IT202000018949A1 - Estratto derivato da bucce di punica granatum per la prevenzione e il trattamento di infezioni virali - Google Patents
Estratto derivato da bucce di punica granatum per la prevenzione e il trattamento di infezioni virali Download PDFInfo
- Publication number
- IT202000018949A1 IT202000018949A1 IT102020000018949A IT202000018949A IT202000018949A1 IT 202000018949 A1 IT202000018949 A1 IT 202000018949A1 IT 102020000018949 A IT102020000018949 A IT 102020000018949A IT 202000018949 A IT202000018949 A IT 202000018949A IT 202000018949 A1 IT202000018949 A1 IT 202000018949A1
- Authority
- IT
- Italy
- Prior art keywords
- extract
- pomegranate
- virus
- peel
- composition
- Prior art date
Links
- 239000000284 extract Substances 0.000 title claims description 58
- 235000014360 Punica granatum Nutrition 0.000 title claims description 56
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 title claims description 15
- 244000294611 Punica granatum Species 0.000 title claims description 14
- 230000002265 prevention Effects 0.000 title claims description 12
- 241000219991 Lythraceae Species 0.000 claims description 43
- 241000700605 Viruses Species 0.000 claims description 33
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 33
- 241000711573 Coronaviridae Species 0.000 claims description 23
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 22
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 16
- 241001678559 COVID-19 virus Species 0.000 claims description 15
- 239000002537 cosmetic Substances 0.000 claims description 15
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 14
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 12
- 238000009472 formulation Methods 0.000 claims description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 12
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 12
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 9
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 239000002904 solvent Substances 0.000 claims description 8
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 5
- 239000006071 cream Substances 0.000 claims description 5
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 claims description 5
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 5
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 claims description 4
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 claims description 4
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 claims description 4
- 239000006210 lotion Substances 0.000 claims description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 4
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 4
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 claims description 3
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims description 3
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 3
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 claims description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 150000002576 ketones Chemical class 0.000 claims description 3
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 claims description 3
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 230000000699 topical effect Effects 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 2
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims description 2
- 102000053723 Angiotensin-converting enzyme 2 Human genes 0.000 description 30
- 108090000975 Angiotensin-converting enzyme 2 Proteins 0.000 description 30
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 27
- 229940109529 pomegranate extract Drugs 0.000 description 24
- MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N Testostosterone Chemical compound O=C1CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CCC2=C1 MUMGGOZAMZWBJJ-DYKIIFRCSA-N 0.000 description 16
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 14
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 11
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 11
- 101710198474 Spike protein Proteins 0.000 description 9
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 9
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 9
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 8
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 8
- 101000638154 Homo sapiens Transmembrane protease serine 2 Proteins 0.000 description 8
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- 229960003604 testosterone Drugs 0.000 description 8
- 229940096437 Protein S Drugs 0.000 description 7
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 239000002417 nutraceutical Substances 0.000 description 7
- 235000021436 nutraceutical agent Nutrition 0.000 description 7
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 6
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 17-β-hydroxy-5-α-Androstan-3-one Chemical compound C1C(=O)CC[C@]2(C)[C@H]3CC[C@](C)([C@H](CC4)O)[C@@H]4[C@@H]3CC[C@H]21 NVKAWKQGWWIWPM-ABEVXSGRSA-N 0.000 description 5
- 101710167605 Spike glycoprotein Proteins 0.000 description 5
- 102100031989 Transmembrane protease serine 2 Human genes 0.000 description 5
- 230000006870 function Effects 0.000 description 5
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960003473 androstanolone Drugs 0.000 description 4
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 4
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 4
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 4
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 238000000265 homogenisation Methods 0.000 description 4
- 239000000399 hydroalcoholic extract Substances 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 4
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 3
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 3
- 108010066551 Cholestenone 5 alpha-Reductase Proteins 0.000 description 3
- 101710114810 Glycoprotein Proteins 0.000 description 3
- 241000315672 SARS coronavirus Species 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 3
- 239000003098 androgen Substances 0.000 description 3
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 3
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 3
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 3
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 3
- 241000894007 species Species 0.000 description 3
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- 102000040650 (ribonucleotides)n+m Human genes 0.000 description 2
- 102100030988 Angiotensin-converting enzyme Human genes 0.000 description 2
- 208000025721 COVID-19 Diseases 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 2
- 244000270834 Myristica fragrans Species 0.000 description 2
- 235000009421 Myristica fragrans Nutrition 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 2
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 2
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 2
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 2
- 201000003176 Severe Acute Respiratory Syndrome Diseases 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 2
- 240000001085 Trapa natans Species 0.000 description 2
- 235000014364 Trapa natans Nutrition 0.000 description 2
- 244000042312 Wisteria floribunda Species 0.000 description 2
- 235000010724 Wisteria floribunda Nutrition 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000000919 ceramic Substances 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000013078 crystal Substances 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- DBEPLOCGEIEOCV-WSBQPABSSA-N finasteride Chemical compound N([C@@H]1CC2)C(=O)C=C[C@]1(C)[C@@H]1[C@@H]2[C@@H]2CC[C@H](C(=O)NC(C)(C)C)[C@@]2(C)CC1 DBEPLOCGEIEOCV-WSBQPABSSA-N 0.000 description 2
- 229960004039 finasteride Drugs 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N gallic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C1 LNTHITQWFMADLM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 2
- 206010022000 influenza Diseases 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N insulin Chemical compound N1C(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(NC(=O)CN)C(C)CC)CSSCC(C(NC(CO)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CCC(N)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(CC=2C=CC(O)=CC=2)C(=O)NC(CSSCC(NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2C=CC(O)=CC=2)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(C(C)C)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(CC=2NC=NC=2)NC(=O)C(CO)NC(=O)CNC2=O)C(=O)NCC(=O)NC(CCC(O)=O)C(=O)NC(CCCNC(N)=N)C(=O)NCC(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC=CC=3)C(=O)NC(CC=3C=CC(O)=CC=3)C(=O)NC(C(C)O)C(=O)N3C(CCC3)C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C)C(O)=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(O)=O)=O)NC(=O)C(C(C)CC)NC(=O)C(CO)NC(=O)C(C(C)O)NC(=O)C1CSSCC2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(N)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(N)CC=1C=CC=CC=1)C(C)C)CC1=CN=CN1 NOESYZHRGYRDHS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000001768 microscale thermophoresis Methods 0.000 description 2
- VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N n'-amino-n-iminomethanimidamide Chemical compound N\N=C\N=N VMGAPWLDMVPYIA-HIDZBRGKSA-N 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 2
- 150000008442 polyphenolic compounds Chemical class 0.000 description 2
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 description 2
- 230000003449 preventive effect Effects 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 239000001575 punica granatum l. bark extract Substances 0.000 description 2
- BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N renifolin D Natural products CC(=C)[C@@H]1Cc2c(O)c(O)ccc2[C@H]1CC(=O)c3ccc(O)cc3O BOLDJAUMGUJJKM-LSDHHAIUSA-N 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 239000003826 tablet Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000004448 titration Methods 0.000 description 2
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 2
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 2
- JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 2-[4-(2-hydroxyethyl)piperazin-1-yl]ethanesulfonic acid Chemical compound OCC[NH+]1CCN(CCS([O-])(=O)=O)CC1 JKMHFZQWWAIEOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide Chemical compound [Br-].S1C(C)=C(C)N=C1[N+]1=NC(C=2C=CC=CC=2)=NN1C1=CC=CC=C1 AZKSAVLVSZKNRD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 241000008904 Betacoronavirus Species 0.000 description 1
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 1
- 241000288673 Chiroptera Species 0.000 description 1
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 1
- 244000077995 Coix lacryma jobi Species 0.000 description 1
- 235000007354 Coix lacryma jobi Nutrition 0.000 description 1
- 208000001528 Coronaviridae Infections Diseases 0.000 description 1
- 244000163122 Curcuma domestica Species 0.000 description 1
- 102000004163 DNA-directed RNA polymerases Human genes 0.000 description 1
- 108090000626 DNA-directed RNA polymerases Proteins 0.000 description 1
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 241001115402 Ebolavirus Species 0.000 description 1
- AFSDNFLWKVMVRB-UHFFFAOYSA-N Ellagic acid Chemical compound OC1=C(O)C(OC2=O)=C3C4=C2C=C(O)C(O)=C4OC(=O)C3=C1 AFSDNFLWKVMVRB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ATJXMQHAMYVHRX-CPCISQLKSA-N Ellagic acid Natural products OC1=C(O)[C@H]2OC(=O)c3cc(O)c(O)c4OC(=O)C(=C1)[C@H]2c34 ATJXMQHAMYVHRX-CPCISQLKSA-N 0.000 description 1
- 229920002079 Ellagic acid Polymers 0.000 description 1
- 241001149422 Ganoderma applanatum Species 0.000 description 1
- 240000008397 Ganoderma lucidum Species 0.000 description 1
- 235000001637 Ganoderma lucidum Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 1
- 241000893570 Hendra henipavirus Species 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 101000929928 Homo sapiens Angiotensin-converting enzyme 2 Proteins 0.000 description 1
- 108090000144 Human Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003839 Human Proteins Human genes 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 241000701074 Human alphaherpesvirus 2 Species 0.000 description 1
- 241000701085 Human alphaherpesvirus 3 Species 0.000 description 1
- 238000012404 In vitro experiment Methods 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 102000004877 Insulin Human genes 0.000 description 1
- 108090001061 Insulin Proteins 0.000 description 1
- 241000331120 Krameria cistoidea Species 0.000 description 1
- 241000331121 Krameria lappacea Species 0.000 description 1
- 241000218922 Magnoliophyta Species 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 102000018697 Membrane Proteins Human genes 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241001292005 Nidovirales Species 0.000 description 1
- 241000526636 Nipah henipavirus Species 0.000 description 1
- 206010067482 No adverse event Diseases 0.000 description 1
- 108090001074 Nucleocapsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 1
- 231100000124 OECD 439 In Vitro Skin Irritation Toxicity 0.000 description 1
- 235000003283 Pachira macrocarpa Nutrition 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 1
- 241001083505 Punica Species 0.000 description 1
- 229920000241 Punicalagin Polymers 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000018569 Respiratory Tract disease Diseases 0.000 description 1
- 241000710799 Rubella virus Species 0.000 description 1
- 229940126247 SARS-CoV-2 inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 208000037847 SARS-CoV-2-infection Diseases 0.000 description 1
- 241001678561 Sarbecovirus Species 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000008910 Severe acute respiratory syndrome-related coronavirus Species 0.000 description 1
- 102000004338 Transferrin Human genes 0.000 description 1
- 108090000901 Transferrin Proteins 0.000 description 1
- 239000013504 Triton X-100 Substances 0.000 description 1
- 229920004890 Triton X-100 Polymers 0.000 description 1
- 244000078534 Vaccinium myrtillus Species 0.000 description 1
- 235000017537 Vaccinium myrtillus Nutrition 0.000 description 1
- 208000025259 Viral Zoonoses Diseases 0.000 description 1
- 108050008392 Viral spike glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 244000273928 Zingiber officinale Species 0.000 description 1
- 235000006886 Zingiber officinale Nutrition 0.000 description 1
- 101150054399 ace2 gene Proteins 0.000 description 1
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 229940030486 androgens Drugs 0.000 description 1
- 230000000844 anti-bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 229940121357 antivirals Drugs 0.000 description 1
- 208000011775 arteriosclerosis disease Diseases 0.000 description 1
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N beta-N-Acetyl-D-neuraminic acid Natural products CC(=O)NC1C(O)CC(O)(C(O)=O)OC1C(O)C(O)CO SQVRNKJHWKZAKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000004166 bioassay Methods 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 229940055416 blueberry extract Drugs 0.000 description 1
- 235000019216 blueberry extract Nutrition 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011148 calcium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 238000000423 cell based assay Methods 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 230000001684 chronic effect Effects 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 210000004351 coronary vessel Anatomy 0.000 description 1
- 239000008341 cosmetic lotion Substances 0.000 description 1
- 235000003373 curcuma longa Nutrition 0.000 description 1
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 1
- 210000000805 cytoplasm Anatomy 0.000 description 1
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 1
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- -1 drinks Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 229940000406 drug candidate Drugs 0.000 description 1
- 241001493065 dsRNA viruses Species 0.000 description 1
- 235000020694 echinacea extract Nutrition 0.000 description 1
- 235000004132 ellagic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960002852 ellagic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000003038 endothelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000007824 enzymatic assay Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000010429 evolutionary process Effects 0.000 description 1
- 239000012632 extractable Substances 0.000 description 1
- 238000013467 fragmentation Methods 0.000 description 1
- 238000006062 fragmentation reaction Methods 0.000 description 1
- 235000004515 gallic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940074391 gallic acid Drugs 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000008397 ginger Nutrition 0.000 description 1
- 229940002508 ginger extract Drugs 0.000 description 1
- 235000020708 ginger extract Nutrition 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 210000000442 hair follicle cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 235000008216 herbs Nutrition 0.000 description 1
- 102000048657 human ACE2 Human genes 0.000 description 1
- 230000000055 hyoplipidemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003308 immunostimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 231100000058 in vitro skin irritation / corrosion testing Toxicity 0.000 description 1
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 229940125396 insulin Drugs 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 210000005265 lung cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 150000002669 lysines Chemical class 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- FAARLWTXUUQFSN-UHFFFAOYSA-N methylellagic acid Natural products O1C(=O)C2=CC(O)=C(O)C3=C2C2=C1C(OC)=C(O)C=C2C(=O)O3 FAARLWTXUUQFSN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000116 mitigating effect Effects 0.000 description 1
- 230000002438 mitochondrial effect Effects 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000009456 molecular mechanism Effects 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 239000007922 nasal spray Substances 0.000 description 1
- 201000009240 nasopharyngitis Diseases 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 210000001331 nose Anatomy 0.000 description 1
- 239000001702 nutmeg Substances 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 210000003800 pharynx Anatomy 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 229940124606 potential therapeutic agent Drugs 0.000 description 1
- 230000037452 priming Effects 0.000 description 1
- 230000005180 public health Effects 0.000 description 1
- ZJVUMAFASBFUBG-OGJBWQGYSA-N punicalagin Chemical compound C([C@H]1O[C@@H]([C@@H]2OC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)O[C@H]2[C@@H]1OC(=O)C1=CC(O)=C(O)C(O)=C11)O)OC(=O)C2=CC(O)=C(O)C(O)=C2C2=C(O)C(O)=C(OC3=O)C4=C2C(=O)OC2=C4C3=C1C(O)=C2O ZJVUMAFASBFUBG-OGJBWQGYSA-N 0.000 description 1
- LMIBIMUSUFYFJN-RSVYENFWSA-N punicalagin Natural products O[C@@H]1O[C@@H]2COC(=O)c3cc(O)c(O)c(O)c3c4c(O)cc5OC(=O)c6c(c(O)c(O)c7OC(=O)c4c5c67)c8c(O)c(O)c(O)cc8C(=O)O[C@H]2[C@@H]9OC(=O)c%10cc(O)c(O)c(O)c%10c%11c(O)c(O)c(O)cc%11C(=O)O[C@@H]19 LMIBIMUSUFYFJN-RSVYENFWSA-N 0.000 description 1
- ZRKSVMFLACVUIU-UHFFFAOYSA-N punicalagin isomer Natural products OC1=C(O)C(=C2C3=4)OC(=O)C=4C4=C(O)C(O)=C3OC(=O)C2=C1C1=C(O)C(O)=C(O)C=C1C(=O)OC1C2OC(=O)C3=CC(O)=C(O)C(O)=C3C3=C(O)C(O)=C(O)C=C3C(=O)OC2C(O)OC1COC(=O)C1=CC4=C(O)C(O)=C1O ZRKSVMFLACVUIU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 239000011535 reaction buffer Substances 0.000 description 1
- 108091006082 receptor inhibitors Proteins 0.000 description 1
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 208000023504 respiratory system disease Diseases 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 235000009165 saligot Nutrition 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 239000003001 serine protease inhibitor Substances 0.000 description 1
- SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N sialic acid Chemical compound CC(=O)N[C@@H]1[C@@H](O)C[C@@](O)(C(O)=O)OC1[C@H](O)[C@H](O)CO SQVRNKJHWKZAKO-OQPLDHBCSA-N 0.000 description 1
- 238000007390 skin biopsy Methods 0.000 description 1
- 210000000329 smooth muscle myocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000003381 solubilizing effect Effects 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000012089 stop solution Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 150000003536 tetrazoles Chemical group 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001541 thymus gland Anatomy 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000000954 titration curve Methods 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 239000012581 transferrin Substances 0.000 description 1
- 230000010415 tropism Effects 0.000 description 1
- 229940052016 turmeric extract Drugs 0.000 description 1
- 235000020240 turmeric extract Nutrition 0.000 description 1
- 239000008513 turmeric extract Substances 0.000 description 1
- 208000001072 type 2 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 1
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 description 1
- 241000712461 unidentified influenza virus Species 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 239000001841 zingiber officinale Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
- A23L33/00—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
- A23L33/10—Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
- A23L33/105—Plant extracts, their artificial duplicates or their derivatives
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K8/00—Cosmetics or similar toiletry preparations
- A61K8/18—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition
- A61K8/96—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution
- A61K8/97—Cosmetics or similar toiletry preparations characterised by the composition containing materials, or derivatives thereof of undetermined constitution from algae, fungi, lichens or plants; from derivatives thereof
- A61K8/9783—Angiosperms [Magnoliophyta]
- A61K8/9789—Magnoliopsida [dicotyledons]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61Q—SPECIFIC USE OF COSMETICS OR SIMILAR TOILETRY PREPARATIONS
- A61Q19/00—Preparations for care of the skin
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Botany (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Mycology (AREA)
- Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Virology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Alternative & Traditional Medicine (AREA)
- Medical Informatics (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Birds (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Oncology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
DESCRIZIONE
Campo dell?invenzione
La presente invenzione si riferisce, in termini generali, all?uso in campo farmaceutico, nutraceutico e cosmetico, di un estratto derivato da bucce di melagrana, al procedimento per la produzione di tale estratto e alle relative composizioni e formulazioni farmaceutiche, nutraceutiche e cosmetiche che lo comprendono per l?uso nei diversi campi applicativi sopracitati.
Arte Nota
? noto che l?evoluzione, cio? il processo che porta al cambiamento di tutte le forme di vita e che permette loro di adattarsi all?ambiente, ? la conseguenza delle modificazioni genotipiche che avvengono negli organismi e si mostra con evidenza tanto maggiore quanto inferiore ? la complessit? genomica dell?organismo considerato. Per questo motivo, i virus, dato il ridotto numero di geni posseduti, hanno nella rapida evoluzione il principale fattore di successo che permette loro di adattarsi e sopravvivere.
In particolare, i virus a RNA mostrano un?estrema variabilit? che consente loro di evolvere ad una velocit? decisamente maggiore rispetto a quelli a DNA.
Le modificazioni che insorgono nel genoma virale durante il processo evolutivo possono determinare l?acquisizione di caratteristiche tali da consentire il cosiddetto ?salto di specie?, che determina una modificazione del tropismo cellulare del virus, rendendo vulnerabile una specie che precedentemente si mostrava resistente all?infezione.
La nuova variante virale cos? originata potr? avere le caratteristiche di un patogeno emergente, cio? si diffonder? in modo epidemico nella nuova popolazione (spesso priva di copertura immunitaria) causando manifestazioni cliniche potenzialmente diverse.
? noto che l?insorgenza di nuove zoonosi virali rappresenta la principale minaccia per la salute pubblica e sono eventi che negli ultimi decenni si sono ripetuti con una certa frequenza, si considerino ad esempio il virus della SARS, il virus Ebola, i virus influenzali, il virus Hendra ed il virus Nipah.
In particolare, i Coronavirus mostrano una notevole propensione nel trasmettersi a nuovi ospiti e questa propensione ? emersa in pi? occasioni nella storia evolutiva di questa famiglia virale; recentemente, si ? diffusa una nuova sindrome respiratoria acuta grave dovuta ad infezione da ?-coronavirus chiamata SARS-CoV-2 (o 2019-nCoV), originatasi probabilmente dai pipistrelli, che ha provocato un'epidemia (chiamata COVID-19).
I coronavirus (CoV), appartenenti all?ordine Nidovirales e alla famiglia Coronaviridae, sono un gruppo di virus dotati di genoma lineare a singolo filamento non segmentato di RNA a polarit? positiva (ssRNA+) e provvisti di una membrana e di rivestimento esterno (?envelope?); inoltre, possiedono un core a simmetria elicoidale ed una caratteristica morfologia a corona.
Il genoma dei coronavirus ? il pi? grande genoma virale a RNA non-segmentato conosciuto (circa 30 kbp) ed ? suddiviso in un numero variabile da 6 a 9 di ?open reading frame? (ORF). Gli ORF codificano un complesso di proteine non strutturali a funzione RNA polimerasica (Pol-1a,b) e quattro principali proteine strutturali: glicoproteina S (spike, S), proteine di membrana (M), proteine del rivestimento (envelope, E) e proteine del nucleocapside (N).
La glicoproteina S media il legame e la fusione del virus con la proteina di membrana della cellula ospite ed ? il principale determinante antigenico: ? composta da due porzioni, una estremit? N-terminale (S1) che svolge una funzione di legame alla proteina umana, ed una estremit? C-terminale (S2) che svolge le funzioni di fusione ed entrata tra virus e cellula.
Il dominio di legame della glicoproteina S (definito RBD) ? un tratto di circa 200 aminoacidi, posto all?estremit? S1; ha la funzione di legarsi specificamente al recettore enzimatico ACE2 (?angiotensin converting enzyme 2?) localizzato sulla superficie della cellula ospite e rappresenta il principale epitopo immunostimolante e neutralizzante della glicoproteina S.
In particolare, il recettore ACE2 dell?uomo, espresso in particolare sulla superficie delle cellule polmonari e quelle del tratto gastrointestinale, ? stato identificato come il sito di ingresso del virus SARS-CoV-2.
? altres? noto che il recettore ACE2 ? pressoch? ubiquitario: ? stato individuato anche sulla mucosa orale e nasale, nel naso, faringe, linfonodi, timo, midollo osseo, milza, fegato, reni e cervello, vasi, cuore (particolarmente, endotelio dei vasi coronarici e cellule muscolari lisce della parete vasale).
Inoltre, ? stata recentemente riscontrata la presenza del recettore ACE 2 anche sulla pelle umana, identificando nella pelle una altra potenziale via di infezione.
Per effettuare l?ingresso nella cellula ospite, oltre al legame con il recettore ACE2, il virus ha bisogno di un innesco (priming) o la scissione della glicoproteina spike, consentendo la fusione della membrana del virus a quella della cellula umana.
In particolare, SARS-CoV-2 utilizza la proteasi umana transmembrana (TMPRSS2) per separare la sequenza S1 da S2 della glicoproteina Spike; la porzione S2 della proteina, una volta esposta, aggancia la membrana cellulare dell'ospite dando inizio al meccanismo molecolare di ingresso del virus.
Ad oggi, non sono disponibili dei vaccini contro questo virus e ci sono poche evidenze a supporto dell'efficacia di potenziali agenti terapeutici. Inoltre, presumibilmente, la popolazione non possiede alcuna immunit? pregressa contro questo recente coronavirus, quindi tutti i soggetti sono considerati suscettibili.
Dato l?impatto dell?infezione a livello globale e sulla capacit? di risposta dei Sistemi Sanitari, si cercano misure efficaci di prevenzione e controllo delle infezioni determinate dal virus SARS-CoV-2.
? noto che esistono diversi farmaci candidati che possono inibire l'infezione e replicazione di SARS-CoV-2, tra cui inibitori della serina-proteasi TMPRSS2 ed inibitori del recettore ACE2, che sono in grado di impedire l'ingresso di SARS-CoV-2 nelle cellule.
? altres? noto che le piante e le erbe medicinali offrono strumenti preventivi e terapeutici contro le infezioni virali. La loro comprovata sicurezza, legata al loro uso fin dall'antichit?, e il basso costo rispetto alle droghe sintetiche rendono i prodotti derivati dalle piante e i loro preparati promettenti strumenti contro molti focolai infettivi virali: questi composti naturali possono essere un'importante medicina complementare nella lotta contro i virus.
Il melograno (Punica granatum) ? una pianta angiosperme dicotiledone appartenente alla famiglia delle Punicaceae e al genere Punica.
Il frutto del melograno, melagrana o granata, ? una bacca di forma rotonda avente un esocarpo (noto anche come epicarpo) che costituisce lo strato esterno della parete della melagrana, duro, coriaceo e di colore giallo ? rosso; un mesocarpo spugnoso di colore giallo chiaro, che costituisce la parte mediana della parete della melagrana, interposta tra epicarpo ed endocarpo; ed un endocarpo sottile e membranoso che protegge e circonda i loculi nei quali si trovano gli arili e i semi.
La melagrana viene consumata da secoli e, negli ultimi decenni, ha dimostrato di possedere un?azione preventiva e attenuativa contro numerose patologie croniche e malattie genetiche quali cancro, diabete di tipo 2, arteriosclerosi e malattie cardiovascolari.
Infatti, nella letteratura scientifica ? stato riportato che gli estratti di melagrana possiedono notevoli attivit? antibatteriche, ipolipidemiche e antinfiammatorie grazie al contenuto di composti polifenolici, tra cui punicalagina, acido gallico, acido ellagico e suoi derivati glicolisati.
La domanda internazionale di brevetto WO2012049045A1 descrive una formulazione che contiene estratto di mirtillo (Vaccinium myrtillus), estratto di melograno (Punica granatum), estratto di Echinacea ed opzionalmente estratto di ratania (Krameria triandra), per il trattamento di affezioni del tratto respiratorio dovute specificatamente al virus influenzale. Non viene descritto alcun trattamento di affezioni respiratorie dovute a virus appartenenti al genere coronavirus.
La domanda di brevetto US2003021857A1 descrive una composizione contenente un estratto da glicine giapponese (Wisteria floribunda), noce moscata (Myristica fragrans), melograno (Punica granatum), castagna d?acqua (Trapa bispinosa), Coix lachryma-jobi, Elfvingia applanata e fungo Ganoderma lucidum. Tale estratto viene preparato miscelando le specie vegetali suddette, mettendo a contatto tale miscela con acqua bollente (80-100?C) e seccando l?estratto cos? ottenuto fino ad ottenere la relativa polvere. L?estratto di US2003021857A1 presenta un?attivit? antivirale specifica nei confronti degli herpes virus (ad esempio herpes simplex virus di tipo 1 e tipo 2, virus varicella-zoster e simili), rubella virus, virus dell?epatite B e simili. Non viene descritto alcun trattamento di infezioni virali dovute a virus appartenenti al genere coronavirus.
La domanda di brevetto internazionale WO2016198943A1 descrive una combinazione di estratto di curcuma (Curcuma longa), estratto di melograno (Punica granatum) ed estratto di zenzero (Zingiber officinale) per il trattamento di comuni raffreddori o influenze.
Il problema tecnico oggettivo alla base della presente invenzione ? quello di mettere a disposizione un estratto di melagrana da impiegarsi vantaggiosamente nel trattamento di infezioni virali, in particolare infezioni virali da coronavirus, e che sia sostanzialmente privo degli svantaggi degli estratti di melograno dell?arte nota.
Sommario
In un aspetto della presente invenzione, il suddetto problema tecnico ? stato risolto mettendo a disposizione un estratto derivato da buccia di melagrana (Punica granatum) per l?uso nella prevenzione e nel trattamento di un?infezione virale causata da un virus appartenente alla famiglia Coronaviridae.
Con il termine ?buccia di melagrana?, come qui utilizzata, si fa riferimento alla parte della melagrana costituta da esocarpo, mesocarpo ed opzionalmente endocarpo della melagrana; la buccia della melagrana secondo la presente definizione non comprende gli arilli e i semi del frutto.
Preferibilmente, il virus appartenente alla famiglia Coronaviridae ? il virus SARS-CoV-2.
Con il termine ?SARS-CoV-2?, come qui utilizzato, si fa riferimento al ?Coronavirus 2 da sindrome respiratoria acuta grave?, abbreviato in SARS-CoV-2, (noto anche come 2019-nCoV e 201-nCoV-ARD) ed ? un ceppo virale della specie ?SARS-related coronavirus/SARS-CoV?, appartenente al genere Betacoronavirus della famiglia dei Coronavirus (Coronaviridae), sottogenere Sarbecovirus.
Preferibilmente, la melagrana appartiene alla variet? Dente di Cavallo DC2.
Preferibilmente, l?estratto ? ottenuto per estrazione di buccia di melagrana essiccata con una soluzione idroalcolica.
In un altro suo aspetto, la presente invenzione riguarda anche un uso cosmetico di un estratto derivato da buccia di melagrana (Punica granatum) preferibilmente appartenente alla variet? Dente di Cavallo DC2.
In un altro aspetto, l?invenzione riguarda anche un procedimento per la preparazione di un estratto derivato da buccia di melagrana (Punica granatum), preferibilmente appartenente alla variet? Dente di Cavallo DC2, comprendente le fasi di:
a) sgranare una melagrana allontanando i semi e gli arilli ivi contenuti, ottenendo la buccia di melagrana comprendente esocarpo e mesocarpo della melagrana;
b) essiccare la buccia di melagrana ottenuta nella fase a); c) omogeneizzare la buccia di melagrana essiccata in una soluzione idroalcolica, ottenendo un omogenato; d) separare la parte solida dalla parte liquida dell?omogenato ottenuto nella fase c);
e) portare a secco la parte liquida ottenuta nella fase d), ottenendo detto estratto.
Preferibilmente, la parte liquida in detta fase e) ? portata a secco mediante evaporazione o liofilizzazione.
Preferibilmente, la soluzione idroalcolica ? una soluzione di etanolo in acqua ad una concentrazione di etanolo pari a 1%-99%, pi? preferibilmente 10%-98%.
Preferibilmente, la soluzione idroalcolica ? ad una temperatura compresa tra 1?C e 10?.
Vantaggiosamente, la soluzione idroalcolica entro questo intervallo di temperatura evita il raggiungimento di temperature elevate durante la fase di omogeneizzazione che potrebbero parzialmente degradare alcune delle molecole di interesse con conseguente perdita di attivit? antivirale.
Preferibilmente, il rapporto tra il volume di detta soluzione idroalcolica e il peso di detta buccia essiccata di melagrana della fase b) ? compreso tra 7:1 e 3:1, pi? preferibilmente ? 5:1.
La presente invenzione riguarda anche una composizione comprendente un estratto derivato da buccia di melagrana (Punica granatum) ottenuto secondo il procedimento sopra descritto ed almeno un solvente idrofilo selezionato tra acqua e soluzioni acquose saline, oppure almeno un solvente organico selezionato dal gruppo comprendente oli, alcoli, glicerolo, acidi organici, ammidi, ammine, aldeidi e chetoni, detto estratto essendo compreso in una percentuale da 0,0001% a 10%, preferibilmente da 0,001% a 0,01%, in peso sul peso totale della composizione.
In un ulteriore suo aspetto, la presente invenzione si riferisce ad una composizione come sopra definita per l?uso nella prevenzione e nel trattamento di un?infezione virale causata da un virus appartenente alla famiglia Coronaviridae, preferibilmente SARS-CoV-2.
La presente invenzione concerne ulteriormente una formulazione farmaceutica comprendente un estratto o una composizione come sopra definiti e un veicolo farmaceuticamente accettabile, per l?uso nella prevenzione e nel trattamento di un?infezione virale causata da un virus appartenente alla famiglia Coronaviridae, preferibilmente SARS-CoV-2.
Inoltre, la presente invenzione riguarda una formulazione cosmetica comprendente un estratto o una composizione come sopra definiti, e un veicolo cosmeticamente accettabile.
Preferibilmente, la formulazione cosmetica ? in forma di gel, crema o lozione.
Infine, la presente invenzione riguarda una formulazione di integratore alimentare comprendente un estratto o una composizione come sopra definiti, e un veicolo accettabile dal punto di vista nutraceutico.
Preferibilmente, la formulazione farmaceutica e/o di integratore alimentare pu? essere in una forma adatta per l?assunzione orale scelta tra compresse, capsule, bevande, sospensioni, polveri.
Preferibilmente, la suddetta formulazione farmaceutica pu? essere in forma di soluzione salina sterile adatta per l?assunzione per inalazione o per via oftalmica, oppure in forma adatta per l?applicazione topica, pi? preferibilmente in forma di gel, crema o lozione.
Vantaggiosamente, la Richiedente ha individuato un estratto di bucce di melagrana, in particolare un estratto idro-alcolico, in grado di bloccare il primo passaggio dell'infezione virale da coronavirus, impedendo l?interazione tra la glicoproteina virale S (Spike) e il recettore enzimatico ACE2 esposto sulla superficie della cellule umane, nonch? riducendo indirettamente l?attivit? della TMPRSS2, necessaria per l?ingresso del virus nella cellula ospite.
L?estratto della presente invenzione ? quindi capace di inibire l?ingresso del virus, agendo esternamente nelle mucose orali, orifizi e sulla pelle.
Vantaggiosamente il presente estratto impedisce quindi la replicazione e la propagazione virale nelle cellule ospiti, risultando quindi efficace nella prevenzione dell?infezione.
Nelle applicazioni cosmetiche della presente invenzione, tale estratto fornisce vantaggiosamente il suddetto effetto antivirale ai cosmetici in cui esso ? compreso, ad esempio rossetti, fondotinta e trucchi.
L?espressione ?prevenzione? dell?infezione, come qui utilizzata, indica il blocco delle primissime fasi di ingresso del virus nella cellula: qualora il virus riuscisse a legare un sito diverso da ACE2, come quello recentemente identificato dell?acido sialico, l?estratto ? in grado di contrastare anche l?innesco della proteina virale attraverso la capacit? di ridurre indirettamente l?espressione della proteasi TMPRSS2 che opera il taglio necessario all?attivazione ed all?ingresso del virus, risultando pi? efficace rispetto ad altri estratti e molecole che sono in grado di agire su un solo meccanismo.
Breve descrizione delle figure
La Figura 1 mostra un grafico a barre che riporta i risultati del saggio di citotossicit? (MTT), evidenziando come l?estratto idro-alcolico di melagrana secondo l?invenzione non abbia un effetto tossico sulle cellule dei follicoli dei capelli (HFDPC), sulle cellule renali (HK2) e su sezioni di espianti cutanei, a concentrazioni uguali o inferiori allo 0,1 mg/ml.
Sull?asse delle ordinate, ? riportato il numero di cellule vitali espresso in valore percentuale rispetto al controllo (uguale a 100%).
La Figura 2 mostra un grafico a barre che rappresenta l'effetto dell'estratto di melagrana dell?invenzione sull?inibizione del legame tra ACE2 e la glicoproteina S (Spike) (dominio RBD); i valori riportati nel grafico sono espressi come percentuali rispetto al controllo in cui le due proteine interagiscono senza inibizioni (stabilito arbitrariamente come 100%)
La Figura 3 mostra un grafico a barre che rappresenta l'effetto dell'estratto di melagrana dell?invenzione sull?attivit? della 5?-reduttasi indotta dal testosterone nelle cellule della papilla dermica; i valori riportati nel grafico sono espressi come percentuali rispetto alle cellule stimolate con il testosterone, stabilito arbitrariamente come 100%.
La Figura 4 mostra la curva di legame tra la proteina ACE2 e l?estratto di melagrana della presente invenzione e la curva di legame tra la proteina Spike e l?estratto di melagrana della presente invenzione; i valori riportati sull?asse delle ascisse rappresentano concentrazioni crescenti dell?estratto di melagrana, mentre i valori sull?asse delle ordinate rappresentano la quantit? di proteina (ACE2 o Spike) legata all?estratto.
Descrizione dettagliata
La Richiedente ha trovato di particolare interesse per il campo farmaceutico, nutraceutico e cosmetico un estratto idro-alcolico di Punica granatum (melograno) che ? risultato attivo nel trattamento e nella prevenzione di infezioni virali, in particolare infezioni virali da coronavirus.
Nello specifico, ? stato rilevato che l?estratto della presente invenzione ? in grado di inibire il legame del dominio RDB della glicoproteina virale S (Spike) al recettore enzimatico umano ACE 2 e di inibire l?attivit? dell?enzima 5?-reduttasi umana, inattivando indirettamente la proteasi TMPRSS2 necessaria per l?ingresso del virus nella cellula.
In particolare, tale estratto ? sorprendentemente in grado di legare sia la glicoproteina virale Spike che il recettore enzimatico ACE2, inibendo quindi la loro interazione.
In particolare, l?affinit? di legame dell?estratto melagrana della presente invenzione per la proteina virale Spike risulta essere maggiore rispetto all?affinit? per l?enzima ACE2: a parit? di concentrazione dell?estratto di melagrana la quantit? di proteina Spike legata risulta essere 10 volte maggiore rispetto ad ACE2.
Inoltre, tale estratto ? capace di ridurre anche l?attivit? dell?enzima 5?-reduttasi umana, un enzima responsabile della conversione del testosterone in diidrotestosterone (DHT), ormone androgenico che controlla lo sviluppo e il mantenimento delle caratteristiche maschili.
Il DHT, legandosi ai suoi recettori, riduce l?espressione di TMPRSS2 (la proteasi necessaria ad innescare l?ingresso del virus) in tessuti prostatici e non, compreso il polmone: infatti, la somministrazione di androgeni induce l?espressione di TMPRSS2 nelle cellule epiteliali polmonari umane, mentre la privazione di androgeni ne riduce la trascrizione.
L?estratto della presente invenzione ha quindi mostrato vantaggiosamente un duplice effetto: non solo inibisce il legame del virus al suo sito specifico sulla cellula umana ma, riducendo l?attivit? della 5? -reduttasi, e quindi la produzione di DHT, riduce l?espressione della proteasi TMPRSS2, indispensabile per il taglio delle proteine virali e per l?ingresso del virus nella cellula ospite.
Secondo la presente invenzione, l?estratto idroalcolico qui descritto ? in grado, quindi, di bloccare l?ingresso del virus nelle cellule umane a due livelli, quello dell?interazione con il suo sito specifico di attacco alle cellule umane e quello dell?innesco necessario al suo ingresso.
Vantaggiosamente, l?estratto dell?invenzione, ottenuto mediante il processo estrattivo descritto qui di seguito, contiene composti polifenolici in grado di regolare importanti funzioni antivirali, in particolare contro il coronavirus.
Le bucce di melagrana, ottenute mediante un processo di sgranatura nel quale sono allontanati gli arilli e i semi contenuti nel frutto, sono sottoposte ad una fase di essiccazione al calore, esponendole al sole per una settimana ad una temperatura compresa tra i 20-25?.
Successivamente, le bucce essiccate sono sottoposte a rottura meccanica tramite omogeneizzazione in una soluzione idroalcolica, preferibilmente idro-etanolica, cos? da ottenere un omogenato.
Con il termine ?omogeneizzazione? si intende un trattamento di frammentazione del materiale vegetale, che avviene in un contenitore idoneo quale mortaio di ceramica ed un pestello anch?esso di ceramica, precedentemente raffreddati, o per volumi maggiori si possono utilizzare recipienti pi? grandi anche metallici dove il materiale pu? essere omogeneizzato con lame metalliche, utilizzando sia frullatori da laboratorio e quelli industriali, che presse.
L?omogenato viene quindi separato in una parte liquida e un residuo solido mediante centrifugazione e/o filtrazione dell?omogenato. Nella forma di realizzazione in cui detta separazione avviene per centrifugazione, la parte liquida ? rappresentata dal surnatante del centrifugato ottenuto.
In seguito, dalla parte liquida vengono eliminati i solventi (etanolo e acqua) mediante roto-evaporazione e/o liofilizzazione, camera di essiccazione o essiccatore spray (spray dryer).
Formano oggetto dell?invenzione composizioni farmaceutiche e nutraceutiche comprendenti l?estratto della presente invenzione ed eventualmente veicoli, solventi, eccipienti e/o adiuvanti accettabili. Tali composizioni possono essere in forma di preparazioni orali quali compresse, capsule, sospensione, polveri e spray nasali.
Formano altres? oggetto dell?invenzione composizioni cosmetiche comprendenti l?estratto della presente invenzione ed eventualmente veicoli, solventi, eccipienti e/o adiuvanti cosmeticamente accettabili. Tali composizioni possono essere in forma di gel, creme, lozioni cosmetiche per l?applicazione cutanea.
Preferibilmente, il solvente ? un solvente idrofilo, preferibilmente scelto tra acqua e soluzioni acquose saline, oppure uno o pi? solventi organici compatibili con le formulazioni farmaceutiche e cosmetiche, pi? preferibilmente scelto tra alcoli, glicerolo, acidi organici, ammidi, ammine, aldeidi o chetoni, o una combinazione di uno o pi? tipi di solvente, se miscibili fra loro.
La presente invenzione si riferisce altres? all?uso cosmetico della composizione succitata e all?uso farmaceutico e nutraceutico della stessa per la prevenzione e il trattamento di un?infezione virale da coronavirus.
Queste composizioni rappresentano la materia prima che viene aggiunta ai formulati per la fabbricazione dei prodotti cosmetici, dermatologici, farmaceutici o nutraceutici pronti per le applicazioni.
A titolo esemplificativo e non limitativo della presente invenzione, si riportano di seguito alcuni esempi relativi alla preparazione dell?estratto delle bucce di melagrana. Inoltre, si riporta un esempio di preparazione di un estratto secondo la presente invenzione, ed esperimenti che dimostrano l?attivit? biologica di tale estratto nei diversi campi applicati sopra citati.
ESEMPI ESEMPIO 1
L?estratto della presente invenzione ? stato ottenuto da bucce essiccate di melagrane (costituite da esocarpi e mesocarpi del frutto) appartenenti alla variet? Dente di Cavallo DC2 e coltivate in Italia.
Preparazione dell?estratto idroalcolico
150 grammi di bucce essiccate di melagrana sono stati risospesi in 0,7 L di una soluzione 70/30 (v/v) di etanolo/acqua a 4?C, sottoposte ad omogeneizzazione in un frullatore meccanico per 3 minuti a 1500 rpm e successivamente per 2 min a 3000 rpm.
Una volta ottenuta una sospensione omogenea, il campione ? stato lasciato in un becker in agitazione per 2 ore a temperatura ambiente e al riparo dalla luce, prima di essere centrifugato a 6300 rpm per 10 minuti a 4?C. Il surnatante ? stato poi filtrato per rimuovere ulteriori residui. Dopo la filtrazione l'estratto ? stato concentrato attraverso un processo di evaporazione a bassa pressione con l?ausilio di un evaporatore rotante (IKA RV8). La soluzione concentrata ? stata titolata con NaOH 10 N fino ad ottenere un valore finale di pH pari a 7.0. L'estratto ? stato poi congelato prima di essere liofilizzato.
Per eseguire i saggi biologici, l?estratto in polvere cos? ottenuto ? stato diluito in acqua ad una concentrazione variabile tra il 10 % e lo 0,1 %.
L?estratto ? stato testato su cellule umane (cellule della papilla dermica, HFDPC e cellule renali, HK2) per stabilirne le dosi di utilizzo e la citotossicit?.
Gli estratti sono poi stati utilizzati in saggi cellulari differenti per valutare le loro propriet? antivirali in saggi in vitro e su cellule umane.
ESEMPIO 2 ? Saggio di citotossicit?
Allo scopo di determinare le concentrazioni degli estratti da utilizzare per i successivi saggi, ? stato condotto un saggio di citotossicit? per determinare l?intervallo di concentrazioni in cui l?estratto della presente invenzione risultasse non dannoso alle cellule in fase di crescita.
Questo saggio si basa sull'uso del composto MTT [3-(4,5-dimetiltiazolil)-2,5-difeniltetrazolio-bromuro], descritto per la prima volta da Mosmann nel 1983. Esso ? basato sulla capacit? dell'enzima deidrogenasi mitocondriale delle cellule vitali di idrolizzare l'anello tetrazolico del MTT (di colore giallo chiaro) e formare cristalli di formazano (di colore blu scuro). Tali cristalli sono impermeabili alle membrane cellulari e si accumulano nel citoplasma delle cellule metabolicamente attive. Il numero di cellule vive e sane ? cos? direttamente proporzionale alla quantit? di formazano prodotto.
Cellule HFDPC e HK2, in numero iniziale di 8 x 10<3>, sono state fatte crescere in piastra da 96 pozzetti rispettivamente nel mezzo di crescita Follicle Dermal Papilla Cell Growth Medium e nel mezzo di coltura DMEM (Dulbecco's Modified Eagle Medium) (Lonza), supplementato con il 5 % di siero bovino fetale (FBS) ed ?insulin transferrin selenium? (ITS) 1X, per circa 16 ore. Dopo il trattamento con concentrazioni crescenti degli estratti comprese tra 0,01 % e 0,001 % (0.1 mg/ml e 0.01 mg/ml) per circa 48 ore, le cellule sono state lavate in PBS ed incubate con 100 ?l/pozzetto di ?tampone di reazione? contenente: 10 mM di Hepes, 1,3 di mM CaCl2, 1 mM MgSO4, 5 mM di glucosio e 0,5 mg/ml di substrato colorimetrico MTT in tampone PBS a pH 7,4. Dopo 3 ore di incubazione a 37?C e con 5 % di CO2, ad ogni pozzetto sono stati aggiunti 100 ?l di soluzione solubilizzante contenente 10% di Triton X-100 e 0,1 N di HCl in isopropanolo assoluto. Dopo 16 ore, la reazione colorimetrica ? stata misurata a 595 nm con il lettore di piastre Victor3.
Per l?analisi sugli espianti di pelle, sono stati prelevati dei dischetti dalle biopsie cutanee e sono stati trattati secondo un protocollo basato sulle linee guida della OECD 439 (Test N<o>. 439: In Vitro Skin Irritation: Reconstructed Human Epidermis Test Method). I dischetti di biopsie da 8 mm sono stati mantenuti per 24 ore in transwell da 12 pozzetti in condizioni di crescita all?interfaccia aria-mezzo. L?estratto di melagrana ? stato aggiunto a concentrazioni crescenti comprese tra 0,01 % e 0,001 % (0.1 mg/ml e 0.01 mg/ml) in glicerolo mediante applicazione topica direttamente sull?epidermide esposta all?aria e lasciato per 30 minuti a temperatura ambiente. I dischetti sono stati lavati con PBS e poi lasciati in piastre da 24 pozzetti completamente immersi in mezzo di crescita addizionato con 10% FBS per 40 ore in incubatore a 37?C con 5% CO2.
Al termine dell?incubazione, i dischetti sono stati lavati in PBS, asciugati, pesati e incubati in 500 ?l di PBS contenente 0.5mg/ml di MTT per 3 ore. Per solubilizzare l?MTT sono stati aggiunti 500 ?l di isopropanolo assoluto. 100 ?l sono stati usati per misurare l?assorbanza a 595 nm utilizzando il lettore multipiastra Victor (PerkinElmer) e il valore ottenuto rapportato al peso di ciascun dischetto.
Come mostrato in Figura 1, gli estratti risultano non avere alcun effetto tossico sulle cellule e sugli espianti a concentrazioni uguali o inferiori allo 0,1 mg/ml (0,01%).
ESEMPIO 3 - Analisi del legame tra SPIKE S (RBD) e ACE2. Allo scopo di analizzare se l?estratto idro-etanolico di melograno secondo la presente invenzione potesse inibire il legame tra la glicoproteina SPIKE del virus SARS-COV2 e il recettore enzimatico umano ACE2, sono stati condotti esperimenti in vitro basati sull?utilizzo del Kit ?SARS-CoV2 inhibitor screening? fornito da Adipogen.
100 ?l per pozzetto di una soluzione di SPIKE in PBS alla concentrazione 1?g/ml sono stati caricati su una piastra a 96 pozzetti e lasciati incubare per una notte a 4?C, in modo da consentire il legame della proteina SPIKE alla piastra. Il giorno dopo la soluzione ? stata eliminata, e aggiunta una soluzione di saturazione in modo da saturare i legami aspecifici della piastra, che ? stata lasciata incubare per 2 ore a temperatura ambiente. Al termine dell?incubazione, la soluzione ? stata eliminata e la piastra lavata con un tampone di lavaggio per tre volte.
Ad ogni pozzetto sono stati aggiunti 100?l di una soluzione in tampone di ELISA contenente o solo ACE2 0,5 ?g/ml oppure ACE2 0,5?g/ml addizionato con concentrazioni crescenti da 0,04 mg/ml a 1mg/ml di estratto di melagrana oppure ACE2 pi? uno anticorpo monoclonale specifico per ACE2 (AC384), usato come controllo di inibizione del legame ACE2 e SPIKE. In particolare, il recettore ACE2 utilizzato in questo saggio ? coniugato con biotina. Dopo aver effettuato un?incubazione di 1 ora a 37?C, la piastra ? stata lavata per tre volte con il tampone di lavaggio e sono stati aggiunti 100 ?l di una soluzione in tampone di ELISA contenente perossidasi di rafano (?horseradish peroxidase?, HRP) coniugata con streptavidina, diluita 1:200. Dopo incubazione di 1 ora a temperatura ambiente, la piastra ? stata lavata e sono stati aggiunti 100 ?l di TMB, uno specifico substrato della perossidasi. Dopo 5 minuti di incubazione, sono stati aggiunti 50?l di una soluzione di stop in ogni pozzetto ed ? stato rivelato il colore sviluppato mediante lettura alla spettrofotometro a 450 nm (lettore di piastra Victor Nivo, Perkin Elmer).
I valori riportati nel grafico della figura 2 rappresentano le percentuali di glicoproteine Spike e ACE2 legate, riferite al controllo senza inibitori stabilito arbitrariamente come 100%. L? anticorpo monoclonale (AC384), usato come controllo positivo a 1 ?g/ml e che riconosce la porzione di ACE2 che lega Spike, ha inibito il legame tra le due proteine del 60%. L?estratto di melagrana secondo la presente invenzione ? stato usato a tre diversi dosi partendo da 0,04 mg/ml fino a 1mg/ml. Come si pu? vedere dalla figura 2, la presenza dell?estratto di melagrana riduce il legame tra Spike e ACE2 in maniera dose dipendente fino ad arrivare ad una riduzione del legame del 75%, maggiore del controllo positivo utilizzato.
ESEMPIO 4 - Studio della capacit? dell?estratto di melagrana di ridurre l?attivit? della 5alfa reduttasi in cellule della papilla dermica.
Per determinare se l?estratto idro-etanolico di melagrana secondo l?invenzione fosse in grado di ridurre l?attivit? della 5alfa reduttasi in cellule della papilla dermica indotte da testosterone sono stati condotti saggi enzimatici su cellule umane della papilla dermica.
Cellule del follicolo della papilla dermica (HFDPC) in numero iniziale di 8 x 10<3 >per pozzetto, sono state fatte crescere in piastre da 96 pozzetti in mezzo di coltura ?Follicle Dermal Papilla Cell Growth Medium? per 16 ore.
Le cellule sono state successivamente trattate con le tre diverse concentrazioni dell'estratto di melagrana (0,02mg/ml e 0,1mg/ml) in presenza di 600 nM di testosterone per 24 ore. Come controllo positivo ? stata usata la finasteride alla concentrazione 100nM. In un?altra piastra a 96 pozzetti sono stati caricati 100 ng di BSA coniugata al DHT per pozzetto e lasciati incubare per una notte a 4?C. Il giorno dopo la piastra ? stata lavata con PBS 1X 0.05% di Tween e poi incubata con una soluzione di saturazione contenente PBS 0,05% Tween 3% BSA per 1 h. Dopo lavaggi, su questa piastra sono stati caricati 50 ?l dei surnatanti delle cellule della papilla dermica dopo trattamento di 24 h con i composti in presenza di testosterone. A questi sono stati aggiunti 50 ?l di anticorpo anti-DHT coniugato alla biotina diluito 1:1000 in PBS 1X BSA 1% e lasciato incubare per 2 ore a temperatura ambiente. Dopo 3 lavaggi sono stati aggiunti 5?g/ml di perossidasi coniugata alla streptavidina e incubati per 1 ora a temperatura ambiente. Dopo 3 lavaggi, per sviluppare la reazione sono stati aggiunti 0,5mg/ml di OPD in buffer citrato 50mM e H2O20,012%. Il colore sviluppato ? stato quantificato misurando l?assorbanza a 490nm.
Come mostrato nella figura 3, il trattamento con 600 nM di testosterone stimola l?attivit? enzimatica della 5alfa reduttasi inducendo la produzione del DHT (valore considerato pari al 100% per convenienza). Le cellule trattate contemporaneamente con il testosterone e con l?estratto di melagrana secondo l?invenzione alle dosi di 0,02 mg/ml e 0,1 mg/ml presentano, invece, un?attivit? enzimatica ridotta rispettivamente del 70 e 85%; tale riduzione risulta simile a quella ottenuta con la finasteride usata come controllo positivo (riduzione di circa il 75%).
ESEMPIO 5 - Studio della capacit? dell?estratto di melagrana di legare le proteine ACE2 e SPIKE.
Allo scopo di verificare la capacit? dell?estratto di melagrana di legare la proteina virale Spike e/o l?enzima umano Ace2, sono stati condotti esperimenti di Termoforesi in microscala (MST). Sono state utilizzate le proteine ricombinanti fornite dalla : Spike S1+S2 ECD (aa 1-1296) e ACE2 (aa 1- 734).
Gli esperimenti sono stati condotti utilizzando uno strumento Monolith NT.115 . Le proteine Spike e ACE2 sono state marcate utilizzando un fluoroforo specifico per le ammine (Labeling Kit RED-tris-NTA- ), che interagisce specificamente con le lisine della proteina. La proteina ? stata diluita in ?labeling buffer? ad una concentrazione pari a 10 ?M. Il fluoroforo ? stato preparato ad una concentrazione di 30 ?M e successivamente aggiunto alla proteina in un rapporto molare 1:3. La reazione di marcatura ? stata condotta a temperatura ambiente per 1 ora al buio, successivamente il fluoroforo in eccesso ? stato allontanato mediante centrifugazione a 4 ?C per 10 min a 10000 rpm. La curva di titolazione ? stata ottenuta preparando 16 diluizioni seriali 1:2 dell?estratto a partire da 0,5% (5000 ?g/ml) per la titolazione della proteina ACE2 e 0,25% (2500 ?g/ml) per la titolazione della proteina Spike. Tutte le misure sono state condotte a 37 ?C in PBS a cui ? stato aggiunto 0,05% di Tween-20 utilizzando capillari standard e un power LED pari a 20%. Le curve di legame sono state ottenute utilizzando il software MO-S002 MO Affinity Analysis fornito dalla
Come mostrato nella figura 4, l?estratto di melagrana della presente invenzione lega entrambe le proteine in esame, ma l?affinit? di legame per la proteina Spike risulta essere maggiore di quella per ACE2: a parit? di concentrazione dell?estratto di melagrana la quantit? di proteina Spike legata risulta essere 10 volte maggiore rispetto ad ACE2.
Claims (17)
1. Estratto derivato da buccia di melagrana (Punica granatum) per l?uso nella prevenzione e nel trattamento di un?infezione virale causata da un virus appartenente alla famiglia Coronaviridae.
2. Estratto per l?uso secondo la rivendicazione 1, in cui detto virus appartenente alla famiglia Coronaviridae ? il virus SARS-CoV-2.
3. Estratto per l?uso secondo la rivendicazione 1 o 2, in cui detta melagrana appartiene alla variet? Dente di Cavallo DC2.
4. Estratto per l?uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 3, in cui detto estratto ? ottenuto per estrazione di buccia di melagrana essiccata con una soluzione idroalcolica.
5. Uso cosmetico di un estratto derivato da buccia di melagrana (Punica granatum) preferibilmente appartenente alla variet? Dente di Cavallo DC2.
6. Procedimento per la preparazione di un estratto derivato da buccia di melagrana (Punica granatum), preferibilmente appartenente alla variet? Dente di Cavallo DC2, comprendente le fasi di:
a) sgranare una melagrana allontanando i semi e gli arilli ivi contenuti, ottenendo la buccia di melagrana comprendente esocarpo e mesocarpo di detta melagrana;
b) essiccare detta buccia di melagrana ottenuta nella fase a); c) omogeneizzare detta buccia di melagrana essiccata in una soluzione idroalcolica, ottenendo un omogenato;
d) separare la parte solida dalla parte liquida di detto omogenato ottenuto nella fase c);
e) portare a secco detta parte liquida ottenuta nella fase d), ottenendo detto estratto.
7. Procedimento secondo la rivendicazione 6, in cui la parte liquida in detta fase e) ? portata a secco mediante evaporazione o liofilizzazione.
8. Procedimento secondo la rivendicazione 6 o 7, in cui detta soluzione idroalcolica ? una soluzione di etanolo in acqua ad una concentrazione di etanolo pari a 1%-99%, preferibilmente 10%-98%.
9. Procedimento secondo una qualunque delle rivendicazioni da 6 a 8, in cui detta soluzione idroalcolica ? ad una temperatura compresa tra 1?C e 10?.
10. Procedimento secondo una qualunque delle rivendicazioni da 6 a 9 in cui il rapporto tra il volume di detta soluzione idroalcolica e il peso di detta buccia essiccata di melagrana della fase b) ? compreso tra 7:1 e 3:1, preferibilmente ? 5:1.
11. Composizione comprendente un estratto derivato da buccia di melagrana (Punica granatum) ottenuto secondo il procedimento secondo una qualunque delle rivendicazioni da 6 a 10 ed almeno un solvente idrofilo selezionato tra acqua e soluzioni acquose saline, oppure almeno un solvente organico selezionato dal gruppo comprendente oli, alcoli, glicerolo, acidi organici, ammidi, ammine, aldeidi e chetoni, detto estratto essendo compreso in una percentuale da 0,0001% a 10%, preferibilmente da 0,001% a 0,01%, in peso sul peso totale di detta composizione.
12. Composizione secondo la rivendicazione 11 per l?uso nella prevenzione e nel trattamento di un?infezione virale causata da un virus appartenente alla famiglia Coronaviridae, preferibilmente SARS-CoV-2.
13. Formulazione farmaceutica comprendente un estratto per l?uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 4, o una composizione per l?uso secondo la rivendicazione 12 e un veicolo farmaceuticamente accettabile, per l?uso nella prevenzione e nel trattamento di un?infezione virale causata da un virus appartenente alla famiglia Coronaviridae, preferibilmente SARS-CoV-2.
14. Formulazione cosmetica comprendente un estratto secondo la rivendicazione 5, o una composizione secondo la rivendicazione 11, e un veicolo cosmeticamente accettabile, detta formulazione cosmetica essendo preferibilmente in forma di gel, crema o lozione.
15. Formulazione di integratore alimentare comprendente un estratto per l?uso secondo una qualsiasi delle rivendicazioni da 1 a 4, o una composizione per l?uso secondo la rivendicazione 12, e un veicolo accettabile dal punto di vista nutraceutico.
16. Formulazione farmaceutica secondo la rivendicazione 13 o formulazione di integratore alimentare secondo la rivendicazione 15 in una forma adatta per l?assunzione orale scelta tra compresse, capsule, bevande, sospensioni, polveri.
17. Formulazione farmaceutica secondo la rivendicazione 13, in forma di soluzione salina sterile adatta per l?assunzione per inalazione o per via oftalmica, oppure in forma adatta per l?applicazione topica, preferibilmente in forma di gel, crema o lozione.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT102020000018949A IT202000018949A1 (it) | 2020-08-03 | 2020-08-03 | Estratto derivato da bucce di punica granatum per la prevenzione e il trattamento di infezioni virali |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| IT102020000018949A IT202000018949A1 (it) | 2020-08-03 | 2020-08-03 | Estratto derivato da bucce di punica granatum per la prevenzione e il trattamento di infezioni virali |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| IT202000018949A1 true IT202000018949A1 (it) | 2022-02-03 |
Family
ID=73139133
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| IT102020000018949A IT202000018949A1 (it) | 2020-08-03 | 2020-08-03 | Estratto derivato da bucce di punica granatum per la prevenzione e il trattamento di infezioni virali |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| IT (1) | IT202000018949A1 (it) |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030021857A1 (en) | 2001-07-24 | 2003-01-30 | Nitto Denko Corporation | Composition having physiological activity and production method thereof |
| US20090060878A1 (en) * | 2007-09-04 | 2009-03-05 | The Procter & Gamble Company | Oral Compositions, Products And Methods Of Use |
| WO2012049045A1 (en) | 2010-10-11 | 2012-04-19 | Indena S.P.A. | Formulations for the treatment of disorders of the upper respiratory tract |
| WO2016198943A1 (en) | 2015-06-10 | 2016-12-15 | Raman Mehta | Formulations for the treatment of disorders of the mouth, throat and respiratory tract |
| CN111358781A (zh) * | 2020-04-20 | 2020-07-03 | 云南农业大学 | 鞣花酸在防治新型冠状病毒感染中的应用 |
-
2020
- 2020-08-03 IT IT102020000018949A patent/IT202000018949A1/it unknown
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US20030021857A1 (en) | 2001-07-24 | 2003-01-30 | Nitto Denko Corporation | Composition having physiological activity and production method thereof |
| US20090060878A1 (en) * | 2007-09-04 | 2009-03-05 | The Procter & Gamble Company | Oral Compositions, Products And Methods Of Use |
| WO2012049045A1 (en) | 2010-10-11 | 2012-04-19 | Indena S.P.A. | Formulations for the treatment of disorders of the upper respiratory tract |
| WO2016198943A1 (en) | 2015-06-10 | 2016-12-15 | Raman Mehta | Formulations for the treatment of disorders of the mouth, throat and respiratory tract |
| CN111358781A (zh) * | 2020-04-20 | 2020-07-03 | 云南农业大学 | 鞣花酸在防治新型冠状病毒感染中的应用 |
Non-Patent Citations (8)
| Title |
|---|
| DATABASE GNPD [online] Mintel; 1 April 2020 (2020-04-01), ANONYMOUS: "Healthy Skin Supplement Capsules", XP055785320, retrieved from https://www.gnpd.com/sinatra/recordpage/7555265/ Database accession no. 7555265 * |
| DATABASE GNPD [online] Mintel; 1 July 2020 (2020-07-01), ANONYMOUS: "Eye Cream", XP055785305, retrieved from https://www.gnpd.com/sinatra/recordpage/7920481/ Database accession no. 7920481 * |
| DATABASE GNPD [online] Mintel; 1 July 2020 (2020-07-01), ANONYMOUS: "Serum", XP055785309, retrieved from https://www.gnpd.com/sinatra/recordpage/7920483/ Database accession no. 7920483 * |
| DATABASE GNPD [online] Mintel; 1 March 2020 (2020-03-01), ANONYMOUS: "Hand Cream", XP055785315, retrieved from https://www.gnpd.com/sinatra/recordpage/7470205/ Database accession no. 7470205 * |
| HOUSTON DAVID M. J. ET AL: "Potentiated virucidal activity of pomegranate rind extract (PRE) and punicalagin against Herpes simplex virus (HSV) when co-administered with zinc (II) ions, and antiviral activity of PRE against HSV and aciclovir-resistant HSV", PLOS ONE, vol. 12, no. 6, 30 June 2017 (2017-06-30), pages e0179291, XP055785268, Retrieved from the Internet <URL:https://storage.***apis.com/plos-corpus-prod/10.1371/journal.pone.0179291/1/pone.0179291.pdf?X-Goog-Algorithm=GOOG4-RSA-SHA256&[email protected]/20210312/auto/storage/goog4_request&X-Goog-Date=20210312T151252Z&X-Goog-Expires=3600&X-Goog-SignedHeaders=ho> DOI: 10.1371/journal.pone.0179291 * |
| ISMAIL TARIQ ET AL: "Pomegranate peel and fruit extracts: A review of potential anti-inflammatory and anti-infective effects", JOURNAL OF ETHNOPHARMACOLOGY, vol. 143, no. 2, 20 July 2012 (2012-07-20), IE, pages 397 - 405, XP055785327, ISSN: 0378-8741, DOI: 10.1016/j.jep.2012.07.004 * |
| MORADI MOHAMMAD-TAGHI ET AL: "Pomegranate peel extract inhibits internalization and replication of the influenza virus: An in vitro study", AVICENNA JOURNAL OF PHYTOMEDICINE, vol. 10, no. 2, 1 March 2020 (2020-03-01), Iran, pages 143 - 151, XP055785270, ISSN: 2228-7930, Retrieved from the Internet <URL:https://www.researchgate.net/publication/340511677_Pomegranate_peel_extract_inhibits_internalization_and_replication_of_the_influenza_virus_An_in_vitro_study/fulltext/5e91070a4585150839d22d55/Pomegranate-peel-extract-inhibits-internalization-and-replication-of-the-influenza-virus-An-in-vitro-study.p> DOI: 10.22038/ajp.2019.13855 * |
| SESHU VARDHAN ET AL: "Protein-ligand interaction study to identify potential dietary compounds binding at the active site of therapeutic target proteins of SARS-CoV-2", ARXIV.ORG, CORNELL UNIVERSITY LIBRARY, 201 OLIN LIBRARY CORNELL UNIVERSITY ITHACA, NY 14853, 24 May 2020 (2020-05-24), XP081682806 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102257524B1 (ko) | 피부 진정 및 재생효과를 지니는 병풀 유래 엑소좀 함유 피부 개선용 화장료 조성물 | |
| EP3277254B1 (en) | Topical cosmetic treatment of skin and scalp and corresponding active ingredient based on an extract of apium graveolens | |
| ES2546402T3 (es) | Composiciones a base de hierbas y métodos para tratar trastornos hepáticos | |
| KR100950437B1 (ko) | 발모, 양모 촉진 및 탈모 방지를 위한 생약 조성물 및 이의제조방법 | |
| WO2011043397A1 (ja) | 抗インフルエンザウイルス剤 | |
| CA2784973C (en) | New synergistic compositions for the treatment of topical viral infections | |
| JP5928732B2 (ja) | 褐色脂肪細胞活発化剤 | |
| ES2426783T3 (es) | Extracto acuoso de Ribes para el tratamiento de infecciones virales | |
| KR20130068307A (ko) | 식물 추출물을 유효성분으로 함유하는 15-하이드록시프로스타글란딘 탈수소효소（15－ｐｇｄｈ） 억제용 조성물 | |
| JP2016160198A (ja) | 黒生姜含有組成物 | |
| JP2023540598A (ja) | 皮膚由来エキソソームを通じて筋損失抑制又は筋生成促進効果を示す組成物 | |
| ES2856498T3 (es) | Extracto de Daphne laureola y su uso para el tratamiento de dermopatías | |
| KR101654308B1 (ko) | 탈모 예방 및 양모 효과를 갖는 모발 개선용 조성물 | |
| IT202000018949A1 (it) | Estratto derivato da bucce di punica granatum per la prevenzione e il trattamento di infezioni virali | |
| KR101747111B1 (ko) | 산양삼 추출물을 포함하는 두피 및 모발 보호용 화장료 조성물 | |
| JP2019147824A (ja) | 黒生姜含有組成物 | |
| EP4351621A1 (en) | Hevamine-related plant composition and methods | |
| Rani et al. | Phytosomes: potential carriers for herbal drugs | |
| EP4138793A1 (fr) | Nouvel inhibiteur non protéique de furine | |
| KR102413124B1 (ko) | 구강용 조성물 | |
| KR102347243B1 (ko) | 퀼라야 추출물을 함유하는 항바이러스용 조성물 | |
| KR102598905B1 (ko) | 퀼라야 추출물을 함유하는 소취용 조성물 | |
| KR20200100419A (ko) | 진토닌을 포함하는 탈모 방지 또는 발모 촉진용 조성물 | |
| JP5903251B2 (ja) | インボルクリン発現促進剤 | |
| Shahid et al. | Phytochemical, pharmacological and therapeutic profile of bacopa monnieri: A prospective complementary medicine |