JP2001299140A - Ｈｃｖを増幅しうる細胞及び非ヒト動物 - Google Patents
Ｈｃｖを増幅しうる細胞及び非ヒト動物Info
- Publication number
- JP2001299140A JP2001299140A JP2000122486A JP2000122486A JP2001299140A JP 2001299140 A JP2001299140 A JP 2001299140A JP 2000122486 A JP2000122486 A JP 2000122486A JP 2000122486 A JP2000122486 A JP 2000122486A JP 2001299140 A JP2001299140 A JP 2001299140A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- human
- hcv
- amplification
- human animal
- replication
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 101000914479 Homo sapiens CD81 antigen Proteins 0.000 claims abstract description 146
- 102000055772 human CD81 Human genes 0.000 claims abstract description 123
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 claims abstract description 55
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims abstract description 51
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims abstract description 45
- 101100166626 Homo sapiens CD81 gene Proteins 0.000 claims abstract description 35
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims abstract description 33
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 31
- 208000005176 Hepatitis C Diseases 0.000 claims abstract description 24
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 claims abstract description 20
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 20
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 claims abstract description 16
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 claims abstract description 11
- 210000003101 oviduct Anatomy 0.000 claims abstract description 7
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 5
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 126
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims description 107
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 105
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 105
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 96
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 76
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 69
- 230000009261 transgenic effect Effects 0.000 claims description 66
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 39
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 claims description 35
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 25
- 102100027221 CD81 antigen Human genes 0.000 claims description 23
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 23
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 claims description 18
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 15
- 230000002950 deficient Effects 0.000 claims description 13
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 claims description 11
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 11
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 11
- 101150045282 CD81 gene Proteins 0.000 claims description 10
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 claims description 10
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 9
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 claims description 9
- 208000006454 hepatitis Diseases 0.000 claims description 9
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 9
- 201000007270 liver cancer Diseases 0.000 claims description 9
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 claims description 9
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 claims description 8
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 claims description 7
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 7
- 231100000283 hepatitis Toxicity 0.000 claims description 7
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 6
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 6
- 210000005228 liver tissue Anatomy 0.000 claims description 6
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 claims description 6
- 102100036475 Alanine aminotransferase 1 Human genes 0.000 claims description 4
- 108010082126 Alanine transaminase Proteins 0.000 claims description 4
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 claims description 4
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 claims description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 4
- 239000000556 agonist Substances 0.000 claims description 3
- 239000005557 antagonist Substances 0.000 claims description 3
- 210000000287 oocyte Anatomy 0.000 claims description 3
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 3
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 claims 1
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 189
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 53
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 25
- 238000011830 transgenic mouse model Methods 0.000 description 23
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 13
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 11
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 8
- 102000014150 Interferons Human genes 0.000 description 7
- 108010050904 Interferons Proteins 0.000 description 7
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 7
- 229940079322 interferon Drugs 0.000 description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 7
- 102100034349 Integrase Human genes 0.000 description 6
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 6
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 6
- 241000282579 Pan Species 0.000 description 5
- 201000010878 atypical lipomatous tumor Diseases 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 5
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 5
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 5
- 208000022752 well-differentiated liposarcoma Diseases 0.000 description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 4
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 4
- 238000011161 development Methods 0.000 description 4
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 4
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 4
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 4
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 4
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 3
- 210000005075 mammary gland Anatomy 0.000 description 3
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 3
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 3
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 3
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 3
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 3
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 206010008909 Chronic Hepatitis Diseases 0.000 description 2
- 208000006154 Chronic hepatitis C Diseases 0.000 description 2
- 101710091045 Envelope protein Proteins 0.000 description 2
- 206010016654 Fibrosis Diseases 0.000 description 2
- 101000834253 Gallus gallus Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 2
- 206010067125 Liver injury Diseases 0.000 description 2
- 108010004729 Phycoerythrin Proteins 0.000 description 2
- 101710188315 Protein X Proteins 0.000 description 2
- 108010045517 Serum Amyloid P-Component Proteins 0.000 description 2
- 102100036202 Serum amyloid P-component Human genes 0.000 description 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 description 2
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 2
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 2
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 2
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 208000019425 cirrhosis of liver Diseases 0.000 description 2
- 201000010897 colon adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 2
- 231100000753 hepatic injury Toxicity 0.000 description 2
- 208000010710 hepatitis C virus infection Diseases 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108091027963 non-coding RNA Proteins 0.000 description 2
- 102000042567 non-coding RNA Human genes 0.000 description 2
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 230000000384 rearing effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 2
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 2
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 20-hydroxyecdysone Chemical compound C1[C@@H](O)[C@@H](O)C[C@]2(C)[C@@H](CC[C@@]3([C@@H]([C@@](C)(O)[C@H](O)CCC(C)(O)C)CC[C@]33O)C)C3=CC(=O)[C@@H]21 NKDFYOWSKOHCCO-YPVLXUMRSA-N 0.000 description 1
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 1
- 238000011740 C57BL/6 mouse Methods 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 102100032566 Carbonic anhydrase-related protein 10 Human genes 0.000 description 1
- 241001227713 Chiron Species 0.000 description 1
- 208000000419 Chronic Hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 102100033779 Collagen alpha-4(IV) chain Human genes 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 206010061818 Disease progression Diseases 0.000 description 1
- 102100038132 Endogenous retrovirus group K member 6 Pro protein Human genes 0.000 description 1
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 1
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 1
- 208000010201 Exanthema Diseases 0.000 description 1
- 101100321669 Fagopyrum esculentum FA02 gene Proteins 0.000 description 1
- 241000710781 Flaviviridae Species 0.000 description 1
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 108700039791 Hepatitis C virus nucleocapsid Proteins 0.000 description 1
- 206010019786 Hepatitis non-A non-B Diseases 0.000 description 1
- 101100005713 Homo sapiens CD4 gene Proteins 0.000 description 1
- 101000867836 Homo sapiens Carbonic anhydrase-related protein 10 Proteins 0.000 description 1
- 101000710870 Homo sapiens Collagen alpha-4(IV) chain Proteins 0.000 description 1
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 description 1
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 206010022004 Influenza like illness Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- -1 LW or pCALN / pBR Substances 0.000 description 1
- 101000930477 Mus musculus Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101100134024 Mus musculus Lat2 gene Proteins 0.000 description 1
- 229930193140 Neomycin Natural products 0.000 description 1
- 108010088373 Neurofilament Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000008763 Neurofilament Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 101100166628 Pan troglodytes CD81 gene Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 102000007568 Proto-Oncogene Proteins c-fos Human genes 0.000 description 1
- 108010071563 Proto-Oncogene Proteins c-fos Proteins 0.000 description 1
- 238000010802 RNA extraction kit Methods 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 102000043977 Tetraspanins Human genes 0.000 description 1
- 108700031126 Tetraspanins Proteins 0.000 description 1
- 108070000030 Viral receptors Proteins 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 229910000389 calcium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001506 calcium phosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011010 calcium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 230000003915 cell function Effects 0.000 description 1
- 231100000749 chronicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000007882 cirrhosis Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 230000005750 disease progression Effects 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 201000005884 exanthem Diseases 0.000 description 1
- 230000004761 fibrosis Effects 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 238000010363 gene targeting Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 1
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 208000002672 hepatitis B Diseases 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000012642 immune effector Substances 0.000 description 1
- 230000006058 immune tolerance Effects 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 230000008595 infiltration Effects 0.000 description 1
- 238000001764 infiltration Methods 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 229960004927 neomycin Drugs 0.000 description 1
- 210000005044 neurofilament Anatomy 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 210000003240 portal vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000000750 progressive effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 206010037844 rash Diseases 0.000 description 1
- 238000012827 research and development Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229960002197 temoporfin Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 206010043554 thrombocytopenia Diseases 0.000 description 1
- 230000006016 thyroid dysfunction Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H tricalcium bis(phosphate) Chemical compound [Ca+2].[Ca+2].[Ca+2].[O-]P([O-])([O-])=O.[O-]P([O-])([O-])=O QORWJWZARLRLPR-UHFFFAOYSA-H 0.000 description 1
- 241000701161 unidentified adenovirus Species 0.000 description 1
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/8509—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells for producing genetically modified animals, e.g. transgenic
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/027—New or modified breeds of vertebrates
- A01K67/0275—Genetically modified vertebrates, e.g. transgenic
- A01K67/0278—Knock-in vertebrates, e.g. humanised vertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K49/00—Preparations for testing in vivo
- A61K49/0004—Screening or testing of compounds for diagnosis of disorders, assessment of conditions, e.g. renal clearance, gastric emptying, testing for diabetes, allergy, rheuma, pancreas functions
- A61K49/0008—Screening agents using (non-human) animal models or transgenic animal models or chimeric hosts, e.g. Alzheimer disease animal model, transgenic model for heart failure
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
- A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
- C07K14/70596—Molecules with a "CD"-designation not provided for elsewhere
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2207/00—Modified animals
- A01K2207/15—Humanized animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2217/00—Genetically modified animals
- A01K2217/05—Animals comprising random inserted nucleic acids (transgenic)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2227/00—Animals characterised by species
- A01K2227/10—Mammal
- A01K2227/105—Murine
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K2267/00—Animals characterised by purpose
- A01K2267/03—Animal model, e.g. for test or diseases
- A01K2267/0337—Animal models for infectious diseases
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Public Health (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Oncology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
Abstract
(57)【要約】
【課題】 Ｃ型肝炎の予防・治療剤のスクリーニングに
有用であるＨＣＶ感染によりＨＣＶを増幅しうるヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物や、ＨＣＶ感染に
よりＨＣＶを増幅しうる非ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ
８１発現細胞を提供すること。 【解決手段】 ヒトＣＤ８１遺伝子を非ヒト動物の受精
卵の雄性前核にマイクロインジェクションし、得られた
卵細胞を培養した後、仮親非ヒト動物の輸卵管に移植
し、その後被移植動物を飼育し、産まれた仔非ヒト動物
から前記ヒトＣＤ８１遺伝子を有する仔非ヒト動物を選
択し、ヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物を得
る。ヒトＣＤ８１をコードするｃＤＮＡ等を含む発現ベ
クターを、マーカー遺伝子といっしょに非ヒト動物肝臓
由来の樹立細胞にトランスフェクションし、ヒトＣＤ８
１を安定発現する樹立細胞を選択し、非ヒト動物肝臓由
来の樹立細胞を得る。
有用であるＨＣＶ感染によりＨＣＶを増幅しうるヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物や、ＨＣＶ感染に
よりＨＣＶを増幅しうる非ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ
８１発現細胞を提供すること。 【解決手段】 ヒトＣＤ８１遺伝子を非ヒト動物の受精
卵の雄性前核にマイクロインジェクションし、得られた
卵細胞を培養した後、仮親非ヒト動物の輸卵管に移植
し、その後被移植動物を飼育し、産まれた仔非ヒト動物
から前記ヒトＣＤ８１遺伝子を有する仔非ヒト動物を選
択し、ヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物を得
る。ヒトＣＤ８１をコードするｃＤＮＡ等を含む発現ベ
クターを、マーカー遺伝子といっしょに非ヒト動物肝臓
由来の樹立細胞にトランスフェクションし、ヒトＣＤ８
１を安定発現する樹立細胞を選択し、非ヒト動物肝臓由
来の樹立細胞を得る。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は、ＨＣＶ（Ｃ型肝炎
ウイルス）感染によりＨＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１
トランスジェニック非ヒト動物や、ＨＣＶ感染によりＨ
ＣＶを増幅しうる非ヒト動物肝臓由来の細胞や、これら
ＨＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非
ヒト動物やＨＣＶ感染によりＨＣＶを増幅しうる非ヒト
動物肝臓由来の細胞を用いたＨＣＶの発現及び／又は増
幅・複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法
や、かかるスクリーニング方法により得られるＨＣＶの
発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は抑制物質や、
これらを有効成分とする医薬組成物に関する。
ウイルス）感染によりＨＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１
トランスジェニック非ヒト動物や、ＨＣＶ感染によりＨ
ＣＶを増幅しうる非ヒト動物肝臓由来の細胞や、これら
ＨＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非
ヒト動物やＨＣＶ感染によりＨＣＶを増幅しうる非ヒト
動物肝臓由来の細胞を用いたＨＣＶの発現及び／又は増
幅・複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法
や、かかるスクリーニング方法により得られるＨＣＶの
発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は抑制物質や、
これらを有効成分とする医薬組成物に関する。
【０００２】
【従来の技術】非Ａ非Ｂ型肝炎の主要な原因ウイルスで
あるＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）の遺伝子は、１９８８
年にアメリカのカイロン社の研究陣により全長約９５０
０塩基をもつＲＮＡ遺伝子としてクローニングがなさ
れ、この一本鎖ＲＮＡ遺伝子に基づいて作製された組換
え蛋白（Ｃ１００−３抗原）を用いたヒト血清中の抗体
測定系が開発され、ＨＣＶ肝炎の血清学的診断方法が既
に確立されている。このＨＣＶはフラビウイルス科に属
し、そのゲノム全体の９０％を占める１つのＯＲＦ（op
en reading frame；蛋白質読み枠）は、構造蛋白領域
（５′側からＣ領域、Ｅ１領域、Ｅ２領域、ｐ７領域）
とその下流に位置する非構造蛋白領域（５′側からＮＳ
２領域、ＮＳ３領域、ＮＳ４領域、ＮＳ５領域）とから
構成され、Ｃ領域はウイルス粒子の内核の糖鎖のないコ
ア蛋白を、Ｅ１及びＥ２領域は外被糖蛋白（エンベロー
プ蛋白）を、ＮＳ３領域はウイルス複製に必要なプロテ
アーゼ活性を、ＮＳ５領域はＲＮＡポリメラーゼ活性を
コードしていることが知られている。
あるＨＣＶ（Ｃ型肝炎ウイルス）の遺伝子は、１９８８
年にアメリカのカイロン社の研究陣により全長約９５０
０塩基をもつＲＮＡ遺伝子としてクローニングがなさ
れ、この一本鎖ＲＮＡ遺伝子に基づいて作製された組換
え蛋白（Ｃ１００−３抗原）を用いたヒト血清中の抗体
測定系が開発され、ＨＣＶ肝炎の血清学的診断方法が既
に確立されている。このＨＣＶはフラビウイルス科に属
し、そのゲノム全体の９０％を占める１つのＯＲＦ（op
en reading frame；蛋白質読み枠）は、構造蛋白領域
（５′側からＣ領域、Ｅ１領域、Ｅ２領域、ｐ７領域）
とその下流に位置する非構造蛋白領域（５′側からＮＳ
２領域、ＮＳ３領域、ＮＳ４領域、ＮＳ５領域）とから
構成され、Ｃ領域はウイルス粒子の内核の糖鎖のないコ
ア蛋白を、Ｅ１及びＥ２領域は外被糖蛋白（エンベロー
プ蛋白）を、ＮＳ３領域はウイルス複製に必要なプロテ
アーゼ活性を、ＮＳ５領域はＲＮＡポリメラーゼ活性を
コードしていることが知られている。
【０００３】ＨＣＶ感染は長期慢性化する特徴があり、
これに伴って慢性肝炎を引き起こし、その後肝硬変、そ
して肝臓癌へと進行する割合が非常に高いことが大きな
問題となっている。したがって、現在はいかに感染して
いるＨＣＶを排除するか、そしてＨＣＶ感染による疾病
を防ぐかといった点が課題となっている。これらの問題
を解決するには、まずＨＣＶの生活環を解明することが
重要であることは明らかであるが、ＨＣＶのウイルス学
的研究には依然として大きな壁が存在している。それは
ＨＣＶが感染可能な実験動物は、使用に大きな制限、す
なわち、実験に要する費用や実験に利用できる頭数に限
りがあるチンパンジーだけであり、また培養細胞を用い
た効率の高いＨＣＶ感染増幅系がないことであった。こ
の問題を解決するために、近年、Ｃ型肝炎治療剤の開発
のためのＣ型肝炎モデル動物、すなわち、ＨＣＶの全ｃ
ＤＮＡが血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）プロモーター
遺伝子の下流側に挿入されているＤＮＡ配列を含むＤＮ
Ａを導入したトランスジェニック動物（特開平９−９９
６５号公報）や、ＨＣＶ由来のｃＤＮＡが導入されてい
るＣ型肝炎モデル動物（特開平１０−８４８１３号公
報）や、ＨＣＶコア蛋白をコードする遺伝子が導入され
たマウス又はその子孫（特開平１１−１２３０３５号公
報）や、ヒトＨＣＶ遺伝子を動物の分化前能性を有する
細胞に導入してその遺伝子を発現する形質転換マウス
（特開平１１−２６６７３９号公報）等のＣ型肝炎モデ
ル動物が報告されている。しかし、これらのモデル動物
において実際に肝炎が発症したという報告はなされてい
ない。
これに伴って慢性肝炎を引き起こし、その後肝硬変、そ
して肝臓癌へと進行する割合が非常に高いことが大きな
問題となっている。したがって、現在はいかに感染して
いるＨＣＶを排除するか、そしてＨＣＶ感染による疾病
を防ぐかといった点が課題となっている。これらの問題
を解決するには、まずＨＣＶの生活環を解明することが
重要であることは明らかであるが、ＨＣＶのウイルス学
的研究には依然として大きな壁が存在している。それは
ＨＣＶが感染可能な実験動物は、使用に大きな制限、す
なわち、実験に要する費用や実験に利用できる頭数に限
りがあるチンパンジーだけであり、また培養細胞を用い
た効率の高いＨＣＶ感染増幅系がないことであった。こ
の問題を解決するために、近年、Ｃ型肝炎治療剤の開発
のためのＣ型肝炎モデル動物、すなわち、ＨＣＶの全ｃ
ＤＮＡが血清アミロイドＰ成分（ＳＡＰ）プロモーター
遺伝子の下流側に挿入されているＤＮＡ配列を含むＤＮ
Ａを導入したトランスジェニック動物（特開平９−９９
６５号公報）や、ＨＣＶ由来のｃＤＮＡが導入されてい
るＣ型肝炎モデル動物（特開平１０−８４８１３号公
報）や、ＨＣＶコア蛋白をコードする遺伝子が導入され
たマウス又はその子孫（特開平１１−１２３０３５号公
報）や、ヒトＨＣＶ遺伝子を動物の分化前能性を有する
細胞に導入してその遺伝子を発現する形質転換マウス
（特開平１１−２６６７３９号公報）等のＣ型肝炎モデ
ル動物が報告されている。しかし、これらのモデル動物
において実際に肝炎が発症したという報告はなされてい
ない。
【０００４】また、ＨＣＶ感染治療法としては、現在で
はインターフェロン（ＩＦＮ）療法が有効とされてい
る。このＩＦＮは、細胞表面に存在するＩＦＮレセプタ
ーを介して肝細胞内でウイルスの増幅・複製を阻止する
抗ウイルス性蛋白の合成を促進したり、あるいは免疫エ
フェクター細胞を活性化してＨＣＶ感染細胞の排除に働
くと考えられているが、Ｃ型慢性肝炎の完全著効率は約
３０％に留まっている。例えば、ＨＣＶ遺伝子型が１ｂ
以外の患者、ＨＣＶ感染からの期間が短い患者、血中の
ＨＣＶ−ＲＮＡ量が少ない患者、慢性肝炎の肝病理組織
像が軽度である患者などは、ＩＦＮ治療効果が期待でき
るとされている。しかし、組換えＩＦＮに対する抗体の
出現は２５％程度であり、治療の阻害原因にもなってい
る。また、ＩＦＮにはインフルエンザ様症状、うつ状態
誘導、甲状腺機能異常、血小板減少症、発疹、脱毛など
の副作用が認められているなどの問題があった。
はインターフェロン（ＩＦＮ）療法が有効とされてい
る。このＩＦＮは、細胞表面に存在するＩＦＮレセプタ
ーを介して肝細胞内でウイルスの増幅・複製を阻止する
抗ウイルス性蛋白の合成を促進したり、あるいは免疫エ
フェクター細胞を活性化してＨＣＶ感染細胞の排除に働
くと考えられているが、Ｃ型慢性肝炎の完全著効率は約
３０％に留まっている。例えば、ＨＣＶ遺伝子型が１ｂ
以外の患者、ＨＣＶ感染からの期間が短い患者、血中の
ＨＣＶ−ＲＮＡ量が少ない患者、慢性肝炎の肝病理組織
像が軽度である患者などは、ＩＦＮ治療効果が期待でき
るとされている。しかし、組換えＩＦＮに対する抗体の
出現は２５％程度であり、治療の阻害原因にもなってい
る。また、ＩＦＮにはインフルエンザ様症状、うつ状態
誘導、甲状腺機能異常、血小板減少症、発疹、脱毛など
の副作用が認められているなどの問題があった。
【０００５】最近、アメリカのカイロン社の研究陣によ
り、ＨＣＶのエンベロープ蛋白Ｅ２領域をプローブとし
てヒトＴリンパ種（Ｅ２との結合性が高い細胞クロー
ン）由来ｃＤＮＡ発現ライブラリーからＥ２結合分子の
スクリーニングが行われ、ヒトＣＤ８１分子がＥ２と結
合することや、かかるＣＤ８１分子上のＥ２結合領域が
ＨＣＶのＲＮＡと結合し、この結合がＨＣＶ感染を中和
する抗体により阻害されることが報告されている（Scie
nce 282, 938-941, 1998）。また、ＨＣＶのＥ２はヒト
ＣＤ８１を発現する細胞と特異的に結合するが、他のテ
トラスパニン（tetraspanin）ファミリー（ＣＤ９、Ｃ
Ｄ６３及びＣＤ１５１）を発現する細胞とは結合せず、
Ｅ２の結合量がヒトＣＤ８１を発現させたラットＲＢＬ
（白血病細胞）やＫＭ３（黒色腫細胞）とヒト細胞とで
違いがなかったことから、Ｅ２の細胞表面との初期反応
（結合）にはＣＤ８１以外のヒト細胞特異的な因子は必
要とされないことや、このＣＤ８１の細胞外領域（ＥＣ
２）中にＥ２との反応（結合）を決定づけている特定の
４つのアミノ酸が存在することや、ＣＤ８１の構造はＥ
２の認識に重要であることや、Ｅ２内のＣＤ８１との反
応（結合）領域に４８０、４９３、５４４、５５１のア
ミノ酸が含まれることや、Ｅ２とＣＤ８１の反応（結
合）は細胞機能を改変することが報告されている（J. V
irol. 73, 6235-6244, 1999）。
り、ＨＣＶのエンベロープ蛋白Ｅ２領域をプローブとし
てヒトＴリンパ種（Ｅ２との結合性が高い細胞クロー
ン）由来ｃＤＮＡ発現ライブラリーからＥ２結合分子の
スクリーニングが行われ、ヒトＣＤ８１分子がＥ２と結
合することや、かかるＣＤ８１分子上のＥ２結合領域が
ＨＣＶのＲＮＡと結合し、この結合がＨＣＶ感染を中和
する抗体により阻害されることが報告されている（Scie
nce 282, 938-941, 1998）。また、ＨＣＶのＥ２はヒト
ＣＤ８１を発現する細胞と特異的に結合するが、他のテ
トラスパニン（tetraspanin）ファミリー（ＣＤ９、Ｃ
Ｄ６３及びＣＤ１５１）を発現する細胞とは結合せず、
Ｅ２の結合量がヒトＣＤ８１を発現させたラットＲＢＬ
（白血病細胞）やＫＭ３（黒色腫細胞）とヒト細胞とで
違いがなかったことから、Ｅ２の細胞表面との初期反応
（結合）にはＣＤ８１以外のヒト細胞特異的な因子は必
要とされないことや、このＣＤ８１の細胞外領域（ＥＣ
２）中にＥ２との反応（結合）を決定づけている特定の
４つのアミノ酸が存在することや、ＣＤ８１の構造はＥ
２の認識に重要であることや、Ｅ２内のＣＤ８１との反
応（結合）領域に４８０、４９３、５４４、５５１のア
ミノ酸が含まれることや、Ｅ２とＣＤ８１の反応（結
合）は細胞機能を改変することが報告されている（J. V
irol. 73, 6235-6244, 1999）。
【０００６】他方、各種ウイルスレセプターのトランス
ジェニック動物が作製されてきたが、ウイルス感染が成
立して有用なモデルになったものもあれば、感染が成立
しなかったものもある。例えば、ヒトＣＤ４とヒトＣＣ
Ｒ５を同時に発現させた動物細胞の場合、ＨＩＶ−１は
細胞内に浸入するが、細胞内で複製するか否かは動物種
によって異なる可能性が示唆されており、ヒトＣＤ８１
を発現させたトランスジェニック動物を作製できたとし
てもＨＣＶに感染するか否かはやってみないとわからな
いとの報告もなされている（Hepatology 29, 990-992,
1999）。
ジェニック動物が作製されてきたが、ウイルス感染が成
立して有用なモデルになったものもあれば、感染が成立
しなかったものもある。例えば、ヒトＣＤ４とヒトＣＣ
Ｒ５を同時に発現させた動物細胞の場合、ＨＩＶ−１は
細胞内に浸入するが、細胞内で複製するか否かは動物種
によって異なる可能性が示唆されており、ヒトＣＤ８１
を発現させたトランスジェニック動物を作製できたとし
てもＨＣＶに感染するか否かはやってみないとわからな
いとの報告もなされている（Hepatology 29, 990-992,
1999）。
【０００７】
【発明が解決しようとする課題】Ｃ型肝炎の予防・治療
剤の開発は、ＨＣＶ感染の防止、ＨＣＶ感染による肝硬
変及び肝臓癌の治療などＨＣＶに起因する疾病の治療に
不可欠であるが、ＨＣＶはヒトとチンパンジーにしか感
染しないことから、Ｃ型肝炎の予防・治療剤の研究開発
のための動物実験としては、現在のところ、Ｃ型肝炎患
者の血清をチンパンジーに注入して発症させる系しかな
く、Ｃ型肝炎の予防・治療剤の開発のみならず、動物愛
護の点からも問題があった。また従来、ＨＣＶを増幅し
うるヒト及びチンパンジー以外の動物や、ＨＣＶ感染に
よりＨＣＶを持続して増幅しうるヒト及びチンパンジー
以外の細胞は知られていなかった。
剤の開発は、ＨＣＶ感染の防止、ＨＣＶ感染による肝硬
変及び肝臓癌の治療などＨＣＶに起因する疾病の治療に
不可欠であるが、ＨＣＶはヒトとチンパンジーにしか感
染しないことから、Ｃ型肝炎の予防・治療剤の研究開発
のための動物実験としては、現在のところ、Ｃ型肝炎患
者の血清をチンパンジーに注入して発症させる系しかな
く、Ｃ型肝炎の予防・治療剤の開発のみならず、動物愛
護の点からも問題があった。また従来、ＨＣＶを増幅し
うるヒト及びチンパンジー以外の動物や、ＨＣＶ感染に
よりＨＣＶを持続して増幅しうるヒト及びチンパンジー
以外の細胞は知られていなかった。
【０００８】本発明の課題は、かかるＣ型肝炎の予防・
治療剤のスクリーニングに有用であるＨＣＶ感染により
ＨＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非
ヒト動物や、ＨＣＶ感染によりＨＣＶを増幅しうる非ヒ
ト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細胞を提供すること
にある。また、本発明の課題は、上記ＨＣＶを増幅しう
るヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物や、ＨＣ
Ｖを増幅しうる非ヒト動物肝臓由来の細胞を用いたＨＣ
Ｖの発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は抑制物質
のスクリーニング方法や、かかるスクリーニング方法に
より得られるＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進
物質又は抑制物質や、これらを有効成分とする医薬組成
物などを提供することにある。
治療剤のスクリーニングに有用であるＨＣＶ感染により
ＨＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非
ヒト動物や、ＨＣＶ感染によりＨＣＶを増幅しうる非ヒ
ト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細胞を提供すること
にある。また、本発明の課題は、上記ＨＣＶを増幅しう
るヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物や、ＨＣ
Ｖを増幅しうる非ヒト動物肝臓由来の細胞を用いたＨＣ
Ｖの発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は抑制物質
のスクリーニング方法や、かかるスクリーニング方法に
より得られるＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進
物質又は抑制物質や、これらを有効成分とする医薬組成
物などを提供することにある。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、マウス肝
癌細胞又はマウス由来の受精卵にヒトＣＤ８１遺伝子を
導入することにより、ヒトＣＤ８１導入遺伝子発現細胞
又はヒトＣＤ８１トランスジェニックマウスを作製し、
これらヒトＣＤ８１導入遺伝子発現細胞又はヒトＣＤ８
１トランスジェニックマウスをＨＣＶに感染させると、
これらの肝細胞においてＨＣＶが増幅しうることを見い
出し、本発明を完成するに至った。
癌細胞又はマウス由来の受精卵にヒトＣＤ８１遺伝子を
導入することにより、ヒトＣＤ８１導入遺伝子発現細胞
又はヒトＣＤ８１トランスジェニックマウスを作製し、
これらヒトＣＤ８１導入遺伝子発現細胞又はヒトＣＤ８
１トランスジェニックマウスをＨＣＶに感染させると、
これらの肝細胞においてＨＣＶが増幅しうることを見い
出し、本発明を完成するに至った。
【００１０】すなわち本発明は、ＨＣＶ感染によりＨＣ
Ｖを増幅しうることを特徴とするヒトＣＤ８１トランス
ジェニック非ヒト動物（請求項１）や、ヒトＣＤ８１遺
伝子が導入されていることを特徴とする請求項１記載の
ヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物（請求項
２）や、本来備えているＣＤ８１遺伝子機能が染色体上
で欠損し、かつヒトＣＤ８１遺伝子が導入されているこ
とを特徴とする請求項１又は２記載のヒトＣＤ８１トラ
ンスジェニック非ヒト動物（請求項３）や、非ヒト動物
が、齧歯目動物であることを特徴とする請求項１〜３の
いずれか記載のヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト
動物（請求項４）や、齧歯目動物が、マウスであること
を特徴とする請求項４記載のヒトＣＤ８１トランスジェ
ニック非ヒト動物（請求項５）や、マウスが、Ｃ３Ｈ系
統マウスであることを特徴とする請求項５記載のヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物（請求項６）に関
する。
Ｖを増幅しうることを特徴とするヒトＣＤ８１トランス
ジェニック非ヒト動物（請求項１）や、ヒトＣＤ８１遺
伝子が導入されていることを特徴とする請求項１記載の
ヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物（請求項
２）や、本来備えているＣＤ８１遺伝子機能が染色体上
で欠損し、かつヒトＣＤ８１遺伝子が導入されているこ
とを特徴とする請求項１又は２記載のヒトＣＤ８１トラ
ンスジェニック非ヒト動物（請求項３）や、非ヒト動物
が、齧歯目動物であることを特徴とする請求項１〜３の
いずれか記載のヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト
動物（請求項４）や、齧歯目動物が、マウスであること
を特徴とする請求項４記載のヒトＣＤ８１トランスジェ
ニック非ヒト動物（請求項５）や、マウスが、Ｃ３Ｈ系
統マウスであることを特徴とする請求項５記載のヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物（請求項６）に関
する。
【００１１】また本発明は、ヒトＣＤ８１遺伝子を非ヒ
ト動物の受精卵の雄性前核にマイクロインジェクション
し、得られた卵細胞を培養した後、仮親非ヒト動物の輸
卵管に移植し、その後被移植動物を飼育し、産まれた仔
非ヒト動物から前記ヒトＣＤ８１遺伝子を有する仔非ヒ
ト動物を選択することを特徴とするＨＣＶ感染によりＨ
ＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒ
ト動物の製造方法（請求項７）や、ヒトＣＤ８１遺伝子
を非ヒト動物の受精卵の雄性前核にマイクロインジェク
ションし、得られた卵細胞を培養した後、仮親非ヒト動
物の輸卵管に移植し、その後被移植動物を飼育し、産ま
れた仔非ヒト動物から前記ヒトＣＤ８１遺伝子を有する
仔非ヒト動物を選択することにより得られるヒトＣＤ８
１トランスジェニック非ヒト動物と、非ヒト動物に備わ
ったＣＤ８１遺伝子が染色体上で欠損した非ヒト動物と
を戻し交配し、非ヒト動物ＣＤ８１遺伝子機能が染色体
上で欠損し、かつヒトＣＤ８１遺伝子が導入されている
産仔を得ることを特徴とするＨＣＶ感染によりＨＣＶを
増幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物
の製造方法（請求項８）や、請求項７又は８記載のＨＣ
Ｖ感染によりＨＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トランス
ジェニック非ヒト動物の製造方法により得られることを
特徴とするヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物
（請求項９）に関する。
ト動物の受精卵の雄性前核にマイクロインジェクション
し、得られた卵細胞を培養した後、仮親非ヒト動物の輸
卵管に移植し、その後被移植動物を飼育し、産まれた仔
非ヒト動物から前記ヒトＣＤ８１遺伝子を有する仔非ヒ
ト動物を選択することを特徴とするＨＣＶ感染によりＨ
ＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒ
ト動物の製造方法（請求項７）や、ヒトＣＤ８１遺伝子
を非ヒト動物の受精卵の雄性前核にマイクロインジェク
ションし、得られた卵細胞を培養した後、仮親非ヒト動
物の輸卵管に移植し、その後被移植動物を飼育し、産ま
れた仔非ヒト動物から前記ヒトＣＤ８１遺伝子を有する
仔非ヒト動物を選択することにより得られるヒトＣＤ８
１トランスジェニック非ヒト動物と、非ヒト動物に備わ
ったＣＤ８１遺伝子が染色体上で欠損した非ヒト動物と
を戻し交配し、非ヒト動物ＣＤ８１遺伝子機能が染色体
上で欠損し、かつヒトＣＤ８１遺伝子が導入されている
産仔を得ることを特徴とするＨＣＶ感染によりＨＣＶを
増幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物
の製造方法（請求項８）や、請求項７又は８記載のＨＣ
Ｖ感染によりＨＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トランス
ジェニック非ヒト動物の製造方法により得られることを
特徴とするヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物
（請求項９）に関する。
【００１２】また本発明は、ＨＣＶ感染によりＨＣＶを
増幅しうることを特徴とする非ヒト動物肝臓由来のヒト
ＣＤ８１発現細胞（請求項１０）や、非ヒト動物が、Ｈ
ＣＶ感染によりＨＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トラン
スジェニック非ヒト動物であることを特徴とする請求項
１０記載の非ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細胞
（請求項１１）や、ヒトＣＤ８１トランスジェニック非
ヒト動物が、本来備えているＣＤ８１遺伝子機能が染色
体上で欠損し、かつヒトＣＤ８１遺伝子が導入されてい
るヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物であるこ
とを特徴とする請求項１１記載の非ヒト動物肝臓由来の
ヒトＣＤ８１発現細胞（請求項１２）や、ヒトＣＤ８１
遺伝子を導入した樹立細胞であることを特徴とする請求
項１０記載の非ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細
胞（請求項１３）や、非ヒト動物が、齧歯目動物である
ことを特徴とする請求項１０〜１３のいずれか記載の非
ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細胞（請求項１
４）や、齧歯目動物が、マウスであることを特徴とする
請求項１４記載の非ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発
現細胞（請求項１５）や、マウスが、Ｃ３Ｈ系統マウス
であることを特徴とする請求項１５記載の非ヒト動物肝
臓由来のヒトＣＤ８１発現細胞（請求項１６）に関す
る。
増幅しうることを特徴とする非ヒト動物肝臓由来のヒト
ＣＤ８１発現細胞（請求項１０）や、非ヒト動物が、Ｈ
ＣＶ感染によりＨＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トラン
スジェニック非ヒト動物であることを特徴とする請求項
１０記載の非ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細胞
（請求項１１）や、ヒトＣＤ８１トランスジェニック非
ヒト動物が、本来備えているＣＤ８１遺伝子機能が染色
体上で欠損し、かつヒトＣＤ８１遺伝子が導入されてい
るヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物であるこ
とを特徴とする請求項１１記載の非ヒト動物肝臓由来の
ヒトＣＤ８１発現細胞（請求項１２）や、ヒトＣＤ８１
遺伝子を導入した樹立細胞であることを特徴とする請求
項１０記載の非ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細
胞（請求項１３）や、非ヒト動物が、齧歯目動物である
ことを特徴とする請求項１０〜１３のいずれか記載の非
ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細胞（請求項１
４）や、齧歯目動物が、マウスであることを特徴とする
請求項１４記載の非ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発
現細胞（請求項１５）や、マウスが、Ｃ３Ｈ系統マウス
であることを特徴とする請求項１５記載の非ヒト動物肝
臓由来のヒトＣＤ８１発現細胞（請求項１６）に関す
る。
【００１３】また本発明は、ヒトＣＤ８１をコードする
ｃＤＮＡと、プロモーターと、エンハンサーとを含む発
現ベクターを、マーカー遺伝子といっしょに非ヒト動物
肝臓由来の樹立細胞にトランスフェクションし、該トラ
ンスフェクションされた細胞を培養し、ヒトＣＤ８１を
安定発現する樹立細胞を選択することを特徴とするＨＣ
Ｖを増幅しうる非ヒト動物肝臓由来の樹立細胞の製造方
法（請求項１７）や、ヒトＣＤ８１遺伝子を発現するこ
とができる非ヒト動物肝臓由来の樹立細胞とＨＣＶとを
インビトロで接触せしめることを特徴とするＨＣＶの増
幅方法（請求項１８）に関する。
ｃＤＮＡと、プロモーターと、エンハンサーとを含む発
現ベクターを、マーカー遺伝子といっしょに非ヒト動物
肝臓由来の樹立細胞にトランスフェクションし、該トラ
ンスフェクションされた細胞を培養し、ヒトＣＤ８１を
安定発現する樹立細胞を選択することを特徴とするＨＣ
Ｖを増幅しうる非ヒト動物肝臓由来の樹立細胞の製造方
法（請求項１７）や、ヒトＣＤ８１遺伝子を発現するこ
とができる非ヒト動物肝臓由来の樹立細胞とＨＣＶとを
インビトロで接触せしめることを特徴とするＨＣＶの増
幅方法（請求項１８）に関する。
【００１４】また本発明は、請求項１０〜１６のいずれ
か記載の非ヒト肝臓由来の細胞と被検物質とをインビト
ロで接触させる前後に、ＨＣＶを感染させ、次いで該細
胞株におけるＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度
を測定・評価することを特徴とするＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニン
グ方法（請求項１９）や、請求項１〜６のいずれか記載
のヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物にあらか
じめ被検物質を投与した後、該非ヒト動物から得られる
肝細胞又は肝組織をＨＣＶの存在下で培養し、肝細胞に
おけるＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定
・評価することを特徴とするＨＣＶの発現及び／又は増
幅・複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法
（請求項２０）や、請求項１〜６のいずれか記載のヒト
ＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物にあらかじめ被
検物質を投与した後、ＨＣＶを感染させ、該感染後の非
ヒト動物から得られる肝細胞におけるＨＣＶの発現及び
／又は増幅・複製の程度を測定・評価することを特徴と
するＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は
抑制物質のスクリーニング方法（請求項２１）や、請求
項１〜６のいずれか記載のヒトＣＤ８１トランスジェニ
ック非ヒト動物をあらかじめＨＣＶに感染させた後、該
非ヒト動物から得られる肝細胞又は肝組織を被検物質の
存在下で培養し、該肝細胞におけるＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の程度を測定・評価することを特徴とす
るＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は抑
制物質のスクリーニング方法（請求項２２）や、請求項
１〜６のいずれか記載のヒトＣＤ８１トランスジェニッ
ク非ヒト動物をあらかじめＨＣＶに感染させた後、被検
物質を投与し、該非ヒト動物から得られる肝細胞におけ
るＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定・評
価することを特徴とするＨＣＶの発現及び／又は増幅・
複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法（請
求項２３）や、ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程
度の測定・評価が、肝細胞におけるＨＣＶ遺伝子の測定
・評価であることを特徴とする請求項１９〜２３のいず
れか記載のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物
質又は抑制物質のスクリーニング方法（請求項２４）
や、請求項１〜６のいずれか記載のヒトＣＤ８１トラン
スジェニック非ヒト動物に被検物質を投与する前後に、
ＨＣＶを感染させ、該非ヒト動物におけるＨＣＶの発現
及び／又は増幅・複製の程度を測定・評価することを特
徴とするＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質
又は抑制物質のスクリーニング方法（請求項２５）や、
ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度の測定・評価
が、非ヒト動物から得られる肝臓における肝炎の病理組
織像の解析・評価であることを特徴とする請求項２５記
載のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は
抑制物質のスクリーニング方法（請求項２６）や、ＨＣ
Ｖの発現及び／又は増幅・複製の程度の測定・評価が、
非ヒト動物から得られる血清中のＨＣＶ遺伝子、酵素活
性又は抗体価の測定・評価であることを特徴とする請求
項２５記載のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進
物質又は抑制物質のスクリーニング方法（請求項２７）
や、血清中の酵素が、アラニンアミノトランスフェラー
ゼ又はアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである
ことを特徴とする請求項２７記載のＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニン
グ方法（請求項２８）や、ＨＣＶの発現及び／又は増幅
・複製の程度を測定・評価するに際し、ヒトＣＤ８１ト
ランスジェニック非ヒト動物と同種の野生型非ヒト動物
の測定値と比較・評価することを特徴とする請求項１９
〜２８のいずれか記載のＨＣＶの発現及び／又は増幅・
複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法（請
求項２９）に関する。
か記載の非ヒト肝臓由来の細胞と被検物質とをインビト
ロで接触させる前後に、ＨＣＶを感染させ、次いで該細
胞株におけるＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度
を測定・評価することを特徴とするＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニン
グ方法（請求項１９）や、請求項１〜６のいずれか記載
のヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物にあらか
じめ被検物質を投与した後、該非ヒト動物から得られる
肝細胞又は肝組織をＨＣＶの存在下で培養し、肝細胞に
おけるＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定
・評価することを特徴とするＨＣＶの発現及び／又は増
幅・複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法
（請求項２０）や、請求項１〜６のいずれか記載のヒト
ＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物にあらかじめ被
検物質を投与した後、ＨＣＶを感染させ、該感染後の非
ヒト動物から得られる肝細胞におけるＨＣＶの発現及び
／又は増幅・複製の程度を測定・評価することを特徴と
するＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は
抑制物質のスクリーニング方法（請求項２１）や、請求
項１〜６のいずれか記載のヒトＣＤ８１トランスジェニ
ック非ヒト動物をあらかじめＨＣＶに感染させた後、該
非ヒト動物から得られる肝細胞又は肝組織を被検物質の
存在下で培養し、該肝細胞におけるＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の程度を測定・評価することを特徴とす
るＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は抑
制物質のスクリーニング方法（請求項２２）や、請求項
１〜６のいずれか記載のヒトＣＤ８１トランスジェニッ
ク非ヒト動物をあらかじめＨＣＶに感染させた後、被検
物質を投与し、該非ヒト動物から得られる肝細胞におけ
るＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定・評
価することを特徴とするＨＣＶの発現及び／又は増幅・
複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法（請
求項２３）や、ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程
度の測定・評価が、肝細胞におけるＨＣＶ遺伝子の測定
・評価であることを特徴とする請求項１９〜２３のいず
れか記載のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物
質又は抑制物質のスクリーニング方法（請求項２４）
や、請求項１〜６のいずれか記載のヒトＣＤ８１トラン
スジェニック非ヒト動物に被検物質を投与する前後に、
ＨＣＶを感染させ、該非ヒト動物におけるＨＣＶの発現
及び／又は増幅・複製の程度を測定・評価することを特
徴とするＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質
又は抑制物質のスクリーニング方法（請求項２５）や、
ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度の測定・評価
が、非ヒト動物から得られる肝臓における肝炎の病理組
織像の解析・評価であることを特徴とする請求項２５記
載のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は
抑制物質のスクリーニング方法（請求項２６）や、ＨＣ
Ｖの発現及び／又は増幅・複製の程度の測定・評価が、
非ヒト動物から得られる血清中のＨＣＶ遺伝子、酵素活
性又は抗体価の測定・評価であることを特徴とする請求
項２５記載のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進
物質又は抑制物質のスクリーニング方法（請求項２７）
や、血清中の酵素が、アラニンアミノトランスフェラー
ゼ又はアスパラギン酸アミノトランスフェラーゼである
ことを特徴とする請求項２７記載のＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニン
グ方法（請求項２８）や、ＨＣＶの発現及び／又は増幅
・複製の程度を測定・評価するに際し、ヒトＣＤ８１ト
ランスジェニック非ヒト動物と同種の野生型非ヒト動物
の測定値と比較・評価することを特徴とする請求項１９
〜２８のいずれか記載のＨＣＶの発現及び／又は増幅・
複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法（請
求項２９）に関する。
【００１５】また本発明は、請求項１９〜２９のいずれ
か記載のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質
又は抑制物質のスクリーニング方法により得られること
を特徴とするＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進
物質（請求項３０）や、ＨＣＶの発現及び／又は増幅・
複製の促進物質が、ＣＤ８１に対するアゴニストである
ことを特徴とする請求項３０記載のＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の促進物質（請求項３１）や、請求項１
９〜２９のいずれか記載のＨＣＶの発現及び／又は増幅
・複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法に
より得られることを特徴とするＨＣＶの発現及び／又は
増幅・複製の抑制物質（請求項３２）や、ＨＣＶの発現
及び／又は増幅・複製の抑制物質が、ＣＤ８１に対する
アンタゴニストであることを特徴とする請求項３２記載
のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の抑制物質（請求
項３３）や、ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の抑制
物質が、Ｃ型肝炎に対する予防剤、抑制剤若しくは治療
剤、又は肝臓癌に対する予防剤、抑制剤若しくは治療剤
であることを特徴とする請求項３２記載のＨＣＶの発現
及び／又は増幅・複製の抑制物質（請求項３４）や、Ｈ
ＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進を必要としてい
る患者を治療するのに用いられる医薬組成物であって、
有効成分として請求項３０又は３１記載のＨＣＶの発現
及び／又は増幅・複製の促進物質を含有することを特徴
とする医薬組成物（請求項３５）や、ＨＣＶの発現及び
／又は増幅・複製の抑制を必要としている患者を治療す
るのに用いられる医薬組成物であって、有効成分として
請求項３２〜３４のいずれか記載のＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の抑制物質を含有することを特徴とする
医薬組成物（請求項３６）に関する。
か記載のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質
又は抑制物質のスクリーニング方法により得られること
を特徴とするＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進
物質（請求項３０）や、ＨＣＶの発現及び／又は増幅・
複製の促進物質が、ＣＤ８１に対するアゴニストである
ことを特徴とする請求項３０記載のＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の促進物質（請求項３１）や、請求項１
９〜２９のいずれか記載のＨＣＶの発現及び／又は増幅
・複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法に
より得られることを特徴とするＨＣＶの発現及び／又は
増幅・複製の抑制物質（請求項３２）や、ＨＣＶの発現
及び／又は増幅・複製の抑制物質が、ＣＤ８１に対する
アンタゴニストであることを特徴とする請求項３２記載
のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の抑制物質（請求
項３３）や、ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の抑制
物質が、Ｃ型肝炎に対する予防剤、抑制剤若しくは治療
剤、又は肝臓癌に対する予防剤、抑制剤若しくは治療剤
であることを特徴とする請求項３２記載のＨＣＶの発現
及び／又は増幅・複製の抑制物質（請求項３４）や、Ｈ
ＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進を必要としてい
る患者を治療するのに用いられる医薬組成物であって、
有効成分として請求項３０又は３１記載のＨＣＶの発現
及び／又は増幅・複製の促進物質を含有することを特徴
とする医薬組成物（請求項３５）や、ＨＣＶの発現及び
／又は増幅・複製の抑制を必要としている患者を治療す
るのに用いられる医薬組成物であって、有効成分として
請求項３２〜３４のいずれか記載のＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の抑制物質を含有することを特徴とする
医薬組成物（請求項３６）に関する。
【００１６】
【発明の実施の形態】本発明においてＨＣＶ感染により
ＨＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非
ヒト動物とは、ヒトＣＤ８１を発現することができるよ
うに、ヒトＣＤ８１遺伝子の導入など非ヒト動物におけ
るゲノムが改変されており、ＨＣＶ含有血清の静脈注射
等のＨＣＶ感染により非ヒト動物の肝細胞へ侵入したＨ
ＣＶが、該肝細胞内で増幅することができる非ヒト動物
をいう。肝細胞内で増幅しているかどうかは、増幅・複
製の結果を示す細胞内のＨＣＶ(−)鎖を検出することに
より確認することができる。また、ＨＣＶ感染によりＨ
ＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒ
ト動物が、Ｃ型慢性肝炎を起こしうることは、血中のＨ
ＣＶ由来のＲＮＡやタンパクの検出、肝臓の病理組織像
等により確認することができる。そして、上記非ヒト動
物としては、マウス、ラット、ウサギ等を具体的に例示
することができるが、創製、育成、使用の簡便さなどか
らしてマウス、ラット等の齧歯目動物、特にマウスを用
いることが好ましい。また、マウスとしては、Ｃ３Ｈ系
統のマウスを用いることが好ましい。かかるＨＣＶ感染
によりＨＣＶを増幅することができるヒトＣＤ８１トラ
ンスジェニック非ヒト動物の作製方法について、ヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニックマウスの場合を例に挙げて説
明する。
ＨＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非
ヒト動物とは、ヒトＣＤ８１を発現することができるよ
うに、ヒトＣＤ８１遺伝子の導入など非ヒト動物におけ
るゲノムが改変されており、ＨＣＶ含有血清の静脈注射
等のＨＣＶ感染により非ヒト動物の肝細胞へ侵入したＨ
ＣＶが、該肝細胞内で増幅することができる非ヒト動物
をいう。肝細胞内で増幅しているかどうかは、増幅・複
製の結果を示す細胞内のＨＣＶ(−)鎖を検出することに
より確認することができる。また、ＨＣＶ感染によりＨ
ＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒ
ト動物が、Ｃ型慢性肝炎を起こしうることは、血中のＨ
ＣＶ由来のＲＮＡやタンパクの検出、肝臓の病理組織像
等により確認することができる。そして、上記非ヒト動
物としては、マウス、ラット、ウサギ等を具体的に例示
することができるが、創製、育成、使用の簡便さなどか
らしてマウス、ラット等の齧歯目動物、特にマウスを用
いることが好ましい。また、マウスとしては、Ｃ３Ｈ系
統のマウスを用いることが好ましい。かかるＨＣＶ感染
によりＨＣＶを増幅することができるヒトＣＤ８１トラ
ンスジェニック非ヒト動物の作製方法について、ヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニックマウスの場合を例に挙げて説
明する。
【００１７】ヒトＣＤ８１遺伝子の発現産物をコードす
るｃＤＮＡ（例えば、ＥＭＢＬ／Ｇｅｎｂａｎｋデータ
ベースＡｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｍ３３６９０）を、
エンハンサーとプロモーター、例えばＣＭＶ−エンハン
サーとチキンβ−アクチンプロモーターの下流に、かつ
ポリＡシグナル配列、例えばラビットβ−グロビンポリ
Ａの上流に挿入した導入遺伝子を構築し、該導入遺伝子
をマウス受精卵の雄性前核にマイクロインジェクション
し、得られた卵細胞を培養した後、仮親のマウスの輸卵
管に移植し、その後被移植動物を飼育し、産まれた仔マ
ウスから前記ｃＤＮＡを有する仔マウスを選択すること
によりトランスジェニックマウスを創製することができ
る。受精卵への遺伝子の導入方法は特に限定されるもの
ではなく、マイクロインジェクション法の代わりにエレ
クトロポレーション法等を用いてもよく、また注入する
導入遺伝子の数は受精卵１個当たり、例えば、２００〜
１０００分子が好ましい。そして、ｃＤＮＡを有する仔
マウスの選択は、マウスの尻尾等より粗ＤＮＡを抽出
し、導入したヒトＣＤ８１遺伝子をプローブとするドッ
トハイブリダイゼーション法や、特異的プライマーを用
いたＰＣＲ法等により行うことができる。なお、本発明
においては、ヒトＣＤ８１遺伝子の発現産物をコードす
るｃＤＮＡに代えて、チンパンジーＣＤ８１遺伝子の発
現産物をコードするｃＤＮＡを用いることができる。以
上のようなトランスジェニックマウスは、例えば「新遺
伝子工学ハンドブック」２６９−２７６、羊土社（１９
９６）や、「マウス胚の操作マニュアル」近代出版（１
９８９）などの基本書に従って創製することができる。
るｃＤＮＡ（例えば、ＥＭＢＬ／Ｇｅｎｂａｎｋデータ
ベースＡｃｃｅｓｓｉｏｎ Ｎｏ．Ｍ３３６９０）を、
エンハンサーとプロモーター、例えばＣＭＶ−エンハン
サーとチキンβ−アクチンプロモーターの下流に、かつ
ポリＡシグナル配列、例えばラビットβ−グロビンポリ
Ａの上流に挿入した導入遺伝子を構築し、該導入遺伝子
をマウス受精卵の雄性前核にマイクロインジェクション
し、得られた卵細胞を培養した後、仮親のマウスの輸卵
管に移植し、その後被移植動物を飼育し、産まれた仔マ
ウスから前記ｃＤＮＡを有する仔マウスを選択すること
によりトランスジェニックマウスを創製することができ
る。受精卵への遺伝子の導入方法は特に限定されるもの
ではなく、マイクロインジェクション法の代わりにエレ
クトロポレーション法等を用いてもよく、また注入する
導入遺伝子の数は受精卵１個当たり、例えば、２００〜
１０００分子が好ましい。そして、ｃＤＮＡを有する仔
マウスの選択は、マウスの尻尾等より粗ＤＮＡを抽出
し、導入したヒトＣＤ８１遺伝子をプローブとするドッ
トハイブリダイゼーション法や、特異的プライマーを用
いたＰＣＲ法等により行うことができる。なお、本発明
においては、ヒトＣＤ８１遺伝子の発現産物をコードす
るｃＤＮＡに代えて、チンパンジーＣＤ８１遺伝子の発
現産物をコードするｃＤＮＡを用いることができる。以
上のようなトランスジェニックマウスは、例えば「新遺
伝子工学ハンドブック」２６９−２７６、羊土社（１９
９６）や、「マウス胚の操作マニュアル」近代出版（１
９８９）などの基本書に従って創製することができる。
【００１８】また、免疫寛容の問題を回避するために、
所望の時期にヒトＣＤ８１を発現させることができる発
現システム、例えば、Ｐ１ファージの組換え酵素Ｃｒｅ
と、３４塩基からなる特異的認識配列ｌｏｘＰとを用い
たＣｒｅ／ｌｏｘＰ発現システム（J. Molecular Biolo
gy 150, 467-486, 1981、J. Molecular Biology 150,48
7-507, 1981、「マウスラボマニュアル 遺伝子の導入
と解析を中心に」Ｐ２４５−２５０）により、ヒトＣＤ
８１トランスジェニックマウスを創製することもでき
る。すなわち、プロモーター遺伝子と２つのｌｏｘＰ配
列とそのｌｏｘＰ配列間に挿入されたマーカー遺伝子と
を含むベクター、例えば、ｐＣＡＬＮＬ５、ｐＣＡＬＮ
ＬＷ，ｐＣＡＬＮ／ｐＢＲ等のベクターにおいて、下流
側ｌｏｘＰ配列の下流にヒトＣＤ８１のｃＤＮＡを挿入
し、このヒトＣＤ８１のｃＤＮＡが挿入されたベクター
をマイクロインジェクション法やエレクトロポレーショ
ン法等の方法で受精卵に導入し、導入後の受精卵を仮親
の輸卵管に移植し、その後被移植動物を飼育し、産まれ
た仔マウスから前記ベクターのＤＮＡを有する仔マウス
を選択することにより、所望の時期にヒトＣＤ８１を発
現させることができるトランスジェニックマウスを創製
することができる。このヒトＣＤ８１由来の導入遺伝子
はスイッチング発現機能を有するので、ヒトＣＤ８１ト
ランスジェニックマウスにおいてヒトＣＤ８１を発現さ
せる場合、当該ｃＤＮＡの発現を抑制しているｌｏｘＰ
間の配列を除去すればよく、除去する方法としては、Ｃ
ｒｅ組換え酵素を用いる方法、例えば、Ｃｒｅを発現す
るＣｒｅ遺伝子組換えアデノウイルス（理研ジーンバン
クＲＤＢ−１７４８）を感染させる方法等を挙げること
ができる。
所望の時期にヒトＣＤ８１を発現させることができる発
現システム、例えば、Ｐ１ファージの組換え酵素Ｃｒｅ
と、３４塩基からなる特異的認識配列ｌｏｘＰとを用い
たＣｒｅ／ｌｏｘＰ発現システム（J. Molecular Biolo
gy 150, 467-486, 1981、J. Molecular Biology 150,48
7-507, 1981、「マウスラボマニュアル 遺伝子の導入
と解析を中心に」Ｐ２４５−２５０）により、ヒトＣＤ
８１トランスジェニックマウスを創製することもでき
る。すなわち、プロモーター遺伝子と２つのｌｏｘＰ配
列とそのｌｏｘＰ配列間に挿入されたマーカー遺伝子と
を含むベクター、例えば、ｐＣＡＬＮＬ５、ｐＣＡＬＮ
ＬＷ，ｐＣＡＬＮ／ｐＢＲ等のベクターにおいて、下流
側ｌｏｘＰ配列の下流にヒトＣＤ８１のｃＤＮＡを挿入
し、このヒトＣＤ８１のｃＤＮＡが挿入されたベクター
をマイクロインジェクション法やエレクトロポレーショ
ン法等の方法で受精卵に導入し、導入後の受精卵を仮親
の輸卵管に移植し、その後被移植動物を飼育し、産まれ
た仔マウスから前記ベクターのＤＮＡを有する仔マウス
を選択することにより、所望の時期にヒトＣＤ８１を発
現させることができるトランスジェニックマウスを創製
することができる。このヒトＣＤ８１由来の導入遺伝子
はスイッチング発現機能を有するので、ヒトＣＤ８１ト
ランスジェニックマウスにおいてヒトＣＤ８１を発現さ
せる場合、当該ｃＤＮＡの発現を抑制しているｌｏｘＰ
間の配列を除去すればよく、除去する方法としては、Ｃ
ｒｅ組換え酵素を用いる方法、例えば、Ｃｒｅを発現す
るＣｒｅ遺伝子組換えアデノウイルス（理研ジーンバン
クＲＤＢ−１７４８）を感染させる方法等を挙げること
ができる。
【００１９】上記マウスの受精卵としては、例えば、１
２９／ｓｖ、Ｃ５７ＢＬ／６、ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ３Ｈ、
ＳＪＬ／Ｗｔ、ＤＢＡ／１、ＤＢＡ／２等に由来するマ
ウスの交配により得られるものならばどのようなもので
もよいが、トランスジェニックマウスを効率的に作製し
うる点で、Ｆ１（雑種第一代）マウスの受精卵を用いる
ことが好ましい。また、このようにして得られたヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニックマウスを、マウスＣＤ８１欠
損マウス（EMBO J. 16, 4217, 1997）と戻し交配させ、
マウスＣＤ８１が欠損したヒトＣＤ８１トランスジェニ
ックマウスを作製することができる。上記マウスＣＤ８
１欠損マウスは、「ジーンターゲッティング」羊土社
（１９９５）や、「新遺伝子工学ハンドブック」２７７
−２８３、羊土社（１９９６）に従い作製することがで
きる。そして、マウスＣＤ８１が欠損したヒトＣＤ８１
トランスジェニックマウスは、ＨＣＶの感染効率を高め
ると考えられる点で好ましい。
２９／ｓｖ、Ｃ５７ＢＬ／６、ＢＡＬＢ／ｃ、Ｃ３Ｈ、
ＳＪＬ／Ｗｔ、ＤＢＡ／１、ＤＢＡ／２等に由来するマ
ウスの交配により得られるものならばどのようなもので
もよいが、トランスジェニックマウスを効率的に作製し
うる点で、Ｆ１（雑種第一代）マウスの受精卵を用いる
ことが好ましい。また、このようにして得られたヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニックマウスを、マウスＣＤ８１欠
損マウス（EMBO J. 16, 4217, 1997）と戻し交配させ、
マウスＣＤ８１が欠損したヒトＣＤ８１トランスジェニ
ックマウスを作製することができる。上記マウスＣＤ８
１欠損マウスは、「ジーンターゲッティング」羊土社
（１９９５）や、「新遺伝子工学ハンドブック」２７７
−２８３、羊土社（１９９６）に従い作製することがで
きる。そして、マウスＣＤ８１が欠損したヒトＣＤ８１
トランスジェニックマウスは、ＨＣＶの感染効率を高め
ると考えられる点で好ましい。
【００２０】本発明においてＨＣＶ感染によりＨＣＶを
増幅しうる非ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細胞
とは、ヒトＣＤ８１を発現することができるように、ヒ
トＣＤ８１遺伝子の導入など非ヒト動物肝臓由来の細胞
におけるゲノムが改変されており、例えばＨＣＶ含有血
清の共存下での培養などのＨＣＶのインビトロ感染によ
り、非ヒト動物の肝臓由来の細胞へ侵入したＨＣＶが、
該肝臓由来の細胞内で増幅することができる非ヒト動物
肝臓由来の細胞をいう。したがって、ヒトＣＤ８１遺伝
子を発現することができる非ヒト動物肝臓由来の樹立細
胞とＨＣＶとをインビトロで接触せしめることにより、
ＨＣＶを増幅することができる。また、上記非ヒト動物
としては、マウス、ラット、ウサギ等を具体的に例示す
ることができるが、創製、育成、使用の簡便さなどから
してマウス、ラット等の齧歯目動物、特にマウスの肝臓
由来の細胞が好ましく、マウスとしてはＣ３Ｈ系統マウ
スを用いることがより好ましい。
増幅しうる非ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細胞
とは、ヒトＣＤ８１を発現することができるように、ヒ
トＣＤ８１遺伝子の導入など非ヒト動物肝臓由来の細胞
におけるゲノムが改変されており、例えばＨＣＶ含有血
清の共存下での培養などのＨＣＶのインビトロ感染によ
り、非ヒト動物の肝臓由来の細胞へ侵入したＨＣＶが、
該肝臓由来の細胞内で増幅することができる非ヒト動物
肝臓由来の細胞をいう。したがって、ヒトＣＤ８１遺伝
子を発現することができる非ヒト動物肝臓由来の樹立細
胞とＨＣＶとをインビトロで接触せしめることにより、
ＨＣＶを増幅することができる。また、上記非ヒト動物
としては、マウス、ラット、ウサギ等を具体的に例示す
ることができるが、創製、育成、使用の簡便さなどから
してマウス、ラット等の齧歯目動物、特にマウスの肝臓
由来の細胞が好ましく、マウスとしてはＣ３Ｈ系統マウ
スを用いることがより好ましい。
【００２１】かかるＨＣＶ感染によりＨＣＶを増幅する
ことができる非ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細
胞としては、ＨＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トランス
ジェニック非ヒト動物の肝臓から得られる細胞、特にヒ
トＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物が本来備えて
いるＣＤ８１遺伝子機能が染色体上で欠損し、かつヒト
ＣＤ８１遺伝子が導入されているヒトＣＤ８１トランス
ジェニック非ヒト動物の肝臓から得られる細胞や、肝臓
由来の腫瘍細胞等を不死化細胞として樹立した細胞株に
ヒトＣＤ８１遺伝子を導入した細胞株を例示することが
できる。また、上記肝臓由来の腫瘍細胞としては、Ｃ３
Ｈ［マウス肝癌細胞、東京大学の大西博士より分与］が
好ましく、それ以外にも、Ｈｅｐａ１−６（マウス肝癌
細胞、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１８３０）、Ｈｅｐａ−１ｃ
ｌｃ７（マウス肝癌細胞、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−２０２
６）等を例示することができる。かかる肝臓由来の腫瘍
細胞等にヒトＣＤ８１遺伝子を導入した樹立細胞の作製
方法について、以下、マウスの場合を例に挙げて説明す
る。
ことができる非ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細
胞としては、ＨＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トランス
ジェニック非ヒト動物の肝臓から得られる細胞、特にヒ
トＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物が本来備えて
いるＣＤ８１遺伝子機能が染色体上で欠損し、かつヒト
ＣＤ８１遺伝子が導入されているヒトＣＤ８１トランス
ジェニック非ヒト動物の肝臓から得られる細胞や、肝臓
由来の腫瘍細胞等を不死化細胞として樹立した細胞株に
ヒトＣＤ８１遺伝子を導入した細胞株を例示することが
できる。また、上記肝臓由来の腫瘍細胞としては、Ｃ３
Ｈ［マウス肝癌細胞、東京大学の大西博士より分与］が
好ましく、それ以外にも、Ｈｅｐａ１−６（マウス肝癌
細胞、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−１８３０）、Ｈｅｐａ−１ｃ
ｌｃ７（マウス肝癌細胞、ＡＴＣＣ ＣＲＬ−２０２
６）等を例示することができる。かかる肝臓由来の腫瘍
細胞等にヒトＣＤ８１遺伝子を導入した樹立細胞の作製
方法について、以下、マウスの場合を例に挙げて説明す
る。
【００２２】ＨＣＶ受容体であるヒトＣＤ８１遺伝子の
全部又は一部を、プロモーターとエンハンサーとを有す
る発現ベクターに挿入し、構築された発現ベクターを、
例えば、マウス肝癌細胞に遺伝子導入することにより作
製することができる。より具体的には、ヒトＣＤ８１を
コードするｃＤＮＡと、プロモーターと、エンハンサー
とを含む発現ベクターを、マーカー遺伝子といっしょに
マウス肝臓由来の樹立細胞にトランスフェクションし、
該トランスフェクションされた細胞を培養し、ヒトＣＤ
８１を安定発現する樹立細胞を選択することにより作製
することができる。また、発現ベクターをマウス、ラッ
ト、ヒト等の動物由来の肝癌細胞に遺伝子導入する方法
としては、従来よく知られているリン酸カルシウム法、
エレクトロポレーション法、リポソーム法、マイクロイ
ンジェクション法等を用いることができる。上記プロモ
ーターとしては、チキンβ−アクチン、マウスニューロ
フィラメント、ＳＶ４０等のプロモーターを、エンハン
サーとしては、ヒトサイトメガロウイルス、マウスアル
ブミン、マウス免疫グロブリン、インスリン、ＳＶ４
０、ｃ−ｆｏｓ等のエンハンサーを具体的に例示するこ
とができる。
全部又は一部を、プロモーターとエンハンサーとを有す
る発現ベクターに挿入し、構築された発現ベクターを、
例えば、マウス肝癌細胞に遺伝子導入することにより作
製することができる。より具体的には、ヒトＣＤ８１を
コードするｃＤＮＡと、プロモーターと、エンハンサー
とを含む発現ベクターを、マーカー遺伝子といっしょに
マウス肝臓由来の樹立細胞にトランスフェクションし、
該トランスフェクションされた細胞を培養し、ヒトＣＤ
８１を安定発現する樹立細胞を選択することにより作製
することができる。また、発現ベクターをマウス、ラッ
ト、ヒト等の動物由来の肝癌細胞に遺伝子導入する方法
としては、従来よく知られているリン酸カルシウム法、
エレクトロポレーション法、リポソーム法、マイクロイ
ンジェクション法等を用いることができる。上記プロモ
ーターとしては、チキンβ−アクチン、マウスニューロ
フィラメント、ＳＶ４０等のプロモーターを、エンハン
サーとしては、ヒトサイトメガロウイルス、マウスアル
ブミン、マウス免疫グロブリン、インスリン、ＳＶ４
０、ｃ−ｆｏｓ等のエンハンサーを具体的に例示するこ
とができる。
【００２３】上記本発明のＨＣＶ感染によりＨＣＶを増
幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物
や、ＨＣＶ感染によりＨＣＶを増幅することができる非
ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細胞は、Ｃ型肝炎
の生活環及びメカニズム解明の他、ＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニン
グ等に用いることができる。以下、これらヒトＣＤ８１
トランスジェニック非ヒト動物や非ヒト動物肝臓由来の
ヒトＣＤ８１発現細胞の用途について説明する。
幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物
や、ＨＣＶ感染によりＨＣＶを増幅することができる非
ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細胞は、Ｃ型肝炎
の生活環及びメカニズム解明の他、ＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニン
グ等に用いることができる。以下、これらヒトＣＤ８１
トランスジェニック非ヒト動物や非ヒト動物肝臓由来の
ヒトＣＤ８１発現細胞の用途について説明する。
【００２４】上記非ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発
現細胞を用いるＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促
進物質又は抑制物質のスクリーニング方法としては、か
かるヒトＣＤ８１発現細胞（細胞株）と被検物質とをイ
ンビトロで接触させる前、あるいは接触させた以降に、
ＨＣＶ陽性患者から得られた所定のウイルス価の血清を
用いてＨＣＶに感染させ、次いで該細胞株におけるＨＣ
Ｖの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定・評価する
方法を挙げることができる。
現細胞を用いるＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促
進物質又は抑制物質のスクリーニング方法としては、か
かるヒトＣＤ８１発現細胞（細胞株）と被検物質とをイ
ンビトロで接触させる前、あるいは接触させた以降に、
ＨＣＶ陽性患者から得られた所定のウイルス価の血清を
用いてＨＣＶに感染させ、次いで該細胞株におけるＨＣ
Ｖの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定・評価する
方法を挙げることができる。
【００２５】また上記ヒトＣＤ８１トランスジェニック
非ヒト動物を用いるＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製
の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法として
は、かかる非ヒト動物にあらかじめ被検物質を投与した
後、該非ヒト動物から得られる肝細胞又は肝組織を所定
のウイルス価の血清の存在下で培養し、該肝細胞におけ
るＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定・評
価する方法や、ヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト
動物にあらかじめ被検物質を投与した後、所定のウイル
ス価の血清を用いてＨＣＶに感染させ、該感染後の非ヒ
ト動物から得られる肝細胞におけるＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の程度を測定・評価する方法や、ヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物をあらかじめ所定
のウイルス価の血清を用いてＨＣＶに感染させた後、該
非ヒト動物から得られる肝細胞又は肝組織を被検物質の
存在下で培養し、該肝細胞におけるＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の程度を測定・評価する方法や、ヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物をあらかじめ所定
のウイルス価の血清を用いてＨＣＶに感染させた後、被
検物質を投与し、該非ヒト動物から得られる肝細胞にお
けるＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定・
評価する方法を挙げることができる。
非ヒト動物を用いるＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製
の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法として
は、かかる非ヒト動物にあらかじめ被検物質を投与した
後、該非ヒト動物から得られる肝細胞又は肝組織を所定
のウイルス価の血清の存在下で培養し、該肝細胞におけ
るＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定・評
価する方法や、ヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト
動物にあらかじめ被検物質を投与した後、所定のウイル
ス価の血清を用いてＨＣＶに感染させ、該感染後の非ヒ
ト動物から得られる肝細胞におけるＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の程度を測定・評価する方法や、ヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物をあらかじめ所定
のウイルス価の血清を用いてＨＣＶに感染させた後、該
非ヒト動物から得られる肝細胞又は肝組織を被検物質の
存在下で培養し、該肝細胞におけるＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の程度を測定・評価する方法や、ヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物をあらかじめ所定
のウイルス価の血清を用いてＨＣＶに感染させた後、被
検物質を投与し、該非ヒト動物から得られる肝細胞にお
けるＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定・
評価する方法を挙げることができる。
【００２６】上記のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製
の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法における
ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度の測定・評価
としては、肝細胞におけるＨＣＶ遺伝子の測定・評価を
具体的に例示することができる。ＨＣＶ遺伝子の検出や
測定方法としては特に制限されるものではないが、例え
ばＲＮＡ抽出キット（日本ジーン社製「IsogenLS」な
ど）を用いて、肝細胞内のＲＮＡ画分を調製し、逆転写
酵素（GIBCO-BRL社製「Superscript II」など）を用い
て逆転写を行い、得られるｃＤＮＡをＰＣＲにより増幅
するＲＴ−ＰＣＲ法を挙げることができる。
の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法における
ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度の測定・評価
としては、肝細胞におけるＨＣＶ遺伝子の測定・評価を
具体的に例示することができる。ＨＣＶ遺伝子の検出や
測定方法としては特に制限されるものではないが、例え
ばＲＮＡ抽出キット（日本ジーン社製「IsogenLS」な
ど）を用いて、肝細胞内のＲＮＡ画分を調製し、逆転写
酵素（GIBCO-BRL社製「Superscript II」など）を用い
て逆転写を行い、得られるｃＤＮＡをＰＣＲにより増幅
するＲＴ−ＰＣＲ法を挙げることができる。
【００２７】また、上記ヒトＣＤ８１トランスジェニッ
ク非ヒト動物を用いるＨＣＶの発現及び／又は増幅・複
製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法として
は、かかるヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物
に被検物質を投与する前後に、所定のウイルス価の血清
を用いてＨＣＶに感染させ、該非ヒト動物におけるＨＣ
Ｖの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定・評価する
方法を挙げることができる。特に、Ｃ型肝炎の治療剤開
発のスクリーニングにおいては、ＨＣＶの感染から肝炎
発症までに時間を要する場合が想定されるため、ヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物にあらかじめＨＣ
Ｖを感染させ、その後血清中のＨＣＶの存在等を確認し
た後に被検物質を投与することが好ましい。そして、Ｈ
ＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度の測定・評価と
しては、非ヒト動物から得られる肝臓における肝炎の病
理組織像の解析・評価や、非ヒト動物から得られる血清
中のＨＣＶ遺伝子、酵素活性又は抗体価の測定・評価を
挙げることができる。肝炎の病理組織像としては、門脈
域におけるリンパ球を主体とした細胞浸潤と線維化、肝
実質内での種々の程度の肝細胞の変性・壊死などの病態
を挙げることができる。また、血清中のＨＣＶ遺伝子の
測定は、前記したＲＴ−ＰＣＲを用いることができる
（関谷剛男他編「ＰＣＲ法最前線−基礎技術から応用ま
で」１９９７年６月１５日共立出版発行、２７０〜２７
４頁）。さらに、測定対象の血清中の酵素としては、ア
ラニンアミノトランスフェラーゼやアスパラギン酸アミ
ノトランスフェラーゼ等を例示することができ、これら
血清中の酵素や抗体は常法により測定することができ
る。
ク非ヒト動物を用いるＨＣＶの発現及び／又は増幅・複
製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法として
は、かかるヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物
に被検物質を投与する前後に、所定のウイルス価の血清
を用いてＨＣＶに感染させ、該非ヒト動物におけるＨＣ
Ｖの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定・評価する
方法を挙げることができる。特に、Ｃ型肝炎の治療剤開
発のスクリーニングにおいては、ＨＣＶの感染から肝炎
発症までに時間を要する場合が想定されるため、ヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物にあらかじめＨＣ
Ｖを感染させ、その後血清中のＨＣＶの存在等を確認し
た後に被検物質を投与することが好ましい。そして、Ｈ
ＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度の測定・評価と
しては、非ヒト動物から得られる肝臓における肝炎の病
理組織像の解析・評価や、非ヒト動物から得られる血清
中のＨＣＶ遺伝子、酵素活性又は抗体価の測定・評価を
挙げることができる。肝炎の病理組織像としては、門脈
域におけるリンパ球を主体とした細胞浸潤と線維化、肝
実質内での種々の程度の肝細胞の変性・壊死などの病態
を挙げることができる。また、血清中のＨＣＶ遺伝子の
測定は、前記したＲＴ−ＰＣＲを用いることができる
（関谷剛男他編「ＰＣＲ法最前線−基礎技術から応用ま
で」１９９７年６月１５日共立出版発行、２７０〜２７
４頁）。さらに、測定対象の血清中の酵素としては、ア
ラニンアミノトランスフェラーゼやアスパラギン酸アミ
ノトランスフェラーゼ等を例示することができ、これら
血清中の酵素や抗体は常法により測定することができ
る。
【００２８】ところで、メンデルの法則に従い出生して
くる非ヒト動物には、ヒトＣＤ８１トランスジェニック
非ヒト動物とその同腹の野生型非ヒト動物とが含まれ、
これらヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物とそ
の同腹の野生型非ヒト動物を同時に用いることによって
個体レベルで正確な比較実験をすることができることか
ら、野生型非ヒト動物、すなわちヒトＣＤ８１を細胞内
で発現することができる非ヒト動物と同種の動物、さら
には同腹の動物を、例えばＨＣＶの発現及び／又は増幅
・複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニングに際し
て併用することが好ましい。
くる非ヒト動物には、ヒトＣＤ８１トランスジェニック
非ヒト動物とその同腹の野生型非ヒト動物とが含まれ、
これらヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物とそ
の同腹の野生型非ヒト動物を同時に用いることによって
個体レベルで正確な比較実験をすることができることか
ら、野生型非ヒト動物、すなわちヒトＣＤ８１を細胞内
で発現することができる非ヒト動物と同種の動物、さら
には同腹の動物を、例えばＨＣＶの発現及び／又は増幅
・複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニングに際し
て併用することが好ましい。
【００２９】本発明のスクリーニング方法により得られ
るＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は抑
制物質は、ＣＤ８１に対するアゴニスト又はアンタゴニ
ストである可能性もある。また、ＨＣＶの発現及び／又
は増幅・複製の抑制物質は、Ｃ型肝炎に対する予防剤、
抑制剤又は治療剤や、肝臓癌に対する抑制剤又は治療剤
等に用いることができる可能性がある。例えば、上記ス
クリーニング方法において、ＨＣＶの感染前の被検物質
の投与は、Ｃ型肝炎の予防薬剤のスクリーニングに適し
ており、反対にＨＣＶの感染後の被検物質の投与は、Ｃ
型慢性肝炎の治療剤のスクリーニングに適している。他
方、ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質は、
ＨＣＶの増殖が不十分なモデル動物において、ＨＣＶの
増幅を充分に生起させたい場合などに有用であると考え
られる。また、上記ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製
の促進物質又は抑制物質としては、例えば、抗体、ヒト
ＣＤ８１活性を有するタンパク質のリガンド、このタン
パク質の断片及び断片をコードするオリゴヌクレオチド
等を例示することができる。
るＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は抑
制物質は、ＣＤ８１に対するアゴニスト又はアンタゴニ
ストである可能性もある。また、ＨＣＶの発現及び／又
は増幅・複製の抑制物質は、Ｃ型肝炎に対する予防剤、
抑制剤又は治療剤や、肝臓癌に対する抑制剤又は治療剤
等に用いることができる可能性がある。例えば、上記ス
クリーニング方法において、ＨＣＶの感染前の被検物質
の投与は、Ｃ型肝炎の予防薬剤のスクリーニングに適し
ており、反対にＨＣＶの感染後の被検物質の投与は、Ｃ
型慢性肝炎の治療剤のスクリーニングに適している。他
方、ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質は、
ＨＣＶの増殖が不十分なモデル動物において、ＨＣＶの
増幅を充分に生起させたい場合などに有用であると考え
られる。また、上記ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製
の促進物質又は抑制物質としては、例えば、抗体、ヒト
ＣＤ８１活性を有するタンパク質のリガンド、このタン
パク質の断片及び断片をコードするオリゴヌクレオチド
等を例示することができる。
【００３０】またＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の
抑制を必要としている患者を治療するのに用いられる医
薬組成物は、有効成分としてのＨＣＶの発現及び／又は
増幅・複製の促進物質又は抑制物質と、製剤化に必要な
公知の物質を含んでいる。これらはＣ型肝炎等のウイル
ス感染症の予防、抑制及び治療目的等の医薬として使用
することができるが、これらの用途に限定されるもので
はない。
抑制を必要としている患者を治療するのに用いられる医
薬組成物は、有効成分としてのＨＣＶの発現及び／又は
増幅・複製の促進物質又は抑制物質と、製剤化に必要な
公知の物質を含んでいる。これらはＣ型肝炎等のウイル
ス感染症の予防、抑制及び治療目的等の医薬として使用
することができるが、これらの用途に限定されるもので
はない。
【００３１】
【実施例】以下、本発明を実施例により詳細に説明する
が、本発明の技術的範囲はかかる実施例により何ら制限
されるものではない。 実施例１（ヒトＣＤ８１発現マウス細胞株の作製） Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ上のシークエンスをもとにＰＣＲを
用いてクローニングしたヒトＣＤ８１をコードするｃＤ
ＮＡ２０μｇを、β−アクチンプロモーター及びＣＭＶ
−エンハンサーを有する発現ベクターｐＣＡＧＧＳ［熊
本大学医学部の山村研一教授より分与；文献（Gene 10
8, 193, 1991）］にサブクローンし、かかる発現ベクタ
ーを１μｇのネオマイシン耐性遺伝子を含むプラスミド
pMC1-neo-polyA（Stratagene社製）と共にＣ３Ｈ［マウ
ス肝癌細胞、東京大学の大西博士より分与］、ＣＭＴ−
９３（マウス結腸腺癌細胞株、ＡＴＣＣより購入）、及
びＭＭＴ（マウス乳癌細胞株、ＡＴＣＣより購入）の各
細胞株にエレクトロポレーション（４００Ｖ、１２５μ
Ｆ）することによりトランスフェクションした。１４日
後、トランスフェクションした細胞を１ｍｇ／ｍｌのＧ
４１８で選択し、生残したクローンを採取し、ヒトＣＤ
８１発現マウス細胞株を作製した。このヒトＣＤ８１発
現マウス細胞をフィコエリトリン（ＰＥ）を結合した抗
ヒトＣＤ８１抗体（Pharmingen社製）で染色し、フロー
サイトメトリーでヒトＣＤ８１発現テストを行った結
果、各細胞においてヒトＣＤ８１が発現しているのが確
認できた（図１）。
が、本発明の技術的範囲はかかる実施例により何ら制限
されるものではない。 実施例１（ヒトＣＤ８１発現マウス細胞株の作製） Ｇｅｎｅ Ｂａｎｋ上のシークエンスをもとにＰＣＲを
用いてクローニングしたヒトＣＤ８１をコードするｃＤ
ＮＡ２０μｇを、β−アクチンプロモーター及びＣＭＶ
−エンハンサーを有する発現ベクターｐＣＡＧＧＳ［熊
本大学医学部の山村研一教授より分与；文献（Gene 10
8, 193, 1991）］にサブクローンし、かかる発現ベクタ
ーを１μｇのネオマイシン耐性遺伝子を含むプラスミド
pMC1-neo-polyA（Stratagene社製）と共にＣ３Ｈ［マウ
ス肝癌細胞、東京大学の大西博士より分与］、ＣＭＴ−
９３（マウス結腸腺癌細胞株、ＡＴＣＣより購入）、及
びＭＭＴ（マウス乳癌細胞株、ＡＴＣＣより購入）の各
細胞株にエレクトロポレーション（４００Ｖ、１２５μ
Ｆ）することによりトランスフェクションした。１４日
後、トランスフェクションした細胞を１ｍｇ／ｍｌのＧ
４１８で選択し、生残したクローンを採取し、ヒトＣＤ
８１発現マウス細胞株を作製した。このヒトＣＤ８１発
現マウス細胞をフィコエリトリン（ＰＥ）を結合した抗
ヒトＣＤ８１抗体（Pharmingen社製）で染色し、フロー
サイトメトリーでヒトＣＤ８１発現テストを行った結
果、各細胞においてヒトＣＤ８１が発現しているのが確
認できた（図１）。
【００３２】実施例２（インビトロでのＨＣＶ結合試
験） インビボにおいて、ＨＣＶ受容体であるヒトＣＤ８１は
ほぼ至る所に発現するが、ＨＣＶは基本的に肝細胞だけ
に感染することが報告されている（J. Immunol. 155, 1
229, 1995）。そして、細胞へのＨＣＶ感染には、レセ
プター（ヒトＣＤ８１）とのＨＣＶの結合、細胞へのＨ
ＣＶの侵入、細胞内でのＨＣＶの増幅という少なくとも
３つのステップがあり、そこで、まずＨＣＶのヒトＣＤ
８１への結合が各組織由来の細胞型によって制限される
かどうかを調べてみた。
験） インビボにおいて、ＨＣＶ受容体であるヒトＣＤ８１は
ほぼ至る所に発現するが、ＨＣＶは基本的に肝細胞だけ
に感染することが報告されている（J. Immunol. 155, 1
229, 1995）。そして、細胞へのＨＣＶ感染には、レセ
プター（ヒトＣＤ８１）とのＨＣＶの結合、細胞へのＨ
ＣＶの侵入、細胞内でのＨＣＶの増幅という少なくとも
３つのステップがあり、そこで、まずＨＣＶのヒトＣＤ
８１への結合が各組織由来の細胞型によって制限される
かどうかを調べてみた。
【００３３】ヒトＣＤ８１遺伝子導入によりヒトＣＤ８
１を発現する実施例１で調製したＣ３Ｈ、ＣＭＴ−９３
及びＭＭＴの各１０5細胞と、ヒトＣＤ８１遺伝子未導
入のヒトＣＤ８１を発現しないＣ３Ｈ、ＣＭＴ−９３及
びＭＭＴの各１０5細胞とを、ＨＣＶ陽性患者由来の１
０7以上のウイルス価を有する新鮮な血清といっしょに
３７℃で１時間インキュベートした。これら細胞を常法
により溶解して、全ＲＮＡを単離した。肝臓、乳腺、結
腸に由来する各細胞型から単離されたＲＮＡの１０％を
用いてＲＴ−ＰＣＲを行った。まず、上記単離した全Ｒ
ＮＡ（〜１μｇ）を用い、文献（Science 244, 359, 19
89）記載のＨＣＶの塩基配列をもとに作製した＋鎖特異
的なプライマーと逆転写酵素（rTth DNA polymerase；
パーキンエルマー社製）によりｃＤＮＡを合成し、この
逆転写反応混合液に含まれるｃＤＮＡを鋳型として２段
階のＰＣＲを行いｃＤＮＡを増幅させ（各３０サイク
ル）、このＰＣＲ産物の１０％をアガロースゲル電気泳
動（３％）にかけ、ＨＣＶ(＋)鎖を検出した。なお、Ｐ
ＣＲ反応におけるプライマーも上記文献（Science 244,
359, 1989）記載のＨＣＶの塩基配列をもとに作製した
ものを用いた。結果を表１に示す。
１を発現する実施例１で調製したＣ３Ｈ、ＣＭＴ−９３
及びＭＭＴの各１０5細胞と、ヒトＣＤ８１遺伝子未導
入のヒトＣＤ８１を発現しないＣ３Ｈ、ＣＭＴ−９３及
びＭＭＴの各１０5細胞とを、ＨＣＶ陽性患者由来の１
０7以上のウイルス価を有する新鮮な血清といっしょに
３７℃で１時間インキュベートした。これら細胞を常法
により溶解して、全ＲＮＡを単離した。肝臓、乳腺、結
腸に由来する各細胞型から単離されたＲＮＡの１０％を
用いてＲＴ−ＰＣＲを行った。まず、上記単離した全Ｒ
ＮＡ（〜１μｇ）を用い、文献（Science 244, 359, 19
89）記載のＨＣＶの塩基配列をもとに作製した＋鎖特異
的なプライマーと逆転写酵素（rTth DNA polymerase；
パーキンエルマー社製）によりｃＤＮＡを合成し、この
逆転写反応混合液に含まれるｃＤＮＡを鋳型として２段
階のＰＣＲを行いｃＤＮＡを増幅させ（各３０サイク
ル）、このＰＣＲ産物の１０％をアガロースゲル電気泳
動（３％）にかけ、ＨＣＶ(＋)鎖を検出した。なお、Ｐ
ＣＲ反応におけるプライマーも上記文献（Science 244,
359, 1989）記載のＨＣＶの塩基配列をもとに作製した
ものを用いた。結果を表１に示す。
【００３４】表１から、ヒトＣＤ８１遺伝子未導入のＣ
３Ｈ、ＣＭＴ−９３及びＭＭＴの各細胞ではいずれの細
胞型においてもＨＣＶの結合がみられず、ＣＤ８１への
ＨＣＶ結合の種特異性を示す従来の報告と一致した。一
方、ヒトＣＤ８１を導入したヒトＣＤ８１を発現するＣ
３Ｈ、ＣＭＴ−９３及びＭＭＴの各細胞では、いずれの
細胞型においてもＨＣＶと結合することが明らかとなっ
た。これらのことから、ＨＣＶレセプターであるヒトＣ
Ｄ８１へのＨＣＶの結合は、肝臓、乳腺、結腸等の組織
に特異的なものでなく、あらゆる組織の細胞に発現した
ヒトＣＤ８１に結合することがわかった。
３Ｈ、ＣＭＴ−９３及びＭＭＴの各細胞ではいずれの細
胞型においてもＨＣＶの結合がみられず、ＣＤ８１への
ＨＣＶ結合の種特異性を示す従来の報告と一致した。一
方、ヒトＣＤ８１を導入したヒトＣＤ８１を発現するＣ
３Ｈ、ＣＭＴ−９３及びＭＭＴの各細胞では、いずれの
細胞型においてもＨＣＶと結合することが明らかとなっ
た。これらのことから、ＨＣＶレセプターであるヒトＣ
Ｄ８１へのＨＣＶの結合は、肝臓、乳腺、結腸等の組織
に特異的なものでなく、あらゆる組織の細胞に発現した
ヒトＣＤ８１に結合することがわかった。
【００３５】
【表１】
【００３６】実施例３（インビトロでのＨＣＶ感染試
験） 次に、ヒトＣＤ８１に結合したＨＣＶがヒトＣＤ８１発
現マウス細胞内に侵入できるかどうか、侵入後に該細胞
内で増幅できるかどうかについて検討した。実施例２と
同様に、ヒトＣＤ８１遺伝子を導入したＣ３Ｈ、ＣＭＴ
−９３及びＭＭＴの各細胞とヒトＣＤ８１遺伝子未導入
のＣ３Ｈ、ＣＭＴ−９３及びＭＭＴの各細胞を用い、こ
れら各１０4細胞を、１０7以上のウイルス価を有するＨ
ＣＶ含有血清の存在下又は非存在下で６日間培養し、生
残した細胞を溶解して全ＲＮＡを単離し、この単離した
全ＲＮＡ（〜１μｇ）を用い、特異的プライマー［５′
−ＴＴＣＣＴＡＧＴＣＧＣＧＣＧＣＡＣＡＣＣ−３′
（配列番号１）］と逆転写酵素（rTth DNA polymeras
e；パーキンエルマー社製）によりｃＤＮＡを合成し、
この逆転写反応混合液に含まれるｃＤＮＡを鋳型として
２段階のＰＣＲを行いｃＤＮＡを増幅させ（各３０サイ
クル）、このＰＣＲ産物の１０％をアガロースゲル電気
泳動（３％）にかけ、ＨＣＶ(−)鎖を検出した。なお、
ＰＣＲ反応におけるプライマーの組合せとしては、１段
階目のＰＣＲでは［１ｓｔ−Ｆ：５′−ＣＣＡＴＧＧＣ
ＧＴＴＡＧＴＡＴＧＡＧＴＧ−３′（配列番号２）、１
ｓｔ−Ｒ：５′−ＧＴＧＣＴＣＡＴＧＧＴＧＣＡＣＧＧ
ＴＣＴＡ−３′（配列番号３）］、２段階目のＰＣＲで
は［２ｎｄ−Ｆ：５′−ＡＧＡＧＣＣＡＴＡＧＴＧＧＴ
ＣＴＧＣＧＧＡ−３′（配列番号４）、２ｎｄ−Ｒ：
５′−ＣＴＴＴＣＧＣＧＡＣＣＣＡＡＣＡＣＴＡＣ−
３′（配列番号５）］をそれぞれ用いた。結果を表２に
示す。
験） 次に、ヒトＣＤ８１に結合したＨＣＶがヒトＣＤ８１発
現マウス細胞内に侵入できるかどうか、侵入後に該細胞
内で増幅できるかどうかについて検討した。実施例２と
同様に、ヒトＣＤ８１遺伝子を導入したＣ３Ｈ、ＣＭＴ
−９３及びＭＭＴの各細胞とヒトＣＤ８１遺伝子未導入
のＣ３Ｈ、ＣＭＴ−９３及びＭＭＴの各細胞を用い、こ
れら各１０4細胞を、１０7以上のウイルス価を有するＨ
ＣＶ含有血清の存在下又は非存在下で６日間培養し、生
残した細胞を溶解して全ＲＮＡを単離し、この単離した
全ＲＮＡ（〜１μｇ）を用い、特異的プライマー［５′
−ＴＴＣＣＴＡＧＴＣＧＣＧＣＧＣＡＣＡＣＣ−３′
（配列番号１）］と逆転写酵素（rTth DNA polymeras
e；パーキンエルマー社製）によりｃＤＮＡを合成し、
この逆転写反応混合液に含まれるｃＤＮＡを鋳型として
２段階のＰＣＲを行いｃＤＮＡを増幅させ（各３０サイ
クル）、このＰＣＲ産物の１０％をアガロースゲル電気
泳動（３％）にかけ、ＨＣＶ(−)鎖を検出した。なお、
ＰＣＲ反応におけるプライマーの組合せとしては、１段
階目のＰＣＲでは［１ｓｔ−Ｆ：５′−ＣＣＡＴＧＧＣ
ＧＴＴＡＧＴＡＴＧＡＧＴＧ−３′（配列番号２）、１
ｓｔ−Ｒ：５′−ＧＴＧＣＴＣＡＴＧＧＴＧＣＡＣＧＧ
ＴＣＴＡ−３′（配列番号３）］、２段階目のＰＣＲで
は［２ｎｄ−Ｆ：５′−ＡＧＡＧＣＣＡＴＡＧＴＧＧＴ
ＣＴＧＣＧＧＡ−３′（配列番号４）、２ｎｄ−Ｒ：
５′−ＣＴＴＴＣＧＣＧＡＣＣＣＡＡＣＡＣＴＡＣ−
３′（配列番号５）］をそれぞれ用いた。結果を表２に
示す。
【００３７】
【表２】
【００３８】表２からもわかるように、乳腺（ＣＭＴ−
９３）及び結腸（ＭＭＴ）由来のヒトＣＤ８１発現又は
非発現のいずれの細胞からもＨＣＶ(−)鎖は検出でき
ず、これに対して、ヒトＣＤ８１発現肝癌細胞（Ｃ３
Ｈ）からはＨＣＶ(−)鎖が著量検出できたが、ヒトＣＤ
８１非発現肝癌細胞（Ｃ３Ｈ）からは何らＨＣＶ(−)鎖
が検出できなかった。これらのことから、ＨＣＶは、ヒ
トＣＤ８１を発現するいずれの組織のマウス細胞とも結
合するが、肝細胞においてのみ増幅することがわかっ
た。
９３）及び結腸（ＭＭＴ）由来のヒトＣＤ８１発現又は
非発現のいずれの細胞からもＨＣＶ(−)鎖は検出でき
ず、これに対して、ヒトＣＤ８１発現肝癌細胞（Ｃ３
Ｈ）からはＨＣＶ(−)鎖が著量検出できたが、ヒトＣＤ
８１非発現肝癌細胞（Ｃ３Ｈ）からは何らＨＣＶ(−)鎖
が検出できなかった。これらのことから、ＨＣＶは、ヒ
トＣＤ８１を発現するいずれの組織のマウス細胞とも結
合するが、肝細胞においてのみ増幅することがわかっ
た。
【００３９】実施例４（マウスＣＤ８１が欠損したヒト
ＣＤ８１トランスジェニックマウスの作製） 実施例１により得られたヒトＣＤ８１発現ベクター（pC
AGGS-hCD81 plasmid vector）を制限酵素ＳａｌＩとＨ
ｉｎｄIIIとを用いて切断し、アガロースゲル電気泳動
後、およそ２．５ｋｂのＤＮＡ断片（図２）をGene Cle
anII kit（Ｂｉｏ１０１社製）を用いて精製し、この精
製したＤＮＡを２ｎｇ／ｍｌの濃度になるように蒸留水
で希釈し、Ｆ１マウス（Ｃ５７ＢＬ／６マウス×ＤＢＡ
／２マウス）の受精卵に注入し、以後常法によりトラン
スジェニックマウスを作製した。このようにして得られ
た３匹のヒトＣＤ８１トランスジェニックマウスのうち
２匹を用い、これらをマウスＣＤ８１欠損マウスと戻し
交配させ、４タイプのマウス、すなわちヒトＣＤ８１＋
／マウスＣＤ８１−（Ｈ＋Ｍ−）、ヒトＣＤ８１−／マ
ウスＣＤ８１−（Ｈ−Ｍ−）、ヒトＣＤ８１＋／マウス
ＣＤ８１＋（Ｈ＋Ｍ＋）及びヒトＣＤ８１−／マウスＣ
Ｄ８１＋（Ｈ−Ｍ＋）を作製した。上記ヒトＣＤ８１＋
／マウスＣＤ８１−（Ｈ＋Ｍ−）タイプのマウスは、マ
ウスＣＤ８１が欠損したヒトＣＤ８１トランスジェニッ
クマウスである。なお、これらマウスのタイプは、戻し
交配により得られたマウスから末梢血液細胞を採取し、
この末梢血液細胞の白血球を抗ヒトＣＤ８１抗体又は抗
マウスＣＤ８１抗体（Pharmingen社製）で染色し、末梢
血液細胞上のヒトＣＤ８１及びマウスＣＤ８１の発現を
フローサイトメトリーで測定することによって決定し
た。
ＣＤ８１トランスジェニックマウスの作製） 実施例１により得られたヒトＣＤ８１発現ベクター（pC
AGGS-hCD81 plasmid vector）を制限酵素ＳａｌＩとＨ
ｉｎｄIIIとを用いて切断し、アガロースゲル電気泳動
後、およそ２．５ｋｂのＤＮＡ断片（図２）をGene Cle
anII kit（Ｂｉｏ１０１社製）を用いて精製し、この精
製したＤＮＡを２ｎｇ／ｍｌの濃度になるように蒸留水
で希釈し、Ｆ１マウス（Ｃ５７ＢＬ／６マウス×ＤＢＡ
／２マウス）の受精卵に注入し、以後常法によりトラン
スジェニックマウスを作製した。このようにして得られ
た３匹のヒトＣＤ８１トランスジェニックマウスのうち
２匹を用い、これらをマウスＣＤ８１欠損マウスと戻し
交配させ、４タイプのマウス、すなわちヒトＣＤ８１＋
／マウスＣＤ８１−（Ｈ＋Ｍ−）、ヒトＣＤ８１−／マ
ウスＣＤ８１−（Ｈ−Ｍ−）、ヒトＣＤ８１＋／マウス
ＣＤ８１＋（Ｈ＋Ｍ＋）及びヒトＣＤ８１−／マウスＣ
Ｄ８１＋（Ｈ−Ｍ＋）を作製した。上記ヒトＣＤ８１＋
／マウスＣＤ８１−（Ｈ＋Ｍ−）タイプのマウスは、マ
ウスＣＤ８１が欠損したヒトＣＤ８１トランスジェニッ
クマウスである。なお、これらマウスのタイプは、戻し
交配により得られたマウスから末梢血液細胞を採取し、
この末梢血液細胞の白血球を抗ヒトＣＤ８１抗体又は抗
マウスＣＤ８１抗体（Pharmingen社製）で染色し、末梢
血液細胞上のヒトＣＤ８１及びマウスＣＤ８１の発現を
フローサイトメトリーで測定することによって決定し
た。
【００４０】実施例５（インビボでのヒトＣＤ８１トラ
ンスジェニックマウスへのＨＣＶ感染） ヒトの場合は、ＨＣＶ（＋）−血液の輸血後のＨＣＶ感
染及び肝傷害の進行は、レシピエント、ウイルスのタイ
プ又はウイルスの投与量等のような多くのパラメータに
よって異なり、何人かの患者は繰り返し注入した後、肝
炎を引き起こすことが知られている。また、ＨＣＶウイ
ルス価が高い患者でさえも、ＡＬＴ（アラニンアミノト
ランスフェラーゼ）及びＡＳＴ（アスパラギン酸アミノ
トランスフェラーゼ）濃度では診断することができない
くらい非常に緩慢な進行の肝傷害を引き起こすことが知
られている。従って、マウスにおける病気の進行を予測
するのは非常に困難である。そこで、ＡＬＴ及びＡＳＴ
濃度の測定の他に、肝細胞におけるＨＣＶの存在及び増
幅の測定を併せて実施した。
ンスジェニックマウスへのＨＣＶ感染） ヒトの場合は、ＨＣＶ（＋）−血液の輸血後のＨＣＶ感
染及び肝傷害の進行は、レシピエント、ウイルスのタイ
プ又はウイルスの投与量等のような多くのパラメータに
よって異なり、何人かの患者は繰り返し注入した後、肝
炎を引き起こすことが知られている。また、ＨＣＶウイ
ルス価が高い患者でさえも、ＡＬＴ（アラニンアミノト
ランスフェラーゼ）及びＡＳＴ（アスパラギン酸アミノ
トランスフェラーゼ）濃度では診断することができない
くらい非常に緩慢な進行の肝傷害を引き起こすことが知
られている。従って、マウスにおける病気の進行を予測
するのは非常に困難である。そこで、ＡＬＴ及びＡＳＴ
濃度の測定の他に、肝細胞におけるＨＣＶの存在及び増
幅の測定を併せて実施した。
【００４１】実施例４により得られた２タイプのヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニックマウス（Ｈ＋Ｍ−及びＨ＋Ｍ
＋）に導入された遺伝子の発現をノーザンブロット法に
より調べた結果、肝臓を含む全ての組織で形質転換ヒト
ＣＤ８１遺伝子の転写（ｍＲＮＡ）を検出することがで
きた（図３）。そこで、５〜６週齢の４タイプのマウス
（Ｈ＋Ｍ−、Ｈ−Ｍ−、Ｈ＋Ｍ＋、Ｈ−Ｍ＋）全てに、
ＨＣＶ陽性患者の１０ 7以上のウィルス価を有する新鮮
な血清を静脈注射しＨＣＶを感染させた。感染後の所定
の期間後毎に各マウスの血液を採取し、肝細胞傷害のマ
ーカーであるＡＬＴ及びＡＳＴの濃度を測定した。注射
後９０日までは、これらマウスにおいて血清中のＡＳＴ
やＡＬＴの濃度はいずれも上昇していなかった。
Ｄ８１トランスジェニックマウス（Ｈ＋Ｍ−及びＨ＋Ｍ
＋）に導入された遺伝子の発現をノーザンブロット法に
より調べた結果、肝臓を含む全ての組織で形質転換ヒト
ＣＤ８１遺伝子の転写（ｍＲＮＡ）を検出することがで
きた（図３）。そこで、５〜６週齢の４タイプのマウス
（Ｈ＋Ｍ−、Ｈ−Ｍ−、Ｈ＋Ｍ＋、Ｈ−Ｍ＋）全てに、
ＨＣＶ陽性患者の１０ 7以上のウィルス価を有する新鮮
な血清を静脈注射しＨＣＶを感染させた。感染後の所定
の期間後毎に各マウスの血液を採取し、肝細胞傷害のマ
ーカーであるＡＬＴ及びＡＳＴの濃度を測定した。注射
後９０日までは、これらマウスにおいて血清中のＡＳＴ
やＡＬＴの濃度はいずれも上昇していなかった。
【００４２】実施例６（ＲＴ−ＰＣＲによる血清内のＨ
ＣＶ存在の評価、並びに肝細胞内におけるＨＣＶの存在
及び増幅の測定） 実施例５により得られた２タイプのヒトＣＤ８１トラン
スジェニックマウス（Ｈ＋Ｍ−及びＨ＋Ｍ＋）のＨＣＶ
感染後９０〜１２０日の肝細胞内におけるＨＣＶの存在
をマウスの肝組織から単離したＲＮＡの増幅についてＲ
Ｔ−ＰＣＲ法により調べてみた。これらマウスから肝臓
を摘出し、常法により肝細胞を採取し、該細胞を溶解し
た後、実施例３と同様にしてＨＣＶの増幅を示すＨＣＶ
(−)鎖を測定した。同様にして、トランスジーンネガテ
ィブマウス（Ｈ−Ｍ−及びＨ−Ｍ＋マウス）についても
ＨＣＶ(−)鎖を測定した。結果を表３に示す。
ＣＶ存在の評価、並びに肝細胞内におけるＨＣＶの存在
及び増幅の測定） 実施例５により得られた２タイプのヒトＣＤ８１トラン
スジェニックマウス（Ｈ＋Ｍ−及びＨ＋Ｍ＋）のＨＣＶ
感染後９０〜１２０日の肝細胞内におけるＨＣＶの存在
をマウスの肝組織から単離したＲＮＡの増幅についてＲ
Ｔ−ＰＣＲ法により調べてみた。これらマウスから肝臓
を摘出し、常法により肝細胞を採取し、該細胞を溶解し
た後、実施例３と同様にしてＨＣＶの増幅を示すＨＣＶ
(−)鎖を測定した。同様にして、トランスジーンネガテ
ィブマウス（Ｈ−Ｍ−及びＨ−Ｍ＋マウス）についても
ＨＣＶ(−)鎖を測定した。結果を表３に示す。
【００４３】
【表３】
【００４４】表３から、上記ヒトＣＤ８１トランスジェ
ニックマウス由来の肝臓でＨＣＶ(−)鎖を検出し、肝細
胞内においてＨＣＶが増幅することがわかった。一方、
トランスジーンネガティブマウス（Ｈ−Ｍ−及びＨ−Ｍ
＋マウス）ではＨＣＶの増幅を示すＨＣＶ(−)鎖を検出
することができなかった。これらのことから、ヒトＣＤ
８１トランスジェニックマウスでは、肝細胞特異的にＨ
ＣＶ感染が生じ、ＨＣＶが肝細胞内で増幅することが明
らかとなった。
ニックマウス由来の肝臓でＨＣＶ(−)鎖を検出し、肝細
胞内においてＨＣＶが増幅することがわかった。一方、
トランスジーンネガティブマウス（Ｈ−Ｍ−及びＨ−Ｍ
＋マウス）ではＨＣＶの増幅を示すＨＣＶ(−)鎖を検出
することができなかった。これらのことから、ヒトＣＤ
８１トランスジェニックマウスでは、肝細胞特異的にＨ
ＣＶ感染が生じ、ＨＣＶが肝細胞内で増幅することが明
らかとなった。
【００４５】
【発明の効果】本発明によると、Ｃ型肝炎の感染・発症
機構の解明や、Ｃ型肝炎の予防・治療剤等のスクリーニ
ングに有用であるＣ型肝炎モデルを提供することができ
る。また、かかるＣ型肝炎モデルを用いて、Ｃ型肝炎の
予防・治療剤等を開発することができる。
機構の解明や、Ｃ型肝炎の予防・治療剤等のスクリーニ
ングに有用であるＣ型肝炎モデルを提供することができ
る。また、かかるＣ型肝炎モデルを用いて、Ｃ型肝炎の
予防・治療剤等を開発することができる。
【００４６】
【配列表】 SEQUENCE LISTING <110> SUMITOMO PHARMACEUTICALS COMPANY LIMITED <120> Cells and non-human animals in which HCV replicate <130> 132695 <140> <141> <160> 5 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:specific primer <400> 1 ttcctagtcg cgcgcacacc 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:PCR primer (1st) <400> 2 ccatggcgtt agtatgagtg 20 <210> 3 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:PCR Primer (1st) <400> 3 gtgctcatgg tgcacggtct a 21 <210> 4 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:PCR Primer (2nd) <400> 4 agagccatag tggtctgcgg a 21 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:PCR Primer (2nd) <400> 5 ctttcgcgac ccaacactac 20
【図１】マウス肝癌細胞、マウス結腸腺癌細胞株及びマ
ウス乳癌細胞株におけるヒトＣＤ８１の発現を示す図で
ある。
ウス乳癌細胞株におけるヒトＣＤ８１の発現を示す図で
ある。
【図２】本発明に用いた発現ベクターの遺伝子構造を示
す図である。
す図である。
【図３】本発明のヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒ
ト動物の各組織における導入された遺伝子発現の結果を
示す図である。
ト動物の各組織における導入された遺伝子発現の結果を
示す図である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｑ 1/48 Ｃ１２Ｎ 7/00 1/70 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ // Ｃ１２Ｎ 7/00 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ Ｃ１２Ｐ 21/02 15/00 ＺＮＡＡ Ｆターム(参考） 4B024 AA01 AA14 BA63 CA04 DA02 EA04 FA02 FA06 FA10 GA12 GA14 GA18 4B063 QA01 QA05 QQ03 QQ08 QQ10 QQ26 QQ42 QQ61 QR77 QR79 QR80 QS11 QS24 4B064 AG20 CA10 CA19 CC24 DA15 4B065 AA90X AA90Y AA96X AB01 BA03 BA25 BB37 CA24 CA44 CA46 4C084 AA16 ZB331 ZB332
Claims (36)
- 【請求項１】 ＨＣＶ感染によりＨＣＶを増幅しうるこ
とを特徴とするヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト
動物。 - 【請求項２】 ヒトＣＤ８１遺伝子が導入されているこ
とを特徴とする請求項１記載のヒトＣＤ８１トランスジ
ェニック非ヒト動物。 - 【請求項３】 本来備えているＣＤ８１遺伝子機能が染
色体上で欠損し、かつヒトＣＤ８１遺伝子が導入されて
いることを特徴とする請求項１又は２記載のヒトＣＤ８
１トランスジェニック非ヒト動物。 - 【請求項４】 非ヒト動物が、齧歯目動物であることを
特徴とする請求項１〜３のいずれか記載のヒトＣＤ８１
トランスジェニック非ヒト動物。 - 【請求項５】 齧歯目動物が、マウスであることを特徴
とする請求項４記載のヒトＣＤ８１トランスジェニック
非ヒト動物。 - 【請求項６】 マウスが、Ｃ３Ｈ系統マウスであること
を特徴とする請求項５記載のヒトＣＤ８１トランスジェ
ニック非ヒト動物。 - 【請求項７】 ヒトＣＤ８１遺伝子を非ヒト動物の受精
卵の雄性前核にマイクロインジェクションし、得られた
卵細胞を培養した後、仮親非ヒト動物の輸卵管に移植
し、その後被移植動物を飼育し、産まれた仔非ヒト動物
から前記ヒトＣＤ８１遺伝子を有する仔非ヒト動物を選
択することを特徴とするＨＣＶ感染によりＨＣＶを増幅
しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物の製
造方法。 - 【請求項８】 ヒトＣＤ８１遺伝子を非ヒト動物の受精
卵の雄性前核にマイクロインジェクションし、得られた
卵細胞を培養した後、仮親非ヒト動物の輸卵管に移植
し、その後被移植動物を飼育し、産まれた仔非ヒト動物
から前記ヒトＣＤ８１遺伝子を有する仔非ヒト動物を選
択することにより得られるヒトＣＤ８１トランスジェニ
ック非ヒト動物と、非ヒト動物に備わったＣＤ８１遺伝
子が染色体上で欠損した非ヒト動物とを戻し交配し、非
ヒト動物ＣＤ８１遺伝子機能が染色体上で欠損し、かつ
ヒトＣＤ８１遺伝子が導入されている産仔を得ることを
特徴とするＨＣＶ感染によりＨＣＶを増幅しうるヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物の製造方法。 - 【請求項９】 請求項７又は８記載のＨＣＶ感染により
ＨＣＶを増幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非
ヒト動物の製造方法により得られることを特徴とするヒ
トＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物。 - 【請求項１０】 ＨＣＶ感染によりＨＣＶを増幅しうる
ことを特徴とする非ヒト動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発
現細胞。 - 【請求項１１】 非ヒト動物が、ＨＣＶ感染によりＨＣ
Ｖを増幅しうるヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト
動物であることを特徴とする請求項１０記載の非ヒト動
物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細胞。 - 【請求項１２】 ヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒ
ト動物が、本来備えているＣＤ８１遺伝子機能が染色体
上で欠損し、かつヒトＣＤ８１遺伝子が導入されている
ヒトＣＤ８１トランスジェニック非ヒト動物であること
を特徴とする請求項１１記載の非ヒト動物肝臓由来のヒ
トＣＤ８１発現細胞。 - 【請求項１３】 ヒトＣＤ８１遺伝子を導入した樹立細
胞であることを特徴とする請求項１０記載の非ヒト動物
肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細胞。 - 【請求項１４】 非ヒト動物が、齧歯目動物であること
を特徴とする請求項１０〜１３のいずれか記載の非ヒト
動物肝臓由来のヒトＣＤ８１発現細胞。 - 【請求項１５】 齧歯目動物が、マウスであることを特
徴とする請求項１４記載の非ヒト動物肝臓由来のヒトＣ
Ｄ８１発現細胞。 - 【請求項１６】 マウスが、Ｃ３Ｈ系統マウスであるこ
とを特徴とする請求項１５記載の非ヒト動物肝臓由来の
ヒトＣＤ８１発現細胞。 - 【請求項１７】 ヒトＣＤ８１をコードするｃＤＮＡ
と、プロモーターと、エンハンサーとを含む発現ベクタ
ーを、マーカー遺伝子といっしょに非ヒト動物肝臓由来
の樹立細胞にトランスフェクションし、該トランスフェ
クションされた細胞を培養し、ヒトＣＤ８１を安定発現
する樹立細胞を選択することを特徴とするＨＣＶを増幅
しうる非ヒト動物肝臓由来の樹立細胞の製造方法。 - 【請求項１８】 ヒトＣＤ８１遺伝子を発現することが
できる非ヒト動物肝臓由来の樹立細胞とＨＣＶとをイン
ビトロで接触せしめることを特徴とするＨＣＶの増幅方
法。 - 【請求項１９】 請求項１０〜１６のいずれか記載の非
ヒト肝臓由来の細胞と被検物質とをインビトロで接触さ
せる前後に、ＨＣＶを感染させ、次いで該細胞株におけ
るＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定・評
価することを特徴とするＨＣＶの発現及び／又は増幅・
複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法。 - 【請求項２０】 請求項１〜６のいずれか記載のヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物にあらかじめ被検
物質を投与した後、該非ヒト動物から得られる肝細胞又
は肝組織をＨＣＶの存在下で培養し、肝細胞におけるＨ
ＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定・評価す
ることを特徴とするＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製
の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法。 - 【請求項２１】 請求項１〜６のいずれか記載のヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物にあらかじめ被検
物質を投与した後、ＨＣＶを感染させ、該感染後の非ヒ
ト動物から得られる肝細胞におけるＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の程度を測定・評価することを特徴とす
るＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は抑
制物質のスクリーニング方法。 - 【請求項２２】 請求項１〜６のいずれか記載のヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物をあらかじめＨＣ
Ｖに感染させた後、該非ヒト動物から得られる肝細胞又
は肝組織を被検物質の存在下で培養し、該肝細胞におけ
るＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定・評
価することを特徴とするＨＣＶの発現及び／又は増幅・
複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法。 - 【請求項２３】 請求項１〜６のいずれか記載のヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物をあらかじめＨＣ
Ｖに感染させた後、被検物質を投与し、該非ヒト動物か
ら得られる肝細胞におけるＨＣＶの発現及び／又は増幅
・複製の程度を測定・評価することを特徴とするＨＣＶ
の発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は抑制物質の
スクリーニング方法。 - 【請求項２４】 ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の
程度の測定・評価が、肝細胞におけるＨＣＶ遺伝子の測
定・評価であることを特徴とする請求項１９〜２３のい
ずれか記載のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進
物質又は抑制物質のスクリーニング方法。 - 【請求項２５】 請求項１〜６のいずれか記載のヒトＣ
Ｄ８１トランスジェニック非ヒト動物に被検物質を投与
する前後に、ＨＣＶを感染させ、該非ヒト動物における
ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の程度を測定・評価
することを特徴とするＨＣＶの発現及び／又は増幅・複
製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法。 - 【請求項２６】 ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の
程度の測定・評価が、非ヒト動物から得られる肝臓にお
ける肝炎の病理組織像の解析・評価であることを特徴と
する請求項２５記載のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複
製の促進物質又は抑制物質のスクリーニング方法。 - 【請求項２７】 ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の
程度の測定・評価が、非ヒト動物から得られる血清中の
ＨＣＶ遺伝子、酵素活性又は抗体価の測定・評価である
ことを特徴とする請求項２５記載のＨＣＶの発現及び／
又は増幅・複製の促進物質又は抑制物質のスクリーニン
グ方法。 - 【請求項２８】 血清中の酵素が、アラニンアミノトラ
ンスフェラーゼ又はアスパラギン酸アミノトランスフェ
ラーゼであることを特徴とする請求項２７記載のＨＣＶ
の発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は抑制物質の
スクリーニング方法。 - 【請求項２９】 ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の
程度を測定・評価するに際し、ヒトＣＤ８１トランスジ
ェニック非ヒト動物と同種の野生型非ヒト動物の測定値
と比較・評価することを特徴とする請求項１９〜２８の
いずれか記載のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促
進物質又は抑制物質のスクリーニング方法。 - 【請求項３０】 請求項１９〜２９のいずれか記載のＨ
ＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は抑制物
質のスクリーニング方法により得られることを特徴とす
るＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質。 - 【請求項３１】 ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の
促進物質が、ＣＤ８１に対するアゴニストであることを
特徴とする請求項３０記載のＨＣＶの発現及び／又は増
幅・複製の促進物質。 - 【請求項３２】 請求項１９〜２９のいずれか記載のＨ
ＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質又は抑制物
質のスクリーニング方法により得られることを特徴とす
るＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の抑制物質。 - 【請求項３３】 ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の
抑制物質が、ＣＤ８１に対するアンタゴニストであるこ
とを特徴とする請求項３２記載のＨＣＶの発現及び／又
は増幅・複製の抑制物質。 - 【請求項３４】 ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の
抑制物質が、Ｃ型肝炎に対する予防剤、抑制剤若しくは
治療剤、又は肝臓癌に対する予防剤、抑制剤若しくは治
療剤であることを特徴とする請求項３２記載のＨＣＶの
発現及び／又は増幅・複製の抑制物質。 - 【請求項３５】 ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の
促進を必要としている患者を治療するのに用いられる医
薬組成物であって、有効成分として請求項３０又は３１
記載のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の促進物質を
含有することを特徴とする医薬組成物。 - 【請求項３６】 ＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の
抑制を必要としている患者を治療するのに用いられる医
薬組成物であって、有効成分として請求項３２〜３４の
いずれか記載のＨＣＶの発現及び／又は増幅・複製の抑
制物質を含有することを特徴とする医薬組成物。
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000122486A JP2001299140A (ja) | 2000-04-24 | 2000-04-24 | Ｈｃｖを増幅しうる細胞及び非ヒト動物 |
| PCT/JP2001/003409 WO2001080632A1 (fr) | 2000-04-24 | 2001-04-20 | Cellule et animal non humain capables d'amplifier le virus de l'hepatite c |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2000122486A JP2001299140A (ja) | 2000-04-24 | 2000-04-24 | Ｈｃｖを増幅しうる細胞及び非ヒト動物 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2001299140A true JP2001299140A (ja) | 2001-10-30 |
| JP2001299140A5 JP2001299140A5 (ja) | 2007-05-31 |
Family
ID=18632955
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000122486A Pending JP2001299140A (ja) | 2000-04-24 | 2000-04-24 | Ｈｃｖを増幅しうる細胞及び非ヒト動物 |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2001299140A (ja) |
| WO (1) | WO2001080632A1 (ja) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003037081A1 (fr) * | 2001-10-30 | 2003-05-08 | Tokyo Metropolitan Organization For Medical Research | Animal transgenique a gene hcv |
| WO2005021792A1 (ja) * | 2003-08-28 | 2005-03-10 | Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. | 抗ｃｄ８１抗体を有効成分として含有する炎症性腸疾患の予防または治療剤 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999018198A1 (en) * | 1997-10-06 | 1999-04-15 | Chiron S.P.A. | Hepatitis c receptor protein cd81 |
-
2000
- 2000-04-24 JP JP2000122486A patent/JP2001299140A/ja active Pending
-
2001
- 2001-04-20 WO PCT/JP2001/003409 patent/WO2001080632A1/ja active Application Filing
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1999018198A1 (en) * | 1997-10-06 | 1999-04-15 | Chiron S.P.A. | Hepatitis c receptor protein cd81 |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2003037081A1 (fr) * | 2001-10-30 | 2003-05-08 | Tokyo Metropolitan Organization For Medical Research | Animal transgenique a gene hcv |
| WO2005021792A1 (ja) * | 2003-08-28 | 2005-03-10 | Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. | 抗ｃｄ８１抗体を有効成分として含有する炎症性腸疾患の予防または治療剤 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2001080632A1 (fr) | 2001-11-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP6573924B2 (ja) | フマリルアセト酢酸ヒドロラーゼ（ｆａｈ）欠損及び免疫不全ラット、並びにそれらの使用 | |
| JP5073836B2 (ja) | ヒト肝細胞が移植されたマウス | |
| KR100656795B1 (ko) | 인간의 ｃ형 간염 바이러스 감염을 받을 수 있는 키메라동물 모델 | |
| US7858843B2 (en) | Gene disruptions, compositions and methods relating thereto | |
| US20120005766A1 (en) | Methods of identifying agents that modulate phenotypes related to disruptions, of a gene encoding PRO235 polypeptide | |
| JP2007518404A (ja) | 新規な遺伝子破壊、これに関する組成物と方法 | |
| JP2008541781A5 (ja) | ||
| JP2003512846A (ja) | ヒト以外の動物におけるヒト肝細胞の増殖 | |
| US20110182883A1 (en) | Novel gene disruptions, compositions and methods relating thereto | |
| US7566812B2 (en) | Transgenic mouse models of hepatitis C virus (HCV) and identification of HCV therapeutics | |
| JP2001299140A (ja) | Ｈｃｖを増幅しうる細胞及び非ヒト動物 | |
| US20160106076A1 (en) | Recombinant non-human mammalian model for hepatitis infection and immunopathogenesis | |
| US6610905B1 (en) | Transgenic mouse model for Kaposi's sarcoma |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| A711 | Notification of change in applicant |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A712 Effective date: 20051026 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20070405 |
|
| A621 | Written request for application examination |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A621 Effective date: 20070405 |
|
| A131 | Notification of reasons for refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A131 Effective date: 20100308 |
|
| A521 | Request for written amendment filed |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A523 Effective date: 20100507 |
|
| A02 | Decision of refusal |
Free format text: JAPANESE INTERMEDIATE CODE: A02 Effective date: 20100713 |