HUT77979A

HUT77979A - Peptidek, előállításuk és ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények

Info

Publication number: HUT77979A
Application number: HU9700245A
Authority: HU
Inventors: Francois Cardinaux; Jean Honoré M. Feyen; Rainer Gamse; Frank Otto Gombert
Original assignee: Novartis Ag.
Priority date: 1994-07-28
Filing date: 1995-07-27
Publication date: 1999-01-28
Also published as: BR9508433A; MX9700446A; AU3167095A; FI970168A0; TR199500915A2; CZ23397A3; NO970356D0; SK12097A3; CA2192787A1; CO4410206A1; IL114736A0; EP0773958A1; NO970356L; FI970168A; JPH10502091A; PL318017A1; WO1996003437A1

Description

A jelen találmány mellékpajzsmirigy- (paratiroid) hormon (PTH) és mellékpajzsmirigy-hormonokkal rokon peptid(PTHrP) vegyületekre, azok előállítási eljárására, ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítményekre és azok gyógyszerként való felhasználására vonatkozik.

Közelebbről a jelen találmány olyan PTH- vagy PTHrPvegyületekre vonatkozik, amelyek erős antagonisztikus hatékonysággal rendelkeznek a PTH/PTHrP-receptoron, amely vegyületekben a 2-es és a 10-es helyzetben a természetben előforduló aminosavmaradékok közül legalább az egyiket triptofán vagy egy másik olyan aminosavmaradék helyettesíti, amely oldalláncában egy aromás vagy heteroaromás csoportot visel, és adott esetben a 3-as és a 6-os helyzetekben a természetben előforduló aminosavmaradékok közül legalább az egyik triptofánnal vagy egy másik olyan aminosamaradékkal van helyettesítve, amely oldalláncában egy aromás vagy heteroaromás csoportot hordoz. A vegyületeket a továbbiakban mint találmány szerinti vegyületeket fogjuk említeni.

A találmány egy sajátos megvalósítási módja olyan PTHvagy PTHrP-vegyületekre vonatkozik, amelyekben a 10-es helyzetben a természetben előforduló aminosavmaradék triptofánnal vagy egy másik olyan aminosavmaradékkal van helyettesítve, amely oldalláncában egy aromás vagy egy heteroaromás csoportot hordoz, és adott esetben a 3-as és a 6-os helyzetben a természetben előforduló aminosavmaradékok közül legalább az egyik még triptofánnal vagy egy másik olyan aminosavmaradékkal van helyettesítve, amely oldalláncában egy aromás vagy egy heteroaromás csoportot hordoz.

- 3 A PTHrP kifejezés a PTHrP bármilyen természetben előforduló alakjára, például humán, marha-, csirke-, patkányvagy egér-PTHrP-re vonatkozik. Egyöntetűség kedvéért és a nevezéktani szokásoknak megfelelően az alábbi leírásban a PTHrP-szekvencia aminosavmaradékaira végig ugyanazt a számozási rendszert fogjuk alkalmazni, függetlenül attól, hogy a PTHrP-szekvencia valamelyik α-aminosav-maradékát a találmány szerint helyettesítjük vagy elhagyjuk.

A PTH kifejezés a PTH természetben előforduló bármelyik alakjára, például humán, marha-, csirke-, patkány- vagy egér-PTH-ra vonatkozik. Egyöntetűség kedvéért és a nevezéktani szokásoknak megfelelően az alábbi leírásban a PTH-szekvencia avinosavmaradékaira ugyanazt a számozási rendszert fogjuk alkalmazni, függetlenül attól, hogy a PTH a-aminosavmaradékát a találmány szerint helyettesítjük vagy elhagyjuk.

A PTHrP-vegyület vagy PTH-vegyület kifejezés olyan peptidre vonatkozik, amely egy N-terminális PTHrP-fragmentumon vagy PTH-fragmentumon alapuló aminosav-szekvenciát, előnyösen egy olyan PTHrP-fragmentumon vagy PTH-fragmentumon alapuló aminosav-szekvenciát foglal magában, amely az 1-7-es maradékok bármelyikével kezdődik és a 27-38-as maradékok bármelyikével végződik, például egy olyan N-terminális PTHrP-fragmentumot vagy PTH-fragmentumot tartalmaz, amely 31, 34, 35, 36, 37 vagy 38 aminosavmaradékot foglal magában. A PTHrP vagy PTH kifejezéseket így olyan peptidekre használjuk, amelyekben az említett N-terminális fragmentum egy vagy több aminosavmaradéka elmarad, előnyösen az N-terminálison. Ezeket a kifejezéseket olyan peptidekre is használ- 4 juk, amelyekben a természetben előforduló szekvencia egy vagy több aminosavmaradékát egy vagy több (természetes vagy nem-természetes) másik aminosavmaradék helyettesíti amellett, hogy a találmány szerint a 2-es és/vagy a 10-es helyzetben és adott esetben a 3-as és/vagy a 6-os helyzetben a vegyületek szubsztituálva vannak.

A humán PTHrP 1-38-as, 1-34-es és 1-31-es N-terminális fragmentumai az l-es, 2-es, ill. 3-as azonosítószámú szekvenciában megadott szekvenciákkal rendelkeznek.

A humán PTH 1-38-as, 1-34-es és 1-31-es N-terminális fragmentumai a 4-es, 5-ös, ill. 6-os azonosítószámú szekvenciában megadott szekvenciákkal rendelkeznek.

A PTHrP- vagy PTH-vegyületek N-terminálisa szabad vagy védett aminocsoport lehet, amely például olyan N-védőcsoportot hordozhat, amilyenek a T. W. Greene: Protective Groups in Organic Synthesis (Védőcsoportok szerves szintézisekben) című könyv 219-287. oldalain vannak leírva [J. Wiley & Sons, NY (1981)]; ennek a könyvnek a tartalmára e leírás részeként hivatkozunk; előnyös védőcsoportok az R-CO-, R-O-CO-, R-0-CH2~C0- vagy R-S02 csoportok vagy az olyan aminocsoportok, amelyek R''', R'''-NH-CO- vagy R'’'-NH-CS- képletű, az alábbiakban definiált szubsztituenst hordoznak.

A találmány szerinti vegyületek C-terminális csoportja COOH, CONH2 vagy egy mono- vagy diszubsztituált amid, például -CONRqRj lehet, ahol R_c és R^ közül az egyik hidrogén, míg a másik egy alifás csoport, például egy 1-6 szénatomos alkilcsoport, vagy pedig mindkettő alifás csoport lehet, vagy pedig R_c és Rj együtt a hozzájuk kapcsolódó nitrogénatommal együtt egy heterociklusos csoportot, például pirrolidinil- vagy piperidinilcsoportot képezhetnek.

A találmány szerinti PTHrP- vagy PTH-vegyületek erős antagonisztikus hatékonyságot gyakorolnak a PTH/PTHrP-receptorra, például megkötik a PTH/PTHrP-receptort, benső (intrinsic) aktivitással (i.a.) rendelkeznek a PTH/PTHrP-receptor aktiválásához funkcionális biopróbában, amely lényegesen kisebb értéket mutat egynél (<1), például egy olyan biopróbában, amelynek értéke legalább 0,3, és antagonizálják a PTHrP-t vagy PTH-t vagy annak egy fragmentumát, például a PTHrP(1-34)-et vagy a PTH(l-34)-et legalább 6,5-ös pA2 értékű funkcionális biopróbában. A találmány szerinti vegyületek előnyösen 0,03 vagy alacsonyabb vagy egyes próbákban ki sem mutatható benső aktivitással rendelkeznek. A funkcionális biopróba példáiként megemlítjük a szakmában szokásosan alkalmazott oszteoszarkoma-alapú adenilát-cikláz próbát. Ez a próba lehetővé teszi annak in vitro meghatározását, hogy a vizsgálandó vegyület milyen mértékben stimulálja az adenilát-cikláz aktivitást vagy antagonizálja a PTHrP vagy PTH vagy azok egy fragmentumának a hatását UMR patkányok, például UMR-106-06 származású patkányok oszteoszarkoma-sejtjeiben Marcus és Aurbach módszere szerint [Endocrinology 85, 801-810 (1969)], amit az alábbiakban fogunk ismertetni.

Az aminosav megjelölésen természetben előforduló vagy kereskedelmileg beszerezhető vagy nem-természetes aminosavat vagy azok optikai izomerjét értjük. A nem-természetes aminosav olyan aminosav, amely mRNS irányítás alatt nem épül be proteinbe, amilyenek például a β-Nal, a fluor-a-aminosavak,

- 6 így a fluor-alanin, továbbá a ciklohexil-alanin vagy a trimetil-szilil-alanin. A természetes aminosavak kifejezés a szakmában jól ismert aminosavakra voantkozik. Ezeket szabványos rövidítéseikkel együtt megtalálhatjuk az Amerikai Egyesült Államok Szabadalmi Hivatalának a hivatalos lapjában, a Tradeiaark Official Gazette-ben, annak 1990. május 15-i számában a 33. oldalon a 46. sortól kezdve. Ezeket az aminosavakat és azok rövidítéseit a jelen bejelentés leírásába hivatkozásként iktatjuk be.

A természetes aminosavakat az alábbiakban soroljuk fel:

A	Alá	alanin
D	Asp		aszpartinsav
E	Glu		glutaminsav
F	Phe		fenil-alanin
G	Gly		glicin
H	His		hisztidin
I	Ile		izoleucin
K	Lys		lizin
L	Leu		leucin
M	Met		metionin
N	Asn		aszparagin
Q	Gin		glutamin
R	Arg		arginin
S	Ser		szerin
T	Thr		treonin
V	Val		valin
W	Trp		triptofán
Y	Tyr		tirozin

Oldalláncán aromás vagy heteroaromás csoportot hordozó aminosavmaradékon olyan aminosavmaradékot értünk, amelynek az oldallánca például adott esetben gyűrűn szubsztituált fenil-metil-csoport, 1- vagy 2-naftil-metil-csoport, 1- vagy

2-naftil-etil-csoport, 3- vagy 4-piridil-metil-csoport, 3-indolil-metil-csoport vagy 3-indazolil-metil-csoport; előnyösen ez egy -NH-CHR'-CO- képletű aminosavmaradék, amelyet az alábbiakban még meghatározunk.

A találmány egy előnyös kiviteli alakja (I) általános képletű vegyületekre vonatkozik - ahol a képletben x jelentése 31, 34, 35, 36, 37 vagy 38, y jelentése 1, 2, 3, 4, 5, 6 vagy 7,

X² jelentése Val, vagy pedig függetlenül X¹⁰ valamelyik jelentésével rendelkezik,

X³ jelentése Ser, vagy pedig függetlenül X¹⁰ valamelyik jelentésével rendelkezik,

X⁶ jelentése Gin, vagy pedig függetlenül X¹⁰ valamelyik jelentésével rendelkezik, rIO jelentése Asp vagy X¹⁰, ahol X¹⁰ jelentése Trp vagy

-NH-CHR'-CO-, ahol R' jelentése (a), (b), (c) vagy (d) általános képletű csoport, ahol n jelentése 1 vagy 2, m jelentése 1 vagy 2, o jelentése 0 vagy 1,

A jelentése adott esetben egy vagy több fluoratommal, klóratommal, nitrocsoporttal, ^-4 alkilcsoporttal vagy Cj_4 alkoxicsoporttal szubsztituált gyűrű, ahol « · · · · · · • · ··« ·· • · · · ·· · · ·

- 8 két alkilcsoport vagy két alkoxicsoport szubsztituens együtt egy olyan gyűrűt képezhet, amely az A gyűrűvel kondenzálva van, a B és C gyűrűk egymástól függetlenül szubsztituálva lehetnek ugyanolyan módon, mint ahogyan azt fentebb az A gyűrűvel kapcsolatban megadtuk, és

Y_a jelentése közvetlen kötés, -CH2-, O, NH vagy N-C^-g alkil-csoport,

D jelentése PTHrP vagy PTH N-terminális fragmentumából származó aminosav-szekvencia, p, q és s jelentése egyaránt 1, feltéve, hogy p 0, amikor y > 2, q jelentése 1, amikor y > 3, és s 0, amikor y > 6,

R jelentése H, R-CO-, R-O-CO-, R-O-CH₂-CO-, R-SO₂-,

R''', R''’—NH-CO—, R''’-NH-CS- vagy NH₂-C₁_6 alkilén-CO-, ahol R jelentése C^-g alkilcsoport7 cu-karboxi-Ci_g alkilcsoport; ω-[(Ci_4 alkoxi)-karbonil]-C^g alkil-csoport; C₂-s alkenilcsoport; ¢5-7 cikloalkilcsoport; Cg_7 cikloalkil-Ci_4 alkil-csoport; vagy fenilcsoport, fenil-Ci_4 alkil-csoport, l-naftilcsoport, 2-naftilcsoport, l-naftil-Ci_₂ alkil-csoport vagy 2-naftil-C₁_₂ alkil-csoport, amelyek mindegyike adott esetben a gyűrűn egy vagy több fluoratommal, klóratommal, nitrocsoporttal, C^_4 alkilcsoporttal vagy C^_4 alkoxi-csoporttal szubsztituálva lehet; heteroarilcsoport; és

R''' jelentése függetlenül az R szubsztituens kapcsán megadott jelentésekkel azonos, kivéve az

- 9 tJ-karboxi—C^_g alkil-csoport és az 6J-[ (Cl-4 alkoxi)-karbonil]-Ci_g alkil-csoport jelentést; és

R_a jelentése OH vagy NH2, azzal a megkötéssel, hogy X² és R¹⁰ közül legalább az egyiknek a jelentése megyegyezik X¹⁰ valamelyik jelentésével.

Amikor az A, B vagy C gyűrűk szubsztituensei együtt gyűrűs szerkezetet képeznek, ez például -O-CH2-CH2-O- csoport lehet. A policiklusos cikloalkilcsoport példájaként megemlítjük az adamantilcsoportot.

R heteroarilcsoport jelentéseként megemlítjük az 5-, 6- vagy 7-tagú telítetlen heterociklusos csoportot, amely legalább egy nitrogénatomot és adott esetben egy további heteroatomot, így nitrogén-, oxigén- vagy kénatomot tartalmaz és adott esetben kondenzálva van egy benzolgyűrűvel. A heteroarilcsoport előnyösen indolilcsoport, kinolilcsoport vagy izokinolilcsoport.

A találmány szerinti vegyületek szabad alakban, só alakjában vagy komplexek alakjában létezhetnek. Savaddíciós sókat képezhetnek például szerves savakkal, polimer savakkal és szervetlen savakkal. Az ilyen savaddíciós sóalakok közül megemlítjük a hidrokloridokat és az acetátokat. Komplexek képződhetnek például a találmány szerinti PTHrP vagy PTH vegyületekből szervetlen anyagok, például szervetlen sók vagy hidroxidok, így kalcium- és cinksók hozzáadásakor és/vagy polimer szerves anyagok hozzáadásakor.

Az (I) általános képletű vegyületekben előnyösek az alábbi jelentések vagy külön külön, vagy pedig bármilyen kombinációban vagy alkombinációban.

• · ·«· ·«

1. D jelentése a hPTHrP N-terminális fragmentuma.

2. D jelentése a hPTH N-terminális fragmentuma.

3. X¹⁰ jelentése Trp.

4. X¹⁰ jelentése -NH-CHR'-CO- csoport, ahol R' jelentése (a) , (b) vagy (c) általános képletű csoport, előnyösen (a) vagy (c) általános képletű csoport, még előnyösebben (a) általános képletű csoport.

5. X² jelentése Trp vagy -NH-CHR'-CO- csoport, ahol R' jelentése (a), (b) vagy (c) általános képletű csoport.

6. X² és X¹⁰ jelentése egymástól függetlenül Trp vagy

-NH-CHR'-CO- csoport, ahol R' jelentése (a), (b) vagy (c) általános képletű csoport.

7. X² és χΐθ jelentése egymástól függetlenül Trp vagy

-NH-CHR'-CO- csoport, ahol R' jelentése (a) , (b) vagy (c) általános képletű csoport.

8. X⁶ és X¹⁰ jelentése egymástól függetlenül Trp vagy

9. X², X⁶ és X¹⁰ jelentése egymástól függetlenül Trp vagy -NH-CHR'-CO- csoport, ahol R' jelentése (a), (b) vagy (c) általános képletű csoport.

10. n jelentése 1.

11. y jelentése 3, 4, 5, 6 vagy 7, előnyösen 3 vagy 5.

12. x jelentése 31 vagy 34.

13. R jelentése RCO-, R-SO2, R'' ' vagy ^N-Cpg alkilén-CO- csoport.

14. R jelentése C^-g alkilcsoport, fenil-Ci_4 alkilcsoport, 1- vagy 2-naftilcsoport, 1- vagy 2-naftil-Cx_2 al- 11 kil-csoport.

15. R jelentése -karboxi-C^_g alkil-csoport.

Miként fentebb már említettük, a 2-es és/vagy 10-es helyzettől eltérő helyzetű egy vagy több aminosavmaradékot egy természetes vagy nem-természetes, fentebb meghatározott aminosavmaradék helyettesítheti, vagy pedig ezek a csoportok hiányozhatnak. Amikor a találmány szerinti vegyületek hPTHrP-származékok, további aminosav-helyettesítőket foglalhatnak magukban, például 3-as helyzetben, például Alá csoportot, 4-es helyzetben, például Trp csoportot, 5-ös helyzetben, például adott esetben gyűrűn szubsztituált Phe csoportot, 11-es és/vagy 13-as helyzetben, például Leu csoportot, vagy 34-es helyzetben, például D-Ala csoportot; ezeknek az aminosavmaradékoknak az aminosav-szekvenciája adott esetben az N-terminálison rövidebb lehet annak következtében, hogy hiányzik 1-7 aminosavmaradék. Amikor a találmány szerinti vegyületek hPTH-szármázékok, az aminosavmaradékok tovább lehetnek helyettesítve például az alábbi helyzetek közül legalább egyben: 8, 16, 18, 33 és 34, például Leu⁸,

Alá¹⁶, Gin¹⁸, Thr³³, Alá³⁴ csoporttal vagy azok D-izomerjeivel.

A találmány eljárásra is vonatkozik a találmány szerinti PTHrP- vagy PTH-vegyületek előállítására. Ezeket a vegyületeket lépésenként állíthatjuk elő oldatban, a szilárd fázisú szintézismódszert alkalmazva, vagy pedig génmérnöki úton, vagy pedig ezeknek a módszereknek a kombinálásával.

A találmány szerinti vegyületeket például az alábbi módokon állíthatjuk elő:

• · · · · · · • · · · · · · • · · · · · ···· · · · · «

- 12 a) legalább egy olyan védőcsoportot eltávolítunk, amely jelen van egy találmány szerinti PTHrP- vagy PTH-vegyületben, például egy (I) általános képletű vegyületben, annak védett alakjában; vagy

b) amidkötéssel összekapcsolunk védett, részben védett vagy védetlen alakú két peptidfragmentumot, amelyek olyanok, hogy a kívánt PTHrP- vagy PTH-vegyület, például az (I) általános képletű vegyület aminosav-szekvenciáját kapjuk, majd adott esetben az eljárás a) lépését hajtjuk végre, vagy

c) a kívánt szekvencia vagy N-terminális fragmentum Nterminális maradékának védett vagy védetlen alakban levő aminocsoportjához szelektív módon egy védőcsoportot vagy szubsztituenst adunk, majd adott esetben elvégezzük az a) lépés szerinti műveletet, és szabad alakban, só alakjában vagy komplex alakban kinyerjük az így kapott PTHrP- vagy PTH-vegyületeket.

Az a) , b) és c) eljárási lépéseket ismert módszerekkel analóg módon hajthatjuk végre, például a peptidkémia ismert módszereivel, vagy pedig az alábbi példákban leírt módon. Ahol ez kívánatos, ezekben a reakciókban olyan védőcsoportokat használhatunk, amelyek alkalmasak peptidekben funkciós csoportokként való felhasználásra, de nem vesznek részt a reakciókban. A védőcsoportok funkciós csoportokat tartalmazó polimer gyanták is lehetnek.

Amikor a találmány szerinti vegyületek nem-természetes vagy természetes maradékokat foglalnak magukban, a lépcsős vegyi eljárás és a génmérnöki eljárás kombinációjával állíthatók elő; a genetikusán kódolható aminosavmaradékokból álló

- 13 peptidszekvencia (akár a teljes szekvencia vagy annak egy fragmentuma) előállítható rekombináns technikával, és a kívánt nem-természetes aminosavak vagy terminális aminoszubsztituensek vegyi szintézissel vezethetők be, és - ahol ez kívánatos - a fragmentumok kombinálhatok, és a védőcsoport(ok) - ha jelen van(nak) - eltávolítható(k).

Az alábbi példákban az összes hőmérséklet-értéket °Cban adjuk meg. Az alábbi rövidítéseket alkalmazzuk.

DMF = dimetil-formamid

DMA = N,N-dimetil-acetamid-6-szulfonil

Pmc = 2,2,5,7,8-pentametil-kromán tBu = terc-butil

PyBOP = benzotriazol-l-il-oxi-tripirrolidino-foszfónium-hexafluor-foszfát

Nal (2) = L-3-(2-naftil)-alanin

DIEA = N,N-diizopropil-N-etilamin

Fmoc = 9-fluorenil-metoxi-karbonil

RT = szobahőmérséklet

MS = elektrospray-spektroszkópiával meghatározott M+

1. PÉLDA [Trp⁴'¹⁰]hPTHrP(1-24) OH

A peptidet lépésenként! módszerrel szintetizáljuk polisztirol alapú gyantahordozón. Az α-amino-csoportot Fmoc csoporttal védjük, és az oldallánc funkciós csoportjait az alábbi módon védjük: Asp(OtBu), Glu(OtBu), His(Trt), Lys(Boc), Asn(Trt), Gln(Trt), Arg(Pmc), Ser(tBu), Trp(Boc) és Thr(tBu).

• ·« · ·· ·»· ··

- 14 Szilárd fázisú peptidszintézisekhez kiindulási anyagként Fmoc-Ala-oxi-metil-4-fenoxi-metil-ko(polisztirol-l%-divinil-benzol)-t használunk közelítőleg 0,5 mmol/g mennyiségben. A szintézis során ismétlődő ciklusokban eltávolítjuk az α-amino-csoport védőcsoportját, mosunk, kapcsolunk (vagyis a következő aminosavmaradékot hozzákapcsoljuk a növekedő peptidlánchoz) és mosunk. Az Ν-α-Fmoc-csoportot lehasítjuk, 20% piperidint használva DMA-ban. A kapcsolási reakcióban négy ekvivalens Fmoc-aminosavat és PyBOP-reagenst, valamint nyolc ekvivalens DIEA-t használunk DMA-ban aminocsoportonként. A peptidlánc teljes összeállítása után a terminális Fmoc védőcsoportot piperidinnel DMA-ban a fenti módon eltávolítjuk. A peptidet lehasítjuk a gyantahordozóról, és az összes oldallánc-védőcsoportot két óra alatt szobahőmérsékleten egyidejűleg eltávolítjuk olyan reagenst használva, amely 5% dodecil-metil-szulfidőt és 5% vizet tartalmaz TFAban. A gyantarészecskéket leszűrjük, kevés TFA-val mossuk, majd a terméket az egyesített szűrletekből 10-20 térfogatnyi dietil-éter hozzáadásával kicsapjuk, dietil-éterrel mossuk és szárítjuk. A terméket kromatografálással tisztítjuk C-18 tágpórusú szilikagéloszlopon, 2%-os vizes foszforsavban acetonitril-grádienst használva. A tiszta vegyületet tartalmazó frakciókat egyesítjük, anioncserélő gyantán (Biorad, AG4-X4 acetát-forma) leszűrjük és liofilizáljuk. így a cím szerinti vegyületet kapjuk.

MS: 4146

Ha mindenben az 1. példa szerinti módon járunk el, azonban a megfelelő aminosavakat használjuk, az alábbi pél4 • » · · 1 » · a · ·«· ·« • · · · « · ···· · · ·· »

- 15 dákban meghatározott vegyületeket állíthatjuk elő:

2. PÉLDA

[Trp¹⁰, Leu¹¹, Leu¹³JhPTHrP(1-34)OH 3. PÉLDA	MS:	4059
[Trp¹⁰, Leu¹¹JhPTHrP(1-34) OH 4. PÉLDA	MS:	4073
[Trp³/¹⁰JhPTHrP(1-34)OH 5. PÉLDA	MS:	4188
[Trp²/¹⁰JhPTHrP(1-34)OH 6. PÉLDA	MS:	4176
[Trp¹⁰ J hPTHrP(2-3 4)OH 7. PÉLDA	MS:	4018,3
[Trp¹⁰]hPTHrP(3-3 4)OH 8. PÉLDA	MS:	3919,2
[Trp² J hPTHrP(1-3 4)OH 9. PÉLDA	MS:	4104,9
[Trp¹⁰]hPTH(1-34)OH	MS:	4189

10. PÉLDA [Leu⁸,Trp¹⁰,Alá¹⁶,Gin¹⁸,Thr^{3 3},Alá^{3 4}]hPTH(1-3 4)OH MS: 4036

11. PÉLDA [Leu⁸,Trp¹⁰,Alá¹⁶,Gin¹⁸,Thr^{3 3},Alá^{3 4}]hPTH(2-3 4)OH MS: 3949

12. PÉLDA [Leu⁸,Trp¹⁰,DLeu¹¹,Gin¹⁸,Thr^{3 3},Alá³⁴]hPTH(1-34)OH MS: 4079

13. PÉLDA [Phe², Trp¹⁰JhPTHrP(1-34)-OH MS: 4137,1 • ··*· ·· * • · * · » * »·· <t • · · ♦ ··· ·· ··

14. PÉLDA [Trp², Trp¹⁰]hPTHrP(2-34)-OH

15. PÉLDA [Trp⁶, Trp¹⁰]hPTHrP(1-34)-OH

16. PÉLDA [Trp⁶, Trp¹⁰]hPTHrP(6-34)-OH

17. PÉLDA [Trpl°]hPTHrP(7-34)-OH

18. PÉLDA [Trp³, Trp¹⁰]hPTHrP(3-34) -OH

19. PÉLDA [Trp¹⁰]hPTHrΡ(1-3 4)OH

20. PÉLDA [Trp⁶, Trp¹⁰]hPTHrP(3-34)NH₂

21. PÉLDA [Phe⁶, Trp¹⁰]hPTHrP(1-34)OH

22. PÉLDA [Phe², Phe⁶, Trp¹⁰]hPTHrP(1-34)OH

23. PÉLDA

MS: 4105,1

MS: 4146,8

MS: 3623,3

MS: 3437,6

MS: 4018,0

MS: 4088,7

MS: 3976,8

MS: 3546,1

MS: 4155,1

N^a-3-amino-propionil-[Phe⁶, Nal(2)¹⁰]hPTHrP(4-34)NH₂MS: 3932,0

24. PÉLDA

N^a-benziloxi-karbonil [Nal (2)¹⁰]hPTHrP(3-34)-NH₂Ezt a peptidet az 1. példa szerinti módon állítjuk elő azonban kiindulási anyagként közelítőleg 0,4 mmol/g 4 (2',4'-dimetoxi-fenil-Fmoc-amino-metil)-fenoxi-ko(polisztirol-l%-divinil-benzol)-t használunk; ezt a vegyületet példá

- 17 ul a Tetrahedron Letters-ben [28, 3787-3790 (1987)] leírt módon állíthatjuk elő. Az utolsó szintézisciklusban a peptidlánchoz Z-Ser-OH-t adunk, és a peptidet az 1. példában leírt módon hasítjuk le és tisztítjuk.

MS: 3975,3

25. PÉLDA

N^a-acet i1-[Trp¹⁰]hPTHrP(3-3 4)OH

Ezt a peptidet az 1. példában leírt eljáráshoz hasonló módon állítjuk össze. A szintézis végén Fmoc védócsoporteltávolítási és acetilezési ciklust alkalmazunk, az utóbbiban ecetsavanhidrid és DMF 1:1 térfogatarányú elegyét használva. A peptidet a korábban leírthoz hasonló módon hasítjuk le a gyantáról és tisztítjuk.

MS: 3961,1.

Az alábbi vegyületeket az 1., a 24. vagy a 25. példában ismertetett eljáráshoz hasonló módon állíthatjuk elő.

26. PÉLDA

N^a-acetÍl-[Trp¹⁰]hPTHrP(2-34)OH MS: 4060,4

27. PÉLDA

1-izopropil-[Leu⁸,Trp¹⁰,Gin¹⁸,Thr^{3 3},Alá^{3 4}]-hPTH(1-34)OH MS: 4091

28. PÉLDA

N“-2-naftil-acetil-[Nal(2)¹⁰]hPTHrP(3-34)NH₂ MS: 4097,1

29. PÉLDA

N“-2-naftil-acetil-[Nal(2)¹⁰]hPTHrP(4-34)NH₂ MS: 4009,7 ···· ·· ·· • · · · · · · • · · · · · · ·········

- 18 30. PÉLDA

N^a-2-naftil-szulfonil-[Nal(2)¹⁰]hPTHrP(3-34)NH₂

MS: 4119,2

31. PÉLDA

N“-2-naftoxi-acetil-[Nal(2)¹⁰]hPTHrP(3-34)NH₂

MS: 4111,5

32. PÉLDA

N^a-2-naftil-acetil-[Alá³,Nal(2)¹⁰]hPTHrP(3-34)NH₂

MS: 4080,8

33. PÉLDA

N^a-2-benziloxi-karbonil-[Trp²,Nal(2)¹⁰]hPTHrP(2-34)NH₂MS: 4248,3

34. PÉLDA

3-naft-2-il-proprionil-[Nal(2)¹⁰]hPTHrP(3-34)NH₂

MS: 4110,8

35. PÉLDA

3-naft-2-i1-propioni1-[Na1(2)¹⁰]hPTHrP(3-3 4)NH₂

MS: 4110,9

36. PÉLDA

N^a-2-naftil-acetil-[Nal(2)¹⁰, DAla³⁴]hPTHrP(3-34)NH₂

MS: 4095,9

37. PÉLDA

N^a-2-naftil-acetil-[Nal(2)¹⁰]hPTHrP(3-31)NH₂

MS: 3788,0

38. PÉLDA

N^a-3-naft-2-il-propionil-[Nal(2)¹⁰]hPTHrP(7-34)NH₂

MS: 3630,0

• · · · · · • · · • · • · · · · ·	• · · · • · · · • · · · · • · ·
- 19 - 39. PÉLDA N^a-acetil-[Phe⁶,Nal(2)¹⁰)hPTHrP(6-34)NH₂	MS:	3637,0
40. PÉLDA N“-acetil-[Phe⁶,Nal(2)¹⁰)hPTHrP(4-34)NH₂	MS:	3903,1
41. PÉLDA 1-(1-amino-l-ciklopentil-karbonil)- [Leu⁸,Trp¹⁰,Gin¹⁸,Thr³³,Alá³⁴]hPTH(1-34)OH	MS:	4104

A peptidgyanta közbenső termék előállításánál felhasznált Fmoc-l-amino-ciklopentán-l-karbonsavat például a G. Valié és munkatársai által leírt módszerrel [Can. J. Chem. 66, 2575-2582 (1988)] lehet előállítani.

42. PÉLDA

1-adamantil-karbonil-[Leu⁸,Trp¹⁰,Gin¹⁸,Thr^{3 3},Alá³⁴]hPTH (1-34)OH MS: 4155

43. PÉLDA

1-(3-indolil-karbonil)[Leu⁸,Trp¹⁰,Gin¹⁸,Thr³³,Alá³⁴]hPTH (1-34)OH MS: 4150

44. PÉLDA

1-(3-kinolil-karbonil-[Leu⁸,Trp¹⁰,Alá¹⁶,Gin¹⁸,

Thr³³,Alá³⁴]hPTH(1-34)OH MS: 4104

45. PÉLDA

1-(2-naftoil)-[Leu⁸,Trp¹⁰,Gin¹⁸,Thr^{3 3},Alá^{3 4}]hPTH (1-34)OH MS: 4147

- 20 46. PÉLDA

Ν^α-(2-nafti1)-meti1-[Trp¹⁰]hPTHrP(2-3 4)-OH Metil-N-naftoil(2)-valinátot Lawesson-reagenssel [S-O.

Lawesson et al., Tetrahedron 37, 3635 (1981)] kezelünk, és az így kapott N-tio-naftoil(2)-valinátot redukáljuk, az F.S. Guziec és munkatársai által endotiopeptidekkel kapcsolatban leírt [Tetrah. Letters 23-26 (1990)] módszert használva. A metil-észtert hidrolizáljuk, lítium-hidroxidot használva, így kristályos, szilárd anyagként N-α-(naftil(2)-metil)valin-hidrokloridot kapunk, op. = 205-210 °C (bomlással). Ezt a vegyületet PyBOP-reagenst használva kapcsoljuk az előzőleg elkészített és védett [Trp¹⁰]hPTHrP-(3-34)-O-peptid gyantához, amelyből az Ν-α-Fmoc-csoportot lehasítottuk. A peptidet lehasítjuk a gyantáról és az 1. példában leírt módon tisztítjuk.

MS: 4158,2

47. PÉLDA

N^a-2-naft-2-il-etil-[Trp¹⁰]hPTHrP(2-34)OH MS: 4171,9

48. PÉLDA

N^a-2-naft-2-il-etil-[ALa³,Nal(2)¹⁰]hPTHrP(3-34)NH₂

MS: 4066,7

49. PÉLDA

N^a-szukcinil-[Phe⁶,Nal(2)¹⁰]hPTHrP(5-34)NH₂

Ezt a peptidet az 1. példában leírt eljáráshoz hasonló módon állítjuk elő, azonban kiindulási anyagként 0,63 g 4(2',4'-dimetoxi-fenil-Fmoc-amino-metil)-fenoxi-ko(polisztirol-l%-divinil-benzol)-t használunk, közelítőleg 0,4 mmol/g

- 21 töltéssel; ezt a vegyületet például a Tetrah. Letters-ben leírt [28, 3787-3790 (1987)] módon állíthatjuk elő. Miután kapcsoltuk az utolsó aminosavat, az Fmoc-His(Trt)-OH-t, az Fmoc-csoportot a szokásos módon szelektíven eltávolítjuk, és a peptidgyantát dimetil-formamidban borostyánkősavanhidriddel (0,5 g) és DIPEA-val (0,86 ml) reagálttjuk. A peptidet lehasítjuk a gyantáról, majd acetát-alakban az 1. példában leírt módon tisztítjuk és liofilizáljuk. így a cím szerinti vegyületet kapjuk.

MS: 3832,0.

A 49. példában ismertetett eljárással az alábbi vegyületeket állíthatjuk elő:

50. PÉLDA

N^a-szukcinÍl-[Phe⁶,Nal(2)¹⁰]hPTHrP(5-31)NH₂ MS: 3522,1

51. PÉLDA

N^a-szukcinil-[Nal(2)⁶,Nal(2)¹⁰]hPTHrP(5-34)NH₂

MS: 3881,7

52. PÉLDA

N^a-giutaril-[Phe⁶,Nal(2)¹⁰]hPTHrP(5-34)NH₂ MS: 3845,6

53. PÉLDA

N^a-szukcinil-[Phe⁶,Nal(2)¹⁰,DAla³⁴]hPTHrP(5-34)NH₂

MS: 3832,0

54. PÉLDA

N^a-szukcinil-[4-Cl-Phe⁶,Nal(2)¹⁰]hPTHrP(5-34)NH₂

MS: 3866,5

55. PÉLDA

Na-szukcinil-[4-Cl-Phe⁵, 4-Cl-Phe⁶, Nal(2)¹⁰]- 22 hPTHrP(5-34)NH₂ MS: 3910,2

A találmány szerinti vegyületek szabad alakban vagy gyógyászatilag elfogadható sók és komplexek alakjában értékes farmakológiai tulajdonságokkal rendelkeznek, amelyeket állatkísérletekben tapasztaltunk. Ezért a vegyületek gyógyászatilag felhasználhatók.

A találmány szerinti vegyületek biológiai hatékonyságát in vitro úgy határozzuk meg, hogy mérjük ciklusos AMP PTHstimulált (antagonizmus) szintézisének stimulálási képességét (agonizmus) vagy gátlási képességét (UMR-fajtájú 106-06) egerek oszteoszarkóma-sejtjeiben Marcus és Aurbach módszerével [Endocrinology, 85, 801-810 (1969)]. Az UMR 106 egerek oszteoszarkóma-sejtjeit összenövésig tenyésztjük DMEM-HAM’ F12 közegben (1:1) - 10% FCS, 12 mélyedésű lemezeken. A közeget ezután lecseréljük 2% FCS-t tartalmazó közegre, és hozzáadunk mélyedésenként 1-5 mCí [3H]-adenint. Két órával később a sejteket kétszer mossuk szérummentes közeggel és inkubáljuk 1 mM 3-izobutil-l-metil-xantint tartalmazó 0,1% BSA - DMEM közegben, hogy kizárjuk a foszfo-diészterázokra gyakorolt hatásokat. A vizsgálandó anyagokat 20 perccel később vagy egyedül, vagy pedig PTH-val együtt adjuk hozzá (antagonista kísérlet). 15 perc eltelte után a közeget eltávolítjuk és a reakciót leállítjuk, majd a cAMP-t extraháljuk 0,5 ml jéghideg 5%-os triklór-ecetsav hozzáadásával. 0,2 mM jelöletlen adenint, adenozint, AMP-t, ADP-t, ATP-t és cAMPt, valamint a hozam meghatározása céljából 0,4 yCi [14C]adenozint tartalmazó hordozóoldatot adunk hozzá, mélyedésen• ·

- 23 ként 0,5 ml mennyiségben. A [3H]-cAMP-t 200-400 lyukboségű Dowex AG 50W-X4 sorozatgyantával és aluminium-oxidon végzett kromatográfálással elkülönítjük, majd Salomon Y. módszerével [Advances in Cyclic Nucleotide Research (Fejlődés a ciklusos nukleotidok kutatásában), 10. kötet, Raven Press, 35-55. oldal (1979)] megszámoljuk. Az eredményeket az ellenőrző oldószer százalékában határozzuk meg, és az EC5Q értékeket DRC-görbékből határozzuk meg. Az antagonista hatékonyságot a PTHrP vagy PTH DRC-görbéinek jobbratolódásából számítjuk ki és pA2 értékekként adjuk meg. A találmány szerinti vegyületek hatékony antagonisták 10^-9-tól a 10“⁵ M koncentrációkban. A 36., a 37. és a 49. példa szerinti vegyületek pA2 értéke UMR 106-06 patkányok sejtjeiben 10,3; 9,7; ill. 9,3.

A találmány szerinti vegyületek PTH-receptorokhoz kötődési affinitást is mutatnak, amit az alábbi adatokkal bizonyítunk.

Csirke-[Tyr³⁶]PTHrP(l-36)-amidot 2200 Ci/mmol fajlagos aktivitásig jódozunk laktoperoxidáz-módszerrel (Anawa Láb. AG, Wangen). Oposszum-vesesejtek (OKI) monorétegeit mossuk 1% BSA-t tartalmazó 200 μΐ DMEM és HAM F12 1:1 térfogatarányú elegyével, majd 16 °C hőmérsékleten inkubáljuk mélyedésenként 50 000 cpm [ 12 5i_Tyr³⁶] chPTHrP (1-3 6) -amiddal, 1 μπιοί [Tyr³⁶]chPTHrP(1-36)-amid jelenlétében vagy távollétében. Inkubálás után a sejteket 0,5 ml 4 °C hőmérsékletű közeggel mossuk, 0,5 ml IN nátrium-hidroxid-oldattal feloldjuk és a radioaktivitást meghatározzuk. A fajlagos kötést a teljes kötés mínusz nem-fajlagos kötés különbségeként határozzuk meg. A kompetíciós görbéket SCTFIT-tel, nem-lineáris reg·· ···· ·· ·· • · · * · · · • · ·«· · · • · · · · · < ········· <

- 24 ressziós számítógép-programmal [Feyen et al., Biochem. Biophys. Rés. Commun. 187, 8-13 (1992)] elemezzük, és az adatokat átlagos pKg értékekként (n = 2-től 3-ig) adjuk meg. A 36., a 37. és a 49. példák szerinti vegyületek pKp értékei 8,3; 7,9; ill. 8,4.

A fentieken kívül a találmány szerinti vegyületek antagonizálják a PTH hatását i.v. infúzió után, amit például olyan patkányokon határoztunk meg, amelyek mellékpajzsmirigyét műtéti úton eltávolítottuk. A mellékpajzsmirigy műtéti úton való eltávolítását követő 24 óra elteltével a patkányokat érzéstelenítjük, szervezetükbe infúzióval PTH(1-34)-et viszünk be, majd a vizsgálandó vegyületet külön visszük be a nyaki vénákon keresztül. A húgyhólyagból vizeletet veszünk a gyomron keresztül bevezetett kanülön keresztül. A szokásos módszerekkel mérjük a vizeletben a foszfátot és a cAMP-tartalmat, továbbá a szérumban a kalcium- és a foszfát-tartalmat. Ezeket a paramétereket használjuk annak meghatározására, hogy milyen mértékű az antagonista hatás in vivő PTH-hatásokkal szemben. Ebben a vizsgálatban a találmány szerinti vegyületek antagonizálják a PTH-hatásokat, amikor az adagolást i.v. infúzióval végezzük 1 gg/kg/h-től 1 mg/kg/h-ig terjedő dózisokban. A 49. példa szerinti vegyület 90 percig terjedő időtartamon át teljesen elnyomja a PTH által indukált foszfaturiát, vagyis a normálisnál nagyobb mennyiségű foszfát ürülését a vizelettel, amikor i.v. infúzióval visszük be 190 Mg/kg/h mennyiségben, és a PTH(l-34)-et i.v. infúzióval visszük be 4 Mg/kg/h mennyiségben.

A fentieknek megfelelően a találmány szerinti vegyüle• ·* · *

- 25 tek hasznosak minden olyan állapot megelőzésére vagy kezelésére, amely a PTH vagy PTHrP túlzott mértékű felszabadulása által előidézett megnövekedett plazma-kalciumtartalommal függ össze; ilyen például a mellékpajzsmirigy-túltengés, a fokozott kalcium-tartalom a vérben, például rosszindulatú daganatokkal, így mellrákkal, a tüdő, a nyelőcső, a fej és a nyak tájainak pikkelyes sejtkarcinómáival és hematológiai rákos tünetekkel társulva, áttételekkel vagy azok nélkül. A találmány szerinti vegyületek ezenkívül hasznosak a PTHrP által stimulált tumornövekedés, tumorbehatolás és tumorbenövés megelőzésére és kezelésére, dermatológiai rendellenességek, így például szövet-helyreállítási terápiák, például égések, fekélyek és sebek kezelésére, valamint a haj növekedésének elősegítésére.

A felsorolt tünetek kezelése esetén a közelítő dózis természetesen több tényezőtől, így például a kezelt személytől, az adagolás módjától, valamint a kezelendő állapotok súlyosságától függ. Általában azonban állatokban kielégítő eredményeket kapunk közelítőleg 0,1 mg/kg testsúlytól közelítőleg 100 mg/kg testsúlyig terjedő napi dózisokkal. Nagyobb emlősökben, például emberekben a napi dózis körülbelül 0,1 mg-tól körülbelül 500 mg-ig terjedő mennyiségű, találmány szerinti vegyület.

A találmány szerinti vegyületeket szabad alakban vagy gyógyászatilag elfogadható sók vagy komplexek alakjában adagolhatjuk. Az ilyen sók és komplexek a szokásos módon készíthetők, és ugyanolyan nagyságrendű hatékonyságot mutatnak, mint a szabad vegyületek. A találmány oltalmi köre ki*

I ·· · ·

« ·

9999

9 9 9

9 « ·»· 99

9 9

9· · terjed olyan gyógyászati készítményekre is, amelyek a találmány szerinti vegyületeket szabad bázis alakjában vagy gyógyászatilag elfogadható só vagy komplex alakjában tartalmazzák gyógyászatilag elfogadható higítószerekkel vagy hordozóanyagokkal együtt. Az ilyen kompozíciókat a szokásos módon állíthatjuk eló. Egységdózisformák célszerűen körülbelül 0,025-250 mg mennyiségben tartalmazzák a találmány szerinti vegyületet gyógyászatilag elfogadható higítószerrel vagy hordozóval együtt.

A találmány szerinti vegyületeket bármilyen szokásos úton adagolhajtuk, például parenterálisan, pl. injektálható oldatok vagy szuszpenziók alakjában, vagy pedig nazálisán vagy végbélkúp alakjában. A találmány szerinti vegyületeket ezenkívül adagolhatjuk helyileg is, például krém, gél vagy hasonló alakban, például a bor kezelésére vagy a hajnövekedés elősegítésére, miként ezt fentebb már leírtuk.

A fentebb mondottak szerint a találmány oltalmi köre kiterjed:

a) a találmány szerinti vegyületek vagy azok gyógyászatilag elfogadható sói vagy komplexei felhasználására gyógyszerként;

b) a fentebb jelzett állapotok és rendellenességek megelőzését vagy kezelését szolgáló módszerre az ilyen kezelésre szoruló egyéneken; ez a módszer abban áll, hogy az említett egyénnek a találmány szerinti vegyületből vagy annak gyógyászatilag elfogadható sójából vagy komplexéből hatásos mennyiséget adagolunk;

• · ···· ·· ·· • · · · · · · • · · · · · · • · · · · · «··· ·· ·« ·

c) a találmány szerinti vegyületek vagy azok gyógyászatilag elfogadható sói vagy komplexei felhasználására az elózó b) szerinti módszerben felhasználható gyógyászati készítmény előállítására.

A találmány szerinti vegyületeket felhasználhatjuk egyéb gyógymódok kiegészítőjeként vagy segítőjeként, például hiperkalcémia (a vérben fokozott kalcium-tartalom) esetén olyan gyógymód kiegészítésére, amelyben csontfelszívódás-inhibitort használnak, különösen kalcitonint vagy annak analógját vagy származékát, pl. lazac-, angolna- vagy humán kalcitonint, bifoszfonátot, diuretikumot vagy ezek kombinációját alkalmazó terápia esetén, vagy tumor-terápia, citosztatikumokat alkalmazó terápia vagy ezek kombinációja esetén.

Az előzőekben mondottak alapján a találmány oltalmi köre kiterjed még:

d) hiperkalcémia megelőzési vagy kezelési módszerére, például a fentebb felsorolt sajátos állapotok vagy betegségek megelőzésére vagy kezelésére az ilyen kezelésre rászoruló egyénben; ez a módszer abban áll, hogy az említett egyénnek a) a találmány szerinti vegyület és b) egy második gyógyszer hatású anyag hatásos mennyiségét adagoljuk, ahol az említett második gyógyszer hatású anyag a fentebb említett gyógyászati hatóanyag.

A 36., a 37. és a 49. példa szerinti vegyületek előnyösek minden olyan állapot megelőzésére vagy kezelésére, ame- 28 lyet a túlzott mértékű PTH- vagy PTHrP-felszabadulás által előidézett, megnövekedett plazma-kalciumszint idéz elő.

• · · ·

Claims

Szabadalmi igénypont

1. PTH- vagy PTHrP-vegyületek, amelyekben a 2-es és a 10-es helyzetben helyzetben a természetben előforduló aminosav-maradékok közül legalább az egyiket triptofán vagy egy másik olyan aminosavmaradék helyettesíti, amely oldalláncában egy aromás vagy heteroaromás csoportot visel, és adott esetben a 3as és a 6-os helyzetekben a természetben előforduló aminosavmaradékok közül legalább az egyik triptofánnal vagy egy másik olyan aminosavmaradékkal van helyettesítve, amely oldalláncában egy aromás vagy heteroaromás csoportot hordoz, szabad alakban vagy só vagy komplex alakjában.
2. PTH- vagy PTHrP-vegyületek, amelyekben a 10-es helyzetben a természetben előforduló aminosavmaradék triptofánnal vagy egy másik olyan aminosavmaradékkal van helyettesítve, amely oldalláncában egy aromás vagy egy heteroaromás csoportot hordoz, és adott esetben a 3-as és a 6-os helyzetben a természetben előforduló aminosavmaradékok közül legalább az egyik még triptofánnal vagy egy másik olyan aminosavmaradékkal van helyettesítve, amely oldalláncában egy aromás vagy egy heteroaromás csoportot hordoz, szabad alakban vagy só vagy komplex alakjában.
3. Az 1. igénypont szerinti vegyületek, amelyekben az oldalláncán egy aromás vagy heteroaromás csoportot hordozó aminosavmaradék oldallánca egy adott esetben gyűrűn szubsz·· ···· · · · · • · · β · · · • · · · · · · • · · · · · ·· · tituált 3- vagy 4-piridil-metilcsoport, 3-indolil-metilcsoport vagy 3-indazolil-metil-csoport vagy egy (a) , (b) , (c) vagy (d) általános képletű csoport, amelyben

n jelentése 1 vagy 2, m jelentése 1 vagy 2, 0 jelentése 0 vagy 1, A jelentése adott esetben egy vagy több fluoratommal,

klóratommal, nitrocsoporttal, Ci_4 alkilcsoporttal vagy Cj_4 alkoxicsoporttal szubsztituált gyűrű, ahol két alkilcsoport vagy két alkoxicsoport szubsztituens együtt egy olyan gyűrűt képezhet, amely az A gyűrűvel kondenzálva van, a B és C gyűrűk egymástól függetlenül szubsztituálva lehetnek ugyanolyan módon, mint ahogyan azt fentebb az A gyűrűvel kapcsolatban megadtuk, és

Y_a jelentése közvetlen kötés, -CH2-, O, NH vagy N-C^-g alkil-csoport.
4. Az 1. igénypont szerinti, (I) általános képletű vegyületek, ahol a képletben x jelentése 31, 34, 35, 36, 37 vagy 38, y jelentése 1, 2, 3, 4, 5, 6 vagy 7,

X² jelentése Val, vagy pedig függetlenül X¹⁰ valamelyik jelentésével rendelkezik,

X³ jelentése Ser, vagy pedig függetlenül X¹⁰ valamelyik jelentésével rendelkezik,

X⁶ jelentése Gin, vagy pedig függetlenül X¹⁰ valamelyik jelentésével rendelkezik,

R¹⁰ jelentése Asp vagy X¹⁰, ahol X¹⁰ jelentése Trp vagy a · · a · · · • a a a a · a ····*···· *

- 31 -NH-CHR'-C0-, ahol R' jelentése (a), (b), (c) vagy (d) általános képletü csoport, ahol n jelentése 1 vagy 2, m jelentése 1 vagy 2, o jelentése 0 vagy 1,

A jelentése adott esetben egy vagy több fluoratómmal, klóratommal, nitrocsoporttal, Cj__4 alkilcsoporttal vagy C^_4 alkoxicsoporttal szubsztituált gyűrű, ahol két alkilcsoport vagy két alkoxiesoport szubsztituens együtt egy olyan gyűrűt képezhet, amely az A gyűrűvel kondenzálva van, a B és C gyűrűk egymástól függetlenül szubsztituálva lehetnek ugyanolyan módon, mint ahogyan azt fentebb az A gyűrűvel kapcsolatban megadtuk, és

Y_a jelentése közvetlen kötés, -CH2-, O, NH vagy N-C^-g alkil-csoport,

D jelentése PTHrP vagy PTH N-terminális fragmentumából származó aminosav-szekvencia, p, q és s jelentése egyaránt 1, feltéve, hogy p 0, amikor y > 2, q jelentése 1, amikor y > 3, és s 0, amikor y > 6,

R jelentése H, R-CO-, R-O-CO-, R-O-CH₂-CO-, R-SO₂-,

R'·', R'''-NH-CO-, R'''-NH-CS- vagy NH₂-C₁_₆ alkilén-C0-, ahol R jelentése C^g alkilcsoport; ω-karboxi-Ci_g alkilcsoport;u-[(Cj_4 alkoxi)-karbonil]-C^-g alkil-csoport; C₂_g alkenilcsoport; Cg_7 cikloalkilcsoport; 05-7 cikloalkil-Ci_4 alkil-csoport; vagy • · · · • · · · · · · • · · · · · · • · · · · ·

I ···· ·· ·· w

- 32 fenilcsoport, fenil-Ci_4 alkil-csoport, 1-naftilcsoport, 2-naftilcsoport, l-naftil-Ci_₂ alkil-csoport vagy 2-naftil-C₁_₂ alkil-csoport, amelyek mindegyike adott esetben a gyűrűn egy vagy több fluoratommal, klóratommal, nitrocsoporttal, 0χ_4 alkilcsoporttal vagy 0χ_4 alkoxicsoporttal szubsztituálva lehet; heteroarilcsoport; és

R''' jelentése függetlenül az R” szubsztituens kapcsán megadott jelentésekkel azonos, kivéve az u> -karboxi-Cj-g alkil-csoport és az í*j- [(C1-4 alkoxi)-karbonil]-Cj.g alkil-csoport jelentést; és

R_a jelentése OH vagy NH₂, azzal a megkötéssel, hogy X² és R¹⁰ közül legalább az egyiknek a jelentése megyegyezik X¹⁰ valamelyik jelentésével.
5. Az 1. vagy a 4. igénypont szerinti vegyület, amely a hPTH vagy hPTHrP N-terminális fragmentumából származik.
6. Az 1. igénypont szerinti alábbi vegyületek:

N^a-2-naftil-acetil-[Nal(2)¹⁰,DAla³⁴]hPTHrP(3-34)NH2, N^a-2-naftil-acetil-[Nal(2)¹⁰]hPTHrP(3-31)NH2,

N“-szukcinil-[Phe⁶,Nal(2)¹⁰]hPTHrP(5-34)NH₂.
7. Eljárás az 1. igénypont szerinti vegyületek előállítására szabad alakban vagy só vagy komplex alakjában, azzal jellemezve, hogy

a) legalább egy olyan védőcsoportot eltávolítunk, amely jelen van egy találmány szerinti PTHrP- vagy PTHvegyületben, például egy (I) általános képletű vegyületben, annak védett alakjában; vagy

b) amidkötéssel összekapcsolunk védett, részben védett

t.

Λ • · · · vagy védetlen alakú két peptidfragmentumot, amelyek olyanok, hogy a kívánt PTHrP- vagy PTH-vegyület, például az (I) általános képletű vegyület aminosavszekvenciáját kapjuk, majd adott esetben az eljárás a) lépését hajtjuk végre, vagy

c) a kívánt szekvencia vagy N-terminális fragmentum Nterminális maradékának védett vagy védetlen alakban levő aminocsoportjához szelektív módon egy védőcsoportot vagy szubsztituenst adunk, majd adott esetben elvégezzük az a) lépés szerinti műveletet, és szabad alakban, só alakjában vagy komplex alakban kinyerjük az így kapott PTHrP- vagy PTH-vegyületeket.
8. Az 1. igénypont szerinti vegyületek szabad alakban vagy fiziológiailag elfogadható só alakjában gyógyszerként való felhasználásra.
9. Gyógyászati kompozíció, amely egy az 1. igénypont szerinti vegyületet szabad alakban vagy fiziológiailag elfogadható só alakjában tartalmaz egy gyógyászatilag elfogadható hgítószerrel vagy hordozószerrel együtt.
10. Egy 1. igénypont szerinti vegyület szabad alakban vagy fiziológiailag elfogadható só alakjában gyógyszerként való felhasználásra, egy további gyógyhatású anyaggal együtt, amely csontfelszívódásgátló és citosztatikus anyag lehet.