JP2000309521A - Skin lotion - Google Patents
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、皮膚外用剤に関す
る技術分野の発明である。より具体的には、本発明は、
皮膚における抗老化効果やしわ抑制効果、さらには、細
胞増殖促進作用、コラーゲン産生促進作用、コラーゲン
糖化抑制作用が認められる皮膚外用剤に関する発明であ
る。TECHNICAL FIELD [0001] The present invention relates to an external preparation for the skin. More specifically, the present invention provides:
The present invention relates to an external preparation for skin which has an anti-aging effect and a wrinkle suppressing effect on skin, a cell growth promoting effect, a collagen production promoting effect, and a collagen glycation inhibiting effect.
【０００２】[0002]
【従来の技術】人間の皮膚は、主に、外側から、表皮層
及び真皮層により構成される。特に、内側を構成する真
皮層は、皮膚の９０％以上の体積を占め、皮膚を支える
働きを担っている。そして、この真皮層の状態が、皮膚
表面のはりや、表面形態に大きな影響を与えている。真
皮は加齢とともに薄くなることが知られており、皮膚の
しわやたるみなどの、皮膚の老化現象の要因となるの
は、真皮部分が薄くなり、衰えてくることが大きく関わ
っているものと考えられている。2. Description of the Related Art Human skin is mainly composed of an epidermis layer and a dermis layer from the outside. In particular, the dermis layer constituting the inside occupies 90% or more of the volume of the skin and plays a role of supporting the skin. The state of the dermis layer has a great effect on the skin surface beam and surface morphology. It is known that the dermis thins with age, and the cause of skin aging phenomena, such as wrinkles and sagging of the skin, is largely related to the fact that the dermis part becomes thinner and weakens It is considered.
【０００３】このような、皮膚の老化を防ぐことを目的
として、従来から、皮膚に対してペプチド類を使用し
て、皮膚の状態を向上させる試みが、いくつかなされて
いる。例えば、ペプチド類の中でもオリゴペプチド類を
配合した化粧料は、皮膚への密着性が良好で、しわを抑
制する等の、皮膚の老化を防止することが知られている
（特開昭５７−２２１３号公報）、特に、Ａｒｇ−Ｇｌ
ｙ−Ａｓｐ−Ｓｅｒ及びＡｒｇ−Ｇｌｙ−Ａｓｐの２種
類のペプチドは、皮膚の角質層に作用して、乾燥皮膚を
改善して、皮膚の老化を防止することが報告されている
（特開平２−１７８２０７号公報）。[0003] For the purpose of preventing such aging of the skin, several attempts have conventionally been made to improve the condition of the skin by using peptides for the skin. For example, it is known that cosmetics containing oligopeptides among peptides have good adhesion to the skin and prevent skin aging such as suppressing wrinkles (Japanese Patent Application Laid-Open No. 57-57). No. 2213), especially Arg-Gl
It has been reported that two types of peptides, y-Asp-Ser and Arg-Gly-Asp, act on the stratum corneum of the skin to improve dry skin and prevent aging of the skin (Japanese Unexamined Patent Publication (Kokai) No. 2). -178207).
【０００４】[0004]
【発明が解決しようとする課題】上述したような、加齢
に伴う真皮の減少は、真皮のマトリックス成分を供給し
ている線維芽細胞の数や活性の減少による部分が大き
い。線維芽細胞が減少すると、マトリックス成分、特に
コラーゲンが減少する。また、残りのコラーゲンも加齢
とともに、糖化などの質的変化を受け、機能が低下す
る。それ故に、真皮部分に対する改善作用を発揮するこ
とが、しわを抑制し、肌にはりを与える等により、皮膚
老化の改善を目的とする皮膚外用剤においては、非常に
大切な条件である。As described above, the decrease in the dermis associated with aging is largely due to the decrease in the number and activity of fibroblasts supplying matrix components of the dermis. As fibroblasts decrease, matrix components, especially collagen, decrease. In addition, the remaining collagen undergoes qualitative changes such as saccharification with aging, and its function deteriorates. Therefore, exerting an improving effect on the dermis portion is a very important condition for an external preparation for skin intended to improve skin aging by suppressing wrinkles and giving skin scalp.
【０００５】しかしながら、上述したオリゴペプチドの
作用は、皮膚の表面上に対するに止まっており、真皮に
対しては、十分に有効な作用を及ぼすには至っていな
い。[0005] However, the action of the above-mentioned oligopeptide is limited to the surface of the skin, and has not been sufficiently effective to the dermis.
【０００６】また、真皮に対して有効な作用を及ぼす試
みとして、いわゆる細胞成長因子（EGF やFGF など）
の、細胞増殖作用が知られているペプチド類を配合した
皮膚外用剤が提供されている（特開昭６１−５００６号
公報等）、その皮膚の老化の抑制効果は、必ずしも満足
の行くものではなく、さらに、多様な生理活性を有する
細胞成長因子を用いることによる、人体への影響等を、
特に配慮する必要があった。In an attempt to exert an effective action on the dermis, so-called cell growth factors (such as EGF and FGF) are used.
However, skin external preparations containing peptides known to have a cell proliferation action have been provided (JP-A-61-5006, etc.), but the effect of suppressing skin aging is not always satisfactory. In addition, the effect on the human body, etc. by using cell growth factors having various physiological activities,
Special consideration was needed.
【０００７】そこで、本発明が解決すべき課題は、上述
のような問題点が解決された、真皮に対して作用し、優
れた皮膚の老化の防止作用を発揮し、かつ、安全性にも
優れる皮膚外用剤を提供することである。[0007] Therefore, the problem to be solved by the present invention is to act on the dermis, which has solved the above-mentioned problems, to exert an excellent effect of preventing skin aging, and to improve safety. It is to provide an excellent skin external preparation.
【０００８】[0008]
【課題を解決するための手段】本発明者は、この課題の
解決に向けて、鋭意検討を行った。その結果、主に、コ
ラーゲンやゼラチンのコラゲナーゼによる分解物中に含
まれる、特定のペプチドに、皮膚における優れた抗老化
作用が認められることを見出して、本発明を完成した。Means for Solving the Problems The present inventor has made intensive studies to solve this problem. As a result, they have found that a specific peptide contained mainly in collagen and gelatin degradation products of collagenase has an excellent anti-aging effect on the skin, and completed the present invention.
【０００９】すなわち、本発明者は、本願において、コ
ラーゲン又はゼラチンのコラゲナーゼによる分解物〔以
下、「コラゲナーゼ分解物」ともいう〕、特に、そのア
ミノ酸配列が、（Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙ）n （式中、Ｇｌｙは
グリシン残基を表し、Ｘ，Ｙは、グリシン残基を除くア
ミノ酸残基を表し、互いに同一であっても、異なっても
よく、ｎは、正の整数を表す）で表され、かつ、平均分
子量が２８０〜２００００であるペプチドが含まれてい
るコラーゲン又はゼラチンのコラゲナーゼによる分解物
を有効成分とする皮膚外用剤（以下、本発明皮膚外用剤
という）を提供する。That is, in the present application, the present inventor has determined that collagen or gelatin decomposed by collagenase (hereinafter also referred to as “collagenase decomposed product”), particularly, its amino acid sequence is represented by (Gly-XY) n (formula Wherein Gly represents a glycine residue, X and Y represent amino acid residues excluding the glycine residue, and may be the same or different from each other, and n represents a positive integer. And a skin external preparation (hereinafter referred to as the skin external preparation of the present invention) containing, as an active ingredient, a collagen or gelatin degradation product of collagen or gelatin containing a peptide having an average molecular weight of 280 to 20,000.
【００１０】本発明皮膚外用剤は、具体的には、皮膚
における抗老化効果（作用）〔本明細書中で「抗老化効
果（作用）」と記載する場合には、この「皮膚における
抗老化効果（作用）」のことを意味するものとする〕が
認められる皮膚外用剤（この態様の本発明皮膚外用剤
を、特に、本発明抗老化用皮膚外用剤という）、しわ
抑制効果、すなわち、肌上のしわの発生を予防し、しわ
を抑制し得る効果が認められる皮膚外用剤（この態様の
本発明皮膚外用剤を、特に、本発明しわ抑制用皮膚外用
剤という）、細胞増殖促進作用が認められる皮膚外用
剤（この態様の本発明皮膚外用剤を、特に、本発明細胞
増殖促進皮膚外用剤という）、コラーゲン産生促進作
用が認められる皮膚外用剤（この態様の本発明皮膚外用
剤を、特に、本発明コラーゲン産生促進皮膚外用剤とい
う）、コラーゲンの糖化抑制作用が認められる皮膚外
用剤（この態様の本発明皮膚外用剤を、特に、本発明コ
ラーゲン糖化抑制皮膚外用剤という）としての態様をと
り得る。[0010] The skin external preparation of the present invention specifically includes an anti-aging effect (action) on the skin [in this specification, "anti-aging effect (action)" Effect (action) "), the skin external preparation of the present invention (in particular, the skin external preparation of the present invention of this embodiment is referred to as the anti-aging skin external preparation of the present invention), wrinkle suppressing effect, Skin external preparation which has an effect of preventing the generation of wrinkles on the skin and suppressing wrinkles (the skin external preparation of the present invention of this embodiment is particularly referred to as the skin external preparation of the present invention for suppressing wrinkles), a cell growth promoting action (External skin preparation of the present invention of this embodiment is referred to as skin external preparation of the present invention in particular), skin external preparation exhibiting collagen production promoting action (the skin external preparation of this embodiment is In particular, the collagen of the present invention That production promoter external preparation for skin), collagen glycation inhibition is observed it is the skin external preparation (the present invention external preparation for skin of this embodiment, in particular, may take the aspect of a) of the present invention collagen glycation inhibiting skin external preparation.
【００１１】[0011]
【発明の実施の形態】以下、本発明の実施の形態につい
て説明する。 Ａ．本発明皮膚外用剤の有効成分について 本発明皮膚外用剤の有効成分である、コラゲナーゼ分解
物の出発原料となる、コラーゲンは、特に限定されず、
I 型からXIII型のコラーゲンのいずれをも用いることが
可能であり、これらの混合物である混合型のコラーゲン
を用いることもできる。現実的には、コラーゲンは、各
種の動物や魚類から得られる、混合型のコラーゲンを用
いることが想定されるが、このコラーゲンの出所となる
動物（例えば、牛、豚等）や魚類（例えば、ヒラメ、サ
ケ、イワシ、マグロ等）の種類や、コラーゲンの抽出部
位も、骨、皮、腱、ウキブクロ（魚類）等が可能であ
る。Embodiments of the present invention will be described below. A. About the active ingredient of the external preparation for skin of the present invention, which is the active ingredient of the external preparation for skin of the present invention, which is a starting material of a collagenase hydrolyzate, collagen is not particularly limited,
Any of type I to type XIII collagen can be used, and mixed collagen, which is a mixture thereof, can also be used. In reality, it is assumed that collagen is a mixed type of collagen obtained from various animals and fishes. However, animals (for example, cows and pigs) and fishes (for example, Flounder, salmon, sardine, tuna, etc.) and collagen extraction sites can be bones, skins, tendons, duckfishes (fishes) and the like.
【００１２】これらの成分からのコラーゲンの抽出・精
製は、通常公知の方法を用いて行うことができる。具体
的には、例えば、骨、皮、腱、ウキブクロ等のコラーゲ
ンを含有する組織を粉砕した後、水洗、希塩溶液による
抽出、酸若しくはアルカリ溶液による抽出、ペプシン，
トリプシンやヒアルロニダーゼ等の酵素による抽出し
て、塩析や透析等の公知の精製手段を施して、コラーゲ
ンを精製して得ることができる。また、通常公知の方法
により、「再生コラーゲン」として得ることも可能であ
る。また、市販のコラーゲンを、コラゲナーゼ分解物の
出発原料として用いることも可能である。[0012] Collagen can be extracted and purified from these components using generally known methods. Specifically, for example, after crushing a tissue containing collagen such as bone, skin, tendon, and sea urchin, washing with water, extraction with a dilute salt solution, extraction with an acid or alkali solution, pepsin,
The collagen can be obtained by extraction with an enzyme such as trypsin or hyaluronidase and subjecting it to a known purification means such as salting out or dialysis to purify collagen. It is also possible to obtain “regenerated collagen” by a generally known method. It is also possible to use commercially available collagen as a starting material for a collagenase degradation product.
【００１３】そして、ゼラチンは、上述のコラーゲン
を、水で加熱抽出して得られる水溶性タンパク質であ
る。本発明においては、通常公知の方法により製造した
ゼラチンを上記のコラゲナーゼ分解物の出発原料として
用いることも可能であり、市販品を用いることも可能で
ある。[0013] Gelatin is a water-soluble protein obtained by heat-extracting the above-mentioned collagen with water. In the present invention, gelatin produced by a generally known method can be used as a starting material for the above-mentioned collagenase degradation product, and a commercially available product can also be used.
【００１４】コラゲナーゼ分解物は、上述のようにして
得られるコラーゲン又はゼラチンに、コラゲナーゼを作
用させて製造することができる（この製造工程、また、
得られるコラゲナーゼ分解物自体の内容については、特
開平９−１７６１９６号公報参照のこと）。The collagenase hydrolyzate can be produced by allowing collagenase to act on collagen or gelatin obtained as described above (this production step,
For the content of the obtained collagenase hydrolyzate itself, see JP-A-9-176196).
【００１５】ここで用いられるコラゲナーゼは、特に限
定されないが、Clostridium histolyticum Streptomyce
s parvulus等の細菌、放線菌又は真菌等由来で、コラー
ゲン特有のアミノ酸配列〔（Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙ）n （式
中、Ｇｌｙはグリシン残基を表し、Ｘ，Ｙは、グリシン
残基を除くアミノ酸残基を表し、互いに同一であって
も、異なってもよく、ｎは、正の整数を表す）：以下、
このアミノ酸配列を、「特有アミノ酸配列」ともい
う）〕のグリシン残基のアミノ基末端側を、特異的に切
断するコラゲナーゼを用いることが、この特有アミノ酸
配列のペプチドを豊富に含むコラゲナーゼ分解物を得る
ことが可能であり、好ましい。The collagenase used here is not particularly limited, but may be Clostridium histolyticum Streptomyce.
s parvulus or other bacteria, actinomycetes or fungi, etc., and an amino acid sequence specific to collagen [(Gly-XY) n (wherein Gly represents a glycine residue, and X and Y exclude glycine residues) Represents an amino acid residue, which may be the same or different, and n represents a positive integer):
This amino acid sequence is also referred to as “unique amino acid sequence”))], by using a collagenase that specifically cleaves the amino-terminal side of a glycine residue to obtain a collagenase degradation product rich in peptides having this unique amino acid sequence. It is possible and preferred.
【００１６】また、ここで用いるコラゲナーゼは、天然
物として得られるコラゲナーゼは勿論のこと、例えば、
タンパク工学的な手法で改変して得られる、上記の特異
性を有する改変コラゲナーゼであってもよい。The collagenase used herein is not limited to collagenase obtained as a natural product, for example,
It may be a modified collagenase having the above specificity, which is obtained by being modified by a protein engineering technique.
【００１７】なお、上記のＸ，Ｙが採り得る、グリシン
残基を除くアミノ酸残基の種類は、特に限定されず、通
常は、天然に存在するアミノ酸（グリシンを除く）のア
ミノ酸残基、具体的には、アラニン残基、バリン残基、
ロイシン残基、イソロイシン残基、プロリン残基、フェ
ニルアラニン残基、トリプトファン残基、メチオニン残
基、セリン残基、トレオニン残基、システイン残基、グ
ルタミン残基、アスパラギン残基、チロシン残基、リシ
ン残基、アルギニン残基、ヒスチジン残基、アスパラギ
ン酸残基、グルタミン酸残基のいずれのアミノ酸残基を
も採ることができる（本明細書においては、特に断わら
ない限り、アミノ酸残基は、Ｌ型アミノ酸残基を意味す
る）。The types of amino acid residues other than glycine residues, which can be taken by X and Y, are not particularly limited. Usually, amino acid residues of naturally occurring amino acids (excluding glycine), specifically, Typically, alanine residue, valine residue,
Leucine residue, isoleucine residue, proline residue, phenylalanine residue, tryptophan residue, methionine residue, serine residue, threonine residue, cysteine residue, glutamine residue, asparagine residue, tyrosine residue, lysine residue Group, an arginine residue, a histidine residue, an aspartic acid residue, and a glutamic acid residue (in the present specification, unless otherwise specified, the amino acid residue is an L-amino acid residue). Residue).
【００１８】また、本発明において用いられ得るコラゲ
ナーゼ分解物は、通常公知の方法、例えば、特開平７−
８２２９９号公報に記載されている方法に準じて、遊離
又はキトバール等の固定化担体に固定化されたコラゲナ
ーゼを、バッチ法、カラム法又はこれらの方法を組み合
わせ、好ましくは、反応温度を４０〜４５℃に設定し
て、製造することができる。The collagenase hydrolyzate which can be used in the present invention can be produced by a generally known method, for example,
According to the method described in Japanese Patent No. 82299, collagenase free or immobilized on an immobilized carrier such as chitovar is mixed with a batch method, a column method or a combination of these methods, preferably at a reaction temperature of 40 to 45. It can be manufactured by setting the temperature to ° C.
【００１９】このようにして製造され得る、特有アミノ
酸配列のペプチド、最も好ましくは、上記の正の整数ｎ
が１であるトリペプチドを豊富に含むコラゲナーゼ分解
物（本発明の所期の効果を発揮させるためには、正の整
数ｎは、可能な限り小さいことが好ましい）は、ゼラチ
ンやコラーゲン特有の抗原性が著しく抑制されており、
これを皮膚外用剤に配合することにより、その皮膚外用
剤のアレルギー反応等に対する安全性を、さらに向上さ
せることができる。A peptide having a unique amino acid sequence which can be produced in this manner, most preferably the above positive integer n
The collagenase hydrolyzate enriched in the tripeptide having a value of 1 (a positive integer n is preferably as small as possible in order to exert the intended effect of the present invention) is an antigen specific to gelatin or collagen. Properties are significantly suppressed,
By blending this in an external preparation for skin, the safety of the external preparation for skin against allergic reactions and the like can be further improved.
【００２０】なお、特有アミノ酸配列のペプチドを含む
コラゲナーゼ分解物の平均分子量は、２８０〜２０００
０であることが、皮膚における抗老化作用や細胞増殖促
進作用を、本発明皮膚外用剤において発現させ得るとい
う点と、コラーゲン等に由来する抗原性を排除し、皮膚
に対する安全性をより高度に保つことが可能であるとい
う点において好ましい。この平均分子量の最低値である
２８０は、上述した正の整数ｎが１であるトリペプチド
を想定した分子量であり、前述したように、可能な限り
２８０付近の小さい値をとることが好ましい。The average molecular weight of a collagenase digest containing a peptide having a unique amino acid sequence is 280 to 2000.
0 means that the anti-aging effect and the cell growth promoting effect on the skin can be expressed in the external preparation for skin of the present invention, and the antigenicity derived from collagen and the like is eliminated, and the safety on the skin is enhanced to a higher degree. It is preferable in that it can be maintained. The minimum value 280 of the average molecular weight is a molecular weight assuming the above-mentioned tripeptide in which the positive integer n is 1, and as described above, it is preferable to take a value as small as possible near 280.
【００２１】さらに、コラゲナーゼ分解物における、特
有アミノ酸配列のトリペプチド（正の整数ｎが１であ
る）の含有量は、コラゲナーゼ分解物に対して３０〜１
００重量％であることが好ましく、特に好ましくは同７
０〜１００重量％、非常に好ましくは８５〜１００重量
％、最も好ましくは９５〜１００重量％である。Further, the content of the tripeptide having a unique amino acid sequence (where the positive integer n is 1) in the collagenase digest is 30 to 1 relative to the collagenase digest.
00% by weight, particularly preferably 7% by weight.
0-100% by weight, very preferably 85-100% by weight, most preferably 95-100% by weight.
【００２２】上述した、コラゲナーゼ分解物の特定の平
均分子量の分解物の分取や、特有アミノ酸配列のトリペ
プチド（正の整数ｎが１である）の含有量が特定範囲の
分解物の分取は、通常公知の分取法、例えば、ゲル濾過
法や逆相クロマトグラフィー法等を、単独で、場合によ
っては組み合わせて用いることにより行うことができ
る。The above-described fractionation of a collagenase digest having a specific average molecular weight or a tripeptide having a specific amino acid sequence (where the positive integer n is 1) has a specific range. Can be carried out by using a generally known fractionation method, for example, a gel filtration method or a reverse phase chromatography method, alone or in some cases in combination.
【００２３】コラゲナーゼ分解物は、上述の方法に従
い、これを製造して本発明皮膚外用剤に配合することも
可能であるが、市販品、例えば、商品名コラーゲン・ト
リペプチドＭシリーズ （宮城化学工業株式会社製）等
を用いることも可能である。The collagenase hydrolyzate can be produced according to the above-mentioned method and can be blended with the external preparation for skin of the present invention. However, a commercially available product such as collagen tripeptide M series (Miyagi Chemical Industry Co., Ltd.) (Manufactured by K.K.) can also be used.
【００２４】本発明皮膚外用剤におけるコラゲナーゼ分
解物の配合量は、本発明皮膚外用剤の具体的な剤形や用
途等に応じて適宜選択することが可能であり、特に限定
されるべきものではない。一般的には、剤全体に対して
０．００００１〜２０．０重量％であることが好まし
く、特に好ましくは同０．０００１〜１０．０重量％、
最も好ましくは同０．００１〜１．０重量％である。The amount of the collagenase hydrolyzate in the external preparation for skin of the present invention can be appropriately selected according to the specific dosage form, application, etc. of the external preparation for skin of the present invention, and is not particularly limited. Absent. Generally, it is preferably 0.00001 to 20.0% by weight, particularly preferably 0.0001 to 10.0% by weight, based on the whole agent.
Most preferably, it is 0.001 to 1.0% by weight.
【００２５】この配合量が、剤全体に対して０．０００
０１重量％未満であると、皮膚の老化に対する抑制作用
や細胞増殖作用を十分に発揮することが困難であり好ま
しくなく、逆に、同２０．０重量％を超えて配合して
も、配合量の増加に見合った、前記効果の増強を見込め
なくなる傾向が強くなり好ましくないばかりか、製剤に
おいても問題を生じることがある。This amount is 0.000 to the whole agent.
When the amount is less than 01% by weight, it is difficult to sufficiently exert an inhibitory effect on skin aging and a cell growth effect, which is not preferable. In addition to the above, there is a strong tendency that the enhancement of the effect cannot be expected in proportion to the increase in the amount, which is not only unfavorable, but also causes a problem in the preparation.
【００２６】このようにして、コラゲナーゼ分解物を有
効成分とすることにより、皮膚のしわや、たるみに対
する優れた抑制作用に基づく抗老化効果を発揮する皮膚
外用剤、特に、皮膚のしわの発生の予防やしわの抑制
における優れた効果を発揮する皮膚外用剤、皮膚線維
芽細胞の増殖を促進し、真皮の減少を抑制し、皮膚のし
わやたるみに優れた効果を発揮する皮膚外用剤、真皮
におけるコラーゲンの産生を促進し、これにより、皮膚
のしわやたるみに優れた効果を発揮する皮膚外用剤及び
真皮において存在するコラーゲンが糖化により変質し
て、細胞外マトリックスにおける本来のコラーゲンの作
用が衰えることを抑制することにより、皮膚のしわやた
るみに優れた効果を発揮する皮膚外用剤（それぞれ、
本発明抗老化用皮膚外用剤、本発明しわ抑制用皮膚外
用剤、本発明細胞増殖促進皮膚外用剤、本発明コラ
ーゲン産生促進皮膚外用剤及び本発明コラーゲン糖化
抑制剤のことを意味する）が提供される。By using the collagenase hydrolyzate as an active ingredient in this manner, an external preparation for skin which exhibits an anti-aging effect based on an excellent inhibitory action on wrinkles and sagging of the skin, in particular, wrinkles on the skin An external preparation for skin that exerts an excellent effect in prevention and suppression of wrinkles, an external preparation for skin that promotes the proliferation of skin fibroblasts, suppresses the decrease in dermis, and exerts an excellent effect on wrinkles and sagging of the skin, dermis Promotes the production of collagen in the dermis, whereby the external preparation for the skin and the collagen present in the dermis exhibiting an excellent effect on wrinkles and sagging of the skin are altered by saccharification, and the action of the original collagen in the extracellular matrix is reduced. An external preparation for skin that exerts an excellent effect on skin wrinkles and sagging by suppressing
The anti-aging skin external preparation of the present invention, the wrinkle suppressing skin external preparation of the present invention, the cell proliferation promoting skin external preparation of the present invention, the collagen production promoting skin external preparation of the present invention and the collagen saccharification inhibitor of the present invention are provided. Is done.
【００２７】また、コラゲナーゼ分解物として、特有ア
ミノ酸配列のトリペプチド（正の整数ｎが１である）の
含有量の多いものを選択することにより、ゼラチンやコ
ラーゲンの抗原性が著しく抑制された、上記の有効性だ
けではなく安全性にも、特に優れる皮膚外用剤が提供さ
れる。Further, by selecting a collagenase degraded product having a high content of a tripeptide having a unique amino acid sequence (where the positive integer n is 1), the antigenicity of gelatin and collagen was remarkably suppressed. A skin external preparation that is particularly excellent not only in the above-mentioned efficacy but also in safety is provided.
【００２８】Ｂ．本発明皮膚外用剤の具体的な態様につ
いて 本発明皮膚外用剤は、あらゆる皮膚外用剤（化粧料，医
薬品，医薬部外品）としての形態を採ることが可能であ
り、具体的には、化粧水，乳液，クリーム，軟膏，パッ
ク，エアゾル，水−油二層系剤．水−油−粉末三層系
剤，美容液，ジェル，ファンデーション，口紅，シャン
プー，リンス等に適用することが可能である。また、本
発明皮膚外用剤に、皮膚老化に対して有効な公知の成分
や、しわの抑制のために有効な公知の成分、さらには公
知の美白剤等を、具体的な用途や目的に応じて配合可能
である。具体的には、茶エキス、Ｌ−リジン、Ｌ−アル
ギニン、カフェイン、タンニン、ベラパミル、トラネキ
サム酸、トラネキサム酸誘導体、甘草抽出物、グラブリ
ジン、カリンの果実の熱水抽出物、各種の生薬、酢酸ト
コフェロール、グリチルリチン酸、グリチルリチン酸誘
導体、ビタミンＣ、アスコルビン酸リン酸マグネシウ
ム、アスコルビン酸グルコシド、アルブチン、コウジ酸
等の美白剤；グルコース、フルクトース、マンノース、
ショ糖、トレハロース等の糖類；レチノイン酸、レチノ
ール、レチノール酢酸、レチノールパルミチン酸等のビ
タミンＡ誘導体類等を、上記の有効成分と共に、本発明
皮膚外用剤の具体的な態様に応じて配合することが可能
である。B. Regarding Specific Embodiments of External Skin Preparation of the Present Invention The external skin preparation of the present invention can take any form as an external skin preparation (cosmetics, pharmaceuticals, quasi-drugs). Water, emulsion, cream, ointment, pack, aerosol, water-oil two-layer system. It can be applied to water-oil-powder three-layer preparations, serums, gels, foundations, lipsticks, shampoos, rinses and the like. In addition, the skin external preparation of the present invention, a known component effective for skin aging, a known component effective for suppression of wrinkles, a known whitening agent, etc., depending on the specific use and purpose Can be blended. Specifically, tea extract, L-lysine, L-arginine, caffeine, tannin, verapamil, tranexamic acid, tranexamic acid derivative, licorice extract, glabridine, hot water extract of karin fruit, various crude drugs, acetic acid Whitening agents such as tocopherol, glycyrrhizic acid, glycyrrhizic acid derivatives, vitamin C, magnesium ascorbate phosphate, ascorbate glucoside, arbutin, kojic acid; glucose, fructose, mannose,
Sugars such as sucrose and trehalose; vitamin A derivatives such as retinoic acid, retinol, retinol acetic acid, and retinol palmitic acid, etc., together with the above-mentioned active ingredients according to the specific embodiment of the skin external preparation of the present invention. Is possible.
【００２９】これらの具体的な形態に応じて、種々の基
剤成分等、具体的には液体油脂、固体油脂、ロウ類、エ
ステル油、炭化水素油、シリコーン樹脂、シリコーン、
陰イオン性界面活性剤、アニオン系界面活性剤、陽イオ
ン性界面活性剤、両性界面活性剤、非イオン性界面活性
剤、低級アルコール、ステロール類、水溶性高分子、金
属イオン封鎖剤（エデト酸二ナトリウム、エデト酸三ナ
トリウム、クエン酸ナトリウム、ポリリン酸ナトリウ
ム、メタリン酸ナトリウム、グルコン酸等）、中和剤、
ｐＨ調整剤、抗菌剤、香料、色素等を、本発明の所期の
効果を損なわない範囲で本発明皮膚外用剤に配合するこ
と可能である。本発明皮膚外用剤の具体的な剤形は、後
述する実施例において説明する。Depending on the specific form, various base components and the like, specifically, liquid fats and oils, solid fats and oils, waxes, ester oils, hydrocarbon oils, silicone resins, silicones,
Anionic surfactants, anionic surfactants, cationic surfactants, amphoteric surfactants, nonionic surfactants, lower alcohols, sterols, water-soluble polymers, sequestering agents (edetate Disodium, trisodium edetate, sodium citrate, sodium polyphosphate, sodium metaphosphate, gluconic acid, etc.), neutralizing agent,
A pH adjuster, an antibacterial agent, a fragrance, a pigment, and the like can be added to the external preparation for skin of the present invention within a range that does not impair the intended effect of the present invention. The specific dosage form of the skin external preparation of the present invention will be described in Examples described later.
【００３０】[0030]
【実施例】以下、本発明を実施例により具体的に説明す
るが、本発明の技術的範囲が、これにより限定されるも
のではない。また、本実施例における配合量は、特に断
わらない限り、配合成分の配合対象に対する重量％で表
示する。EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described specifically with reference to Examples, but the technical scope of the present invention is not limited thereto. In addition, the blending amount in this example is represented by% by weight based on the blending target of the blending component, unless otherwise specified.
【００３１】〔試験例〕 １．試料の調製 高純度ゼラチン５０ｇを、１０００mlの２０mM Tris-HC
l 緩衝液（pH 7.4）/0.1 M NaCl に加温しながら溶解
後、５０℃に冷却した。酵素分解用の固定化酵素とし
て、１００mgのコラゲナーゼ酵素（ワシントン社製、高
純度品）を５０g のキトパール（富士紡績社製）に２架
橋試薬を用いて結合させて調製した。この固定化酵素
を、２連式のカラム式バイオリアクターに充填し、２０
mM Tris-HCl 緩衝液（pH 7.4）/ 0.1 M NaClで平衡化を
行った。上記工程を経て準備した高純度のゼラチンを、
上記工程で調製した、縦型２連式のコラゲナーゼ酵素固
定化カラムにアプライし、カラム法による酵素分解を行
った。[Test Example] Preparation of sample 50 g of high purity gelatin was added to 1000 ml of 20 mM Tris-HC.
After dissolving in l buffer (pH 7.4) /0.1 M NaCl while heating, the mixture was cooled to 50 ° C. As an immobilized enzyme for enzymatic degradation, 100 mg of collagenase enzyme (manufactured by Washington, high purity product) was bound to 50 g of chitopearl (manufactured by Fuji Boseki) using a two-crosslinking reagent. This immobilized enzyme was packed in a double column bioreactor,
Equilibration was performed with mM Tris-HCl buffer (pH 7.4) /0.1 M NaCl. High purity gelatin prepared through the above process,
The column was applied to a column of a double collagenase enzyme-immobilized column prepared in the above step, and subjected to enzymatic degradation by a column method.
【００３２】最終カラムから出てきた酵素反応終了液を
分取し、0.45μm のフィルターでろ過した。このろ液を
ゲル濾過法、あるいは逆相クロマトグラフィー法によ
り、分画し、それぞれ、平均分子量が２００００以上の
もの、Gly-X-Y(Gly は、グリシン残基、X,Y は、アミノ
酸残基を表し、X,Y は、同一であっても異なってもよ
い。以下、同様である）含量が３０〜８５重量％のもの
（平均分子量約３０００）、Gly-X-Y 含量が８５〜１０
０重量％のもの（平均分子量約３００）の調製を行っ
た。分取後、凍結乾燥処理を、それぞれの分取物に施し
た。[0032] The enzyme-terminated liquid that came out of the final column was fractionated and filtered with a 0.45 µm filter. The filtrate is fractionated by gel filtration or reverse phase chromatography, and has an average molecular weight of 20,000 or more, Gly-XY (Gly is a glycine residue, X and Y are amino acid residues). Wherein X and Y may be the same or different; the same applies hereinafter) having a content of 30 to 85% by weight (average molecular weight of about 3000), and having a Gly-XY content of 85 to 10
A composition having 0% by weight (average molecular weight: about 300) was prepared. After the fractionation, each fraction was subjected to a freeze-drying treatment.
【００３３】ここで得られた分取物（後述するコラーゲ
ン由来の分取物を含む）を、以下に述べる試験例ないし
実施例において用いた。The fractions obtained here (including fractions derived from collagen described later) were used in the following Test Examples and Examples.
【００３４】なお、これらの分取物において、公知の手
法で、アナフィラキシーテストを行ったところ、いずれ
の分取物においても、抗原性が極めて低く、これらの分
取物は、皮膚における安全性において、非常に優れてい
ることが明らかになった（後述するコラーゲン由来の分
取物を含んだ結果である）。When an anaphylaxis test was carried out on these fractions by a known method, all fractions had extremely low antigenicity, and these fractions showed safety in skin. It was found to be very excellent (results including a collagen-derived fraction described below).
【００３５】２．細胞増殖促進試験 ヒト皮膚線維芽細胞を、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地
で２４時間培養した後、各試料を含んだ０．５％ＦＢＳ
含有ＤＭＥＭ培地に交換して、さらに４８時間培養し
た。培養終了時に、MTT 活性を測定し、細胞増殖の指標
とした。試料を加えない０．５％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培
地のみで培養した場合のMTT 活性を、１００％として表
した。試料は、上記の例において調製した、Gly-X-Y 含
量が３０〜８５重量％の分取物、同８５〜１００重量％
の分取物の、２種類について検討した。なお、対照試料
としては、上記の例における、平均分子量が２００００
以上のもの及びＥＧＦ (epidermal growthfactor) を用
いて、同様の試験を行った。この細胞増殖促進試験の結
果を、第１表に示す。2. Cell proliferation promotion test After culturing human skin fibroblasts in DMEM medium containing 10% FBS for 24 hours, 0.5% FBS containing each sample was used.
The medium was replaced with a DMEM medium containing the cells, and the cells were further cultured for 48 hours. At the end of the culture, MTT activity was measured and used as an indicator of cell proliferation. The MTT activity when cultured only in the DMEM medium containing 0.5% FBS without adding the sample was expressed as 100%. The samples were fractions prepared in the above example with a Gly-XY content of 30-85% by weight, 85-100% by weight.
Two types of fractions were examined. As a control sample, the average molecular weight in the above example was 20,000.
A similar test was performed using the above and EGF (epidermal growth factor). Table 1 shows the results of the cell growth promotion test.
【００３６】[0036]
【表１】 第 １ 表 ──────────────────────────────────── 試 料 ＭＴＴ活性（％対対照） ───────────────────────── 濃度０．００１％ 濃度０．０１％ 濃度０．１％ ──────────────────────────────────── ゼラチン分解ペプチド ９５％ １１０％ １１０％ （平均分子量20000 以上） ──────────────────────────────────── Gly-X-Y 含量が １００％ １１０％ １３０％ 30〜85重量％の分取物 ──────────────────────────────────── Gly-X-Y 含量が １１０％ １２０％ １５０％ 85〜100 重量％の分取物 ──────────────────────────────────── ＥＧＦ ９５％ ９５％ １２０％ ──────────────────────────────────── 注）ＭＴＴ活性とは、細胞内のミトコンドリアの呼吸により、色素が還元され着 色される反応を利用した生細胞測定値である。この値が高いほど、細胞増殖活性 が認められることを意味する。[Table 1] Table 1 ──────────────────────────────────── Sample MTT activity (% vs. Control) ───────────────────────── concentration 0.001% concentration 0.01% concentration 0.1% ────────ゼ ラ チ ン Gelatin-degraded peptide 95% 110% 110% (average molecular weight 20,000 or more) ───────分 Gly-XY content 100% 110% 130% 30 ~ 85% by weight 分─────────────────────────────────── Gly-XY content 110% 120% 150% 85-100 weight % Fraction 分───────── EGF 95% 95% 120% ────────────────────────────────── ── Note) MTT activity is a measured value of living cells using a reaction in which dyes are reduced and colored by mitochondrial respiration in cells. The higher the value, the more cell proliferation activity is observed.
【００３７】第１表から、Gly-X-Y 含量が３０重量％以
上の分取物の細胞増殖促進効果は、対照と比べて高いこ
とがわかった。また、Gly-X-Y 含量が８５〜１００重量
％であると、より一層、細胞増殖促進活性が向上するこ
とが明らかになった。From Table 1, it was found that the fraction having a Gly-XY content of 30% by weight or more had a higher cell growth promoting effect than the control. It was also found that when the Gly-XY content was 85 to 100% by weight, the cell growth promoting activity was further improved.
【００３８】なお、前述の例におけるゼラチンの代わり
に、市販のコラーゲンを、同例において用いたコラゲナ
ーゼ酵素で酵素分解した後、これを、上記と同様の処理
を行って、Gly-X-Y 含量が３０〜８５重量％の分取物
（平均分子量約３０００）及び同８５〜１００重量％の
分取物（平均分子量約３００）の調製を行い、上記と同
様の細胞増殖促進試験を行った。その結果、これらのコ
ラーゲン由来の分取物は、両者共、対照よりも優れた細
胞増殖促進活性を有していた。また、また、Gly-X-Y 含
量が８５〜１００重量％であると、より一層、細胞増殖
促進活性が向上することも、前述のゼラチンに由来する
分取物についての結果と同様であった。In place of the gelatin in the above-mentioned example, commercially available collagen was enzymatically decomposed with the collagenase enzyme used in the same example, and this was treated in the same manner as described above to give a Gly-XY content of 30%. A fraction of 85% by weight (average molecular weight: about 3000) and a fraction of 85 to 100% by weight (average molecular weight: about 300) were prepared and subjected to the same cell growth promotion test as described above. As a result, both of these collagen-derived fractions had superior cell growth promoting activity as compared with the control. Further, when the Gly-XY content was 85 to 100% by weight, the cell growth promoting activity was further improved, which was the same as the result of the above-mentioned fraction derived from gelatin.
【００３９】この結果により、本発明皮膚外用剤の有効
成分であるコラゲナーゼ分解物は、優れた細胞増殖促進
作用を有し、これにより、真皮の減少を抑制し、皮膚の
しわやたるみに対して優れた効果を発揮し得ることが明
らかになった。According to the results, the collagenase hydrolyzate, which is an active ingredient of the external preparation for skin of the present invention, has an excellent cell growth promoting action, thereby suppressing the decrease of the dermis and preventing skin wrinkles and sagging. It has become clear that excellent effects can be exhibited.
【００４０】３．コラーゲン産生促進試験 ヒト皮膚線維芽細胞を、１０％ＦＢＳ含有ＤＭＥＭ培地
で４８時間培養した後、各試料を含んだ０．５％ＦＢＳ
含有ＤＭＥＭ培地に交換して、さらに４８時間培養し
た。培養終了後に、Ｉ型コラーゲン生合成能を測定する
ために培養上清を、細胞量を計測するために細胞を採取
した。試料は、上記の例において調製した、Gly-X-Y 含
量が３０〜８５重量％の分取物、同８５〜１００重量％
の分取物の、２種類について検討した。なお、対照試料
としては、優れたコラーゲン産生促進作用が知られてい
るビタミンＣを用いて、同様の試験を行った。細胞のＩ
型コラーゲン生合成能は、培養上清中に分泌されるＩ型
プロコラーゲンのＣ端末ペプチド（Procollagen type I
C-peptide:ＰＩＰと略す。）量を測定することにより評
価した。具体的には、「Procollagen type IC-peptide
（ＰＩＰ）測定キット（宝酒造株式会社：MK001 ）」を
用いて測定した。細胞量は細胞のＤＮＡ量で推定するこ
ととし、ＤＮＡ量は、Cesar Lsbarca らの方法（Analyt
ical Biochemisty、102 、344-352 、(1980)）に準じて
Hoechst 33258 試薬を用いて測定した。このコラーゲン
産生試験の結果を第２表に示す。3. Collagen production promotion test Human skin fibroblasts were cultured in a DMEM medium containing 10% FBS for 48 hours, and then 0.5% FBS containing each sample was cultured.
The medium was replaced with a DMEM medium containing the cells, and the cells were further cultured for 48 hours. After the completion of the culture, the culture supernatant was collected to measure the type I collagen biosynthesis ability, and the cells were collected to measure the cell amount. The samples were fractions prepared in the above example with a Gly-XY content of 30-85% by weight, 85-100% by weight.
Two types of fractions were examined. As a control sample, a similar test was performed using vitamin C, which is known to have an excellent collagen production promoting action. Cell I
The ability of type I collagen biosynthesis is determined by the C-terminal peptide of type I procollagen secreted into the culture supernatant (Procollagen type I).
C-peptide: Abbreviated as PIP. ) Was evaluated by measuring the amount. Specifically, “Procollagen type IC-peptide
(PIP) measurement kit (Takara Shuzo Co., Ltd .: MK001) ". The amount of cells was estimated based on the amount of DNA in the cells. The amount of DNA was determined by the method of Cesar Lsbarca et al. (Analyt
ical Biochemisty, 102, 344-352, (1980))
The measurement was performed using Hoechst 33258 reagent. Table 2 shows the results of this collagen production test.
【００４１】[0041]
【表２】 第 ２ 表 ──────────────────────────────────── 試 料 PIP 量（％対対照） ───────────────────────── 濃度０．０００１％ 濃度０．００１％ 濃度０．０１％ ──────────────────────────────────── ゼラチン分解ペプチド ９５％ ９８％ １１０％ （平均分子量20000 以上） ──────────────────────────────────── Gly-X-Y 含量が １１８％ １２６％ １６５％ 30〜85重量％の分取物 ──────────────────────────────────── Gly-X-Y 含量が １２０％ １６０％ １８５％ 85〜100 重量％の分取物 ──────────────────────────────────── ビタミンＣ（濃度0.2mM ） １７８％ ────────────────────────────────────[Table 2] Table 2 P Sample PIP amount (% Control) ───────────────────────── Concentration 0.0001% Concentration 0.001% Concentration 0.01% ──────── ──────────────────────────── Gelatin-degraded peptide 95% 98% 110% (average molecular weight 20,000 or more) ───────分 Gly-XY content 118% 126% 165% 30 ~ 85% by weight 分─────────────────────────────────── Gly-XY content is 120% 160% 185% 85-100 weight % Fraction 分──────── Vitamin C (concentration 0.2mM) 178% ───────────────────────────────── ───
【００４２】第２表から、Gly-X-Y 含量が３０重量％以
上の分取物は、コラーゲン産生促進効果に優れることが
明らかになった。また、Gly-X-Y 含量が８５〜１００重
量％であると、より一層、コラーゲン産生促進活性が向
上することが明らかになった。Table 2 shows that fractions having a Gly-XY content of 30% by weight or more have an excellent collagen production promoting effect. It was also found that when the Gly-XY content was 85 to 100% by weight, the collagen production promoting activity was further improved.
【００４３】この結果により、本発明皮膚外用剤の有効
成分であるコラゲナーゼ分解物は、優れたコラーゲン産
生促進作用を有し、これにより、皮膚のしわやたるみに
対して優れた効果を発揮し得ることが明らかになった。From these results, the collagenase hydrolyzate, which is an active ingredient of the external preparation for skin of the present invention, has an excellent collagen production promoting action, and thus can exert an excellent effect on wrinkles and sagging of the skin. It became clear.
【００４４】４．コラーゲン糖化抑制試験 ヒト皮膚線維芽細胞によるコラーゲンゲル収縮活性を指
標とした糖化反応による架橋形成の阻害作用を評価し
た。コラーゲン溶液（コラーゲンは高研株式会社製品Ｉ
−ＡＣを使用した。）を氷上にて作製後、細胞培養用１
２穴ウエルプレート（コーニング：２５８１５）に加
え、３７℃でコラーゲンをゲル化した。被験物質（コン
トロールとしては１，３−ブチレングリコールを用い
た。また、優れたコラーゲンの糖化抑制活性が認められ
ているＬ−リジンとＬ−アルギニンについても検討を行
った。濃度は重量％）含有グルコース−６−リン酸溶液
（最終濃度；１００mM）を添加後、３７℃にて７日間イ
ンキュベートすることにより糖化反応（グリケーショ
ン）を行った。4. Collagen Saccharification Inhibition Test The inhibitory effect of the saccharification reaction on the formation of crosslinks was evaluated using the collagen gel contraction activity of human dermal fibroblasts as an index. Collagen solution (Collagen is product I of Koken Co., Ltd.
-AC was used. ) Is prepared on ice, and 1
The collagen was gelled at 37 ° C. in a 2-well plate (Corning: 25815). A test substance (1,3-butylene glycol was used as a control. L-lysine and L-arginine, which have excellent collagen saccharification inhibitory activity, were also examined. The concentration was% by weight.) After adding a glucose-6-phosphate solution (final concentration; 100 mM), the mixture was incubated at 37 ° C. for 7 days to perform a saccharification reaction (glycation).
【００４５】未反応のグルコース−６−リン酸を洗浄に
より除去後、１×ｌ０5 cells ／mlの線維芽細胞をコラ
ーゲンゲル上に植えつけ、０．２５％ＦＢＳ／ＤＭＥＭ
培地を上載した。３時間後、シャーレ壁面からゲルを剥
離し、コラーゲン収縮を行った。４８時間後、培地を吸
引して、コラーゲンゲルの直径を測定し、面積を算出し
た。その結果を第３表に示す。なお、収縮後のコラーゲ
ン面積は、小さい方が、コラーゲン架橋が正常に保たれ
ており、糖化反応によりコラーゲンが変性を受けていな
いことを意味する。After removing unreacted glucose-6-phosphate by washing, 1 × 10 5 cells / ml of fibroblasts were inoculated on a collagen gel, and 0.25% FBS / DMEM was added.
The medium was loaded. After 3 hours, the gel was peeled off from the petri dish wall, and the collagen was contracted. Forty-eight hours later, the medium was aspirated, the diameter of the collagen gel was measured, and the area was calculated. Table 3 shows the results. The smaller the collagen area after shrinkage, the more the collagen cross-linking is normally maintained, which means that the collagen is not denatured by the saccharification reaction.
【００４６】[0046]
【表３】 第 ３ 表 ──────────────────────────────────── グリケーション 被検物質 収縮後のコラーゲン面積（cm2 ） ──────────────────────────────────── なし コントロール 247.8 あり コントロール 379.9 あり Gly-X-Y 含量が 30 〜85 重量％の分取物（0.05％） 290.2 あり Gly-X-Y 含量が85〜100 重量％の分取物（0.05％） 268.5 あり Ｌ−リジン（0.5 ％） 243.0 あり Ｌ−アルギニン（0.5 ％） 241.2 ────────────────────────────────────[Table 3] Table 3 ──────────────────────────────────── Glycation Test substance After contraction Collagen area (cm 2 ) な し No Control 247.8 Yes Control 379.9 Yes Gly-XY content of 30 to 85% by weight (0.05%) 290.2 Yes Gly-XY content of 85 to 100% by weight (0.05%) 268.5 Yes L-Lysine (0.5%) 243.0 Yes L -Arginine (0.5%) 241.2 ────────────────────────────────────
【００４７】第３表から、Gly-X-Y 含量が３０重量％以
上の分取物には、優れたコラーゲンの糖化抑制作用が認
められることが明らかになった。また、Gly-X-Y 含量が
８５〜１００重量％であると、より一層、コラーゲンの
糖化抑制作用に一層優れることが明らかになった。Table 3 shows that fractions having a Gly-XY content of 30% by weight or more show excellent collagen glycation-inhibiting action. Further, it was revealed that when the Gly-XY content is 85 to 100% by weight, the action of inhibiting saccharification of collagen is more excellent.
【００４８】この結果により、本発明皮膚外用剤の有効
成分であるコラゲナーゼ分解物は、優れたコラーゲン糖
化抑制作用を有し、これにより、皮膚のしわやたるみに
対して優れた効果を発揮し得ることが明らかになった。
このように、コラゲナーゼ分解物には、特に、真皮層に
おける主要な線維構造を構成するコラーゲンを、量的
（コラーゲンの産生促進活性）・質的（コラーゲンの糖
化による変性抑制作用）に維持・増強し得る作用が認め
られ、皮膚外用剤の有効成分として用いることにより、
皮膚構造にかかわる老化現象（典型的には、しわやたる
み）の予防・改善に有効であることが明らかになった。As a result, the collagenase hydrolyzate, which is an active ingredient of the external preparation for skin of the present invention, has an excellent inhibitory effect on collagen saccharification, and thus can exert an excellent effect on wrinkles and sagging of the skin. It became clear.
As described above, collagenase, which constitutes a major fibrous structure in the dermis layer, is quantitatively maintained (collagen production promoting activity) and qualitatively (inhibition of denaturation due to collagen saccharification) in collagenase degradation products. Action is recognized, by using it as an active ingredient of a skin external preparation,
It has been found to be effective in preventing and improving the aging phenomenon (typically wrinkles and sagging) related to the skin structure.
【００４９】５．皮膚老化改善効果試験 後述する実施例１ないし比較例１（実施例１の処方にお
けるGly-X-Y 含量が30〜85重量％の分取物を、イオン交
換水と置換して調製したもの）に示す化粧料（クリー
ム）について、以下に示す実使用試験を行った。5. Skin aging improvement effect test Examples 1 to Comparative Example 1 described below (prepared by replacing a fraction having a Gly-XY content of 30 to 85% by weight in the formulation of Example 1 with ion-exchanged water). The actual use test shown below was performed about the cosmetics (cream).
【００５０】試験方法 無作為に抽出した、年齢２５〜６０歳の健常人（女性）
１００名を被験者とし、試験品を、顔面の皮膚に、連日
１ヵ月間使用した後、シワに対する改善効果と、たるみ
に対する改善効果について検討した。 Test Method A healthy person (female) aged 25 to 60 years, randomly selected
After using the test article on the facial skin for one month every day, 100 subjects were examined, and the effect of improving wrinkles and the effect of improving sagging were examined.
【００５１】ａ）しわに対する効果の評価：目尻の状態
を、目視により観察し、以下の評価基準に基づいて評価
した。A) Evaluation of effect on wrinkles: The condition of the outer corners of the eyes was visually observed and evaluated based on the following evaluation criteria.
【００５２】評価基準 Ａ：非常に改善された Ｂ：改善された Ｃ：やや改善された Ｄ：改善効果が認められない Ｅ：悪化した ｂ）たるみに対する効果 顔全体の皮膚の状態を、目視により観察し、以下の評価
基準に基づいて評価した。 Evaluation criteria A: Very improved B: Improved C: Slightly improved D: No improvement effect was observed E: Deteriorated b) Effect on sagging The skin condition of the entire face was visually observed. It was observed and evaluated based on the following evaluation criteria.
【００５３】評価基準 Ａ：非常に改善された Ｂ：改善された Ｃ：やや改善された Ｄ：改善効果が認められない Ｅ：悪化した これらの実使用試験の結果を、第４表に示す。 Evaluation criteria A: very improved B: improved C: slightly improved D: no improvement effect was observed E: deteriorated The results of these practical use tests are shown in Table 4.
【００５４】[0054]
【表４】 第 ４ 表 ──────────────────────────────────── しわに対する効果（人） たるみに対する効果（人） Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ Ａ Ｂ Ｃ Ｄ Ｅ ──────────────────────────────────── 実施例１ 19 32 38 11 0 22 28 32 18 0 比較例１ 6 21 45 26 2 0 23 58 19 0 ────────────────────────────────────[Table 4] Table 4 効果 Effect on wrinkles (people) Sagging Effect (person) ABCDEABCDE ─────────────────────────────────── ─ Example 1 19 32 38 11 0 22 28 32 18 0 Comparative Example 1 6 21 45 26 2 0 23 58 19 0 ─────────────────────── ─────────────
【００５５】第４表から、実施例１の本発明品であるク
リームを用いた場合には、比較例１のクリームを用いた
場合よりも、目尻のしわにおいても、皮膚のたるみにお
いても、明らかに改善されていることが認められる。こ
のことにより、上述の分取物を有効成分として配合した
皮膚外用剤は、皮膚において、抗老化効果、しわ抑制効
果等をもたらす外用剤であることが明らかになった。From Table 4, it is clear that when the cream of the present invention of Example 1 was used, wrinkles at the outer corners of the eyes and sagging of the skin were higher than when the cream of Comparative Example 1 was used. It is recognized that the above has been improved. This has revealed that a skin external preparation containing the above fraction as an active ingredient is an external preparation that has an anti-aging effect, a wrinkle suppressing effect, and the like on the skin.
【００５６】以下、上述の実施例１を含めて、種々の剤
形の本発明皮膚外用剤の処方例を実施例として記載す
る。なお、実施例１以外の実施例についても、上述の実
使用試験を行ったところ、いずれの実施例においても、
非常に優れた皮膚の抗老化効果やしわ抑制効果が認めら
れた。Hereinafter, examples of the formulation of the skin external preparation of the present invention in various dosage forms, including Example 1 described above, will be described as examples. In addition, when the above-mentioned actual use test was performed also on the examples other than the example 1, in any of the examples,
Very excellent anti-aging and wrinkle-suppressing effects of the skin were observed.
【００５７】 〔実施例１〕 クリーム 配合成分 配合量（重量％） ステアリン酸 ５．０ ステアリルアルコール ４．０ イソプロピルミリステート １８．０ グリセリンモノステアリン酸エステル ３．０ プロピレングリコール １０．０ Gly-X-Y 含量が30〜85重量％の分取物（ゼラチン由来） ０．０１ ＫＯＨ ０．２ 亜硫酸水素ナトリウム ０．０１ 防腐剤 適 量 香料 適 量 イオン交換水 残 余 ＜製法＞イオン交換水に、プロピレングリコールと、分
取物及びＫＯＨを加えて、溶解後、加熱し、７０℃に保
った（水相）。この水相に、他の成分を加熱融解して７
０℃に保った油相を、徐々に添加し、全部加え終わって
から、しばらくその温度に保ち、反応させた。その後、
ホモミキサーで均一に乳化し、よく攪拌しながら、３０
℃まで冷却して、クリームを得た。Example 1 Cream Ingredient Amount (% by Weight) Stearic Acid 5.0 Stearyl Alcohol 4.0 Isopropyl Myristate 18.0 Glycerin Monostearate 3.0 Propylene Glycol 10.0 Gly-XY Content 30-85% by weight (derived from gelatin) 0.01 KOH 0.2 Sodium bisulfite 0.01 Preservatives Appropriate amount Fragrance Appropriate amount Ion-exchanged water residue <Production method> Ion-exchanged water with propylene glycol , A fraction, and KOH were added, and after dissolution, the mixture was heated and kept at 70 ° C (aqueous phase). In this aqueous phase, other components are heated and melted,
The oil phase kept at 0 ° C. was gradually added, and after all the addition was completed, the temperature was kept at that temperature for a while to cause a reaction. afterwards,
Emulsify evenly with a homomixer and, with good stirring,
Cooling to ° C gave a cream.
【００５８】 〔実施例２〕 クリーム 配合成分 配合量（重量％） ステアリン酸 ２．０ ステアリルアルコール ７．０ 水添ラノリン ２．０ スクワラン ５．０ ２−オクチルドデシルアルコール ６．０ ポリオキシエチレン（２５モル） セチルアルコールエーテル ３．０ グリセリンモノステアリン酸エステル ２．０ プロピレングリコール ５．０ Gly-X-Y 含量が85〜100 重量％の分取物（ゼラチン由来） ０．０５ 亜硫酸水素ナトリウム ０．０３ エチルパラベン ０．３ 香料 適 量 イオン交換水 残 余 ＜製法＞イオン交換水に、プロピレングリコールを加
え、加熱して７０℃に保った（水相）。この水相に、他
の成分を加熱融解して７０℃に保った油相を添加し、予
備乳化を行い、ホモミキサーで均一に乳化した後、よく
攪拌しながら３０℃まで冷却して、クリームを得た。Example 2 Cream Ingredients Ingredients (% by Weight) Stearic Acid 2.0 Stearyl Alcohol 7.0 Hydrogenated Lanolin 2.0 Squalane 5.0 2-Octyldodecyl Alcohol 6.0 Polyoxyethylene (25 Mol) Cetyl alcohol ether 3.0 Glycerin monostearate 2.0 Propylene glycol 5.0 Gly-XY Fraction (gelatin-derived) having a content of 85 to 100% by weight 0.05 Sodium bisulfite 0.03 Ethyl paraben 0.3 Appropriate amount of perfume Ion-exchanged water residue <Production method> Propylene glycol was added to ion-exchanged water, and heated to 70 ° C (aqueous phase). To this aqueous phase, add an oil phase that is heated and melted at 70 ° C. by heating and melting other components, pre-emulsify, uniformly emulsify with a homomixer, and then cool to 30 ° C. while stirring well to obtain a cream. I got
【００５９】 〔実施例３〕 クリーム 配合成分 配合量（重量％） 固形パラフィン ５．０ ミツロウ １０．０ ワセリン １５．０ 流動パラフィン ４１．０ グリセリンモノステアリン酸エステル ２．０ ポリオキシエチレン（２０モル） ソルビタンモノラウリン酸エステル ２．０ 石けん粉末 ０．１ 硼砂 ０．２ Gly-X-Y 含量が30〜85重量％の分取物（コラーゲン由来） ０．５ ワレモコウエタノール抽出物 ０．０５ 亜硫酸水素ナトリウム ０．０３ エチルパラベン ０．３ 香料 適 量 イオン交換水 残 余 ＜製法＞イオン交換水に、石けん粉末と硼砂を加え、加
熱溶解して７０℃に保った（水相）。この水相に、他の
成分を加熱融解して７０℃に保った油相を、徐々に添加
し、反応させた。反応終了後、ホモミキサーで均一に乳
化し、乳化後、よく攪拌しながら、３０℃まで冷却し
て、クリームを得た。[Example 3] Cream blending ingredients blending amount (% by weight) Solid paraffin 5.0 Beeswax 10.0 Vaseline 15.0 Liquid paraffin 41.0 Glycerin monostearate 2.0 Polyoxyethylene (20 mol) Sorbitan monolaurate 2.0 Soap powder 0.1 Borax 0.2 Gly-XY A fraction with a content of 30 to 85% by weight (derived from collagen) 0.5 Warmoko ethanol extract 0.05 Sodium bisulfite 0.03 Ethylparaben 0.3 Perfume Appropriate amount Ion-exchanged water residue <Production method> Soap powder and borax were added to ion-exchanged water, heated and dissolved, and kept at 70 ° C (aqueous phase). An oil phase maintained at 70 ° C. by heating and melting the other components was gradually added to the aqueous phase and reacted. After the completion of the reaction, the mixture was uniformly emulsified with a homomixer. After the emulsification, the mixture was cooled to 30 ° C. with good stirring to obtain a cream.
【００６０】 〔実施例４〕 乳液 配合成分 配合量（重量％） ステアリン酸 ２．５ セチルアルコール １．５ ワセリン ５．０ 流動パラフィン １０．０ ポリオキシエチレン（１０モル） モノオレイン酸エステル ２．０ ポリエチレングリコール１５００ ３．０ トリエタノールアミン １．０ カルボキシビニルポリマー ０．０５ （商品名：カーボポール941, B.F.Goodrich Chemical company) Gly-X-Y 含量が85〜100 重量％の分取物（コラーゲン由来）１０．０ 亜硫酸水素ナトリウム ０．０１ エチルパラベン ０．３ 香料 適 量 イオン交換水 残 余 ＜製法＞イオン交換水に、プロピレングリコールを加
え、加熱して７０℃に保った（水相）。この水相に、他
の成分を加熱融解して７０℃に保った油相を、徐々に添
加し、ホモミキサーで均一に乳化し、乳化後、よく攪拌
しながら、３０℃まで冷却して、乳液を得た。[Example 4] Emulsion compounding amount (% by weight) Stearic acid 2.5 Cetyl alcohol 1.5 Vaseline 5.0 Liquid paraffin 10.0 Polyoxyethylene (10 mol) Monooleate 2.0 Polyethylene glycol 1500 3.0 Triethanolamine 1.0 Carboxyvinyl polymer 0.05 (trade name: Carbopol 941, BFGoodrich Chemical company) Gly-XY fraction (derived from collagen) having a content of 85 to 100% by weight 0 Sodium bisulfite 0.01 Ethylparaben 0.3 Perfume Appropriate amount Ion-exchanged water residue <Production method> Propylene glycol was added to ion-exchanged water and heated to 70 ° C (aqueous phase). To this aqueous phase, the oil phase, which was heated and melted at 70 ° C. with other components, was gradually added, uniformly emulsified with a homomixer, and after emulsification, cooled to 30 ° C. with good stirring. An emulsion was obtained.
【００６１】 〔実施例５〕 ゼリー 配合成分 配合量（重量％） ９５％エチルアルコール １０．０ ジプロピレングリコール １５．０ ポリオキシエチレン（５０モル） オレイルアルコールエーテル ２．０ カルボキシビニルポリマー １．０ （商品名：カーボポール940, B.F.Goodrich Chemical company) ＮａＯＨ ０．１５ Ｌ−アルギニン ０．１ Gly-X-Y 含量が30〜85重量％の分取物（ゼラチン由来） ０．０００１ ２−ヒドロキシ−４−メトキシベンゾフェノン スルホン酸ナトリウム ０．０５ エチレンジアミンテトラアセテート・ ３ナトリウム・２水 ０．０５ メチルパラベン ０．２ 香料 適 量 イオン交換水 残 余 ＜製法＞イオン交換水に、カルボキシビニルポリマーを
均一に溶解し（水相）、これとは別に、９５％エチルア
ルコールに、ポリオキシエチレン（５０モル）オレイル
アルコールエーテルを溶解し、これを水相に添加した。
次いで、これに、その他の成分を加えた後、ＮａＯＨと
Ｌ−アルギニンで中和させ、増粘し、ゼリーを得た。[Example 5] Jelly blending component blending amount (% by weight) 95% ethyl alcohol 10.0 dipropylene glycol 15.0 polyoxyethylene (50 mol) oleyl alcohol ether 2.0 carboxyvinyl polymer 1.0 ( Trade name: Carbopol 940, BFGoodrich Chemical company) NaOH 0.15 L-arginine 0.1 Gly-XY Fraction having a content of 30 to 85% by weight (derived from gelatin) 0.0001 2-hydroxy-4-methoxybenzophenone Sodium sulfonate 0.05 Ethylenediaminetetraacetate 3 Trisodium 2 water 0.05 Methyl paraben 0.2 Perfume Appropriate amount Ion exchange water residue <Production method> Carboxyvinyl polymer is uniformly dissolved in ion exchange water (aqueous phase) Separately, in 95% ethyl alcohol, polyoxyethylene Down was dissolved (50 mol) oleyl alcohol ether which was added to the aqueous phase.
Next, after adding other components to this, it neutralized with NaOH and L-arginine, thickened, and obtained jelly.
【００６２】 〔実施例６〕 美容液 配合成分 配合量（重量％） （Ａ相） ９５％エチルアルコール １０．０ ポリオキシエチレン（２０モル） オクチルドデカノール １．０ パントテニールエチルエーテル ０．１ Gly-X-Y 含量が85〜100 重量％の分取物（ゼラチン由来） １．５ メチルパラベン ０．１５ （Ｂ相） ＫＯＨ ０．１ （Ｃ相） グリセリン ５．０ ジプロピレングリコール １０．０ 亜硫酸水素ナトリウム ０．０３ カルボキシビニルポリマー ０．２ （商品名：カーボポール940, B.F.Goodrich Chemical company) イオン交換水 残 余 ＜製法＞Ａ相、Ｃ相を、それぞれに均一に溶解し、Ｃ相
にＡ相を加えて可溶化した。次いで、Ｂ相を加えた後、
充填を行い、美容液を得た。Example 6 Essence Composition (Weight% ) 95% Ethyl Alcohol 10.0 Polyoxyethylene (20 mol) Octyldodecanol 1.0 Pantothenyl Ethyl 0.1 Gly Preparative fraction having -XY content of 85 to 100% by weight (derived from gelatin) 1.5 Methyl paraben 0.15 (B phase) KOH 0.1 (C phase) Glycerin 5.0 Dipropylene glycol 10.0 Sodium bisulfite 0 .03 Carboxyvinyl polymer 0.2 (trade name: Carbopol 940, BFGoodrich Chemical company) Ion-exchanged water Residue <Production method> A phase and C phase are uniformly dissolved respectively, and A phase is added to C phase. Solubilized. Then, after adding phase B,
Filling was performed to obtain a serum.
【００６３】 〔実施例７〕 パック 配合成分 配合量（重量％） （Ａ相） ジプロピレングリコール ５．０ ポリオキシエチレン（６０モル）硬化ヒマシ油 ５．０ （Ｂ相） Gly-X-Y 含量が30〜85重量％の分取物（コラーゲン由来） ０．０１ オリーブ油 ５．０ 酢酸トコフェロール ０．２ エチルパラベン ０．２ 香料 ０．２ （Ｃ相） 亜硫酸水素ナトリウム ０．０３ ポリビニルアルコール １３．０ （ケン化度９０，重合度２０００） エタノール ７．０ イオン交換水 残 余 ＜製法＞Ａ相，Ｂ相及びＣ相を、それぞれ均一に溶解
し、Ａ相をＢ相に加えて可溶化した。次いで、これをＣ
相に加えた後、充填を行い、パックを得た。Example 7 Packing Ingredients (Weight%) (A phase) Dipropylene glycol 5.0 Polyoxyethylene (60 mol) hydrogenated castor oil 5.0 (B phase) Gly-XY content is 30 -85 wt% fraction (derived from collagen) 0.01 Olive oil 5.0 Tocopherol acetate 0.2 Ethylparaben 0.2 Fragrance 0.2 (C phase) Sodium bisulfite 0.03 Polyvinyl alcohol 13.0 (Ken Ethanol 7.0 Deionized water Residue <Production method> A phase, B phase and C phase were each uniformly dissolved, and A phase was added to B phase to be solubilized. Then, this is C
After adding to the phase, filling was performed to obtain a pack.
【００６４】 〔実施例８〕 固形ファンデーション 配合成分 配合量（重量％） タルク ４３．１ カオリン １５．０ セリサイト １０．０ 亜鉛華 ７．０ 二酸化チタン ３．８ 黄色酸化鉄 ２．９ 黒色酸化鉄 ０．２ スクワラン ８．０ イソステアリン酸 ４．０ モノオレイン酸ＰＯＥソルビタン ３．０ オクタン酸イソセチル ２．０ Gly-X-Y 含量が85〜100 重量％の分取物（コラーゲン由来）１．０ 防腐剤 適 量 香料 適 量 ＜製法＞タルク〜黒色酸化鉄の粉末成分を、ブレンダー
で十分混合し、これにスクワラン〜オクタン酸イソセチ
ルの油性成分、分取物、防腐剤、香料を加え、良く混練
した後、容器に充填して成型し、固形ファンデーション
を得た。Example 8 Solid Foundation Compounding Component Mixing Amount (% by Weight) Talc 43.1 Kaolin 15.0 Sericite 10.0 Zinc White 7.0 Titanium Dioxide 3.8 Yellow Iron Oxide 2.9 Black Iron Oxide 0.2 Squalane 8.0 Isostearic acid 4.0 POE sorbitan monooleate 3.0 Isocetyl octoate 2.0 Gly-XY Fractionated (collagen-derived) having a content of 85 to 100% by weight 1.0 Preservative Suitable Amount Perfume Appropriate amount <Production method> The talc-black iron oxide powder components are mixed well in a blender, and the squalane-isocetyl octanoate oil components, fractions, preservatives, and fragrances are added and kneaded well. The container was filled and molded to obtain a solid foundation.
【００６５】 〔実施例９〕 乳化型ファンデーション（クリームタイプ） 配合成分 配合量（重量％） （粉体部） 二酸化チタン １０．３ セリサイト ５．４ カオリン ３．０ 黄色酸化鉄 ０．８ ベンガラ ０．３ 黒色酸化鉄 ０．２ （油相） デカメチルシクロペンタシロキサン １１．５ 流動パラフィン ４．５ ポリオキシエチレン変性ジメチルポリシロキサン ４．０ （水相） イオン交換水 ５０．０ １，３−ブチレングリコール ４．５ Gly-X-Y 含量が30〜85重量％の分取物（ゼラチン由来） １．５ ソルビタンセスキオレイン酸エステル ３．０ 防腐剤 適 量 香料 適 量 ＜製法＞水相成分を加熱攪拌後、これに、十分混合粉砕
した粉体部を添加して、ホモミキサー処理を行った。更
に、加熱混合した油相を加えて、ホモミキサー処理した
後、攪拌しながら香料を添加して、室温まで冷却して、
乳化型ファンデーションを得た。[Example 9] Emulsion type foundation (cream type) compounding components compounding amount (% by weight) (powder part) titanium dioxide 10.3 sericite 5.4 kaolin 3.0 yellow iron oxide 0.8 bengara 0 0.3 Black iron oxide 0.2 (oil phase) Decamethylcyclopentasiloxane 11.5 Liquid paraffin 4.5 Polyoxyethylene-modified dimethylpolysiloxane 4.0 (aqueous phase) Deionized water 50.0 1,3-butylene Glycol 4.5 Gly-XY Fraction with a content of 30 to 85% by weight (derived from gelatin) 1.5 Sorbitan sesquioleate 3.0 Preservatives Appropriate amount Fragrance Appropriate amount <Production method> After heating and stirring the aqueous phase component Then, a powder portion sufficiently mixed and pulverized was added thereto, and a homomixer treatment was performed. Furthermore, after adding the heat-mixed oil phase and performing a homomixer treatment, adding a flavor while stirring, and cooling to room temperature,
An emulsion type foundation was obtained.
【００６６】[0066]
【発明の効果】本発明により、皮膚の抗老化効果、しわ
抑制効果、さらには、細胞増殖促進作用、コラーゲン産
生促進作用、コラーゲン糖化抑制作用が認められ、しか
も、安全性に極めて優れる皮膚外用剤が提供される。Industrial Applicability According to the present invention, an external preparation for skin which has an anti-aging effect on skin, a wrinkle suppressing effect, a cell growth promoting effect, a collagen production promoting effect and a collagen glycation inhibiting effect, and which is extremely excellent in safety. Is provided.
フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｐ 43/00 １０７ Ａ６１Ｋ 37/18 Continued on the front page (51) Int.Cl. 7 Identification symbol FI Theme coat II (reference) A61P 43/00 107 A61K 37/18
Claims (8)
よる分解物を有効成分とする皮膚外用剤。1. An external preparation for skin containing as an active ingredient a decomposition product of collagen or gelatin by collagenase.
よる分解物に、そのアミノ酸配列が、（Ｇｌｙ−Ｘ−
Ｙ）n （式中、Ｇｌｙは、グリシン残基を表し、Ｘ，Ｙ
は、グリシン残基を除くアミノ酸残基を表し、互いに
Ｘ，Ｙは同一であっても、異なってもよく、ｎは、正の
整数を表す）で表され、かつ、平均分子量が２８０〜２
００００であるペプチドが含まれている、請求項１記載
の皮膚外用剤。2. The degradation product of collagen or gelatin by collagenase has the amino acid sequence of (Gly-X-
Y) n (where Gly represents a glycine residue; X, Y
Represents an amino acid residue excluding a glycine residue; X and Y may be the same or different; n represents a positive integer); and an average molecular weight of 280 to 2
The external preparation for skin according to claim 1, which contains a peptide which is 0000.
よる分解物中の、Ｇｌｙ−Ｘ−Ｙ（式中、Ｇｌｙは、グ
リシン残基を表し、Ｘ，Ｙは、グリシン残基を除くアミ
ノ酸残基を表し、互いにＸ，Ｙは同一であっても、異な
ってもよい）で表されるトリペプチドの含量が、前記分
解物中において３０〜１００重量％である、請求項２記
載の皮膚外用剤。3. Gly-XY (in the formula, Gly represents a glycine residue, X and Y represent amino acid residues excluding a glycine residue) in a degradation product of collagen or gelatin by collagenase, The external preparation for skin according to claim 2, wherein the content of the tripeptide represented by X and Y may be the same or different from each other) is 30 to 100% by weight in the decomposed product.
る、請求項１ないし３のいずれかの請求項記載の皮膚外
用剤。4. The skin external preparation according to claim 1, wherein the skin external preparation is an anti-aging skin external preparation.
る、請求項１ないし３のいずれかの請求項記載の皮膚外
用剤。5. The external preparation for skin according to claim 1, wherein the external preparation for skin is a wrinkle suppressing skin external preparation.
れる皮膚外用剤である、請求項１ないし３のいずれかの
請求項記載の皮膚外用剤。6. The external preparation for skin according to claim 1, wherein the external preparation for skin is an external preparation for skin having an effect of promoting cell proliferation.
認められる皮膚外用剤である、請求項１ないし３のいず
れかの請求項記載の皮膚外用剤。7. The external preparation for skin according to any one of claims 1 to 3, wherein the external preparation for skin is an external preparation for skin having an effect of promoting collagen production.
られる皮膚外用剤である、請求項１ないし３のいずれか
の請求項記載の皮膚外用剤。8. The external preparation for skin according to any one of claims 1 to 3, wherein the external preparation for skin is an external preparation for skin in which suppression of collagen saccharification is observed.
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