ITMI980086A1 - PYRIMIDIN 3-OXIDE COMPOUNDS FOR THE TREATMENT OF MUSCLE-SKELETAL PATHOLOGIES IN PARTICULAR FOR THE TREATMENT OF - Google Patents
PYRIMIDIN 3-OXIDE COMPOUNDS FOR THE TREATMENT OF MUSCLE-SKELETAL PATHOLOGIES IN PARTICULAR FOR THE TREATMENT OFInfo
- Publication number
- ITMI980086A1 ITMI980086A1 ITMI980086A ITMI980086A1 IT MI980086 A1 ITMI980086 A1 IT MI980086A1 IT MI980086 A ITMI980086 A IT MI980086A IT MI980086 A1 ITMI980086 A1 IT MI980086A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- group
- rats
- treatment
- hypokalemic
- oxide
- Prior art date
Links
- OQZGLXOADHKTDN-UHFFFAOYSA-N 1-oxidopyrimidin-1-ium Chemical class [O-][N+]1=CC=CN=C1 OQZGLXOADHKTDN-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims description 8
- 230000000396 hypokalemic effect Effects 0.000 claims description 63
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 41
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 claims description 35
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 claims description 19
- 230000007170 pathology Effects 0.000 claims description 14
- -1 piperidino, hexahydroazepinyl Chemical group 0.000 claims description 13
- 125000004178 (C1-C4) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 12
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 claims description 9
- 210000002346 musculoskeletal system Anatomy 0.000 claims description 9
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 5
- 125000005843 halogen group Chemical group 0.000 claims description 4
- 201000002169 Mitochondrial myopathy Diseases 0.000 claims description 3
- HHHKFGXWKKUNCY-FHWLQOOXSA-N cilazapril Chemical compound C([C@@H](C(=O)OCC)N[C@@H]1C(N2[C@@H](CCCN2CCC1)C(O)=O)=O)CC1=CC=CC=C1 HHHKFGXWKKUNCY-FHWLQOOXSA-N 0.000 claims description 3
- 229960005025 cilazapril Drugs 0.000 claims description 3
- 125000000229 (C1-C4)alkoxy group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004209 (C1-C8) alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003342 alkenyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000002393 azetidinyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 2
- 125000000753 cycloalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 claims description 2
- 125000001326 naphthylalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 claims description 2
- 125000003884 phenylalkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000003386 piperidinyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000719 pyrrolidinyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 claims description 2
- 125000000547 substituted alkyl group Chemical group 0.000 claims description 2
- ZIMGGGWCDYVHOY-UHFFFAOYSA-N 3-hydroxy-2-imino-6-(1-piperidinyl)-4-pyrimidinamine Chemical compound N=C1N(O)C(N)=CC(N2CCCCC2)=N1 ZIMGGGWCDYVHOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 150000001555 benzenes Chemical class 0.000 claims 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 103
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 59
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 47
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 40
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 33
- ZFMITUMMTDLWHR-UHFFFAOYSA-N Minoxidil Chemical compound NC1=[N+]([O-])C(N)=CC(N2CCCCC2)=N1 ZFMITUMMTDLWHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 32
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 27
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 27
- 239000000902 placebo Substances 0.000 description 26
- 229940068196 placebo Drugs 0.000 description 26
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 23
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 23
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 23
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 19
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 17
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 16
- 125000000587 piperidin-1-yl group Chemical group [H]C1([H])N(*)C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C1([H])[H] 0.000 description 15
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 14
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 14
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 13
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 11
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 11
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 9
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 9
- 230000001086 cytosolic effect Effects 0.000 description 9
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 8
- 208000019025 Hypokalemia Diseases 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 6
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 6
- 229940090044 injection Drugs 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 238000000692 Student's t-test Methods 0.000 description 5
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 5
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 5
- 208000024896 potassium deficiency disease Diseases 0.000 description 5
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 5
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 5
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M Chloride anion Chemical compound [Cl-] VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- SGHQFNHCCOBUKB-UHFFFAOYSA-N NC1=CC=NC(N)=[N+]1[O-] Chemical compound NC1=CC=NC(N)=[N+]1[O-] SGHQFNHCCOBUKB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 208000033952 Paralysis flaccid Diseases 0.000 description 4
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 208000028331 flaccid paralysis Diseases 0.000 description 4
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 4
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 4
- 238000000034 method Methods 0.000 description 4
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000002682 Hyperkalemia Diseases 0.000 description 3
- 102000004016 L-Type Calcium Channels Human genes 0.000 description 3
- 108090000420 L-Type Calcium Channels Proteins 0.000 description 3
- 208000010428 Muscle Weakness Diseases 0.000 description 3
- 206010028372 Muscular weakness Diseases 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000283984 Rodentia Species 0.000 description 3
- BZKPWHYZMXOIDC-UHFFFAOYSA-N acetazolamide Chemical compound CC(=O)NC1=NN=C(S(N)(=O)=O)S1 BZKPWHYZMXOIDC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000571 acetazolamide Drugs 0.000 description 3
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 210000003050 axon Anatomy 0.000 description 3
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 3
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 3
- 201000005706 hypokalemic periodic paralysis Diseases 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 239000012669 liquid formulation Substances 0.000 description 3
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 3
- 230000028161 membrane depolarization Effects 0.000 description 3
- 238000001964 muscle biopsy Methods 0.000 description 3
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 3
- 210000003314 quadriceps muscle Anatomy 0.000 description 3
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 201000004384 Alopecia Diseases 0.000 description 2
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 description 2
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 description 2
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 2
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 2
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RPTUSVTUFVMDQK-UHFFFAOYSA-N Hidralazin Chemical compound C1=CC=C2C(NN)=NN=CC2=C1 RPTUSVTUFVMDQK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 2
- 206010061533 Myotonia Diseases 0.000 description 2
- 239000012891 Ringer solution Substances 0.000 description 2
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 2
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 2
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 2
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 2
- 210000002565 arteriole Anatomy 0.000 description 2
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 2
- HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N barbituric acid Chemical compound O=C1CC(=O)NC(=O)N1 HNYOPLTXPVRDBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000002876 beta blocker Substances 0.000 description 2
- 229940097320 beta blocking agent Drugs 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 description 2
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 2
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 2
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 210000003141 lower extremity Anatomy 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 229960003632 minoxidil Drugs 0.000 description 2
- UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N monobenzene Natural products C1=CC=CC=C1 UHOVQNZJYSORNB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000001769 paralizing effect Effects 0.000 description 2
- 238000012402 patch clamp technique Methods 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 2
- 150000003230 pyrimidines Chemical class 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 2
- 230000002459 sustained effect Effects 0.000 description 2
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 2
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 2
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 2
- 108700012359 toxins Proteins 0.000 description 2
- 230000001960 triggered effect Effects 0.000 description 2
- 210000001364 upper extremity Anatomy 0.000 description 2
- 230000024883 vasodilation Effects 0.000 description 2
- 235000019786 weight gain Nutrition 0.000 description 2
- JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N (+-)-Isoprenaline Chemical compound CC(C)NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 JWZZKOKVBUJMES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N (-)-norepinephrine Chemical compound NC[C@H](O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N (S)-chloroquine Chemical compound ClC1=CC=C2C(N[C@@H](C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- VBNFLOFWLGPGJE-UHFFFAOYSA-N 4-chloro-1-hydroxy-6-methylpyrimidin-2-imine Chemical compound CC1=CC(Cl)=NC(=N)N1O VBNFLOFWLGPGJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- IPFIEHIRBSTAKA-UHFFFAOYSA-N 6-piperidin-1-ylpyrimidine-2,4-diamine Chemical compound NC1=NC(N)=CC(N2CCCCC2)=N1 IPFIEHIRBSTAKA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091006112 ATPases Proteins 0.000 description 1
- 102000057290 Adenosine Triphosphatases Human genes 0.000 description 1
- 206010001497 Agitation Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 206010007572 Cardiac hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 208000006029 Cardiomegaly Diseases 0.000 description 1
- 240000001879 Digitalis lutea Species 0.000 description 1
- 206010071602 Genetic polymorphism Diseases 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- SVSKFMJQWMZCRD-MCDZGGTQSA-L MgADP Chemical compound [Mg+2].C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)([O-])=O)[C@@H](O)[C@H]1O SVSKFMJQWMZCRD-MCDZGGTQSA-L 0.000 description 1
- 108010005991 Pork Regular Insulin Proteins 0.000 description 1
- 241000700157 Rattus norvegicus Species 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 206010070863 Toxicity to various agents Diseases 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 231100000569 acute exposure Toxicity 0.000 description 1
- 239000000556 agonist Substances 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 206010068168 androgenetic alopecia Diseases 0.000 description 1
- 201000002996 androgenic alopecia Diseases 0.000 description 1
- 239000002220 antihypertensive agent Substances 0.000 description 1
- 229940127088 antihypertensive drug Drugs 0.000 description 1
- 206010003119 arrhythmia Diseases 0.000 description 1
- 208000006673 asthma Diseases 0.000 description 1
- 229910052788 barium Inorganic materials 0.000 description 1
- DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N barium atom Chemical compound [Ba] DSAJWYNOEDNPEQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 239000011230 binding agent Substances 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 150000001721 carbon Chemical class 0.000 description 1
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 description 1
- 229940105329 carboxymethylcellulose Drugs 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 1
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004098 cellular respiration Effects 0.000 description 1
- 229960003677 chloroquine Drugs 0.000 description 1
- WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N chloroquine Natural products ClC1=CC=C2C(NC(C)CCCN(CC)CC)=CC=NC2=C1 WHTVZRBIWZFKQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N choline Chemical compound C[N+](C)(C)CCO OEYIOHPDSNJKLS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960001231 choline Drugs 0.000 description 1
- 229940110456 cocoa butter Drugs 0.000 description 1
- 235000019868 cocoa butter Nutrition 0.000 description 1
- 238000005056 compaction Methods 0.000 description 1
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 description 1
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000002999 depolarising effect Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960004042 diazoxide Drugs 0.000 description 1
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000007884 disintegrant Substances 0.000 description 1
- 239000002934 diuretic Substances 0.000 description 1
- 229940030606 diuretics Drugs 0.000 description 1
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 1
- 230000001614 effect on membrane Effects 0.000 description 1
- 230000002996 emotional effect Effects 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 1
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 1
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 description 1
- 235000013355 food flavoring agent Nutrition 0.000 description 1
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 229940093181 glucose injection Drugs 0.000 description 1
- 125000005456 glyceride group Chemical group 0.000 description 1
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 1
- 208000024963 hair loss Diseases 0.000 description 1
- 230000003676 hair loss Effects 0.000 description 1
- 230000002440 hepatic effect Effects 0.000 description 1
- 229960002474 hydralazine Drugs 0.000 description 1
- 230000037417 hyperactivation Effects 0.000 description 1
- 208000023692 inborn mitochondrial myopathy Diseases 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L magnesium carbonate Chemical compound [Mg+2].[O-]C([O-])=O ZLNQQNXFFQJAID-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000001095 magnesium carbonate Substances 0.000 description 1
- 229910000021 magnesium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000014380 magnesium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 150000002689 maleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 238000002844 melting Methods 0.000 description 1
- 230000008018 melting Effects 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N methionine Chemical compound CSCCC(N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229920000609 methyl cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000001923 methylcellulose Substances 0.000 description 1
- 235000010981 methylcellulose Nutrition 0.000 description 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 1
- 210000001700 mitochondrial membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000000877 morphologic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000422 nocturnal effect Effects 0.000 description 1
- 229960002748 norepinephrine Drugs 0.000 description 1
- SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N norepinephrine Natural products NCC(O)C1=CC=C(O)C(O)=C1 SFLSHLFXELFNJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000399 orthopedic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 239000001814 pectin Substances 0.000 description 1
- 235000010987 pectin Nutrition 0.000 description 1
- 229920001277 pectin Polymers 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 208000029308 periodic paralysis Diseases 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 239000000825 pharmaceutical preparation Substances 0.000 description 1
- 239000002831 pharmacologic agent Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001997 phenyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- AQHHHDLHHXJYJD-UHFFFAOYSA-N propranolol Chemical compound C1=CC=C2C(OCC(O)CNC(C)C)=CC=CC2=C1 AQHHHDLHHXJYJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008085 renal dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 1
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 1
- 230000005801 respiratory difficulty Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 210000001908 sarcoplasmic reticulum Anatomy 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N spironolactone Chemical compound C([C@@H]1[C@]2(C)CC[C@@H]3[C@@]4(C)CCC(=O)C=C4C[C@H]([C@@H]13)SC(=O)C)C[C@@]21CCC(=O)O1 LXMSZDCAJNLERA-ZHYRCANASA-N 0.000 description 1
- 229960002256 spironolactone Drugs 0.000 description 1
- 230000008925 spontaneous activity Effects 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 150000003467 sulfuric acid derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 239000000829 suppository Substances 0.000 description 1
- 239000000375 suspending agent Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000000454 talc Substances 0.000 description 1
- 229910052623 talc Inorganic materials 0.000 description 1
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 1
- 230000002477 vacuolizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 1
- 239000011345 viscous material Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
- 230000004584 weight gain Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/33—Heterocyclic compounds
- A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
- A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
- A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
- A61K31/506—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim not condensed and containing further heterocyclic rings
Description
DESCRIZIONE DESCRIPTION
La presente invenzione si riferisce a composti pirimidin 3-ossido per il trattamento delle patologie muscolo scheletriche, in particolare per il trattamento della paralisi ipocalemica. The present invention relates to pyrimidine 3-oxide compounds for the treatment of musculoskeletal pathologies, in particular for the treatment of hypokalemic paralysis.
Specificatamente, la presente invenzione si riferisce a nuovi medicamenti a base di 3 ossido derivati della pirimidina utilizzabili nel campo delle affezioni invalidanti l'apparato muscolo scheletrico, quali le paralisi periodiche ipocalemiche primarie e secondarie. Specifically, the present invention refers to new medicaments based on 3 oxide derivatives of pyrimidine usable in the field of disabling diseases of the musculoskeletal system, such as primary and secondary hypokalemic periodic paralysis.
Derivati pirimidin-3-ossido ad attività antiipertensiva sono noti da tempo dai brevetti americani No. 3.382.247 e 3.644.364. Pyrimidine-3-oxide derivatives with antihypertensive activity have been known for some time from US patents Nos. 3,382,247 and 3,644,364.
Inoltre, alcuni derivati della pirimidina hanno recentemente trovato una nuova indicazione di utilizzo nel trattamento della caduta dei capelli e dell'alopecia androgenetica. Furthermore, some derivatives of pyrimidine have recently found a new indication for use in the treatment of hair loss and androgenetic alopecia.
E'inoltre noto che il 6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamino 3-ossido trova come principale impiego terapeutico il trattamento delle ipertensioni gravi resistenti al diazossido, all'idralazina o ad altri farmaci antiipertensivi. il 6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina-3-ossido produce, in vitro, una spiccata vasodilatazione arteriorale a concentrazioni che vanno da 5 a 100 micromoli litro. E' stato verificato che il farmaco vasodilata piccole arteriole nel distretto gastrointestinale, nel muscolo scheletrico, e nella cute. Spiccata vasodilatazione si osserva anche a livello cardiaco ma non nel SNC. Il farmaco riesce a rilassare in vitro arteriole precontratte con norepinefrina o con 20-30 mM di KC1. Gli effetti del 6-[l-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido si estendono anche a livello renale dove il farmaco migliora la performance renale in particolare in quei pazienti dove la disfunzione renale à secondaria all'ipertensione . It is also known that 6- [1-Piperidinil] pyrimidine-2,4-diamino 3-oxide has as its main therapeutic use the treatment of severe hypertension resistant to diazoxide, hydralazine or other antihypertensive drugs. 6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine-3-oxide produces, in vitro, a marked anterior vasodilation at concentrations ranging from 5 to 100 micromol liter. The drug has been found to vasodilate small arterioles in the gastrointestinal tract, skeletal muscle, and skin. Marked vasodilation is also observed in the heart but not in the CNS. The drug is able to relax in vitro arterioles pre-contracted with norepinephrine or with 20-30 mM of KC1. The effects of 6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide also extend to the kidney where the drug improves renal performance, particularly in those patients where renal dysfunction is secondary to hypertension.
E' noto che le paralisi periodiche ipocaleraiche sono classificate in due tipologie: paralisi primarie e paralisi secondarie. Queste sono associate ad abbassamenti del K<+ >ematico al di sotto di 3.2 meq/L. Le paralisi primarie incidono sulla popolazione per 1/100000 soggetti, mentre le paralisi secondarie rappresentano uno dei più comuni fenomeni di tossicità da farmaci e tossine, colpendo una percentuale alta e fortemente variabile dei soggetti trattati con β-bloccanti e diuretici. It is known that hypocaleraic periodic paralysis is classified into two types: primary paralysis and secondary paralysis. These are associated with decreases in blood K <+> below 3.2 meq / L. Primary paralysis affects the population for 1/100000 subjects, while secondary paralysis represents one of the most common phenomena of drug and toxin toxicity, affecting a high and highly variable percentage of subjects treated with β-blockers and diuretics.
Anche se ad oggi non e’ stata rilevata familiarità nei soggetti colpiti da paralisi secondarie, vi è però una predisposizione in questi soggetti, presumibilmente legata a fenomeni di polimorfismo genetico. Although familiarity has not been detected to date in subjects affected by secondary paralysis, there is however a predisposition in these subjects, presumably linked to genetic polymorphism phenomena.
Nelle forme primarie e secondarie, gli attacchi paralitici vengono scatenati da un pasto ricco in carboidrati, iniezione di glucosio, riposo dopo esercizio fisico, e stress emozionale, cioè nelle condizioni che liberano insulina dal pancreas, inducendo la paralisi. Nelle forme primarie si osserva una maggiore penetranza nei maschi in età adolescenziale, mentre le femmine sono più lievemente colpita. In questi soggetti, l'esame istopatologico effettuato su tessuto muscolare rileva la presenza di vacuolizzazione ed alterazione morfologica del reticolo sarcoplasmatico. Gli attacchi paralitici sono intervallati da periodi di prolungata debolezza muscolare anch'essa associata ad abbassamento del K<+ >ematico anche se inferiore. Inizialmente vengono coinvolti gli arti inferiori, successivamente sono colpiti gli arti superiori. Nei casi più gravi si osserva paralisi flaccida completa degli arti inferiori e superiori, difficolti respiratoria ed aritmia cardiaca. L'analisi elettromiografica non mostra segni di attività spontanea (raiotonia ed ipereccitabilità muscolare) nei pazienti colpiti . In the primary and secondary forms, paralytic attacks are triggered by a carbohydrate-rich meal, glucose injection, rest after exercise, and emotional stress, that is, in conditions that release insulin from the pancreas, inducing paralysis. In the primary forms, greater penetrance is observed in adolescent males, while females are more mildly affected. In these subjects, histopathological examination carried out on muscle tissue reveals the presence of vacuolation and morphological alteration of the sarcoplasmic reticulum. The paralytic attacks are interspersed with periods of prolonged muscle weakness also associated with lowering of the blood K <+> even if lower. The lower limbs are initially involved, later the upper limbs are affected. In the most severe cases, complete flaccid paralysis of the lower and upper limbs, respiratory difficulties and cardiac arrhythmia are observed. Electromyographic analysis shows no signs of spontaneous activity (raiotonia and muscle hyperexcitability) in affected patients.
E' inoltre noto che l'iniezione sottocutanea di una soluzione di insulina (4 U/L) e glucosio (0.5 gr.) nei pazienti affetti da paralisi primaria e nei ratti ipocalemici induce paralisi flaccida in 3-4 hr dalla iniezione. Questo rappresenta un utile test diagnostico provocativo caratteristico tutt’oggi utilizzato in clinica. It is also known that the subcutaneous injection of a solution of insulin (4 U / L) and glucose (0.5 gr.) In patients with primary paralysis and in hypokalemic rats induces flaccid paralysis within 3-4 hr from the injection. This is a useful characteristic provocative diagnostic test still used in the clinic today.
Attualmente il trattamento delle ipocalemie primarie è limitato all’utilizzo di farmaci che riequilibrano il K<+ >ematico quali 1'acetazolamide e più raramente, lo spironolattone. Currently, the treatment of primary hypokalemia is limited to the use of drugs that rebalance blood K <+> such as acetazolamide and, more rarely, spironolactone.
Il trattamento cronico con questi farmaci presenta lo svantaggio di comportare la somministrazione di alte concentrazioni per lunghi periodi di tempo. Queste terapie sono pertanto associate alla comparsa di effetti collaterali di rilievo. Ad esempio, la somministrazione protratta di acetazolamide causa, in una alta percentuale di pazienti trattati, nefrotiliasi. Inoltre, vi sono delle varianti che non rispondono al farmaco. In alcune di queste 1’acetazolamide precipita la paralisi. Chronic treatment with these drugs has the disadvantage of involving the administration of high concentrations for long periods of time. These therapies are therefore associated with the appearance of significant side effects. For example, prolonged administration of acetazolamide causes nephrothyliasis in a high percentage of treated patients. In addition, there are variants that do not respond to the drug. In some of these, acetazolamide precipitates paralysis.
A tutt'oggi, un altro intervento terapeutico prevede la somministrazione di sali di K . Questo approccio terapeutico però risulta utile solo in alcuni pazienti poiché non sortisce effetto nel maggior numero di casi. Anzi, la scarsa maneggiabilità di questo approccio terapeutico fa sì che vi siano frequenti casi di ipercalemia con conseguenze critiche per i pazienti . To date, another therapeutic intervention involves the administration of K salts. This therapeutic approach, however, is only useful in some patients as it does not have an effect in the greatest number of cases. Indeed, the poor manageability of this therapeutic approach means that there are frequent cases of hyperkalaemia with critical consequences for patients.
Inoltre, nelle intossicazioni da farmaci, trovano impiego i β-bloccanti quali il propanololo. Questo composto riesce a revertire i sintomi dell 'ipocalemia legata ad una iperattivazione della pompa Na<+>/K<+ >ATPase, ma presenta l'inconveniente di essere controindicato nei pazienti asmatici ed in quelli con difficoltà respiratorie croniche. Furthermore, in drug poisoning, β-blockers such as propanolol are used. This compound is able to revert the symptoms of hypokalemia linked to an hyperactivation of the Na <+> / K <+> ATPase pump, but has the drawback of being contraindicated in asthmatic patients and in those with chronic breathing difficulties.
Il trattamento delle intossicazioni da bario e clorochina è basato sulla sola infusione di sali di K<+ >che però è causa di ipercalemia con severe conseguenze cliniche. The treatment of barium and chloroquine poisoning is based solely on the infusion of K <+> salts which, however, causes hyperkalaemia with severe clinical consequences.
Allo stato attuale, pertanto, non esistono, sul mercato, farmaci in grado di revertire gli effetti dell' ipocalemia primaria e secondaria in maniera significativa. At present, therefore, there are no drugs on the market capable of significantly reversing the effects of primary and secondary hypokalemia.
Uno degli scopi generali della presente invenzione consiste nel fornire nuovi utilizzi terapeutici per una classe di farmaci di per sè già nota. One of the general purposes of the present invention is to provide new therapeutic uses for a class of drugs already known per se.
Un ulteriore scopo della presente invenzione consiste nel fornire una nuova indicazione di utilizzo per derivati pirimidin-3-ossido in qualità di agenti farmacologici per il trattamento di patologie invalidanti l'apparato muscolo scheletrico. A further object of the present invention is to provide a new indication of use for pyrimidine-3-oxide derivatives as pharmacological agents for the treatment of pathologies disabling the musculoskeletal system.
Non ultimo scopo consiste nel provvedere per il (6-(1-Piperidinil]-pirimidin-2,4-diamino 3-ossido) un nuovo utilizzo terapeutico nel trattamanto dalla paralisi ipocalemicha primarie o secondarie. Not least object is to provide for (6- (1-Piperidinyl] -pyrimidin-2,4-diamino 3-oxide) a new therapeutic use in the treatment of primary or secondary hypokalemic paralysis.
Alla luce di questi scopi e di altri ancora che appariranno più evidenti in seguito, viene fornito, in accordo con la presente invenziona, l'uso di composti pirimidin 3-ossido di formula (I): In the light of these purposes and of others still which will appear more evident in the following, the use of pyrimidine 3-oxide compounds of formula (I) is provided in accordance with the present invention:
(I) (THE)
in cui: in which:
R1 è scelto dal gruppo consistente in C1-C4 alchile, un gruppo NHR in cui R è un gruppo C1-C4 alchile, oppure H; R1 is selected from the group consisting of C1-C4 alkyl, an NHR group wherein R is a C1-C4 alkyl group, or H;
R2 è scelto dal gruppo consistente in H, un gruppo C1-C4 alchile, un gruppo NHR in cui R è come sopra, R2 is chosen from the group consisting of H, a C1-C4 alkyl group, an NHR group where R is as above,
R3 è scelto dal gruppo consistente in un atomo di H, un atomo di alogeno, un gruppo nitro, un gruppo amino, un gruppo C1-C4 alchile opzionalmente sostituito con un gruppo OR5 in cui R5 è un gruppo C1-C4 alchile, un nuclao benzenico opzionalmente sostituito con uno o più gruppi C1-C4 alcossi, R3 is selected from the group consisting of an H atom, a halogen atom, a nitro group, an amino group, a C1-C4 alkyl group optionally substituted with an OR5 group in which R5 is a C1-C4 alkyl group, a nucleus benzene optionally substituted with one or more C1-C4 alkoxy groups,
R4 à scelto dal gruppo consistente in H, un atomo di alogeno, un gruppo C1-C4 alchile, un gruppo -NXY in cui X ad Y sono scelti dal gruppo consistente in H, C1-C8 alchile, C1-C8 alchenila, cicloalchila con da 3 a 10 atomi di carbonio non sostituito o alchil sostituito, fenilalchile con da 7 a 12 atomi di carbonio, naftilalchile con da 11 a 14 atomi di carbonio, un eterociclico aziridinile, azetidinile, pirrolidinile, piperidino, esaidroazepinile, eptametilenimino, octametilenimino, morfolino, 4-alchilpiperazinile, ciascuno di detti etericicli avendo opzionalmente attaccati quali sostituenti sui suoi atomi di carbonio da 1 a tre alchile ciascuno di essi avente da 1 a 8 atomi di carbonio, ed i loro sali farmaceuticamente accettabili;per la produzione di un medicamento per il trattamento delle patologie dell'apparato muscolo scheletrico. R4 is selected from the group consisting of H, a halogen atom, a C1-C4 alkyl group, a -NXY group in which X to Y are selected from the group consisting of H, C1-C8 alkyl, C1-C8 alkenyl, cycloalkyl with 3 to 10 unsubstituted carbon or substituted alkyl, phenylalkyl with 7 to 12 carbon atoms, naphthylalkyl with 11 to 14 carbon atoms, a heterocyclic aziridinyl, azetidinyl, pyrrolidinyl, piperidino, hexahydroazepinyl, heptamethylenymino, octamethylenimino , 4-alkylpiperazinyl, each of said heterycycles having optionally attached as substituents on its carbon atoms from 1 to three alkyl each of them having from 1 to 8 carbon atoms, and their pharmaceutically acceptable salts; for the production of a medicament for the treatment of diseases of the musculoskeletal system.
Tra questi composti è risultato particolarmente preferito un composto fi formula (I) in cui Among these compounds, a compound of formula (I) in which
R1 è NH2; R2 è NH2, R1 is NH2; R2 is NH2,
R3 è H; R3 is H;
R4 è piperidinile, denominato 6-(l-piperidinil)-2,4-pirimidindiamina 3-ossido, od anche (6-[l-piperidinil]-pirimidin-2,4-diamino 3-ossido). R4 is piperidinyl, referred to as 6- (1-piperidinyl) -2,4-pyrimidindiamine 3-oxide, or also (6- [1-piperidinyl] -pyrimidine-2,4-diamino 3-oxide).
In accordo con una forma di realizzazione preferita della presente invenzione, i composti pirimidin 3-ossido di formula (I) sono risultati idonei e selettivi agenti terapeutici nel trattamento delle paralisi ipocalemiche primarie o secondarie. According to a preferred embodiment of the present invention, the pyrimidine 3-oxide compounds of formula (I) have been found to be suitable and selective therapeutic agents in the treatment of primary or secondary hypokalemic palsies.
Nell'ambito della presente invenzione con il termine patologie dell'apparato muscolo scheletrico si designano le affezioni che colpiscono la muscolatura scheletrica, indipendentemente dalla loro natura. Tra queste patologie sono comprese le paralisi ipocalemiche primarie di origine familiare (HOPP) e secondarie indotte da farmaci, tossine o da perdita gastrointestinale di ione K<+ >e diete prive di K<+>. Questo termine si estende anche a tutte le patologie depolarizzanti ed invalidanti l' apparato muscolo scheletrico, come ad esempio le miotonie e paramiotonie. Sono inoltre ricomprese le patologie ad alta incidenza come le miopatie mitocondriali che, ad oggi, non hanno ancora trovato una valido approccio farmacologico. In the context of the present invention, the term pathologies of the musculoskeletal system refers to the diseases affecting the skeletal muscles, regardless of their nature. Among these pathologies are included primary hypokalemic paralysis of family origin (HOPP) and secondary hypokalaemia induced by drugs, toxins or by gastrointestinal loss of K <+> ion and diets without K <+>. This term also extends to all depolarizing and disabling pathologies of the musculoskeletal system, such as myotonia and paramiotonia. Also included are high incidence pathologies such as mitochondrial myopathies which, to date, have not yet found a valid pharmacological approach.
Quest'ultima specifica attività dei composti di formula (I) e da ascrivere alla presenza di recettori per questi composti localizzati sulle membrane mitocondriali. Si è osservato che la loro stimolazione da parte di agonisti induce una consistente stimolazione della respirazione cellulare con un possibile conseguente beneficio in pazienti affetti da miopatia mitocondriale. The latter specific activity of the compounds of formula (I) and to be ascribed to the presence of receptors for these compounds located on the mitochondrial membranes. It has been observed that their stimulation by agonists induces a consistent stimulation of cellular respiration with a possible consequent benefit in patients with mitochondrial myopathy.
Tra i composti di formula (I), è stato verificato che il composto 6-(1-piperidinil)-2,4-pirimidindiamina 3-ossido , avente come denominazione generica Minoxidil, è particolarmente idoneo nella produzione di un medicamento per il trattamento delle patologie del muscolo scheletrico, ed in particolare per il trattamento delle paralisi ipocalemiche primarie o secondarie. Among the compounds of formula (I), it has been verified that the compound 6- (1-piperidinyl) -2,4-pyrimidindiamine 3-oxide, having as its generic name Minoxidil, is particularly suitable in the production of a medicament for the treatment of pathologies of the skeletal muscle, and in particular for the treatment of primary or secondary hypokalemic paralysis.
Secondo un aspetto della presente invenzione vengono forniti medicamenti o composizioni contenenti un quantitativo terapeuticamente efficace di un composto pirimidin 3-ossido di formula (!) in associazione con un veicolo farmaceuticamente accettabile per trattare le affezioni dell'apparato muscolo scheletrico. According to an aspect of the present invention, medicaments or compositions are provided containing a therapeutically effective amount of a pyrimidine 3-oxide compound of formula (!) In association with a pharmaceutically acceptable vehicle for treating diseases of the musculoskeletal system.
Esempi di composti che ricadono nell'ambito della presente invenzione, includono, in senso non limitativo: Examples of compounds falling within the scope of the present invention include, but are not limited to:
4-cloro-l,2-diidro-l-idrossi-2-imino-6-metil-pirimidina, 4-chloro-1,2-dihydro-1-hydroxy-2-imino-6-methyl-pyrimidine,
1,2-diidro-l-idrossi-2-imino-6-metil-4-pirrolidilpiriraidina, 1,2-dihydro-1-hydroxy-2-imino-6-methyl-4-pyrrolidylpyriraidine,
6-aminometil-l,2,diidro-l-idrossi-2-imino-4-piperidinopirimidina . 6-aminomethyl-1,2, dihydro-1-hydroxy-2-imino-4-piperidinopyrimidine.
Ulteriori esempi di composti di formula (I) sono citati in US-3.644.364, o in US-3.382.247 e completamente incorporati nella presente domanda. Further examples of compounds of formula (I) are cited in US-3,644,364, or in US-3,382,247 and fully incorporated in the present application.
I composti/derivati pirimidin 3-ossido di formula (I) sono anche utilizzabili nella forma dei loro sali di addizione con acidi farmaceuticamente accettabili come, ad esempio, l'acido cloridrico, fosforico, solforico, glicolico, salicilico, succinico, lattico, maleico, e con aminoacidi. The pyrimidine 3-oxide compounds / derivatives of formula (I) are also usable in the form of their addition salts with pharmaceutically acceptable acids such as, for example, hydrochloric, phosphoric, sulfuric, glycolic, salicylic, succinic, lactic, maleic acids , and with amino acids.
Nel trattamento delle patologie che colpiscono l’apparato muscolo scheletrico, in particolare nelle ipocalemie primarie e secondarie, i composti di formula (I) in accordo con la presente invenzione sono somministrati al paziente in necessità di trattamento, ad un dosaggio preferibilmente compreso tra 18 e 150 μg pro die. In particolare, in una persona adulta del peso di ca. 70 Kg, questi dosaggi sono pari a 1,3 - 10 mg/kg di peso corporeo per giorno. Forme di dosaggio più specifiche potranno essere utilizzate in funzione di particolari condizioni del paziente, della gravità delle patologie, dell'estensione dell'invalidità e dell'attività del composto utilizzato. La determinazione di dosaggi ottimali per situazione cliniche particolari rientra nelle mansioni del tecnico del ramo. In the treatment of pathologies affecting the musculoskeletal system, in particular in primary and secondary hypokalemia, the compounds of formula (I) according to the present invention are administered to the patient in need of treatment, at a dosage preferably between 18 and 150 μg per day. In particular, in an adult person weighing approx. 70 kg, these dosages are equal to 1.3 - 10 mg / kg of body weight per day. More specific dosage forms may be used according to the particular conditions of the patient, the severity of the pathologies, the extent of disability and the activity of the compound used. The determination of optimal dosages for particular clinical situations falls within the duties of the person skilled in the art.
Per la preparazione di un medicamento o di una composizione farmaceutica a partire dai composti della presente invenzione, sono utilizzati veicoli farmaceuticamente accettabili inerti, sia in forma solida che liquida. For the preparation of a medicament or a pharmaceutical composition starting from the compounds of the present invention, pharmaceutically acceptable inert vehicles are used, both in solid and liquid form.
Medicamenti o composizioni farmaceutiche dell'invenzione, includono polveri, compresse, forme granulari, capsule, cachet, soluzioni e supposte Nelle formulazioni in forma solida può essere utilizzato, come veicolo solido, una o più sostanze fisiologicamente accettabili che agiscano come diluenti, solubilizzanti, lubrificanti, leganti, aggreganti, o disgreganti. Medicaments or pharmaceutical compositions of the invention, include powders, tablets, granular forms, capsules, cachets, solutions and suppositories. , binders, aggregators, or disintegrants.
A titolo di esempio, nella forma farmaceutica di compressa il principio attivo di formula (I) è miscelato con il veicolo od eccipiente in proporzioni idonee per ottenere la compattazione, in proporzioni predefinite in accordo con le formulazioni di tecnica farmaceutica. Nella formulazione in polvere il veicolo è un solido finemente suddiviso in miscela con il principio attivo di formula (I). By way of example, in the pharmaceutical form of tablet the active principle of formula (I) is mixed with the vehicle or excipient in proportions suitable for obtaining compaction, in predefined proportions in accordance with the pharmaceutical technique formulations. In the powder formulation the vehicle is a finely divided solid mixed with the active ingredient of formula (I).
Nella forma farmaceutica per via rettale il composto attivo di formula (I) è in forma dispersa all’interno di un opportuno eccipiente come ad esempio una cera basso fondente, quale una miscela di gliceridi di acidi grassi e burro di cacao o in glicerina. In the rectal pharmaceutical form, the active compound of formula (I) is in dispersed form within a suitable excipient such as a low melting wax, such as a mixture of glycerides of fatty acids and cocoa butter or in glycerin.
Veicoli idonei nella preparazione di medicamenti secondo l’invenzione sono magnesio stearato, lattosio, saccarosio, magnesio carbonato, destrina, amido, metil cellulosa, pectina, cerbossiraetilcellulosa, cera, talco e simili. Suitable vehicles in the preparation of medicaments according to the invention are magnesium stearate, lactose, sucrose, magnesium carbonate, dextrin, starch, methyl cellulose, pectin, cerboxyraethylcellulose, wax, talc and the like.
Le formulazioni in forma liquida includono soluzioni idonee per la somministrazione parenterale od orale, o sospensioni od emulsioni adatte per la somministrazione orale. Liquid formulations include solutions suitable for parenteral or oral administration, or suspensions or emulsions suitable for oral administration.
Formulazioni o preparazioni liquide idonee per la somministrazione parenterale sono, ad esempio, soluzioni dei composti di formula (I) in etanolo, acqua, propilen glicole. Liquid formulations or preparations suitable for parenteral administration are, for example, solutions of the compounds of formula (I) in ethanol, water, propylene glycol.
Formulazioni o preparazioni liquide idonee per la somministrazione orale possono includere uno o più materiali viscosi naturali o sintetici, come gomme, resine, carbossi metilcellulosa, ed altri agenti sospendenti. Liquid formulations or preparations suitable for oral administration may include one or more natural or synthetic viscous materials, such as gums, resins, carboxy methylcellulose, and other suspending agents.
Le composizioni farmaceutiche dell’invenzione possono ulteriormente includere agenti aromatizzanti, coloranti e sostanze di utilizzo comune nelle preparazioni farmaceutiche. The pharmaceutical compositions of the invention can further include flavoring agents, dyes and substances of common use in pharmaceutical preparations.
L'utilizzo dei composti di formula (1} prevede vantaggiosamente la produzione di un medicamento in unità di dosaggio singola. In tale forma, la preparazione è divisa in dosi unitarie contenenti appropriate quantità del principio attivo. La forma di dosaggio unitaria può essere una preparazione confezionata contenente variabili quantità di unità. The use of the compounds of formula (1} advantageously provides for the production of a medicament in single dosage units. In this form, the preparation is divided into unit doses containing appropriate quantities of the active principle. The unit dosage form can be a preparation packaged containing variable quantities of units.
In accordo con un altro aspetto della presente invenzione viene fornita l'uso di un composto pirimidin 3-ossido di formula (I) in associazione con cilazapril per produrre un medicamento per trattare patologie invalidanti l'apparato muscolo scheletrico. In particolare, questa associazione risulta utile nel trattamento cronico od acuto delle patologie muscolari per prevenire il possibile aumento di massa ventricolare che si osserva nei pazienti trattati per lunghi periodi di tempo (6 mesi - 1 anno). In accordance with another aspect of the present invention, the use of a pyrimidine 3-oxide compound of formula (I) is provided in association with cilazapril to produce a medicament for treating pathologies disabling the musculoskeletal system. In particular, this association is useful in the chronic or acute treatment of muscle pathologies to prevent the possible increase in ventricular mass which is observed in patients treated for long periods of time (6 months - 1 year).
Un'associazione particolarmente attiva nel trattare l'ipocalemia primaria o secondaria è risultata quella tra il minoxidil e la cilazapril. A particularly active association in treating primary or secondary hypokalemia has been that between minoxidil and cilazapril.
L'utilizzo in terapia della associazione di questi due principi attivi produce un'attività sinergica particolarmente rilevante. The use of the combination of these two active ingredients in therapy produces a particularly relevant synergistic activity.
La specifica attività biologica dei composti secondo la presente invenzione è stata valutata utilizzando i seguenti esempi e prove che vengono forniti a solo scopo illustrativo della presente invenzione e non devono essere intesi in senso limitativo dell'ambito della presente invenzione, quale risulta definito dalle accluse rivendicazioni. The specific biological activity of the compounds according to the present invention has been evaluated using the following examples and tests which are provided for illustrative purposes only of the present invention and must not be construed as limiting the scope of the present invention, as defined by the attached claims .
ESEMPIO 1 EXAMPLE 1
Esperimenti su ratti ipocalemici. Experiments on hypokalemic rats.
Un lotto di 35 ratti maschi Wistar (Charles River, Milano) di 280+21 gr. è stato suddiviso in due gruppi rispettivamente di 25 ratti e di 10 ratti. Il primo gruppo (ratti ipocalemici) è stato alimentato con una dieta priva in K<+ >(Mucedola s.r.l., Settimo Milanese, Mi) di composizione: caseina 21.3%, saccarosio 15%, fiocchi di solca 3%, miscela multivitaminica 2%, acqua minerale priva di ione K<+ >3%, D,L-metionina 15%, colina 0.25%, olio di mais 5%, lardo 5%, destrina 43.35%. Il secondo gruppo (ratti normocalemici ) è stato alimentato con una dieta della stessa composizione di quella del primo gruppo ma era arricchita in ione K<+>(0%). Entrambi i gruppi sono stati alimentati con pellet di 30 gr./die e acqua ad libidum. Il (6-[l-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido)-cloruro veniva solubilizzato in una soluzione salina isotonica sterile (0.9 % NaCl) mantenuta a pH 7.4 con tampone fosfato poi utilizzata come placebo. Dopo 23 giorni di dieta priva in K<+>, il peso corporeo dei ratti ipocalemici era diminuito ed era di 340+37 gr. mentre nei ratti normocalemici questo era di 410+15 gr. Il K<+ >ematico, misurato mediante spettrofotometria a fiamma (Corning EEL 450 flame photometer) in sieri preparati da campioni di sangue prelevati dalla vena caudale, risultava significativamente ridotto (p<000.1) negli animali ipocalemici (significatività valutata mediante il test di t-student). In questi animali il K<+ >ematico era di, 2.5+0.2 meq/1 (n ratti=25) mentre nei ratti normocalemici questo era di 5.1+0.3 meq/1 (n ratti=10). Nessun cambiamento significativo è stato osservato nei livelli di Na ematici tra ratti ipocalemici e normocalemici. I livelli di Na ematico erano rispettivamente di 142+3 raeq/l (n ratti=25) e 144+ 4 meq/1 (n ratti=10) nei ratti ipocalemici e normoocalemici. A batch of 35 male Wistar rats (Charles River, Milan) of 280 + 21 gr. was divided into two groups of 25 rats and 10 rats, respectively. The first group (hypokalemic rats) was fed with a diet free of K <+> (Mucedola s.r.l., Settimo Milanese, Mi) of composition: casein 21.3%, sucrose 15%, flakes of furrow 3%, multivitamin mixture 2%, mineral water free of ion K <+> 3%, D, L-methionine 15%, choline 0.25%, corn oil 5%, lard 5%, dextrin 43.35%. The second group (normokalemic rats) was fed a diet of the same composition as that of the first group but was enriched in K <+> (0%) ion. Both groups were fed with 30 gr./die pellets and water ad libidum. The (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -chloride was solubilized in a sterile isotonic saline solution (0.9% NaCl) maintained at pH 7.4 with phosphate buffer and then used as a placebo. After 23 days of a K <+> free diet, the body weight of the hypokalemic rats had decreased and was 340 + 37 g. while in normokalemic rats this was 410 + 15 gr. The blood K <+>, measured by Corning EEL 450 flame photometer in sera prepared from blood samples taken from the caudal vein, was significantly reduced (p <000.1) in hypokalemic animals (significance assessed by the t -student). In these animals the blood K <+> was 2.5 + 0.2 meq / 1 (n rats = 25) while in normokalemic rats this was 5.1 + 0.3 meq / 1 (n rats = 10). No significant changes were observed in blood Na levels between hypokalemic and normokalemic rats. Blood Na levels were 142 + 3 raeq / l (n rats = 25) and 144 + 4 meq / 1 (n rats = 10) in hypokalemic and normookalemic rats, respectively.
I ratti ipocalemici venivano a loro volta suddivisi in tre gruppi di cui due di 10 ratti ciascuno ed un gruppo di 15 ratti. Il primo gruppo (ipocalemici basso dosaggio) veniva trattato cronicamente per via orale mediante sondino endogastrico con una dose di {6-[1-Piperidinil]primidina-2,4-diamina 3-ossido)cloruro pari a 18 pg kg<-1>· die<-1 >per 10 giorni. Il secondo, (ipocalemici alto dosaggio), veniva trattato cronicamente per os mediante sondino endogastrico con una dose di (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido)cloruro pari a 36 μg kg<-1 >die<-1 >per 10 giorni, il terzo veniva trattato con placebo ed usato come controllo. I restanti 5 ratti placebo erano poi utilizzati per la valutazione degli effetti acuti del (6-[l-Piperidinil]primidin-2,4-diamina 3-ossido)cloruro. I ratti normocalemici erano a loro volta suddivisi in due gruppi; il primo, era trattato per dieci giorni con l'alto dosaggio di (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossida)-cloruro, il secondo era trattato con placebo e veniva usato come controllo. Durante i dieci giorni di trattamento farmacologico, il regime alimentare dei ratti ipocalemici e norraocalemici non era modificato. The hypokalemic rats were in turn divided into three groups of which two of 10 rats each and a group of 15 rats. The first group (hypokalemic low dose) was treated chronically orally by endogastric tube with a dose of {6- [1-Piperidinyl] primidine-2,4-diamine 3-oxide) chloride equal to 18 pg kg <-1> Die <-1> for 10 days. The second, (hypokalemic high dose), was treated chronically orally by endogastric tube with a dose of (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) chloride equal to 36 μg kg <-1> day <-1> for 10 days, the third was treated with placebo and used as a control. The remaining 5 placebo rats were then used for the evaluation of the acute effects of (6- [1-Piperidinyl] primidine-2,4-diamine 3-oxide) chloride. The normokalemic rats were in turn divided into two groups; the first was treated for ten days with the high dosage of (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -chloride, the second was treated with placebo and was used as a control. During the ten days of drug treatment, the diet of the hypokalemic and norraokalemic rats was not changed.
Dopo 10 giorni di trattamento con il basso dosaggio di (6-[1-Piperidinil]primidin-2,4-diammina 3-ossido)-cloruro, nei ratti ipocalemici trattati si e osservato un aumento di peso corporeo relazionato alla dose. Questo era di 375+28 gr. e di 462+12 gr. rispettivamente per il dosaggio di 18 /jg kg<-1 >die<-1 >e di 36 μς kg<-1 >die <-1>di farmaco. In questi animali il K<+ >ematico era prossimo a quello dei norraocalemici ed era di 3.3±0 meq/1 e di 3±0.9 meq/1 rispettivamente per il dosaggio di 18 μq kg<-1 >die<-1 >e di 36 yg kg<-1 >die<-1>. Non vi erano alterazioni dei livelli di Na<+ >ematici dopo trattamento con (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido)-cloruro. After 10 days of treatment with low dose (6- [1-Piperidinyl] primidine-2,4-diamine 3-oxide) -chloride, dose-related body weight gain was observed in treated hypokalemic rats. This was 375 + 28 gr. and 462 + 12 gr. respectively for the dosage of 18 / jg kg <-1> day <-1> and 36 μς kg <-1> day <-1> of drug. In these animals the blood K <+> was close to that of norraokalemics and was 3.3 ± 0 meq / 1 and 3 ± 0.9 meq / 1 for the dose of 18 μq kg <-1> day <-1> and of 36 yg kg <-1> die <-1>. There were no changes in blood Na <+> levels after treatment with (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -chloride.
Prova n°1: dopo 10 giorni di trattamento, veniva effettuata la prova dell' insulina, i ratti ipocaleraici trattati con (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2, 4-diamina 3-ossido)-cloruro e i ratti trattati con placebo venivano iniettati per via intraperitoneale con una soluzione fisiologica arricchita in insulina porcina bovina (4 U/100 gr. peso corporeo) e glucosio (0.5 gr. ). Questa procedura causa paralisi flaccida in 3-4 ore dall’iniezione sia nei pazienti affetti dalle forme primarie sia nei soggetti affetti da quelle secondaria. Test No. 1: after 10 days of treatment, the insulin test was performed, the hypocaleraic rats treated with (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2, 4-diamine 3-oxide) -chloride and the rats treated with placebo they were injected intraperitoneally with a physiological solution enriched in bovine porcine insulin (4 U / 100 gr. body weight) and glucose (0.5 gr.). This procedure causes flaccid paralysis within 3-4 hours of injection both in patients with primary forms and in subjects with secondary ones.
Si è osservato che il 100% dei ratti ipocalemici trattati con placebo si paralizzavano dopo 3-4 ore dall'iniezione di insulina e glucosio. Mentre, il trattamento cronico con (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido)-cloruro basso dosaggio preveniva la paralisi nel 50% dei ratti ipocalemici trattati e nell' 80% dei ratti ipocalemici trattati con alto dosaggio. It was observed that 100% of the hypokalemic rats treated with placebo became paralyzed 3-4 hours after the injection of insulin and glucose. While, chronic treatment with low dose (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -chloride prevented paralysis in 50% of hypokalemic rats treated and in 80% of hypokalemic rats treated with high dosage.
I ratti normocalemici placebo non presentavano alcuna forma di paralisi dopo iniezione della soluzione di insulina e glucosio. The placebo normokalemic rats did not show any form of paralysis after injection of the insulin and glucose solution.
Esempio 2 Example 2
In accordo con la paralisi flaccida osservata in seguito a somministrazione acuta di insulina e glucosio (Prova n°l), misure di potenziale di membrana della fibra muscolare scheletrica effettuate in vitro mediante la tecnica dei due microelettrodi endocellulari su muscolo estensore lungo digitale (EDL) prelevato da ratti ipocalemici paralizzati (ratti ipocalemici trattati con placebo e frazione di ratti ipocalemici che non rispondevano al trattamento con (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido)-cloruro, (Prova n°1) hanno evidenziato che in questi animali le fibre muscolari erano depolarizzate, come evidenziato nelle Tabelle 1, e 2 riportate in seguito. L'esposizione in vitro del muscolo EDL di questi animali ad una soluzione Ringer basso K ulteriormente depolarizzava le fibre muscolari (Tab. 1, 2). Al contrario, le fibre muscolari dei ratti ipocalemici non paralizzati (frazione di ratti ipocalemici che hanno risposto al trattamento con (6-(1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido)-cloruro) non si depolarizzavano quando esposte al Ringer basso K<+>, come evidenziato nella seguente Tabella 2. In accordance with the flaccid paralysis observed following acute administration of insulin and glucose (Test No. 1), measurements of the membrane potential of the skeletal muscle fiber carried out in vitro by the technique of two intracellular microelectrodes on digital long extensor muscle (EDL) taken from paralyzed hypokalemic rats (hypokalemic rats treated with placebo and fraction of hypokalaemic rats that did not respond to treatment with (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -chloride, (Test No. 1) showed that muscle fibers were depolarized in these animals, as shown in Tables 1, and 2 below. In vitro exposure of the EDL muscle of these animals to a low-K Ringer solution further depolarized the muscle fibers (Table 1). In contrast, muscle fibers of non-paralyzed hypokalemic rats (fraction of hypokalemic rats that responded to treatment with (6- (1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3 -oxide) -chloride) did not depolarize when exposed to the low Ringer K <+>, as shown in the following Table 2.
In accordo con la Prova n°1, le fibre muscolari dei ratti norraocalemici placebo dopo iniezione con la soluzione di insulina e glucosio erano fortemente iperpolarizzate quando esposte alla soluzione Ringer basso K<+ >(Tab. 1). According to Test No. 1, the muscle fibers of the placebo norraokalemic rats after injection with the insulin and glucose solution were strongly hyperpolarized when exposed to the low K <+> Ringer's solution (Table 1).
Tabella n°l Effetti di una somministrazione acuta di insulina sui potenziali di membrana delle fibre di muscolo estensore lungo digitale di ratti Table n ° l Effects of acute insulin administration on membrane potentials of digital long extensor muscle fibers of rats
ipocalemici e normocalemici hypokalemic and normokalemic
I valori sono la media+ errore standard di 10 esperimenti indipendenti. * Valori significativamente differenti rispetto a quelli dei ratti normocalemici (p<0.001). La significatività è stata valutata mediante student-t test. Values are the mean + standard error of 10 independent experiments. * Values significantly different from those of normokalemic rats (p <0.001). Significance was assessed by the student-t test.
Tabella 2 Effetti della somministrazione cronica di (6-[l-Piperidinillpirimidm -2,4-diamina 3- ossido )-cloruro sulla paralisi indotta da insulina e sui potenziali di membrana delle fibre di muscolo Table 2 Effects of chronic administration of (6- [l-Piperidinylpyrimidm -2,4-diamine 3-oxide) -chloride on insulin-induced paralysis and membrane potentials of muscle fibers
estensore lungo digitale di ratti ipocalemici digital long extensor of hypokalemic rats
I valori sono la media+_errore standard di 10 esperimenti indipendenti. ^Valori significativamente differenti rispetto a quelli dei ratti normocalemici (p<0.001).La significatività è stata valutata mediante student-t test. Values are the mean + _standard error of 10 independent experiments. ^ Values significantly different from those of normokalemic rats (p <0.001). Significance was assessed by student-t test.
In un’altra serie di esperimenti, il (6-[1-piperidinil ]pirimidin-2 ,4-diamina 3-ossido )-solfato , metabolita in vivo del (6-[1-Piperidinil]pirimidina-2 ,.4-diamina 3-ossido )-cloruro, è stato applicato in vitro diret-tamente sul muscolo EDL dei ratti ipocalemici placebo. Abbiamo osservato che il farmaco a dosi comprese tra 1 μΜ e 100 μΜ è riuscito a prevenire la depolarizzazione delle fibre muscolari indotta dal Ringer basso K<+ >ar-ricchito con insulina, in accordo con i dati riportati nella seguente Tabella 3. In another series of experiments, (6- [1-piperidinyl] pyrimidine-2, 4-diamine 3-oxide) -sulfate, an in vivo metabolite of (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2, .4- diamine 3-oxide) -chloride, was applied in vitro directly to the EDL muscle of hypokalemic placebo rats. We observed that the drug at doses ranging from 1 μΜ to 100 μΜ was able to prevent the depolarization of muscle fibers induced by the insulin-enriched low K <+> Ringer, in accordance with the data reported in the following Table 3.
Tabella 3 Effetti della somministrazione acuta di (6-[l-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido) -solfato sui potenziali di membrana delle fibre di muscolo estensore lungo digitale di ratti ipocalemici preincubate “in vitro” con insulina. Table 3 Effects of acute administration of (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -sulfate on membrane potentials of digitalis long extensor muscle fibers of hypokalemic rats pre-incubated “in vitro” with insulin.
I valori sono la media÷_errore standard di 5 esperimenti indipendenti. *Valori significativamente differenti rispetto a quelli dei ratti normocalemici (p<0.001 o meno). La significatività è stata valutata mediante student-t test. Values are the mean ÷ _standard error of 5 independent experiments. * Values significantly different from those of normokalemic rats (p <0.001 or less). Significance was assessed by the student-t test.
Esempio 3 Example 3
Allo scopo di valutare gli effetti del (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina. 3-ossido)-solfato sulle correnti macroscopiche al K<+ >a sui singoli canali al K<+ >ATP dipendenti delle fibre muscolari di ratti ipocalemici, singole fibre sono state ottenute per dissociazione enzimatica di biopsie muscolari (EDL) prelevate dai ratti paralizzati e non paralizzati, e dai ratti normocalemici. I muscoli venivano poi incubati con Ringer normale arricchito in collagenasi tipo XI-S per 30 min. a 30 °C in un bagno Dubnoff a 0 rpm in atmosfera di 95% O2 e 5% CO2 . Correnti macroscopiche fluenti da macropipette (area di pipetta=5.2+0.9) e correnti di singolo canale fluenti da raicropipette (area di pipetta=l.2+0.3) venivano così registrate mediante la tecnica standard del patch clamp in frazioni di membrana isolate dalle fibre scheletriche (configurazione inside-out). Le registrazioni sono state effettuate ad un voltaggio di -60 mV, a 22°C, in presenza di 150 mM di KC1 da entrambi i lati della frazione di membrana in studio, ed in presenza o in assenza di MgADP 50 μΜ che e noto indurre la massima stimolazione delle correnti (12). Le registrazioni di corrente macroscopicha venivano acquisite mediante il programma Clampex (AXON Instrument, U.S.A.) con un campionamento di 5 kHz e filtrate a 0.5 kHz mediante filtri passa basso. Le registrazioni di singolo canale venivano acquisite in continuo a voltaggio costante su un video registratore ad una frequenza di 98.4 kHz. Successivamente mediante il programma Fetchex (AXON instrument) venivano ricampionate a 20 kHz e filtrate a 2 kHz per la successiva analisi. La analisi delle tracce macroscopiche e microscopiche veniva effettuata mediante i programmi Clampfit e Fetchan, e Pstat (AXON Instrument, USA). Le frazioni di membrana isolate dalle fibre muscolari dei ratti ipocaleraici che si erano paralizzati (ratti ipocalemici che non hanno risposto al trattamento con (6-[l-Piperidinil]pirimidina-2,4-diamina 3-ossido) -cloruro e ratti trattati con placebo, Prova n°l) mostravano una corrente macroscopica al K<+ >fortemente ridotta legata alla caduta della componente ATP dipendente, come illustrato nelle Figure 1 A, B, in cui sono riportate le registrazioni di correnti macroscopiche al K<+ >ATP dipendenti di ratti normocalemici placebo (A) e di ratti ipocalemici (B). Le registrazioni sono state effettuate, in frazioni isolate di membrana, a -60 mV (Vm), a 20 °C, in presenza di 150 mM di KC1 da entrambi i lati della membrana. L'applicazione di ATP sul lato citosolico dei canali riduce le correnti al K<+ >indicando che queste sono sostenute da canali al K<+ >ATP dipendenti . In order to evaluate the effects of (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine. 3-oxide) -sulfate on the macroscopic currents at K <+> a on the individual K <+> ATP-dependent channels of the fibers muscle from hypokalemic rats, single fibers were obtained by enzymatic dissociation of muscle biopsies (EDL) taken from paralyzed and non-paralyzed rats, and from normokalemic rats. The muscles were then incubated with normal Ringer's enriched in collagenase type XI-S for 30 min. at 30 ° C in a Dubnoff bath at 0 rpm in an atmosphere of 95% O2 and 5% CO2. Macroscopic currents flowing from macropipettes (pipette area = 5.2 + 0.9) and single channel currents flowing from raicropipettes (pipette area = 1.2 + 0.3) were thus recorded by the standard patch clamp technique in membrane fractions isolated from the fibers skeletal (inside-out configuration). The recordings were made at a voltage of -60 mV, at 22 ° C, in the presence of 150 mM of KC1 on both sides of the membrane fraction under study, and in the presence or absence of MgADP 50 μΜ which is known to induce the maximum stimulation of the currents (12). The macroscopic current recordings were acquired by means of the Clampex program (AXON Instrument, U.S.A.) with a sampling of 5 kHz and filtered at 0.5 kHz by means of low-pass filters. The single channel recordings were acquired continuously at constant voltage on a video recorder at a frequency of 98.4 kHz. Subsequently by means of the Fetchex program (AXON instrument) they were resampled at 20 kHz and filtered at 2 kHz for subsequent analysis. The analysis of macroscopic and microscopic traces was carried out by means of the Clampfit and Fetchan programs, and Pstat (AXON Instrument, USA). Membrane fractions isolated from muscle fibers of hypocaleraic rats that had paralyzed (hypokalemic rats that did not respond to treatment with (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -chloride and rats treated with placebo, Trial n ° l) showed a strongly reduced macroscopic current at K <+> linked to the fall of the dependent ATP component, as illustrated in Figures 1 A, B, in which the recordings of macroscopic currents at K <+> ATP are reported dependent of placebo normokalemic rats (A) and hypokalemic rats (B). The recordings were carried out, in isolated fractions of the membrane, at -60 mV (Vm), at 20 ° C, in the presence of 150 mM of KC1 on both sides of the membrane. The application of ATP to the cytosolic side of the channels reduces the K <+> currents indicating that they are sustained by ATP dependent K <+> channels.
Nei ratti ipocaleraici placebo la corrente macroscopica al K<+ >ATP dipendente era di -11.1+2.5 pA/μm<2 >(n° macropipette/n° ratti= 98/10). In alcune frazioni di membrana risultava particolarmente ridotta ed era di -1.4+2.1 pA/μm<2 >(n° macropipette/n° ratti = 54/10). Al contrario, nei ratti normocalemici placebo la corrente al K<+ >ATP dipendente risultava elevata ed era di -21.5+3 pA/μm<2 >(n° macropipette/n ratti= 170/10). L'analisi di singolo canale rilevava una anormale riduzione delle probabilità di apertura (Popen), del numero di canali funzionali (N) presenti nelle frazioni di membrana in studio, dei canali al K<+ >ATP dipendenti, come si evince dalla seguente Tabella 4. In particolare due livelli di conduttanza (gamma) di singolo canale al K<+ >bloccati da ATP sono stati rilevati nelle membrane in studio dei ratti ipocalemici (Tab. 4). Questi erano dovuti a fluttuazioni dello stesso canale tra due differenti stati di conduttanza. Simili alterazioni macroscopiche e microscopiche sono state osservate nei ratti ipocalemici trattati con (6-[l-Piperidinil]primidin-2,4-diamina 3-ossido )-cloruro che non hanno risposto al trattamento (vedi Prova 1). Al contrario, un solo livello di conduttanza è rilevabile nei ratti normocalemici placebo e nei ratti trattati con {6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido)cloruro (Tab . n° 4). Nei ratti ipocalemici non paralizzati che hanno quindi risposto al trattamento con (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2 ,4-diamina 3-ossido) -cloruro basso e alto dosaggio (vedi Prova 1), le correnti macroscopiche al K<+ >erano elevate grazie alla presenza della componente ATP dipendente ed erano simili a quelle rilevate nei ratti normocalemici placebo, come illustrato nelle qui accluse Figure 2 A, B in cui sono riportate le registrazioni di correnti macroscopiche al K<+ >ATP dipendenti di ratti ipocalemici trattati per 10 giorni con (6-[1-piperidinil]-pirimidina-2,4-diamina 3-ossido) 36 μg Kg<-1 >die<-1 >(A) e con 18 μg Kg<-1 >die<-1 >(B). Le registrazioni sono state effettuate, in frazioni isolate di membrana, a -60 mV (Vra) a 20 °C, in presenza di 150 mM di KC1 da entrambi i lati della membrana. L’applicazione di ATP sul lato citosolico dei canali riduce le correnti al K<+ >indicando che queste sono sostenute da canali al K<+ >ATP dipendenti. In hypocaleraic placebo rats, the macroscopic current at the K <+> ATP dependent was -11.1 + 2.5 pA / μm <2> (n ° macropipettes / n ° rats = 98/10). In some membrane fractions it was particularly reduced and was -1.4 + 2.1 pA / μm <2> (n ° macropipettes / n ° rats = 54/10). In contrast, in placebo normokalemic rats the ATP dependent K <+> current was high and was -21.5 + 3 pA / μm <2> (n ° macropipettes / n rats = 170/10). The single channel analysis revealed an abnormal reduction of the probability of opening (Popen), of the number of functional channels (N) present in the membrane fractions under study, of the K <+> ATP dependent channels, as shown in the following Table 4. In particular, two levels of conductance (gamma) of single channel at K <+> blocked by ATP were detected in the study membranes of hypokalemic rats (Table 4). These were due to fluctuations of the same channel between two different conductance states. Similar macroscopic and microscopic changes were observed in hypokalemic rats treated with (6- [1-Piperidinyl] primidine-2,4-diamine 3-oxide) -chloride that did not respond to treatment (see Test 1). On the contrary, only one level of conductance is detectable in normokalemic placebo rats and in rats treated with {6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) chloride (Table n ° 4). In non-paralyzed hypokalemic rats that therefore responded to treatment with (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2, 4-diamine 3-oxide) -chloride low and high dose (see Test 1), the macroscopic currents at K <+ > were elevated due to the presence of the ATP dependent component and were similar to those found in normokalemic placebo rats, as illustrated in the enclosed Figures 2 A, B which show the recordings of macroscopic currents at K <+> ATP dependent of hypokalemic rats treated for 10 days with (6- [1-piperidinyl] -pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) 36 μg Kg <-1> day <-1> (A) and with 18 μg Kg <-1> day <-1> (B). The recordings were carried out, in isolated fractions of the membrane, at -60 mV (Vra) at 20 ° C, in the presence of 150 mM of KC1 on both sides of the membrane. The application of ATP on the cytosolic side of the channels reduces the K <+> currents indicating that these are supported by ATP dependent K <+> channels.
In questi animali le correnti erano di -18.2+4 pA/μm<2 >(n° macropipette/n° ratti= 71/10) e di -15.2+3 ρΑ/μm<2 >(n° macropipette/n° rats= 51/10) rispettivamente nei ratti ipocalemici alto e basso dosaggio. In these animals the currents were -18.2 + 4 pA / μm <2> (n ° macropipettes / n ° rats = 71/10) and -15.2 + 3 ρΑ / μm <2> (n ° macropipettes / n ° rats = 51/10) in high and low dose hypokalemic rats, respectively.
Anche i parametri di singolo canale risultavano simili a quelli dei ratti normocalemici (Tab. 4). Even the single channel parameters were similar to those of the normokalemic rats (Table 4).
- TP - TP
Nessun effetto significativo sui potenziali di membrana (vedi Prova <n >2), e sulle correnti macro e microscopiche è stato osservato in seguito a trattamento cronico dei ratti normocalemici con (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2 ,4-diaraina 3-ossido)-cloruro ad alto dosaggio. No significant effect on membrane potentials (see Trial <n> 2), and on macro and microscopic currents was observed following chronic treatment of normokalemic rats with (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2, 4-diaraine 3 -oxide) -chloride in high dosage.
In un'altra serie di esperimenti, il (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4diamine 3-ossido)-solfato è stato applicato in vitro in acuto direttamente sulle frazioni di membrana isolate dalle fibre muscolari dei ratti ipocalemici placebo. Si è osservato che il farmaco a dosi comprese tra 1 μΜ e 100 μΜ è riuscito a stimolare le correnti macroscopiche al K<+ >ATP dipendenti senza però raggiungere i valori dei ratti normocalemici placebo. Anche alcuni parametri di singolo canale come e la P risultavano simili rispetto à quelli dei ratti normocalemici placebo. Al contrario N non era modificato dal {6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido) ed era simile a quello dei ratti ipocalemici placebo come illustrato nelle Fig. 3 A, B in cui sono riportate le tipiche registrazioni in continuo di correnti di singolo canale al K<+ >ATP dipendenti di ratto normocalemico placebo (A) e di ratto ipocalemico placebo (B). Le registrazioni sono state effettuate, in frazioni isolate di membrana, a -60mV (Vm), a 20°C, in presenza di 150 mM di KCl da entrambi i lati della membrana. Le aperture dei canali sono per convenzione dall'alto verso il basso. Un solo livello di conduttanza è distinguibile nella traccia del ratto normocalemico (A), mentre due livelli di conduttanza, 01 e 02, sono presenti nella traccia del ratto ipocalemico (B). L'applicazione di ATP al 16 sec (A) e al 30 sec (B) di registrazione sul lato citosolico dei canali inibisce i canali al K<+ >indicando che questi sono canali ATP dipendenti. L'applicazione di (6-[1-piperidinil]pirimidina-2,4-diamina 3-ossido) induce una stimolazione della probabilità di apertura dei canali dei ratti normocalemici ed ipocalemici. Nessun effetto significativo si è osservato nelle frazioni di membrana dei ratti normocalemici che già presentavano correnti macroscopiche al K<+ >ATP dipendenti elevate. In another series of experiments, (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4diamine 3-oxide) -sulfate was acutely applied in vitro directly to membrane fractions isolated from muscle fibers of placebo hypokalemic rats. It was observed that the drug at doses ranging from 1 μΜ to 100 μΜ was able to stimulate the macroscopic currents at the K <+> ATP dependent without however reaching the values of the normokalemic placebo rats. Some single channel parameters such as and P were also similar to those of the placebo normokalemic rats. On the contrary, N was not modified by {6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) and was similar to that of hypokalemic placebo rats as illustrated in Fig. 3 A, B where typical Continuous recordings of single channel currents at the K <+> ATP dependent of placebo normokalemic rat (A) and of placebo hypokalemic rat (B). The recordings were carried out, in isolated fractions of the membrane, at -60mV (Vm), at 20 ° C, in the presence of 150 mM of KCl on both sides of the membrane. The channel openings are conventionally from top to bottom. A single level of conductance is distinguishable in the normokalemic rat trace (A), while two conductance levels, 01 and 02, are present in the hypokalemic rat trace (B). Application of ATP at 16 sec (A) and 30 sec (B) of recording on the cytosolic side of the channels inhibits the K <+> channels indicating that these are ATP dependent channels. The application of (6- [1-piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) induces a stimulation of the probability of opening of the channels of normokalemic and hypokalemic rats. No significant effect was observed in the membrane fractions of normokalemic rats that already had high K <+> ATP dependent macroscopic currents.
Esempio 4 Example 4
Prova n° 4: allo scopo di valutare se una singola somministrazione di (6-[1-Piperidinil ]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido)-cloruro prevenga la paralisi nei ratti ipocalemici, è stata somministrata acutamente una soluzione fisiologica arricchita con (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido )-cloruro 150 μg kg<-1>·die<-1 >a 5 ratti ìpocalemici. Dopo 90 min. dalla somministrazione (tempo di metabolizzazione epatica del farmaco da (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido)-cloruro in derivato solfato, metabolita attivo), questi ratti sono stati trattati con la consueta iniezione della soluzione di insulina e glucosio. In 5 ratti su 5 non è stata osservata paralisi nell'arco delle 4 ore di osservazione dalla somministrazione. In questi animali in K<+ >ematico al sacrifico era di 3+0 meq/L, valore prossimo a quello dei controlli. Test No. 4: In order to evaluate whether a single administration of (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -chloride prevents paralysis in hypokalemic rats, an enriched physiological solution was acutely administered with (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -chloride 150 μg kg <-1> · day <-1> to 5 ìpokalemic rats. After 90 min. from administration (time of hepatic metabolization of the drug from (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -chloride in sulfate derivative, active metabolite), these rats were treated with the usual injection of the solution of insulin and glucose. In 5 of 5 rats, no paralysis was observed within 4 hours of observation after administration. In these animals the blood K <+> at sacrifice was 3 + 0 meq / L, a value close to that of the controls.
Esempio 5 Example 5
Prova n°5: Allo scopo di valutare se la somministrazione cronica di (6—[1— Piperidini1]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido)-cloruro inducesse alterazioni macroscopiche negli organi principali, abbiamo valutato il peso dei singoli organi a secco rapportandolo al peso corporeo del ratto al sacrificio. Questo tipo di analisi è stata fatta su ratti ìpocalemici trattati con placebo, su ratti ìpocalemici trattati con (6-[1-Piperidinillpirimidin-2,4-diamina 3-ossido)-cloruro ai due differenti dosaggi, su ratti normocalemici trattati con l'alto dosaggio di farmaco. Test n ° 5: In order to evaluate whether the chronic administration of (6— [1— Piperidini1] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -chloride induced macroscopic alterations in the main organs, we evaluated the weight of the individual organs dry in relation to the body weight of the rat at the sacrifice. This type of analysis was performed on hypokalemic rats treated with placebo, on hypokalemic rats treated with (6- [1-Piperidinylpyrimidin-2,4-diamine 3-oxide) -chloride at two different dosages, on normokalemic rats treated with high dosage of drug.
Dalla tabella n° 5 si evince un significativo aumento del peso dei reni e dei polmoni dei ratti ìpocalemici rispetto a quello dei ratti normocalemici. Non sono state osservate altre variazioni di peso di rilievo negli altri organi vitali. Il (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido)-cloruro dopo somministrazione cronica (10 giorni) ad entrambi i dosaggi testati non ha indotto variazioni significative nel peso del cuore sia nei ratti ipocalemici sia nei ratti normocalemici. Questo riveste un certo interesse, infatti il limite di utilizzo del farmaco come antipertensivo è la potenziale comparsa di ipertrofia cardiaca che si manifesta con un aumento significativo del peso del cuore a secco nei soggetti trattati. Questi effetti tossici riportati da altri autori sono stati osservati a concentrazioni di 2 mg al giorno, che sono quelle minime utilizzate come antiipertensivo, per somministrazioni croniche di almeno 6 settimane. Gli stessi autori hanno inoltre riportato che il trattamento acuto non ha prodotto effetti tossici di rilevo. Una interessante osservazione che abbiamo fatto è che il trattamento cronico con (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2 ,4-diamina 3-ossido)-cloruro con un meccanismo non noto, è riuscito a revertire l'aumento significativo di peso che si osserva nei polmoni e nei reni dei ratti ipocalemici, come evidenziato in Tabella 5. Table 5 shows a significant increase in the weight of the kidneys and lungs of the ìpokalemic rats compared to that of the normokalemic rats. No other relevant weight changes were observed in the other vital organs. The (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -chloride after chronic administration (10 days) at both tested dosages did not induce significant changes in heart weight in both hypokalemic and rats. normokalemic. This is of some interest, in fact the limit of use of the drug as an antihypertensive is the potential appearance of cardiac hypertrophy which manifests itself with a significant increase in the weight of the dry heart in the treated subjects. These toxic effects reported by other authors have been observed at concentrations of 2 mg per day, which are the lowest ones used as an antihypertensive, for chronic administration of at least 6 weeks. The same authors also reported that acute treatment did not produce significant toxic effects. An interesting observation we made is that chronic treatment with (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2, 4-diamine 3-oxide) -chloride with an unknown mechanism, was able to reverse the significant weight gain that is observed in the lungs and kidneys of hypokalemic rats, as shown in Table 5.
Tabella n° 5 Effetto del trattamento cronico con (6-[l-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido) -cloruro sul peso degli organi dei ratti normocalemici ed Table No. 5 Effect of chronic treatment with (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -chloride on the organ weight of normokalemic and
ipocalemici hypokalemic
I valori sono la media+ errore standard del rapporto tra il peso dell’organo a secco ed il peso corporeo degli animali. I ratti sono stati trattati con insulina e glucosio (v. Prova n° 1) per indurre la paralisi. . *Valori significativamente differenti rispetto a quelli dei ratti normocalemici (p<0.001 o meno). La significatività è stata valutata mediante student-t test. The values are the mean + standard error of the ratio between the weight of the dry organ and the body weight of the animals. The rats were treated with insulin and glucose (see Test No. 1) to induce paralysis. . * Values significantly different from those of normokalemic rats (p <0.001 or less). Significance was assessed by the student-t test.
Esperimenti su biopsie umane. Human biopsy experiments.
In analogia con gli esperimenti su descritti nel roditore, si sono eseguite le seguenti prove su pazienti. In analogy with the experiments described above in the rodent, the following tests were performed on patients.
Gli effetti del (6-[1-piperidinil]piriraidin-2,4-diamina 3-ossido)-solfato sono stati valutati in vitro su biopsie muscolari di pazienti affetti da paralisi periodica ipocalemica primaria e in soggetti operati per scopi ortopedici considerati come controlli. The effects of (6- [1-piperidinyl] pyriraidin-2,4-diamine 3-oxide) -sulfate were evaluated in vitro on muscle biopsies of patients suffering from primary hypokalemic periodic paralysis and in subjects operated on for orthopedic purposes considered as controls. .
I due soggetti affetti da HOPP erano un adolescente di sesso maschile di 18 anni e un soggetto adulto di sesso femminile di 40 anni. Ambedue i pazienti presentavano la mutazione R528H del recettore diidropiridinico del muscolo scheletrico che risulta essere la più comune delle tre note che si osservano nei pazienti HOPP. 11 paziente di 18 anni era colpito da attacchi ripetuti, 4-5 per settimana, e severi di paralisi ipocaleraica, aventi una durata minima di 5 ore ad una massima di 48 ore. La paralisi generalmente notturna si osservava dopo un periodo di stress fisico, o dopo un pasto ricco in carboidrati. Durante gli attacchi il K<+ >ematico era di < 1.5 meq/L. Gli attacchi erano poi intervallati da periodi di debolezza muscolare in cui il K<+ >ematico saliva a valori di 3-3.5 meq/L. L'analisi elettromiografica non mostrava segni di miotonia. Il pedigree familiare mostrava che la madre risultava affetta. The two subjects with HOPP were an 18-year-old male adolescent and a 40-year-old female adult. Both patients had the skeletal muscle dihydropyridine receptor R528H mutation which is the most common of the three known to occur in HOPP patients. The 18-year-old patient was suffering from repeated attacks, 4-5 per week, and severe attacks of hypocaleraic paralysis, lasting from a minimum of 5 hours to a maximum of 48 hours. Usually nocturnal paralysis was observed after a period of physical stress, or after a carbohydrate-rich meal. During the attacks the blood K <+> was <1.5 meq / L. The attacks were then interspersed with periods of muscle weakness in which the blood K <+> rose to values of 3-3.5 meq / L. Electromyographic analysis showed no signs of myotonia. The family pedigree showed that the mother was affected.
La donna di 50 anni mostrava una persistente debolezza muscolare che sfociava in più rari attacchi, 1 per settimana generalmente notturni di breve durata (1 -2 ore). Durante gli attacchi il K<+ >ematico era di ≤2 meq/L. Gli attacchi erano principalmente scatenati da un periodo di stress fisico. The 50-year-old woman showed persistent muscle weakness that resulted in more rare attacks, 1 per week usually short-lived (1-2 hours) at night. During the attacks the blood K <+> was ≤2 meq / L. The attacks were mainly triggered by a period of physical stress.
I due soggetti sani esaminati non presentavano patologie di rilievo, né infezioni sistemiche, nè alterazioni dei parametri ematici. Il prelievo bioptico sia nei soggetti sani che nei pazienti era effettuato previa consenso dei soggetti esaminati. The two healthy subjects examined did not present significant pathologies, nor systemic infections, nor alterations in blood parameters. The biopsy sampling in both healthy subjects and patients was carried out with the prior consent of the subjects examined.
Esempio 6 Example 6
Prova n° 6: come già osservato per i ratti ipocalemici, misure di potenziale di membrana della fibra muscolare scheletrica effettuate in vitro mediante la tecnica dei due microelettrodi endocellulari su muscolo vasto laterale prelevato dai due soggetti ipocalemici hanno evidenziato che in queste biospie le fibre muscolari erano lievemente depolarizzate rispetto a quelle dei soggetti sani (Tab. 6). L'esposizione in vitro dei muscoli ad una soluzione Ringer basso K<+ >ulteriormente depolarizzava le fibre muscolari {Tab. 6). Una ulteriore depolarizzazione si osservava quando le fibre erano esposte ad una soluzione Ringer basso K<+ >arricchita in insulina. Al contrario, le fibre muscolari dei soggetti sani si iperpolarizzavano quando esposte al Ringer basso K<+ >e/o all'insulina, come evidenziato dai dati riportati nella Tabella 6. Test n ° 6: as already observed for hypokalemic rats, measurements of the membrane potential of the skeletal muscle fiber carried out in vitro using the technique of two endocellular microelectrodes on vastus lateralis muscle taken from the two hypokalemic subjects have shown that in these biospies the muscle fibers they were slightly depolarized compared to those of healthy subjects (Table 6). In vitro exposure of muscles to a low K <+> Ringer solution further depolarized muscle fibers {Tab. 6). Further depolarization was observed when the fibers were exposed to an insulin-enriched low K <+> Ringer's solution. In contrast, muscle fibers of healthy subjects hyperpolarized when exposed to low Ringer K <+> and / or insulin, as evidenced by the data reported in Table 6.
Tabellan°6 Potenziatidimembrana dette fibredimuscolo vasto laterale disoggetti Table n ° 6 Membrane enhancements called vastus lateral muscle fibers of subjects
sanie dipazientiipocalemici healthy and hypokalemic patients
I valori sono la media÷ errare standard. *Valori significativamente differenti rispetto a quelli dei soggetti sani (p<0.001 o meno). La significatività è stata valutata mediante student-t test. I muscoli sono stati incubati con insulina (4 U/L) per 30 min prima della registrazione. Values are mean ÷ standard err. * Values significantly different from those of healthy subjects (p <0.001 or less). Significance was assessed by the student-t test. Muscles were incubated with insulin (4 U / L) for 30 min before recording.
L'incubazione per 30 min. delle biospie muscolari dei pazienti HOPP Incubation for 30 min. of the muscle biospies of HOPP patients
con (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido)-solfato (1 μΜ e 100 with (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -sulfate (1 μΜ and 100
μΜ) riusciva a prevenire in maniera dose-dipendente la caratteristica de¬ μΜ) was able to prevent the characteristic de¬ in a dose-dependent manner
polarizzazione indotta dal Ringer basso K<+ >ed insulina ripristinando il low Ringer-induced bias K <+> and insulin restoring the
potenziale di membrana delle fibre muscolari, come evidenziato nella se¬ membrane potential of muscle fibers, as highlighted in section 6
guente Tabella 7. following Table 7.
Tabella 7 Effetti della somministrazione acuta di (6-[l-Piperidinillpirimidin -2,4-diamina 3-ossido) -solfato sui potenziali di membrana delle fibre di muscolo vasto laterale di pazienti affetti da Table 7 Effects of acute administration of (6- [1-Piperidinylpyrimidin -2,4-diamine 3-oxide) -sulfate on the membrane potentials of vastus lateralis muscle fibers of patients with
paralisi periodi i l i paralysis periods i l i
I valori sono la media+ errore standard di 2 esperimenti indipendenti. * Valori significativamente differenti rispetto a quelli controllo (p<0.001 o meno). Values are the mean + standard error of 2 independent experiments. * Values significantly different from the controls (p <0.001 or less).
Nessun effetto significativo del (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-dia- No significant effect of (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-dia-
min 3-ossido)-solfato è stato osservato sui potenziali di membrana delle min 3-oxide) -sulfate was observed on the membrane potentials of
fibre di muscolo vasto laterale dei soggetti sani. vastus lateral muscle fibers of healthy subjects.
Esempio 7 Example 7
Prova n” 7: Allo scopo di valutare gli effetti del (6-[1-Piperidinil]piri- Test n "7: In order to evaluate the effects of (6- [1-Piperidinyl] pyri-
midin-2,4-diamina 3-ossido)-solfato sulle correnti al K<+ >ATP dipendenti e midin-2,4-diamine 3-oxide) -sulfate on ATP-dependent K <+> currents e
sui singoli canali al K<+ >ATP dipendenti delle fibre muscolari dei pazienti on the individual K <+> ATP dependent channels of the patients' muscle fibers
HOPP, singole cellula sono state ottenute dalle biopsie muscolari per dissociazione enzimatica del muscolo vasto laterale con la soluzione Krebs arricchita in collagenasi tipo XI-S per 30 min. a 30°C in un bagno Dubnoff a 0 rpm in atmosfera di 95% O2 e 5% CO2. Correnti macroscopiche fluenti da macropipette {area di pipetta=5.01+0) e correnti di singolo canale fluenti da micropipette {area di pipetta=l.1+0.4) venivano così registrate mediante la tecnica standard del patch clamp in frazioni di membrana isolate dalle fibre scheletriche. Le registrazioni macroscopiche e microscopiche sono state effettuate come su riportato (vedi prova n°3). Come già osservato nei ratti ipocalemici, le frazioni di membrana isolate dalle fibre muscolari di ambedue i pazienti di 18 e 40 anni mostravano una corrente macroscopica al K<+ >fortemente ridotta rispetto a quella registrata nei soggetti sani legata alla caduta della componente ATP dipendente come risulta dalle Fig. 4 A, B in cui sono riportate le registrazioni di correnti macroscopiche al K<+ >ATP dipendenti di pazienti ipocalemici. Le registrazioni sono state effettuate, in frazioni isolate di membrana, a -60 mV (Vm), a 20°C, in presenza di 150 mM di KCl da entrambi i lati della membrana. L'applicazione di ATP sul lato citosolico dei canali riduce le correnti al K indicando che queste sono sostenute da canali al K ATP dipendenti. Il (6-[l-piperidinil]piriraidin-2,4-diamina 3-ossido), applicato sul lato citosolico dei canali, indice una stimolazione delle correnti. Un'ulteriore evidenza è mostrata nelle Fig. 5 A, B in cui sono riportate le registrazioni di correnti macroscopiche al K<+ >ATP dipendenti di soggetti sani. Le registrazioni sono state effettuate, in frazioni isolate di membrana, a -60 mV (Vra), a 20°C, in presenza di 150 mM di KCl da entrambi i lati della membrana. L'applicazione di ATP sul lato citosolico dei canali riduca le correnti al K<+ >indicando che queste sono sostenute da canali al K<+ >ATP dipendenti. Il (6-[1-piperidinil]pirimidin-2,4-diaraina 3-ossido), applicato sul.lato citosolico dei canali, induce una stimolazione delle correnti . HOPP, single cells were obtained from muscle biopsies by enzymatic dissociation of the vastus lateralis muscle with Krebs solution enriched in collagenase type XI-S for 30 min. at 30 ° C in a Dubnoff bath at 0 rpm in an atmosphere of 95% O2 and 5% CO2. Macroscopic currents flowing from macropipettes {pipette area = 5.01 + 0) and single-channel currents flowing from micropipettes {pipette area = 1.1 + 0.4) were thus recorded by the standard patch clamp technique in membrane fractions isolated from the fibers skeletal. Macroscopic and microscopic recordings were carried out as reported above (see test n ° 3). As already observed in hypokalemic rats, the membrane fractions isolated from the muscle fibers of both patients aged 18 and 40 showed a strongly reduced macroscopic current at K <+> compared to that recorded in healthy subjects linked to the fall of the dependent ATP component such as results from Fig. 4 A, B which show the recordings of macroscopic currents at the K <+> ATP dependent of hypokalemic patients. The recordings were carried out, in isolated fractions of the membrane, at -60 mV (Vm), at 20 ° C, in the presence of 150 mM of KCl on both sides of the membrane. Application of ATP to the cytosolic side of the channels reduces the K currents indicating that these are supported by ATP dependent K channels. The (6- [1-piperidinyl] pyriraidin-2,4-diamine 3-oxide), applied on the cytosolic side of the channels, indicates a stimulation of the currents. Further evidence is shown in Fig. 5 A, B in which the recordings of macroscopic currents at the K <+> ATP dependent of healthy subjects are reported. The recordings were carried out, in isolated fractions of the membrane, at -60 mV (Vra), at 20 ° C, in the presence of 150 mM of KCl on both sides of the membrane. The application of ATP on the cytosolic side of the channels reduces the K <+> currents indicating that they are supported by ATP dependent K <+> channels. (6- [1-piperidinyl] pyrimidine-2,4-diaraine 3-oxide), applied to the cytosolic side of the channels, induces a stimulation of the currents.
Nei pazienti HOPP la corrente al K<+ >ATP dipendente era di -0.36+0.02 ρΑ/μπι2 (n° macropipette=8) e di 016+0.36 ρΑ/μm<2 >(n" macropipette=13) nel paziente maschio di 18 anni e nel paziente femmina di 40 anni, rispettivamente (Fig. 4 A, B). Mentre questa era di -9.03+0 pA/μm<2 >(n° macropipette=8) e di -9.1+0.9 pA/μmη<2 >(n° macropipette=l1) nel soggetto controllo di 18 anni e nel soggetto femmina di 50 anni, rispettivamente (Fig. 5 A, B). In queste fibre muscolari, l'analisi di singolo canale rilevava una anormale riduzione della Popen del canale al K<+ >ATP dipendente e del numero di canali funzionali, come riportato in Tabella 8. In HOPP patients the ATP dependent K <+> current was -0.36 + 0.02 ρΑ / μπι2 (n ° macropipettes = 8) and 016 + 0.36 ρΑ / μm <2> (n "macropipettes = 13) in the male patient of 18 years old and in the 40 year old female patient, respectively (Fig. 4 A, B). While this was -9.03 + 0 pA / μm <2> (n ° macropipettes = 8) and -9.1 + 0.9 pA / μmη <2> (n ° macropipettes = l1) in the 18-year-old control subject and in the 50-year-old female subject, respectively (Fig. 5 A, B). In these muscle fibers, single-channel analysis revealed an abnormal reduction in Popen of the channel at the dependent K <+> ATP and of the number of functional channels, as reported in Table 8.
Come già osservato negli esperimenti sui roditori, anche nell’uomo si osservavano almeno due livelli di conduttanza di singolo canale al K<+ >ATP dipendente, come evidenziato nella Fig. 6 in cui sono riportate le registrazioni in continuo di correnti di singolo canale al K<+ >ATP dipendente di un paziente ipocalemico di sesso maschile di 18 anni. Le registrazioni sono state effettuate, in frazioni isolate di membrana, a -60 mV (Vm), a 20°C, in presenza di 150 mM di KCl da entrambi i lati della membrana. Le aperture dei canali sono per convenzione dall'alto verso il basso. Almeno due livelli di conduttanza di differente ampiezza sono presenti nella traccia qui rappresentata. L'applicazione di ATP sul lato citosolico dei canali inibisce i canali al K<+ >indicando che questi sono canali ATP dipendenti. L'applicazione di (6-[1-piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido) induce una stimolazione della probabilità di apertura dei canali del paziente. Questi livelli erano dovuti a fluttuazioni dello stesso canale tra almeno due differenti stati di conduttanza. Al contrario, un solo livello di conduttanza si osservava nei soggetti sani come appare nella figura 7 in cui sono evidenziate tipiche registrazioni in continuo di correnti di singolo canale al K<+ >ATP dipendente di un soggetto sano di sesso maschile di 18 anni. Le registrazioni sono state effettuate, in frazioni isolate di membrana, a -60 mV (Vm), a 20°C, in presenza di 150 mM di KC1 da entrambi i lati della membrana. Le aperture dei canali sono per convenzione dall'alto verso il basso. Almeno tre livelli di conduttanza di uguale ampiezza sono presenti nella traccia qui rappresentata. L'applicazione di ATP sul lato citosolico dei canali inibisce i canali al K<+ >indicando che questi sono canali ATP dipendenti. L'applicazione di (6-[1-piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido) induce una stimolazione della probabilità di apertura dei canali del soggetto. As already observed in the experiments on rodents, at least two levels of single channel conductance at the K <+> ATP dependent were also observed in humans, as shown in Fig. 6 which shows the continuous recordings of single channel currents at the K <+> ATP dependent of an 18-year-old hypokalemic male patient. The recordings were carried out, in isolated fractions of the membrane, at -60 mV (Vm), at 20 ° C, in the presence of 150 mM of KCl on both sides of the membrane. The channel openings are conventionally from top to bottom. At least two levels of conductance of different amplitude are present in the trace represented here. Application of ATP to the cytosolic side of the channels inhibits the K <+> channels indicating that these are ATP dependent channels. The application of (6- [1-piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) induces a stimulation of the probability of opening the patient's channels. These levels were due to fluctuations of the same channel between at least two different conductance states. On the contrary, only one level of conductance was observed in healthy subjects as shown in Figure 7 which shows typical continuous recordings of single channel currents at the K <+> dependent ATP from a healthy 18-year-old male subject. The recordings were carried out, in isolated fractions of the membrane, at -60 mV (Vm), at 20 ° C, in the presence of 150 mM of KC1 on both sides of the membrane. The channel openings are conventionally from top to bottom. At least three levels of conductance of equal amplitude are present in the trace represented here. Application of ATP to the cytosolic side of the channels inhibits the K <+> channels indicating that these are ATP dependent channels. The application of (6- [1-piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) induces a stimulation of the probability of opening of the channels of the subject.
L’esposizione acuta delle membrane al (6—[1-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido)-solfato induceva una significativa stimolazione della corrente macroscopica al K<+ >ATP dipendente sia nei soggetti sani sia nei pazienti HOPP (Fig 4 A, B; 5 A, B). Questo effetto era più marcato nel paziente HOPP di 18 anni che in quello di 40 anni. A livello di singolo canale, dopo esposizione delle membrane al farmaco, si è osservato un aumento della probabilità di apertura dei canali ma non del numero di canali funzionali (Fig. 6; Tab. 8). Inoltre, in presenza del farmaco un solo livello di conduttanza è stato rilevato nei pazienti di ampiezza simile a quella dei soggetti sani (Tab. 8). Acute exposure of membranes to (6— [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -sulfate induced significant stimulation of the macroscopic current to the K <+> ATP dependent in both healthy subjects and HOPP patients (Fig 4 A, B; 5 A, B). This effect was more pronounced in the 18-year-old HOPP patient than in the 40-year-old. At the single channel level, after exposure of the membranes to the drug, an increase in the probability of channel opening was observed but not in the number of functional channels (Fig. 6; Tab. 8). Furthermore, in the presence of the drug only one level of conductance was detected in patients of similar amplitude to that of healthy subjects (Table 8).
Tabella 8 Effetti della somministrazione acuta di (6-[l-PiperidinUJpirimidin-2,4-diamina 3-ossido) -solfato sui parametri di singolo canale al IO ATP dipendente di Table 8 Effects of acute administration of (6- [l-PiperidinUJpirimidin-2,4-diamine 3-oxide) -sulfate on single channel parameters at the ATP dependent IO of
fibre di muscolo vasto laterale di pazienti HOPP e di soggetti sani vastus lateral muscle fibers from HOPP patients and healthy subjects
I valori sono la media+ errore standard. Da sinistra verso destra sono rappresentati y, conduttanza di singolo canale calcolata nell’ intervallo di potenziali di membrane tra -10 mV e -70 mV; N, numero di canali funzionale normalizzato sull’area delle pipette utilizzate, Popen, probabilità di apertura dei canali misurata a -60 mV come rapporto tra il tempo speso dai canali nello stato di apertura sul tempo totale di registrazione. Values are mean + standard error. From left to right are represented y, single channel conductance calculated in the membrane potential range between -10 mV and -70 mV; N, number of functional channels normalized on the area of the pipettes used, Popen, probability of channel opening measured at -60 mV as a ratio between the time spent by the channels in the open state on the total recording time.
Si à così verificato che il (6-[l-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido)-cloruro somministrato cronicamente per un periodo di 10 giorni a dosi di 18 μg kg<-1 >die<-1 >e 36 μg kg<-1 >die<-1 >è stato in grado di prevenire la caratteristica paralisi indotta da insulina nei ratti ipocalemici in maniera dose dipendente. Anche il trattamento acuto con il farmaco in studio ad una dose di 150 kg<-1 >die<-1 >è risultato efficace nel prevenire la paralisi da insulina nei medesimi animali. It was thus verified that (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) -chloride administered chronically for a period of 10 days at doses of 18 μg kg <-1> day <-1> and 36 μg kg <-1> day <-1> was able to prevent the characteristic insulin-induced paralysis in hypokalemic rats in a dose-dependent manner. Acute treatment with study drug at a dose of 150 kg <-1> day <-1> was also effective in preventing insulin paralysis in the same animals.
Sia il trattamento cronico sia quello acuto con (6-[1-Piperidinil]pirimidin-2 ,4-diamina 3-ossido) sono stati in grado di ripristinare i livelli di K<+ >ematico dei ratti ipocalemici senza indurre episodi di ipercalemia fatto questo di notevole rilievo nella pratica clinica. Both chronic and acute treatment with (6- [1-Piperidinyl] pyrimidine-2, 4-diamine 3-oxide) were able to restore blood K <+> levels of hypokalemic rats without inducing hyperkalaemia. this is of considerable importance in clinical practice.
In accordo con i risultati ottenuti in vivo, si è osservato che il farmaco è riuscito a ripolarizzare le fibre muscolari dei ratti ipocalemici. Questo effetto è stato osservato sia nelle biopsie dei ratti ipocalemici non paralizzati e che quindi hanno risposto al trattamento, sia dopo applicazione diretta in vitro del farmaco sui muscoli dei ratti ipocalemici placebo preincubati con insulina e Ringer basso K<+>. Parallelamente, dopo trattamento cronico con il farmaco in studio, anche i valori delle correnti macroscopiche e i parametri di singolo canale risultavano simili a quelli che si osservano nei ratti normocalemici placebo usati come controlli. L'applicazione diretta del farmaco sui patch di membrana pur in grado di ripristinare la probabilità di apertura e la conduttanza dei singoli canali, non era in grado però di ripristinare il numero di canali funzionali presenti nelle membrane. La efficacia del trattamento cronico è ulteriormente confermata dal fatto che negli animali paralizzati dall'insulina che quindi non hanno risposto al trattamento cronico si osservavano parametri in vitro simili a quelli dei ratti ipocaleraici placebo sia per quel che riguarda le misure macroscopiche che quelle microscopiche. In agreement with the results obtained in vivo, it was observed that the drug was able to repolarize the muscle fibers of hypokalemic rats. This effect was observed both in biopsies of hypokalemic rats that were not paralyzed and therefore responded to treatment, and after direct in vitro application of the drug on the muscles of hypokalemic placebo rats preincubated with insulin and low K <+> Ringer. At the same time, after chronic treatment with the study drug, the values of the macroscopic currents and the single channel parameters were also similar to those observed in the normokalemic placebo rats used as controls. The direct application of the drug on the membrane patches, although able to restore the probability of opening and the conductance of the single channels, was not able to restore the number of functional channels present in the membranes. The efficacy of chronic treatment is further confirmed by the fact that in animals paralyzed by insulin which therefore did not respond to chronic treatment, in vitro parameters similar to those of hypocaleraic placebo rats were observed both in terms of macroscopic and microscopic measurements.
Il trattamento cronico con (6-[1-Piperidinl]pirimidine-2,4-diamina 3-ossido) non ha prodotto alterazioni di massa a carico di organi vitali, come ad esempio il cuore. Anzi, sono stati osservati effetti benefici a carico dei polmoni e dei reni dei ratti ipocalemici. Infatti in questi animali normalmente si osserva un aumento di peso polmonare e renale che viene antagonizzato dal trattamento con (6-[l-Piperidinil]pirimidin-2,4-diamina 3-ossido). Inoltre, il trattamento cronico con (6-[1-Piperidinil]-pirimidina-2 ,4-diamina 3-ossido) ha prevenuto la caratteristica caduta di peso corporeo dei ratti ipocalemici. Chronic treatment with (6- [1-Piperidinl] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide) did not produce mass changes in vital organs, such as the heart. Indeed, beneficial effects were observed on the lungs and kidneys of hypokalemic rats. In fact, in these animals an increase in lung and renal weight is normally observed which is antagonized by treatment with (6- [1-Piperidinil] pyrimidine-2,4-diamine 3-oxide). Furthermore, chronic treatment with (6- [1-Piperidinyl] -pyrimidine-2, 4-diamine 3-oxide) prevented the characteristic body weight loss of hypokalemic rats.
Esempio 8 Example 8
Esperimenti sui pazienti HOPP. Experiments on HOPP patients.
In accordo con i risultati ottenuti sui roditori, l’applicazione acuta in vitro del (6-[1-Piperidinil]primidin-2,4-diamina 3-ossido)-solfato sulle fibre muscolari di pazienti HOPP ha ripolarizzato in maniera dosedipendente le fibre preincubate con insulina e Ringer basso K<+>. Questa osservazione è consistente con il fatto che il farmaco era in grado di stimolare le correnti macroscopiche sostenute da canali al K<+ >ATP dipendenti delle fibre muscolari di questi pazienti. Come già osservato nei ratti, l'applicazione in vitro del farmaco sui singoli canali era in grado di ripristinare la probabilità di apertura e la conduttanza, ma non il numero di canali funzionali presenti nelle membrane. Questo indica che in questi pazienti HOPP, già portatori di una mutazione R528H a carico del recettore diidropiridinico, il numero di canali funzionali al K<+ >ATP dipendente è irreversibilmente ridotto. Questa osservazione riveste un certo interessa considerando che a tutt'oggi nonostante sia noto che la paralisi periodica ipocalemica familiare sia legata a mutazioni del recettore diidropiridinico, non vi sono correlazioni tra queste mutazioni e la depolarizzazione della membrana della fibra muscolare scheletrica, la paralisi causata da insulina nei pazienti e l’ipocalemia. Invece, una alterazione dei canali al K ATP dipendenti del muscolo scheletrico sembra meglio giustificare molti dei sintomi che si osservano nei pazienti e nei ratti ipocalemici. Un farmaco come il (6-[l-Piperidinil]primidin-2,4-diamina 3-ossido) che è in grado di stimolare selettivamente questi canali che sono alterati in questo tipo di patologie risulta quindi di particolare utilità terapeutica. In accordance with the results obtained in rodents, the acute in vitro application of (6- [1-Piperidinyl] primidin-2,4-diamine 3-oxide) -sulfate on the muscle fibers of HOPP patients has dose-dependent repolarized fibers preincubate with insulin and low Ringer's K <+>. This observation is consistent with the fact that the drug was able to stimulate the macroscopic currents sustained by ATP dependent K <+> channels of the muscle fibers of these patients. As already observed in rats, the in vitro application of the drug on individual channels was able to restore the probability of opening and conductance, but not the number of functional channels present in the membranes. This indicates that in these HOPP patients, already carriers of an R528H mutation in the dihydropyridine receptor, the number of channels functional to the ATP dependent K <+> is irreversibly reduced. This observation is of some interest considering that to date, although it is known that the familial hypokalemic periodic paralysis is linked to mutations of the dihydropyridine receptor, there are no correlations between these mutations and the depolarization of the skeletal muscle fiber membrane, the paralysis caused by insulin in patients and hypokalaemia. On the other hand, an alteration of the ATP-dependent K-channels of skeletal muscle seems to better justify many of the symptoms seen in hypokalemic patients and rats. A drug such as (6- [1-Piperidinil] primidin-2,4-diamine 3-oxide) which is able to selectively stimulate these channels which are altered in this type of pathology is therefore of particular therapeutic utility.
Claims (7)
Priority Applications (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ITMI980086 IT1298155B1 (en) | 1998-01-19 | 1998-01-19 | PYRIDID 3-OXIDE COMPOUNDS FOR THE TREATMENT OF MUSCLE-SKELETAL PATHOLOGIES, IN PARTICULAR FOR THE TREATMENT OF |
| EP99904793A EP1049473A1 (en) | 1998-01-19 | 1999-01-18 | Pyrimidin 3-oxide compounds suitable for the treatment of pathologies of the skeletal muscle, in particular for the treatment of the hypokalemic paralysis |
| PCT/EP1999/000269 WO1999036072A1 (en) | 1998-01-19 | 1999-01-18 | Pyrimidin 3-oxide compounds suitable for the treatment of pathologies of the skeletal muscle, in particular for the treatment of the hypokalemic paralysis |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| ITMI980086 IT1298155B1 (en) | 1998-01-19 | 1998-01-19 | PYRIDID 3-OXIDE COMPOUNDS FOR THE TREATMENT OF MUSCLE-SKELETAL PATHOLOGIES, IN PARTICULAR FOR THE TREATMENT OF |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| ITMI980086A1 true ITMI980086A1 (en) | 1999-07-19 |
| IT1298155B1 IT1298155B1 (en) | 1999-12-20 |
Family
ID=11378623
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| ITMI980086 IT1298155B1 (en) | 1998-01-19 | 1998-01-19 | PYRIDID 3-OXIDE COMPOUNDS FOR THE TREATMENT OF MUSCLE-SKELETAL PATHOLOGIES, IN PARTICULAR FOR THE TREATMENT OF |
Country Status (3)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP1049473A1 (en) |
| IT (1) | IT1298155B1 (en) |
| WO (1) | WO1999036072A1 (en) |
Families Citing this family (17)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE60112955D1 (en) * | 2001-12-28 | 2005-09-29 | Sandra Cosci | Cyclodextrin complexes with potassium ion homeostasis regulators |
| AR059898A1 (en) | 2006-03-15 | 2008-05-07 | Janssen Pharmaceutica Nv | DERIVATIVES OF 3-CIANO-PIRIDONA 1,4-DISUSTITUTED AND ITS USE AS ALLOSTERIC MODULATORS OF MGLUR2 RECEIVERS |
| TW200845978A (en) | 2007-03-07 | 2008-12-01 | Janssen Pharmaceutica Nv | 3-cyano-4-(4-tetrahydropyran-phenyl)-pyridin-2-one derivatives |
| TW200900065A (en) | 2007-03-07 | 2009-01-01 | Janssen Pharmaceutica Nv | 3-cyano-4-(4-pyridinyloxy-phenyl)-pyridin-2-one derivatives |
| CN101801951B (en) | 2007-09-14 | 2013-11-13 | 杨森制药有限公司 | 1',3'-disubstituted-4-phenyl-3,4,5,6-tetrahydro-2h, 1'h-[1, 4'] bipyridinyl-2'-ones |
| RU2510396C2 (en) | 2008-09-02 | 2014-03-27 | Янссен Фармасьютикалз, Инк. | 3-azabicyclo[3,1,0]hexyl derivatives as modulators of metabotropic glutamate receptors |
| AU2009319387B2 (en) | 2008-11-28 | 2012-05-10 | Addex Pharma S.A. | Indole and benzoxazine derivatives as modulators of metabotropic glutamate receptors |
| RS53075B (en) | 2009-05-12 | 2014-04-30 | Janssen Pharmaceuticals Inc. | 1,2,4-triazolo[4,3-a]pyridine derivatives and their use for the treatment or prevention of neurological and psychiatric disorders |
| MY153913A (en) | 2009-05-12 | 2015-04-15 | Janssen Pharmaceuticals Inc | 7-aryl-1,2,4-triazolo[4,3-a]pyridine derivatives and their use as positive allosteric modulators of mglur2 receptors |
| JP5707390B2 (en) | 2009-05-12 | 2015-04-30 | ジャンセン ファーマシューティカルズ， インコーポレイテッド | 1,2,4-Triazolo [4,3-a] pyridine derivatives and their use as positive allosteric modulators of the mGluR2 receptor |
| EP2643320B1 (en) | 2010-11-08 | 2015-03-04 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | 1,2,4-TRIAZOLO[4,3-a]PYRIDINE DERIVATIVES AND THEIR USE AS POSITIVE ALLOSTERIC MODULATORS OF MGLUR2 RECEPTORS |
| EP2649069B1 (en) | 2010-11-08 | 2015-08-26 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | 1,2,4-TRIAZOLO[4,3-a]PYRIDINE DERIVATIVES AND THEIR USE AS POSITIVE ALLOSTERIC MODULATORS OF MGLUR2 RECEPTORS |
| EP2661435B1 (en) | 2010-11-08 | 2015-08-19 | Janssen Pharmaceuticals, Inc. | 1,2,4-TRIAZOLO[4,3-a]PYRIDINE DERIVATIVES AND THEIR USE AS POSITIVE ALLOSTERIC MODULATORS OF MGLUR2 RECEPTORS |
| JO3368B1 (en) | 2013-06-04 | 2019-03-13 | Janssen Pharmaceutica Nv | 6,7-DIHYDROPYRAZOLO[1,5-a]PYRAZIN-4(5H)-ONE COMPOUNDS AND THEIR USE AS NEGATIVE ALLOSTERIC MODULATORS OF MGLUR2 RECEPTORS |
| JO3367B1 (en) | 2013-09-06 | 2019-03-13 | Janssen Pharmaceutica Nv | 1,2,4-TRIAZOLO[4,3-a]PYRIDINE COMPOUNDS AND THEIR USE AS POSITIVE ALLOSTERIC MODULATORS OF MGLUR2 RECEPTORS |
| DK3431106T3 (en) | 2014-01-21 | 2021-03-15 | Janssen Pharmaceutica Nv | COMBINATIONS INCLUDING POSITIVE ALLOSTERIC MODULATORS OR ORTHOSTERIC AGONISTS OF METABOTROP GLUTAMATERG SUBTYPE 2 RECEPTOR AND USE OF THESE |
| ES2860298T3 (en) | 2014-01-21 | 2021-10-04 | Janssen Pharmaceutica Nv | Combinations comprising positive allosteric modulators of metabotropic glutamatergic receptor subtype 2 and their use |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ZA918999B (en) * | 1990-12-05 | 1992-08-26 | Squibb & Sons Inc | Method of treating shock using a potassium channel activator |
-
1998
- 1998-01-19 IT ITMI980086 patent/IT1298155B1/en active IP Right Grant
-
1999
- 1999-01-18 EP EP99904793A patent/EP1049473A1/en not_active Withdrawn
- 1999-01-18 WO PCT/EP1999/000269 patent/WO1999036072A1/en not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP1049473A1 (en) | 2000-11-08 |
| WO1999036072A1 (en) | 1999-07-22 |
| IT1298155B1 (en) | 1999-12-20 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| ITMI980086A1 (en) | PYRIMIDIN 3-OXIDE COMPOUNDS FOR THE TREATMENT OF MUSCLE-SKELETAL PATHOLOGIES IN PARTICULAR FOR THE TREATMENT OF | |
| EP0411668B1 (en) | Central cholecystokinin antagonists for treatment of psychiatric disorders | |
| Gardner et al. | GR205171: a novel antagonist with high affinity for the tachykinin NK1 receptor, and potent broad-spectrum anti-emetic activity | |
| KR20180064373A (en) | Diaryl and aryl heteroaryl urea derivatives as modulators of 5-HT2A serotonin receptors useful for the prevention and treatment of hallucinations associated with neurodegenerative diseases | |
| DE69912808T2 (en) | Use of hymenialdisine and its derivatives for the preparation of therapeutic agents | |
| JP5566482B2 (en) | PTEN inhibitor or Maxi-K channel opener | |
| EP2606890A1 (en) | Combinations comprising BCR-ABL/C-KIT/PDGF-R TK inhibitors for treating cancer | |
| BRPI0709750A2 (en) | combinations of therapeutic agents for cancer treatment | |
| KR20180022792A (en) | Diaryl and aryl heteroaryl urea derivatives useful for the prevention and treatment of sleep-disordered sleep disorders | |
| US9192610B2 (en) | Use of quinazoline derivatives for neurodegenerative diseases | |
| US20020045566A1 (en) | Selective maxi-K potassium channel openers functional under conditions of high intracellular calcium concentration, methods and uses thereof | |
| BR112019020798A2 (en) | methods and compositions for treating age-related damage using ccr3 inhibitors | |
| JPH04226917A (en) | Prophylactic and therapeutic drug for nerve atrophy in advance | |
| EP3394083B9 (en) | N-[5-[(3,4-dimethoxyphenyl)methyl]-1,3,4-thiadiazol-2-yl]-2-methoxy-benzeneacetamide derivatives and related compounds as cftr activators for treating constipation or cholestasis | |
| BR112021006578A2 (en) | aurora kinase inhibitor for use in the treatment of neuroblastoma | |
| EP1707202A1 (en) | Organic compounds | |
| Hedner et al. | A double-blind, randomized trial of sabeluzole—a putative glutamate antagonist—in obstructive sleep apnea | |
| US10512637B2 (en) | Use of inhibitor of cystine-glutamate transporter | |
| BRPI0710291A2 (en) | therapeutic agent combinations for cancer treatment | |
| ES2935705T3 (en) | A ligand of the GABA A receptor | |
| Reiriz et al. | Dopaminergic function in rat brain after oral administration of calcium-channel blockers or haloperidol. A microdialysis study | |
| ES2199541T3 (en) | APPLICATION OF 2-AMINO-6-TRIFLUOROMETOXI-BENZOTIAZOL FOR THE PREVENTION OR TREATMENT OF BRAIN DYSFUNCTIONS. | |
| US20220143014A1 (en) | Selective Agonist Of Alpha6 Containing nAChRs | |
| CN101489562B (en) | Jak inhibitors for treatment of myeloproliferative disorders | |
| WO2023107428A1 (en) | Methods for treating traumatic brain injury |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| 0001 | Granted |