JP2001151699A - Oil adjuvant of vaccine for animal - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide an animal vaccine oil adjuvant which has good emulsion stability and can be injected into an animal without causing an injection reaction such as shock, heat generation and the necrosis, induration and pain of an injected site, and so on. SOLUTION: This oil adjuvant comprising an oil-in-water type emulsion which contains an animal oil and/or a vegetable oil as an oil phase component, a polyhydric alcohol fatty acid ester not having a polyalkylene structure in the molecule as an emulsifier, and a sugar or sugar alcohol fatty acid ester as an immunostimulant, and does not contain an emulsifier having a polyoxyalkylene structure in the molecule.

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、油中水型（以下Ｏ
／Ｗ型という）のオイルアジュバント及びそれらのアジ
ュバントを含む動物用のワクチンに関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to a water-in-oil type (hereinafter referred to as O
/ W type oil adjuvants and vaccines for animals containing these adjuvants.

【０００２】[0002]

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】従来、
免疫を強化するためのオイルアジュバントとして、フロ
イントアジュバントに代表される水中油型（以下Ｗ／Ｏ
型という）アジュバントや、親水性界面活性剤を多く用
いたＯ／Ｗ型アジュバントが主として使用されてきた。
しかしこれらの内、Ｗ／Ｏ型オイルアジュバント製剤は
免疫効果が高い反面、ワクチン注射部位に硬結や腫脹、
疼痛、壊死などを引き起こす事例が少なからずあった。
一方、Ｏ／Ｗ型オイルアジュバント製剤では接種部位の
硬結、腫脹、壊死などを引き起こす例は少ないものの、
乳化剤として、可溶化力が強く細胞障害性が高いポリオ
キシエチレン系の親水性乳化剤含むことから、ワクチン
を接種された動物に強い発熱が認められることが問題と
なっていた。2. Description of the Related Art
As an oil adjuvant for enhancing immunity, an oil-in-water type (hereinafter referred to as W / O) represented by Freund's adjuvant
Adjuvants) and O / W adjuvants using a large amount of a hydrophilic surfactant have been mainly used.
However, among these, W / O type oil adjuvant preparations have high immunity effects, but induration and swelling at the vaccine injection site,
There were not a few cases that caused pain, necrosis, etc.
On the other hand, with O / W type oil adjuvant preparations, although there are few cases which cause induration, swelling, necrosis, etc. of the inoculation site,
Since a polyoxyethylene-based hydrophilic emulsifier having high solubilizing power and high cytotoxicity is contained as an emulsifier, there has been a problem that a strong fever is observed in animals vaccinated.

【０００３】具体的には、（１）特公平８−３２６３９
号公報には、ポリオキシエチレン・ポリオキシプロピレ
ンブロックポリマー及びソルビタンモノオレートを乳化
剤に使用してスクアレンを乳化した、Ｏ／Ｗ型ワクチン
アジュバントが開示されている。また、（２）特開平５
−２５５１１７号公報には、少なくとも１種以上の疎水
性合成リポ多糖、界面活性剤及び水性溶質よりなるＯ／
Ｗ型ワクチンアジュバントが開示されている。また、
（３）特開平６−１７２２１６号公報には、油相成分に
植物油を、界面活性剤としてソルビタン脂肪酸エステル
とポリオキシエチレンソルビタン脂肪酸エステルとを使
用したオイルアジュバントワクチンが開示されている。
更に、（４）特公平６−８１７３１号公報には、無水マ
ンニトール・オレイン酸エステルと流動パラフィンとか
らなるＷ／Ｏ型ワクチンアジュバントが開示されてい
る。しかし、（１）〜（３）は何れもポリオキシアルキ
レン構造を有する界面活性剤による効果を示すものであ
り、また、（４）はＷ／Ｏ型であり、何れも接種した動
物に対して発熱、接種部位の壊死、硬結、疼痛等の接種
反応を生じさせる。Specifically, (1) Japanese Patent Publication No. 8-32639
Japanese Patent Application Publication No. JP-A-2003-115139 discloses an O / W vaccine adjuvant in which squalene is emulsified using a polyoxyethylene / polyoxypropylene block polymer and sorbitan monooleate as emulsifiers. Also, (2) JP-A-5
-255117 discloses an O / O comprising at least one or more hydrophobic synthetic lipopolysaccharides, a surfactant and an aqueous solute.
W-type vaccine adjuvants have been disclosed. Also,
(3) JP-A-6-172216 discloses an oil adjuvant vaccine using vegetable oil as an oil phase component and sorbitan fatty acid esters and polyoxyethylene sorbitan fatty acid esters as surfactants.
Furthermore, (4) Japanese Patent Publication No. 6-81731 discloses a W / O vaccine adjuvant comprising anhydrous mannitol oleate and liquid paraffin. However, (1) to (3) all show the effect of a surfactant having a polyoxyalkylene structure, and (4) is a W / O type, all of which show It causes inoculation reactions such as fever, necrosis at the site of inoculation, induration, and pain.

【０００４】また、一般にＯ／Ｗ型乳化アジュバントを
調製する際には、乳化安定剤として、エタノール、イソ
プロパノール等の水溶性低級アルコール、セロソルブ
類、カービトール類等の水溶性グリコールエーテル（以
上、総称して、水溶性溶剤とする）、グリセリン、ジグ
リセリン、ポリグリセリン、エチレングリコール、プロ
ピレングリコール、１，３−ブタンジオール、低分子ポ
リエチレングリコール等の水溶性多価アルコールが使用
されるが、これらも、接種した動物に対して酩酊、発
熱、硬結、疼痛、等の接種反応を生じさせるので好まし
くないが、これらの水溶性多価アルコールを使用しない
でＯ／Ｗ乳化を行うと、生成した乳化粒子の径が小さく
ならず（１０００ｎｍ以上）、経時的に乳化粒子の合一
を生じ、安定性が低下する。In general, when preparing an O / W type emulsifying adjuvant, water-soluble lower alcohols such as ethanol and isopropanol and water-soluble glycol ethers such as cellosolves and carbitols are generally used as an emulsifying stabilizer. Water-soluble solvents), glycerin, diglycerin, polyglycerin, ethylene glycol, propylene glycol, 1,3-butanediol, water-soluble polyhydric alcohols such as low-molecular-weight polyethylene glycol are used. It is not preferable because it causes inoculation reactions such as drunkenness, fever, induration, pain, etc. on the inoculated animals. However, when O / W emulsification is performed without using these water-soluble polyhydric alcohols, the resulting emulsified particles The diameter does not decrease (1000 nm or more), coalescence of the emulsified particles occurs over time, and the stability decreases. That.

【０００５】このように、従来の動物ワクチン用オイル
アジュバント製剤は、安定性の良い乳化物を得るため
に、生体に対して刺激が強く、接種した動物に対して接
種反応を生じさせやすい成分を使用せざるを得なかっ
た。しかし、動物保護等の観点から、このような問題が
無く、且つ、経時的に安定で、免疫増強作用の良好な動
物用ワクチンのオイルアジュバンドが望まれている。[0005] As described above, the conventional oil adjuvant preparations for animal vaccines contain components that are highly irritating to the living body and easily cause an inoculation reaction to inoculated animals in order to obtain a stable emulsion. I had to use it. However, from the viewpoint of animal protection and the like, an oil adjuvant of an animal vaccine which does not have such a problem, is stable over time, and has a good immunopotentiating effect is desired.

【０００６】[0006]

【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に、本発明は、油相成分が動物油及び／又は植物油（以
下動・植物油という）であり、乳化剤として分子中にポ
リオキシアルキレン構造を持たない多価アルコール脂肪
酸エステルを、免疫増強剤として糖又は糖アルコールの
脂肪酸エステルを含有し、分子中にポリオキシアルキレ
ン構造を持つ乳化剤を含有しない油中水型エマルジョン
からなる動物用ワクチンのオイルアジュバントを提供す
るものである。更に本発明は、該オイルアジュバント
と、少なくとも一種の抗原とを含む、動物用ワクチンを
提供するものである。In order to solve the above-mentioned problems, the present invention provides an oil-phase component comprising animal oil and / or vegetable oil (hereinafter referred to as animal or vegetable oil), and having a polyoxyalkylene structure in the molecule as an emulsifier. Oil adjuvant for animal vaccines comprising a water-in-oil emulsion containing a polyhydric alcohol fatty acid ester without a sugar or a fatty acid ester of a sugar alcohol as an immunopotentiator and containing no emulsifier having a polyoxyalkylene structure in the molecule Is provided. Further, the present invention provides an animal vaccine comprising the oil adjuvant and at least one antigen.

【０００７】本発明のオイルアジュバント及びワクチン
は、ヒトを除く動物に適用されるが、具体的な対象動物
としては、家畜、家禽、愛玩用動物、魚類が挙げられ
る。[0007] The oil adjuvant and the vaccine of the present invention are applied to animals other than humans. Specific target animals include livestock, poultry, pet animals, and fish.

【０００８】[0008]

【発明の実施の形態】（１）動・植物油 油相成分の動物油としては、スクアレン及びスクアラン
等の炭化水素油、牛脂、馬油、ミンク油及び卵黄脂肪油
等のエステル油等が挙げられる。これらの中で、特に、
スクワレン、スクワランが、好適である。スクワレン
は、深海サメの肝油中に存在する炭化水素油であり、ス
クワランとはスクアレンの水素添加物ある。これらは動
物由来であるので、生体適合性及び安全性の面で、特に
好ましい。又、スクアランは、不飽和油であるスクアレ
ンの水素添加物であるので、酸化安定性に優れる。DESCRIPTION OF THE PREFERRED EMBODIMENTS (1) Animal and vegetable oils Animal oils as oil phase components include hydrocarbon oils such as squalene and squalane, and ester oils such as tallow, horse oil, mink oil and egg yolk fatty oil. Of these,
Squalene and squalane are preferred. Squalene is a hydrocarbon oil present in deep-sea shark liver oil, and squalane is a hydrogenated product of squalene. Since these are derived from animals, they are particularly preferable in terms of biocompatibility and safety. Further, squalane is a hydrogenated product of squalene, which is an unsaturated oil, and therefore has excellent oxidation stability.

【０００９】また油相成分の植物油としては、アボガド
油、オリーブ油、ゴマ油、コメヌカ油、トウモロコシ胚
芽油、小麦胚芽油、サフラワー油、ダイズ油、トウモロ
コシ油、ナタネ油、パーム油、ククイナッツ油、マカデ
ミアナッツ油、月見草油等のトリグリセライド、ホホバ
油等のロウエステルが挙げられる。同様に、オリーブオ
イルの不ケン化物中に存在する炭化水素油である、植物
起源のオリーブスクワレン及びオリーブスクワランも、
好適に使用できる。[0009] Vegetable oils as oil phase components include avocado oil, olive oil, sesame oil, rice bran oil, corn germ oil, wheat germ oil, safflower oil, soybean oil, corn oil, rapeseed oil, palm oil, kuku nut oil, macadamia nut Oil, triglycerides such as evening primrose oil, and wax esters such as jojoba oil. Similarly, olive squalene and olive squalane of vegetable origin, which are hydrocarbon oils present in unsaponifiable olive oil,
It can be suitably used.

【００１０】さらには、上記した動・植物油のうちエス
テル油を、低級アルコール又は高級アルコールとエステ
ル交換を行い、アルコール脂肪酸エステルとした油も好
適に使用できる。具体的には、オレイン酸エチル、オレ
イン酸オレイルなどのアルコール脂肪酸エステル等が挙
げられる。[0010] Further, among the above-mentioned animal and vegetable oils, ester oils are transesterified with lower alcohols or higher alcohols to obtain alcohol fatty acid esters. Specific examples include alcohol fatty acid esters such as ethyl oleate and oleyl oleate.

【００１１】これらの動・植物油のうち構造中に不飽和
結合を多く含むもの、具体的には、動物油では、スクワ
レン、卵黄脂肪油等、植物油では、オリーブスクワレ
ン、ククイナッツ油、マカデミアナッツ油、月見草油、
ローズヒップ油等は、酸化に対して不安定であるので、
抗酸化剤を添加することで、本発明に、好適に使用でき
る。好ましい抗酸化剤としては、ビタミンＥ類、ビタミ
ンＡ類、ブチルヒドロキシアニソール、ｐ−ヒドロキシ
アニソール、ジブチルヒドロキシトルエン、没食子酸プ
ロピル、パルミチン酸アスコルビル、ステアリン酸アス
コルビル等の油溶性抗酸化剤、アスコルビン酸、カテキ
ン類、エリソルビン酸、エリソルビン酸ナトリウム等の
水溶性抗酸化剤が挙げられる。これらの抗酸化剤は、オ
イルアジュバント調製において、油相成分と混合して、
あるいは、使用する水に予め溶解しておいて、使用する
ことができる。Among these animal / vegetable oils, those containing a large amount of unsaturated bonds in the structure, specifically, squalene, egg yolk fatty oil, etc. for animal oils, olive squalene, kukui nut oil, macadamia nut oil, evening primrose oil for vegetable oils ,
Rosehip oil is unstable against oxidation,
By adding an antioxidant, it can be suitably used in the present invention. Preferred antioxidants include vitamin Es, vitamins A, butylhydroxyanisole, p-hydroxyanisole, dibutylhydroxytoluene, propyl gallate, oil-soluble antioxidants such as ascorbyl palmitate and ascorbyl stearate, ascorbic acid, Examples include water-soluble antioxidants such as catechins, erythorbic acid, and sodium erythorbic acid. These antioxidants are mixed with an oil phase component in the preparation of an oil adjuvant,
Alternatively, it can be used after being dissolved in water to be used in advance.

【００１２】本発明のＯ／Ｗ型オイルアジュバント中の
好ましい動・植物油の配合量は、アジュバント製剤全体
に対して重量比で、好ましくは１０〜８０％、より好ま
しくは２０〜８０％、特に好ましくは２０〜５０％であ
る。この範囲において、アジュバント効果の持続性やエ
マルジョンの安定性が良好となる。The preferred amount of the animal / vegetable oil in the O / W type oil adjuvant of the present invention is preferably 10 to 80%, more preferably 20 to 80%, particularly preferably 20 to 80% by weight based on the whole adjuvant preparation. Is 20 to 50%. Within this range, the persistence of the adjuvant effect and the stability of the emulsion will be good.

【００１３】（２）乳化剤 本発明のオイルアジュバントでは、乳化剤として分子中
に、ポリオキシエチレン（以下ＰＯＥという）構造、ポ
リオキシプロピレン（以下ＰＯＰという）構造等のポリ
オキシアルキレン構造を持たない多価アルコール脂肪酸
エステルが使用される。かかる多価アルコール脂肪酸エ
ステルは、多価アルコールと脂肪酸を、カセイソーダ等
のアルカリ触媒下、又は、パラトルエンスルホン酸等の
酸性触媒下、２００〜２５０℃で、公知の方法で脱水縮
合して製造されたエステルである。エステル反応後、ろ
過等の精製工程を経て触媒等を除去し、本発明に供せら
れる。好ましい多価アルコールとしては、ソルビタン、
ソルビトール、イソソルバイト等のソルビトール類及び
分子内脱水物、グリセリン、ジグリセリン、テトラグリ
セリン、ヘキサグリセリン、ペンタグリセリン、デカグ
リセリン等のグリセリン及びポリグリセリン類、ペンタ
エリスリトール、ショ糖、アルキルグルコシド及びポリ
アルキルグルコシド類等が挙げられる。好ましい脂肪酸
類としては、オクタン酸、デカン酸、ラウリン酸、ミリ
スチン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、イソステアリ
ン酸等の飽和脂肪酸、パルミトレイン酸、オレイン酸、
リノール酸、リノレン酸等の不飽和脂肪酸、１２−ヒド
ロキシステアリン酸、リシノレイン酸等の水酸基を含む
脂肪酸及びそれらの脱水縮合物等が挙げられる。(2) Emulsifier In the oil adjuvant of the present invention, a polyvalent having no polyoxyalkylene structure such as a polyoxyethylene (hereinafter referred to as POE) structure or a polyoxypropylene (hereinafter referred to as POP) structure in a molecule as an emulsifier. Alcohol fatty acid esters are used. Such a polyhydric alcohol fatty acid ester is produced by subjecting a polyhydric alcohol and a fatty acid to dehydration condensation under a known method at 200 to 250 ° C. under an alkaline catalyst such as caustic soda or an acidic catalyst such as paratoluenesulfonic acid. Ester. After the ester reaction, the catalyst and the like are removed through a purification step such as filtration, and the resulting product is used in the present invention. Preferred polyhydric alcohols are sorbitan,
Sorbitols such as sorbitol and isosorbite and intramolecular dehydrates, glycerin and polyglycerins such as glycerin, diglycerin, tetraglycerin, hexaglycerin, pentaglycerin and decaglycerin, pentaerythritol, sucrose, alkylglucoside and polyalkylglucoside And the like. Preferred fatty acids include octanoic acid, decanoic acid, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, saturated fatty acids such as isostearic acid, palmitoleic acid, oleic acid,
Examples include unsaturated fatty acids such as linoleic acid and linolenic acid, fatty acids containing a hydroxyl group such as 12-hydroxystearic acid and ricinoleic acid, and dehydration condensates thereof.

【００１４】乳化剤としての多価アルコール脂肪酸エス
テルの好ましい極性は、ＨＬＢで９．０〜１８．０、好
ましくは、９．０〜１６．０、より好ましくは、１０．
０〜１６．０の範囲である。ＨＬＢが９．０未満である
と、乳化剤の親水性が小さすぎて、Ｏ／Ｗ型の乳化製剤
を調製できない。ＨＬＢが１８．０を超えると、乳化剤
の親水性が高すぎ、油/水の界面に乳化剤が集合するこ
となく、単独で水に分散してしまい、好ましい乳化性能
を発揮せず、結果的に、Ｏ／Ｗ型の乳化製剤を調製でき
ない。The preferred polarity of the polyhydric alcohol fatty acid ester as the emulsifier is HLB 9.0 to 18.0, preferably 9.0 to 16.0, more preferably 10.
It is in the range of 0 to 16.0. If the HLB is less than 9.0, the hydrophilicity of the emulsifier is too small to prepare an O / W emulsion preparation. When the HLB exceeds 18.0, the hydrophilicity of the emulsifier is too high, the emulsifier does not aggregate at the oil / water interface, and is dispersed alone in water. , O / W emulsion preparations cannot be prepared.

【００１５】乳化剤として特に好ましい多価アルコール
脂肪酸エステルとしては、ジグリセリン、テトラグリセ
リン、ヘキサグリセリン、ペンタグリセリン、デカグリ
セリン等のポリグリセリン類と上記の飽和脂肪酸、不飽
和脂肪酸、水酸基を含む脂肪酸及びそれらの脱水縮合物
とのエステル（以下、ポリグリセリン脂肪酸エステ
ル）、及び、ショ糖と上記脂肪酸とのエステル（以下、
ショ糖脂肪酸エステル）である。これらは、上記の好ま
しいＨＬＢの範囲に調整され、本発明に供せられる。ま
た、これらポリグリセリン脂肪酸エステルとショ糖脂肪
酸エステルは、それぞれ単独で又は混合して使用され
る。両者の混合比は、特に制限がない。Particularly preferred polyhydric alcohol fatty acid esters as emulsifiers include polyglycerols such as diglycerin, tetraglycerin, hexaglycerin, pentaglycerin, decaglycerin and the above-mentioned saturated fatty acids, unsaturated fatty acids, fatty acids containing hydroxyl groups, and the like. (Hereinafter referred to as polyglycerin fatty acid ester) and ester of sucrose with the above fatty acid (hereinafter referred to as polyglycerin fatty acid ester).
Sucrose fatty acid ester). These are adjusted to the above-mentioned preferred HLB range and provided to the present invention. These polyglycerin fatty acid esters and sucrose fatty acid esters are used alone or in combination. The mixing ratio of the two is not particularly limited.

【００１６】本発明の乳化剤の添加量は、動・植物油に
対して重量比で、好ましくは１．０〜５０．０％、より
好ましくは１．０〜３０．０％、特に好ましくは５．０
〜３０．０％である。この範囲内において、良好な乳化
安定性が得られる。The addition amount of the emulsifier of the present invention is preferably 1.0 to 50.0%, more preferably 1.0 to 30.0%, particularly preferably 5. 0
３30.0%. Within this range, good emulsion stability can be obtained.

【００１７】（３）免疫増強剤 本発明では、免疫増強剤として糖又は糖アルコールの脂
肪酸エステルが用いられる。糖及び糖アルコールの脂肪
酸エステルとしては、グルコース、マンノース、ラクト
ース、フルクトース等の単糖類及びマンニトール、ソル
ビトール、キシリトール等の糖アルコール類（それらの
分子内脱水物を含む）と、脂肪酸とのエステルが挙げら
れる。好ましい脂肪酸としては、オクタン酸、デカン
酸、ラウリン酸、ミリスチン酸、パルミチン酸、ステア
リン酸、イソステアリン酸等の飽和脂肪酸、パルミトレ
イン酸、オレイン酸、リノール酸、リノレン酸等の不飽
和脂肪酸、１２−ヒドロキシステアリン酸、リシノレイ
ン酸等の水酸基を含む脂肪酸及びそれらの脱水縮合物等
が挙げられる。(3) Immunity Enhancer In the present invention, a sugar or a fatty acid ester of a sugar alcohol is used as the immunoenhancement agent. Examples of the fatty acid esters of sugars and sugar alcohols include esters of monosaccharides such as glucose, mannose, lactose and fructose and sugar alcohols such as mannitol, sorbitol and xylitol (including their intramolecular dehydrates) with fatty acids. Can be Preferred fatty acids include saturated fatty acids such as octanoic acid, decanoic acid, lauric acid, myristic acid, palmitic acid, stearic acid, isostearic acid, unsaturated fatty acids such as palmitoleic acid, oleic acid, linoleic acid, linolenic acid, and 12-hydroxy. Fatty acids containing a hydroxyl group such as stearic acid and ricinoleic acid, and dehydration condensates thereof, and the like.

【００１８】免疫増強剤として用いられる糖及び糖アル
コールの脂肪酸エステルは、ＨＬＢが９以下、特に８〜
１のものが好ましい。The sugar ester and sugar alcohol fatty acid ester used as the immunopotentiator have an HLB of 9 or less, especially 8 to
One is preferred.

【００１９】これら免疫増強剤の配合量は、動・植物油
に対して重量比で、好ましくは０．５〜２０％、より好
ましくは、１．０〜２０．０％、特に好ましくは、１．
０〜１０．０％である。この範囲において良好な免疫賦
活性能が得られ、また乳化状態も良好となる。また、免
疫増強剤はこの範囲内で、全Ｏ／Ｗ型オイルアジュバン
ト中に１〜５ｗ／ｖ％となるように配合するのが好まし
い。The compounding amount of these immunopotentiators is preferably 0.5 to 20%, more preferably 1.0 to 20.0%, and particularly preferably 1.
0 to 10.0%. Within this range, good immunostimulating ability is obtained, and the emulsified state is also good. In addition, it is preferable that the immunopotentiator is blended so as to be 1 to 5 w / v% in all the O / W type oil adjuvants within this range.

【００２０】（４）乳化安定剤 本発明のＯ／Ｗ型オイルアジュバントには、その乳化安
定性を向上させる目的で、更に単糖類、２糖類及び糖ア
ルコールから選ばれる１種以上を、乳化安定剤として配
合できる。(4) Emulsion stabilizer The O / W type oil adjuvant of the present invention further comprises one or more selected from monosaccharides, disaccharides and sugar alcohols for the purpose of improving the emulsion stability. It can be formulated as an agent.

【００２１】これらは、Ｏ／Ｗ型オイルアジュバントを
調製する際に、乳化安定剤として一般的に使用される水
溶性多価アルコールに替えて配合されるものであり、こ
れら単糖類、２糖類、糖アルコール類は、接種した動物
に対して酩酊、発熱、接種部位の壊死、硬結、疼痛等の
接種反応を生じさせることがなく、Ｏ／Ｗ型オイルアジ
ュバントの乳化粒子径を好ましい範囲（後に記述）に調
整することで、安定なＯ／Ｗ型オイルアジュバントが調
製できる。These are used instead of water-soluble polyhydric alcohols generally used as emulsion stabilizers when preparing O / W type oil adjuvants. These monosaccharides, disaccharides, The sugar alcohols do not cause inoculation reactions such as drunkenness, fever, necrosis of the inoculation site, induration, pain, etc., in the inoculated animals, and the emulsion particle size of the O / W type oil adjuvant is within a preferred range (described later). ), A stable O / W type oil adjuvant can be prepared.

【００２２】好ましい単糖類としては、トリオース、テ
トロース、ペントース、ヘキソース、ヘプトース、オク
トース、ノノース、デコースのうち、いずれも好適に使
用できる。具体的には、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコー
ス、Ｄ−マンノース、Ｄ−ガラクトース、Ｄ−フルクト
ース等が挙げられる。好ましい２糖類としては、ショ
糖、ラクトース、マルトース、トレハロース等が挙げら
れる。好ましい糖アルコールとしては、アルドース又は
ケトースのカルボニル基を還元して得られる鎖状の多価
アルコールと、環状アルコールであるイノシトールが挙
げられる。具体的には、ソルビトール、ソルビタン、イ
ソソルバイト、マンニトール、キシリトール、イノシト
ール等が挙げられる。As preferred monosaccharides, any of triose, tetroose, pentose, hexose, heptose, octose, nonose and decose can be suitably used. Specific examples include D-xylose, D-glucose, D-mannose, D-galactose, D-fructose, and the like. Preferred disaccharides include sucrose, lactose, maltose, trehalose and the like. Preferred sugar alcohols include linear polyhydric alcohols obtained by reducing the carbonyl group of aldose or ketose, and inositol, which is a cyclic alcohol. Specific examples include sorbitol, sorbitan, isosorbite, mannitol, xylitol, inositol and the like.

【００２３】これらの乳化安定剤の配合量は、本発明の
Ｏ／Ｗ型オイルアジュバント中に、少なくとも５．０
％、更に５．０〜５０％、特に１０．０〜５０．０％
（重量基準）であるのが好ましい。この範囲であると、
好ましい安定化効果を発揮でき、オイルアジュバントの
粘度も適正となり、注射等の際に、作業性も良好とな
る。The content of these emulsion stabilizers is at least 5.0 in the O / W type oil adjuvant of the present invention.
%, Further 5.0 to 50%, especially 10.0 to 50.0%
(Based on weight). Within this range,
A favorable stabilizing effect can be exhibited, the viscosity of the oil adjuvant becomes appropriate, and the workability at the time of injection or the like becomes good.

【００２４】本発明のＯ／Ｗ型オイルアジュバントは、
公知の乳化方法、乳化機械で調製できる。好ましい方法
は、動・植物油、免疫増強剤及び乳化剤の３成分、ある
いはこれらと更に必要に応じて配合される乳化安定剤の
４成分を、予め、室温で混合しておき、この混合物を、
水相へ、ホモミキサー又はパドルミキサー等で撹拌しな
がら、徐々に添加することで調製できる。又、上記混合
物と水を同時に仕込み、撹拌・混合しても調製できる。
乳化安定剤は、予め、水相へ溶解しておいても良い。そ
の際の温度は、室温〜８０℃、好ましくは、室温〜５０
℃である。又、動・植物油、免疫増強剤、乳化剤を同時
に水相へ添加し、超音波乳化機等の大きい機械力を利用
して調製してもよい。調製した乳化物の安定性を更に向
上させる目的で、乳化後、高圧ホモジナイザーで処理す
ることもできる。The O / W type oil adjuvant of the present invention comprises:
It can be prepared by known emulsification methods and emulsification machines. A preferred method is to previously mix three components of animal and vegetable oils, an immune enhancer and an emulsifier, or four components of an emulsifier and a further emulsifier, if necessary, at room temperature.
It can be prepared by gradually adding to the aqueous phase while stirring with a homomixer or a paddle mixer. Alternatively, it can be prepared by simultaneously charging the above mixture and water, stirring and mixing.
The emulsion stabilizer may be previously dissolved in the aqueous phase. The temperature at that time is from room temperature to 80 ° C, preferably from room temperature to 50 ° C.
° C. Alternatively, animal and vegetable oils, an immune enhancer, and an emulsifier may be simultaneously added to the aqueous phase, and prepared using a large mechanical force such as an ultrasonic emulsifier. In order to further improve the stability of the prepared emulsion, it can be treated with a high-pressure homogenizer after emulsification.

【００２５】本発明のＯ／Ｗ型オイルアジュバントは、
乳化粒子径が、１０００ｎｍ以下、好ましくは、７００
ｎｍ以下、より好ましくは、５００ｎｍ以下である。こ
の範囲において乳化状態の経時安定性が良好で、特に、
抗原（ワクチン原体）と混合した際、乳化破壊の抑制に
優れる。The O / W type oil adjuvant of the present invention comprises:
The emulsified particle diameter is 1000 nm or less, preferably 700 nm
nm or less, more preferably 500 nm or less. The stability over time of the emulsified state is good in this range, especially,
When mixed with an antigen (vaccine drug substance), it is excellent in suppressing emulsification destruction.

【００２６】本発明のＯ／Ｗ型オイルアジュバントに抗
原（ワクチン原体）を配合する場合、好ましい配合量は
５０〜８０ｖ／ｖ％である。好ましい抗原（ワクチン原
体）は、ウイルス粒子、細菌可溶化抗原、可溶性蛋白
質、蛋白質可溶化抗原などの粒子径の小さい、好ましく
は平均粒子径２００ｎｍ以下の抗原である。When the antigen (vaccine) is blended with the O / W type oil adjuvant of the present invention, the preferred blending amount is 50 to 80 v / v%. Preferred antigens (vaccine antigens) are antigens having a small particle diameter, preferably an average particle diameter of 200 nm or less, such as virus particles, bacterial solubilized antigens, soluble proteins, and protein solubilized antigens.

【００２７】本発明のＯ／Ｗ型オイルアジュバントと抗
原（ワクチン原体）は、次の方法で混合され、ワクチン
製剤を得ることができる。例えば、油相成分５０ｖ／ｖ
％を含むアジュバント乳剤を使用する場合は、無菌的に
調製された本アジュバント乳剤とワクチン原液を等量混
合することにより、２５％の油相成分を含有するＯ／Ｗ
型アジュバントワクチンを簡単に製造できる。The O / W oil adjuvant of the present invention and an antigen (vaccine) are mixed by the following method to obtain a vaccine preparation. For example, the oil phase component 50 v / v
% Of the adjuvant emulsion containing 25% of an oil phase component by mixing equal amounts of the aseptically prepared adjuvant emulsion and the vaccine stock solution.
Type adjuvant vaccine can be easily produced.

【００２８】本発明により得られたワクチン製剤は、２
７ゲージの注射針でも注射可能であり、皮下、皮内、筋
肉内はもとより、アジュバントの安全性が高いため、使
用する油相成分、抗原の組み合わせを選ぶことで静脈内
注射によっても動物に接種することができる。The vaccine preparation obtained according to the present invention comprises 2
Injection is possible with a 7-gauge injection needle, and because of the high safety of adjuvants as well as subcutaneous, intradermal, and intramuscular, the animals can be inoculated intravenously by selecting a combination of oil phase components and antigens to be used. can do.

【００２９】[0029]

【発明の効果】本発明によれば、免疫強化力に優れ、乳
化安定性が良好でかつ動物に注射するのに十分低粘度で
あり、しかも、接種した動物に対して接種時のショック
症状、発熱、接種部位の壊死、硬結、疼痛等の接種反応
が生じない動物用ワクチンのオイルアジュバント及び動
物用ワクチンが得られる。Industrial Applicability According to the present invention, the immunity-enhancing power is excellent, the emulsification stability is good, the viscosity is low enough to be injected into animals, and the inoculated animals have shock symptoms upon inoculation, Thus, an oil adjuvant for an animal vaccine and an animal vaccine that do not cause an inoculation reaction such as fever, necrosis at the site of inoculation, induration, and pain can be obtained.

【００３０】[0030]

【実施例】実施例１ Ｏ／Ｗ型オイルアジュバントの
調製 容量２リッターのガラス製真空乳化機（ホモミキサー及
びパドル式攪拌装置、温度計、温度調節器、真空ポン
プ、滴下装置が付属した）に、表１、２の処方に示す組
成比で、全量が１ｋｇになるように原料を仕込み、５０
ミリＨｇの減圧下、５０℃、８０００回転／分で３０分
間攪拌を行い、それぞれの乳化物（Ｏ／Ｗ型オイルアジ
ュバント）を得た。Example 1 Preparation of O / W type oil adjuvant A 2 liter glass vacuum emulsifier (homomixer and paddle type stirrer, thermometer, temperature controller, vacuum pump, dropping device was attached). The raw materials were charged so that the total amount was 1 kg at the composition ratios shown in the formulations of Tables 1 and 2, and 50
The mixture was stirred at 8000 rpm for 30 minutes at a reduced pressure of milliHg at 50 ° C. to obtain each emulsion (O / W type oil adjuvant).

【００３１】得られたＯ／Ｗ型オイルアジュバントの安
定性は、５０℃±０．２℃の恒温槽中に、１ヶ月間保管
して、外観を観察し、下記の基準で評価した。 〇：水相の分離が確認されず、均一 △：水相の分離容積が、全体の１０％未満 ×：水相の分離容積が、全体の１０％以上The stability of the obtained O / W type oil adjuvant was stored in a thermostat at 50 ° C. ± 0.2 ° C. for one month, observed for its appearance, and evaluated according to the following criteria. 〇: Separation of aqueous phase was not confirmed, uniform △: Separation volume of aqueous phase was less than 10% of the whole ×: Separation volume of aqueous phase was 10% or more of the whole

【００３２】[0032]

【表１】 [Table 1]

【００３３】[0033]

【表２】 [Table 2]

【００３４】実施例２（猫免疫試験） 実施例１で調製されたＯ／Ｗ型オイルアジュバントの効
果と安全性を確認する目的で、アジュバントなしでは通
常殆ど抗体価が上昇しない猫ヘルペスウイルスを抗原と
して、猫を免疫し、中和抗体の測定を行うとともに、注
射後の発熱と注射部位の剖検を行った。Example 2 (Cat immunity test) In order to confirm the effect and safety of the O / W type oil adjuvant prepared in Example 1, feline herpesvirus, whose antibody titer usually hardly increases without an adjuvant, was used as an antigen. The cats were immunized, neutralizing antibodies were measured, and fever after injection and necropsy of the injection site were performed.

【００３５】ウイルス原液（１０^8.2ＰＦＵ／ｍＬ）を
実施例１記載の各処方で調製したアジュバントと等量混
合して試作ワクチンを調製した。３ヶ月齢の猫の頸部皮
下にこれらの試作ワクチンを３週間間隔で２回１ｍＬ宛
注射し、ウイルスに対する中和抗体の推移を測定すると
ともに、継時的に剖検してワクチン注射部位の組織反応
を確認した。An equal amount of the virus stock solution ( ^108.2 PFU / mL) was mixed with an adjuvant prepared according to each formulation described in Example 1 to prepare a trial vaccine. Three-month-old cats were subcutaneously injected subcutaneously with these test vaccines 1 mL twice at three-week intervals to measure the transition of neutralizing antibodies against the virus. The reaction was confirmed.

【００３６】（１）中和抗体価の推移 表３に中和抗体価の推移を示すが、中和抗体価は処方１
で最も高く、処方２、３、４でもほぼ同様な価が得られ
た。一方比較例では処方８で良好な抗体上昇が確認され
たが、処方５〜７では乳剤の安定性が悪く、且つ抗体上
昇も不良であった。(1) Transition of neutralizing antibody titer Table 3 shows the transition of neutralizing antibody titer.
And almost the same value was obtained with Formulations 2, 3, and 4. On the other hand, in Comparative Example, a favorable increase in antibody was confirmed in Formulation 8, but in Formulations 5 to 7, the emulsion stability was poor and the antibody rise was poor.

【００３７】[0037]

【表３】 [Table 3]

【００３８】（２）発熱性に関する試験 図１は各種アジュバントで調製した試作ワクチンを注射
した猫の発熱の状況を示したものである。ポリオキシエ
チレン系の親水性界面活性剤を全く使用していない処方
１〜４では発熱は軽微あるいは全く認められない〔図１
（Ａ）〕のに対して、ポリオキシエチレン系界面活性剤
を含む処方５〜８では注射後数時間から、３、４日にか
けて強い発熱が連続し、臨床的にも重篤な症状を示す例
がみられた〔図１（Ｂ）〕。(2) Test on pyrogenicity FIG. 1 shows the status of pyrogenicity of a cat injected with a test vaccine prepared with various adjuvants. In Formulas 1 to 4 in which no polyoxyethylene hydrophilic surfactant was used, little or no heat generation was observed [Fig.
(A)], on the other hand, in Formulations 5 to 8 containing a polyoxyethylene-based surfactant, a strong fever was continuously present from several hours to 3 or 4 days after injection, showing clinically serious symptoms. An example was seen [FIG. 1 (B)].

【００３９】（３）ワクチン注射時の猫の反応 ポリオキシエチレン系界面活性剤を含まない処方１〜４
ではワクチン注射時に疼痛を訴える個体はなかった。一
方ポリオキシエチレン系界面活性剤を含有する処方５か
ら８では全ての猫が、注射時に跳ねる、噛みつく、引っ
掻くなどの疼痛を訴える行動を示した。また、処方８で
はワクチン注射直後に猫が酩酊状態を示す場合がみら
れ、後に、処方８に乳化安定剤として含有されるグリセ
リンの影響によるものであることが確認された。しかし
糖類を安定剤とした場合にはこのような酩酊反応は全く
みられず、安全性が高いことが確認された。(3) Reaction of cat at the time of vaccine injection Formulations 1-4 containing no polyoxyethylene surfactant
No patient complained of pain at the time of vaccination. On the other hand, in Formulations 5 to 8 containing a polyoxyethylene surfactant, all cats showed behaviors such as bouncing, biting, and scratching upon injection. In addition, in the case of Formula 8, cats showed a drunken state immediately after injection of the vaccine, and it was later confirmed that this was due to the effect of glycerin contained in Formula 8 as an emulsion stabilizer. However, when a saccharide was used as a stabilizer, no such drunkenness reaction was observed at all, confirming that the safety was high.

【００４０】（４）注射部位の接種局所反応に関する試
験 表４はワクチン注射部位の剖検所見を比較した結果であ
る。処方１から４では注射後短時間での膠様浸潤が認め
られるがその程度は軽く、７日後の剖検では処方１，２
でわずかにみられるのみで、一ヶ月後においては注射部
位には殆ど痕跡を認めず、接種反応は極めて軽いことが
確認された。これに対して、処方５〜８では全般に接種
反応が強く、特にポリオキシエチレン系界面活性剤を含
む処方５〜７で強度の膠様浸潤と出血が認められた。ま
た７日後においてもこの傾向は続き、膠様浸潤、出血は
やや収まる方向にあるが接種部位の筋肉を中心として細
胞浸潤による白色化がみられ、接種反応の強いことが確
認された。(4) Test on local reaction of inoculation at the injection site Table 4 shows the results of comparison of autopsy findings at the vaccine injection site. In formulas 1 to 4, glue-like infiltration was observed in a short time after injection, but the degree was slight.
Only one month later, almost no trace was observed at the injection site one month later, and it was confirmed that the inoculation reaction was extremely light. In contrast, Formulations 5 to 8 showed a strong inoculation reaction in general, and Formulations 5 to 7 containing a polyoxyethylene-based surfactant showed strong glue-like infiltration and bleeding. Even after 7 days, this tendency continued, and the infiltration and bleeding tended to subside slightly, but whitening due to cell infiltration was observed around the muscle at the inoculation site, confirming that the inoculation reaction was strong.

【００４１】[0041]

【表４】 [Table 4]

【００４２】上記の事例より、一般にＯ／Ｗ型乳剤を調
製する際に最も良く用いられているポリオキシエチレン
系界面活性剤は、アジュバント製剤に用いた場合、その
組織障害性により強い発熱と接種部位の障害をもたらす
ことから、Ｏ／Ｗ型オイルアジュバントを調製する際に
は、ポリオキシエチレン系界面活性剤を使用せずに安定
な乳剤を得ることが重要であることが確認された。ま
た、Ｏ／Ｗ乳剤の乳化安定剤として知られているプロピ
レングリコール、グリセリンは猫などに一時的な酩酊状
態を誘発する事から、動物用オイルアジュバント製剤の
乳化安定剤としてはグルコースなどの糖類が適用できる
ことが確認された。このことから、本発明は安全な動物
用オイルアジュバントを作成する上で欠くべからざる技
術を提供するものである。From the above case, the polyoxyethylene surfactants most commonly used in preparing O / W emulsions, when used in adjuvant formulations, have a strong fever and inoculation due to their tissue damage. It was confirmed that when preparing an O / W type oil adjuvant, it is important to obtain a stable emulsion without using a polyoxyethylene-based surfactant because it causes site damage. In addition, propylene glycol and glycerin, which are known as emulsion stabilizers for O / W emulsions, induce a temporary drunken state in cats and the like. Therefore, sugars such as glucose are used as emulsion stabilizers in animal oil adjuvant formulations. It was confirmed that it could be applied. For this reason, the present invention provides an indispensable technique for producing a safe animal oil adjuvant.

【００４３】実施例３（豚免疫試験） 上記実施例で得られた知見を元に、豚用ワクチンに適合
するオイルアジュバント処方を確立すべく、下記表５の
処方にて調製されたＯ／Ｗ型オイルアジュバントの効果
と安全性を確認する目的で、豚丹毒及びアクチノバシラ
ス・プルロニューモニエ１型、２型、及び５型を抗原と
した混合ワクチンをマウス、モルモット、及び豚に接種
して、各抗原に対する抗体価の測定を行うと共に、注射
後の発熱と注射部位の剖検観察を行った。Example 3 (Pig Immunity Test) Based on the knowledge obtained in the above example, to establish an oil adjuvant formulation suitable for a pig vaccine, an O / W prepared with the formulation shown in Table 5 below was established. Inoculating mice, guinea pigs, and pigs with a mixed vaccine using swine erysipelas and Actinobacillus pleuropneumoniae types 1, 2, and 5 as antigens for the purpose of confirming the efficacy and safety of the type oil adjuvant, Antibody titers for each antigen were measured, and fever after injection and necropsy observation of the injection site were performed.

【００４４】[0044]

【表５】 [Table 5]

【００４５】使用抗原：豚丹毒菌抽出抗原、アクチノバ
シラス・プルロニューモニエ１型、２型、及び５型培養
上清由来抗原液。Antigen used: Antigen extracted from swine erysipelas, antigen solution derived from the culture supernatant of Actinobacillus pluropneumoniae type 1, type 2, and type 5

【００４６】（１）マウス毒性限度確認試験 マウス腹腔内０．３ｍＬ注射後、３日目の体重を有意差
検定（1％ｔ検定）した。なお1週間を通して、一般臨床
観察を行った。(1) Test for confirming mouse toxicity limit After the intraperitoneal injection of 0.3 mL of the mouse, the body weight on the third day was subjected to a significant difference test (1% t test). General clinical observations were made throughout the week.

【００４７】その結果を表６に示すが、豚用処方１及び
３の２群では、境界値以下のｔ値を示した。また臨床症
状においても終始異常を認めず、良好な経過であった。
一方、豚用処方２注射群においては、ｔ値は境界値を越
した。また注射後１日目及び２日目に全個体で目やにを
認め、一部の個体ではふるえ、うずくまりが観察され
た。The results are shown in Table 6. In the two groups of the prescriptions 1 and 3 for pigs, the t value was lower than the boundary value. In addition, no abnormalities were observed throughout the clinical symptoms, and the course was favorable.
On the other hand, in the prescription 2 injection group for pigs, the t value exceeded the boundary value. Further, on the first and second days after the injection, eyes were observed in all individuals, and in some individuals, trembling and crouching were observed.

【００４８】[0048]

【表６】 [Table 6]

【００４９】（２）モルモット力価試験 体重約３５０ｇのモルモット１０頭（免疫群８頭、対照
群２頭）を用い、筋肉内に０．２ｍＬ、３週間隔２回注
射後、２週目に採血した。得られた血清のアクチノバシ
ラス・プルロニューモニエ１型、２型、及び５型に対す
るＣＦ抗体価を測定した。(2) Guinea Pig Titer Test Using 10 guinea pigs weighing about 350 g (8 immunized groups and 2 control groups), 0.2 mL was intramuscularly injected twice at 3 week intervals, and 2 weeks later. Blood was collected. The CF antibody titers of the obtained sera to Actinobacillus pleuropneumoniae type 1, type 2 and type 5 were measured.

【００５０】その結果を表７に示すが、豚用処方１及び
３の２群では、１型、２型、及び５型のいずれに対する
ＣＦ抗体価も上昇していた。一方、豚用処方２注射群に
おいては、２型のＣＦ抗体価の上昇が不十分であった。The results are shown in Table 7. As can be seen from Table 7, in the two groups of the swine formulas 1 and 3, CF antibody titers against any of type 1, type 2 and type 5 were increased. On the other hand, in the swine prescription 2 injection group, the type 2 CF antibody titer was insufficiently increased.

【００５１】[0051]

【表７】 [Table 7]

【００５２】（３）豚の安全試験 約３０日齢の豚を用い、筋肉内に１．０ｍＬ、１か月間
隔で２回注射し、体温測定と臨床観察を行った。２回目
注射後２か月目に剖検して、注射後６０日目と９０日目
としての注射部位の注射痕の有無を肉眼的に観察した。(3) Pig safety test Using a 30-day-old pig, 1.0 mL was injected intramuscularly twice a month, and body temperature measurement and clinical observation were performed. Necropsy was performed 2 months after the second injection, and the presence or absence of injection marks at the injection site on the 60th and 90th days after the injection was visually observed.

【００５３】注射後の体温の変化 注射後の体温の変化を表８（第１回目注射）、９（第２
回目注射）に示すが、１回目注射時において豚用処方１
及び２では発熱は殆ど認められず、臨床的な異常も何ら
認められなかったが、乳化剤にポリオキシエチレン系界
面活性剤を含む豚用処方２では個体によって４２度に近
い発熱が観察された。Changes in body temperature after injection Changes in body temperature after injection are shown in Tables 8 (first injection) and 9 (second injection).
The first injection), but at the time of the first injection
In Examples 2 and 3, almost no fever was observed, and no clinical abnormality was observed. However, in Formulation 2 for pigs containing a polyoxyethylene surfactant as an emulsifier, fever close to 42 degrees was observed in some individuals.

【００５４】[0054]

【表８】 [Table 8]

【００５５】[0055]

【表９】 [Table 9]

【００５６】一般臨床症状 豚用処方１及び２では注射後６時間でやや食欲、元気が
減退する傾向を認めたが注射翌日では、全頭が元気と食
欲を回復した。一方豚用処方２では注射後６時間後に於
いて犬座姿勢をとり、食欲不振体のふるえ等の好ましく
ない症状が観察され、これらの症状は前後２回の注射に
おいて同様な傾向をみせた。General Clinical Symptoms The prescriptions 1 and 2 for pigs tended to have a slight decrease in appetite and energy 6 hours after injection, but on the day after the injection, all animals recovered their energy and appetite. On the other hand, in the case of the formulation 2 for pigs, the dog took a sitting posture 6 hours after the injection, and unfavorable symptoms such as shaking of the anorexic body were observed. These symptoms showed the same tendency in the two injections before and after the injection.

【００５７】注射痕の消長 豚用処方２の注射後９０日目の部位で、筋間脂肪層にお
よそ３ｃｍ×３ｃｍの範囲において、淡黄褐色の大豆大
硬結病変を認めた。表１０に結果をまとめた。Changes in Injection Marks A light yellow-brown soybean induration lesion was observed in the area of about 3 cm × 3 cm in the intermuscular fat layer at a site 90 days after injection of the swine formulation 2. Table 10 summarizes the results.

【００５８】[0058]

【表１０】 [Table 10]

【００５９】（４）まとめ 以上の結果より、スクワランをベースオイルとし、親水
性乳化剤としてポリオキシエチレン系を含まず、さらに
乳化安定剤としてグルコースを含有するＯ／Ｗ型オイル
アジュバントである豚用処方1が高い力価を試験動物に
保有させる一方、安全性をも有するＯ／Ｗ型オイルアジ
ュバントであることが明らかとなった。この豚用処方1
は、請求項1を満たすＯ／Ｗ型オイルアジュバントであ
る。猫や鶏での場合と同様に、豚においても十分なワク
チン効果と安全性を付加することが証明された。(4) Conclusion From the above results, the formulation 1 for pigs, which is an O / W type oil adjuvant containing squalane as a base oil, containing no polyoxyethylene as a hydrophilic emulsifier, and containing glucose as an emulsion stabilizer, Is an O / W type oil adjuvant that allows test animals to retain a high titer and also has safety. Formula 1 for this pig
Is an O / W type oil adjuvant satisfying claim 1. As with cats and chickens, it has been proven to add sufficient vaccine efficacy and safety in pigs.

【図面の簡単な説明】[Brief description of the drawings]

【図１】実施例２における猫の発熱状況を示すグラフ。FIG. 1 is a graph showing the state of fever of a cat in Example 2.

【手続補正書】[Procedure amendment]

【提出日】平成１２年７月１３日（２０００．７．１
３）[Submission Date] July 13, 2000 (2007.1)
3)

【手続補正１】[Procedure amendment 1]

【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement

【補正対象項目名】請求項１[Correction target item name] Claim 1

【補正方法】変更[Correction method] Change

【補正内容】[Correction contents]

【手続補正２】[Procedure amendment 2]

【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement

【補正対象項目名】０００１[Correction target item name] 0001

【補正方法】変更[Correction method] Change

【補正内容】[Correction contents]

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、水中油型（以下Ｏ
／Ｗ型という）のオイルアジュバント及びそれらのアジ
ュバントを含む動物用のワクチンに関する。TECHNICAL FIELD The present invention relates to an oil- in- water type (hereinafter referred to as O
/ W type oil adjuvants and vaccines for animals containing these adjuvants.

【手続補正３】[Procedure amendment 3]

【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement

【補正対象項目名】０００２[Correction target item name] 0002

【補正方法】変更[Correction method] Change

【補正内容】[Correction contents]

【０００２】[0002]

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】従来、
免疫を強化するためのオイルアジュバントとして、フロ
イントアジュバントに代表される油中水型（以下Ｗ／Ｏ
型という）アジュバントや、親水性界面活性剤を多く用
いたＯ／Ｗ型アジュバントが主として使用されてきた。
しかしこれらの内、Ｗ／Ｏ型オイルアジュバント製剤は
免疫効果が高い反面、ワクチン注射部位に硬結や腫脹、
疼痛、壊死などを引き起こす事例が少なからずあった。
一方、Ｏ／Ｗ型オイルアジュバント製剤では接種部位の
硬結、腫脹、壊死などを引き起こす例は少ないものの、
乳化剤として、可溶化力が強く細胞障害性が高いポリオ
キシエチレン系の親水性乳化剤含むことから、ワクチン
を接種された動物に強い発熱が認められることが問題と
なっていた。2. Description of the Related Art
As an oil adjuvant for enhancing immunity, a water-in-oil type (hereinafter referred to as W / O) represented by Freund's adjuvant
Adjuvants) and O / W adjuvants using a large amount of a hydrophilic surfactant have been mainly used.
However, among these, W / O type oil adjuvant preparations have high immunity effects, but induration and swelling at the vaccine injection site,
There were not a few cases that caused pain, necrosis, etc.
On the other hand, O / W type oil adjuvant preparations rarely cause induration, swelling, necrosis, etc. of the inoculation site,
Since a polyoxyethylene-based hydrophilic emulsifier having high solubilizing power and high cytotoxicity is contained as an emulsifier, there has been a problem that a strong fever is observed in animals vaccinated.

【手続補正４】[Procedure amendment 4]

【補正対象書類名】明細書[Document name to be amended] Statement

【補正対象項目名】０００６[Correction target item name] 0006

【補正方法】変更[Correction method] Change

【補正内容】[Correction contents]

【０００６】[0006]

【課題を解決するための手段】上記課題を解決するため
に、本発明は、油相成分が動物油及び／又は植物油（以
下動・植物油という）であり、乳化剤として分子中にポ
リオキシアルキレン構造を持たない多価アルコール脂肪
酸エステルを、免疫増強剤として糖又は糖アルコールの
脂肪酸エステルを含有し、分子中にポリオキシアルキレ
ン構造を持つ乳化剤を含有しない水中油型エマルジョン
からなる動物用ワクチンのオイルアジュバントを提供す
るものである。更に本発明は、該オイルアジュバント
と、少なくとも一種の抗原とを含む、動物用ワクチンを
提供するものである。In order to solve the above-mentioned problems, the present invention provides an oil-phase component comprising animal oil and / or vegetable oil (hereinafter referred to as animal or vegetable oil), and having a polyoxyalkylene structure in the molecule as an emulsifier. Oil adjuvants for animal vaccines consisting of oil-in-water emulsions containing a polyhydric alcohol fatty acid ester that does not have a sugar or a sugar alcohol fatty acid ester as an immunopotentiator and that do not contain an emulsifier having a polyoxyalkylene structure in the molecule. To provide. Further, the present invention provides an animal vaccine comprising the oil adjuvant and at least one antigen.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 橋本 悟 東京都板橋区蓮根３−24−３ 日本サーフ ァクタント工業株式会社内 (72)発明者 扇谷 年昭 京都府京都市伏見区桃山町大島38−251 (72)発明者 片山 茂二 京都府宇治市池森44−11 (72)発明者 小田 健司 京都府城陽市寺田市の久保２−７ Ｆターム(参考） 4C085 AA03 AA38 FF11 FF14  ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (72) Inventor Satoru Hashimoto 3-24-3 Hasune, Itabashi-ku, Tokyo Inside Japan Surfactant Industry Co., Ltd. (72) Inventor Toshiaki Ogiya 38-Oshima, Momoyamacho, Fushimi-ku, Kyoto-shi, Kyoto 251 (72) Inventor Shigeji Katayama 44-11 Ikemori, Uji City, Kyoto Prefecture (72) Inventor Kenji 2-7 Kubo, Terada City, Joyo City, Kyoto F term (reference) 4C085 AA03 AA38 FF11 FF14

Claims (4)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 油相成分が動物油及び／又は植物油であ
り、乳化剤として分子中にポリオキシアルキレン構造を
持たない多価アルコール脂肪酸エステルを、免疫増強剤
として糖又は糖アルコールの脂肪酸エステルを含有し、
分子中にポリオキシアルキレン構造を持つ乳化剤を含有
しない油中水型エマルジョンからなる動物用ワクチンの
オイルアジュバント。1. An oil phase component comprising an animal oil and / or a vegetable oil, a polyhydric alcohol fatty acid ester having no polyoxyalkylene structure in a molecule as an emulsifier, and a sugar or a sugar alcohol fatty acid ester as an immunopotentiator. ,
An oil adjuvant for an animal vaccine comprising a water-in-oil emulsion containing no emulsifier having a polyoxyalkylene structure in the molecule. 【請求項２】 多価アルコール脂肪酸エステルが、ポリ
グリセリン脂肪酸エステル及びショ糖脂肪酸エステルか
ら選ばれた１種以上である請求項１記載のオイルアジュ
バント。2. The oil adjuvant according to claim 1, wherein the polyhydric alcohol fatty acid ester is at least one selected from polyglycerin fatty acid esters and sucrose fatty acid esters. 【請求項３】 乳化安定剤として、単糖類、２糖類及び
糖アルコールから選ばれた１種以上を含有する請求項１
又は２記載のオイルアジュバント。3. The emulsion stabilizer according to claim 1, which comprises at least one selected from monosaccharides, disaccharides and sugar alcohols.
Or the oil adjuvant according to 2. 【請求項４】 請求項１〜３の何れか１項記載のオイル
アジュバントと、少なくとも一種の抗原とを含む、動物
用ワクチン。4. An animal vaccine comprising the oil adjuvant according to claim 1 and at least one antigen.