JP2000239292A

JP2000239292A - 抗ｍｒｓａ抗生物質

Info

Publication number: JP2000239292A
Application number: JP4258499A
Authority: JP
Inventors: Satoru Ishikawa; 覚石川; Kenya Ishizawa; 謙哉石澤
Original assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Current assignee: Asahi Chemical Industry Co Ltd
Priority date: 1999-02-22
Filing date: 1999-02-22
Publication date: 2000-09-05

Abstract

(57)【要約】【構成】黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌｏｃｏｃｃ
ｕｓａｕｒｅｕｓ）の多剤耐性菌（ＭＲＳＡ）に対し
て優れた有効性を有する、Ｋｉｎｅｏｓｐｏｒｉａ属に
属する微生物が生産する化合物またはその塩、又はそれ
らを有効成分とする医薬。【効果】ＭＲＳＡに対してバンコマイシンよりも優れ
た抗菌活性を有し、これらの感染症に対する優れた医薬
を提供し得る。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、新規な抗生物質及
びその製造法と用途に関する。

【０００２】

【従来の技術】微生物の生産する抗生物質としては、こ
れまでに数多く発見されており、医薬品、動物薬、農薬
の分野においてすでに実用化されている。

【０００３】

【発明が解決しようとする課題】抗生物質の使用におい
ては、耐性菌の発現や毒性が大きな問題となっており、
これらの問題点を解決し得る新規な抗生物質の開発が強
く望まれている。特に黄色ブドウ球菌（Ｓｔａｐｈｙｌ
ｏｃｏｃｃｕｓａｕｒｅｕｓ）は化膿性疾患の起因菌
として知られているが、その多剤耐性菌（ＭＲＳＡ）が
臨床上非常に大きな問題となっている（小栗ら、臨床と
微生物、１５巻、７〜１５項、１９９８年）。現在、抗
ＭＲＳＡ抗生物質としてはバンコマイシン、テイコプラ
ニン、ハベカシンが開発され、臨床に用いられ、優れた
効果を示してきた。しかしながら、それら薬剤に対して
さえも、近年、耐性菌が問題となっており（花木、日本
臨床、５５巻、５号、２６９〜２７４項、１９９７
年）、さらに有効で新規な抗ＭＲＳＡ抗生物質が求めら
れている。

【０００４】

【課題を解決する為の手段】本発明者らは、抗菌活性を
有する新規な抗生物質を微生物代謝産物より見出すべく
鋭意探索を行った。その結果、和歌山県田辺市の落葉か
ら分離したキネオスポリア（Ｋｉｎｅｏｓｐｏｒｉａ）
属に属する放線菌ＡＰ１１１５８株の培養液からＭＲＳ
Ａをはじめとする各種の病原性微生物に対して生育阻害
活性を示す新規抗生物質が産生される事を見出し本発明
を完成させた。

【０００５】即ち、本発明は、下記の物理化学的性質を
有する化合物、またはその塩である。本発明の第一の化合物の性状は以下の通りである。
（尚、この化合物をＡＰ１１１５８Ａ１化合物と略記す
ることがある。）１）概観：白色粉末２）酸性、塩基性、中性の区別：酸性物質３）比旋光度：〔α〕_D ²²＝−４５±５°（ｃ＝１．
０、ＤＭＳＯ）４）分子量：ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ１１１０（Ｍ＋
Ｈ）５）紫外部吸収スペクトル：メタノール中の主な吸収ピ
ーク（ｎｍ）は次の通りである。

【０００６】２１３、２７８−２８３、３１０−３２０６）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤中の主な波数
（ｃｍ^-1）は次の通りである。３３５５、１６８１、１６３３、１６００、１５２５、
１４８８、１３８６、１２１８、１１２２、１０８９７）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ、ｄ６−Ｄ
ＭＳＯ）：図２に示す通りである。

【０００７】８）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨ
ｚ、ｄ６−ＤＭＳＯ）：図３に示す通りである。９）溶解性：クロロホルム、酢酸エチルに可溶で、ヘキ
サンに不溶である。１０）呈色試験：ヨウ素蒸気との反応及び過マンガン酸
カリウム脱色反応に陽性を示し、ニンヒドリン反応に陰
性を示す。

【０００８】また、本発明の第二の化合物の性状は以下
の通りである。（尚、この化合物をＡＰ１１１５８Ａ３
化合物と略記することがある。）１）概観：白色粉末２）酸性、塩基性、中性の区別：酸性物質３）比旋光度：〔α〕_D ²²＝−７０±５°（ｃ＝１．
０、ＤＭＳＯ）４）分子量：ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ１１１０（Ｍ＋
Ｈ）５）紫外部吸収スペクトル：メタノール中の主な吸収ピ
ーク（ｎｍ）は次の通りである。

【０００９】２１１、２７８−２８３、３２０−３３０６）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤中の主な波数
（ｃｍ^-1）は次の通りである。３３５４、１６７９、１６３１、１５９６、１５２５、
１４８６、１３８６、１２１８、１１２４、１０８９７）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ、ｄ−６Ｄ
ＭＳＯ）：図５に示す通りである。

【００１０】８）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨ
ｚ、ｄ−６ＤＭＳＯ）：図６に示す通りである。９）溶解性：クロロホルム、酢酸エチルに可溶で、ヘキ
サンに不溶である。１０）呈色試験：ヨウ素蒸気との反応及び過マンガン酸
カリウム脱色反応に陽性を示し、ニンヒドリン反応に陰
性を示す。

【００１１】さらに本発明の第三の化合物の性状は以下
の通りである。（尚、この化合物をＡＰ１１１５８Ｂ化
合物と略記することがある。）１）概観：白色粉末２）酸性、塩基性、中性の区別：酸性物質３）比旋光度：〔α〕_D ²²＝−７２±５°（ｃ＝１．
０、ＤＭＳＯ）４）分子量：ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ１００３（Ｍ＋
Ｈ）５）紫外部吸収スペクトル：メタノール中の主な吸収ピ
ーク（ｎｍ）は次の通りである。

【００１２】２１１、２７８−２８３、３２０−３３０６）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤中の主な波数
（ｃｍ^-1）は次の通りである。３３６３、１６６０、１６３１、１６００、１５６４、
１５４６、１５３１、１４９６、１３８６、１１１８、
１０８７７）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ、ｄ−６Ｄ
ＭＳＯ）：図８に示す通りである。

【００１３】８）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨ
ｚ、ｄ−６ＤＭＳＯ）：図９に示す通りである。９）溶解性：クロロホルム、酢酸エチルに可溶で、ヘキ
サンに不溶である。１０）呈色試験：ヨウ素蒸気との反応及び過マンガン酸
カリウム脱色反応に陽性を示し、ニンヒドリン反応に陰
性を示す。

【００１４】また本発明のＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、
Ｂ化合物はそれぞれ塩の形で存在する事ができ、その様
な塩としては薬学的に許容される塩であれば特に限定さ
れないが、例えば、通常のアルカリ金属、アルカリ土金
属、アンモニアなどの塩基性基からなる塩、例えばナト
リウム塩、カリウム塩、アンモニウム塩等があげられ
る。

【００１５】ＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３化合物はＦＡＢ
−ＭＳ分析の結果よりｍ／ｚ１１１０にＭ＋Ｈのピーク
が検出されることより分子量は１１０９と判断した。Ａ
Ｐ１１１５８Ａ１、Ａ３化合物と同一の１１０９に分子
量を持つ化合物としてＫｅｒａｍａｍｉｄｅＤ（Ｊｏ
ｕｒｎａｌｏｆＡｍｅｒｉｃａｎＣｈｅｍｉｃａ
ｌＳｏｃｉｅｔｙ，１１３（２），７８１２，１９９
１）とＡｒｔｈｒｏｂａｃｉｌｉｎＢ（Ｔｅｔｒａｈ
ｅｄｒｏｎＬｅｔｔｅｒ、３３（１９）２７０５、１
９９２）が挙げられる。しかしながらＫｅｒａｍａｍｉ
ｄｅＤは¹Ｈ−ＮＭＲスペクトルにおいてＮ−Ｈに帰
属された８．１５、８．０８ｐｐｍに特徴的なケミカル
シフトを示すが、ＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３化合物は該
当するケミカルシフトを示さないことより明確に区別さ
れる。またＡｒｔｈｒｏｂａｃｉｌｉｎＢは特徴的な
紫外部吸収を持たないのに対し、ＡＰ１１１５８Ａ１化
合物は２１３、２７８−２８３、３１０−３２０ｎｍに
紫外部吸収を持ち、ＡＰ１１１５８Ａ３化合物は２１
１、２７８−２８３、３２０−３３０ｎｍに紫外部吸収
を持つことにより明確に区別される。またＡＰ１１１５
８Ｂ化合物はＦＡＢ−ＭＳ分析の結果よりｍ／ｚ１００
３にＭ＋Ｈのピークが検出されることより分子量は１０
０２と判断した。ＡＰ１１１５８Ｂ化合物と同一の分子
量１００２を持つ化合物としてＢＥ−４４６５１（特開
平９−１００２６１号公報）があげられるがＢＥ−４４
６５１は２２３、２６７、４２６ｎｍに紫外部吸収を持
つのに対し、ＡＰ１１１５８Ｂ化合物は２１１、２７８
−２８３、３２０−３３０ｎｍに紫外部吸収を持つこと
より、明確に区別される。したがって、ＡＰ１１１５８
Ａ１、Ａ３、Ｂは新規化合物であると確認された。

【００１６】そしてまた、本発明はＡＰ１１１５８Ａ
１、Ａ３、Ｂ化合物を産生する能力を有するキネオスポ
リア属に属する微生物を培養し、その培養物よりＡＰ１
１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合物を採取する事を特徴とす
るＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合物またはその塩の
製造方法である。本発明のＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、
Ｂ化合物を産生する能力を有するキネオスポリア属に属
する微生物としては、本発明の化合物を産生する能力が
あれば特に限定されないが、例えば、下記のキネオスポ
リア・エスピー（Ｋｉｎｅｏｓｐｏｒｉａｓｐ．）Ａ
Ｐ１１１５８株が例示される。

【００１７】上記ＡＰ１１１５８株の菌学的性状は次の
通りである。１．形態的性質イーストエキス・麦芽エキス寒天培地で２８℃、２０日
間培養し、光学顕微鏡、走査型電子顕微鏡及び透過型電
子顕微鏡にて観察した。基底菌糸は緩やかな曲線状に伸
長し、よく分岐する。その直径は約０．４〜０．６μｍ
である。通常、菌糸の断裂は認められない。基底菌糸の
先端に1個の胞子を含む胞子のうを形成する。その大き
さは約０．８〜１．２μｍ×１．２〜１．８μｍであ
る。胞子はほぼ卵型でその大きさは約０．８〜１．２μ
ｍ×１．０〜１．５μｍである。また、５本程度の極べ
ん毛を有し、運動性を示す。表面は平滑ないし若干の凸
凹が見られる。気菌糸の形成は認められない。

【００１８】２．培養的性質各種培地で２８℃、２０日間培養し、観察した。色の記
載はコンティナ・コーポレーション・オブ・アメリカ(C
ontainer Corporation of America)のカラー・ハーモニ
ー・マニュアル(Color harmony manual)第4版１９５８
年に従った。（１）イーストエキス・麦芽エキス寒天培地生育良好、裏面の色Light Melon Yellow(3ea)、気菌糸
なし、色素生産なし（２）オートミール寒天培地生育不良、裏面の色Peal Pink(3ca)乃至無色、気菌糸な
し、色素生産なし（３）スターチ・無機塩寒天培地生育微弱、裏面の色無色、気菌糸なし、色素生産なし（４）グリセロール・アスパラギン寒天培地生育微弱、裏面の色無色、気菌糸なし、色素生産なし３．生理学的性質（１）生育温度（イーストエキス・麦芽エキス寒天培地
で２８℃、１４日間培養）６、１０℃ 生育せず１２℃ 中程度の生育１６、２０、２４、２８、３２℃ 旺盛な生育３６℃ 微弱な生育３８、４３、４８℃ 生育せず（２）メラニン色素生産性ペプトン・イースト・鉄寒天培地：色素生産なし（生育
微弱）チロシン寒天培地：色素生産なし（生育微弱）（３）炭素源の利用性（プリドハム・ゴトリーブ寒天培
地を基礎培地とする）Ｌ−アラビノース、Ｄ−キシロース、Ｄ−グルコース、
Ｄ−フラクトース、シュークロース及びＬ−ラムノース
を利用する。

【００１９】イノシトール及びラフィノースを利用しな
い。以上の様に、ＡＰ１１１５８株は、放線菌であっ
て、良く分岐する基底菌糸の先端に1個の胞子を含む胞
子のうを形成し、胞子はべん毛を有し、運動性を示す
事、気菌糸を形成しないという特徴より、キネオスポリ
ア（Ｋｉｎｅｏｓｐｏｒｉａ）属に属する事を確認し
た。そこで、ＡＰ１１１５８株をキネオスポリア・エス
ピー（Ｋｉｎｅｏｓｐｏｒｉａｓｐ．）ＡＰ１１１５
８と命名した。尚、本菌株を工業技術院生命工学工業技
術研究所にＦＥＲＭＢＰ−６６５３して寄託した。

【００２０】本発明に係わるＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ
３、Ｂ化合物の典型的で好ましい製造方法は、キネオス
ポリア属に属する該化合物生産菌（例えばＫｉｎｅｏｓ
ｐｏｒｉａｓｐ．ＡＰ１１１５８）を好適な培地で培
養し、その培養物から分離する方法が例示される。本発
明物質を製造するのに使用される培地は、液体培地によ
る振盪培養または通気攪拌培養が最も適しているが、こ
れに限定されない。培地はＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、
Ｂ化合物生産菌が生育して培地中に該化合物を蓄積する
ものであれば特に限定されず、例えば、炭素源としては
グルコース、シュクロース、デキストリン、澱粉、グリ
セリン、糖蜜、有機酸等が使用できる。また窒素源とし
ては、例えばイーストエキス、ペプトン、肉エキス、大
豆粉、グルテンミール、小麦胚芽、コーンスティープリ
カー、アミノ酸類、アンモニウム塩、硝酸塩、その他各
種有機あるいは無機窒素化合物が用いられる。無機塩と
しては、塩化ナトリウム、塩化カリウム、炭酸カルシウ
ム、各種リン酸塩、マグネシウム塩、銅塩、コバルト塩
などを添加しても良い。また菌の生育及びＡＰ１１１５
８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合物生産を促進するようなビタミン
類、補酵素などを添加しても良い。特に、培地が強く発
泡するのであれば、必要ある時に液体パラフィン、動物
油、鉱物油、シリコン等を添加しても良い。

【００２１】ＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合物生産
菌の培養における培養温度、培養時間、攪拌速度、通気
量、培養液のｐＨなどの条件は、微生物の増殖を最大に
するか、又はＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合物の蓄
積量が最大となるように適当に選択、調節される。例え
ば、通常の通気攪拌培養の場合、培養温度は通常２０〜
３５℃、好ましくは２５〜３０℃の条件が例示される。
培養時間は通常２〜１０日間、好ましくは３〜７日間の
条件が例示される。また培養液のｐＨとしては、通常ｐ
Ｈ５〜９、好ましくは６〜８に調節するのが好ましい例
として挙げられる。

【００２２】培養の経過に伴って培養液中に蓄積される
ＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合物の量の経時変化は
以下に記載の分離、精製の際、確認可能な液体クロマト
グラフィーまたは薄層クロマトグラフィーにより測定し
てもよい。ＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合物の分
離、精製は、適宜公知の方法やその組み合わせを採用す
ることができるが、例えば、培養液中に存在するＡＰ１
１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合物は、酸性ｐＨ条件下で水
と混和しない有機溶媒、例えば酢酸エチル、塩化エチレ
ンなどの単独又はそれらの組み合わせにより抽出精製す
る事ができる。あるいは吸着剤として例えばダイヤイオ
ンＨＰ−２０（三菱化成社製）などが使用される。ＡＰ
１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合物を含む画分を上記の吸
着剤の層を通過させて不純物を吸着させて取り除くか、
又は、ＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合物を吸着させ
た後、メタノール水、アセトン水などを用いて溶出させ
る事により該化合物を得る事ができる。更にシリカゲ
ル、アルミナ、フロリジルの様な担体を用いた吸着カラ
ムクロマトグラフィー、セファデックスＬＨ−２０（フ
ァルマシア社製）、トヨパールＨＷ−４０（東ソー社
製）などを用いた分配カラムクロマトグラフィー、及び
順相、逆相カラムを用いた高速液体クロマトグラフィー
などでＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合物をそれぞれ
分離、精製する事ができる。尚、これらは単独、または
それぞれの混合物として用いることもできる。

【００２３】上述のＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合
物の分離、精製等における適当な手法の選択や、培養液
中の存在量等の確認に際しては、それらの物理化学的特
性に基づく種々の方法を用いる事ができ例えば下記の条
件の液体クロマトグラフィーまたは薄層クロマトグラフ
ィーにより確認することで追跡可能である。液体クロマトグラフィー条件分離カラム：ＹＭＣＰａｃｋＯＤＳ−ＡＡ３０３（株式会社ＹＭＣ製）溶媒：メタノール−０．１％ＴＦＡ水溶液（９：１）流速：１．０ｍｌ／分検出：ＵＶ２８０ｎｍ保持時間：ＡＰ１１１５８Ａ１化合物は約１１．２分ＡＰ１１１５８Ａ３化合物は約１３．５分ＡＰ１１１５８Ｂ化合物は約７．８分薄層クロマトグラフィー条件固定層：シリカゲルｆＳ２０１（東京化成工業株式会社製展開溶媒：クロロホルム−アセトン−酢酸（１０：５：０．１）検出：ＵＶ２５４ｎｍＲｆ値：ＡＰ１１１５８Ａ１化合物は約０．２ＡＰ１１１５８Ａ３化合物は約０．４ＡＰ１１１５８Ｂ化合物は約０．１ＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合物のナトリウム塩の
抗菌活性を各種の病原性微生物に対して測定し、その最
小発育阻止濃度を求めた。その結果を表１に示す。

【００２４】表１に示したごとく、ＡＰ１１１５８Ａ
１，Ａ３、Ｂ化合物のナトリウム塩はＭＲＳＡ（ＭＳ１
６０３１株：群馬大学より分与）を含む各種の病原性微
生物に対して、顕著な抗菌活性を示しており、従来最も
有効とされているバンコマイシンに比較しても顕著な効
果が確認された。したがって、ＡＰ１１１５８Ａ１，Ａ
３、Ｂ化合物、またはそれらの塩は、これらの病原性微
生物を起因する感染症に対する治療又は予防剤として有
用である。なお検定に用いる微生物は、本願で用いた微
生物に限られる事なく、各種の寄託機関の標準菌株や各
施設での臨床分離株を利用する事ができ、容易に本願の
抗菌活性の効果が確認されるであろう。

【００２５】本発明のＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化
合物またはその塩を医薬として使用する際、ＡＰ１１１
５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合物またはその塩の他に、薬学的
に許容される担体とからなる事ができる。担体として
は、公知のものが使用でき、その性質によっては賦型
剤、結合剤、崩壊剤、潤沢剤、矯味矯臭剤、溶解補助
剤、懸濁剤、コーティング剤等と分類されることもある
が、例えば、ラクトース、コーンスターチ、ステアリン
酸マグネシウム等が挙げられる。医薬の典型例としては
ＡＰ１１１５８Ａ１，Ａ３、Ｂ化合物のナトリウム塩の
生理的食塩水溶液が例示される。

【００２６】本発明の医薬は、例えば抗生物質であり、
さらに詳しくは、抗ＭＲＳＡ剤である。本発明の医薬
は、種々の形態で投与され得るが、例えば錠剤、カプセ
ル剤、顆粒剤、シロップ剤等による経口投与または注射
剤（静脈内、筋肉内、皮下）、点眼剤、座薬、軟膏、ス
プレー、ローション等による非経口投与を挙げることが
できる。

【００２７】これらの医薬は、症状、年齢、体重、投与
方法及び剤形等によって異なるが通常は成人に対して1
日１ｍｇ乃至１０００ｍｇを投与することができる。

【００２８】

【実施例】次に実施例をあげて本発明を更に具体的に説
明するが、本発明はこの実施例によって限定されるもの
ではない。

【００２９】

【実施例１】（１）ＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化
合物の発酵生産グルコース１％、デキストリン１％、イーストエキス
０．５％、カゼイン水解物０．５％、ＣａＣＯ₃０．１
％の組成の培地（滅菌前ｐＨ７．０）を１５０ｍｌ容三
角フラスコ２本に各３５ｍｌずつ分注し、１１５℃で１
５分間滅菌した。これらにＫｉｎｅｏｓｐｏｒｉａｓ
ｐ．ＡＰ１１１５８（ＦＥＲＭＢＰ−６６５３）の斜
面培養物を一白金耳接種し、ロータリーシェーカー（毎
分２００回転）で３０℃、９６時間培養し、1次種培養
液とした。得られた1次種培養液を、５００ｍｌ容三角
フラスコ１２本に上記と同じ滅菌培地１００ｍｌ中へ４
ｍｌずつ接種し、ロータリーシェーカー（毎分２００回
転）で３０℃、４８時間培養し、２次種培養液とした。
こうして得た２次培養液をさらに、スターチ２％、デキ
ストリン２％、コーンスチープリカー１％、ドライイー
スト０．５％、ＮａＣｌ０．２５％、Ｋ₂ＨＰＯ₄０．２
％、ＣａＣＯ₃０．８％、ＣｏＣｌ₂０．００１％の組成
培地（滅菌前ｐＨ７．０）を５００ｍｌ容三角フラスコ
1本に各１００ｍｌずつ分注し、１１５℃で１５分間滅
菌した培地３００本に４ｍｌずつ接種し、３０℃で１９
２時間ロータリーシェーカー（毎分２００回転）上で培
養を行った。

【００３０】（２）ＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合
物の精製上記の培養方法で得られたブロス３０ｌを遠心分離器
（毎分４０００回転、１０分間）で菌体（１８００ｇ）
とろ液（２４ｌ）に分離した。得られた菌体にアセトン
（１５ｌ）を添加し、抽出操作を行った。抽出後菌体を
ろ過にて除去し、アセトン抽出液を減圧下に濃縮後、濃
縮物に水１５ｌを加えた後、酢酸エチル（８ｌ）を加え
て、１Ｎ塩酸でｐＨ２に調整し、酢酸エチルで抽出し
た。ろ液については酢酸エチル（１２ｌ）を加えて、１
Ｎ塩酸でｐＨ２に調整し、酢酸エチルで抽出した。菌体
及びろ液の酢酸エチル抽出液を混合し、水（１０ｌ）を
加え１Ｎアンモニア水でｐＨ９に調整し、目的物を水層
に転溶させた。得られた水層にクロロホルム（５ｌ）を
加え１Ｎ塩酸でｐＨ２に調整しクロロホルム抽出し、抽
出液を５０ｍｌに減圧濃縮した。得られた濃縮液にメタ
ノール５００ｍｌを加え目的物を沈殿物とした。この沈
殿物をグラスフィルター上に集め少量のクロロホルムに
溶解し、予めクロロホルム−アセトン−酢酸（１０：
５：０．１）にて作成したシリカゲルカラムクロマト
（４００ｍｌ）に付し上記溶媒で溶出し、２０ｍｌずつ
分画を行うと、ＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３化合物はフラ
クションＮｏ．１７〜５０に、ＡＰ１１１５８Ｂ化合物
はフラクションＮｏ．７０〜１５６に溶出されていた。
上述のＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３を含むフラクション
（Ｎｏ．１７〜５０）を集め減圧下で濃縮を行うと粗粉
末２９０ｍｇが得られた。次いでこの粗粉末１００ｍｇ
をジメチルスルホキシドに溶解し、その１０分の１量を
予めアセト二トリル−１０ｍＭＮＨ₄Ｃｌ（ｐＨ９）
（２５：７５）にて作成した逆相分取カラム（旭化成工
業、ＯＤＰ−９０、１０９ｍｌ）に付し、同混合溶媒で
展開し、１０ｍｌずつ分画した。クロロホルム−アセト
ン−酢酸（１０：５：１）の系を用いたシリカゲルＴＬ
ＣにてＲｆ値０．４０を示すフラクションＮｏ．４６〜
４９にＡＰ１１１５８Ａ３化合物成分、同じくＲｆ値
０．２０を示すフラクション６５〜７１にＡＰ１１１５
８Ａ１化合物成分を得た。同様の操作をを１０回行い、
ＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３化合物を含む各フラクション
をそれぞれ集めアセト二トリルを減圧濃縮後、クロロホ
ルムを加え、１Ｎ塩酸でｐＨ２に調整し、クロロホルム
抽出した。各クロロホルム層を減圧濃縮し、ヘキサンを
加え沈殿を生じせしめ、沈殿物をグラスフィルター上に
集め減圧乾燥すると、単一なＡＰ１１１５８Ａ１化合物
（３３ｍｇ）、Ａ３化合物（１９ｍｇ）の白色粉末が得
られた。得られたＡＰ１１１５８Ａ１化合物及びＡＰ１
１１５８Ａ３化合物の各種性状を検定したところ以下の
結果を示した。ＡＰ１１１５８Ａ１化合物の性状１）概観：白色粉末２）酸性、塩基性、中性の区別：酸性物質３）比旋光度：〔α〕_D ²²＝−４５±５°（ｃ＝１．
０、ＤＭＳＯ）４）分子量：ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ１１１０（Ｍ＋
Ｈ）より分子量は１１０９と判断した５）紫外部吸収スペクトルメタノール溶液で測定した結果 λ_maxｎｍ（Ｅ_1cm ^1%) ２１３（６５０）、２７８−２
８３（４７０）、３１０−３２０（２８５）アルカリ性メタノール溶液で測定した結果 λ_maxｎｍ（Ｅ_1cm ^1%) 末端吸収、２７８−２８３（５
１２）、３０４−３０９（３１５）６）赤外部吸収スペクトル図１の通りで、ＫＢｒ錠剤中の主な波数（ｃｍ^-1）は次
の通りである。

【００３１】３３５５、１６８１、１６３３、１６０
０、１５２５、１４８８、１３８６、１２１８、１１２
２、１０８９７）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ、ｄ−６Ｄ
ＭＳＯ）：図２に示す通りである。８）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ、ｄ−６Ｄ
ＭＳＯ）：図３に示す通りである。

【００３２】９）溶解性：クロロホルム、酢酸エチルに
可溶で、ヘキサンに不溶である。１０）呈色試験：ヨウ素蒸気との反応及び過マンガン酸
カリウム脱色反応に陽性を示し、ニンヒドリン反応に陰
性を示す。ＡＰ１１１５８Ａ３化合物の性状１）概観：白色粉末２）酸性、塩基性、中性の区別：酸性物質３）比旋光度：〔α〕_D ²²＝−７０±５°（ｃ＝１．
０、ＤＭＳＯ）４）分子量：ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ１１１０（Ｍ＋
Ｈ）より分子量は１１０９と判断した。

【００３３】５）紫外部吸収スペクトルメタノール溶液で測定した結果 λ_maxｎｍ（Ｅ_1cm ^1%) ２１１（５９５）、２７８−２
８３（４５５）、３２０−３３０（３０５）アルカリ性メタノール溶液で測定した結果 λ_maxｎｍ（Ｅ_1cm ^1%) 末端吸収、２７８−２８３（５
５５）、３０４−３０９（３５０）６）赤外部吸収スペクトル図４の通りで、ＫＢｒ錠剤中の主な波数（ｃｍ^-1）は次
の通りである。

【００３４】３３５４、１６７９、１６３１、１５９
６、１５２５、１４８６、１３８６、１２１８、１１２
４、１０８９７）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ、ｄ−６Ｄ
ＭＳＯ）：図５に示す通りである。８）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ、ｄ−６Ｄ
ＭＳＯ）：図６に示す通りである。

【００３５】９）溶解性：クロロホルム、酢酸エチルに
可溶で、ヘキサンに不溶である。１０）呈色試験：ヨウ素蒸気との反応及び過マンガン酸
カリウム脱色反応に陽性を示し、ニンヒドリン反応に陰
性を示す。上述のＡＰ１１１５８Ｂ化合物を含むフラクション（Ｎ
ｏ．７０〜１５６）を集め減圧下濃縮するとＡＰ１１１
５８Ｂ化合物を含む粗粉末１０１ｍｇが得られた。次い
でこの粗粉末をクロロホルムに溶解し、予めクロロホル
ム−アセトン−酢酸（１０：４：０．１）にて作成した
シリカゲルカラムクロマト（４００ｍｌ）に付し上記溶
媒で溶出し、２０ｍｌずつ分画を行うと、ＡＰ１１１５
８Ｂ化合物はフラクションＮｏ．８０〜１４４に溶出さ
れていた。ＡＰ１１１５８Ｂ化合物を含むフラクション
を集め減圧下濃縮し、約２ｍｌのクロロホルムに溶解
後、ヘキサンを加え沈殿を生じせしめ、沈殿物をグラス
フィルター上に集め減圧乾燥すると単一なＡＰ１１１５
８Ｂ化合物（５５ｍｇ）の白色粉末が得られた。得られ
たＡＰ１１１５８Ｂ化合物の各種性状を検定したところ
以下の結果を示した。

【００３６】１）概観：白色粉末２）酸性、塩基性、中性の区別：酸性物質３）比旋光度：〔α〕_D ²²＝−７２±５°（ｃ＝１．
０、ＤＭＳＯ）４）分子量：ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ１００３（Ｍ＋
Ｈ）より分子量は１００２と判断した。

【００３７】５）紫外部吸収スペクトルメタノール溶液で測定した結果 λ_maxｎｍ（Ｅ_1cm ^1%) ２１１（７１０）、２７８−２
８３（３７０）、３２０−３３０（３７０）アルカリ性メタノール溶液で測定した結果 λ_maxｎｍ（Ｅ_1cm ^1%) 末端吸収、２７８−２８３（４
５０）、３０４−３０９（３９０）６）赤外部吸収スペクトル図７の通りで、ＫＢｒ錠剤中の主な波数（ｃｍ^-1）は次
の通りである。

【００３８】３３６３、１６６０、１６３１、１６０
０、１５６４、１５４６、１５３１、１４９６、１３８
６、１１１８、１０８７７）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ、ｄ−６Ｄ
ＭＳＯ）：図８に示す通りである。８）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ、ｄ−６Ｄ
ＭＳＯ）：図９に示す通りである。

【００３９】９）溶解性：クロロホルム、酢酸エチルに
可溶で、ヘキサンに不溶である。１０）呈色試験：ヨウ素蒸気との反応及び過マンガン酸
カリウム脱色反応に陽性を示し、ニンヒドリン反応に陰
性を示す。

【００４０】

【実施例２】実施例１で得られたＡＰ１１１５８Ａ１、
Ａ３、Ｂ化合物各１５ｍｇをクロロホルム１０ｍｌに溶
解し、１０ｍｌの水を添加し、０．１ＮＮａＯＨでｐＨ
９に調整し、攪拌後、水層を凍結乾燥し、ＡＰ１１１５
８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合物の各ナトリウム塩をそれぞれ１
４．５ｍｇ、１４．０ｍｇ、１４．８ｍｇ白色粉末とし
て得た。

【００４１】

【実施例３】抗菌活性実施例２で得られたＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合
物の各ナトリウム塩を蒸留水に溶解し、各種濃度の水溶
液を作成し、表１に示す各種の病原性微生物に対する抗
菌活性を寒天希釈平板法（日本化学療法学会標準法）に
準じて試験した。その結果を表1に示す。

【００４２】

【表１】

【００４３】表１に示したごとく、ＡＰ１１１５８Ａ
１、Ａ３、Ｂ化合物は各種の病原性微生物に対して顕著
な抗菌活性を示した。特にＭＲＳＡ（ＭＳ１６０３１
株）に対し、既存のバンコマイシンがＭＩＣ値１．２５
μｇ／ｍｌであるのに対し、ＡＰ１１１５８Ａ１化合物
は０．０１μｇ／ｍｌ、ＡＰ１１１５８Ａ３化合物は
０．０２μｇ／ｍｌ、ＡＰ１１１５８Ｂ化合物は０．１
６μｇ／ｍｌと非常に強い抗菌活性を示した。従ってＡ
Ｐ１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合物はこれら病原菌、特
にＭＲＳＡに起因する感染症に対する抗菌剤として有用
である。

【００４４】

【実施例４】毒性試験実施例２で得られたＡＰ１１１５８Ａ１、Ａ３、Ｂ化合
物の各ナトリウム塩を生理的食塩水溶液で希釈し、１０
０ｍｇ／ｋｇをＩＣＲ系マウス３匹に静脈内投与した。
その結果いずれの化合物においても死亡例はなく、本発
明化合物は、安全性が高いことが確認された。

【００４５】

【発明の効果】本発明により、ＭＲＳＡを含む各種病原
菌に起因する感染症に有効である新規抗生物質を提供す
ることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】図１はＡＰ１１１５８Ａ１化合物のＫＢｒ錠剤
中での赤外吸収スペクトルを示す。

【図２】図２はＡＰ１１１５８Ａ１化合物のｄ６−ＤＭ
ＳＯ中で測定した¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）スペク
トルを示す。

【図３】図３はＡＰ１１１５８Ａ１化合物のｄ６−ＤＭ
ＳＯ中で測定した¹³Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）スペク
トルを示す。

【図４】図４はＡＰ１１１５８Ａ１化合物のＫＢｒ錠剤
中での赤外吸収スペクトルを示す。

【図５】図５はＡＰ１１１５８Ａ３化合物のｄ６−ＤＭ
ＳＯ中で測定した¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）スペク
トルを示す。

【図６】図６はＡＰ１１１５８Ａ３化合物のｄ６−ＤＭ
ＳＯ中で測定した¹³Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）スペク
トルを示す。

【図７】図７はＡＰ１１１５８Ｂ化合物のＫＢｒ錠剤中
での赤外吸収スペクトルを示す。

【図８】図８はＡＰ１１１５８Ｂ化合物のｄ６−ＤＭＳ
Ｏ中で測定した¹Ｈ−ＮＭＲ（４００ＭＨｚ）スペクト
ルを示す。

【図９】図９はＡＰ１１１５８Ｂ化合物のｄ６−ＤＭＳ
Ｏ中で測定した¹³Ｃ−ＮＭＲ（１００ＭＨｚ）スペクト
ルを示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続きＦターム(参考） 4B064 AH19 BA10 BD03 BE07 BE14 BG01 BG09 BH01 BH02 BH04 BH05 BH06 BH07 BH08 BH10 CA03 DA03 4H055 AA01 AA02 AA03 AB29 AC62 AD22 AD32 CA20 DA10 DA70 DA78 DA83 DA89

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】下記の物理化学的性状を有する化合物、ま
たはその塩。１）概観：白色粉末２）酸性、塩基性、中性の区別：酸性物質３）比旋光度：〔α〕_D ²²＝−４５±５°（ｃ＝１．
０、ＤＭＳＯ）４）分子量：ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ１１１０（Ｍ＋
Ｈ）５）紫外部吸収スペクトル：メタノール中の主な吸収ピ
ーク（ｎｍ）は次の通りである。２１３、２７８−２８３、３１０−３２０６）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤中の主な波数
（ｃｍ^-1）は次の通りである。３３５５、１６８１、１６３３、１６００、１５２５、
１４８８、１３８６、１２１８、１１２２、１０８９７）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ、ｄ６−Ｄ
ＭＳＯ）：図２に示す通りである。８）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ、ｄ６−Ｄ
ＭＳＯ）：図３に示す通りである。９）溶解性：クロロホルム、酢酸エチルに可溶で、ヘキ
サンに不溶である。１０）呈色試験：ヨウ素蒸気との反応及び過マンガン酸
カリウム脱色反応に陽性を示し、ニンヒドリン反応に陰
性を示す。
【請求項２】下記の物理化学的性状を有する化合物、ま
たはその塩。１）概観：白色粉末２）酸性、塩基性、中性の区別：酸性物質３）比旋光度：〔α〕_D ²²＝−７０±５°（ｃ＝１．
０、ＤＭＳＯ）４）分子量：ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ１１１０（Ｍ＋
Ｈ）５）紫外部吸収スペクトル：メタノール中の主な吸収ピ
ーク（ｎｍ）は次の通りである。２１１、２７８−２８３、３２０−３３０６）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤中の主な波数
（ｃｍ^-1）は次の通りである。３３５４、１６７９、１６３１、１５９６、１５２５、
１４８６、１３８６、１２１８、１１２４、１０８９７）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ、ｄ−６Ｄ
ＭＳＯ）：図５に示す通りである。８）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ、ｄ−６Ｄ
ＭＳＯ）：図６に示す通りである。９）溶解性：クロロホルム、酢酸エチルに可溶で、ヘキ
サンに不溶である。１０）呈色試験：ヨウ素蒸気との反応及び過マンガン酸
カリウム脱色反応に陽性を示し、ニンヒドリン反応に陰
性を示す。
【請求項３】下記の物理化学的性状を有する化合物、ま
たはその塩。１）概観：白色粉末２）酸性、塩基性、中性の区別：酸性物質３）比旋光度：〔α〕_D ²²＝−７２±５°（ｃ＝１．
０、ＤＭＳＯ）４）分子量：ＦＡＢ−ＭＳｍ／ｚ１００３（Ｍ＋
Ｈ）５）紫外部吸収スペクトル：メタノール中の主な吸収ピ
ーク（ｎｍ）は次の通りである。２１１、２７８−２８３、３２０−３３０６）赤外部吸収スペクトル：ＫＢｒ錠剤中の主な波数
（ｃｍ^-1）は次の通りである。３３６３、１６６０、１６３１、１６００、１５６４、
１５４６、１５３１、１４９６、１３８６、１１１８、
１０８７７）¹Ｈ−ＮＭＲスペクトル（４００ＭＨｚ、ｄ−６Ｄ
ＭＳＯ）：図８に示す通りである。８）¹³Ｃ−ＮＭＲスペクトル（１００ＭＨｚ、ｄ−６Ｄ
ＭＳＯ）：図９に示す通りである。９）溶解性：クロロホルム、酢酸エチルに可溶で、ヘキ
サンに不溶である。１０）呈色試験：ヨウ素蒸気との反応及び過マンガン酸
カリウム脱色反応に陽性を示し、ニンヒドリン反応に陰
性を示す。
【請求項４】請求項１、２、３に記載のいずれかの化
合物を産生する能力を有するＫｉｎｅｏｓｐｏｒｉａ属
に属する微生物を培養し、その培養物より該化合物を採
取する事を特徴とする該化合物またはその塩の製造方
法。
【請求項５】請求項１、２、３に記載されたいずれか
の化合物またはその塩を有効成分とする医薬。