JP2000083682A - 新規なヒトｇ―タンパク質結合レセプタ―（ｈｃｅｐｔ０９） - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 新規ヒト７−膜貫通レセプターのＨＣＥＰＴ
０９ポリペプチドおよびこれをコードするｃＤＮＡを提
供する。 【解決手段】 ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドおよびポリ
ヌクレオチド、ならびにそれらの製造方法、さらに感染
症等の治療プロトコールの設計におけるＨＣＥＰＴ０９
ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本出願は、１９９７年５月７日出願の米国
仮出願第６０／０４５，８８９の利益を主張する。

【発明の属する技術分野】本発明は、新たに同定された
ポリヌクレオチド、それによりコードされるポリペプチ
ド、このようなポリヌクレオチドおよびポリペプチドの
使用およびその生成に関する。さらに詳しくは、本発明
のポリヌクレオチドおよびポリペプチドはＧ−タンパク
質結合レセプターファミリー（以下、ＨＣＥＰＴ０９と
いう）に関する。本発明はまた、かかるポリヌクレオチ
ドおよびポリペプチドの作用を阻害または活性化するこ
とに関する。

【０００２】

【従来の技術および発明が解決しようとする課題】医学
的に重要な多くの生物学的プロセスが、Ｇタンパク質お
よび／またはセカンドメッセンジャー、例えばｃＡＭＰ
が関係しているシグナルトランスダクション経路に関係
するタンパク質によって媒介されることはよく確立され
ている（Lefkowitz, Nature, 1991, 351:353-354）。本
明細書中、これらのタンパク質は、Ｇタンパク質または
ＰＰＧタンパク質とともに経路に関係しているタンパク
質をいう。これらのタンパク質のいくつかの例は、アド
レナリン作動性因子およびドパミンのためのタンパク質
のごときＧＰＣレセプター（Kobilka, B. K. et al.,Pr
oc. Natl. Acad. Sci., USA, 1987, 84:46-50;Kobilka,
B. K. et al., Science, 1987, 238:650-656;Bunzow,
J. R., et al., Nature, 1988, 336:783-787）、Ｇタン
パク質そのもの、エフェクター・タンパク質、例えば、
ホスホリパーゼＣ、アデニルサイクラーゼおよびホスホ
ジエステラーゼ、および、アクチュエイター・タンパク
質、例えばプロテインキナーゼＡおよびプロテインキナ
ーゼＣ（Simon, M. I., et al., Science, 1991, 252:8
02-8）を包含する。

【０００３】例えば、シグナルトランスダクションの一
つの形態において、ホルモン結合の効果は、酵素である
アデニレートサイクラーゼの細胞内部での活性化であ
る。ホルモンによる酵素の活性化は、ヌクレオチドＧＴ
Ｐの存在に依存している。ＧＴＰはホルモン結合にも影
響する。Ｇタンパク質は、アデニレートサイクラーゼに
対するホルモンレセプターに結合する。Ｇタンパク質
は、ホルモンレセプターによって活性化されると結合型
ＧＤＰをＧＴＰに交換することが示された。ついで、有
ＧＴＰ形態はアデニレートサイクラーゼに結合して活性
化する。Ｇタンパク質自体によって触媒されるＧＴＰの
ＧＤＰへの加水分解は、Ｇタンパク質をもとの不活性形
態に戻す。かくしてＧタンパク質は、レセプターからエ
フェクターへシグナルを伝達する媒体のごとき、およ
び、シグナルの持続期間を制御する時計のごとき２つの
役割を果たしている。

【０００４】Ｇタンパク質結合レセプターの膜タンパク
質遺伝子スーパーファミリーは、７つの推定膜貫通ドメ
インを有するものとして特徴づけられる。そのドメイン
は細胞外ループまたは細胞質ループによって連結される
膜貫通αヘリックスを表すと考えられている。Ｇタンパ
ク質結合レセプターは、ホルモンレセプター、ウイルス
レセプター、成長因子レセプターおよび神経レセプター
のごとき、広範囲の生物学的活性レセプターを包含す
る。

【０００５】Ｇタンパク質結合レセプター（もしくは７
ＴＭレセプターとして知られているもの）は、約２０な
いし３０個のアミノ酸のこれら７つの保存的疎水的スト
レッチを包含し、少なくとも８つの多様な親水性ループ
を連結するものとして特徴づけられる。レセプター結合
Ｇタンパク質ファミリーは、精神病および神経疾患を治
療するために使用される向精神薬に結合するドパミンレ
セプターを包含する。このファミリーのメンバーの他の
例は、カルシトニン、アドレナリン様物質、エンドセリ
ン、ｃＡＭＰ、アデノシン、ムスカリン様物質、アセチ
ルコリン、セロトニン、ヒスタミン、トロンビン、キニ
ン、卵胞刺激ホルモン、オプシン、内皮細胞分化遺伝子
-１、ロドプシン、オドラント、およびサイトメガロウ
イルスレセプターを包含するが、これらに限定されな
い。

【０００６】ほとんどのＧタンパク質結合レセプター
は、機能的タンパク質構造を安定化すると考えられてい
るジスルフィド結合を形成する最初の２つの細胞外ルー
プの各々において単一の保存的システイン残基を有す
る。７つの膜貫通領域を、ＴＭ１、ＴＭ２、ＴＭ３、Ｔ
Ｍ４、ＴＭ５、ＴＭ６およびＴＭ７と命名する。ＴＭ３
はシグナルトランスダクションに関係している。システ
イン残基のリン酸化および脂質付加（パルミチル化また
はファルネシル化）は、いくつかのＧタンパク質結合レ
セプターのシグナルトランスダクションに影響し得る。
ほとんどのＧタンパク質結合レセプターは、第３の細胞
質ループおよび／またはカルボキシ末端に潜在的リン酸
化部位を含有する。βアドレナリンレセプターのごとき
いくつかのＧタンパク質結合レセプターについて、プロ
テインキナーゼＡおよび／または特異的レセプターキナ
ーゼによるリン酸化がレセプターの脱感作を媒介する。

【０００７】いくつかのレセプターについては、Ｇタン
パク質結合レセプターのリガンド結合部位は、いくつか
のＧタンパク質結合レセプター膜貫通ドメインによって
形成される親水性ソケットを含んでなり、該ソケットは
Ｇタンパク質結合レセプターの疎水性残基によって取り
囲まれていると考えられている。各Ｇタンパク質結合レ
セプター膜貫通ヘリックスの親水性側は内向きになって
おり、極性のリガンド結合部位を形成すると仮定されて
いる。ＴＭ３は、いくつかのＧタンパク質結合レセプタ
ーにおいて、ＴＭ３アスパラギン酸残基のごときリガン
ド結合部位を有することにＴＭ３が関係している。複数
のＴＭ５セリン、ＴＭ６アスパラギン、および、ＴＭ６
またはＴＭ７のフェニルアラニンまたはチロシンもリガ
ンド結合に関係している。

【０００８】Ｇタンパク質結合レセプターは、様々な細
胞内酵素、イオンチャンネルおよび輸送体とヘテロ３量
体Ｇタンパク質によって細胞内で結合している可能性が
ある（Johnson et al., Endoc. Rev., 1989, 10:317-33
1参照）。異なるＧタンパク質αサブユニットは、特定
のエフェクターを優先的に刺激して、細胞内の様々な生
物学的機能をモジュレートする。Ｇタンパク質結合レセ
プターの細胞質側残基のリン酸化は、いくつかのＧタン
パク質結合レセプターのＧタンパク質結合調節のための
重要な機構として同定されている。Ｇタンパク質結合レ
セプターは、哺乳動物宿主内の多数の部位において見い
だされる。過去１５年間、７膜貫通（７ＴＭ）レセプタ
ーを標的にした３５０種近くの治療薬が市場に導入され
成功している。

【０００９】これは、これらレセプターが治療標的とし
て確立され、かつ立証された歴史を有することを示して
いる。限定するものではないが、細菌、真菌、原生動物
およびウイルス感染、詳細には、ＨＩＶ−１またはＨＩ
Ｖ−２によって引き起こされる感染；痛み；腫瘍；拒食
症；過食症；喘息；パーキンソン病；急性心不全；低血
圧；高血圧；閉尿；骨粗鬆症；狭心症；心筋梗塞；潰
瘍；喘息；アレルギー；良性前立腺肥大；および、不安
症、精神***症、躁鬱病、精神錯乱、痴呆、重度の知恵
遅れ、ならびに、ハンチントン病またはジルス・デラ・
トレット（Gillesdela Tourett's）症候群のごとき運動
障害を含め、機能不全または疾患の予防、改善または矯
正において役割を果たしうる、さらなるレセプターを同
定および特徴付ける必要があるのは明らかである。

【００１０】

【課題を解決するための手段】一の態様において、本発
明はＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドおよび組換え材料なら
びにその製法に関する。本発明の別の態様は、そのよう
なＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドおよびポリヌクレオチド
を用いる方法に関する。かかる使用は、とりわけ、細
菌、真菌、原生動物およびウイルス感染、詳細には、Ｈ
ＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされる感
染；痛み；腫瘍；拒食症；過食症；喘息；パーキンソン
病；急性心不全；低血圧；高血圧；閉尿；骨粗鬆症；狭
心症；心筋梗塞；潰瘍；喘息；アレルギー；良性前立腺
肥大；および、不安症、精神***症、躁鬱病、精神錯
乱、痴呆、重度の知恵遅れ、ならびに、ハンチントン病
またはジルス・デラ・トレット（Gilles dela Tourett'
s）症候群のごとき運動障害の治療を包含する。さらに
別の態様において、本発明は、該発明により得られる材
料を用いてアゴニストおよびアンタゴニストを同定する
方法、およびＨＣＥＰＴ０９の平衡異常に付随する症状
をその同定した化合物を用いて治療することに関する。
本発明のさらに別の態様は不適当なＨＣＥＰＴ０９活性
またはレベルに伴う疾患を検出するための診断アッセイ
に関する。

【００１１】

【発明の実施の形態】定義 以下の定義は、本明細書で汎用する用語の理解を容易に
するためのものである。「ＨＣＥＰＴ０９」は、とりわ
け、配列番号２に示されるアミノ酸配列を有するポリペ
プチドまたはその対立遺伝子変種をいう。「レセプター
の活性」または「レセプターの生物学的活性」とは、類
似の活性または改良された活性あるいは望ましくない副
作用の減じたこれらの活性を含め、該ＨＣＥＰＴ０９の
代謝的または生理学的機能をいう。該ＨＣＥＰＴ０９の
抗原的および免疫原的活性も含まれる。

【００１２】「ＨＣＥＰＴ０９遺伝子」とは、配列番号
１に示されるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチ
ドまたはその対立遺伝子変種および／またはそれらの相
補物をいう。本明細書で用いる「抗体」は、ポリクロー
ナルおよびモノクローナル抗体、キメラ、１本鎖、およ
びヒト化抗体、ならびにＦａｂの産物または他の免疫グ
ロブリン発現ライブラリーを含め、Ｆａｂフラグメント
を包含する。「単離」とは、「人間の手により」天然の
状態から変えられたことを意味する。「単離」された組
成物または物質が天然に存在する場合、その本来の環境
から変えられるかもしくは取り除かれ、またはその両方
がなされたことを意味する。例えば、天然の状態で生存
動物に存在するポリヌクレオチドまたはポリペプチドは
「単離」されていないが、その天然状態で共存する物質
から分離されているその同一のポリヌクレオチドまたは
ポリペプチドは、本明細書に用いる用語である、「単
離」がなされている。

【００１３】「ポリヌクレオチド」とは、一般に、修飾
されていないＲＮＡもしくはＤＮＡ、または修飾された
ＲＮＡもしくはＤＮＡであってよい、いずれかのポリリ
ボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドを
いう。「ポリヌクレオチド」は、一本鎖および二本鎖Ｄ
ＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、
一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、および一本鎖および二本鎖
領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖もしくはより典型的
には二本鎖、または一本鎖および二本鎖領域の混合物で
あってもよいＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分
子を包含するが、これに限定されるものではない。加え
て、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡもしくはＤＮＡま
たはＲＮＡとＤＮＡの両方を含む三本鎖領域をいう。ポ
リヌクレオチドなる用語はまた、一つまたはそれ以上の
修飾された塩基を含有するＤＮＡまたはＲＮＡ、ならび
に安定性またはその他の理由で修飾された骨格を有する
ＤＮＡまたはＲＮＡを包含する。「修飾された」塩基
は、例えば、トリチル化された塩基およびイノシンなど
の通常でない塩基を包含する。種々の修飾がＤＮＡおよ
びＲＮＡに対してなされている。よって、「ポリヌクレ
オチド」は、典型的には天然において見いだされるよう
な化学的、酵素的または代謝的に修飾された形態のポリ
ヌクレオチド、ならびにウイルスおよび細胞に特徴的な
化学的形態のＤＮＡおよびＲＮＡを包含する。また、
「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴヌクレオチド
と称される比較的短いポリヌクレオチドも包含する。

【００１４】「ポリペプチド」は、ペプチド結合により
互いに結合している２個またはそれ以上のアミノ酸を含
むペプチドまたはタンパク質あるいは修飾されたペプチ
ド結合により互いに結合している２個またはそれ以上の
アミノ酸を含むペプチドまたはタンパク質、すなわち、
ペプチドアイソスターをいう。「ポリペプチド」は、通
常、ペプチド、オリゴペプチドまたはオリゴマーと称さ
れる短鎖、およびタンパク質と称される長鎖の両方をい
う。ポリペプチドは遺伝子によりコードされた２０種の
アミノ酸とは異なるアミノ酸を含有してもよい。「ポリ
ペプチド」は、翻訳後プロセッシングなどの自然の工程
により、または当業者に周知の化学修飾技法により修飾
されたアミノ酸配列を含有する。このような修飾は基本
テキストにて、およびさらに詳細な研究論文にて、なら
びに膨大な研究文献において詳しく記載されている。修
飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノまたは
カルボキシル末端を含め、ポリペプチドのどこででも起
こり得る。同一の型の修飾が所定のポリペプチドの幾つ
かの部位で、同一または異なる程度で存在し得ることは
理解されよう。また、所定のポリペプチドは多くの型の
修飾を含んでいてもよい。ポリペプチドはユビキチネー
ションの結果として分岐していてもよく、分岐している
かまたはしていない、環状であってもよい。環状、分岐
および分岐した環状ポリペプチドは翻訳後の天然プロセ
スにより生じたものであってもよく、または合成法によ
り製造されたものであってもよい。修飾は、アセチル
化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビ
ンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまた
はヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導
体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、
交差架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、
交差架橋共有結合形成、シスチン形成、ピログルタメー
ト形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、糖鎖形
成、ＧＰＩアンカー形成、ヒドロキシル化、ヨード化、
メチル化、ミリストイル化、酸化、タンパク質分解的プ
ロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、セレ
ノイル化、硫酸化、アルギニル化などのトランスファー
ＲＮＡ媒介のタンパク質へのアミノ酸付加、ならびにユ
ビキチネーションを包含する。例えば、PROTEINS‐STRU
CTUREAND MOLECULAR PROPERTIES、第２版、T.E.Creight
on、W.H.Freeman and Company、New York（1993）およ
びPOSTTRANSLATIONAL COVALENT MODIFICATION OF PROTE
INS、B.C.Johnson編、Academic Press、New York（198
3）のWold,F.、Posttranslational Protein Modificati
ons：Perspectives and Prospects、1〜12頁；Seifter
ら、“Analysis for protein modifications and nonpr
otein cofactors”、Meth.Enzymol. 182：626-646（199
0）およびRattanら、“Protein Synthesis：Posttransl
ational Modifications and Aging"、Ann.N.Y.Acad.Sc
i.663：48-62（1992）を参照のこと。

【００１５】本明細書で用いる「変種」なる用語は、各
々、対照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは異な
るが、本質的な特性は保持している、ポリヌクレオチド
またはポリペプチドである。典型的なポリヌクレオチド
の変種は、別の対照ポリヌクレオチドとはヌクレオチド
配列が異なる。変種のヌクレオチド配列における変化
は、対照ポリヌクレオチドによりコードされるポリペプ
チドのアミノ酸配列と変わっていてもよく、変わってい
なくてもよい。ヌクレオチドの変化は、後記するよう
に、対照配列によりコードされるポリペプチドにおいて
アミノ酸置換、付加、欠失、融合および末端切断をもた
らしうる。典型的なポリペプチドの変種は、別の対照ポ
リペプチドとはアミノ酸配列が異なる。一般に、差異
は、対照ポリペプチドおよび変種の配列が、全体的に極
めて類似しており、多くの領域で同一であるように限定
される。変種および対照ポリペプチドは、１またはそれ
以上の置換、付加、欠失のいずれかの組み合わせによ
り、アミノ酸配列にて異なっていてもよい。置換または
挿入されたアミノ酸残基は、遺伝暗号によりコードされ
たものであってもなくてもよい。ポリヌクレオチドまた
はポリペプチドの変種は、対立遺伝子変種のような天然
物であってもよく、または天然に発生することが知られ
ていない変種であってもよい。ポリヌクレオチドおよび
ポリペプチドの天然に生じない変種は、突然変異誘発技
術により、または直接的合成により製造できる。

【００１６】「同一性」は、ヌクレオチド配列またはア
ミノ酸配列のある程度の同一性をいう。一般に、配列は
最高の対合が得られるように配置される。「同一性」自
体は、当該分野にて認識されている意義を有しており、
公開されている方法を用いて計算することができる。例
えば、（COMPUTATIONAL MOLECULAR BIOLOGY，Lesk,A.M.
編、Oxford University Press、New York、1988年；BIO
COMPUTING：INFORMATICS AND GENOME PROJECTS、Smith,
D.W.編、Academic Press、New York、1993年；COMPUTER
ANALYSIS OF SEQUENCE DATA，PARTＩ，Griffin,A.M.お
よびGriffin,H.G.編、Humana Press、New Jersey、1994
年；SEQUENCE ANALYSIS IN MOLECULAR BIOLOGY，von He
inje,G.、Academic Press、1987年；およびSEQUENCE AN
ALYSIS PRIMER，Gribskov,M.およびDevereux,J.編、Ｍ
Stockton Press、New York、1991年）を参照のこと。二
つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列の間の同
一性を測定するのに多数の方法があるが、「同一性」な
る用語は当業者に周知である（Carillo,H.およびLipto
n,D.，SIAM J.Applied Math.，48：1073（1988））。２
つの配列間の同一性または類似性を測定するために通常
用いられる方法は、Guide to Huge Computers、Martin
J. Bishop,編、Academic Press、San Diego、1994年、
およびCarillo,H.およびLipton,D.，SIAM J.Applied Ma
th.，48：1073（1988）に開示されている方法を包含す
るが、これらに限定されるものではない。同一性および
類似性を決定するための方法はコンピュータープログラ
ムに集成されている。二つの配列間の同一性および類似
性を測定するための好ましいコンピュータープログラム
法は、ＧＣＧプログラムパッケージ（Devereux,J.ら、N
ucleic Acids Research 12（1）：387（1984））、BLAS
TP、BLASTN、FASTA（Atschul,S.F.ら、J.Molec.Biol. 2
15：215-403（1990））を包含するが、これらに限定さ
れるものではない。

【００１７】一例として、配列番号１の対照ヌクレオチ
ド配列に対して少なくとも、例えば９５％の「同一性」
を有するヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチド
は、そのポリヌクレオチド配列が配列番号１の対照ヌク
レオチド配列のヌクレオチド各１００個当たり５個まで
の点突然変異を有していてもよいことを除き、ポリヌク
レオチドのヌクレオチド配列が対照配列と同一であるこ
とを意図とする。言い換えれば、対照ヌクレオチド配列
と少なくとも９５％同一であるヌクレオチド配列を有す
るポリヌクレオチドを得るためには、その対照配列にお
けるヌクレオチドの５％までが欠失または別のヌクレオ
チドで置換されていてもよく、または対照配列における
全ヌクレオチドの５％までの数のヌクレオチドが対照配
列中に挿入されていてもよい。対照配列のこれらの変異
は、対照ヌクレオチド配列の５’または３’末端位置
で、またはそれら末端位置の間のどこで起こってもよ
く、対照配列中のヌクレオチド間に個々に、または対照
配列内の一またはそれ以上の隣接する基において点在し
てもよい。

【００１８】同様に、配列番号２の対照アミノ酸配列に
対して少なくとも、例えば９５％の同一性を有するアミ
ノ酸配列を有するポリペプチドは、そのポリペプチド配
列が配列番号２の対照アミノ酸のアミノ酸各１００個当
たり５個までのアミノ酸変異を有していてもよいことを
除き、そのポリペプチドのアミノ酸配列が、対照配列と
同一であることを意図とする。言い換えれば、対照アミ
ノ酸配列に対して少なくとも９５％同一であるアミノ酸
配列を有するポリペプチドを得るためには、その対照配
列におけるアミノ酸残基の５％までが欠失または別のア
ミノ酸で置換されていてもよく、または対照配列におけ
る全アミノ酸残基の５％までの数のアミノ酸が対照配列
中に挿入されていてもよい。対照配列のこれらの変化は
対照アミノ酸配列のアミノまたはカルボキシ末端位置
で、またはそれら末端位置の間のどこで起こってもよ
く、対照配列中の残基間に個々に、または対照配列内の
一またはそれ以上の隣接する基において点在してもよ
い。

【００１９】本発明のポリペプチド 一の態様において、本発明はＨＣＥＰＴ０９ポリペプチ
ドに関する。ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドは、配列番号
２のポリペプチド；ならびに配列番号２のアミノ酸配列
を含むポリペプチド；および配列番号２のアミノ酸配列
とその全長にわたって少なくとも８０％の同一性、より
好ましくは配列番号２と少なくとも９０％の同一性、さ
らにより好ましくは少なくとも９５％の同一性を有する
アミノ酸配列を含むポリペプチドを包含する。さらに
は、少なくとも９７−９９％の同一性を有するものがも
っとも好ましい。ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドはまた、
配列番号２のアミノ酸配列を有するポリペプチドとその
全長にわたって少なくとも８０％の同一性、より好まし
くは配列番号２と少なくとも９０％の同一性、さらによ
り好ましくは少なくとも９５％の同一性を有するアミノ
酸配列を含むポリペプチドも包含する。さらには、少な
くとも９７−９９％の同一性を有するものがもっとも好
ましい。好ましくは、ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドは少
なくとも１つのレセプターの生物学的活性を示す。

【００２０】ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドは「成熟」タ
ンパク質の形態であってもよく、あるいは融合タンパク
質などの大型のタンパク質の一部であってもよい。分泌
またはリーダー配列、プロ配列、複数のヒスチジン残基
のごとき精製を促進する配列、または組換え操作の間の
安定性のための付加的な配列を含む付加的なアミノ酸配
列を含んでいることが有利なことがよくある。

【００２１】ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドのフラグメン
トも本発明に含まれる。フラグメントは、前記のＨＣＥ
ＰＴ０９ポリペプチドのアミノ酸配列のすべてではなく
一部に対して全く同一であるアミノ酸配列を有するポリ
ペプチドである。ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドでは、フ
ラグメントは「独立している」ものであるか、またはフ
ラグメントが一部分もしくは一領域を形成する大型のポ
リペプチド内に含まれていてもよく、最も好ましくは単
一の連続した領域として含まれる。本発明のポリペプチ
ドフラグメントの典型例は、例えば、ＨＣＥＰＴ０９ポ
リペプチドのアミノ酸番号約１〜２０、２１〜４０、４
１〜６０、６１〜８０、８１〜１００および１０１から
末端までからなるフラグメントを包含する。この意味に
おいて、「約」とは、片方または両端において、特記さ
れた数よりも数個、５個、４個、３個、２個または１個
だけ多いかまたは少ない範囲を含む。

【００２２】好ましいフラグメントは、例えば、アミノ
末端を含む一連の残基が欠失、またはカルボキシル末端
を含む一連の残基が欠失、あるいは一方がアミノ末端で
もう一方がカルボキシル末端を含む２つの一連の残基が
欠失していること以外は、ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチド
のアミノ酸配列を有する切断ポリペプチドを包含する。
また、アルファーヘリックスおよびアルファーヘリック
ス形成領域、ベータシートおよびベータシート形成領
域、ターンおよびターン形成領域、コイルおよびコイル
形成領域、親水領域、疎水領域、アルファー両親媒性領
域、ベータ両親媒性領域、可変領域、表面形成領域、基
質結合領域および高抗原性指標領域を有するフラグメン
トなどの構造的または機能的属性により特徴付けられる
フラグメントも好ましい。他の好ましいフラグメントは
生物学的に活性なフラグメントである。生物学的に活性
なフラグメントは、類似活性または改良された活性を有
する、あるいは望ましくない活性を減じたものを含め、
レセプター活性を媒介する、フラグメントである。動
物、とりわけヒトにおいて抗原的または免疫原的なフラ
グメントもまた含まれる。

【００２３】好ましくは、これらのポリペプチドフラグ
メントはすべて、抗原的活性を含め、レセプターの生物
学的活性を保持している。定義した配列の変種およびフ
ラグメントも本発明の一部を形成する。好ましい変種
は、同類アミノ酸置換により対照と異なるものであり、
すなわち、一の残基が同様の特徴を有する他の残基によ
り置換されているものである。典型的なかかる置換は、
Ala、Val、LeuおよびIleの間：SerおよびThrの間；酸性
残基AspおよびGluの間；AsnおよびGlnの間；ならびに塩
基性残基LysおよびArgの間；あるいは芳香族残基Pheお
よびTyrの間におけるものである。数個、５ないし１０
個、１ないし５個、または１ないし２個のアミノ酸がい
ずれかの組み合わせで置換、欠失または付加されている
変種が特に好ましい。

【００２４】いずれか適当な方法にて本発明のＨＣＥＰ
Ｔ０９ポリペプチドを製造することができる。かかるポ
リペプチドは、単離された天然ポリペプチド、組換え技
法で製造されたポリペプチド、合成法により製造された
ポリペプチド、またはこれらの方法の組み合わせにより
産生されたポリペプチドを包含する。かかるポリペプチ
ドの製造手段は当該分野においてよく知られている。

【００２５】本発明のポリヌクレオチド 本発明のもう一つ別の態様はＨＣＥＰＴ０９ポリヌクレ
オチドに関する。ＨＣＥＰＴ０９ポリヌクレオチドは、
ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドをコードする単離ポリヌク
レオチドおよびフラグメント、ならびにそのポリヌクレ
オチドに密接に関連するポリヌクレオチドに関する。さ
らに詳細には、本発明のＨＣＥＰＴ０９ポリヌクレオチ
ドは、配列番号２のＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドをコー
ドする配列番号1に示されるヌクレオチド配列を有して
なるポリヌクレオチド、および配列番号1の特定の配列
を有するポリヌクレオチドを包含する。ＨＣＥＰＴ０９
ポリヌクレオチドは、さらには、配列番号２のＨＣＥＰ
Ｔ０９ポリペプチドをコードするヌクレオチド配列とそ
の全長にわたって少なくとも８０％の同一性を有するヌ
クレオチドを含むポリヌクレオチド、および配列番号１
のヌクレオチド配列とその全長にわたって少なくとも８
０％同一であるヌクレオチド配列を有するポリヌクレオ
チドを包含する。この点において、少なくとも９０％同
一であるポリヌクレオチドが特に好ましく、少なくとも
９５％同一であるのがさらに好ましい。さらには、少な
くとも９７％同一であるのがより好ましく、少なくとも
９８−９９％の同一性を有するものがより一層好まし
く、少なくとも９９％の同一性を有するものが最も好ま
しい。さらに、増幅させるのにあるいはプローブまたは
マーカーとしての用途に用いることのできる条件下で、
ハイブリッド形成するのに配列番号１に含まれるヌクレ
オチド配列と十分な同一性を有するヌクレオチド配列も
ＨＣＥＰＴ０９ポリヌクレオチドに含められる。本発明
はまた、かかるＨＣＥＰＴ０９ポリヌクレオチドに相補
的なポリヌクレオチドを提供する。

【００２６】ヒトＨＣＥＰＴ０９をコードする表１(配
列番号１)のｃＤＮＡを配列決定した結果に示されるよ
うに、本発明のＨＣＥＰＴ０９は、Ｇ−タンパク質結合
レセプターファミリーに構造的に関連付けられる。配列
番号１のｃＤＮＡ配列は、４２３個のアミノ酸のポリペ
プチドをコードする読み枠（ヌクレオチド番号１〜１２
７２）を含んでいる。表２（配列番号２）のアミノ酸配
列は、マウスグルココルチコイド−誘導レセプターと、
４２３個のアミノ酸残基にて、約８８．４％の同一性
（FASTAを使用）を有する(Accession M80481, M. T. Ha
rriganら、 Mol. Endo. 5:1331-1338, 1991)。さらに、
ＨＣＥＰＴ０９は、米国特許第５，５０８，３８４号由
来の配列７１に対し、８８．４％の同一性を有する。さ
らに、ＨＣＥＰＴ０９（配列番号２)は、ニューロペプ
チドＹレセプターと、３４．１％の同一性を有する（Ac
cession M81490, X. J. Li ら、J. Biol. Chem. 267:9-
12, 1992）。さらに、ＨＣＥＰＴ０９（配列番号２）
は、ニューロメジン（neuromedin）Ｋレセプターと、３
５．１％の同一性を有する(Accession X65172, K. Taka
hashi ら、Eur. J. Biochem. 204:1025-1033, 1992)。
さらに、ＨＣＥＰＴ０９（配列番号２）は、リムノキニ
ン（lymnokinin)レセプターと、３５．５％の同一性を
有する(Accession U84499, K. J. A. Cox ら、 J Nuero
sci. 17, in press,1997)。表１（配列番号１）のヌク
レオチド配列は、マウスグルココルチコイド誘導レセプ
ターと１３７４ヌクレオチド残基において約８３．４％
の同一性（FASTAを使用）を有する（Accession M80841,
M. T. Harrigan ら、Mol. Endo. 5:1331-1338, 199
1）。

【００２７】表１^a ATGGTCCCTCACCTCTTGCTGCTCTGTCTCCTCCCCTTGG 40 TGCGAgCCACCGAGCCCCACGAgGGCCGGGCCGACGAgCA 80 gAGCGCGGAgGCGGCCCTGGCCGTGCCCAATGCCTCGCAC 120 TTCTTCTCTTGGAACAACTACACCTTCTCCGACTGGCAgA 160 ACTTTGTGGGCAGGAgGCGCTACGGCGCTgAgTCCCAgAA 200 CCCCACGGTGAAAgCCCTGCTCATTGTGGCTTAcTCCTTc 240 ATCATtGTcTTCTCAcTCTttGGCAAcGTCCTGGTCTGTC 280 ATGTcATcTTCAAGAACCAGCGAATGCACTcGGCCACCAG 320 CCTCTTcATCGTcAACCTGACAGTTGCCGACATAATGATC 360 ACGCTGcTCAACACCCCCTTCACTTTGGTTCGCTTTGTGA 400 ACAGCACATGGATATTTGGGAAGGGCATGTGCCATGTCAG 440 CCGCTTTGCCCAGTACTGCTCACTGCACGTCTCAGCACTG 480 ACACTGACAGCCATTGCGGTGGATCGCCACCAGGTCATCA 520 TGCACCCCTTGAAACCCCGGATCTCAATCACAAAGGGTGT 560 CATCTACATCGCTGTCATCTGGACCATGGCTACGTTCTTT 600 TCACTCCCACATGCTATCTGCCAGAAATTATTTACCTTCA 640 AATACAGTGAGGACATTGTGCGCTCCCTCTGCCTGCCAGA 680 CTTCCCTGAGCCAGCTGACCTCTTCTGGAAGTACCTGGAC 720 TTGGCCACCTTCATCCTGCTCTACATCCTGCCCCTCCTCA 760 TCATCTCTGTGGCCTACGCTCGTGTGGCCAAGAAAcTGTG 800 GcTGTGTAATATGATTGGcGATGTGACCACAGAGCAGtAc 840 TTTGCCcTGCGGcGCAAAAAGAAGAAGACCATCAAGATGT 880 TGATGcTGGTGGTAGTCcTCTTTGCCcTcTGcTGGTTCCC 920 CcTCAAcTGctACGTCcTCcTCCTGTCCAGCAAGGTCATC 960 CGCACCAACAATGCCcTcTACTTTGCCTTCCACTGGTTTG 1000 CCATGAGCAGCACCTGCTATAACCCCTTCATATACTGcTG 1040 GCTGAACGAGAACTTCAGGATCGAGCTAAAGGCATTACTG 1080 AGCATGTGTCAAAGACCTCCCAAGCCTCAGGAGGACAGGC 1120 CACCCTCCCCAGTTCCTTCCTTCAGGGTGGCCTGGACAGA 1160 GAAGAATGATGGCCAGAGGGCTCCCCTTGCCAATAACCTC 1200 CTGCCCACCTCCCAACTCCAGTcTGGGAAGACAGACCTGT 1240 CATCTGTGGAACCCATTGTGACGATGAGTTAGAAGAGGTT 1280 GGGAAGAGGGAGTGGGAGGGGTCTGTCTCCACCTGAGGCA 1320 GGGAAAGAGAGCCTATTCTCACACATGATCTTCAGAGTGC 1360 TGGAAACACACTCCTGCAGAAGCTGTAGGACTCTTGAATT 1400 CCTAGGAAACTGTCCAGCCTCCTAGCCCCATGTGATGTGA 1440 AAACTAAAAnGCACCACCAACTAGACATGTGTTCATAAAT 1480 TCCCATCTAAGAAACACTGGGAGGCACAGCAGCCTGTATC 1520 TCTGAGGAAGAGGAGCGAGGACAACGTTGGCCCAGATGGG 1560 GGCTGAATCATTCAACTGCCTCCATCTGTGGGGCAGCTGC 1600 TGCCTTACAGCCCTTCCTACTGCTGAGCATCCCGAAGGGA 1640 GACCTAAATCATACTTTGGGTGTGGTGACCCAGATGCACA 1680 GAGCTCTGCTTGAAACAGGTACACGGGCCAGGGAAATGCC 1720 AGCAAGCCAGAGCGGGCGTGGAGATTTTTATGCCTCACTT 1760 TCTGGAGTCACTGGGCCATGATGAATCATAAGTCTTCAGT 1800 GGCCTAGCAATATCCAGATAAGAAAGGACCAACTTGGGTT 1840 CCTTAAAACAAAGGGAAATTATTATTGCCACTTAGAAAAA 1880 TTCAGAAAAGCACACACTCACATACACACACACAAAATCA 1920 CTCTCTTATCCCATCCATTTGTGATAACATCTGTGAACAT 1960 GCTGTGGCTCTATTTGCAACATTTTCCTTCGTGTGTGTGA 2000 TTGTGTGCATGTGTGCATGACCTTTTTTTTTTCTTTTTTT 2040 TTTTTTTTGAGATGGAATCTCGCTCTGTCACCCAGGTTGG 2080 AGTTCAGTGGCACAATCTCGGCTCACTGCAAGCTCTGCCT 2120 CCCAGGTTCATGCCGTTCTCCTGCCTCAGCCTCCCTAGTA 2160 GCTGGGACTACAGGTGCCCGCCACCATGCCCGGCTAATCT 2200 TTTGCATTTTTAGTAGAGACGGGGTTTCACCGTGTTAGCC 2240 AGGATGGTCTCGATCTCCTGACCTCGTGATCCACCTGCCT 2280 AGGCCTCCCAAAGTGTTGGGATTACAGGCGTGAGCCACCC 2320 CGCCCGGCCCTTTTTTTTCATTTATACTTTTTCATTTAGA 2360 TTGTAATGATTAACAGAAACAGGGGTACCTTTCCCAGGGG 2400 TGTCCACCAGAAGAGTTGAAGAAGAGGTGAGAAGATCCCA 2440 AGGTGAAGCCTGTCACCACGCAGACAGAACTGCCCCCTAT 2480 TGTAGACAGTGGTGGGAAGGGCCTGGCTCACATGCCCCTC 2520 CTTAGAGGCAGCCTCAAGATGAACCAGGAATCAAACTCAA 2560 CCAnGAGGCATGATTCCTTCTCTCCTGCAATTGCACAAAA 2600 ACAAGTGGTGGTGAAACATTGTTCTGTTTTCACAAGAGAT 2640 GAGGGAGCAGGCTTTCCAATATGCTGGAAGTATTGTGCTT 2680 AGACACTCATCCTCCCAGCTGTCTAGAA 2708^a ヒトＨＣＥＰＴ０９のヌクレオチド配列（配列番号
１）

【００２８】表２^b MVPHLLLLCLLPLVRATEPHEGRADQQNAEAALAVPNASH 40 FFSWNNYTYSDWQNFVGRRRYGAESQNPTVKALLIVAYSF 80 IIVFSLFGNVVVCHVIFKNQRMHSATSLFIVNLTVADIMI 120 TLLNTPFTLVRFVNSTWIFGKGMCHVSRFAQYCSLHVSAL 160 TLTAIAVDRHQVIMHPLKPRISITKGVIYIAVIWTMATFF 200 SLPHAICQKLFTFKYSEDIVRSLCLPDFPEPADLFWKYLD 240 LATFILLYILPLLIISVAYARVAKKLWLCNMIGDVTTEQY 280 FALRRKKKKTIKMLMLVVVLFALCWFPLNCYVLLLSSKVI 320 RTNNALYFAFHWFAMSSTCYNPFIYCWLNENFRIELKALL 360 SMCQRPPKPQEDRPPSPVPSFRVAWTEKNDGQRAPLANNL 400 LPTSQLQSGKTDLSSVEPIVTMS 423^b ヒトＨＣＥＰＴ０９のアミノ酸配列（配列番号２）

【００２９】ヒト小脳の細胞中のｍＲＮＡから由来のｃ
ＤＮＡライブラリーより標準的クローニングおよびスク
リーニングを用い、発現配列タグ（ＥＳＴ）分析（Adam
s,M.D.ら、Science 252：1651-1656（1991）；Adams,M.
D.ら、Nature 355：632-634（1992）；Adams,M.D.ら、N
ature 377 Supp：3-174（1995））を用いて、ＨＣＥＰ
Ｔ０９をコードする本発明の１のポリヌクレオチドを得
てもよい。ゲノムＤＮＡライブラリーのごとき天然源か
ら本発明のポリヌクレオチドを得ることもでき、あるい
はよく知られ、かつ商業上利用可能な方法を用いて合成
することもできる。配列番号2のＨＣＥＰＴ０９ポリペ
プチドをコードするヌクレオチド配列は、表１（配列番
号１のヌクレオチド番号１〜１２７２）に含まれるポリ
ペプチドをコードする配列と同一であってもよく、また
は遺伝暗号の重複性（縮重性）の結果として、配列番号
２のポリペプチドをもコードする配列であってもよい。

【００３０】本発明のポリヌクレオチドをＨＣＥＰＴ０
９ポリペプチドの組換え生産に用いる場合、ポリヌクレ
オチドはそれ自体、成熟ポリペプチドまたはそのフラグ
メントのコーディング配列を含むものであってもよく；
読み枠中に、リーダーまたは分泌配列、プレ、プロ、も
しくはプレプロタンパク質配列をコードするコーディン
グ配列、または他の融合ペプチド部分などの、他のコー
ディング配列を伴った、成熟ポリペプチドまたはフラグ
メントのコーディング配列を含むものであってもよい。
例えば、融合ポリペプチドの精製を促進するマーカー配
列をコードすることもできる。本発明のこの態様の特に
好ましい具体例において、マーカー配列は、ｐＱＥベク
ター（Qiagen,Inc.）で得られ、Gentzら、Proc.Natl.Ac
ad.Sci.,USA，86:821-824（1989）に記載されるよう
な、ヘキサ−ヒスチジンペプチドであるか、またはＨＡ
タグである。ポリヌクレオチドはまた、非コーディング
５’および３’配列、例えば、転写された非翻訳配列、
スプライスおよびポリアデニル化シグナル、リボソーム
結合部位およびmＲＮＡを安定化する配列などを含有し
ていてもよい。

【００３１】さらなる好ましい具体例は、表１（配列番
号２）のＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドのアミノ酸配列を
有し、数個、５ないし１０個、１ないし５個、１ないし
３個、１ないし２個または１個のアミノ酸残基がいずれ
かの組み合わせで置換、欠失または付加されているＨＣ
ＥＰＴ０９の変種をコードするポリヌクレオチドであ
る。本発明は、さらには、本明細書において前記した配
列とハイブリッド形成するポリヌクレオチドにも関す
る。この点において、本発明は、特に、本明細書におい
て前記したポリヌクレオチドにストリンジェントな条件
下でハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関
する。本明細書で用いる用語の「ストリンジェントな条
件」とは、配列間に少なくとも９５％、好ましくは少な
くとも９７％の同一性がある場合にのみハイブリダイゼ
ーションが起こることを意味する。

【００３２】本発明のポリヌクレオチドは、配列番号１
に含まれるヌクレオチド配列またはそのフラグメントに
対して同一または十分に同一であり、ｃＤＮＡおよびゲ
ノムＤＮＡ用のハイブリダイゼーションプローブとして
用いてＨＣＥＰＴ０９をコードする全長のｃＤＮＡおよ
びゲノムクローンを単離し、ＨＣＥＰＴ０９遺伝子に対
して高い配列類似性を有する他の遺伝子のｃＤＮＡおよ
びゲノムクローンを単離することができる。かかるハイ
ブリダイゼーション法は当業者に知られている。典型的
には、これらのヌクレオチド配列は、対照配列と７０％
同一、好ましくは８０％同一、より好ましくは９５％同
一である。一般に、プローブは少なくとも１５個のヌク
レオチドを含むであろう。好ましくは、かかるプローブ
は少なくとも３０個のヌクレオチドを有し、少なくとも
５０個のヌクレオチドを有していてもよい。特に好まし
いプローブは３０ないし５０個のヌクレオチドの範囲に
ある。

【００３３】一の具体例において、ＨＣＥＰＴ０９をコ
ードするポリヌクレオチドを得るには、適当なライブラ
リーをストリンジェントなハイブリダイゼーション条件
下で配列番号１を有する標識したプローブまたはそのフ
ラグメントでスクリーニングし、該ポリヌクレオチド配
列を含有する全長のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単
離する工程からなる。かくしてもう一つ別の態様におい
て、本発明のＨＣＥＰＴ０９ポリヌクレオチドは、さら
には、ストリンジェントな条件下で、配列番号1のヌク
レオチド配列またはそのフラグメントとハイブリダイズ
するヌクレオチド配列を含むヌクレオチド配列を包含す
る。さらに、上記したハイブリダイゼーション条件によ
り得られるヌクレオチド配列でコードされるアミノ酸配
列を含むポリペプチドもＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドに
含まれる。そのようなハイブリダイゼーション法は当業
者に周知である。ストリンジェントなハイブリダイゼー
ション条件は、前記されているとおりであるか、あるい
はまた５０％ホルムアミド、５ｘＳＳＣ（１５０ｍＭ N
aCl、１５ｍＭ クエン酸三ナトリウム）、５０ｍＭリン
酸ナトリウム（ｐＨ７.６）、５ｘDenhardt's溶液、１
０％硫酸デキストランおよび２０マイクログラム／ｍｌ
の変性切断サケ***ＤＮＡを有してなる溶液中で一夜４
２℃でインキュベートし、つづいてそのフィルターを約
６５℃で０.１ｘＳＳＣにて洗浄する条件である。研究
試薬ならびに動物およびヒトの疾患の治療および診断を
見いだすための材料として本発明のポリヌクレオチドお
よびポリペプチドを用いてもよい。

【００３４】ベクター、宿主細胞、発現 本発明はまた、本発明のポリヌクレオチド（複数でも
可）を含むベクター、本発明のベクターで遺伝子操作す
る宿主細胞および組換え技法による本発明のポリペプチ
ドの製造にも関する。無細胞翻訳系を用い、本発明のＤ
ＮＡ構築物から由来のＲＮＡを用いてかかるタンパク質
を製造できる。組換え体を製造するために、宿主細胞を
遺伝子操作して、本発明のポリヌクレオチドについての
発現系もしくはそれらの一部を組み込むことができる。
ポリヌクレオチドの宿主細胞への導入は、Davisら、BAS
IC METHODS IN MOLECULAR BIOLOGY（1986）；Sambrook
ら、MOLECUR CLONING：A LABORATORY MANUAL、第２版、
Cold Spring Harbor Laboratory Press、Cold Spring H
arbor、N.Y.（1989）のような、多くの標準的な実験マ
ニュアルに記載される方法により行うことができ、例え
ばリン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−
デキストラン媒介トランスフェクション、トランスベク
ション、マイクロインジェクション、陽イオン脂質媒介
トランスフェクション、エレクトロポレーション、トラ
ンスダクション、スクレープ負荷、バリスティック導入
または感染等がある。

【００３５】適当な宿主の代表的なものとして、細菌細
胞、例えば連鎖球菌属（streptococci）、ブドウ球菌属
（staphylococci）、大腸菌（E.coli）、ストレプトミ
セス（Streptomyces）および枯草菌（Bacillus subtili
s）細胞；真菌細胞、例えば酵母細胞およびアスペルギ
ルス属（Aspergillus）細胞；昆虫細胞、例えばドロソ
フィラＳ２（Drosophila S2）およびスポドプテラＳｆ
９（Spodoptera Sf9）細胞；動物細胞、例えばCHO、CO
S、HeLa、Ｃ１２７、３Ｔ３、BHK、HEK２９３およびボ
ウズ（Bows）黒色腫細胞；ならびに植物細胞が挙げられ
る。

【００３６】多種の発現系を用いることができる。この
ような系として、とりわけ、染色体、エピソームおよび
ウイルス由来系、例えば細菌プラスミドから、バクテリ
オファージから、トランスポゾンから、酵母エピソーム
から、挿入エレメントから、酵母染色体エレメントか
ら、バキュロウイルス、パポバウイルスなどの、例えば
ＳＶ４０、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘
ウイルス、仮性狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス等
のウイルスから由来のベクター、ならびにその組み合わ
せから由来のベクター、例えばコスミドおよびファージ
ミドなどのプラスミドおよびバクテリオファージ遺伝因
子から由来のベクターが挙げられる。発現系は発現を制
御および引き起こす調節領域を含有していてもよい。一
般に、ポリヌクレオチドを保持、伸長または発現させ、
宿主にてポリペプチドを産生するのに適した系またはベ
クターを使用できる。種々の周知かつ慣用的な技法、例
えば、Sambrookら、MOLECULAR CLONING、A LABORATORY
MANUAL（前掲）に記載されている技法により、適当なヌ
クレオチド配列を発現系に挿入できる。

【００３７】翻訳タンパク質を、小胞体内腔、周辺腔ま
たは細胞外環境へ分泌させるために、適当な分泌シグナ
ルを所望のポリペプチドに組み込むことができる。これ
らのシグナルはポリペプチドに固有のシグナルであって
もよく、あるいは異種性のシグナルであってもよい。Ｈ
ＣＥＰＴ０９ポリペプチドをスクリーニングアッセイに
て用いるために発現させる場合、一般に、そのポリペプ
チドを細胞表面で生成させることが好ましい。この場
合、スクリーニングアッセイに使用する前に細胞を集め
てもよい。ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドが培地中に分泌
されるならば、培地を回収してポリペプチドを回収し精
製することができる。細胞内に生成されるならば、まず
細胞を溶解し、ついで、ポリペプチドを回収しなければ
ならない。

【００３８】ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドは、硫酸アン
モニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまた
は陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロース
クロマトグラフィー、疎水相互作用クロマトグラフィ
ー、アフィニティークロマトグラフィー、ヒドロキシル
アパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマト
グラフィーを含め、周知の方法により、組換え細胞培養
物から回収および精製できる。高性能液体クロマトグラ
フィーを精製に用いるのが最も好ましい。ポリペプチド
が単離および／または精製中に変性する場合、タンパク
質を再生するための周知方法を用い、再び活性な立体配
座とすることができる。

【００３９】診断アッセイ 本発明はまた診断薬として用いるためのＨＣＥＰＴ０９
ポリヌクレオチドの使用にも関する。機能不全に関与す
るＨＣＥＰＴ０９遺伝子の変異形の検出は、ＨＣＥＰＴ
０９の過少発現、過剰発現または発現の変化よりもたら
される疾患の診断または疾患の疑いを特定することので
きる診断手段を提供する。ＨＣＥＰＴ０９遺伝子に変異
のある個体は、種々の方法によりＤＮＡレベルで検出で
きる。

【００４０】診断に供する核酸は、対象の細胞、例え
ば、血液、尿、唾液、組織生検または剖検材料より得る
ことができる。ゲノムＤＮＡは、検出するのに直接使用
してもよく、または分析の前にＰＣＲもしくはその他の
増幅法を用いることにより酵素的に増幅させてもよい。
ＲＮＡまたはｃＤＮＡもまた同じ方法で用いることがで
きる。正常な遺伝子型との比較における増幅産物の大き
さの変化により、欠失および挿入を検出できる。点突然
変異は、増幅ＤＮＡを標識化ＨＣＥＰＴ０９のヌクレオ
チド配列とハイブリッド形成させることにより同定でき
る。完全に対合した配列はＲＮase消化により、または
融解温度の違いにより、誤対合二重らせんから区別でき
る。ＤＮＡ配列の違いはまた、変性物質と一緒にまたは
なしで、ゲル中のＤＮＡフラグメントの電気泳動の移動
度の変化により、または直接的ＤＮＡ配列決定法により
検出できる。例えばMyersら、Science 230：1242（198
5）を参照のこと。特異的な位置での配列の変化はま
た、ヌクレアーゼ保護アッセイ、例えばRＮaseおよびＳ
１保護または化学的切断法によっても明らかにすること
ができる。Cottonら、Proc. Natl. Acad. Sci., USA，8
5：4397-4401（1985）を参照のこと。もう１つの具体例
において、ＨＣＥＰＴ０９のヌクレオチド配列またはそ
のフラグメントを含むオリゴヌクレオチドプローブのア
レイ（array）を構築して、例えば遺伝的変異の効果的
なスクリーニングを行うことができる。アレイ法はよく
知られており、適用範囲が広く、その方法を用いて、遺
伝子発現、遺伝的連鎖および遺伝的変化を含め、分子遺
伝学における種々の問題と取り組むことができる（例え
ば、M.Cheeら、Science, Vol 274, pp610-613（1996）
を参照のこと）。

【００４１】診断アッセイは、記載した方法によりＨＣ
ＥＰＴ０９遺伝子中の変異を検出することによる、細
菌、真菌、原生動物およびウイルス感染、詳細には、Ｈ
ＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされる感
染；痛み；腫瘍；拒食症；過食症；喘息；パーキンソン
病；急性心不全；低血圧；高血圧；閉尿；骨粗鬆症；狭
心症；心筋梗塞；潰瘍；喘息；アレルギー；良性前立腺
肥大；および、不安症、精神***症、躁鬱病、精神錯
乱、痴呆、重度の知恵遅れ、ならびに、ハンチントン病
またはジルス・デラ・トレット症候群のごとき運動障害
への罹病し易さを診断または測定する方法を提供する。

【００４２】加えて、細菌、真菌、原生動物およびウイ
ルス感染、詳細には、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によ
って引き起こされる感染；痛み；腫瘍；拒食症；過食
症；喘息；パーキンソン病；急性心不全；低血圧；高血
圧；閉尿；骨粗鬆症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；喘息；
アレルギー；良性前立腺肥大；および、不安症、精神分
裂症、躁鬱病、精神錯乱、痴呆、重度の知恵遅れ、なら
びに、ハンチントン病またはジルス・デラ・トレット症
候群のごとき運動障害は、対象から由来の試料より、異
常に上昇または低下したＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドま
たはＨＣＥＰＴ０９のｍＲＮＡのレベルを調べることを
特徴とする方法によって診断することができる。発現の
増加または低下は、ポリヌクレオチドの定量法として当
該分野で周知の方法、例えば、ＰＣＲ、ＲＴ-ＰＣＲ、
ＲＮase保護、ノーザンブロッティングおよび他のハイ
ブリダイゼーション法を用いてＲＮＡレベルで調べられ
る。宿主から由来の試料中のＨＣＥＰＴ０９ポリペプチ
ドなどのタンパク質のレベルを決定するために用いるこ
とができるアッセイ法は、当業者に周知である。このよ
うなアッセイ法には、ラジオイムノアッセイ、競争結合
アッセイ、ウェスタンブロット分析およびＥＬＩＳＡア
ッセイが挙げられる。

【００４３】染色体アッセイ 本発明のヌクレオチド配列は染色体の同定にも価値があ
る。該配列は、個々のヒト染色体上の特定の位置を特異
的に標的とし、これとハイブリッド形成しうる。本発明
に従って、関連する配列を染色体にマッピングする工程
は、それらの配列を遺伝子関連疾患と関連づける重要な
第１工程である。配列を正確な染色***置にマッピング
したならば、染色体上の配列の物理的位置を遺伝地図の
データと関連づけることができる。かかるデータは、例
えば、V. McKusick, Mendelian Inheritance in Man（J
ohns Hopkins University Welch Medical Libraryから
オンラインで利用できる）にて見られる。ついで、連鎖
分析（物理的に隣接する遺伝子の同時遺伝）により、同
じ染色体領域にマッピングされた遺伝子と疾患との関係
を同定する。罹病個体と未罹病個体との間のｃＤＮＡま
たはゲノム配列の相違も調べることができる。いくつか
またはすべての罹病個体において変異が観察されるが、
正常個体においては観察されない場合、その変異は該疾
患の原因である可能性がある。

【００４４】抗体 本発明のポリペプチドもしくはそれらのフラグメントま
たはそのアナログ、あるいはそれらを発現する細胞を免
疫原として用いて、ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドに対し
て免疫特異的な抗体を得ることもできる。「免疫特異
的」なる語は、抗体が先行技術における他の関連ポリペ
プチドに対するアフィニティーよりも、本発明のポリペ
プチドに対して実質的により大きなアフィニティーを有
することを意味する。

【００４５】ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドに拮抗して生
じる抗体は、ポリペプチドまたはエピトープ担持フラグ
メント、アナログまたは細胞を、動物、好ましくはヒト
以外の動物に、通常の実験法を用いて投与することによ
り得ることができる。モノクローナル抗体の産生には、
連続的セルライン培養により得られる抗体を提供するい
ずれの方法も用いることができる。例えば、ハイブリド
ーマ法（Kohler,G.およびMilstein,C.、Nature 256：49
5-497（1975）、トリオーマ法、ヒトB-細胞ハイブリド
ーマ法（Kozborら、Immunology Today 4：72（1983）お
よびEBV-ハイブリドーマ法（Coleら、MONOCLONAL ANTIB
ODIES AND CANCER THERAPY、７７−９６頁、Alan R. Li
ss, Inc.,（1985））が挙げられる。

【００４６】一本鎖抗体を産生するのに記載された技術
（米国特許第４９４６７７８号）を適用して、本発明の
ポリペプチドに対する一本鎖抗体を産生できる。また、
トランスジェニックマウスまたは他の哺乳動物を含め、
他の生物を用いて、ヒト化抗体を発現させることができ
る。前記した抗体を用いて、ポリペプチドを発現するク
ローンを単離または同定してもよく、あるいはアフィニ
ティークロマトグラフィーによりポリペプチドを精製し
てもよい。

【００４７】ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドに対する抗体
を用いて、とりわけ、細菌、真菌、原生動物およびウイ
ルス感染、詳細には、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によ
って引き起こされる感染；痛み；腫瘍；拒食症；過食
症；喘息；パーキンソン病；急性心不全；低血圧；高血
圧；閉尿；骨粗鬆症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；喘息；
アレルギー；良性前立腺肥大；および、不安症、精神分
裂症、躁鬱病、精神錯乱、痴呆、重度の知恵遅れ、なら
びに、ハンチントン病またはジルス・デラ・トレット
（Gilles dela Tourett's）症候群のごとき運動障害を
治療してもよい。

【００４８】ワクチン 本発明の別の態様は、哺乳動物における免疫学的応答を
誘起する方法であって、抗体および／またはＴ細胞免疫
応答を生じさせるに十分なＨＣＥＰＴ０９ポリペプチド
またはそのフラグメントを哺乳動物に接種して、とりわ
け、細菌、真菌、原生動物およびウイルス感染、詳細に
は、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こされ
る感染；痛み；腫瘍；拒食症；過食症；喘息；パーキン
ソン病；急性心不全；低血圧；高血圧；閉尿；骨粗鬆
症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；喘息；アレルギー；良性
前立腺肥大；および、不安症、精神***症、躁鬱病、精
神錯乱、痴呆、重度の知恵遅れ、ならびに、ハンチント
ン病またはジルス・デラ・トレット症候群のごとき運動
障害から該動物を防御することを含む方法に関する。本
発明のもう１つ別の態様は、哺乳動物における免疫学的
応答を誘導する方法であって、ＨＣＥＰＴ０９ポリペプ
チドをベクターを介してデリバリーし、かかる免疫学的
応答を誘発させ、抗体を産生し、該動物を疾患から保護
するように、インビボにてＨＣＥＰＴ０９ポリヌクレオ
チドの発現を指令することを含む方法に関する。

【００４９】本発明のさらなる態様は免疫学的／ワクチ
ン処方（組成物）であって、哺乳動物宿主中に導入され
た場合、その哺乳動物にてＨＣＥＰＴ０９ポリペプチド
に対する免疫学的応答を誘導する処方（該組成物はＨＣ
ＥＰＴ０９ポリペプチドまたはＨＣＥＰＴ０９遺伝子を
含んでなる）に関する。ワクチン処方は、さらに適当な
担体を含んでいてもよい。ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチド
は胃で分解されるかもしれないため、好ましくは非経口
的（皮下、筋肉内、静脈内、皮内注射等を包含する）に
投与する。非経口投与に適した処方は、抗酸化剤、バッ
ファー、静菌剤および処方を患者の血液と等張にする溶
質を含有してもよい水性および非水性滅菌注射用溶液；
ならびに懸濁剤または増粘剤を含んでいてもよい水性お
よび非水性滅菌懸濁液を包含する。処方を１回投与また
は複数回投与用容器、例えば、密封アンプルおよびバイ
アルに入れて提供してもよく、使用直前に滅菌液体担体
を添加するだけでよい凍結乾燥状態にて保存してもよ
い。またワクチン処方は、水中油系および当該分野で知
られた他の系などの処方の免疫原性を高めるためのアジ
ュバント系を含んでいてもよい。用量は、ワクチンの個
々の活性に依存しており、通常の実験により容易に決定
することができる。

【００５０】スクリーニングアッセイ 本発明のＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドは、本発明のレセ
プターと結合し、そのポリペプチドの活性を活性化（ア
ゴニスト）または阻害（アンタゴニスト）する化合物に
ついてのスクリーニング法にて用いてもよい。かくし
て、本発明のポリペプチドを用いて、例えば細胞、無細
胞調製物、化学ライブラリーおよび天然物の混合物にお
ける小型分子基質およびリガンドの結合を評価してもよ
い。これらの天然の基質およびリガンドは、天然の基質
およびリガンドであってもよく、あるいは構造または機
能を模倣したものであってもよい。Coliganら、Current
Protocols in Immunology 1（2）：第5章（1991）を参
照のこと。

【００５１】ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドは、種々の病
原性を含め、多くの生物学的機能に関与している。した
がって、一方でＨＣＥＰＴ０９を刺激する化合物および
薬剤を、他方でＨＣＥＰＴ０９機能を阻害しうる化合物
または薬剤を見いだすことが望ましい。一般に、アゴニ
ストは、細菌、真菌、原生動物およびウイルス感染、詳
細には、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によって引き起こ
される感染；痛み；腫瘍；拒食症；過食症；喘息；パー
キンソン病；急性心不全；低血圧；高血圧；閉尿；骨粗
鬆症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；喘息；アレルギー；良
性前立腺肥大；および、不安症、精神***症、躁鬱病、
精神錯乱、痴呆、重度の知恵遅れ、ならびに、ハンチン
トン病またはジルス・デラ・トレット症候群のごとき運
動障害のような症状についての治療および予防目的に利
用される。アンタゴニストは、細菌、真菌、原生動物お
よびウイルス感染、詳細には、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ
−２によって引き起こされる感染；痛み；腫瘍；拒食
症；過食症；喘息；パーキンソン病；急性心不全；低血
圧；高血圧；閉尿；骨粗鬆症；狭心症；心筋梗塞；潰
瘍；喘息；アレルギー；良性前立腺肥大；および、不安
症、精神***症、躁鬱病、精神錯乱、痴呆、重度の知恵
遅れ、ならびに、ハンチントン病またはジルス・デラ・
トレット症候群のごとき運動障害などの症状の種々の治
療および予防目的に利用できる。

【００５２】一般に、かかるスクリーニング操作は、本
発明のレセプターのポリペプチドを細胞表面に発現する
適当な細胞を作り出すことを含む。かかる細胞は、哺乳
動物、酵母、DrosophilaまたはE.coli由来の細胞を包含
する。ついで、レセプター（または発現したポリペプチ
ドを有する細胞膜）を発現する細胞を、試験化合物と接
触させて結合または機能的応答の刺激もしくは阻害を観
察する。

【００５３】一つのスクリーニング方法は、レセプター
活性化によって引き起こされる細胞外ｐＨまたは細胞内
カルシウム変化を測定する系における、本発明レセプタ
ーを発現する細胞（例えば、トランスフェクトされたＣ
ＨＯ細胞）の使用を包含する。この方法において、化合
物を本発明レセプターポリペプチドを発現する細胞に接
触させてもよい。ついで、潜在的化合物がレセプターを
活性化または阻害するかどうかを決定するために、セカ
ンドメッセンジャー応答、例えば、シグナルトランスダ
クション、ｐＨ変化、または、カルシウムレベルの変化
を測定する。

【００５４】もう一つの方法は、レセプターが媒介する
ｃＡＭＰおよび／またはアデニレートサイクラーゼの蓄
積の阻害または促進を測定することによる、レセプター
の阻害剤をスクリーニングすることを包含する。かかる
方法は、本発明レセプターで真核細胞をトランスフェク
ションし、細胞表面にレセプターを発現させることを包
含する。ついで、本発明レセプターの存在下、細胞を潜
在的アンタゴニストに曝露する。ついで、ｃＡＭＰの蓄
積量を測定する。潜在的アンタゴニストがレセプターに
結合し、かくしてレセプターの結合を阻害するならば、
レセプターが媒介するｃＡＭＰまたはアデニレートサイ
クラーゼ活性のレベルは減少または増加するであろう。
本発明レセプターのアゴニストまたはアンタゴニストを
検出するもう一つの方法は、米国特許第５,４８２,８３
５号に記載のごとき酵母をによる方法である。

【００５５】該アッセイは、候補化合物に直接または間
接的に結合した標識を用いて、あるいは標識競争物質と
の競争を用いるアッセイにおいて、レセプターを有する
細胞への付着を検出する、候補化合物の結合を簡単に試
験することができる。さらには、候補化合物がレセプタ
ーの活性化により発生するシグナルを生じるかどうか
を、その表面にレセプターを有する細胞に適した検出系
を用いて、これらのアッセイにより試験してもよい。活
性化の阻害剤は、一般に、既知アゴニストの存在下でア
ッセイされ、候補化合物の存在がアゴニストによる活性
化に及ぼす作用を観察する。該スクリーニングアッセイ
を行うための標準的は方法は、当業者においてよく理解
されるものである。潜在的なＨＣＥＰＴ０９のアンタゴ
ニストの例は、抗体、またはある場合には、ＨＣＥＰＴ
０９のリガンドに密接に関連するオリゴヌクレオチドま
たはタンパク質、例えば、リガンドのフラグメント、ま
たはレセプターの活性が妨げられるように、該レセプタ
ーに結合するが、応答を惹起しない、小型分子を包含す
る。

【００５６】予防および治療方法 本発明は、過剰および不十分な量の両方のＨＣＥＰＴ０
９活性に関連する、細菌、真菌、原生動物およびウイル
ス感染、詳細には、ＨＩＶ−１またはＨＩＶ−２によっ
て引き起こされる感染；痛み；腫瘍；拒食症；過食症；
喘息；パーキンソン病；急性心不全；低血圧；高血圧；
閉尿；骨粗鬆症；狭心症；心筋梗塞；潰瘍；喘息；アレ
ルギー；良性前立腺肥大；および、不安症、精神***
症、躁鬱病、精神錯乱、痴呆、重度の知恵遅れ、ならび
に、ハンチントン病またはジルス・デラ・トレット症候
群のごとき運動障害などの、異常な症状の治療方法を提
供する。ＨＣＥＰＴ０９活性が過剰な場合、いくつかの
方法を用いることができる。１の方法は、リガンドのＨ
ＣＥＰＴ０９との結合を遮断することにより、または別
のシグナルを阻害することにより活性化を阻害するのに
効果的な量の前記した阻害化合物（アンタゴニスト）を
医薬上許容される担体と共に対象に投与し、そのことに
より異常な症状を改善することを含む。もう１つ別の方
法において、内在性ＨＣＥＰＴ０９と競争してリガンド
との結合能を有する可溶形のＨＣＥＰＴ０９ポリペプチ
ドを投与してもよい。かかる競争物質の典型例はＨＣＥ
ＰＴ０９ポリペプチドのフラグメントを含む。

【００５７】さらにもう１つ別の方法において、発現遮
断法を用いて内在性ＨＣＥＰＴ０９をコードする遺伝子
の発現を阻害してもよい。公知のかかる方法は、内部生
成した、あるいは別個に投与されたアンチセンス配列の
使用を含む。例えば、Oligodeoxynucleotides as Antis
ense Inhibitors of Gene Expression，CRC Press，Boc
a Raton, FL（1988）中、O'Connor、J.Neurochem 56：5
60（1991）を参照のこと。別法として、遺伝子と共に三
重らせんを形成するオリゴヌクレオチドを供給すること
もできる。例えば、Leeら、Nucleic Acids Res 6：3073
（1979）；Cooneyら、Science 241：456（1988）；Derv
anら、Science 251：1360（1991）を参照のこと。これ
らのオリゴマーはそれ自体投与することができ、あるい
は関連するオリゴマーをインビボで発現させることもで
きる。

【００５８】ＨＣＥＰＴ０９およびその活性の過少発現
に関連する異常な症状を治療するのに、またいくつかの
方法が利用可能である。１の方法は、ＨＣＥＰＴ０９を
活性化する治療上有効量の化合物（すなわち、前記のア
ゴニスト）を医薬上許容される担体とともに対象に投与
し、そのことにより異常な状態を改善することを含む。
別法として、遺伝子治療を用いて、対象中の関連細胞に
よるＨＣＥＰＴ０９の内因的生成を有効ならしめてもよ
い。例えば、前記のごとく、複製欠損レトロウイルスベ
クターにて発現するように、本発明のポリヌクレオチド
を操作してもよい。ついで、該レトロウイルス発現構築
物を単離し、本発明のポリペプチドをコードするＲＮＡ
含有のレトロウイルスプラスミドベクターでトランスダ
クションしたパッケージング細胞中に導入して、パッケ
ージング細胞が目的とする遺伝子を含む感染性ウイルス
粒子を生成するようにしてもよい。これらのプロデュー
サー細胞を対象に投与して細胞をインビボで操作し、イ
ンビボでポリペプチドを発現するようにしてもよい。遺
伝子治療の概説としては、Human Molecular Genetics,
T.Strachan and A. P. Read, BIOS Scientific Publish
ers Ltd（1996）中、第２０章、Gene Therapy and othe
r Molecular Genetic-based Therapeutic Approaches
（およびその中の引用文献）を参照のこと。別法は、治
療量のＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドを適当な医薬担体と
組み合わせて投与することである。

【００５９】処方および投与 可溶形のＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドのごときペプチ
ド、ならびにアゴニストおよびアンタゴニストペプチド
または小型分子を、適当な医薬担体と組み合わせて処方
してもよい。かかる処方は、治療上有効量のポリペプチ
ドまたは化合物、および医薬上許容される担体もまたは
賦形剤を含んでなる。かかる担体としては、食塩水、緩
衝食塩水、デキストロース、水、グリセロール、エタノ
ール、およびその組み合わせを包含するが、これらに限
定されない。処方は投与経路に適したものとすべきであ
り、当業者によく知られている。さらに本発明は、前記
した本発明の組成物の１種またはそれ以上の成分を充填
した、１個またはそれ以上の容器を含んでなる医薬パッ
クおよびキットにも関する。

【００６０】本発明のポリペプチドおよび他の化合物を
単独で使用してもよく、あるいは治療化合物のごとき他
の化合物と一緒に使用してもよい。医薬組成物の全身系
投与の好ましい形態は、典型的には静脈注射による注射
を包含する。皮下、筋肉内または腹腔内などの他の注射
経路を用いることもできる。全身系投与のための別の手
段は、胆汁酸塩またはフシジン酸などの浸透剤または他
の界面活性剤を用いる経粘膜または経皮投与を包含す
る。加えて、腸溶処方またはカプセル処方にうまく処方
されるならば、経口投与も可能である。これらの化合物
の投与は、膏薬、パスタ、ゲル等の形態にて、局所的お
よび／または局在化したものであってもよい。

【００６１】必要な用量範囲は、ペプチドの選択、投与
経路、処方の性質、対象の症状の性質、および顧問医の
判断に依存する。しかしながら、適当な用量は対象１ｋ
ｇ当たり０.１ないし１００μｇの範囲である。しか
し、使用可能な種々の化合物および種々の投与経路の効
力の違いを考慮すれば、必要な用量は広範囲なものと思
われる。例えば、経口投与には静脈注射よりも多い用量
が必要であると考えられる。当該分野においてよく知ら
れた最適化のための標準的な経験的慣用操作を用いてこ
れらの用量の変更を行うことができる。しばしば「遺伝
子治療」と称される前記した治療方法において、治療に
用いられるポリペプチドを対象中において内在的に得る
こともできる。よって、例えば、レトロウイルスプラス
ミドベクターを用いて対象由来の細胞をＤＮＡまたはＲ
ＮＡなどのポリヌクレオチドで操作し、ポリペプチドを
エクスビボでコードしてもよい。ついで、細胞を対象に
導入する。

【００６２】

【実施例】以下の実施例は、特記する場合を除き、当業
者に周知かつ慣用的な、標準方法を用いて行う。実施例
は例示であって、本発明を限定するものではない。

【００６３】実施例１ ＢＬＡＳＴアルゴリズムを用いる、７−ＴＭドメインを
コードするｃＤＮＡとともに発現配列タグ（ＥＳＴ）と
して知られる短い配列を含むヒトゲノムサイエンス由来
のランダムｃＤＮＡ配列データベースのサーチにより、
マウスグルコルチコイド−誘導レセプター（ＧＩＲ）Ｒ
Ｐ２３に対し相同的であるＥＳＴ（ＨＧＳ２２９０３
４）が示された。インサートの完全ＤＮＡ配列を自動Ｄ
ＮＡ配列決定方法を用いて推定した。ＧＣＧソフトウェ
アを用いるＤＮＡ配列のマップ解析により、ｎ−末端Ｄ
ＮＡ配列情報（５’上流終止コドン、ＭｅｔおよびＴＭ
１−６）を欠く読み枠（ＯＲＦ）が示唆された。完全長
配列を得るために、５’ＲＡＣＥ ＰＣＲ（Clontech la
boratories, Inc. 1020, East Meadow circle, PaloAlt
o, CA 94303, USA）を遺伝子特異的プライマーを用いて
行った。ＰＣＲバンドをＰＣＲ２．１ベクターにサブク
ローニングし、配列決定した。ＦＡＳＴＡおよびＢＬＡ
ＳＴアルゴリズムによるこのＤＮＡ配列の組み立ておよ
びさらなる解析により、コードされるポリペプチド配列
のマウスＧＩＲレセプターに対する相同性が示された。
これは、完全マウスＧＩＲレセプターと８８．４％の同
一性を有しており、これがマウス遺伝子のヒトの対応物
であることを示唆した。LaserGeneタンパク質ソフトウ
ェアを用いる疎水性プロット解析により、Ｇ−タンパク
質結合レセプターに共通のいくつかの特徴が示された。
もっとも特徴的なものは、レセプターのＧ−タンパク質
結合スーパーファミリー間で見られる７−膜貫通構造ト
ポロジーを提供する、膜貫通ドメインの可能性のある、
各々約２０−３０アミノ酸の疎水性領域の存在であっ
た。さらに、配列の同一性を確証するために、遺伝子特
異的プライマーの対を消化し、ヒト脳および小脳ライブ
ラリーから完全コーディング領域を増幅した。このフラ
グメントは組み立てられた読み枠（ＯＲＦ）と同じ配列
を含むことが確証された。クローンは、依然として５’
末端の終止コドンを欠いていたが、開始コドンとしての
ＡＴＧを確証するために、決定した開始コドンをマウス
遺伝子のものと比較することができる。

【００６４】実施例２： 哺乳動物細胞発現 本発明レセプターを、ヒト・胎児腎２９３（ＨＥＫ２９
３）細胞または付着性ｄｈｆｒＣＨＯ細胞のいずれかで
発現させる。レセプター発現を最大にするために、典型
的には、ｐＣＤＮまたはｐＣＤＮＡ３ベクター中に挿入
する前に、すべての５'および３'非翻訳領域（ＵＴＲ
ｓ）をレセプターｃＤＮＡから除去する。リポフェクチ
ンによって細胞を個々のレセプターｃＤＮＡでトランス
フェクションし、４００ｍｇ／ｍｌ Ｇ４１８の存在下
選択する。選択後３週間で、個々のクローンを拾い上
げ、さらなる解析を行う。ベクターのみでトランスフェ
クションしたＨＥＫ２９３またはＣＨＯ細胞をネガティ
ブ対照として用いる。個々のレセプターを安定に発現す
る細胞系を単離するために、典型的に約２４個のクロー
ンを選択し、ついで、ノザンブロット解析によって解析
する。一般に、レセプターｍＲＮＡは、解析したＧ４１
８耐性クローンの約５０％において検出される。

【００６５】実施例：３ 結合および機能アッセイのた
めのリガンドバンク 推定の２００を超えるレセプターリガンドのバンクをス
クリーニングのために作成した。そのバンクは、ヒト・
７膜貫通（７ＴＭ）レセプターを介して作用することが
知られているトランスミッター、ホルモンおよびケモカ
イン；ヒト・７ＴＭレセプターの推定アゴニストであっ
てもよい天然化合物、哺乳動物での対応物がまだ同定さ
れていない非哺乳動物の生物学的活性ペプチド；およ
び、天然には見いだされないが、未知の天然リガンドと
ともに７ＴＭレセプターを活性化する化合物を含んでな
る。最初に、このバンクを使用して、結合アッセイと同
様、２機能性（即ち、カルシウム、ｃＡＭＰ、マイクロ
フィジオメーター、卵母細胞電気生理学など以下参照）
を用いて、既知のリガンドのためのレセプターをスクリ
ーニングする。

【００６６】実施例４： リガンド結合アッセイ リガンド結合アッセイは、レセプター薬理学を確認する
ための直接的方法を提供し、高処理量フォーマットに適
合する。精製されたレセプターリガンドは、結合研究の
ために高比活性（５０-２０００Ｃｉ／ｍｍｏｌ）に放
射性ラベルされる。ついで、放射性ラベルの工程がリガ
ンドのレセプターに対する活性を消失させないように測
定が行われる。緩衝液、イオン、ｐＨおよびヌクレオチ
ドのごとき他のモジュレーターに関するアッセイ条件が
最適化され、膜および全細胞レセプター供給源のいずれ
についても使用可能なシグナル対ノイズ比を確立する。
これらのアッセイについて、全結合放射活性から過剰の
非ラベル競合リガンドの存在下で測定された放射活性を
引いたものとして、特異的なレセプター結合が定義され
る。可能ならば、一つ以上のリガンドを使用して、残存
する非特異的結合を定義する。

【００６７】実施例５： アフリカツメガエル卵母細胞
での機能アッセイ 標準的方法に従って、ＲＮＡポリメラーゼを用いて、本
発明レセプターｃＤＮＡをコードする直鎖状にされたプ
ラスミド鋳型からのキャップＲＮＡ転写物をインビトロ
で合成する。インビトロ転写物を最終濃度０.２ｍｇ／
ｍｌになるように水に懸濁する。成体メスのカエルから
卵巣葉を取り出し、ステージＶの脱胞卵母細胞を得て、
ついで、マイクロインジェクション装置を用いて、ＲＮ
Ａ転写物（１０ｎｇ／卵母細胞）を５０ｎｌボーラス
（bolus）で注入する。２つの電極電圧クランプを使用
して、アゴニスト曝露に応答した個々のアフリカツメガ
エル卵母細胞からの電流を測定する。室温でＣａ２＋を
含まないバース培地（Barth's medium）中で記録する。
アフリカツメガエルの系は、既知のリガンドおよび活性
化リガンドについて組織／細胞抽出物をスクリーニング
するために使用することができる。

【００６８】実施例６： 微小生理機能測定アッセイ 非常に多様なセカンドメッセンジャー系の活性化によ
り、細胞から少量の酸の放出が起こる。生成した酸は、
主に、細胞内シグナリング工程にエネルギーを供給する
ために必要な代謝活性を増大させる。細胞の周りの培地
のｐＨ変化は非常に小さいが、CYTOSENSOR微小生理機能
測定器（Molecular Devices Ltd., MenloPark, CA）に
よって検出可能である。かくして、CYTOSENSORは、本発
明レセプターに共役したＧタンパク質のごとく、細胞内
シグナル伝達経路を使用するエネルギーに共役している
レセプターの活性化を検出することができる。

【００６９】実施例７： 抽出物／細胞上清スクリーニ
ング 多数の哺乳動物レセプターが存在し、それらについて未
だに同種の活性化リガンド（アゴニスト）は残っていな
い。かくして、これらのレセプターの活性リガンドは、
現在までに同定されたリガンドバンク中に包含されてい
なくてもよい。従って、天然のリガンドを同定するため
に組織抽出物に対して本発明７ＴＭレセプターを（カル
シウム、ｃＡＭＰ、微小生理機能測定器、卵母細胞電気
生理学など機能的スクリーニングを使用して）機能的に
もスクリーニングする。活性化リガンドが単離同定され
るまで、陽性の機能応答を生じる抽出物を連続して分画
することができる。

【００７０】実施例８： カルシウムおよびｃＡＭＰの
機能アッセイ ＨＥＫ２９３細胞において発現している７ＴＭレセプタ
ーは、ＰＬＣの活性化およびカルシウムの移動、および
／またはｃＡＭＰ刺激または阻害に機能的に共役してい
ることが示されている。レセプタートランスフェクショ
ンまたはベクター制御細胞におけるＨＥＫ２９３細胞の
基礎的カルシウムレベルは、正常には１００ｎＭないし
２００ｎＭの範囲内で観察された。組換えレセプターを
発現しているＨＥＫ２９３細胞をｆｕｒａ２で負荷し、
カルシウム移動を誘導するアゴニストについて、１日で
１５０を超えるリガンドを選択し、または組織／細胞抽
出物を評価する。同様に、組換えレセプターを発現して
いるＨＥＫ２９３細胞を、標準的ｃＡＭＰ定量アッセイ
を用いてｃＡＭＰ産生の刺激または阻害について評価す
る。応答がレセプターを発現しているトランスフェクシ
ョンされた細胞でのみ起こっているのかどうかを調べる
ために、ベクター制御細胞において、カルシウムの一時
的変動またはｃＡＭＰ変動を引き起こすアゴニストを試
験する。

【００７１】

【配列表】（１）一般的情報 （ｉ）出願人：ツー，ユアン サザ，ギャネシュ エルショアーバギー，ネイビル ハルシー，ウェンディ （ｉｉ）発明の名称：新規なヒトＧ−タンパク質結合レ
セプター（ＨＣＥＰＴ０９） （ｉｉｉ）配列の数：２ （ｉｖ）郵送先 （Ａ）名称：ラトナー・アンド・プレスティア （Ｂ）通り名： 私書箱９８０ （Ｃ）都市名：バリー・フォージ （Ｄ）州名：ＰＡ （Ｅ）国名：ＵＳＡ （Ｆ）郵便番号：１９４８２ （ｖ）コンピューター・リーダブル・フォーム： （Ａ）媒体タイプ：ディスケット （Ｂ）コンピューター：ＩＢＭコンパチブル （Ｃ）オペレーティング・システム：ＤＯＳ （Ｄ）ソフトウェア：Window Version２．０用FastＳＥ
Ｑ （ｖ）現出願データ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日：１９９７年９月５日 （Ｃ）分類番号：不明 （ｖｉ）先の出願データ： （Ａ）出願番号：６０／０４５，８８９ （Ｂ）出願日：１９９７年５月７日 （ｖｉｉｉ）代理人情報： （Ａ）名称：プレスティア，ポール・エフ （Ｂ）登録番号：２３０３１ （Ｃ）代理人等における処理番号：ＧＨ−７００１１ （ｉｘ）テレコミュニケーション情報： （Ａ）電話番号：６１０−４０７−０７００ （Ｂ）ファックス番号：６１０−４０７−０７０１ （Ｃ）テレックス番号：８４６１６９

【００７２】 （２）配列番号１に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：２７０８塩基対 （Ｂ）配列の型：核酸 （Ｃ）鎖の数：一本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）分子の型：ｃＤＮＡ （ｘｉ）配列の記載：配列番号１： ATGGTCCCTC ACCTCTTGCT GCTCTGTCTC CTCCCCTTGG TGCGAGCCAC CGAGCCCCAC 60 GAGGGCCGGG CCGACGAGCA GAGCGCGGAG GCGGCCCTGG CCGTGCCCAA TGCCTCGCAC 120 TTCTTCTCTT GGAACAACTA CACCTTCTCC GACTGGCAGA ACTTTGTGGG CAGGAGGCGC 180 TACGGCGCTG AGTCCCAGAA CCCCACGGTG AAAGCCCTGC TCATTGTGGC TTACTCCTTC 240 ATCATTGTCT TCTCACTCTT TGGCAACGTC CTGGTCTGTC ATGTCATCTT CAAGAACCAG 300 CGAATGCACT CGGCCACCAG CCTCTTCATC GTCAACCTGA CAGTTGCCGA CATAATGATC 360 ACGCTGCTCA ACACCCCCTT CACTTTGGTT CGCTTTGTGA ACAGCACATG GATATTTGGG 420 AAGGGCATGT GCCATGTCAG CCGCTTTGCC CAGTACTGCT CACTGCACGT CTCAGCACTG 480 ACACTGACAG CCATTGCGGT GGATCGCCAC CAGGTCATCA TGCACCCCTT GAAACCCCGG 540 ATCTCAATCA CAAAGGGTGT CATCTACATC GCTGTCATCT GGACCATGGC TACGTTCTTT 600 TCACTCCCAC ATGCTATCTG CCAGAAATTA TTTACCTTCA AATACAGTGA GGACATTGTG 660 CGCTCCCTCT GCCTGCCAGA CTTCCCTGAG CCAGCTGACC TCTTCTGGAA GTACCTGGAC 720 TTGGCCACCT TCATCCTGCT CTACATCCTG CCCCTCCTCA TCATCTCTGT GGCCTACGCT 780 CGTGTGGCCA AGAAACTGTG GCTGTGTAAT ATGATTGGCG ATGTGACCAC AGAGCAGTAC 840 TTTGCCCTGC GGCGCAAAAA GAAGAAGACC ATCAAGATGT TGATGCTGGT GGTAGTCCTC 900 TTTGCCCTCT GCTGGTTCCC CCTCAACTGC TACGTCCTCC TCCTGTCCAG CAAGGTCATC 960 CGCACCAACA ATGCCCTCTA CTTTGCCTTC CACTGGTTTG CCATGAGCAG CACCTGCTAT 1020 AACCCCTTCA TATACTGCTG GCTGAACGAG AACTTCAGGA TCGAGCTAAA GGCATTACTG 1080 AGCATGTGTC AAAGACCTCC CAAGCCTCAG GAGGACAGGC CACCCTCCCC AGTTCCTTCC 1140 TTCAGGGTGG CCTGGACAGA GAAGAATGAT GGCCAGAGGG CTCCCCTTGC CAATAACCTC 1200 CTGCCCACCT CCCAACTCCA GTCTGGGAAG ACAGACCTGT CATCTGTGGA ACCCATTGTG 1260 ACGATGAGTT AGAAGAGGTT GGGAAGAGGG AGTGGGAGGG GTCTGTCTCC ACCTGAGGCA 1320 GGGAAAGAGA GCCTATTCTC ACACATGATC TTCAGAGTGC TGGAAACACA CTCCTGCAGA 1380 AGCTGTAGGA CTCTTGAATT CCTAGGAAAC TGTCCAGCCT CCTAGCCCCA TGTGATGTGA 1440 AAACTAAAAN GCACCACCAA CTAGACATGT GTTCATAAAT TCCCATCTAA GAAACACTGG 1500 GAGGCACAGC AGCCTGTATC TCTGAGGAAG AGGAGCGAGG ACAACGTTGG CCCAGATGGG 1560 GGCTGAATCA TTCAACTGCC TCCATCTGTG GGGCAGCTGC TGCCTTACAG CCCTTCCTAC 1620 TGCTGAGCAT CCCGAAGGGA GACCTAAATC ATACTTTGGG TGTGGTGACC CAGATGCACA 1680 GAGCTCTGCT TGAAACAGGT ACACGGGCCA GGGAAATGCC AGCAAGCCAG AGCGGGCGTG 1740 GAGATTTTTA TGCCTCACTT TCTGGAGTCA CTGGGCCATG ATGAATCATA AGTCTTCAGT 1800 GGCCTAGCAA TATCCAGATA AGAAAGGACC AACTTGGGTT CCTTAAAACA AAGGGAAATT 1860 ATTATTGCCA CTTAGAAAAA TTCAGAAAAG CACACACTCA CATACACACA CACAAAATCA 1920 CTCTCTTATC CCATCCATTT GTGATAACAT CTGTGAACAT GCTGTGGCTC TATTTGCAAC 1980 ATTTTCCTTC GTGTGTGTGA TTGTGTGCAT GTGTGCATGA CCTTTTTTTT TTCTTTTTTT 2040 TTTTTTTTGA GATGGAATCT CGCTCTGTCA CCCAGGTTGG AGTTCAGTGG CACAATCTCG 2100 GCTCACTGCA AGCTCTGCCT CCCAGGTTCA TGCCGTTCTC CTGCCTCAGC CTCCCTAGTA 2160 GCTGGGACTA CAGGTGCCCG CCACCATGCC CGGCTAATCT TTTGCATTTT TAGTAGAGAC 2220 GGGGTTTCAC CGTGTTAGCC AGGATGGTCT CGATCTCCTG ACCTCGTGAT CCACCTGCCT 2280 AGGCCTCCCA AAGTGTTGGG ATTACAGGCG TGAGCCACCC CGCCCGGCCC TTTTTTTTCA 2340 TTTATACTTT TTCATTTAGA TTGTAATGAT TAACAGAAAC AGGGGTACCT TTCCCAGGGG 2400 TGTCCACCAG AAGAGTTGAA GAAGAGGTGA GAAGATCCCA AGGTGAAGCC TGTCACCACG 2460 CAGACAGAAC TGCCCCCTAT TGTAGACAGT GGTGGGAAGG GCCTGGCTCA CATGCCCCTC 2520 CTTAGAGGCA GCCTCAAGAT GAACCAGGAA TCAAACTCAA CCANGAGGCA TGATTCCTTC 2580 TCTCCTGCAA TTGCACAAAA ACAAGTGGTG GTGAAACATT GTTCTGTTTT CACAAGAGAT 2640 GAGGGAGCAG GCTTTCCAAT ATGCTGGAAG TATTGTGCTT AGACACTCAT CCTCCCAGCT 2700 GTCTAGAA 2708

【００７３】 （２）配列番号２に関する情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）配列の長さ：４２３アミノ酸 （Ｂ）配列の型：アミノ酸 （Ｃ）鎖の数：一本 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ｉｉ）分子の型：タンパク質 （ｘｉ）配列の記載：配列番号２： Met Val Pro His Leu Leu Leu Leu Cys Leu Leu Pro Leu Val Arg Ala 1 5 10 15 Thr Glu Pro His Glu Gly Arg Ala Asp Gln Gln Asn Ala Glu Ala Ala 20 25 30 Leu Ala Val Pro Asn Ala Ser His Phe Phe Ser Trp Asn Asn Tyr Thr 35 40 45 Tyr Ser Asp Trp Gln Asn Phe Val Gly Arg Arg Arg Tyr Gly Ala Glu 50 55 60 Ser Gln Asn Pro Thr Val Lys Ala Leu Leu Ile Val Ala Tyr Ser Phe 65 70 75 80 Ile Ile Val Phe Ser Leu Phe Gly Asn Val Val Val Cys His Val Ile 85 90 95 Phe Lys Asn Gln Arg Met His Ser Ala Thr Ser Leu Phe Ile Val Asn 100 105 110 Leu Thr Val Ala Asp Ile Met Ile Thr Leu Leu Asn Thr Pro Phe Thr 115 120 125 Leu Val Arg Phe Val Asn Ser Thr Trp Ile Phe Gly Lys Gly Met Cys 130 135 140 His Val Ser Arg Phe Ala Gln Tyr Cys Ser Leu His Val Ser Ala Leu 145 150 155 160 Thr Leu Thr Ala Ile Ala Val Asp Arg His Gln Val Ile Met His Pro 165 170 175 Leu Lys Pro Arg Ile Ser Ile Thr Lys Gly Val Ile Tyr Ile Ala Val 180 185 190 Ile Trp Thr Met Ala Thr Phe Phe Ser Leu Pro His Ala Ile Cys Gln 195 200 205 Lys Leu Phe Thr Phe Lys Tyr Ser Glu Asp Ile Val Arg Ser Leu Cys 210 215 220 Leu Pro Asp Phe Pro Glu Pro Ala Asp Leu Phe Trp Lys Tyr Leu Asp 225 230 235 240 Leu Ala Thr Phe Ile Leu Leu Tyr Ile Leu Pro Leu Leu Ile Ile Ser 245 250 255 Val Ala Tyr Ala Arg Val Ala Lys Lys Leu Trp Leu Cys Asn Met Ile 260 265 270 Gly Asp Val Thr Thr Glu Gln Tyr Phe Ala Leu Arg Arg Lys Lys Lys 275 280 285 Lys Thr Ile Lys Met Leu Met Leu Val Val Val Leu Phe Ala Leu Cys 290 295 300 Trp Phe Pro Leu Asn Cys Tyr Val Leu Leu Leu Ser Ser Lys Val Ile 305 310 315 320 Arg Thr Asn Asn Ala Leu Tyr Phe Ala Phe His Trp Phe Ala Met Ser 325 330 335 Ser Thr Cys Tyr Asn Pro Phe Ile Tyr Cys Trp Leu Asn Glu Asn Phe 340 345 350 Arg Ile Glu Leu Lys Ala Leu Leu Ser Met Cys Gln Arg Pro Pro Lys 355 360 365 Pro Gln Glu Asp Arg Pro Pro Ser Pro Val Pro Ser Phe Arg Val Ala 370 375 380 Trp Thr Glu Lys Asn Asp Gly Gln Arg Ala Pro Leu Ala Asn Asn Leu 385 390 395 400 Leu Pro Thr Ser Gln Leu Gln Ser Gly Lys Thr Asp Leu Ser Ser Val 405 410 415 Glu Pro Ile Val Thr Met Ser 420

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 45/00 45/00 48/00 48/00 Ａ６１Ｐ 3/02 Ａ６１Ｐ 3/02 9/00 9/00 11/06 11/06 13/08 13/08 19/10 19/10 25/00 25/00 25/16 25/16 29/00 29/00 31/00 31/00 31/18 31/18 37/08 37/08 Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ０７Ｋ 14/705 16/28 16/28 Ｃ１２Ｎ 1/15 Ｃ１２Ｎ 1/15 1/19 1/19 1/21 1/21 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ 5/10 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｑ 1/68 Ａ６１Ｋ 37/02 // Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ａ (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） (72)発明者 ユアン・ツー アメリカ合衆国19422ペンシルベニア州ブ ルー・ベル、オークモント・ドライブ203 番 (72)発明者 ネイビル・エルショアーバギー アメリカ合衆国19380ペンシルベニア州ウ エスト・チェスター、ボー・トゥリー・ド ライブ1648番 (72)発明者 ウェンディ・エス・ハルシー アメリカ合衆国19348ペンシルベニア州ケ ネット・スクエア、ベイヤード・ロード 435番 (72)発明者 ギャネシュ・サザ アメリカ合衆国19406ペンシルベニア州キ ング・オブ・プルシア、ハンターズ・ラ ン・ロード107番

Claims (18)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 配列番号２のＨＣＥＰＴ０９ポリペプチ
   ドをコードするヌクレオチド配列とその全長にわたって
   少なくとも８０％の同一性を有するヌクレオチド配列を
   含む単離されたポリヌクレオチド、またはそのヌクレオ
   チド配列に相補的なヌクレオチド配列。
2. 【請求項２】 ＤＮＡまたはＲＮＡである請求項１記載
   のポリヌクレオチド。
3. 【請求項３】 ヌクレオチド配列が配列番号１に含まれ
   るものと少なくとも８０％同一である請求項1記載のポ
   リヌクレオチド。
4. 【請求項４】 ヌクレオチド配列がＨＣＥＰＴ０９ポリ
   ペプチドをコードする配列番号１に含まれる配列を含む
   請求項３記載のポリヌクレオチド。
5. 【請求項５】 配列番号１のポリヌクレオチドである請
   求項３記載のポリヌクレオチド。
6. 【請求項６】 発現系を含むＤＮＡまたはＲＮＡ分子で
   あって、発現系が適合可能な宿主細胞中にある場合に、
   その発現系が配列番号２のポリペプチドと少なくとも８
   ０％の同一性を有するアミノ酸配列を含むＨＣＥＰＴ０
   ９ポリペプチドを産生することができるＤＮＡまたはＲ
   ＮＡ分子。
7. 【請求項７】 請求項６の発現系を含む宿主細胞。
8. 【請求項８】 請求項７の宿主を、そのポリペプチドを
   産生するのに十分な条件下で培養し、そのポリペプチド
   を培養物から回収することを含むＨＣＥＰＴ０９ポリペ
   プチドの製造方法。
9. 【請求項９】 ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドを産生する
   細胞の製造方法であって、宿主細胞が、適当な培養条件
   下、ＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドを産生するように、該
   宿主細胞を請求項６記載の発現系でトランスフォーメー
   ションまたはトランスフェクションすることを含む方
   法。
10. 【請求項１０】 配列番号２のアミノ酸配列とその全長
    にわたって少なくとも８０％同一であるアミノ酸配列を
    含むＨＣＥＰＴ０９ポリペプチド。
11. 【請求項１１】 配列番号２のアミノ酸配列を含む請求
    項１０記載のポリペプチド。
12. 【請求項１２】 請求項１０記載ののＨＣＥＰＴ０９ポ
    リペプチドに免疫特異的な抗体。
13. 【請求項１３】 請求項１０記載のＨＣＥＰＴ０９ポリ
    ペプチドの活性または発現を強化する必要性のある対象
    の治療法であって、 （ａ）該対象に該レセプターに対する治療上有効量のア
    ゴニストを投与し；および／または（ｂ）インビボにて
    該レセプターの活性を生じさせるような形態にて、配列
    番号２のＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドをコードするヌク
    レオチド配列とその全長にわたって少なくとも８０％の
    同一性を有するヌクレオチド配列を含む単離されたポリ
    ヌクレオチド、またはそのヌクレオチド配列に相補的な
    ヌクレオチド配列を該対象に与えることを含む方法。
14. 【請求項１４】 請求項１０のＨＣＥＰＴ０９ポリペプ
    チドの活性または発現を阻害する必要性のある対象の治
    療法であって、 （ａ）該対象に該レセプターに対する治療上有効量のア
    ンタゴニストを投与し；および／または（ｂ）該対象に
    該レセプターをコードするヌクレオチド配列の発現を阻
    害する核酸分子を投与し；および／または（ｃ）該対象
    にそのリガンドについて該レセプターと競合する治療上
    有効量のポリペプチドを投与することを含む方法。
15. 【請求項１５】 対象での請求項１０記載のＨＣＥＰＴ
    ０９ポリペプチドの発現または活性に関連付けられる対
    象の疾患または疾患への罹病し易さの診断方法であっ
    て、 （ａ）該対象のゲノム中のＨＣＥＰＴ０９ポリペプチド
    をコードするヌクレオチド配列における変異の有無を調
    べ；および／または（ｂ）該対象からの試料中のＨＣＥ
    ＰＴ０９ポリペプチドの発現の存在または量について分
    析することを含む方法。
16. 【請求項１６】 請求項１０記載のＨＣＥＰＴ０９ポリ
    ペプチドに対するアゴニストの同定方法であって、 （ａ）請求項９に記載の方法により製造される細胞を候
    補化合物と接触させ、 （ｂ）候補化合物がＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドの活性
    化により生じるシグナルを発するかどうかを調べること
    を含む方法。
17. 【請求項１７】 請求項１０記載のＨＣＥＰＴ０９ポリ
    ペプチドに対するアンタゴニストの同定方法であって、 （ａ）ＨＣＰＥＴ０９のポリペプチドを産生する細胞を
    アゴニストと接触させ、 （ｂ）該アゴニストにより生じるシグナルが候補化合物
    の存在下で減じるかどうかを調べることを含む方法。
18. 【請求項１８】 請求項９記載の方法により製造される
    組換え宿主細胞、またはＨＣＥＰＴ０９ポリペプチドを
    発現しているその膜。