JP2000226398A - Cleavage of nucleic acid and controlling agent for virus or bacterium - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To provide a method for cleaving a nucleic acid extremely effective in controlling viruses or bacteria, capable of manifesting powerfully inhibiting actions on infection with viruses even in a small dose and having a strong germicidal power even for the bacteria by which the nucleic acid which is an object of cleavage can moderately and surely be cleaved, and to obtain a controlling agent for the viruses or bacteria capable of imparting cleaving effects. SOLUTION: This method is to cleave a nucleic acid by actions of radicals chemically generated from a radical former and the radicals have a smaller peak area obtained when measuring the radicals by an electron spin resonance method (ESR) than that obtained when measuring a mixture of a 0.1 mM hydrogen peroxide with 0.05 mM copper chloride by the ESR. The nucleic acid of especially infected viruses or bacteria can moderately and surely be cleaved without adversely affecting biological cells of an animal or a plant which is a host by a cleaving power of feeble radicals chemically generated from the radical former for the nucleic acid.

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、ラジカル発生剤か
ら化学的に発生させたラジカルにより、核酸（ＤＮＡ又
はＲＮＡ）を切断する方法、及び該切断効果を与えるウ
ィルス又は細菌の防除剤に関する。The present invention relates to a method for cleaving a nucleic acid (DNA or RNA) by a radical chemically generated from a radical generator, and to a virus or bacterial control agent which gives the cleaving effect.

【０００２】[0002]

【従来の技術及び発明が解決しようとする課題】現在、
我々は、ウィルスや細菌などの感染により様々な被害を
被っている。例えば、家畜、養殖魚、作物などに経済的
な損失を与える病害のみならず、インフルエンザ、脳
炎、肝炎等のヒトの健康に及ぼす影響をも含めるとその
被害は計り知れないものになると言われている。これら
ウィルスや細菌などの感染による被害の中でも、特にウ
ィルスの感染による被害はその根本的対策がない点で更
に深刻である。2. Description of the Related Art
We are suffering from various infections such as viruses and bacteria. For example, not only diseases that cause economic loss to livestock, farmed fish, and crops, but also the effects on human health, such as influenza, encephalitis, and hepatitis, are said to be incalculable if they include the effects on human health. I have. Among the damages caused by these viruses and bacteria, the damages caused by the viruses are particularly serious because there is no fundamental countermeasure.

【０００３】植物を例にとると、畑、水田、或いは各種
施設で栽培されるタバコ、トマト、ジャガイモ、キュウ
リ、スイカ、ダイコン、イチゴなどの作物は、タバコモ
ザイクウィルス、キュウリモザイクウィルス、キュウリ
緑斑モザイクウィルス、ジャガイモＹウィルス等に罹患
することにより、生産力が低下し、衰弱、枯死を招き、
著しい被害を受ける。Taking plants as examples, crops such as tobacco, tomato, potato, cucumber, watermelon, radish and strawberry cultivated in a field, paddy field or various facilities are tobacco mosaic virus, cucumber mosaic virus, cucumber green spot. By suffering from mosaic virus, potato Y virus, etc., productivity decreases, leading to weakness and death,
Receive significant damage.

【０００４】これらの植物ウィルスは、他の作物、雑
草、種苗、土壌中などに通常存在しており、管理作業時
の接触、昆虫の吸汁などによって周囲の作物に伝染し、
被害を更に拡大する。[0004] These plant viruses are usually present in other crops, weeds, seedlings, soil, etc., and are transmitted to surrounding crops by contact during management work, sucking insects, etc.
Further expand the damage.

【０００５】このような植物ウィルス病は、現代におい
て、熱療法と生長点組織培養法による治療が可能であ
る。しかしながら、これらの方法は、品種全株がウィル
スに罹患したときにその品種をウィルスフリー種に再生
する手段としては有効であるが、圃場で発生したウィル
ス病を防除する場合には全く役に立たないという問題が
ある。[0005] Such plant virus diseases can be treated by heat therapy and growth point tissue culture in modern times. However, these methods are effective as a means for regenerating the varieties into virus-free varieties when all varieties are infected with the virus, but they are completely useless when controlling a virus disease that has occurred in the field. There's a problem.

【０００６】従って、ウィルス病を有効に治療するため
には、薬剤を散布してウィルスを防除するという手段が
どうしても必要であり、早急に、有効な抗植物ウィルス
剤の開発を行い、それを実用化していくことが望まれて
いる。[0006] Therefore, in order to effectively treat a viral disease, it is absolutely necessary to apply a medicine to control the virus. Therefore, an effective anti-plant virus agent is developed immediately, and it is put to practical use. It is hoped that it will be transformed.

【０００７】このような抗植物ウィルス剤については、
１９５０年頃から多種類の化学物質でウィルスの増殖阻
害性の点から研究が行われているが、増殖を阻害する物
質の多くは宿主の代謝系をも阻害してしまい、薬害を生
じるなどの様々な問題点が見つかり、次第に研究の報告
は減少していった。[0007] With respect to such anti-plant virus agents,
Around 1950, research has been conducted on the inhibitory effects of a variety of chemicals on the growth of viruses. However, many substances that inhibit growth also inhibit the host's metabolic system, causing various harms such as phytotoxicity. Problems were discovered, and the number of studies reported gradually declined.

【０００８】一方、ウィルスの感染阻害性の点からも研
究が行われており、感染を阻害する物質は、一度、植物
がウィルスに感染してしまった後では、その増殖を抑え
ることができないため、感染をほぼ完全に阻害できるよ
うな強力な物質でなければならないが、反面、宿主の代
謝に作用せず薬害の心配が少ない点から実用化しやすい
と考えられ、このような感染阻害剤についてはかなり古
くから現在に至るまで多くの報告がなされている。[0008] On the other hand, studies are also being conducted on the point of inhibiting virus infection. Substances that inhibit infection cannot suppress the growth of plants once the virus has been infected. However, it must be a strong substance that can completely inhibit infection, but on the other hand, it is considered that it is easy to put into practical use because it does not act on the metabolism of the host and there is little concern about phytotoxicity. Many reports have been made since the very old days.

【０００９】最近では、ウィルスの抵抗誘起性の点か
ら、植物が本来持っているウィルス抵抗性を防除に利用
する方法、即ち、薬剤によって植物にウィルス抵抗性を
誘導してウィルス病を防除する方法が研究されている。Recently, from the viewpoint of inducing virus resistance, a method of utilizing the inherent virus resistance of a plant for control, that is, a method of inducing virus resistance in a plant with a drug to control a viral disease. Has been studied.

【００１０】このように抗植物ウィルス剤については、
増殖阻害性、感染阻害性、抵抗誘起性の観点から数多く
の研究がなされているが、今までに抗植物ウィルス剤と
して実用化されたものはごくわずかである。As described above, anti-plant virus agents include:
Numerous studies have been made from the viewpoints of growth inhibition, infection inhibition, and resistance-inducing properties, but very few have been practically used as anti-plant virus agents so far.

【００１１】また、動物ウィルスについても同様の問題
があり、根本的にウィルスを不活性化する方法は今のと
ころ見出されていないのが現状である。[0011] In addition, animal viruses have the same problem, and a method of fundamentally inactivating the virus has not been found so far.

【００１２】本発明は、上記事情に鑑みなされたもの
で、切断対象である核酸を穏やかにかつ確実に切断する
ことができ、ウィルス又は細菌の防除に極めて有効であ
り、低用量でウィルスの感染を強力に阻害する作用を発
揮すると共に、細菌に対しても強い殺菌力を有する核酸
の切断方法及び該切断効果を与えるウィルス又は細菌の
防除剤を提供することを目的とする。The present invention has been made in view of the above circumstances, and can gently and surely cleave nucleic acids to be cleaved, is extremely effective in controlling viruses or bacteria, and is capable of infecting viruses with a low dose. An object of the present invention is to provide a method for cleaving a nucleic acid, which has a strong bactericidal activity against bacteria while exhibiting a strong inhibitory effect on bacteria, and an agent for controlling a virus or a bacterium which gives the cleavage effect.

【００１３】[0013]

【課題を解決するための手段及び発明の実施の形態】本
発明者は、上記目的を達成するため鋭意検討を重ねた結
果、特定のラジカル発生剤から化学的に発生させた微弱
なラジカルが核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ）を緩やかにかつ
確実に切断し得ると共に、そのラジカル強度が適切なも
のであるため、宿主である生体細胞には悪影響を及ぼさ
ないことを知見した。Means for Solving the Problems and Embodiments of the Invention The present inventors have conducted intensive studies in order to achieve the above object, and as a result, have found that a weak radical chemically generated from a specific radical generator can be used as a nucleic acid. (DNA or RNA) can be gently and reliably cleaved, and its radical strength is appropriate, so that it has been found that it has no adverse effect on living cells as hosts.

【００１４】即ち、ラジカル発生剤から化学的に発生さ
せたラジカルが、ＥＳＲ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｓｐｉｎ
Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ；電子ス
ピン共鳴法）で測定したとき、そのピーク面積が０．１
ｍＭの過酸化水素と０．０５ｍＭの塩化銅との混合物を
ＥＳＲで測定したとき得られるピーク面積よりも小さい
こと、好ましくはＥＳＲで測定したとき、磁束密度３２
５〜３４５ｍＴの間にピークが観察されるポリフェノー
ル類及びアスコルビン酸類から選ばれる少なくとも１種
の化合物と遷移金属から選ばれる少なくとも１種の金属
塩との混合物を含有するラジカル発生剤から化学的に発
生させたラジカルが、核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ）を切断
するには十分かつ適切なラジカル強度を有し、宿主であ
る動物や植物の生体細胞を障害することがないという優
れた切断特性を備えていることを知見した。That is, radicals chemically generated from the radical generator are converted into ESR (Electron Spin).
When measured by Resonance absorption (electron spin resonance method), the peak area was 0.1%.
The peak area obtained when a mixture of mM mM hydrogen peroxide and 0.05 mM copper chloride is measured by ESR is smaller than the peak area obtained by ESR.
Generated chemically from a radical generator containing a mixture of at least one compound selected from polyphenols and ascorbic acids and a metal salt selected from transition metals, the peak of which is observed between 5 and 345 mT The radicals have sufficient and appropriate radical strength to cleave nucleic acids (DNA or RNA), and have excellent cleavage properties that do not damage living cells of animals or plants as hosts. I found that.

【００１５】また、本発明者は、上記核酸の切断方法に
用いるラジカル発生剤を主成分とする防除剤が、動物や
植物に感染した細菌又はウィルスの核酸（ＤＮＡ又はＲ
ＮＡ）を宿主の生体細胞には悪影響を及ぼすことなく穏
やかにかつ確実に切断し得て、その機能を奪い、不活化
するものであり、従来からの課題を解決し得るウィルス
又は細菌の防除剤であることを見出し、本発明をなすに
至った。Further, the present inventor has reported that the controlling agent containing a radical generator as a main component used in the method for cleaving a nucleic acid described above may be a nucleic acid (DNA or R) of a bacterium or virus that has infected animals or plants.
NA), which can gently and surely cleave NA) without adversely affecting living cells of the host, deprive its function and inactivate it, and can solve the conventional problems. Thus, the present invention has been accomplished.

【００１６】従って、本発明は、（１）ラジカル発生剤
から化学的に発生させたラジカルの作用により核酸を切
断する方法であって、上記ラジカルがＥＳＲ（電子スピ
ン共鳴法）で測定したとき、そのピーク面積が０．１ｍ
Ｍの過酸化水素と０．０５ｍＭの塩化銅との混合物で測
定したとき得られるピーク面積よりも小さいラジカルで
あることを特徴とする核酸の切断方法、及び、（２）上
記ラジカル発生剤を主成分とすることを特徴とするウィ
ルス又は細菌の防除剤を提供する。Accordingly, the present invention provides (1) a method for cleaving a nucleic acid by the action of a radical chemically generated from a radical generator, wherein the radical is measured by ESR (electron spin resonance). The peak area is 0.1m
(2) a method for cleaving a nucleic acid, wherein the radical is smaller than a peak area obtained when measured with a mixture of M hydrogen peroxide and 0.05 mM copper chloride; Provided is a virus or bacterial control agent characterized by being a component.

【００１７】以下、本発明につき更に詳しく説明する。
本発明の核酸の切断方法は、ラジカル発生剤から化学的
に発生させたラジカルにより、核酸（ＤＮＡ又はＲＮ
Ａ）を切断する方法である。Hereinafter, the present invention will be described in more detail.
In the method for cleaving a nucleic acid according to the present invention, a nucleic acid (DNA or RN) is generated by a radical chemically generated from a radical generator.
This is a method of cutting A).

【００１８】ここで、上記ラジカル発生剤から発生され
るラジカルは、ＥＳＲ（Ｅｌｅｃｔｒｏｎ Ｓｐｉｎ
Ｒｅｓｏｎａｎｃｅ ａｂｓｏｒｐｔｉｏｎ；電子スピ
ン共鳴法）で測定したとき、そのピーク面積が０．１ｍ
Ｍの過酸化水素と０．０５ｍＭの塩化銅との混合物をＥ
ＳＲで測定したときのピーク面積よりも小さいラジカル
であり、具体的には、０．１ｍＭの過酸化水素と０．０
５ｍＭの塩化銅との混合物より得られるピーク面積を１
とした時の面積比が０．００１〜０．９９９、好ましく
は０．００５〜０．７、より好ましくは０．００５〜
０．５、更に好ましくは０．０１〜０．３である。この
ピーク面積比はラジカル強度を反映する指標となるもの
であり、ラジカルのピーク面積が０．１ｍＭの過酸化水
素と０．０５ｍＭの塩化銅との混合物をＥＳＲで測定し
たときのピーク面積よりも大きいとラジカル強度が強す
ぎて、宿主である生体細胞に障害が生じる。Here, the radical generated from the radical generator is ESR (Electron Spin).
When measured by Resonance absorption (electron spin resonance method), the peak area was 0.1 m.
A mixture of M hydrogen peroxide and 0.05 mM copper chloride was added to E
It is a radical smaller than the peak area measured by SR, specifically, 0.1 mM hydrogen peroxide and 0.0
The peak area obtained from the mixture with 5 mM copper chloride was 1
When the area ratio is 0.001 to 0.999, preferably 0.005 to 0.7, more preferably 0.005 to
0.5, more preferably 0.01 to 0.3. This peak area ratio is an index that reflects the radical intensity, and the peak area of the radical is smaller than the peak area when a mixture of 0.1 mM hydrogen peroxide and 0.05 mM copper chloride is measured by ESR. If it is large, the radical strength is too strong, and damages the host living cells.

【００１９】上記ラジカルは、ＥＳＲで測定したとき、
磁束密度３２５〜３４５ｍＴ、特に３３０〜３４０ｍＴ
の間にピークが観察されるものが好ましい。The above radical, as measured by ESR,
Magnetic flux density 325-345 mT, especially 330-340 mT
It is preferable that a peak is observed between the two.

【００２０】また、本発明の微弱なラジカルは、ポリフ
ェノール類及びアスコルビン酸類から選ばれる少なくと
も１種の化合物と遷移金属から選ばれる少なくとも１種
の金属塩との混合物を含むラジカル発生剤から化学的に
発生されるものが好ましい。Further, the weak radical of the present invention can be produced from a radical generator containing a mixture of at least one compound selected from polyphenols and ascorbic acids and at least one metal salt selected from transition metals. Generated ones are preferred.

【００２１】上記ポリフェノール類としては、リグニ
ン、タンニン、カテキン、没食子酸などが挙げられ、こ
れらの１種を単独で又は２種以上を組み合わせて用いる
ことができる。Examples of the polyphenols include lignin, tannin, catechin, gallic acid and the like, and one of these can be used alone or in combination of two or more.

【００２２】アスコルビン酸類としては、アスコルビン
酸及びそのアルカリ金属塩、エリソルビン酸及びそのア
ルカリ金属塩などが挙げられ、中でもエリソルビン酸及
びそのアルカリ金属塩がＤＮＡ切断効果の面から好まし
い。Examples of the ascorbic acids include ascorbic acid and its alkali metal salts, erythorbic acid and its alkali metal salts, and among them, erythorbic acid and its alkali metal salts are preferred from the viewpoint of DNA cutting effect.

【００２３】また、遷移金属塩としては、銅、亜鉛、
鉄、マンガン、チタン、ジルコニウム等の硫酸塩、塩化
物塩、リン酸塩などが挙げられ、これらの１種又は２種
以上を用いることができる。これらの中では銅又は鉄の
塩が最も効果の面から好ましい。The transition metal salts include copper, zinc,
Sulfates such as iron, manganese, titanium and zirconium, chlorides, phosphates and the like can be mentioned, and one or more of these can be used. Of these, salts of copper or iron are preferred from the viewpoint of the most effect.

【００２４】本発明のラジカル発生剤において、ポリ
フェノール類及びアスコルビン酸類から選ばれる少なく
とも１種の化合物と、遷移金属から選ばれる少なくと
も１種の金属塩との混合割合は、特に制限されないが、
通常モル比で：＝１０００：１〜１０：１、好まし
くは１００：１〜５０：１である。In the radical generator of the present invention, the mixing ratio of at least one compound selected from polyphenols and ascorbic acids and at least one metal salt selected from transition metals is not particularly limited.
The molar ratio is usually: 1000: 1 to 10: 1, preferably 100: 1 to 50: 1.

【００２５】本発明の核酸の切断方法は、切断対象であ
る核酸（ＤＮＡ又はＲＮＡ）を含む試料にラジカル発生
剤を所定濃度で添加混合し、ラジカルを核酸に作用させ
ることにより、核酸を穏やかにかつ確実に切断するもの
である。In the nucleic acid cleavage method of the present invention, a radical generator is added to a sample containing a nucleic acid (DNA or RNA) to be cleaved at a predetermined concentration and mixed, and the radical is allowed to act on the nucleic acid. And it cuts reliably.

【００２６】また、本発明の核酸の切断方法は、従来か
ら知られている制限酵素を用いたＤＮＡの特定部位を特
異的に切断する方法、超音波処理や他のせん断法のよう
に物理的な作用による方法とは全く異なるものであり、
特定のラジカル発生剤から化学的に発生されたラジカル
により、切断対象である核酸のみを周囲の生体細胞を何
ら傷付けることなく切断し得、その機能を確実に奪うこ
とができるものである。The nucleic acid cleavage method of the present invention may be a method for specifically cutting a specific site of DNA using a conventionally known restriction enzyme, or a physical method such as ultrasonic treatment or another shearing method. Method is completely different from
With a radical chemically generated from a specific radical generator, only a nucleic acid to be cleaved can be cleaved without damaging surrounding living cells at all, and its function can be surely deprived.

【００２７】次に、本発明の防除剤は、上記特定のラジ
カル発生剤を主成分として含むものであり、これをその
まま防除剤として使用できるものであるが、通常は上記
ラジカル発生剤に、担体、更に必要に応じ界面活性剤、
補助剤などを混合して例えば粒剤、粉剤、乳剤、懸濁
剤、水和剤などの態様で使用することができ、その態様
に応じて、塗布したり、噴霧したり、散布したり、植物
の場合は土中に散布する方法などにより用いることがで
きる。Next, the controlling agent of the present invention contains the above-mentioned specific radical generator as a main component, and can be used as it is as a controlling agent. And, if necessary, a surfactant,
Auxiliaries and the like can be mixed and used, for example, in the form of granules, powders, emulsions, suspensions, wettable powders, and the like, and depending on the form, can be applied, sprayed, or sprayed, In the case of a plant, it can be used by a method of spraying it in the soil.

【００２８】なお、上記ラジカル発生剤の配合量は防除
剤全体の０．１〜５０重量％、好ましくは１〜１０重量
％の範囲である。ラジカル発生剤の配合量が少なすぎる
と核酸の切断率、殺菌率が低下し、ウィルス又は細菌の
防除効果が十分でなくなる場合があり、一方、多すぎる
とラジカル強度が必要以上に強くなり、宿主である生体
細胞に障害を与えてしまう場合がある。The amount of the radical generator is in the range of 0.1 to 50% by weight, preferably 1 to 10% by weight, based on the entire control agent. If the amount of the radical generator is too small, the nucleic acid cleavage rate and the bactericidal rate may be reduced, and the effect of controlling viruses or bacteria may not be sufficient. In some cases, the living cells may be damaged.

【００２９】上記担体としては、固体担体又は液体担体
を好適に用いることができ、固体担体としては、カオリ
ンクレー、アタパルジャイトクレー、タルク、ベントナ
イト、珪藻土、炭酸カルシウム、無水ケイ酸、大豆粉、
クルミ粉、澱粉、木粉、結晶セルロース、ポリ塩化ビニ
ル、ポリ酢酸ビニル、ポリビニルアルコールなどが挙げ
られる。液体担体としては、水、メタノール、エタノー
ル、エチレングリコール、アセトン、メチルエチルケト
ン、エチルエーテル、ベンゼン、トルエン、キシレン、
四塩化炭素、ケロシン、鉱油などが挙げられる。As the carrier, a solid carrier or a liquid carrier can be suitably used. Examples of the solid carrier include kaolin clay, attapulgite clay, talc, bentonite, diatomaceous earth, calcium carbonate, anhydrous silicic acid, soybean powder,
Walnut powder, starch, wood flour, crystalline cellulose, polyvinyl chloride, polyvinyl acetate, polyvinyl alcohol and the like. Liquid carriers include water, methanol, ethanol, ethylene glycol, acetone, methyl ethyl ketone, ethyl ether, benzene, toluene, xylene,
Carbon tetrachloride, kerosene, mineral oil and the like.

【００３０】上記界面活性剤は、乳化、分散、湿潤など
を付与することを目的として添加するものであり、非イ
オン性、陰イオン性、陽イオン性及び両性イオン性のい
ずれのものでもよく、通常は、非イオン性及び陰イオン
性のものが好適である。The above-mentioned surfactant is added for the purpose of imparting emulsification, dispersion, wetting, etc., and may be any of nonionic, anionic, cationic and zwitterionic. Usually, nonionic and anionic ones are preferred.

【００３１】非イオン性界面活性剤としては、ポリオキ
シエチレンアルキルエーテル、ポリオキシエチレンアル
キルアリルエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂
肪酸エステル、ソルビタン脂肪酸エステル、ポリオキシ
エチレンポリオキシプロピレンブロックコポリマーなど
が例示される。Examples of the nonionic surfactant include polyoxyethylene alkyl ether, polyoxyethylene alkyl allyl ether, polyoxyethylene sorbitan fatty acid ester, sorbitan fatty acid ester, and polyoxyethylene polyoxypropylene block copolymer.

【００３２】陰イオン性界面活性剤としては、アルキル
硫酸エステル塩、アルキル（アリール）スルホン酸塩、
ジアルキルスルホコハク酸塩、ポリオキシエチレンアル
キルアリールエーテルリン酸エステル塩などが挙げられ
る。Examples of the anionic surfactant include an alkyl sulfate, an alkyl (aryl) sulfonate,
Examples include dialkyl sulfosuccinates and polyoxyethylene alkyl aryl ether phosphates.

【００３３】上記界面活性剤の配合量は防除剤全体の
０．０１〜１０重量％、好ましくは０．１〜５重量％の
範囲である。The amount of the surfactant is 0.01 to 10% by weight, preferably 0.1 to 5% by weight, based on the whole control agent.

【００３４】更に、製剤の性状を改善し、効果を高める
目的で、補助剤を添加することができ、このような補助
剤としてはカゼイン、ゼラチン、アルブミン、リグニン
スルホン酸塩、アルギン酸塩、ニカワ、カルボキシメチ
ルセルロース、アラビアガムなどが挙げられる。また、
防腐剤、酸化防止剤、キレート剤、ｐＨ調整剤などを適
宜配合することもできる。Further, an auxiliary agent can be added for the purpose of improving the properties of the preparation and enhancing the effect. Examples of the auxiliary agent include casein, gelatin, albumin, ligninsulfonate, alginate, glue, Carboxymethyl cellulose, gum arabic and the like. Also,
Preservatives, antioxidants, chelating agents, pH adjusters and the like can also be appropriately compounded.

【００３５】本発明の防除剤は、ウィルス又は細菌に対
して用いることができ、ウィルスの場合は、ＤＮＡウィ
ルスでも、ＲＮＡウィルスでもよく、また、動物ウィル
ス、植物ウィルス、細菌ウィルス（バクテリオファー
ジ）のいずれにも制限なく用いることができる。The control agent of the present invention can be used against a virus or a bacterium. In the case of a virus, it may be a DNA virus or an RNA virus, and may be an animal virus, a plant virus, or a bacterial virus (bacteriophage). Any of them can be used without limitation.

【００３６】例えば、植物ウィルス防除剤として使用す
る場合には、対応し得る植物ウィルスとしては、特に汁
液伝染性植物ウィルス、生物媒介伝染性植物ウィルスな
どが好適である。For example, when used as a plant virus controlling agent, suitable plant viruses include, in particular, sap-borne virus, organism-borne virus, and the like.

【００３７】具体的には、タバコモザイクウィルス、タ
バコラットウィルス、タバコ矮化ウィルス、タバコ葉巻
ウィルス、タバコ脈葉モザイクウィルス、タバコ壊疽萎
縮ウィルス、タバコストリークウィルス、ジャガイモＸ
ウィルス、ジャガイモＹ，Ｓ，Ｍ，Ａウィルス、ジャガ
イモ黄斑ウィルス、ジャガイモモモップトップウィル
ス、ジャガイモ葉巻ウィルス、アルファルファモザイク
ウィルス、キュウリモザイクウィルス、キュウリ緑斑モ
ザイクウィルス、キュウリ黄化ウィルス、カボチャモザ
イクウィルス、トマト黄化壊疽ウィルス、トマト輪点ウ
ィルス、サトウキビモザイクウィルス、イネ萎縮ウィル
ス、イネ縞葉枯ウィルス、イネ黒条萎縮ウィルス、イチ
ゴモットルウィルス、イチゴベインバンデングウィル
ス、イチゴマイルドイエローエッジウィルス、イチゴリ
ンクルウィルス、ソラマメウイルトウィルス、メロン壊
疽斑点ウィルス等が挙げられる。Specifically, tobacco mosaic virus, tobacco rat virus, tobacco dwarf virus, tobacco cigar virus, tobacco vein mosaic virus, tobacco gangrene dwarf virus, tobacco streak virus, potato X
Virus, Potato Y, S, M, A virus, Potato yellow spot virus, Potato mop top virus, Potato cigar virus, Alfalfa mosaic virus, Cucumber mosaic virus, Cucumber green spot mosaic virus, Cucumber yellow virus, Pumpkin mosaic virus, Tomato Yellow gangrene virus, tomato ring spot virus, sugarcane mosaic virus, rice dwarf virus, rice stripe virus, rice black streak virus, strawberry mottle virus, strawberry vein banding virus, strawberry mild yellow edge virus, strawberry wrinkle virus And broad bean virus, melon gangrene spot virus and the like.

【００３８】また、動物ウィルスとしては、ワクチニア
ウィルス、オルフウィルス、種痘ウィルス、粘液腫ウィ
ルス、ヘルペスウィルス、サイトメガロウィルス、アデ
ノウィルス、パピローマウィルス、肝炎ウィルス、レオ
ウィルス、風疹ウィルス、粘膜病ウィルス、黄熱ウィル
ス、インフルエンザウィルス、麻疹ウィルス、水疱口疹
ウィルス、狂犬病ウィルス、ヒト免疫不全ウィルス、ポ
リオウィルス、ライノウィルス、コロナウィルス、ペル
ンウィルス等に対応することができる。Examples of animal viruses include vaccinia virus, orf virus, vaccinia virus, myxoma virus, herpes virus, cytomegalovirus, adenovirus, papilloma virus, hepatitis virus, reovirus, rubella virus, mucosal disease virus, and yellow virus. It can respond to fever virus, influenza virus, measles virus, vesicular rash virus, rabies virus, human immunodeficiency virus, poliovirus, rhinovirus, coronavirus, perunvirus and the like.

【００３９】細菌としては、炭疽菌、丹毒菌、コレラ
菌、腸炎ビブリオ、淋菌、髄膜炎菌、百日咳菌、ジフテ
リア菌、結核菌、緑膿菌、インフルエンザ菌、肺炎球
菌、歯周病菌、う触原因菌等に対応することができる。Bacteria include anthrax, erysipelas, cholera, Vibrio parahaemolyticus, gonorrhea, meningococcus, B. pertussis, diphtheria, tuberculosis, Pseudomonas aeruginosa, influenza, pneumococcus, periodontitis, and germplasm. It can respond to contact-causing bacteria.

【００４０】[0040]

【発明の効果】本発明によれば、ラジカル発生剤から化
学的に発生させた微弱なラジカルの作用により、特に動
物又は植物に感染したウィルス又は細菌の核酸（ＤＮＡ
又はＲＮＡ）を宿主の生体細胞には悪影響を及ぼさず、
穏やかにかつ確実に切断し、その機能を奪うことがで
き、高い感染阻害作用を有するものである。また、本発
明の防除剤は、低用量で高い感染阻害作用を発揮し得、
タバコモザイクウィルスなどの植物又は動物ウィルスや
細菌による病害を未然に防除することができる。According to the present invention, the nucleic acid (DNA) of a virus or a bacterium that infects an animal or a plant, in particular, by the action of a weak radical chemically generated from a radical generator.
Or RNA) does not adversely affect living cells of the host,
It gently and surely cuts, can deprive its function, and has a high infection inhibitory action. Further, the control agent of the present invention can exhibit a high infection inhibitory action at a low dose,
Diseases caused by plant or animal viruses or bacteria such as tobacco mosaic virus can be controlled in advance.

【００４１】[0041]

【実施例】以下、実施例及び比較例を示して本発明を具
体的に説明するが、本発明は下記実施例に制限されるも
のではない。EXAMPLES The present invention will be described in detail below with reference to examples and comparative examples, but the present invention is not limited to the following examples.

【００４２】[実施例１〜３、比較例１〜４]表１に示し
た濃度のラジカル発生剤を用い、下記〜の試験方法
によりＤＮＡ切断活性、殺菌率、及び細胞障害率をそれ
ぞれ測定した。結果を表１に併記する。[Examples 1 to 3 and Comparative Examples 1 to 4] Using the radical generators at the concentrations shown in Table 1, the DNA cleavage activity, the bactericidal rate, and the cytotoxicity rate were measured by the following test methods. . The results are also shown in Table 1.

【００４３】＜試験方法＞ ＤＮＡ切断活性 大腸菌ファージＤＮＡ（φＸ−１７４）２５０ｎｇと表
１の濃度のラジカル発生剤をｐＨ７．１のトリス塩酸緩
衝液２０μｌに溶解し、３７℃で３時間反応させ、その
後アガロースゲル電気泳動で分離し切断されたＤＮＡ量
を測定し、下記式によりＤＮＡの切断活性を求めた。<Test Method> DNA cleavage activity 250 ng of Escherichia coli phage DNA (φX-174) and a radical generator having the concentration shown in Table 1 were dissolved in 20 μl of Tris-HCl buffer (pH 7.1) and reacted at 37 ° C. for 3 hours. Thereafter, the amount of DNA separated and cleaved by agarose gel electrophoresis was measured, and the DNA cleavage activity was determined by the following formula.

【００４４】[0044]

【数１】 (Equation 1)

【００４５】殺菌率 アグロバクテリウム リゾジーンズ（Ａｇｒｏｂａｃｔ
ｅｒｉｕｍ ｒｈｉｚｏｇｅｎｅｓ）菌を２８℃で２４
時間前培養を行い、集菌後、生理食塩水に懸濁し、菌懸
濁液を作成した。次に、表１の濃度のラジカル発生剤を
含んだ生理食塩水９００μｌに菌懸濁液１００μｌを添
加し、２８℃で２時間反応させて試験液とした。その
後、試験液を生理食塩水で１０００〜１０００００倍に
希釈して平板培地に播種し、２８℃で２日間培養後、コ
ロニー数をカウントし、下記式により殺菌率を求めた。
なお、ブランクの菌数はラジカル発生剤を添加しない菌
の懸濁液を用いて同様にコロニー数をカウントしたもの
である。Sterilization rate Agrobacterium lyso jeans ( Agrobacter)
erium rhizogenes ) at 28 ° C. for 24 hours.
The cells were pre-cultured for an hour, collected, and suspended in a physiological saline to prepare a bacterial suspension. Next, 100 μl of the bacterial suspension was added to 900 μl of physiological saline containing a radical generator having the concentration shown in Table 1, and reacted at 28 ° C. for 2 hours to prepare a test solution. Thereafter, the test solution was diluted 1000 to 100,000 times with physiological saline, inoculated on a plate medium, cultured at 28 ° C. for 2 days, the number of colonies was counted, and the bactericidal rate was determined by the following formula.
The number of cells in the blank was obtained by counting the number of colonies in the same manner using a suspension of bacteria to which no radical generator was added.

【００４６】[0046]

【数２】 (Equation 2)

【００４７】細胞障害率 ３Ｔ３繊維芽細胞を培養し、表１の濃度のラジカル発生
剤を加えた培地を添加後、０℃で１時間放置した。次
に、この培地をＰＢＳで２回洗浄し、培地にアラマーブ
ルーを添加して３７℃に３時間保温した。その後、分光
光度計で５９０ｎｍの吸光度を測定し、下記式により細
胞障害率を求めた。なお、ブランクの吸光度はラジカル
発生剤を添加しない培地を用いて同様に吸光度を測定し
たものである。Cytotoxicity 3T3 fibroblasts were cultured, and a medium containing a radical generator at the concentration shown in Table 1 was added, and then left at 0 ° C. for 1 hour. Next, the medium was washed twice with PBS, Alamar Blue was added to the medium, and the medium was kept at 37 ° C. for 3 hours. Thereafter, the absorbance at 590 nm was measured with a spectrophotometer, and the cell injury rate was determined by the following equation. The absorbance of the blank was measured in the same manner using a medium to which no radical generator was added.

【００４８】[0048]

【数３】 (Equation 3)

【００４９】[0049]

【表１】 ＊０．１ｍＭの過酸化水素＋０．０５ｍＭの塩化銅をＥ
ＳＲ測定した時のピーク面積を１とした場合の面積比[Table 1] * 0.1 mM hydrogen peroxide + 0.05 mM copper chloride in E
Area ratio when the peak area when SR measurement is 1

【００５０】表１の結果から、比較例１〜３はラジカル
発生剤としてポリフェノール類及びアスコルビン酸類か
ら選ばれる化合物のみを用いており、細胞障害率は０％
と良好であるが、ＤＮＡ切断活性が極めて低く、殺菌率
が０％で細菌を殺菌することができないものである。比
較例４はラジカル発生剤として１ｍＭの過酸化水素＋５
０μＭの塩化銅を用いており、ＤＮＡ切断活性及び殺菌
率は高いものの、ラジカル強度が強すぎるため、細胞障
害率が高く、目的とする核酸の切断と同時に宿主である
生体細胞に障害を与えてしまうものである。これに対し
て、実施例１〜３はラジカル発生剤としてポリフェノー
ル類及びアスコルビン酸類から選ばれる化合物と遷移金
属塩との混合物を用いており、比較例４と同レベルの高
いＤＮＡ切断活性と殺菌率を有すると共に、細胞障害率
が極めて低いことが認められた。From the results shown in Table 1, in Comparative Examples 1 to 3, only compounds selected from polyphenols and ascorbic acids were used as radical generators, and the cell injury rate was 0%.
However, the DNA-cleaving activity is extremely low, and the bactericidal rate is 0%, so that bacteria cannot be killed. In Comparative Example 4, 1 mM hydrogen peroxide + 5 was used as a radical generator.
Although 0 μM copper chloride is used, the DNA cleavage activity and the bactericidal rate are high, but the radical strength is too strong, so the cell damage rate is high, and the target nucleic acid is simultaneously cleaved to damage the living cell as a host. It is a mess. In contrast, Examples 1 to 3 use a mixture of a compound selected from polyphenols and ascorbic acids and a transition metal salt as a radical generator, and have the same level of high DNA cleavage activity and bactericidal rate as Comparative Example 4. And a very low cytotoxicity rate.

【００５１】[実施例４]事前に水耕栽培により本葉２〜
３枚になるまで生長させたトマト（品種：大型福寿）苗
を、水（無処理区）又は１ｍＭのエリソルビン酸ナトリ
ウムと２０μＭの塩化銅を含んだ水溶液中に１，２，３
日間移した後、本葉にカーボランダム法によりタバコモ
ザイクウィルスを接種した（ＴＭＶ純化標品をｐＨ７の
リン酸緩衝液に懸濁したウィルス液を接種源とした）。
その後、栽培を続け、ウィルスを接種してから２週間後
にモザイク病の発病状態を観察した。結果を表２に示
す。[Example 4] The true leaves 2 to 2 were previously cultivated by hydroponics.
Tomato (cultivar: large fukushou) seedlings grown up to 3 seedlings were put in water (untreated area) or in an aqueous solution containing 1 mM sodium erythorbate and 20 μM copper chloride.
After transferring for one day, tobacco mosaic virus was inoculated to the true leaves by the carborundum method (a virus solution obtained by suspending a purified TMV sample in a phosphate buffer at pH 7 was used as an inoculum).
Thereafter, cultivation was continued, and the onset of mosaic disease was observed two weeks after inoculation of the virus. Table 2 shows the results.

【００５２】[0052]

【表２】 （１区７株）[Table 2] (7 shares per ward)

【００５３】表２の結果から、無処理区では高いモザイ
ク病の発症が見られたのに対し、エリソルビン酸ナトリ
ウム＋塩化銅で処理した区では発病が抑えられているこ
とが確認された。From the results shown in Table 2, it was confirmed that the mosaic disease was highly developed in the untreated group, whereas the disease was suppressed in the group treated with sodium erythorbate + copper chloride.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/375 Ａ６１Ｋ 31/375 45/00 45/00 (72)発明者 鬼木 隆行 東京都墨田区本所１丁目３番７号 ライオ ン株式会社内 (72)発明者 下津浦 勇雄 東京都墨田区本所１丁目３番７号 ライオ ン株式会社内 Ｆターム(参考） 4C057 MM10 4C084 AA02 AA03 AA16 AA18 MA02 MA17 NA01 NA14 ZA591 ZA661 ZA671 ZA812 ZB321 ZB331 ZC541 ZC611 4C086 AA01 AA02 BA03 HA04 HA10 HA11 MA02 MA04 NA01 NA14 ZA59 ZA66 ZA81 ZB32 ZB33 ZC54 ZC61 4C206 AA01 AA02 CA19 JB01 JB02 JB11 KA12 MA02 MA04 MA13 NA01 NA14 ZA59 ZA66 ZA81 ZB32 ZB33 ZC54 ZC61 4H011 AA01 AA04 BA06 BB03 BB08 BB18 DA13 DA14 DD03 ──────────────────────────────────────────────────の Continued on the front page (51) Int.Cl. ⁷ Identification symbol FI Theme coat ゛ (Reference) A61K 31/375 A61K 31/375 45/00 45/00 (72) Inventor Takayuki Oniki Headquarters Sumida-ku, Tokyo 1-3-7 in Lyon Co., Ltd. (72) Inventor Isao Shimotsuura 1-3-7 in Honjo, Sumida-ku, Tokyo F-Term in Lyon Co., Ltd. 4C057 MM10 4C084 AA02 AA03 AA16 AA18 MA02 MA17 NA01 NA14 ZA591 ZA661 ZA671 ZA812 ZB321 ZB331 ZC541 ZC611 4C086 AA01 AA02 BA03 HA04 HA10 HA11 MA02 MA04 NA01 NA14 ZA59 ZA66 ZA81 ZB32 ZB33 ZC54 ZC61 4C206 AA01 AA02 CA19 JB01 Z14 ZA13 ZB01 ZB01 ZB01 ZB01 ZB14 AA04 BA06 BB03 BB08 BB18 DA13 DA14 DD03

Claims (6)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 ラジカル発生剤から化学的に発生させた
ラジカルの作用により核酸を切断する方法であって、上
記ラジカルがＥＳＲ（電子スピン共鳴法）で測定したと
き、そのピーク面積が０．１ｍＭの過酸化水素と０．０
５ｍＭの塩化銅との混合物をＥＳＲで測定したとき得ら
れるピーク面積よりも小さいラジカルであることを特徴
とする核酸の切断方法。1. A method for cleaving a nucleic acid by the action of a radical chemically generated from a radical generator, wherein the radical has a peak area of 0.1 mM when measured by ESR (electron spin resonance method). Of hydrogen peroxide and 0.0
A method for cleaving a nucleic acid, characterized in that the radical is smaller than a peak area obtained when a mixture with 5 mM copper chloride is measured by ESR. 【請求項２】 上記ラジカルがＥＳＲで測定したとき、
磁束密度３２５〜３４５ｍＴの間に観察されるものであ
る請求項１記載の方法。2. When the radical is measured by ESR,
The method of claim 1 wherein the magnetic flux density is observed between 325 and 345 mT. 【請求項３】 上記ラジカル発生剤がポリフェノール類
及びアスコルビン酸類から選ばれる少なくとも１種の化
合物と遷移金属から選ばれる少なくとも１種の金属塩と
の混合物を含有したものである請求項１又は２記載の方
法。3. The radical generator according to claim 1, wherein the radical generator contains a mixture of at least one compound selected from polyphenols and ascorbic acids and at least one metal salt selected from transition metals. the method of. 【請求項４】 アスコルビン酸類がエリソルビン酸又は
そのアルカリ金属塩である請求項３記載の方法。4. The method according to claim 3, wherein the ascorbic acid is erythorbic acid or an alkali metal salt thereof. 【請求項５】 遷移金属塩が銅又は鉄の塩である請求項
３記載の方法。5. The method according to claim 3, wherein the transition metal salt is a copper or iron salt. 【請求項６】 請求項１乃至５のいずれか１項記載のラ
ジカル発生剤を主成分とすることを特徴とするウィルス
又は細菌の防除剤。6. A virus or bacterial control agent comprising the radical generator according to any one of claims 1 to 5 as a main component.