JP2000169395A - Medicine for lowering blood level of lipoprotein (a) - Google Patents

Abstract

PROBLEM TO BE SOLVED: To obtain the subject medicine for a mammal, useful for treatment of atherosclerosis or the like by including an effective amount of an apolipoprotein B secretion product/a microsome triglyceride-transfer protein inhibitor. SOLUTION: This medicine contains an apolipoprotein B secretion product/a microsome triglyceride-transfer protein inhibitor preferably 4'-trifiluoromethyl- biphenyl-2-carboxylic acid-[2-(1H-[1,2,4]triazol-3-ylmethyl)-1,2,3,4- tetrahydroisoquinolin-6-yl]amide in an amount effective for lowering the blood level of lipoprotein (a). A preferable daily dose of the inhibitor is within the range of about 0.1-1.0 mg/kg.

Description

【発明の詳細な説明】DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION

【０００１】[0001]

【発明の属する技術分野】本発明は、哺乳動物における
リポタンパク質の血液レベルを低下させる薬剤に関す
る。TECHNICAL FIELD The present invention relates to an agent for lowering lipoprotein blood levels in mammals.

【０００２】[0002]

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】糖タ
ンパク質であるアポリポタンパク質(ａ)(アポ(ａ))は肝
臓細胞から合成・分泌され、ヒトの場合には殆どが、Ｌ
ｐ(ａ)と呼ばれるハイブリッドリポタンパク質の形態に
て低密度リポタンパク質(ＬＤＬ)と関連して循環する。
アポ(ａ)とＬＤＬの主要タンパク質部分〔すなわち、ア
ポリポタンパク質Ｂ100(アポＢ100）〕との間の関連
は、アポ(ａ)における単一の非共有システイン残基の、
アポＢ100のカルボキシル末端におけるコンプリメンタ
リー（complimentary）非共有システイン残基への共有
結合を介して媒介される。2. Description of the Related Art Apolipoprotein (a) (apo (a)), which is a glycoprotein, is synthesized and secreted from liver cells.
Circulates in association with low density lipoprotein (LDL) in the form of a hybrid lipoprotein called p (a).
The association between apo (a) and the major protein portion of LDL [ie, apolipoprotein B100 (apoB100)] is that of a single non-covalent cysteine residue in apo (a)
It is mediated via a covalent bond to a complementary non-covalent cysteine residue at the carboxyl terminus of Apo B100.

【０００３】リポタンパク質という化学種が生物学にい
て関心を呼んでいるのは、ヒトにおけるＬｐ(ａ)のレベ
ルの増大が、アテローム性動脈硬化による心臓疾患や血
管疾患に対する危険性と関連しているという観察による
ものである。しかしながら、Ｌｐ(ａ)レベルを低下させ
ることは簡単ではないことがわかっている。なぜなら、
ＬＤＬのレベルを低下させるのに有効である種々の従来
法が、Ｌｐ(ａ)のレベルを低下させるのにはそれほど有
効ではないか、あるいは有効性がはっきりしないからで
ある。たとえば、ネオマイシン（単独またはナイアシン
と組み合わせて）は、数週間から数年にわたって投与す
ると、Ｌｐ(ａ)のレベルを低下させるのに有効であると
いうことが報告されている。Spinlerらによる“J. Ann.
Pharmacother., 28, 343 (1994)”を参照のこと。しか
しながら、高用量のナイアシンやネオマイシンを投与す
ると、多くの望ましくない臨床的副作用を引き起こすた
めに、この処方がもつ優れた点が制約を受ける。これと
は別に、フォシノプリル（アンジオテンシン変換酵素阻
害薬）を経口投与すると、処置の12週間後にＬｐ(ａ)の
レベルが低下することが示されている。しかしながら、
Ｌｐ(ａ)レベルの低下は、腎臓機能の向上を示した患者
にのみ顕著であり、したがってフォシノプリルのＬｐ
(ａ)低下能力は、単に向上した腎臓機能の間接的な結果
とみなすことができる。Keilaniらによる“Ann. Inter.
Med., 118, 246 (1993)”を参照のこと。さらに、特定
のステロイドホルモン（たとえばエストロゲン）がＬｐ
(ａ)のレベルを低下調整することが知られている。たと
えばFrazerらによる“Nature Genet, 9, 424 (1995)”
を参照のこと。しかしながら、エストロゲン単独による
治療では、子宮内膜ガンの危険性増大の恐れがあり、こ
のためエストロゲンは通常、プロゲステロンと組み合わ
せて投与される。このエストロゲン/プロゲステロン組
み合わせ物による短期間の治療は、Ｌｐ(ａ)のレベルを
低下させるための有効な治療法であるけれども、長期間
にわたる治療（すなわち６ヶ月以上）を行っても、エス
トロゲン単独による治療の際に観察されたのと同程度の
低下は得られない。Somaらによる“Arch. Internal. Me
d., 153, 1462 (1993)”およびSomaらによる“Chem. Ph
ys. Lipids, 345, 67 (1994)”を参照のこと。さらに、
ＬＤＬアフェレーシスが、Ｌｐ(ａ)のレベルを低下させ
るための有効な手段であることが示されている。Koizum
iらによる“Atherosclerosis, 100, 65 (1993)”を参照
のこと。しかしながら、アフェレーシスは１週１回の処
置を必要とする侵襲性のアプローチであり、したがって
選択すべき最新の治療法とは思われない。したがって、
Ｌｐ(ａ)またはその前駆体の形成を抑制する改良法は、
たとえばアテローム性動脈硬化症、早発の心筋梗塞、発
作、および冠状動脈バイパス手術後の再発狭窄症などを
含めた高リポタンパク血症から生じる病気や疾患の治療
に対して有用である。[0003] The species of lipoproteins has been of interest in biology because of the increased levels of Lp (a) in humans in connection with the risk of heart and vascular disease due to atherosclerosis. It is due to the observation that there is. However, it has been found that reducing Lp (a) levels is not easy. Because
Various conventional methods that are effective in lowering LDL levels are not as effective or less effective in lowering Lp (a) levels. For example, neomycin (alone or in combination with niacin) has been reported to be effective in lowering Lp (a) levels when administered over weeks to years. “J. Ann.
Pharmacother., 28 , 343 (1994) ". However, administering high doses of niacin or neomycin limits many of the undesirable clinical side effects that limit the superiority of this formulation. Alternatively, oral administration of fosinopril (an angiotensin converting enzyme inhibitor) has been shown to reduce Lp (a) levels after 12 weeks of treatment.
The decrease in Lp (a) levels is only significant in patients who showed an increase in renal function, and therefore fosinopril Lp (a)
(a) The ability to decrease can simply be considered an indirect result of improved renal function. “Ann. Inter.
Med., 118 , 246 (1993) ". In addition, certain steroid hormones (eg, estrogens) are Lp
It is known to lower the level of (a). For example, “Nature Genet, 9 , 424 (1995)” by Frazer et al.
checking ... However, treatment with estrogen alone may increase the risk of endometrial cancer, so estrogen is usually administered in combination with progesterone. Although this short-term treatment with an estrogen / progesterone combination is an effective treatment for lowering Lp (a) levels, estrogen alone does not affect long-term treatment (ie, 6 months or more). The reduction is not as good as that observed during treatment. "Arch. Internal. Me" by Soma et al.
d., 153 , 1462 (1993) "and Soma et al., Chem. Ph.
ys. Lipids, 345, 67 (1994) ".
LDL apheresis has been shown to be an effective means for lowering the level of Lp (a). Koizum
See Atherosclerosis, 100 , 65 (1993). However, apheresis is an invasive approach that requires weekly treatment and therefore does not appear to be the latest treatment of choice. Therefore,
An improved method for suppressing the formation of Lp (a) or its precursor is
For example, it is useful for treating diseases and disorders resulting from hyperlipoproteinemia, including atherosclerosis, premature myocardial infarction, stroke, restenosis after coronary artery bypass surgery.

【０００４】ミクロソームトリグリセリド転移タンパク
質（ＭＴＰ）は、トリグリセリド、コレステリルエステ
ル、およびリン脂質の輸送の媒介をすることが知られて
おり、リポタンパク質、キロミクロン、およびＶＬＤＬ
（超低密度リポタンパク質）を含有するアポリポタンパ
ク質Ｂのアセンブリーおけるメディエイタとして関わっ
ている。具体的に説明すると、ＭＴＰの亜細胞（ミクロ
ソームフラクションの管腔）分布および組織（肝臓と
腸）分布は、これらが血漿リポタンパク質のアセンブリ
ーのサイトであることから、ＭＴＰが血漿リポタンパク
質のアセンブリーにおいてある役割を果たしていると考
えられている。ＭＴＰのもつ膜間でのトリグリセリドの
輸送を触媒する能力はこうした考察と矛盾せず、またＭ
ＴＰが、小胞体膜における合成サイトから小胞体の管腔
内の発生期リポタンパク質粒子まで、トリグリセリドの
輸送を触媒することがあるということを示している。し
たがって、ＭＴＰを抑制する、および/またはアポＢ分
泌物を抑制する化合物は、アテローム性動脈硬化症およ
びそれに関連した他の病気の治療に有用である。このよ
うな化合物はさらに、ＭＴＰおよび/またはアポＢ分泌
物を抑制することによって、血清のコレステロールレベ
ルとトリグリセリドレベルを低下させることのできるよ
うな他の疾患または病気の治療にも有用である。このよ
うな病気としては、たとえば、高コレステロール血症、
高トリグリセリド血症、膵臓炎、肥満症、ならびに膵臓
炎、肥満症、および糖尿病に関連した高コレステロール
血症、高トリグリセリド血症、および高脂血症などがあ
る。詳細な説明については、たとえば、Wetterauらによ
る“Science, 258, 999-1001 (1992)”および Wetterau
らによる“Biochem. Biophys. Acta., 875, 610-617 (1
986)”を参照のこと。[0004] Microsomal triglyceride transfer protein (MTP) is known to mediate the transport of triglycerides, cholesteryl esters, and phospholipids, and is known to be lipoprotein, kilomicron, and VLDL.
It is involved as a mediator in the assembly of apolipoprotein B containing (very low density lipoprotein). Specifically, the subcellular (lumen of microsomal fraction) and tissue (liver and intestine) distributions of MTP indicate that MTP is involved in the assembly of plasma lipoproteins, since these are sites of plasma lipoprotein assembly. It is believed to play a role. The ability of MTP to catalyze the transport of triglycerides across membranes is consistent with these considerations, and
It shows that TP may catalyze the transport of triglycerides from synthesis sites in the endoplasmic reticulum membrane to nascent lipoprotein particles in the lumen of the endoplasmic reticulum. Accordingly, compounds that inhibit MTP and / or inhibit apo B secretion are useful for treating atherosclerosis and other diseases associated therewith. Such compounds are also useful for treating other diseases or conditions that can reduce serum cholesterol and triglyceride levels by inhibiting MTP and / or apo B secretion. Such diseases include, for example, hypercholesterolemia,
There are hypertriglyceridemia, pancreatitis, obesity, and hypercholesterolemia, hypertriglyceridemia, and hyperlipidemia associated with pancreatitis, obesity, and diabetes. For a detailed description, see, for example, “Science, 258 , 999-1001 (1992)” by Wetterau et al. And Wetterau
"Biochem. Biophys. Acta., 875 , 610-617 (1.
986) ”.

【０００５】Ｌｐ(ａ)の血液レベルを制御している正確
なメカニズムは現在明らかとなっていないが、Ｌｐ(ａ)
のレベルが、異化よりむしろ合成の段階において調整さ
れるということを示す事実が見いだされている。したが
って、ＶＬＤＬとアポリポタンパク質（アポＢ）の肝臓
分泌を抑制すると、アポＢが分泌前にデグラデーション
を起こし、これに伴って肝臓のアポＢレベルが低下する
ということが知られているので、また各Ｌｐ(ａ)粒子が
アポＢに結合したアポ(ａ)の１つのコピーを含んでいる
ので、アポＢ分泌物/ＭＴＰ阻害薬を投与することによ
って肝臓アポＢの濃度を低下させると、分泌されるＬｐ
(ａ)が減少し、これによって血液のＬｐ(ａ)レベルが低
下する、と考えられている。The exact mechanism controlling the blood level of Lp (a) is currently unknown, but Lp (a)
Have been found to indicate that the level of is regulated at the stage of synthesis rather than catabolism. Therefore, it is known that when hepatic secretion of VLDL and apolipoprotein (apo B) is suppressed, apo B undergoes a degradation before secretion, and the level of apo B in the liver decreases with this. Since each Lp (a) particle contains one copy of apo (a) bound to apoB, reducing the concentration of hepatic apoB by administering an apoB secretion / MTP inhibitor will Lp
It is believed that (a) decreases, thereby lowering blood Lp (a) levels.

【０００６】[0006]

【課題を解決するための手段】本発明は、リポタンパク
質(ａ)（Ｌｐ(ａ)）の血液レベルを低下させる必要のあ
る哺乳動物に、Ｌｐ(ａ)の血液レベルを低下させるのに
有効な量のアポリポタンパク質Ｂ分泌物/ミクロソーム
トリグリセリド転移タンパク質阻害薬を投与することを
含む、哺乳動物におけるＬｐ(ａ)の血液レベルを低下さ
せる方法に関する。DISCLOSURE OF THE INVENTION The present invention is effective for reducing the blood level of Lp (a) in a mammal in need of lowering the blood level of lipoprotein (a) (Lp (a)). A method for reducing blood levels of Lp (a) in a mammal, comprising administering an effective amount of an apolipoprotein B secretion / microsomal triglyceride transfer protein inhibitor.

【０００７】本発明の方法の好ましい実施態様において
は、アポＢ分泌物/ＭＴＰ阻害薬は、４'−トリフルオロ
メチル−ビフェニル−２−カルボン酸−[２−(１Ｈ−
[１,２,４］トリアゾール−３−イルメチル)−１,２,
３,４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル]−アミ
ド、４'−トリフルオロメチル−ビフェニル−２−カル
ボン酸−[２−(２−アセチルアミノエチル)−１,２,３,
４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル]−アミド、
９Ｈ−(４−[４−[４'−トリフルオロメチル−ビフェニ
ル−２−カルボニル）アミノ]−ピペリジン−１−イ
ル｝ブチル)−９Ｈ−フルオレン−９−カルボン酸−
(２,２,２−トリフルオロエチル)−アミド、９−[４−
[４−(２−ベンゾチアゾール−２−イル−ベンゾイルア
ミノ）ピペリジン−１−イル］ブチル]−９Ｈ−フルオ
レン−９−カルボン酸−(２,２,２−トリフルオロエチ
ル）アミド、[11ａ−Ｒ]−８−[(４−シアノフェニル）
メトキシ]−２−シクロペンチル−７−(プロプ−２−エ
ニル)−２,３,11,11ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ピラジノ
［１,２ｂ］イソキノリン−１,４−ジオン、[11ａ−Ｒ]
−シクロペンチル−７−(プロプ−２−エニル)−８−
[(ピリジン−２−イル）メトキシ]−２,３,11,11ａ−テ
トラヒドロ−６Ｈ−ピラジノ［１,２ｂ］イソキノリン
−１,４−ジオン、２−シクロペンチル−２−[４−(２,
４−ジメチルピリド［２,３−ｂ］インドール−９−イ
ルメチル）フェニル]−Ｎ−(２−ヒドロキシ−１−フェ
ニルエチル）アセトアミド、２−シクロペンチル−Ｎ−
(２−ヒドロキシ−１−フェニルエチル)−２−[４−(キ
ノリン−２−イルメトキシ)−フェニル］アセトアミ
ド、これら化合物の水和物、これら化合物の立体異性
体、ならびに前記化合物、前記水和物、および前記立体
異性体の医薬用として許容しうる塩からなる群から選ば
れる化合物である。In a preferred embodiment of the method of the present invention, the apo B secretion / MTP inhibitor is 4'-trifluoromethyl-biphenyl-2-carboxylic acid- [2- (1H-
[1,2,4] triazol-3-ylmethyl) -1,2,
3,4-tetrahydroisoquinolin-6-yl] -amide, 4'-trifluoromethyl-biphenyl-2-carboxylic acid- [2- (2-acetylaminoethyl) -1,2,3,
4-tetrahydroisoquinolin-6-yl] -amide,
9H- (4- [4- [4'-trifluoromethyl-biphenyl-2-carbonyl) amino] -piperidin-1-yl @ butyl) -9H-fluorene-9-carboxylic acid-
(2,2,2-trifluoroethyl) -amide, 9- [4-
[4- (2-benzothiazol-2-yl-benzoylamino) piperidin-1-yl] butyl] -9H-fluorene-9-carboxylic acid- (2,2,2-trifluoroethyl) amide, [11a- R] -8-[(4-cyanophenyl)
Methoxy] -2-cyclopentyl-7- (prop-2-enyl) -2,3,11,11a-tetrahydro-6H-pyrazino [1,2b] isoquinoline-1,4-dione, [11a-R]
-Cyclopentyl-7- (prop-2-enyl) -8-
[(Pyridin-2-yl) methoxy] -2,3,11,11a-tetrahydro-6H-pyrazino [1,2b] isoquinolin-1,4-dione, 2-cyclopentyl-2- [4- (2,
4-dimethylpyrido [2,3-b] indol-9-ylmethyl) phenyl] -N- (2-hydroxy-1-phenylethyl) acetamide, 2-cyclopentyl-N-
(2-hydroxy-1-phenylethyl) -2- [4- (quinolin-2-ylmethoxy) -phenyl] acetamide, hydrates of these compounds, stereoisomers of these compounds, and the compounds and hydrates And a compound selected from the group consisting of pharmaceutically acceptable salts of the stereoisomers.

【０００８】本発明の方法を実施する上で有用な、特に
好ましいアポＢ分泌物/ＭＴＰ阻害薬は、４'−トリフル
オロメチル−ビフェニル−２−カルボン酸−[２−(１Ｈ
−[１,２,４］トリアゾール−３−イルメチル)−１,２,
３,４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル]−アミ
ド、４'−トリフルオロメチル−ビフェニル−２−カル
ボン酸−[２−(２−アセチルアミノエチル)−１,２,３,
４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル]−アミド、
前記化合物の水和物、ならびに前記化合物および前記水
和物の医薬用として許容しうる塩である。A particularly preferred apo B secretion / MTP inhibitor useful in practicing the method of the present invention is 4'-trifluoromethyl-biphenyl-2-carboxylic acid- [2- (1H
-[1,2,4] triazol-3-ylmethyl) -1,2,
3,4-tetrahydroisoquinolin-6-yl] -amide, 4'-trifluoromethyl-biphenyl-2-carboxylic acid- [2- (2-acetylaminoethyl) -1,2,3,
4-tetrahydroisoquinolin-6-yl] -amide,
Hydrates of the compounds, and pharmaceutically acceptable salts of the compounds and the hydrates.

【０００９】本発明は、リポタンパク質(ａ)（Ｌｐ
(ａ)）の血液レベルを低下させる必要のある哺乳動物
に、Ｌｐ(ａ)の血液レベルを低下させるのに有効な量の
アポリポタンパク質Ｂ分泌物/ミクロソームトリグリセ
リド転移タンパク質阻害薬を投与することを含む、哺乳
動物におけるＬｐ(ａ)の血液レベルを低下させる方法を
提供する。The present invention relates to lipoprotein (a) (Lp
administering to a mammal in need of lowering the blood level of (a)) an amount of an apolipoprotein B secretion / microsomal triglyceride transfer protein inhibitor effective to lower the blood level of Lp (a). A method for lowering the blood level of Lp (a) in a mammal.

【００１０】本明細書の本文および特許請求の範囲にお
いて使用している“血液”は、“血液レベル”という用
語に関連して使用しているときには、全血、血漿（すな
わち、粒状成分が懸濁している血液の液状部分）、およ
び血清（すなわち、フィブリンクロットと血球を除去し
た後に得られる血液の液状部分）を含む。[0010] As used herein and in the claims, the term "blood" when used in connection with the term "blood level" refers to whole blood, plasma (ie, particulate components are suspended). Liquid portion of blood that is turbid, and serum (ie, the liquid portion of blood obtained after removing fibrin clot and blood cells).

【００１１】本明細書の本文および特許請求の範囲にお
いて使用している“アポＢ分泌物/ＭＴＰ阻害薬”と
は、アポリポタンパク質Ｂの分泌を阻害する能力、およ
び/またはミクロソームトリグリセリド転移タンパク質
の転移作用を阻害する能力を有する化合物を意味してい
る。As used herein and in the claims, "apoB secretion / MTP inhibitor" refers to the ability to inhibit apolipoprotein B secretion and / or transfer of microsomal triglyceride transfer protein. A compound having the ability to inhibit an action is meant.

【００１２】当業者には、種々のアポＢ分泌物/ＭＴＰ
阻害薬が知られているか、あるいは知られるようになる
であろう。本発明の実施に際してはいかなるアポＢ分泌
物/ＭＴＰ阻害薬も使用することができるが、一般的に
好ましいアポＢ分泌物/ＭＴＰ阻害薬としては、前記の
化合物、前記化合物の水和物、前記化合物の立体異性
体、ならびに前記化合物、前記水和物、および前記立体
異性体の医薬用として許容しうる塩（たとえば、ヨーロ
ッパ特許出願公開 EP643057, EP719763, EP753517, EP7
64647, EP765878, EP779276, EP779279, EP799828, EP7
99829, EP802186,EP802188, EP802192,およびEP802197;
PCT出願公開 WO96/13499, WO96/33193,WO96/40640, WO
97/26240, WO97/43255, WO97/43257, WO98/16526,およ
びWO98/23593; ならびに米国特許第5,595,872号、第5,6
46,162号、第5,684,014号、第5,712,279号、第5,739,13
5号、および第5,789,197号; に開示されている物質）な
どがある。これら特許文献の開示内容を全て、参照によ
り本明細書に含める。Those skilled in the art will recognize various apo B secretions / MTP
Inhibitors are known or will become known. While any apoB secretion / MTP inhibitor can be used in the practice of the present invention, generally preferred apoB secretion / MTP inhibitors include the compounds described above, hydrates of the compounds, Stereoisomers of the compounds, and pharmaceutically acceptable salts of the compounds, the hydrates, and the stereoisomers (eg, EP643057, EP719763, EP753517, EP7
64647, EP765878, EP779276, EP779279, EP799828, EP7
99829, EP802186, EP802188, EP802192, and EP802197;
PCT application publication WO96 / 13499, WO96 / 33193, WO96 / 40640, WO
97/26240, WO97 / 43255, WO97 / 43257, WO98 / 16526, and WO98 / 23593; and U.S. Patent Nos. 5,595,872, 5,6
No. 46,162, No. 5,684,014, No. 5,712,279, No. 5,739,13
No. 5, and No. 5,789,197; The disclosures of all of these patent documents are incorporated herein by reference.

【００１３】特に好ましいアポＢ分泌物/ＭＴ阻害薬
は、同一人に譲渡された上記PCT出願公開 WO/96/40640
とWO98/23593、および特に上記米国特許に開示のビフェ
ニル−２−カルボン酸−テトラヒドロイソキノリン−６
−イルアミド誘導体、前記誘導体の立体異性体、前記誘
導体の水和物、前記誘導体のプロドラッグ、および前記
誘導体の医薬用として許容しうる塩である。PCT出願公
開WO96/40640とWO98/23593に開示されていて本発明の方
法において有用な特に好ましいアポＢ分泌物/ＭＴＰ阻
害薬は、４'−トリフルオロメチル−ビフェニル−２−
カルボン酸−[２−(１Ｈ−[１,２,４］トリアゾール−
３−イルメチル)−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノ
リン−６−イル]−アミド、４'−トリフルオロメチル−
ビフェニル−２−カルボン酸−[２−(アセチルアミノエ
チル)−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−６−
イル]−アミド、前記化合物の水和物、および前記化合
物または前記水和物の医薬用として許容しうる塩であ
る。Particularly preferred apo B secretion / MT inhibitors are described in the above-mentioned commonly assigned PCT Application Publication WO / 96/40640.
And WO 98/23593, and especially the biphenyl-2-carboxylic acid-tetrahydroisoquinoline-6 disclosed in the above-mentioned U.S. patents.
-Ylamide derivatives, stereoisomers of the derivatives, hydrates of the derivatives, prodrugs of the derivatives, and pharmaceutically acceptable salts of the derivatives. A particularly preferred apo B secretion / MTP inhibitor disclosed in PCT applications WO 96/40640 and WO 98/23593 and useful in the method of the present invention is 4'-trifluoromethyl-biphenyl-2-
Carboxylic acid- [2- (1H- [1,2,4] triazole-
3-ylmethyl) -1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-6-yl] -amide, 4'-trifluoromethyl-
Biphenyl-2-carboxylic acid- [2- (acetylaminoethyl) -1,2,3,4-tetrahydroisoquinoline-6
Yl] -amide, a hydrate of the compound, and a pharmaceutically acceptable salt of the compound or the hydrate.

【００１４】[0014]

【化１】 Embedded image

【００１５】他の特に好ましい種類のアポＢ分泌物/Ｍ
ＴＰ阻害薬が米国特許第5,595,872号、第5,712,279号、
第5,739,135号、および第5,789,197号に開示されてお
り、下記の構造式を有する化合物を含む。[0015] Another particularly preferred type of apo B secretion / M
TP inhibitors are described in U.S. Patent Nos. 5,595,872, 5,712,279,
Nos. 5,739,135 and 5,789,197 and include compounds having the following structural formula:

【００１６】[0016]

【化２】 Embedded image

【００１７】米国特許第5,595,872号、第5,712,279号、
第5,739,135号、および第5,789,197号に開示されていて
本発明の方法において有用な特に好ましいアポＢ分泌物
/ＭＴＰ阻害薬は、９Ｈ−(４−[４−[４'−トリフルオ
ロメチル−ビフェニル−２−カルボニル)−アミノ]−ピ
ペリジン−１−イル]−ブチル−９Ｈ−フルオレン−９
−カルボン酸−(２,２,２−トリフルオロメチル)−アミ
ドおよび９−[４−[４−(２−ベンゾチアゾール−２−
イル−ベンゾイルアミノ)−ピペリジン−１−イル]−ブ
チル]−９Ｈ−フルオレン−９−カルボン酸−(２,２,２
−トリフルオロエチル)−アミドである。US Patent Nos. 5,595,872, 5,712,279,
Particularly preferred apo B secretions disclosed in US Pat. Nos. 5,739,135 and 5,789,197 and useful in the method of the invention
/ MTP inhibitor is 9H- (4- [4- [4'-trifluoromethyl-biphenyl-2-carbonyl) -amino] -piperidin-1-yl] -butyl-9H-fluoren-9
-Carboxylic acid- (2,2,2-trifluoromethyl) -amide and 9- [4- [4- (2-benzothiazole-2-
Yl-benzoylamino) -piperidin-1-yl] -butyl] -9H-fluorene-9-carboxylic acid- (2,2,2
-Trifluoroethyl) -amide.

【００１８】他の種類の特に好ましいアポＢ分泌物/Ｍ
ＴＰ阻害薬がPCT出願公開WO98/16526に開示されてお
り、下記の構造式を有する化合物を含む。Other Types of Particularly Preferred Apo B Secretions / M
TP inhibitors are disclosed in PCT Application Publication WO 98/16526, and include compounds having the following structural formula:

【００１９】[0019]

【化３】 Embedded image

【００２０】PCT出願公開WO98/16526に開示されていて
本発明の方法において有用な特に好ましいアポＢ分泌物
/ＭＴＰ阻害薬は、[11ａ−Ｒ]−８−[(４−シアノフェ
ニル）メトキシ]−２−シクロペンチル−７−(プロプ−
２−エニル)−２,３,11,11ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ピ
ラジノ［１,２ｂ］イソキノリン−１,４−ジオン、およ
び[11ａ−Ｒ]−シクロペンチル−７−(プロプ−２−エ
ニル)−８−[(ピリジン−２−イル）メトキシ]−２,３,
11,11ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ピラジノ［１,２ｂ］イ
ソキノリン−１,４−ジオンである。Particularly preferred apo B secretions disclosed in PCT application WO 98/16526 and useful in the method of the present invention
/ MTP inhibitor is [11a-R] -8-[(4-cyanophenyl) methoxy] -2-cyclopentyl-7- (prop-
2-enyl) -2,3,11,11a-tetrahydro-6H-pyrazino [1,2b] isoquinoline-1,4-dione, and [11a-R] -cyclopentyl-7- (prop-2-enyl)- 8-[(pyridin-2-yl) methoxy] -2,3,
11,11a-tetrahydro-6H-pyrazino [1,2b] isoquinoline-1,4-dione.

【００２１】他の特に好ましい種類のアポＢ分泌物/Ｍ
ＴＰ阻害薬が米国特許第5,684,014号に開示されてお
り、下記の構造式を有する化合物を含む。Another particularly preferred type of apo B secretion / M
TP inhibitors are disclosed in US Pat. No. 5,684,014 and include compounds having the structural formula:

【００２２】[0022]

【化４】 Embedded image

【００２３】米国特許第5,684,014号に開示されていて
本発明の方法において有用な特に好ましいアポＢ分泌物
/ＭＴＰ阻害薬は、２−シクロペンチル−２−[４−(２,
４−ジメチル−ピリド［２,３−ｂ］インドール−９−
イルメチル)−フェニル]−Ｎ−(２−ヒドロキシ−１−
フェニル−エチル)−アセトアミドである。Particularly preferred apo B secretions disclosed in US Pat. No. 5,684,014 and useful in the method of the present invention
/ MTP inhibitors are 2-cyclopentyl-2- [4- (2,
4-dimethyl-pyrido [2,3-b] indole-9-
Ylmethyl) -phenyl] -N- (2-hydroxy-1-
Phenyl-ethyl) -acetamide.

【００２４】さらに他の種類の特に好ましいアポＢ分泌
物/ＭＴＰ阻害薬が米国特許第5,646,162号に開示されて
おり、下記の構造式を有する化合物を含む。Yet another class of particularly preferred apo B secretion / MTP inhibitors is disclosed in US Pat. No. 5,646,162 and includes compounds having the following structural formula:

【００２５】[0025]

【化５】 Embedded image

【００２６】米国特許第5,646,162号に開示されていて
本発明の方法において有用な特に好ましいアポＢ分泌物
/ＭＴＰ阻害薬は、２−シクロペンチル−Ｎ−(２−ヒド
ロキシ−１−フェニル−エチル)−２−[４−(キノリン
−２−イルメトキシ)−フェニル]−アセトアミドであ
る。Particularly preferred apo B secretions disclosed in US Pat. No. 5,646,162 and useful in the method of the present invention
The / MTP inhibitor is 2-cyclopentyl-N- (2-hydroxy-1-phenyl-ethyl) -2- [4- (quinolin-2-ylmethoxy) -phenyl] -acetamide.

【００２７】上記のアポＢ分泌物/ＭＴＰ阻害薬（好ま
しい実施態様と特に好ましい実施態様を含む）、これら
化合物の医薬用として許容しうる塩、水和物、もしくは
立体異性体、あるいは本発明の方法において使用される
前記水和物もしくは前記立体異性体の医薬用として許容
しうる塩は、上記のヨーロッパ特許、PCT特許、米国特
許、および出願公開文書の開示内容にしたがって製造す
ることができる。The apoB secretion / MTP inhibitors described above (including preferred and particularly preferred embodiments), pharmaceutically acceptable salts, hydrates or stereoisomers of these compounds, or the compounds of the present invention. The hydrates or pharmaceutically acceptable salts of the stereoisomers used in the method can be prepared according to the disclosures of the above-mentioned European patents, PCT patents, US patents and published applications.

【００２８】上記のアポＢ分泌物/ＭＴＰ阻害薬、これ
ら化合物の医薬用として許容しうる塩、水和物、もしく
は立体異性体、あるいは本発明の方法において使用され
る前記水和物もしくは前記立体異性体の医薬用として許
容しうる塩は、医薬用として許容しうるキャリヤーまた
は希釈剤を含んだ医薬用組成物の形態にて投与するのが
好ましい。したがって、上記のアポＢ分泌物/ＭＴＰ阻
害薬、これら化合物の医薬用として許容しうる塩、水和
物、もしくは立体異性体、あるいは本発明の前記水和物
もしくは前記立体異性体の医薬用として許容しうる塩
は、従来の経口剤形、非経口剤形、または経皮剤形にて
個別に投与することも、あるいは一緒に投与することも
できる。The above-mentioned apo B secretion / MTP inhibitors, pharmaceutically acceptable salts, hydrates or stereoisomers of these compounds, or the hydrates or the stereoisomers used in the method of the present invention. Preferably, the pharmaceutically acceptable salt of the isomer is administered in the form of a pharmaceutical composition comprising a pharmaceutically acceptable carrier or diluent. Therefore, the above-mentioned apo B secretion / MTP inhibitor, a pharmaceutically acceptable salt, hydrate or stereoisomer of these compounds, or a medicament of the hydrate or the stereoisomer of the present invention. The acceptable salts can be administered separately in conventional oral, parenteral, or transdermal dosage forms, or together.

【００２９】医薬用として許容しうる適切なキャリヤー
としては、不活性の固体充填剤もしくは希釈剤、および
無菌の水溶液もしくは有機溶液などがある。上記のアポ
Ｂ分泌物/ＭＴＰ阻害薬、これら化合物の医薬用として
許容しうる塩、水和物、もしくは立体異性体、あるいは
本発明の前記水和物もしくは前記立体異性体の医薬用と
して許容しうる塩は、このような医薬用組成物中に、下
記の範囲の所望の用量が得られるに足る量にて存在す
る。したがって、経口投与の場合、化合物を適切な固体
もしくは液体のキャリヤーあるいは固体もしくは液体の
希釈剤と組み合わせて、カプセル、錠剤、粉末、シロッ
プ、溶液、および懸濁液などを形成させることができ
る。本発明の医薬用組成物は、必要に応じて追加の成分
（たとえば風味剤、甘味剤、および賦形剤など）を含ん
でよい。Suitable pharmaceutically acceptable carriers include inert solid fillers or diluents, and sterile aqueous or organic solutions. The above-mentioned apo B secretion / MTP inhibitors, pharmaceutically acceptable salts, hydrates or stereoisomers of these compounds, or pharmaceutically acceptable hydrates or stereoisomers of the present invention of the present invention. The resulting salt is present in such pharmaceutical compositions in an amount sufficient to provide the desired dosage in the range described below. Thus, for oral administration, the compounds can be combined with a suitable solid or liquid carrier or solid or liquid diluent to form capsules, tablets, powders, syrups, solutions, suspensions, and the like. The pharmaceutical compositions of the present invention may optionally contain additional components, such as flavoring, sweetening, and excipients.

【００３０】錠剤、ピル、およびカプセルなどはさら
に、結合剤（たとえばトラガカントゴム、アラビアゴ
ム、コーンスターチ、またはゼラチン）; 賦形剤（たと
えばリン酸二カルシウム）; 崩壊剤（たとえばコーンス
ターチ、ジャガイモスターチ、またはアルギン酸）; 滑
剤（たとえば硫酸マグネシウム）; および甘味剤（たと
えばスクロース、ラクトース、またはサッカリン）; を
含んでもよい。ユニット剤形がカプセルの場合、カプセ
ルは、上記タイプの物質の他に液体キャリヤー（たとえ
ば脂肪油）を含んでもよい。Tablets, pills, capsules and the like may further comprise a binder (eg, tragacanth, acacia, corn starch, or gelatin); an excipient (eg, dicalcium phosphate); a disintegrant (eg, corn starch, potato starch, or alginic acid). Glidants (eg, magnesium sulfate); and sweeteners (eg, sucrose, lactose, or saccharin). When the unit dosage form is a capsule, the capsule may contain, in addition to materials of the above type, a liquid carrier (eg, a fatty oil).

【００３１】他の種々の物質が、被覆物として、あるい
は単位剤形の物理的形態を変えるために存在してよい。
たとえば、錠剤をセラック、砂糖、またはこれら両方で
被覆してもよい。シロップまたはエリキシルは、活性成
分のほかに、スクロース（甘味剤として）、メチルパラ
ベンとプロピルパラベン（保存剤として）、色素、およ
び風味剤（たとえば、チェリー風味やオレンジ風味）を
含んでよい。Various other materials may be present as coatings or to modify the physical form of the dosage unit.
For example, tablets may be coated with shellac, sugar, or both. A syrup or elixir may contain, in addition to the active ingredient, sucrose (as a sweetening agent), methyl and propylparabens (as a preservative), a dye, and a flavoring agent (eg, cherry or orange flavor).

【００３２】本発明の医薬用組成物は非経口投与するこ
ともできる。非経口投与の場合、医薬用組成物を無菌の
水性媒体または有機媒体と組み合わせて、注射可能な溶
液または懸濁液を形成させることができる。これら医薬
用組成物の溶液または懸濁液は、水中にて界面活性剤
（たとえばヒドロキシプロピルセルロース）と適切に混
合して調製することができる。さらに、ゴマ油、落花生
油、エタノール、水、ポリオール（たとえばグリセロー
ル、プロピレングリコール、および液状ポリエチレング
リコール）、前記物質の適切な混合物; 植物油、Ｎ−メ
チルグルカミン、ポリビニルピロリドン、および前記物
質の油中混合物; 中に分散させて得られる分散液も調製
することができる。さらに、本発明の化合物の医薬用と
して許容しうる水溶性塩の水溶液も調製することができ
る。貯蔵および使用の通常条件下において、これらの製
剤は微生物の成長を防ぐための保存剤を含有する。この
ようにして調製された注射可能溶液は、静脈内、腹膜
内、皮下、あるいは筋内に投与することができ、ヒトに
おける好ましい非経口投与は筋内投与である。静脈投与
用に調製された溶液は、使用前に等張性にするのが好ま
しい。The pharmaceutical composition of the present invention can be administered parenterally. For parenteral administration, the pharmaceutical compositions can be combined with a sterile aqueous or organic vehicle to form an injectable solution or suspension. Solutions or suspensions of these pharmaceutical compositions can be prepared in water suitably mixed with a surfactant (eg, hydroxypropylcellulose). Additionally, sesame oil, peanut oil, ethanol, water, polyols (eg, glycerol, propylene glycol, and liquid polyethylene glycol), suitable mixtures of said substances; vegetable oils, N-methylglucamine, polyvinylpyrrolidone, and mixtures of said substances in oil A dispersion obtained by dispersing the compound in the dispersion can also be prepared. In addition, aqueous solutions of pharmaceutically acceptable water-soluble salts of the compounds of the present invention can be prepared. Under ordinary conditions of storage and use, these preparations contain a preservative to prevent the growth of microorganisms. The injectable solutions thus prepared can be administered intravenously, intraperitoneally, subcutaneously or intramuscularly, with the preferred parenteral administration in humans being intramuscular. Solutions prepared for intravenous administration are preferably rendered isotonic prior to use.

【００３３】注射として使用するのに適した製剤として
は、無菌の水溶液や分散液、および注射可能な無菌の溶
液や分散液を調製するための無菌粉末などがある。いず
れの場合においても、こうした製剤は無菌でなければな
らず、また簡単な注射操作性が得られる程度に流動性が
なければならない。こうした製剤は、製造条件下および
貯蔵条件下にて安定でなければならず、また微生物（た
とえば、バクテリアや真菌類）による汚染を受けないよ
う保存しなければならない。Formulations suitable for use as injections include sterile aqueous solutions and dispersions and sterile powders for preparing sterile injectable solutions and dispersions. In each case, the preparation must be sterile and must be fluid to the extent that easy syringability exists. Such preparations must be stable under the conditions of manufacture and storage and must be preserved against the contaminating action of microorganisms such as bacteria and fungi.

【００３４】本発明の医薬用組成物は経皮投与すること
もできる。経皮投与のための適切な製剤は、リポタンパ
ク質(ａ)の血液レベルを低下させるのに有効な量の本発
明の化合物または医薬用組成物を適切な経皮キャリヤー
とともに含む。好ましい経皮キャリヤーとしては、治療
しようとする患者の皮膚に対する通過を補助・促進する
ための薬理学的に許容しうる吸収性溶媒がある。経皮投
与用器具は、裏地部材、本発明の化合物を（所望により
キャリヤーと一緒に）収容しているリザーバー、治療し
ようとする患者の皮膚に本発明の化合物を、長時間にわ
たって制御された所定の速度にて供給するための、所望
により使用される速度制御バリヤー、および治療しよう
とする患者の皮膚に器具を固定するための手段、を有す
る包帯の形態をとっているのが特徴である。[0034] The pharmaceutical composition of the present invention can also be administered transdermally. Suitable formulations for transdermal administration comprise a compound or pharmaceutical composition of the invention in an amount effective to reduce lipoprotein (a) blood levels, together with a suitable transdermal carrier. Preferred transdermal carriers are pharmacologically acceptable absorbent solvents to assist and facilitate passage through the skin of the patient to be treated. The device for transdermal administration includes a backing member, a reservoir containing the compound of the present invention (optionally with a carrier), and a controlled, controlled administration of the compound of the present invention to the skin of the patient to be treated over an extended period of time. In the form of a bandage having an optional speed control barrier for delivery at a speed of, and means for securing the device to the skin of the patient to be treated.

【００３５】所望量の活性成分を含んだ種々の医薬用組
成物を製造する方法は、当業者にとっては公知である
か、あるいは本明細書の開示内容を考察すれば明らかと
なるであろう。たとえば“Remington's Pharmaceutical
Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, 15
th Edition（1975）”を参照のこと。Methods of preparing various pharmaceutical compositions with a desired amount of active ingredient are known, or will be apparent, in light of this disclosure. For example, "Remington's Pharmaceutical
Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA, 15
th Edition (1975) ".

【００３６】本発明による所望の治療効果を達成するの
に必要な、アポＢ分泌物/ＭＴＰ阻害薬、前記阻害薬の
医薬用として許容しうる塩、水和物、もしくは立体異性
体、あるいは前記水和物もしくは前記立体異性体の医薬
用として許容しうる塩の用量は、当業者が本明細書の開
示内容の利点が得られるよう通常適用する技術の範囲内
である。An apoB secretion / MTP inhibitor, a pharmaceutically acceptable salt, hydrate or stereoisomer of said inhibitor, or a pharmaceutically acceptable salt thereof, required to achieve the desired therapeutic effect according to the invention. Dosages of the hydrates or pharmaceutically acceptable salts of said stereoisomers are within the skill of the ordinary artisan to apply to the benefit of the disclosure herein.

【００３７】一般には、特定のアポＢ分泌物/ＭＴＰ阻
害薬に対する用量範囲は、代表的な有効範囲が約0.01mg
/kg/日〜約15.0mg/kg/日であると報告されている。一般
的に好ましい用量範囲は約0.1〜約5.0mg/kg/日であり、
特に好ましい用量範囲は約0.1〜約1.0mg/kg/日である。
上記の特定の化合物に対する用量範囲が、前記の特許お
よび特許出願公開に記載されている。しかしながら、患
者の年齢や体重、意図する投与経路、および治療しよう
とする疾患の進行程度や症状程度に応じ、一般的な用量
範囲において幾らかの変動が必要となることがある。In general, the dose range for a particular apo B secretion / MTP inhibitor will typically be about 0.01 mg
/ kg / day to about 15.0 mg / kg / day. A generally preferred dose range is from about 0.1 to about 5.0 mg / kg / day,
A particularly preferred dose range is from about 0.1 to about 1.0 mg / kg / day.
Dose ranges for the specific compounds described above are set forth in the aforementioned patents and patent application publications. However, some variation in typical dosage ranges may be required depending on the age and weight of the patient, the intended route of administration, and the degree of progress or symptom of the disease to be treated.

【００３８】言うまでもないことであるが、本発明の方
法にしたがって哺乳動物を治療するとき、適用される実
際の好ましい投与経路と最適用量は、治療を担当する信
頼できる医師の裁量に任されており、治療しようとする
疾患の程度、意図する投与経路、および患者の特徴（た
とえば年齢、体重、***速度、同時に投与される薬物、
および患者の一般的な肉体状態など）にしたがって変わ
る。通常、治療を受ける患者のための最適用量は、一般
には、初期において少なめの用量を投与し、その後に処
方計画を少しずつ変えて用量を増やし、必要に応じて最
も適切な用量を決定することによって決まる。この最適
用量は、使用する化合物の種類および治療を受ける患者
の特質に応じて異なる。Of course, when treating mammals according to the methods of the present invention, the actual preferred route of administration and optimal dosage applied will be at the discretion of the responsible physician in charge of the treatment. , The extent of the disease to be treated, the intended route of administration, and the characteristics of the patient (eg, age, weight, rate of excretion,
And the general physical condition of the patient). Usually, the optimal dose for the patient to be treated is generally to start with a lower dose, then gradually change the regimen to increase the dose and determine the most appropriate dose as needed. Depends on The optimal dose will depend on the type of compound used and the nature of the patient being treated.

【００３９】実験の部 本発明の方法を実施することによる、リポタンパク質
(ａ)の血液レベルの低下に対するアポＢ分泌物/ＭＴＰ
阻害薬の有用性は、Nassirらによる“J. Biological Ch
em., 273, 17793-17800 (1998)”に開示のプロトコルに
したがって示すことができる。このプロトコルを以下に
要約して記す。パルス追跡実験 トランスフェクションされたHepG2細胞とMcA-RH7777細
胞をT-25フラスコ中にて90％合流（confluence）まで成
長させる。実験を行う日に、リン酸塩を緩衝剤とする塩
水で細胞を２回洗浄し、メチオニンとシステインを含ま
ないDMEM中にて１時間にわたって血清なしでプレインキ
ュベートし、250μCi/ml Tran³⁵S-標識とアポＢ分泌物/
ＭＴＰ阻害薬を含有する同じ媒体中で４時間パルス標識
し、次いで３mMのシステインと10mMのメチオニンを含有
する全部の媒体（complete medium）中にて所定時間追
跡する。アポＢ分泌物/ＭＴＰ阻害薬をジメチルスルホ
キシド中に100mg/mlの濃度にて溶解し、細胞と一緒にイ
ンキュベーションする直前に媒体中にて適切な濃度に希
釈する。細胞を制御するために、ジメチルスルホキシド
を同一の最終濃度にて単独で加える。放射性同位体標識
後の所定の時間にて、氷上に媒体を集め、以下のプロテ
アーゼ阻害薬の最終濃度になるよう調整する（100mMの
ロイペプチン、450mMのアポプロチン、２mMのペプスタ
チン、１mMのフッ化フェニルメチルスルホニル、および
１mMのベンズアミジン）。氷冷したリン酸塩緩衝液で細
胞を３回洗浄し、引き続きプロテアーゼ阻害薬を含有す
る低温リーシス緩衝液（100mMのTris, pH8.0, 100mMのN
aCl, 10mMのEDTA, １%のTriton X-100, 0.1%のSDS）中
で溶解分離させ、そしてHepG2細胞に対しては100mMのε
−アミノカプロン酸を使用する。10,000rpmにて４℃で
５分間遠心分離することにより細胞の溶解分離物と媒体
を清澄にして細胞破片を除去し、次いで下記のように免
疫沈降を行う。全タンパク質中への放射能の取り込み量
を、細胞溶解分離物のトリクロロ酢酸沈降によって測定
する。すべてのケースにおいて、対照標準と実験群との
間に同等の値が示される。免疫沈降 媒体と溶解分離物の両方を、タンパク質Ｇ-アガロース
と共に４℃で２〜３時間インキュベーションすることに
より予め清浄にする。アリコートを、飽和量の抗アポ
(ａ)、抗アポＢ、およびアポＡ-１もしくは抗アルブミ
ン抗血清を使用して免疫沈降させる。４℃で一晩インキ
ュベーションした後、タンパク質Ｇ-アガロースのビー
ズを加え、インキュベーションを４℃でさらに２〜３時
間続ける。最終的に得られるペレットを、免疫沈降洗浄
緩衝液（50mMのTris, pH7.4, 0.65MのNaCl, 10mMのEDT
A, 1%のTritonX-100, 1%のデオキシコール酸ナトリウ
ム, 0.1%のSDS）中で４回、および水中で２回洗浄し、
そしてSDSサンプル緩衝液（4%のSDS, 20%のグリセロー
ル, 0.001%のブロモフェノールブルー, 125mMのTris, p
H6.8, および100mMのジチオトレイトール）中で10分沸
騰させる。遠心分離後、上澄み液をSDS-PAGEとフルオロ
グラフィーによって分析する。次いで、標準的な手法に
より定量化を行う。 EXPERIMENTAL PART Lipoproteins by performing the method of the invention
(a) Apo B secretion / MTP against decrease in blood level
The usefulness of inhibitors is described in “J. Biological Ch.
em., 273 , 17793-17800 (1998) ". The protocol is summarized below. Pulse tracking experiments Transfected HepG2 cells and McA-RH7777 cells were transformed into T-cells. Grow to 90% confluence in 25 flasks On the day of the experiment, wash cells twice with phosphate-buffered saline and 1 hour in methionine and cysteine free DMEM Pre-incubated without serum for 250 μCi / ml Tran ³⁵ S-label and ApoB secretion /
Pulse label for 4 hours in the same medium containing the MTP inhibitor and then follow for a predetermined time in the complete medium containing 3 mM cysteine and 10 mM methionine. Apo B secretion / MTP inhibitor is dissolved in dimethylsulfoxide at a concentration of 100 mg / ml and diluted to the appropriate concentration in the vehicle immediately before incubation with the cells. To control the cells, dimethyl sulfoxide is added alone at the same final concentration. At a predetermined time after the radioisotope labeling, collect the medium on ice and adjust to the final concentrations of the following protease inhibitors (100 mM leupeptin, 450 mM apoprotin, 2 mM pepstatin, 1 mM phenylmethyl fluoride Sulfonyl, and 1 mM benzamidine). The cells are washed three times with ice-cold phosphate buffer, followed by a cold lysis buffer containing protease inhibitors (100 mM Tris, pH 8.0, 100 mM N
aCl, 10 mM EDTA, 1% Triton X-100, 0.1% SDS) and 100 mM ε for HepG2 cells.
Using aminocaproic acid; The cell lysate and medium are clarified by centrifugation at 10,000 rpm for 5 minutes at 4 ° C. to remove cell debris and then immunoprecipitated as described below. The amount of radioactivity incorporated into the total protein is determined by trichloroacetic acid precipitation of the cell lysate. In all cases, equivalent values are shown between the control and the experimental group. Both the immunoprecipitation medium and the lysate are pre-cleared by incubation with protein G-agarose at 4 ° C. for 2-3 hours. Aliquot a saturating amount of anti-ap
(a) Immunoprecipitate using anti-apoB and apoA-1 or anti-albumin antiserum. After overnight incubation at 4 ° C., beads of protein G-agarose are added and the incubation is continued at 4 ° C. for another 2-3 hours. The final pellet is washed with immunoprecipitation wash buffer (50 mM Tris, pH 7.4, 0.65 M NaCl, 10 mM EDT
A, 4 times in 1% Triton X-100, 1% sodium deoxycholate, 0.1% SDS) and 2 times in water,
And SDS sample buffer (4% SDS, 20% glycerol, 0.001% bromophenol blue, 125 mM Tris, p
Boil in H6.8, and 100 mM dithiothreitol) for 10 minutes. After centrifugation, the supernatant is analyzed by SDS-PAGE and fluorography. The quantification is then performed by standard techniques.

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 31/4985 Ａ６１Ｋ 31/4985 Ａ６１Ｐ 3/06 Ａ６１Ｐ 3/06 9/10 9/10 43/00 １１１ 43/00 １１１ ──────────────────────────────────────────────────続 き Continued on the front page (51) Int.Cl. ⁷ Identification symbol FI Theme coat ゛ (Reference) A61K 31/4985 A61K 31/4985 A61P 3/06 A61P 3/06 9/10 9/10 43/00 111 43 / 00 111

Claims (4)

【特許請求の範囲】[Claims] 【請求項１】 リポタンパク質（ａ）の血液レベルを低
下させるのに有効な量のアポリポタンパク質Ｂ分泌物/
ミクロソームトリグリセリド転移タンパク質阻害薬を含
む、哺乳動物におけるリポタンパク質(ａ)の血液レベル
を低下させる薬剤。1. An amount of apolipoprotein B secretion effective to reduce blood levels of lipoprotein (a).
An agent for lowering blood levels of lipoprotein (a) in a mammal, comprising a microsomal triglyceride transfer protein inhibitor. 【請求項２】 前記アポリポタンパク質Ｂ分泌物/ミク
ロソームトリグリセリド転移タンパク質阻害薬が、４'
−トリフルオロメチル−ビフェニル−２−カルボン酸−
[２−(１Ｈ−[１,２,４］トリアゾール−３−イルメチ
ル)−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−６−イ
ル]−アミド、４'−トリフルオロメチル−ビフェニル−
２−カルボン酸−[２−(２−アセチルアミノエチル)−
１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−６−イル]−
アミド、９Ｈ−(４−[４−[４'−トリフルオロメチル−
ビフェニル−２−カルボニル）アミノ]−ピペリジン−
１−イル｝ブチル)−９Ｈ−フルオレン−９−カルボン
酸−(２,２,２−トリフルオロエチル)−アミド、９−
[４−[４−(２−ベンゾチアゾール−２−イル−ベンゾ
イルアミノ）ピペリジン−１−イル］ブチル]−９Ｈ−
フルオレン−９−カルボン酸−(２,２,２−トリフルオ
ロエチル）アミド、[11ａ−Ｒ]−８−[(４−シアノフェ
ニル）メトキシ]−２−シクロペンチル−７−(プロプ−
２−エニル)−２,３,11,11ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ピ
ラジノ［１,２ｂ］イソキノリン−１,４−ジオン、[11
ａ−Ｒ]−シクロペンチル−７−(プロプ−２−エニル)
−８−[(ピリジン−２−イル）メトキシ]−２,３,11,11
ａ−テトラヒドロ−６Ｈ−ピラジノ［１,２ｂ］イソキ
ノリン−１,４−ジオン、２−シクロペンチル−２−[４
−(２,４−ジメチルピリド［２,３−ｂ］インドール−
９−イルメチル）フェニル]−Ｎ−(２−ヒドロキシ−１
−フェニルエチル）アセトアミド、２−シクロペンチル
−Ｎ−(２−ヒドロキシ−１−フェニルエチル)−２−
[４−(キノリン−２−イルメトキシ)−フェニル］アセ
トアミド、これら化合物の水和物、これら化合物の立体
異性体、ならびに前記化合物、前記水和物、および前記
立体異性体の医薬用として許容しうる塩からなる群から
選ばれる化合物である、請求項１記載の薬剤。2. The method according to claim 2, wherein the apolipoprotein B secretory / microsomal triglyceride transfer protein inhibitor is 4 ′.
-Trifluoromethyl-biphenyl-2-carboxylic acid-
[2- (1H- [1,2,4] triazol-3-ylmethyl) -1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-6-yl] -amide, 4'-trifluoromethyl-biphenyl-
2-carboxylic acid- [2- (2-acetylaminoethyl)-
1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-6-yl]-
Amide, 9H- (4- [4- [4'-trifluoromethyl-
Biphenyl-2-carbonyl) amino] -piperidine-
1-yl @ butyl) -9H-fluorene-9-carboxylic acid- (2,2,2-trifluoroethyl) -amide, 9-
[4- [4- (2-Benzothiazol-2-yl-benzoylamino) piperidin-1-yl] butyl] -9H-
Fluorene-9-carboxylic acid- (2,2,2-trifluoroethyl) amide, [11a-R] -8-[(4-cyanophenyl) methoxy] -2-cyclopentyl-7- (prop-
2-enyl) -2,3,11,11a-tetrahydro-6H-pyrazino [1,2b] isoquinoline-1,4-dione, [11
aR] -Cyclopentyl-7- (prop-2-enyl)
-8-[(pyridin-2-yl) methoxy] -2,3,11,11
a-Tetrahydro-6H-pyrazino [1,2b] isoquinoline-1,4-dione, 2-cyclopentyl-2- [4
-(2,4-dimethylpyrido [2,3-b] indole-
9-ylmethyl) phenyl] -N- (2-hydroxy-1
-Phenylethyl) acetamide, 2-cyclopentyl-N- (2-hydroxy-1-phenylethyl) -2-
[4- (quinolin-2-ylmethoxy) -phenyl] acetamide, hydrates of these compounds, stereoisomers of these compounds, and pharmaceutically acceptable forms of the compounds, the hydrates, and the stereoisomers The drug according to claim 1, which is a compound selected from the group consisting of salts. 【請求項３】 前記アポリポタンパク質Ｂ分泌物/ミク
ロソームトリグリセリド転移タンパク質阻害薬が、４'
−トリフルオロメチル−ビフェニル−２−カルボン酸−
[２−(１Ｈ−[１,２,４］トリアゾール−３−イルメチ
ル)−１,２,３,４−テトラヒドロイソキノリン−６−イ
ル]−アミドという化合物または前記化合物の医薬用と
して許容しうる塩である、請求項２記載の薬剤。3. The method according to claim 2, wherein the apolipoprotein B secretory / microsomal triglyceride transfer protein inhibitor is 4 ′.
-Trifluoromethyl-biphenyl-2-carboxylic acid-
The compound [2- (1H- [1,2,4] triazol-3-ylmethyl) -1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-6-yl] -amide or a pharmaceutically acceptable salt of the compound The drug according to claim 2, which is: 【請求項４】 前記アポリポタンパク質Ｂ分泌物/ミク
ロソームトリグリセリド転移タンパク質阻害薬が、４'
−トリフルオロメチル−ビフェニル−２−カルボン酸−
[２−(２−アセチルアミノエチル)−１,２,３,４−テト
ラヒドロイソキノリン−６−イル]−アミドという化合
物、前記化合物の水和物、前記化合物の医薬用として許
容しうる塩、または前記水和物の医薬用として許容しう
る塩である、請求項２記載の薬剤。4. The apolipoprotein B secretion / microsomal triglyceride transfer protein inhibitor comprises 4 ′
-Trifluoromethyl-biphenyl-2-carboxylic acid-
A compound [2- (2-acetylaminoethyl) -1,2,3,4-tetrahydroisoquinolin-6-yl] -amide, a hydrate of the compound, a pharmaceutically acceptable salt of the compound, or 3. The medicament according to claim 2, which is a pharmaceutically acceptable salt of the hydrate.