ITRM20060427A1 - Composizioni antiossidanti comprendenti estratti di rosmarino e mirto - Google Patents

Description

Descrizione dell'Invenzione Industriale avente per titolo:

"Composizioni antiossidanti comprendenti estratti di rosmarino e mirto".

Campo del invenzione

La presente invenzione è relativa a composizioni antiossidanti comprendenti estratti di rosmarino e mirto da impiegare per preparare farmaci per terapia e prevenzione di affezioni e patologie correlate a sovrapproduzione di radicali liberi.

Secondo un altro aspetto dell’invenzione, detti estratti sono impiegati con lo stesso scopo per preparare integratori alimentari, nutraceutici, prodotti dermatologici e cosmetici e farmaci da impiegare nella medicina veterinaria.

Arte nota

L’azione di protezione svolta dagli agenti antiossidanti nel contrastare lo stress ossidativo è ben nota (" Towards Prolongation of healthy life spari", Annals of thè New York Academy of Sciences, 854, 1998, New York (a cura di Harman D.; Holliday R. and M. Meydany); Stahlin H. B., " The Impact of Antioxidants on Chronic Disease in Aging and Old Age ", Int. J. Vitamin. Nutr. Res. 69, 146-149; 1999).

I radicali liberi sono anch’essi ben noti come agenti ossidanti ed hanno origine endogena (connessa con i processi biologici all’intemo dell’organismo) o esogena derivante da inquinamento, alimentazione, esposizione ai raggi solari e condizioni generali di vita.

I principali meccanismi con cui i radicali liberi, non contrastati efficacemente dal sistema antiossidante, possono provocare condizioni patologiche sono la perossidazione lipidica; l’azione mutagena sul DNA; l’apoptosi; la proteolisi incontrollata, e la disfunzione immunitaria. (Kwon YW, Masutani H, Nakamura H, Ishii Y, Yodoi J: “Redox regulation of celi growth and celi death”. Biol. Chem (2003), 384 (7): 991-996). In particolare, l’apoptosi è un meccanismo fisiologico di morte cellulare che permette il ricambio cellulare dei tessuti. Molti degli agenti che inducono apoptosi sono ossidanti oppure attivatori del metabolismo ossidativo cellulare e molte sostanze capaci di inibire l’apoptosi sono antiossidanti. Ciò suggerisce un ruolo cruciale dei radicali Uberi nella regolazione della morte cellulare programmata (Hengartner MG: “The biochemistry of apoptosis”. Nature, 2000; 407, 770-775).

L’apoptosi indotta da radicali liberi svolge altresì un ruolo patogenetico importante in numerose condizioni morbose e nell’invecchiamento stesso. (Nicholson DW: “From bench to clinic with apoptosis-based therapeutic agents”. Nature 2000; 407, 810-816).

La combinazione dei danni ossidativi da cause esogene ed endogene provoca alterazioni nella struttura dei tessuti e nella loro funzione che si manifestano come invecchiamento, malattie dege nerative croniche (ad esempio l'artrite), aterosclerosi e cancro (Ames BN, Shigenaga MK, Hagen TM. "Oxidants, antioxidants, and thè degenerative diseases of aging". Proc Nati Acad Sci (USA) 90: 7915, 1993), come nel caso del cancro gastrointestinale, della prostata e del seno, malattie degenerative cerebrali e del sistema vascolare cerebrale.

Gli agenti antiossidanti possono essere di aiuto alle funzioni cardiovascolari nei modi seguenti:

• Detossificando il colesterolo (Ehara S. Circulation ; 103:

(2001); Jialal I. Thrombosis and Vascular Biology 15(2): 190-98 (1995)

• Contrastando infiammazione cronica, responsabile, fra l’altro, della possibile occlusione delle arterie, di attacchi cardiaci ed infarto

■ Migliorando le funzioni vascolari attraverso l’azione dilatante ed antinfiammatoria sull’endotelio delle arterie

• Contrastando la coagulazione del sangue (azione antiplacca).

Evidenze immunoistochimiche e biochimiche dimostrano il ruolo significativo delle specie ossigeno-reattive dell’organismo (ROS) nell’infiammazione acuta e cronica. All’effetto citotossico dei ROS contribuiscono le prime fasi della perossidazione dei lipidi, l’inibizione diretta della catena enzimatica della respirazione mitocondriale, l’inattivazione della gliceraldeide-3-fosfato deidrogenasi, l’inibizione dell’attività delle membrane cellulari Na<+>/K<+>ATPasi, l’inattivazione dei canali di membrana per il sodio e la modificazione di altre proteine ossidative. Tutte queste tossicità giocano un ruolo nella patologia dello shock, nell’infiammazione e nella riperfusione.

Il flusso sanguigno è influenzato dall’infiammazione acuta e cronica che colpisce una molteplicità di organi e si manifesta in una molteplicità di sintomi, il più comune dei quali è il dolore. Altre patologie correlabili al danno ossidativo sono: asma, diabete, obesità, depressione, affezioni cardiache, artrite, Alzheimer, osteoporosi e altre patologie connesse con l’età (Maeda H, Akaike T: "Nitric oxide and oxygen radicala in infection, inflammation, and cancer" Biochemistry 63:854-865 (1998); Wiseman H, Halliwell B: "Damage to DNA by reactiue oxygen and nitrogen species; role in inflammatory disease and progression to cancer " Biochem J.

313:17-29 (1996)); malattie croniche quali sindrome da fatica cronica, fibromialgia, tossicità da metalli pesanti, infezioni in genere, colon irritabile, malattia di Crohn (Bauer G: "Reactiue oxygen and nitrogen species: Efficient, selectiue, and Interactive signals during intercellular induction of apoptosis" Anticancer Res 20:4115-4139, (2000)); diabete mellito (diabete di Tipo I e II) e sindromi correlate, in particolare incapacità a sintetizzare enzimi antiossidanti (Mates JM, Sanche z-Jime ne z F: " Antioxidant enzymes and their implications in pathophysiological process " Front Biosci 4:339-345(1999)); carenza di vitamina C e scorbuto.

Altri disordini metabolici, come obesità, malattie mitocondriali e la stessa “sindrome metabolica” sembrano essere legate a livelli incrementati di ROS come dell’enzima NADPH ossidasi (Galinier et al. "Adipose Tissue Proadipogenic Redox Changes in Obesity" J. Biol. Chem. 281: 12682-12687 (2006).

Denutrizione e malnutrizione sono alla base di alterazioni della risposta immune, cui conseguono:

• Deficit delle difese immunitarie, in particolare maggior predisposizione a molte infezioni virali, per esempio da rotavirus, virus del morbillo e della parainfluenza (Scrimshaw NS: " Nutrition and infection " Prog Food Nutr Sci 1: 393—420 (1975); Harbige LS: "Nutrition and immunity with emphasis on infection and autoimmune disease" Nutr Health 10: 285—312, (1996));

• Alterazione della risposta anticorpale, che ad esempio si manifesta in una diminuita attività dei macrofagi e disfunzioni delle cellule T (Bendich A:"Antioxidant vitamine and human immune responses" Vit Horm 52: 35—62, (1996); Stadtman TC: "Selenium biochemistry. Mammalian selenoenzymes" Ann NY Acad Sci 899:

399-402, (2000)).

Gli effetti dei ROS e dei derivati dellOssido d’Azoto (NO) sono stati inoltre valutati nella modulazione fisiologica della funzione contrattile del muscolo scheletrico e di quello liscio (Balon TW: ‘Integrative biology of nitric oxide and exercise” Exerc Sport Sci Rev 27: 219-253, 1999; Clanton TL et al. “Oxidants and skeletal muscle functions: physiologic and pathophysiologìc implications” .

Proc Soc Exp Biol Med 222: 253-262, 1999). L’attività biologica ossidante dei ROS nel muscolo scheletrico è controbilanciata da quella esercitata da una serie di antiossidanti endogeni. È di rilievo al riguardo il ruolo di modulazione esercitato dal NO, capace, a bassa concentrazione (nel muscolo a riposo) di bilanciare l’effetto dei ROS sia direttamente che attraverso l’induzione di una seconda cascata di derivati redox-attivi, capaci di esercitare a loro volta un’azione antiossidante (Abraham RZ et al. “Cyclic GMP is a second messenger by which nitric oxide inhibits diaphragm contraction ” Comp Biochem Physiol.ll9A: 177-183, 1998; Andrade FH et al. “ Effect of nitric oxideon single skeletal muscle fibers from thè mouse” J ofPhysiol (Lond) 509:577-586, 1998 ).

Al contrario, concentrazioni elevate di NO (che si registrano durante l’attività contrattile del muscolo) interagiscono con l’anione supero ssido, inducendo ima franca attività ossidante. (Balon TW. ” Integrative biology of nitric oxide and exercise ” Exerc Sport Sci Rev 27: 219-253, 1999).

Appare evidente dunque che l’equilibrio fra ROS e NO ed i suoi derivati nel muscolo scheletrico è di particolare importanza per una corretta funzionalità del muscolo, manifestandosi clinicamente in maniera acuta e diretta sul senso di fatica, ed indirettamente e cronicamente sui processi di invecchiamento della fibra muscolare stessa.

Il NO deprime la produzione di forza contrattile nel muscolo scheletrico non affaticato, esercitando una simile azione sul miocardio e sulla muscolatura liscia di organi differenti (Reid MB: ” Plasticty in skeletal, cardiac and smooth muscle " J Appl Physiol.90: 724-731, 2001).

A livello del muscolo liscio sono interessanti le osservazioni riportate sulla motilità della vena porta isolata di ratto (Rossetti ZL et al.”Biphasic effect of NMDA in thè rat portai vein.British Journal of Pharmacology, 129:156-162, 2000), dove si postula che l' effetto bifasico di modulazione della NMDA sul muscolo liscio della vena porta si possa esercitare attraverso l’attivazione del sistema modulatorio del NO, come osservato anche precedentemente (Rand MJ “Nitrergic transmissionsnitric oxide as a mediator of nonadrenergic, non-cholinergicneuro-effector transmission”. Clin Exp Pharmacol Physiol. 19: 147-169, 1992).

L’impiego di alcuni antiossidanti esogeni impiegati come integratori dietetici si è dimostrato utile nell’inibire la fatica muscolare nell’uomo. (Reid MB et al. “ N-acetylcysteine inhibits muscle fatigue in humans”. J Clin Invest 94: 2468-2474; 1994; Travaline JM et al:” Effect of N-acetylcysteine on human diaphragm strength and fatigue” Am J Resp Criticai Care Med 156: 1567-1571; 1997).

Tutte le affezioni e/o alterazioni metaboliche sopra indicate possono essere trattate o prevenute almeno in parte con terapie a base di principi attivi contenenti agenti antiossidanti.

Il rosmarino ( Rosmarinus officinalis, Labiatae) è una pianta ubiquitaria nell'area Mediterranea ed è caratterizzata da proprietà farmacologiche antiossidanti e antimicrobiche.

I principali componenti del fitocomplesso del rosmarino sono: • Olio essenziale: alfa-pinene; 1,8-cineolo,· borneolo, canfene, limonene, linaloolo, isobutil acetato, 3-ottanone, terpineolo, verbenolo

• Flavonoidi: apigenina, diosmetina, diosmina, genkvanine, 6-metossigenkvanina, ispidulina, sinensetina, luteolina

• Acido rosmarinico ed altri acidi fendici,

• Diterpeni: picrosalvina, carnosolo, acido carnosolico e rosmarichinone

• Altri componenti come rosmaricina, acido ursolico e acidi oleanolici.

E stato dimostrato in vitro e in vitro che l'attività antiossidante del fitocomplesso di Rosmarinus officinalis è principalmente dovuta alla presenza di carnosolo, acido carnosico e acido rosmarinico (Ai-Hsiang Lo Et al: “Carnosol, an antioxidant in rosemary, suppresses inducibìle nitric oxide synthase through down-regulating nuclear factor-kB in mouse macrophages". Carcinogenesis, 23, 6: 983-991, 2002; Zeng H-H et al. “ Antioxidant properties ofphenolic diterpenes from Rosmarinus Officinalis" Acta Pharmacol Sin., 22, 12: 1094-1098, 2001). Questa attività è anche legata all'azione antinfiammatoria e chemiopreventiva del rosmarino.

II mirto ( Myrtus communis, Myrtaceaé) è l'unico membro di questa famiglia presente in Europa, mentre tutti gli altri si trovano in Australia e lungo i tropici. Il mirto è utilizzato nella medi cina popolare per le sue proprietà astringenti, toniche, disinfettanti e balsamiche.

I principali componenti del fitocomplesso, estratto dalle foghe e dalle bacche, sono l'olio essenziale, acilfluoroglicinoli non premiati, flavonoidi, acidi fenolici e terpeni. È presente anche a-tocoferolo. L'olio essenziale di foghe e frutti di mirto contiene 27 componenti fra i quali i composti principali sono ct-pinene, 1,8-cineolo e limonene. Gli acilfluoroglicinoli non premiati sono rappresentati dai composti myrtucommulone e semimyrtucommulone. I flavonoidi del mirto sono rappresentati principalmente da quercetina e mircetina. Gli acidi fenohci sono per la maggior parte acido gallico, acido ellagico e tannini (Grassman J et al: “ Antioxidant properties of essential oils. Possible explanations for their anti-inflammatory effects Arzneimittelforschung, 50; 2: 135-139, 2000).

Fino ad oggi sono stati condotti studi e saggi con estratti di mirto o rosmarino, o loro componenti antiossidanti saggiati singolarmente.

È stato ora trovato che la combinazione degh estratti secchi di queste due piante, cioè di Rosmarinus officinalis e Myrtus communis esercita un’azione sinergica, mostrando l'esaltazione reciproca delle attività antiossidanti di ciascun estratto, che risultano estremamente utih per il raggiungimento di un effetto protettivo altamente efficace sulle cellule umane e animali.

Inoltre, la combinazione dei due estratti si è sorprendentemente dimostrata capace di esaltare significativamente gli effetti sulla motilità del muscolo liscio isolato rispetto ai risultati ottenuti dalle stesse sostanze somministrate singolarmente. In particolare gli effetti indotti dalla combinazione dei due estratti appaiono caratterizzati da un marcato positivo potenziamento dell’ inotropismo muscolare.

Come espresso precedentemente, la funzione e la motilità del muscolo scheletrico e del muscolo liscio sembrano essere direttamente modulate dall’equilibrio ossido -riduttivo cellulare, con effetto acuto sulla fatica muscolare e cronico sui processi infiammatori e di invecchiamento della fibra muscolare stessa.

Infine, di grande rilievo è stata poi Γ inattesa osservazione di una marcata attività anti-apoptotica indotta dalla combinazione dei due estratti quando somministrati su colture cellulari di feocromocitoma PC12 stressate mediante presenza di H2O2 nell’ambiente di coltura.

Tale sorprendente risultato sembra essere almeno parzialmente riconducibile alla marcata attività antiossidante sinergica mostrata dalla combinazione dei due estratti.

Sommario dell’invenzione

Scopo della presente invenzione è pertanto il miglioramento della protezione cellulare basato sulla combinazione sinergica degli estratti delle piante di rosmarino e mirto, come anche l’uso di tale combinazione per il trattamento o la prevenzione di condizioni patologiche correlate ad una sovrapproduzione di radicali Uberi dovuti a cause esogene o endogene dell’organismo umano 0 animale.

Conformemente all’invenzione, la composizione può essere utilizzata per preparare farmaci per la terapia e prevenzione di affezioni e patologie correlate a sovrapproduzione di radicali liberi; può essere inoltre impiegata con lo stesso scopo per preparare integratori alimentari, nutraceutici, prodotti dermatologici e cosmetici e per preparare farmaci da impiegare anche nella medicina veterinaria.

Altro scopo dell’invenzione è una composizione che comprende una combinazione di dosi farmaceuticamente efficaci di:

a) estratti di foglie di rosmarino come rivendicato nelle rivendicazioni allegate;

b) estratti di foglie di mirto come rivendicato nelle rivendicazioni allegate;

eventualmente in combinazione con adiuvanti, eccipienti, disperdenti ed altri principi attivi ad azione farmacologica nota.

Altro scopo dell’invenzione è il processo per la preparazione delle composizioni, comprendente uno stadio di mescolamento dei due estratti e successive modalità di ottenimento delle varie tipologie di formulazione, scelte fra: granuli, polveri, pillole, supposte, sospensioni, soluzioni, creme, paste e sciroppi.

Ancora altro scopo dell’invenzione è costituito dalle modalità di somministrazione, che possono essere: orale, topica, parenterale e transdermica.

Ulteriori scopi risulteranno evidenti dalla seguente descrizione dettagliata dell’invenzione.

Breve descrizione delle figure

Fig. 1. Concentrazioni di riferimento del BHA come antiossidante standard. Riduzione dell’assorbanza del DPPH* in funzione del tempo in presenza dell’antiossidante standard BHA alle concentrazioni 1, 0,1, 0,01 mg/ml.

Figura 2. Effetto antiossidante del Mirto a differenti concentrazioni. Riduzione dell’assorbanza del DPPH* in funzione del tempo in presenza dell’estratto di Mirto alle concentrazioni sopra elencate

Figura 3. Effetto antiossidante del Rosmarino a differenti concentrazioni. Riduzione dell’assorbanza del DPPH* in funzione del tempo in presenza dell’estratto acquoso di Rosmarino alle concentrazioni sopraelencate

Figura 4. ECso del Mirto a dosi crescenti. Azione antiossidante a concentrazioni crescenti (1 — 3000 μg/ml ) dell’estratto di mirto sul radicale libero DPPH*. I dati sono espressi come % di inibizione dell’assorbanza del DPPH*

Figura 5. ECso del Rosmarino a dosi crescenti. Azione antiossidante a concentrazioni crescenti (1 - 3000 pg/ml ) dell’estratto alcolico di rosmarino sul radicale libero DPPH*. I dati sono espressi come % di inibizione dell’assorbanza del DPPH*

Figura 6. Effetto sinergico antiossidante dell’associazione di Mirto e Rosmarino. Azione antiossidante ottenuta degli estratti di rosmarino e mirto testati singolarmente e in combinazione tra loro. I dati sono espressi come % di inibizione dell’assorbanza del DPPH*.

Figura 7. Formulazione di Sostanze Singole. Effetto sulla contrattilità della vena porta. Controllo vs. Mirto. (A) indice di mobilità, (B) variazione % rispetto al controllo.

Figura 8. Formulazione di Sostanze Singole. Effetto sulla contrattilità della vena porta. Controllo vs. Rosmarino. (A) indice di mobilità, (B) variazione % rispetto al controllo.

Figura 9. Coformulazione di Mirto e Rosmarino (cosiddetti mirros). Effetto sulla contrattilità della vena porta (A) indice di mobilità, (B) variazione % rispetto al controllo.

Figura 10. Effetto dell’estratto di Mirto sulla produzione di ATP delle cellule di ratto PC-12 dopo tossicità indotta da H2O2 Figura 11. Effetto dell’estratto di Rosmarino sulla produzione di ATP delle cellule di ratto PC-12 dopo tossicità indotta da H2O2

Figura 12. Effetto dell’associazione degli estratti di Mirto e Rosmarino: protezione delle cellule di ratto PC-12 nei confronti della diminuzione di ATP indotta da H2O2

Descrizione dettagliata del invenzione Oggetto dell’invenzione è l’aver sorprendentemente trovato che la somministrazione della combinazione degli estratti delle piante di rosmarino e mirto, aumenta significativamente in modo sinergico la protezione cellulare contro i danni ossidativi testati secondo la metodica del test antiradicalico al DPPH. I risultati ottenuti dagli studi sperimentali descritti mostrano che Fattività di miglior amento della protezione cellulare ottenuta con la combinazione delle suddette sostanze è significativamente superiore a quella degli estratti singoli. Questo effetto sinergico è stato rilevato combinando estratti di varia natura (ottenuti con vari solventi, quali ad es. acquoso, alcolico, idroalcolico, apolare aprotico). Le varie tipologie di estratti costituiscono conoscenza del tecnico del ramo.

Altro oggetto dell’invenzione, direttamente correlato al primo descritto, è l’aver sorprendentemente trovato che la somministrazione della combinazione degli estratti secchi delle piante di rosmarino e mirto induce un marcato positivo potenziamento dell’inotropismo muscolare testato sulla vena porta isolata del topo.

Ulteriore oggetto dell’invenzione, ancora una volta correlato alla protezione cellulare contro i danni indotti da fenomeni di ossidazione biologica, è la sorprendente osservazione che la somministrazione degli estratti secchi delle piante di mirto e rosmarino induce una marcata attività anti-apoptotica nelle colture cellulari PC 12 di feocromocitoma di ratto, ap opto si espressa come diminuzione di concentrazione dell’ATP indotta da somministrazione di perossido di idrogeno (H2O2).

L’invenzione nel suo insieme quindi si riferisce ad una combinazione sinergica positiva di estratti naturali di Mirto e Rosmarino per il miglioramento della protezione delle cellule dalle condizioni fisiopatologiche caratterizzate e in parte causate da una sovrapproduzione di radicali Uberi e per contrastare lo stress ossidativo causato dalla eccessiva produzione di detti radicali liberi, e per prevenire e/o trattare le patologie ad esso correlate.

Detta migliorata protezione è basata sulla somministrazione di quantità efficaci ad ottenere un’attività protettiva o curativa di composizioni comprendenti quantità sinergiche, nell’ordine di dosi da 1 mg fino a 1000 mg di ciascuno degli estratti di mirto e rosmarino preparati come appresso indicato.

Gli estratti secondo la presente invenzione possono essere ottenuti secondo i processi di estrazione noti all’esperto del ramo, a partire dalle foglie così come raccolte, oppure preferibilmente trattando foglie essiccate. Sono preferiti i processi di estrazione in cui le foglie vengono macinate prima di essere sottoposte allo stadio di estrazione.

Gli estratti di Mirto e Rosmarino sono ottenuti trattando le foglie con un processo di estrazione solido/liquido scelto ad es. fra: estrazione in Soxhlet, macerazione, percolazione, ultrasuoni o per distillazione in corrente di vapore o tramite estrazione con fluidi supercritici. Tali processi sono condotti utilizzando un rapporto (peso/peso) matrice vegetale/solvente compreso tra 1:1 e 1: 50 e per tempi compresi tra 30 minuti e 45 giorni. Eventualmente gli estratti così ottenuti possono essere successivamente rettificati per aumentare la purezza dell’estratto attraverso estrazioni liquido/liquido o per passaggio su opportune colonne cromatografiche o SPE (Solid Phase Extraction).

I solventi utilizzati sono quelli normalmente usati nell’ambito delle estrazioni delle sostanze vegetali e possono essere scelti fra: acqua, soluzioni idroalcoliche, solventi organici polari quali: alcoli, chetoni, eteri, esteri, solventi organici apolari aprotici, quali i solventi idrocarburici, anidride carbonica. Sono ad es. impiegabili: acetone, glicole etilenico, glicole propilenico, dietiletere, etere di petrolio, acetato di etile, cloruro di metilene

Gli estratti, ottenuti secondo le metodologie sopra indicate vengono impiegati per ottenere composizioni comprendenti:

a) estratto di Mirto, in particolare prodotto a partire dalle foglie di Myrtus communis ;

b) estratto di Rosmarino, in particolare prodotto a partire dalle foglie di Rosmarinus officinalis ;

la combinazione di a) e b) essendo caratterizzata da un potere antiossidante di almeno 5% superiore alla somma dei poteri antiossidanti dei singoli componenti alle medesime concentrazioni; preferibilmente superiore al 15%; più preferibilmente nell’intervallo di 16-50%, misurato con il test del DPPH in etanolo alla lunghezza d’onda di 517 nm come appresso descritto.

Preferibilmente si impiegano:

a) estratto di Mirto, in particolare Myrtus communis prodotto a partire dalle foglie essiccate e caratterizzato da una azione antiossidante di riferimento osservata al test DPPH ed espressa come capacità di inibire del 50% l’assorbanza del DPPH (EC50 EC50) in un range di concentrazione compreso fra 110 e 175 microg/ml.

b) estratto di Rosmarino, in particolare Rosmarinus officinalis prodotto a partire dalle foglie essiccate caratterizzato da una azione antiossidante di riferimento osservata al test del DPPH ed espressa come ED50 in un range di concentrazione compreso fra 5 e 35 microg/ml.

Preferibilmente il rapporto in peso (a):(b) va da 0,1:1000 a 1000:0,1 rispettivamente per il mirto ed il rosmarino.

Con le composizioni secondo l’invenzione si possono utilizzare in campo farmaceutico o cosmetico o possono essere impiegate in campo alimentare come supplementi dietetici o come nutraceutici o integratori. Le composizioni sono formulate in modo che il principio attivo sia presente in dosi giornaliere che comprendono:

da circa 1 mg a 1000 mg di estratto di rosmarino; da circa 1 mg a 1000 mg di estratto di mirto;

con un rapporto in peso fra i due componenti di 0,1:1000 a 1000: 0,1 rispettivamente per il mirto ed il rosmarino

Le composizioni secondo l’invenzione preferibilmente comprendono ulteriormente, come noto a qualsiasi esperto nel campo farmaceutico, eccipienti (i più appropriati alla via di somministrazione e nutrizionale prescelta), vitamine, come ad esempio il complesso vitaminico B, C ed E, sali minerali, amminoacidi, antiossidanti, coenzimi, come il coenzima Q10, magnesio, zinco, luteina, acido alfa-lipoico, condroitina, glucosammina, gingko biloba, fosfatidilserina .

Le composizioni possono assumere la forma ed esercitare l'azione di prevenzione se in forma di un supplemento dietetico o come cosmetico oppure di un vero e proprio farmaco, nella prevenzione e trattamento di condizioni patologiche collegate alla sovrapproduzione di radicali liberi nell’animale e nell’uomo. La somministrazione e il dosaggio saranno funzione dell'azione di supporto o preventiva o strettamente terapeutica che si intende esercitare e secondo i particolari soggetti ai quali le composizioni e i formulati verranno somministrati.

Le composizioni e i formulati possono essere preparati in forma solida, semi-solida o liquida, sottoforma di compresse, pasticche, pillole, capsule, granulati, sciroppi, fiale, gocce, emulsioni, sospensioni, creme, gel.

Nell’ambito della presente invenzione sono preferite composizioni in cui gli estratti sono: estratto di foglie essiccate di Myrtua communis, estratto di foglie essiccate di Rosmarinus officinalis, eventualmente ciascuno in quantità compresa fra circa 1 mg e 1000 mg.

Le composizioni sono somministrabili per via orale sottoforma di supplemento dietetico; oppure, per via parenterale, rettale o transdermica sottoforma di preparazione farmaceutica; oppure, per via topica sottoforma di preparazione cosmetica.

Le composizioni possono essere impiegate come supplemento dietetico o come cosmetico o come farmaco per la prevenzione e/o il trattamento dello stress ossidativo causato dalla sovrapproduzione di radicali liberi e per la prevenzione e/o il trattamento di condizioni patologiche ad esso correlate, quali invecchiamento, malattie neurodegenerative, arteriosclerosi, infiammazione cronica, disturbi metabolici, cancro, infezioni virali, invecchiamento cutaneo, fatica cronica e fatica muscolare acuta, invecchiamento delle fibre muscolari, disturbi delle vie digestive, dispepsie, disturbi del transito biliare ed intestinale, disturbi del metabolismo epatico, obesità e per il controllo del peso e della massa corporea.

Esperimenti condotti combinando gli estratti della presente invenzione e utilizzando i saggi più significativi rispetto all'azione terapeutica o preventiva attesa da parte della combinazione hanno sorprendentemente rivelato un potente effetto antiossidante sinergico della composizione che è l'oggetto della presente invenzione.

L'attività antiossidante della combinazione oggetto della presente invenzione può essere saggiata in vitro utilizzando il metodo spettrofotometrico del DPPH (2,2-difenil-l-picril-idrazile). Questo metodo permette di misurare il potenziale antiossidante di una molecola da saggiare misurando la variazione dell'assorbanza del radicale DPPH in sua presenza alla lunghezza d'onda di 517 nm (come riportato in letteratura) (Blois MS, “Antioxidant determina -tion by thè use of a stable free radicai”. Nature, 181:1199-1200, 1958), secondo la reazione:

Z* AH = ZH A· [1]

m cui:

Z<■>è il radicale DPPH

AH è la singola molecola antiossidante (riducente) presente nella composizione o nell’estratto

ZH è la forma ridotta del DPPH

A· è il radicale libero prodotto per ossidazione della molecola antiossidante

Quanto maggiore è la diminuzione di assorbanza del radicale DPPH in soluzione, tanto superiore è il potenziale antiossidante della molecola studiata. I risultati finali del saggio vengono espressi come ECBO, cioè come concentrazione di molecola antiossidante alla quale viene ridotto il 50% del radicale DPPH secondo la seguente formula:

% Inibizione = [A(To) — A(Tn)/A(To)]

A(To) = Assorbanza del campione di controllo al tempo 0

A(Tn) = Assorbenza in presenza del campione di antiossidante al tempo n

La capacità antiossidante della combinazione oggetto della presente invenzione è stata saggiata in etanolo, utilizzando una concentrazione di DPPH di 6,0 x 10<6>M e concentrazioni finali di ciascun estratto, preventivamente soìubilizzati in etanolo, comprese tra 1 microg/ml e 3mg/ml. Al fine della valutazione dell’effetto sinergico gli estratti sono stati saggiati anche in miscela, in rapporti compresi tra 0,1:1 e 9,9:1. Gli estratti di mirto e rosmarino erano sottoposti ciascuno alla stessa metodica di estrazione, scelta fra quelle sopra indicate, poi portati a secco e quindi ripresi in etanolo alle concentrazioni volute in modo da standardizzare la metodologia di valutazione, L’assorbanza era poi valutata alla lunghezza d’onda di 517nm in celle di quarzo da lem.

Sorprendentemente, è stato osservato che la miscela dei due estratti, utilizzati a dosaggi inferiori alla loro rispettiva dose di EC50 (10 microg/ml di Rosmarino contro i 15 microg/ml della sua EC50; e 80 microg/ml di Mirto contro i 150 microg/ml della sua EC50) provocavano una riduzione dell’assorbanza del DPPH superiore ad un semplice effetto sommatorio dei due alle concentrazioni impiegate (i.e. 59% riduzione dell’ assorbanza) ma chiaramente indice di un effetto sinergico moltiplicativo e pari ad 81% della riduzione dell’assorbanza. (Fig 6).

La capacità antiossidante della combinazione oggetto della presente invenzione può essere inoltre saggiata sempre in vitro testandone gli effetti sulla motilità spontanea o indotta da stimolo elettrico della muscolatura liscia vasale nel topo, secondo la metodica descritta qui di seguito, e secondo i modelli di riferimento introdotti da Mancinelli R et al: “Functional Role of inducible nitric oxide synthase on mouse colonie motility ” Neuroscience Lettere, 311: 2, 101-104, 2001; e da Rossetti ZL et al “ Biphasic effect of NMDA on thè motility of thè rat portai vein”, British Journal of Pharmacology, 129: 156-162, 2000.

Allestimento del preparato

Gli esperimenti sono stati condotti su preparati di vena porta isolata, previa anestesia con etere, di topi maschi adulti (60-80 g).

Segmenti (4—6 mm) di vena porta venivano sospesi in un bagno (15 mi) di soluzione fisiologica di Krebs mantenuta a 32 °C e continuamente ossigenata con ima miscela di O25% e CO25% (pH 7,4) La soluzione di Krebs aveva la seguente composizione: [mM/1]: NaCl 118, KC1 4,7, CaCl22,52, MgS041,64, NaHC0324,88, Glucose 5,55.

Una estremità del preparato veniva ancorata ad un supporto rigido posto sul fondo del bagno mentre l’altra estremità era in rapporto con un trasduttore isometrico di forza per la registrazione dell’attività contrattile spontanea o elettricamente stimolata.

Il preparato era posto tra una coppia di elettrodi di platino connessi ad un generatori di impulsi a frequenza durata e intensità variabili. Treni di stimoli elettrici di 30Hz, 5 ms di durata con intensità di corrente di 20-30 mA, venivano applicati per un periodo di 5 s durante la registrazione dell'attività contrattile.

Le onde di contrazione spontanee o elettricamente indotte venivano registrate previa conversione analogico-digitale su computer.

Protocollo sperimentale.

Il segmento di vena porta esibiva immediatamente un’attività contrattile spontanea caratterizzata da onde di contrazione fasiche che andavano progressivamente aumentando in ampiezza.

Dopo un periodo di adattamento (10-30 min) le onde mostravano durata ampiezza e frequenza pressoché stabili. Successivamente il preparato veniva gradualmente disteso al fine di stabilire la lunghezza ottimale (Lmax) per ottenere la massima forza di contrazione. Tale operazione veniva eseguita misurando l’ampiezza delle onde spontanee ad ogni grado di allungamento (100 μηι).

Registrazioni in soluzione fisiologica. Tracciati di controllo A Lmax, durante la registrazione continua dell’attività fasica spontanea, il preparato veniva periodicamente stimolato ad intervalli di 5 minuti per un periodo di 35 minuti.

Registrazioni in presenza dell’estratto o di una coformulazione di estratti nel bagno di soluzione fisiologica

35 minuti dopo l’avvio del ciclo di stimolazioni, i singoli estratti (Rosmarino, Mirto, 200μg/ml) o combinazioni dei due estratti [Rosmarino (200μg/ml) -Mirto (200ug/ml ), venivano aggiunti al bagno di soluzione fisiologica. In presenza delle sostanze veniva ripetuto il ciclo di stimolazioni per un periodo di 35 minuti.

Ciascuna vena porta è stata utilizzata per saggiare una singola sostanza o una singola combinazione di sostanze.

Analisi dei tracciati.

I tracciati analizzati hanno riguardato le registrazioni effettuate per un periodo di 35 minuti con il preparato in soluzione fisiologica (tracciati di controllo) e per un successivo periodo di 35 minuti in cui il preparato era in presenza di singoli estratti o di combinazioni di estratti (tracciati test).

L’analisi dell’ampiezza e della frequenza delle onde di contrazione è stata effettuata in intervalli di tempo di 2,5 minuti a partire dall’inizio del ciclo di stimolazione per un periodo complessivo di 35 minuti. In ciascun intervallo di tempo è stata misurata l’ampiezza media ± DS delle onde di contrazione spontanea nonché la frequenza di ripetizione delle onde.

I risultati sono riportati nelle Fig. 7, 8 e 9.

La significatività statistica è stata calcolata con l’analisi della varianza (ANOVA) per gruppi. Sono stati considerati significativi i dati con p < 0,05.

Gli esempi seguenti vengono dati ad illustrazione dell’invenzione e non sono da considerare limitativi della portata della medesima.

Esempio 1

500 g di foglie di Rosmarino ( Rosmarinus officinalis) sono state separate accuratamente dalla pianta ed essiccate naturalmente per 7 giorni 50 g di rosmarino sono stati macinati e posti in un ditale di cellulosa.

Il ditale è stato poi inserito nell’apparato Soxhlet e sottoposto ad estrazione con 400 ml di esano.

Il processo di estrazione è stato condotto in 10 cicli per un tempo complessivo di 6 ore.

Dopo aver fatto raffreddare il sistema, si concentra la soluzione_e stratta al rotavapor (c). Da 50 g di matrice iniziale sono stati ottenuti 2,5 g di estratto secco.

Esempio 2

2,0 grammi di estratto secco da foglie di Mirto (Myrtus communis) sono stati ottenuti secondo la stessa metodica (Estrazione solido liquido — “Soxhlet”) descritta sopra per l’estrazione rosmarino, utilizzando una soluzione acqua/etanolo al 40% in peso di etanolo, al posto dell’esano.

Esempio 3

Risultati ottenuti con metodo DPPH sugli estratti ottenuti negli esempi 1 e 2 sia singoli che sulla miscela dei due

Inizialmente è stata valutata la riduzione dell’assorbanza del radicale DPPH 6,0 x IO-<6>M in etanolo (espressa come riduzione percentuale in funzione del tempo, in presenza dell’antiossidante standard BHA (Butylated HydroxyAnisol) alle concentrazioni di 0,01 mg/ml, 0,1 mg/ml ed infine 1 mg/ml in etanolo (Fig.l), che mostrano un decremento dell’assorbanza del DPPH rispettivamente del 96,63, 95,41 e 92,18%.

Dopo aver ottenuto questi 3 valori di riferimento standard del potere antiossidante secondo il metodo spettrofotometrico del DPPH, si è quindi proceduto a testare il potere antiossidante dei singoli estratti di Rosmarino e Mirto ottenuti rispettivamente negli esempi n.l e n. 2.

Sono state valutate dosi crescenti dell’estratto di Mirto (da 0,01 mucrog/ml fino a 3 microg/ml in etanolo) ed è stato osservato un chiaro effetto dose- dipendente rispetto alla riduzione dell’assorbanza del DPPH.

Il Mirto estratto secondo la metodica sopradescritta (esempio n.2) esercita un evidente effetto antiossidante quando impiegato a dosi superiori a 0,5 microg/ml. (Fig. 2).

Alla stessa stregua, il Rosmarino estratto secondo la metodica sopradescritta (esempio n.l)„ esercita un chiaro effetto antiossidante, espresso sempre come riduzione dell’assorbanza del DPPH, quando impiegato a dosi superiori 0,5 microg/ml (Fig.3).

Per meglio caratterizzare l’azione antiossidante di ciascuno dei due estratti si è proceduto ad identificare la rispettiva concentrazione di dose alla quale i singoli estratti si sono dimostrati capaci di inibire del 50% l’assorbanza del DPPH (espressa come ECBO),

Testando il Mirto a dosi crescenti (range di dose da 1 a 3000 microg/ml), è stato osservato che la ECBOper il Mirto estratto secondo la metodica sopradescritta è pari ad un range 150+10 microgrammi/ml (Fig 4).

Al contrario, per l’estratto di Rosmarino testato egualmente secondo concentrazioni crescenti (range da 1 a 3000 microg/ml), la dose ECso è stata di 14±3 microgrammi/ml (Fig 5).

Infine si è proceduto a testare l’attività antiossidante della combinazione dei due estratti di Mirto e Rosmarino utilizzati sinergicamente.

Differenti combinazioni di dosaggio dei due estratti sono state quindi valutate ed espresse sempre in funzione della capacità di inibizione dell’assorbanza del DPPH.

Sorprendentemente, è stato osservato che la miscela dei due estratti, utilizzati a dosaggi inferiori alla loro rispettiva dose di EC50 (10 microg/ml di Rosmarino contro i 15 microg/ml della sua ECso; e 80 microg/ml di Mirto contro i 150 microg/ml della sua EC50) provocavano una riduzione dell’assorbanza del DPPH superiore ad un semplice effetto sommatorio dei due alle concentrazioni impiegate (i.e. 65 % riduzione dell’ assorbanza) ma chiaramente indice di un effetto sinergico moltiplicativo e pari ad 81% della riduzione dell’assorbanza. (Fig 6).

Tale risultato indica ima sorprendente ed inattesa azione antiossidante sinergica moltiplicativa al test del DPPH dei due estratti di Mirto e Rosmarino quando impiegati insieme in una stessa miscela.

Il potere antiossidante della combinazione dei due appare essere superiore alla semplice somma dell’attività degli estratti impiegati singolarmente ad eguali dosaggi.

Questa inattesa osservazione incoraggia pertanto l’impiego della combinazione degli estratti di Mirto e Rosmarino come integratore dietetico, nutraceutico, cosmetico o farmaco in considerazione della elevatissima e dose-dipendente proprietà antiossidante della miscela.

Esempio 4

Risultati ottenuti ‘*in vitro” su estratti di Rosmarino e Mirto sulla motilità spontanea o indotta da stimolo elettrico della muscolatura liscia casale nel topo sugli estratti singoli e sulla miscela dei due.

Dopo un periodo di adattamento la vena porta isolata di topo esibiva onde di contrazione fasiche con ampiezza, durata e frequenza oscillanti intorno a valori medi che si mantenevano pressoché costanti per alcune ore.

La stimolazione elettrica induceva un potenziamento dell’attività contrattile che perdurava per un arco di tempo di 2-3 minuti susseguente l’applicazione dello stimolo elettrico.

L’attività motoria di controllo è stata continuamente registrata per un periodo di tempo di 35 minuti a partire dall’applicazione della prima stimolazione elettrica. Successivamente lo stimolo elettrico veniva applicato ogni 5 minuti per un numero totale di 6 stimolazioni.

Effetti del Mirto

La presenza di Mirto nel bagno di soluzione fisiologica determinava un aumento delle onde di contrazione spontanee (29- 30% vs controllo) con concomitante calo della frequenza di ripetizione (17-25% vs controllo).

L’andamento delI’IM (Fig. 7) mostrava l’interazione degli effetti inotropi positivi e cronotropi negativi risultando in una iniziale inibizione della motilità con un successivo lieve e non significativo aumento dei valori.

Effetti del Rosmarino

La presenza di estratto di Rosmarino [200pg/ml] nel bagno di soluzione fisiologica determinava effetti simili a quelli indotti dal mirto. Tuttavia l’effetto eccitatorio come mostrato dall’andamento

dell’IM (Fig. 8) era più marcato se confrontato con quello ottenuto con il mirto. E stato inoltre osservato che gli effetti eccitatori si attenuano in intensità dopo 20 minuti dalla somministrazione della sostanza.

Effetti della co-formulazione di Mirto [200μg/ml] e di Rosmarino [200μg/ml].

L’aggiunta al bagno di soluzione fisiologica di una miscela di Mirto e Rosmarino determinava un potenziamento dell’attività motoria vasale caratterizzato da un marcato (p <0,05) aumento dei valori dell’IM (Fig. 9). Tale aumento era evidente già nei primi minuti di registrazione e si manteneva costante per tutta la durata della prova. Si nota che dopo il 15 minuto dalla somministrazione i valori dell’IM si mantengono pressoché stabili indicando che la sostanza è anche capace di controllare la stabilità dei meccanismi energetici cellulari implicati nello sviluppo dell’attività spontanea.

Considerazioni finali sui risultati ottenuti

I risultati della presente indagine sperimentale indicano che le coformulazioni dei due estratti sono sorprendentemente capaci di migliorare, in maniera statisticamente significativa, gli effetti sulla motilità indotti dalle sostanze quando somministrate singolarmente. In particolare gli effetti indotti dalla coformulazione di Mirto e Rosmarino appaiono caratterizzati da un marcato positivo potenziamento dell’inotropismo muscolare.

Tale sostanza di combinazione appare pertanto indicata in stati di ipomotilità.

Esempio 5

Risultati ottenuti dalla somministrazione combinata di estratti secchi di Mirto e Rosmarino sulla apoptosi indotta da esposizione a H2O2 di colture cellulari di feocromocitoma di ratto PC-12.

È stato utilizzato il test ATPLite™ (Perkin Elmer, Milano), un sistema di monitoraggio dell’ATP basato sulla luciferasi, che permette la valutazione degli effetti citostatici e proliferativi di diversi composti biologici. (Cree LA. and Andreotti P.E. 1997 Measurement of cytotoxicity by ATP - based luminescence assay in primary celi cultures and celi linea. Toxicology in Vitro, 11, 553 -556);

(Guan S., Bao Y.M., Jiang B., An L. Protective effect of protocatechuic acid from Alpinia oxyphylla on hydrogen peroxideinduced oxidative PC12 celi death. European Journal of Pharmacology, 2006, 538.)

E stata utilizzata la linea cellulare di feocromocitoma di ratto PC- 12 (European Collection of Celi Culture- ECACC, Sigma Aldrich, Milano) per valutare i potenziali effetti protettivi di estratti di Rosmarino (lo stesso estratto come sopra descritto nel-VEsempio N° 1) e Mirto (lo stesso estratto come sopra descritto nel-VEsempio N° 2) nei confronti della tossicità indotta dal perossido di idrogeno (H2O2). Le cellule sono state fatte crescere su piastre da 96 pozzetti trattate con poli-D-lisina (Sigma Aldrich, Milano) in terreno di coltura D-MEM addizionato di siero fetale bovino (FBS), penicillina/streptomicina, gentamicina, L-Glutamina (tutti Invitrogen, Milano). Le cellule sono state pre-esposte per 1 ora con diverse concentrazioni degli estratti di rosmarino e mirto (da 1,5 a 300 Dg /500 Di) e, in seguito, ad H2O2200DM. Dopo 24 ore è stata valutata l'attività degli estratti sulla produzione dell'ATP mediante spettrofotometro Victor 3 (Perkin Elmer, Milano). La valutazione statistica è stata eseguita tramite il programma Graph-Pad Prism (San Diego, USA).

Come mostrato nella figura A, H2O2200 microM (h2 200) utilizzata senza raggiunta di estratti, determina una diminuzione significativa della produzione di ATP (- 80% ± 4,1 vs veicolo: vei o veh) nelle cellule PC- 12 rispetto al gruppo di controllo (veh). L'estratto di mirto mostra di per se un'aumento significativo della produzione di ATP alla concentrazione di 300 microg/500 microl (mir 300) (+ 78% ± 22 vs veicolo), ma non è in grado di proteggere le cellule dalla tossicità indotta dall'H2O2 , alle diverse concentrazioni (mil, 5-300 h2).

Come mostrato in figura B, l’estratto di rosmarino, alle diverse concentrazioni testate, non è in grado di proteggere le cellule PC-12 dallo stress indotto dall'H2O2. Tale estratto, inoltre, mostra di per sè (R) una tendenza, non significativa, a diminuire la produzione di ATP.

Come mostrato in figura C, l'associazione degli estratti di mirto e rosmarino, in concentrazioni di per sè inattive (m 10 e R150), sono in grado di proteggere le cellule PC-12 nei confronti della diminuzione di ATP indotta dalH2O2 200 microM (+ 250% ± 22,3 vs H202).

In conclusione, i risultati di tale sperimentazione hanno sorprendentemente dimostrato che la combinazione dei due estratti è capace di proteggere significativamente le cellule di PC-12 di ratto dal processo apoptotico (espresso come diminuzione dell’ ATP) indotto dal Perossido di Idrogeno.

Tale effetto sinergico è ancora più sorprendente alla luce di un effetto diametralmente opposto (pro-apoptotico) esercitato da uno dei due estratti (Rosmarino) quando somministrato separatamente al medesimo range di dosaggio.

Esempio 6

Le formulazioni seguenti sono state preparate in compresse utilizzando gli estratti indicati agli esempi 1, 2, 3 e 4 secondo le seguenti modalità di preparazione ed alle seguenti dosi per i singoli componenti:

1) Compressa di 500 mg contenente 100 mg Rosmarino estratto secco 1⁄4; 100 mg Mirto estratto secco 1⁄4; 1,77 mg Vitamina Bl; 1,6 mg Vitamina B2; 18 mg Nicotinamide; 6,55 mg Vitamina B5; 2,42 mg Vitamina B6; 10 mg CoQ10; 244,66 mg Cellulosa; lOmg Silice; 5 mg Stearato.

2) Compressa di 850 mg contenente 100 mg Rosmarino estratto secco 1⁄4; 100 mg Mirto estratto secco 1⁄4; 192,5 mg Glucosamina; 50 mg Curcuma; 60 mg Vitamina C; 100 mg Condroitin Solfato; 20 mg Silice; 10 mg Stearato.

3) Compressa di 500 mg contenente 100 mg Rosmarino estratto secco 1⁄4; 100 mg Mirto estratto secco 1⁄4; 50 mg Gingko Boloba estratto secco 24%; 50 mcg Acido Folico; 5,5. mg Selenio Metionina; 62,5 mg Zinco Gluconato 12%; 100 mg Magnesio Ossido Pesante; 50 mg Fosfadilserina 20%; 16,95 mg Cellulosa; 10 mg Silice; 5 mg Stearato.

4) Compressa di 500 mg contenente 60 mg Rosmarino estratto secco 1⁄4, 100 mg Mirto estratto secco 1⁄4, 8 mg Luteina 25%; 4 mg Zeaxantina; 300 mg Vitamina E; 23 mg Cellulosa; 10 mg Silice; 5 mg Stearato

5) Compressa di 500 mg contenente: 100 mg Rosmarino estratto secco 1⁄4; 100 mg Mirto estratto secco 1⁄4; 10 mg Elicriso estratto secco 1⁄4 ; 50 mg Curcuma; 100 mg Acido Alfa-Lipoico; 60 mg Vitamina C; 50 mg Cellulosa; 20 mg Silice; 10 mg Stearato 6) Compressa di 500 mg contenente 150 mg Rosmarino estratto secco 1⁄4; 50 mg Mirto estratto secco 1⁄4; 20 mg CoQlO; 220 mg Biancospino estratto secco 1% vitexina; 30 mg Cellulosa; 20 mg Silice; 10 mg Stearato

7) Compressa di 850 mg contenente 150 mg Rosmarino estratto secco 1⁄4; 150 mg Mirto estratto secco 1⁄4; 500 mg Acidi Grassi Omega 3 EPA e DHA (minimo 60% concentrazione, rapporto EPA: DHA 2:1), 5 mg Idrossitirosolo; 30 mg Cellulosa; 10 mg Silice; 5 mg Stearato

8) Compresse 500 mg contenenti 150 mg Rosmarino estratto secco 1⁄4; 150 mg Mirto estratto secco 1⁄4; 10 mg Elicriso estratto secco 1⁄4; 5 mg Idrossitirosolo; 62,5 Zinco Gluconato 12%; 100 mg Magnesio Ossido Pesante; 17,5 mg Cellulosa; 10 mg Silice; 5 mg Stearato

9) Compresse di 500 mg contenenti 50 mg Rosmarino estratto secco 1⁄4; 50 mg Mirto estratto secco 1⁄4; 300 mg Acetyl-L-Carnitine; 10 mg CoQlO; 5 mg Idrossitirosolo; 62,5 mg Zinco Gluconato 12%; 7,5 mg Cellulosa; 10 mg Silice; 5 mg Stearato.

Claims (1)

1. RIVENDICAZIONI 1. Composizione comprendente: a) estratto di Mirto, in particolare Myrtus communis prodotto a partire dalle foglie per estrazione solido/liquido; b) estratto di Rosmarino, in particolare Rosmarinus officinalis prodotto a partire dalle foglie per estrazione solido/liquido; la combinazione di a) e b) essendo caratterizzata da un potere antiossidante di almeno 5% superiore alla somma dei poteri antiossidanti, misurati con il test del DPPH, rispetto a quelli degli estratti singoli, ottenuti con la medesima metodologia ed alle medesime concentrazioni; 2. Composizione secondo la rivendicazione 1, caratterizzata da un potere ossidante superiore al 15%; preferibilmente nell’intervallo di 16-50%. 3. Composizione secondo la rivendicazione 1, comprendente: a) estratto di Mirto, in particolare Myrtus communis prodotto a partire dalle foglie essiccate e caratterizzato da una azione antiossidante di riferimento osservata al test DPPH ed espressa come capacità di inibire del 50% l’assorbanza del DPPH (EC50) in un range di concentrazione compreso fra 110 e 175 microg/ml; b) estratto di Rosmarino, in particolare Rosmarinus officinalis prodotto a partire dalle foglie essiccate caratterizzato da una azione antiossidante di riferimento osservata al test del DPPH ed espressa come EC50 in un range di concentrazione compreso fra 5 e 35 microg/ml. 4. Composizione secondo le rivendicazioni 1-3, in cui il rapporto in peso (a):(b) varia da 0,1:1000 a 1000:0,1 rispettivamente per il mirto ed il rosmarino. 5. Composizione secondo le rivendicazioni 1-4, da impiegare in campo farmaceutico o cosmetico o alimentare. 6. Composizioni secondo la rivendicazione 5, da impiegare per la preparazione di supplementi dietetici o integratori alimentari,, prodotti nutraceutici, cosmetici, farmaci per uso umano o animale. 7. Composizioni secondo le rivendicazioni 1-6, comprendenti ulteriormente eccipienti, vitamine, come ad esempio il complesso vitaminico B, C ed E; sali minerali; amminoacidi; antiossidanti; coenzimi, come il coenzima Q10; magnesio; zinco; luteina; acido alfalipoico; condroitina; glucosammina; gingko biloba; fosfatidilserina. 8. Composizioni secondo la rivendicazione 7, formulate in modo che il principio attivo sia presente in dosi giornaliere che variano: da circa 1 microg a 1000 mg di estratto di rosmarino; da circa 1 microg a 1000 mg di estratto di mirto; con un rapporto in peso fra i due componenti di 0,1:1000 a 1000: 0,1 rispettivamente per il mirto ed il rosmarino. 9. Composizioni secondo le rivendicazioni 1-8, in forma solida, semisolida o liquida, sotto forma di compresse, pasticche, pillole, capsule, granulati, sciroppi, fiale, gocce, emulsioni, sospensioni, creme, gel. 10. Composizioni secondo le rivendicazioni 1-9, in cui gli estratti sono: estratto di foglie essiccate di Myrtus communis, estratto di foglie essiccate di Rosmarinus officinalis, eventualmente ciascuno in quantità compresa fra circa 1 mg e 1000 mg. 11. Composizioni secondo le rivendicazioni 1-10, somministrabili per via orale sottoforma di supplemento dietetico,· oppure, per via parenterale, rettale o transdermica sottoforma di preparazione farmaceutica; oppure, per via topica sottoforma di preparazione cosmetica. 12. Composizioni secondo le rivendicazioni 1-11 per la prevenzione e/o il trattamento dello stress ossidativo causato dalla sovrapproduzione di radicali liberi e per la prevenzione e/o il trattamento di condizioni patologiche ad esso correlate, quali invecchiamento, malattie neurodegenerative, arteriosclerosi, infiammazione cronica, disturbi metabolici, cancro, infezioni virali, invecchiamento cutaneo, fatica cronica e fatica muscolare acuta, invecchiamento delle fibre muscolari, disturbi delle vie digestive, dispepsie, disturbi del transito biliare ed intestinale, disturbi del metabolismo epatico, obesità e per il controllo del peso e della massa corporea. 13. Processo per la preparazione delle composizioni secondo le rivendicazioni 1-11, in cui le foglie di dette piante vengono sottoposte ad estrazione solido/liquido secondo metodologia scelta fra: estrazione in Soxhlet, macerazione, percolazione, ultrasuoni o per distillazione in corrente di vapore o tramite estrazione con fluidi supercritici, dette estrazioni essendo condotte utilizzando un rapporto (peso/peso) matrice vegetale/solvente compreso tra 1:1 e 1:50 e per tempi da 30 min. a 45 giorni in un solvente scelto fra: acqua, soluzioni idroalcoliche, solventi organici polari quali: alcoli, chetoni, eteri, esteri, quali: acetone, glicole etilenico, glicole propilenico, dietiletere, etere di petrolio, acetato di etile, cloruro di metilene; solventi organici apolari aprotici, quali i solventi idrocarburici, anidride carbonica, in funzione del tipo di estratto da ottenere. 14. Processo secondo la rivendicazione 13, in cui le foghe vengono macinate prima di essere sottoposte allo stadio di estrazione. 15. Processo secondo le rivendicazioni 13-14, in cui l’estratto finale viene sottoposto ad un ulteriore stadio di estrazione per rettifica. 16. Impiego delle composizioni secondo le rivendicazioni 1-12, per preparare supplementi dietetici o cosmetici o farmaci per la prevenzione e/o il trattamento dello stress ossidativo causato dalla sovrapproduzione di radicali liberi e per la prevenzione e/o il trattamento di condizioni patologiche ad esso correlate, quali l’apoptosi cellulare, la perossidazione lipidica; l’azione mutagena sul DNA; la proteolisi incontrollata, e la disfunzione immunitaria 17. Impiego secondo la rivendicazione 16, per realizzare farmaci per la prevenzione o il trattamento dell’invecchiamento, delle malattie neurodegenerative, quali arteriosclerosi, infiammazione cronica, disturbi metabolici, cancro; infezioni virali; invecchiamento cutaneo; fatica cronica e fatica muscolare acuta, invecchiamento delle fibre muscolari, disturbi delle vie digestive, dispepsie, disturbi del transito biliare ed intestinale, disturbi del metabolismo epatico, obesità e per il controllo del peso e della massa corporea.