JP2000266753A - Measuring method for thiol-group-containing compound - Google Patents
Measuring method for thiol-group-containing compoundInfo
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、チオール基含有化
合物の簡便な測定方法に関するものである。The present invention relates to a simple method for measuring a thiol group-containing compound.
【０００２】[0002]
【従来の技術】チオール基含有化合物の検出及び定量に
は、ガスクロマトグラフィーや液体クロマトグラフィー
などの分離分析手段を用いて直接測定する方法や、マレ
イミド誘導体などチオールと反応する化合物と反応させ
て、蛍光色素などの検出容易な化合物を結合させたのち
検出する方法が知られている。しかしながらこれらの方
法には、大がかりな装置あるいは操作に熟練が必要とい
う問題がある。2. Description of the Related Art Detection and quantification of thiol group-containing compounds are carried out by direct measurement using separation and analysis means such as gas chromatography or liquid chromatography, or by reacting with a compound that reacts with thiol such as a maleimide derivative. A method is known in which a compound that is easily detectable such as a fluorescent dye is bound and then detected. However, these methods have a problem that a large-scale apparatus or operation requires skill.
【０００３】[0003]
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、チオ
ール基含有化合物を簡便かつ正確に測定する方法を提供
することにある。より具体的には、アルキルチオール
類、アリールチオール類、システイン、グルタチオン、
及び蛋白質などのチオール基含有化合物を簡便かつ正確
に測定することができる方法を提供することである。ま
た、本発明の別の課題は、上記のチオール基含有化合物
の測定に用いる試薬を提供することにある。An object of the present invention is to provide a method for simply and accurately measuring a thiol group-containing compound. More specifically, alkyl thiols, aryl thiols, cysteine, glutathione,
Another object of the present invention is to provide a method for simply and accurately measuring a thiol group-containing compound such as a protein. Another object of the present invention is to provide a reagent used for measuring the above thiol group-containing compound.
【０００４】[0004]
【課題を解決するための手段】本発明者らは上記の課題
を解決すべく研究を行った結果、銀などの金属を含む微
粒子を分散させた分散液にチオール基含有化合物を含む
液体、固体、又は気体状態の試料を接触させると、試料
中に含まれるチオール基含有化合物と金属微粒子との間
に相互作用が生じ、分散液に色調の変化や金属微粒子の
凝集が生じること、並びに、この色調の変化や微粒子の
凝集状態の変化を、例えば目視、光学顕微鏡あるいは分
光学的な手段によって検出することにより、試料中のチ
オール基含有化合物を簡便かつ正確に測定できることを
見出した。本発明はこれらの知見を基にして完成された
ものである。Means for Solving the Problems As a result of research conducted to solve the above problems, the present inventors have found that a liquid containing a thiol group-containing compound, a solid containing a thiol group-containing compound, , Or when a gaseous sample is brought into contact, an interaction occurs between the thiol group-containing compound and the metal fine particles contained in the sample, and a change in color tone and aggregation of the metal fine particles occur in the dispersion, and It has been found that a thiol group-containing compound in a sample can be easily and accurately measured by detecting a change in color tone or a change in the state of aggregation of fine particles, for example, by visual observation, an optical microscope, or spectroscopic means. The present invention has been completed based on these findings.
【０００５】すなわち本発明は、チオール基含有化合物
の測定方法であって、下記の工程：(1)金属微粒子を含
む分散液にチオール基含有化合物を含む溶液、固体、又
は気体試料を接触させる工程；及び(2)チオール基含有
化合物と金属微粒子との相互作用により生じた分散液の
状態変化を検出する工程を含む方法を提供するものであ
る。本発明の好ましい態様によれば、分散液の状態変化
として色の変化及び／又は金属微粒子の凝集を検出する
方法が提供される。That is, the present invention provides a method for measuring a thiol group-containing compound, which comprises the following steps: (1) a step of bringing a solution, a solid, or a gas sample containing a thiol group-containing compound into contact with a dispersion containing metal fine particles. And (2) detecting a change in the state of the dispersion caused by the interaction between the thiol group-containing compound and the fine metal particles. According to a preferred embodiment of the present invention, there is provided a method for detecting a change in color and / or aggregation of metal fine particles as a change in state of a dispersion.
【０００６】本発明のさらに好ましい態様として、金属
微粒子がコロイド状態である上記方法；金属微粒子が元
素周期率表の第８族、第９族、第１０族、第１１族、及
び第１２族からなる群から選ばれる金属を主成分として
含む上記方法；金属微粒子が元素周期率表の第４周期、
第５周期、第６周期からなる群から選ばれる金属を主成
分として含む上記方法；金属微粒子の平均粒径が0.001
μm 〜0.5 μm である上記方法；金属微粒子が金、銀、
銅、白金の中から選ばれる金属を含む上記方法；金属微
粒子が銀を主成分として含む上記方法；チオール基含有
化合物がアルキルチオール類、アリールチオール類、ア
ミノ酸及びその誘導体（システイン、グルタチオンな
ど）、及び蛋白質から選ばれる上記方法が提供される。As a further preferred embodiment of the present invention, the above method wherein the metal fine particles are in a colloidal state; wherein the metal fine particles are selected from the group 8, 9, 10, 10, 11 and 12 of the periodic table. The above method comprising, as a main component, a metal selected from the group consisting of;
The above method including, as a main component, a metal selected from the group consisting of the fifth cycle and the sixth cycle;
μm to 0.5 μm; wherein the fine metal particles are gold, silver,
The above-described method including a metal selected from copper and platinum; the above-described method in which metal fine particles contain silver as a main component; the thiol group-containing compound is an alkylthiol, an arylthiol, an amino acid and a derivative thereof (such as cysteine or glutathione); And a method selected from proteins.
【０００７】また、本発明の別の観点からは、チオール
基含有化合物の測定用試薬であって、金属微粒子を含む
分散液を含む試薬が提供される。この試薬は、チオール
基含有化合物と金属微粒子との相互作用により生じる分
散液の状態変化を検出することによりチオール基含有化
合物を測定するために用いられる。この発明の好ましい
態様によれば、状態変化が色の変化及び／又は金属微粒
子の凝集である上記試薬が提供される。さらに別の観点
からは、上記の各方法に使用するための分散液が本発明
により提供される。According to another aspect of the present invention, there is provided a reagent for measuring a thiol group-containing compound, the reagent comprising a dispersion containing fine metal particles. This reagent is used to measure a thiol group-containing compound by detecting a change in the state of the dispersion caused by the interaction between the thiol group-containing compound and the metal fine particles. According to a preferred embodiment of the present invention, there is provided the above-mentioned reagent, wherein the state change is a color change and / or aggregation of metal fine particles. In yet another aspect, the present invention provides a dispersion for use in each of the above methods.
【０００８】[0008]
【発明の実施の形態】本発明のチオール基含有化合物の
測定方法は、金属微粒子を含む分散液に対してチオール
基含有化合物を含む溶液、固体、又は気体試料を接触さ
せる工程（第一工程）と、試料中に含まれるチオール基
含有化合物と金属微粒子との相互作用により分散液中に
現れる状態変化を検出する工程（第二工程）を含んでい
る。本発明の方法では、分散液の状態変化を検出するこ
とにより、極めて簡便かつ正確にチオール基含有化合物
を測定することができる。本明細書において用いられる
「測定」という用語は、定性及び定量を含めて、チオー
ル基含有化合物の存在に関する情報を提供できるものを
すべて包含するように最も広義に解釈されるべきであ
る。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION In the method for measuring a thiol group-containing compound of the present invention, a step of bringing a solution, a solid, or a gas sample containing a thiol group-containing compound into contact with a dispersion containing metal fine particles (first step) And a step (second step) of detecting a state change appearing in the dispersion liquid due to the interaction between the thiol group-containing compound contained in the sample and the metal fine particles. In the method of the present invention, a thiol group-containing compound can be measured extremely simply and accurately by detecting a change in the state of the dispersion. The term "measurement" as used herein should be interpreted in the broadest sense to include anything that can provide information about the presence of a thiol-containing compound, including qualitative and quantitative.
【０００９】本発明の方法の測定対象となるチオール基
含有化合物の種類は特に限定されず、１個又は２個以上
のチオール基を有する化合物であればいかなるものでも
よい。チオール基含有化合物としては、例えば、アルキ
ルチオール類（例えば、メチルメルカプタン、エチルメ
ルカプタンなど）、アリールチオール類（例えば、チオ
フェノール、チオナフトール、ベンジルメルカプタンな
ど）、アミノ酸又はその誘導体（例えば、システイン、
グルタチオンなど）、ペプチド化合物（例えば、システ
イン残基を含むジペプチド化合物、トリペプチド化合
物、テトラペプチド化合物、５以上のアミノ酸残基を含
むオリゴペプチド化合物など）、又は蛋白質（例えば、
メタロチオネインやシステイン残基が表面に配置された
球状蛋白質など）などを挙げることができるが、これら
に限定されることはない。The type of the thiol group-containing compound to be measured in the method of the present invention is not particularly limited, and may be any compound having one or more thiol groups. Examples of the thiol group-containing compound include alkyl thiols (eg, methyl mercaptan, ethyl mercaptan, etc.), aryl thiols (eg, thiophenol, thionaphthol, benzyl mercaptan, etc.), amino acids and derivatives thereof (eg, cysteine,
Glutathione, etc.), a peptide compound (eg, a dipeptide compound containing a cysteine residue, a tripeptide compound, a tetrapeptide compound, an oligopeptide compound containing 5 or more amino acid residues, etc.), or a protein (eg,
Metallothionein, globular protein having a cysteine residue disposed on the surface, and the like, but are not limited thereto.
【００１０】本発明の方法に従って測定を行うと、試料
中にチオール基含有化合物が含まれている場合には、該
化合物と分散液中の金属微粒子との間に相互作用が生
じ、分散液中に検出可能な状態変化が惹起される。本明
細書において用いられる「相互作用」という用語は、チ
オール基含有化合物と金属微粒子との間で生じる種々の
物理化学的及び／又は化学的な相互作用を包含してお
り、例えば、化学結合の形成、錯体の形成、吸着、凝
集、酸化、又は還元などを含めて最も広義に解釈する必
要がある。また、上記の相互作用には、酵素作用により
生じる物質、例えばプロテアーゼの作用により生じるチ
オール基含有ペプチドと金属微粒子との間の相互作用も
含まれる。When the measurement is carried out according to the method of the present invention, when the sample contains a thiol group-containing compound, an interaction occurs between the compound and the fine metal particles in the dispersion, and , A detectable state change is caused. As used herein, the term "interaction" encompasses various physicochemical and / or chemical interactions that occur between the thiol group-containing compound and the metal microparticles, for example, a chemical bond. It should be interpreted in the broadest sense, including formation, complex formation, adsorption, aggregation, oxidation, or reduction. The above-mentioned interaction also includes an interaction between a substance generated by an enzyme action, for example, a thiol group-containing peptide generated by the action of a protease, and metal fine particles.
【００１１】分散液中に起こる色の変化はいかなる種類
のものでもよく、例えば、着色、脱色、濃度変化、又は
色調変化などを挙げることができる。色の変化は、目視
又は吸光度測定などの手段により検出可能な変化である
ことが好ましい。通常は、可視光線下での色の変化を観
測することができるが、紫外−可視領域、赤外−可視領
域、又は赤外−可視−紫外領域における吸光スペクトル
を測定してもよい。金属微粒子の凝集は、一般的には目
視又は吸光度測定などの手段により検出可能であるが、
凝集による濁度などの変化を吸光スペクトル分析により
観測することが好ましい。使用する金属微粒子の粒径や
金属の種類などに応じて、適宜のスペクトル分析を利用
することが可能である。The color change occurring in the dispersion may be of any kind, and may include, for example, coloration, decolorization, density change, or color tone change. The change in color is preferably a change that can be detected visually or by means such as absorbance measurement. Usually, a change in color under visible light can be observed, but an absorption spectrum in an ultraviolet-visible region, an infrared-visible region, or an infrared-visible-ultraviolet region may be measured. Aggregation of metal microparticles is generally detectable by means such as visual or absorbance measurements,
It is preferable to observe changes such as turbidity due to aggregation by absorption spectrum analysis. Appropriate spectral analysis can be used depending on the particle size of the metal fine particles used, the type of metal, and the like.
【００１２】本発明の方法で用いられる金属微粒子は特
に限定されず、いかなるものを用いてもよい。例えば、
金属微粒子が、元素周期表の第４周期、第５周期、及び
第６周期からなる群から選ばれる金属を主成分として含
むことが好ましく、また、第８族、第９族、第１０族、
第１１族、及び第１２族からなる群から選ばれる金属を
主成分として含むことが好ましい。これらの金属のう
ち、第４周期、第５周期、又は第６周期の金属であっ
て、第１０族、第１１族、又は第１２族の金属がさらに
好ましく、金、銀、銅、白金、又はパラジウムが最も好
ましい。その中でも金、銀、銅が好ましく、とりわけ銀
が好ましい。銀としてはコロイド銀が最も好ましい。金
属微粒子の製造には、上記金属を２種以上組み合わせて
用いてもよく、合金として用いることも可能である。The fine metal particles used in the method of the present invention are not particularly limited, and any fine particles may be used. For example,
The metal fine particles preferably contain, as a main component, a metal selected from the group consisting of the fourth period, the fifth period, and the sixth period of the periodic table.
It is preferable to contain a metal selected from the group consisting of Group 11 and Group 12 as a main component. Among these metals, metals of Group 4, Group 11, or Group 12 are more preferable, and are metals of Group 4, Group 11, or Group 12, and are preferably gold, silver, copper, platinum, Or palladium is most preferred. Among them, gold, silver and copper are preferable, and silver is particularly preferable. Colloidal silver is most preferred as silver. For the production of metal fine particles, two or more of the above metals may be used in combination, or may be used as an alloy.
【００１３】金属微粒子は溶液中に分散して存在してい
ればよく、存在状態は特に限定されないが、金属微粒子
が安定な分散状態で存在していることが好ましく、例え
ば、コロイド状態であることがより好ましい。コロイド
状態の場合には、例えば、金属微粒子が実質的に球形の
微粒子状態で分散されていることが好ましい。金属微粒
子の粒径は特に限定されないが、平均粒径が0.001 μm
〜0.5 μmの範囲であることが好ましい。微粒子の好ま
しい平均粒径は、例えば、0.1 μm 以下、より好ましく
は0.05μm 以下、特に好ましくは0.03μm 以下である。The fine metal particles only need to be present in a dispersed state in the solution. The state of the fine particles is not particularly limited, but it is preferable that the fine metal particles be present in a stable dispersed state. Is more preferred. In the case of a colloidal state, for example, it is preferable that metal fine particles are dispersed in a substantially spherical fine particle state. The particle size of the metal fine particles is not particularly limited, but the average particle size is 0.001 μm
It is preferably in the range of 0.50.5 μm. The preferred average particle size of the fine particles is, for example, 0.1 μm or less, more preferably 0.05 μm or less, and particularly preferably 0.03 μm or less.
【００１４】本発明の方法で用いられる分散液には、金
属微粒子以外の成分として、親水性高分子、界面活性
剤、防腐剤、安定化剤などを適宜配合してもよい。親水
性高分子としては、水に溶解でき、希薄状態において実
質的に溶液状態を維持できるものであればいかなるもの
を用いてもよい。例えば、ゼラチン、コラーゲン、カゼ
イン、フィブロネクチン、ラミニン、エラスチンなどの
タンパク質及びタンパク質由来の物質；セルロース、デ
ンプン、アガロース、カラギーナン、デキストラン、デ
キストリン、キチン、キトサン、ペクチン、マンナンな
どの多糖類及び多糖類由来の物質などの天然高分子；ポ
バール、ポリアクリルアミド、ポリアクリル酸ポリビニ
ルピロリドン、ポリエチレングリコール、ポリスチレン
スルホン酸、ポリアリルアミンなどの合成高分子；又は
これらに由来するゲルなどを用いることができる。ゼラ
チンを用いる場合には、ゼラチンの種類は特に限定され
ず、例えば、牛骨アルカリ処理ゼラチン、豚皮膚アルカ
リ処理ゼラチン、牛骨酸処理ゼラチン、牛骨フタル化処
理ゼラチン、豚皮膚酸処理ゼラチンなどを用いることが
できる。The dispersion used in the method of the present invention may optionally contain a hydrophilic polymer, a surfactant, a preservative, a stabilizer and the like as components other than the metal fine particles. Any hydrophilic polymer may be used as long as it can be dissolved in water and can maintain a substantially solution state in a dilute state. For example, proteins and substances derived from proteins such as gelatin, collagen, casein, fibronectin, laminin, and elastin; and polysaccharides and polysaccharides such as cellulose, starch, agarose, carrageenan, dextran, dextrin, chitin, chitosan, pectin, and mannan. Natural polymers such as substances; synthetic polymers such as poval, polyacrylamide, polyvinylpyrrolidone polyacrylate, polyethylene glycol, polystyrenesulfonic acid, and polyallylamine; and gels derived therefrom can be used. When gelatin is used, the kind of gelatin is not particularly limited.Examples include, for example, beef bone alkali-treated gelatin, pork skin alkali-treated gelatin, bovine bone-treated gelatin, bovine bone phthalated gelatin, and pig skin acid-treated gelatin. Can be used.
【００１５】本発明の方法に用いる試料の種類は特に限
定されない。例えば、上水、下水、廃水、河川などから
採取された水質検査用などの水性試料、土壌、汚泥、生
体から分離・採取された生体試料、呼気、大気、煤煙、
排気ガス、天然ガス、プロパンガスなどを挙げることが
できるが、これらに限定されることはない。試料として
は、例えば、化学研究や化学工業などの分野において用
いられるチオール基含有化合物を含む液体、固体、若し
くは気体試料、天然ガス、プロパンガス、又はヒトを含
む哺乳類動物から分離・採取した生体試料などを好適に
用いることができる。The type of sample used in the method of the present invention is not particularly limited. For example, water samples such as water quality samples collected from water, sewage, wastewater, rivers, etc., soil, sludge, biological samples separated and collected from living organisms, breath, air, smoke,
Examples include, but are not limited to, exhaust gas, natural gas, propane gas, and the like. Examples of the sample include a liquid, solid, or gas sample containing a thiol group-containing compound used in fields such as chemical research and the chemical industry, natural gas, propane gas, or a biological sample separated and collected from mammals including humans Etc. can be suitably used.
【００１６】化学研究又は化学工業の分野における試料
としては、例えば、化学合成に用いられる試薬、反応
液、反応中間体、生成物、又は廃液などのうち、アルキ
ルチオール類又はアリールチオール類などのチオール基
含有化合物を含むものであればいかなる形態のものでも
よい。例えば、実験室内、ドラフトチャンバー内、工場
内、又は各種の装置内などから採取した空気なども試料
として用いることができる。天然ガス又はプロパンガス
にはアルキルチオール類が含有又は添加されており、本
発明の方法により、アルキルチオール類を容易に測定す
ることが可能である。Samples in the field of chemical research or the chemical industry include, for example, thiols such as alkyl thiols or aryl thiols among reagents, reaction solutions, reaction intermediates, products, and waste solutions used in chemical synthesis. Any form may be used as long as it contains a group-containing compound. For example, air collected from a laboratory, a draft chamber, a factory, various devices, or the like can be used as a sample. Alkyl thiols are contained or added to natural gas or propane gas, and alkyl thiols can be easily measured by the method of the present invention.
【００１７】生体試料としては、例えば、血清、血漿、
リンパ液、歯肉溝滲出液、破壊性病変組織又は液（例え
ばリウマチ性病変の関節液、歯槽膿漏組織抽出液、又は
歯周病の歯肉溝滲出液）、胸水、腹水、脳脊髄液、乳腺
異常分泌液、卵巣内貯留液、喀痰、尿、癌、又は癌が疑
われる組織切片などを挙げることができる。生体試料に
は、健康診断における尿や血液などの採取試料、疾病の
診断における各種の採取試料のほか、実験動物から分離
・採取した試料などが含まれる。実験動物とは、医学又
は薬学の分野において実験に用いられるヒト以外の動物
であり、具体的にはマウス、ラット、モルモット、ウサ
ギ、フェレット、ネコ、イヌ、サル、チンパンジー、ヤ
ギ、ヒツジ、ウシ、ウマなどを挙げることができる。生
体試料には、哺乳類動物から分離された細胞や組織の培
養物、及びその培養上清なども包含される。Examples of the biological sample include serum, plasma,
Lymph fluid, gingival crevicular fluid, destructive lesion tissue or fluid (eg, rheumatic lesion joint fluid, alveolar pyorrhea extract, or periodontal disease gingival crevicular fluid), pleural effusion, ascites, cerebrospinal fluid, mammary gland abnormalities Examples include secretions, ovarian pools, sputum, urine, cancer, and tissue sections suspected of having cancer. Biological samples include collected samples such as urine and blood in health diagnosis, various collected samples in disease diagnosis, and samples separated and collected from experimental animals. Experimental animals are non-human animals used for experiments in the field of medicine or pharmacy, and specifically, mice, rats, guinea pigs, rabbits, ferrets, cats, dogs, monkeys, chimpanzees, goats, sheep, cows, Horses and the like can be mentioned. Biological samples also include cultures of cells and tissues isolated from mammals and culture supernatants thereof.
【００１８】生体試料が組織の場合には、薄切又は細か
く裁断してそのまま用いるか、ホモジナイズした後、水
又は緩衝液などを用いて成分を抽出するか、あるいは圧
縮して組織液を滲出させてもよい。リウマチ性関節炎の
患者から採取した滑膜液を生体試料として用いる場合に
は、滑膜液約 5〜100μL、好ましくは20μL程度を用い
ればよい。歯周病の歯肉溝滲出液を試料として用いる場
合には、歯肉溝内に濾紙を挿入して約 5〜10μL 程度の
歯肉溝滲出液を採取し、該濾紙を本発明の分散液に浸漬
する方法を採用することができる。歯肉溝滲出液の採取
後、必要に応じて蒸留水や適宜の緩衝液（例えば、50 m
M Tris-HCl, pH 7.5, 10 mM CaCl2, 0.2 MNaClなど）を
用いて濾紙から歯肉溝滲出液を抽出し、抽出液を本発明
の分散液に滴下してもよい。When the biological sample is a tissue, it is sliced or cut into small pieces and used as it is, or after homogenization, components are extracted using water or a buffer solution, or compressed to exude tissue fluid. Is also good. When using a synovial fluid collected from a patient with rheumatoid arthritis as a biological sample, about 5 to 100 μL, preferably about 20 μL, of the synovial fluid may be used. When using a gingival crevicular fluid for periodontal disease as a sample, insert a filter paper into the gingival sulcus, collect about 5 to 10 μL of gingival crevicular fluid, and immerse the filter paper in the dispersion of the present invention. A method can be adopted. After collecting the gingival crevicular fluid, if necessary, use distilled water or an appropriate buffer (eg, 50 m
The gingival crevicular fluid may be extracted from the filter paper using M Tris-HCl, pH 7.5, 10 mM CaCl 2 , 0.2 M NaCl, or the like, and the extract may be added dropwise to the dispersion of the present invention.
【００１９】本発明の分散液の溶媒は特に限定されない
が、例えば、水、メタノール、エタノール、イソプロピ
ルアルコール、エチレングリコール、グリセリン、ポリ
エチレングリコール、ジオキサン、N-メチルピロリド
ン、ジメチルスホキシド、ジメチルホルムアミド、ジメ
チルアセトアミド、又はそれらの混合溶媒などを用いる
ことができる。水を溶媒に用いる場合のpHについては特
に限定されないが、pH5〜8程度が好ましい。測定対象の
チオール基含有化合物の種類によって最大の状態変化を
与える至適pHが異なる場合があるが、当業者は適宜のpH
を容易に選択することが可能である。金属微粒子をコロ
イド状態で使用するときの懸濁液の調製方法は特に限定
はないが、例えば写真用フイルムの技術分野などにおい
て汎用されている分散方法などを適宜採用することが可
能である。The solvent of the dispersion of the present invention is not particularly limited. For example, water, methanol, ethanol, isopropyl alcohol, ethylene glycol, glycerin, polyethylene glycol, dioxane, N-methylpyrrolidone, dimethyl sulfoxide, dimethyl formamide, dimethyl Acetamide or a mixed solvent thereof can be used. The pH when water is used as the solvent is not particularly limited, but is preferably about 5 to 8. Depending on the type of the thiol group-containing compound to be measured, the optimal pH at which the maximum state change occurs may differ, but those skilled in the art
Can be easily selected. The method of preparing the suspension when the metal fine particles are used in a colloidal state is not particularly limited, and for example, a dispersion method generally used in the technical field of photographic films and the like can be appropriately adopted.
【００２０】金属微粒子としてコロイド銀を用いる場合
について説明すると、例えば、ハロゲン化銀カラー写真
感光材料の分野において、コロイド銀は通常イエローフ
ィルター用としての黄色コロイド銀とアンチハレーショ
ン用の黒色コロイド銀が一般的に用いられているので、
本発明にはこれらのコロイド銀を用いることができる。
また、これらに加えて、橙褐色や褐灰色のコロイド銀で
あってもよい。これらのうち、最大吸収波長が400nm か
ら500nm の黄色のコロイド銀を用いることが特に好まし
い。The case where colloidal silver is used as metal fine particles will be described. For example, in the field of silver halide color photographic light-sensitive materials, colloidal silver is generally yellow colloidal silver for yellow filters and black colloidal silver for antihalation. Since it is used
In the present invention, these colloidal silvers can be used.
In addition, in addition to these, orange-brown or brown-gray colloidal silver may be used. Of these, it is particularly preferable to use yellow colloidal silver having a maximum absorption wavelength of 400 to 500 nm.
【００２１】コロイド銀の調製方法としては、従来から
知られている方法、例えば、米国特許第2,688,601号明
細書に開示されたゼラチン溶液中で可溶性銀塩をハイド
ロキノンによって還元する方法、ドイツ特許第1,096,19
3号明細書に記載されている難溶性銀塩をヒドラジンに
よって還元する方法、米国特許第2,921,914号明細書に
記載されているようにタンニン酸により銀に還元する方
法、特開平5-134358号公報に記載されているように無電
解メッキによって銀粒子を形成する方法などを用いるこ
とができる。また、Wiley & Sons, New York, 1933年発
行、Weiser著の Colloidal Elements に記載されたCare
y Leのデキストリン還元法による黄色コロイド銀の調製
方法を用いてもよい。As a method for preparing colloidal silver, a conventionally known method, for example, a method of reducing a soluble silver salt with hydroquinone in a gelatin solution disclosed in US Pat. No. 2,688,601, German Patent 1,096 , 19
3, a method of reducing a poorly soluble silver salt with hydrazine, a method of reducing silver with tannic acid as described in U.S. Pat. As described in the above, a method of forming silver particles by electroless plating can be used. In addition, Care is described in Colloidal Elements by Weiser, published in Wiley & Sons, New York, 1933.
A method of preparing yellow colloidal silver by the dextrin reduction method of y Le may be used.
【００２２】本発明の分散液を製造する際に、上記に説
明した成分に加えて、染料、顔料、防腐剤、分散剤、安
定化剤などの成分を適宜配合してもよい。このような成
分は、チオール基含有化合物と金属微粒子との相互作用
に実質的に影響を与えないものであれば特に限定され
ず、適宜のものを選択して用いることが可能である。染
料としては、例えば、特開平6-102624号公報に記載され
た染料（第９頁 I-1より第47頁63までの化学構造式によ
り具体的に示された染料）を用いることができ、染料の
添加方法は、例えば、特開平5-313307号公報に記載され
た方法（第11頁段落番号[0037]から第12頁段落番号[004
4]までに具体的に説明された方法）を採用することがで
きる。本発明の分散液の保存方法は特に限定されない
が、例えば5〜15℃程度の温度で保存することが好まし
い。保存容器についても特に限定はなく、検査試薬用の
密封容器又は密閉容器、あるいは写真用乳剤及び処理剤
用の容器、遮光容器などを好ましく使用できる。In producing the dispersion of the present invention, components such as a dye, a pigment, a preservative, a dispersant, and a stabilizer may be appropriately blended in addition to the components described above. Such a component is not particularly limited as long as it does not substantially affect the interaction between the thiol group-containing compound and the metal fine particles, and an appropriate component can be selected and used. As the dye, for example, a dye described in JP-A-6-102624 (a dye specifically shown by the chemical structural formulas from page 9, I-1 to page 47, 63) can be used. The method of adding the dye is, for example, the method described in JP-A-5-313307 (page 11, paragraph [0037] to page 12, paragraph [004]
4]) can be employed. The method for storing the dispersion of the present invention is not particularly limited, but is preferably stored, for example, at a temperature of about 5 to 15 ° C. The storage container is also not particularly limited, and a sealed container or a sealed container for a test reagent, a container for a photographic emulsion and a processing agent, a light-shielding container, and the like can be preferably used.
【００２３】本発明の方法の実施の形態は特に限定され
ないが、例えば、本発明の分散液と試料とを接触させた
後、室温から80℃の範囲で、好ましくは37℃で 1分間〜
24時間、好ましくは 5分間〜3時間、さらに好ましくは5
分間〜1時間程度インキュベートすればよい。試料中に
チオール基含有化合物が含まれる場合には溶液の金属微
粒子との間で相互作用が生じ、溶液内に色の変化又は金
属微粒子の凝集が惹起される。色の変化と金属微粒子の
凝集が同時に惹起される場合もあるが、それらの変化の
うちのいずれか、又は両方を検出することができる。酵
素を含む溶液試料を用いる場合には、酵素作用による反
応物が検出される場合もある。Although the embodiment of the method of the present invention is not particularly limited, for example, after contacting the dispersion of the present invention with a sample, the temperature ranges from room temperature to 80 ° C., preferably at 37 ° C. for 1 minute to 1 hour.
24 hours, preferably 5 minutes to 3 hours, more preferably 5 hours
The incubation may be for about 1 minute to 1 hour. When the sample contains a thiol group-containing compound, an interaction occurs with the metal fine particles in the solution, causing a change in color or aggregation of the metal fine particles in the solution. In some cases, a change in color and agglomeration of the fine metal particles are caused at the same time, but either or both of the changes can be detected. When a solution sample containing an enzyme is used, a reaction product due to the action of the enzyme may be detected in some cases.
【００２４】[0024]
【実施例】以下、本発明を実施例によりさらに具体的に
説明するが、本発明の範囲はこれらの実施例に限定され
ることはない。 例１：チオール基含有化合物の測定用分散液の製造 (a) コロイド銀乳剤の作成 pHを11.0に調整したデキストリンを18 g含む水溶液 700
mL に硝酸銀 17 g を含む水溶液を添加し、ゼラチンを
添加して30℃で公知のフローキュレーション法により水
洗し、さらにゼラチンを加えて60℃に加熱することによ
り作成した。得られたコロイド銀乳剤は溶液状態で黄色
であった。乳剤は冷蔵保存した。 (b)分散液の作成 コロイド銀乳剤 1 gを純水100 mLに40℃で希釈・分散し
て分散液を得た。この溶液の銀濃度は1.9 mmol/Lであっ
た。なお、必要に応じて界面活性剤を使用した。EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described more specifically with reference to Examples, but the scope of the present invention is not limited to these Examples. Example 1: Preparation of dispersion for measurement of thiol group-containing compound (a) Preparation of colloidal silver emulsion An aqueous solution containing 18 g of dextrin adjusted to pH 11.0 700
An aqueous solution containing 17 g of silver nitrate was added to mL, gelatin was added, washed with water at 30 ° C. by a known flow curation method, gelatin was added, and the mixture was heated to 60 ° C. The obtained colloidal silver emulsion was yellow in solution. The emulsion was stored refrigerated. (b) Preparation of Dispersion A 1 g colloidal silver emulsion was diluted and dispersed in 100 mL of pure water at 40 ° C. to obtain a dispersion. The silver concentration of this solution was 1.9 mmol / L. In addition, a surfactant was used as needed.
【００２５】例２：コロイド銀分散液を用いたチオール
基含有化合物の測定 チオール基含有化合物を含む試料として、エチルメルカ
プタン、フェニルメルカプタン、システイン、グルタチ
オン、メタロチオネインをそれぞれ0.1 mmol/Lから25 m
mol/Lの濃度で含む溶液を用いた。生体試料としては、
乳癌組織の凍結切片、及びU937細胞を培養した上清を用
いた。例１で得た分散液0.9 mLに液体試料0.1 mLを滴下
した。組織試料は適当量を少量の水でホモジナイズし、
上清をコロイド銀分散液と混合した。各試料とコロイド
銀分散液との混合液を密閉できるチューブに入れ、37℃
の水浴中で 10〜60分インキュベートした後、それぞれ
の試料に対して目視による判定又は分光光度計による分
光吸収の測定による判定を行い、色の変化と微粒子の凝
集を評価した。Example 2: Measurement of a thiol group-containing compound using a colloidal silver dispersion As a sample containing a thiol group-containing compound, ethyl mercaptan, phenyl mercaptan, cysteine, glutathione, and metallothionein were each added at 0.1 mmol / L to 25 m.
A solution containing mol / L was used. As a biological sample,
A frozen section of a breast cancer tissue and a supernatant obtained by culturing U937 cells were used. 0.1 mL of a liquid sample was added dropwise to 0.9 mL of the dispersion obtained in Example 1. The tissue sample is homogenized with a small amount of water,
The supernatant was mixed with the colloidal silver dispersion. Place the mixture of each sample and the colloidal silver dispersion in a sealable tube at 37 ° C.
After incubation in a water bath for 10 to 60 minutes, each sample was visually judged or measured by measuring spectral absorption with a spectrophotometer to evaluate color change and aggregation of fine particles.
【００２６】その結果、いずれのサンプルについても目
視で赤色の着色変化が現れた。各チオール類溶液につい
ては濃度が高い程、短時間に強い着色を示した。また、
510 nmにおける吸光度を分光光度計で評価したところ、
インキュベーション時間が長いほど吸収が強くなり、ま
た濃度依存的に吸収が強くなった。乳癌組織に関して
は、癌部位の試料が強い着色を示したのに対して、周辺
の正常部分ではほとんど着色しなかった。As a result, a red color change was visually observed in all samples. The higher the concentration of each thiol solution, the stronger the coloration in a short time. Also,
When the absorbance at 510 nm was evaluated with a spectrophotometer,
The longer the incubation time, the stronger the absorption, and the higher the concentration-dependent absorption. As for the breast cancer tissue, the sample at the cancer site showed strong coloring, whereas the surrounding normal portion hardly stained.
【００２７】[0027]
【発明の効果】本発明の方法は、液体、固体、又は気体
試料中のチオー基含有化合物を正確かつ簡便に測定する
ことができ、従来の方法に比べて短時間に判定できると
いう特徴がある。The method of the present invention is characterized in that a thio-group-containing compound in a liquid, solid or gas sample can be measured accurately and easily and can be determined in a shorter time than conventional methods. .
Claims (11)
て、下記の工程： (1) 金属微粒子を含む分散液に、チオール基含有化合物
を含む溶液、固体、又は気体試料を接触させる工程；及
び(2) チオール基含有化合物と金属微粒子との相互作用
により生じた上記分散液の状態変化を検出する工程を含
む方法。1. A method for measuring a thiol group-containing compound, the method comprising: (1) contacting a solution, a solid, or a gas sample containing a thiol group-containing compound with a dispersion containing metal fine particles; (2) A method comprising a step of detecting a change in the state of the dispersion caused by the interaction between the thiol group-containing compound and the metal fine particles.
１に記載の方法。2. The method according to claim 1, wherein the metal fine particles are in a goloid state.
族、第１１族、及び第１２族からなる群から選ばれる金
属を含む請求項１又は２に記載の方法。3. Group 8 of the periodic table of elements, Group 9 and 10
The method according to claim 1, comprising a metal selected from the group consisting of Group 11, Group 11, and Group 12.
第５周期、第６周期からなる群から選ばれる金属を含む
請求項1ないし３のいずれか１項に記載の方法。4. The method according to claim 1, wherein the metal fine particles are in the fourth period of the periodic table.
4. The method according to claim 1, comprising a metal selected from the group consisting of a fifth cycle and a sixth cycle.
なる群から選ばれる金属を含む請求項１又は２に記載の
方法。5. The method according to claim 1, wherein the metal fine particles include a metal selected from the group consisting of gold, silver, copper, and platinum.
5 μm である請求項１ないし５のいずれか１項に記載の
方法。6. The metal fine particles having an average particle size of 0.001 μm to 0.1 μm.
The method according to any one of claims 1 to 5, wherein the thickness is 5 µm.
化及び／又は金属微粒子の凝集を検出する請求項１ない
し６のいずれか１項に記載の方法。7. The method according to claim 1, wherein a change in color of the dispersion and / or aggregation of metal fine particles are detected as a change in the state of the dispersion.
ール類、アリールチオール類、アミノ酸及びその誘導
体、及び蛋白質からなる群から選ばれる物質である請求
項１ないし７のいずれか１項に記載の方法。8. The method according to claim 1, wherein the thiol group-containing compound is a substance selected from the group consisting of alkylthiols, arylthiols, amino acids and derivatives thereof, and proteins.
って、金属微粒子を含む分散液を含む試薬。9. A reagent for measuring a thiol group-containing compound, the reagent comprising a dispersion containing fine metal particles.
より状態変化を生じる請求項９に記載の試薬。10. The reagent according to claim 9, wherein a state change is caused by interaction with the thiol group-containing compound.
載の方法に使用するための金属微粒子を含む分散液。11. A dispersion containing fine metal particles for use in the method according to claim 1. Description:
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7601199A JP2000266753A (en) | 1999-03-19 | 1999-03-19 | Measuring method for thiol-group-containing compound |
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| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP7601199A JP2000266753A (en) | 1999-03-19 | 1999-03-19 | Measuring method for thiol-group-containing compound |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
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| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
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| JP7601199A Pending JP2000266753A (en) | 1999-03-19 | 1999-03-19 | Measuring method for thiol-group-containing compound |
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| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000266753A (en) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6773926B1 (en) * | 2000-09-25 | 2004-08-10 | California Institute Of Technology | Nanoparticle-based sensors for detecting analytes in fluids |
| JP2015190886A (en) * | 2014-03-28 | 2015-11-02 | 国立大学法人山梨大学 | Method for detecting catecholamines using metal fine particle formation process |
-
1999
- 1999-03-19 JP JP7601199A patent/JP2000266753A/en active Pending
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6773926B1 (en) * | 2000-09-25 | 2004-08-10 | California Institute Of Technology | Nanoparticle-based sensors for detecting analytes in fluids |
| JP2015190886A (en) * | 2014-03-28 | 2015-11-02 | 国立大学法人山梨大学 | Method for detecting catecholamines using metal fine particle formation process |
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