JP2001275633A - Bacteriostatic agent for beverage and beverage having bacteriostatic action - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To prevent a precipitate from forming even when a beverage containing a bacteriostatic agent containing a polyphenol fraction having prescribed effective bacteriostatic actions added thereto is allowed to stand for a while in the beverage. SOLUTION: A precipitate so as to lower the appearance quality of the beverage after adding the bacteriostatic agent thereto is prevented from forming by subjecting the bacteriostatic agent for the beverage to a treatment for cooling the bacteriostatic agent for the beverage, thereby partially solidifying the bacteriostatic agent and then filtering the formed precipitate in a process for separating the polyphenol fraction by a liquid column chromatography for reversed phase separation and thereby producing the bacteriostatic agent for the beverage derived from a natural product.

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、所定のポリフェノ
ールを主成分とする静菌剤を飲料添加剤に加工・処理す
る際の処理方法、並びに、当該処理方法によって得られ
た飲料添加剤を含有する飲料に関する。[0001] The present invention relates to a processing method for processing and processing a bacteriostatic agent containing a predetermined polyphenol as a main component into a beverage additive, and to a beverage additive obtained by the processing method. To drink.

【０００２】[0002]

【従来の技術】赤ワインの常飲者に動脈硬化等の成人病
（生活習慣病）が少ないというフレンチパラドックスと
いう現象がよく知られているが、これは赤ワインに多く
含まれるポリフェノールに起因するものであるというこ
とが提唱されている。また、このポリフェノールが有す
る疾病予防効果は、体内の活性酸素を抑制するという抗
酸化機能に大きく起因するからではないかというような
ことも言われている。2. Description of the Related Art A phenomenon called French paradox, in which a regular drinker of red wine has few adult diseases (lifestyle-related diseases) such as arteriosclerosis, is well known, but this is caused by polyphenols contained in a large amount in red wine. It is proposed that there be. It is also said that the disease prevention effect of the polyphenol is largely attributable to the antioxidant function of suppressing active oxygen in the body.

【０００３】ポリフェノールについて、このような有用
性が指摘されるようになったのは、多くのポリフェノー
ルが備える抗酸化物質としての機能が大いに注目された
ことに起因している。そして、酸化という現象それだけ
について見てみた場合には、それが飲料の品質劣化の一
因ともなっていることから、飲料業界の注目をも集める
ことになり、酸化防止剤としてのポリフェノールを飲料
に添加することが本格的に検討されるようになった。[0003] Such usefulness of polyphenols has come to be pointed out because much attention has been paid to the functions of many polyphenols as antioxidants. And when we look at the phenomenon of oxidation alone, it contributes to the deterioration of the beverage quality, which also attracts the attention of the beverage industry, and polyphenols as an antioxidant are added to beverages. It has come to be considered in earnest.

【０００４】こうした中にあって、いくつかのポリフェ
ノールについては、抗酸化剤としての飲料への添加が本
格的に行われるようになってきたが、そのようになって
きたのは、酸化による飲料の劣化が従来よりも問題視さ
れるようになってきたことに加え、ポリフェノール自体
が天然由来のものであり、健康志向の消費者に受け入れ
られやすいということも主な要因の一つとなっている。[0004] Under such circumstances, some polyphenols have been added to beverages as antioxidants in earnest. One of the main factors is that the deterioration of foods has become more problematic than before, and that polyphenols are naturally derived and easily accepted by health-conscious consumers. .

【０００５】[0005]

【関連する技術】このように、ポリフェノールの抗酸化
物質としての機能とその有用性がよく知られるようにな
ると、いきおい、その抗酸化機能に基づく抽出原料、抽
出方法、応用範囲に関しての研究が中心に進められるよ
うになった。[Related Art] As the functions of polyphenols as antioxidants and their usefulness become well known, research on extraction raw materials, extraction methods, and application ranges based on their antioxidant functions has been focused on. You can now proceed.

【０００６】しかしながら、本発明者らがポリフェノ−
ルに関して鋭意研究を重ねた結果、ポリフェノール（特
に、プロアントシアニジンそれ自体及びプロアントシア
ニジンの近隣に抽出されてくる画分中のポリフェノー
ル）が静菌作用を有するということが明らかになった。[0006] However, the present inventors have found that polypheno-
As a result of diligent studies on phenols, it has been revealed that polyphenols (particularly, proanthocyanidins themselves and polyphenols in fractions extracted in the vicinity of proanthocyanidins) have a bacteriostatic effect.

【０００７】更に、本発明者らは、所定の条件下、ＨＰ
ＬＣでポリフェノールを分離した際に、ある画分が強力
な静菌効果を有することをも併せて見出し、所定のポリ
フェノールを主成分とする静菌剤に関する本発明を完成
するに至り、既に特許出願も行っている（特願平１１‐
３３６９５８号）。即ち、本発明者らは、ポリフェノー
ル画分の更なる分離により、従来よりも有効な静菌作用
を有するポリフェノール画分を見出し、有効かつ有用な
静菌剤及びそれを含有する飲料を既に提案しているので
ある。[0007] Further, the present inventors, under predetermined conditions, HP
When polyphenols were separated by LC, they also found that a certain fraction had a strong bacteriostatic effect, and completed the present invention relating to a bacteriostatic agent containing a predetermined polyphenol as a main component, and already filed a patent application. (Japanese Patent Application Hei 11-
No. 336958). That is, the present inventors have found a polyphenol fraction having a more effective bacteriostatic action than before by further separating the polyphenol fraction, and have already proposed an effective and useful bacteriostatic agent and a beverage containing the same. -ing

【０００８】[0008]

【発明が解決しようとする課題】ところが、上記の静菌
剤及びそれを含有する飲料について鋭意研究を継続した
結果、上記の静菌剤を添加した飲料を暫く放置した場合
には、沈殿が発生してしまい、飲料の外観品質が低下す
る。However, as a result of intensive studies on the above-mentioned bacteriostatic agent and the beverage containing it, if the beverage containing the bacteriostatic agent is left for a while, precipitation occurs. As a result, the appearance quality of the beverage is reduced.

【０００９】この場合において、沈殿が発生して外観品
質が低下するということは、透明容器がメジャーとなっ
ている現状では、軽んじることができない問題である。
また、沈殿が発生するということは、即ち保存性にも問
題があるということにつながり、最終的には飲料用の静
菌剤としての使用に適さないということにもなる。In this case, the fact that the appearance quality is deteriorated due to the occurrence of precipitation is a problem that cannot be neglected under the current situation where transparent containers are the mainstay.
In addition, the occurrence of precipitation leads to a problem in storage stability, and ultimately results in being unsuitable for use as a bacteriostatic agent for beverages.

【００１０】本発明は以上のような課題に鑑みてなされ
たものであり、その目的は、所定の有効な静菌作用を有
するポリフェノール画分を含む静菌剤を添加した飲料に
おいて、これを暫く放置した場合でも沈殿の発生が生じ
ないようにすることにある。[0010] The present invention has been made in view of the above problems, and an object thereof is to provide a beverage containing a bacteriostatic agent containing a polyphenol fraction having a predetermined effective bacteriostatic action, for a while. It is to prevent precipitation from occurring even when left unattended.

【００１１】[0011]

【発明を解決するための手段】以上のような目的を達成
するために本発明者らが鋭意研究を行った結果、上記静
菌剤についてこれを一度冷却をして部分的固化させてか
ら、それを解凍したときに生ずる沈殿をろ過するという
処理を施した場合には、当該処理後の静菌剤を飲料に添
加して暫く放置したとしても沈殿が生じないということ
を見出し、本発明を完成するに至った。Means for Solving the Problems As a result of intensive studies conducted by the present inventors to achieve the above object, the bacteriostatic agent was once cooled and partially solidified, The present inventors have found that when a process of filtering a precipitate formed upon thawing it is performed, the precipitate does not occur even if the bacteriostatic agent after the treatment is added to the beverage and left for a while. It was completed.

【００１２】即ち本発明においては、暫く放置した後に
沈殿が発生しないようにするために有効な処理方法とし
て、上記静菌剤についてこれを一度凍結させてから、そ
れを解凍したときに生ずる沈殿をろ過するという処理を
提供すると共に、当該処理後の静菌剤が添加された保存
性の良い飲料を提供するものである。That is, in the present invention, as an effective treatment method for preventing precipitation after standing for a while, the bacteriostatic agent is frozen once, and the precipitate formed when the bacteriostatic agent is thawed is removed. The present invention provides a process of filtering and a beverage having good storability to which a bacteriostatic agent after the process is added.

【００１３】より具体的には、本発明は、以下のような
飲料及び静菌剤を提供する。More specifically, the present invention provides the following beverages and bacteriostatic agents.

【００１４】（１） 果実、果種等から得られたポリフ
ェノール画分を逆相分離用液体カラムクロマトグラフィ
ーにより分離したときに得られるピークの内のメジャー
なピークの中で、最後に溶出されるピークに相当する成
分を主成分として含む静菌剤を飲料添加剤へと加工・処
理する際の処理方法であって、前記静菌剤を含水エタノ
ールに溶解させ、これを冷却することによって部分的固
化させた後に解凍し、当該解凍後に発生した沈殿を限外
濾過して除去する工程を含むことを特徴とする処理方
法。(1) Among the major peaks obtained when the polyphenol fraction obtained from fruits, fruit seeds, etc. is separated by liquid column chromatography for reverse phase separation, it is eluted last. A processing method for processing and processing a bacteriostatic agent containing a component corresponding to a peak as a main component into a beverage additive, wherein the bacteriostatic agent is dissolved in hydrous ethanol, and this is partially cooled by cooling. A processing method comprising the steps of: thawing after solidification; and ultrafiltration to remove a precipitate generated after the thawing.

【００１５】（２） 果実、果種等から得られたポリフ
ェノール画分を逆相分離用液体カラムクロマトグラフィ
ーにより分離したときに得られるピークの内のメジャー
なピークの中で、ＮＦ膜処理により消失するピークの部
分を主成分として含む静菌剤を飲料添加剤へと加工・処
理する際の処理方法であって、前記静菌剤を含水エタノ
ールに溶解させ、これを冷却することによって部分的固
化させた後に解凍し、当該解凍後に発生した沈殿を限外
濾過して除去する工程を含むことを特徴とする処理方
法。(2) Among the major peaks obtained when the polyphenol fraction obtained from fruits, fruit seeds and the like is separated by liquid column chromatography for reversed phase separation, the major peak disappears due to NF membrane treatment. A processing method for processing and treating a bacteriostatic agent containing a peak portion as a main component into a beverage additive, wherein the bacteriostatic agent is dissolved in aqueous ethanol and cooled to partially solidify the solution. A thawing method after the thawing, and ultrafiltration to remove a precipitate generated after the thawing.

【００１６】（３） 果実、果種等から得られたポリフ
ェノール画分を逆相分離用液体カラムクロマトグラフィ
ーにより分離したときに得られるピークの内のメジャー
なピークの中で、最後のほうに溶出されるピークに属
し、かつ、ＮＦ膜処理により消失するピークの部分を主
成分として含む静菌剤を飲料添加剤へと加工・処理する
際の処理方法であって、前記静菌剤を含水エタノールに
溶解させ、これを冷却することによって部分的固化させ
た後に解凍し、当該解凍後に発生した沈殿を限外濾過し
て除去する工程を含むことを特徴とする処理方法。(3) Among the major peaks obtained when a polyphenol fraction obtained from fruits, fruit seeds and the like is separated by liquid column chromatography for reverse phase separation, the peak is eluted toward the end. A processing method for processing and processing a bacteriostatic agent, which belongs to a peak to be processed and contains a peak portion disappeared by the NF membrane treatment as a main component, into a beverage additive, wherein the bacteriostatic agent is aqueous ethanol. A partially solidified by cooling, followed by thawing, and ultrafiltration to remove precipitates generated after the thawing.

【００１７】（４） 果実、果種等から得られたポリフ
ェノール画分を逆相分離用液体カラムクロマトグラフィ
ーにより分離した場合に、より後に溶出されてくる画分
をより多く含むように製造された静菌剤を飲料添加剤へ
と加工・処理する際の処理方法であって、前記静菌剤を
含水エタノールに溶解させ、これを冷却することによっ
て部分的固化させた後に解凍し、当該解凍後に発生した
沈殿を限外濾過して除去する工程を含むことを特徴とす
る処理方法。(4) When the polyphenol fraction obtained from fruits, fruit seeds and the like is separated by liquid column chromatography for reverse phase separation, it is produced so as to contain more fraction eluted later. A processing method when processing and processing the bacteriostatic agent into a beverage additive, wherein the bacteriostatic agent is dissolved in aqueous ethanol, and then partially solidified by cooling, followed by thawing, followed by thawing. A treatment method comprising a step of removing generated precipitate by ultrafiltration.

【００１８】（５） 前記逆相分離用液体カラムクロマ
トグラフィーはＨＰＬＣであることを特徴とする（１）
から（４）いずれか記載の処理方法。(5) The liquid column chromatography for reverse phase separation is HPLC (1).
To (4).

【００１９】（６） プロアントシアニジンを主成分と
する静菌剤を飲料添加剤へと加工・処理する際の処理方
法であって、前記静菌剤を含水エタノールに溶解させ、
これを冷却することによって部分的固化させた後に解凍
し、当該解凍後に発生した沈殿を限外濾過して除去する
工程を含むことを特徴とする処理方法。(6) A processing method for processing and treating a bacteriostatic agent containing proanthocyanidin as a main component into a beverage additive, wherein the bacteriostatic agent is dissolved in aqueous ethanol.
A processing method comprising the steps of: partially solidifying by cooling, thawing, and ultrafiltration and removing precipitates generated after the thawing.

【００２０】（７） 前記ポリフェノール画分はぶどう
種子から得られたものであることを特徴とする（１）か
ら（５）いずれか記載の静菌剤。(7) The bacteriostatic agent according to any one of (1) to (5), wherein the polyphenol fraction is obtained from grape seeds.

【００２１】（８） 耐熱性好酸性菌に対して静菌作用
を有する静菌剤であることを特徴とする（６）または
（７）記載の静菌剤。(8) The bacteriostatic agent according to (6) or (7), which is a bacteriostatic agent having a bacteriostatic action against heat-resistant acidophilic bacteria.

【００２２】（９） （１）から（６）いずれか記載の
処理方法を経ることによって製造された飲料添加剤。(9) A beverage additive produced by the treatment method according to any one of (1) to (6).

【００２３】（１０） 酸性飲料に対して静菌作用を有
する飲料添加剤であることを特徴とする（９）記載の飲
料添加剤。(10) The beverage additive according to (9), which is a beverage additive having a bacteriostatic action on acidic beverages.

【００２４】（１１） （９）または（１０）いずれか
記載の飲料添加剤を静菌性有効量含有する飲料。(11) A beverage containing the bacteriostatically effective amount of the beverage additive according to (9) or (10).

【００２５】［用語の定義等］「静菌」とは、細菌を殺
傷する作用までもは有しないが、細菌の生育・増殖を抑
制し、細菌の活動に基づく製品飲料の変敗を防止できる
作用を有することをいい、「静菌剤」とは、飲料に添加
された場合に飲料の風味等に悪影響を及ぼすことなく飲
料中で静菌作用を発揮し得るものを意味する。[Definition of terms, etc.] "Bacteriostatic" has no action to kill bacteria, but suppresses the growth and proliferation of bacteria and can prevent deterioration of product beverages based on the activity of bacteria. The term "bacteriostatic agent" refers to a substance capable of exerting a bacteriostatic action in a beverage without adversely affecting the flavor and the like of the beverage when added to the beverage.

【００２６】「酸性飲料」というのは、典型的にはｐＨ
が３．０〜３．５程度の果汁飲料であるが、ｐＨが３．
０〜４．０付近に調整されているスポーツドリンクやア
イソトニック飲料、健康飲料なども含まれる。An “acidic beverage” typically has a pH
Is a fruit juice beverage having a pH of about 3.0 to 3.5.
Sports drinks, isotonic drinks, health drinks, and the like adjusted to around 0 to 4.0 are also included.

【００２７】「耐熱性好酸性菌」というのは、上記のよ
うな「酸性飲料」の中で生育し、増殖する細菌（好酸性
菌）の中でも、「酸性飲料」において一般的に行われて
いる加熱殺菌処理によっても死滅しない耐熱性のものを
意味し、飲料業界において静菌のターゲットとされるも
のである。ここで、好酸性菌の中でも耐熱性のもの(耐
熱性好酸性菌)は芽胞を形成するが、本発明に係る静菌剤
は飲料中に生残した芽胞の発芽による増殖の防止に有効
に作用することが認められる。The term “thermostable acidophilic bacterium” is commonly used in “acidic beverages” among bacteria (acidophiles) that grow and proliferate in the above “acidic beverages”. It does not perish even by heat sterilization, and is a target for bacteriostasis in the beverage industry. Here, among the acidophilic bacteria, those having heat resistance (thermostable acidophilic bacteria) form spores, but the bacteriostatic agent according to the present invention is effective in preventing the growth of spores remaining in the beverage by germination. It is found to work.

【００２８】［ＨＰＬＣ］「逆相分離用液体カラムクロ
マトグラフィー」は、疎水性固定相と親水性移動相の組
み合せにより分離を行うカラムクロマトグラフィーのこ
とを意味するが、これを行う場合には、固定相として非
極性な固体（普通はシリカゲルの表面に疎水性基（炭化
水素鎖）を化学結合した物質）或いは表面が疎水性の合
成高分子を用い、移動相として水または水溶液、或いは
水と良く混合する有機溶媒と水との混合液を用いる。
「逆相分離用液体カラムクロマトグラフィー」その典型
的なものは、オクタデシル基を結合したシリカゲルを充
填し、溶離液として緩衝溶液を使用した「ＨＰＬＣ（高
速液体クロマトグラフィー）」であり、後述の実施例で
もこれを採用している。[HPLC] “Liquid column chromatography for reverse phase separation” means column chromatography in which separation is carried out by a combination of a hydrophobic stationary phase and a hydrophilic mobile phase. A non-polar solid (usually a substance in which a hydrophobic group (hydrocarbon chain) is chemically bonded to the surface of silica gel) or a synthetic polymer having a hydrophobic surface is used as a stationary phase, and water or an aqueous solution or water is used as a mobile phase. Use a mixture of an organic solvent and water that mix well.
A typical example of “liquid column chromatography for reversed phase separation” is “HPLC (high performance liquid chromatography)” using silica gel packed with octadecyl groups and using a buffer solution as an eluent. The example also employs this.

【００２９】［メジャーなピーク］本明細書において
「メジャーなピーク」というのは、数あるピークの中で
も、顕著に目立つものを意味する。「静菌性有効量」
は、静菌剤として使用するポリフェノールや画分の種類
に応じて適宜決定する。[Major Peak] In the present specification, the term "major peak" means a remarkable peak among a number of peaks. `` Bacteriostatically effective amount ''
Is appropriately determined according to the type of polyphenol or fraction used as a bacteriostatic agent.

【００３０】［部分的固化］「部分的固化」というの
は、対象物が完全な凍結体になるのではなく、一部が固
体で一部が液体というような状態を形成していることを
いう。そして、含水エタノールを冷却していくと、この
ような形態が発現する。[Partial solidification] "Partial solidification" means that an object does not become a completely frozen body but forms a state in which a part is solid and a part is liquid. Say. Then, as the aqueous ethanol is cooled, such a form is developed.

【００３１】従って、上記静菌剤を含水エタノールに溶
解させ、発生した沈殿を限外濾過して除去することによ
り得られた濾液を、好ましくは−３０℃から−４℃、更
に好ましくは−２０℃から−７℃程度に冷却すると、完
全な固体状の凍結体になるのではなく、どろっとしたシ
ャーベット状のものを形成した状態となる。かかる状態
にすることを、本明細書においては基本的に「冷却する
ことによって部分的固化させた」と言っている。Therefore, the filtrate obtained by dissolving the bacteriostatic agent in aqueous ethanol and removing the generated precipitate by ultrafiltration is preferably -30 ° C to -4 ° C, more preferably -20 ° C. When cooled to about -7 ° C from 0 ° C, not a completely solid frozen body, but a thick sherbet-like one is formed. This state is basically referred to as "partially solidified by cooling" in this specification.

【００３２】［解凍］「解凍」とは、固体のものに熱を
加えて液体状態にすることをいうが、本明細書において
は、冷却することによって部分的固化された静菌剤を、
固形物が全く残存していない完全な液体状態にすること
を主に意味する。[Thawing] "Thawing" refers to applying heat to a solid to make it into a liquid state. In the present specification, a bacteriostatic agent which has been partially solidified by cooling is used.
It mainly means to make a complete liquid state without any solid matter remaining.

【００３３】［ポリフェノール画分の抽出］ポリフェノ
ールを含有するものであれば、ブドウや茶等、あらゆる
植物を本発明の原料とすることができる。なお、ブドウ
に関しては、特に種子部分については、未利用副産物の
利用ともなるため、種子部分を利用するのも得策であ
る。なお、種子部分については、有用なポリフェノール
が多く含有されていることも、当該有用なポリフェノー
ルを効率良く抽出する方法も、様々な研究がなされ、本
発明者らによっても知見されている（特願平１１−２０
９５７８号）。[Extraction of Polyphenol Fraction] Any plant such as grape or tea can be used as a raw material of the present invention as long as it contains a polyphenol. In the case of grapes, especially for the seed portion, since unused by-products are also used, it is also advisable to use the seed portion. In addition, various studies have been conducted on the seed portion, which contains a large amount of useful polyphenols, and a method for efficiently extracting the useful polyphenols, and the present inventors have also found out (see, for example, Japanese Patent Application Laid-Open No. H10-163,837). Flat 11-20
9578).

【００３４】ポリフェノール画分の抽出は水やエタノー
ル等を溶媒として行う。なお、その後、抽出物の精度を
高めるべく、適宜、酵素の添加や遠心分離等を行うこと
も可能である。The extraction of the polyphenol fraction is performed using water, ethanol or the like as a solvent. After that, in order to increase the accuracy of the extract, it is possible to appropriately add an enzyme, centrifuge, or the like.

【００３５】［限外濾過］本発明における「限外濾過」
は、いわゆる「膜濾過」の一種であり、基本的には分子
量１０万以上のものを、好ましくは分子量８万以上のも
のを、より好ましくは分子量７万以上のものを、また場
合によっては分子量５万以上のものを除く限外濾過のこ
とを意味する。[Ultrafiltration] "Ultrafiltration" in the present invention
Is a kind of so-called "membrane filtration", and basically has a molecular weight of 100,000 or more, preferably a molecular weight of 80,000 or more, more preferably a molecular weight of 70,000 or more, and in some cases, a molecular weight of 70,000 or more. It means ultrafiltration excluding those of 50,000 or more.

【００３６】ここで、分子量１０万以上のものを除く濾
過処理を行った場合には沈殿の発生を十分に防止させる
ことができず、この一方で、分子量２万以上のものを除
く濾過処理を行った場合には、静菌作用を有する有効な
ポリフェノールの大部分（半分程度）が除去されてしま
うこととなり、沈殿の発生は防止できたとしても、濾過
処理による弊害が顕在化してきてしまうこととなる。Here, when a filtration treatment is performed to remove those having a molecular weight of 100,000 or more, it is not possible to sufficiently prevent the formation of a precipitate. If performed, most (about half) of the effective polyphenols having bacteriostatic action will be removed, and even if the generation of precipitation can be prevented, the adverse effects of the filtration process will become apparent Becomes

【００３７】従って、本発明の目的を達成する上では、
分子量１０万以上のものを除去する一方で、少なくとも
分子量２万以上のポリフェノール、より好ましくは分子
量５万以上のポリフェノールを残すような濾過処理を行
う必要があり、そのような濾過処理としては、限外濾過
処理が適しているのである。Therefore, in order to achieve the object of the present invention,
It is necessary to carry out a filtration treatment to remove at least a polyphenol having a molecular weight of 100,000 or more, while leaving at least a polyphenol having a molecular weight of 20,000 or more, more preferably a polyphenol having a molecular weight of 50,000 or more. External filtration is suitable.

【００３８】なお、本発明において、限外濾過の代わり
に珪藻土（褐色植物）濾過を施した場合には、飲料添加
後の沈殿発生を阻止することはできない。In the present invention, when diatomaceous earth (brown plant) filtration is performed instead of ultrafiltration, it is impossible to prevent the occurrence of precipitation after the addition of the beverage.

【００３９】ここで、「珪藻土濾過」とは、充填された
珪藻土を濾剤として採用した濾過処理のことを意味し、
精製濾過処理の際には一般的に用いられている方法であ
る。珪藻土処理を行うときには、例えば、グラスフィル
ター上に珪藻土を堆積させ、これを十分に充填させた状
態でその上から試料を流し込んで濾過処理をする。Here, "diatomaceous earth filtration" means a filtration treatment employing the filled diatomaceous earth as a filtering agent.
This method is generally used in the purification and filtration treatment. When performing diatomaceous earth processing, for example, diatomaceous earth is deposited on a glass filter, and a sample is poured from above onto the glass filter in a state where the diatomaceous earth is sufficiently filled to perform filtration processing.

【００４０】［ＮＦ膜処理］「ＮＦ膜処理」とは、荷電
型逆浸透膜もしくは荷電型限外濾過膜を利用して濾過す
る処理をいうが、これに使用されるナノ濾過膜は分画分
子量が数百〜数千の荷電膜であり、電解質の透過を阻止
する性質を有する。[NF membrane treatment] "NF membrane treatment" refers to a treatment in which filtration is carried out using a charged reverse osmosis membrane or a charged ultrafiltration membrane. It is a charged membrane having a molecular weight of several hundreds to several thousands, and has a property of preventing permeation of an electrolyte.

【００４１】[0041]

【発明の実施の形態】［ポリフェノール類の検出］ポリ
フェノール類の検出（定質・定量分析）は、常法に従っ
て行う。ポリフェノール類の検出方法としては、例えば
液体クロマトグラフィーによる分析法、酒石酸鉄法、Fo
lin-Denis法などが挙げられる。後に示す実施例におい
ては、ポリフェノール量は全てFolin-Denis法（タンニ
ン酸換算）で測定した。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION [Detection of Polyphenols] Detection of polyphenols (qualitative / quantitative analysis) is carried out according to a conventional method. As a method for detecting polyphenols, for example, an analytical method by liquid chromatography, an iron tartrate method, Fo
lin-Denis method and the like. In the examples described later, the amounts of polyphenols were all measured by the Folin-Denis method (converted to tannic acid).

【００４２】ポリフェノールというものそれ自体は、殆
ど全ての植物に含まれる物質であり、また、ポリフェノ
ール自体の種類も多いことから、研究の当初からその成
分と機能との関係についての実証は難しかった。しか
し、ポリフェノールに対する研究が進むにつれ、このポ
リフェノールの一種であるプロアントシアニジンという
成分が極めて優れた抗酸化機能を有するということが見
出され（例えば、特開平３−２００７８１号公報、特開
平９−２２１４８４号公報、特開平１１−８０１４８号
公報）、現在では、この成分を多く有するブドウ種子か
らの抽出物が、酸化防止剤として食品添加物の一つに登
録され（厚生省告示第120号の既存添加物名簿第367号記
載）、商業的に生産され、販売されるに至っている。Since polyphenol itself is a substance contained in almost all plants, and there are many types of polyphenol itself, it was difficult to prove the relationship between the components and the functions from the beginning of the research. However, as research on polyphenols has progressed, it has been found that a component called proanthocyanidin, which is a kind of polyphenol, has an extremely excellent antioxidant function (for example, JP-A-3-200781, JP-A-9-222484). At present, an extract from grape seeds having a large amount of this component has been registered as one of food additives as an antioxidant (Ministry of Health and Welfare Notification No. 120). (List No. 367), commercially produced and sold.

【００４３】プロアントシアニジンを多く含有するポリ
フェノールとして商業的に入手可能なものとしては、市
販品であるグラヴィノール（商品名）を挙げることがで
き、実施に際しては、これを使用するのが好適である。
グラヴィノール（商品名）は、エタノール／水の混合溶
媒を用いてブドウ種子からプロアントシアニジンを抽出
したものであり、製品として一般に販売されているもの
である。なお、飲料の静菌剤としては、このグラヴィノ
ールをそのまま使用してもよいし、或いは、さらに分離
処理（例えば、先に述べたＨＰＬＣによる分離）を行っ
て使用するようにしてもよい。Commercially available polyphenols containing a large amount of proanthocyanidin include Gravinol (trade name) which is a commercially available product, and it is preferable to use this in practice. .
Gravinol (trade name) is obtained by extracting proanthocyanidin from grape seeds using a mixed solvent of ethanol / water, and is generally sold as a product. In addition, as a bacteriostatic agent for beverages, this gravinol may be used as it is, or may be used after further performing a separation treatment (for example, the above-described separation by HPLC).

【００４４】因みに、グラヴィノール（商品名）の主成
分であるプロアントシアニジンは、ポリフェノールの一
種として、以下の表に示すところに位置付けられる成分
である。Incidentally, proanthocyanidin, which is the main component of Gravinol (trade name), is a component positioned as shown in the following table as a kind of polyphenol.

【００４５】[0045]

【表１】 [Table 1]

【００４６】このプロアントシアニジンという物質は、
カテキンが重合した縮合型タンニンであり、そして、そ
れが備える強い抗酸化作用から、フランスにおいては医
薬品（血管治療薬）として用いられているものでもあ
る。The substance called proanthocyanidins is
Catechin is a polymerized condensed tannin, and because of its strong antioxidant activity, it is also used as a pharmaceutical (vascular treatment) in France.

【００４７】なお、プロアントシアニジンそれ自体に関
しては、コーヒー飲料の品質安定法についての特許出願
がなされてはいるが（特開平８‐２２８６８５号公
報)、それは抗酸化作用を離れたものではなく、むしろ
その抗酸化作用に基づいた品質安定化を図ったものに過
ぎない。As for proanthocyanidin itself, a patent application for a method for stabilizing the quality of coffee beverages has been filed (Japanese Patent Application Laid-Open No. Hei 8-228885), but it does not leave the antioxidant action. It is merely a stabilization of quality based on its antioxidant action.

【００４８】[0048]

【実施例】市販のグラヴィノール（商品名）を、下記の
条件でＨＰＬＣにかけた。EXAMPLES A commercially available Gravinol (trade name) was subjected to HPLC under the following conditions.

【００４９】[0049]

【表２】 [Table 2]

【００５０】その結果、図１に示されるようなクロマト
グラムが得られた。As a result, a chromatogram as shown in FIG. 1 was obtained.

【００５１】また、同じく市販のグラヴィノール（商品
名）を、表２と同等の条件下でＨＰＬＣにかけたとこ
ろ、図２に示されるようなクロマトグラムが得られた。When commercially available Gravinol (trade name) was subjected to HPLC under the same conditions as in Table 2, a chromatogram as shown in FIG. 2 was obtained.

【００５２】更に、液化炭酸ガス抽出を行って得られた
ブドウ種子抽出物（特願平１１−２０９５７８号）を、
図２と同じ条件でＨＰＬＣにかけたところ、図３に示さ
れるようなクロマトグラムが得られた。また、ブドウ種
子から熱水抽出することにより得られたブドウ種子抽出
物についてこれをＮＦ膜処理したものを、図２と同じ条
件でＨＰＬＣにかけたところ、図４に示されるようなク
ロマトグラムが得られた。Further, the grape seed extract (Japanese Patent Application No. 11-209578) obtained by liquefied carbon dioxide extraction was
When subjected to HPLC under the same conditions as in FIG. 2, a chromatogram as shown in FIG. 3 was obtained. The grape seed extract obtained by hot water extraction from grape seeds and subjected to NF membrane treatment was subjected to HPLC under the same conditions as in FIG. 2 to obtain a chromatogram as shown in FIG. Was done.

【００５３】そして更に、お茶から得られたカテキン
を、基本的には図２と同じ条件でＨＰＬＣにかけたとこ
ろ（但し、溶出の速度を遅くするために２０分以降のグ
ラジエント（アセトニトリルの添加量の増分（即ち、溶
離液の極性の下げ方））を適宜小さくするようにした
（表２の下部分の右端参照））、図５に示されるような
クロマトグラムが得られた。Further, the catechin obtained from the tea was subjected to HPLC under basically the same conditions as in FIG. 2 (however, in order to reduce the rate of elution, a gradient after 20 minutes (amount of acetonitrile added). The increment (that is, how to decrease the polarity of the eluent)) was appropriately reduced (see the right end of the lower part of Table 2), and a chromatogram as shown in FIG. 5 was obtained.

【００５４】これらの図から明らかなように、図１に示
されるグラヴィノール（商品名）のＨＰＬＣクロマトグ
ラムでは、メジャーなピークとして、「ピーク１」、
「ピーク２」及び「ピーク３」の３つのピークが得られ
ており、これは図２のものも同様である。As is clear from these figures, the HPLC chromatogram of Gravinol (trade name) shown in FIG.
Three peaks, "Peak 2" and "Peak 3", are obtained, as are those in FIG.

【００５５】そして、この中で最後に溶出されてくるメ
ジャーピークである「ピーク３」と同様のピークは、液
化炭酸ガス抽出を行って得られたブドウ種子抽出物のＨ
ＰＬＣクロマトグラムである図３のものにも見られるが
（図３中の「ピーク３’」）、熱水抽出したものをＮＦ膜
処理した図４や、お茶から得られたカテキンのＨＰＬＣ
クロマトグラムである図５には見られない。The peak similar to the “peak 3” which is the last major peak to be eluted is the H peak of the grape seed extract obtained by liquefied carbon dioxide extraction.
As can be seen in the PLC chromatogram of FIG. 3 (“Peak 3 ′” in FIG. 3), FIG. 4 in which hot water extraction was performed on the NF membrane, and HPLC of catechin obtained from tea.
It is not seen in the chromatogram, FIG.

【００５６】なお、最後に溶出されてくるメジャーピー
クである「ピーク３」（或いは「ピーク３’」）について
は、分子量が高いポリフェノールが多く含有されている
と考えられるため、その実体は、プロアントシアニジン
であろうことが予測されるが、現時点では、確証を得ら
れるまでには至っていない。しかしながら、少なくと
も、最後に溶出されてくるメジャーピークと同程度のプ
ロアントシアニジンが含有されていたということが何ら
かの方法によって検出された場合には、本発明に係る静
菌剤であろうと推測することができる。The major peak "Peak 3" (or "Peak 3 '") eluted last is considered to contain a large amount of polyphenol having a high molecular weight. It is expected that this would be anthocyanidin, but at this time no evidence has been obtained. However, at least, if it is detected by any method that contains the same level of proanthocyanidins as the major peak eluted at the end, it is presumed that it will be the bacteriostatic agent according to the present invention. it can.

【００５７】[0057]

【実施例１】ここでまず、市販のグラヴィノール（商品
名）を、一般的な混濁タイプスポーツ飲料（果汁３％、
可溶性固形分１Ｂｒｉｘ未満、ｐＨ約３．８）、混濁タ
イプ果汁飲料（果汁１０％未満、可溶性固形分７〜８Ｂ
ｒｉｘ、ｐＨ約３．０）、透明タイプ果汁飲料（果汁１
０％未満、可溶性固形分４〜５Ｂｒｉｘ、ｐＨ約３．
２）のそれぞれに添加し、そこに耐熱性好酸性菌２種
（ＤＳＭ2498株（DeutscheSammlung von Microorganism
en und Zellkulturen GmbH）、ＡＴＣＣ49025株（Ameri
can Type Culture Collection）を「胞子数１０００
個／５００ｍｌ ＰＥＴボトル」の割合で接種し、経過
を見た。各試験区の母数は３であり、菌が接種された飲
料は、３７℃で１４日間放置された。EXAMPLE 1 First, a commercially available gravinol (trade name) was used as a general turbid sports drink (3% fruit juice,
Soluble solid content less than 1 Brix, pH about 3.8), cloudy type juice beverage (fruit juice less than 10%, soluble solid content 7-8B)
rix, pH about 3.0), transparent juice beverage (juice 1
Less than 0%, soluble solids 4-5 Brix, pH about 3.
2), and two heat-resistant acidophilic bacteria (DSM2498 strain (Deutsche Sammlung von Microorganism)
en und Zellkulturen GmbH), ATCC49025 strain (Ameri
can Type Culture Collection)
Individuals / 500 ml PET bottles "were inoculated and the progress was monitored. The population of each test plot was 3, and the beverage inoculated with the bacteria was left at 37 ° C. for 14 days.

【００５８】以下の表３に、本実施例に係る抽出物の添
加量（但し、抽出物中に含まれる総ポリフェノールの濃
度に換算してある）を変化させた場合の結果を示す。Table 3 below shows the results obtained when the amount of the extract according to the present example (in terms of the concentration of the total polyphenol contained in the extract) was changed.

【００５９】[0059]

【表３】 [Table 3]

【００６０】この表３では、製品中での菌の増殖及びそ
れに伴う異味・異臭がしたものを＋としている（なお、
表３中、「+」「-」の符号につき、カンマの左３つがＤ
ＳＭ2498株の結果を、カンマの右３つがＡＴＣＣ49025
株の結果を示す）。In Table 3, the growth of the bacteria in the product and the off-flavor and odor associated with the growth are indicated by +.
In Table 3, for the signs of "+" and "-", the left three commas are D
The results of the SM2498 strain show ATCC49025 in the three right commas.
Strain results are shown).

【００６１】この結果により、市販のグラヴィノール
（商品名）においては、ポリフェノール濃度が１０ｐｐ
ｍ以上となるように飲料に混合した場合には、飲料の種
類を問わず、静菌効果があるということが分かる。According to the results, in the case of commercially available Gravinol (trade name), the polyphenol concentration was 10 pp.
It can be seen that when mixed with the beverage so as to be not less than m, there is a bacteriostatic effect regardless of the type of beverage.

【００６２】[0062]

【実施例２】次に、ポリフェノール画分を、上述したよ
うにＨＰＬＣによって分離したときに得られるメジャー
なピーク（「ピーク１」、「ピーク２」及び「ピーク
３」（図１））について、それぞれ静菌効果を比較して
みることとした。そして、そのためにはまず、グラヴィ
ノールをポリフェノール換算０.５％の溶液とし、その
３６ｍｌをＨＰＬＣにより「ピーク１」、「ピーク２」
及び「ピーク３」の３画分に分離した。そして、分離さ
れた各部分について、回収後に濃縮・希釈をして7.2ｍ
ｌとした。ピーク比較による回収率を、以下の表に示
す。Example 2 Next, major peaks ("Peak 1,""Peak2," and "Peak 3" (FIG. 1) obtained when the polyphenol fraction was separated by HPLC as described above) It was decided to compare the bacteriostatic effects. For that purpose, first, gravinol was made into a 0.5% solution in terms of polyphenol, and 36 ml of the solution was analyzed by HPLC for “Peak 1” and “Peak 2”.
And “Peak 3”. Then, each separated part is concentrated and diluted after collection, and
l. The recoveries by peak comparison are shown in the table below.

【００６３】[0063]

【表４】 [Table 4]

【００６４】上記各画分の回収率を考慮し、グラヴィノ
ール（商品名）のポリフェノール換算１０ｐｐｍ添加相
当となるように、各画分を混濁タイプスポーツ飲料に添
加した。この混濁タイプスポーツ飲料を５００ｍｌＰＥ
Ｔボトルに８５℃ホットパック充填後、耐熱性好酸性菌
（ＤＳＭ2498株）を「胞子数１０００個／５００ｍｌＰ
ＥＴボトル」の割合で接種し、閉栓した後に１分３０秒
間転倒保持し、冷却した。In consideration of the recovery rate of each fraction, each fraction was added to a turbid sports drink so as to be equivalent to the addition of Gravinol (trade name) at 10 ppm in terms of polyphenol. 500ml PE
After filling the T bottle with hot pack at 85 ° C, heat-resistant eosinophilic bacterium (DSM2498 strain) was added to “1000 spores / 500mlP
After inoculating at the ratio of "ET bottle", and closing the bottle, it was kept overturned for 1 minute and 30 seconds and cooled.

【００６５】静菌の効果は、３５℃１４日間培養後、製
品液１ｍｌの混釈培養により、菌の増殖の有無で確認し
た。また、いずれの画分が静菌作用を有するのかを一層
明確にするため、単独添加、混合添加の双方を行った。The effect of bacteriostasis was confirmed by the presence or absence of bacterial growth by culturing for 14 days at 35 ° C. and then pour-cultured with 1 ml of the product solution. In order to further clarify which fraction has a bacteriostatic action, both single addition and mixed addition were performed.

【００６６】その結果、下表のような結果が得られた。As a result, the following results were obtained.

【００６７】[0067]

【表５】 [Table 5]

【００６８】この表５では、製品中での菌の増殖があっ
たものを＋としているが、この結果から明らかなよう
に、単独添加、混合添加のいずれにおいても「ピーク
３」の画分が飲料に添加されている場合に、菌の増殖が
抑制されていることが認められた。In Table 5, the case where the bacteria grew in the product was indicated as +, and as is clear from the results, the fraction of “Peak 3” was found to be independent and mixed in both cases. It was found that when added to the beverage, the growth of the bacteria was suppressed.

【００６９】従って、上記実施例１によれば、グラヴィ
ノール（商品名）に静菌作用があるということが立証さ
れ、この実施例２によれば、グラヴィノール（商品名）
を逆相液体カラムクロマトグラフィーによって分離した
ときの最後に溶出される画分の中に静菌作用を備える成
分が含まれているということが明らかになった。Thus, according to Example 1 above, it was proved that Gravinol (trade name) has a bacteriostatic effect, and according to Example 2, Gravinol (trade name) was proved.
It was clarified that a component having a bacteriostatic action was contained in the fraction eluted last when the was separated by reverse phase liquid column chromatography.

【００７０】よって、グラヴィノール（商品名）を逆相
液体カラムクロマトグラフィーによって分離したときに
最後に溶出される画分を常法に従って取り出し、当該画
分の部分を飲料に添加することによって、飲料中におい
て静菌作用を発現させることができることが明らかであ
る。Therefore, the fraction eluted last when Gravinol (trade name) is separated by reversed-phase liquid column chromatography is taken out according to a conventional method, and the fraction is added to the beverage to obtain the beverage. It is clear that bacteriostatic action can be expressed in the medium.

【００７１】[0071]

【実施例３】次に、異なる抽出方法で抽出したブドウ抽
出物、並びに他のポリフェノールの静菌作用について、
それらを相互に比較した。具体的には、（１）水／エタ
ノールの混合溶媒を使用して抽出されたブドウ種子抽出
物であるグラヴィノール（商品名）、（２）液化炭酸ガ
スで抽出されたブドウ種子抽出物、（３）熱水抽出され
たブドウ種子抽出物をＮＦ膜濾過処理したブドウ種子抽
出物、（４）緑茶カテキン製剤、をそれぞれ一般的な混
濁タイプスポーツ飲料（果汁３％、可溶性固形分１Ｂｒ
ｉｘ未満、ｐＨ約３．８）に添加し、そこに耐熱性好酸
性菌（ＤＳＭ2498株）を「胞子数１０００個／５００ｍ
ｌ ＰＥＴボトル」の割合で接種し、経過を見た。各試
験区の母数は２であり、菌が接種された飲料は、３７℃
で１４日間放置された。EXAMPLE 3 Next, the bacteriostatic action of grape extracts extracted by different extraction methods and other polyphenols was described.
They were compared with each other. Specifically, (1) Gravinol (trade name) which is a grape seed extract extracted using a mixed solvent of water / ethanol, (2) a grape seed extract extracted with liquefied carbon dioxide, 3) A grape seed extract obtained by subjecting a grape seed extract extracted with hot water to NF membrane filtration, and (4) a green tea catechin preparation, each of a general turbidity type sports drink (fruit juice 3%, soluble solid content 1Br)
ix, pH about 3.8), and heat-resistant acidophilic bacterium (DSM2498 strain) was added to the mixture at "1000 spores / 500 m
Inoculation was carried out at a ratio of "1 PET bottle" and the progress was monitored. The population of each test plot was 2, and the beverage inoculated with the bacteria was at 37 ° C.
For 14 days.

【００７２】以下の表６に、本実施例に係る抽出物の添
加量（但し、抽出物中に含まれる総ポリフェノールの濃
度に換算してある）を変化させた場合の結果を示す。Table 6 below shows the results when the amount of the extract according to the present example (in terms of the concentration of the total polyphenol contained in the extract) was changed.

【００７３】[0073]

【表６】 [Table 6]

【００７４】この表６では、製品中での菌の増殖及びそ
れに伴う異味・異臭がしたものを＋としている。In Table 6, the growth of the bacteria in the product and the unpleasant odor / odor associated with the growth are indicated by +.

【００７５】この結果から、ブドウ種子抽出物をＮＦ膜
で濾過をした場合には、ブドウ種子抽出物中から静菌作
用が消失してしまうということが分かる。上述したよう
に、これは、最後に溶出されて来る「ピーク３」もしくは
「ピーク３’」に相当するピークが、ＮＦ膜処理を経る
ことによって消失してしまうからであると考えられるた
め、この現象からも、「ピーク３」もしくは「ピーク
３’」の部分に静菌作用があることの事実の裏付けがな
されている。From these results, it can be seen that when the grape seed extract is filtered through the NF membrane, the bacteriostatic action disappears from the grape seed extract. As described above, this is thought to be because the peak corresponding to “Peak 3” or “Peak 3 ′” eluted last disappears through the NF membrane treatment. The phenomenon also supports the fact that the "peak 3" or "peak 3 '" portion has a bacteriostatic effect.

【００７６】同様に、緑茶カテキンに静菌作用が無いの
は、元々「ピーク３」もしくは「ピーク３’」に相当する
ピークが存在しないためであると考えられる。Similarly, it is considered that the reason why green tea catechin has no bacteriostatic action is that a peak corresponding to “Peak 3” or “Peak 3 ′” does not originally exist.

【００７７】[0077]

【実施例４】本発明は、ぶどう種子抽出物（例えばグラ
ヴィノール（商品名））を使用して、以下のようなフロ
ーに従って実施することができる。Embodiment 4 The present invention can be carried out using grape seed extract (for example, Gravinol (trade name)) according to the following flow.

【００７８】[0078]

【表７】 [Table 7]

【００７９】ここで、上記の表７に示されるフローに従
い、グラヴィノール2.5％の含水エタノール溶解液（総
ポリフェノール約1％）にＵＦ20,000の限外濾過膜、Ｕ
Ｆ50,000の限外濾過膜、及びＵＦ100,000の限外濾過膜
を用いて本発明を実施した場合において、得られた静菌
剤を飲料添加剤として飲料（透明タイプ果汁飲料：果汁
１０％未満、可溶性固形分８〜9Brix、pH約3.9）に添加
したものを放置（４８〜１２０時間程度）して沈殿の発
生を見た結果、以下のような結果が得られた（なお、添
加量は、各処理液の飲料への添加濃度で示す）。Here, according to the flow shown in Table 7 above, a UF20,000 ultrafiltration membrane was added to a 2.5% gravinol aqueous ethanol solution (about 1% of total polyphenols).
In the case where the present invention is carried out using an ultrafiltration membrane of F50,000 and an ultrafiltration membrane of UF100,000, the obtained bacteriostatic agent is used as a beverage additive as a beverage (transparent juice juice: juice 10%). , A soluble solid content of 8 to 9 Brix, pH of about 3.9) was allowed to stand (about 48 to 120 hours), and the occurrence of precipitation was observed. As a result, the following results were obtained. Indicates the concentration of each treatment liquid added to the beverage).

【００８０】[0080]

【表８】 [Table 8]

【００８１】この表に示されるように、ＵＦ100,000の
限外濾過膜を用いて本発明を実施した場合には沈殿の発
生が見られたものの、ＵＦ20,000の限外濾過膜及びＵＦ
50,000の限外濾過膜を用いて本発明を実施した場合に
は、いずれも沈殿の発生は見られなかった。As shown in the table, when the present invention was carried out using an ultrafiltration membrane of UF100,000, although precipitation occurred, the ultrafiltration membrane of UF20,000 and the UF of UF20,000 were observed.
When the present invention was carried out using 50,000 ultrafiltration membranes, no precipitation was observed in any case.

【００８２】次に、表７に示されるフローに従い、ＵＦ
20,000の限外濾過膜及びＵＦ50,000の限外濾過膜を用い
て本発明を実施した場合において、得られた静菌剤を飲
料添加剤として飲料(透明タイプ果汁飲料：果汁10％未
満、可溶性固形分８〜９Brix、pH約3.9)に添加した場合
の静菌効果の発現について調べた結果、以下のような結
果が得られた（なお、添加量は、各処理液の飲料への添
加濃度で表す。）。Next, according to the flow shown in Table 7, UF
When the present invention is carried out using a 20,000 ultrafiltration membrane and a UF50,000 ultrafiltration membrane, the obtained bacteriostatic agent is used as a beverage additive in a beverage (clear juice juice: less than 10% juice, soluble As a result of examining the expression of the bacteriostatic effect when added to a solid content of 8 to 9 Brix, pH of about 3.9), the following results were obtained. .).

【００８３】[0083]

【表９】 [Table 9]

【００８４】因みに、各処理液について、これをＨＰＬ
Ｃにかけた結果が図２（未処理の場合）、図６（ＵＦ5
0,000の限外濾過膜の場合）及び図７（ＵＦ20,000の限
外濾過膜の場合）に示されている。Incidentally, for each processing solution, this was
C (FIG. 2 (unprocessed)) and FIG. 6 (UF5
This is shown in FIG. 7 (for a UF20,000 ultrafiltration membrane) and FIG. 7 (for a UF20,000 ultrafiltration membrane).

【００８５】このような表９、並びに図２、図６及び図
７の結果より、ＵＦ20,000の限外濾過膜を使用した場合
にはポリフェノールロスが大きく、静菌作用の低下が見
られるようである。From the results shown in Table 9 and FIGS. 2, 6 and 7, it can be seen that when an ultrafiltration membrane having a UF of 20,000 was used, the polyphenol loss was large and the bacteriostatic action was reduced. It is.

【００８６】[0086]

【発明の効果】以上説明したように、本発明により、所
定のものから所定のポリフェノールを採取し、或いは、
ポリフェノール画分を逆相分離用液体カラムクロマトグ
ラフィーで分離することにより、天然由来の飲料用静菌
剤を製造することができ、この画分を飲料中に混合する
ことにより静菌作用を有する飲料とすることができる
が、この過程において、前記飲料用静菌剤に対して冷却
をして部分的固化後に生じた沈殿を濾過するという処理
を施すことによって、静菌剤添加後の飲料に、当該飲料
の外観品質を低下させるような沈殿の発生を防ぐことが
できるようになる。As described above, according to the present invention, a predetermined polyphenol is collected from a predetermined substance, or
By separating a polyphenol fraction by liquid column chromatography for reverse phase separation, a bacteriostatic agent for beverages of natural origin can be produced, and a beverage having a bacteriostatic action by mixing this fraction in a beverage. In this process, by performing a process of cooling the beverage bacteriostatic agent and filtering a precipitate formed after partial solidification in the process, the beverage after the addition of the bacteriostatic agent, It becomes possible to prevent the occurrence of sediment that lowers the appearance quality of the beverage.

【００８７】これにより、天然由来のポリフェノール含
有性の飲料用静菌剤を添加した飲料を透明容器に安心し
て充填できるようになり、当該飲料の安定性も確保され
る。言い換えれば、本発明により、天然由来のポリフェ
ノール含有性の飲料用静菌剤を好適な飲料添加剤、特に
透明容器に充填された飲料に好適な飲料添加剤を製造す
ることができるようになる。Thus, a beverage containing a naturally-occurring polyphenol-containing beverage bacteriostatic agent can be safely filled in a transparent container, and the stability of the beverage is also ensured. In other words, according to the present invention, a naturally occurring polyphenol-containing bacteriostatic agent for beverages can be produced as a suitable beverage additive, particularly a beverage additive suitable for a beverage filled in a transparent container.

【図面の簡単な説明】[Brief description of the drawings]

【図１】市販のグラヴィノール（商品名）をＨＰＬＣに
かけた結果得られたクロマトグラムを示す図である（表
２参照）。FIG. 1 is a diagram showing a chromatogram obtained as a result of subjecting commercially available Gravinol (trade name) to HPLC (see Table 2).

【図２】市販のグラヴィノール（商品名）を、表２の条
件下でＨＰＬＣにかけた結果得られたクロマトグラムを
示す図である。FIG. 2 is a diagram showing a chromatogram obtained by subjecting commercially available Gravinol (trade name) to HPLC under the conditions shown in Table 2.

【図３】液化炭酸ガス抽出を行って得られたブドウ種子
抽出物を、図２と同じ条件でＨＰＬＣにかけた結果得ら
れたクロマトグラムを示す図である。FIG. 3 is a view showing a chromatogram obtained as a result of subjecting a grape seed extract obtained by liquefied carbon dioxide extraction to HPLC under the same conditions as in FIG. 2;

【図４】ブドウ種子から熱水抽出することにより得られ
たブドウ種子抽出物についてＮＦ膜処理したものを、図
２と同じ条件でＨＰＬＣにかけた結果得られたクロマト
グラムを示す図である。4 is a diagram showing a chromatogram obtained as a result of subjecting a grape seed extract obtained by hot water extraction from grape seeds to NF membrane treatment under HPLC under the same conditions as in FIG. 2;

【図５】お茶から得られたカテキンを、表２の条件（下
部分の右端）でＨＰＬＣにかけた結果得られたクロマト
グラムを示す図である。FIG. 5 is a diagram showing a chromatogram obtained as a result of subjecting catechin obtained from tea to HPLC under the conditions shown in Table 2 (the lower right end).

【図６】冷却することによる部分的固化→解凍→濾過
（ＵＦ50,000の限外濾過膜の場合）を経た静菌剤を図２
と同じ条件でＨＰＬＣにかけた結果を示すチャート図で
ある。FIG. 6 shows the bacteriostatic agent after partial solidification by cooling → thawing → filtration (in the case of an ultrafiltration membrane of UF50,000)
FIG. 7 is a chart showing the results of HPLC under the same conditions as in FIG.

【図７】冷却することによる部分的固化→解凍→濾過
（ＵＦ20,000の限外濾過膜の場合）を経た静菌剤を図２
と同じ条件でＨＰＬＣにかけた結果を示すチャート図で
ある。FIG. 7 shows the bacteriostatic agent after partial solidification by cooling → thawing → filtration (in the case of an ultrafiltration membrane of UF20,000)
FIG. 7 is a chart showing the results of HPLC under the same conditions as in FIG.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き Ｆターム(参考） 4B017 LC07 LC10 LE10 LG20 LK07 LL07 LP14 LP18 4B021 LA07 LW06 MC01 MK05 MP01 MQ04 4B041 LC07 LD10 LE08 LK06 LK26 LK29 LP05  ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page F term (reference) 4B017 LC07 LC10 LE10 LG20 LK07 LL07 LP14 LP18 4B021 LA07 LW06 MC01 MK05 MP01 MQ04 4B041 LC07 LD10 LE08 LK06 LK26 LK29 LP05

Claims (11)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 果実、果種等から得られたポリフェノー
ル画分を逆相分離用液体カラムクロマトグラフィーによ
り分離したときに得られるピークの内のメジャーなピー
クの中で、最後に溶出されるピークに相当する成分を主
成分として含む静菌剤を飲料添加剤へと加工・処理する
際の処理方法であって、 前記静菌剤を含水エタノールに溶解させ、これを冷却す
ることによって部分的固化させた後に解凍し、当該解凍
後に発生した沈殿を限外濾過して除去する工程を含むこ
とを特徴とする処理方法。1. A peak eluted last among major peaks obtained when a polyphenol fraction obtained from a fruit, a seed, or the like is separated by liquid column chromatography for reverse phase separation. A processing method for processing and treating a bacteriostatic agent containing a component corresponding to the main component into a beverage additive, wherein the bacteriostatic agent is dissolved in aqueous ethanol and cooled to partially solidify the solution. A thawing method after the thawing, and ultrafiltration to remove a precipitate generated after the thawing. 【請求項２】 果実、果種等から得られたポリフェノー
ル画分を逆相分離用液体カラムクロマトグラフィーによ
り分離したときに得られるピークの内のメジャーなピー
クの中で、ＮＦ膜処理により消失するピークの部分を主
成分として含む静菌剤を飲料添加剤へと加工・処理する
際の処理方法であって、 前記静菌剤を含水エタノールに溶解させ、これを冷却す
ることによって部分的固化させた後に解凍し、当該解凍
後に発生した沈殿を限外濾過して除去する工程を含むこ
とを特徴とする処理方法。2. Among the major peaks obtained when a polyphenol fraction obtained from fruits, fruit seeds and the like is separated by liquid column chromatography for reversed phase separation, it disappears due to NF membrane treatment. A processing method for processing and processing a bacteriostatic agent containing a peak portion as a main component into a beverage additive, wherein the bacteriostatic agent is dissolved in hydrous ethanol, and then partially solidified by cooling. After thawing, and ultrafiltration to remove precipitates generated after the thawing. 【請求項３】 果実、果種等から得られたポリフェノー
ル画分を逆相分離用液体カラムクロマトグラフィーによ
り分離したときに得られるピークの内のメジャーなピー
クの中で、最後のほうに溶出されるピークに属し、か
つ、ＮＦ膜処理により消失するピークの部分を主成分と
して含む静菌剤を飲料添加剤へと加工・処理する際の処
理方法であって、 前記静菌剤を含水エタノールに溶解させ、これを冷却す
ることによって部分的固化させた後に解凍し、当該解凍
後に発生した沈殿を限外濾過して除去する工程を含むこ
とを特徴とする処理方法。3. A major peak among peaks obtained when a polyphenol fraction obtained from a fruit, a fruit seed, or the like is separated by liquid column chromatography for reverse phase separation. And processing the bacteriostatic agent containing a peak portion that disappears by the NF membrane treatment into a beverage additive, wherein the bacteriostatic agent is added to aqueous ethanol. A processing method comprising the steps of dissolving, partially solidifying by cooling, thawing, and ultrafiltration and removing precipitates generated after the thawing. 【請求項４】 果実、果種等から得られたポリフェノー
ル画分を逆相分離用液体カラムクロマトグラフィーによ
り分離した場合に、より後に溶出されてくる画分をより
多く含むように製造された静菌剤を飲料添加剤へと加工
・処理する際の処理方法であって、 前記静菌剤を含水エタノールに溶解させ、これを冷却す
ることによって部分的固化させた後に解凍し、当該解凍
後に発生した沈殿を限外濾過して除去する工程を含むこ
とを特徴とする処理方法。4. A method for producing a polyphenol fraction obtained from a fruit, a seed, or the like, wherein the polyphenol fraction is separated by liquid column chromatography for reverse phase separation, and is produced so as to contain a larger amount of a fraction eluted later. A method for processing and treating a bactericide into a beverage additive, comprising dissolving the bacteriostatic agent in aqueous ethanol, cooling and partially solidifying the bacteriostatic agent, followed by thawing, followed by thawing after the thawing. A process comprising the step of removing ultrafiltration by precipitation. 【請求項５】 前記逆相分離用液体カラムクロマトグラ
フィーはＨＰＬＣであることを特徴とする請求項１から
４いずれか記載の処理方法。5. The processing method according to claim 1, wherein the liquid column chromatography for reverse phase separation is HPLC. 【請求項６】 プロアントシアニジンを主成分とする静
菌剤を飲料添加剤へと加工・処理する際の処理方法であ
って、 前記静菌剤を含水エタノールに溶解させ、これを冷却す
ることによって部分的固化させた後に解凍し、当該解凍
後に発生した沈殿を限外濾過して除去する工程を含むこ
とを特徴とする処理方法。6. A method for processing and treating a bacteriostatic agent containing proanthocyanidin as a main component into a beverage additive, comprising dissolving the bacteriostatic agent in hydrous ethanol and cooling the same. A processing method comprising the steps of thawing after partial solidification, and ultrafiltration to remove precipitates generated after the thawing. 【請求項７】 前記ポリフェノール画分はぶどう種子か
ら得られたものであることを特徴とする請求項１から５
いずれか記載の静菌剤。7. The method according to claim 1, wherein said polyphenol fraction is obtained from grape seeds.
The bacteriostatic agent according to any one of the above. 【請求項８】 耐熱性好酸性菌に対して静菌作用を有す
る静菌剤であることを特徴とする請求項６または７記載
の静菌剤。8. The bacteriostatic agent according to claim 6, which is a bacteriostatic agent having a bacteriostatic action against a thermostable acidophilic bacterium. 【請求項９】 請求項１から６いずれか記載の処理方法
を経ることによって製造された飲料添加剤。9. A beverage additive produced by the processing method according to claim 1. 【請求項１０】 酸性飲料に対して静菌作用を有する飲
料添加剤であることを特徴とする請求項９記載の飲料添
加剤。10. The beverage additive according to claim 9, which is a beverage additive having a bacteriostatic effect on acidic beverages. 【請求項１１】 請求項９または１０いずれか記載の飲
料添加剤を静菌性有効量含有する飲料。11. A beverage containing the bacteriostatically effective amount of the beverage additive according to claim 9 or 10.