JP2001342196A - 高純度酸性リン脂質の製造方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】反応時の劣化が少なく、油脂との相溶性や生理
活性に優れた高純度の酸性リン脂質を得る製造方法を提
供する。 【解決手段】塩型リン脂質と酸とを接触させて酸性リン
脂質を製造するに際して、［１］塩型リン脂質を水中懸
濁液で、［２］０〜５０℃の条件下で、［３］塩型リン
脂質１ｍｏｌに対し、酸を１〜１００ｍｏｌの割合で混
合し、反応することを特徴とする高純度酸性リン脂質の
製造方法。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、高純度酸性リン脂
質の製造方法に関する。さらに詳しくは、塩型リン脂質
と酸とを反応して酸性リン脂質を製造する際して、特定
の条件下で行うことにより高純度酸性リン脂質を得る製
造方法に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来、塩型リン脂質は牛脳や植物から抽
出されたり、他のリン脂質を出発原料とする塩基交換反
応または加水分解により製造されてきた。天然から得ら
れるホスファチジルセリンまたはホスファチジン酸は主
に陽イオンと塩を形成したものであり、酸型のリン脂質
を天然界から抽出によって得ることは困難とされてき
た。

【０００３】特開昭６３−３６１９０号公報、特開昭６
３−３６１９１号公報、特開昭６３−３６１９２号公
報、特開平２−７９９９０号公報ではホスファチジルコ
リンに微生物由来のホスフォリパーゼＤを作用させ、塩
基交換反応によりホスファチジルセリン等を得ている。
特開平５−３３６９８４号公報では、ホスファチジル基
塩基交換反応を行う際にｐＨを調節して、反応の選択性
を高めている。しかし、いずれの方法も、得られる反応
物は塩型のリン脂質であった。

【０００４】特開平９−１７３０９２号公報では、リン
脂質のカルシウム塩を作った後、ヘプタン／アセトン中
で結晶化し、他の塩に変換する技術が開示されている。
実施例では、リン脂質のカルシウム塩の高純度化につい
て記載されているが、カルシウム塩を他の塩に変換する
条件や、カルシウム塩から酸型のリン脂質（酸性リン脂
質ともいうこともある）を調製する具体的な方法につい
ては開示されていない。

【０００５】すなわち、天然界に存在するリン脂質は多
くの場合、塩の状態で存在するため、天然界から酸性リ
ン脂質を直接得ることはコスト的にも資源量的にも困難
であった。また前記の先行技術は、すべて塩型のリン脂
質を製造するものであった。すなわち、天然界からの抽
出や従来の製造法を用いても、酸性リン脂質を得ること
ができなかった。また一方、酸性リン脂質については、
最近、様々な生理活性が見出されており、特にホスファ
チジルセリンは、学習効果を高めるような脳機能改善効
果や、抗ストレス効果等の機能が見い出されており、医
薬品や食品等への応用も期待されてきている。しかし、
これらのリン脂質は、酸型では、化学的に不安定であ
り、酸化や加水分解による品質の劣化を引き起こしやす
かった。そのため、前記のように塩型のリン脂質が主流
として流通していた。酸性リン脂質は、塩型のものに比
べて、他の油脂との相溶性がよく製品加工しやすく、ま
た、先のような機能を有することから高純度の酸性リン
脂質が求められていた。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、前記
の実状に鑑み、特定の条件で塩型リン脂質と酸とを反応
させて、高反応率で、高純度の酸性リン脂質を得る製造
方法を提供することにある。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記の問
題点に鑑み鋭意検討した結果、塩型リン脂質と酸とを反
応させて、酸性リン脂質を製造する方法において、特定
の条件で製造を行うことにより、反応率が高く、高純度
の酸性リン脂質が得られることの知見を得て、本発明を
完成させるに至った。すなわち、本発明は、〔１〕およ
び〔２〕である。 〔１〕塩型リン脂質と酸とを接触させて酸性リン脂質を
製造するに際して、［１］塩型リン脂質を水中懸濁状態
で、［２］０〜５０℃の条件下で、［３］塩型リン脂質
１ｍｏｌに対し、酸を１〜１００ｍｏｌの割合で混合
し、反応することを特徴とする高純度酸性リン脂質の製
造方法。

【０００８】〔２〕塩型リン脂質がナトリウム、カルシ
ウム、マグネシウム、カリウムの塩型ホスファチジルセ
リンまたはホスファチジン酸であり、酸がギ酸、酢酸、
コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、クエン
酸、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、フィチン酸からなる群
より選択される１種または２種以上であり、得られる酸
性リン脂質の純度が、高周波プラズマ発光装置による陽
イオンの測定方法により算出する純度で９０％以上の陽
イオンが除去されることである前記［１］の高純度酸性
リン脂質の製造方法。

【０００９】

【発明の実施の形態】本発明に用いる塩型リン脂質は、
各種のリン脂質が使用でき、なかでも、ホスファチジル
セリンまたはホスファチジン酸が好ましい。各種のリン
脂質は、天然資源から抽出したもの、あるいは合成した
リン脂質が使用できる。また、市販のもの、または公知
の方法で調製したものを使用してもよい。例えば、大
豆、脱脂大豆、卵黄等から抽出したものを単独または２
種以上混合して使用することができる。また、大豆レシ
チン、脱脂大豆レシチン、卵黄レシチン、ホスファチジ
ルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファ
チジルグリセロール、リゾレシチン等から塩基交換反応
もしくは加水分解により得られたものを使用することも
可能である。塩型リン脂質は、ナトリウム、カルシウ
ム、マグネシウム、カリウムの塩型ホスファチジルセリ
ンまたはホスファチジン酸を望ましく挙げられる。

【００１０】本発明では、高純度酸性リン脂質を効率よ
く得るために、精製により純度を高めた塩型リン脂質を
用いる方が好ましい。公知の濃縮法、例えば、カラム精
製、溶媒分画により２０から９８％に純度を高めた塩型
リン脂質が原料として好ましい。例えば、市販品として
は、ルーカスマイヤー社の製品、商品名ＤＰ−８４１
（ホスファチジルセリンカルシウム塩純度２０％）、同
ＬＥＣＩ−ＰＳ２０（ホスファチジルセリンカルシウム
塩純度２０％）、シグマ社の製品、ホスファチジルセリ
ンナトリウム塩（純度９８％）、ホスファチジン酸ナト
リウム塩（純度９８％）、同ジステアロイルホスファチ
ジンナトリウム塩（純度９９％）等が好ましいものとし
て挙げられる。

【００１１】本発明に用いる塩型ホスファチジルセリン
またはホスファチジン酸の構成脂肪酸は、同一でも異っ
ていてもよく、炭素数８〜２４の飽和または不飽和の脂
肪酸である。例えば、カプロン酸、カプリン酸、ラウリ
ン酸、ミリスチン酸、ステアリン酸、ベヘン酸、アラキ
ジン酸、パルミトオレイン酸、オレイン酸、リノール
酸、αおよびγ−リノレン酸、エルシン酸、アラキドン
酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキサエン酸、テト
ラコサテトラエン酸等が挙げられる。なかでも、オレイ
ン酸、リノール酸、エイコサペンタエン酸、ドコサヘキ
サエン酸が生理活性等の面から好ましい。

【００１２】本発明に用いる酸としては、例えば、ギ
酸、酢酸、コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、マレイン
酸、クエン酸、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、フィチン酸
等が挙げられる。これらの中から選ばれる１種または２
種以上を組み合わせて用いることができる。また、緩衝
液溶液、例えば、ギ酸−ギ酸ナトリウム緩衝液、グリシ
ン−塩酸緩衝液、酢酸−酢酸ナトリウム緩衝液、クエン
酸−クエン酸ナトリウム緩衝液、リン酸緩衝液等を所定
のｐＨの調整用に用いることがより望ましい。陽イオン
の除去効果の点から塩酸、硫酸、硝酸、リン酸の無機
酸、フィチン酸等の有機酸を使用することがより好まし
い。酸または緩衝液の添加量は、塩型リン脂質１ｍｏｌ
に対し、酸を１〜１００ｍｏｌ、好ましくは１５〜６０
ｍｏｌ、より好ましくは２０〜５０ｍｏｌである。添加
量が１ｍｏｌ未満では酸の効果が十分でなく、高純度酸
性リン脂質を製造することができない。また、酸の添加
量が１００ｍｏｌを越えると、加水分解等の副反応が生
じるので望ましくない。

【００１３】本発明の酸性リン脂質を得る方法は、具体
的には例えば、有機溶媒を用いずに、酸水溶液に、塩型
リン脂質を添加し、物理的に懸濁して反応を行う。この
とき、反応様式として容器に入れた懸濁液を回転撹拌や
超音波により撹拌して反応を行うことができる。反応系
中の塩型リン脂質の濃度は０．０１から５０重量％、好
ましくは０．１から２０重量％、より好ましくは１〜１
０重量％とする。濃度が０．０１重量％未満では回収が
困難となる。また、濃度が５０重量％を越えると、分離
が起こり、反応速度が低下する。ここで反応条件は、温
度は０〜５０℃、好ましくは５〜３０℃、より好ましく
は７〜２０℃である。温度が０℃未満では反応液の粘度
が上昇したり凝固するため取り扱いが難しくなる。ま
た、反応液の温度が５０℃を越えると、加水分解等の副
反応が生じるので望ましくない。

【００１４】塩型リン脂質を酸水溶液に添加し、物理的
に懸濁するために、市販の均質化器、例えば、ポリトロ
ン（キネマチカ社）、ソニファイヤー（ブランソン
社）、マイクロフルイダイザー（マイクロフルイド
社）、ホモゲナイザー（岩井機械社）、ホモミキサー
（特殊機化工業社）等を使用することができる。また、
塩型リン脂質と酸との混合条件は、容器に入れた塩型リ
ン脂質を水相中で、沈殿させずに反応させればよく、回
転撹拌や超音波による撹拌方式、カラム中において、水
相と塩型リン脂質を向流にして接触させる方式、カラム
中に水相を保持しておいて、細分化した塩型リン脂質を
自然浮上させながら反応を行う方式、などあらゆる形式
の反応様式が可能である。

【００１５】反応時間は、通常５分〜１０時間、好まし
くは３０分から５時間、より好ましくは４５分から２時
間である。反応時間は、選択する酸の種類と塩型リン脂
質の種類により適宜選択することができる。

【００１６】本発明で得られる酸性リン脂質の純度は、
高周波プラズマ発光装置を用いて、厚生省の発令、平成
８年５月２３日の衛新第４７号（栄養表示基準に伴う栄
養成分の分析方法等について）の記載方法に準じて、リ
ン脂質に結合している陽イオン（ｍｏｌ）の量と、高速
液体クロマトグラフィーの方法で測定して求めた総リン
脂質（ｍｏｌ）との比を求めることにより測定する。例
えば、反応物中のホスファチジルセリンとホスファチジ
ン酸の総量が２４ｍｍｏｌで、リン脂質に結合したカル
シウムイオンが１ｍｍｏｌの場合には、酸性リン脂質の
純度の算出は、（１−１／２４）×１００＝９６％とな
る。本発明で得られる酸性リン脂質は、好ましくは、９
０％以上の高純度の酸性リン脂質である。

【００１７】

【発明の効果】本発明の酸性リン脂質の製造方法は、塩
型リン脂質を水中懸濁状態で、特定の条件で反応するこ
とにより、高純度の酸性リン脂質を得ることができる。
その結果、反応時の劣化が少なく、油脂との相溶性や生
理活性に優れた高純度酸性リン脂質を得ることができ、
食品や医薬品等に用途展開する際の可能性が広がる。

【００１８】

【実施例】次に実施例に基づいて本発明をさらに詳細に
説明する。なお以下の記載において、「％」は特に断ら
ない限り「重量％」を意味する。なお、用いた測定方法
を次に示す。 １．リン脂質（塩型および酸性リン脂質の合計）の定量
方法 反応物中の塩型および酸性リン脂質の定量について、リ
ン脂質の定量は、高速液体クロマトグラフィー（ギルソ
ン社製、機種モデル３０３）を用いて行った。すなわ
ち、固定相にはシリカゲルカラム（径４．６ｍｍ×長さ
２５０ｍｍ）を用い、移動相にはアセトニトリル：メタ
ノール：１０ｍＭリン酸二水素アンモニウム＝６１２：
２８９：１００の混合溶液を用い、検出はＵＶ検出器
（検出波長２０２ｎｍ）で行った。なお、リン脂質のｍ
ｏｌ数としては、原料のカタログデータまたは脂肪酸組
成から算出した平均分子量を基に計算した。

【００１９】２．塩型および酸性リン脂質の定量方法 試料のリン脂質１ｇに対して、クロロホルム９ｍｌを加
えて、遠心分離（条件；２０００ｒｐｍ、１０分間）に
よりリン脂質に結合していない陽イオンを徐去した後、
高周波プラズマ発光装置（島津製作所、ＩＣＰＳ−７５
００）を用いて下記の方法に準じて行い、リン脂質に結
合している陽イオン（ｍｏｌ）を求めた。次に陽イオン
のｍｏｌ数から塩型リン脂質のｍｏｌ数を求め、リン脂
質の合計ｍｏｌ数から差し引くことにより試料中の酸性
リン脂質の含有量を求めた。 酸性リン脂質の含量（％）＝｛１−（塩型リン脂質のｍ
ｏｌ数／リン脂質の合計ｍｏｌ数）×１００ なお、陽イオンがカルシウム等の多価イオンの場合は、
陽イオンの価数により補正する。なおまた、酸性リン脂
質の含量（％）を用いて、反応率（％）を次式により求
めた。 反応率（％）＝｛１−（酸性リン脂質のｍｏｌ数／リン
脂質の合計ｍｏｌ数）｝×１００ ３．リン脂質に結合した陽イオンの測定 装置；高周波プラズマ発光装置（ＩＣＰＳ７５００：島
津製作所製）を用い、厚生省、発令、平成８年５月２３
日、衛新第４７号（栄養表示基準の導入に伴う栄養成分
の分析方法等について）に従って測定を行った。

【００２０】実施例１ ＤＰ−８４１（ルーカスマイヤー社品；リン脂質含量２
０％、含まれるリン脂質の平均分子量８００）１００ｇ
（ホスファチジルセリンのカルシウム塩２５ｍｍｏｌ）
を２Ｍの塩酸１Ｌに加え、ホモミキサー（特殊機化工業
社）で１０分間均質化した。さらに２５℃で３時間撹拌
した。反応後に濾過により余分な酸を除去し、真空凍結
乾燥機により水分を蒸発させて、反応物９５ｇを得た。
反応物中のリン脂質を前記の方法により測定した結果、
塩型と酸型の合計で、２４ｍｍｏｌのフォスファチジル
セリンが得られ、また、酸型／（塩型＋酸型の合計リン
脂質）の比を求めたところ９６％であった。

【００２１】実施例２ ジステアロイルホスファチジン酸ナトリウム塩（シグマ
社品、純度９９％、分子量７２７）１ｇ（１．３ｍｍｏ
ｌ）を、１０℃の８５％リン酸０．００７Ｌ（６０ｍｍ
ｏｌ）に加え、超音波撹拌機（ブランソン社製）で５分
間均質化した。さらに５℃で３０分間撹拌し酸性リン脂
質を調製した。反応後に１Ｌの精製水を加え濾過により
余分な酸を除去し、真空凍結乾燥機により水分を蒸発せ
しめ、反応物０．９５ｇを得た。反応物中のリン脂質の
含量を前記の測定方法により測定した結果、酸型と塩型
の合計で１．２４ｍｍｏｌのホスファチジルセリンであ
った。さらに、酸型／（塩型＋酸型の合計リン脂質）の
比を求めたところ９６％であった。

【００２２】実施例３ ジオレオイルホスファチジルセリンナトリウム塩（シグ
マ社品、純度９８％、分子量８１０）５００ｇ（０．６
３ｍｏｌ）を０．１ｍＭの硝酸水溶液１０ｋｇ（１ｍｏ
ｌ）に入れ、ホモミキサー（特殊機化工業社製品）で均
質化し、懸濁液を調製した。混濁液を０℃に保持して５
時間撹拌した。反応後に遠心分離を行い、余分な酸を除
去し、沈殿物を真空凍結乾燥して反応物４８５ｇを回収
した。反応物中のリン脂質の含量を前記の測定方法によ
り測定した結果、酸型と塩型の合計で０．６３ｍｍｏｌ
のホスファチジルセリンであった。さらに、酸型／（塩
型＋酸型の合計リン脂質）の比を求めたところ９５％で
あった。

【００２３】比較例１ ＤＰ−８４１（ルーカスマイヤー社品、；リン脂質含量
２０％、含まれるリン脂質の平均分子量８００）１００
ｇ（ホスファチジルセリンカルシウム塩２５ｍｍｏｌ）
を２Ｍの塩酸３Ｌに加え、ホモミキサー（特殊機化工業
社）で１０分間均質化した。さらに２５℃で３時間撹拌
した。反応後に濾過により余分な酸を除去し、真空凍結
乾燥機により水分を蒸発せしめ、反応物８０ｇを得た。
反応物中のリン脂質の含量を前記の測定方法により測定
した結果、酸型と塩型の合計で１０ｍｍｏｌのホスファ
チジルセリンであった。さらに、酸型／（塩型＋酸型の
合計リン脂質）の比を求めたところ８０％であった。

【００２４】比較例２ ＤＰ−８４１（ルーカスマイヤー社品、酸性リン脂質２
０％、含まれる酸性リン脂質の平均分子量８００）１０
０ｇ（ホスファチジルセリンカルシウム塩２５ｍｍｏ
ｌ）を０．０２Ｍの塩酸１Ｌに加え、ホモミキサー（特
殊機化工業社）で１０分間均質化した。さらに２５℃で
３時間撹拌した。反応後に濾過により余分な酸を除去
し、真空凍結乾燥機により水分を蒸発せしめ、反応物７
５ｇを得た。反応物中のリン脂質の含量を前記の測定方
法により測定した結果、酸型と塩型の合計で２３ｍｍｏ
ｌのホスファチジルセリンであった。さらに、酸型／
（塩型＋酸型の合計リン脂質）の比を求めたところ４．
３％であった。

【００２５】比較例３ ジステアロイルホスファチジン酸ナトリウム塩（シグマ
社品、分子量７２７）１ｇ（１．４ｍｍｏｌ）を、１０
℃の８５％リン酸０．００７Ｌ（６０ｍｍｏｌ）に加
え、超音波撹拌機（ブランソン社製）で５分間均質化し
た。さらに６０℃で３０分間撹拌し酸性リン脂質を調製
した。反応後に１Ｌの精製水を加え濾過により余分な酸
を除去し、真空凍結乾燥機により水分を蒸発せしめ、反
応物０．６ｇを得た。反応物中のリン脂質の含量を前記
の測定方法により測定した結果、酸型と塩型の合計で
０．３ｍｍｏｌのホスファチジン酸であった。さらに、
酸型／（塩型＋酸型の合計リン脂質）の比を求めたとこ
ろ６７％であった。

【００２６】比較例４ ジステアロイルホスファチジン酸ナトリウム塩（シグマ
社品、分子量７２７）１ｇ（１．４ｍｍｏｌ）を、１０
℃の８５％リン酸０．００７Ｌ（６０ｍｍｏｌ）に加
え、超音波撹拌機（ブランソン社製）で５分間均質化し
た。さらに−１℃で３０分間撹拌し酸性リン脂質を調製
した。反応後に１Ｌの精製水を加え濾過により余分な酸
を除去し、真空凍結乾燥機により水分を蒸発せしめ、反
応物０．９ｇを得た。反応物中のリン脂質の含量を前記
の測定方法により測定した結果、酸型と塩型の合計で
１．１ｍｍｏｌのホスファチジン酸であった。さらに、
酸型／（塩型＋酸型の合計リン脂質）の比を求めたとこ
ろ９％であった。

【００２７】比較例５ ジオレイルホスファチジルセリンナトリウム塩（シグマ
社品、純度９８％）５００ｇ（０．６２ｍｏｌ）を０．
１ｍＭの硝酸水溶液１０ｋｇ（１ｍｏｌ）に入れ、均質
化を行わず、２相に分離した混合溶液を調製した。混濁
液を０℃に保持して５時間撹拌した。反応後に遠心分離
を行い、余分な酸を除去し、沈殿物を真空凍結乾燥して
反応物４０５ｇを回収した。反応物中のリン脂質の含量
を前記の測定方法により測定した結果、酸型と塩型の合
計で０．６１ｍｍｏｌのホスファチジン酸であった。さ
らに、酸型／（塩型＋酸型の合計リン脂質）の比を求め
たところ１４％であった。

【００２８】試験例１ 実施例１〜３、比較例１〜５で得られた反応物の収率を
測定した結果を表１および２に示す。

【００２９】試験例２ 実施例１〜３、比較例１〜５で得られた反応物の反応率
を測定した結果を表１および２に示す。

【００３０】試験例３ 実施例１〜３、比較例１〜５で得られた反応物のそれぞ
れ１０ｇをオリーブ油９０ｇに添加し、マグネチックス
ターラーにより４０℃で２時間撹拌した。撹拌後に真空
ポンプを用いて気泡を除き、２４時間４０℃中で保存し
たときの溶解状態を表１および２に示した。

【００３１】試験例４ 実施例１〜３、比較例１〜５で得られた反応物の生理活
性をＰＣ−１２細胞の分化誘導作用により評価した。す
なわち、理研細胞銀行から取り寄せたＰＣ−１２細胞を
１０％の牛胎児血清、５％の馬血清を添加したＭＥＭＥ
培地中で、３７℃、ＣＯ₂濃度５％の雰囲気下で培養し
た。細胞数を１．５×１０⁴／ｍｌに調製した溶液を２
４穴のマイクロタイタープレートに注ぎ、２４時間前培
養した。上澄を廃棄し、実施例２で用いた原料および反
応物を血清を添加せず、ＤＭＳＯを１％添加したＭＥＭ
Ｅ培地に１％添加した溶液に置き換えた。３７℃、ＣＯ
₂濃度５％の雰囲気下７日間培養し、形態の変化を顕微
鏡で判定した結果を表１および２に示した。実施例１〜
３の試験区はＰＣ−１２細胞に形態変化を起こす作用が
認められ、神経細胞に対する生理活性が認められたが、
比較例１〜５の試験区には活性が認められなかった。

【００３２】

【表１】

【００３３】

【表２】

【００３４】なお、表中略号は次のとおりである。 ＰＳ−Ｃａ；ホスファチジルセリンカルシウム塩、 ＰＡ−Ｎａ；ホスファチジン酸ナトリウム塩、 ＰＳ−Ｎａ；ホスファチジルセリンナトリウム塩。

【００３５】上記の実施例１〜３は、酸の添加量が本発
明の範囲外の比較例１、２、反応温度が本発明の範囲外
の比較例３、４、反応時に原料リン脂質の均質化を省略
した比較例５に比べて、陽イオン量の含量が低く、リン
脂質の減少が抑えられ、油脂との相溶性が高いことが分
かる。また、試験例４から、本発明で得られた高純度酸
性リン脂質が、本発明の範囲外の条件で製造したリン脂
質よりも生理活性面でも優れた特性を有することがわか
る。

【図面の簡単な説明】

【図１】 図１は、実施例１のリン脂質の試料を高速液
体クロマトグラフィーを用いて行った図である。

Claims (2)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】塩型リン脂質と酸とを接触させて酸性リン
   脂質を製造するに際して、［１］塩型リン脂質を水中懸
   濁液で、［２］０〜５０℃の条件下で、［３］塩型リン
   脂質１ｍｏｌに対し、酸を１〜１００ｍｏｌの割合で混
   合し、反応することを特徴とする高純度酸性リン脂質の
   製造方法。
2. 【請求項２】塩型リン脂質が、ナトリウム、カルシウ
   ム、マグネシウム、カリウムの塩型ホスファチジルセリ
   ンまたはホスファチジン酸であり、酸が、ギ酸、酢酸、
   コハク酸、リンゴ酸、フマル酸、マレイン酸、クエン
   酸、塩酸、硫酸、硝酸、リン酸、フィチン酸からなる群
   より選択される１種または２種以上であり、得られる酸
   性リン脂質の純度が、高周波プラズマ発光装置による陽
   イオンの測定方法により算出する純度で９０％以上の陽
   イオンが除去されることである請求項１記載の高純度酸
   性リン脂質の製造方法。