JP2000507204A

JP2000507204A - Ｃ１―インヒビターの補体及び血液凝固阻害特性の強化

Info

Publication number: JP2000507204A
Application number: JP9522672A
Authority: JP
Inventors: ハク，コルネリス・エリク; ウイレミン，ワルター
Original assignee: ステイヒテイング・サンキン・ブロードボールジーニング
Priority date: 1995-12-18
Filing date: 1996-12-18
Publication date: 2000-06-13
Also published as: EP0868191A1; WO1997022347A1; AU1042597A

Abstract

(57)【要約】補体及び血液凝固の阻害に関してＣ１−エステラーゼインヒビターを選択的に強化するが、接触及び線維素溶解系の阻害に関しては強化しないためにデキストラン硫酸が用いられる。デキストラン硫酸により強化されるＣ１−エステラーゼインヒビターは、内因性のＣ１−エステラーゼインヒビターまたは外因性のＣ１−エステラーゼインヒビターであってもよく、これは、デキストラン硫酸と一緒にまたは別個に投与される。敗血症及び心筋梗塞症のような炎症疾患の予防または治療処置における、デキストラン硫酸の単独またはＣ１−エステラーゼインヒビターと一緒の使用。

Description

【発明の詳細な説明】Ｃ１−インヒビターの補体及び血液凝固阻害特性の強化発明の分野本発明は、免疫学及び生化学の分野であり、補体、接触、線維素溶解及び血液凝固血漿カスケード系の多数のプロテアーゼの主要な血漿インヒビターであるＣ１−インヒビターの阻害スペクトルを変えるための方法を開示する。より具体的には、線維素溶解または接触系プロテアーゼに対する阻害特性を変えずに、Ｃ１ −インヒビターによる補体及び血液凝固プロテアーゼの阻害を１００倍以上まで強化することができることが示される。この強化は、Ｃ１−インヒビターを合成硫酸化多糖デキストラン硫酸とインキュベートすることにより得られる。強化されたＣ１−インヒビターを含有する製薬学的組成物は、例えば、敗血症または心筋梗塞の予防または治療処置のための抗炎症剤として、多くの用途がある。発明の背景炎症反応は、多数のヒト及び動物の疾病の間に起こり、一連のいわゆる炎症メディエーターによりもたらされる。ＧａｌｌｉｎＪＩ、ＧｏｌｄｓｔｅｉｎＩＭ、ＳｎｙｄｅｒｍａｎＲ（ｅｄｓ）：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ＢａｓｉｃＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＣｏｒｒｅｌａｔｅｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓＬｔｄ、１９９２。炎症メディエーターは、活性化された単球、マクロファージ、好中球、好酸球、好塩基球、肥満細胞、血小板及び内皮細胞；サイトカイン；プロスタグランジン；ロイコトリエン；血小板活性化因子；ヒスタミン及びセロトニン；神経ペプチド：反応性酸素種；並びに一酸化窒素及び関連化合物を含む。また、血液凝固、線維素溶解、接触及び補体系を初めとする主要な血漿カスケード系の活性化の間にはフラグメントが生成され、それらは、有効な生物学的作用を有し、それ故、炎症メディエーターであるとみなされるので、これらの系も炎症反応に寄与する。これらの血漿カスケード系は各々、一連の血漿タンパク質からなり、それらの大部分は、肝臓により合成され、因子とも呼ばれる不活性前駆物質として血液中を循環する。系の第一因子の活性化は、不活性のしばしば単鎖である前駆物質を切断されたしばしば２本鎖の活性タンパク質へ限定タンパク質分解により転化することを含んでなる。続いて、この活性第一因子は、再び限定タンパク質分解により多数の不活性第二因子を活性化し、次にこれらは各々、多数の第三因子を活性化するという具合である。この反応様式はカスケードに似ている。血漿カスケード系の過度な活性化は、多数に特異的なインヒビターであるα２−マクログロブリン及びセリンプロテイナーゼインヒビター類（セルピン類）のアンチトロンビンIII、α１−アンチトリプシン、α１−アンチキモトリプシン、α２−アンチプラスミン、Ｃ１−インヒビター等を初めとする一連のインヒビターの存在により調節される。補体系補体系は、血漿カスケード系の一つを構成する。その生理学的役割は、侵入する微生物に対して体を守り、壊死組織及び細胞残渣を除去することである。古典的及び代替経路の２つの経路により補体系を活性化することができ、これらは両方とも共通の末端経路（ｔｅｒｍｉｎａｌｐａｔｈｗａｙ）の活性化を引き起こすことができる。ＣｏｏｐｅｒＮ．Ｒ．、１９８５、ＡｄｖＩｍｍｕｎｏｌ３７：１５１；Ｍｕｌｌｅｒ−ＥｂｅｒｈａｒｄＨ．Ｊ．等、１９８０、ＡｄｖＩｍｍｕｎｏｌ２９：１；Ｍｕｌｌｅｒ−ＥｂｅｒｈａｒｄＨ．Ｊ．、１９９２、ＧａｌｌｉｎＪＩ、ＧｏｌｄｓｔｅｉｎＩＭ、ＳｎｙｄｅｒｍａｎＲ（ｅｄｓ）：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ＢａｓｉｃＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＣｏｒｒｅｌａｔｅｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓＬｔｄ、３３頁。補体の活性化は、アナフィラトキシンとしても知られている生物学的活性ペプチドの生成をもたらす。これらのアナフィラトキシン、特にＣ３ａ及びＣ５ａは、好中球の走化性を引き起こし、これらの細胞を集め、活性化し、脱顆粒化することができる。ＶｏｇｔＷ．、１９８６、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ３：１７７；ＧｏｌｄｓｔｅｉｎＩＭ、１９９２、ＧａｌｌｉｎＪＩ、ＧｏｌｄｓｔｅｉｎＩＭ、ＳｎｙｄｅｒｍａｎＲ（ｅｄｓ）：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ＢａｓｉｃＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＣｏｒｒｅｌａｔｅｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓＬｔｄ、６３頁；ＨｕｇｌｉＴＥ、１９８４、ＳｐｒｉｎｇｅｒＳｅｍｉｎＩｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ７：１９３。さらに、これらは、血管透過性を高め、好中球の内皮への接着を刺激し、血小板及び内皮細胞を活性化し、肥満細胞の脱顆粒、並びに単核細胞による血管作動性エイコサノイド、トロンボキサンＡ２並びにＬＴＣ４、ＬＴＤ４及びＬＴＥ４のようなペプチドロイコトリエンの生産を誘導することができる。また、共通経路の活性化の際に形成されるいわゆる末端（ｔｅｒｍｉｎａｌ）補体複合体（ＴＣＣ）は、標的細胞を溶解する能力、及び溶解以下の（ｓｕｂｌｙｔｉｃ）濃度で細胞にサイトカイン、プロテイナーゼ及びエイコサノイドのようなメディエーターを放出させる能力を初めとする重要な生物学的作用を有する。Ｍｕｌｌｅｒ −ＥｂｅｒｈａｒｄＨ．Ｊ．、１９８６、ＡｎｎＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ４：５０３；ＨａｎｓｃｈＧＭ、１９９２、Ｉｍｍｕｎｏｐｈａｒｍａｃｏｌ２４：１０７。最後に、補体活性化生成物は、細胞による組織因子の発現を誘導し、それにより血液凝固を開始し、高めることができる。ＯｓｔｅｒｕｄＢ等、１９８４、Ｈａｅｍｏｓｔａｓｉｓ１４：３８６；ＨａｍｉｌｔｏｎＫＫ等、１９９０、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２６５：３８０９。従って、補体活性化生成物は、炎症反応を誘導または高めることができる多数の生物学的作用を有する。補体の活性化は、敗血症及び敗血症性ショックを初めとする多数の炎症性疾患；サイトカインまたはモノクローナル抗体（ｍＡｂ）のインビボ投与により誘導される毒性；慢性関節リウマチ、全身性エリテマトーデス及び血管炎（ｖａｓｃｕｌｉｔｉｓ）のような免疫複合体病；多発外傷；虚血再灌流障害；心筋梗塞症等の発生において重要な役割を果たすと考えられる。これらの疾患における補体活性化の病因の役割は、その活性化生成物の前述の生物学的作用になんらか関係するようである。それ故、補体活性化の阻害は、これらの疾患の治療のプラスになる可能性がある。先程述べたように、古典的及び代替経路の２つの異なる経路により補体を活性化することができる。Ｃ１−インヒビターが後者の経路に影響を及ぼすことは知られていないので、ここでは後者を議論しない。古典的経路の活性化は、第一成分の活性化から始まり、これは１個のＣ１ｑ、２個のＣ１ｒ及び２個のＣ１ｓタンパク質の５個のタンパク質の高分子複合体からなる。Ｃ１複合体のＣ１ｑタンパク質は、アクチベーター、例えば免疫複合体に結合し、これは、両方のＣ１ｒ及び両方のＣ１ｓサブコンポーネントの活性化をもたらす。ＳｃｈｕｍａｋｅｒＶＮ等、１９８７、ＡｎｎＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ５：２１；ＣｏｏｐｅｒＮ．Ｒ．、１９８５、ＡｄｖＩｍｍｕｎｏｌ３７：１５１。活性化の間に、Ｃ１ｒ及びＣ１ｓは、単ペプチド鎖の不活性タンパク質から２本鎖の活性セリンプロテイナーゼに転化される。次に、活性Ｃ１複合体は、Ｃ４及びＣ２補体因子を活性化し、これらは一緒になって二分子のＣ４ｂ，２ａ複合体を形成する。ＰｏｌｌｅｙＭＪ等、１９６８、ＪＥｘｐＭｅｄ１２８：５３３；ＫｅｒｒＭＡ、１９８０、ＢｉｏｃｈｅｍＪ１８９：１７３。この複合体は、次に、補体の第三成分のＣ３を小さい方のＣ３ａフラグメントと大きい方のＣ３ｂに切断することにより活性化する。それ故、Ｃ４ｂ，２ａ複合体は、Ｃ３−コンバーターゼ（ｃｏｎｖｅｒｔａｓｅ）と呼ばれる。Ｃ３−コンバーターゼにさらなるＣ３ｂ分子が結合することにより生成されるＣ５−コンバーターゼによるＣ５の切断は、アナフィラトキシンＣ５ａと発生期（ｎａｓｃｅｎｔ）Ｃ５ｂを生じ、後者はＣ６と一緒になって二分子のＣ５ｂ，Ｃ６複合体を形成し、これは次にＣ７に結合する。このＣ５ｂ，Ｃ６，Ｃ７複合体は、膜に挿入されるか、またはＳタンパク質と相互作用するかのいずれかである。Ｓタンパク質との相互作用は、最終的に可溶性の膜攻撃複合体（ＭＡＣ）を生じる。膜に挿入されたＣ５ｂ，Ｃ６，Ｃ７は、Ｃ８のレセプターを形成する。続いて、四分子のＣ５ｂ−８複合体はＣ９を結合し、これを重合させ、各々、Ｃ５ｂ−８複合体と１個以上のＣ９分子からなる完全に集合した膜挿入ＭＡＣ複合体を生じる。Ｍｕｌｌｅｒ−ＥｂｅｒｈａｒｄＨ．Ｊ．、１９９２：ＧａｌｌｉｎＪＩ、ＧｏｌｄｓｔｅｉｎＩＭ、ＳｎｙｄｅｒｍａｎＲ（ｅｄｓ）：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ＢａｓｉｃＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＣｏｒｒｅｌａｔｅｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ、３３頁；Ｍｕｌｌｅｒ−ＥｂｅｒｈａｒｄＨＪ、１９８６、ＡｎｎｕＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ４：５０３。いくつかの血漿タンパク質、顕著なものとしては、Ｃ１−インヒビター、Ｃ４ −結合タンパク質及びセリン−プロテイナーゼＩ因子は、補体の古典的経路の活性化を阻害することができる。Ｍｕｌｌｅｒ−ＥｂｅｒｈａｒｄＨ．Ｊ．、１９９２：Ｇａｌ１ｉｎＪＩ、ＧｏｌｄｓｔｅｉｎＩＭ、ＳｎｙｄｅｒｍａｎＲ（ｅｄｓ）：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ＢａｓｉｃＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＣ１ｉｎｉｃａｌＣｏｒｒｅ１ａｔｅｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ、３３頁；ＳｃｈｕｍａｋｅｒＶＮ等、１９８７、ＡｎｎＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ５：２１；ＣｏｏｐｅｒＮＲ、１９８５、ＡｄｖＩｍｍｕｎｏｌ３７：１５１。これらのうち、Ｃ１−インヒビターを以下により詳細に説明する。接触系接触系は一組のタンパク質からなり、これらは、不活性前駆物質タンパク質として血液中を循環する。この系は、血液凝固の接触系またはカリクレイン−キニン系としても知られている。Ｃｏ１ｍａｎＲ．Ｗ．、１９８４、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ７３：１２４９；ＫａｐｌａｎＡ．Ｐ．等、１９８７、Ｂｌｏｏｄ７０：１；ＫｏｚｉｎＦ．等、１９９２、ＧａｌｌｉｎＪＩ、ＧｏｌｄｓｔｅｉｎＩＭ、ＳｎｙｄｅｒｍａｎＲ（ｅｄｓ）：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ＢａｓｉｃＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＣｏｒｒｅｌａｔｅｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ、１０３頁。接触系は、主要な血漿カスケード系の一つを構成し、しばしば、血液凝固の２つの経路の一つとみなされ、いわゆる血液凝固の外因性経路がもう一方のものである。接触系の活性化は、ハーゲマン因子としても知られている第XII因子のアクチベーターへの結合から始まる。続いて、結合した第XII因子は、活性化されるようになることができ、この工程の間に、単鎖の不活性型から２本鎖の活性セリンプロテイナーゼに転化される。ＴａｎｓＧ．等、１９８７、ＳｅｍＴｈｒｏｍｂＨｅｍｏｓｔ１３：１。次に、活性化された第XII因子は、補因子の高分子量キニノゲンを介してアクチベーターに結合するプレカリクレインを、活性セリンプロテイナーゼのカリクレインに活性化する。カリクレインは、次に、結合しているがまだ活性化されていない第XII因子を活性化することができる（逆活性化）。第XIIａ因子は、第XI因子を活性化することができ、これは、次に第I X因子を活性化して血液凝固の活性化を開始することができる。ＣｏｃｈｒａｎｅＣ．Ｇ．等、１９８２、ＡｄｖＩｍｍｕｎｏｌ３３：２９０；ＣｏｌｍａｎＲ．Ｗ．、１９８４、ＪＣ１ｉｎＩｎｖｅｓｔ７３：１２４９；ＫａｐｌａｎＡ．Ｐ．等、１９８７、Ｂｌｏｏｄ７０；１；ＫｏｚｉｎＦ．等、１９９２：ＧａｌｌｉｎＪＩ、ＧｏｌｄｓｔｅｉｎＩＭ、ＳｎｙｄｅｒｍａｎＲ（ｅｄｓ）：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ＢａｓｉｃＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＣｏｒｒｅｌａｔｅｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ、１０３頁。接触系の活性化は、古典的補体経路も阻害する同じタンパク質のＣ１−インヒビターにより制御され、これを以下に説明する。接触系の活性化の間に、ブラジキニン、カリクレイン及び活性第XII因子のようないくつかの生物学的活性フラグメントが形成される。これらのフラグメントは、好中球の活性化及び脱顆粒を高め、血管透過性を増大し、血管緊張を減少することができる。ＣｏｌｍａｎＲ．Ｗ．、１９８４、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ７３：１２４９：ＫｏｚｉｎＦ．等、１９９２、ＧａｌｌｉｎＪＩ、ＧｏｌｄｓｔｅｉｎＩＭ、ＳｎｙｄｅｒｍａｎＲ（ｅｄｓ）：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ＢａｓｉｃＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＣｏｒｒｅｌａｔｅｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ、１０３頁。接触系が炎症条件で活性化されるようになることは一般的に認められている。ＣｏｌｍａｎＲ．Ｗ．、１９８４、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ７３：１２４９；ＫａｐｌａｎＡ．Ｐ．等、１９８７、Ｂｌｏｏｄ７０：１；ＫｏｚｉｎＦ．等、１９９２、ＧａｌｌｉｎＪＩ、ＧｏｌｄｓｔｅｉｎＩＭ、ＳｎｙｄｅｒｍａｎＲ（ｅｄｓ）：Ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ：ＢａｓｉｃＰｒｉｎｃｉｐｌｅｓａｎｄＣｌｉｎｉｃａｌＣｏｒｒｅｌａｔｅｓ、ＮｅｗＹｏｒｋ、ＲａｖｅｎＰｒｅｓｓ、１０３頁。しかしながら、炎症及び生理学的条件下でのその正確な役割は、よく理解されていない。第XII因子の遺伝的欠損を有する人々は、血栓塞栓疾患の増大した危険を有する可能性がある。このことは、組織型プラスミノゲン様構造（ＴａｎｓＧ．等、１９８７、ＳｅｍＴｈｒｏｍｂＨｅｍｏｓｔ１３：１）と共に、第XII因子が線維素溶解に関与することを示唆する。ホモ及びヘテロの第XII因子欠損個体におけるプラスミノゲン活性化への第XII因子の寄与に関するインビボの報告は、これと一致する。ＬｅｖｉＭ．等、１９９１、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ８８：１１５５。第XI因子は、インビトロで第XII因子により活性化することができるので、しばしば、接触系のメンバーとしてみなされる。ＫｕｒａｃｈｉＫ．等、１９７７、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１６：５８３１。第XI因子は、ジスルフィド結合によりつながれた２本の同一のポリペプチド鎖からなる二量体糖タンパク質である。活性化の際に、各ポリペプチド鎖を内部のペプチド結合で切断することができ、ジスルフィド結合した重鎖及び軽鎖を生じ、後者は各々、１つの活性部位を含んでいる。ＢｏｕｍａＢ．Ｎ．等、１９７７、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２５２：６４３２；ＶａｎｄｅｒＧｒａａｆＦ．等、１９８３、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２５８：９６６９；ＦｕｊｉｋａｗａＫ．等、１９８６、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２５：２４１７。第XIａ因子の各活性部位の活性は、各々セリンプロテアーゼインヒビター類（セルピン類）のスーパーファミリーのメンバーであるα１−アンチトリプシン、アンチトロンビンIII、Ｃ１−インヒビター及びα２−アンチプラスミンを初めとする血漿プロテアーゼインヒビターにより調節される。ＳｏｏｎｓＨ．等、１９８７、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２６：４６２４−４６２９；ＨｅｃｋＬ．Ｗ．等、１９７４、ＪＥｘｐＭｅｄ１４０：１６１５；ＤａｍｕｓＰ．Ｓ．等、１９７３、Ｎａｔｕｒｅ２４６：３５５；ＦｏｒｂｅｓＣ．Ｄ．等、１９７０、ＪＬａｂＣｌｉｎＭｅｄ７６：８０９；ＳａｉｔｏＨ．等、１９７９、ＰｒｏｃＮａｔｌＡｃａｄＳｃｉＵＳＡ７６：２０１３。初期の研究では、α１−アンチトリプシンが血漿における第XIａ因子の主要なインヒビターであると示唆された。ＳｃｏｔｔＣ．Ｆ．等、１９８２、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ６９：８４４。しかしながら、血漿の第XIａ因子とそのインヒビター間の複合体を定量するための固相酵素免疫測定法を用いた研究により、Ｃ１−インヒビターが第XIａ因子の主要なインヒビターであることが示された。ＷｕｉｌｌｅｍｉｎＷ．Ａ．等、１９９５、Ｂｌｏｏｄ８５：１５１７。第XI因子のインビボの役割は、接触活性化に関係しない可能性があり、すなわち、最近の研究では、第XI因子の活性化がトロンビンを介して第XII因子から独立して起こり、そして第IX因子の活性化に寄与する可能性があることが示唆されている。ＮａｉｔｏＫ．等、１９９１、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２６６：７３５３；ＧａｉｌａｎｉＤ．等、１９９１、Ｓｃｉｅｎｃｅ２５３：９０９。この観点において、第XI因子は、外因性経路により最初誘導されるトロンビン生成を高めるように作用する。ＤａｖｉｅＥ．Ｗ．等、１９９１、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３０：１０３６３；ＢｒｏｚｅＪｒ．Ｇ．Ｊ．、１９９２、ＳｅｍｉｎａｒｓＨｅｍａｔｏｌ２９：１５９。血液凝固系における第XI因子のこの推定される役割は、（軽い）出血疾患をもたらす接触系タンパク質の唯一の欠損が、第XI因子のものであるという臨床データと一致する。このことは、インビボで接触系が血液凝固工程に関与する証拠がないことと共に、第XI因子を接触系タンパク質とみなすべきかどうかに関して重大な疑念を引き起こす。とにかく、血液凝固機構における第XI因子の正確な役割にかかわらず、第XIａ因子の阻害により、例えばヘパリンがもたらすアンチトロンビンIIIの強化により誘導されるような激しい出血傾向の危険なしに、血液凝固が弱められる。Ｃ１−インヒビターＣ１−エステラーゼインヒビターとしても知られているＣ１−インヒビターは、血液中に存在し、補体の古典的経路及び接触系の主要なインヒビターであるタンパク質をいう。Ｃ１−インヒビターは、補体の第一成分の活性型及び活性第XI I因子を阻害することができ、カリクレインの主要なインヒビターでもある。ＳｃｈａｐｉｒａＭ．等、１９８５、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ２：１１１；ＤａｖｉｓＡ．Ｅ．、１９８８、ＡｎｎＲｅｖＩｍｍｕｎｏｌ６：５９５；ＳｉｍＲ．Ｂ．等、１９７９、ＦＥＢＳＬｅｔｔ９７：１１１：ＤｅＡｇｏｓｔｉｎｉＡ．等、１９８４、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ７３：１５４２；ＰｉｘｌｅｙＲ．Ａ．等、１９８５、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２６０：１７２３；ＳｃｈａｐｉｒａＭ．等、１９８２、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ６９：４６２；ＶａｎｄｅｒＧｒａａｆＦ．等、１９８３、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ７１：１４９；ＨａｒｐｅｌＰ．Ｃ．等、１９７５、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ５５：５９３。従って、Ｃ１−インヒビターは、活性化の間に生物学的活性ペプチドを生成する２つの血漿カスケード系、すなわち、補体及び接触系の活性を調節する。それ故、Ｃ１−インヒビターは、炎症反応の重要なレギュレーターである。さらに、Ｃ１−インヒビターは、活性第XI因子の主要なインヒビターである。ＭｅｉｊｅｒｓＪ．Ｃ．Ｍ．等、１９８８、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２７：９５９；ＷｕｉｌｌｅｍｉｎＷ．Ａ．等、１９９５、Ｂｌｏｏｄ８５：１５１７。従って、上に説明したような第XI因子の可能な機能を考慮すると、Ｃ１−インヒビターは、血液凝固インヒビターともみなされるべきである。また、Ｃ１−インヒビターは、組織型プラスミノゲンアクチベーター及びプラスミンの主要なインヒビターではないけれども、これらのプロテイナーゼもこのインヒビターによりある程度阻害される。ＨａｒｐｅｌＰ．Ｃ．等、１９７５、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ５５：１４９；ＢｏｏｔｈＮ．Ａ．等、１９８７、Ｂｌｏｏｄ６９；１６００。それ故、Ｃ１−インヒビターは、（弱い）線維素溶解インヒビターともみなされるべきである。Ｃ１−インヒビターは、血漿から大規模に精製され、臨床用途のため、特に、Ｃ１−インヒビターの遺伝的欠損により引き起こされる疾患である遺伝性血管浮腫の治療に用いられている。さらに、Ｃ１−インヒビターの投与は、哺乳類における全身性炎症反応［ＦｏｎｇＳ．、１９９２、ＷＯ第９２／２２３２０号（ＧｅｎｅｎｔｅｃｈＩｎｃ）］のような他の疾病においても同様に、並びに重い熱傷の合併症、膵炎、骨髄移植、サイトカイン治療及び体外循環の使用［ＥｉｓｅｌｅＢ．等、１９９４、ＤＥ−Ａ−第４２２７７６２号（ＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅＡＧ）］に有益な効果を有することが請求されている。本発明は、Ｃ１−インヒビターの阻害活性を高めるための新規な方法を提供し、それにより、これらの治療のために必要なＣ１−インヒビターの量を減らす点で、Ｃ１− インヒビターのこれらの治療用途に関係する。Ｃ１−インヒビターをコードする全長のゲノム及びｃＤＮＡはクローン化されている。ＢｏｃｋＳ．Ｃ．等、１９８６、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２５：４２９２；ＣａｒｔｅｒＰ．Ｅ．等、１９８８、ＥｕｒＪＢｉｏｃｈｅｍ１７３：１６３。機能的な組み換え体のＣ１−インヒビタータンパク質がＣＯＳ細胞で発現され、血漿タンパク質と類似することが見いだされている。ＥｌｄｅｒｉｎｇＥ．等、１９８８、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２６３：１１７７６。反応中心のＰ１及びＰ３及び／またはＰ５位にアミノ酸突然変異を有する組み換え体Ｃ１−インヒビターのいくつかの変異体、並びに遺伝性血管浮腫の患者から単離された変異体が、同じ系で発現されている。ＥｌｄｅｒｉｎｇＥ．等、１９８８、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２６３：１１７７６；ＥｌｄｅｒｉｎｇＥ．等、１９９３、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２６７：７０１３：ＥｌｄｅｒｉｎｇＥ．等、１９９３、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ９１：１０３５；ＰａｔｅｎｔＣｅｔｕｓＣｏｒｐ、ＵＳ６１７９２０；ＤａｖｉｓＡ．Ｅ．等、１９９２、ＮａｔｕｒｅＧｅｎｅｔｉｃｓ１：３５４；ＥｌｄｅｒｉｎｇＥ．等、１９９５、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２７０：２５７９；Ｖｅｒｐｙ等、１９９５、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ９５：３５０。Ｃ１−インヒビターは、セルピン類とも呼ばれるセリン−プロテイナーゼインヒビター類として知られている同族タンパク質のスーパーファミリーに属する。ＴｒａｖｉｓＪ．等、１９８３、ＡｎｎＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ５２：６５５；ＣａｒｒｅｌＲ．Ｗ．等、１９８５、ＴｒｅｎｄｓＢｉｏｃｈＳｃｉ１０：２０。ドデシル硫酸ナトリウムポリアクリルアミドゲルで、Ｃ１−インヒビターは、おおよそ１０５ｋＤの見かけの分子量を有する。その血漿濃度は、約２７０ｍｇ／ｌである。ＳｃｈａｐｉｒａＭ等、１９８５、Ｃｏｍｐｌｅｍｅｎｔ２：１１１；ＮｕｉｊｅｎｓＪＨ等、１９８９、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ８４：４４３。Ｃ１−インヒビターは、合併症のない感染及び他の炎症条件中にそのレベルが２倍まで増加する可能性のある急性期応答タンパク質である。ＫａｌｔｅｒＥＳ等、１９８５、ＪＩｎｆｅｃｔＤｉｓ１５１：１０１９。炎症条件におけるＣ１−インヒビターの増加した合成は、最もおそらくは、急性期応答中の補体及び接触系の（血管内）活性化の有害な影響に対して生体を守ることを意味する。慢性関節リウマチの患者では、Ｃ１−インヒビターの合成速度は、正常な速度の２．５倍まで増加する可能性がある。Ｗｏｏ等、１９８５、ＣｌｉｎＥｘｐＩｍｍｕｎｏｌ６１：１．正常な志願者における放射性標識したＣ１−インヒビターを用いた代謝研究では、１時間当たり血漿プールの２．５％の部分分解代謝速度（ｆｒａｃｔｉｏｎａｌｃａｔａｂｏｌｉｃｒａｔｅ）（ＦＣＲ）及び約２０時間のクリアランスの見かけの血漿半減期が得られている。Ｗｏｏ等、１９８５、ＣｌｉｎＥｘｐＩｍｍｕｎｏｌ６１：１；ＱｕａｓｔｅｌＭ・等、１９８３、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ７１：１０４１。セルピン類は、類似した阻害機構を共有し、それは、阻害されるプロテイナーゼと安定な二分子複合体を形成することを特徴とする。これらの複合体において、プロテイナーゼの活性部位は、セルピンのいわゆる反応中心に結合され、それにより不活性にされる。ＴｒａｖｉｓＪ．等、１９８３、ＡｎｎＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ５２：６５５。他のセルピン類のように、Ｃ１−インヒビターはプロテイナーゼと安定な複合体を形成することによりこれらのプロテイナーゼを阻害し、複合体は循環から迅速に取り除かれる。ＤｅＳｍｅｔＢ．Ｊ．Ｇ．Ｌ・等、１９９３、Ｂｌｏｏｄ８１：５６。セルピン類は、ある種のプロテイナーゼに特異性を有し、この特異性は、反応中心のアミノ酸配列によりある程度決定される。セルピン類の活性は、タンパク質コアに結合した高分子の硫酸化糖複合体（ｇｌｙｃｏｃｏｎｊｕｇａｔｅ）の混成群であるグリコサミノグリカンにより影響される可能性がある。ＫｊｅｌｌｅｎＬ．等・１９９１、ＡｎｎｕＲｅｖＢｉｏｃｈｅｍ６０：４４３；ＰｏｏｌｅＡ．Ｒ．、１９８６、ＪＢｉｏｃｈｅｍ２３６：１；ＢｏｕｒｉｎＭ．−Ｃ．等、１９９３、ＢｉｏｃｈｅｍｉｃａｌＪ２８９：３１３。この群は、生理学的化合物のヘパリン、ヘパラン硫酸及びデルマタン硫酸を含む。ＰｏｏｌｅＡ．Ｒ．、１９８６、ＪＢｉｏｃｈｅｍ２３６：１。例えば、ヘパラン硫酸及びヘパリン様分子は、血管床（ｂｅｄ）の内皮細胞結合グリコサミノグリカンである。ＡｕｓｐｒｕｎｋＤ．Ｈ．等、１９８１、ＡｍＪＰａｔｈｏｌ１０３：３５３；ＭａｒｃｕｍＪ．Ａ．等、１９８５、ＢｉｏｃｈｅｍＢｉｏｐｈｙｓＲｅｓＣｏｍｍ１２６：３６５；ＩｈｒｃｋｅＮ．Ｓ．等、１９９３、ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＴｏｄａｙ１４：５００。グリコサミノグリカンは、エンドグリコシダーゼ、特にヘパリナーゼを阻害するそれらの特性に基づく抗転移及び／または抗炎症活性を有することが請求されている。ＰａｒｉｓｈＣ．Ｒ．等、１９８８、ＷＯ第８８／０５３０１号（オーストラリア大学）。グリコサミノグリカンのこの作用は、本発明に関係しない。ヘパリンの治療用途の根底には、アンチトロンビンの機能に対するその増大効果がある。さらに、硫酸化多糖は、リポタンパク質結合血液凝固インヒビター（ＬＡＣＩ）の存在下でさらなる抗凝血活性を出すことができ、この作用は、治療用途のために特許を得ている。Ｔｚｅ−ＣｈｅｉｎＷｕｎ、１９９２、ＥＰ−Ａ−第０４７３５６４号（ＭｏｎｓａｎｔｏＣｏｍｐａｎｙ）。半合成の硫酸化多糖デキストラン硫酸は、プロテアーゼネキシン−１（ＰＮ−１）のような血液凝固の他のインヒビターを強化することができるが、アンチトロンビンIIIに対してはヘパリンより低い増大作用を有する。ＳｃｏｔｔＲ．Ｗ．、１９９１、ＷＯ第９１／０５５６６号（ＩｎｖｉｔｒｏｎＣｏｒｐ．）。血液凝固インヒビターに対する硫酸化多糖のこれらの作用は本発明に関係せず、本発明は、デキストラン硫酸とＣ１−インヒビターの相互作用を扱っている。ヘパリン−アンチトロンビンIIIの相互作用は、おそらく、グリコサミノグリカンが増大するセルピンの機能の最もよく研究された例である。しかしながら、多数の研究は、グリコサミノグリカン、特にヘパリンが、Ｃ１−インヒビターを初めとする他のセルピン類の機能も強化することができることも示している。すなわち、精製されたタンパク質を用いた反応速度論アッセイにおいて、ヘパリンが、Ｃ１ −インヒビターによるＣ１ｓの阻害を１５ないし３５倍強化することが示されており、一方、活性Ｃ１またはＣ１ｒの阻害は、これより低く増大された。ＲｅｎｔＲ．等、１９７６、ＣｌｉｎＥｘｐＩｍｍｕｎｏｌ２３：２６４；ＳｉｍＲ．Ｂ．等、１９８０、ＢｉｏｃｈｉｍＢｉｏｐｈｙｓＡｃｔａ６１２：４３３；ＣａｕｇｈｍａｎＧ．Ｂ．等・１９８２、ＭｏｌＩｍｍｕｎｏｌ１９：２８７；ＮｉｌｓｓｏｎＴ．等、１９８３、ＥｕｒＪＢｉｏｃｈｅｍ１２９：６６３；ＬｅｎｎｉｃｋＭ．等、１９８６、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２５：３８９０；ＨｏｒｔｉｎＧ．Ｌ．等、１９９１、ＩｍｍｕｎｏｌＩｎｖｅｓｔ２０：７５。Ｃ１ｓのこの高められた相互作用は、Ｃ１−インヒビターの増大したタンパク質分解不活性化を犠牲にして起こる。ＷｅｉｓｓＶ．等、１９８３、Ｈｏｐｐｅ−Ｓｅｙｌｅｒ’ｓＺＰｈｙｓｉｏｌＣｈｅｍ３６４：２９５。Ｃ１−インヒビターに対するこれらの作用に加えて、ヘパリンは、アクチベーターへのＣ１ｑの結合、Ｃ１−エステラーゼの活性及び古典的Ｃ３−コンバーターゼの形成に対する阻害作用のような補体系に対する多数の他の作用を有する。ＲａｅｐｐｌｅＥ．等、１９７６、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１３：２５１；ＬｏｏｓＭ．等、１９７６、Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ１３：２５７：ＳｔｒｕｎｋＲ．等、１９７６、ＣｌｉｎＩｍｍｕｎｏｌＩｍｍｕｎｏｐａｔｈｏｌ６：２４８。従って、ヘパリンは、治療的補体インヒビターとみなされるかもしれない。しかしながら、ヘパリンの補体阻害作用は、抗凝血作用のために必要とされるものより少なくとも一桁高い濃度で見られ、インビボでそのような用量を用いることは、容認できない出血の危険を伴う。抗凝血特性を弱めるために、ヘパリンのＮ−脱硫酸化Ｎ−アセチル化型が開発されており、この調製物は、顕著な補体阻害特性を有することが示されている。ＷｅｉｌｅｒＪ．Ｍ．等、１９９２、ＪＩｍｍｕｎｏｌ１４８：３２１０；ＦｒｉｅｄｒｉｃｈｓＧ．Ｓ．等、１９９４、ＣｉｒｃＲｅｓ７５：７０１。しかしながら、これは、ヘパリン（またはあらゆる他のグルコサミノグリカン）の使用のもう一つの不都合な点、すなわち、動物の供給源から精製されなければならないことを回避していない。グリコサミノグリカンが、Ｃ１−インヒビターをその標的プロテアーゼのＣ１ｓ及び第XIａ因子の阻害に対して強化する機構は知られていない。しかしながら、ヘパリンが促進するアンチトロンビンIIIによるトロンビンの阻害に関して知られていることの類推により、いくつかの機構が仮定される。すなわち、（Ｉ）グリコサミノグリカンが、インヒビターの構造的変化を引き起こすことができ、これをより活性にする；（II）グリコサミノグリカンが、インヒビター及び標的プロテアーゼが集合することができる鋳型として働くことができる：（III）グリコサミノグリカンが、インヒビターもしくはプロテアーゼのいずれかまたは両方のプラスの電荷を中和することができ、これにより、より容易な相互作用を可能にする。ＥｖａｎｓＤ．Ｌ．等、１９９２、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ３１：１２６２９；ＢｏｄｅＷ．等、１９９４、Ｆｉｂｒｉｎｏｌｙｓｉｓ８：１６１；ＰｏｔｅｍｐａＪ．等、１９９４、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２６９：１５９５７。報告されたグリコサミノグリカンが誘導するＣ１−インヒビター機能の増大にこれらの機構のいずれが当てはまるかは、さらなる研究において示されなければならない。本発明では、Ｃ１−インヒビターの阻害活性を高めるために合成の硫酸化多糖デキストラン硫酸が用いられる。デキストラン硫酸及び関連化合物は、ヒト免疫不全ウイルス１型の有効なインヒビターである可能性がある。ＤｅＣｌｅｒｃｑＥ．Ｄ．Ａ．等、１９８８、ＥＰ−Ａ−第０２９３８２６号（ＳｔｉｃｈｔｉｎｇＲｅｇａＶ．Ｚ．Ｗ．）。さらに、デキストラン硫酸は、動脈硬化症の治療のために有用である可能性がある。ＨｅｒｒＤ．、１９８８、ＥＰ−Ａ −第０２７６３７０号（ＫｎｏｌｌＡＧ）。これらの作用は、本発明に関係しない。さらに、デキストラン硫酸の高分子量種は、接触系の第XII因子の自己活性化を高めることができるが、低分子量種はできない。ＳａｍｕｅｌＭ．等、１９９２、ＪＢｉｏｌＣｈｅｍ２６７：１９６９１。発明の要約今回、各種補体、血液凝固、接触系及び線維素溶解プロテアーゼの主要なインヒビターであるＣ１−インヒビターの阻害特性を、半合成ポリアニオン化合物の硫酸化多糖デキストラン硫酸とのインキュベーションにより変え、補体及び血液凝固阻害特性に関して１００倍以上まで選択的に強化されたＣ１−インヒビターを生じることができることが見いだされた。従って、本発明は、選択的に高められた機能を有するＣ１−インヒビターを含有している製薬学的組成物を意図し、インビボで補体及び／または血液凝固の活性化を阻害するためにこれを予防的または治療的に用いることができる。製薬学的組成物は、Ｃ１−インヒビター及びデキストラン硫酸種を含んでなる。典型的な組成物は、ヒト血漿もしくはあらゆる他の生物学的供給源由来のＣ１−インヒビター、または組み換え体のＣ１−エステラーゼインヒビター、またはそれ由来の突然変異体を含んでもよい。また、典型的な組成物は、異なる分子量のデキストラン硫酸、または類似する作用を有するあらゆる他の合成ポリアニオン化合物も含んでもよい。本発明は、以下の本発明の説明の考察の後に、より完全に理解されるであろう。図面の簡単な説明図１．第XIａ因子のアミド分解活性に対するグリコサミノグリカンまたはＤＸＳの影響。第XIａ因子のアミド分解活性は、０．１ｍｏｌ／ｌＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、０．１４ｍｏ１／ｌＮａＣｌ及び０．１％（ｗｔ／ｖｏｌ）Ｔｗを含むバッファー中、０．４ｍｍｏｌ／ｌの最終濃度で発色性基質Ｓ−２３６６を用いて、３７℃で４０５ｎｍの吸光度の初期変化として測定された。ＤＸＳＭＷ５００，０００（黒丸）、ＤＸＳＭＷ５，０００（三角）、ヘパリン（白丸）、ヘパラン硫酸（黒四角）またはデルマタン硫酸（白四角）の異なる量の効果が調べられた。結果は、異なるグリコサミノグリカンの異なる量（μｇ／ｍｌ、最終濃度）を添加した後に残っている、あらゆるグリコサミノグリカンの非存在下での１ｎｍｏｌ／ｌの第XIａ因子の活性のパーセンテージとして表される。図２．グリコサミノグリカンまたはＤＸＳの非存在下でのＣ１−インヒビターによる第XIａ因子の不活性化の反応速度論。第XIａ因子（最終濃度６ｎｍｏｌ／ｌ）を０．１ｍｏｌ／ｌＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、０．１４ｍｏｌ／ｌＮａＣｌ、０．１％Ｔｗ中で異なる濃度のＣ１−インヒビターと３７℃でインキュベートした。各時間にアリコートを取り出し、第XIａ因子の残存するアミド分解活性に関してアッセイした。（パネルＡ）０（黒丸）、０．３２（白丸）、０．６４（黒四角）、０．９６（白四角）または１．２８（プラス記号）μｍｏｌ／ｌのＣ１−インヒビターの存在下で、第XIａ因子の不活性化を評価した。残存する第XI因子のアミド分解活性の自然対数を時間に対してプロットした。（パネルＢ）擬一次速度定数（ｋ、ｍｉｎ^-1）をパネルＡに示したプロットの勾配から計算し、Ｃ１−インヒビター濃度の関数としてプロットした。この線の勾配は、二次速度定数（ｋ₂、ｍｉｎ^-1、Ｍ^-1）を表す。図３．グリコサミノグリカンまたはＤＸＳの存在下でのＣ１−インヒビターによる第XIａ因子の不活性化の反応速度論。第XIａ因子（最終濃度３ないし８ｎｍｏｌ／ｌ）を０．１ｍｏｌ／ｌＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、０．１４ｍｏｌ／ｌＮａＣｌ、０．１％Ｔｗ中でＣ１−インヒビター（最終濃度０．３２ μｍｏｌ／ｌ）と３７℃でインキュベートし、擬一次速度定数を図２の説明文に記述したように測定した。結果は、グリコサミノグリカンまたはＤＸＳの非存在下での阻害速度と比較した、異なる量のＤＸＳＭＷ５００，０００、ＤＸＳＭＷ５，０００、ヘパリン、ヘパラン硫酸またはデルマタン硫酸の存在下でのＣ１−インヒビターによる第XIａ因子の阻害の強化倍数として表される。図４．グリコサミノグリカンまたはＤＸＳの存在下でのＣ１−インヒビターによる第XIａ因子阻害の擬一次速度定数。異なる濃度のＣ１−インヒビターの存在下で、そしてＤＸＳＭＷ５００，０００、ＤＸＳＭＷ５，０００、ヘパリン、ヘパラン硫酸もしくはデルマタン硫酸の存在下で、またはグリコサミノグリカンもしくはＤＸＳの非存在下で、図２の説明文に記述したように擬一次速度定数を測定した。これらの線の勾配は、二次速度定数（ｋ₂、ｍｉｎ^-1、Ｍ^-1）を表す。図５．各種グリコサミノグリカンまたはＤＸＳの存在下でのＣ１−インヒビターによるＣ１ｓの阻害。０．８ｍｍｏｌ／ｌの最終濃度で発色性基質Ｓ２３１４を含んでいるリン酸緩衝食塩水（ＰＢＳ）−０．０５％Ｔｗ中で、３ｎｍｏｌ／ｌの最終濃度のＣ１ｓをＣ１−インヒビター（最終濃度１５ｎｍｏｌ／ｌ）及び各種グリコサミノグリカン（各々１０μｇ／ｍｌで試験した）と３７℃でインキュベートした。４０５ｎｍの吸光度の時間変化を示す。図６．Ｃ１−インヒビターによるＣ１ｓの阻害に対するＤＸＳＭＷ５００，０００の増大効果の投与量反応。用いた条件は、図５に記述したものと同じである。図７．Ｃ１−インヒビターによるＣ１ｓの阻害に対するＤＸＳＭＷ５，０００の増大効果の投与量反応。用いた条件は、図５に記述したものと同じである。図８．集合（ａｇｇｒｅｇａｔｅｄ）ヒトＩｇＧによる再石灰化（ｒｅｃａｌｃｉｆｉｅｄ）血漿における補体活性化のＤＸＳＭＷ５００，０００による阻害。１０ｍＭＣａＣｌ₂（最終濃度）を添加することにより、クエン酸塩添加血（１０ｍｍｏｌ／ｌ、最終濃度）を再石灰化した。３７℃で１５分後に血餅が生じ、４℃で２，０００ｘｇで１０分間遠心分離することによりこれを除いた。次に、５ｍｇ／ｍｌの濃度で集合ヒトＩｇＧを含んでいるベローナール緩衝食塩水１容量と再石灰化血漿１容量を３７℃で２０分間インキュベートした。次に、Ｃ１ｓ−Ｃ１−インヒビター複合体、Ｃ４及びＣ３の活性化生成物（それぞれ、Ｃ４ｂ／Ｃ４ｂｉ／Ｃ４ｃ及びＣ３ｂ／Ｃ３ｂｉ／Ｃ３ｃ）の生成を評価することにより、このインキュベーション中の補体活性化を測定した。集合ＩｇＧを記述されたように調製した。ＨａｃｋＣ．Ｅ．等、１９８１、ＪＩｍｍｕｎｏｌ１２７：１４５０。Ｃ１ｓ−Ｃ１−インヒビター複合体並びにＣ３及びＣ４の活性化生成物を以前に記述されたように測定した。ＮｕｉｊｅｎｓＪ．Ｈ．等、１９８９、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ８４：４４３；ＷｏｌｂｉｎｋＧ．Ｊ．等、１９９３、ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈ１６３：６７。結果（３回の実験の平均及び標準偏差）を阻害％として示し、０％は、ＤＸＳの非存在下での活性化生成物の生成であり、１００％は、集合ＩｇＧ及びＤＸＳの非存在下での補体活性化生成物の生成である。図９．集合ヒトＩｇＧによる再石灰化血漿における補体活性化のＤＸＳＭＷ５，０００による阻害。ＤＸＳＭＷ５，０００を用いたことを除いて、図８に記述したものと同様に実験を実施した。図１０．集合ヒトＩｇＧによる再石灰化血漿における補体活性化のヘパリンによる阻害。ヘパリンを用いたことを除いて、図８に記述したものと同様に実験を実施した。図１１．集合ヒトＩｇＧによる再石灰化血漿における補体活性化のＮ−アセチル−ヘパリンによる阻害。Ｎ−アセチル−ヘパリンを用いたことを除いて、図８に記述したものと同様に実験を実施した。発明の詳細な説明本発明を実現するために用いた材料及び方法の様々な特徴を説明するいくつかの特許／特許出願及び科学論文が、以下に引用される。これらの参考文献の全ては、引用することにより完全に組み込まれると解釈される。本発明の要旨は、血漿における補体、血液凝固、接触系及び線維素溶解プロテアーゼの主要なインヒビターであるＣ１−インヒビターを半合成化合物デキストラン硫酸（ＤＸＳ）によりその阻害スペクトルに関して修飾することができる実現であり、すなわち、補体及び血漿凝固系に対するＣ１−インヒビターの阻害特性は１００倍以上まで強化され、一方、接触及び線維素溶解系に対するものは変化しない。ＤＸＳによりＣ１−インヒビターの阻害機能を変える実質的にあらゆる方法が、本発明の範囲に入ると解釈される。Ｃ１ｓの阻害に対するグリコサミノグリカンの強化作用は、以前に記述されている（「本発明の背景」の項を参照）。しかしながら、これらのグリコサミノグリカンは、動物供給源から得られており、異なる程度で、アンチトロンビンIII及びヘパリン補因子IIも強化する。これらのグリコサミノグリカンの低い投与量が、血栓塞栓疾患の治療のために臨床環境で用いられている。患者において補体の阻害を得るためには、少なくとも１桁高いヘパリンの投与量が必要とされ、これは、容認できない出血の危険を有する。本発明の利点は、ａ）以下に例示するように、ＤＸＳは、いずれのグリコサミノグリカンよりも第XIａ因子及びＣ１ｓの阻害に対して強い増大効果を有する；ｂ）ＤＸＳの大きい方の型のみがアンチトロンビンIIIに対するいくらかの刺激効果を有する可能性があり、それ故、この化合物の低分子量型を用いた治療は、出血傾向の危険がない；そして、ｃ）ヘパリンのようなグリコサミノグリカンは動物から精製されるが、ＤＸＳは半合成化合物であり、大量生産することができる。本発明をより明確に定義するために、これを３つの項で説明する。第一項では、精製された系でのＣ１−インヒビターによる標的プロテアーゼの第XIａ因子、第XIIａ因子、カリクレイン及びＣ１ｓの阻害に対するＤＸＳの効果を説明する。グリコサミノグリカンを用いて得られた結果も比較のために示される。第二項では、血漿における補体活性化に対するＤＸＳの効果を説明する。補体インヒビターとして時々用いられるグリコサミノグリカンのヘパリン及びＮ−アセチル− ヘパリンの効果も比較のために示される。第三項では、Ｃ１−インヒビターを含有する治療的組成物におけるＤＸＳの応用を説明する。精製された系におけるＣ１−インヒビターによる標的プロテアーゼの阻害に対するＤＸＳの効果この項では、Ｃ１−インヒビターによる標的プロテアーゼの第XIａ因子、第XI Iａ因子、カリクレイン及びＣ１ｓの阻害に対するＤＸＳの効果が示される。示される実験のタイプは、Ｃ１−インヒビターによる標的プロテアーゼの阻害の速度反応論を表す擬一次及び二次速度定数の測定、及びこれらの速度定数に対するＤＸＳの効果である。Ｃ１−インヒビターによる第XIａ因子の阻害の速度定数の測定は詳細に示され、一方、カリクレイン、第XIIａ因子またはＣ１ｓの阻害を示す定数のものはより簡潔に述べられる。ＤＸＳが、いずれのグリコサミノグリカンよりもＣ１−インヒビターを強めることに有効であることを説明するために、各種グリコサミノグリカンの速度定数に対する効果も示される。最後に、アンチトロンビンIII、α２−アンチプラスミン及びα１−アンチトリプシンは、血漿において第XIａ因子の阻害にかなり寄与しているので、第XIａ因子の場合、これらのインヒビターによる阻害に対するＤＸＳまたはグリコサミノグリカンの効果も示される。デキストラン硫酸（ＭＷ５００，０００、硫黄含有量１７％）は、ＰｈａｒｍａｃｉａＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎから購入し；デキストラン硫酸（ＭＷ５，０００）、ヘパラン硫酸（ウシ腸粘膜由来）及びダイズ−トリプシンインヒビター（ＳＢＴＩ、Ｉ−Ｓ型）は、ＳｉｇｍａＣｈｅｍｉｃａｌＣｏ．、Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ、ＭＯから；未分画ヘパリン（ＩＵ／ｍｌは、７μｇ／ｍｌに相当する）は、ＫａｂｉＶｉｔｒｕｍ、Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ、Ｓｗｅｄｅｎから；デルマタン硫酸（コンドロイチン硫酸Ｂ）臭化ヘキサジメトリン（ポリブレン（Ｐｏｌｙｂｒｅｎｅ））は、ＪａｎｓｓｅｎＣｈｉｍｉｃａ、Ｂｅｅｒｓｅ、Ｂｅｌｇｉｕｍからであり：Ｔｗｅｅｎ− ２０（Ｔｗ）は、Ｊ．Ｔ．ＢａｋｅｒＣｈｅｍｉｃａｌ、Ｐｈｉｌｌｉｐｓｂｕｒｇ、ＮＪから購入した。発色性基質のＧｌｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−ｐ−ニトロアニリド（Ｓ−２３６６：第XIａ因子の基質）及びＨ−Ｄ−Ｐｒｏ−Ｐｈｅ−Ａｒｇ−ｐ−ニトロアニリド（Ｓ−２３０２；第XIIａ因子及びカリクレインの基質）は、Ｃｈｒｏｍｏｇｅｎｉｒ−Ａｒｇ−ｐ−ニトロアニリド（Ｓ−２３１４；Ｃ１ｓの基質）は、ＫａｂｉＤｉａｇｎｏｓｔｉｃａ（Ｓｔｏｃｋｈｏｌｍ、Ｓｗｅｄｅｎ）からであった。精製されたヒト第XIａ因子をＫｏｒｄｉａＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｕｐｐｌｉｅｓ、Ｌｅｉｄｅｎ、ＴｈｅＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓから購入し、０．１ｍｏｌ／ｌＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、０．１４ｍｏｌ／ｌＮａＣｌ、０．１％（ｗｔ／ｖｏｌ）Ｔｗ中で−７０℃で保存した。第XI因子を第XIIａ因子とインキュベートし、その後、トウモロコシのトリプシンインヒビターカラムへの吸収により第XIIａ因子を除くことにより、この調製物は製造された。第XIａ因子調製物は、非還元ＳＤＳ／１０−１５％（ｗｔ／ｖｏｌ）−ポリアクリルアミドゲル電気泳動で１６０ｋＤの単一バンドとして、そして還元ＳＤＳ／１０− １５％（ｗｔ／ｖｏｌ）−ポリアクリルアミドゲル電気泳動でそれぞれ５０及び３０ｋＤの２本のバンドとして移動した。活性第XII因子の軽鎖に対して向かい、その触媒活性を妨げるモノクローナル抗体（ｍＡｂ）ＯＴ−２（ＤｏｒｓＤ．Ｍ．等、１９９２、ＴｈｒｏｍｂＨａｅｍｏｓｔ６７：６４４）を第XIａ因子調製物に添加し（８０μｇ／ｍｌの最終濃度）、微量の残っている第XIIａ因子をブロックした。第XIａ因子の濃度を８０ｋＤサブユニットのモル濃度として表した。精製されたヒトα−第XIIａ因子をＫｏｒｄｉａＬａｂｏｒａｔｏｒｙＳｕｐｐｌｉｅｓ、Ｌｅｉｄｅｎ、ＴｈｅＮｅｔｈｅｒｌａｎｄｓから購入した。カリクレイン、β−第XIIａ因子及びＣ１ｓを記述されたように精製した（ＮｕｉｊｅｎｓＪ．Ｈ．等、１９８７、ＴｈｒｏｍｂＨａｅｍｏｓｔ５８：７７８；ＮｕｉｊｅｎｓＪ．Ｈ．等、１９８７、Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ６１：３８７）。精製されたＣ１− インヒビター調製物をＢｅｈｒｉｎｇｗｅｒｋｅＡＧ（Ｍａｒｂｕｒｇ、Ｇｅｒｍａｎｙ）及び我々の研究所（ＣＬＢ）の血漿生成物の開発部門から、α１− アンチトリプシン、α２−アンチプラスミン及びアンチロトンビンIIIをＣａｌｂｉｏｃｈｅｍ（ＬａＪｏｌｌａ、ＣＡ）から購入した。０．１ｍｏｌ／ｌＴｒｉｓ−ＨＣｌ、ｐＨ７．４、０．１４ｍｏｌ／ｌＮａＣｌ及び０．１％（ｗｔ／ｖｏｌ）Ｔｗを含むバッファー中で０．４ｍｍｏｌ／ｌの最終濃度で発色性基質Ｓ−２３６６を用いることにより、マイクロタイタープレート（ＧｒｅｉｎｅｒＧｍｂＨ、Ｆｒｉｃｋｅｎｈａｕｓｅｎ、Ｇｅｒｍａｎｙ）のウェル中で第XIａ因子のアミド分解活性を測定した（２００μｌの全容量）。タイターテックツインリーダー（Ｔｉｔｅｒｔｅｋｔｗｉｎｒｅａｄｅｒ）（ＦｌｏｗＬａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ、Ｉｒｖｉｎｅ、ＵＫ）を用いて、４０５ｎｍの吸光度の初期変化（δＡ）を３７℃で測定した。グリコサミノグリカン及びＤＸＳは、カリクレインのアミド分解活性に直接影響を及ぼすことができる。ＴａｎｋｅｒｓｌｅｙＤ．Ｌ．等、１９８３、Ｂｌｏｏｄ６２：４４８。ヘパリン、ヘパラン硫酸またはデルマタン硫酸は、第XIａ因子のアミド分解活性に対して測定できる効果を有さず、一方、ＤＸＳＭＷ５００，０００は、この活性を投与量に依存して５０％まで阻害したが、ＤＸＳＭＷ５，０００はそうしなかった（図１）。さらなる実験において、ＤＸＳを用いて得られた結果は、この効果に関して修正された。バッファーとして０．１ｍｏｌ／ｌＴｒｉｓ−Ｈｃｌ、ｐＨ７．４、０．１４ｍｏｌ／ｌＮａＣｌ、０．１％（ｗｔ／ｖｏｌ）Ｔｗを用いて３７℃で０．５ｍｌのポリプロピレンチューブ中、グリコサミノグリカンまたはＤＸＳの存在または非存在下で第XIａ因子及びインヒビターをインキュベートした。インキュベーション前に、これらの混合物の各種成分を３７℃で５分間前もって温めた。前もって温めた第XIａ因子（最終濃度３ないし８ｎｍｏｌ／ｌ）を反応混合物に添加した後、各時間で１０μｌのアリコートを取り出し、上記のように１９０μ ｌのバッファー及び基質に希釈することにより、第XIａ因子の残存アミド分解活性を評価した。観察されたδＡ／分は測定の期間中一定であり、これを第XIａ因子及びグリコサミノグリカンを含むがプロテアーゼインヒビターを含まない試料のδＡ／分と比較することにより最大活性のパーセンテージに換算した。第XIａ因子に対して１３ないし２１０倍モル過剰でインヒビターを用いる擬一次条件下で阻害の速度反応論を調べた。実際、第XIａ因子の残存アミド分解活性の自然対数を時間に対してプロットした時に得られる直線から結論づけられるように（図２Ａ）、Ｃ１−インヒビターによる第XIａ因子の不活性化は、擬一次条件下で一次反応速度論に従うようであった。これらの条件下で、式ｌｎ（Ｅ／Ｅ₀）＝− ｋｘｔ、式中、Ｅ₀は第XIａ因子の初期濃度であり、Ｅは時間ｔで残存している第XIａ因子の濃度である、は、阻害反応速度論を表す（ＳｏｏｎｓＨ．、１９８７、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２６：４６２４）。この式により、見かけの一次速度定数ｋの値は、これらの線の勾配から計算され、これらが、Ｃ１ −インヒビターの濃度に正比例することが見いだされた（図２Ｂ）。従って、以前の研究と一致して、阻害は二次であることが見いだされた。ＳｏｏｎｓＨ．、１９８７、Ｂｉｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ２６：４６２４。反応を表す速度定数を線形回帰分析により計算し、１．８ｘ１０³Ｍ^-1ｓ^-1であると求められた。異なる量のデキストラン硫酸、ヘパリン、ヘパラン硫酸またはデルマタナ硫酸の存在下でのＣ１−インヒビターによる第XIａ因子の阻害も擬一次条件下で一次であるようであった。しかしながら、これらの速度定数は、グリコサミノグリカンの増加する量と共に増加した（図３）。ＤＸＳＭＷ５００，０００及びＤＸＳＭＷ５，０００は、調べられた生理学的グリコサミノグリカンのいずれよりもＣ１−インヒビターによる第XIａ因子の阻害を増大することに有効であるようであった（図４）。二次速度定数を計算するために式ｋ₁＝ｋ₂ ｘ［Ｃ１−インヒビター］を用いたことを除いて、第XIａ因子の他のインヒビターを用いて同様の実験を実施した。第XIａ因子の残存アミド分解活性の時間に対する半対数プロットにおいて再び直線が得られ、これは、反応が一次であることを示す。見かけの二次速度定数の値を計算し、これらを表Ｉに示す。各速度定数を少なくとも２回測定し、異なる測定間の変動は、９．６±０．５％（平均±平均の標準誤差）であった。従って、各種グリコサミノグリカンはＣ１−インヒビターによる第XIａ因子の阻害を強化したが、半合成化合物ＤＸＳが、第XIａ因子の阻害に関してＣ１−インヒビターを最もよく、すなわち１００倍以上まで強化する化合物であった。また、ＤＸＳは、アンチトロンビンIII（ＡＴIII）による第XIａ因子の阻害も強化したが、この効果は５倍より大きくはなく、またＡＴIIIに対するヘパリンのものよりかなり弱かった（表Ｉ）。α２−アンチプラスミン（α２ＡＰ）またはα１−アンチトリプシン（αＩＡＴ）による第XIａ因子の阻害は、ＤＸＳによりほとんど高められなかった。表Ｉ．各種グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）またはＤＸＳの存在下でのＣ１− インヒビター（Ｃ１Ｉｎｈ）、α１−アンチトリプシン（α１ＡＴ）、α２−アンチプラスミン（α２ＡＰ）及びアンチトロンビンIII（ＡＴIII）による第XIａ因子の不活性化の二次速度定数。 ¹ ＤＸＳＭＷ５００，０００［１０μｇ／ｍｌ、最終濃度］；² ＤＸＳＭＷ５，０００［１０μｇ／ｍｌ］；＊Ｈｅｐ、ヘパリン［５０Ｕ／ｍｌ］；ＨＳ、ヘパラン硫酸［１ｍｇ／ｍｌ］；ＤＳ、デルマタン硫酸［１ｍｇ／ｍｌ］；ｎｄ＝測定されない。上記と同様にして、Ｃ１−インヒビターによる第XIIａ因子またはカリクレインの阻害に対するグリコサミノグリカン及びＤＸＳの効果を調べた。これらの実験では、Ｃ１−インヒビターの強化は見られなかった（表II）。表II．各種グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）またはＤＸＳの存在下でのＣ１− インヒビターによるα−第XIIａ因子、β−第XIIａ因子及びカリクレインの不活性化の二次速度定数。 ¹ＤＸＳＭＷ５００，０００［１２５μｇ／ｍｌ、最終濃度］；² ＤＸＳＭＷ５，０００［１２５μｇ／ｍｌ］；＊ＨＳ、ヘパラン硫酸［１ｍｇ／ｍｌ］；ＤＳ、デルマタン硫酸［１ｍｇ／ｍｌ］。このように、Ｃ１−インヒビターによる第XIａ因子の阻害に対する増大効果にもかかわらず、ＤＸＳ及びグリコサミノグリカンは、Ｃ１−インヒビターによる第XIIａ因子またはカリクレインの阻害に対しては、たとえあったとしても、ほとんど効果を有さなかった。二次条件を用いてＣ１ｓの阻害を分析した。各種グリコサミノグリカンは、Ｃ１−インヒビターによるＣ１ｓの阻害も強化するようであった。図５は、ＤＸＳＭＷ５００，０００が、Ｃ１−Ｉｎｈ（１５ｎＭ）によるＣ１ｓ（３ｎＭ）のアミド分解活性に関してＣ１−インヒビター（１５ｎＭ）の阻害活性を最もよく強化することを示す。図６は、ＤＸＳのこの効果が、１０−２０μｇ／ｍｌのＤＸＳ濃度で最高であることを示す。ＤＸＳＭＷ５，０００を用いて同様の結果が得られた（図３参照）。これらのデータをまとめると、表IIIに示される阻害の二次速度定数が得られる。表III．各種グリコサミノグリカン（ＧＡＧ）の存在下でのＣ１−インヒビターによるＣ１ｓの不活性化の二次速度定数。＊ＤＸＳ、デキストラン硫酸；ＨＳ、ヘパラン硫酸；ＤＳ、デルマタン硫酸；ＣＳＡ／ＣＳＣ、コンドロイチン硫酸Ａ／Ｃ。＃最終濃度。このように、この項で示される実験で、Ｃ１−インヒビターをＤＸＳとインキュベートすることによりＣ１−インヒビターによるＣ１ｓまたは第XIａ因子の阻害を強化でき、一方、接触系の阻害は変化しないことが示される。血漿における補体活性化に対するＤＸＳの効果この項及び次の項に示される実施例は、本発明をさらに具体的に説明することを意味し、本発明の範囲を限定するとみなされるべきではない。例えば、供給源、型またはＤＸＳ種の製造方法の変形；異なるアッセイ；異なる標識及び／またはシグナル；異なる材料及び形態の試験サポート（ｓｕｐｐｏｒｔｓ）を本発明の範囲から外れることなしに利用することができる。ＤＸＳを新しいヒト血清に添加し、続いてこの混合物を集合ＩｇＧ、コブラ毒因子、大腸菌バクテリアまたはザイモサンのような補体アクチベーターと３７℃ でインキュベーションすることにより、血清におけるＣ１−インヒビターによる補体の阻害に対するＤＸＳの効果を試験することができる。このインキュベーション後、さらなる活性化を防ぐためにＥＤＴＡを添加し、Ｃ３ａ、Ｃ４ａ、Ｃ５ａ、Ｃ３ｂ／ｂｉ／ｃ、Ｃ４ｂ／ｂｉ／ｃまたはＣ５ｂ−Ｃ９のような補体活性化生成物の存在に関して混合物を調べる。これらの補体活性化生成物のアッセイは、当該技術分野においてよく知られており、市販のものを購入することができる。好ましいアッセイは、ＨａｃｋＣ．Ｅ．等、１９８８、ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈ１０８：７７；ＨａｃｋＣ．Ｅ．等、１９９０、ＪＩｍｍｕｎｏｌ１４４：４２４９；ＮｕｉｊｅｎｓＪ．Ｈ．等、１９８９、ＪＣｌｉｎＩｎｖｅｓｔ８４：４４３；及びＷｏｌｂｉｎｋＧ．Ｊ．等、１９９３、ＪＩｍｍｕｎｏｌＭｅｔｈ１６３：６７により記述されたものである。図８及び図９に示されるように、ＤＸＳＭＷ５００，０００及びＤＸＳＭＷ５，０００は両方とも、集合ＩｇＧによる血清における補体活性化を顕著に阻害した。すなわち、約１００−２００μｇ／ｍｌの濃度の両ＤＸＳ種は、古典的経路のアクチベーターである集合ＩｇＧによる血清における活性Ｃ４及びＣ３の生成をほとんど完全に阻害した。さらに、ＤＸＳＭＷ５，０００ではなく、ＤＸＳＭＷ５００，０００は、Ｃ１ｓ−Ｃ１−インヒビター複合体の生成も阻害し、これは、おそらく、集合ＩｇＧへのＣ１ｓの結合に対してＤＸＳＭＷ５００，０００が直接作用することを表している。ヘパリン及びＮ−アセチル−ヘパリンの作用を同様の実験で調べた。図１０に示されるように、ヘパリンは、ＤＸＳＭＷ５，０００と同様に集合ＩｇＧによる血清における補体活性化を阻害した。それに反して、Ｎ−アセチル−ヘパリンは、ヘパリンまたはＤＸＳより弱い補体インヒビターであるようであった（図１１）。減少した抗凝血特性を有するこのヘパリン種の活性Ｃ３の生成に対する効果はほとんど見られず、一方、Ｃ４活性化の阻害は、１ｍｇ／ｍｌの濃度を調べなければ完全ではなかった。ＤＸＳで処理したＣ１−インヒビターの効果をＣＨ５０測定の投与量反応曲線のものと評価することにより、１Ｕの精製されたＣ１−インヒビターに対するＤＸＳの効果を増加するＣ１−インヒビター濃度の効果と直接比較した。このために、ＤＸＳと前もってインキュベートした１ＵのＣ１−インヒビター、またはＤＸＳを含まない各種濃度のＣ１−インヒビターを再石灰化血漿に添加し、これらの混合物のＣＨ５０力価を測定した。表IVに示されるこれらの結果は、高投与量、すなわち１３５ＵまでのＣ１−インヒビターを添加した際のＣＨ５０力価の減少がほんのわずか、すなわち４４から２７Ｕ／ｍｌまでであったことを示す。同様の効果が、ＤＸＳで強化された１ＵのＣ１−インヒビターで見られた表IV．ＣＨ５０アッセイにより測定される再石灰化血漿の溶血活性に対する、ＤＸＳで強化された１ＵのＣ１−インヒビターと未処理のＣ１ −インヒビターの効果の比較。＊ＤＸＳ、デキストラン硫酸；Ｃ１−Ｉｎｈ、Ｃ１−インヒビターこのように、この項に記述した実験により、ＤＸＳが血清中のＣ１−インヒビターを強化し、補体活性化生成物の生成を減少することができることが示される。Ｃ１−インヒビターを含有する治療的組成物におけるＤＸＳの応用本発明の好ましい態様において、治療的組成物は、例えば、ＶｏｏｇｅｌａａｒＥ．Ｆ．等、１９７４、ＶｏｘＳａｎｇ２６：１１８に従って調製されるように、有効成分として血漿由来のＣ１−インヒビターを含む。この調製物のウイルス安全性は、Ｂ型肝炎−免疫グロブリンの添加及び最終容器中での凍結乾燥調製物の熱処理により保証される。ＢｒｕｍｍｅｌｈｕｉｓＨ．Ｇ．Ｊ．等、１９８３、ＶｏｘＳａｎｇ４５：２０５、Ｔｅｒｓｍｅｔｔｅ等、１９８６、ＶｏｘＳａｎｇ５１：２３９。以下の精製工程を含む方法により、ビタミンＫ依存性血液凝固因子を欠いた、Ｃ１−インヒビターは、ヒト血漿から調製される。すなわち、１）開始する血漿を滅菌蒸留水で１対１０希釈し；２）希釈した血漿を２ｇ／ｋｇの濃度でＤＥＡＥ−セファデックス（ＤＥＡＥ−Ｓｅｐｈａｄｅｘ）Ａ５０（ＰｈａｒｍａｃｉａＦｉｎｅＣｈｅｍｉｃａｌｓ、Ｕｐｐｓａｌａ、Ｓｗｅｄｅｎ）と８−１０℃で６０分間インキュベートし；３）このＤＥＡＥ −セファデックスを集め、１５０ｍＭ塩化ナトリウム、ｐＨ７．０で洗浄し、１０ｍＭクエン酸三ナトリウム、２Ｍ塩化ナトリウム、ｐＨ７．０で溶出し；４）５０％、ｖ／ｖの最終濃度が得られるように溶出液に硫酸アンモニウムを添加し；５）１３，０００ｒｐｍで遠心分離した後、６５％、ｖ／ｖの最終濃度が得られるように上清に硫酸アンモニウムを添加し；６）沈殿物を遠心分離により集め、１０ｍＭクエン酸三ナトリウム、ｐＨ７．０に溶解し；７）硫酸アンモニウムを除き、溶液を４０−５０ｍｇ／ｍｌのタンパク質濃度に濃縮するために分離濾過（ｄｉａｆｉｌｔｒａｔｉｏｎ）を実施し；８）Ｂ型肝炎免疫グロブリン（０４ＩＵ／ｍｌ）を添加した後、溶液を０．２２μｍフィルターを通して濾過し、バイアルに分注し、凍結乾燥し；９）凍結乾燥生成物を６０℃で７２時間熱処理する。本発明の好ましい態様において、Ｃ１−インヒビターをＤＸＳ（例えば、Ｃ１ −インヒビターの１ユニット当たり１００μｇ）と混合し、１時間インキュベートし、次に、静脈内注入により投与する。

【手続補正書】特許法第１８４条の８第１項【提出日】１９９７年１０月３０日（１９９７．１０．３０）【補正内容】請求の範囲１．Ｃ１−エステラーゼインヒビター、補体及び血液凝固の阻害に関してＣ１−エステラーゼインヒビターを選択的に強化するが、接触及び線維素溶解系の阻害に関しては強化しないデキストラン硫酸種、並びに製薬学的に受容しうる担体を含んでなる製薬学的組成物。２．該デキストラン硫酸種が低分子量のデキストラン硫酸である、請求の範囲１の製薬学的組成物。３．該デキストラン硫酸種が約５，０００の分子量を有するデキストラン硫酸である、請求の範囲２の製薬学的組成物。４．該デキストラン硫酸種が約５００，０００の分子量を有するデキストラン硫酸である、請求の範囲１の製薬学的組成物。５．該Ｃ１−エステラーゼインヒビターが、血漿から精製されるＣ１−エステラーゼインヒビター、血漿以外の生物学的材料から精製されるＣ１−エステラーゼインヒビター、組み換え体Ｃ１−エステラーゼインヒビター及び組み換え体Ｃ１−エステラーゼインヒビターの突然変異体からなる群から選択される、請求の範囲１の製薬学的組成物。６．該Ｃ１−エステラーゼインヒビターが、ヒト血漿から精製されるＣ１− エステラーゼインヒビター、血漿以外の生物学的ヒト材料から精製されるＣ１− エステラーゼインヒビター、ヒト組み換え体Ｃ１−エステラーゼインヒビター及びヒト組み換え体Ｃ１−エステラーゼインヒビターの突然変異体からなる群から選択される、請求の範囲１の製薬学的組成物。７．該Ｃ１−エステラーゼインヒビター及び該デキストラン硫酸種が互いに化学的に結合される、請求の範囲１の製薬学的組成物。８．補体及び血液凝固の阻害に関してＣ１−エステラーゼインヒビターを選択的に強化するが、接触及び線維素溶解系の阻害に関しては強化しないために有効な量で該デキストラン硫酸種を含んでなる、請求の範囲１の製薬学的組成物。９．抗炎症組成物としての使用のための、請求の範囲１の製薬学的組成物。１０．敗血症または心筋梗塞症の予防または治療処置のための、請求の範囲１の製薬学的組成物。１１．補体及び血液凝固の阻害に関してＣ１−エステラーゼインヒビターを選択的に強化するが、接触及び線維素溶解系の阻害に関しては強化しないデキストラン硫酸種の有効量を哺乳類に投与することを含んでなる、該哺乳類の予防または治療処置方法。１２．該哺乳類に生理学的に有効量のＣ１−エステラーゼインヒビターを投与することをさらに含んでなる、請求の範囲１１の方法。１３．該デキストラン硫酸種及び該Ｃ１−エステラーゼインヒビターが、物理的混合物の形態で、または互いに化学的に結合して、または別個の組成物で投与される、請求の範囲１２の方法。１４．補体及び血液凝固の阻害に関してＣ１−エステラーゼインヒビターを選択的に強化するが、接触及び線維素溶解系の阻害に関しては強化しないための製薬学的組成物を調製するためのデキストラン硫酸種の使用。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 38/00 Ａ６１Ｋ 47/36 47/36 35/14 Ｂ // Ａ６１Ｋ 35/14 37/02

Claims

【特許請求の範囲】１．補体及び血液凝固の阻害に関してＣ１−エステラーゼインヒビターを選択的に強化するが、接触及び線維素溶解系の阻害に関しては強化しないデキストラン硫酸種、並びに製薬学的に受容しうる担体を含んでなる製薬学的組成物。２．該デキストラン硫酸種が低分子量のデキストラン硫酸である、請求の範囲１の製薬学的組成物。３．該デキストラン硫酸種が約５，０００の分子量を有するデキストラン硫酸である、請求の範囲２の製薬学的組成物。４．該デキストラン硫酸種が約５００，０００の分子量を有するデキストラン硫酸である、請求の範囲１の製薬学的組成物。５．Ｃ１−エステラーゼインヒビターをさらに含んでなる、請求の範囲１の製薬学的組成物。６．該Ｃ１−エステラーゼエンヒビターが、血漿から精製されるＣ１−エステラーゼインヒビター、血漿以外の生物学的材料から精製されるＣ１−エステラーゼインヒビター、組み換え体Ｃ１−エステラーゼインヒビター及び組み換え体Ｃ１−エステラーゼインヒビターの突然変異体からなる群から選択される、請求の範囲５の製薬学的組成物。７．該Ｃ１−エステラーゼインヒビターが、ヒト血漿から精製されるＣ１− エステラーゼインヒビター、血漿以外の生物学的ヒト材料から精製されるＣ１− エステラーゼインヒビター、ヒト組み換え体Ｃ１−エステラーゼインヒビター及びヒト組み換え体Ｃ１−エステラーゼインヒビターの突然変異体からなる群から選択される、請求の範囲５の製薬学的組成物。８．該Ｃ１−エステラーゼインヒビター及び該デキストラン硫酸種が互いに化学的に結合される、請求の範囲５の製薬学的組成物。９．補体及び血液凝固の阻害に関してＣ１−エステラーゼインヒビターを選択的に強化するが、接触及び線維素溶解系の阻害に関しては強化しないために有効な量で該デキストラン硫酸種を含んでなる、請求の範囲１または請求の範囲５の製薬学的組成物。１０．抗炎症組成物としての使用のための、請求の範囲１または請求の範囲５の製薬学的組成物。１１．敗血症または心筋梗塞症の予防または治療処置のための、請求の範囲１または請求の範囲５の製薬学的組成物。１２．補体及び血液凝固の阻害に関してＣ１−エステラーゼインヒビターを選択的に強化するが、接触及び線維素溶解系の阻害に関しては強化しないデキストラン硫酸種の有効量を哺乳類に投与することを含んでなる、該哺乳類の予防または治療処置方法。１３．該哺乳類に生理学的に有効量のＣ１−エステラーゼインヒビターを投与することをさらに含んでなる、請求の範囲１２の方法。１４．該デキストラン硫酸種及び該Ｃ１−エステラーゼインヒビターが、物理的混合物の形態で、または互いに化学的に結合して、または別個の組成物で投与される、請求の範囲１３の方法。１５．補体及び血液凝固の阻害に関してＣ１−エステラーゼインヒビターを選択的に強化するが、接触及び線維素溶解系の阻害に関しては強化しないための哺乳類の予防または治療処置方法において使用するためのデキストラン硫酸種。１６．補体及び血液凝固の阻害に関してＣ１−エステラーゼインヒビターを選択的に強化するが、接触及び線維素溶解系の阻害に関しては強化しないための製薬学的組成物を調製するためのデキストラン硫酸種の使用。