JP2001316462A - ３−ヒドロキシチエニルアルカン酸をモノマーユニットとして含むポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法 - Google Patents
３−ヒドロキシチエニルアルカン酸をモノマーユニットとして含むポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法Info
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- JP2001316462A JP2001316462A JP2001055670A JP2001055670A JP2001316462A JP 2001316462 A JP2001316462 A JP 2001316462A JP 2001055670 A JP2001055670 A JP 2001055670A JP 2001055670 A JP2001055670 A JP 2001055670A JP 2001316462 A JP2001316462 A JP 2001316462A
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Abstract
(57)【要約】
【課題】 新規な構成を有するポリヒドロキシアルカノ
エート（ＰＨＡ）、ならびに、目的とするモノマーユニ
ット以外に、混入してくる不要なモノマーユニットを大
幅に低減しつつ、高い収率で、生分解性を有する前記Ｐ
ＨＡを微生物を利用して生産する方法の提供。 【解決手段】 ３−ヒドロキシチエニルアルカン酸をモ
ノマーユニットとして有する新規ＰＨＡであり、対応す
るチエニルアルカン酸を原料として、前記ＰＨＡ産生能
を有する微生物を、基質のチエニルアルカン酸を含む培
地で培養し、得られる培養菌体中に蓄積される目的のＰ
ＨＡを抽出、回収する。
エート（ＰＨＡ）、ならびに、目的とするモノマーユニ
ット以外に、混入してくる不要なモノマーユニットを大
幅に低減しつつ、高い収率で、生分解性を有する前記Ｐ
ＨＡを微生物を利用して生産する方法の提供。 【解決手段】 ３−ヒドロキシチエニルアルカン酸をモ
ノマーユニットとして有する新規ＰＨＡであり、対応す
るチエニルアルカン酸を原料として、前記ＰＨＡ産生能
を有する微生物を、基質のチエニルアルカン酸を含む培
地で培養し、得られる培養菌体中に蓄積される目的のＰ
ＨＡを抽出、回収する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、新規なポリヒドロ
キシアルカノエート（以下、ＰＨＡと略す場合もある）
ならびにその製造方法に関する。より具体的には、ＰＨ
Ａを生産し菌体内に蓄積する能力を有する微生物を用
い、側鎖にチエニル基を置換基として有するＰＨＡを、
対応するチエニル基を置換基として有する置換アルカン
酸を基質に用いて、目的のＰＨＡの効率的な製造する方
法に関する。
キシアルカノエート（以下、ＰＨＡと略す場合もある）
ならびにその製造方法に関する。より具体的には、ＰＨ
Ａを生産し菌体内に蓄積する能力を有する微生物を用
い、側鎖にチエニル基を置換基として有するＰＨＡを、
対応するチエニル基を置換基として有する置換アルカン
酸を基質に用いて、目的のＰＨＡの効率的な製造する方
法に関する。
【０００２】
【従来の技術】これまで、多くの微生物がポリ−３−ヒ
ドロキシ酪酸（以下、ＰＨＢと略す場合もある）あるい
はその他のＰＨＡを生産し、菌体内に蓄積することが報
告されてきた（「生分解性プラスチックハンドブッ
ク」、生分解性プラスチック研究会編、(株)エヌ・ティ
ー・エス、Ｐ178-197）。これらのポリマーは従来のプ
ラスチックと同様に、溶融加工等により各種製品の生産
に利用することができる。さらに、微生物が生産するＰ
ＨＡは生分解性であるので、自然界で微生物により完全
分解されるという利点を有している。従って、これら生
分解性ＰＨＡは、従来の多くの合成高分子化合物のよう
に自然環境に残留して汚染を引き起こすことがない。ま
た、生体適合性にも優れており、医療用軟質部材等とし
ての応用も期待されている。
ドロキシ酪酸（以下、ＰＨＢと略す場合もある）あるい
はその他のＰＨＡを生産し、菌体内に蓄積することが報
告されてきた（「生分解性プラスチックハンドブッ
ク」、生分解性プラスチック研究会編、(株)エヌ・ティ
ー・エス、Ｐ178-197）。これらのポリマーは従来のプ
ラスチックと同様に、溶融加工等により各種製品の生産
に利用することができる。さらに、微生物が生産するＰ
ＨＡは生分解性であるので、自然界で微生物により完全
分解されるという利点を有している。従って、これら生
分解性ＰＨＡは、従来の多くの合成高分子化合物のよう
に自然環境に残留して汚染を引き起こすことがない。ま
た、生体適合性にも優れており、医療用軟質部材等とし
ての応用も期待されている。
【０００３】このような微生物産生ＰＨＡは、その生産
に用いる微生物の種類や培地組成、培養条件等により、
様々な組成や構造のものとなり得ることが知られてお
り、これまで主に、ＰＨＡの物性の改良という観点か
ら、このような組成や構造の制御に関する研究がなされ
てきた。
に用いる微生物の種類や培地組成、培養条件等により、
様々な組成や構造のものとなり得ることが知られてお
り、これまで主に、ＰＨＡの物性の改良という観点か
ら、このような組成や構造の制御に関する研究がなされ
てきた。
【０００４】例えば、アルカリゲネス・ユウトロファス
Ｈ16株（Ａlcaligenes eutropusＨ16、ＡＴＣＣ Ｎo.1
7699）及びその変異株は、その培養時の炭素源を変化さ
せることによって、３-ヒドロキシ酪酸（以下、３ＨＢ
と略す場合もある）と３-ヒドロキシ吉草酸（以下、３
ＨＶと略す場合もある）との共重合体を様々な組成比で
生産することが報告されている（特表平６-１５６０４
号公報、特表平７-１４３５２号公報、特表平８-１９２
２７号公報など）。
Ｈ16株（Ａlcaligenes eutropusＨ16、ＡＴＣＣ Ｎo.1
7699）及びその変異株は、その培養時の炭素源を変化さ
せることによって、３-ヒドロキシ酪酸（以下、３ＨＢ
と略す場合もある）と３-ヒドロキシ吉草酸（以下、３
ＨＶと略す場合もある）との共重合体を様々な組成比で
生産することが報告されている（特表平６-１５６０４
号公報、特表平７-１４３５２号公報、特表平８-１９２
２７号公報など）。
【０００５】特開平５-７４４９２号公報では、メチロ
バクテリウム属（Ｍethylobacteriuｍ sp.）、パラコッ
カス属（Paracoccus sp.）、アルカリゲネス属（Ａlcal
igenes sp.）、シュードモナス属（Pseudoｍonas sp.）
の微生物を、炭素数３から７の第一アルコールに接触さ
せることにより、３ＨＢと３ＨＶとの共重合体を生産さ
せる方法が開示されている。
バクテリウム属（Ｍethylobacteriuｍ sp.）、パラコッ
カス属（Paracoccus sp.）、アルカリゲネス属（Ａlcal
igenes sp.）、シュードモナス属（Pseudoｍonas sp.）
の微生物を、炭素数３から７の第一アルコールに接触さ
せることにより、３ＨＢと３ＨＶとの共重合体を生産さ
せる方法が開示されている。
【０００６】特開平５-９３０４９号公報、及び、特開
平７-２６５０６５号公報では、アエロモナス・キャビ
エ（Ａeroｍonas caviae）を、オレイン酸やオリーブ油
を炭素源として培養することにより、３ＨＢと３-ヒド
ロキシヘキサン酸（以下、３ＨＨxと略す場合もある）
との２成分共重合体を生産することが開示されている。
平７-２６５０６５号公報では、アエロモナス・キャビ
エ（Ａeroｍonas caviae）を、オレイン酸やオリーブ油
を炭素源として培養することにより、３ＨＢと３-ヒド
ロキシヘキサン酸（以下、３ＨＨxと略す場合もある）
との２成分共重合体を生産することが開示されている。
【０００７】特開平９-１９１８９３号公報では、コマ
モナス・アシドボランス・IＦＯ 13852株（Ｃoｍaｍona
s acidovorans IＦＯ 13852）が、炭素源としてグルコ
ン酸及び１,４-ブタンジオールを用いた培養により、３
ＨＢと４-ヒドロキシ酪酸とをモノマーユニットに持つ
ポリエステルを生産することが開示されている。
モナス・アシドボランス・IＦＯ 13852株（Ｃoｍaｍona
s acidovorans IＦＯ 13852）が、炭素源としてグルコ
ン酸及び１,４-ブタンジオールを用いた培養により、３
ＨＢと４-ヒドロキシ酪酸とをモノマーユニットに持つ
ポリエステルを生産することが開示されている。
【０００８】また、近年、炭素数が１２程度までの中鎖
長（mediu chain-length：mclと略記）の３−ヒドロキ
シアルカノエート（以下、３ＨＡと略す場合もある）を
モノマーユニットとするＰＨＡについての研究が精力的
に行われている。このようなＰＨＡの合成経路は大きく
２つに分類することが可能であり、その具体例を下記
（１）および（２）に示す。
長（mediu chain-length：mclと略記）の３−ヒドロキ
シアルカノエート（以下、３ＨＡと略す場合もある）を
モノマーユニットとするＰＨＡについての研究が精力的
に行われている。このようなＰＨＡの合成経路は大きく
２つに分類することが可能であり、その具体例を下記
（１）および（２）に示す。
【０００９】（１）β酸化を利用した合成:特許公報第
２６４２９３７号では、シュードモナス・オレオボラン
ス・ATCC 29347株（Pseudomonas oleovorans ATCC 2934
7）に、炭素源として非環状脂肪族炭化水素を与えるこ
とにより、炭素数が６から１２までの３−ヒドロキシア
ルカノエートのモノマーユニットを有するＰＨＡが生産
されることが開示されている。また、Appl. Environ. M
icrobiol., ５８(２), 746 （1992）には、シュードモ
ナス・レジノボランス（Pseudomonas resinovorans）
が、オクタン酸を単一炭素源として、３−ヒドロキシ酪
酸、３−ヒドロキシヘキサン酸、３−ヒドロキシオクタ
ン酸、３−ヒドロキシデカン酸（含有比（モル比率）
1：15：75：9）をモノマーユニットとするポリエステル
を生産し、また、ヘキサン酸を単一炭素源として、３−
ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシヘキサン酸、３−ヒド
ロキシオクタン酸、３−ヒドロキシデカン酸（含有比
（モル比率） 8：62：23：7）をユニットとするポリエ
ステルを生産することが報告されている。ここで、原料
のアルカン酸に対して、その炭素数が２または４少ない
３ＨＡモノマーユニットは、代謝産物であるが、原料の
アルカン酸よりも鎖長の延長がなされている３ＨＡモノ
マーユニットは、次ぎの（２）に説明する脂肪酸合成経
路を経由していると考えられる。
２６４２９３７号では、シュードモナス・オレオボラン
ス・ATCC 29347株（Pseudomonas oleovorans ATCC 2934
7）に、炭素源として非環状脂肪族炭化水素を与えるこ
とにより、炭素数が６から１２までの３−ヒドロキシア
ルカノエートのモノマーユニットを有するＰＨＡが生産
されることが開示されている。また、Appl. Environ. M
icrobiol., ５８(２), 746 （1992）には、シュードモ
ナス・レジノボランス（Pseudomonas resinovorans）
が、オクタン酸を単一炭素源として、３−ヒドロキシ酪
酸、３−ヒドロキシヘキサン酸、３−ヒドロキシオクタ
ン酸、３−ヒドロキシデカン酸（含有比（モル比率）
1：15：75：9）をモノマーユニットとするポリエステル
を生産し、また、ヘキサン酸を単一炭素源として、３−
ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシヘキサン酸、３−ヒド
ロキシオクタン酸、３−ヒドロキシデカン酸（含有比
（モル比率） 8：62：23：7）をユニットとするポリエ
ステルを生産することが報告されている。ここで、原料
のアルカン酸に対して、その炭素数が２または４少ない
３ＨＡモノマーユニットは、代謝産物であるが、原料の
アルカン酸よりも鎖長の延長がなされている３ＨＡモノ
マーユニットは、次ぎの（２）に説明する脂肪酸合成経
路を経由していると考えられる。
【００１０】（２）脂肪酸合成経路を利用した合成 Int. Ｊ. Biol. Macromol., １６(３)、 119 （1994）
には、シュードモナスsp.61-3株（Pseudomonas sp.61-3
strain）が、グルコン酸ナトリウムを単一炭素源とし
て、３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシヘキサン酸、
３−ヒドロキシオクタン酸、３−ヒドロキシデカン酸、
３−ヒドロキシドデカン酸といった３−ヒドロキシアル
カン酸、ならびに、３−ヒドロキシ−５−cis−デセン
酸、３−ヒドロキシ−５−cis−ドデセン酸といった３
−ヒドロキシアルケン酸（３−ヒドロキシ５−cis−ア
ルケン酸）をモノマーユニットとするポリエステルを生
産することが報告されている。
には、シュードモナスsp.61-3株（Pseudomonas sp.61-3
strain）が、グルコン酸ナトリウムを単一炭素源とし
て、３−ヒドロキシ酪酸、３−ヒドロキシヘキサン酸、
３−ヒドロキシオクタン酸、３−ヒドロキシデカン酸、
３−ヒドロキシドデカン酸といった３−ヒドロキシアル
カン酸、ならびに、３−ヒドロキシ−５−cis−デセン
酸、３−ヒドロキシ−５−cis−ドデセン酸といった３
−ヒドロキシアルケン酸（３−ヒドロキシ５−cis−ア
ルケン酸）をモノマーユニットとするポリエステルを生
産することが報告されている。
【００１１】ところで、通常、ＰＨＡの生合成は、細胞
内の様々な代謝経路の中間体として生じる「Ｄ−３−ヒ
ドロキシアシル−ＣoＡ」を基質とし、ＰＨＡシンター
ゼ（PHA synthase）により行われる。
内の様々な代謝経路の中間体として生じる「Ｄ−３−ヒ
ドロキシアシル−ＣoＡ」を基質とし、ＰＨＡシンター
ゼ（PHA synthase）により行われる。
【００１２】ここで、「ＣoＡ」とは「補酵素Ａ（coenz
yme A）」のことである。そして上記（１）中の文献に
記載されている様に、オクタン酸やノナン酸等の脂肪酸
を炭素源とした場合、ＰＨＡの生合成は、「β酸化サイ
クル」中に生じた「Ｄ−３−ヒドロキシアシル−Ｃo
Ａ」が出発物質として行われるとされている。
yme A）」のことである。そして上記（１）中の文献に
記載されている様に、オクタン酸やノナン酸等の脂肪酸
を炭素源とした場合、ＰＨＡの生合成は、「β酸化サイ
クル」中に生じた「Ｄ−３−ヒドロキシアシル−Ｃo
Ａ」が出発物質として行われるとされている。
【００１３】以下に、「β酸化サイクル」を経由してＰ
ＨＡが生合成されるまでの反応を示す。
ＨＡが生合成されるまでの反応を示す。
【００１４】
【化３３】
【００１５】一方、この（２）中の文献に記載されてい
る様に、グルコース等の糖類を基質とし、ＰＨＡを生合
成する場合は、「脂肪酸合成経路」中に生成する「Ｄ−
３−ヒドロキシアシル−ＡＣＰ」から変換された「Ｄ−
３−ヒドロキシアシル−ＣoＡ」が出発物質として利用
されるとされている。なお、「ＡＣＰ」とは「アシルキ
ャリアプロテイン（acyl carrier protein）」のことで
ある。従って、脂肪酸合成経路で生成する３−ヒドロキ
シアルカノイル基、ならびに、その過渡的な中間体であ
る３−ヒドロキシ−５−cis−アルケノイル基を利用し
て、生合成される。
る様に、グルコース等の糖類を基質とし、ＰＨＡを生合
成する場合は、「脂肪酸合成経路」中に生成する「Ｄ−
３−ヒドロキシアシル−ＡＣＰ」から変換された「Ｄ−
３−ヒドロキシアシル−ＣoＡ」が出発物質として利用
されるとされている。なお、「ＡＣＰ」とは「アシルキ
ャリアプロテイン（acyl carrier protein）」のことで
ある。従って、脂肪酸合成経路で生成する３−ヒドロキ
シアルカノイル基、ならびに、その過渡的な中間体であ
る３−ヒドロキシ−５−cis−アルケノイル基を利用し
て、生合成される。
【００１６】ところで、先に述べた通り、炭素源として
アルカン酸を用いる際、上記（１）および（２）の過程
で合成されているＰＨＡは、いずれも側鎖にアルキル基
（あるいは３−cis−アルケニル基）を有するモノマー
ユニットからなるＰＨＡ、即ち、「usual ＰＨＡ」であ
る。しかし、このような微生物産生ＰＨＡのより広範囲
な応用、例えば機能性ポリマーとしての応用を考慮した
場合、アルキル基以外の置換基（例えば、フェニル基な
ど）を側鎖に導入したＰＨＡが極めて有用であることが
期待される。他の置換基の例としては、不飽和炭化水
素、エステル基、アリル基、シアノ基、ハロゲン化炭化
水素、エポキシドなどが挙げられる。
アルカン酸を用いる際、上記（１）および（２）の過程
で合成されているＰＨＡは、いずれも側鎖にアルキル基
（あるいは３−cis−アルケニル基）を有するモノマー
ユニットからなるＰＨＡ、即ち、「usual ＰＨＡ」であ
る。しかし、このような微生物産生ＰＨＡのより広範囲
な応用、例えば機能性ポリマーとしての応用を考慮した
場合、アルキル基以外の置換基（例えば、フェニル基な
ど）を側鎖に導入したＰＨＡが極めて有用であることが
期待される。他の置換基の例としては、不飽和炭化水
素、エステル基、アリル基、シアノ基、ハロゲン化炭化
水素、エポキシドなどが挙げられる。
【００１７】そのような置換基を側鎖に導入したＰＨＡ
（以下、「unusual ＰＨＡ」とする）の合成に関して
は、β酸化を利用した合成について、例えば、Macromol
ecules, ２４, p5256-5260 （1991）に、アリール基等
を側鎖に導入したＰＨＡに関する報告がある。具体的に
は、シュードモナス・オレオボランスが５−フェニル吉
草酸（以下、ＰＶＡと略す場合もある）とノナン酸とを
基質として（モル比２:１、総濃度 10ｍｍol/L）、３Ｈ
Ｖ、３−ヒドロキシヘプタン酸、３−ヒドロキシノナン
酸、３−ヒドロキシウンデカン酸、３−ヒドロキシ−５
−フェニル吉草酸（以下、３ＨＰＶと略す場合もある）
をモノマーユニットとして、0.6：16.0：41.1：1.7：4
0.6 の含有比（モル比率）で含むＰＨＡを、培養液１L
あたり 160ｍg（菌体に対する乾燥重量比 31.6％）生産
し、また、ＰＶＡとオクタン酸とを基質として（モル比
１:１、総濃度 10ｍｍol/L）、３ＨＨx、３−ヒドロキ
シオクタン酸、３−ヒドロキシデカン酸、３ＨＰＶをモ
ノマーユニットとして、7.3：64.5：3.9：24.3の含有比
（モル比率）で含むＰＨＡを、培養液１Lあたり 200ｍg
（菌体に対する乾燥重量比 39.2％）生産することが報
告されている。この報告におけるＰＨＡは、副次的な原
料として、ノナン酸やオクタン酸が用いられていること
からも、主にβ酸化経路を経て合成されているものと考
えられる。
（以下、「unusual ＰＨＡ」とする）の合成に関して
は、β酸化を利用した合成について、例えば、Macromol
ecules, ２４, p5256-5260 （1991）に、アリール基等
を側鎖に導入したＰＨＡに関する報告がある。具体的に
は、シュードモナス・オレオボランスが５−フェニル吉
草酸（以下、ＰＶＡと略す場合もある）とノナン酸とを
基質として（モル比２:１、総濃度 10ｍｍol/L）、３Ｈ
Ｖ、３−ヒドロキシヘプタン酸、３−ヒドロキシノナン
酸、３−ヒドロキシウンデカン酸、３−ヒドロキシ−５
−フェニル吉草酸（以下、３ＨＰＶと略す場合もある）
をモノマーユニットとして、0.6：16.0：41.1：1.7：4
0.6 の含有比（モル比率）で含むＰＨＡを、培養液１L
あたり 160ｍg（菌体に対する乾燥重量比 31.6％）生産
し、また、ＰＶＡとオクタン酸とを基質として（モル比
１:１、総濃度 10ｍｍol/L）、３ＨＨx、３−ヒドロキ
シオクタン酸、３−ヒドロキシデカン酸、３ＨＰＶをモ
ノマーユニットとして、7.3：64.5：3.9：24.3の含有比
（モル比率）で含むＰＨＡを、培養液１Lあたり 200ｍg
（菌体に対する乾燥重量比 39.2％）生産することが報
告されている。この報告におけるＰＨＡは、副次的な原
料として、ノナン酸やオクタン酸が用いられていること
からも、主にβ酸化経路を経て合成されているものと考
えられる。
【００１８】関連する記述は、Macromol. Chem., １９
１， 1957-1965 （1990）、Chirality, ３， 492-494
（1991）にもあり、含有される３ＨＰＶモノマーユニッ
ト、そのフェニル基の存在に起因すると思われる、ポリ
マー物性の変化が認められている。
１， 1957-1965 （1990）、Chirality, ３， 492-494
（1991）にもあり、含有される３ＨＰＶモノマーユニッ
ト、そのフェニル基の存在に起因すると思われる、ポリ
マー物性の変化が認められている。
【００１９】
【発明が解決しようとする課題】以上のように、微生物
産生ＰＨＡにおいては、その製造に用いる微生物の種類
や培地組成、培養条件等を変えることにより、各種の組
成・構造のものが得られている。しかしながら、既に得
られている微生物産生ＰＨＡは、プラスチックとしての
応用を進める上では、種々の応用分野に応じて、物性的
に用途に適するものが未だ十分に供給されているとは言
えない。先ず、微生物産生ＰＨＡの利用範囲をさらに拡
大する上では、従来に増して、物性の改良をより幅広く
検討していくことが重要である。そのためには、さらに
多様な構造のモノマーユニットを含むＰＨＡと、その製
造方法を開発することが不可欠であり、それに伴い、所
望のＰＨＡを効率的に生産しうる微生物の開発、探索も
必要となる。
産生ＰＨＡにおいては、その製造に用いる微生物の種類
や培地組成、培養条件等を変えることにより、各種の組
成・構造のものが得られている。しかしながら、既に得
られている微生物産生ＰＨＡは、プラスチックとしての
応用を進める上では、種々の応用分野に応じて、物性的
に用途に適するものが未だ十分に供給されているとは言
えない。先ず、微生物産生ＰＨＡの利用範囲をさらに拡
大する上では、従来に増して、物性の改良をより幅広く
検討していくことが重要である。そのためには、さらに
多様な構造のモノマーユニットを含むＰＨＡと、その製
造方法を開発することが不可欠であり、それに伴い、所
望のＰＨＡを効率的に生産しうる微生物の開発、探索も
必要となる。
【００２０】一方、前述のように種々の置換基を側鎖に
導入したタイプのＰＨＡ（unusualＰＨＡ）は、所望と
する特性等に応じて、導入される置換基を選択すること
で、その置換基自体の特性等に起因する、極めて有用な
機能や特性を具備した「機能性ポリマー」としての展開
も期待できる。生分解性に加えて、そのような機能性を
も有する、新規な機能を持つＰＨＡと、その製造方法、
加えて、かかる新規な機能を持つＰＨＡを効率的に生産
しうる微生物の開発、探索もまた重要な課題である。
導入したタイプのＰＨＡ（unusualＰＨＡ）は、所望と
する特性等に応じて、導入される置換基を選択すること
で、その置換基自体の特性等に起因する、極めて有用な
機能や特性を具備した「機能性ポリマー」としての展開
も期待できる。生分解性に加えて、そのような機能性を
も有する、新規な機能を持つＰＨＡと、その製造方法、
加えて、かかる新規な機能を持つＰＨＡを効率的に生産
しうる微生物の開発、探索もまた重要な課題である。
【００２１】側鎖に置換基が導入されたＰＨＡの例とし
ては、前記したフェニル基に加えて、さらに、フェノキ
シ基を側鎖に有するＰＨＡの報告例が挙げられる。
ては、前記したフェニル基に加えて、さらに、フェノキ
シ基を側鎖に有するＰＨＡの報告例が挙げられる。
【００２２】３ＨＰＶモノマーユニット以外に、フェニ
ル基を側鎖に有するＰＨＡの他の例としては、Macromol
ecules, ２９, 1762-1766 （1996）に、シュードモナス
・オレオボランスが、５−(ｐ−トリル)吉草酸（５−
（４−メチルフェニル）吉草酸）を基質として含む培地
中での培養によって、３−ヒドロキシ−５−(ｐ−トリ
ル)吉草酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡを生産
することが報告されている。
ル基を側鎖に有するＰＨＡの他の例としては、Macromol
ecules, ２９, 1762-1766 （1996）に、シュードモナス
・オレオボランスが、５−(ｐ−トリル)吉草酸（５−
（４−メチルフェニル）吉草酸）を基質として含む培地
中での培養によって、３−ヒドロキシ−５−(ｐ−トリ
ル)吉草酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡを生産
することが報告されている。
【００２３】さらには、Macromolecules, ３２, 2889-2
895 （1999）には、シュードモナス・オレオボランス
が、５−(２,４−ジニトロフェニル)吉草酸とノナン酸
を基質として含む培地中での培養によって、３−ヒドロ
キシ−５−(２,４−ジニトロフェニル)吉草酸、およ
び、３−ヒドロキシ−５−(４−ニトロフェニル)吉草酸
をモノマーユニットとして含むＰＨＡを生産することが
報告されている。
895 （1999）には、シュードモナス・オレオボランス
が、５−(２,４−ジニトロフェニル)吉草酸とノナン酸
を基質として含む培地中での培養によって、３−ヒドロ
キシ−５−(２,４−ジニトロフェニル)吉草酸、およ
び、３−ヒドロキシ−５−(４−ニトロフェニル)吉草酸
をモノマーユニットとして含むＰＨＡを生産することが
報告されている。
【００２４】また、フェノキシ基を側鎖に有するＰＨＡ
の例として、Macromol. Chem. Phys., 195, 1665-1672
（1994）に、シュードモナス・オレオボランスが、１１
-フェノキシウンデカン酸から３−ヒドロキシ−５−フ
ェノキシ吉草酸、および、３−ヒドロキシ−９−フェノ
キシノナン酸をユニットとして含むＰＨＡを生産するこ
とが報告されている。
の例として、Macromol. Chem. Phys., 195, 1665-1672
（1994）に、シュードモナス・オレオボランスが、１１
-フェノキシウンデカン酸から３−ヒドロキシ−５−フ
ェノキシ吉草酸、および、３−ヒドロキシ−９−フェノ
キシノナン酸をユニットとして含むＰＨＡを生産するこ
とが報告されている。
【００２５】また、Macromolecules, ２９, 3432-3435
（1996）には、シュードモナス・オレオボランスを用い
て、６-フェノキシヘキサン酸から３−ヒドロキシ−４
−フェノキシ酪酸および３−ヒドロキシ−６−フェノキ
シヘキサン酸をユニットとして含むＰＨＡを、また、８
−フェノキシオクタン酸から３−ヒドロキシ−４−フェ
ノキシ酪酸、３−ヒドロキシ−６−フェノキシヘキサン
酸および３−ヒドロキシ−８−フェノキシオクタン酸を
ユニットとして含むＰＨＡを、さらには、１１−フェノ
キシウンデカン酸から３−ヒドロキシ−５−フェノキシ
吉草酸および３−ヒドロキシ−７−フェノキシヘプタン
酸をユニットとして含むＰＨＡを生産することが報告さ
れている。この報告におけるポリマーの収率を抜粋する
と以下のとおりである。
（1996）には、シュードモナス・オレオボランスを用い
て、６-フェノキシヘキサン酸から３−ヒドロキシ−４
−フェノキシ酪酸および３−ヒドロキシ−６−フェノキ
シヘキサン酸をユニットとして含むＰＨＡを、また、８
−フェノキシオクタン酸から３−ヒドロキシ−４−フェ
ノキシ酪酸、３−ヒドロキシ−６−フェノキシヘキサン
酸および３−ヒドロキシ−８−フェノキシオクタン酸を
ユニットとして含むＰＨＡを、さらには、１１−フェノ
キシウンデカン酸から３−ヒドロキシ−５−フェノキシ
吉草酸および３−ヒドロキシ−７−フェノキシヘプタン
酸をユニットとして含むＰＨＡを生産することが報告さ
れている。この報告におけるポリマーの収率を抜粋する
と以下のとおりである。
【００２６】
【表１】
【００２７】更に、Can. Ｊ. Microbiol., ４１, 32-43
（1995）では、シュードモナス・オレオボランス ATCC
29347株及びシュードモナス・プチダ（Pseudomonas pu
tida） ＫＴ 2442株を用いて、オクタン酸と６−（p
−シアノフェノキシ）ヘキサン酸あるいは６−（p−ニ
トロフェノキシ）ヘキサン酸を基質として、３−ヒドロ
キシ−６−（p−シアノフェノキシ）ヘキサン酸あるい
は３−ヒドロキシ−６−（p−ニトロフェノキシ）ヘキ
サン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡの生産に成
功している。
（1995）では、シュードモナス・オレオボランス ATCC
29347株及びシュードモナス・プチダ（Pseudomonas pu
tida） ＫＴ 2442株を用いて、オクタン酸と６−（p
−シアノフェノキシ）ヘキサン酸あるいは６−（p−ニ
トロフェノキシ）ヘキサン酸を基質として、３−ヒドロ
キシ−６−（p−シアノフェノキシ）ヘキサン酸あるい
は３−ヒドロキシ−６−（p−ニトロフェノキシ）ヘキ
サン酸をモノマーユニットとして含むＰＨＡの生産に成
功している。
【００２８】特許第２９８９１７５号公報には、３−ヒ
ドロキシ−５−（モノフルオロフェノキシ）ペンタノエ
ート（以下、３Ｈ５(ＭＦＰ)Ｐと略す場合もある）ユニ
ットあるいは３−ヒドロキシ−５−（ジフルオロフェノ
キシ）ペンタノエート（以下、３Ｈ５(ＤＦＰ)Ｐと略す
場合もある）ユニットからなるホモポリマー、少なくと
も３Ｈ５（ＭＦＰ）Ｐユニットあるいは３Ｈ５（ＤＦ
Ｐ）Ｐユニットを含有するコポリマー；これらのポリマ
ーを産生するシュードモナス・プチダ；シュードモナス
属を用いた前記のポリマーの製造方法が記載されてい
る。
ドロキシ−５−（モノフルオロフェノキシ）ペンタノエ
ート（以下、３Ｈ５(ＭＦＰ)Ｐと略す場合もある）ユニ
ットあるいは３−ヒドロキシ−５−（ジフルオロフェノ
キシ）ペンタノエート（以下、３Ｈ５(ＤＦＰ)Ｐと略す
場合もある）ユニットからなるホモポリマー、少なくと
も３Ｈ５（ＭＦＰ）Ｐユニットあるいは３Ｈ５（ＤＦ
Ｐ）Ｐユニットを含有するコポリマー；これらのポリマ
ーを産生するシュードモナス・プチダ；シュードモナス
属を用いた前記のポリマーの製造方法が記載されてい
る。
【００２９】これらＰＨＡの生産は、以下の様な「二段
階培養」で行われている。 培養時間： 一段目、２４時間 ； 二段目、９６時間 各段における炭素源と得られるポリマーを以下に示す。 （１）得られるポリマー:３Ｈ５（ＭＦＰ）Ｐホモポリ
マー 一段目の炭素源:クエン酸、イーストエキス 二段目の炭素源:１１−（モノフルオロフェノキシ）ウ
ンデカン酸 （２）得られるポリマー:３Ｈ５(ＤＦＰ)Ｐホモポリマ
ー 一段目の炭素源:クエン酸、イーストエキス 二段目の炭素源:１１−（ジフルオロフェノキシ）ウン
デカン酸 （３）得られるポリマー:３Ｈ５(ＭＦＰ)Ｐコポリマー 一段目の炭素源:オクタン酸あるいはノナン酸、イース
トエキス 二段目の炭素源:１１−（モノフルオロフェノキシ）ウ
ンデカン酸 （４）得られるポリマー:３Ｈ５(ＤＦＰ)Ｐコポリマー 一段目の炭素源:オクタン酸あるいはノナン酸、イース
トエキス 二段目の炭素源:１１−（ジフルオロフェノキシ）ウン
デカン酸 上記の二段階培養法の効果として、置換基を有する中鎖
脂肪酸を資化して、側鎖末端が１から２個のフッ素原子
で置換されたフェノキシ基を有するポリマーを生産する
ことができる。得られるＰＨＡは、フッ素原子で置換さ
れたフェノキシ基を有するため、融点が高く良い加工性
を保ちながら、立体規則性、撥水性を与えることができ
るとしている。
階培養」で行われている。 培養時間： 一段目、２４時間 ； 二段目、９６時間 各段における炭素源と得られるポリマーを以下に示す。 （１）得られるポリマー:３Ｈ５（ＭＦＰ）Ｐホモポリ
マー 一段目の炭素源:クエン酸、イーストエキス 二段目の炭素源:１１−（モノフルオロフェノキシ）ウ
ンデカン酸 （２）得られるポリマー:３Ｈ５(ＤＦＰ)Ｐホモポリマ
ー 一段目の炭素源:クエン酸、イーストエキス 二段目の炭素源:１１−（ジフルオロフェノキシ）ウン
デカン酸 （３）得られるポリマー:３Ｈ５(ＭＦＰ)Ｐコポリマー 一段目の炭素源:オクタン酸あるいはノナン酸、イース
トエキス 二段目の炭素源:１１−（モノフルオロフェノキシ）ウ
ンデカン酸 （４）得られるポリマー:３Ｈ５(ＤＦＰ)Ｐコポリマー 一段目の炭素源:オクタン酸あるいはノナン酸、イース
トエキス 二段目の炭素源:１１−（ジフルオロフェノキシ）ウン
デカン酸 上記の二段階培養法の効果として、置換基を有する中鎖
脂肪酸を資化して、側鎖末端が１から２個のフッ素原子
で置換されたフェノキシ基を有するポリマーを生産する
ことができる。得られるＰＨＡは、フッ素原子で置換さ
れたフェノキシ基を有するため、融点が高く良い加工性
を保ちながら、立体規則性、撥水性を与えることができ
るとしている。
【００３０】あるいは、シクロヘキシル基を側鎖上に有
するモノマーユニットを含むＰＨＡは、通常の脂肪族３
−ヒドロキシアルカン酸をユニットとして含むＰＨＡと
は異なる高分子物性を示すことが期待されている。例え
ば、シュードモナス・オレオボランスによる生産の例が
報告されている（Macromolecules, ３０, 1611-1615（1
997））。
するモノマーユニットを含むＰＨＡは、通常の脂肪族３
−ヒドロキシアルカン酸をユニットとして含むＰＨＡと
は異なる高分子物性を示すことが期待されている。例え
ば、シュードモナス・オレオボランスによる生産の例が
報告されている（Macromolecules, ３０, 1611-1615（1
997））。
【００３１】この報告によれば、シュードモナス・オレ
オボランスを、ノナン酸（以下、ＮＡと略す場合もあ
る）とシクロヘキシル酪酸（以下、ＣＨＢＡと略す場合
もある）あるいはシクロヘキシル吉草酸（以下、ＣＨＶ
Ａと略す場合もある）の共存する培地中で培養すると、
シクロヘキシル基を側鎖上に有するモノマーユニット
と、ノナン酸由来のユニットを含むＰＨＡが得られてい
る（各割合は不明）。
オボランスを、ノナン酸（以下、ＮＡと略す場合もあ
る）とシクロヘキシル酪酸（以下、ＣＨＢＡと略す場合
もある）あるいはシクロヘキシル吉草酸（以下、ＣＨＶ
Ａと略す場合もある）の共存する培地中で培養すると、
シクロヘキシル基を側鎖上に有するモノマーユニット
と、ノナン酸由来のユニットを含むＰＨＡが得られてい
る（各割合は不明）。
【００３２】その収率等に関しては、ＣＨＢＡに対し
て、基質濃度トータル20 ｍｍol/L の条件で、ＣＨＢＡ
とＮＡの量比を変化させ、表２に示すような結果を得た
と報告されている。
て、基質濃度トータル20 ｍｍol/L の条件で、ＣＨＢＡ
とＮＡの量比を変化させ、表２に示すような結果を得た
と報告されている。
【００３３】
【表２】
【００３４】しかしながら、この例では、培養液当たり
のポリマー収率は十分なものではなく、また、得られた
ＰＨＡ自体も、そのモノマーユニット中にはノナン酸由
来の脂肪族ヒドロキシアルカン酸が混在しているもので
ある。
のポリマー収率は十分なものではなく、また、得られた
ＰＨＡ自体も、そのモノマーユニット中にはノナン酸由
来の脂肪族ヒドロキシアルカン酸が混在しているもので
ある。
【００３５】側鎖に様々な置換基が導入されたＰＨＡを
微生物により生産しようとする場合、先に挙げたシュー
ドモナス・オレオボランスの報告例等に見られるよう
に、導入しようとする置換基を有するアルカノエート
を、ポリマーの原料とする上に、微生物の増殖用炭素源
としても利用する方法が用いられている。
微生物により生産しようとする場合、先に挙げたシュー
ドモナス・オレオボランスの報告例等に見られるよう
に、導入しようとする置換基を有するアルカノエート
を、ポリマーの原料とする上に、微生物の増殖用炭素源
としても利用する方法が用いられている。
【００３６】しかしながら、導入しようとする置換基を
有するアルカノエートを、ポリマー原料とする上に、増
殖用炭素源としても利用する培養方法では、原料の置換
アルカノエートのβ酸化に因るアセチル−ＣoＡの生成
を経て、エネルギー源の供給が期待されている。この培
養方法においては、ある程度の鎖長を有する置換アルカ
ノエート基質でないとβ酸化によりアセチル−ＣoＡを
生成することができず、そのため、ＰＨＡ産生の基質と
して用いうる置換アルカノエートが限定されてしまう点
が大きな課題となる。また、一般的に、前記のβ酸化に
より、原料と比較して、その鎖長がメチレン鎖２つ分ず
つ短くなった基質が新たに生成される。これら副生する
基質に由来するモノマーユニットも、産生されるＰＨＡ
のモノマーユニットとして取り込まれるため、得られる
ＰＨＡは鎖長がメチレン鎖２つ分ずつ異なるモノマーユ
ニットからなる共重合体となることが多い。前述の報告
例では、原料基質である８−フェノキシオクタン酸由来
の３−ヒドロキシ−８−フェノキシオクタン酸に加え
て、代謝産物由来の副生物である３−ヒドロキシ−６−
フェノキシヘキサン酸及び３−ヒドロキシ−４−フェノ
キシ酪酸を含む、合計３種類のモノマーユニットからな
る共重合体が生産されている。そのため、原料基質を唯
一の炭素源とする培養方法を用いて、単一のモノマーユ
ニットからなるＰＨＡを得ることは極めて難しい。さら
に、β酸化によるアセチル−ＣoＡの生成を経るエネル
ギー源の供給を前提とした方法では、微生物の増殖が遅
く、ＰＨＡの生産に時間を要する点、また、産生される
ＰＨＡの収率が低くなりがちな点も大きな課題となる。
有するアルカノエートを、ポリマー原料とする上に、増
殖用炭素源としても利用する培養方法では、原料の置換
アルカノエートのβ酸化に因るアセチル−ＣoＡの生成
を経て、エネルギー源の供給が期待されている。この培
養方法においては、ある程度の鎖長を有する置換アルカ
ノエート基質でないとβ酸化によりアセチル−ＣoＡを
生成することができず、そのため、ＰＨＡ産生の基質と
して用いうる置換アルカノエートが限定されてしまう点
が大きな課題となる。また、一般的に、前記のβ酸化に
より、原料と比較して、その鎖長がメチレン鎖２つ分ず
つ短くなった基質が新たに生成される。これら副生する
基質に由来するモノマーユニットも、産生されるＰＨＡ
のモノマーユニットとして取り込まれるため、得られる
ＰＨＡは鎖長がメチレン鎖２つ分ずつ異なるモノマーユ
ニットからなる共重合体となることが多い。前述の報告
例では、原料基質である８−フェノキシオクタン酸由来
の３−ヒドロキシ−８−フェノキシオクタン酸に加え
て、代謝産物由来の副生物である３−ヒドロキシ−６−
フェノキシヘキサン酸及び３−ヒドロキシ−４−フェノ
キシ酪酸を含む、合計３種類のモノマーユニットからな
る共重合体が生産されている。そのため、原料基質を唯
一の炭素源とする培養方法を用いて、単一のモノマーユ
ニットからなるＰＨＡを得ることは極めて難しい。さら
に、β酸化によるアセチル−ＣoＡの生成を経るエネル
ギー源の供給を前提とした方法では、微生物の増殖が遅
く、ＰＨＡの生産に時間を要する点、また、産生される
ＰＨＡの収率が低くなりがちな点も大きな課題となる。
【００３７】それを解決するため、導入しようとする置
換基を有するアルカノエートに加えて、増殖用炭素源と
して、オクタン酸やノナン酸といった中鎖の脂肪酸等を
共存させた培地で微生物を培養した後、ＰＨＡを抽出す
る方法は、収率の向上に有効と考えられ、一般的に利用
されている。
換基を有するアルカノエートに加えて、増殖用炭素源と
して、オクタン酸やノナン酸といった中鎖の脂肪酸等を
共存させた培地で微生物を培養した後、ＰＨＡを抽出す
る方法は、収率の向上に有効と考えられ、一般的に利用
されている。
【００３８】しかしながら、本発明者らの検討によれ
ば、原料基質以外に、オクタン酸やノナン酸といった中
鎖の脂肪酸等を増殖用炭素源として含有する培地を利用
すると、β-酸化経路を経て合成されるＰＨＡは、原料
基質に由来する目的のモノマーユニットの純度（含有比
率）が相対的に低く、得られるポリマーに含まれるモノ
マーユニットの 50％以上（モル比率）が、増殖用炭素
源として利用する中鎖の脂肪酸等に由来するモノマーユ
ニット（例えば、３−ヒドロキシオクタン酸や３−ヒド
ロキシノナン酸等）であるmcl-３ＨＡモノマーユニッ
ト、すなわち「usual ＰＨＡ」のユニットとなる。これ
らmcl-３ＨＡユニットは、単独の組成においては常温で
粘着性のポリマーを与え、目的とするＰＨＡに多量に混
在した場合、得られるポリマーのガラス転移温度（Ｔ
g）を著しく降下させる。従って、常温で硬いポリマー
物性を得ようとする際には、mcl-３ＨＡモノマーユニッ
トの混在は望ましくない。加えて、このようなヘテロな
側鎖構造は、ポリマー分子内あるいは分子間での側鎖構
造に由来する相互作用を妨害し、結晶性あるいは配向性
に大きな影響を与えることが知られている。その点から
も、ポリマー物性の向上、機能性の付与を達成するにあ
たり、これらのmcl-３ＨＡモノマーユニットの混在は大
きな課題である。
ば、原料基質以外に、オクタン酸やノナン酸といった中
鎖の脂肪酸等を増殖用炭素源として含有する培地を利用
すると、β-酸化経路を経て合成されるＰＨＡは、原料
基質に由来する目的のモノマーユニットの純度（含有比
率）が相対的に低く、得られるポリマーに含まれるモノ
マーユニットの 50％以上（モル比率）が、増殖用炭素
源として利用する中鎖の脂肪酸等に由来するモノマーユ
ニット（例えば、３−ヒドロキシオクタン酸や３−ヒド
ロキシノナン酸等）であるmcl-３ＨＡモノマーユニッ
ト、すなわち「usual ＰＨＡ」のユニットとなる。これ
らmcl-３ＨＡユニットは、単独の組成においては常温で
粘着性のポリマーを与え、目的とするＰＨＡに多量に混
在した場合、得られるポリマーのガラス転移温度（Ｔ
g）を著しく降下させる。従って、常温で硬いポリマー
物性を得ようとする際には、mcl-３ＨＡモノマーユニッ
トの混在は望ましくない。加えて、このようなヘテロな
側鎖構造は、ポリマー分子内あるいは分子間での側鎖構
造に由来する相互作用を妨害し、結晶性あるいは配向性
に大きな影響を与えることが知られている。その点から
も、ポリマー物性の向上、機能性の付与を達成するにあ
たり、これらのmcl-３ＨＡモノマーユニットの混在は大
きな課題である。
【００３９】このmcl-３ＨＡモノマーユニットの混在に
起因する特性上の課題を解決する手段の一つとして、特
定の置換基を有するモノマーユニットのみで構成された
ＰＨＡを取得するため、増殖用炭素源由来のmcl-３ＨＡ
モノマーユニット等の「目的外」のモノマーユニットを
分離/除去するための精製工程を設けることが挙げられ
る。しかしながら、精製工程を設けると、目的とするＰ
ＨＡの回収工程全体として、操作が煩雑となる上、分離
/除去に伴い、場合によっては、大幅な収率の低下を引
き起こすことも避けられない点が課題として残る。さら
に、本質的な大きな問題点は、目的のモノマーユニット
と目的外のモノマーユニットとが共重合体を形成してい
る際には、精製工程によって、目的外のモノマーユニッ
トのみを除去するのは極めて困難であることである。特
に、不飽和炭化水素から得られる基、エステル基、アリ
ル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン化炭化水素から得
られる基、エポキシド等が導入された基を、側鎖構造上
の置換基として有するようなモノマーユニットを含むＰ
ＨＡの生産を目的とする際には、mcl-３ＨＡモノマーユ
ニットは目的のモノマーユニットと共重合体を形成して
いる場合が多く、産生されたＰＨＡから、含まれている
mcl-３ＨＡモノマーユニットの除去は極めて困難であ
る。
起因する特性上の課題を解決する手段の一つとして、特
定の置換基を有するモノマーユニットのみで構成された
ＰＨＡを取得するため、増殖用炭素源由来のmcl-３ＨＡ
モノマーユニット等の「目的外」のモノマーユニットを
分離/除去するための精製工程を設けることが挙げられ
る。しかしながら、精製工程を設けると、目的とするＰ
ＨＡの回収工程全体として、操作が煩雑となる上、分離
/除去に伴い、場合によっては、大幅な収率の低下を引
き起こすことも避けられない点が課題として残る。さら
に、本質的な大きな問題点は、目的のモノマーユニット
と目的外のモノマーユニットとが共重合体を形成してい
る際には、精製工程によって、目的外のモノマーユニッ
トのみを除去するのは極めて困難であることである。特
に、不飽和炭化水素から得られる基、エステル基、アリ
ル基、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン化炭化水素から得
られる基、エポキシド等が導入された基を、側鎖構造上
の置換基として有するようなモノマーユニットを含むＰ
ＨＡの生産を目的とする際には、mcl-３ＨＡモノマーユ
ニットは目的のモノマーユニットと共重合体を形成して
いる場合が多く、産生されたＰＨＡから、含まれている
mcl-３ＨＡモノマーユニットの除去は極めて困難であ
る。
【００４０】以上のことを考慮に入れ、本発明者らは、
機能性ポリマーへの応用を図る上では、目的とする「un
usual ＰＨＡ」を高純度で得られる微生物による生産方
法の開発が是非とも必要であるとの認識を持つに至っ
た。より具体的には、生分解性と導入される置換基に由
来する前記のような機能性とを兼ね備えた優れたポリマ
ーの創製と、このポリマーを生産し菌体内に蓄積し得る
微生物を見出すこと、ならびに、見出した微生物を利用
して、目的とするモノマーユニットを高い比率（高純
度）で含むＰＨＡを効率的に生産する方法の開発は、有
用かつ重要であると考えた。
機能性ポリマーへの応用を図る上では、目的とする「un
usual ＰＨＡ」を高純度で得られる微生物による生産方
法の開発が是非とも必要であるとの認識を持つに至っ
た。より具体的には、生分解性と導入される置換基に由
来する前記のような機能性とを兼ね備えた優れたポリマ
ーの創製と、このポリマーを生産し菌体内に蓄積し得る
微生物を見出すこと、ならびに、見出した微生物を利用
して、目的とするモノマーユニットを高い比率（高純
度）で含むＰＨＡを効率的に生産する方法の開発は、有
用かつ重要であると考えた。
【００４１】本発明は前記の課題を解決するもので、本
発明の目的は、デバイス材料や医用材料等として利用可
能な、ポリマー特性の付与に有用な多様な構造の置換基
を側鎖に有するモノマーユニットを含む新規なＰＨＡ
（unusual ＰＨＡ）、ならびに、かかる新規な「unusua
l ＰＨＡ」を微生物を利用して製造する方法を提供する
ことにある。より具体的には、目的外のモノマーユニッ
トの混在が少なく、目的とする置換基を側鎖に有するモ
ノマーユニットを高純度で含む「unusual ＰＨＡ」を選
択的に、また、高収率で得ることができる製造方法を提
供することにある。
発明の目的は、デバイス材料や医用材料等として利用可
能な、ポリマー特性の付与に有用な多様な構造の置換基
を側鎖に有するモノマーユニットを含む新規なＰＨＡ
（unusual ＰＨＡ）、ならびに、かかる新規な「unusua
l ＰＨＡ」を微生物を利用して製造する方法を提供する
ことにある。より具体的には、目的外のモノマーユニッ
トの混在が少なく、目的とする置換基を側鎖に有するモ
ノマーユニットを高純度で含む「unusual ＰＨＡ」を選
択的に、また、高収率で得ることができる製造方法を提
供することにある。
【００４２】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、前記の課
題を解決すべく、デバイス材料や医用材料等として有用
な官能基を側鎖に有するＰＨＡの開発を目指して、各種
のＰＨＡを生産し菌体内に蓄積する能力を有する微生物
の探索、ならびに、このようなＰＨＡ産生能を有する微
生物を用いて、所望のモノマーユニットを高純度で含む
ＰＨＡの生産方法を開発するため、鋭意研究を重ねてき
た。その結果、末端にチエニル基を置換したアルカン酸
（ω−チエニルアルカン酸）を基質として、対応する３
−ヒドロキシ−ω−チエニルアルカン酸のモノマーユニ
ットを含む新規なＰＨＡを生産し菌体内に蓄積する能力
を有する微生物を見出した。さらに、本発明者らは、こ
れらＰＨＡ産生能を有する微生物を、基質のω−チエニ
ルアルカン酸に加えて、糖類、酵母エキス、または、ポ
リペプトンを共存させている培地で培養することによ
り、前記の目的とするＰＨＡを高い収率で生産すること
ができること、さらには、その際得られるＰＨＡは、対
応する３−ヒドロキシ−ω−チエニルアルカン酸のモノ
マーユニットを比較的高純度（含有比率）で含むことを
も見出し、本発明を完成するに至った。
題を解決すべく、デバイス材料や医用材料等として有用
な官能基を側鎖に有するＰＨＡの開発を目指して、各種
のＰＨＡを生産し菌体内に蓄積する能力を有する微生物
の探索、ならびに、このようなＰＨＡ産生能を有する微
生物を用いて、所望のモノマーユニットを高純度で含む
ＰＨＡの生産方法を開発するため、鋭意研究を重ねてき
た。その結果、末端にチエニル基を置換したアルカン酸
（ω−チエニルアルカン酸）を基質として、対応する３
−ヒドロキシ−ω−チエニルアルカン酸のモノマーユニ
ットを含む新規なＰＨＡを生産し菌体内に蓄積する能力
を有する微生物を見出した。さらに、本発明者らは、こ
れらＰＨＡ産生能を有する微生物を、基質のω−チエニ
ルアルカン酸に加えて、糖類、酵母エキス、または、ポ
リペプトンを共存させている培地で培養することによ
り、前記の目的とするＰＨＡを高い収率で生産すること
ができること、さらには、その際得られるＰＨＡは、対
応する３−ヒドロキシ−ω−チエニルアルカン酸のモノ
マーユニットを比較的高純度（含有比率）で含むことを
も見出し、本発明を完成するに至った。
【００４３】すなわち、本発明のポリヒドロキシアルカ
ノエートは、下記式［１］で表されるモノマーユニット
組成を有することを特徴とするポリヒドロキシアルカノ
エート。 ＡxＢ(1-x) ［１］ （式中、Ａは、下記一般式［２］で表される少なくとも
１つ以上のモノマーユニットであり、Ｂは、下記一般式
［３］で表されるモノマーユニットならびに下記一般式
［４］で表されるモノマーユニットからなる群から選択
される少なくとも１つ以上のモノマーユニットであり、
xは０.０１以上１以下である）
ノエートは、下記式［１］で表されるモノマーユニット
組成を有することを特徴とするポリヒドロキシアルカノ
エート。 ＡxＢ(1-x) ［１］ （式中、Ａは、下記一般式［２］で表される少なくとも
１つ以上のモノマーユニットであり、Ｂは、下記一般式
［３］で表されるモノマーユニットならびに下記一般式
［４］で表されるモノマーユニットからなる群から選択
される少なくとも１つ以上のモノマーユニットであり、
xは０.０１以上１以下である）
【００４４】
【化３４】
【００４５】（式中、ｎは１から８の整数のいずれかを
表す）
表す）
【００４６】
【化３５】
【００４７】（式中、ｐは０から１０の整数のいずれか
を表す）
を表す）
【００４８】
【化３６】
【００４９】（式中、ｑは３または５である） 本発明のポリヒドロキシアルカノエートには、前記Ａ成
分のモノマーユニットの一つとして、下記化学式［５］
で表されるモノマーユニットを含むことを特徴とするポ
リヒドロキシアルカノエートが含まれる。
分のモノマーユニットの一つとして、下記化学式［５］
で表されるモノマーユニットを含むことを特徴とするポ
リヒドロキシアルカノエートが含まれる。
【００５０】
【化３７】
【００５１】本発明のポリヒドロキシアルカノエートに
は、前記Ａ成分のモノマーユニットの一つとして、下記
化学式［６］で表されるモノマーユニットを含むことを
特徴とするポリヒドロキシアルカノエートが含まれる。
は、前記Ａ成分のモノマーユニットの一つとして、下記
化学式［６］で表されるモノマーユニットを含むことを
特徴とするポリヒドロキシアルカノエートが含まれる。
【００５２】
【化３８】
【００５３】本発明のポリヒドロキシアルカノエートに
は、前記Ａ成分のモノマーユニットの一つとして、下記
化学式［７］で表されるモノマーユニットを含むことを
特徴とするポリヒドロキシアルカノエートが含まれる。
は、前記Ａ成分のモノマーユニットの一つとして、下記
化学式［７］で表されるモノマーユニットを含むことを
特徴とするポリヒドロキシアルカノエートが含まれる。
【００５４】
【化３９】
【００５５】本発明のポリヒドロキシアルカノエートに
は、前記Ａ成分のモノマーユニットの一つとして、下記
化学式［８］で表されるモノマーユニットを含むことを
特徴とするポリヒドロキシアルカノエートが含まれる。
は、前記Ａ成分のモノマーユニットの一つとして、下記
化学式［８］で表されるモノマーユニットを含むことを
特徴とするポリヒドロキシアルカノエートが含まれる。
【００５６】
【化４０】
【００５７】本発明のポリヒドロキシアルカノエートに
は、前記Ａ成分のモノマーユニットとして、下記化学式
［５］で表されるモノマーユニットならびに下記化学式
［７］で表されるモノマーユニットを含むことを特徴と
するポリヒドロキシアルカノエートが含まれる。
は、前記Ａ成分のモノマーユニットとして、下記化学式
［５］で表されるモノマーユニットならびに下記化学式
［７］で表されるモノマーユニットを含むことを特徴と
するポリヒドロキシアルカノエートが含まれる。
【００５８】
【化４１】
【００５９】
【化４２】
【００６０】本発明のポリヒドロキシアルカノエートに
は、前記Ａ成分のモノマーユニットとして、下記化学式
［６］で表されるモノマーユニットならびに下記化学式
［８］で表されるモノマーユニットを含むことを特徴と
するポリヒドロキシアルカノエートが含まれる。
は、前記Ａ成分のモノマーユニットとして、下記化学式
［６］で表されるモノマーユニットならびに下記化学式
［８］で表されるモノマーユニットを含むことを特徴と
するポリヒドロキシアルカノエートが含まれる。
【００６１】
【化４３】
【００６２】
【化４４】
【００６３】本発明のポリヒドロキシアルカノエートに
は、前記Ａ成分のモノマーユニットとして、下記化学式
［５］で表されるモノマーユニットのみを含むポリマー
であることを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート
が含まれる。
は、前記Ａ成分のモノマーユニットとして、下記化学式
［５］で表されるモノマーユニットのみを含むポリマー
であることを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート
が含まれる。
【００６４】
【化４５】
【００６５】本発明のポリヒドロキシアルカノエートに
は、前記Ａ成分のモノマーユニットとして、下記化学式
［６］で表されるモノマーユニットのみを含むポリマー
であることを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート
が含まれる。
は、前記Ａ成分のモノマーユニットとして、下記化学式
［６］で表されるモノマーユニットのみを含むポリマー
であることを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート
が含まれる。
【００６６】
【化４６】
【００６７】本発明のポリヒドロキシアルカノエートに
は、前記Ａ成分のモノマーユニットとして、下記化学式
［７］で表されるモノマーユニットのみを含むポリマー
であることを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート
が含まれる。
は、前記Ａ成分のモノマーユニットとして、下記化学式
［７］で表されるモノマーユニットのみを含むポリマー
であることを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート
が含まれる。
【００６８】
【化４７】
【００６９】本発明のポリヒドロキシアルカノエートに
は、前記Ａ成分のモノマーユニットとして、下記化学式
［８］で表されるモノマーユニットのみを含むポリマー
であることを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート
が含まれる。
は、前記Ａ成分のモノマーユニットとして、下記化学式
［８］で表されるモノマーユニットのみを含むポリマー
であることを特徴とするポリヒドロキシアルカノエート
が含まれる。
【００７０】
【化４８】
【００７１】なお、上記する種々の構成をとる本発明の
ポリヒドロキシアルカノエートは、ポリマー全体の数平
均分子量が10,000から300,000であるポリヒドロキシア
ルカノエートとすることができる。
ポリヒドロキシアルカノエートは、ポリマー全体の数平
均分子量が10,000から300,000であるポリヒドロキシア
ルカノエートとすることができる。
【００７２】加えて、本発明は、微生物を利用して、上
記する種々の構成をとる本発明のポリヒドロキシアルカ
ノエートを製造する方法をも提供している。すなわち、
本発明のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法は、
ポリヒドロキシアルカノエート（ＰＨＡ）産生能を有す
る微生物を利用して、下記式［１］で表されるモノマー
ユニット組成を有するポリヒドロキシアルカノエートを
製造する方法であって、目的とするポリヒドロキシアル
カノエートは、下記式［１］で表されるモノマーユニッ
ト組成を有するポリヒドロキシアルカノエートであり、 ＡxＢ(1-x) ［１］ （ただし、上記式中、Ａは下記化学式［２］で表される
少なくとも１つ以上であり、Ｂは下記化学式［３］また
は下記化学式［４］で表されるモノマーユニットから選
択される少なくとも１つ以上であり、xは０.０１以上１
以下である）；
記する種々の構成をとる本発明のポリヒドロキシアルカ
ノエートを製造する方法をも提供している。すなわち、
本発明のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法は、
ポリヒドロキシアルカノエート（ＰＨＡ）産生能を有す
る微生物を利用して、下記式［１］で表されるモノマー
ユニット組成を有するポリヒドロキシアルカノエートを
製造する方法であって、目的とするポリヒドロキシアル
カノエートは、下記式［１］で表されるモノマーユニッ
ト組成を有するポリヒドロキシアルカノエートであり、 ＡxＢ(1-x) ［１］ （ただし、上記式中、Ａは下記化学式［２］で表される
少なくとも１つ以上であり、Ｂは下記化学式［３］また
は下記化学式［４］で表されるモノマーユニットから選
択される少なくとも１つ以上であり、xは０.０１以上１
以下である）；
【００７３】
【化４９】
【００７４】（式中、ｎは１以上８以下の整数を表
す）；
す）；
【００７５】
【化５０】
【００７６】（式中、ｐは０から１０の整数のいずれか
を表す）；
を表す）；
【００７７】
【化５１】
【００７８】（式中、ｑは３または５である）；利用す
るＰＨＡ産生能を有する微生物は、末端にチエニル基置
換を有するアルカン酸（チエニルアルカン酸）を基質と
して、対応する末端にチエニル基置換を有する３−ヒド
ロキシアルカン酸のモノマーユニットを含むポリヒドロ
キシアルカノエートを産生する能力を有し；上記Ａ成分
の末端にチエニル基置換を有する３−ヒドロキシアルカ
ン酸のモノマーユニットに対応する末端にチエニル基置
換を有するアルカン酸（チエニルアルカン酸）を原料と
して含む培地において、前記微生物を培養する工程を有
することを特徴とするポリヒドロキシアルカノエートの
製造方法である。
るＰＨＡ産生能を有する微生物は、末端にチエニル基置
換を有するアルカン酸（チエニルアルカン酸）を基質と
して、対応する末端にチエニル基置換を有する３−ヒド
ロキシアルカン酸のモノマーユニットを含むポリヒドロ
キシアルカノエートを産生する能力を有し；上記Ａ成分
の末端にチエニル基置換を有する３−ヒドロキシアルカ
ン酸のモノマーユニットに対応する末端にチエニル基置
換を有するアルカン酸（チエニルアルカン酸）を原料と
して含む培地において、前記微生物を培養する工程を有
することを特徴とするポリヒドロキシアルカノエートの
製造方法である。
【００７９】本発明のポリヒドロキシアルカノエートの
製造方法は、例えば、原料のチエニルアルカン酸とし
て、下記一般式［９］で表されるチエニルアルカン酸を
用いて、生産するポリヒドロキシアルカノエートは、下
記一般式［１０］で表されるモノマーユニットを含むポ
リヒドロキシアルカノエートであることを特徴とするポ
リヒドロキシアルカノエートの製造方法とすることがで
きる。
製造方法は、例えば、原料のチエニルアルカン酸とし
て、下記一般式［９］で表されるチエニルアルカン酸を
用いて、生産するポリヒドロキシアルカノエートは、下
記一般式［１０］で表されるモノマーユニットを含むポ
リヒドロキシアルカノエートであることを特徴とするポ
リヒドロキシアルカノエートの製造方法とすることがで
きる。
【００８０】
【化５２】
【００８１】（式中、ｎは１から８の整数のいずれかを
表す）；
表す）；
【００８２】
【化５３】
【００８３】（式中、ｍは、１以上の整数であって、前
記一般式［９］のｎにより定まる、ｎ、ｎ−２、ｎ−
４、ｎ−６からなる群より選択されるいずれかの整数を
表す） 本発明のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法は、
例えば、原料のチエニルアルカン酸と糖類とを含む培地
で、原料の前記チエニルアルカン酸を利用して、前記式
［１］で表されるモノマーユニット組成を有するポリヒ
ドロキシアルカノエートを生産する微生物を培養する工
程を有することを特徴とするポリヒドロキシアルカノエ
ートの製造方法とすることができる。例えば、前記微生
物の培養は、原料のチエニルアルカン酸と糖類とを含む
培地による１段階培養であることを特徴とするポリヒド
ロキシアルカノエートの製造方法とすることができる。
また、例えば、前記微生物の培養は、原料のチエニルア
ルカン酸と糖類とを含む培地による培養と、これに続
く、原料のチエニルアルカン酸と糖類を含み、しかしな
がら、含有される窒素源を制限した培地による培養と
の、少なくとも２段階の培養で実施されることを特徴と
するポリヒドロキシアルカノエートの製造方法とするこ
ともできる。その際、例えば、培地に含有される前記糖
類が、グルコース、フルクトース、マンノースからなる
群から選択される少なくとも一つの糖類であることを特
徴とするポリヒドロキシアルカノエートの製造方法とす
ることができる。
記一般式［９］のｎにより定まる、ｎ、ｎ−２、ｎ−
４、ｎ−６からなる群より選択されるいずれかの整数を
表す） 本発明のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法は、
例えば、原料のチエニルアルカン酸と糖類とを含む培地
で、原料の前記チエニルアルカン酸を利用して、前記式
［１］で表されるモノマーユニット組成を有するポリヒ
ドロキシアルカノエートを生産する微生物を培養する工
程を有することを特徴とするポリヒドロキシアルカノエ
ートの製造方法とすることができる。例えば、前記微生
物の培養は、原料のチエニルアルカン酸と糖類とを含む
培地による１段階培養であることを特徴とするポリヒド
ロキシアルカノエートの製造方法とすることができる。
また、例えば、前記微生物の培養は、原料のチエニルア
ルカン酸と糖類とを含む培地による培養と、これに続
く、原料のチエニルアルカン酸と糖類を含み、しかしな
がら、含有される窒素源を制限した培地による培養と
の、少なくとも２段階の培養で実施されることを特徴と
するポリヒドロキシアルカノエートの製造方法とするこ
ともできる。その際、例えば、培地に含有される前記糖
類が、グルコース、フルクトース、マンノースからなる
群から選択される少なくとも一つの糖類であることを特
徴とするポリヒドロキシアルカノエートの製造方法とす
ることができる。
【００８４】本発明のポリヒドロキシアルカノエートの
製造方法は、例えば、原料のチエニルアルカン酸と酵母
エキスとを含む培地で、原料の前記チエニルアルカン酸
を利用して前記式［１］で表されるモノマーユニット組
成を有するポリヒドロキシアルカノエートを生産する微
生物を培養する工程を有することを特徴とするポリヒド
ロキシアルカノエートの製造方法とすることができる。
製造方法は、例えば、原料のチエニルアルカン酸と酵母
エキスとを含む培地で、原料の前記チエニルアルカン酸
を利用して前記式［１］で表されるモノマーユニット組
成を有するポリヒドロキシアルカノエートを生産する微
生物を培養する工程を有することを特徴とするポリヒド
ロキシアルカノエートの製造方法とすることができる。
【００８５】本発明のポリヒドロキシアルカノエートの
製造方法は、例えば、原料のチエニルアルカン酸とポリ
ペプトンとを含む培地で、原料の前記チエニルアルカン
酸を利用して前記式［１］で表されるモノマーユニット
組成を有するポリヒドロキシアルカノエートを生産する
微生物を培養する工程を有することを特徴とするポリヒ
ドロキシアルカノエートの製造方法とすることができ
る。
製造方法は、例えば、原料のチエニルアルカン酸とポリ
ペプトンとを含む培地で、原料の前記チエニルアルカン
酸を利用して前記式［１］で表されるモノマーユニット
組成を有するポリヒドロキシアルカノエートを生産する
微生物を培養する工程を有することを特徴とするポリヒ
ドロキシアルカノエートの製造方法とすることができ
る。
【００８６】さらに、本発明のポリヒドロキシアルカノ
エートの製造方法は、微生物が産生したポリヒドロキシ
アルカノエートを単離する工程をさらに有することを特
徴とするポリヒドロキシアルカノエートの製造方法とす
ることが好ましい。
エートの製造方法は、微生物が産生したポリヒドロキシ
アルカノエートを単離する工程をさらに有することを特
徴とするポリヒドロキシアルカノエートの製造方法とす
ることが好ましい。
【００８７】上記の本発明のポリヒドロキシアルカノエ
ートの製造方法においては、利用するＰＨＡ産生能を有
する微生物が、シュードモナス属（Pseudomonas sp.）
に属する微生物であることを特徴とするポリヒドロキシ
アルカノエートの製造方法とすることが好ましい。その
際、例えば、前記微生物が、シュードモナス・プチダ・
Ｐ９１株（Pseudomonas putida Ｐ９１、ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−７３７３）、シュードモナス・チコリアイ・Ｈ４５
株（Pseudomonas cichorii Ｈ４５、ＦＥＲＭＢＰ−７
３７４）、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株（Ps
eudomonas cichorii ＹＮ２、ＦＥＲＭ ＢＰ−７３７
５）、シュードモナス・ジェッセニイ・Ｐ１６１株（Ps
eudomonas jessenii Ｐ１６１、ＦＥＲＭ ＢＰ-７３７
６）からなる群から選択される少なくとも１つの菌株で
あることを特徴とするポリヒドロキシアルカノエートの
製造方法とするとより好ましい。
ートの製造方法においては、利用するＰＨＡ産生能を有
する微生物が、シュードモナス属（Pseudomonas sp.）
に属する微生物であることを特徴とするポリヒドロキシ
アルカノエートの製造方法とすることが好ましい。その
際、例えば、前記微生物が、シュードモナス・プチダ・
Ｐ９１株（Pseudomonas putida Ｐ９１、ＦＥＲＭ Ｂ
Ｐ−７３７３）、シュードモナス・チコリアイ・Ｈ４５
株（Pseudomonas cichorii Ｈ４５、ＦＥＲＭＢＰ−７
３７４）、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株（Ps
eudomonas cichorii ＹＮ２、ＦＥＲＭ ＢＰ−７３７
５）、シュードモナス・ジェッセニイ・Ｐ１６１株（Ps
eudomonas jessenii Ｐ１６１、ＦＥＲＭ ＢＰ-７３７
６）からなる群から選択される少なくとも１つの菌株で
あることを特徴とするポリヒドロキシアルカノエートの
製造方法とするとより好ましい。
【００８８】本発明のポリヒドロキシアルカノエートの
製造方法には、生産目的のポリヒドロキシアルカノエー
トは、下記化学式［６］で表されるモノマーユニットを
含むポリヒドロキシアルカノエートであり、下記化学式
［１１］で表される５−（２−チエニル）吉草酸を原料
として含む前記培地において、５−（２−チエニル）吉
草酸を基質に利用して、下記化学式［６］で表されるモ
ノマーユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートを
生産する微生物を培養する工程を有することを特徴とす
るポリヒドロキシアルカノエートの製造方法が含まれ
る。
製造方法には、生産目的のポリヒドロキシアルカノエー
トは、下記化学式［６］で表されるモノマーユニットを
含むポリヒドロキシアルカノエートであり、下記化学式
［１１］で表される５−（２−チエニル）吉草酸を原料
として含む前記培地において、５−（２−チエニル）吉
草酸を基質に利用して、下記化学式［６］で表されるモ
ノマーユニットを含むポリヒドロキシアルカノエートを
生産する微生物を培養する工程を有することを特徴とす
るポリヒドロキシアルカノエートの製造方法が含まれ
る。
【００８９】
【化５４】
【００９０】
【化５５】
【００９１】本発明のポリヒドロキシアルカノエートの
製造方法には、生産目的のポリヒドロキシアルカノエー
トは、下記化学式［７］で表されるモノマーユニットを
含むポリヒドロキシアルカノエートであり、下記化学式
［１２］で表される６−（２−チエニル）ヘキサン酸を
含む培地で、６−（２−チエニル）ヘキサン酸を利用し
て下記化学式［７］で表されるモノマーユニットを含む
ポリヒドロキシアルカノエートを生産する微生物を培養
する工程を有することを特徴とするポリヒドロキシアル
カノエートの製造方法が含まれる。
製造方法には、生産目的のポリヒドロキシアルカノエー
トは、下記化学式［７］で表されるモノマーユニットを
含むポリヒドロキシアルカノエートであり、下記化学式
［１２］で表される６−（２−チエニル）ヘキサン酸を
含む培地で、６−（２−チエニル）ヘキサン酸を利用し
て下記化学式［７］で表されるモノマーユニットを含む
ポリヒドロキシアルカノエートを生産する微生物を培養
する工程を有することを特徴とするポリヒドロキシアル
カノエートの製造方法が含まれる。
【００９２】
【化５６】
【００９３】
【化５７】
【００９４】本発明のポリヒドロキシアルカノエートの
製造方法には、生産目的のポリヒドロキシアルカノエー
トは、下記化学式［８］で表されるモノマーユニットを
含むポリヒドロキシアルカノエートであり、下記化学式
［１３］で表される７−（２−チエニル）ヘプタン酸を
含む培地で、７−（２−チエニル）ヘプタン酸を利用し
て下記化学式［８］で表されるモノマーユニットを含む
ポリヒドロキシアルカノエートを生産する微生物を培養
する工程を有することを特徴とするポリヒドロキシアル
カノエートの製造方法が含まれる。
製造方法には、生産目的のポリヒドロキシアルカノエー
トは、下記化学式［８］で表されるモノマーユニットを
含むポリヒドロキシアルカノエートであり、下記化学式
［１３］で表される７−（２−チエニル）ヘプタン酸を
含む培地で、７−（２−チエニル）ヘプタン酸を利用し
て下記化学式［８］で表されるモノマーユニットを含む
ポリヒドロキシアルカノエートを生産する微生物を培養
する工程を有することを特徴とするポリヒドロキシアル
カノエートの製造方法が含まれる。
【００９５】
【化５８】
【００９６】
【化５９】
【００９７】本発明のポリヒドロキシアルカノエートの
製造方法には、生産目的のポリヒドロキシアルカノエー
トは、下記化学式［５］で表されるモノマーユニットと
下記化学式［７］で表されるモノマーユニットとを含む
ポリヒドロキシアルカノエートであり、下記化学式［１
２］で表される６−（２−チエニル）ヘキサン酸を含む
培地で、６−（２−チエニル）ヘキサン酸を利用して。
下記化学式［５］で表されるモノマーユニットならびに
下記化学式［７］で表されるモノマーユニットを含むポ
リヒドロキシアルカノエートを生産する微生物を培養す
る工程を有することを特徴とするポリヒドロキシアルカ
ノエートの製造方法が含まれる。
製造方法には、生産目的のポリヒドロキシアルカノエー
トは、下記化学式［５］で表されるモノマーユニットと
下記化学式［７］で表されるモノマーユニットとを含む
ポリヒドロキシアルカノエートであり、下記化学式［１
２］で表される６−（２−チエニル）ヘキサン酸を含む
培地で、６−（２−チエニル）ヘキサン酸を利用して。
下記化学式［５］で表されるモノマーユニットならびに
下記化学式［７］で表されるモノマーユニットを含むポ
リヒドロキシアルカノエートを生産する微生物を培養す
る工程を有することを特徴とするポリヒドロキシアルカ
ノエートの製造方法が含まれる。
【００９８】
【化６０】
【００９９】
【化６１】
【０１００】
【化６２】
【０１０１】本発明のポリヒドロキシアルカノエートの
製造方法には、生産目的のポリヒドロキシアルカノエー
トは、下記化学式［６］で表されるモノマーユニットと
下記化学式［８］で表されるモノマーユニットとを含む
ポリヒドロキシアルカノエートであり、下記化学式［１
３］で表される７−（２−チエニル）ヘプタン酸を含む
培地で、７−（２−チエニル）ヘプタン酸を利用して、
下記化学式［６］で表されるモノマーユニットならびに
下記化学式［８］で表されるモノマーユニットを含むポ
リヒドロキシアルカノエートを生産する微生物を培養す
る工程を有することを特徴とするポリヒドロキシアルカ
ノエートの製造方法が含まれる。
製造方法には、生産目的のポリヒドロキシアルカノエー
トは、下記化学式［６］で表されるモノマーユニットと
下記化学式［８］で表されるモノマーユニットとを含む
ポリヒドロキシアルカノエートであり、下記化学式［１
３］で表される７−（２−チエニル）ヘプタン酸を含む
培地で、７−（２−チエニル）ヘプタン酸を利用して、
下記化学式［６］で表されるモノマーユニットならびに
下記化学式［８］で表されるモノマーユニットを含むポ
リヒドロキシアルカノエートを生産する微生物を培養す
る工程を有することを特徴とするポリヒドロキシアルカ
ノエートの製造方法が含まれる。
【０１０２】
【化６３】
【０１０３】
【化６４】
【０１０４】
【化６５】
【０１０５】
【発明の実施の形態】本発明のＰＨＡは、特には、下記
する一般式［９］：
する一般式［９］：
【０１０６】
【化６６】
【０１０７】（式中、ｎは１から８の整数のいずれかで
ある）で表されるチエニルアルカン酸を原料として、対
応する一般式［２］：
ある）で表されるチエニルアルカン酸を原料として、対
応する一般式［２］：
【０１０８】
【化６７】
【０１０９】（式中、ｎは１から８の整数のいずれかで
ある）で表される３−ヒドロキシチエニルアルカン酸を
モノマーユニットとして含む新規なＰＨＡを生産し菌体
内に蓄積する能力を有する微生物により産生される生分
解性のＰＨＡである。また、本発明にかかるＰＨＡの製
造方法は、これら微生物を、前記化学式［９］で表され
るチエニルアルカン酸に加えて、糖類、酵母エキス、ま
たは、ポリペプトンのいずれかを炭素源として加えてあ
る培地で培養することにより、目的とする上記一般式
［２］のモノマーユニットを含むＰＨＡを高い収率で生
産させ、さらには、その際に得られるＰＨＡ中におい
て、上記一般式［２］のモノマーユニットが比較的高純
度（含有モル比率）としたものである。
ある）で表される３−ヒドロキシチエニルアルカン酸を
モノマーユニットとして含む新規なＰＨＡを生産し菌体
内に蓄積する能力を有する微生物により産生される生分
解性のＰＨＡである。また、本発明にかかるＰＨＡの製
造方法は、これら微生物を、前記化学式［９］で表され
るチエニルアルカン酸に加えて、糖類、酵母エキス、ま
たは、ポリペプトンのいずれかを炭素源として加えてあ
る培地で培養することにより、目的とする上記一般式
［２］のモノマーユニットを含むＰＨＡを高い収率で生
産させ、さらには、その際に得られるＰＨＡ中におい
て、上記一般式［２］のモノマーユニットが比較的高純
度（含有モル比率）としたものである。
【０１１０】一例を挙げるち、原料基質として、化学式
［１１］：
［１１］：
【０１１１】
【化６８】
【０１１２】で表される５−（２−チエニル）吉草酸
（以下、ＴＶＡと略す）、化学式［１２］：
（以下、ＴＶＡと略す）、化学式［１２］：
【０１１３】
【化６９】
【０１１４】で表される６−（２−チエニル）ヘキサン
酸（以下、ＴＨｘＡと略す）、化学式［１３］：
酸（以下、ＴＨｘＡと略す）、化学式［１３］：
【０１１５】
【化７０】
【０１１６】で表される７−（２−チエニル）ヘプタン
酸（以下、ＴＨｐＡと略す）これらのいずれかを用い
て、目的とするＰＨＡは、対応するモノマーユニットと
して、化学式［５］：
酸（以下、ＴＨｐＡと略す）これらのいずれかを用い
て、目的とするＰＨＡは、対応するモノマーユニットと
して、化学式［５］：
【０１１７】
【化７１】
【０１１８】で表される３−ヒドロキシ−４−（２−チ
エニル）酪酸（以下、３ＨＴＢと略す）のユニット、化
学式［６］：
エニル）酪酸（以下、３ＨＴＢと略す）のユニット、化
学式［６］：
【０１１９】
【化７２】
【０１２０】で表される３−ヒドロキシ−５−（２−チ
エニル）吉草酸（以下、３ＨＴＶと略す）のユニット、
化学式［７］：
エニル）吉草酸（以下、３ＨＴＶと略す）のユニット、
化学式［７］：
【０１２１】
【化７３】
【０１２２】で表される３−ヒドロキシ−６−（２−チ
エニル）ヘキサン酸（以下、３ＨＴＨｘと略す）のユニ
ット、化学式［８］：
エニル）ヘキサン酸（以下、３ＨＴＨｘと略す）のユニ
ット、化学式［８］：
【０１２３】
【化７４】
【０１２４】で表される３−ヒドロキシ−７−（２−チ
エニル）ヘプタン酸（以下、３ＨＴＨｐと略す）のユニ
ット、の何れかをモノマーユニットとして含む新規なＰ
ＨＡを、それを生産し菌体内に蓄積する能力を有する微
生物によって生産させる方法となる。
エニル）ヘプタン酸（以下、３ＨＴＨｐと略す）のユニ
ット、の何れかをモノマーユニットとして含む新規なＰ
ＨＡを、それを生産し菌体内に蓄積する能力を有する微
生物によって生産させる方法となる。
【０１２５】なお、本発明の方法は、上述する培養方法
を利用することによって、化学式［２］：
を利用することによって、化学式［２］：
【０１２６】
【化７５】
【０１２７】（式中、ｎは１から８の整数のいずれかで
ある）で表される２−チエニル基を側鎖上に有するモノ
マーユニットを主成分として有するポリヒドロキシアル
カノエートを高い効率で製造する方法とするものであ
る。
ある）で表される２−チエニル基を側鎖上に有するモノ
マーユニットを主成分として有するポリヒドロキシアル
カノエートを高い効率で製造する方法とするものであ
る。
【０１２８】なお、本発明の方法では、基質として、一
般式［９］：
般式［９］：
【０１２９】
【化７６】
【０１３０】（式中、ｎは１から８の整数のいずれかで
ある）で表されるチエニルアルカン酸を含む培地で微生
物を培養することで、上記の微生物がβ酸化により産生
する、一般式［１０］：
ある）で表されるチエニルアルカン酸を含む培地で微生
物を培養することで、上記の微生物がβ酸化により産生
する、一般式［１０］：
【０１３１】
【化７７】
【０１３２】（式中、ｍは、１以上の整数であって、前
記一般式［９］のｎにより定まる、ｎ、ｎ−２、ｎ−
４、ｎ−６からなる群より選択されるいずれかの整数で
ある）で表される対応する炭素数のモノマーユニットを
有するＰＨＡを産生させるものである。
記一般式［９］のｎにより定まる、ｎ、ｎ−２、ｎ−
４、ｎ−６からなる群より選択されるいずれかの整数で
ある）で表される対応する炭素数のモノマーユニットを
有するＰＨＡを産生させるものである。
【０１３３】本発明のＰＨＡは、デバイス材料や医用材
料等として有用な置換基を側鎖に有する多様な構造のモ
ノマーユニットを含むＰＨＡであり、より具体的には、
チエニル基を側鎖に有するＰＨＡである。また、本発明
のＰＨＡの製造方法は、微生物を利用して高純度かつ高
収率に所望のＰＨＡを製造することを可能とするもので
ある。なお、本発明のＰＨＡは、一般にＲ体のみから構
成される、アイソタクチックなポリマーである。また、
前記の用途では、本発明のＰＨＡにおいて、上述のＡ成
分、すなわち、一般式［２］で示されるチエニル基を側
鎖に有するモノマーユニットを主成分、例えば、二種以
上含む際には、その総和として、組成比（モル比率）
が、少なくとも０．６を超える、より好ましくは、０．
８以上とするＰＨＡとすることも望ましい。
料等として有用な置換基を側鎖に有する多様な構造のモ
ノマーユニットを含むＰＨＡであり、より具体的には、
チエニル基を側鎖に有するＰＨＡである。また、本発明
のＰＨＡの製造方法は、微生物を利用して高純度かつ高
収率に所望のＰＨＡを製造することを可能とするもので
ある。なお、本発明のＰＨＡは、一般にＲ体のみから構
成される、アイソタクチックなポリマーである。また、
前記の用途では、本発明のＰＨＡにおいて、上述のＡ成
分、すなわち、一般式［２］で示されるチエニル基を側
鎖に有するモノマーユニットを主成分、例えば、二種以
上含む際には、その総和として、組成比（モル比率）
が、少なくとも０．６を超える、より好ましくは、０．
８以上とするＰＨＡとすることも望ましい。
【０１３４】＜糖類の利用＞本発明のＰＨＡ製造方法の
１つの形態は、微生物を培養する際、培地に所望とする
モノマーユニット導入用のアルカン酸に加えて、当該ア
ルカン酸以外の炭素源として糖類のみを添加すること
で、微生物が産生・蓄積するＰＨＡにおいて、目的とす
るモノマーユニットの含有率を著しく高いものとする、
あるいは目的とするモノマーユニットのみとする点を特
徴としている。この特定のモノマーユニットの優先化を
促進する効果は、培地中に当該アルカン酸以外の炭素源
として糖類のみを添加することにより得られている。
１つの形態は、微生物を培養する際、培地に所望とする
モノマーユニット導入用のアルカン酸に加えて、当該ア
ルカン酸以外の炭素源として糖類のみを添加すること
で、微生物が産生・蓄積するＰＨＡにおいて、目的とす
るモノマーユニットの含有率を著しく高いものとする、
あるいは目的とするモノマーユニットのみとする点を特
徴としている。この特定のモノマーユニットの優先化を
促進する効果は、培地中に当該アルカン酸以外の炭素源
として糖類のみを添加することにより得られている。
【０１３５】すなわち、発明者らは、糖類を共存炭素源
として、所望とするモノマーユニット導入用のアルカン
酸と共に培養せしめたところ、ノナン酸やオクタン酸と
いったmcl-アルカン酸を共存炭素源として用いた従来の
方法に比較して、目的とするＰＨＡが格段に優れた収率
および純度で得られること、そしてこのような効果が、
微生物の炭素源ならびにエネルギー源であるアセチル−
ＣoＡをβ酸化に拠らない方法により生成することが可
能な培養方法であることにより得られるものであるとの
知見を得て本発明に至ったものである。
として、所望とするモノマーユニット導入用のアルカン
酸と共に培養せしめたところ、ノナン酸やオクタン酸と
いったmcl-アルカン酸を共存炭素源として用いた従来の
方法に比較して、目的とするＰＨＡが格段に優れた収率
および純度で得られること、そしてこのような効果が、
微生物の炭素源ならびにエネルギー源であるアセチル−
ＣoＡをβ酸化に拠らない方法により生成することが可
能な培養方法であることにより得られるものであるとの
知見を得て本発明に至ったものである。
【０１３６】本発明の方法においては、糖類化合物、例
えばグルコースやフルクトース、マンノース等は、微生
物の増殖基質として利用されることになり、生産される
ＰＨＡは、糖類に共存させている所望とするモノマーユ
ニット導入用のアルカノエートから構成され、グルコー
ス等の糖類に由来するモノマーユニットが全く含まれな
いか、極めて少量しか含まれない。このような点で、本
発明の方法は、従来のグルコースなどの糖類そのものを
ＰＨＡに導入するモノマーユニットの原料基質として用
いるＰＨＡ微生物生産方法とは構成及び効果ともに根本
的に異なるものである。
えばグルコースやフルクトース、マンノース等は、微生
物の増殖基質として利用されることになり、生産される
ＰＨＡは、糖類に共存させている所望とするモノマーユ
ニット導入用のアルカノエートから構成され、グルコー
ス等の糖類に由来するモノマーユニットが全く含まれな
いか、極めて少量しか含まれない。このような点で、本
発明の方法は、従来のグルコースなどの糖類そのものを
ＰＨＡに導入するモノマーユニットの原料基質として用
いるＰＨＡ微生物生産方法とは構成及び効果ともに根本
的に異なるものである。
【０１３７】＜酵母エキスの利用＞本発明のＰＨＡ製造
方法の１つの形態は、微生物を培養する際、培地に所望
とするモノマーユニット導入用のアルカン酸に加えて、
当該アルカン酸以外の炭素源として酵母エキスのみを添
加することで、微生物が産生・蓄積するＰＨＡにおい
て、目的とするモノマーユニットの含有率を著しく高い
ものとする、あるいは目的とするモノマーユニットのみ
とする点を特徴としている。この特定のモノマーユニッ
トの優先化を促進する効果は、培地中に当該アルカン酸
以外の炭素源として酵母エキスのみを添加することによ
り得られている。
方法の１つの形態は、微生物を培養する際、培地に所望
とするモノマーユニット導入用のアルカン酸に加えて、
当該アルカン酸以外の炭素源として酵母エキスのみを添
加することで、微生物が産生・蓄積するＰＨＡにおい
て、目的とするモノマーユニットの含有率を著しく高い
ものとする、あるいは目的とするモノマーユニットのみ
とする点を特徴としている。この特定のモノマーユニッ
トの優先化を促進する効果は、培地中に当該アルカン酸
以外の炭素源として酵母エキスのみを添加することによ
り得られている。
【０１３８】微生物によるＰＨＡの製造に際して、培地
に酵母エキスを利用する例として、特開平５−４９４８
７号公報に記載の、ロドバクター属（Rhodobacter s
p.）に属する微生物を用いた方法が挙げられる。しかし
ながら、この従来技術は、置換基を有しないヒドロキシ
アルカノエートをモノマーユニットとする、一般的なＰ
ＨＢおよびＰＨＶを製造する方法である。本発明のＰＨ
Ａ製造方法が目的とするようなＰＨＡの合成経路は、Ｐ
ＨＢおよびＰＨＶを生産する合成経路とは独立した経路
であることが知られている。従って、特開平５−４９４
８７号公報においては、本発明の方法が目的とするよう
なＰＨＡの合成経路における酵母エキスの効果について
は何ら言及がないものである。また、酵母エキス利用の
効果も、微生物が一般的に生産するＰＨＡやＰＨＶに関
して、酵母エキスを添加すると、単に菌体内のＰＨＡ蓄
積量の増大が図られる効果があることを示すのみであ
る。その点から、増殖の向上を図るために、酵母エキス
が添加されている訳ではないことが明記されている。本
発明の方法では、チエニルアルカン酸と酵母エキスとを
共存させることにより、菌体の増殖とともにＰＨＡの生
産・蓄積を行うものであり、その意味では、酵母エキス
の発揮する効果が全く異なるものとなっている。さら
に、本発明の方法で達成される効果である、特定のモノ
マーユニットの優占化について何ら言及されておらず、
勿論のことながら、本発明の方法のように、微生物が生
産するＰＨＡ組成における、チエニル基を置換基として
有する特定のモノマーユニットの優占化という効果は示
されていない。
に酵母エキスを利用する例として、特開平５−４９４８
７号公報に記載の、ロドバクター属（Rhodobacter s
p.）に属する微生物を用いた方法が挙げられる。しかし
ながら、この従来技術は、置換基を有しないヒドロキシ
アルカノエートをモノマーユニットとする、一般的なＰ
ＨＢおよびＰＨＶを製造する方法である。本発明のＰＨ
Ａ製造方法が目的とするようなＰＨＡの合成経路は、Ｐ
ＨＢおよびＰＨＶを生産する合成経路とは独立した経路
であることが知られている。従って、特開平５−４９４
８７号公報においては、本発明の方法が目的とするよう
なＰＨＡの合成経路における酵母エキスの効果について
は何ら言及がないものである。また、酵母エキス利用の
効果も、微生物が一般的に生産するＰＨＡやＰＨＶに関
して、酵母エキスを添加すると、単に菌体内のＰＨＡ蓄
積量の増大が図られる効果があることを示すのみであ
る。その点から、増殖の向上を図るために、酵母エキス
が添加されている訳ではないことが明記されている。本
発明の方法では、チエニルアルカン酸と酵母エキスとを
共存させることにより、菌体の増殖とともにＰＨＡの生
産・蓄積を行うものであり、その意味では、酵母エキス
の発揮する効果が全く異なるものとなっている。さら
に、本発明の方法で達成される効果である、特定のモノ
マーユニットの優占化について何ら言及されておらず、
勿論のことながら、本発明の方法のように、微生物が生
産するＰＨＡ組成における、チエニル基を置換基として
有する特定のモノマーユニットの優占化という効果は示
されていない。
【０１３９】さらに、微生物によるＰＨＡの生産に酵母
エキスを利用する例としては、特許第２９８９１７５号
公報に記載のシュードモナス・プチダ（Pseudomonas pu
tida）を用いた方法が挙げられる。ここで開示されてい
るＰＨＡの製造方法は、２段階培養によるもののみであ
り、ＰＨＡの蓄積は２段階目の培養においてのみ、炭素
源以外の栄養源の制限下で行うことが開示されている。
この点で、本発明の方法における、チエニルアルカン酸
と酵母エキスとを含む培地を利用して、１段階培養のみ
でも、所望のＰＨＡを合成・蓄積させる方法とは構成／
効果ともに全く異なる。なお、二段階培養法を採用する
際にも、何れの段階にも、基質のアルカン酸と酵母エキ
スとを含む培地を利用する点に、根本的な相違を有して
いる。つまり、特許第２９８９１７５号公報における酵
母エキスの効果は、２段階培養を用いる際、１段階目の
培養において、単に２段階目の培養に用いる微生物の増
殖のみを目的としたものであり、１段階目は栄養源の豊
富な条件下で培養されると明記されている。ここで、Ｐ
ＨＡの基質は１段階目には共存していない。本発明の方
法における酵母エキスの効果は、チエニルアルカン酸と
酵母エキスとを共存させることにより、増殖とともにＰ
ＨＡの生産・蓄積を行うものであり、その点において、
酵母エキスの発揮する効果が全く異なる。また、特許第
２９８９１７５号公報では、１段階目の培養に、炭素源
としてクエン酸、オクタン酸、ノナン酸のいずれかが共
存しており、チエニルアルカン酸と酵母エキスのみを共
存させる本発明の方法とは、実質的な構成においても異
なるものである。
エキスを利用する例としては、特許第２９８９１７５号
公報に記載のシュードモナス・プチダ（Pseudomonas pu
tida）を用いた方法が挙げられる。ここで開示されてい
るＰＨＡの製造方法は、２段階培養によるもののみであ
り、ＰＨＡの蓄積は２段階目の培養においてのみ、炭素
源以外の栄養源の制限下で行うことが開示されている。
この点で、本発明の方法における、チエニルアルカン酸
と酵母エキスとを含む培地を利用して、１段階培養のみ
でも、所望のＰＨＡを合成・蓄積させる方法とは構成／
効果ともに全く異なる。なお、二段階培養法を採用する
際にも、何れの段階にも、基質のアルカン酸と酵母エキ
スとを含む培地を利用する点に、根本的な相違を有して
いる。つまり、特許第２９８９１７５号公報における酵
母エキスの効果は、２段階培養を用いる際、１段階目の
培養において、単に２段階目の培養に用いる微生物の増
殖のみを目的としたものであり、１段階目は栄養源の豊
富な条件下で培養されると明記されている。ここで、Ｐ
ＨＡの基質は１段階目には共存していない。本発明の方
法における酵母エキスの効果は、チエニルアルカン酸と
酵母エキスとを共存させることにより、増殖とともにＰ
ＨＡの生産・蓄積を行うものであり、その点において、
酵母エキスの発揮する効果が全く異なる。また、特許第
２９８９１７５号公報では、１段階目の培養に、炭素源
としてクエン酸、オクタン酸、ノナン酸のいずれかが共
存しており、チエニルアルカン酸と酵母エキスのみを共
存させる本発明の方法とは、実質的な構成においても異
なるものである。
【０１４０】＜ポリペプトンの利用＞本発明のＰＨＡ製
造方法の１つの形態は、微生物を培養する際、培地に所
望とするモノマーユニット導入用のアルカン酸に加え
て、当該アルカン酸以外の炭素源としてポリペプトンの
みを添加することで、微生物が産生・蓄積するＰＨＡに
おいて、目的とするモノマーユニットの含有率を著しく
高いものとする、あるいは目的とするモノマーユニット
のみとする点を特徴としている。この特定のモノマーユ
ニットの優先化を促進する効果は、培地中に当該アルカ
ン酸以外の炭素源としてポリペプトンのみを添加するこ
とにより得られている。
造方法の１つの形態は、微生物を培養する際、培地に所
望とするモノマーユニット導入用のアルカン酸に加え
て、当該アルカン酸以外の炭素源としてポリペプトンの
みを添加することで、微生物が産生・蓄積するＰＨＡに
おいて、目的とするモノマーユニットの含有率を著しく
高いものとする、あるいは目的とするモノマーユニット
のみとする点を特徴としている。この特定のモノマーユ
ニットの優先化を促進する効果は、培地中に当該アルカ
ン酸以外の炭素源としてポリペプトンのみを添加するこ
とにより得られている。
【０１４１】なお、微生物によるＰＨＡの生産にポリペ
プトンを利用する例として、特開平５−４９４８７号公
報、特開平５−６４５９１号公報、特開平５−２１４０
８１号公報、特開平６−１４５３１１号公報、特開平６
−２８４８９２号公報、特開平７−４８４３８公報、特
開平８−８９２６４号公報、特開平９−１９１８９３号
公報、特開平１１−３２７８９号公報等に、ＰＨＡを微
生物に生産させる際に、培地中にポリペプトンを含有さ
せていることが開示されている。しかしながら、これら
の方法では、いずれも前培養、つまり、菌体を単に増殖
させる段階で用いており、前培養時にＰＨＡのモノマー
ユニットとなる基質は含まれていない。また、菌体にＰ
ＨＡを生産させる工程でポリペプトンを用いた事例はな
い。それに対して、本発明の方法では、所望のモノマー
ユニット導入用のアルカン酸と、当該アルカン酸以外の
炭素源としてポリペプトンのみを共存させることによ
り、増殖とともにＰＨＡの生産・蓄積を行うものであ
る。その点で、従来のポリペプトンを利用した例とは構
成および効果が全く異なる。さらに本発明の方法が有す
る効果である、特定のモノマーユニットの優占化につい
て、上述の刊行物には何ら言及されておらず、勿論のこ
とであるが、本発明のように、微生物が生産するＰＨＡ
組成における、チエニル基を置換基として有する特定の
モノマーユニットの優占化という効果は示されていな
い。
プトンを利用する例として、特開平５−４９４８７号公
報、特開平５−６４５９１号公報、特開平５−２１４０
８１号公報、特開平６−１４５３１１号公報、特開平６
−２８４８９２号公報、特開平７−４８４３８公報、特
開平８−８９２６４号公報、特開平９−１９１８９３号
公報、特開平１１−３２７８９号公報等に、ＰＨＡを微
生物に生産させる際に、培地中にポリペプトンを含有さ
せていることが開示されている。しかしながら、これら
の方法では、いずれも前培養、つまり、菌体を単に増殖
させる段階で用いており、前培養時にＰＨＡのモノマー
ユニットとなる基質は含まれていない。また、菌体にＰ
ＨＡを生産させる工程でポリペプトンを用いた事例はな
い。それに対して、本発明の方法では、所望のモノマー
ユニット導入用のアルカン酸と、当該アルカン酸以外の
炭素源としてポリペプトンのみを共存させることによ
り、増殖とともにＰＨＡの生産・蓄積を行うものであ
る。その点で、従来のポリペプトンを利用した例とは構
成および効果が全く異なる。さらに本発明の方法が有す
る効果である、特定のモノマーユニットの優占化につい
て、上述の刊行物には何ら言及されておらず、勿論のこ
とであるが、本発明のように、微生物が生産するＰＨＡ
組成における、チエニル基を置換基として有する特定の
モノマーユニットの優占化という効果は示されていな
い。
【０１４２】以下に、本発明において利用される微生
物、培養工程などについて説明する。
物、培養工程などについて説明する。
【０１４３】＜ＰＨＡモノマーユニット供給系＞先ず、
目的とするＰＨＡに混在してくるmcl-３ＨＡモノマーユ
ニットの供給系の１つである「脂肪酸合成経路」につい
て詳細に説明する。
目的とするＰＨＡに混在してくるmcl-３ＨＡモノマーユ
ニットの供給系の１つである「脂肪酸合成経路」につい
て詳細に説明する。
【０１４４】グルコース等の糖類を炭素源とした場合、
細胞成分として必要なアルカン酸は、糖類から「解糖
系」を経て生産されるアセチル−ＣoＡを出発物質とし
た「脂肪酸合成経路」から生合成される。なお、脂肪酸
合成には新規（de novo）合成経路と炭素鎖延長経路が
あり、以下にこれらについて説明する。
細胞成分として必要なアルカン酸は、糖類から「解糖
系」を経て生産されるアセチル−ＣoＡを出発物質とし
た「脂肪酸合成経路」から生合成される。なお、脂肪酸
合成には新規（de novo）合成経路と炭素鎖延長経路が
あり、以下にこれらについて説明する。
【０１４５】（１）新規（de novo）合成経路 アセチル−ＣoＡカルボキシラーゼ（ＥＣ ６.４.１.
２）と脂肪酸合成酵素（ＥＣ ２.３.１.８５）の２つの
酵素で触媒される。なお、アセチルＣoＡカルボキシラ
ーゼは、ビオチンを介在し、最終的に以下の反応を触媒
し、アセチルＣoＡからマロニルＣoＡを生成する酵素で
あり、反応は下記式で表わされる。 アセチル−CoA＋ATP＋HCO3 - → マロニル−CoA＋ADP
＋Pi また、脂肪酸合成酵素は、転移−縮合−還元−脱水−還
元の反応サイクルを触媒する酵素であり、全反応は次の
反応式で示される。 アセチル−CoA＋nマロニル−CoA＋2nNADPH＋2nH+ →CH3
(CH2)2nCOOH＋nCO2＋2nNADP+＋(n-1)CoA なお、酵素の種類によって、反応産物が遊離酸、ＣoＡ
誘導体、あるいはＡＣＰ誘導体の場合がある。
２）と脂肪酸合成酵素（ＥＣ ２.３.１.８５）の２つの
酵素で触媒される。なお、アセチルＣoＡカルボキシラ
ーゼは、ビオチンを介在し、最終的に以下の反応を触媒
し、アセチルＣoＡからマロニルＣoＡを生成する酵素で
あり、反応は下記式で表わされる。 アセチル−CoA＋ATP＋HCO3 - → マロニル−CoA＋ADP
＋Pi また、脂肪酸合成酵素は、転移−縮合−還元−脱水−還
元の反応サイクルを触媒する酵素であり、全反応は次の
反応式で示される。 アセチル−CoA＋nマロニル−CoA＋2nNADPH＋2nH+ →CH3
(CH2)2nCOOH＋nCO2＋2nNADP+＋(n-1)CoA なお、酵素の種類によって、反応産物が遊離酸、ＣoＡ
誘導体、あるいはＡＣＰ誘導体の場合がある。
【０１４６】ここで、アセチル−ＣoＡは以下の化学式
で示され、
で示され、
【０１４７】
【化７８】
【０１４８】マロニル−ＣoＡは以下の化学式で示され
る。
る。
【０１４９】
【化７９】
【０１５０】また、ＣｏＡとは、補酵素Ａ（coenzyme
Ａ）の略称であり、以下の化学式で示される。
Ａ）の略称であり、以下の化学式で示される。
【０１５１】
【化８０】
【０１５２】本反応経路のうち、以下に示す経路によ
り、ＰＨＡ生合成のモノマー基質となる「Ｄ−３−ヒド
ロキシアシル−ＡＣＰ」が中間体として供給される。ま
た、以下の反応式に示すように経路は炭素を２個ずつ付
加しながら最終的にはパルミチン酸まで延長される。そ
れゆえＰＨＡ生合成のモノマー基質としては「Ｄ−３−
ヒドロブチリル−ＡＣＰ」から「Ｄ−３−ヒドロキシパ
ルミチル−ＡＣＰ」の炭素数が偶数（４以上１６以下）
の７種類の「Ｄ−３−ヒドロキシアシル−ＡＣＰ」が供
給されることになる。
り、ＰＨＡ生合成のモノマー基質となる「Ｄ−３−ヒド
ロキシアシル−ＡＣＰ」が中間体として供給される。ま
た、以下の反応式に示すように経路は炭素を２個ずつ付
加しながら最終的にはパルミチン酸まで延長される。そ
れゆえＰＨＡ生合成のモノマー基質としては「Ｄ−３−
ヒドロブチリル−ＡＣＰ」から「Ｄ−３−ヒドロキシパ
ルミチル−ＡＣＰ」の炭素数が偶数（４以上１６以下）
の７種類の「Ｄ−３−ヒドロキシアシル−ＡＣＰ」が供
給されることになる。
【０１５３】
【化８１】
【０１５４】（２）炭素鎖延長経路 この経路は、アシル−ＡＣＰにマロニル−ＡＣＰが付加
し、最終的に炭素鎖が２つ延長されたアシル−ＡＣＰ
（及びＣＯ2）となる経路（経路Ａとする）と、アシル
−ＣoＡにアセチル−ＣoＡが付加し、最終的に炭素鎖が
２つ延長されたアシル−ＣoＡとなる経路（経路Ｂとす
る）の２経路に大別される。以下に各経路について説明
する。 経路Ａ、Ｂいずれの系も、中間体として「Ｄ−３−ヒド
ロキシアシル−ＣoＡ」あるいは「Ｄ−３−ヒドロキシ
アシル−ＡＣＰ」が生じ、「Ｄ−３−ヒドロキシアシル
−ＣoＡ」はそのままＰＨＡ合成のモノマー基質として
利用され、「Ｄ−３−ヒドロキシアシル−ＡＣＰ」はＡ
ＣＰ−ＣoＡ転移酵素により「Ｄ−３−ヒドロキシアシ
ル−ＣoＡ」に変換された後に、ＰＨＡ合成のモノマー
基質として利用されると考えられる。
し、最終的に炭素鎖が２つ延長されたアシル−ＡＣＰ
（及びＣＯ2）となる経路（経路Ａとする）と、アシル
−ＣoＡにアセチル−ＣoＡが付加し、最終的に炭素鎖が
２つ延長されたアシル−ＣoＡとなる経路（経路Ｂとす
る）の２経路に大別される。以下に各経路について説明
する。 経路Ａ、Ｂいずれの系も、中間体として「Ｄ−３−ヒド
ロキシアシル−ＣoＡ」あるいは「Ｄ−３−ヒドロキシ
アシル−ＡＣＰ」が生じ、「Ｄ−３−ヒドロキシアシル
−ＣoＡ」はそのままＰＨＡ合成のモノマー基質として
利用され、「Ｄ−３−ヒドロキシアシル−ＡＣＰ」はＡ
ＣＰ−ＣoＡ転移酵素により「Ｄ−３−ヒドロキシアシ
ル−ＣoＡ」に変換された後に、ＰＨＡ合成のモノマー
基質として利用されると考えられる。
【０１５５】グルコース等の糖類を炭素源とした場合、
微生物細胞中では以上のような「解糖系」及び「脂肪酸
合成経路」を経由してmcl-３ＨＡモノマーユニットが生
成されると考えられる。
微生物細胞中では以上のような「解糖系」及び「脂肪酸
合成経路」を経由してmcl-３ＨＡモノマーユニットが生
成されると考えられる。
【０１５６】ここで、例えば、オクタン酸、ノナン酸等
のmcl-アルカン酸、あるいは、例えば、５−フェニル吉
草酸、４−フェノキシ酪酸、４−シクロヘキシル酪酸、
5−(2−チエニル)吉草酸といった、末端に直鎖脂肪族ア
ルキル以外の官能基が付加されたアルカン酸はＣoＡリ
ガーゼ（ＥＣ ６.２.１.３等）によりＣoＡ誘導体とな
り、β酸化系を担う酵素群により直接的にＰＨＡ生合成
のモノマー基質となる「Ｄ−３−ヒドロキシアシル−Ｃ
oＡ」となると考えられる。
のmcl-アルカン酸、あるいは、例えば、５−フェニル吉
草酸、４−フェノキシ酪酸、４−シクロヘキシル酪酸、
5−(2−チエニル)吉草酸といった、末端に直鎖脂肪族ア
ルキル以外の官能基が付加されたアルカン酸はＣoＡリ
ガーゼ（ＥＣ ６.２.１.３等）によりＣoＡ誘導体とな
り、β酸化系を担う酵素群により直接的にＰＨＡ生合成
のモノマー基質となる「Ｄ−３−ヒドロキシアシル−Ｃ
oＡ」となると考えられる。
【０１５７】つまり、糖類から生成するmcl-３ＨＡモノ
マーユニットが、きわめて多段階の酵素反応を経て（つ
まり間接的に）生成されるのに比較し、mcl-アルカン酸
からはきわめて直接的にmcl-３ＨＡモノマーユニットが
生成されてくることになる。
マーユニットが、きわめて多段階の酵素反応を経て（つ
まり間接的に）生成されるのに比較し、mcl-アルカン酸
からはきわめて直接的にmcl-３ＨＡモノマーユニットが
生成されてくることになる。
【０１５８】ここで、微生物の増殖を担うアセチル−Ｃ
oＡの生成について説明する。目的とするモノマーユニ
ット導入用のアルカン酸に加えて、mcl-アルカン酸を培
地中に共存させる方法では、これらのmcl-アルカン酸が
β酸化系を経由することによりアセチル−ＣoＡが生成
する。一般に、バルキーな置換基を有するアルカン酸
（フェニル基、フェノキシ基、シクロヘキシル基、チエ
ニル基等の置換基を有するアルカン酸）と比較して、mc
l-アルカン酸はβ酸化系の酵素群との基質親和性に優れ
ていると考えられる。従って、mcl-アルカン酸の共存に
より効果的にアセチル−ＣoＡが生成される。このた
め、アセチル−ＣoＡを、エネルギー源ならびに炭素源
として用いる微生物の増殖には有利となる。
oＡの生成について説明する。目的とするモノマーユニ
ット導入用のアルカン酸に加えて、mcl-アルカン酸を培
地中に共存させる方法では、これらのmcl-アルカン酸が
β酸化系を経由することによりアセチル−ＣoＡが生成
する。一般に、バルキーな置換基を有するアルカン酸
（フェニル基、フェノキシ基、シクロヘキシル基、チエ
ニル基等の置換基を有するアルカン酸）と比較して、mc
l-アルカン酸はβ酸化系の酵素群との基質親和性に優れ
ていると考えられる。従って、mcl-アルカン酸の共存に
より効果的にアセチル−ＣoＡが生成される。このた
め、アセチル−ＣoＡを、エネルギー源ならびに炭素源
として用いる微生物の増殖には有利となる。
【０１５９】しかしながら、mcl-アルカン酸は、β酸化
系を経由することで、直接的にＰＨＡのモノマーユニッ
トとなるために、生産されるＰＨＡは、目的のモノマー
ユニットに加えて、mcl-３ＨＡモノマーユニットの混在
が多いものとなってしまうことが大きな課題となる。
系を経由することで、直接的にＰＨＡのモノマーユニッ
トとなるために、生産されるＰＨＡは、目的のモノマー
ユニットに加えて、mcl-３ＨＡモノマーユニットの混在
が多いものとなってしまうことが大きな課題となる。
【０１６０】この課題を回避するためには、mcl-アルカ
ン酸以外で、効果的にアセチル−ＣoＡの生成に利用さ
れ、エネルギー源及び炭素源を供給し得るような炭素源
を選択して、目的とするアルカン酸と共存させる方法が
望ましいことが、本発明者らの検討により結論された。
前述のように、一旦生成されたアセチル−ＣoＡは、脂
肪酸合成経路を経ることによりＰＨＡのモノマーユニッ
トとなり得るが、mcl-アルカン酸からβ酸化系で直接生
成するものと比較すれば、より多段階の反応を経由する
必要がある、間接的な産物である。また、このアセチル
−ＣoＡの生成に利用される炭素源の濃度等、培養条件
を適宜選択することにより、実質的には、脂肪酸合成経
路に由来するmcl-３ＨＡの混在のない、あるいは少ない
ＰＨＡ製造の実現が可能となる。
ン酸以外で、効果的にアセチル−ＣoＡの生成に利用さ
れ、エネルギー源及び炭素源を供給し得るような炭素源
を選択して、目的とするアルカン酸と共存させる方法が
望ましいことが、本発明者らの検討により結論された。
前述のように、一旦生成されたアセチル−ＣoＡは、脂
肪酸合成経路を経ることによりＰＨＡのモノマーユニッ
トとなり得るが、mcl-アルカン酸からβ酸化系で直接生
成するものと比較すれば、より多段階の反応を経由する
必要がある、間接的な産物である。また、このアセチル
−ＣoＡの生成に利用される炭素源の濃度等、培養条件
を適宜選択することにより、実質的には、脂肪酸合成経
路に由来するmcl-３ＨＡの混在のない、あるいは少ない
ＰＨＡ製造の実現が可能となる。
【０１６１】また、従来より、１段階目で微生物の増殖
のみを目的に培養し、２段階目においては、炭素源とし
て、目的とするモノマーユニットを与えるアルカン酸の
みを培地に加える二段階培養法を利用したＰＨＡの製造
方法が汎用されている。ここで、当該アルカン酸をアシ
ルＣoＡ化するβ酸化系の初発酵素であるアシルＣoＡリ
ガーゼがＡＴＰを要求することから、発明者らの検討に
よれば２段階目においても微生物がエネルギー源として
利用し得る基質を共存させる製造方法がより効果的であ
るとの結果を得て、本発明を完成した。
のみを目的に培養し、２段階目においては、炭素源とし
て、目的とするモノマーユニットを与えるアルカン酸の
みを培地に加える二段階培養法を利用したＰＨＡの製造
方法が汎用されている。ここで、当該アルカン酸をアシ
ルＣoＡ化するβ酸化系の初発酵素であるアシルＣoＡリ
ガーゼがＡＴＰを要求することから、発明者らの検討に
よれば２段階目においても微生物がエネルギー源として
利用し得る基質を共存させる製造方法がより効果的であ
るとの結果を得て、本発明を完成した。
【０１６２】本発明のＰＨＡの製造方法においては、利
用する微生物おけるアセチルＣｏＡの産生に利用され
る、エネルギー源ならびに炭素源を培地に含有させる。
その際、エネルギー源ならびに炭素源として効果的に使
用される炭素源化合物として、グリセロアルデヒド、エ
リスロール、アラビノース、キシロース、グルコース、
ガラクトース、マンノース、フルクトースといったアル
ドース、グリセロール、エリスリトール、キシリトール
等のアルジトール、グルコン酸等のアルドン酸、グルク
ロン酸やガラクツロン酸等のウロン酸、マルトース、ス
クロース、ラクトースといった二糖等の糖類が挙げられ
る。その他に、酵母エキス、ポリペプトン、肉エキス、
カザミノ酸などの天然物由来の培地成分など、前記糖類
と同様に、β酸化系を経ずにアセチルＣｏＡの産生を可
能とする、エネルギー源ならびに炭素源として、用いる
微生物が利用できる有機化合物であれば、いかなる化合
物でも用いることができる。これら炭素源化合物は、用
いる菌株に対する基質としての有用性で適宜選択するこ
とができる。また、mcl-３ＨＡの混入の少ない組み合わ
せであれば、複数の化合物を選択して用いることも可能
である。
用する微生物おけるアセチルＣｏＡの産生に利用され
る、エネルギー源ならびに炭素源を培地に含有させる。
その際、エネルギー源ならびに炭素源として効果的に使
用される炭素源化合物として、グリセロアルデヒド、エ
リスロール、アラビノース、キシロース、グルコース、
ガラクトース、マンノース、フルクトースといったアル
ドース、グリセロール、エリスリトール、キシリトール
等のアルジトール、グルコン酸等のアルドン酸、グルク
ロン酸やガラクツロン酸等のウロン酸、マルトース、ス
クロース、ラクトースといった二糖等の糖類が挙げられ
る。その他に、酵母エキス、ポリペプトン、肉エキス、
カザミノ酸などの天然物由来の培地成分など、前記糖類
と同様に、β酸化系を経ずにアセチルＣｏＡの産生を可
能とする、エネルギー源ならびに炭素源として、用いる
微生物が利用できる有機化合物であれば、いかなる化合
物でも用いることができる。これら炭素源化合物は、用
いる菌株に対する基質としての有用性で適宜選択するこ
とができる。また、mcl-３ＨＡの混入の少ない組み合わ
せであれば、複数の化合物を選択して用いることも可能
である。
【０１６３】＜微生物＞本発明に用いる微生物として
は、末端にチエニル基を置換したアルカン酸（ω−チエ
ニルアルカン酸）を基質として、対応する３−ヒドロキ
シ−ω−チエニルアルカン酸のモノマーユニットを含む
新規なＰＨＡを生産し菌体内に蓄積する能力を有する微
生物、例えば、前記のＴＶＡ、ＴＨｘＡ、または、ＴＨ
ｐＡを原料とし、前記の３ＨＴＢ、３ＨＴＶ、３ＨＴＨ
ｘ、または、３ＨＴＨｐをモノマーユニットとして含む
ＰＨＡを産生可能であれば、いかなる微生物をも使用す
ることができる。また、本発明の目的を達成できる範囲
内で、必要に応じて複数の微生物を混合して用いること
もできる。
は、末端にチエニル基を置換したアルカン酸（ω−チエ
ニルアルカン酸）を基質として、対応する３−ヒドロキ
シ−ω−チエニルアルカン酸のモノマーユニットを含む
新規なＰＨＡを生産し菌体内に蓄積する能力を有する微
生物、例えば、前記のＴＶＡ、ＴＨｘＡ、または、ＴＨ
ｐＡを原料とし、前記の３ＨＴＢ、３ＨＴＶ、３ＨＴＨ
ｘ、または、３ＨＴＨｐをモノマーユニットとして含む
ＰＨＡを産生可能であれば、いかなる微生物をも使用す
ることができる。また、本発明の目的を達成できる範囲
内で、必要に応じて複数の微生物を混合して用いること
もできる。
【０１６４】本発明者らは、ＴＶＡ、ＴＨｘＡ、また
は、ＴＨｐＡを基質として用いて、前記の３ＨＴＢ、３
ＨＴＶ、３ＨＴＨｘ、または、３ＨＴＨｐをモノマーユ
ニットとして含むＰＨＡを生産し菌体内に蓄積する能力
を有する微生物の探索を行った。その結果、ＰＨＡを生
産し菌体内に蓄積する能力を有する、シュードモナス属
（Pseudomonas sp.）に属する微生物が、好ましいもの
であることを見出した。なかでも、好適に菌株として、
本発明者らが山梨県の土壌より分離した微生物であり、
ＰＨＡの生産能力を有する、シュードモナス・プチダ・
Ｐ９１株（Pseudomonas putida Ｐ９１）、シュードモ
ナス・チコリアイ・Ｈ４５株（Pseudomonascichorii Ｈ
４５）、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株（Pseu
domonas cichorii ＹＮ２）、シュードモナス・ジェッ
セニイ・Ｐ１６１株（Pseudomonas jessenii Ｐ１６
１）等が所望の能力を有することを見出した。
は、ＴＨｐＡを基質として用いて、前記の３ＨＴＢ、３
ＨＴＶ、３ＨＴＨｘ、または、３ＨＴＨｐをモノマーユ
ニットとして含むＰＨＡを生産し菌体内に蓄積する能力
を有する微生物の探索を行った。その結果、ＰＨＡを生
産し菌体内に蓄積する能力を有する、シュードモナス属
（Pseudomonas sp.）に属する微生物が、好ましいもの
であることを見出した。なかでも、好適に菌株として、
本発明者らが山梨県の土壌より分離した微生物であり、
ＰＨＡの生産能力を有する、シュードモナス・プチダ・
Ｐ９１株（Pseudomonas putida Ｐ９１）、シュードモ
ナス・チコリアイ・Ｈ４５株（Pseudomonascichorii Ｈ
４５）、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株（Pseu
domonas cichorii ＹＮ２）、シュードモナス・ジェッ
セニイ・Ｐ１６１株（Pseudomonas jessenii Ｐ１６
１）等が所望の能力を有することを見出した。
【０１６５】なお、前記４種の菌株については、シュー
ドモナス・プチダ・Ｐ９１株（Pseudomonas putida Ｐ
９１）は、平成１１年６月３日付けで、微工研菌寄第Ｐ
−１７４０９号（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４０９）として寄
託され、その後、原寄託は平成１２年１１月２０日付け
でブタペスト条約に基づく寄託へと移管され、寄託番号
「ＦＥＲＭ ＢＰ−７３７」として国際寄託され、シュ
ードモナス・チコリアイ・Ｈ４５株（Pseudomonas cich
orii Ｈ４５）は、平成１１年６月３日付けで、微工研
菌寄第Ｐ−１７４１０号（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４１０）
として寄託され、その後、原寄託は平成１２年１１月２
０日付けでブタペスト条約に基づく寄託へと移管され、
寄託番号「ＦＥＲＭ ＢＰ−７３７４」として国際寄託
され、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株（Pseudo
monas cichorii ＹＮ２）は、平成１１年６月３日付け
で、微工研菌寄第Ｐ−１７４１１号（ＦＥＲＭ Ｐ−１
７４１１）として寄託され、その後、原寄託は平成１２
年１１月２０日付けでブタペスト条約に基づく寄託へと
移管され、寄託番号「ＦＥＲＭ ＢＰ−７３７５」とし
て国際寄託され、シュードモナス・ジェッセニイ・Ｐ１
６１株（Pseudomonas jessenii Ｐ１６１）は、平成１
１年７月１日付けで、微工研菌寄第Ｐ−１７４４５号
（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４４５）として寄託され、その
後、原寄託は平成１２年１１月２０日付けでブタペスト
条約に基づく寄託へと移管され、寄託番号「ＦＥＲＭ
ＢＰ−７３７６」として国際寄託され、国際寄託機関で
ある、経済産業省生命工学工業技術研究所（特許微生物
寄託センター）にそれぞれ寄託されている。
ドモナス・プチダ・Ｐ９１株（Pseudomonas putida Ｐ
９１）は、平成１１年６月３日付けで、微工研菌寄第Ｐ
−１７４０９号（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４０９）として寄
託され、その後、原寄託は平成１２年１１月２０日付け
でブタペスト条約に基づく寄託へと移管され、寄託番号
「ＦＥＲＭ ＢＰ−７３７」として国際寄託され、シュ
ードモナス・チコリアイ・Ｈ４５株（Pseudomonas cich
orii Ｈ４５）は、平成１１年６月３日付けで、微工研
菌寄第Ｐ−１７４１０号（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４１０）
として寄託され、その後、原寄託は平成１２年１１月２
０日付けでブタペスト条約に基づく寄託へと移管され、
寄託番号「ＦＥＲＭ ＢＰ−７３７４」として国際寄託
され、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株（Pseudo
monas cichorii ＹＮ２）は、平成１１年６月３日付け
で、微工研菌寄第Ｐ−１７４１１号（ＦＥＲＭ Ｐ−１
７４１１）として寄託され、その後、原寄託は平成１２
年１１月２０日付けでブタペスト条約に基づく寄託へと
移管され、寄託番号「ＦＥＲＭ ＢＰ−７３７５」とし
て国際寄託され、シュードモナス・ジェッセニイ・Ｐ１
６１株（Pseudomonas jessenii Ｐ１６１）は、平成１
１年７月１日付けで、微工研菌寄第Ｐ−１７４４５号
（ＦＥＲＭ Ｐ−１７４４５）として寄託され、その
後、原寄託は平成１２年１１月２０日付けでブタペスト
条約に基づく寄託へと移管され、寄託番号「ＦＥＲＭ
ＢＰ−７３７６」として国際寄託され、国際寄託機関で
ある、経済産業省生命工学工業技術研究所（特許微生物
寄託センター）にそれぞれ寄託されている。
【０１６６】前記のＰ９１株、Ｈ４５株、ＹＮ２株およ
びＰ１６１株の菌学的性質を列挙すれば以下の通りであ
る。また、Ｐ１６１株については、16Ｓ rＲＮＡの塩基
配列を配列番号1に示す。 ＜Ｐ９１株の菌学的性質＞ 形態学的性質 細胞の形と大きさ ：桿菌、０．６μｍ×１．５
μｍ 細胞の多形性 ：なし 運動性 ：あり 胞子形成 ：なし グラム染色性 ：陰性 コロニー形状 ：円形、全縁なめらか、低凸
状、表層なめらか、光沢、クリーム色 生理学的性質 カタラーゼ ：陽性 オキシダーゼ ：陽性 Ｏ／Ｆ試験 ：酸化型 硝酸塩の還元 ：陰性 インドールの生成 ：陰性 ブドウ糖酸性化 ：陰性 アルギニンジヒドロラーゼ ：陽性 ウレアーゼ ：陰性 エスクリン加水分解 ：陰性 ゼラチン加水分解 ：陰性 β−ガラクトシダーゼ ：陰性 Ｋｉｎｇ'ｓＢ寒天での蛍光色素産生 ：陽性 基質資化能 ブドウ糖 ：陽性 Ｌ−アラビノース ：陰性 Ｄ−マンノース ：陰性 Ｄ−マンニトール ：陰性 Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン ：陰性 マルトース ：陰性 グルコン酸カリウム ：陽性 ｎ−カプリン酸 ：陽性 アジピン酸 ：陰性 ｄｌ−リンゴ酸 ：陽性 クエン酸ナトリウム ：陽性 酢酸フェニル ：陽性 ＜Ｈ４５株の菌学的性質＞ （１）形態学的性質 細胞の形と大きさ :桿菌、0.8μｍ×1.0〜1.2μｍ 細胞の多形性 :なし 運動性 :あり 胞子形成 :なし グラム染色性 :陰性 コロニー形状 :円形、全縁なめらか、低凸状、表
層なめらか、光沢、クリーム色 （２）生理学的性質 カタラーゼ :陽性 オキシダーゼ :陽性 Ｏ/Ｆ試験 :酸化型 硝酸塩の還元 :陰性 インドールの生成 :陰性 ブドウ糖酸性化 :陰性 アルギニンジヒドロラーゼ :陰性 ウレアーゼ :陰性 エスクリン加水分解 :陰性 ゼラチン加水分解 :陰性 β-ガラクトシダーゼ :陰性 Ｋing’sＢ寒天での蛍光色素産生:陽性 ４％ＮaＣlでの生育 :陰性 ポリ−β−ヒドロキシ酪酸の蓄積 :陰性 （３）基質資化能 ブドウ糖 :陽性 Ｌ−アラビノース :陰性 Ｄ−マンノース :陽性 Ｄ−マンニトール :陽性 Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン :陽性 マルトース :陰性 グルコン酸カリウム :陽性 n−カプリン酸 :陽性 アジピン酸 :陰性 dl−リンゴ酸 :陽性 クエン酸ナトリウム :陽性 酢酸フェニル :陽性 ＜ＹＮ２株の菌学的性質＞ （１）形態学的性質 細胞の形と大きさ :桿菌、0.8μｍ×1.5〜2.0μｍ 細胞の多形性 :なし 運動性 :あり 胞子形成 :なし グラム染色性 :陰性 コロニー形状 :円形、全縁なめらか、低凸状、表
層なめらか、光沢、半透明 （２）生理学的性質 カタラーゼ :陽性 オキシダーゼ :陽性 Ｏ/Ｆ試験 :酸化型 硝酸塩の還元 :陰性 インドールの生成 :陽性 ブドウ糖酸性化 :陰性 アルギニンジヒドロラーゼ :陰性 ウレアーゼ :陰性 エスクリン加水分解 :陰性 ゼラチン加水分解 :陰性 β-ガラクトシダーゼ :陰性 Ｋing’sＢ寒天での蛍光色素産生:陽性 ４％ＮaＣlでの生育 :陽性（弱い生育） ポリ−β−ヒドロキシ酪酸の蓄積 :陰性 Tween８０の加水分解 :陽性 （３）基質資化能 ブドウ糖 :陽性 Ｌ−アラビノース :陽性 Ｄ−マンノース :陰性 Ｄ−マンニトール :陰性 Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン :陰性 マルトース :陰性 グルコン酸カリウム :陽性 n−カプリン酸 :陽性 アジピン酸 :陰性 dl−リンゴ酸 :陽性 クエン酸ナトリウム :陽性 酢酸フェニル :陽性 ＜Ｐ１６１株の菌学的性質＞ （１）形態学的性質 細胞の多形性 :あり（伸長型） 運動性 :あり 胞子形成 :なし グラム染色性 :陰性 コロニー形状 :円形、全縁なめらか、低凸状、表
層なめらか、淡黄色 （２）生理学的性質 カタラーゼ :陽性 オキシダーゼ :陽性 Ｏ/Ｆ試験 :酸化型 硝酸塩の還元 :陽性 インドールの生成 :陰性 ブドウ糖酸性化 :陰性 アルギニンジヒドロラーゼ :陽性 ウレアーゼ :陰性 エスクリン加水分解 :陰性 ゼラチン加水分解 :陰性 β-ガラクトシダーゼ :陰性 Ｋing’sＢ寒天での蛍光色素産生:陽性 （３）基質資化能 ブドウ糖 :陽性 Ｌ−アラビノース :陽性 Ｄ−マンノース :陽性 Ｄ−マンニトール :陽性 Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン :陽性 マルトース :陰性 グルコン酸カリウム :陽性 n−カプリン酸 :陽性 アジピン酸 :陰性 dl−リンゴ酸 :陽性 クエン酸ナトリウム :陽性 酢酸フェニル :陽性 また、シュードモナス属に属する微生物に加えて、アエ
ロモナス属（Aeromonas sp.）、コマモナス属（Comamon
as sp.）、バークホルデリア属（Burkholderiasp.）な
どに属し、上記一般式［２］で表されるモノマーユニッ
トを含むＰＨＡを生産する微生物を用いることも可能で
ある。
びＰ１６１株の菌学的性質を列挙すれば以下の通りであ
る。また、Ｐ１６１株については、16Ｓ rＲＮＡの塩基
配列を配列番号1に示す。 ＜Ｐ９１株の菌学的性質＞ 形態学的性質 細胞の形と大きさ ：桿菌、０．６μｍ×１．５
μｍ 細胞の多形性 ：なし 運動性 ：あり 胞子形成 ：なし グラム染色性 ：陰性 コロニー形状 ：円形、全縁なめらか、低凸
状、表層なめらか、光沢、クリーム色 生理学的性質 カタラーゼ ：陽性 オキシダーゼ ：陽性 Ｏ／Ｆ試験 ：酸化型 硝酸塩の還元 ：陰性 インドールの生成 ：陰性 ブドウ糖酸性化 ：陰性 アルギニンジヒドロラーゼ ：陽性 ウレアーゼ ：陰性 エスクリン加水分解 ：陰性 ゼラチン加水分解 ：陰性 β−ガラクトシダーゼ ：陰性 Ｋｉｎｇ'ｓＢ寒天での蛍光色素産生 ：陽性 基質資化能 ブドウ糖 ：陽性 Ｌ−アラビノース ：陰性 Ｄ−マンノース ：陰性 Ｄ−マンニトール ：陰性 Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン ：陰性 マルトース ：陰性 グルコン酸カリウム ：陽性 ｎ−カプリン酸 ：陽性 アジピン酸 ：陰性 ｄｌ−リンゴ酸 ：陽性 クエン酸ナトリウム ：陽性 酢酸フェニル ：陽性 ＜Ｈ４５株の菌学的性質＞ （１）形態学的性質 細胞の形と大きさ :桿菌、0.8μｍ×1.0〜1.2μｍ 細胞の多形性 :なし 運動性 :あり 胞子形成 :なし グラム染色性 :陰性 コロニー形状 :円形、全縁なめらか、低凸状、表
層なめらか、光沢、クリーム色 （２）生理学的性質 カタラーゼ :陽性 オキシダーゼ :陽性 Ｏ/Ｆ試験 :酸化型 硝酸塩の還元 :陰性 インドールの生成 :陰性 ブドウ糖酸性化 :陰性 アルギニンジヒドロラーゼ :陰性 ウレアーゼ :陰性 エスクリン加水分解 :陰性 ゼラチン加水分解 :陰性 β-ガラクトシダーゼ :陰性 Ｋing’sＢ寒天での蛍光色素産生:陽性 ４％ＮaＣlでの生育 :陰性 ポリ−β−ヒドロキシ酪酸の蓄積 :陰性 （３）基質資化能 ブドウ糖 :陽性 Ｌ−アラビノース :陰性 Ｄ−マンノース :陽性 Ｄ−マンニトール :陽性 Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン :陽性 マルトース :陰性 グルコン酸カリウム :陽性 n−カプリン酸 :陽性 アジピン酸 :陰性 dl−リンゴ酸 :陽性 クエン酸ナトリウム :陽性 酢酸フェニル :陽性 ＜ＹＮ２株の菌学的性質＞ （１）形態学的性質 細胞の形と大きさ :桿菌、0.8μｍ×1.5〜2.0μｍ 細胞の多形性 :なし 運動性 :あり 胞子形成 :なし グラム染色性 :陰性 コロニー形状 :円形、全縁なめらか、低凸状、表
層なめらか、光沢、半透明 （２）生理学的性質 カタラーゼ :陽性 オキシダーゼ :陽性 Ｏ/Ｆ試験 :酸化型 硝酸塩の還元 :陰性 インドールの生成 :陽性 ブドウ糖酸性化 :陰性 アルギニンジヒドロラーゼ :陰性 ウレアーゼ :陰性 エスクリン加水分解 :陰性 ゼラチン加水分解 :陰性 β-ガラクトシダーゼ :陰性 Ｋing’sＢ寒天での蛍光色素産生:陽性 ４％ＮaＣlでの生育 :陽性（弱い生育） ポリ−β−ヒドロキシ酪酸の蓄積 :陰性 Tween８０の加水分解 :陽性 （３）基質資化能 ブドウ糖 :陽性 Ｌ−アラビノース :陽性 Ｄ−マンノース :陰性 Ｄ−マンニトール :陰性 Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン :陰性 マルトース :陰性 グルコン酸カリウム :陽性 n−カプリン酸 :陽性 アジピン酸 :陰性 dl−リンゴ酸 :陽性 クエン酸ナトリウム :陽性 酢酸フェニル :陽性 ＜Ｐ１６１株の菌学的性質＞ （１）形態学的性質 細胞の多形性 :あり（伸長型） 運動性 :あり 胞子形成 :なし グラム染色性 :陰性 コロニー形状 :円形、全縁なめらか、低凸状、表
層なめらか、淡黄色 （２）生理学的性質 カタラーゼ :陽性 オキシダーゼ :陽性 Ｏ/Ｆ試験 :酸化型 硝酸塩の還元 :陽性 インドールの生成 :陰性 ブドウ糖酸性化 :陰性 アルギニンジヒドロラーゼ :陽性 ウレアーゼ :陰性 エスクリン加水分解 :陰性 ゼラチン加水分解 :陰性 β-ガラクトシダーゼ :陰性 Ｋing’sＢ寒天での蛍光色素産生:陽性 （３）基質資化能 ブドウ糖 :陽性 Ｌ−アラビノース :陽性 Ｄ−マンノース :陽性 Ｄ−マンニトール :陽性 Ｎ−アセチル−Ｄ−グルコサミン :陽性 マルトース :陰性 グルコン酸カリウム :陽性 n−カプリン酸 :陽性 アジピン酸 :陰性 dl−リンゴ酸 :陽性 クエン酸ナトリウム :陽性 酢酸フェニル :陽性 また、シュードモナス属に属する微生物に加えて、アエ
ロモナス属（Aeromonas sp.）、コマモナス属（Comamon
as sp.）、バークホルデリア属（Burkholderiasp.）な
どに属し、上記一般式［２］で表されるモノマーユニッ
トを含むＰＨＡを生産する微生物を用いることも可能で
ある。
【０１６７】＜培養＞上記の微生物を、所望とするモノ
マーユニット導入用のアルカノエート基質と増殖用基質
とを含む培地で培養することで、目的とする側鎖上のチ
エニル基が置換したモノマーユニットを含むＰＨＡを生
産することができる。この微生物が産生するＰＨＡは、
一般にＲ−体のみから構成され、アイソタクチックなポ
リマーであり、加えて、生分解性を示すポリマーであ
る。
マーユニット導入用のアルカノエート基質と増殖用基質
とを含む培地で培養することで、目的とする側鎖上のチ
エニル基が置換したモノマーユニットを含むＰＨＡを生
産することができる。この微生物が産生するＰＨＡは、
一般にＲ−体のみから構成され、アイソタクチックなポ
リマーであり、加えて、生分解性を示すポリマーであ
る。
【０１６８】本発明にかかるＰＨＡの製造方法に用いる
微生物の通常の培養、例えば、保存菌株の作成、ＰＨＡ
の生産に必要とされる菌数や活性状態を確保するための
増殖などには、用いる微生物の増殖に必要な成分を含有
する培地を適宜選択して用いる。例えば、微生物の生育
や生存に悪影響を及ぼすものでない限り、一般的な天然
培地（肉汁培地など）や、栄養源（酵母エキス、ポリペ
プトンなど）を添加した合成培地など、いかなる種類の
培地をも用いることができる。
微生物の通常の培養、例えば、保存菌株の作成、ＰＨＡ
の生産に必要とされる菌数や活性状態を確保するための
増殖などには、用いる微生物の増殖に必要な成分を含有
する培地を適宜選択して用いる。例えば、微生物の生育
や生存に悪影響を及ぼすものでない限り、一般的な天然
培地（肉汁培地など）や、栄養源（酵母エキス、ポリペ
プトンなど）を添加した合成培地など、いかなる種類の
培地をも用いることができる。
【０１６９】培養には、利用する微生物が増殖し、ＰＨ
Ａを生産する培養方法である限り、液体培養、固体培養
などの種類に依らず、いかなる培養方法でも用いること
ができる。さらには、バッチ培養、フェドバッチ培養、
半連続培養、連続培養等の培養形態も問わない。液体バ
ッチ培養の形態としては、振とうフラスコによって、培
地を振とうさせて酸素を供給する方法、ジャー・ファー
メンターによる攪拌通気方式の酸素供給を利用する方法
がある。また、これらの培養工程を、複数段接続した多
段方式の培養形態を採用してもよい。
Ａを生産する培養方法である限り、液体培養、固体培養
などの種類に依らず、いかなる培養方法でも用いること
ができる。さらには、バッチ培養、フェドバッチ培養、
半連続培養、連続培養等の培養形態も問わない。液体バ
ッチ培養の形態としては、振とうフラスコによって、培
地を振とうさせて酸素を供給する方法、ジャー・ファー
メンターによる攪拌通気方式の酸素供給を利用する方法
がある。また、これらの培養工程を、複数段接続した多
段方式の培養形態を採用してもよい。
【０１７０】上述するＰＨＡ生産微生物を利用して、例
えば、３ＨＴＢ、３ＨＴＶ、３ＨＴＨｘ、または、３Ｈ
ＴＨｐをモノマーユニットとして含むＰＨＡを製造する
場合は、ＰＨＡ生産用の原料として、それぞれ目的のモ
ノマーユニットに対応するＴＶＡ、ＴＨｘＡ、ＴＨｐＡ
を含み、加えて、微生物の増殖用炭素源を少なくとも一
種含んだ無機培地などを用いることができる。利用され
る増殖用炭素源としては、酵母エキスやポリペプトン、
肉エキスといった栄養素を用いることも可能である。さ
らには、増殖用炭素源として、糖類、例えば、グリセロ
アルデヒド、エリスロース、アラビノース、キシロー
ス、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクト
ースといったアルドース、グリセロール、エリスリトー
ル、キシリトール等のアルジトール、グルコン酸等のア
ルドン酸、グルクロン酸やガラクツロン酸等のウロン
酸、マルトース、スクロース、ラクトースといった二糖
等など、β酸化サイクルを経ずにアセチルＣoＡを生じ
る化合物であれば、いかなる化合物でも用いることがで
きる。これらの増殖用炭素源は、用いる菌株に対する基
質としての有用性で適宜選択することができる。また、
mcl-３ＨＡのユニットの混入が少ない組み合わせであれ
ば、増殖用炭素源に複数の化合物を選択して用いること
も可能である。先に例示する増殖用炭素源の中でも、特
に糖類を用いることが好ましく、中でもグルコース、フ
ルクトース、マンノースからなる群から選択される少な
くとも一つであることがより好ましい。
えば、３ＨＴＢ、３ＨＴＶ、３ＨＴＨｘ、または、３Ｈ
ＴＨｐをモノマーユニットとして含むＰＨＡを製造する
場合は、ＰＨＡ生産用の原料として、それぞれ目的のモ
ノマーユニットに対応するＴＶＡ、ＴＨｘＡ、ＴＨｐＡ
を含み、加えて、微生物の増殖用炭素源を少なくとも一
種含んだ無機培地などを用いることができる。利用され
る増殖用炭素源としては、酵母エキスやポリペプトン、
肉エキスといった栄養素を用いることも可能である。さ
らには、増殖用炭素源として、糖類、例えば、グリセロ
アルデヒド、エリスロース、アラビノース、キシロー
ス、グルコース、ガラクトース、マンノース、フルクト
ースといったアルドース、グリセロール、エリスリトー
ル、キシリトール等のアルジトール、グルコン酸等のア
ルドン酸、グルクロン酸やガラクツロン酸等のウロン
酸、マルトース、スクロース、ラクトースといった二糖
等など、β酸化サイクルを経ずにアセチルＣoＡを生じ
る化合物であれば、いかなる化合物でも用いることがで
きる。これらの増殖用炭素源は、用いる菌株に対する基
質としての有用性で適宜選択することができる。また、
mcl-３ＨＡのユニットの混入が少ない組み合わせであれ
ば、増殖用炭素源に複数の化合物を選択して用いること
も可能である。先に例示する増殖用炭素源の中でも、特
に糖類を用いることが好ましく、中でもグルコース、フ
ルクトース、マンノースからなる群から選択される少な
くとも一つであることがより好ましい。
【０１７１】すなわち、目的のＰＨＡを生産させる培養
では、基質とするチエニルアルカン酸に加えて、培地中
に、糖類、酵母エキス、ポリペプトンのいずれかを、含
有濃度を、一般に、０．０５％〜５．０％の範囲で、好
ましくは、０．１％〜２．０％の範囲などで含有させた
状態で微生物の培養を行うことが望ましい。その際、基
質とするチエニルアルカン酸の添加率は、その分子量に
もよるが、一般に、０．０１％〜１．０％の範囲に、好
ましくは、０．０５％〜０．５％の範囲に選択すること
が望ましい。
では、基質とするチエニルアルカン酸に加えて、培地中
に、糖類、酵母エキス、ポリペプトンのいずれかを、含
有濃度を、一般に、０．０５％〜５．０％の範囲で、好
ましくは、０．１％〜２．０％の範囲などで含有させた
状態で微生物の培養を行うことが望ましい。その際、基
質とするチエニルアルカン酸の添加率は、その分子量に
もよるが、一般に、０．０１％〜１．０％の範囲に、好
ましくは、０．０５％〜０．５％の範囲に選択すること
が望ましい。
【０１７２】微生物にＰＨＡを生産・蓄積させる方法と
しては、一旦十分に増殖させた後に、塩化アンモニウム
のような窒素源を制限し、目的とするモノマーユニット
の基質となる化合物を加えた培地へ菌体を移し、更に培
養する二段階の培養方法を採用すると、目的とするＰＨ
Ａの生産性が向上する場合がある。具体的には、前記の
工程を複数段接続した多段方式の採用が挙げられる。例
えば、二段階培養法として、Ｄ-グルコースを 0.05％〜
5.0％の範囲、および、ＴＶＡ、ＴＨｘＡ、または、Ｔ
ＨｐＡを 0.01％〜1.0％の範囲で含んだ無機培地等で対
数増殖後期から定常期の時点まで培養し、菌体を遠心分
離等で回収した後、ＴＶＡ、ＴＨｘＡ、または、ＴＨｐ
Ａを 0.01％〜1.0％の範囲で含んだ、窒素源を制限し
た、あるいは実質的に存在しない無機培地に回収した菌
体を再懸濁し、さらに培養する方法がある。
しては、一旦十分に増殖させた後に、塩化アンモニウム
のような窒素源を制限し、目的とするモノマーユニット
の基質となる化合物を加えた培地へ菌体を移し、更に培
養する二段階の培養方法を採用すると、目的とするＰＨ
Ａの生産性が向上する場合がある。具体的には、前記の
工程を複数段接続した多段方式の採用が挙げられる。例
えば、二段階培養法として、Ｄ-グルコースを 0.05％〜
5.0％の範囲、および、ＴＶＡ、ＴＨｘＡ、または、Ｔ
ＨｐＡを 0.01％〜1.0％の範囲で含んだ無機培地等で対
数増殖後期から定常期の時点まで培養し、菌体を遠心分
離等で回収した後、ＴＶＡ、ＴＨｘＡ、または、ＴＨｐ
Ａを 0.01％〜1.0％の範囲で含んだ、窒素源を制限し
た、あるいは実質的に存在しない無機培地に回収した菌
体を再懸濁し、さらに培養する方法がある。
【０１７３】上記の培養方法に用いる無機培地として
は、リン源（例えば、リン酸塩等）、窒素源（例えば、
アンモニウム塩、硝酸塩等）等、微生物が増殖し得る成
分を含んでいるものであればいかなるものでも良く、例
えば、利用可能な無機塩培地として、ＭＳＢ培地、Ｅ培
地（Ｊ. Biol. Chem.， ２１８， 97-106 （1956））、
Ｍ９培地等を挙げることができる。
は、リン源（例えば、リン酸塩等）、窒素源（例えば、
アンモニウム塩、硝酸塩等）等、微生物が増殖し得る成
分を含んでいるものであればいかなるものでも良く、例
えば、利用可能な無機塩培地として、ＭＳＢ培地、Ｅ培
地（Ｊ. Biol. Chem.， ２１８， 97-106 （1956））、
Ｍ９培地等を挙げることができる。
【０１７４】なお、本発明の生産方法に利用可能な無機
塩培地の一例、下記の実施例で用いるＭ９培地の組成は
以下の通りである。
塩培地の一例、下記の実施例で用いるＭ９培地の組成は
以下の通りである。
【０１７５】（Ｍ９培地の組成） Ｎa2ＨＰＯ4： ６.２ g ＫＨ2ＰＯ4 ： ３.０ ｇ ＮaＣl ： ０.５ g ＮＨ4Ｃl ： １.０ g （培地１リットル中、pＨ７.０） 更に、良好な増殖及びＰＨＡの生産のためには、上記の
無機塩培地に対して、微生物の増殖に利用される微量金
属などを補う目的で、以下に示す組成の微量成分溶液を
0.3％（v/v）程度添加することが好ましい。
無機塩培地に対して、微生物の増殖に利用される微量金
属などを補う目的で、以下に示す組成の微量成分溶液を
0.3％（v/v）程度添加することが好ましい。
【０１７６】（微量成分溶液の組成） ニトリロ三酢酸： 1.5 g ＭgＳＯ4 ： 3.0 g ＭnＳＯ4 ： 0.5 g ＮaＣl ： 1.0 g ＦeＳＯ4 ： 0.1 g ＣaＣl2 ： 0.1 g ＣoＣl2 ： 0.1 g ＺnＳＯ4 ： 0.1 g ＣuＳＯ4 ： 0.1 g ＡlＫ(ＳＯ4)2： 0.1 g Ｈ3ＢＯ3 ： 0.1 g Ｎa2ＭoＯ4： 0.1 g ＮiＣl2 ： 0.1 g (培地１リットル中、pＨ7.0) 培養温度としては、上記の菌株など、利用する微生物が
良好に増殖可能な温度であれば良く、例えば 14〜40℃
の範囲、好ましくは 20〜35℃の範囲に選択することが
適当である。
良好に増殖可能な温度であれば良く、例えば 14〜40℃
の範囲、好ましくは 20〜35℃の範囲に選択することが
適当である。
【０１７７】具体的な例としては、Ｄ-グルコースを 0.
05％から 5.0％程度、および、ＴＶＡ、ＴＨｘＡ、また
は、ＴＨｐＡを 0.01％から 1.0％程度含んだ無機培地
等で培養し、対数増殖後期から定常期の時点で菌体を回
収して目的外のモノマーユニットの混在が少ない、ある
いは全くない所望のＰＨＡを抽出することができる。こ
のようなＰＨＡは、一般にＲ-体のみから構成され、ア
イソタクチックなポリマーである。
05％から 5.0％程度、および、ＴＶＡ、ＴＨｘＡ、また
は、ＴＨｐＡを 0.01％から 1.0％程度含んだ無機培地
等で培養し、対数増殖後期から定常期の時点で菌体を回
収して目的外のモノマーユニットの混在が少ない、ある
いは全くない所望のＰＨＡを抽出することができる。こ
のようなＰＨＡは、一般にＲ-体のみから構成され、ア
イソタクチックなポリマーである。
【０１７８】Ｄ-グルコースの代わりに同量の酵母エキ
スまたはポリペプトンを与えても良い。また、それらの
組み合わせを用いてもよい。
スまたはポリペプトンを与えても良い。また、それらの
組み合わせを用いてもよい。
【０１７９】＜ＰＨＡの回収＞本発明の生産方法では、
かかる培養液からのＰＨＡの分離には、通常行われてい
る方法を適用することができる。仮に、ＰＨＡが培養液
中に分泌される場合は、培養液からの抽出精製方法が利
用できる。目的とするＰＨＡが菌体に蓄積される場合
は、菌体からの抽出精製方法が用いられる。例えば、微
生物の培養菌体からのＰＨＡの回収には、通常行われて
いるクロロホルムなどの有機溶媒による抽出が最も簡便
ではある。利用される有機溶媒には、クロロホルム以外
に、アセトンが用いられる場合もある。また、有機溶媒
の使用が制限される環境中においては、溶媒抽出に代え
て、ＳＤＳ等の界面活性剤による処理、リゾチーム等の
酵素による処理、ＥＤＴＡ、次亜塩素酸ナトリウム、ア
ンモニア等の薬剤による処理によってＰＨＡ以外の菌体
成分を除去して、ＰＨＡを回収する方法を用いることも
できる。
かかる培養液からのＰＨＡの分離には、通常行われてい
る方法を適用することができる。仮に、ＰＨＡが培養液
中に分泌される場合は、培養液からの抽出精製方法が利
用できる。目的とするＰＨＡが菌体に蓄積される場合
は、菌体からの抽出精製方法が用いられる。例えば、微
生物の培養菌体からのＰＨＡの回収には、通常行われて
いるクロロホルムなどの有機溶媒による抽出が最も簡便
ではある。利用される有機溶媒には、クロロホルム以外
に、アセトンが用いられる場合もある。また、有機溶媒
の使用が制限される環境中においては、溶媒抽出に代え
て、ＳＤＳ等の界面活性剤による処理、リゾチーム等の
酵素による処理、ＥＤＴＡ、次亜塩素酸ナトリウム、ア
ンモニア等の薬剤による処理によってＰＨＡ以外の菌体
成分を除去して、ＰＨＡを回収する方法を用いることも
できる。
【０１８０】なお、本発明の生産方法において、微生物
の培養、微生物によるＰＨＡの生産と菌体への蓄積、並
びに、菌体からのＰＨＡの回収は、上記の方法に限定さ
れるものではない。
の培養、微生物によるＰＨＡの生産と菌体への蓄積、並
びに、菌体からのＰＨＡの回収は、上記の方法に限定さ
れるものではない。
【０１８１】
【実施例】以下に、実施例を示して、本発明をより具体
的に説明すり。なお、これらの実施例は、本発明の最良
の実施の形態の一例を示すものの、本発明は、これら実
施例により、限定を受けるものではない。また、以下に
おける「％」は特に標記した以外は重量基準である。
的に説明すり。なお、これらの実施例は、本発明の最良
の実施の形態の一例を示すものの、本発明は、これら実
施例により、限定を受けるものではない。また、以下に
おける「％」は特に標記した以外は重量基準である。
【０１８２】（実施例１）酵母エキス（Difco社製）0.5
％、ＴＶＡ0.1％を含むＭ９培地200 mlにシュードモナ
ス・プチダ・Ｐ９１株を植菌し、30℃、125ストローク
／分で振盪培養した。24時間後、菌体を遠心分離によっ
て回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍結乾燥した。
％、ＴＶＡ0.1％を含むＭ９培地200 mlにシュードモナ
ス・プチダ・Ｐ９１株を植菌し、30℃、125ストローク
／分で振盪培養した。24時間後、菌体を遠心分離によっ
て回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍結乾燥した。
【０１８３】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０１８４】得られたＰＨＡは、常法に従ってメタノリ
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表３に示す通り、このＰＨＡは、前記化学式
［６］に示す３ＨＴＶのモノマーユニットを唯一のモノ
マーユニットとするＰＨＡであることが確認された。
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表３に示す通り、このＰＨＡは、前記化学式
［６］に示す３ＨＴＶのモノマーユニットを唯一のモノ
マーユニットとするＰＨＡであることが確認された。
【０１８５】
【表３】
【０１８６】このＰＨＡについて、核磁気共鴫装置（Ｆ
Ｔ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ４００）を用いて、下記の測
定条件で分析した。 ＜測定条件＞ 測定核種：1Ｈ、13Ｃ 使用溶媒：ＣＤＣl3（ＴＭＳ/ＣＤＣl3をキャピラリ封
入で reference として使用） 共鳴周波数：1Ｈ＝４００ＭＨz、13Ｃ＝１００ＭＨz 図１及び図２に、1Ｈ及び13Ｃ-ＮＭＲスぺクトルを、そ
の帰属結果（化学式［１４］参照）を表４にそれぞれ示
した。
Ｔ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ４００）を用いて、下記の測
定条件で分析した。 ＜測定条件＞ 測定核種：1Ｈ、13Ｃ 使用溶媒：ＣＤＣl3（ＴＭＳ/ＣＤＣl3をキャピラリ封
入で reference として使用） 共鳴周波数：1Ｈ＝４００ＭＨz、13Ｃ＝１００ＭＨz 図１及び図２に、1Ｈ及び13Ｃ-ＮＭＲスぺクトルを、そ
の帰属結果（化学式［１４］参照）を表４にそれぞれ示
した。
【０１８７】
【化８２】
【０１８８】
【表４】
【０１８９】さらに、このＰＨＡの分子量をゲルパーミ
エーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ
-8020、カラム；ポリマーラボラトリーＰＬgel ＭIＸＥ
Ｄ-Ｃ(５μｍ)、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換
算）により評価した結果、数平均分子量Ｍn＝72,000、
重量平均分子量Ｍｗ＝260,000であった。
エーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ；東ソーＨＬＣ
-8020、カラム；ポリマーラボラトリーＰＬgel ＭIＸＥ
Ｄ-Ｃ(５μｍ)、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換
算）により評価した結果、数平均分子量Ｍn＝72,000、
重量平均分子量Ｍｗ＝260,000であった。
【０１９０】（実施例２）Ｄ-グルコース 0.5％、ＴＶ
Ａ 0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・チ
コリアイ・ＹＮ２株を植菌し、30℃、125ストローク／
分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠心分離によって
回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＶＡ 0.1
％とを含む、窒素源(ＮＨ4Ｃl)を含まないＭ９培地 200
ｍＬに、回収した菌体を再懸濁して、更に30℃、125ス
トローク／分で振盪培養した。42時間後、菌体を遠心分
離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍結乾
燥した。
Ａ 0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・チ
コリアイ・ＹＮ２株を植菌し、30℃、125ストローク／
分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠心分離によって
回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＶＡ 0.1
％とを含む、窒素源(ＮＨ4Ｃl)を含まないＭ９培地 200
ｍＬに、回収した菌体を再懸濁して、更に30℃、125ス
トローク／分で振盪培養した。42時間後、菌体を遠心分
離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍結乾
燥した。
【０１９１】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径 0.45μｍのメンブレンフィルターで
ろ過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃
縮液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径 0.45μｍのメンブレンフィルターで
ろ過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃
縮液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０１９２】得られたＰＨＡは、常法に従ってメタノリ
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー質量分析装
置（ＧＣ-ＭＳ,島津ＱＰ-5050、ＥI法）で分析し、ＰＨ
Ａモノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行っ
た。その結果、表５に示す通り、このＰＨＡは前記化学
式［６］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡで
あることが確認された。
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー質量分析装
置（ＧＣ-ＭＳ,島津ＱＰ-5050、ＥI法）で分析し、ＰＨ
Ａモノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行っ
た。その結果、表５に示す通り、このＰＨＡは前記化学
式［６］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡで
あることが確認された。
【０１９３】
【表５】
【０１９４】（実施例３）Ｄ-グルコース 0.5％、ＴＶ
Ａ 0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・チ
コリアイ・Ｈ４５株を植菌し、30℃、125ストローク／
分で振盪培養した。48時問後、菌体を遠心分離によって
回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＶＡ 0.1
％とを含む、窒素源（ＮＨ4Ｃl）を含まないＭ９培地 2
00ｍＬに、回収した菌体を再懸濁して、更に30℃、125
ストローク／分で振盪培養した。42時間後、菌体を遠心
分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍結
乾燥した。
Ａ 0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・チ
コリアイ・Ｈ４５株を植菌し、30℃、125ストローク／
分で振盪培養した。48時問後、菌体を遠心分離によって
回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＶＡ 0.1
％とを含む、窒素源（ＮＨ4Ｃl）を含まないＭ９培地 2
00ｍＬに、回収した菌体を再懸濁して、更に30℃、125
ストローク／分で振盪培養した。42時間後、菌体を遠心
分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍結
乾燥した。
【０１９５】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径 0.45μｍのメンブレンフィルターで
ろ過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃
縮液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径 0.45μｍのメンブレンフィルターで
ろ過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃
縮液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回
収して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０１９６】得られたＰＨＡは、常法に従ってメタノリ
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー質量分析装
置（ＧＣ-ＭＳ,島津ＱＰ-5050、ＥI法）で分析し、ＰＨ
Ａモノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行っ
た。その結果、表６に示す通り、このＰＨＡは前記化学
式［６］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡで
あることが確認された。
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー質量分析装
置（ＧＣ-ＭＳ,島津ＱＰ-5050、ＥI法）で分析し、ＰＨ
Ａモノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行っ
た。その結果、表６に示す通り、このＰＨＡは前記化学
式［６］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡで
あることが確認された。
【０１９７】
【表６】
【０１９８】（実施例４）Ｄ-グルコース 0.5％、ＴＶ
Ａ 0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・ジ
ェッセニイ・Ｐ１６１株を植菌し、30℃、125ストロー
ク／分で振盪培養した。46時間後、菌体を遠心分離によ
って回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＶＡ
0.1％とを含む、窒素源（ＮＨ4Ｃl）を含まないＭ９培
地 200 mlに、回収した菌体を再懸濁して、更に30℃、1
25ストローク／分で振盪培養した。41時間後、菌体を遠
心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍
結乾燥した。
Ａ 0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・ジ
ェッセニイ・Ｐ１６１株を植菌し、30℃、125ストロー
ク／分で振盪培養した。46時間後、菌体を遠心分離によ
って回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＶＡ
0.1％とを含む、窒素源（ＮＨ4Ｃl）を含まないＭ９培
地 200 mlに、回収した菌体を再懸濁して、更に30℃、1
25ストローク／分で振盪培養した。41時間後、菌体を遠
心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍
結乾燥した。
【０１９９】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た.抽出液を孔径 0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た.抽出液を孔径 0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０２００】得られたＰＨＡは、常法に従ってメタノリ
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー質量分析装
置（ＧＣ-ＭＳ,島津ＱＰ-5050、ＥI法）で分析し、ＰＨ
Ａモノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行っ
た。その結果、表７に示す通り、このＰＨＡは前記化学
式［６］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡで
あることが確認された。
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー質量分析装
置（ＧＣ-ＭＳ,島津ＱＰ-5050、ＥI法）で分析し、ＰＨ
Ａモノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行っ
た。その結果、表７に示す通り、このＰＨＡは前記化学
式［６］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡで
あることが確認された。
【０２０１】
【表７】
【０２０２】（実施例５）ポリペプトン（日本製薬社
製）0.5％、ＴＨｘＡ0.1％を含むＭ９培地200 mlにシュ
ードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、30℃、12
5ストローク／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠
心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍
結乾燥した。
製）0.5％、ＴＨｘＡ0.1％を含むＭ９培地200 mlにシュ
ードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、30℃、12
5ストローク／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠
心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍
結乾燥した。
【０２０３】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０２０４】得られたＰＨＡは、常法に従ってメタノリ
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表８に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［８］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表８に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［８］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
【０２０５】
【表８】
【０２０６】これらのＰＨＡについて、核磁気共鴫装置
（ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ４００）を用いて、下記
の測定条件で分析した。 ＜測定条件＞ 測定核種：1Ｈ 使用溶媒：ＣＤＣl3（ＴＭＳ/ＣＤＣl3をキャピラリ封
入で referenceに使用） 共鳴周波数：1Ｈ＝４００ＭＨz 図３に、1Ｈ-ＮＭＲスぺクトルをその帰属結果（化学
式：３−ヒドロキシ−４−（２−チエニル）酪酸［１
５］、３−ヒドロキシ−６−（２−チエニル）ヘキサン
酸［１６］、３−ヒドロキシ酪酸［１７］参照）を表９
にそれぞれ示した。
（ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ４００）を用いて、下記
の測定条件で分析した。 ＜測定条件＞ 測定核種：1Ｈ 使用溶媒：ＣＤＣl3（ＴＭＳ/ＣＤＣl3をキャピラリ封
入で referenceに使用） 共鳴周波数：1Ｈ＝４００ＭＨz 図３に、1Ｈ-ＮＭＲスぺクトルをその帰属結果（化学
式：３−ヒドロキシ−４−（２−チエニル）酪酸［１
５］、３−ヒドロキシ−６−（２−チエニル）ヘキサン
酸［１６］、３−ヒドロキシ酪酸［１７］参照）を表９
にそれぞれ示した。
【０２０７】
【化８３】
【０２０８】
【化８４】
【０２０９】
【化８５】
【０２１０】
【表９】
【０２１１】さらに、これらＰＨＡの分子量をゲルパー
ミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ；東ソーＨＬ
Ｃ-8020、カラム；ポリマーラボラトリーＰＬgel ＭIＸ
ＥＤ-Ｃ(５ｍ)、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換
算）により評価した結果、数平均分子量Mn＝180,000、
重量平均分子量Mw＝411,000であった。
ミエーションクロマトグラフィー（ＧＰＣ；東ソーＨＬ
Ｃ-8020、カラム；ポリマーラボラトリーＰＬgel ＭIＸ
ＥＤ-Ｃ(５ｍ)、溶媒；クロロホルム、ポリスチレン換
算）により評価した結果、数平均分子量Mn＝180,000、
重量平均分子量Mw＝411,000であった。
【０２１２】（実施例６）ポリペプトン（日本製薬社
製）0.5％、ＴＨｘＡ0.1％を含むＭ９培地200 mlにシュ
ードモナス・ジェッセニイ・Ｐ１６１株を植菌し、30
℃、125ストローク／分で振盪培養した。48時間後、菌
体を遠心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄
して凍結乾燥した。
製）0.5％、ＴＨｘＡ0.1％を含むＭ９培地200 mlにシュ
ードモナス・ジェッセニイ・Ｐ１６１株を植菌し、30
℃、125ストローク／分で振盪培養した。48時間後、菌
体を遠心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄
して凍結乾燥した。
【０２１３】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０２１４】得られたＰＨＡは、常法に従ってメタノリ
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１０に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［８］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１０に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［８］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
【０２１５】
【表１０】
【０２１６】（実施例７）ポリペプトン（日本製薬社
製）0.5％、ＴＨｘＡ0.1％を含むＭ９培地200 mlにシュ
ードモナス・チコリアイ・Ｈ４５株を植菌し、30℃、12
5ストローク／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠
心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍
結乾燥した。
製）0.5％、ＴＨｘＡ0.1％を含むＭ９培地200 mlにシュ
ードモナス・チコリアイ・Ｈ４５株を植菌し、30℃、12
5ストローク／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠
心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍
結乾燥した。
【０２１７】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０２１８】得られたＰＨＡは、常法に従ってメタノリ
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１１に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［８］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１１に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［８］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
【０２１９】
【表１１】
【０２２０】（実施例８）Ｄ-グルコース 0.5％、ＴＨ
ｘＡ0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・チ
コリアイ・ＹＮ２株を植菌し、30℃、125ストローク／
分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠心分離によって
回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＨｘＡ0.1
％とを含む、窒素源(ＮＨ4Ｃl)を含まないＭ９培地 200
ｍＬに、回収した菌体を再懸濁して、更に30℃、125ス
トローク／分で振盪培養した。42時間後、菌体を遠心分
離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍結乾
燥した。
ｘＡ0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・チ
コリアイ・ＹＮ２株を植菌し、30℃、125ストローク／
分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠心分離によって
回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＨｘＡ0.1
％とを含む、窒素源(ＮＨ4Ｃl)を含まないＭ９培地 200
ｍＬに、回収した菌体を再懸濁して、更に30℃、125ス
トローク／分で振盪培養した。42時間後、菌体を遠心分
離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍結乾
燥した。
【０２２１】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０２２２】得られたＰＨＡは、常法に従ってメタノリ
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１２に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［８］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１２に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［８］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
【０２２３】
【表１２】
【０２２４】（実施例９）Ｄ-グルコース 0.5％、ＴＨ
ｘＡ0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・ジ
ェッセニイ・Ｐ１６１株を植菌し、30℃、125ストロー
ク／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠心分離によ
って回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＨｘ
Ａ0.1％とを含む、窒素源(ＮＨ4Ｃl)を含まないＭ９培
地 200ｍＬに、回収した菌体を再懸濁して、更に30℃、
125ストローク／分で振盪培養した。42時間後、菌体を
遠心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して
凍結乾燥した。
ｘＡ0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・ジ
ェッセニイ・Ｐ１６１株を植菌し、30℃、125ストロー
ク／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠心分離によ
って回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＨｘ
Ａ0.1％とを含む、窒素源(ＮＨ4Ｃl)を含まないＭ９培
地 200ｍＬに、回収した菌体を再懸濁して、更に30℃、
125ストローク／分で振盪培養した。42時間後、菌体を
遠心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して
凍結乾燥した。
【０２２５】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０２２６】得られたＰＨＡは、常法に従ってメタノリ
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１３に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［８］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１３に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［８］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
【０２２７】
【表１３】
【０２２８】（実施例１０）Ｄ-グルコース 0.5％、Ｔ
ＨｘＡ0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・
チコリアイ・Ｈ４５株を植菌し、30℃、125ストローク
／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠心分離によっ
て回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＨｘＡ
0.1％とを含む、窒素源(ＮＨ4Ｃl)を含まないＭ９培地
200ｍＬに、回収した菌体を再懸濁して、更に30℃、125
ストローク／分で振盪培養した。42時間後、菌体を遠心
分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍結
乾燥した。
ＨｘＡ0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・
チコリアイ・Ｈ４５株を植菌し、30℃、125ストローク
／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠心分離によっ
て回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＨｘＡ
0.1％とを含む、窒素源(ＮＨ4Ｃl)を含まないＭ９培地
200ｍＬに、回収した菌体を再懸濁して、更に30℃、125
ストローク／分で振盪培養した。42時間後、菌体を遠心
分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍結
乾燥した。
【０２２９】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０２３０】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０２３１】得られたＰＨＡは、常法に従ってメタノリ
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１４に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［８］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１４に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［８］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
【０２３２】
【表１４】
【０２３３】（実施例１１）ポリペプトン（日本製薬社
製）0.5％、ＴＨｐＡ0.1％を含むＭ９培地200 mlにシュ
ードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、30℃、12
5ストローク／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠
心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍
結乾燥した。
製）0.5％、ＴＨｐＡ0.1％を含むＭ９培地200 mlにシュ
ードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、30℃、12
5ストローク／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠
心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍
結乾燥した。
【０２３４】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０２３５】得られたＰＨＡは、常法に従ってメタノリ
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１５に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［２］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１５に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［２］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
【０２３６】
【表１５】
【０２３７】これらのＰＨＡについて、核磁気共鴫装置
（ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ４００）を用いて、下記
の測定条件で分析した。 ＜測定条件＞ 測定核種：1Ｈ 使用溶媒：ＣＤＣl3（ＴＭＳ/ＣＤＣl3をキャピラリ封
入で referenceに使用） 共鳴周波数：1Ｈ＝４００ＭＨz 図４に、1Ｈ−ＮＭＲスぺクトルを、その帰属結果（化
学式：３−ヒドロキシ−５−（２−チエニル）吉草酸
［１８］、３−ヒドロキシ−７−（２−チエニル）ヘプ
タン酸［１９］参照）を表１６にそれぞれ示した。
（ＦＴ-ＮＭＲ:Ｂruker ＤＰＸ４００）を用いて、下記
の測定条件で分析した。 ＜測定条件＞ 測定核種：1Ｈ 使用溶媒：ＣＤＣl3（ＴＭＳ/ＣＤＣl3をキャピラリ封
入で referenceに使用） 共鳴周波数：1Ｈ＝４００ＭＨz 図４に、1Ｈ−ＮＭＲスぺクトルを、その帰属結果（化
学式：３−ヒドロキシ−５−（２−チエニル）吉草酸
［１８］、３−ヒドロキシ−７−（２−チエニル）ヘプ
タン酸［１９］参照）を表１６にそれぞれ示した。
【０２３８】
【化８６】
【０２３９】
【化８７】
【０２４０】
【表１６】
【０２４１】さらに、これらＰＨＡの分子量をゲル・パ
ーミエーション・クロマトグラフィー（ＧＰＣ；東ソー
ＨＬＣ-8020、カラム；ポリマーラボラトリーＰＬgel
ＭIＸＥＤ-Ｃ(５ｍ)、溶媒；クロロホルム、ポリスチレ
ン換算）により評価した結果、数平均分子量Mn＝49,00
0、重量平均分子量Mw＝88,000であった。
ーミエーション・クロマトグラフィー（ＧＰＣ；東ソー
ＨＬＣ-8020、カラム；ポリマーラボラトリーＰＬgel
ＭIＸＥＤ-Ｃ(５ｍ)、溶媒；クロロホルム、ポリスチレ
ン換算）により評価した結果、数平均分子量Mn＝49,00
0、重量平均分子量Mw＝88,000であった。
【０２４２】（実施例１２）ポリペプトン（日本製薬社
製）0.5％、ＴＨｐＡ0.1％を含むＭ９培地200 mlにシュ
ードモナス・ジェッセニイ・Ｐ１６１株を植菌し、30
℃、125ストローク／分で振盪培養した。48時間後、菌
体を遠心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄
して凍結乾燥した。
製）0.5％、ＴＨｐＡ0.1％を含むＭ９培地200 mlにシュ
ードモナス・ジェッセニイ・Ｐ１６１株を植菌し、30
℃、125ストローク／分で振盪培養した。48時間後、菌
体を遠心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄
して凍結乾燥した。
【０２４３】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０２４４】得られたＰＨＡは、常法に従ってメタノリ
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１７に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［２］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１７に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［２］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
【０２４５】
【表１７】
【０２４６】（実施例１３）ポリペプトン（日本製薬社
製）0.5％、ＴＨｐＡ0.1％を含むＭ９培地200 mlにシュ
ードモナス・チコリアイ・Ｈ４５株を植菌し、30℃、12
5ストローク／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠
心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍
結乾燥した。
製）0.5％、ＴＨｐＡ0.1％を含むＭ９培地200 mlにシュ
ードモナス・チコリアイ・Ｈ４５株を植菌し、30℃、12
5ストローク／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠
心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍
結乾燥した。
【０２４７】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０２４８】得られたＰＨＡは、常法に従ってメタノリ
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１８に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［２］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表１８に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［２］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
【０２４９】
【表１８】
【０２５０】（実施例１４）Ｄ-グルコース 0.5％、Ｔ
ＨｐＡ0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・
チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、30℃、125ストローク
／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠心分離によっ
て回収し、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＨｐＡ0.1％とを含
む、窒素源(ＮＨ4Ｃl)を含まないＭ９培地 200ｍＬに再
懸濁して、更に30℃、125ストローク／分で振盪培養し
た。42時間後、菌体を遠心分離によって回収し、冷メタ
ノールで一度洗浄して凍結乾燥した。
ＨｐＡ0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・
チコリアイ・ＹＮ２株を植菌し、30℃、125ストローク
／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠心分離によっ
て回収し、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＨｐＡ0.1％とを含
む、窒素源(ＮＨ4Ｃl)を含まないＭ９培地 200ｍＬに再
懸濁して、更に30℃、125ストローク／分で振盪培養し
た。42時間後、菌体を遠心分離によって回収し、冷メタ
ノールで一度洗浄して凍結乾燥した。
【０２５１】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。得られたＰＨＡは、常
法に従ってメタノリシスを行ったのち、ガスクロマトグ
ラフィー−質量分析装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）
で分析し、ＰＨＡモノマーユニットのメチルエステル化
物の同定を行った。その結果、表１９に示す通り、この
ＰＨＡは前記化学式［２］で示されるモノマーユニット
を有するＰＨＡであることが確認された。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。得られたＰＨＡは、常
法に従ってメタノリシスを行ったのち、ガスクロマトグ
ラフィー−質量分析装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）
で分析し、ＰＨＡモノマーユニットのメチルエステル化
物の同定を行った。その結果、表１９に示す通り、この
ＰＨＡは前記化学式［２］で示されるモノマーユニット
を有するＰＨＡであることが確認された。
【０２５２】
【表１９】
【０２５３】（実施例１５）Ｄ-グルコース 0.5％、Ｔ
ＨｐＡ0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・
ジェッセニイ・Ｐ１６１株を植菌し、30℃、125ストロ
ーク／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠心分離に
よって回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＨ
ｐＡ0.1％とを含む、窒素源(ＮＨ4Ｃl)を含まないＭ９
培地 200ｍＬに、回収した菌体を再懸濁して、更に30
℃、125ストローク／分で振盪培養した。42時間後、菌
体を遠心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄
して凍結乾燥した。
ＨｐＡ0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・
ジェッセニイ・Ｐ１６１株を植菌し、30℃、125ストロ
ーク／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠心分離に
よって回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＨ
ｐＡ0.1％とを含む、窒素源(ＮＨ4Ｃl)を含まないＭ９
培地 200ｍＬに、回収した菌体を再懸濁して、更に30
℃、125ストローク／分で振盪培養した。42時間後、菌
体を遠心分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄
して凍結乾燥した。
【０２５４】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０２５５】得られたＰＨＡは、常法に従ってメタノリ
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表２０に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［２］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表２０に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［２］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
【０２５６】
【表２０】
【０２５７】（実施例１６）Ｄ-グルコース 0.5％、Ｔ
ＨｐＡ0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・
チコリアイ・Ｈ４５株を植菌し、30℃、125ストローク
／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠心分離によっ
て回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＨｐＡ
0.1％とを含む、窒素源(ＮＨ4Ｃl)を含まないＭ９培地
200ｍＬに、回収した菌体を再懸濁して、更に30℃、125
ストローク／分で振盪培養した。42時間後、菌体を遠心
分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍結
乾燥した。
ＨｐＡ0.1％を含むＭ９培地 200 mlにシュードモナス・
チコリアイ・Ｈ４５株を植菌し、30℃、125ストローク
／分で振盪培養した。48時間後、菌体を遠心分離によっ
て回収した。次いで、Ｄ-グルコース 0.5％とＴＨｐＡ
0.1％とを含む、窒素源(ＮＨ4Ｃl)を含まないＭ９培地
200ｍＬに、回収した菌体を再懸濁して、更に30℃、125
ストローク／分で振盪培養した。42時間後、菌体を遠心
分離によって回収し、冷メタノールで一度洗浄して凍結
乾燥した。
【０２５８】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０２５９】この凍結乾燥ペレットを20 mlのクロロホ
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
ルムに懸濁し、60℃で20時間攪拌してＰＨＡを抽出し
た。抽出液を孔径0.45μｍのメンブレンフィルターでろ
過したのち、ロータリーエバポレーターで濃縮し、濃縮
液を冷メタノール中で再沈澱させ、更に沈澱のみを回収
して真空乾燥してＰＨＡを得た。
【０２６０】得られたＰＨＡは、常法に従ってメタノリ
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表２１に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［２］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
シスを行ったのち、ガスクロマトグラフィー−質量分析
装置（GC-MS，島津QP-5050、EI法）で分析し、ＰＨＡモ
ノマーユニットのメチルエステル化物の同定を行った。
その結果、表２１に示す通り、このＰＨＡは前記化学式
［２］で示されるモノマーユニットを有するＰＨＡであ
ることが確認された。
【０２６１】
【表２１】
【０２６２】
【発明の効果】本発明のＰＨＡは、構成するモノマーユ
ニットとして、側鎖末端にチエニル基を置換基として含
有するものであり、この芳香性を有するチエニル基の存
在により、融点も高く、加工性も優れたものとなり、新
規な機能性を発揮するＰＨＡポリマー材料となる。特
に、微生物により生産させることにより、前記の機能性
を具えつつ、生分解性をも保持するポリマー材料とな
る。加えて、本発明のＰＨＡの製造方法では、かかる側
鎖末端にチエニル基を置換基として含有するモノマーユ
ニットに対応する基質のチエニルアルカン酸に加えて、
利用するＰＨＡ産生能を有する微生物が炭素源、エネル
ギー源として利用できる、糖類、酵母エキス、または、
ポリペプトンのいずれかを加えてある培地で培養するこ
とにより、基質チエニルアルカン酸に由来する目的とす
るモノマーユニットを含むＰＨＡを高い収率で生産さ
せ、さらには、その際に得られるＰＨＡ中において、基
質チエニルアルカン酸に由来する目的とするモノマーユ
ニットが比較的高純度（含有モル比率）とすることがで
きる。
ニットとして、側鎖末端にチエニル基を置換基として含
有するものであり、この芳香性を有するチエニル基の存
在により、融点も高く、加工性も優れたものとなり、新
規な機能性を発揮するＰＨＡポリマー材料となる。特
に、微生物により生産させることにより、前記の機能性
を具えつつ、生分解性をも保持するポリマー材料とな
る。加えて、本発明のＰＨＡの製造方法では、かかる側
鎖末端にチエニル基を置換基として含有するモノマーユ
ニットに対応する基質のチエニルアルカン酸に加えて、
利用するＰＨＡ産生能を有する微生物が炭素源、エネル
ギー源として利用できる、糖類、酵母エキス、または、
ポリペプトンのいずれかを加えてある培地で培養するこ
とにより、基質チエニルアルカン酸に由来する目的とす
るモノマーユニットを含むＰＨＡを高い収率で生産さ
せ、さらには、その際に得られるＰＨＡ中において、基
質チエニルアルカン酸に由来する目的とするモノマーユ
ニットが比較的高純度（含有モル比率）とすることがで
きる。
【０２６３】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> Canon Inc. <120> Polyhydroxyalkanoate comprising 3-hydroxythenylalkanoic acid as mo nomer units, and its manufacturing method. <130> 4416075 <160> 1 <210> 1 <211> 1501 <212> DNA <213> Pseudomonas jessenii 161 strain (FERM BP-7376). <400> 1 tgaacgctgg cggcaggcct aacacatgca agtcgagcgg atgacgggag cttgctcctg 60 aattcagcgg cggacgggtg agtaatgcct aggaatctgc ctggtagtgg gggacaacgt 120 ctcgaaaggg acgctaatac cgcatacgtc ctacgggaga aagcagggga ccttcgggcc 180 ttgcgctatc agatgagcct aggtcggatt agctagttgg tgaggtaatg gctcaccaag 240 gcgacgatcc gtaactggtc tgagaggatg atcagtcaca ctggaactga gacacggtcc 300 agactcctac gggaggcagc agtggggaat attggacaat gggcgaaagc ctgatccagc 360 catgccgcgt gtgtgaagaa ggtcttcgga ttgtaaagca ctttaagttg ggaggaaggg 420 cattaaccta atacgttagt gttttgacgt taccgacaga ataagcaccg gctaactctg 480 tgccagcagc cgcggtaata cagagggtgc aagcgttaat cggaattact gggcgtaaag 540 cgcgcgtagg tggtttgtta agttggatgt gaaagccccg ggctcaacct gggaactgca 600 ttcaaaactg acaagctaga gtatggtaga gggtggtgga atttcctgtg tagcggtgaa 660 atgcgtagat ataggaagga acaccagtgg cgaaggcgac cacctggact gatactgaca 720 ctgaggtgcg aaagcgtggg gagcaaacag gattagatac cctggtagtc cacgccgtaa 780 acgatgtcaa ctagccgttg ggagccttga gctcttagtg gcgcagctaa cgcattaagt 840 tgaccgcctg gggagtacgg ccgcaaggtt aaaactcaaa tgaattgacg ggggcccgca 900 caagcggtgg agcatgtggt ttaattcgaa gcaacgcgaa gaaccttacc aggccttgac 960 atccaatgaa ctttccagag atggatgggt gccttcggga acattgagac aggtgctgca 1020 tggctgtcgt cagctcgtgt cgtgagatgt tgggttaagt cccgtaacga gcgcaaccct 1080 tgtccttagt taccagcacg taatggtggg cactctaagg agactgccgg tgacaaaccg 1140 gaggaaggtg gggatgacgt caagtcatca tggcccttac ggcctgggct acacacgtgc 1200 tacaatggtc ggtacagagg gttgccaagc cgcgaggtgg agctaatccc acaaaaccga 1260 tcgtagtccg gatcgcagtc tgcaactcga ctgcgtgaag tcggaatcgc tagtaatcgc 1320 gaatcagaat gtcgcggtga atacgttccc gggccttgta cacaccgccc gtcacaccat 1380 gggagtgggt tgcaccagaa gtagctagtc taaccttcgg gaggacggtt accacggtgt 1440 gattcatgac tggggtgaag tcgtaccaag gtagccgtag gggaacctgc ggctggatca 1500 c 1501
【図１】実施例１において、ＴＶＡを原料として生産さ
れたＰＨＡポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す図で
ある。
れたＰＨＡポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す図で
ある。
【図２】実施例１において、ＴＶＡを原料として生産さ
れたＰＨＡポリマーの13Ｃ-ＮＭＲスペクトルを示す図
である。
れたＰＨＡポリマーの13Ｃ-ＮＭＲスペクトルを示す図
である。
【図３】実施例５において、ＴＨｘＡを原料として生産
されたＰＨＡポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す図
である。
されたＰＨＡポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す図
である。
【図４】実施例１１において、ＴＨｐＡを原料として生
産されたＰＨＡポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す
図である。
産されたＰＨＡポリマーの1Ｈ-ＮＭＲスペクトルを示す
図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｒ 1:38） Ｃ１２Ｒ 1:38） (72)発明者 今村 剛士 東京都大田区下丸子３丁目30番２号 キヤ ノン株式会社内 (72)発明者 見目 敬 東京都大田区下丸子３丁目30番２号 キヤ ノン株式会社内 (72)発明者 小林 辰 東京都大田区下丸子３丁目30番２号 キヤ ノン株式会社内 (72)発明者 矢野 哲哉 東京都大田区下丸子３丁目30番２号 キヤ ノン株式会社内
Claims (28)
- 【請求項１】 下記式［１］で表されるモノマーユニッ
ト組成を有することを特徴とするポリヒドロキシアルカ
ノエート。 ＡxＢ(1-x) ［１］ （式中、Ａは、下記一般式［２］で表される少なくとも
１つ以上のモノマーユニットであり、Ｂは、下記一般式
［３］で表されるモノマーユニットならびに下記一般式
［４］で表されるモノマーユニットからなる群から選択
される少なくとも１つ以上のモノマーユニットであり、
xは０.０１以上１以下である） 【化１】 （式中、ｎは１から８の整数のいずれかを表す） 【化２】 （式中、ｐは０から１０の整数のいずれかを表す） 【化３】 （式中、ｑは３または５である） - 【請求項２】 前記Ａ成分のモノマーユニットの一つと
して、下記化学式［５］で表されるモノマーユニットを
含むことを特徴とする、請求項１に記載のポリヒドロキ
シアルカノエート。 【化４】 - 【請求項３】 前記Ａ成分のモノマーユニットの一つと
して、下記化学式［６］で表されるモノマーユニットを
含むことを特徴とする、請求項１に記載のポリヒドロキ
シアルカノエート。 【化５】 - 【請求項４】 前記Ａ成分のモノマーユニットの一つと
して、下記化学式［７］で表されるモノマーユニットを
含むことを特徴とする、請求項１に記載のポリヒドロキ
シアルカノエート。 【化６】 - 【請求項５】 前記Ａ成分のモノマーユニットの一つと
して、下記化学式［８］で表されるモノマーユニットを
含むことを特徴とする、請求項１に記載のポリヒドロキ
シアルカノエート。 【化７】 - 【請求項６】 前記Ａ成分のモノマーユニットとして、
下記化学式［５］で表されるモノマーユニットならびに
下記化学式［７］で表されるモノマーユニットを含むこ
とを特徴とする、請求項１に記載のポリヒドロキシアル
カノエート。 【化８】 【化９】 - 【請求項７】 前記Ａ成分のモノマーユニットとして、
下記化学式［６］で表されるモノマーユニットならびに
下記化学式［８］で表されるモノマーユニットを含むこ
とを特徴とする、請求項１に記載のポリヒドロキシアル
カノエート。 【化１０】 【化１１】 - 【請求項８】 前記Ａ成分のモノマーユニットとして、
下記化学式［５］で表されるモノマーユニットのみを含
むポリマーであることを特徴とする、請求項１に記載の
ポリヒドロキシアルカノエート。 【化１２】 - 【請求項９】 前記Ａ成分のモノマーユニットとして、
下記化学式［６］で表されるモノマーユニットのみを含
むポリマーであることを特徴とする、請求項１に記載の
ポリヒドロキシアルカノエート。 【化１３】 - 【請求項１０】 前記Ａ成分のモノマーユニットとし
て、下記化学式［７］で表されるモノマーユニットのみ
を含むポリマーであることを特徴とする、請求項１に記
載のポリヒドロキシアルカノエート。 【化１４】 - 【請求項１１】 前記Ａ成分のモノマーユニットとし
て、下記化学式［８］で表されるモノマーユニットのみ
を含むポリマーであることを特徴とする、請求項１に記
載のポリヒドロキシアルカノエート。 【化１５】 - 【請求項１２】 ポリマー全体の数平均分子量が10,000
から300,000である、請求項１〜１１のいずれかに記載
のポリヒドロキシアルカノエート。 - 【請求項１３】 ポリヒドロキシアルカノエート（ＰＨ
Ａ）産生能を有する微生物を利用して、下記式［１］で
表されるモノマーユニット組成を有するポリヒドロキシ
アルカノエートを製造する方法であって、 目的とするポリヒドロキシアルカノエートは、下記式
［１］で表されるモノマーユニット組成を有するポリヒ
ドロキシアルカノエートであり、 ＡxＢ(1-x) ［１］ （ただし、上記式中、Ａは下記化学式［２］で表される
少なくとも１つ以上であり、Ｂは下記化学式［３］また
は下記化学式［４］で表されるモノマーユニットから選
択される少なくとも１つ以上であり、xは０.０１以上１
以下である）； 【化１６】 （式中、ｎは１以上８以下の整数を表す）； 【化１７】 （式中、ｐは０から１０の整数のいずれかを表す）； 【化１８】 （式中、ｑは３または５である）；利用するＰＨＡ産生
能を有する微生物は、末端にチエニル基置換を有するア
ルカン酸（チエニルアルカン酸）を基質として、対応す
る末端にチエニル基置換を有する３−ヒドロキシアルカ
ン酸のモノマーユニットを含むポリヒドロキシアルカノ
エートを産生する能力を有し；上記Ａ成分の末端にチエ
ニル基置換を有する３−ヒドロキシアルカン酸のモノマ
ーユニットに対応する末端にチエニル基置換を有するア
ルカン酸（チエニルアルカン酸）を原料として含む培地
において、前記微生物を培養する工程を有することを特
徴とするポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。 - 【請求項１４】 原料のチエニルアルカン酸として、下
記一般式［９］で表されるチエニルアルカン酸を用い
て、 生産するポリヒドロキシアルカノエートは、下記一般式
［１０］で表されるモノマーユニットを含むポリヒドロ
キシアルカノエートであることを特徴とする、請求項１
３に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。 【化１９】 （式中、ｎは１から８の整数のいずれかを表す）； 【化２０】 （式中、ｍは、１以上の整数であって、前記一般式
［９］のｎにより定まる、ｎ、ｎ−２、ｎ−４、ｎ−６
からなる群より選択されるいずれかの整数を表す） - 【請求項１５】 原料のチエニルアルカン酸と糖類とを
含む培地で、原料の前記チエニルアルカン酸を利用し
て、前記式［１］で表されるモノマーユニット組成を有
するポリヒドロキシアルカノエートを生産する微生物を
培養する工程を有することを特徴とする、請求項１３に
記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。 - 【請求項１６】 前記微生物の培養は、原料のチエニル
アルカン酸と糖類とを含む培地による１段階培養である
ことを特徴とする、請求項１５に記載のポリヒドロキシ
アルカノエートの製造方法。 - 【請求項１７】 前記微生物の培養は、 原料のチエニルアルカン酸と糖類とを含む培地による培
養と、 これに続く、原料のチエニルアルカン酸と糖類を含み、
しかしながら、含有される窒素源を制限した培地による
培養との、少なくとも２段階の培養で実施されることを
特徴とする、請求項１５に記載のポリヒドロキシアルカ
ノエートの製造方法。 - 【請求項１８】 培地に含有される前記糖類が、グルコ
ース、フルクトース、マンノースからなる群から選択さ
れる少なくとも一つの糖類であることを特徴とする、請
求項１５に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造
方法。 - 【請求項１９】 原料のチエニルアルカン酸と酵母エキ
スとを含む培地で、原料の前記チエニルアルカン酸を利
用して前記式［１］で表されるモノマーユニット組成を
有するポリヒドロキシアルカノエートを生産する微生物
を培養する工程を有することを特徴とする、請求項１３
に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。 - 【請求項２０】 原料のチエニルアルカン酸とポリペプ
トンとを含む培地で、原料の前記チエニルアルカン酸を
利用して前記式［１］で表されるモノマーユニット組成
を有するポリヒドロキシアルカノエートを生産する微生
物を培養する工程を有することを特徴とする、請求項１
３に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。 - 【請求項２１】 微生物が産生したポリヒドロキシアル
カノエートを単離する工程をさらに有することを特徴と
する、請求項１３に記載のポリヒドロキシアルカノエー
トの製造方法。 - 【請求項２２】 利用するＰＨＡ産生能を有する微生物
が、シュードモナス属（Pseudomonas sp.）に属する微
生物であることを特徴とする、、請求項１３に記載のポ
リヒドロキシアルカノエートの製造方法。 - 【請求項２３】 前記微生物が、シュードモナス・プチ
ダ・Ｐ９１株（Pseudomonas putida Ｐ９１、ＦＥＲＭ
ＢＰ−７３７３）、シュードモナス・チコリアイ・Ｈ
４５株（Pseudomonas cichorii Ｈ４５、ＦＥＲＭ ＢＰ
−７３７４）、シュードモナス・チコリアイ・ＹＮ２株
（Pseudomonas cichorii ＹＮ２、ＦＥＲＭ ＢＰ−７３
７５）、シュードモナス・ジェッセニイ・Ｐ１６１株
（Pseudomonas jessenii Ｐ１６１、ＦＥＲＭ ＢＰ-７
３７６）からなる群から選択される少なくとも１つの菌
株であることを特徴とする、請求項２２に記載のポリヒ
ドロキシアルカノエートの製造方法。 - 【請求項２４】 生産目的のポリヒドロキシアルカノエ
ートは、下記化学式［６］で表されるモノマーユニット
を含むポリヒドロキシアルカノエートであり、 下記化学式［１１］で表される５−（２−チエニル）吉
草酸を原料として含む前記培地において、５−（２−チ
エニル）吉草酸を基質に利用して、下記化学式［６］で
表されるモノマーユニットを含むポリヒドロキシアルカ
ノエートを生産する微生物を培養する工程を有すること
を特徴とする請求項１４に記載のポリヒドロキシアルカ
ノエートの製造方法。 【化２１】 【化２２】 - 【請求項２５】 生産目的のポリヒドロキシアルカノエ
ートは、下記化学式［７］で表されるモノマーユニット
を含むポリヒドロキシアルカノエートであり、 下記化学式［１２］で表される６−（２−チエニル）ヘ
キサン酸を含む培地で、６−（２−チエニル）ヘキサン
酸を利用して下記化学式［７］で表されるモノマーユニ
ットを含むポリヒドロキシアルカノエートを生産する微
生物を培養する工程を有することを特徴とする請求項１
４に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。 【化２３】 【化２４】 - 【請求項２６】 生産目的のポリヒドロキシアルカノエ
ートは、下記化学式［８］で表されるモノマーユニット
を含むポリヒドロキシアルカノエートであり、 下記化学式［１３］で表される７−（２−チエニル）ヘ
プタン酸を含む培地で、７−（２−チエニル）ヘプタン
酸を利用して下記化学式［８］で表されるモノマーユニ
ットを含むポリヒドロキシアルカノエートを生産する微
生物を培養する工程を有することを特徴とする請求項１
４に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。 【化２５】 【化２６】 - 【請求項２７】 生産目的のポリヒドロキシアルカノエ
ートは、下記化学式［５］で表されるモノマーユニット
と下記化学式［７］で表されるモノマーユニットとを含
むポリヒドロキシアルカノエートであり、 下記化学式［１２］で表される６−（２−チエニル）ヘ
キサン酸を含む培地で、６−（２−チエニル）ヘキサン
酸を利用して。下記化学式［５］で表されるモノマーユ
ニットならびに下記化学式［７］で表されるモノマーユ
ニットを含むポリヒドロキシアルカノエートを生産する
微生物を培養する工程を有することを特徴とする請求項
１４に記載のポリヒドロキシアルカノエートの製造方
法。 【化２７】 【化２８】 【化２９】 - 【請求項２８】 生産目的のポリヒドロキシアルカノエ
ートは、下記化学式［６］で表されるモノマーユニット
と下記化学式［８］で表されるモノマーユニットとを含
むポリヒドロキシアルカノエートであり、下記化学式
［１３］で表される７−（２−チエニル）ヘプタン酸を
含む培地で、７−（２−チエニル）ヘプタン酸を利用し
て、下記化学式［６］で表されるモノマーユニットなら
びに下記化学式［８］で表されるモノマーユニットを含
むポリヒドロキシアルカノエートを生産する微生物を培
養する工程を有することを特徴とする請求項１４に記載
のポリヒドロキシアルカノエートの製造方法。 【化３０】 【化３１】 【化３２】
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|---|---|---|---|
| JP2001055670A JP2001316462A (ja) | 2000-02-29 | 2001-02-28 | ３−ヒドロキシチエニルアルカン酸をモノマーユニットとして含むポリヒドロキシアルカノエート及びその製造方法 |
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|---|---|---|---|
| JP2000054317 | 2000-02-29 | ||
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| KR100461511B1 (ko) * | 2001-04-27 | 2004-12-14 | 캐논 가부시끼가이샤 | 신규 폴리히드록시알카노에이트, 그 제조방법, 이폴리히드록시알카노에이트를 함유하는 전하제어제,토너바인더 및 토너, 및 화상형성방법 및 이 토너를사용하는 화상형성장치 |
| KR100511866B1 (ko) * | 2001-03-27 | 2005-09-02 | 캐논 가부시끼가이샤 | 곁사슬에 티에닐구조를 지닌 유닛을 함유하는폴리하이드록시알카노에이트 및 그 제조방법, 상기폴리하이드록시알카노에이트를 함유하는 하전제어제,토너바인더 및 토너, 그리고 상기 토너를 사용한화상형성방법 및 화상형성장치 |
| KR100522483B1 (ko) * | 2001-03-01 | 2005-10-18 | 캐논 가부시끼가이샤 | 곁사슬에 페닐설파닐구조를 지닌 유닛을 함유하는 신규의 폴리하이드록시알카노에이트와, 그의 생산방법, 상기 신규의 폴리하이드록시알카노에이트를 함유하는 하전제어제, 토너바인더 및 토너, 그리고, 상기 토너를 이용하는 화상형성방법 및 화상형성장치 |
| JP2008038124A (ja) * | 2006-08-04 | 2008-02-21 | Sumitomo Rubber Ind Ltd | ゴム組成物およびこれを用いた空気入りタイヤ |
| EP2180374A1 (en) | 2008-10-21 | 2010-04-28 | Xerox Corporation | Toner compositions and processes |
| US8281832B2 (en) | 2005-08-04 | 2012-10-09 | Sumitomo Rubber Industries, Ltd. | Rubber composition and pneumatic tire using the same |
-
2001
- 2001-02-28 JP JP2001055670A patent/JP2001316462A/ja active Pending
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| US8187780B2 (en) | 2008-10-21 | 2012-05-29 | Xerox Corporation | Toner compositions and processes |
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