JP2000239303A - Product formed in sheet shape - Google Patents
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Abstract
Description
【０００１】[0001]
【発明の属する技術分野】本発明は、粒状のヒアルロン
酸ゲルから成形するシート状成形物、及びそれを含有す
る医用材料に関する。BACKGROUND OF THE INVENTION 1. Field of the Invention The present invention relates to a sheet-like molded product formed from granular hyaluronic acid gel and a medical material containing the same.
【０００２】[0002]
【従来の技術】ヒアルロン酸は、β−Ｄ−Ｎ−アセチル
グルコサミンとβ−Ｄ−グルクロン酸が交互に結合した
直鎖状の高分子多糖である。ヒアルロン酸は哺乳動物の
結合組織に分布するほか、ニワトリのとさか、連鎖球菌
の夾膜などにも存在が知られている。ニワトリのとさ
か、臍帯等が抽出材料として用いられているほか、連鎖
球菌の培養物からも精製物が調整されている。ヒアルロ
ン酸は、種及び臓器特異性をもたず、生体に移植または
注入した場合であっても優れた生体適合性を示すことが
知られている。2. Description of the Related Art Hyaluronic acid is a linear high molecular polysaccharide in which β-DN-acetylglucosamine and β-D-glucuronic acid are alternately bonded. Hyaluronic acid is known to be distributed in connective tissues of mammals and also present in chicken crusts, capsular streptococci, and the like. In addition to using chicken crest, umbilical cord and the like as an extraction material, purified products are also prepared from streptococcal cultures. It is known that hyaluronic acid has no species and organ specificity and exhibits excellent biocompatibility even when transplanted or injected into a living body.
【０００３】さらに、生体に適用する場合のヒアルロン
酸自体の易水溶性に由来する短所、例えば、生体内滞留
時間が比較的短いことなどから、多種多様なヒアルロン
酸の化学修飾物も提案されている（米国特許第４，５８
２，８６５号明細書、特公平６−３７５７５号公報、特
開平７−９７４０１号公報、特開昭６０−１３０６０１
号公報、特開平３−１０５００３号、欧州特許０３４１
７４５Ａ１、特開平６−７３１０３号公報参照）。[0003] Further, a variety of chemical modifications of hyaluronic acid have been proposed because of its drawbacks derived from the water solubility of hyaluronic acid itself when applied to living organisms, for example, the relatively short residence time in living organisms. (U.S. Pat. No. 4,582)
2,865, JP-B-6-37575, JP-A-7-97401, JP-A-60-130601
JP, JP-A-3-105003, European Patent 0341
745A1, see JP-A-6-73103).
【０００４】ヒアルロン酸は、極めて高い粘ちょう性と
保湿性を有し、本質的に抗原性が無く生体適合性が高い
ため、変形性膝関節症の治療薬や眼科手術補助剤等に用
いられている。また、ヒアルロン酸溶液そのものを手術
後の癒着防止材として用いることも検討されているが、
生体内での貯留性が比較的短いので効果が弱く、水溶性
のため短時間で創面から拡散・流動してしまう（Journa
l of Gynecologic Surgery vol.7 No.2 97-101(1991)。[0004] Hyaluronic acid has extremely high viscosity and moisturizing properties, is essentially non-antigenic, and has high biocompatibility. Therefore, it is used as a remedy for osteoarthritis of the knee and an auxiliary agent for ophthalmic surgery. ing. In addition, the use of a hyaluronic acid solution itself as an anti-adhesion material after surgery has been studied,
The effect is weak because of its relatively short retention in the living body, and it diffuses and flows from the wound surface in a short time due to its water solubility (Journa
l of Gynecologic Surgery vol.7 No.2 97-101 (1991).
【０００５】なんら化学的架橋剤や化学的修飾剤を使用
することなく、またカチオン性の高分子と複合体化する
ことなく、生体適合性医用材料として使用可能な、生体
内滞留時間が長いヒアルロン酸ゲルがヒアルロン酸の水
溶液を特定のｐＨに調整し、該水溶液を凍結し、次いで
解凍することを少なくとも１回行うことによって得られ
ることを見出し、さらに、こうして得られたヒアルロン
酸ゲルの水中での溶解速度が極めて遅いことを見出し
た。A hyaluronic acid having a long residence time in a living body that can be used as a biocompatible medical material without using any chemical crosslinking agent or chemical modifying agent and without forming a complex with a cationic polymer. The acid gel was found to be obtained by adjusting the aqueous solution of hyaluronic acid to a specific pH, freezing and then thawing the aqueous solution at least once, and furthermore, in the water of the hyaluronic acid gel thus obtained. Was found to have a very slow dissolution rate.
【０００６】ヒアルロン酸ゲルは、医用材料として理想
的な生体適合性、貯留性を有することを見出し、特に癒
着防止材として理想的な生体適合性、貯留性を有し、術
後癒着を顕著に抑制する。[0006] Hyaluronic acid gel has been found to have ideal biocompatibility and storage properties as a medical material, and particularly has ideal biocompatibility and storage properties as an anti-adhesion material, and has a remarkable effect on postoperative adhesion. Suppress.
【０００７】しかしながら、これらシート状成形物を製
造する際、粘性の高いヒアルロン酸酸性溶液をそのまま
容器に展開すると、液の粘性が均一な展開を妨げシート
にむら、しわ等を生じるという問題があった。However, when these sheet-like molded articles are manufactured, if the highly viscous hyaluronic acid acidic solution is directly spread in a container, there is a problem that the viscosity of the liquid prevents uniform spread of the solution, causing unevenness and wrinkles on the sheet. Was.
【０００８】[0008]
【発明が解決しようとする課題】本発明者らは、ゲル化
したヒアルロン酸を破砕処理して得られた粒子、または
低濃度ヒアルロン酸性水溶液を凍結した際に得られるヒ
アルロン酸ゲル粒子を調製し、中性溶液に懸濁すること
により工程液の粘性を下げ、むら、しわ等が無く均一
で、異物や環境菌の混入を防止した、シート成形物を得
ることができ、更に、このシート成形物が医用材料とし
て好適であることを見出し、本発明を完成するに至っ
た。SUMMARY OF THE INVENTION The present inventors prepared particles obtained by crushing gelled hyaluronic acid or gel particles obtained by freezing a low-concentration aqueous solution of hyaluronic acid. By suspending in a neutral solution, the viscosity of the process liquid is reduced, and a sheet molded product that is uniform without unevenness, wrinkles, etc., and is prevented from being contaminated with foreign substances and environmental bacteria can be obtained. The object was found to be suitable as a medical material, and the present invention was completed.
【０００９】[0009]
【課題を解決するための手段】即ち、本発明は、（１）
粒状のヒアルロン酸ゲルから成形することを特徴とする
シート状成形物、（２）ヒアルロン酸ゲルの平均粒径が
１０〜１０，０００μｍであることを特徴とする（１）
記載のシート状成形物、（３）ヒアルロン酸単独で成形
されたゲルの粒子、又はゲルの破砕物をシート化するこ
とを特徴とする（１）又は（２）記載のシート状成形
物、（４）（１）〜（３）のいずれか１項に記載のシー
ト状成形物を含有することを特徴とする医用材料であ
る。That is, the present invention provides (1)
(2) a sheet-shaped molded article characterized by being formed from granular hyaluronic acid gel; (2) an average particle diameter of the hyaluronic acid gel is 10 to 10,000 µm;
(3) The sheet-like molded product according to (1) or (2), wherein the gel particles molded with hyaluronic acid alone or the crushed product of gel are formed into a sheet. 4) A medical material containing the sheet-shaped molded product according to any one of (1) to (3).
【００１０】[0010]
【発明の実施の形態】以下、本発明を詳細に説明する。
本発明でいうヒアルロン酸ゲルとは、三次元網目構造を
もつ高分子及びその膨潤体である。三次元網目構造はヒ
アルロン酸の架橋構造によって形成されている。BEST MODE FOR CARRYING OUT THE INVENTION Hereinafter, the present invention will be described in detail.
The hyaluronic acid gel referred to in the present invention is a polymer having a three-dimensional network structure and a swollen body thereof. The three-dimensional network structure is formed by a cross-linked structure of hyaluronic acid.
【００１１】本発明でいうヒアルロン酸ゲルは、ヒアル
ロン酸単独で形成されるものも含む。このうち、ここで
いうヒアルロン酸単独とは、ヒアルロン酸以外に化学的
架橋剤や化学的修飾剤を使用しないこと、また、カチオ
ン性の高分子と複合体化しないことであり、自己架橋を
意味するものである。化学的架橋剤や化学的修飾剤を使
用することにより、それに起因する生体適合性への悪影
響が考えられるのでヒアルロン酸単独からなるゲルの方
がより好ましい。[0011] The hyaluronic acid gel referred to in the present invention also includes a gel formed of hyaluronic acid alone. Of these, hyaluronic acid alone here means that no chemical crosslinking agent or chemical modifier is used other than hyaluronic acid, and that it is not complexed with a cationic polymer, meaning self-crosslinking. Is what you do. The use of a chemical cross-linking agent or a chemical modifying agent may adversely affect the biocompatibility due to the use of the chemical cross-linking agent or the chemical modifying agent.
【００１２】本発明でいうヒアルロン酸ゲルのうち、ヒ
アルロン酸単独で形成されるものは、中性水溶液に難溶
性であることを特徴とし、このヒアルロン酸ゲルを中性
水溶液中に投入すると、ゲル化していないヒアルロン酸
と比較して有意の難溶性を示す。難溶性は、中性の３７
℃の水溶液中でのゲルの形態の保持とゲルの溶解率で規
定する。このヒアルロン酸単独で形成されたゲルは、ア
ルカリ性水溶液中、例えばｐＨ１１のアルカリ性緩衝水
溶液中に投入すると速やかに溶解する特徴も有する。[0012] Among the hyaluronic acid gels of the present invention, those formed solely of hyaluronic acid are characterized in that they are poorly soluble in neutral aqueous solutions. It shows significant poor solubility compared to unconverted hyaluronic acid. Poorly soluble, neutral 37
It is defined by the retention of the gel form in an aqueous solution at a temperature of ° C. and the dissolution rate of the gel. The gel formed of hyaluronic acid alone also has a feature that it is rapidly dissolved when poured into an alkaline aqueous solution, for example, an alkaline buffered aqueous solution having a pH of 11.
【００１３】本発明でいうヒアルロン酸ゲルのうち、ヒ
アルロン酸単独で形成されるゲルは、ヒアルロン酸の促
進酸加水分解反応条件下でヒアルロン酸ゲルを処理する
ことで分解、可溶化することができる。可溶化されたヒ
アルロン酸が架橋構造を保持している場合、分岐点を有
するヒアルロン酸として高分子溶液論的に直鎖状のヒア
ルロン酸と区別することができる。Among the hyaluronic acid gels referred to in the present invention, the gel formed by hyaluronic acid alone can be decomposed and solubilized by treating the hyaluronic acid gel under the conditions of the accelerated acid hydrolysis reaction of hyaluronic acid. . When the solubilized hyaluronic acid has a crosslinked structure, it can be distinguished from a linear hyaluronic acid in terms of polymer solution as a hyaluronic acid having a branch point.
【００１４】ヒアルロン酸の促進酸加水分解反応条件と
しては、水溶液のｐＨ１．５、温度６０℃が適当であ
る。ヒアルロン酸のグリコシド結合の加水分解による主
鎖切断反応が、中性の水溶液中と比較して、酸性やアル
カリ性の水溶液中で著しく促進される。更に酸加水分解
反応は、反応温度が高い方が促進される。Suitable conditions for the accelerated acid hydrolysis reaction of hyaluronic acid are pH 1.5 of the aqueous solution and a temperature of 60 ° C. The main chain scission reaction by hydrolysis of the glycosidic bond of hyaluronic acid is remarkably promoted in an acidic or alkaline aqueous solution as compared with a neutral aqueous solution. Further, the acid hydrolysis reaction is promoted at a higher reaction temperature.
【００１５】本発明ではＧＰＣ−ＭＡＬＬＳ法を用い、
ＧＰＣで分離された分子量フラクションの分子量と分岐
度をオンラインで連続的に測定した。本発明では、同一
溶出体積のフラクションの可溶化されたヒアルロン酸の
分子量と対照となる直鎖状ヒアルロン酸の分子量を比較
して分岐度を計算する溶出体積法を使って分岐度の測定
を行った。分岐度は可溶化されたヒアルロン酸の高分子
鎖１コ当たりに存在する分岐点の数であり、可溶化され
たヒアルロン酸の分子量に対してプロットされる。In the present invention, the GPC-MALLS method is used,
The molecular weight and the degree of branching of the molecular weight fraction separated by GPC were continuously measured online. In the present invention, the degree of branching is measured by using the elution volume method of calculating the degree of branching by comparing the molecular weight of the solubilized hyaluronic acid of the fraction having the same elution volume with the molecular weight of the linear hyaluronic acid as a control. Was. The degree of branching is the number of branch points present per one polymer chain of solubilized hyaluronic acid, and is plotted against the molecular weight of solubilized hyaluronic acid.
【００１６】可溶化されたヒアルロン酸は、ＧＰＣ溶媒
で希釈して濃度を調製し、０．２μｍのメンブランフィ
ルターでろ過した後測定に供した。本発明でいうヒアル
ロン酸ゲルのうち、ヒアルロン酸単独で形成されるゲル
中に、ヒアルロン酸の促進酸加水分解条件下でも安定に
存在する架橋構造がある場合、可溶化されたヒアルロン
酸に分岐構造が高分子溶液論的に確認される。本発明で
いうヒアルロン酸ゲルのうち、ヒアルロン酸単独で形成
されるゲルの分岐度は、０．５以上である。The solubilized hyaluronic acid was diluted with a GPC solvent to adjust the concentration, filtered through a 0.2 μm membrane filter, and used for measurement. Among the hyaluronic acid gels referred to in the present invention, when a gel formed of hyaluronic acid alone has a cross-linking structure that is stably present even under conditions of accelerated acid hydrolysis of hyaluronic acid, the solubilized hyaluronic acid has a branched structure. Is confirmed by polymer solution theory. Among the hyaluronic acid gels referred to in the present invention, the degree of branching of the gel formed by hyaluronic acid alone is 0.5 or more.
【００１７】本発明に用いられるヒアルロン酸は、動物
組織から抽出したものでも、また発酵法で製造したもの
でもその起源を問うことなく使用できる。発酵法で使用
する菌株は自然界から分離されるストレプトコッカス属
等のヒアルロン酸生産能を有する微生物、又は特開昭６
３−１２３３９２号公報に記載したストレプトコッカス
・エクイＦＭ−１００（微工研菌寄第9027号) 、特開平
２−２３４６８９号公報に記載したストレプトコッカス
・エクイＦＭ−３００（微工研菌寄第2319号) のような
高収率で安定にヒアルロン酸を生産する変異株が望まし
い。上記の変異株を用いて培養、精製されたものが用い
られる。The hyaluronic acid used in the present invention can be used regardless of its origin, whether it is extracted from animal tissues or produced by fermentation. The strain used in the fermentation method is a microorganism having hyaluronic acid-producing ability, such as Streptococcus sp.
No. 3-123392, Streptococcus equi FM-100 (Microtechnical Laboratories No. 9027), and Streptococcus equi FM-300 described in Japanese Patent Application Laid-Open No. Hei 2-234689 (Microtechnical Labs No. 2319) )), A mutant which stably produces hyaluronic acid in high yield is desirable. Those cultured and purified using the above mutant strains are used.
【００１８】本発明に用いられるヒアルロン酸の分子量
は、約１×１０5 〜約１×１０7 ダルトンの範囲内のも
のが好ましい。また、上記範囲内の分子量をもつもので
あれば、より高分子量のものから、加水分解処理等をし
て得たものでも同様に好ましく使用できる。なお、本発
明にいうヒアルロン酸は、そのアルカリ金属塩、例え
ば、ナトリウム、カリウム、リチウムの塩をも包含する
概念で使用される。The molecular weight of the hyaluronic acid used in the present invention is preferably in the range of about 1 × 10 5 to about 1 × 10 7 daltons. In addition, as long as it has a molecular weight within the above range, those obtained by subjecting them to hydrolysis treatment or the like from those having a higher molecular weight can also be preferably used. It should be noted that the hyaluronic acid according to the present invention is used in a concept that also includes alkali metal salts thereof, for example, sodium, potassium and lithium salts.
【００１９】ヒアルロン酸の水溶液は、ヒアルロン酸の
粉末と水を混合し、撹拌して得られる。また、酸で酸性
に調製した水にヒアルロン酸を投入する方法によっても
得られる。このヒアルロン酸の濃度は５．０重量％以下
が水溶液の処理上好都合である。また、ヒアルロン酸の
水溶液のｐＨを調整するために使用する酸は、ｐＨ２．
０以下に調整できる酸であれば、いずれの酸も使用する
ことができる。酸の使用量を低減するために、好ましく
は強酸、例えば、硝酸、塩酸、硫酸等を使用することが
望ましい。The aqueous solution of hyaluronic acid is obtained by mixing hyaluronic acid powder and water and stirring. Further, it can also be obtained by a method in which hyaluronic acid is charged into water prepared with an acid. The concentration of hyaluronic acid of 5.0% by weight or less is convenient for treating the aqueous solution. The acid used to adjust the pH of the aqueous solution of hyaluronic acid is pH 2.
Any acid can be used as long as it can be adjusted to 0 or less. In order to reduce the amount of acid used, it is desirable to use a strong acid, for example, nitric acid, hydrochloric acid, sulfuric acid and the like.
【００２０】本発明の粒状のヒアルロン酸ゲルから成形
されるシート状成形物は、その使用目的に応じて、風
乾、減圧乾燥あるいは凍結乾燥等の処理を経た乾燥状態
で医用材料として供される。またガンマー線、電子線、
プラズマ、光パルス、エチレンオキサイドガス、過酸化
水素ガス等による滅菌処理後も、形態等に変化のない好
適な医用材料が得られる。The sheet-like molded product formed from the granular hyaluronic acid gel of the present invention is provided as a medical material in a dry state after being subjected to a treatment such as air drying, reduced pressure drying or freeze drying, depending on the purpose of use. Gamma rays, electron beams,
Even after sterilization treatment with plasma, light pulse, ethylene oxide gas, hydrogen peroxide gas, or the like, a suitable medical material having no change in form or the like can be obtained.
【００２１】粒状のヒアルロン酸ゲルには、ヒアルロン
酸のゲルを破砕して得られる粒状ヒアルロン酸ゲル、又
は低濃度ヒアルロン酸酸性水溶液を凍結して得られる粒
状ヒアルロン酸ゲル、等があるがこれらに限定するもの
ではない。Examples of the granular hyaluronic acid gel include a granular hyaluronic acid gel obtained by crushing a hyaluronic acid gel and a granular hyaluronic acid gel obtained by freezing a low-concentration aqueous solution of hyaluronic acid. It is not limited.
【００２２】本発明に用いられるヒアルロン酸のゲルを
破砕することにより得られる粒状ヒアルロン酸ゲルの製
造方法について説明する。ヒアルロン酸の水溶液は、ヒ
アルロン酸の粉末と水を混合し撹拌して得られる。ま
た、酸で酸性に調製した水にヒアルロン酸を投入する方
法によっても得られる。ヒアルロン酸の水溶液のｐＨは
０．５〜２．０に調整する。A method for producing a granular hyaluronic acid gel obtained by crushing the hyaluronic acid gel used in the present invention will be described. The aqueous solution of hyaluronic acid is obtained by mixing and stirring the powder of hyaluronic acid and water. Further, it can also be obtained by a method in which hyaluronic acid is charged into water prepared with an acid. The pH of the aqueous solution of hyaluronic acid is adjusted to 0.5 to 2.0.
【００２３】ヒアルロン酸酸性水溶液の凍結は任意の容
器に注入した後、−３０℃〜−１０℃の温度で行う。凍
結は底面から冷凍する方法、空冷方式による凍結いずれ
の方法によってもよい。４時間以上凍結した後、解凍す
ることによりヒアルロン酸ゲルが得られるが、短時間の
凍結の場合、ゲル化率の低いヒアルロン酸ゲルが、長時
間の凍結の場合、ゲル化率の高いヒアルロン酸ゲルが得
られる。いずれも粒状ヒアルロン酸として破砕、シート
化処理することにより好適なシート状成形物が製造でき
る。The acidic aqueous solution of hyaluronic acid is frozen at a temperature of -30 ° C to -10 ° C after being poured into an arbitrary container. Freezing may be performed by a method of freezing from the bottom surface or a method of freezing by air cooling. Hyaluronic acid gel can be obtained by freezing for more than 4 hours and then thawing. Hyaluronic acid gel with low gelling rate is obtained in the case of freezing for a short time, and hyaluronic acid gel with high gelling rate is obtained in the case of freezing for a long time. A gel is obtained. In any case, a suitable sheet-like molded product can be produced by crushing and forming a sheet into granular hyaluronic acid.
【００２４】ヒアルロン酸ゲルの破砕は、目的とする破
砕粒度によって下記の粉砕機が選択されるる。圧縮粉砕
方式の粗砕型（ブレーキ、ドッジ、シングル、トッグル
ジョークラッシャー）、旋動型（ジャイレトリ、コー
ン、ハイドロコーンクラッシャー）、回転型（ロールク
ラッシャー、シングルロールクラッシャー、ディスクク
ラッシャー）。衝撃圧縮粉砕方式のひき臼型（スタンプ
ミル）、ハンマー型（ハンマーミル、インパクトクラッ
シャー、インペラーブレーカー、レイモンド垂直ミル、
チタンミル、ノボロータ、ミクロンミル、ディスインテ
グレーター、ディスメンブレーター）、流体エネルギー
型（ジェットミル、ジェットパルペライザ、ミクロナイ
ザー、リダクショナイザ噴射式粉砕機、エヤーミル）、
回転円筒型（ボール、チューブ、コンパートメント、ロ
ッド、コニカル、トリコン、ヒルデブランドミル）。せ
ん断粉砕方式の回転型（カッティングミル、せん断ロー
ルミル、ユーヒーミル）。摩擦粉砕方式の回転型（ひき
臼、パンミル、アトリションミル、エージランナー）、
旋動型（スクリュークラッシャー、塔式摩砕機、サイド
グライダー）、遠心力型（遠心ローラーミル、遠心ボー
ルミル）、回転円筒型（リングローラーミル、高速ボー
ルミル、低速ボールミル、ハイスイングボールミル、振
動ボールミル）、湿式コロイドミル型（プレミヤミル、
シャロッテミル）および超音波破砕方式等を用いるが、
破砕可能なものであればこれらに限定されない。For the crushing of the hyaluronic acid gel, the following crusher is selected depending on the desired crushing particle size. Compression crushing type crushing type (brake, dodge, single, toggle jaw crusher), swiveling type (gyretri, cone, hydro cone crusher), rotary type (roll crusher, single roll crusher, disk crusher). Milling mill (stamp mill), hammer mill (hammer mill, impact crusher, impeller breaker, raymond vertical mill,
Titanium mill, Novo rotor, Micron mill, Disintegrator, Dismembrator), Fluid energy type (Jet mill, Jet pulperizer, Micronizer, Reducerizer crusher, Air mill),
Rotating cylindrical type (ball, tube, compartment, rod, conical, tricon, Hildebrand mill). Rotary type of shear pulverization (cutting mill, shear roll mill, U-Hee mill). Rotary type of friction grinding method (mill, pan mill, attrition mill, age runner),
Rotating type (screw crusher, tower mill, side glider), centrifugal force type (centrifugal roller mill, centrifugal ball mill), rotating cylindrical type (ring roller mill, high speed ball mill, low speed ball mill, high swing ball mill, vibrating ball mill), Wet colloid mill type (Premier mill,
Charlotte mill) and ultrasonic crushing method
It is not limited to these as long as it can be crushed.
【００２５】ヒアルロン酸ゲルの平均破砕粒径は１０〜
１０，０００μｍであり、好ましくは５０〜５０００μ
ｍである。１０μｍ未満の場合は、乾燥したシート成形
物に十分な強度を得ることが難しく、１０，０００μｍ
を越える場合は、シートにむらができ、均一なシートが
成形しにくく、好ましくない。そして、以下の操作によ
り均一なシート状成形物が得られる。The average crushed particle size of the hyaluronic acid gel is 10 to
10,000 μm, preferably 50 to 5000 μm
m. If the thickness is less than 10 μm, it is difficult to obtain sufficient strength for the dried sheet molded product, and
If it exceeds, the sheet becomes uneven and it is difficult to form a uniform sheet, which is not preferable. Then, a uniform sheet-like molded product is obtained by the following operation.
【００２６】ヒアルロン酸ゲルを破砕することで得られ
た粒状ヒアルロン酸ゲルを、生理的食塩水に５０ｍＭ濃
度でリン酸緩衝成分を加えて調製したｐＨ７のリン酸緩
衝生理的食塩水で中和した後、注射用水で洗浄する。得
られた粒状ヒアルロン酸の懸濁液を任意の容器に展開し
乾燥することによりシート状成形物が得られる。The granular hyaluronic acid gel obtained by crushing the hyaluronic acid gel was neutralized with a phosphate buffered saline of pH 7 prepared by adding a phosphate buffer component to physiological saline at a concentration of 50 mM. Thereafter, the plate is washed with water for injection. The obtained suspension of granular hyaluronic acid is developed in an arbitrary container and dried to obtain a sheet-like molded product.
【００２７】次に本発明に用いられる、低濃度ヒアルロ
ン酸酸性水溶液を凍結して得られる粒状ヒアルロン酸ゲ
ルの製造方法について説明する。ヒアルロン酸の水溶液
の調製は、破砕により粒状化する方法の時と同様であ
る。Next, a method for producing a granular hyaluronic acid gel obtained by freezing a low-concentration aqueous solution of hyaluronic acid used in the present invention will be described. The preparation of the aqueous solution of hyaluronic acid is the same as in the method of granulation by crushing.
【００２８】ヒアルロン酸濃度は０．００５〜０．５重
量％であり、０．０１〜０．２重量％が好ましい。０．
００５重量％未満ではゲルが成形されず、０．５重量％
を越えると粒状のヒアルロン酸ゲルが得られず、容器形
状に依存したひとかたまりのヒアルロン酸ゲルが得られ
るためである。The concentration of hyaluronic acid is 0.005 to 0.5% by weight, preferably 0.01 to 0.2% by weight. 0.
If less than 005% by weight, the gel is not formed, and
If the ratio exceeds the above range, no granular hyaluronic acid gel can be obtained, and a group of hyaluronic acid gels depending on the container shape can be obtained.
【００２９】次にヒアルロン酸の水溶液のｐＨを０．５
〜２．０に調整する。ヒアルロン酸の水溶液のｐＨは
０．５〜２．０に調整する。使用する酸はｐＨ２．０以
下に調整できる酸であればいずれの酸も使用することが
できる。酸の使用量を低減するために、好ましくは強
酸、例えば、硝酸、塩酸、硫酸等を使用することが好ま
しい。Next, the pH of the aqueous solution of hyaluronic acid is adjusted to 0.5
Adjust to ~ 2.0. The pH of the aqueous solution of hyaluronic acid is adjusted to 0.5 to 2.0. Any acid can be used as long as the pH can be adjusted to 2.0 or less. In order to reduce the amount of acid used, it is preferable to use a strong acid, for example, nitric acid, hydrochloric acid, sulfuric acid and the like.
【００３０】この低濃度ヒアルロン酸酸性水溶液の凍結
は、任意の容器に注入した後、−３０℃〜−１０℃の温
度で行う。−３０℃より低い凍結温度ではゲル化の進行
が遅く、長時間かかり、好ましくない。また、−５℃よ
り高い温度では溶液が凍結しない場合があり好ましくな
い。Freezing of the low-concentration aqueous solution of hyaluronic acid is carried out at a temperature of -30 ° C to -10 ° C after being poured into an arbitrary container. At a freezing temperature lower than −30 ° C., the progress of gelation is slow and takes a long time, which is not preferable. If the temperature is higher than −5 ° C., the solution may not freeze, which is not preferable.
【００３１】また、凍結は底面から冷凍する方法、空冷
方式の凍結いずれの方法によってもよい。２日以上凍結
した後、解凍することにより粒状ヒアルロン酸ゲルが得
られる。The freezing may be performed by a method of freezing from the bottom surface or an air-cooling type freezing method. After freezing for 2 days or more, thawing gives a granular hyaluronic acid gel.
【００３２】低濃度ヒアルロン酸酸性溶液を凍結するこ
とで得られた粒状ヒアルロン酸ゲルを含む当該酸性水溶
液をメンブレンフィルターで粒状ヒアルロン酸ゲルを回
収した後、生理的食塩水に５０ｍＭ濃度でリン酸緩衝成
分を加えて調製したｐＨ７のリン酸緩衝生理的食塩水で
中和した後、注射用水で洗浄する。得られた粒状ヒアル
ロン酸の懸濁液を任意の容器に展開し乾燥することによ
りシート状成形物が得られる。The acidic aqueous solution containing the granular hyaluronic acid gel obtained by freezing the low-concentration hyaluronic acid acidic solution was collected with a membrane filter to recover the granular hyaluronic acid gel, and then phosphate buffered at 50 mM in physiological saline. The mixture is neutralized with a phosphate buffered saline at pH 7 prepared by adding the components, and then washed with water for injection. The obtained suspension of granular hyaluronic acid is developed in an arbitrary container and dried to obtain a sheet-like molded product.
【００３３】本発明で得られた粒状ヒアルロン酸ゲルか
ら成形したヒアルロン酸ゲルのシート状成形物は、一般
の生体内分解性医用材料及びヒアルロン酸が用いられる
分野であれば特に制限なく使用することができる。例え
ば、癒着防止材、薬理活性物質の担体、創傷被覆材、人
工皮膚、組織置換型生体組織修復材、関節注入剤、外科
手術用縫合糸、止血剤、人工臓器、人工細胞外マトリッ
クス又は人工基底膜、診断・治療に用いる医療器具・医
療用具等の生物医学的製品又は医薬組成物への使用が挙
げられる。The sheet-shaped molded product of the hyaluronic acid gel formed from the granular hyaluronic acid gel obtained in the present invention can be used without particular limitation as long as it is a field in which general biodegradable medical materials and hyaluronic acid are used. Can be. For example, an anti-adhesion material, a carrier of a pharmacologically active substance, a wound dressing material, artificial skin, a tissue-replacement-type living tissue repair material, a joint injection, a surgical suture, a hemostatic agent, an artificial organ, an artificial extracellular matrix or an artificial base Use in biomedical products or pharmaceutical compositions such as membranes, medical devices and medical devices used for diagnosis and treatment, and the like.
【００３４】粒状ヒアルロン酸ゲルからなるシート状成
形物は、単一形態での使用は当然ながら、異なるヒアル
ロン酸ゲル形態との混合又は併用、更にゲル化されてい
ないヒアルロン酸との混合又は併用による組合せ処方に
より効果の増強が期待できる。例えば、術後癒着防止材
として粒状ヒアルロン酸ゲルからなるシート状成形物と
ヒアルロン酸溶液を腹部に併用した場合、局所効果と腹
腔内全体効果が期待できる。The sheet-shaped molded article composed of granular hyaluronic acid gel may be used in a single form, or may be mixed or used in combination with different hyaluronic acid gel forms, or further mixed or used in combination with ungelled hyaluronic acid. The combination can be expected to enhance the effect. For example, when a hyaluronic acid solution and a sheet-like molded article made of granular hyaluronic acid gel are used in combination with a hyaluronic acid solution as an anti-adhesion preventive material, a local effect and a whole intra-abdominal effect can be expected.
【００３５】次に、本発明の医用材料のうち癒着防止材
について説明する。本発明で得られた粒状ヒアルロン酸
ゲルからなるシート状成形物の癒着防止材は外科手術に
用いられ、外科手術部位に直接貼付するのが好ましい。
粒状ヒアルロン酸ゲルのシート状成形物からなる癒着防
止材は、癒着が生じるいかなる動物にも適用でき、哺乳
動物、特に人間に於いて好適に手術後の癒着を防止する
ことができる。Next, the anti-adhesion material among the medical materials of the present invention will be described. The adhesion preventing material for a sheet-like molded article made of the granular hyaluronic acid gel obtained in the present invention is used for a surgical operation, and is preferably applied directly to a surgical operation site.
The adhesion preventing material comprising a sheet-shaped molded product of the granular hyaluronic acid gel can be applied to any animal in which adhesion occurs, and can suitably prevent adhesion after surgery in mammals, particularly humans.
【００３６】生体内の投与場所は腹腔、胸腔内の各種臓
器、腱鞘、頭蓋、神経、及び眼球、等に係わる、腹部手
術、婦人科手術、胸部手術、腱や靭帯に係わる整形外科
手術、硬膜に係わる神経外科手術、等どこでも有用であ
る。The place of administration in a living body is abdominal surgery, gynecological surgery, thoracic surgery, orthopedic surgery involving tendons and ligaments, hard tissues related to various organs in the abdominal cavity, thoracic cavity, tendon sheath, skull, nerve, eyeball, etc. It is useful everywhere, such as in neurosurgery involving membranes.
【００３７】本発明で得られた粒状ヒアルロン酸ゲルか
らなるシート状成形物の癒着防止材の投与時期は、術後
の癒着を防止できるどの時期でも良く、手術中又は手術
終了時に投与できるが、特に手術終了の直前に投与する
のが好ましい。The adhesion preventing material for the sheet-shaped molded article made of the granular hyaluronic acid gel obtained in the present invention may be administered at any time that can prevent post-operative adhesion, and may be administered during or at the end of surgery. In particular, it is preferable to administer immediately before the end of the operation.
【００３８】[0038]
【実施例】以下、実施例により本発明を更に詳しく説明
する。なお、本発明はこれにより限定されるものではな
い。The present invention will be described in more detail with reference to the following examples. Note that the present invention is not limited to this.
【００３９】実施例１ 分子量が２×１０6 ダルトンのヒアルロン酸ナトリウム
を注射用水に溶解し１重量％のヒアルロン酸水溶液を調
整した。この水溶液のｐＨを、１Ｎ塩酸でｐＨ１．５に
調整し、ヒアルロン酸酸性水溶液を得た。このヒアルロ
ン酸酸性水溶液８０ｍｌを、１００ｍｌサンプル瓶に入
れ、−２０℃に設定した冷凍庫に入れた。１２０時間の
凍結でヒアルロン酸ゲルが得られた。次にこれを注射用
水１０ｍｌを加え１０分間放置後デカンテーションする
洗浄を３回繰り返した後、生理的食塩水に５０ｍＭ濃度
でリン酸緩衝成分を加えて調整したｐＨ７のリン酸緩衝
生理的食塩水１００ｍｌを加えデカンテーションする中
和を２回繰り返した後、注射用水で十分に洗浄しヒアル
ロン酸ゲルを得た。更にヒアルロン酸ゲルを下記実験に
従い注射用水中に添加し、マイクロホモジナイザー（NI
SSEI EXCEL AUTO HOMOGENIZER)を用い破砕処理をすると
粒径が３００〜１，０００μｍの粒状ヒアルロン酸ゲル
の懸濁液を得る。この懸濁液を９０ｍｍ×９０ｍｍのプ
ラスチック製シャーレに展開し乾燥しする。その結果、
２０枚の粒状ヒアルロン酸ゲルからなるシート状成形物
の医用材料を得た。また、この懸濁液と０．５重量％の
ヒアルロン酸水溶液を混合し９０ｍｍ×９０ｍｍのプラ
スチック製シャーレに展開し乾燥しする。その結果、２
０枚の粒状ヒアルロン酸ゲルおよびヒアルロン酸からな
るシート状成形物の医用材料を得た。調製の詳細につい
ては表１に記す。なお、これら一連の操作は無菌・無埃
環境下で行い、使用する薬液等も予め滅菌処理を行った
ものを用いた。Example 1 Sodium hyaluronate having a molecular weight of 2 × 10 6 daltons was dissolved in water for injection to prepare a 1% by weight aqueous solution of hyaluronic acid. The pH of this aqueous solution was adjusted to pH 1.5 with 1N hydrochloric acid to obtain an acidic aqueous solution of hyaluronic acid. 80 ml of this aqueous solution of hyaluronic acid was placed in a 100 ml sample bottle and placed in a freezer set at -20 ° C. Hyaluronic acid gel was obtained after freezing for 120 hours. Next, this was washed three times with 10 ml of water for injection, left standing for 10 minutes, and then decanted. After that, phosphate buffered saline of pH 7 adjusted by adding a phosphate buffer component to physiological saline at a concentration of 50 mM. After repeating neutralization twice by adding 100 ml and decanting, it was sufficiently washed with water for injection to obtain a hyaluronic acid gel. Further, a hyaluronic acid gel was added to water for injection according to the following experiment, and a microhomogenizer (NI
When crushing treatment is performed using SSEI EXCEL AUTO HOMOGENIZER), a suspension of granular hyaluronic acid gel having a particle size of 300 to 1,000 μm is obtained. The suspension is spread on a 90 mm × 90 mm plastic petri dish and dried. as a result,
A sheet-shaped molded material made of 20 granular hyaluronic acid gels was obtained. This suspension and a 0.5% by weight aqueous solution of hyaluronic acid are mixed, spread on a 90 mm × 90 mm plastic petri dish, and dried. As a result, 2
A medical material of a sheet-like molded product comprising zero granular hyaluronic acid gel and hyaluronic acid was obtained. Details of the preparation are shown in Table 1. In addition, these series of operations were performed in an aseptic and dust-free environment, and a chemical solution and the like to be used had been previously sterilized.
【００４０】実施例２ 分子量が２×１０6 ダルトンのヒアルロン酸ナトリウム
を注射用水に溶解し、０．０１重量％のヒアルロン酸水
溶液を調整した。この水溶液のｐＨを、１Ｎ塩酸でｐＨ
１．５に調整し、低濃度ヒアルロン酸酸性水溶液を得
た。この低濃度ヒアルロン酸酸性水溶液８リットルを、
１０リットルの容器に入れ、−２０℃に設定した冷凍庫
に入れた。１２０時間の凍結で粒径１００〜５００μｍ
の粒状のヒアルロン酸ゲルが得られた。粒状ヒアルロン
酸ゲルを含む当該酸性水溶液をメンブレンフィルターで
粒状ヒアルロン酸ゲルを回収した後、注射用水１０ｍｌ
を加え１０分間放置後デカンテーションする洗浄を３回
繰り返した後、生理的食塩水に５０ｍＭ濃度でリン酸緩
衝成分を加えて調整したｐＨ７のリン酸緩衝生理的食塩
水１００ｍｌを加えデカンテーションする中和を２回繰
り返し、注射用水で十分に洗浄した。更に、ヒアルロン
酸ゲルを下記実験に従い注射用水中に添加しヒアルロン
酸ゲルの懸濁液を得た。この懸濁液を９０ｍｍ×９０ｍ
ｍのプラスチック製シャーレに展開し乾燥した。その結
果、２０枚の粒状ヒアルロン酸ゲルからなるシート状成
形物の医用材料を得た。また、この懸濁液と０．５％の
ヒアルロン酸水溶液を混合し９０ｍｍ×９０ｍｍのプラ
スチック製シャーレに展開し乾燥した。その結果、２０
枚の粒状ヒアルロン酸ゲル及びヒアルロン酸からなるシ
ート状成形物の医用材料を得た。調製の詳細については
表１に記す。なお、これら一連の操作は無菌・無埃環境
下で行い、使用する薬液等も予め滅菌処理を行ったもの
を用いた。Example 2 Sodium hyaluronate having a molecular weight of 2 × 10 6 daltons was dissolved in water for injection to prepare a 0.01% by weight aqueous solution of hyaluronic acid. The pH of this aqueous solution is adjusted to pH with 1N hydrochloric acid.
It was adjusted to 1.5 to obtain a low-concentration aqueous solution of hyaluronic acid. 8 liters of this low-concentration aqueous solution of hyaluronic acid is
Placed in a 10 liter container and placed in a freezer set at -20 ° C. Particle size 100-500 μm after 120 hours of freezing
A granular hyaluronic acid gel was obtained. The acidic aqueous solution containing the granular hyaluronic acid gel was collected with a membrane filter to collect the granular hyaluronic acid gel, and then 10 ml of water for injection was used.
, And the mixture was left for 10 minutes and then decanted. After washing was repeated three times, 100 ml of a phosphate buffered saline of pH 7 adjusted by adding a phosphate buffer component to a physiological saline at a concentration of 50 mM was added, followed by decantation. The sum was repeated twice and washed thoroughly with water for injection. Further, the hyaluronic acid gel was added to water for injection according to the following experiment to obtain a suspension of the hyaluronic acid gel. This suspension is 90mm x 90m
m and spread it on a plastic petri dish. As a result, a sheet-shaped molded material made of 20 granular hyaluronic acid gels was obtained. This suspension and a 0.5% aqueous solution of hyaluronic acid were mixed, spread on a 90 mm × 90 mm plastic petri dish, and dried. As a result, 20
A sheet-like molded material made of granular hyaluronic acid gel and hyaluronic acid was obtained. Details of the preparation are shown in Table 1. In addition, these series of operations were performed in an aseptic and dust-free environment, and a chemical solution and the like to be used had been previously sterilized.
【００４１】比較例１ 実施例１で調製したヒアルロン酸水溶液を希釈して得た
０．５重量％ヒアルロン酸水溶液１６０ｍｌのｐＨを、
１Ｎ塩酸でｐＨ１．５に調整し、９０ｍｍ×９０ｍｍの
プラスチック製シャーレに８ｍｌづつ展開し、−２０℃
に設定した冷凍庫に入れた。１２０時間の凍結でヒアル
ロン酸ゲルが得られた。次にこれを注射用水１０ｍｌを
加え１０分間放置後デカンテーションする洗浄を３回繰
り返した後、生理的食塩水に５０ｍＭ濃度でリン酸緩衝
成分を加えて調整したｐＨ７のリン酸緩衝生理的食塩水
１０ｍｌを加えデカンテーションする中和を２回繰り返
した後、注射用水で十分に洗浄しシート状のヒアルロン
酸ゲル得た。Comparative Example 1 The pH of 160 ml of a 0.5% by weight aqueous solution of hyaluronic acid obtained by diluting the aqueous solution of hyaluronic acid prepared in Example 1 was
The pH was adjusted to 1.5 with 1N hydrochloric acid, and the mixture was spread on a 90 mm × 90 mm plastic Petri dish in 8 ml increments at -20 ° C.
Put in the freezer set. Hyaluronic acid gel was obtained after freezing for 120 hours. Next, this was washed three times with 10 ml of water for injection, left standing for 10 minutes, and then decanted. After that, phosphate buffered saline of pH 7 adjusted by adding a phosphate buffer component to physiological saline at a concentration of 50 mM. After neutralization by adding 10 ml and decanting twice was repeated, the resultant was sufficiently washed with water for injection to obtain a sheet-shaped hyaluronic acid gel.
【００４２】[0042]
【表１】 [Table 1]
【００４３】実施例３ 各種、表１の条件でシート成形状況の評価試験を行っ
た。各実験で得られたシート状成形物を、形成の可否、
外観、操作性、強度の面から評価した結果を表２に示
す。Example 3 An evaluation test of the sheet forming condition was performed under various conditions shown in Table 1. Whether the sheet-like molded product obtained in each experiment can be formed,
Table 2 shows the results of evaluation in terms of appearance, operability, and strength.
【００４４】[0044]
【表２】 [Table 2]
【００４５】＜評価法＞ シート成形；成形良好／◎、成形／○、成形不良／△、
成形せず／× 外 観 ；均一で良好／◎、良好／○、不良／×（２０
枚作製中の評価） 収 率 ；外観にて、均一で良好および良好の割合 強 度 ；高／◎、中／○、低／△、極低／×<Evaluation method> Sheet molding: good molding / ◎, molding / ○, poor molding / △,
Not molded / × Appearance; uniform and good /／, good / ○, poor / × (20
Evaluation during production of sheets) Yield: Uniform, good and good ratio in appearance Appearance Strength: High / A, Medium / O, Low / A, Very low / X
【００４６】シート形状比較試験 実験Ｎｏ．１１で得られたヒアルロン酸酸性水溶液をそ
のまま展開、凍結することにより得られたシート状ヒア
ルロン酸ゲル、実験Ｎｏ．１〜５のヒアルロン酸ゲルを
破砕して得られた粒状ヒアルロン酸ゲルからなるヒアル
ロン酸ゲルのシート状成形物、実験Ｎｏ．６〜１０の低
濃度ヒアルロン酸酸性溶液から得られる粒状ヒアルロン
酸ゲルからなるシート状成形物の表面形状の目視検査を
行った。評価は、均一で良好／◎、良好／○、不良／
×、および２０枚作製時の外観にて、均一で良好および
良好の割合として収率［％］で示した。Sheet No. Comparative Test A sheet-shaped hyaluronic acid gel obtained by developing and freezing the aqueous solution of hyaluronic acid obtained in Example 11 as it is, A sheet-shaped molded product of hyaluronic acid gel consisting of granular hyaluronic acid gel obtained by crushing hyaluronic acid gel of Experimental Nos. 1 to 5; A visual inspection of the surface shape of a sheet-like molded product made of granular hyaluronic acid gel obtained from a low-concentration hyaluronic acid acidic solution of 6 to 10 was performed. The evaluation was uniform and good / ◎, good / ○, poor /
×, and the appearance at the time of production of 20 sheets, as a uniform, good and good ratio, are shown by yield [%].
【００４７】表２より、ヒアルロン酸酸性水溶液をその
まま展開しシート化したものに対して、破砕により得ら
れる粒状ヒアルロン酸ゲルからなるシート状成形物及び
破砕により得られる粒状ヒアルロン酸ゲルとヒアルロン
酸からなるシート状成形物、低濃度ヒアルロン酸酸性溶
液から得られる粒状ヒアルロン酸ゲルからなるシート状
成形物、低濃度ヒアルロン酸酸性溶液から得られる粒状
ヒアルロン酸ゲルとヒアルロン酸からなるシート状成形
物は良好なシートの収率の向上および操作性と強度が認
められた。As shown in Table 2, a sheet-shaped molded product comprising a granular hyaluronic acid gel obtained by crushing and a hyaluronic acid gel and a hyaluronic acid obtained by crushing, A sheet-shaped molded product comprising a granular hyaluronic acid gel obtained from a low-concentration hyaluronic acid acidic solution, a sheet-shaped molded product comprising a granular hyaluronic acid gel obtained from a low-concentration hyaluronic acid acidic solution and hyaluronic acid are good. The improvement of the yield of the sheet and the operability and strength were recognized.
【００４８】実施例４ 粒状ヒアルロン酸ゲルの分岐度測定 実施例１及び２で得られた粒状ヒアルロン酸ゲルをｐＨ
１．５の塩酸水溶液１５ｍｌに浸漬し、６０℃で６時間
加水分解し、ゲルを完全に可溶化させた。これをＧＰＣ
溶媒で２倍に希釈して濃度を０．０５重量％に調製し、
０．２μｍのメンブランフィルターでろ過した後、０．
１ｍｌ注入してＧＰＣ−ＭＡＬＬＳで測定した結果、分
岐度はいずれも０．５以上であった。Example 4 Measurement of Degree of Branching of Granular Hyaluronic Acid Gel The granular hyaluronic acid gel obtained in Examples 1 and 2 was subjected to pH measurement.
The gel was immersed in 15 ml of 1.5 hydrochloric acid aqueous solution and hydrolyzed at 60 ° C. for 6 hours to completely solubilize the gel. This is GPC
Diluted 2 times with solvent to adjust the concentration to 0.05% by weight,
After filtration through a 0.2 μm membrane filter, the solution was filtered.
As a result of injecting 1 ml and measuring by GPC-MALLS, the degree of branching was 0.5 or more in each case.
【００４９】実施例５ ヒアルロン酸ゲルの癒着防止材のマウス子宮モデルによ
る癒着防止効果試験 実験Ｎｏ．１２〜１３で得られたシート状のヒアルロン
酸を、１ｃｍ×２ｃｍの長方形に裁断したものをコント
ロールとして、実験Ｎｏ．１〜１０で得られた粒状ヒア
ルロン酸ゲルからなるシート状成形物の癒着防止材を、
１ｃｍ×２ｃｍの長方形に裁断したものを以下の試験に
供した。Example 5 Adhesion Prevention Effect Test of Anti-Adhesion Material of Hyaluronic Acid Gel Using Mouse Uterus Model The sheet-shaped hyaluronic acid obtained in each of Examples 12 to 13 was cut into a rectangular shape of 1 cm × 2 cm as a control. An anti-adhesion material for a sheet-like molded product comprising the granular hyaluronic acid gel obtained in 1 to 10,
One cut into a rectangle of 1 cm × 2 cm was subjected to the following test.
【００５０】７週令雌ＩＣＲマウス（体重２５〜３０
ｇ）を腹腔内ペントバルビタール注射で麻酔後正中切開
にて開腹し、子宮角に約１０ｍｍの長さでヨードチンキ
擦過塗布により損傷を加えた。各群１０匹のマウスにコ
ントロールとして無処置及び、実験Ｎｏ．１で得られた
破砕により得られる粒状ヒアルロン酸ゲルからなるシー
ト状成形物、実験Ｎｏ．３で得られた破砕により得られ
る粒状ヒアルロン酸ゲルとヒアルロン酸からなるシート
状成形物、実験Ｎｏ．４で得られた破砕により得られる
粒状ヒアルロン酸ゲルとヒアルロン酸からなるフィルム
形状のシート状成形物、実験Ｎｏ．５で得られた破砕に
より得られる粒状ヒアルロン酸ゲルとヒアルロン酸から
なるフィルム形状のシート状成形物、実験Ｎｏ．６で得
られた低濃度ヒアルロン酸酸性溶液から得られる粒状ヒ
アルロン酸ゲルからなるシート状成形物、実験Ｎｏ．８
で得られた低濃度ヒアルロン酸酸性溶液から得られる粒
状ヒアルロン酸ゲルとヒアルロン酸からなるシート状成
形物、実験Ｎｏ．９で得られた低濃度ヒアルロン酸酸性
溶液から得られる粒状ヒアルロン酸ゲルからなるフィル
ム形状のシート状成形物、実験Ｎｏ．１０で得られた低
濃度ヒアルロン酸酸性溶液から得られる粒状ヒアルロン
酸ゲルとヒアルロン酸からなるフィルム形状のシート状
成形物を用いた。また比較として実施例１で得られたヒ
アルロン酸水溶液、実験Ｎｏ．１２〜１３のヒアルロン
酸のシート状成形物を用いた。Seven-week-old female ICR mice (body weight 25-30)
g) was anesthetized with an intraperitoneal pentobarbital injection, followed by median incision. The uterine horn was injured by applying iodine tincture to a length of about 10 mm. No treatment was applied to 10 mice in each group as a control, A sheet-shaped molded article comprising the granular hyaluronic acid gel obtained by the crushing obtained in Example 1; No. 3, a sheet-like molded product comprising the granular hyaluronic acid gel obtained by the crushing and hyaluronic acid; No. 4, a film-shaped sheet-shaped molded product composed of the granular hyaluronic acid gel obtained by the crushing and hyaluronic acid, 5, a film-shaped sheet-shaped molded product composed of the granular hyaluronic acid gel obtained by the crushing obtained in Example 5 and hyaluronic acid. No. 6, a sheet-shaped molded article made of granular hyaluronic acid gel obtained from the low-concentration hyaluronic acid acidic solution; 8
, A sheet-shaped molded product comprising hyaluronic acid and a granular hyaluronic acid gel obtained from the low-concentration acidic solution of hyaluronic acid obtained in Experiment No. 9, a film-shaped sheet-shaped molded product comprising granular hyaluronic acid gel obtained from the low-concentration hyaluronic acid acidic solution obtained in Experiment No. 9. A film-shaped sheet-shaped molded product composed of granular hyaluronic acid gel obtained from the low-concentration hyaluronic acid acidic solution obtained in 10 and hyaluronic acid was used. As a comparison, the aqueous solution of hyaluronic acid obtained in Example 1 was used. Sheet-shaped molded products of 12 to 13 hyaluronic acid were used.
【００５１】それぞれ上記のシート状のヒアルロン酸及
び、粒状ヒアルロン酸ゲルからなるシート状成形物の１
ｃｍ×２ｃｍの長方形のシートを損傷部位に巻き付け、
また、ヒアルロン酸水溶液の場合は、調製例１で調整し
たヒアルロン酸溶液１ｍｌを損傷部位に添加した。そし
ていづれの場合も５−０デキソンにて閉腹した。Each of the sheet-like molded articles made of the above-mentioned sheet-like hyaluronic acid and granular hyaluronic acid gel was used.
Wrap a rectangular sheet of cm x 2 cm around the damaged area,
In the case of a hyaluronic acid aqueous solution, 1 ml of the hyaluronic acid solution prepared in Preparation Example 1 was added to the damaged site. In each case, the abdomen was closed at 5-0 dexone.
【００５２】術後１０日目に、無処置、粒状ヒアルロン
酸ゲルからなるシート状成形物、シート状のヒアルロン
酸、ヒアルロン酸水溶液を投与したマウス各１０匹を頚
椎脱臼致死後、腹部を再開腹し、癒着形成の有無を判定
した。癒着形成は、膜状のごく軽度の癒着は癒着と判定
せず、繊維状で厚く、ピンセットで引ぱっても容易に引
き剥がれない強い癒着を生じた場合を癒着と判定した。
その結果を表３に示す。Ten days after the operation, 10 untreated, sheet-shaped molded articles made of granular hyaluronic acid gel, and 10 mice to which sheet-shaped hyaluronic acid and an aqueous solution of hyaluronic acid were administered were killed by cervical dislocation, and the abdomen was restarted. Then, the presence or absence of adhesion formation was determined. Adhesion formation was judged as adhesion when a very slight adhesion in the form of a film was not adhered, but when a strong adhesion which was fibrous and thick and was not easily peeled off even when pulled with forceps was produced.
Table 3 shows the results.
【００５３】[0053]
【表３】 [Table 3]
【００５４】表３より、無処置で癒着の形成割合が１０
匹中９匹の時、実施例１で得られたヒアルロン酸水溶液
が１０匹中６匹、実験Ｎｏ．１２のヒアルロン酸シート
が１０匹中５匹、実験Ｎｏ．１３で得られたフィルム形
状のヒアルロン酸シートが１０匹中５匹、に対して、実
験Ｎｏ．１で得られた破砕により得られる粒状ヒアルロ
ン酸ゲルからなるシート状成形物が１０匹中０匹、実験
Ｎｏ．３で得られた破砕により得られる粒状ヒアルロン
酸ゲルとヒアルロン酸からなるシート状成形物が１０匹
中０匹、実験Ｎｏ．４で得られた破砕により得られる粒
状ヒアルロン酸ゲルとヒアルロン酸からなるフィルム形
状のシート状成形物が１０匹中１匹、実験Ｎｏ．５で得
られた破砕により得られる粒状ヒアルロン酸ゲルとヒア
ルロン酸からなるフィルム形状のシート状成形物が１０
匹中０匹、実験Ｎｏ．６で得られた低濃度ヒアルロン酸
酸性溶液から得られる粒状ヒアルロン酸ゲルからなるシ
ート状成形物が１０匹中１匹、実験Ｎｏ．８で得られた
低濃度ヒアルロン酸酸性溶液から得られる粒状ヒアルロ
ン酸ゲルとヒアルロン酸からなるシート状成形物が１０
匹中１匹、実験Ｎｏ．９で得られた低濃度ヒアルロン酸
酸性溶液から得られる粒状ヒアルロン酸ゲルからなるフ
ィルム形状のシート状成形物が１０匹中１匹、実験Ｎ
ｏ．１０で得られた低濃度ヒアルロン酸酸性溶液から得
られる粒状ヒアルロン酸ゲルとヒアルロン酸からなるフ
ィルム形状のシート状成形物が１０匹中１匹と、優れた
癒着防止作用があることが確認された。From Table 3, it can be seen that the rate of formation of adhesions without treatment was 10%.
When 9 out of 9 animals, the hyaluronic acid aqueous solution obtained in Example 1 was used in 6 out of 10 animals. The number of the hyaluronic acid sheets of Experiment No. 12 was 5 out of 10 animals. The film-shaped hyaluronic acid sheet obtained in Experiment No. 13 was used for 5 out of 10 animals, and the experiment No. 1 out of 10 sheet-shaped molded articles made of the granular hyaluronic acid gel obtained by the crushing obtained in Example 1, No. 10 out of 10 sheet-shaped molded articles composed of the granular hyaluronic acid gel obtained by the crushing obtained in Example 3 and hyaluronic acid were obtained. 4 out of 10 film-shaped sheet-shaped molded articles composed of the granular hyaluronic acid gel obtained by the crushing obtained in Example 4 and hyaluronic acid. The film-shaped sheet-like molded product composed of the granular hyaluronic acid gel obtained by the crushing obtained in 5 and hyaluronic acid is 10
0 of the animals, Experiment No. 6 out of 10 sheet-shaped molded articles made of granular hyaluronic acid gel obtained from the low-concentration hyaluronic acid acidic solution obtained in Experiment No. 6. The sheet-like molded product comprising the granular hyaluronic acid gel and hyaluronic acid obtained from the low-concentration hyaluronic acid acidic solution obtained in 8 is 10
One of the animals, Experiment No. 9 out of 10 film-shaped sheet-like molded articles made of granular hyaluronic acid gel obtained from the low-concentration hyaluronic acid acidic solution obtained in 9
o. In 1 out of 10 film-shaped sheet-like molded articles composed of granular hyaluronic acid gel and hyaluronic acid obtained from the low-concentration hyaluronic acid acidic solution obtained in 10, it was confirmed that they had an excellent anti-adhesion action. .
【００５５】[0055]
【発明の効果】以上、本発明によれば、粒状ヒアルロン
酸ゲルからシートを成形することにより均一なシート成
形物が得られる。かつ、スケールアップ時に煩雑な工程
を避けることができ、異物や環境菌等のコンタミネーシ
ョンの危険性および酸性溶液に対する配管等の腐食の回
避が可能となる。更に、このシート状成形物は医用材料
に好適に用いられる。As described above, according to the present invention, a uniform sheet molded product can be obtained by molding a sheet from granular hyaluronic acid gel. In addition, complicated steps can be avoided at the time of scale-up, and the danger of contamination of foreign substances and environmental bacteria and the corrosion of piping and the like to acidic solutions can be avoided. Further, this sheet-like molded product is suitably used for medical materials.
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 柳 慎一 東京都町田市旭町３丁目５番１号 電気化 学工業株式会社中央研究所内 Ｆターム(参考） 4C090 AA02 AA09 BA67 BB03 BB18 BB22 BB35 BB53 BB65 BB94 BC19 BC27 BD05 BD11 BD19 BD24 BD37 CA01 CA31 CA32 DA10 DA22 ────────────────────────────────────────────────── ─── Continuing from the front page (72) Inventor Shinichi Yanagi 3-5-1 Asahicho, Machida-shi, Tokyo Denka Kagaku Kogyo Co., Ltd. F-term (reference) 4C090 AA02 AA09 BA67 BB03 BB18 BB22 BB35 BB53 BB65 BB94 BC19 BC27 BD05 BD11 BD19 BD24 BD37 CA01 CA31 CA32 DA10 DA22
Claims (4)
とを特徴とするシート状成形物。1. A sheet-shaped molded article formed from a granular hyaluronic acid gel.
０，０００μｍであることを特徴とする請求項１記載の
シート状成形物。2. The hyaluronic acid gel has an average particle size of 10-1.
The sheet-like molded product according to claim 1, wherein the thickness of the sheet-shaped molded product is 000 µm.
子、又はゲルの破砕物をシート化することを特徴とする
請求項１又は２記載のシート状成形物。3. The sheet-like molded product according to claim 1, wherein particles of the gel molded with hyaluronic acid alone or a crushed product of the gel are formed into a sheet.
ート状成形物を含有することを特徴とする医用材料。4. A medical material comprising the sheet-shaped molded product according to claim 1.
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