HUT77034A - Oligonucleotide conjugates, compositions and methods for splitting ribonucleic acids - Google Patents

Description

SVÁJCSWITZERLAND

A nemzetközi bejelentés száma: PCT/EP95/03408International Application Number: PCT / EP95 / 03408

A nemzetközi közzététel száma: WO 96/07667International Publication Number WO 96/07667

A találmány tárgyát olyan oligonukleotid konjugátumok képezik, amelyekben az oligonukleotid dezoxiribonukleinsav, nem természetes, szintetikus nukleotid vagy peptidnukleinsav építőelemekből épül fel, az oligonukleotidhoz átészterező vagy hidrolizáló katalizátor — előnyösen texafirin-fém-komplex — kötődik, és az oligonukleotid belső szekvenciája részben nem-komplementer egy természetben előforduló cél-RNS-sel.The present invention relates to oligonucleotide conjugates in which the oligonucleotide is composed of a deoxyribonucleic acid, a non-naturally occurring synthetic nucleotide or a peptide nucleic acid, a transesterification or hydrolyzing catalyst, preferably a texaphyrin-metal complex, in a non-oligonucleotide complex, with naturally occurring target RNA.

A találmány szerinti oligonukleotid konjugátumok kiválóan alkalmasak komplementer cél-RNS hasítására, ahol az oligonukleotid a hasítási reakció után újra szabaddá válik és ezáltal katalitikus hatást fejt ki.The oligonucleotide conjugates of the invention are well suited for cleavage of complementary target RNA, whereby the oligonucleotide is re-released after the cleavage reaction and thereby exerts a catalytic effect.

Gyógyászatban diagnosztikai és terápiás célra alkalmazható.It can be used in medicine for diagnostic and therapeutic purposes.

c (°)A( v 9c (°) A (v 9

63.455/PA63 455 / PA

II-,II.

Tíleíon: 34 ^;‘H ko-HaThiol: 34 ^; 'H ko-Ha

·. Andrássy úí ι1 ,·. Andrássy ú ι1,

-24-950, Fax: 34-24-323-24-950, Fax: 34-24-323

Ribonukleinsavak hasítására szolgáló oligonukleotid konjugátumok, készítmények és eljárásOligonucleotide Conjugates, Compositions and Method for Cleavage of Ribonucleic Acids

Novartis AG, BÁZEL, SVÁJCNovartis AG, Basel, Switzerland

Feltalálók: HÜSKEN, Dieter, Inventors: HÜSKEN, Dieter, FREIBURG, FREIBURG, NÉMETORSZÁG GERMANY MOSER, Heinz, MOSER, Heinz, MÖHLIN, Mohlin, SVÁJC SWITZERLAND HÁNER, Róbert, HÁNER, Róbert, FEHREN, Fehr, SVÁJC SWITZERLAND HALL, Jonathan, HALL, Jonathan, DONNERBÜHLWEG, SVÁJC DONNERBÜHLWEG, SWITZERLAND

A bejelentés napja:Date of filing:

19951995

Elsőbbségepriority

1994. 09. 02. (2694/94-5),02.09.1994 (2694 / 94-5),

SVÁJCSWITZERLAND

A nemzetközi bejelentés száma: PCT/EP95/03408International Application Number: PCT / EP95 / 03408

A nemzetközi közzététel száma: WO 96/07667International Publication Number WO 96/07667

A találmány tárgyát képezik átészterező vagy hidrolizáló katalizátorokkal rendelkező oligonukleotid konjugátumok, amelyeknek az oligonukleotid-szekvenciája részben nem-komplementer egy természetben előforduló cél-ribonukleinsavval (cél-RNS); eljárás cél-RNS szekvencia-specifikus hasítására fiziológiai körülmények között és az oligonukleotid-asszociátum hatására; inért hordozó anyagból és az oligonukleotid-asszociátumból álló készítmény ugyanúgy, mint ezek alkalmazása.The present invention relates to oligonucleotide conjugates having transesterification or hydrolyzing catalysts, the oligonucleotide sequence of which is partially non-complementary to a naturally occurring target ribonucleic acid (target RNA); a method for sequence-specific cleavage of target RNA under physiological conditions and by the oligonucleotide association; a composition comprising an inert carrier and an oligonucleotide association as well as their use.

Egyszálú RNS-ek hidrolitikus hasítása fémionok katalitikus hatására már régóta ismert. A hasítás alapvetően az RNS pár nélküli — angolul „loop-nak (huroknak) nevezett — részén következik be. Krzyzosiak és munkatársai az ólom-diacetát használatát ajánlják [ Biochemistry 27, 5771-5777 (1988)] . Murakawa és munkatársai az 1,1O-fenantrolin réz komplexeinek bevetését írják le [ Nucleic Acid Research 17, 5361-5375 (1989)] . Ugyanezen alkalma_z Phe zás céljára, tRNS hasitasara Ciesiolka és munkatársai az európium-trikloridot teszik közzé [Eur. J. Biochem. 182, 445-450 (1989)] . Chow és munkatársai ugyanezen RNS-hez ruténium- és ródium-komplexeket használnak fenantrolin ligandumokkal [ J. Am.Hydrolytic cleavage of single-stranded RNAs by the catalytic action of metal ions has long been known. The cleavage occurs essentially in the unpaired part of the RNA, called the "loop". Krzyzosiak et al., 1988, recommend the use of lead diacetate (Biochemistry 27, 5771-5777). Murakawa et al. (1989) describe the use of copper complexes of 1,1O-phenanthroline (Nucleic Acid Research 17, 5361-5375). The same applied for _z Phe tion, tRNA cleaving Ciesiolka et europium trichloride published [Eur. J. Biochem. 182: 445-450 (1989)]. Chow et al. Use ruthenium and rhodium complexes for the same RNA with phenanthroline ligands [J. Am.

Chem. Soc. 112, 2839-2841 (1990)] . Behlen és munkatársai ólomPhe diacetáttal létrehozott tRNS mutánsokat említenek [ Biochemistry 29, 2515-2523 (1990)] . Továbbá Hayashi és munkatársai leírják [ Inorg. Chem. 32, 5899-5900 (1993)] , hogy tRNS-ek hasítására lantanida fénomplexek is alkalmasak.Soc., 112, 2839-2841 (1990). Behlen et al. Refer to tRNA mutants created with leadPhe diacetate (Biochemistry 29, 2515-2523 (1990)). Further, Hayashi et al., Inorg. Chem. 32: 5899-5900 (1993)] that lanthanide phene complexes are also suitable for cleavage of tRNAs.

Kappen és munkatársai [Biochemistry 32, 13138-13145 (1993) leírják, hogy egy- vagy kettősszálú DNS-nek neokarcinosztatinnal történő oxidatív hasításánál azután egy helyzetspecifikus hasítás következik be, amikor például pár nélküli részek egy DNS szálon kitüremkedéshez vezetnek. Williams és munkatársai [ Nucleic Acid Research 16, 11607-11615 (1988)] azt teszik közzé, hogy kettőszálú DNS-nek réz-fenantrolinnal való hidrolitikus reakciójánál a hasítás előnyösen olyan helyeken következik be, amelyek kiegészítésként egy pár nélküli citidint tartalmaznak a láncban.Kappen et al., Biochemistry 32, 13138-13145 (1993) disclose that oxidative cleavage of single or double-stranded DNA with neocarcinostatin is followed by a site-specific cleavage where, for example, unpaired portions lead to protrusions on a DNA strand. Williams et al., Nucleic Acid Research 16: 11607-11615 (1988) disclose that cleavage of double-stranded DNA with copper phenanthroline preferably occurs at sites which additionally contain an unpaired cytidine in the chain.

A DE-A 2451358 számú szabadalmi iratban már leírják, hogy az egy kettősszálú (rl_n. rC_n)-komplexszel történő utánzott interferon képződésénél csökken a toxicitás az interferon termelődés fennmaradása alatt, ha az rC_n-lánc módosításával szerkezeti zavart idézünk elő oly módon, hogy az rC_n-lánc a sejtekben nukleázok által könnyebben hidrolizálódjon. Szerkezeti zavarként egy olyan nukleotid bevezetését ajánlják, amely megakadályozza a komplexben a párképződést. Meg kell még említeni, hogy Kolasa és munkatársai [Inorg. Chem. 32, 3983-3984 (1993)] rámutatnak, hogy DNSRNS hibridekben az RNS-ek háromértékű lantanid ionokkal nem hasadnak .DE-A 2451358 already discloses that formation of mimicked interferon by a double-stranded (rl _n . RC _n ) complex reduces toxicity during the maintenance of interferon production by structural alteration of the rC _n chain to facilitate the hydrolysis of the rC _n chain by nucleases in cells. It is recommended to introduce a nucleotide that prevents mating in the complex as a structural disorder. It should also be noted that Kolasa et al., Inorg. Chem. 32, 3983-3984 (1993)] indicate that RNAs in DNARNA hybrids do not cleave with trivalent lanthanide ions.

Továbbá leírták, hogy európium(III)-texafirin-ből és DNS építőköveket tartalmazó oligonukleotidokból álló konjugátumok cél-RNS-t hasítani képesek, ahol az RNS/oligonukleotid komplexben a texafirin-komplexek területén csupán körülbelül 30%-os megnövekedett hasítás figyelhető meg [D. Magda et al., J. Am. Chem. Soc. 116, 7439-7440 (1994)] . Ezeknél a texafirin-komp4 lexeknél hátrányos még az is, hogy a ligandumokhoz kiegészítésként hidroxi-propil-csoportot kell kötni, amellyel kielégítő oldhatóságot biztosítunk. Továbbá a ligandumok iminocsoportjai hidrolízisre hajlamosak, így vizes környezetben a hatékonyság gyorsan alábbhagy, illetve túl csekély tartózkodási idővel rendelkezik terápiás felhasználáshoz. A ligandumok hidrolízise révén ráadásul a fém szabaddá válik, amely komoly toxikológiai problémát és az RNS nem-specifikus hasítását idézheti elő. Továbbá ezek gyenge Lewis-savak, mivel az Eu-kationoknak egy töltését egy ligandum semlegesíti és ezáltal egy kettős töltésű komplex jön létre. A vázolt komplexek ezenfelül csak szintetikus, költséges eljárásokkal kaphatók meg.Further, it has been reported that conjugates of europium (III) texafirin and oligonucleotides containing DNA building blocks are capable of cleavage of target RNA, with only about 30% increased cleavage of the texafirin complexes in the RNA / oligonucleotide complex [D . Magda et al., 1994, J. Am. Chem. Soc. 116, 7439-7440. These texaphyrin complex lexes also have the disadvantage that the ligands have to be supplemented with a hydroxypropyl group to provide satisfactory solubility. In addition, the imino groups of the ligands are prone to hydrolysis, so that in an aqueous environment, efficacy diminishes rapidly and has too little residence time for therapeutic use. In addition, the hydrolysis of the ligands also liberates the metal, which can cause serious toxicological problems and non-specific cleavage of RNA. Furthermore, they are weak Lewis acids, since one charge of the E cations is neutralized by a ligand and thus a double charged complex is formed. In addition, the complexes outlined can only be obtained by synthetic, costly processes.

A WO 94/29316 közzétételi számú nemzetközi szabadalmi bejelentés nyilvánosságra hoz egy foszfát-észter hidrolízisére szolgáló eljárást oligonukleotidnak texafirin-fém-komplexszel alkotott konjugátuma felhasználásával. Egy példában olyan konjugátumokat írnak le, amelyek fémként diszprózium(III)-at tartalmaznak, és amelyeknek az oligonukleotid-szekvenciáját úgy választják meg, hogy az oligonukleotid-szekvenciá kötődése a cél-RNShez ennél egy vagy több nukleotidból álló hurkot hoz létre.WO 94/29316 discloses a process for hydrolysis of a phosphate ester using a conjugate of an oligonucleotide with a texaphyrin metal complex. In one example, conjugates are described which contain dysprosium (III) as a metal and whose oligonucleotide sequence is chosen such that binding to the target RNA produces a loop of one or more nucleotides.

Ismert, hogy sejtekben a fiziológiailag károsodott polipeptidek keletkezése a gének által irányított mRNS képződéséből következik. Betegségek legyőzésére illetve megakadályozására ezért kívánatosak olyan szerek, amelyek a mRNS hatását megakadályozzák. Különösen azt kell elérni, hogy a mRNS-t egy meghatározott helyen irreverzibilis hasítás révén tönkretegyük és ezáltal az i::rmació-tartalom elvész. Továbbá kívánatos az RNS láncoknak * Λ szekvencia-specifikus hasítása révén olyan széttört darabok előállítása, amelyek megfelelő oligonukleotidoknak az „antiszenzterületen történő gyorsabb azonosítására, diagnosztikai célra (bioszenzorok), vagy a sejtben végbemenő anyagcsere-folyamatok befolyása alatt álló betegségek gyógyítására alkalmazhatók.It is known that the formation of physiologically damaged polypeptides in cells results from the generation of gene-driven mRNA. Agents that inhibit the action of mRNA are therefore desirable for overcoming or preventing disease. In particular, it must be achieved that the mRNA is destroyed at a particular site by irreversible cleavage, thereby losing the expression content. Further, it is desirable to produce ruptured fragments by sequence-specific cleavage of RNA chains that can be used to identify suitable oligonucleotides more rapidly in the "antisense region", for diagnostic purposes (biosensors) or for the treatment of diseases under the influence of cellular metabolism.

A fent említett szerekkel szemben magas követelményeket állítanak. A cél-RNS-sel specifikusan hibridizálniuk kell és nem befolyásolhatnak más előforduló DNS és/vagy RNS molekulákat. Különösen hatásosnak kell lenniük már kis mennyiségekben is, és stabilnak kell lenniük a test saját immunanyagai (például nukleázok) által okozott lebontással szemben.High requirements are set for the above mentioned agents. They must specifically hybridize with the target RNA and must not affect other DNA and / or RNA molecules that occur. They must be particularly effective even in small amounts and must be stable to the degradation caused by the body's own immune substances (such as nucleases).

Azt találtuk, hogy olyan oligonukleotidok, amelyeknek a szekvenciája csak részben komplementer egy cél-RNS-sel, és amelyekhez egy átészterező vagy hidrolizáló katalizátor kötődik, nagyon hatásosak és velük egy cél-RNS-ben akár szekvencia-specifikus hasítások is elvégezhetők. Továbbá azt találtuk, hogy öszszehasonlítható reakció körülmények között jelentősen kevesebb oligonukleotid-átészterező katalizátor szükséges, mint szabad, tehát nem oligonukleotidhoz kötődő átészterező katalizátor. A cél-RNS-nek kettősszálú területen történő hasítása révén az RNS/oligonukleotid komplexek instabilitása az RNS hasítása után erősen megnő és megkönnyíti a szabad RNS darabokra és a szabad oligonukleotidból és hidrolízis ill. átészterező katalizátorból álló - konjugátumra történő szétesést. Ennek következtében kibontakozhat a konjugátum katalitikus aktivitása és a bevetési mennyiségek jelentősen csökkenthetők.It has been found that oligonucleotides whose sequence is only partially complementary to a target RNA to which a transesterification or hydrolyzing catalyst is attached are very effective and can even perform sequence-specific cleavage in a target RNA. Furthermore, it has been found that under comparable reaction conditions significantly less oligonucleotide transesterification catalyst is required than free, i.e. non-oligonucleotide binding, transesterification catalyst. By cleavage of the target RNA in the double-stranded region, the instability of the RNA / oligonucleotide complexes after RNA cleavage is greatly increased and facilitated by free RNA fragments and by free hydrolysis and hydrolysis. disintegration to a conjugate consisting of a transesterification catalyst. As a result, the catalytic activity of the conjugate can be unfolded and the application rates can be significantly reduced.

A találmány tárgyát dezoxiribonukleotidokból (NS), nem tér• · · mészetes szintetikus nukleotidokból vagy peptid-nukleinsavakból (PNS) álló oligonukleotid képezi, amelyben az oligonukleotid átészterező vagy hidrolizáló katalizátorhoz kötődik, és az oligonukleotidok belső szekvenciája részben nem-komplementer egy természetben előforduló cél-RNS-sel.The present invention relates to an oligonucleotide consisting of deoxyribonucleotides (NS), non-naturally occurring synthetic nucleotides or peptide nucleic acids (PNS) in which the oligonucleotide is bound to a transesterification or hydrolyzing catalyst and the internal sequence of the oligonucleotides is partially non-naturally complementary. RNA.

A találmány keretein belül a cél-RNS azt jelenti, hogy a célpontban egy RNS szekvenciának kell lennie. Ennek megfelelően rendelkezésre állhatnak poli-ribonukleinsavak (poli-RNS-ek). Előnyösen mRNS-ről (messenger RNS) , elő-mRNS-ről, tRNS-ről (transzfer RNS), snRNS-ről (kis nukleáris RNS), rRNS-ről (riboszómális RNS) és vírus RNS-ről van szó. Lehetnek azonban RNS-ből és poli-dezoxiribonukleinsavakból (DNS) álló keverék szekvenciák is, például a kiméra RNS-DNS Okazaki-fragmentum. Az RNS annyi építőelemből áll, hogy az oligonukleotiddal komplex (kettős szál) képződhet.Within the scope of the invention, the target RNA means that the target must have an RNA sequence. Accordingly, poly-ribonucleic acids (poly-RNAs) may be available. Preferably, these are mRNA (messenger RNA), pre-mRNA, tRNA (transfer RNA), snRNA (small nuclear RNA), rRNA (ribosomal RNA) and viral RNA. However, they may also be mixed sequences consisting of RNA and polydeoxyribonucleic acids (DNA), such as the Okazaki fragment of chimeric RNA DNA. RNA consists of so many building blocks that a complex (double strand) can be formed with the oligonucleotide.

A találmány keretein belül a részben nem-komplementer azt jelenti, hogy az oligonukleotid szekvenciája egy szerkezeti zavart tartalmaz oly módon, hogy a cél-RNS megfelelő nukleotid építőelemeivel nem következik be bázispárosodás (például a célRNS-ben és az oligonukleotidban a következő komplementer nukleozidok bázispárosodását jelenti: A-U, T/U-A, G-C és C-G). Egy kiviteli alakban hiányzik a cél-RNS-hez egyébként komplementer oligonukleotid-szekvencia egy vagy több, egymás után következő nukleotid építőeleme. Ezáltal a cél-RNS-ben kitüremkedés keletkezik, amely különösen instabil átészterezésre és/vagy hidrolízisre. Egy másik kiviteli alakban az oligonukleotid egy vagy több, egymás után következő olyan nukleotid építőelemet tártál7 • · « máz, amelyek a cél-RNS megfelelő nukleotid építőelemeivel nem képeznek párt. Az RNS a kettős hélixben bekövetkezett szerkezeti zavar miatt ezeken a területeken átészterező és/vagy hidrolízis reakciókkal szemben instabil. Az oligonukleotidnak előnyösen 110, különösen előnyösen 1-4 és egészen különösen előnyösen 1 vagy 2 egymást követő nukleotidja hiányzik. Egy másik kiviteli alakban az oligonukleotid előnyösen 1-10, különösen előnyösen 14 és egészen különösen előnyösen 1 vagy 2 egymást követő, párt nem képező nukleotidot tartalmaz (ezeket a szerkezeti zavarásokat angolul „internál loop (belső hurok) és „mismatch (hibás párosítás) elnevezésekkel illetik).Partially non-complementary in the context of the invention means that the sequence of the oligonucleotide contains a structural disruption such that there is no base pairing with the corresponding nucleotide building blocks of the target RNA (e.g., base pairing of the following complementary nucleosides in the target RNA and oligonucleotide). : AU, T / UA, GC and CG). In one embodiment, one or more consecutive nucleotide building blocks of an oligonucleotide sequence otherwise complementary to the target RNA are missing. This results in protrusions in the target RNA which are particularly unstable for transesterification and / or hydrolysis. In another embodiment, the oligonucleotide contains one or more consecutive nucleotide building blocks which do not pair with the corresponding nucleotide building blocks of the target RNA. RNA is unstable for transesterification and / or hydrolysis reactions in these regions due to structural disruption in the double helix. Preferably, the oligonucleotide lacks 110, particularly preferably 1-4, and most preferably 1 or 2 consecutive nucleotides. In another embodiment, the oligonucleotide preferably contains from 1 to 10, particularly preferably 14, and very particularly preferably 1 or 2 consecutive nonpaired nucleotides (referred to as "inter-loop" and "mismatch"). entitled).

A találmány keretein belül a belső szekvencia azt jelenti, hogy a szekvenciának például 10, előnyösen 5, különösen előnyösen 3 és egészen különösen előnyösen 1 vagy 2 külső építőeleméig nem kell komplementernek lennie a cél-RNS-sel. Ez olyan vonatkozásban előny lehet, hogy egy szekvencia végéhez kötött átészterező vagy hidrolizáló katalizátor mozgékonyabb és ezáltal hatékonyabb lehet.Within the scope of the invention, the internal sequence means that the sequence does not need to be complementary to the target RNA, for example, up to 10, preferably 5, especially 3, and most preferably 1 or 2 outer building blocks. This may be advantageous in that the transesterification or hydrolysis catalyst attached to the end of a sequence may be more mobile and thus more efficient.

Az oligonukleotid részben vagy teljes egészében felépülhet a cél-RNS-sel komplementer természetes DNS építőelemekből vagy a cél-RNS-sel szintén teljes egészében komplementer nem természetes, szintetikus nukleotidokból, ahol részben azt jelenti, hogy az oligonukleotid-szekvenciában a cél-RNS-sel komplementer természetes DNS építőelemeket szintén komplementer nem természetes, szintetikus nukleotidokkal helyettesítjük. Szintetikus építőelemek felölelik természetes építőelemek módosításait a nukleinbézisban, a furanóz-gyűrűben és/vagy az oligonukleotid hidat ké8 pező csoportjaiban. Szintetikus építőelemeket általában azért építünk be, hogy erősítsük a komplexkötést a duplex-szerkezetben és/vagy megnöveljük az oligonukleotid stabilitását például a nukleázok okozta lebontással szemben. Komplementer oligonukleotidok szintézisére vagy módosítására szolgáló módosított nukleozidok az „antiszenz-technológia területén nagy számban váltak ismertté és ezért azokat itt nem taglaljuk közelebbről [ lásd például E. Uhlmann et al., Chemical Reviews 90(4) , 543-584 (1990)] .The oligonucleotide may be made up, in whole or in part, of natural DNA building blocks complementary to the target RNA or non-naturally occurring synthetic nucleotides also fully complementary to the target RNA, where it means in part that the target RNA in the oligonucleotide sequence complementary natural DNA building blocks are also replaced by complementary unnatural synthetic nucleotides. Synthetic building blocks include modifications of natural building blocks in the nucleobase, furanose ring and / or oligonucleotide bridge moieties. Synthetic building blocks are generally incorporated to enhance complex bonding in the duplex structure and / or to increase the stability of the oligonucleotide, for example, against degradation by nucleases. Modified nucleosides for the synthesis or modification of complementary oligonucleotides have become widely known in the art of "antisense technology" and are therefore not discussed further (see, e.g., E. Uhlmann et al., 1990, Chemical Reviews 90 (4), 543-584).

Módosításként a nukleinbázisban (például szubsztitúciók, szubsztituensek kihagyása), a nukleotid-híd csoportban (például változtatás a foszforsav-észter csoportban vagy annak helyettesítése más hídképző csoportokkal) és a furanóz-gyűrűben (például szubsztitúciók a 2' -hidroxilcsoporton, a furanóz O-atomjának helyettesítése, a furanóz-gyűrű kicserélése mono- vagy dikarbacilgyűrűvel, a furanóz-gyűrű kicserélése nyíltláncú szerkezetekkel) történő változtatások jönnek szóba.As modifications in the nucleic base (e.g., substitutions, omission of substituents), the nucleotide bridge group (e.g., a change in the phosphoric ester group or its substitution with other bridging groups), and the furanose ring (e.g., substitutions on the 2'-hydroxyl group, furan replacement of the furanose ring with a mono- or dicarbacyl ring, replacement of the furanose ring with open-chain structures).

Az építőelemek választékát és sorrendjét az oligonukleotid szekvenciájában egy cél-RNS-sel való szükséges duplexképződés segítségével határozzuk meg. A katalizátor fajtája és kapcsolódási helye is befolyásolhatja az építőelemek választékát és sorrendjét .The selection and order of the building blocks is determined in the oligonucleotide sequence by the required duplex formation with a target RNA. The type and location of the catalyst may also influence the selection and order of the components.

A párt nem képző nukleotidoknál olyan természetes nukleotidokról lehet szó, amelyeket úgy választunk ki, hogy azok nemkomplementerek a cél-RNS nukleotidjaival (a Watson/Crick féle definíciónak megfelelően például az olyan párok, mint A-A, U-U,Non-pair nucleotides can be natural nucleotides that are selected to be non-complementary to the target RNA nucleotides (for example, pairs such as A-A, U-U, as defined by Watson / Crick).

A-G, A-C, G-T, T-U) . A párt nem képző nukleotidoknál azonban szóba jöhetnek nem természetes, szintetikus nukleotidok is. Ezek a nukleotidok lehetnek a nukleotidbázisnál, a nukleotid-foszforsav-észter hídnál vagy a furanóz-gyűrűnél módosítottak. Ilyen típusú módosított és szintetikus, nem-komplementer építőelemek nagy számban váltak ismertté és a szakember számára közismertek. Egy előnyben részesített kiviteli alakban az oligonukleotid nem természetes komplementer nukleotidokból épül fel, ahol az oligonukleotid különösen előnyösen nem-komplementer nem természetes építőelemeket is tartalmaz.A-G, A-C, G-T, T-U). However, non-paired nucleotides may also include non-natural synthetic nucleotides. These nucleotides may be modified at the nucleotide base, at the nucleotide-phosphoric acid ester bridge, or at the furanose ring. Modified and synthetic non-complementary building blocks of this type have become known in large numbers and are well known in the art. In a preferred embodiment, the oligonucleotide is made up of non-natural complementary nucleotides, wherein the oligonucleotide is particularly preferably composed of non-complementary non-natural building blocks.

Az építőelemek számát az oligonukleotidban úgy mérjük meg, hogy hibridizációt végzünk a cél-RNS-sel. Az oligonukleotidok tartalmazhatnak például 5-100, előnyösen 5-50, különösen előnyösen 8-30 és egészen különösen előnyösen 10-25 építőelemet. Azok a területek, amelyek a cél-RNS-sel való párképződést megakadályozzák (hiányzó illetve párt nem képző nukleotid építőelemek), előnyösen az oligonukleotid középső szekvenciáiban helyezkednek el, például a szekvenciának a mindenkori utolsó előtti negyedik vagy a mindenkori utolsó előtti harmadik vagy a mindenkori utolsó előtti vagy a mindenkori utolsó építőelemei között. Egy 20 építőelemből álló oligonukleotidnál például hiányoznak, vagy párt nem képző építőelemek találhatók előnyösen a negyediktől a tizenhetedik építőelemig terjedő területen. A találmány szerint olyan oligonukleotidokat részesítünk előnyben, amelyekben nukleotidok hiányoznak.The number of building blocks in the oligonucleotide is measured by hybridization with the target RNA. The oligonucleotides may contain, for example, 5-100, preferably 5-50, particularly preferably 8-30, and most preferably 10-25 building blocks. The regions which prevent pairing with the target RNA (missing or unpaired nucleotide building blocks) are preferably located in the middle sequences of the oligonucleotide, for example the fourth to last or third to last last or the last to last RNA. or the last building blocks of the time. For example, an oligonucleotide of 20 building blocks is absent or non-pair building blocks are preferably located in the region of the fourth to the seventeenth building block. Oligonucleotides which lack nucleotides are preferred according to the invention.

Előnyben részesítjük a purin és pirimidin sorozat nukleozidjaiból felépülő oligonukleotidokat. Különösen előnyben részesítjük a 2' -dezoxi-2-amino-adenozinból, 2' -dezoxi-5-metil-citidin10Preference is given to oligonucleotides consisting of the nucleosides of the purine and pyrimidine series. Particularly preferred is 2'-deoxy-2-aminoadenosine, 2'-deoxy-5-methylcytidine10

* · a a • .·· ··. :·· ··· ·»·.·· bői, 2' -dezoxiadenozinból, 2' -dezoxicitidinből, 2' -dezoxiuridinből, 2' -dezoxiguanozinból és 2' -dezoxitimidinből felépülőket. Egészen különösen előnyben részesítjük a 2' -dezoxiadenozint (A), 2' -dezoxicitidint (C) , 2' -dezoxiguanozint (G) és 2' -dezoxitimidint (T). Módosított építőelemek előnyösen adenozinból, citidinből, guanozinból, 2-amino-adenozinból, 5-metil-citozinből, timidinből és az előzőekben megnevezett dezoxi-származékokból vezethetők le. A nukleozidoknál 2' -módosított ribonukleozidok is szóba jöhetnek.* · A a •. ·· ··. : ·· ··· · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ·, ·, ·, are composed of 2 'deoxyadenosine, 2' deoxycytidine, 2 'deoxyguanosine and 2' deoxythymidine. Particularly preferred are 2'-deoxyadenosine (A), 2'-deoxycytidine (C), 2'-deoxyguanosine (G), and 2'-deoxythymidine (T). Modified building blocks are preferably derived from adenosine, cytidine, guanosine, 2-aminoadenosine, 5-methylcytosine, thymidine and the aforementioned deoxy derivatives. For nucleosides, 2 '-modified ribonucleosides may also be contemplated.

A találmánynak egy egészen különösen előnyben részesített kiviteli alakjában a cél-RNS-sel részben komplementer oligonukleotid (1) természetes dezoxinukleozidokból — különösen előnyösen a 2' -dezoxiadenozint (A) , 2' -dezoxicitidint (C) , 2' -dezoxiguanozint (G) és 2' -dezoxitimidint (T) tartalmazó csoportból — vagy komplementer nem természetes szintetikus építőelemekből épül fel, és (2) a csak részben komplementer sajátság előnyösen 1-4, különösen előnyösen 1-3, és egészen különösen előnyösen 1-2 építőelem hiánya révén jön létre az egyébként komplementer szekvenciában. A találmány keretein belül különösen előnyben részesítünk ilyen módosított nukleozidokat, amelyek megnövelik az oligonukleotid stabilitását nukleázokkal szemben.In a very particularly preferred embodiment of the invention, the oligonucleotide (1), which is partially complementary to the target RNA, is derived from natural deoxynucleosides, most preferably 2'-deoxyadenosine (A), 2'-deoxycytidine (C), 2'-deoxyguanosine (G). and 2'-deoxythymidine (T) - or complementary non-natural synthetic building blocks, and (2) the only partially complementary property is preferably lacking 1-4, especially 1-3, and most preferably 1-2 building blocks. is generated in an otherwise complementary sequence. Particularly preferred within the scope of the invention are such modified nucleosides which enhance the stability of the oligonucleotide against the nucleases.

Az oligonukleotid peptidnukleinsavak (PNS) szekvenciáiból is állhat, ahol a katalizátor előnyösen a nukleinbázishoz, az amino- vagy a karboxi-elágazáshoz kötött. A nukleinbázisok a peptid-szekvencia amid-N-atomjához kötöttek. A komplementer szekvencia állhat természetes vagy nem természetes szintetikus aminosav építőelemekből, ahol az előzőekben leírt nem-komplementer • · β sajátság építőelemek elhagyása révén vagy nem-komplementer építőelemek beépítése révén érhető el. A PNS szekvencia felépítésére ugyanazok az előnyben részesítések érvényesek, mint az oligonukleotidokra. PNS-ekre példák találhatók a Science 254, 14971500 publikációban.The oligonucleotide may also comprise sequences of peptide nucleic acids (PNS), wherein the catalyst is preferably linked to a nucleic base, an amino or a carboxy branch. Nucleic bases are linked to the amide N atom of the peptide sequence. The complementary sequence may consist of natural or non-natural synthetic amino acid building blocks, whereby the non-complementary? · Β property described above can be achieved by omitting the building blocks or by inserting non-complementary building blocks. The same preferences as for oligonucleotides apply to the construction of the PNS sequence. Examples of PNSs are found in Science 254, 14971500.

Átészterező és/vagy hidrolizáló katalizátor adott esetben kötődhet hidat képező csoporton keresztül N-, S- vagy O-atomokhoz az oligonukleotid-szekvencia 3’ vagy 5’ végcsoportjaiban. A katalizátorok kötődhetnek azonban nukleinbázisok C-, N- vagy 0atomjaihoz a szekvencia belsejében vagy végén, 0-, S- vagy Natomokhoz furanóz-gyűrűk 2’-helyzetében a szekvencia belsejében vagy végén, vagy a nukleotid hídképző csoportjának 0-, S- vagy N-atomjaihoz a szekvencia belsejében. A kötés jellege a katalizátor típusától és funkciós csoportjainak fajtájától függ. Egy katalizátor molekula például közvetlenül vagy hídképző csoporton keresztül kötődhet az oligonukleotidhoz. Hídképző csoport lehet például egy olyan átalakított funkciós csoport, amely a maga részéről közvetlenül vagy összekötő csoporton keresztül képes a katalizátorhoz és/vagy az oligonukleotidhoz kötődni. Az oligonukleotidhoz való kötődés lehet ionos és előnyösen kovalens. A katalizátorok kötődhetnek egy karbociklusos nukleotid-analóg 6’szénatomjához is.The transesterification and / or hydrolyzing catalyst may optionally be bonded via a bridging group to N, S or O at the 3 'or 5' end groups of the oligonucleotide sequence. However, the catalysts may bind to the C-, N- or O-atoms of the nucleic bases inside or at the end of the sequence, to the O-, S- or Natomes at the 2'-position of the furanose rings, or to the O-, S- or N- atoms within the sequence. The nature of the bond depends on the type of catalyst and the type of functional groups. For example, a catalyst molecule can bind directly to the oligonucleotide or via a bridging group. For example, the bridging group may be a modified functional group which is capable of binding itself to the catalyst and / or to the oligonucleotide, either directly or via a linking group. The binding to the oligonucleotide may be ionic and preferably covalent. The catalysts may also bind to the 6 'carbon atom of a carbocyclic nucleotide analog.

A hídképző csoport előnyösen megfelelhet például az I. általános képletnek,Preferably, the bridging group can be of formula I,

-x₁-x₂-x₃-(x₄)_x- (I.) amelyben X₃ közvetlen kötést vagy olyan kétértékű, 1-22 szénatomos nyíltláncú vagy ciklusos szénhidrogén csoportot, amely meg12 • · · szakítás nélküli vagy az -S-, -NR-, -0(0)-0-, -C(O)-NR- csoportok maradékaival megszakított, vagy 1-12 oxa-alkilén egységet és az alkilénben 2 vagy 3 szénatomot tartalmazó polioxa-alkilénmaradékot jelent; X₂ -0-, -S-, -NR-, -NH-C(0)-NH-, -NH-C (S)-NH-,-x ₁ -x ₂ -x ₃ - (x ₄ ) _x - (I) wherein X _{3 is a} direct bond or a divalent C 1 -C 22 open-chain or cyclic hydrocarbon moiety that is unsubstituted or -S -, -NR-, -O (O) -O-, -C (O) -NR-, interrupted by 1 to 12 oxaalkylene units and a polyoxyalkylene residue containing 2 or 3 carbon atoms in the alkylene; X _{2 is} -O-, -S-, -NR-, -NH-C (O) -NH-, -NH-C (S) -NH-,

-0-C (O)-NH-, -NH-C(O)-O-, -0-C (0)-0-, -0(0)-0-, -C (S) -0-,-O-C (O) -NH-, -NH-C (O) -O-, -O-C (O) -O-, -O (O) -O-, -C (S) -O- .

-0-C(0)-, -O-C(S)-, -C(O)-NR-, -RN-C(O)-, -S (0)-0-,-0-S (0) ₂~,-O-C (O) -, -OC (S) -, -C (O) -NR-, -RN-C (O) -, -S (O) -O-, -O-S (O) ₂ ~,

-S(O)₂-NR-, -NR-S(O)-, -P (0) - (OM)-0-, -0-P (0) - (OM)-, -P(0)-(0M)-NR-, -NR-P (0) - (OM)-, -PH(O)-O-, -O-PH(O)-, -PH(O)-NR- és-S (O) ₂ -NR-, -NR-S (O) -, -P (O) - (OM) -O-, -O-P (O) - (OM) -, -P (O) - (0M) -NR-, -NR-P (O) - (OM) -, -PH (O) -O-, -O-PH (O) -, -PH (O) -NR- and

-NR-PH(O)- csoportokat szemléltet; X₃ függetlenül X_x jelentésével bír és x 0-val azonos, ha X₃ közvetlen kötést szemléltet; X₄ egy nukleozid építőelem 0-, N- vagy C-atomjához való kötődést jelent, vagy X₄ -0-P (0) (OM)-0-, -NR-P (0) (OM)-0-, -0-P (0) (OM)-NR-, vagy -NR-P(O)(OM)-NR- csoportokat szemléltet, ha x 1-gyel azonos és X₃ nem közvetlen kötés; R H-, Cj-Cg-alkil-, fenil- vagy benzilcsoport; Μ H-, C₁-C₆-alkil-, fenil- vagy benzilcsoport, alkálifém kation vagy ammónium kation helyén áll; és x 0 vagy 1.-NR-PH (O) - represents groups; X ₃ independently has the meaning of X _x and is identical to x 0 if X _{3 represents a} direct bond; X _{4 represents} a bond to the O, N or C atom of a nucleoside building block, or X ₄ -O-P (O) (OM) -O-, -NR-P (O) (OM) -O-, - Denotes O-P (O) (OM) -NR- or -NR-P (O) (OM) -NR- groups when x 1 is identical and X _{3 is} not a direct bond; R is H, C 1 -C 8 alkyl, phenyl or benzyl; Áll H, C ₁ -C ₆ alkyl, phenyl or benzyl, alkali metal or ammonium; and x is 0 or 1.

X_T kétértékű szénhidrogén csoportként előnyösen 1-18, különösen előnyösen 1-12 és egészen különösen előnyösen 1-8 szénatomot; és polioxa-alkilén-maradékként — a -CH₂-CH₂-O- és -CH₂-CH(CH₃)-O- csoportból — előnyösen 1-6, különösen előnyösen 1-4 oxa-alkilén egységet tartalmaz. A szénhidrogén csoportnál például lineáris vagy elágazó C₁-C₂₂-alkilén-, előnyösen C₁-C₁₈-alkilén-, különösen előnyösen C₁-C₁₂-alkilén- és egészen különösen előnyösen C₁-C₈-alkilén-; C₃-C₈-cikloalkilén-, előnyösen C₅-vagy Cg-cikloalkilén-; C₆-C₁₂-arilén- vagy C₇-C₁₂-aralkilén-csoportok jöhetnek szóba. Néhány példa kétértékű szénhidrogén csoportokra a metilén-, etilén-, 1,2- vagy 1,3-propilén-, 1,2-, 1,3- vagy • ·X _{T is a} divalent hydrocarbon group preferably having from 1 to 18, particularly preferably from 1 to 12, and very particularly preferably from 1 to 8 carbon atoms; and as a polyoxyaalkylene moiety, it is preferably from 1 to 6, particularly preferably from 1 to 4 oxaalkylene units of -CH ₂ -CH ₂ -O- and -CH ₂ -CH (CH ₃ ) -O-. For example, the hydrocarbon group may be linear or branched C ₁ -C ₂₂ alkylene, preferably C ₁ -C ₁₈ alkylene, particularly preferably C ₁ -C ₁₂ alkylene, and most preferably C ₁ -C ₈ alkylene; C ₃ -C ₈ -cycloalkylene, preferably C ₅ or C ₈ -cycloalkylene; C ₆ -C ₁₂ arylene or C ₇ -C ₁₂ aralkylene groups are possible. Some examples of divalent hydrocarbon groups include methylene, ethylene, 1,2- or 1,3-propylene, 1,2-, 1,3- or • ·

1.4- butilén-, 1,2-, 1,3-, 1,4- vagy 1,5-pentilén-, 1,2-, 1,3-,1,4-butylene, 1,2-, 1,3-, 1,4- or 1,5-pentylene, 1,2-, 1,3-,

1.4- , 1,5- vagy 1,6-hexilén-, 1,2-, 1,3-, 1,4-, 1,5-, 1,6- vagy 1,7-heptilén-, 1,2-, 1,3-, 1,4-, 1,5-, 1,6-, 1,7- vagy 1,8oktilén-, és izomer nonilén-, decilén-, undecilén-, dodecilén-, tridecilén-, teradecilén-, pentadecilén-, hexadecilén-, heptadecilén-, oktadecilén-, nonadecilén- és eikozilén-csoportok; ciklopentilén-, ciklohexilén-; naftilén- és különösen fenilén-; benzilén- és fenil-etilén-csoport. Néhány példa polioxa-alkilénmaradékra etilénoxi-, dietilénoxi-, trietilénoxi-, tetraetilénoxi- és 1,2-propoxi-csoportok.1,4-, 1,5- or 1,6-hexylene, 1,2-, 1,3-, 1,4-, 1,5-, 1,6- or 1,7-heptylene, 1,2 -, 1,3-, 1,4-, 1,5-, 1,6-, 1,7- or 1,8-octylene, and isomer nonylene, decylene, undecylene, dodecylene, tridecylene, teradecylene -, pentadecylene, hexadecylene, heptadecylene, octadecylene, nonadecylene and eicosylene; cyclopentylene, cyclohexylene; naphthylene and especially phenylene; benzene and phenylethylene. Some examples of a polyoxyalkylene residue include ethyleneoxy, diethyleneoxy, triethyleneoxy, tetraethyleneoxy and 1,2-propoxy.

Alkilcsoportként R előnyösen 1-4 szénatomos és előnyösen metil- vagy etilcsoport. Különösen előnyösen R H-nel azonos.Preferably R is alkyl having 1 to 4 carbon atoms and preferably methyl or ethyl. Most preferably, R is the same as H.

Ha M alkilcsoportot jelent, akkor előnyösen 1-4 szénatomos; különösen előnyösen metil- vagy etilcsoport. Alkálifém és ammónium kationokként Na⁺, K⁺, NH4⁺ és N (C1-C₆-alkil) ₄ ⁺ kationokat részesítünk előnyben.When M is alkyl, it is preferably C 1-4; particularly preferably methyl or ethyl. Preferred alkali metal and ammonium cations are Na ⁺ , K ⁺ , NH 4 ⁺ and N (C 1 -C ₆ alkyl) ₄ ⁺ .

Az I. általános képlet hídképző csoportjainak előnyben részesített alcsoportjai azok, ahol X_x közvetlen kötés és előnyösen C₁-C₄-alkilén-, fenilén- vagy benziléncsoportot jelent, ahol az alkilén-csoportot -C(0)-0- vagy -C(O)-NH- csoportok szakíthatják meg; X₂C(O)-O-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-NH- vagy -NH-C (S)-NH-; X₃ C₂~ C₁₈-alkilén-, előnyösen C2-C₁₂-alkilén-csoportot szemléltet; X₄ 0-P (0) (OM) -0-, -NR-P (0) (OM)-0-, -0-P (0) (OM)-NR- vagy -NR-P(O)- (OM)-NR- csoportokat jelent (magyarázatként: az -0-P(0) (OM)-0-,Preferred subgroups of the bridging groups of formula I are those wherein X _{x is a} direct bond and preferably is a C ₁ -C ₄ alkylene, phenylene or benzylene group, wherein the alkylene group is -C (O) -O- or -C May be interrupted by (O) -NH- groups; X _{2 is} C (O) -O-, -C (O) -NH-, -NH-C (O) -NH- or -NH-C (S) -NH-; X _{3 represents a} C ₂ -C ₁₈ alkylene group, preferably a C 2 -C ₁₂ alkylene group; X ₄₀ -P (O) (OM) -O-, -NR-P (O) (OM) -O-, -O-P (O) (OM) -NR- or -NR-P (O) - represents (OM) -NR- groups (for explanation: -0-P (0) (OM) -0-,

-NR-P (0) (OM)-0-, -0-P (0) (OM)-NR- vagy -NR-P (0) (OM)-NR- maradékoknál ezekbe a hídképző csoportokba a nukleozid építőelemek Νέε 0-atomjair integráltuk).-NR-P (O) (OM) -O-, -O-P (O) (OM) -NR- or -NR-P (O) (OM) -NR- residues in these bridge-forming groups are nucleoside building blocks Νέε O-atoms).

·>·>

·»·· »·

Oligonukleotidhoz kötődő katalizátorokként például polipeptidek (transzferázok/hidrolázok), fémsók és fémkomplexek jönnek szóba, ahol a fémeket előnyösen az elemek periódusos rendszerének mellékcsoportjaiból, valamint főcsoportjaiból, In, TI, Sn, Pb és Bi választjuk ki. Példák a Se, Y, La, lantanidák, Ti, Zr,Oligonucleotide-binding catalysts include, for example, polypeptides (transferases / hydrolases), metal salts and metal complexes, wherein the metals are preferably selected from the subgroups and main groups of the periodic table elements, In, TI, Sn, Pb and Bi. Examples of Se, Y, La, Lanthanides, Ti, Zr,

Hf, V, Nb, Ta, Cr, Mo, W, Mn, Fe, Ru, Os, Co, Rh, ír, Ni, Pd, Pt, Cu, Ag, Au, Zn, Cd és Hg. Előnyben részesítjük a szkandiumot, ittriumot, lantánt, lantanida fémeket, rezet és ólmot. A lantanida fémeken belül előnyben részesítjük a következőket: Ce,Hf, V, Nb, Ta, Cr, Mo, W, Mn, Fe, Ru, Os, Co, Rh, Irish, Ni, Pd, Pt, Cu, Ag, Au, Zn, Cd and Hg. Preference is given to scandium, yttrium, lanthanum, lanthanide metals, copper and lead. Within lanthanide metals, we prefer the following: Ce,

Eu, Gd, és Sm. A fémek előnyösen két- vagy háromértékű kationként állnak rendelkezésre.Eu, Gd, and Sm. The metals are preferably available as divalent or trivalent cations.

A fémsókhoz és fémsó-komplexekhez megfelelő anionokat a következő csoportból választhatunk: halogenid (például Cl , Br és I ) , oxisavak anionja, BF₄ , PF₆ , SiF₆ és AsF₆ .Suitable anions for metal salts and metal salt complexes may be selected from the group consisting of halide (e.g. Cl, Br and I), anion of oxy acids, BF ₄ , PF ₆ , SiF ₆ and AsF ₆ .

Az oxisavak anionjainál például szulfát-, foszfát- perklorát-, perbromát-, perjodát-, antimonát-, arzenát-, nitrát-, karbonát-, C₁-C₈-karbonsav anionja, mint például formiát-, acetát-, propionát-, butirát-, benzoát-, fenil-acetát-, mono-, divagy triklór- vagy -fluoracetát-, szulfonát-, mint például metil-szulfonát-, etil-szulfonát-, propil-szulfonát-, butil-szulfonát-, trifluor-metil-szulfonát- (triflat-), adott esetben C₄C₄-alkillel, C₁-C₄-alkoxival vagy halogénnel, különösen fluorral, klórral vagy brómmal szubsztituált fenil-szulfonát- vagy benzilszulfonát-, mint például tozilát-, mezilát-, brozilát-, p-metoxi- vagy p-etoxi-fenil-szulfonát-, pentafluor-fenil-szulfonátvagy 2,4,6-triizopropil-szulfonát- és foszfonátok-, mint például metil-foszfonát-, etil-foszfonát-, propil-foszfonát-, butil15 foszfonát-, fenil-foszfonát-, p-metil-fenil-foszfonát- és benzil-foszfonát- jöhet számításba.Anions of oxy acids include, for example, the anions of sulfate, phosphate perchlorate, perbromate, periodate, antimonate, arsenate, nitrate, carbonate, C ₁ -C ₈ carboxylic acid such as formate, acetate, propionate, butyrate, benzoate, phenylacetate, mono-, dibasic trichloro or fluoroacetate, sulfonates such as methylsulfonate, ethylsulfonate, propylsulfonate, butylsulfonate, trifluoromethyl sulfonate (triflate), phenylsulfonate or benzylsulfonate, such as tosylate, mesylate, optionally substituted with C ₄ C ₄ alkyl, C ₁ -C ₄ alkoxy or halogen, especially fluorine, chlorine or bromine; brosylate, p-methoxy or p-ethoxyphenylsulfonate, pentafluorophenylsulfonate or 2,4,6-triisopropylsulfonate and phosphonates such as methylphosphonate, ethylphosphonate, propyl, phosphonate, butyl 15 phosphonate, phenyl phosphonate, p-methylphenylphosphonate and benzyl phosphonate.

Fémkomplex katalizátorok előnyösen hetero-organikus vegyületekkel, mint komplexképzőkkel képzett fémsó-komplexként állnak rendelkezésre, ahol a komplexképző az oligonukleotidhoz kapcsolódik. Komplexképzők nagy számban ismertek. Az 0, S, N és P csoportból kiválasztott hetero-atomokat tartalmazó nyíltláncú vagy ciklusos szerves vegyületekről lehet szó. Előnyben részesítünk összesen 8-26, előnyösen 12-20 gyűrűtagot tartalmazó és 2-12, előnyösen 4-12, és különösen előnyösen 6-12 hetero-atommal rendelkező ciklusos vagy policiklusos szerves vegyületeket. A hetero-atomok közül az O-t és különösen a N-t részesítjük előnyben. Néhány példa komplexképzőkre a koronaéter, cianin, ftálocianin, porfirin, fenantrolin, nyílt és ciklusos di- és terpiridin, etilén-diamin-tetraecetsav és dietilén-triamin-pentaacetát.Metal complex catalysts are preferably available as metal salt complexes with heteroorganic compounds such as complexing agents, where the complexing agent is attached to the oligonucleotide. Complexing agents are known in large numbers. These may be open-chain or cyclic organic compounds containing heteroatoms selected from the group consisting of O, S, N and P. Preference is given to cyclic or polycyclic organic compounds having a total of 8 to 26, preferably 12 to 20 ring members, and having 2 to 12, preferably 4 to 12, and more preferably 6 to 12 heteroatoms. Of the heteroatoms, O and especially N is preferred. Some examples of complexing agents are crown ether, cyanine, phthalocyanine, porphyrin, phenanthroline, open and cyclic di- and terpyridine, ethylenediaminetetraacetic acid and diethylenetriamine pentaacetate.

Egy előnyben részesített kiviteli alakban a találmány szerinti katalitikusán hatásos oligonukleotidok esetében a II. általános képletű konjugátumról van szó,In a preferred embodiment, the catalytically active oligonucleotides of the present invention are characterized in that II. is a conjugate of general formula

A-B-oligó (II.) amelyben A a B-hez előnyösen szénatomon keresztül kötődő ciklusos vagy policiklusos fémsókomplex, amelyet olyan komplexképzővel állítunk elő, amely a gyűrűben legalább 12 gyűrűatomot és legalább 4 hetero-atomot — N és 0 csoportból - tartalmaz kétértékű vagy háromértékű fémionokhoz kötve, amelyeket a szkandiumot, ittriumot, lantánt és lantanida fémeket tartalmazó csoportból választottunk ki; B az I. általános képlet hídképző csoportjául szolgál és oligó olyan oligonukleotidot jelent, amelynek belső szekvenciája cél-RNS-sel részben nem-komplementer.O-oligo (II) wherein A is a cyclic or polycyclic metal salt complex which is preferably carbon-bonded to B and is prepared by a complexing agent containing at least 12 ring atoms and at least 4 heteroatoms from the N and O ring in a divalent or trivalent bonded to metal ions selected from the group consisting of scandium, yttrium, lanthanum and lanthanide metals; B serves as a bridge-forming group of formula I and an oligon is an oligonucleotide whose internal sequence is partially non-complementary to the target RNA.

Az oligóra és B-re az előzőekben megadott előnyben részesítések érvényesek.The above preferences apply to Oligo and B.

A komplexképző legtöbb 22, előnyösen 6-20, előnyösebben ΙΣΣΟ és különösen előnyösen 14-20 gyűrűatomot tartalmazhat, ahol a gyűrűatomok a hetero-atomokon kívül előnyösen C-atomok. A N és/vagy 0 hetero-atomok száma előnyösen 4-12, különösen előnyösen 4-10, és egészen különösen előnyösen 4-8. Kisebb gyűrűméreteknél (például 6-12 gyűrűatom) alacsonyabb hetero-atom tartalmat részesítünk előnyben, 4-8, előnyösebben 4-6. Előnyben részesített alcsoportnál a komplexképző 16-20 és különösen 18 gyűrűatomot, valamint 6-10 és előnyösebben 8 N-atomot tartalmaz, ahol a fennmaradó gyűrűtagok esetében C-atomokról van szó, és az 1-6.The complexing agent may contain most 22, preferably 6-20, more preferably ΙΣΣΟ, and most preferably 14-20 ring atoms, wherein the ring atoms are preferably C atoms other than heteroatoms. The number of N and / or O heteroatoms is preferably from 4 to 12, particularly preferably from 4 to 10, and most particularly preferably from 4 to 8. For smaller ring sizes (e.g., 6-12 ring atoms), lower heteroatom contents are preferred, 4-8, more preferably 4-6. In a preferred subgroup, the complexing agent comprises 16 to 20 and in particular 18 ring atoms and 6 to 10 and more preferably 8 to N atoms, the remaining ring members being C atoms and 1-6.

és előnyösen a 2-4. gyűrűre nem-szubsztituált és szubsztituáltand preferably as shown in Figs. ring-unsubstituted and substituted

-CH=CH-CH=CH- csoportok kötődnek 1,3 helyzetben, és a gyűrű Natomjaival piridinocsoportot alkotnak. Ez a komplexképző előnyösen 2-4 piridin-csoportot és további 4 N-atomot tartalmaz a gyűrűben. Előnyben részesített fémionok a La, Ce, Nd, Eu és Gd. Előnyben részesített anionok a fémsókomplexekben a halogenidek (Cl-, Br-), szulfát-, PF₆ , nitrát-, acetát-, metil-szulfonét-, trifluor-metil-szulfonát-, karbonát-, hidrogén-szulfát-, hidrogén-karbonát- és perklorát-.The -CH = CH-CH = CH- groups are attached at the 1,3 position and form, with the Natoms of the ring, a pyridino group. This complexing agent preferably contains 2-4 pyridine groups and an additional 4 N atoms in the ring. Preferred metal ions are La, Ce, Nd, Eu and Gd. Preferred anions in the metal salt complexes include halides (Cl, Br), sulfate, PF ₆ , nitrate, acetate, methyl sulfonate, trifluoromethyl sulfonate, carbonate, hydrogen sulfate, bicarbonate - and perchlorate.

Egy különösen előnyben részesített kiviteli alakban a II. ésIn a particularly preferred embodiment, II. and

III. általános képlet szerinti konjugátumokról van szó,III. are conjugates of the general formula,

ahol R₂ és R₇ egymástól függetlenül H-, C₁-C₄-alkil-, C₁-C₄-alkoxi- C₇-C₁₂-aralkil- vagy C_e-C_ie-arilcsoportot jelent,wherein R ₂ and R ₇ are independently H, C ₁ -C ₄ alkyl, C ₁ -C ₄ -alkoxy-C ₇ -C ₁₂ or C does -aralkil- -arilcsoportot _e -C _BC

R₃ és R₆ egymástól függetlenül H-, C₁-C₄-alkil-, C₇-C₁₂-aralkilvagy C₆-C₁₆-arilcsoport,R ₃ and R ₆ are independently H, C ₁ -C ₄ alkyl, C ₇ -C ₁₂ aralkyl or C ₆ -C ₁₆ aryl,

R₄ H-, C₁-C₂₀-alkil-, C₅-C₈-cikloalkil-, C₆-C₁₂-aril- vagy C₇-C₁₂aralkilcsoport helyén áll,R _{4 is} H, C ₁ -C ₂₀ alkyl, C ₅ -C ₈ cycloalkyl, C ₆ -C ₁₂ aryl, or C ₇ -C ₁₂ aralkyl,

Me lantán, lantanid fém, ittrium vagy szkandium helyén áll,Me stands for lanthanum, lanthanide metal, yttrium or scandium,

Y egy aniont helyettesít, n 2 vagy 3, és m 1,2 vagy 3, ahol az alkil-, cikloalkil-, aralkil- és aril-maradékok nemszubsztituáltak vagy C_x-C₄-alkoxi-, F-, Cl-, Br-, -CN, C₁-C₄-alkil- vagy -NO₂ csoporttal szubsztituáltak,Y represents an anion, n 2 or 3, and m 1,2 or 3, wherein the alkyl, cycloalkyl, aralkyl and aryl residues are unsubstituted or C _x -C ₄ alkoxy, F-, Cl-, Br -, -CN, C ₁ -C ₄ alkyl or -NO ₂ ,

R₅ a IV. általános képlet maradéka -B-oligó (IV.) és R_T K vagy egy szubsztituens vagy • · ·R ₅ a IV. the remainder of the formula -B-oligo (IV) and R _T K or a substituent or · · ·

R₅ H vagy egy szubsztituens és R₄ a IV. általános képlet egy maradékát jelenti, ahol B és oligó az előzőekben megadott jelentésekkel rendelkeznek, beleértve az előnyben részesítéseket. Alkalmas és szintén előnyben részesített anionokat Y^m-re az előzőekben említettünk. Különösen előnyben részesítjük ha Y^m = Cl .R _{5 is} H or a substituent and R _{4 is} as defined in IV. represents a remainder of the general formula wherein B and oligo have the meanings given above, including preferences. Suitable and also preferred anions for Y ^{m are} mentioned above. Particularly preferred is Y ^m = Cl.

R₂, R₃, Rg és R₇ alkilcsoportként előnyösen metil- vagy etilcsoportot, alkoxi-csoportként előnyösen metoxi- vagy etoxicsoportot, aralkil-csoportként előnyösen benzilén- vagy fenil-etilén- és árucsoportként előnyösen naftil- és különösen benzilcsoportot jelent. Egy előnyben részesített kiviteli alakban R₂ és R₇ H-t és R₃ és Rg alkilcsoportot jelent. Különösen előnyösen R₂ és R₇ H-t valamint R₃ és Rg C₁-C₄-alkil- és egészen különlegesen metilcsoportot jelent. R₂, R₃, Rg és R₇ esetében 0, S, N hetero-atomokkal C₄-C₁₂-hetero-arilcsoportról is lehet szó. Példák a pirridil-, tiazolil-, imidazolil-, oxazolil-, furanozil-, pirrolil-, tiofenil-csoportok. Továbbá szóba jöhetnek ^-C^-alkiltio-, halogenid, di-(C₁-C₄-alkil)-amino-, szulfonamid- és karboxamid-csoportok.Preferably R ₂ , R ₃ , R 8 and R _{7 are} alkyl or methyl, alkyl is preferably methoxy or ethoxy, aralkyl is preferably benzene or phenylethyl and commodity is preferably naphthyl and especially benzyl. In a preferred embodiment, R ₂ and R _{7 are} Ht and R ₃ and R 8 are alkyl. Particularly preferably R ₂ and R ₇ are H and R ₃ and R represents C ₁ -C ₄ -alkyl and very specially methyl. For R ₂ , R ₃ , R 8 and R ₇ , the heteroatoms O, S, N may also be C ₄ -C ₁₂ heteroaryl. Examples include pyridyl, thiazolyl, imidazolyl, oxazolyl, furanosyl, pyrrolyl, thiophenyl. Also come to mind ^ -C ^ -alkylthio, halide, di- (C ₁ -C ₄ alkyl) amino, sulfonamide and carboxamide groups.

R-l és R₅ szubsztituensként előnyben részesítjük a Cj-C^-alkil-, C₁-C₄-alkoxi-, C₇-C₁₂-aralkil- vagy C₆-C₁₆-aril-, az 0, S, N hetero-atomokkal rendelkező C₄-C₁₂-hetero-aril-, C₁-C₄-alkiltio-, di-(C₁-C₄-alkil)-amino-, halogenid, szulfonamid- és karboxamidcsoportokat.Preferred substituents R 1 and R ₅ are C ₁ -C ₆ alkyl, C ₁ -C ₄ alkoxy, C ₇ -C ₁₂ aralkyl or C ₆ -C ₁₆ aryl, the 0, S, N hetero C ₄ -C ₁₂ heteroaryl, C ₁ -C ₄ alkylthio, di- (C ₁ -C ₄ alkyl) amino, halide, sulfonamide and carboxamide groups.

R₄ és R₅ előnyösen p-helyzetben kötődik a piridin-gyűrű Natomj ához.Preferably R ₄ and R ₅ are p-linked to the Natomy of the pyridine ring.

R₄ alkilcsoportként előnyösen 1-12, különösen előnyösen 1-8 és egészen különösen 1-4 C-atomot tartalmaz. Néhány példa alkil19 csoportokra a metil- és etil- és az izomer propil-, butil-, pentil-, hexil-, heptil-, oktil-, nonil-, decil-, undecil-, dodecil-, tridecil-, tetradecil-, pentadecil-, hexadecil-, oktadecil-, nonadecil- és eikozil-csoportok.Preferably, R _{4 is} 1 to 12, particularly preferably 1 to 8, and more particularly 1 to 4, C atoms as alkyl. Some examples of alkyl 19 groups include methyl and ethyl, and the isomer is propyl, butyl, pentyl, hexyl, heptyl, octyl, nonyl, decyl, undecyl, dodecyl, tridecyl, tetradecyl, pentadecyl. , hexadecyl, octadecyl, nonadecyl and eicosyl.

R₄ cikloalkil-csoportként előnyösen 5 vagy 6 gyűrű-szénatomot tartalmaz. Néhány példa cikloalkil-csoportokra a ciklopropil-, ciklobutil-, ciklopentil-, ciklohexil-, cikloheptil- és ciklooktil-csoport.R ₄ preferably has 5 or 6 ring carbon atoms as cycloalkyl. Some examples of cycloalkyl groups include cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl, cycloheptyl and cyclooctyl.

R₄ arilcsoportként előnyösen naftil- és különösen fenilcsoportot szemléltet. Ha R₄ aralkil-csoport, előnyösen benzil- vagy fenil-etil-csoport jön szóba.Preferably R _{4 is} aryl and naphthyl and especially phenyl. When R _{4 is} aralkyl, preferably benzyl or phenylethyl.

Előnyben részesített alcsoport R₄-re H-, Cj-C^-alkil-, különösen metil-, valamint fenil- vagy benzilcsoport.Preferred subgroups for R _{4 are} H, C 1 -C 6 alkyl, especially methyl, and phenyl or benzyl.

R_x illetve R₅ alkilcsoportként metil- vagy etilcsoportot, alkoxi-csoportként előnyösen metoxi- vagy etoxi-csoportot, arilcsoportként naftil- vagy fenilcsoportot és aralkil-csoportként előnyösen fenil- vagy fenil-etil-csoportot jelent. R₂ illetve R₅ előnyösen H-, metil-, etil-, metoxi- vagy etoxicsoport.R _{@ 5} and R @ ₅ alkyl are methyl or ethyl, alkoxy is preferably methoxy or ethoxy, aryl is naphthyl or phenyl, and aralkyl is preferably phenyl or phenylethyl. Preferably R ₂ and R ₅ are H, methyl, ethyl, methoxy or ethoxy.

A III. általános képletű vegyületek előnyben részesített alcsoportjai azok, amelyekben R₂ és R₇ H- helyén áll, R₃ és R₆ CjC₄-alkilcsoportot jelent, R₄ H-, C₁-C₄-alkil-, fenil- vagy benzilcsoportot szemléltet, R₂ az -X₁-X₂-X₃-(X₄)_x-oligó csoport és R₅ H-, metil- vagy metoxicsoport vagy R₅ az -X_x-X₂-X₃- (X₄) _x-oligó csoport és R-l H-, metil- vagy metoxicsoport, X₂ közvetlen kötés vagy C₂-C₆-alkilén-, X₂ -0-, -NH-, -C(O)-O-, -C(0)-NH-, -NH-C(O)-NH- vagy -NH-C (S) -NH-csoportot jelent, X₃ C₂-C₁₂-alkilén- vagy fenilén-csoportot szemléltet, X₄ nukleozid építőelem 0, N, vagy .’· .·· ····. :··. :··.In III. Preferred subgroups of compounds are those wherein R ₂ is H and R ₇ is appropriate, R ₃ and R ₄ represents CJC ₆ -alkyl residues R ₄ H, C ₁ -C ₄ alkyl, phenyl or benzyl illustrates R ₂ is -X ₁ -X ₂ -X ₃ - (X ₄ ) _x -oligo and R _{5 is} -H, methyl or methoxy or R ₅ is -X _x -X ₂ -X ₃ - (X ₄ ) _x an oligo group and R 1 is H, methyl or methoxy, X _{2 is a} direct bond or C ₂ -C ₆ alkylene, X ₂ -O-, -NH-, -C (O) -O-, -C (O) ) Represents -NH-, -NH-C (O) -NH- or -NH-C (S) -NH-, represents X ₃ C ₂ -C ₁₂ -alkylene or phenylene, X ₄ nucleoside building block 0 , N, or. '·. ·· ····. : ··. : ··.

• · · ·• · · ·

C-atomjához való kötődést jelent, vagy X₄ -O-P(O) (OM)-O-csoportot szemléltet, x 0 vagy 1 helyett áll, Me jelenthet La, Ce, Nd, Eu vagy Gd fémeket, n 2 vagy 3 és m 1 vagy 2 helyett áll, Y mutathat Cl-, Br-, CH₃C(O)O-, C1O₄-, BF₄ , PF₆ , F₃C-SO₃- vagy tozilát aniont, M állhat H, Na vagy K helyett, és oligó egy olyan oligonukleotidot jelent, amelynek belső szekvenciája egy cél-RNS-sel csak részben komplementer, és amely természetes dezoxiribonukleotid építőelemekből vagy nem természetes szintetikus nukleotid építőelemekből épül fel, ahol a cél-RNS-re vonatkoztatva 1-4 építőelem hiányzik.Represents a bond to its C atom or represents X ₄ -OP (O) (OM) -O, stands for x 0 or 1, Me represents La, Ce, Nd, Eu or Gd metals, n 2 or 3 and m Instead of 1 or 2, Y may represent Cl-, Br-, CH ₃ C (O) O-, C 1 -C ₄ -, BF ₄ , PF ₆ , F ₃ C-SO ₃ - or tosylate anions, M may be H, Na or Instead of K, an oligon is an oligonucleotide whose internal sequence is only partially complementary to a target RNA and is composed of natural DNA or non-natural synthetic nucleotide building blocks, wherein 1-4 building blocks are missing per target RNA. .

Alkalmas átészterező és hidrolizáló katalizátorok a nukleázok is vagy nukleáz fragmentumok, bázikus polipeptidek, amidinés guanidin-származékok, oligo-aminok és diimidazolok. Ezek ugyanolyan hídképző csoportokon keresztül kötődhetnek az oligonukleotidhoz, mint a fémkomplexek.Suitable transesterification and hydrolyzing catalysts include nucleases or nuclease fragments, basic polypeptides, amidine and guanidine derivatives, oligoamines and diimidazoles. They can bind to the oligonucleotide through the same bridging groups as the metal complexes.

A találmány egy további tárgyát olyan oligonukleotidok előállítására irányuló eljárás képezi, amelyekhez átészterező vagy hidrolizáló katalizátor kötődik, és az oligonukleotid belső szekvenciái részben nem-komplementerek egy természetben előforduló cél-RNS-sel, és az oligonukleotid természetes dezoxiribonukleotid építőelemekből vagy nem természetes szintetikus nukleotid építőelemekből épül fel. Az eljárás azzal jellemezhető, hogy az alapvázhoz kötve funkciós csoportot felmutató, átészterező vagy hidrolizáló katalizátort egy nukleotid építőelem funkciós csoportjával vagy egy nukleotid építőelem funkcionálisan módosított csoportjával kicseréljük.Another object of the present invention is to provide a process for the preparation of oligonucleotides to which a transesterification or hydrolyzing catalyst is attached and the internal sequences of the oligonucleotide are partially non-complementary to a naturally occurring target RNA and the oligonucleotide is derived from natural DNA or non-naturally occurring synthetic nucleotides. up. The process can be characterized by replacing the transesterification or hydrolyzing catalyst having a functional group attached to the backbone with a functional group of a nucleotide building block or a functionally modified group of a nucleotide building block.

Példák olyan funkciós csoportokra, amelyek adott esetbenExamples of functional groups that are relevant

hídképző csoporton keresztül kapcsolódnak az alapvázhoz, -OH, -SH, -NCO, -NCS, -CN, -O-CH₂-OH, -NHR, -C(O)OR, -C(O)SH, -C(0)-NHR, -C(O)Hal halogenidként F-, Cl- vagy Br-, -C(S)SR, C(S)NHR, -C(S)OR, -SO₃R, -SO₂NHR, -SO₂C1, -P(O)(OH)₂, -P (0) (OH)NHR, P(S)-(SH)₂, -P(S) (SH)NHR, -P(S) (0H)₂, -P (S) (OH) NHR, -P(O)(SH)₂,are bonded through the bridging group to the backbone, -OH, -SH, -NCO, -NCS, -CN, -O-CH ₂ -OH, -NHR, -C (O) OR, -C (O) SH, -C ( O) -NHR, -C (O) Hal as the halide F-, Cl- or Br-, -C (S) SR, C (S) NHR, -C (S) OR, -SO ₃ R, -SO ₂ NHR , -SO ₂ Cl, -P (O) (OH) ₂ , -P (O) (OH) NHR, P (S) - (SH) ₂ , -P (S) (SH) NHR, -P (S) ) (O) ₂ , -P (S) (OH) NHR, -P (O) (SH) ₂ ,

-P (0) (SH) NHR, -P(O)(OH)H, -P(O)(NHR)H, -P(S)(SH)H, -P(S)(NHR)H,-P (O) (SH) NHR, -P (O) (OH) H, -P (O) (NHR) H, -P (S) (SH) H, -P (S) (NHR) H,

-P(S)(OH)H, -P(0) (SH)H, ahol R H, Cj-Cg-alkil-, -C_zH_2z-NH₂,-P (S) (OH) H, -P (0) (SH) H, where RH, Cj-Cg alkyl, C _z H _2z -NH _2,

-C_zH_2z-SH vagy -(C_zH_2zO)_y-H csoportokat jelent, és z 2 és 6 közötti szám, és y 1 és 20 közötti szám. Példák funkcionálisan módosított csoportokra a hidroxi-alkoxi- vagy amino-alkoxicsoportok, amelyek adott esetben linkeren -— például -P(0)OM-O-csoporton — keresztül kötődnek egy nukleotid építőelemhez. A funkciós csoport kötődhet közvetlenül vagy egy X₃ csoporton keresztül az alapvázhoz, és X_x csoport előnyösen C₁-C₁₂-alkilén-, C₁-C₁₂-alkenilén-, C₁-C₁₂-alkinilén-, C₅-C₈-cikloalkilén-, C₈-C₁₂-arilénvagy C₇-C₁₂-aralkilén-csoport.-C ₂ H _{2z represents} -SH or - (C ₂ H 2 _ZO ) _y -H, and z is a number from 2 to 6 and y is a number from 1 to 20. Examples of functionally modified groups are hydroxyalkoxy or aminoalkoxy groups which are optionally linked to a nucleotide building block via a linker such as -P (O) OM-O. The functional group may be bonded directly or via an X ₃ group to the backbone, and the X _x group is preferably C ₁ -C ₁₂ alkylene, C ₁ -C ₁₂ alkenylene, C ₁ -C ₁₂ alkynylene, C ₅ -C ₈ cycloalkylene, C ₈ -C ₁₂ -arilénvagy C ₇ -C ₁₂ -aralkilén group.

A találmány szerinti eljárás oligonukleotid konjugátumok előállítására például oly módon végezhető, hogy egy adott esetben funkcionalizált oligonukleotidot oldószerben vagy oldószer keverékben feloldunk és azután egy funkciós csoportot hordozó átészterező vagy hidrolizáló katalizátort adunk hozzá és ezekután a reakciókeverék, adott esetben rázásra, reagálni fog. A képződött konjugátumot azután ehhez kapcsolódóan ismert módon tisztíthatjuk és kívánság szerint izolálhatjuk.For example, the process for preparing oligonucleotide conjugates of the present invention can be accomplished by dissolving an optionally functionalized oligonucleotide in a solvent or solvent mixture and then adding a functionalized transesterification or hydrolyzing catalyst, and then reacting the reaction mixture, optionally with shaking. The resulting conjugate can then be purified in a manner known per se and isolated as desired.

A reakció hőmérséklete lehet például 0-120 °C, előnyösen 2080 °C. Különösen előnyben részesítjük a szobahőmérsékleten végzett reakciót.The reaction temperature may be, for example, 0 to 120 ° C, preferably 2080 ° C. Particular preference is given to the reaction at room temperature.

• ·• ·

Ha észterező, átészterező vagy amidálási reakció összekapcsolásáról van szó, megfelelő karbonsav-csoporotokat előzőleg ismert módon aktiválunk, például karbodiimidekkel és N-hidroxiszukcinimiddel végzett reakcióval.When coupling an esterification, transesterification or amidation reaction, appropriate carboxylic acid groups are activated in a manner known per se, for example by reaction with carbodiimides and N-hydroxysuccinimide.

Alkalmas oldószerek például a víz és olyan poláros aprotikus oldószerek, amelyek előnyösen vízzel keverhetők. Példák ilyen oldószerekre az alkoholok (metanol, etanol, n- vagy i-propanol, butanol, etilénglikol, propilénglikol, etilénglikol-monometil-éter, dietilénglikol, dietilénglikol-monometil-éter), éter (dietil-éter, dibutil-éter, tetrahidrofurán, dioxán, etilénglikol-dimetil-éter, etilénglikol-dietil-éter, dietilénglikol-dietil-éter, trietilénglikol-dimetil-éter) , halogénezett szénhidrogének (metilén-klorid, kloroform, 1,2-diklór-etán) 1,1,1-triklór-etán, 1,1,2,2-tetraklór-etán, klór-benzol), karbonsavészterek és laktonok (ecetsav-etilészter, propionsav-metilészter, benzoesav-etilészter, 2-metoxi-etilacetát, γ-butirolakton, δ-valerolakton, pivalolakton), N-alkilezett karbonsav-amidok és laktámok (Ν,Ν-dimetil-formamid, N,N-dietil-formamid, N,N-dimetil-acetamid, tetrametil-karbamid, hexametil-foszforsav-triamid, N-metil-y-butirolaktám, N-metil-e-kaprolaktám, N-metil-pirrolidon), szulfoxidok (dimetil-szulfoxid, tetrametilén-szulfoxid), szulfonok (dimetil-szulfon, dietil-szulfon, trimetilén-szulfon, tetrametilén-szulfon), tercier aminok (trimetil-amin, trietliamin, N-metil-piperidin, N-metil-morfolin, piridin) , szubsztituált benzolok (klór-benzol, o-diklór-benzol, 1,2,4-triklór-benzol, nitro-benzol, toluol, xilol) és nitrilek (acetonitril, propionitril, benzonitril, fenil-acetonitril).Suitable solvents are, for example, water and polar aprotic solvents which are preferably miscible with water. Examples of such solvents are alcohols (methanol, ethanol, n- or i-propanol, butanol, ethylene glycol, propylene glycol, ethylene glycol monomethyl ether, diethylene glycol, diethylene glycol monomethyl ether), ether (diethyl ether, dibutyl ether, tetrahydrofuran). dioxane, ethylene glycol dimethyl ether, ethylene glycol diethyl ether, diethylene glycol diethyl ether, triethylene glycol dimethyl ether), halogenated hydrocarbons (methylene chloride, chloroform, 1,2-dichloroethane) 1,1,1- trichloroethane, 1,1,2,2-tetrachloroethane, chlorobenzene), carboxylic acid esters and lactones (ethyl acetate, propionic acid methyl ester, ethyl benzoic acid, 2-methoxyethyl acetate, γ-butyrolactone, δ-valerolactone , pivalolactone), N-alkylated carboxylic acid amides and lactams (Ν, Ν-dimethylformamide, N, N-diethylformamide, N, N-dimethylacetamide, tetramethylurea, hexamethylphosphoric triamide, N-methyl γ-Butyrolactam, N-methyl-ε-caprolactam, N-methylpyrrolidone), sulfoxides (dimethyl sulfoxide, tetramethylene sulfoxide), sulfone ok (dimethylsulfone, diethylsulfone, trimethylene sulfone, tetramethylene sulfone), tertiary amines (trimethylamine, triethylamine, N-methylpiperidine, N-methylmorpholine, pyridine), substituted benzenes (chlorobenzene, o-dichlorobenzene, 1,2,4-trichlorobenzene, nitrobenzene, toluene, xylene) and nitriles (acetonitrile, propionitrile, benzonitrile, phenylacetonitrile).

A reagáltatandó anyagokat célszerűen moláris arányokbar visszük be. A katalizátort vagy az oligonuklectidot azonban alkalmazna ί ok feleslegben is.The substances to be reacted are preferably introduced in molar ratios. However, the catalyst or oligonuclectide would also be used in excess.

Tisztításhoz alkalmazhatjuk a szokásos módszereket, előnyösen például· dialízise, eleksroforéziss és kromaoográfiás eljárásoké, már. nagy nyomású folyadékkromatográfiát ÍHPLC), reverz fázisú HPLC-t, affinitás kromatográfiás, ioncserés kromatográfiás és géikromatográfiás.Usual methods for purification can be used, preferably, for example, dialysis, electrophoresis and chromatography. high pressure liquid chromatography (HPLC), reverse phase HPLC, affinity chromatography, ion exchange chromatography and gel chromatography.

Az alkalmazandó, adcfs esesben funkcionalizáit oligonukleosidot ismert módon előállíthatjuk kereskedelemben kapható, automatikus szinsesizáló segítségével. E szmsézishez nukleozidok ismertek, részben kereskedelemben kaphatók vagy analóg eljárásokkal eikészíehetők.The applicable adcfs-functionalized oligonucleoside can be prepared in a known manner using a commercially available automatic synthesizer. Nucleosides for this synthesis are known, partly commercially available, or may be prepared by analogous methods.

ló η Ίhorse η Ί

Funkciós csoporsokkal rendelkező ásészterező vagy nidrolizákatalizátorok ismertek, részben megvásárolhatók vagy ismert, etve analóg eljárásokkal elkészíthetők.Functional groups of esterification or nidrolyzate catalysts are known, partially commercially available, or can be prepared by analogous procedures.

A 111. általános képlet szerinsi alapvázzal rendelkező funkcionalizált kiindulási vegyületek újak. Megkaphatok azáltal, hogy az V. általános képlet egy terpiridinjétFunctionalized starting compounds having the serine backbone of formula 111 are novel. I get it by taking a terpyridine of formula V

99

9 oiriorn-cta.9 oiriorn-cta.

ο ι r><ο ι r> <

iei vagy aor

VI. általános ké:VI. general view:

a a L· szí di n - dl ke a c r.n a 1a a L · color di - dl ke a c r.n a 1

(VI) általános kéolet szenti aie i , _n/-,p kondenzáljuk, ahol R,, R₂, R₃, R₄, R₅, R-, R₇, Me, Y, n és m az előzőleg megadott jelentésekkel bírnak.(VI) is condensed with ai, _{n /} -, p where R 1, R ₂ , R ₃ , R ₄ , R ₅ , R ₇ , R ₇ , Me, Y, n and m have the meanings given above. .

Az eljárást elvégezhetjük például égy, hogy az V., VI. ésThe procedure may be carried out, for example, as shown in FIGS. and

VII. általános képlet szerinti vegyületeket egyenlő mennyiségben feloldjuk egy oldószerben és azután megemelt hőmérsékleten egymással összehozzuk. Célszerűen felhasználunk kondenzáctős katalizátorokat, például koncentrált ásványt savakat, különösen sósavat vagy savas ioncserélőt. Célszerű lehet vízkötő anyag hoziesKcioeiecjvzáadása vagy a reakció során keletkezett víznek a bői történő eltávolítása.VII. The compounds of formula (I) are dissolved in equal amounts in a solvent and then brought together at elevated temperatures. Condensation catalysts, such as concentrated mineral acids, especially hydrochloric acid or acidic ion exchangers, are preferably used. It may be expedient to remove the water binding agent or to remove the water formed during the reaction.

A reakció hőmérséklete lehet például 4C-22CThe reaction temperature may be, for example, 4C to 22C

0 — 1 o 0 C .0 - 1 o 0 C.

Oldószerként előnyösen szerves, poláros aprotikus oldó.Preferably, the solvent is an organic polar aprotic solvent.

használhatók. Ilve.n oldószereket említettünk az előzőekben.They can be used. Ilve.n solvents have been mentioned above.

naovreszt mi naovest what

;saz isterfeκ nos κ e o — e' , zunrotos csórón talmaz.ó veovüle . oz • · • // • · »· ♦· hoz [Polyhedron 2(24), 2531-2536 (1988)] hasonló módon történhet, ahol a funkciós csoportokat adott esetben védőcsoportokkal látjuk el .; saz isterfeκ nos κ e o - e ', zunrotos csórón talmaz.ó veovüle. This may be done in a similar manner to Polyhedron 2 (24), 2531-2536 (1988), where the functional groups are optionally protected.

Άζ V. és VI. általános képletű vegyületek funkciós csoportokkal vagy anélkül nagyrészt ismertek, vagy ismert illetve analóg eljárásokkal előállíthatok. Az olyan VI. általános képletű vegyületek, ahol R₄ H helyett, R₅ C₂-C₁₈-alkilén-X₅ helyett áll, és X₅ -C(O)-OR, -C(O)-NHR, -SO₂-R vagy -SO₂-NHR csoportot jelent, valamint R H vagy C₈-Cg-alki 1csoport, újak és a következő módon kaphatók meg: egy megfelelő 3-haiogén-piridin-l,5-dikarbonsavésztert palládium katalizátor mellett CH₂=CH-C₁-C₁₆-alkilén-karbonsav-észtér általános képletű alkénnel alkenilezünk, az alkéncsoportot hrdráljuk, például katalitikusán, ehhez kapcsolódóan hidráljuk a megfelelő 1,5-dihidroxi-metil-piridin-alkil-karbonsav-észterré, a hidroxi-meti1-csoportot aldehidcsoporttá oxidáljuk és adott esetben az észtercsoportot karbonsav-csoporttá hidrolizáljuk vagy az észtercsoportot karbonsavamiddá amidáljuk.Άζ V and VI The compounds of the general formula (I) with or without functional groups are largely known or may be prepared by known or analogous methods. That VI. compounds of formula wherein R _{4 is} H, R _{5 is} C ₂ -C ₁₈ alkylene-X ₅ , and X _{5 is} -C (O) -OR, -C (O) -NHR, -SO ₂ -R or -SO ₂ -NHR and RH or C ₈ -C ₈ -alkyl are new and are obtained as follows: a suitable 3-halo-pyridine-1,5-dicarboxylic acid ester with palladium catalyst CH ₂ = CH-C ₁ -C ₁₆ -alkylene-alkenylating alkene carboxylic acid ester of formula hrdráljuk the alkene, for example catalytically, the associated hydrated to the corresponding 1,5-dihydroxy-methylpyridine-alkyl carboxylic acid ester and oxidation of the hydroxymethyl group to an aldehyde group meti1 and optionally hydrolyzing the ester group to the carboxylic acid group or amidating the ester group to the carboxylic acid amide.

Az olyan VI. általános képletű vegyületek, ahol R₈ R vagyThat VI. compounds of the formula wherein R _{8 is} R or

C;-C₁₂-alki lesöpört helyett, R₅ C₂-C_i8-alkilén-X₅ helyett áll, és X₅ -C(O)-OR, -C(O)-NHR, -SO₂-R vagy -SO₂-NHR csoportot jelent, valamint R H vagy C^Cg-alkilcsoport, újak és a következő módon kaphatók meg: egy megfelelő, például acetillel védett 3-halogén1,5-dihidroxi-metil-piridint (a megfelelő 3,5-dikarbonsav-metilészterekből kapható redukcióval) palládium katalizátor mellettR _{5 is} C ₁₂ -C ₁₂ alkyl substituted with R _{5 is} C ₂ -C ₁₈ alkylene-X ₅ and X _{5 is} -C (O) -OR, -C (O) -NHR, -SO ₂ -R or -SO ₂ -NHR and RH or C 1 -C 8 -alkyl are new and are obtained as follows: a suitable 3-halo-1,5-dihydroxymethylpyridine (for example 3,5-dicarboxylic acid) -methyl esters) with palladium catalyst

CH₂ = CH-C--C_{: e}-alkilén-karbonsav-észfer altalános képletű alkénnel vesszük a h r d sok;CH ₂ = CH-C-C _{: e-} alkylene-carboxylic acid ester taken with alkene of general formula;

aoot t • ·aoot t • ·

esetben megfelelő 3,5-piridin-aldehidaé, amelynek az aldehidcsoportjai például Grinard-reagenssel C₁-C₁₂-alkilezhetők, az észter-csoportot adott esetben karbonsav-csoporttá hídrólizál3uk vagy az észtercsoportot karbonsav-araiddá amiaáljuk és a másodlagos alkoholcsoportokat ketocsoportokká oxidáljuk.optionally, the corresponding 3,5-pyridine aldehyde, the aldehyde groups of which may be C ₁ -C ₁₂ alkylated with Grinard's reagent, may be optionally bridged to the carboxylic acid group or amidated to the carboxylic acid araid and the secondary alcohol groups oxidized to keto groups.

A találmány szerinti oligonukleotidok kiválóan alkalmasakThe oligonucleotides of the invention are very suitable

RNS szekvenciák különleges, szekvencia-specifikus hasíoására, ahol katalitikus hatás kifejtésére való képességük révén csak meglepően alacsony mennyiségben kell bevinni azokat.For special sequence-specific cleavage of RNA sequences, where they have to be introduced in surprisingly low amounts due to their ability to exert a catalytic effect.

A találmánynak egy további tárgyát ribonukleinsavak nukleotidfoszfát hídjainak — fiziológiai körülmények között és szintetikus átészterező és/vagy hidrolizáló kaoalizátor hatására történő — hasítására szolgáló eljárás képezi, azzal jellemezve, hogy a (a) komplexbe visszük a cél-RNS-t egy olyan oligonukleotiddal, amelynek belső szekvenciája részben nem-komplementer a cél-RNS-sel, és amely átészterező és/vagy hidrolizáló katalizátorhoz kötődik, és (b) azután hagyjuk reagálni és hasadni.It is a further object of the present invention to provide a method for cleaving nucleotide phosphate bridges of ribonucleic acids under physiological conditions and under synthetic synthesis of esterification and / or hydrolysis, characterized in that the target RNA is complexed with (a) an oligonucleotide having an internal its sequence is partially non-complementary to the target RNA and which binds to the transesterification and / or hydrolyzing catalyst and (b) is then allowed to react and cleave.

A találmány szerinti eljárás in vivő az oligonukleotid beadásával, vagy in vitro egy cél-RNS és egy találmány szerint alkalmazandó oligonukleotid összehozásával végezhető.The method of the invention may be performed in vivo by administration of the oligonucleotide or by in vitro fusion of a target RNA to an oligonucleotide to be used according to the invention.

Fiziológiai körülmények ismertek a szakember számára és felölelik például az eljárás véghezvitelét vizes közegben és 5-9, előnyösen 5-8 és különösen előnyösen 5-7,5 terjedő pH taruományban, ahol a vizes közeg további, inért alkotórészeket tartalmazhat, például alkálifém-sókat vagy alkáiiföldfém-sókat és különösen puffer-rendszereket.Physiological conditions are known to those skilled in the art and include, for example, carrying out the process in an aqueous medium and in a pH range of 5-9, preferably 5-8, and particularly preferably 5-7.5, wherein the aqueous medium may contain additional inert ingredients such as alkali metal salts or alkaline earth metal salts and especially buffer systems.

Az eljárás elvégezhető például 0-100 'C, előnyösen 21-50 0 ··The process may be carried out, for example, at 0-100 ° C, preferably at 21-50 ° C.

Q és különösen előnyösen 30-40 C között.Q and particularly preferably 30-40 ° C.

A találmány szerinti eljárásnál a hasítás a foszfát-híd kötés átészterezésénél következik be egy 2' , 3' -ciklikus foszfátvégcsoporttal rendelkező hasítási darab, és egy további, 5' -hidroxi-elágazást tartalmazó hasítási darab létrejöttével. A ciklikus foszfát-csoport ehhez kapcsolódóan tovább hidrolizálhat.In the process of the invention, the cleavage occurs upon transesterification of the phosphate bridge bond to form a cleavage moiety having a 2 ', 3' -cyclic phosphate terminus and an additional cleavage moiety having a 5 'hydroxy branch. The cyclic phosphate group may be further hydrolyzed.

A találmány szerinti oligonukleotidokat gyógyszerként használjuk fel. A találmány szerinti oligonukleotidok ráadásul nagy stabilitást mutatnak nukleázok okozta lebontással szemben. Különösen meglepő kiváló párképző sajátságuk komplementer RNS típusú nukleinsav szálakkal. Ezenfelül várakozáson felül magas sejtbe történő felvételt mutatnak. A találmány szerinti oligonukleotidok ezért különösen alkalmasak antiszenz-technológiához, amely nem-kívánatos fehérje termékek kifejeződésének gátlását jelenti a mRNS megfelelő komplementer nukleotid-szekvenciájához történő kötődés révén (266,099 számú európai szabadalmi leírás, 87/07300 és 89/08146 közzétételi számú nemzetközi szabadalmi bejelentés).The oligonucleotides of the invention are used as medicaments. In addition, the oligonucleotides of the invention exhibit high stability against nuclease degradation. Particularly surprising is their excellent mating properties with complementary RNA-type nucleic acid strands. In addition, they show high uptake into cells. The oligonucleotides of the invention are therefore particularly suitable for antisense technology, which involves inhibiting the expression of unwanted protein products by binding to the corresponding complementary nucleotide sequence of mRNA (European Patent Nos. 266,099, 87/07300 and 89/08146). .

Bevethetők fertőzések és betegségek kezelésére, például bioaktív fehérjék kifejeződésének a nukleinsavak (például onkogének) szintjén történő blokkolása révén. A találmány szerint előállított oligonukleotid hasítási darabok alkalmasak diagnos zti kürtként és felhasználhatók gén-szondaként vírusfertőzések vagy genetikai eredetű betegségek kimutatására az egy- vagy kétszálú nukleinsavak szintjén történő szelektív kölcsönhatás („gén próbák ) segítségével.They can be used to treat infections and diseases, for example, by blocking the expression of bioactive proteins at the level of nucleic acids (such as oncogenes). The oligonucleotide cleavage fragments of the present invention are useful as a diagnostic horn and can be used as a gene probe for the detection of viral infections or diseases of genetic origin by selective interaction at the level of single or double stranded nucleic acids ("gene probes").

A találmány egy további tárgyát a találmány szerint előállított oligonukleotidoknak - vírusfertőzések vagy genetikai erede• · • · ·· • · ·· ·· • · • · · · · · • · · tű betegségek kimutatására — diagnosztikumként történő felhasználása képezi.Another object of the invention is the use of the oligonucleotides of the invention as diagnostic agents for the detection of needle diseases of viral infections or genetic origin.

A találmánynak egy másik tárgyát szintén a találmány szerinti o.l i gonukleotidoknak a felhasználása képezi, melegvérűek — beleértve az embert — betegségeinek kezelésére irányuló olyan terápiás eljárásban, ahol nukieotio-szekvenciákat inaktiválunk a testben. Körülbelül 10 kg testtömegű melegvérűeknek történő beadásnál az adagolás lehet például 0,01-1000 mg naponta. A beadás előnyösen gyógyszerészeti készítmény formájában történik parenterálisan (gyomor- és bélrendszeren kívül), például intravénásán (vénába adva) vagy intraperitoneálisan (hashártyán át). Parenterális beadáshoz elsősorban vízoldható hatóanyag vizes oldatai alkalmasak, például vízoldható, fiziológiailag jelentéktelen sóé, vagy olyan hatóanyagok vizes szuszpenziói, amelyek viszkozitást növelő anyagokat - mint például nátrium-karboximetil-cellulózt, szorbitot és/vagy dextránt és adott esetben stabiiizátc-rokat - tartalmaznak. A hatóanyag - adott esetben segédanyagokkal együtt - liofilizátum formájában is rendelkezésre állhat, és a beadás előtt megfelelő oldószerek hozzáadásával oldatba vihető.Another object of the present invention is also the use of the oligo gonucleotides of the invention in a therapeutic method for treating diseases of the warm-blooded, including human, subject to inactivation of nucleotide sequences in the body. For warm-blooded animals weighing about 10 kg, the dosage may be, for example, 0.01 to 1000 mg per day. The administration is preferably in the form of a pharmaceutical composition parenterally (outside the gastrointestinal tract), for example, intravenously (intravenously) or intraperitoneally (intraperitoneally). For parenteral administration, aqueous solutions of a water-soluble active ingredient are particularly suitable, for example, water-soluble, physiologically insignificant salts, or aqueous suspensions of active substances which contain viscosity-enhancing agents such as sodium carboxymethylcellulose, sorbitol and / or dextran and optionally stabilize them. The active ingredient, if appropriate together with excipients, may also be present as a lyophilisate and may be reconstituted by the addition of suitable solvents before administration.

A találmánynak egy további tárgyát olyan vizes készítmény és különösen vizes oldaton vagy szuszpenzión alapuló gyógyszerészeti preparátum képezi, amely egy találmány szerinti oligonukleotidot hatékony mennyiségben egymagában vagy más hatóanyagokkal együtt, gyógyszerészeti hordozóanyagként előnyösen jelentős mennyiségű vizez, és adott esetben segédanyagokat tartalmaz.A further object of the present invention is to provide an aqueous composition, and in particular a pharmaceutical preparation based on an aqueous solution or suspension, which comprises an effective amount of an oligonucleotide of the invention alone or in combination with other active ingredients, preferably as a pharmaceutical carrier.

A gyógyszerészetileg hatékony találmány szerinti cligonukle·· otid parenterálisan beadható készítmények vagy infúziós oldatok formájában alkalmazható. Ilyen oldatok előnyösen izotóniás vizes oldatok vagy szuszpenziók, ahol ezek — például liofilizált preparátumoknál, amelyek a hatóanyagot egymagában vagy hordozóanyaggal , példáu1 mánnitta! egvüut tarráírnázzák - felhasználás előtt készíthetők el. A gyógyszerészeti készítmények lehetnek sterilizáltak és/vagy tartalmazhatnak segédanyagokat, például konzerváló, stabilizáló, térnálósító és/vagy emulgeáló anyagokat, oldhatóságot fokozókat, sókat az ozmózisnyomás szabályozására és/vagy fuffereket. A gyógyszerészéül készítményeket - amelyek kívánság szerint további, gyógyszerészetileg hatékony anyagokat, mint például antibiotikumokat tartalmazhatnak — ismert módon, például szokásos feloldási vagy liofilizálási eljárások segítségével állítjuk elő, és körülbelül 0,1-90%, különösen körülbelül 0,5-30%, például 1-5% hatóanyago(ka)t tartalmaznak. A találmány szerinti konjugátumok inhalálással vagy liposzómás beadási formában is alkalmazhatók.The pharmaceutically effective cligonucleic acid of the present invention can be used in the form of parenteral formulations or infusion solutions. Such solutions are preferably isotonic aqueous solutions or suspensions, for example in the case of lyophilized preparations containing the active ingredient alone or with a carrier, for example mannitol. are stamped on the Christmas tree - they can be prepared before use. The pharmaceutical compositions may be sterilized and / or may contain adjuvants such as preserving, stabilizing, bulking and / or emulsifying agents, solubilizers, salts for controlling osmotic pressure and / or buffers. Pharmaceutical formulations which may contain additional pharmaceutically active substances, such as antibiotics, if desired, are prepared in a known manner, for example, by conventional dissolution or lyophilization procedures, and are from about 0.1% to about 90%, particularly from about 0.5% to about 30%, e.g. They contain 1-5% of active ingredient (s). The conjugates of the invention may also be administered by inhalation or in the form of liposomal administration.

A találmány szerinti konjugátumok felhasználást nyerhetnek diagnosztikai célra, vagy mint molekuláris biológiai segédanyag, szekvencia-specifikus endoribonukleázként.The conjugates of the invention can be used for diagnostic purposes or as a molecular biological excipient as a sequence-specific endoribonuclease.

Az ábrákon példaszerűen mutatjuk be egy találmány szerinti antiszenz-oligonukleotid konjug&tumból és cél-RNS molekulából álló hibrid szerkezetének különböző lehetőségeit, ahol a konjugátum szerkezetét mindenkor úgy választjuk meg, hogy a cél-RNSsel képzett hibridben legalább egy páratlan nukleotid kelethez2 QThe Figures illustrate, by way of example, various possibilities for the hybrid structure of an antisense oligonucleotide conjugate of the invention and a target RNA molecule, wherein the structure of the conjugate is always chosen so that at least one odd nucleotide in the hybrid of the target RNA

Az 1. ábra vázlatosan mutatja egy cél-RNS („5'-vei jelölt • · vonal) és egy antiszenz-oligonukleotid („3'-vei jelölt vonal) — amelyhez a találmány szerint egy komplex („Ln-nel jelölt vonal), mint átészterező illetve hidrolizáló katalizátor kötődődik (úgynevezett konjugátum) — hibridjét, ahol a komplex kötőhelye az antiszenz-oligonukleotid-szekvenc:ár belül található. A megadott számozás a cél-RNS nukleotid építőelemeire vonatkozik, ahol a számozás úgy halad, hogy az antiszenz-oligonukleotidnak a komplexet kötő nukleotidjával komplementer cél-RNS nukleotidot jelöljük „0-val. A további számozás növekvő sorrendben (+1, +2 stb.) 3' -irányban illetve csökkenő sorrendben (-1, -2 stb.) 5' irányban halad a cél-RNS-en. Egy, az antiszenz-oligonukleotid szerkezete alapján a cél-R.NS-en fellépő páratlan nukleotidot (lehet több páratlan nukleotid is) kitüremkedésként ábrázolunk és a jelen esetben ez a 0. helyzetből kiindulva 3'-irányban (itt a +2. helyzetben) található a cél-RNS-en.Figure 1 schematically shows a target RNA (&quot; 5 &quot; line) and an antisense oligonucleotide (&quot; 3 &quot; line) for which a complex (&quot; Ln &quot; line) is used according to the invention. , as a transesterification or hydrolyzing catalyst (so-called conjugate), where the binding site of the complex is within the antisense oligonucleotide sequence: price. The given numbering refers to the nucleotide building blocks of the target RNA, wherein the numbering proceeds by designating the target RNA nucleotide complementary to the complex-binding nucleotide of the antisense oligonucleotide as "0". Further numbering runs in ascending order (+1, +2, etc.) in the 3 'direction, and in descending order (-1, -2, etc.) in the target RNA. Based on the structure of the antisense oligonucleotide, the odd nucleotide on the target R.NS (there may be several odd nucleotides) is depicted as a protrusion, and in this case, starting at position 0, 3 '(here + 2). found on the target RNA.

A 2. ábra vázlatosan mutatja egy cél-RNS és egy találmány szerinti antiszenz-oligonukleotid-konjugátum hibridjét, ahol egy páratlan nukleotid a 0. helyzetből kiindulva 5' -irányban (ebben az esetben a -2. helyzetben) található a cél-RNS-en. Egyébként az 1. ábrához megadott megfelelő definíciók érvényesek.Figure 2 schematically shows a hybrid of a target RNA and an antisense oligonucleotide conjugate of the invention, wherein an odd nucleotide from position 0 is located 5 '(in this case, position -2) of the target RNA. I. Otherwise, the corresponding definitions given in Figure 1 apply.

A 3. ábra vázlatosan mutatja egy cél-RNS és egy találmány szerinti antiszenz-oligonukleotid-konjugátum hibridjét, amelynél a komplex kötőhelye az antiszenz-oligonukleotid végén található, és ahol egy páratlan nukleotid a 0. hely: jtből kiindulva 5' irányban (ebben az esetben a -3. helyzetben) található a célRNS-en. Egyék ként az 1. ábrához megadott megfelelő definíciók érvényesek.Figure 3 is a schematic representation of a hybrid of a target RNA and an antisense oligonucleotide conjugate of the invention, wherein the complex has a binding site at the end of the antisense oligonucleotide and wherein an odd nucleotide starts at position 5: in position -3) is located on the target RNA. As appropriate, the corresponding definitions given in Figure 1 apply.

A következő példák világossá teszik a találmányt -The following examples illustrate the invention -

• « terplridm-iantanid-komplexek kiindulási vegyuM előállítása• Preparation of starting compounds of terplridium-imidan complexes

Al, példa: Terpiridin-bisz-hidrazino-vegyületek előállításaExample A1: Preparation of terpyridine bis-hydrazino compounds

a) o-acetil-2-bróm-pirrdin (100 mM) 200 mi metancdos oldatához jégfürdcber. történő hűtés közben 40 ml 2 M vizes kálium-hidroxid oldatot adunk. A megfelelően szubsztituált banzaldehid (400 mM) hozzáadása után eltávolítjuk a hűtőfürdőt és a keveréket 4 órán át szobahőmérsékleten tovább keverjük. A terméket leszűrjük, háromszor mossuk vízzel és kétszer hideg metanollal és erős vákuumban szárítjuk.a) An ice bath was added to a solution of o-acetyl-2-bromopyridine (100 mM) in 200 mL of methane. while cooling, 40 ml of 2M aqueous potassium hydroxide solution were added. After addition of appropriately substituted banaldehyde (400 mM), the cooling bath was removed and the mixture was stirred for 4 hours at room temperature. The product was filtered off, washed three times with water and twice with cold methanol and dried under high vacuum.

Ezen előírás szerint állítjuk elő az a/1. (Rí.: fe.nil-4-OCH₃;According to this specification, a. (R .: _{fe.nil-4-OCH3;}

mM) és vei le^- mM) and down ^-

b) Az a,β-telítetlen karbonil-vegyületet a)-bői (30 mM), (2-brőm-piridil-karbonil-metil)-piridin-jodidot (12,1 g, 30 és ammónium-acetátot (13,9 g, 180 mM) egy lombikba helyezőülb) The α, β-unsaturated carbonyl compound from a) (30 mM), (2-bromopyridylcarbonylmethyl) pyridine iodide (12.1 g, 30 and ammonium acetate (13.9)) g, 180 mM) in a flask

100 ml ecetsavval vegyítjük. A keveréket visszafolyó hőt felszerelve forraljuk. 2 óra után szobahőmérsékletre hűtjük, szűrj ok és az így kapott terméket erős vákuumban regszárítjuk • · • · ·It is mixed with 100 ml of acetic acid. The mixture is heated to reflux. After 2 hours, cool to room temperature, filter, and re-dry the resulting product under high vacuum.

Ξ Ζ θ Ω GΞ Ζ θ Ω G

Mt: 497,1)Mt: 497.1)

Titán(absz . ) szc tium-alumínTitanium (abs.) Scium-aluminum

Ο nercigΟ minutes

Hozzáadjuk lőírás szerint állítjuk elő és b/2. (R : fenil-4-NO₂; Mt:It is added according to the writing and b / 2. (R: phenyl-4-NO ₂ ; Mt:

tetraklorid oldatához (30 mM) üahőmérsékleten argon átmos;a solution of tetrachloride (30 mM) was purged with argon at ambient temperature;

íum-hidridet (22 mM) adagolu szobahőmérsékleten keverjük, a b/2. vegyületet (10 mik) és a b/1. (Rí: fenil-4-OCH₃ Ammonium hydride (22 mM) was stirred at room temperature, b / 2. compound (10 µm) and b / 1. (R: _{phenyl-4-OCH3}

512) vegyületeket.512).

ml tetrahidrczuránba zférában részletekben li nk. A kapott szuszpenzió maja 0 ^-ra lennejuk a szuszpenziót 30 perei szobahőmérsékleten keverjük. 0 C-on, 50 ml víz cseppenként tör tén.ő óvatos hozzáadása után 25 ml 25%-os ammónium-hidroxid clda tet adunk hozzá. A keveréket 150 mi kloroformmal elegyítjük é celiten szűrjük. A vizes fázist elválasztjuk és háromszor extra háljuk kloroformmal. Minden szerves fázist egyesítünk, egvsze mossuk vízzel, nátrium-szulfáton szárítjuk és koncentráljuk.ml of tetrahydrocurane in a sphere in portions. The resulting slurry would be 0 to 0, and the slurry was stirred at 30 rpm for room temperature. After careful addition of 50 ml of water at 0 C, 25 ml of 25% ammonium hydroxide solution was added dropwise. The mixture was mixed with 150 ml of chloroform and filtered through celite. The aqueous phase was separated and extracted three times with chloroform. All organic phases are combined, washed with water, dried over sodium sulfate and concentrated.

Ezen előírás szerint állítjuk elő a b/3. (íb: fenil-4-NH₂ Prepared according to this specification b / 3. (Ib: phenyl-4-NH ₂

Mt: 432,5) vegyületet.Mt: 432.5).

A megfelelő dibrőm-terpiridm vegyületet b)-bői (10 mM) 3 ml metil-hidrazinban oldjuk és 17 órán át visszafolyó hűtőve felszerelve forraljuk. Szobahőmérsékletre történő lehűtés utá beoároljuk és a maradékot 20 ml metanolban zelvesszun. A termé két leszűrjük és erős vákuumban megszárítjuk.The corresponding dibromotterpyridine compound from b) (10 mM) was dissolved in 3 ml of methylhydrazine and refluxed for 17 hours. After cooling to room temperature, the mixture was evaporated and the residue was stirred in 20 ml of methanol. The product is filtered off and dried under high vacuum.

Ezen előírás szerint állítjuk elő a o/l. (b: fenil-4-OCE₃ • · • */'· · · * υ · · ·This specification is prepared in ao / l. (b: Phenyl-4-OCE ₃ • · • * / ’· · * υ · · ·

Μΐ /2. (Ft-, : f enil-4-NH_? ; Mt :Μΐ / 2. (Ft-,: 4-NH-phenyl, _Mw?:

igyületeket.igyületeket.

“ih;"Ih;

szusz— tendáljuk és jeges fürdőben történő hűtés közben 20 perc bor-tribrcmid (50 mM) 1 mólos metiién-kioridos oldatával elegyítjük. k szuszpenziót 5 napig visszafolyó hűtővel felszerelve forraljuk. Szobahőmérsékletre történő lehűtés után 300 ml jeges vízre öntjük, 200 ml 2 M vizes sósavval megsavanyítjuk. Éterrel történő kétszeri extrakció után a vizes fázist 10%-os vizes nátrium-karbonát oldattal pH 9,0-re állítjuk be és 30 percig keverjük. A kicsapódó terméket c/3. (R_:: fenrl-4-ΟΗ; Mt: 413,5) leszűrjük és erős vákuumban megszárítjuk.slurry and mix with boron tribromide (50 mM) in 1 M methylene chloride for 20 minutes while cooling in an ice bath. The suspension is refluxed for 5 days. After cooling to room temperature, it is poured into 300 ml of ice water and acidified with 200 ml of 2M aqueous hydrochloric acid. After extraction twice with ether, the aqueous phase was adjusted to pH 9.0 with 10% aqueous sodium carbonate solution and stirred for 30 minutes. The precipitated product is c / 3. (R _:: fenrl-4-ΟΗ; Mt: 413.5) is filtered off and dried under high vacuum.

(c)(C)

A2, példa: 3- [4'- (2' ,6'-diformil-piridin)]-propionsav előállításaExample A2: Preparation of 3- [4'- (2 ', 6'-diformylpyridine)] propionic acid

a) 3,5 g 4-bróm-piridin-2,6-karbonsav-dimetilésztert, 390 mg tritol11-foszfint, 9,3 ml akrilsav-tercier-butilésztert, 7,1 mi trietil-amrnt, 30 ml dimetil-formamidot és 237 mg palládium-acetátot keverünk össze és 110 °C-ra melegítjük. 90 perc után a reakciókeveréket szobahőmérsékletre hűtjük le, éter-'metilén-klorid uk es avmeuiuv-Klórra/v;a) 3.5 g 4-Bromopyridine-2,6-carboxylic acid dimethyl ester, 390 mg tritol-11-phosphine, 9.3 ml acrylic acid tert-butyl ester, 7.1 ml triethylamine, 30 ml dimethylformamide and Palladium acetate (237 mg) was stirred and heated to 110 ° C. After 90 minutes, the reaction mixture was cooled to room temperature with ether-methylene chloride and methyl chloroform / v;

;rves ráz is' 'ZUZd-S pár l· en : ez mérví z f ák é s erí n ve kuuvhen ve «·; rves shake too '' ZUZd-S pair l · en: this is a water tree and erí n ve kuuvhen ve «·

C Η Ν számított 59,81 5,96 4,36 kapott 59,8 6,0 4,1C Η Ν calculated 59.81 5.96 4.36 found 59.8 6.0 4.1

250 mg palládiumot aktív szénen (5%) és a fent kapott vegyület 2,5 g-ját 250 ml metanolban oldunk és egy éjszakán át szobahőmérsékleten hidrogén atmoszférában hidráljuk. A rerméket Hyflo-n szűrjük, a szűrletet rotációs bepárlón betöményírjük és szobahőmérsékleten erős vákuumban megszárítjuk.Palladium (250 mg) on charcoal (5%) and 2.5 g of the compound obtained above were dissolved in methanol (250 ml) and hydrogenated overnight at room temperature under a hydrogen atmosphere. The cores were filtered on Hyflo, the filtrate concentrated on a rotary evaporator and dried at room temperature under high vacuum.

CC

HH

NN

számított calculated 59,43 59.43 6, 55 6, 55 4,33 4.33 kapott got 59,3 59.3 6, 6 6, 6 4,3 4.3

A fent Kapott vegyület 5,0 g-ját 50 ml metanolban és 50 ml tetrahidrofuránban oldjuk. 0 ^CC-ra történő lehűtés után 1,1 g NaBH^-et adunk hozzá. 50 perc elteltével további 1,1 g NaBH₄-et adunk hozzá és 130 perc múlva további 0,5 g NaBH/j-et adunk hozzá. Összesen 165 perc után szobahőmérsékletre melegítjük fel. Újra lehűtjük 0 °C-ra. 3,5 óra múlva mégegyszer 1,1 g NaBH₄-et adunk hozzá. 6 óra elteltével 60 ml térfogatra pároljuk be. Ezután telített ammónium-klorid oldatot csepegtetünk hozzá, négyszer extraháljuk metilén-kloriddal, a szerves fázisokat egyszer mossuk ammónium-kíorid oldattal, nátrium-szulfáton szárítjuk, leszűrjük és bepároljuk.5.0 g of the compound obtained above are dissolved in 50 ml of methanol and 50 ml of tetrahydrofuran. After cooling to 0 ^° C, 1.1 g of NaBH 4 are added. After 50 minutes, an additional 1.1 g of NaBH _{4 was} added and after 130 minutes, an additional 0.5 g of NaBH 4 was added. After a total of 165 minutes, warm to room temperature. Re-cool to 0 ° C. After 3.5 hours, 1.1 g of NaBH ₄ are added again. After 6 hours, concentrate to 60 ml. A saturated solution of ammonium chloride was added dropwise, the mixture was extracted four times with methylene chloride, the organic phases were washed once with ammonium chloride solution, dried over sodium sulfate, filtered and evaporated.

C C H H K K számítót! calculator! 6 2, 90 6 2, 90 7, 92 7, 92 5,24 5.24 kapott got 63,0 63.0 7,9 7.9 1 ? 1?

kaocsolc :e.er:-aio nk hozzakaocsolc: e.er: -aio nk brings it

A fent kapóit vegyület 19,The above compound 19,

ICLICL

0 ml dioxánban oldjuk.Dissolve in 0 ml dioxane.

· .’· .·· :>···:· :··♦ ciókeveréket 100 °C-ra melegítjük fel és keverjük, 45 perc múlva szobahőmérsékletre hűtjük le. További két órás keverés után aThe cation mixture was heated to 100 ° C and stirred and cooled to room temperature after 45 minutes. After stirring for another two hours,

reakciókeveréket reaction szűrjük és filter and rotációs rotational bepárlón betöményítjük. concentrate. C C H H N N számított calculated 63, 87 63, 87 6, 51 6, 51 5,32 5.32 kapott got 64,14 64.14 6, 53 6, 53 5,43 5.43 A fent kapó The one above tt vegyület tt compound 4,7 g-já 4.7 g t 17,2 ml jéghideg tnfluor 17.2 ml of ice-cold tnfluoro ecetsavhoz adjuk of acetic acid . Az összeöntés után . After the molding a keveréket 0 fc-on betörné break the mixture at 0 fc n y 11 j ü k . n y 11 j. C C H H N N számított calculated 57, 97 57, 97 4, 38 4, 38 6,76 6.76 kapott got 57,55 57.55 4,21 4.21 6,61 6.61 b) 5 g 4-bróm-piridir b) 5 g of 4-bromopyridine ι-2,6-karbonsav-dimetilésztert 175 m ι-2,6-Carboxylic acid dimethyl ester 175 m

tetrahidrofuránban oldunk szobahőmérsékleten. Ehhez kapcsolódóan 75 ml metanolt adunk hozzá. 0 °C-ra hűtjük, 45 perc alatt részletekben 3,44 g nátrium-bórhidridet adunk hozzá és hagyjuk szobahőmérsékletre melegedni. 1 óra múlva 30 ml acetont csepegtetünk hozzá 10 percen belül. A reakciókeveréket 1 óra hosszat visszafolyó hűtővel felszerelve melegítjük, majd a reakciókeveréket rotációs bepárlón szárazra pároljuk. A maradékot szobahőmérsékleten 50 ml piridinbe keverjük bele. Ehhez 0,1 g 4-dimetil-ami0 no-piriaint adunk, majd 0 C-ra lehűtjük. 30 percen belül 34,4 ml ecetsavanhidridet csepegtetünk hozzá. A szuszpenziót hagyjuk szobahőmérsékletre felmelegedni. 50 ml tetrahidrofuránt adunk hozzá. Egy éjszakán ét szobahőmérsékleten történő keverés után a reakciókeveréket szűrjük és kétszer 50-50 ml tetrahidrofuránnal mossuk. A szűrletet rotációs bepárlón koncentráljuk. Kristályo36 ·· ·-·. .’· ,·· .·· ϊ :··. ··· i..dissolved in tetrahydrofuran at room temperature. To this is added methanol (75 mL). After cooling to 0 ° C, 3.44 g of sodium borohydride was added portionwise over 45 minutes and allowed to warm to room temperature. After 1 hour, 30 ml of acetone was added dropwise over 10 minutes. The reaction mixture is heated at reflux for 1 hour and then evaporated to dryness on a rotary evaporator. The residue is stirred in 50 ml of pyridine at room temperature. To this was added 0.1 g of 4-dimethylaminopyridine and then cooled to 0 ° C. Acetic anhydride (34.4 ml) was added dropwise over 30 minutes. The suspension was allowed to warm to room temperature. Tetrahydrofuran (50 mL) was added. After stirring overnight at room temperature, the reaction mixture was filtered and washed twice with 50 ml of tetrahydrofuran. The filtrate was concentrated on a rotary evaporator. Kristályo36 ·· · - ·. . '·, ··. ·· ϊ: ··. ··· i ..

··· ·· .. · .· · · sítással 4-bróm-2,6-di(acetoxi-metil)-piridint kapunk.Purification by 4 · bromo-2,6-di (acetoxymethyl) -pyridine gave ··· ···.

(Olvadáspont: 66-69 C.)(M.p. 66-69 C.)

0,982 g 4-bróm-2,6-di(acetoxi-metil)-piridint, 1,5 g 3-(tributil-sztannil)-akrilsav-etilésztert és 176 mg palládium-tetrakisz-(trifenil-foszfin)-t oldunk 25 mi dioxánban és 90 °C-ra melegítjük fel. 90 perc múlva a reakciókeveréket lehűtjük. A szilárd terméket elválasztjuk és hexán/ecetsav-észter eleggyel átkristályosítjuk. Mt : 321 (M )0.982 g of 4-bromo-2,6-di (acetoxymethyl) pyridine, 1.5 g of ethyl 3- (tributylstanyl) acrylic acid and 176 mg of palladium tetrakis (triphenylphosphine) are dissolved in 25 ml. we warm to 90 ° C in dioxane. After 90 minutes, the reaction mixture was cooled. The solid product was separated and recrystallized from hexane / acetic acid ester. Mt: 321 (M)

A fent kapott vegyület 2,74 g-ját és 70 mg Wilkinson-katalizátort 150 ml benzolban oldunk. 12,2 ml trietil-szilánt adunk hozzá és az oldatot visszafolyó hűtővel felszerelve forraljuk. 270 mg katalizátor trietil-szilánt feleslegben adagolunk egy órán belül részletekben. A terméket kromatográfiásan tisztítjuk.2.74 g of the compound obtained above and 70 mg of Wilkinson's catalyst are dissolved in 150 ml of benzene. 12.2 ml of triethylsilane are added and the solution is refluxed. An excess of 270 mg of catalyst triethylsilane was added over one hour in portions. The product was purified by chromatography.

Mt: 323.Mt: 323.

267 mg nátriumot oldunk 50 ml etanolban. Ennek az oldatnakSodium (267 mg) was dissolved in ethanol (50 mL). For this solution

7,2 ml-ét a fent kapott vegyület 1,845 g-jának 35 ml etanolban történt feloldásával kapott oldathoz adjuk hozzá. 2,5 óra szobahőmérsékleten történő keverés után a reakciókeveréket Kieselgélen szűrjük és a szűrletet szárazra pároljuk. A terméket egy éjszakán át erős vákuumban szárítjuk.7.2 ml is added to a solution of 1.845 g of the compound obtained above in 35 ml of ethanol. After stirring at room temperature for 2.5 hours, the reaction mixture was filtered over silica gel and the filtrate was evaporated to dryness. The product was dried overnight under high vacuum.

NMR(CDC1₃)Ő7, 0(2H, s) , 4, 7 (4H, s) , 4, 1 (2H, q) , 2, 9 (2H, t) , 1,2 (3H, t)NMR (CDCl ₃ ) δ7.0 (2H, s), 4.7 (4H, s), 4.1 (2H, q), 2.9 (2H, t), 1.2 (3H, t)

A fent kapott vegyület 1,27 g-ját 30 ml dioxánban oldjuk.1.27 g of the compound obtained above are dissolved in 30 ml of dioxane.

Ehhez adunk 714 mg szelén-dioxidot. A teakorókeveréket felmelegítjük és 2 óra múlva vattán szűrjük. A szűrletet szárazra pároljuk. A maradékot ecetsav-észter/metiién-klorrd (51) elegyben felvesszük es Kreselgélen szűrjük.To this was added 714 mg of selenium dioxide. The teacup mixture was heated and after 2 hours filtered on a cotton pad. The filtrate was evaporated to dryness. The residue was taken up in acetic acid ester / methylene chloride (51) and filtered through Kreselgel.

Έ NME (CDCl δ!0, 1 (2H, s ) , 8, 0 (2H, s ) , 4 , 1 (2H, q) , 3 , 1 (2H, t) , 2 , 7 (2H, t) , • ·Έ NME (CDCl δ, 0.1 (2H, s), 8.0 (2H, s), 4, 1 (2H, q), 3, 1 (2H, t), 2.7 (2H, t) , • ·

1,2(3Η,ο)1.2 (3Η, ο)

Q ml éter és 350 mg fent kapott vegyület oldatához 0 C-on egy előzőleg elkészített oldat (0,949 g réz-bromid, dimetilszolfid 10 ml éterben 0 °C-ra hűtve és 5,9 ml metil-lítiumot hozzáadva) 13 ml-ét adjuk. 5,5 óra szobahőmérsékleten történő keverés után 0 °C-ra hűtjük. Hozzáadunk 2 ml jégecetet 8 ml éterben és 8 ml etánuiolt. Egy éjszakán át szobahőmérsékleten történő keverés után 60 ml vizet adunk hozzá és metilén-kloriddal négyszer kirázzuk. A szerves fázist nátrium-szulfáttal szárítjuk, szűrjük, rotációs bepárlón betöményítjük és kromatográfiásan tisztítjuk. Mt: 266 (M+H) oTo a solution of Q ml of ether and 350 mg of the compound obtained above, at 0 ° C, add 13 ml of a previously prepared solution (0.949 g of copper bromide, dimethylsulfide in 10 ml of ether cooled to 0 ° C and 5.9 ml of methyl lithium). . After stirring for 5.5 hours at room temperature, it was cooled to 0 ° C. 2 ml of glacial acetic acid in 8 ml of ether and 8 ml of ethanol are added. After stirring overnight at room temperature, water (60 mL) was added and the mixture was extracted four times with methylene chloride. The organic phase is dried over sodium sulfate, filtered, concentrated on a rotary evaporator and purified by chromatography. Mt: 266 (M + H) +

4,5 ml metilén-klorid és oxalil-klorid oldatához -78 C-onTo a solution of 4.5 ml of methylene chloride and oxalyl chloride at -78 ° C

0,5 ml DMSO-t adunk. 15 perc után ezt az oldatot a fent kapott vegyület 193 mg-ját 4 ml metilén-kloridban tartalmazó oldathoz adjuk. Két óra -78 C-on tartás után 1,5 ml trietil-amint adunk oDMSO (0.5 mL) was added. After 15 minutes, this solution was added to a solution of 193 mg of the compound obtained above in 4 ml of methylene chloride. After two hours at -78 ° C, 1.5 ml of triethylamine are added o

hozzá. 30 perces 0 C-on történő keverés után 15 ml vizet adunk hozzá és dietil-éterrel négyszer kirázzuk. A szerves fázist nátrium-szulfáttal szárítjuk, szűrjük, rotációs bepárlón betöményítjük és kromatográfiásan tisztítjuk.added. After stirring for 30 minutes at 0 ° C, 15 ml of water are added and the mixture is extracted four times with diethyl ether. The organic phase is dried over sodium sulfate, filtered, concentrated on a rotary evaporator and purified by chromatography.

számított kapottcalculated received

63, 8763, 87

3,963.96

6,516.51

6,556.55

5, 325, 32

5,4 55.4 5

A fent kapott vegyület 0,464 qml 4 M sósavat együtt u0 C-ra melegítünk. 90 perc elteltével a reakciókeverékei szobahőmérsékletre hűfjük vissza és jeges vízzel hígítjuk. Kristályos terméket kanunk.The compound obtained above was heated to 0.degree. C. with 0.464 qml 4M hydrochloric acid. After 90 minutes, the reaction mixture was cooled to room temperature and diluted with ice water. Crystalline product.

• · · • · számított• · · • · calculated

61,2761.27

5,575.57

5,95 kapott5.95

61,261.2

5,55.5

B) A terpiridin-lantanid-komplexek előállításaB) Preparation of terpyridine-lanthanide complexes

Bl. példa:Example Bl:

a) Az Al· c) példából a megfelelő terpiridin-bisz-hidrazinovegyület 1 mM-ját argon áramban 60 ml abszolút metanolban veszszük fel, lantanid (111)-acetáttal (1 mii) elegyítjük és 10 percig visszafolyó hűtővel felszerelve felforraljuk. Ehhez az oldathoz egymás után a megfelelő 2,6-dikarbonil-vegyűlet 1,2 mM-ját és 5 mM koncentrált vizes sósavat adunk. 2 napig forraljuk. Szobahőmérsékletre történő lehűtés után a terméket leszűrjük és erős vákuumban szárítjuk.a) 1mM of the corresponding terpyridine bis-hydrazino compound from Example A1c is taken up in 60 ml of absolute methanol under argon flow, mixed with lanthanide (III) acetate (1 ml) and refluxed for 10 minutes. To this solution was added sequentially 1.2 mM of the corresponding 2,6-dicarbonyl compound and 5 mM concentrated aqueous hydrochloric acid. Boil for 2 days. After cooling to room temperature, the product is filtered off and dried under high vacuum.

Ezen leírás szerint állítjuk elő az 1. táblázatban az 1.1től 1.28-ig terjedő vegyületeket.According to this description, compounds 1.1 to 1.28 of Table 1 are prepared.

b) Az Al. c) példából a megfelelő terpiridin-bisz-hidrazinovegyület 1 mM-ját argon áramban 60 ml abszolút metanolban veszszük fel, lantanid (111)-klorid (1 mM) elegyítjük és 10 percig visszafolyó hűtővel felszerelve felforraljuk. Ehhez az oldathoz egymás után adjuk az A2. a) példában kapott vegyület 1,2 mM-ját. Egy éjszakán át forraljuk. Szobahőmérsékletre történő lehűtés után az oldószert lehúzzuk és a terméket dimetil-szulfoxidból és toiuolbói történő átknstályosítással kapjuk.b) 1mM of the corresponding terpyridine bis-hydrazino compound from Example A1c) is taken up in 60 ml of absolute methanol under argon, mixed with lanthanide (III) chloride (1mM) and refluxed for 10 minutes. To this solution is successively added A2. 1.2mM of the compound obtained in Example a). Boil overnight. After cooling to room temperature, the solvent is evaporated off and the product is obtained by recrystallization from dimethylsulfoxide and toluene.

Ezen leírás szerint állítjuk elő az 1. táblázatban tői 1.32-ig terjedő vegyületeket.The compounds of Table 1 to 1.32 are prepared according to this description.

az 1.2939 tahuthe 1.2939 Tahu

R.R.

RsRs

/gyület / Gyula Lr/ lr / Rí Ri υ υ R; R; Μ Α ? τ Q ro ζ* ~ Γ Μ — υ Μ Α? τ Q ro ζ * ~ Γ Μ - υ számított/ kap- calculated / get- 1 . 1 1. 1 La La ?h-H ? H H H H Η Η 706/705 706/705 1.2 1.2 La La Ph-OH Ph-OH H H Η Η 722,4/722,3 722.4 / 722.3 Ί j. . Ί j. . La La ?h-OCH₃ ? h-OCH ₃ H H Η Η 736,4/735,6 736.4 / 735.6 1 . 4 1. 4 La La Ph-NH₂ Ph-NH ₂ u u Η Η 1 . 5 1. 5 La La Ph-H Ph-H CH₃ CH ₃ Η Η 734,4/734,4 734.4 / 734.4 1 . 6 1. 6 La La Ph-OH Ph-OH ch₃ ch ₃ Η Η /50,1/ / υ 0, / 50,1 / / υ 0, 1 . 7 1. 7 La La ?h-OCH₃ ? h-OCH ₃ ch₃ ch ₃ Η Η 764,5/755,0 764.5 / 755.0 1 . 3 1. 3 Í-.G I-.g Ph-NK₂ Ph-NK ₂ ch₃ ch ₃ Η Η 7 4 9,5/74 9,5 7 4 9.5 / 74 9.5 1 . 9 1. 9 T? ? i T? ? i ?h-H ? H H Η Η Η Η 719,4/718,9 719.4 / 718.9 1 .10 1 .10 Eu Eu Ph-OH Ph-OH Η Η Η Η / 3 υ _f ο/ 3 υ _f ο 1.11 1:11 Ευ Ευ ?h-OCH-_; ? -H-OCH- _; Η Η Η Η 7 4 9, 5 174 9 ,3 7 4 9, 5 174 9, 3 __ , J, F. __, J, F. υ υ υ υ Ph-NHR Ph-NHR Η Η Η Η / 0 4 , 0 / /01,0 / 0 4, 0 / / 01.0

CHR • · · • ·CHR • · · • ·

1 . 15 1. 15 Eu Eu Ph-OCH₃ Ph-OCH ₃ ch₃ ch ₃ u u 777 , 777, 5/777, 5/777, 3 3 1.16 1:16 Eu Eu Ph-NH₂ Ph-NH ₂ ch₃ ch ₃ H H 762, 762, 5/762, 5/762, c c 1 . 17 1. 17 Ce Ce Ph-NH₂ Ph-NH ₂ ch₃ ch ₃ H H 750, 750 7/749, 7/749, 3 3 1 . 18 1. 18 Pr pr Ph-NH₂ Ph-NH ₂ ch₃ ch ₃ H H 751, 751, 4/750, 4/750, 9 9 1.19 1:19 Nd Nd Ph-NH₂ Ph-NH ₂ ch₃ ch ₃ H H 754 , 754, 8/752, 8/752, 7 7 1.20 1:20 Gd Gd Ph-NH₂ Ph-NH ₂ ch₃ ch ₃ H H 767, 767, 8/766, 8/766, 3 3 1.21 1:21 Tb tb Ph-NH₂ Ph-NH ₂ ch₃ ch ₃ H H 769, 769, 5/768, 5/768, 7 7 1.22 1:22 Dy Dy Ph-NH₂ Ph-NH ₂ ch₃ ch ₃ H H 773, 773, 1/773, 1/773, 2 2 1 . 23 1. 23 Ho Month Ph-NH₂ Ph-NH ₂ ch₃ ch ₃ H H 775, 775, 5/774, 5/774, ú ú 1 . 24 1. 24 Er Er Ph-NH₂ Ph-NH ₂ ch₃ ch ₃ H H 777, 777, 8/776, 8/776, Q Q 1.25 1:25 Tm tm Ph-NH₂ Ph-NH ₂ ch₃ ch ₃ H H 77 9, 77 9, 5/778, 5/778, 8 8 1.26 1:26 Yb Yb Ph-NH₂ Ph-NH ₂ ch₃ ch ₃ H H 783, 783, 6/783, 6/783, 0 0 1 . 27 1. 27 Lu Lu Ph-NH₂ Ph-NH ₂ ch₃ ch ₃ H H 7 8 5, 7 8 5, 5/784, 5/784, 7 7 1 .28 1 .28 Y Y Ph-NH₂ Ph-NH ₂ ch₃ ch ₃ H H 699, 699, 4/698, 4/698, 1 1 1 .29 1 .29 La La H H H H ch₂ ch ₂ CH₂COOHCH ₂ COOH 1.30 1:30 Eu Eu H H H H ch₂ ch ₂ ch₂coohch ₂ cooh 1 . 31 1. 31 La La Ph-H Ph-H H H <---2 <2 --- CPbCOOH CPbCOOH k k 1 . 32 1. 32 Eu Eu Ph-H Ph-H H H C H ₂ CH ₂ CHoCOOH CHoCOOH X * X * Ph: 4-fenil Ph: 4-phenyl én I ★ ★ c c H H N N Cl cl számított calculated +2DMSO) 2DMSO +) 45, 81 45, 81 4,16 4.16 11,55 1 11.55 1 0,9 6 0.9 6 kapott got 45,3 45.3 4,3 4.3 11,8 11.8 0, 6 0, 6 X ★ X ★ C C H H N N Cl cl számított calculated +2DMSO+4H₂O)+ 2DMSO + 4H ₂ O) 42,11 42.11 4 , r 8 4, r 8 10,62 1 10.62 1 0, 07 0, 07 kapott got 4 2,2 4 2.2 r Γ ί-, - r ~~ r Γ ί-, - r ~~ 10, 6 10, 6 Ϊ f Ϊ f

• · • ··· ··· ·• · • ··· ··· ·

Β2. példa: Izotiocianát-származékok előállításaΒ2. Example 1: Preparation of isothiocyanate derivatives

4,4 mM nátrium-dikarbonátből és 3,5 mM tiofoszgénből 4 ml kloroformban készült szuszpenzióhoz az 1. táblázat megfelelő komplexének oldatát adjuk. A keveréket szobahőmérsékleten 2,5 órán át erőteljesen keverjük. A kloroformcs fázist elválasztjuk és egyszer mossuk vízzel. Minden vizes fázist egyesítünk és megszárít₃uk. A.z így kapott, a 2. táblázatban 2.1-től 2.15-ig jelölt termékeket további tisztítás nélkül tovább felhasználjuk.To a suspension of 4.4 mM sodium dicarbonate and 3.5 mM thiophosgene in 4 ml of chloroform is added a solution of the corresponding complex of Table 1. The mixture was vigorously stirred at room temperature for 2.5 hours. The chloroform layer was separated and washed once with water. All aqueous phases were combined and dried with ₃ uk. The products thus obtained, indicated in Table 2, 2.1 to 2.15, are used without further purification.

2. táblázatTable 2

Vegyület Compound Ln ^J Ln ^{J R}1 ^R 1 ^R4 ^R 4 ^R5 ^R 5 Móltömeg [ M-Cl] számított/kapott Molecular weight [M-Cl] calculated / obtained 2.1 2.1 Ce Ce Ph-NCS Ph-NCS ch₃ ch ₃ H H 792,7/792,7 792.7 / 792.7 2 . 2 2. 2 Pr pr Ph-NCS Ph-NCS CPE CPE H H 793,5/791,2 793.5 / 791.2 2.3 2.3 Gd Gd Ph-NCS Ph-NCS CH₃ CH ₃ H H 809,9/807,4 809.9 / 807.4 2.4 2.4 Tb tb Ph-NCS Ph-NCS ch₃ ch ₃ H H 811,5/811,7 811.5 / 811.7 2.5 2.5 Dy Dy Ph-NCS Ph-NCS ch₃ ch ₃ H H 815,1/815,9 815.1 / 815.9 2.6 2.6 Ho Month Ph-NCS Ph-NCS ch₃ ch ₃ H H 817,5/816,2 817.5 / 816.2 2.7 2.7 Er Er Ph-NCS Ph-NCS ch₃ ch ₃ H H 819,9/819,0 819.9 / 819.0 2.8 2.8 Tm tm Ph-NCS Ph-NCS ch₃ ch ₃ p p 821,5/820,1 821.5 / 820.1 2 . 9 2. 9 Yb Yb Ph-NCS Ph-NCS che che H H 825,6/826,4 825.6 / 826.4 2 .10 2 .10 Eu Eu Ph-NCS Ph-NCS ch₃ ch ₃ H H 827,6/825,5 827.6 / 825.5 2.11 2:11 á the Ph-NCS Ph-NCS CH'.· CH '. · 741,5/740,2 741.5 / 740.2 2.12 2:12 La La Ph-NCS Ph-NCS CH ς CH ς H H 791,5/792,1 791.5 / 792.1

Eu oh jEu oh j

804,6/804,7804.6 / 804.7

2.132:13

2.142:14

Z 'VZ 'V

EuEu

Ph-NCSPh-NCS

Ph-NCSPh-NCS

Ph-NCSPh-NCS

C) Amino-oligonukleotidck előállításaC) Preparation of an amino oligonucleotide

Az ellenőrzött pórusé üveg („oontrcied poré glass = G?G) szilárd fázisából körülbelül 30 mg-ct mérünk be egy standard, biológiai rendszerekhez alkalmazott edénybe (Applied 3iosystem) 1,5 pM szintézishez. Az 1. képletű CPG szilárd fázis hordozza a szintetizálandó· ammo-oligonukleotid védett 3' -építőelemét (a oéldában dC).About 30 mg cc of the solid phase of the controlled pore glass (Gont G) was weighed into a standard biological system (Applied 3iosystem) vessel for 1.5 pM synthesis. The CPG solid phase of Formula 1 carries the protected 3 'building block (dC in the example) of the amino-oligonucleotide to be synthesized.

CPG • · · · ·· · · · ··· ··· • · · · · · · ,z oligomerizáláshoz a 6., 7., 8. és 3. képletű foszfor-amidit •együleteket visszük be.Phosphoramidite compounds of formulas 6, 7, 8 and 3 were introduced for oligomerization of the CPG • · · · · · · · · · · · · · · · ·

OSHE

p—och₂ch₂cn N(CH(CH₃)₂)₂ p-och ₂ ch ₂ cn N (CH (CH ₃ ) ₂ ) ₂

/ p—OCH₂CH₂CN/ p — OCH ₂ CH ₂ CN

N(CH(Cf-y₂), • · · • · · 9 '9 • · · · · · • · · · · 9 9N (CH (Cf-y ₂ ), • · · · 9 · 9 · 9 · 9 9

N(CH(CH₃)₂)₂ N (CH (CH ₃ ) ₂ ) ₂

P — OCH-CH,CN IP - OCH-CH, CN I

N(CH(CH₃)₂)₂ • · · • ·N (CH (CH ₃ ) ₂ ) ₂ • · · • ·

^ff ^f f

A szintézis ciklusokat az Applied Biosvstem 394-es számú szintézis automatájával (Svntheseautomat 394) végezzük azSynthesis cycles were performed on Applied Biosvstem Synthesizer 394 (Svntheseautomat 394).

Applied Biosvstem cég standard leírásának (User Manual VersionApplied Biosvstem Standard User Manual Version

2.0 (1992) 1.0 pMol Cyclus, Appen. 1-41) megfelelően, a következő változtatással: a 6., 7., 8. és 9. dezoxi-sorba tartozó foszfor-amidit kapcsolási ideje 2 percet tesz ki, a 10. és 11.2.0 (1992) 1.0 pMol Cyclus, Appen. 1-41), with the following change: the coupling time of the phosphoramidite of the 6, 7, 8 and 9 series is 2 minutes;

foszíor-amidité 10 percet tesz kr, a 12. képletűé 5 percig és a :é 40 percig tart; a 13. képletű fcszfor-amiditet 10013. kéol szoros .eslecmen visszük be.phosphoramidite takes 10 minutes, formula 12 takes 5 minutes and? 40 minutes; the phosphorus amide of Formula 13 is introduced into 100. col.

;vaooi, KeresKeoe_emben ki; vaooi, SearchKeoe_emben out

0,1 M fos • · tetrazol/aoetonitril: 4%, 96%, tercier-buti 1-fenoxi-ecetsavanhidrid/piridin/tetrahidrofurán:0.1 M Phos · · tetrazole / Acetonitrile: 4%, 96%, tert-butyl 1-phenoxyacetic anhydride / pyridine / tetrahydrofuran:

10%, 10%, 80%,10%, 10%, 80%,

N-meuil-imrdazol/tetrahidrofurán: 16%, 84%, urrklór-ecetsav/dimetil-klór-metán: 2%, 93%,N-methylimidazole / tetrahydrofuran: 16%, 84%, Uchloroacetic acid / dimethylchloromethane: 2%, 93%,

V YΟ p ο η z o z υ ι, / a -ε szintetizáljuk:V YΟ p ο η z o z υ ι, / a -ε is synthesized:

(8(8

, ahol T timmwhere T Tim

5' -GTA GAC TGG helyet5 '-GTA GAC TGG space

CGA GACGA GA

OpmOPM

• · · (631)• · · (631)

3’-GA TCG GCT GAC GGC TAG AGC3'-GA TCG GCT GAC GGC TAG AGC

Terein din-lan tanid-oliconukle konnoátumok előállításaPreparation of Terein din-lan tanid-oliconukle cononates

Dl. példa: Olyan konjugátumok előállítása, amelyeknél az oligonukleotid a lantanid-komplex terpiridin részéhez kötődikDl. Example 1: Preparation of conjugates in which the oligonucleotide binds to the terpyridine moiety of the lanthanide complex

a) A megfelelő oligonukleotid 0,2 mg-ját 150 ul ptridin/viz/ /trietil-amin (30:15:1) elegyében oldjuk. A 2. táblázat megfeleegvsa) 0.2 mg of the corresponding oligonucleotide is dissolved in 150 µl of ptridine / water / triethylamine (30: 15: 1). Table 2 is correct

20%20%

6,0, cen őszi .zoftocianát-kcmplexe 1 mg-jának hozzáadása urán a keveréket :án ár szobahőmérsékleten állni hagyjuk. A reakciókevereket zer 0,1 M kálium-klond oldatra! és háromszor vízzel szemben izáljuk. A terméket reverz fázisú H?LC-n (gradiens: 0-30% omtril 0,05 M trietil-ammónium-acetátban, 90 percig) kétől nukleozil-C₁₈-oszlopra, vagy ioncserélő H?LC-n (gradiens: 1 M kálium-klorid oldat és 80% 20 mM kálium-foszfát oldat pH amely 20% acetonitrilt tartalmaz, 10 percig; azután 60 perbeiül 80% kálium-kiorid oldat) keresztül 60 °C-on 3VDI.4000Aopra (5 pm) visszük fel, amely azután a 3. táblázat 3.1-tőlAdd 6.0 mg of 1 mg of zinc phthalocyanate kcmplex of urine to the mixture at room temperature. Pour the reaction mixture into a 0.1 M potassium clone solution! and heat it three times with water. The product was reversed-phase on H 2 LC (gradient: 0-30% omtril in 0.05 M triethylammonium acetate for 90 minutes) on _two nucleosyl C ₁₈ columns or ion-exchange H 2 LC (1 M gradient). potassium chloride solution and 80% 20mM potassium phosphate solution containing 20% acetonitrile for 10 minutes followed by 60 percellular 80% potassium chloride solution) at 60 ° C for 3VDI.4000A (5 pm) then Table 3.1 to 3.1

-rg és 3.18-tól 3.21-rg terjedő tiszta konjugátumait eredméD2. példa: Olyan konjugátumok előállítása, amelyeknél az oligonukleotid a lantanid-komplex piridin részéhez kötődik-rg and from 3.18 to 3.21-rg. Example 1: Preparation of conjugates in which the oligonucleotide binds to the pyridine moiety of the lanthanide complex

Az 1.29-től 1.32-tg terjedő megfelelő karbonsav-származék 3 gM-jának 200 ul dtmetil-szulfcxidos oldatát 3,3 uM dicikiohexil-karbodrtmiddei és 3,3 uh N-hrdrcxi-szukcinimrddel elegyítjük és • · ·A solution of 3 gM of the corresponding carboxylic acid derivative, 1.29 to 1.32 g, in 200 µl of dimethylsulfoxide is mixed with 3.3 µM dicyclohexylcarbodiimide and 3.3 µl of N-hrdrxi-succinimide and · · ·

-diizopropil-etil-amm hozzáadása után a megfelelő amino-oligo nukleotid 0,2 mg-ját adjuk hozzá. Négy nap szobahőmérséklete tartás után kétszer 50 mM trietil-ammór.ium-hidrogén-karbor.átta és kétszer vízzel szemben dializáljuk. P. reverz fázisú H?LC-ve történő tisztítás (lásd a)-t) a 3. táblázat 3.14-3.17, 3.19After adding diisopropylethylamine, 0.2 mg of the corresponding amino oligo nucleotide is added. After four days at room temperature, it is dialysed twice with 50 mM triethylammonium hydrocarbonate and twice with water. P. reverse phase H? LC purification (see (a)) is shown in Table 3. 3.14-3.17, 3.19.

3.20 és 3.22-3.25 vegyületeit eredményezi.3.20 and 3.22-3.25.

Vegy Dry ölet Oleta , 3 + ! , 3+ ! ^4 ^ 4 Rg rg Rg rg MM MM RZ RZ 1 1 La La ch₃ ch ₃ Ph-691 Ph-691 H H 7 0 7 0 82/7093 82/7093 3 . 3. p p Eu Eu fi -Ί com -Ί Ph-691 Ph-691 H H 0 >> 0 >> 95/7090 95/7090 3 . 3. 3 3 C Θ C Θ ch₃ ch ₃ Ph-691 Ph-691 H H 2 2 7, 7 /1 / 1 3 . 3. 4 4 ?r ? r Ph-691 Ph-691 H H 4 4 2, 2, 5* * 5 3 . 3. G G Cg cg ch₃ ch ₃ Ph-691 Ph-691 H H o She 7 , 7, 0 0 3 . 3. 6 6 ib ib CH, CH Ph-6 91 Ph-6 91 H H 2 2 t t 3 . 3. 7 7 Dv dv ch₃ ch ₃ p b - 5 3 p p b - 5 3 p H H - - ^! l ^! l ö She 3 . 3. 6 6 Ho Month ? G ~ 6 9 3 ? G ~ 6 9 3 H H 3 3 t t - - ₃₃ 9 9 - - pu-A 93 pu-A 93 u u 0 0 0 0 0 0 - - ¹¹

* ·« · · • · ·* · «· · • · ·

3.10 3:10 Tm tm ch₃ ch ₃ Ph-691 Ph-691 H H 27,5 27.5 3 . 11 3. 11 Yb Yb ch₃ ch ₃ Ph-691 Ph-691 H H 28,8 28.8 3 . 12 3. 12 Lu Lu ch. ch. Ph-691 Ph-691 H H 27, 9 27, 9 3 . 13 3. 13 Y Y ch₃ ch ₃ Ph-691 Ph-691 H H 27,4 27.4 3.14 3:14 Eu Eu H H fenil- phenyl A-691 A-691 7064/7086 7064/7086 3.15 3:15 La La H H fenil- phenyl A- 691 A-691 7051/7072 7051/7072 3.16 3:16 Eu Eu H H H H A-691 A-691 3.17 3:17 La La H H H H A-691 A-691 3 . 18 3. 18 Eu Eu ch₃ ch ₃ Ph-821 Ph-821 H H 9843/9853 9843/9853 3.19 3:19 La La H H feni 1- feni 1- A-821 A-821 9800/9800 9800/9800 3.20 3:20 Eu Eu H H fenil- phenyl A-821 A-821 9813/9839 9813/9839 3.21 3:21 Eu Eu ch₃ ch ₃ Ph-823 Ph-823 H H 9842/9861 9842/9861 3.22 3:22 La La H H fenil- phenyl A-82 3 A-82 3 3 5,6* 3 5.6 * 3.23 3:23 Eu Eu H H fenil- phenyl A-823 A-823 9811/9826 9811/9826 3.24 3:24 La La H H fenil- phenyl A-940 A-940 9757/9829 9757/9829 3.25 3:25 Eu Eu H H fenil- phenyl A-940 A-940 9770/9794 9770/9794 MM: szárnitott/kapott móltömeg MM: molecular weight derived / obtained RZ: ioncserél RZ: ion exchange ő HPLC retenciós idő HPLC retention time (perc) (minute) Ph-691 : Ph-691: -feni phenyl 1-N(H) C (S) - 1-N (H) C (S) - oligó 691 oligon 691 Ph-821 : Ph-821: -feni phenyl 1-N(H)C (S) - 1-N (H) C (S) - oligó 821 oligon 821 Ph-323 : Ph-323: -feni phenyl 1-N(H)C(S)- 1-N (H) C (S) - oligó 823 oligon 823 A-691 : A-691: -ch₂ck-ch ₂ ck ₂C (0)-oligó ₂ C (0) oligo 691 691 A-821 : A-821: -ch₂ce-ch ₂ ce ₂C (0) -oligó ₂ C (0) oligo 821 821 A-823 : A-823: -ck₂ch-ck ₂ ch ₂C (0) -oligó ₂ C (0) oligo 823 823 A-94 0 : A-94 0: -ch₂ce-ch ₂ ce ₂C (Op -oligó ₂ C (Op oligo 940 940 * reverz * reverse fázis phase ú HPLC retenciós idő = HPLC retention time (perc) (minute)

• * » a « »5 * ·♦• * »a« »5 * · ♦

RN lítái kén v okokbólRN lithium for sulfur reasons

visszük be.let's bring it in.

OCH₃ ó O-Si(CH₃)₂-C(CH₃)₃ /OCH ₃ -O-Si (CH ₃ ) ₂ -C (CH ₃ ) ₃ /

P — OCH-CH-CNP - OCH-CH-CN

II

Ν(ΟΗ(ΟΗ3)₂)₂ Ν (ΟΗ (ΟΗ3) ₂ ) ₂

• ·• ·

N(CH(CH₃)₃)₂ (4)N (CH (CH ₃ ) ₃ ) ₂ (4)

OCH₃ o 0-Si(CHj₂-C(CHj₃ (5)OCH ₃ -O-Si (CH _{2 -} C (CH ₃ ) (5)

P —OCH.CH.CN IP —OCH.CH.CN I

N(CH(CH₃)₂)₂ N (CH (CH ₃ ) ₂ ) ₂

ΟΟ

och₃ ο ρ—och_?ch₂cn Ioch ₃ ο ρ — och _? ch ₂ cn I

N(CH(CH₃)₂)₂ N (CH (CH ₃ ) ₂ ) ₂

p—och₇ch₂cn 1p — och ₇ ch ₂ cn 1

N(CH(CPy )₂ N (CH (CPy) ₂ )

A szintézis ciklusokat az Applied Biosystem 394-es számú szintézis automatájával (Syntheseautomat 394) végezzük az Applied Biosystem cég standard leírásának (User Manual Version 2.0 (1992) 1.0 pMoi Cvclus, Appen. 1-41) megtelelően, a következő változtatással: a ribo-sorba tartozó bősttor-amidit kapcsolási ideje 10 percet tesz ki.Synthesis cycles were performed on the Applied Biosystem Synthesizer 394 (Syntheseautomat 394) in accordance with Applied Biosystem Standard Description (User Manual Version 2.0 (1992) 1.0 pMoi Cvclus, Appen. 1-41), with the following modification: has a switching time of 10 minutes.

A további, kereskedelemben kapható reagenseket alkalmazzuk:The following commercially available reagents are used:

teszt;test;

te seprőnél' tercier-butil-fenoxi-ecetsavanhidrid/piridin/tetrahidrofurán:on your broom 'tert-butyl phenoxyacetic anhydride / pyridine / tetrahydrofuran:

10%, 10%, 80%,10%, 10%, 80%,

N-metil-imrdazol/tetrahidrofurán: 16%, 84%, triklór-ecetsav/dimetil-klór-metán: 2%, 98%, j ód/víz/pirrdin/tetrahidrofurán: 3%, 2%, 20%, 75%N-methylimidazole / tetrahydrofuran: 16%, 84%, trichloroacetic acid / dimethylchloromethane: 2%, 98%, iodine / water / pyridine / tetrahydrofuran: 3%, 2%, 20%, 75%

A következő szubsztrát-RNS-eket szintetizáljuk: A címben szereplő RNS-E1The following substrate RNAs were synthesized: The title RNA-E1

b) Leválás a szilárd fázisról (CPG) és a bázis védelmének megszüntetése: a szilárd fázist (1,5 pM szintézis) 800 pl ammóniával telített etanollal elegyítjük és szobahőmérsékleten egy éjszakán át inkubáljuk. Az ammóniával telített etanolt 1 rész etanolból és 3 rész 33%-os ammónium-hidroxidból állítjuk elő. Az inkubáció után az ammóniával telített etanolos oldatot aekantáljuk, a CPG-t ammóniás etanollal lemossuk és az egyesített oldac) ^A tercier-butil-dimetil-szilil-védőcsoport védelmének megszüntetése: A liofilizált próbát 800 pl 1 M tetrabutil-ammónium-fluorid/tetrahidrofurán (TBAF/THF) oldattal elegyítjük. A próbát 30 percig intenzíven elkeverjük. Az inkubációt 24 órán keresztül szobahőmérsékleten, fény kizárásával végezzük. Az RNSt 50 mM trietrl-amin-hidrogén-karbonát (TAHC) oldattal pH 7,0 (1b) Deprotection of the solid phase (CPG) and deprotection of the base: The solid phase (1.5 pM synthesis) was mixed with 800 µl of ammonia saturated ethanol and incubated overnight at room temperature. Ammonia-saturated ethanol was prepared from 1 part ethanol and 3 parts 33% ammonium hydroxide. After incubation with a saturated ammonia solution in ethanol aekantáljuk, the CPG was washed with ammonia in ethanol and the removal of combined oldac) ^of tert-butyl dimethylsilyl protecting group protection: Lyophilized probe 800 ul of 1 M tetrabutylammonium fluoride / tetrahydrofuran ( TBAF / THF). The test was vigorously stirred for 30 minutes. Incubation is carried out for 24 hours at room temperature with the exclusion of light. RNAt was diluted with 50 mM triethylamine bicarbonate (TAHC) solution at pH 7.0 (1

Q + 1) keverjük és közvetlenül 4 C-on dializáljuk. (A víz „Nanopure minőségű.)Q + 1) and dialyzed directly at 4 ° C. (The water is “Nanopure quality.”)

d) Dialízis: 3-szor dializálunk 7,5 mM TAHC oldattal pH 7,0 szemben. (A.z oldatot „Nanopure minőségű vízzel állítjuk elő, szén-droxiddai pH 7,0-re állítjuk be és 4 C-ra előhűtjük.) A próbát liofilizáljtk és dieti1-plrokarbonattal kezelt [ Sambrook, • · • ·d) Dialysis: Dialysis 3 times with 7.5 mM TAHC solution at pH 7.0. (A.z. solution is prepared with "Nanopure-grade water, adjusted to pH 7.0 with carbon dioxide and pre-cooled to 4 C.) The probe is lyophilized and treated with diethyl-1-plocarbon [Sambrook, · · · ·

Fritsch, Maniatis: Molecular Cloning, A Laboratory Manual,Fritsch, Maniatis: Molecular Cloning, A Laboratory Manual,

Second Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)] és autoklávozott vízben (DEPC-H₂O) vesszük fel. Egy részét 260 nm-en koncentráció meghatározásnak vetjük alá. A további RNS-sel végzete műveletekben mindig RNáz-tól és idegen ionoktól mentesen dolgozunk.Second Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)] and autoclaved water (DEPC-H ₂ O) is taken up. A portion was determined at 260 nm. In further operations with additional RNA, we are always free of RNase and foreign ions.

e) A szubsztrát RNS 5'végének markerezése [ P] γ-ΑΤΡ-vel:e) Labeling of the 5 'end of the substrate RNA with [P] γ-ΑΤΡ:

Enzimes kináz reakcióhoz 100 pM RNS-t a fenti szintézis leírásból 20 pl térfogatban 37 °C-on, 20 percig inkubálunk. A reakcióelegy 0,5 pl T4-polinukleotid-kinázt (Promega, 10 egység/pl), 2 pl kináz puffért (50 mM Tris-HCl pH 7,5, 10 mM MgCl₂, 5 mM 1,4ditio-D,L-treitol, 0,1 mM spermidm) és 0,5 pl ³²[ P] γ-ΑΤΡ-t (Amersham, >1000 Ci/mM, 10 pCi/pl) tartalmaz . Ehhez kapcsolódóanFor enzymatic kinase reaction, 100 µM RNA from the above synthesis description was incubated in 20 µl volume at 37 ° C for 20 minutes. The reaction mixture contained 0.5 µl T4 polynucleotide kinase (Promega, 10 units / µl), 2 µl kinase buffer (50 mM Tris-HCl pH 7.5, 10 mM MgCl ₂ , 5 mM 1,4-dithio-D, L-). threitol, 0.1 mM sperm) and 0.5 µl of ³² [P] γ-ΑΤΡ (Amersham,> 1000 Ci / mM, 10 µCi / µl). Related to this

138 pl Tris-HCl/EDTA (10 mM/Ι mM, pH 7,5) keverékét, 2 pl glikogént (35 mg/ml) és 40 pl ammónium-acetátot (10 mM) adunk hozzá.138 µl Tris-HCl / EDTA (10 mM / Ι mM, pH 7.5), 2 µl glycogen (35 mg / ml) and 40 µl ammonium acetate (10 mM) were added.

QQ

600 pl etanol hozzáadása után a próbát 30 percig -20 C-on hűtjuk, majd 20 percig 4 °C-on centrifugáljuk. A pelletet liofilizáljuk, 15 pl felvevő pufferrel (0,025% brómfenolkék, 0,025% xilol cylanol 1:1 keverékben 80% formamiddal és 7 M karbamiddal, 20 mM citromsav, 1 mM EDTA) egészítjük ki, 1 percig 95 C-on denaturáljuk, azonnal jégre tesszük és a gelelektroforézises elválasztáshoz egy 1, 0 cm x 1 mm zsebre visszük fel. A gélelektroforézises elválasztást egy 40 perces 55 watt-nál végzett előfutam után 2,5 órán át 55 watt mellett végezzük el.After adding 600 µl of ethanol, the probe is cooled for 30 minutes at -20 ° C and centrifuged for 20 minutes at 4 ° C. The pellet was lyophilized, supplemented with 15 µl of uptake buffer (0.025% bromophenol blue, 0.025% xylene cylanol in a 1: 1 mixture with 80% formamide and 7 M urea, 20 mM citric acid, 1 mM EDTA), immediately denatured at 95 C for ice. and applied to a 1.0 cm x 1 mm pocket for gel electrophoresis separation. Gel electrophoresis separation was carried out at 55 watts for 2.5 hours after a 40 minute pre-run at 55 watts.

f) A kmázzal kezelt szubsztrát RNS tisztítása és izolálása:(f) Purification and isolation of substrate RNA treated with Kmase:

A kináz reakció gélelektroforézises felbontásához 12%-os poliaknlamid gélt (1 mm x 30 cm x 40 cm) készítünk elő. A polimeri• · · • ·· · · · · * • · · · · · · zációs reakciót 170 ml-ben végezzük. Itt 51 ml akrilamid oldatot (40% akrilamid/bisz-akrilamid 10:1), 17 ml TBE-puffert (0,89 MA 12% polyaclamide gel (1 mm x 30 cm x 40 cm) was prepared for gel electrophoresis resolution of the kinase reaction. The polymerization reaction was carried out in 170 ml. Here 51 ml of acrylamide solution (40% acrylamide / bis-acrylamide 10: 1), 17 ml of TBE buffer (0.89 M

Tris-(hidroxi-metil)-amino-metán, 0,89 M bórsav, 0,02 M EDTA) ésTris (hydroxymethyl) aminomethane, 0.89 M boric acid, 0.02 M EDTA) and

71,4 g karbamidot megfelelő mennyiségű vízzel keverünk össze. A polimer!zációt 170 pl ammónium-peroxi-diszulfát oldattal (25% tömeg/térfogat) és 170 pl TEMED-del (Ν,Ν,Ν' ,Ν' -tetrametil-etilén-diamm) indítjuk. A gél 1 óra múlva felhasználható. Futtató pufferként 10-szeresére hígított TBE-puffert alkalmazunk.71.4 g of urea are mixed with an appropriate amount of water. Polymerization was started with 170 µl of ammonium peroxydisulfate solution (25% w / v) and 170 µl of TEMED (Ν, Ν, Ν ', Ν' -tetramethylethylene diamine). The gel can be used after 1 hour. Running buffer is TBE diluted 10-fold.

A gélelektroforézises felbontás után a kinázzal kezelt RNS-t ráfektetett röntgen film segítségével mutatjuk ki és kivágjuk a gélből. Egy elektroelúciós készülékben (Schleicher és Schuell) az RNS a géldarabból 100 V feszültségnél eluál (3,3 V/cm) . Elúciós pufferként 10-szeresére hígított TBE-puffert alkalmazunk.After resolution by gel electrophoresis, kinase-treated RNA is detected and excised from the gel using an X-ray film overlay. In an electroelution apparatus (Schleicher and Schuell), RNA elutes from the gel piece at 100 V (3.3 V / cm). The elution buffer is TBE diluted 10-fold.

Az izolált RNS-t 360 pl eluátumban 40 pl nátrium-acetáttal (3 M, oIsolated RNA in 360 µl eluate with 40 µl sodium acetate (3 M, p

pH 5,2) és 1 ml etanollal elegyítjük. A próbát 20 percig -20 Con hűtjük, majd 20 percig 4 °C-on centrifugáljuk. A pelletet liofilizáljuk, 30 pl vízben felvesszük. Az oldatot a Czerenkow-féle előírás szerint szcintillációs számlálóban megmérjük, és 12000 cpm/pl-re állítjuk be.pH 5.2) and 1 ml of ethanol. The probe was cooled to -20 ° C for 20 minutes and then centrifuged for 20 minutes at 4 ° C. The pellet was lyophilized and taken up in 30 µl of water. The solution was weighed according to the Czerenkow protocol in a scintillation counter and adjusted to 12000 cpm / µl.

E2. példa:E2. example:

Az El. példában leírtak szerint járunk el, és a következő szekvenciával rendelkező „RNS-E2 cél-RNS-t állítjuk elő:Proceed as in Example E1 and generate the "RNA-E2 target RNA having the following sequence:

5'd(CTA GCC GAC TG) r (CCC AUC UCA AG)d(CCA GTC TAC) .5'd (CTA GCC GAC TG) r (CCC AUC UCA AG) d (CCA GTC TAC).

E3-E31. példák:E3-E31. examples:

Az El példához hasonlóan további E3-E30. cél-RNS molekulákat, valamint az E31 molekulát állítjuk elő, amelyeknek a szerkezetét az F)-ben, a 4., 6. és 8. táblázatokban mutatjuk be.As in Example E1, additional E3-E30. target RNA molecules as well as the E31 molecule, the structure of which is shown in Tables 4, 6 and 8.

• · ·• · ·

F) Felhasználási példák (RNS hasítás)F) Use Examples (RNA Cleavage)

Különböző, találmány szerinti antiszenz-oligonukleotid-konjugátum hasító tulajdonságát vizsgáljuk különböző cél-RNS-ekkel szemben. A komplexnek a mindenkori antiszenz-oligonukleotidszekvenciához való kötődése szerinti, illetve a hibridben a célRNS-ből és antiszenz-oligonukleotid-konjugátumból keletkező, pár nélküli nukleotidok (mismatch) helyzete szerinti vonatkozásban az 1., 2. és 3. ábrákon bemutatott esetekben különböznek.The cleavage properties of various antisense oligonucleotide conjugates of the invention are tested against different target RNAs. The differences in the binding of the complex to the respective antisense oligonucleotide sequence and in the position of the mismatches of the target RNA and antisense oligonucleotide conjugate in the hybrid are shown in Figures 1, 2 and 3.

Fi. példa:Fi example:

Itt egy találmány szerinti antis zenz-oligonukleotid-konjugátum — ahogyan azt a 3. ábrán szemléltetjük — által előidézett cél-RNS hasításról van szó.This is a target RNA cleavage induced by an antisense oligonucleotide conjugate of the invention as shown in Figure 3.

A hasítási reakciót követően, az RNS termék gélelktroforézises felbontásához és azonosításához 12%-os Long Ranger gélt (ATFollowing the cleavage reaction, 12% Long Ranger Gel (AT) was used for gel electrophoresis resolution and identification of the RNA product.

Biochem, módosított poliakrilamid gél) (0,4 mm x 30 cm x 40 cm) készítünk elő. Ehhez 21 ml Long Ranger oldatot (50%) 11 ml TBEpuffert (0,89 M Tris-(hidroxi-metil)-amino-metán, 0,89 M bórsav,Biochem, modified polyacrylamide gel) (0.4 mm x 30 cm x 40 cm). For this, 21 ml of Long Ranger solution (50%) was added to 11 ml of TBE buffer (0.89 M Tris-hydroxymethyl) aminomethane, 0.89 M boric acid,

0,02 M EDTA) és 37 g karbamidot megfelelő mennyiségű vízzel keverünk össze. A polimerizációt 450 pl ammónium-peroxi-diszulfét oldattal (10% tömeg/térfogat) és 45 pl TEMED-del indítjuk. A gél 1 óra múlva felhasználható. Futtató pufferként 16,66-szorosára hígított TBE-puffert alkalmazunk. Az eiváiaszrás 60 watt mellett percen belül megtörténik. A gélelektroforézises elválasztás után a markerezett hasítási termékeket (RNS oligomereket) ráhelyezett röntgen film segítségével, vagy Phosphonmager segítségével mutatjuk ki, illetve kiszámítjuk.0.02 M EDTA) and 37 g of urea are mixed with an appropriate amount of water. Polymerization was initiated with 450 µl of ammonium peroxydisulfite solution (10% w / v) and 45 µl of TEMED. The gel can be used after 1 hour. Running buffer is 16.66-fold diluted TBE buffer. Emissions are achieved at 60 watts per minute. After gel electrophoresis separation, the labeled cleavage products (RNA oligomers) are detected and calculated using an X-ray film or Phosphonmager.

A hasítási reakciót IC pl térfogatban végezzük.The cleavage reaction is carried out in a volume of IC pl.

Példa egy koncentráció sorozatra:Example of a concentration series:

pl szubsztrát RNS-hez (12000 cpm) 1 pl oligonukleotidkonjugátumot (10 pM) vagy megfelelő hígításokat (végső koncentráció 1 pM, 750 nM, 500 nM, 250 nM, 100 nM, 50 nM, 10 nM, 1 nM és 0,5 nM) , 4 pl Tris-HCl puffért (50 mM pH 7,4 37 “C-on) és a megfelelő mennyiségű vizet hozzápipettázzuk. Ezt a keveréket 1 percig 85 °C-ra hevítjük, és ehhez kapcsolódóan 16 órán át 37 “’Con inkubáljuk. A reakciót 5 pi felvivő puffer (0,025% brómfenolkék, 0,025% xilol cylanol 1:1 keverékben 80% formamiddai és 7 M karbamiddal, 20 mM citromsav, 1 mM EDTA) hozzáadásával állítjuk meg. A gélelektroforézises elválasztáshoz a próba 7,5 pl-ét 1 percig 95 °C-on denaturáljuk, azonnal jégre helyezzük és gélzsebre visszük fel.pl substrate RNA (12000 cpm) 1 µl oligonucleotide conjugate (10 pM) or appropriate dilutions (final concentration 1 pM, 750 nM, 500 nM, 250 nM, 100 nM, 50 nM, 10 nM, 1 nM and 0.5 nM) ), 4 µl Tris-HCl buffer (50 mM pH 7.4 at 37 ° C) and the appropriate amount of water is pipetted. This mixture was heated to 85 ° C for 1 minute and incubated for 16 hours at 37 ° C. The reaction was stopped by the addition of 5 µl loading buffer (0.025% bromophenol blue, 0.025% xylene cylanol in a 1: 1 mixture with 80% formamide and 7 M urea, 20 mM citric acid, 1 mM EDTA). For gel electrophoresis separation, 7.5 µl of the probe is denatured for 1 minute at 95 ° C, immediately placed on ice and applied to a gel pocket.

Példa egy idősorozatra:Example of a time series:

pl szubsztrát RNS/DNS-hez (12000 cpm) 1 pl oligonukleotidkonjugátumot (10 pM) , 4 pl Tris-HCl puffért (50 mM pH 7,4 37 °Con) és a megfelelő mennyiségű vizet hozzápipettázzuk. Ezt a keveréket 1 percig 85 °C-ra hevítjük, és ehhez kapcsolódóan 2, 8,1 µl of substrate RNA / DNA (12000 cpm) is plated with 1 µl of oligonucleotide conjugate (10 µM), 4 µl of Tris-HCl buffer (50 mM pH 7.4 at 37 ° C) and the appropriate amount of water. This mixture is heated to 85 ° C for 1 minute and associated with 2, 8,

16, 40 és 64 órán keresztül 37 °C-on inkubáljuk. A reakciót 5 pl felvivő puffer (0,025% brómfenolkék, 0,025% xilol cylanol 1:1 keverékben 80% formamiddai és 7 M karbamiddal, 20 mM citromsav, mM EDTA) hozzáadásával állítjuk meg. A gélelektroforézises elválasztáshoz a próba 7,5 pl-ét 1 percig 95 “C-on denaturáljuk, azonnal jégre helyezzük és gél-zsebre visszük fel.Incubate for 16, 40 and 64 hours at 37 ° C. The reaction was stopped by the addition of 5 µl of loading buffer (0.025% bromophenol blue, 0.025% xylene cylanol in a 1: 1 mixture with 80% formamide and 7 M urea, 20 mM citric acid, mM EDTA). For gel electrophoresis separation, 7.5 µl of the probe is denatured at 95 ° C for 1 minute, immediately placed on ice and transferred to a gel pocket.

A szubsztrát RNS koncentrációt 25-szörös feleslegben a következők szerint becsüljük meg: 100 pM RNS nyersterméknél és aSubstrate RNA concentration in the 25-fold excess was estimated as follows: 100 pM RNA crude and

10%-os hozamánál az előírás szerint r- r·. oAt a yield of 10%, according to the specification r- r ·. She

U Ό' *7 ·* trát RNS végső koncentráció és 1 μΜ oiigonukleotid-konjugátum található a reakciókeverékben. Amennyiben a terpiridin-lantanidkomplexet visszük be összehasonlításként, úgy 400 μΜ komplexre van szükség körülbelül ugyanolyan hasítás eléréséhez, mint amelyet 40 nM oligonukleotid-komplexnél érünk el. Ebben az esetben 10000-szeres feleslegben van a komplex az oiigonukleotid-konjugátumhoz képest.The final concentration of U Ό '* 7 · * trat RNA and 1 μΜ oligonucleotide conjugate is present in the reaction mixture. If the terpyridine-lanthanide complex is introduced for comparison, a 400 μΜ complex is required to achieve approximately the same cleavage as that obtained with the 40 nM oligonucleotide complex. In this case, the complex is present in an excess of 10,000 times that of the oligonucleotide conjugate.

A koncentráció sorozatnál 40 μΜ szubsztrát RNS/DNS hasítását 40 nM oligonukleotid-konjugátummal 16 óra alatt 37 °C-on szemléltethető .For the concentration series, 40 μΜ of substrate RNA / DNA cleavage with 40 nM oligonucleotide conjugate can be demonstrated for 16 hours at 37 ° C.

Hasítási termékek a 3. táblázat 3.2 vegyületével RNS-El-en végzett hasításnál:Cleavage Products for RNA-El Cleavage with Compound 3.2 of Table 3:

az 5'd(CTA GCC GAC TGC)r(CGA UGA CUC GCC AC) kiindulási anyagnak kevesebb, mint 20%-a marad hasítatlan.less than 20% of the starting material of 5'd (CTA GCC GAC TGC) r (CGA UGA CUC GCC AC) remains uncleaved.

Fő hasítási termékek (Σ80%):Main carcass products (Σ80%):

5' d (CTA GCC GAC TGC)r(CGA UGcp)5 'd (CTA GCC GAC TGC) r (CGA UGcp)

5'ö(CTA GCC GAC TGC)r(CGA Ucp)5'ö (CTA GCC GAC TGC) r (CGA Ucp)

5' d(CTA GCC GAC TGC)r(CGcp)5 'd (CTA GCC GAC TGC) r (CGcp)

További hasítási termékek (Σ5%):Other carcass products (Σ5%):

5' r (CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGCcp)5 'r (CUA GCC GAC UGC CGA UCU CGCcp)

5' r (CUA GCC GAC UGC CGA UCU Ccp) op 2' ,3' -ciklofoszfátot jelent5 'r (CUA GCC GAC UGC CGA UCU Ccp) op means 2', 3 '-cyclophosphate

F2 . példa:F2. example:

Itt egy találmány szerinti antiszenz-oligonukleotid-konjucátum - ahogyan azt az 1. ábrán szemléltetjük - által előidézett cél-RNS hasításról van sző.Herein, the antisense oligonucleotide conjugate of the present invention is directed to the cleavage of target RNA as shown in Figure 1.

Az El példához hasonlóan járunk el a 3. oablázatban találka• · tó 3.20 vegyület és az RNS-E2, mint cél-RNS felhasználásával.Similarly to Example E1, compound 3.20 of Table 3 and RNA-E2 are used as target RNA.

Hasítási termékek:Cleavage products:

az 5' d(CTA GCC GAC TG) r (CCG AUC UCA AG)d(CCA GTC TAC) kiindulási anyagnak kevesebb, mint 5%-a marad hasítatlan.less than 5% of the starting material 5 'd (CTA GCC GAC TG) r (CCG AUC UCA AG) d (CCA GTC TAC) remains uncleaved.

Fő hasítási termékek (Σ95%):Main carcass products (Σ95%):

5' 5 ' d d (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) TG) r r (CCG (CCG AUC AUC UCA Acp UCA Acp 5' 5 ' d d (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) TG) r r (CCG (CCG AUC AUC UCAcp) UCAcp) 5' 5 ' d d (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) TG) K K { CCo {CCo AUC AUC Uccp) UCCP)

F3, példa:Example F3:

Itt további, különböző cél-RNS-ek különböző antiszenzoligonukleotid-konjugátumokkal — ahogyan azt az 1. ábrán szemléltetjük — történő hasításának vizsgálatáról van szó.This is an assay for further cleavage of different target RNAs with different antisense oligonucleotide conjugates as illustrated in Figure 1.

A következő 4 . táblázatban az alkalmazandó cél-RNS-ek szerkezetét mutatjuk be. A vastagon szedett nukleotidok komplementerek az antiszenz-oligonukleotid-konjugátum azon nukleotidjával, amelyhez a komplex kötődik. Az aláhúzott nukleotidok a cél-RNSóől és konjugátumból álló hibridben pár nélkül állnak (mismatch). A cél-RNS-E-17 esetében a kettőzött aláhúzás azt jelenti, hogy a kiválasztott szekvencia környezetében mindenkor 2 szomszédos nukleotid az aláhúzott területen pár nélküli, anélkül hogy egyértelműen meg lehetne határozni, mely nukleotidokról van szó. Továbbá vázolja a konjugárum helyzetét, különösen a komplexét a cél-RNS-re vonatkozóan.The following 4. Table 1 shows the structure of the target RNAs to be used. Bold nucleotides are complementary to the nucleotide of the antisense oligonucleotide conjugate to which the complex binds. The underlined nucleotides are mismatches in the hybrid of the target RNA and the conjugate. For target RNA-E-17, double underlining means that there are always 2 adjacent nucleotides in the region of the selected sequence unpaired, without clearly identifying which nucleotides are involved. Furthermore, it outlines the position of the conjugate, especially its complex with respect to the target RNA.

4. táblázat: Különböző cél-RNS-ek szerkezeteTable 4: Structure of various target RNAs

Antiszenz oligonukleotid konjugátum (vázlat)Antisense oligonucleotide conjugate (outline)

Lnln

ZZ cél-RNSZZ target RNA

E3 E3 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA UCU UCU CUUG) d(C CUUG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E4 E4 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA CUCU CUCU CG) d(C CG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E5 E5 5’d 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA UGCU UGCU CG) d(C CG) d (C CAG CAG ί C ι ί C ι AC) AC) E6 E6 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA UCGU UCGU CG) d(C CG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E7 E7 5'd 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA UCU UCU GCG) d(C GCG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E3 E3 5’d 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA UCU UCU CUG) d(C CUG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E9 E9 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU CAG) d(C CAG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E10 E10 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU ACG) d(C ACG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) Eli Eli 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU CG UC CG UC C) d(AG C) d (AG TCT TCT AC) AC) E12 E12 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU CG CG CG CG C) d(AG C) d (AG TCT TCT AC) AC) E13 E13 5' d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU GACG) d(C GACG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E14 E14 5' d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU GGCG) d(C CAG GGCG) d (C CAG TCT TCT AC) AC) E15 E15 5' d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU AGCG) d(C AGCG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E16 E16 5’d 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU AACG) d(C AACG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E17 E17 5’d 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU CUCG) d(C CUCG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E18 E18 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU CGAG) d(C CGAG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E2 (s.o.) E2 (i.e.) 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU CAAG) d(C CAAG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E19 E19 5’ r 5 'r CUA CUA GCC GCC GAC GAC UGC UGC CGA CGA UCU UCU AACGC AACGC CAG CAG UCU UCU AC AC A 1 1 sasi sasi tásho Tash z az z that FI . p FI. p éldában lei in the living room lei rtak s rtak s zerlnt j zerlnt j árunk price cr, ' — ! cr, ' -! ahol where követ follow keze hands h 5. h 5. tábi Tábi ázatban bemutató tutorial tt ant etc. on .is zenz-olroont .is zenz-olroont ikle ikle C f· i Q _ C f · i Q _ aj ugá’ oh yeah ' rumokat ( rums ( lásd see a 3 . the 3 . tábláz table a a o a a a o a is) és cél-RNS-eket and target RNAs - (V - (V ásd a see 0 á2 0 á2 á the ZOt) ZOT) h a s z r h a s z r i a i z a κ i a i z a κ fel. up. Az í In FIG i 79 2 i 79 2 dazatbar dazatbar i a m 2 i a m 2 _nde _nde n k orr n o n 1 - RNS 1- RNA -r uk -r uk hasít split rási Rashi termékeit 1' products 1 ' j ra megadji again -k. Például a k. For example the C é 2 C é 2 -RNS- -RNS- 3.22 3:22 ko stone nj u cs. nj u cs. summa summa tor break ténő h teen h . a s 2 a s a ώΑ ^ί . as 2 asa ώΑ ^ί a „ +5 Ah +5 Ah aaa aaa ί el· ί el · e.ntr, e.ntr, ?y ^a -? y ^a - r 5 A r 5 A és -ró and -ro A rm- The rm- tleotr tleotr dók ko dók ko zöot Zoot a Q a n a Q a n m hasisé m hashish i 3 . i 3.

• · · • ··• · · • ··

5. táblázat: Különböző cél-RNS-eknek különböző antiszenz-oligonukleotid-konjugátumokkal történő hasításával keletkező fő hasítási termékekTable 5: Major cleavage products resulting from cleavage of different target RNAs with different antisense oligonucleotide conjugates

Konjugátum conjugate 3.18 3:18 i 3.21 3.21 3.19 3:19 3.20 3:20 3.22 3:22 3.23 3:23 cél-RNS (mismatch megadva) target RNA (mismatch set) i i | | E3 ~5U,+6y E3 ~ 5U + 6y +5U, +6U + 5U, + 6U í +3U, i -r-6U + 3U, i -r-6U * * +3U 3U + +3U 3U + -1G -1G E4 + 1C E4 + 1C -1G -1G +2U 2U + * * -1G -1G -1G -1G -1G -1G E5 +2G E5 2G + -1G, OA -1G, OA +2G 2G + * * -1G -1G -1G -1G -1G -1G E6 +3G E6 3G + -1G, +3G -1G, 3G + +3G 3G + ★ ★ +4U + 4U ★ ★ * * E7 +4G E7 4G + +5C + 5C +5C + 5C nincs hasítás no rip +5C + 5C ★ ★ * I * I E3 +5U E3 5U + +5U 5U + +5U 5U + -1G -1G ★ ★ ★ ★ E9 +5 A E9 +5 A ★ ★ +5A +4C 5A + 4C + ★ ★ +4C 4C + * * « l «L E10 +4A E10 4A + ★ ★ +5C, +3U + 5C, 3U + +5C + 5C +5C + 5C * * * ί í I * ί í I E11 +6LJ E11 + 6LJ ★ ★ no woman ★ ★ +6U + 6U ★ ★ * * E12 +7G E12 7G + ★ ★ no woman ★ ★ +7G 7G + * * ★ ★ E13 +4G, +5 A E13 + 4G, +5A +4G, +5A + 4G, 5A + +4G +3U 4G + 3U + ★ ★ +3U, +4G,+5A, +6C + 3U, + 4G, 5A +, 6C + * * +4G, +5A +6C, + 4G, 5A + + 6C,

E14 +4G, +5G E14 + 4G, + 5G -1G -1G +3U, +4G + 3U, 4G + +5G 5G + +5G 5G + +5G, -1G + 5G, -1G +5G 5G + E15 -MA, ±5G E15 -MA, ± 5G +3U,+4 A+5G, +6C + 3U, +4 A + 5G, 6C + +3U 3U + +5G 5G + +5G 5G + +5G, +3U + 5G, 3U + -5G, +3U, -1G -5G, + 3U, -1G E16 E16 +4A, + 4A +3U, + 3U, +3U, + 3U, +3U, + 3U, +3U, + 3U, -1G, -1G, -4A, -5 A -4A, -5A +5A 5A + +4A 4A + +4 A, +5A +4A, 5A + +4A, +5A + 4A 5A + +4A 4A + +3U,+4 At5A + 3U, +4 At5A E17 +1U — — +6C E17 + 1U - - + 6C -1G -1G +3U 3U + ★ ★ -1G -1G nincs hasítás no rip -1G -1G E18 +5G, +6A E18 + 5G, + 6A +5G, +6A + 5G, 6A + +5G 5G + +5G 5G + +5G 5G + +5G 5G + -1G, +4C, +5G -1G, + 4C, 5G + E2 -r^A, +6A E2 -r ^ A, + 6A +5A, +6A + 5A, 6A + +5A 5A + +4C, +5A + 4C, 5A + lásd az F2 példát see example F2 +oA oA + +4C,+5 A+6A,- 1G + 4C + 5 A + 6A - 1G E19 +4A,+5A E19 + 4A, 5A + +4A, +3U + 4A 3U + * * +3U, +4A, +5A + 3U, + 4A 5A + +3U, +4A, +5A I + 3U, + 4A 5A + I -1G, +3U,+4 A-5A -1G, + 3U, +4 A-5A

* nem vizsgáltuk* not tested

F4 , példa:Example F4:

Itt további, különböző cél-RNS-ek különböző antiszenzoiigonukleetid-konjugátumokkai - ahogyan azt a 2. ábrán szemléltetjük — történő hasításának vizsgálatáról van. szó.Here, further studies on the cleavage of different target RNAs with different antisense oligonucleotide conjugates as shown in Figure 2 are performed. weave.

A következő 6. táblázatban tüntetjük fel az alkalmazott célRNS-ek szerkezetét. A 4. táblázatnál megadott magyarázatok érvén' -sek.The following Table 6 shows the structure of the target RNAs used. The explanations given in Table 4 are valid.

6. táblázat: Különböző cél-P^NS-ek szerkezeteTable 6: Structure of various target P ^ NSs

Antiszenz oligo- antisense oligo [ Ln [Ln nukleotid nt 3 3 J J \ \ konjugátum (vázlat) conjugate (Outline) cél-RNS target RNA E4 E4 5' d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA C'JCU C'JCU CG) d(C CG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E5 E5 5' d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA UGCU UGCU CG) d(C CG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E6 E6 5'd 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA UCGU UCGU CG) d(C CG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E7 E7 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA UCU UCU GCG) d(C GCG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E8 E8 5'd 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA UCU UCU CUG) d(C CUG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E9 E9 5'd 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU CAG) d(C CAG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E10 E10 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU AGG) d(C AGG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E20 E20 5'd 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCAU UCAU CG) d(C CG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E12 E12 5’d 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU CG CG CG CG C) d(AG C) d (AG TCT TCT AC) AC) E13 E13 5' d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU GACG) d(C GACG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E14 E14 5'd 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU GGCG) d(C GGCG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E15 E15 5’d 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU AGCG) d(C AGCG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E16 E16 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU AACG) d(C AACG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E18 E18 5'd 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU CGAG) d(C CGAG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E2 E2 5'd 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG) r(C TG) r (C CGA CGA UCU UCU CAAG) d(C CAAG) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E19 E19 5’ r 5 'r CUA CUA GCC GCC GAC GAC UGC UGC CGA CGA UCU UCU AACGC AACGC CAG CAG UCU UCU AC AC

A hasításhoz az FI. példában leírtak szerint járunk el, aho a következő, 7. táblázatban bemutatott antiszenz-oligonukleotid konjugátumot (lásd a 3. táblázatot is) és oel-RNS-eket (lásd zabhoz fűzött m.aovarázatot rs) .For cleavage, FI. Example 7, using the following antisense oligonucleotide conjugate (see also Table 3) and oel RNAs (see m.a.

séi-RNS lő hasítási termékeit újra megadjuk (lásd az 5. tábláthe cleavage products of Se-RNA shoot are re-listed (see Table 5)

7. táblázat: Különböző cél-RNS-eknek egy antiszenz-oligonukleotiö-konjugátummal történő hasításával keletkező fő hasítási termékekTable 7: Major cleavage products resulting from cleavage of various target RNAs with an antisense oligonucleotide conjugate

Konjugátum conjugate 3.25 3:25 cél-RNS target RNA (mismatch megadva) (mismatch set) E4 E4 -10G -10G -8C -8C E5 E5 -10G -10G -7G -7G ES AND -6G -6G -6G -6G

E7 j -€U, ! -5G ί -7C, ! -8UE7 j - € U,! -5G ί -7C ,! -8U

I tzo -4LJ I tzo -4LJ -ac, -6U, -7C ac, -6U, -7C E9 E9 -5C, -5C, -4A -4A -4A -4A E10 E10 -6U -6U -5A -5A E20 E20 -7C -7C -6A -6A

E12 E12 -2G, -2G, -2G -2G -3C 3c E13 E13 -5A, -5A, -5A, -6G -5A, -6G -6G -6G E14 -5G, -6G E14 -5G, -6G -7U -7U E15 E15 -5G, -5G, -5G, -6A -5G, -6A -6A -6A E16 E16 -5A, -5A, -5A, -6A -5A, -6A -6A -6A E18 E18 -3G, -3G, -4A, -5G -4A, -5G -4A -4A E2 E2 ^A, ^ A, -4A, -5A -4A, -5A -5A -5A E19 E19 -6A, 6a, -5A, -6A -5A, -6A -7U -7U

• ··• ··

F5 . példa :F5. example:

Itt további, különböző cél-RNS-ek különböző antiszenzoligonukleotid-kor. jogátumokkal — ahogyan azt a 3. áorán szemléltetjük — történő hasításának vizsgálatáról van szó.Here are further different target RNAs at different antisense oligonucleotides. it is a matter of examining cleavage with legal rights, as illustrated in Feb. 3.

A következő 8. táblázatban tüntetjük fel az alkalmazott célRNS-ek szerkezetét. Ezen kívül egy kor.troll-DNS-t (Ξ31) is alkalmazunk. A 4. táblázatnál megadott magyarázatok érvényesek.The following Table 8 shows the structure of the target RNAs used. In addition, a kor.troll DNA (Ξ31) is also used. The explanations given in Table 4 apply.

8. táblázat: Különböző cél-RNS-ek szerkezeteTable 8: Structure of various target RNAs

Antiszenz oligonukleotid konjugátum g, / (vázlat) cél-RNSAntisense oligonucleotide conjugate g, / (sketch) target RNA

E2: E2: 5’d 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGAC r (CGAC UCU UCU CGC CGC CAC) CAC) E22 E22 5' d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA UGCU UGCU CGC CGC CAC) CAC) E23 E23 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGAG r (CGAG UC'J UC'J CGC CGC CAC) CAC) E24 E24 5' d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGACC r (CGACC UCU UCU CGC CGC CAC) CAC) E1 (s.o.) E1 (i.e.) 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA UGACU UGACU CGC CGC CAC) CAC) E14 E14 5‘d 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG)r(C TG) n (C CGA CGA UCUGG UCUGG CG) CG) d(CCA d (CCA GTC GTC TAC) TAC) E2 E2 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TG)r(C TG) n (C CGA CGA UCUCAA UCUCAA G)d(C G) d (C CAG CAG TCT TCT AC) AC) E2S E2s 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC TGC CGA) CGA) r(UGACU r (UGACU CGC CGC CAC) CAC) E26 E26 5’d 5'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA UGGCU UGGCU CGC CGC CAC) CAC) E27 E27 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA UAGCU UAGCU CGC CGC CAC) CAC) E2S E2s 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA U-CWU U-CWU £GC £ GC CAC) CAC) E29 E29 5' d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC) TGC) r(CGA r (CGA UACU Hill Hikes CGC CGC CAC) CAC) E30 E30 5’ r 5 'r CUA CUA GCC GCC GAC GAC UGC UGC CGA CGA UGACU UGACU CGC CGC CAC CAC UCU UCU AC AC kontroll DNS control DNS E31 E31 5’ d 5 'd (CTA (CTA GCC GCC GAC GAC TGC TGC CGA CGA TGACT TGAC CGC CGC CAC) CAC)

A hasításhoz az FI. példában leírtak szerint járunk el, ahol a következő, 9. táblázatban bemutatott antiszenz-cligonukleotidkonjugátumokat (lásd a 3. táblázatot is) és cél-RNS-eket (lásd a cél-RNS tő hasítási termékeit újra megaojuk zathoz fűzött magyarázatot is).For cleavage, FI. Example 9 where the following antisense-cligonucleotide conjugates shown in Table 9 (see also Table 3) and target RNAs (see also the RNA cleavage products of the target RNA are re-yawned).

9. táblázat: Különböző cél-RNS-ekr.ek különbc nukleotrd-konjagátsmokkal történő hasításával ί1ásd az 5 tábla— ő antiszenz-oligoκ e r e t K e ζ ο t o sasi^- tiási termékekTable 9: Various cleavage of target RNA by ekr.ek különbc nukleotrd konjagátsmokkal ί1ásd-5 antisense his slab-oligoκ this vein K ζ ο to sasi ^- Tias products

Konjugátum conjugate 3.2 3.2 3.14 3:14 cél-RNS (mismatch megadva) target RNA (mismatch set) E21 -5C E21 -5C -1C, -1C, -1C -1C E22 -4G E22 4G -5U, -5U, ★ ★ E23 -5G E23 -5G -7G, +2C -7G, + 2C +2C 2C + E24 -5C, -6C E24 -5C, -6C -1C -1C -21) -21) E1 -4A, -5G E1 -4A, -5G lásd az FI példát see the FI example -5G -5G E14 -2G,-3G E14 -2G, -3G * * 0G,-1C, -2G 0G, -1C, -2G ι E2 l -1A,-2A ι E2 l 1A, 2A * * -1A, -2A 1A, 2A

E25 -4A, -5G E25 -4A, -5G -5G -5G -5G, -6U -5G, -6U E26 E26 -6U -6U +2C, + 2C -4G, -5G -4G, -5G -5G -5G E27 E27 -6U -6U -6U -6U -4G, -5A -4G, -5A E28 E28 -1C -1C -2U -2U -6U — - -1C -6U - -1C E29 E29 -5U -5U -5U -5U -4A -4A E30 E30 -5G, -6U, - -5G, -6U, - ★ ★ -4A, -5G -4A, -5G 7A 7A E31 -4A, -5G E31 -4A, -5G rímes hasítás rhymed rip nincs hasítás no rip

• · · ·· • · · ··

SZABADALMI IGÉNYPONTOKPATENT CLAIMS

Claims (3)

1. ábraFigure 1 1/ • · · · · · · • · · ··· ··· ···>1 / • · · · · · · · · · ··· ··· ···> -· .:. ·..* ·..* * .* '·.· +5- ·.:. · .. * · .. * *. * '·. · +5 5’ 3’5 '3' 1-6. és előnyösen a 2-4. gyűrűre nem-szubsztituált és szubsztituált -CH=CH-CH=CH- csoportok kötődnek 1,3 helyzetben, és a gyűrű N-atomjaival piridinocsoportot alkotnak.1-6. and preferably as shown in Figs. ring-unsubstituted and substituted -CH = CH-CH = CH- groups are attached at the 1,3 position and form a pyridine group with the N atoms of the ring. 37. A 33. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol a konjugátumoknál a III. általános képletű vegyületekről van szó, * · · · ·· ·«« ··· ··* • * · 9 · · · • » ·· * ·· v m' n/m ahol· R? és R_? egymástól függetlenül H-, C₂-C₄-alkil-, C_x-C₄-alk oxi- C^-C₁₂-aralkil- vagy Cg-C^-arilcsopcrtct jelent,37. The oligonucleotide of claim 33, wherein the conjugates are selected from the group consisting of III. these are compounds of the general formula * v · n · m · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · and R _? independently of one another H, C ₂ -C ₄ alkyl, C _x -C ₄ alkoxy-C 1 -C ₁₂ aralkyl or C ₈ -C ₄ aryl; R- és R₆ egymástól függetlenül H-, C₂-C₄-alkil-, C7-C_i2 ^_aralkil vagy Cg-C_2S-arilosoport,R and R ₆ are independently H, C ₂ -C ₄ alkyl, C 7 -C ^_ _i2 aralkyl or Cg-C -arilosoport _2S, R₄ H-, C₂-ü₂Q-aikil-, C₅-Cg-cikloalktl-, Cg-C₂₂ ^_^^rÍl^_ vagy C₇-C₁₂ aralkilcsoport telvén áll,R ₄ H-, C ₂ Q ₂ -yl-alkyl, -CO-cikloalktl- _C5, Cg-C ₂₂ ^_ ^ ^{_ r} yl, or C ₇ -C ₁₂ aralkyl group is filled, Me lantén, iantanid fém, ittrium vagy szkandium helyén áll,Me stands for lanthene, iantanid metal, yttrium or scandium, Y egy aniont helyettesít, n 2 vagy 3, és m 1,2 vagy 3, ahol az alkil-, cikloalkil-, aralkil- és anl-maradékok nem szubsztituáltak vagy Cy-C₄-alkoxi-, F-, Cl-, 3r-, -CN, C₂-C₄-al kil- vagy -NO₂ csoporttal szubsztituáltak,Y represents an anion, n 2 or 3, and m 1,2 or 3, wherein the alkyl, cycloalkyl, aralkyl and anl residues are unsubstituted or Cy-C ₄ -alkoxy, F-, Cl-, 3r -, -CN, C ₂ -C ₄ substituted with kil- or -NO ₂ , R₅ a IV. általános képlet maradékaR ₅ a IV. residue of general formula -B-oligo (IV. ) es R_x H vagy egy szubsztituenst jelent, vagy-B-oligo (IV) and R _x H are either a substituent or Rc K vagy egy. szubsztituens és R, a IV. általános képlet egy ma raoekat jelenti, ahol 3 es oligó a 33. luenvoontban megadott je ·· ··· ··· ··· • * · ·· · · · • · · · » ·» lentéssel rendelkezik.Rc K or one. substituent R; The general formula is a maoek, where the oligon 3 is denoted by Luenvoont 33 ····· ·················································· · · · · · · · 38. A 37. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol az III. általános képletű vegyületekben R₂ és R₇ H- helyén áll, R₃ és R₆ C0C₄-alkiicsoportot jelent, R₄ H-, C₁-C₄-aikil-, fenil- vagy benzilcsoportot szemléltet, az -X,-X₂-X₃-(XJ_x-oligó csoport és R₅ H-, metil- vagy metoxicsoport vagy R₅ az -X₂-X₂-X₃- (X J _x-oiigó csoport és R₂ H-, metil- vagy metoxicsoport, X₂ közvetlen kötés vagy C₂-C₆-alkilén-, X₂ -0-, -NK-, -0(0)-0-, -C(O)-NH-, -NH-C(O)-NH- vagy -NH-C (S) -NH-csoportot jelent, X₃ C₂-C₁₂-alkilén- vagy fenilén-csoportot szemléltet, X₄ nukleozid építőelem 0, N, vagy38. The oligonucleotide of claim 37, wherein the oligonucleotide of claim III. R ₂ and R _{7 are} H, R ₃ and R _{6 are} COC ₄ alkyl, R ₄ H, C ₁ -C ₄ alkyl, phenyl or benzyl, -X, -X ₂ -X ₃ - (XJ _x -group and R ₅ H, methyl or methoxy or R ₅ is -X ₂ -X ₂ -X ₃ - (XJ _x -group and R ₂ H, methyl or methoxy, X ₂ direct bond or C ₂ -C ₆ alkylene, X ₂ -O-, -NK-, -O (O) -O-, -C (O) -NH-, -NH-C (O) ) -NH- or -NH-C (S) -NH-, X ₃ C ₂ -C ₁₂ alkylene or phenylene, X ₄ nucleoside building block 0, N, or C-atomjához való kötődést jelent, vagy X,-_; -0-P(0) (OM)-0-csoportot szemléltet, x 0 vagy 1 helyett áll, Me jelenthet La, Ce, Nd, Eu vagy Gd fémeket, n 2 vagy 3 és m 1 vagy 2 helyett áll, Y mutathat Cl-, Br-, CH₃C(O)O-, C10₄-, BF₄ , PF₆ , F₃C-SO₃- vagy tozilát aniont, M állhat H, Na vagy K helyett, és oligó egy olyan oligonukleotidot jelent, amelynek belső szekvenciája egy cél-RNS-sel csak részben komplementer, és amely természetes dezoxiribonukleotid építőelemekből vagy nem természetes szintetikus nukleotid építőelemekből épül fel, ahol a cél-RNS-re vonatkoztatva 1-4 építőelem hiányzik.Represents a bond to its C atom, or X, - _; Represents -0-P (0) (OM) -O, stands for x 0 or 1, Me stands for La, Ce, Nd, Eu or Gd, n stands for 2 or 3 and m stands for 1 or 2, Y stands for Cl, Br, CH ₃ C (O) O, C 10 ₄ , BF ₄ , PF ₆ , F ₃ C-SO ₃ - or tosylate anions, M can be replaced by H, Na or K, and an oligonucleotide is an oligonucleotide. means an internal sequence that is only partially complementary to a target RNA and is composed of natural DNA or non-naturally occurring synthetic nucleotide building blocks wherein 1-4 building blocks are missing per target RNA. 39. Eljárás olyan oligonukleotidok előállítására, amelyekhez átészterező vagy hidrolizáló katalizátor kötődik, és az oligonukleotid belső szekvenciái részben nem-komplementerek egy természetben előforduló cél-RNS-sel, és az oligonukleotid természetes dezoxiribonukleotid építőelemekből vagy nem természetes szintetikus nukleotid építőelemekből épül fel, azzal jellemezve, hogy az alapvázhoz kötve funkciós csoportot felmutató, átészte78 rező vagy hidrolizáló katalizátort egy nukleotid építőelem funkciós csoportjával vagy egy nukleotid építőelem funkcionálisan módosított csoportjával kicseréljük.39. A method for producing oligonucleotides to which a transesterification or hydrolyzing catalyst is attached and the internal sequences of the oligonucleotide are partially non-complementary to a naturally occurring target RNA and the oligonucleotide is composed of natural or non-naturally occurring synthetic nucleotide building blocks, replacing the catalyzed or hydrolyzing catalyst having a functional group attached to the backbone with a functional group of a nucleotide building block or a functionally modified group of a nucleotide building block. 40. Eljárás ribonukleinsavak nukleotidfoszfát hídjainak — fiziológiai körülmények között és szintetikus átészterező és/vagy hidrolizáló katalizátor hatására történő — hasítására, azzal jellemezve, hogy (a) komplexbe visszük a cél-RNS-t egy olyan oligonukleotiddal, amelynek belső szekvenciája részben nem-komplementer a cél-RNS-sel, és amely átészterező és/vagy hidrolizáló katalizátorhoz kötődik, azzal az kikötéssel, hogy kiemeljük az olyan oligonukleotidokat, amelyeknek belső szekvenciája részben nem-komplementer egy természetben előforduló cél-RNS-sel és amelyhez átészterező vagy hidrolizáló katalizátorként texafirinfém-komplex kötődik, és (b) azután hagyjuk reagálni és hasadni.40. A method of cleaving nucleotide phosphate bridges of ribonucleic acids under physiological conditions and by a synthetic transesterification and / or hydrolysis catalyst comprising (a) complexing the target RNA with an oligonucleotide having an internal sequence that is partially non-complementary to the target RNA and which binds to a transesterification and / or hydrolyzing catalyst, with the proviso that oligonucleotides whose internal sequence is partially non-complementary to a naturally occurring target RNA and to which texaphyrin metal complexes as a transesterification or hydrolyzing catalyst are excised. and (b) is then allowed to react and cleave. 41. Eljárás az 1. igénypont szerinti oligonukleotidok felhasználására egy terápiás eljárás során, melegvérűek — beleértve az embert — betegségeinek kezelésére nukleotid-szekvenciák inaktiválása révén a testben.41. A method of using the oligonucleotides of claim 1 in a therapeutic method for treating diseases of warm-blooded humans, including humans, by inactivating nucleotide sequences in the body. 42. Vizes oldat vagy szuszpenzió alapú készítmény, amely az 1. igénypont szerinti oligonukleotid hatásos mennyiségét egymagában vagy egyéb hatóanyagokkal, gyógyszerészeti hordozóanyagként vízzel és adott esetben segédanyagokkal együtt tartalmazza.An aqueous solution or suspension based composition comprising an effective amount of the oligonucleotide of claim 1, alone or together with other active ingredients, water as a pharmaceutical carrier, and optionally excipients. 43. Vizes oldat vagy szuszpenzió alapú gyógyszerészeti preparátum, amely az i. igénypont szerinti oligonukleotid hatásos menynyiségét egymagában vagy egyéb hatóanyagokkal, gyógyszerészeti hordozóanyagként jelentős mennyiségű vízzel és adott esetben segédanyagokkal együtt tartalmazza.43. An aqueous solution or suspension based pharmaceutical preparation which is administered as an i. An effective amount of an oligonucleotide according to claim 1, alone or in combination with other active ingredients, a significant amount of water as a pharmaceutical carrier, and optionally excipients. • · ·» ·· ·· • · · · · ·· ··· ··* ··· • · · · · · · · • «· ·· · ··• · · »··············································································· ··· 44. A 39. igénypont szerint előállított, 1. igénypont szerinti oligonukleotid felhasználása diagnosztikumként vírusfertőzések vagy genetikai eredetű betegségek kimutatására.Use of the oligonucleotide according to claim 39, produced according to claim 39, as a diagnostic agent for the detection of viral infections or diseases of genetic origin. 45. Az 1. igénypont szerinti oligonukleotid felhasználása melegvérűek — beleértve az embert — betegségeinek kezelésére nukleotid-szekvenciák inaktiválása révén a testben.45. The use of an oligonucleotide according to claim 1 for the treatment of warm-blooded diseases, including man, by inactivating nucleotide sequences in the body. A meghatalmazott:The agent shall: 1. Dezoxinbonukleot időkből, nem természetes, szintetikus nukleotid építőelemekből, vagy peptidnukleinsavakból felépülő olyan oligonukleotid, amelynél az oligonukleotidhoz átészterező vagy hidrolizáló katalizátor kötődik, és az oligonukleotid belső szekvenciája részben nem-komplementer egy természetben előforduló cél-RNS-sel, azzal az kikötéssel, hogy kiemeljük az olyan oligonukleotidokat, amelyeknek belső szekvenciája részben nemkomplementer egy természetben előforduló cél-RNS-sel és amelyhez átészterező vagy hidrolizáló katalizátorként texafirin-fém-komplex kötődik.An oligonucleotide consisting of deoxynbonucleotide times, non-natural synthetic nucleotide building blocks, or peptide nucleic acids, wherein the oligonucleotide is bound by a transesterification or hydrolyzing catalyst, and the internal sequence of the oligonucleotide is partially non-complementary to a naturally occurring target R highlighting oligonucleotides having an internal sequence that is partially non-complementary to a naturally occurring target RNA and bound to a texaphyrin metal complex as a transesterification or hydrolyzing catalyst. 2. ábra • ·« ··· · ·· · ·* , * ········<Figure 2 • · «··· · ·· · · *, * ········· ιι 2/32/3 2. Az 1. igénypont szerinti oligonukleotid, amelyben a részben nem-komplementer jelleget a szekvenciában szerkezeti zavarás okozza oly módon, hogy nem tud bekövetkezni bázispár képződés.The oligonucleotide of claim 1, wherein the partially non-complementary nature is caused by structural disruption of the sequence such that base pair formation cannot occur. 3. Az 1. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol az oligonukleotid szekvenciájában — a cél-RNS-sel összehasonlítva — egy vagy több egymás után következő nukleotid építőelem hiányzik.The oligonucleotide of claim 1, wherein the oligonucleotide has one or more contiguous nucleotide building blocks in its sequence compared to the target RNA. 4. A 3. igénypont szerinti oligonukleotid, amelyben az 1-10 nukleotid építőelem hiányzik.The oligonucleotide of claim 3, wherein 1-10 nucleotides are missing. 5. Az 1. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol az oligonukleotid egy vagy több olyan egymást követő nukleotid építőelemet tartalmaz, amelyek a cél-RNS megfelelő nukleotid építőelemeivel nem képeznek párt.The oligonucleotide of claim 1, wherein the oligonucleotide comprises one or more consecutive nucleotide building blocks which do not pair with the corresponding nucleotide building blocks of the target RNA. 6. Az 5. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol az oligonukleotid 1—10 párt nem képző építőelemet tartalmaz.The oligonucleotide of claim 5, wherein the oligonucleotide comprises 1 to 10 non-pairing building blocks. 7. Az 1. igénypont szerinti oligonukleotid, amelyben a cél-RNS• * · sel párt nem képző külső nukleotid építőelemek 10-ig a belső szekvenciához kötődnek.The oligonucleotide of claim 1, wherein the outer nucleotide building blocks that do not pair with the target RNA bind to up to 10 of the inner sequence. 8. Az 1. igénypont szerinti oligonukleotid, amely párt nem képző épízőelemként természetes nukleotid építőelemeket tartalmaz.8. The oligonucleotide of claim 1, wherein the non-pairing building block comprises natural nucleotide building blocks. 9. Az 1. igénypont szerinti oligonukleorid, amely párt nem képző építőelemként nem természetes, szintetikus nukleotid építőeleme-The oligonucleotide of claim 1, which as a non-pair building block is a non-natural synthetic nucleotide building block. két tartalmaz. contains two. 10 . 10th Az The 1. igénypont Claim 1 szerinti of oligonukleotid, oligonucleotide amely which 5-100 5-100 nukleotid nt építőelemet tartalmaz. contains a building block. 11 . 11th A THE 10. igénypont Claim 10 szerinti of oligonukleotid, oligonucleotide amely which 5-50 5-50 nukleotid nt építőelemet tartalmaz. contains a building block. 12 . 12th A THE 10 . igénypont 10th claim szerinti of oligonukleotid, oligonucleotide amely which 8-30 8-30 nukleotid építőelemet tartalmaz.contains a nucleotide building block. 13. Az 5. igénypont szerinti oligonukleotid, amelyben a párt nem képző rész a szekvencia belső területén helyezkedik el.The oligonucleotide of claim 5, wherein the non-pairing portion is located within the inner region of the sequence. 14. Az 1. igénypont szerinti oligonukleotid, amely a purin és pirimidin sorozat természetes dezoxinukleozidjaiból épül fel.The oligonucleotide of claim 1, which is composed of natural deoxynucleosides of the purine and pyrimidine series. 15. A 14. igénypont szerinti oligonukleotid, amely 2'-dezoxi-2amino-adenozinból, 2' -dezoxi-5-metil-citidinbői, 2' -dezoxiadenozinból, 2' -dezoxicitídmből, 2' -dezoxiguanozmból és 2' -dezoxitimidinből épül fel .The oligonucleotide of claim 14, consisting of 2'-deoxy-2-aminoadenosine, 2'-deoxy-5-methylcytidine, 2'-deoxyadenosine, 2'-deoxycytidine, 2'-deoxyguanosine and 2'-deoxythymidine up. 16. A 14. igénypont szerinti oligonukleotid, amely 2'-dezoxiadenozinból (A), 2' -dezoxicitidinből (C), 2'-dezoxiguanozinból (G) és 2' -dezoxitimidinből (T) épül fel.The oligonucleotide of claim 14, consisting of 2'-deoxyadenosine (A), 2'-deoxycytidine (C), 2'-deoxyguanosine (G), and 2'-deoxythymidine (T). 17. Az 1. igénypont szerinti oligonukleotid, amelyben a nem természetes, szintetikus építőelemek a purm és pirimidin sorozat természetes nukleozidjaiból vezethetők le.The oligonucleotide of claim 1, wherein the non-natural synthetic building blocks are derived from the natural nucleosides of the purm and pyrimidine series. • · ·• · · 9 9 ·9 9 · 18. A 17. igénypont szerinti oligonukleotid, amelyben az építőelem adenozinból, citidinből, guanozinból, 2-amino-adenozinból,18. The oligonucleotide of claim 17, wherein the building block is selected from the group consisting of adenosine, cytidine, guanosine, 2-aminoadenosine, 5-metil-citozinból, timidinből és az előzőekben megnevezett dezoxi-származékokból vezethető le.It can be derived from 5-methylcytosine, thymidine and the aforementioned deoxy derivatives. 19. Az 1. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol a cél-RNS-sel részben komplementer oligonukleotid (1) természetes dezoxinukleozidokból vagy nem természetes, szintetikus építőelemekből épül fel, és (2) a részben komplementer sajátságot az egyébként komplementer szekvencia 1-4 építőelemének hiánya okozza.The oligonucleotide of claim 1, wherein the oligonucleotide partially complementary to the target RNA is (1) composed of natural deoxynucleosides or non-natural synthetic building blocks, and (2) the absence of the 1-4 building blocks of the otherwise complementary sequence. causes. 20. Az 1. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol átészterező vagy hídrólizáló katalizátor az oligonukleotid-szekvencia 3’ vagy20. The oligonucleotide of claim 1, wherein the transesterification or bridge-catalyzing catalyst is a 3 'or 3' oligonucleotide sequence. 5’ végcsoportjaiban N-, S- vagy O-atomokhoz; a szekvencia belsejében vagy végén nukleinbázisok C-, N- vagy O-atomjaihoz; furanóz-gyűrűk 2'-helyzetében a szekvencia belsejében vagy végén 0-, S- vagy N-atomokhoz; vagy a szekvenciában közvetlenül vagy hídképző csoporton keresztül, a nukleotid hídképző csoportjának 0-, S- vagy N-atomjaihoz kötődik.5 'end groups to N, S or O atoms; inside or at the end of the sequence to the C, N or O atoms of nucleic bases; furanose rings at the 2 'position inside or at the end of the sequence to 0, S or N atoms; or, directly or via a bridging group in the sequence, bound to the 0, S or N atoms of the bridging group of the nucleotide. 21. A 20. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol a hídképző csoport az I. általános képletnek felel meg,The oligonucleotide of claim 20, wherein the bridging group is of formula I, -X₁-X₂-X₃-(XJ_x- (I.) amelyben X₂ közvetlen kötést vagy olyan kétértékű, 1-22 szénatomos nyíltláncú vagy ciklusos szénhidrogén csoportot, amely megszakítás nélküli vagy az -S-, -NR-, -C(0)-0-, -C(O)-NR- csoportok maradékaival megszakított, vagy 1-12 oxa-alkilén egyseget és az alkilénben 2 vagy 3 szénatomot tartalmazó polioxa-slkilénmaradékot jelent; X₂ -0-, -S-, -NR-, -NH-C(O)-NH-, -NH-C(S)-NH-,-X ₁ -X ₂ -X ₃ - (XJ _x - (I) wherein X _{2 is a} direct bond or a divalent C 1 -C 22 open or cyclic hydrocarbon group which is unsubstituted or -S-, -NR-, X ₂ -O-, -S- interrupted by the residue of -C (O) -O-, -C (O) -NR- or 1-12 oxaalkylene units and 2 or 3 carbon atoms in the alkylene; -, -NR-, -NH-C (O) -NH-, -NH-C (S) -NH-, -0-C (O) -0-,-O-C (O) -O-, -0-C (0) -NH-,-O-C (O) -NH-, -NH-C(0)-0-,-NH-C (0) -0-, -C (0) -0-,-C (O) -O-, -C (S)-0-, « * ···-C (S) -0-, «* ··· -O-C(O)-, -O-C(S)-, -C(O)-NR-, -RN-C(O)-, -S (Ο ) -0-, -0-S (0 ) ₂~ ,-OC (O) -, -OC (S) -, -C (O) -NR-, -RN-C (O) -, -S (Ο) -O-, -O-S (O) ₂ ~. . -S(O)₂~NR-, -NR-S(O)-, -P (0) - (OM) -0-, -0-P (0) - (OM)-, -P(O)-(OM)-NR-, -NR-P (0) - (OM)-, -PH(O)-O-, -O-PH(O)-, -PH(O)-NR- és-S (O) ₂ -NR-, -NR-S (O) -, -P (O) - (OM) -O-, -O-P (O) - (OM) -, -P (O) - (OM) -NR-, -NR-P (O) - (OM) -, -PH (O) -O-, -O-PH (O) -, -PH (O) -NR- and -NR-PH(O)- csoportokat szemléltet; X₃ függetlenül X₃ jelentésével bír és x 0-val azonos, ha Χς közvetlen kötést szemléltet; Xj egy nukleozid építőelem 0-, N- vagy C-atomjához való kötődést jelent, vagy X₄ -0-P (0 ) (OM)-0-, -NR-P (0 ) (OM)-0-, -0-P (0 ) (OM)-NR-, vagy -NR-P(O)(OM)-NR- csoportokat szemléltet, ha x 1-gyel azonos és X₃ nem közvetlen kötés; R H-, Ο₃-Ο₆-alkil-, fenil- vagy benzilcsoport; Μ H-, C₂-Cg-alkil-, fenil- vagy benzilcsoport, alkálifém kation vagy ammónium kation helyén áll; és x 0 vagy 1.-NR-PH (O) - represents groups; X ₃ independently has the meaning of X ₃ and is x 0 if Χς represents a direct bond; X ₁ represents a bond to the O, N or C atom of a nucleoside building block, or X ₄ -O-P (O) (OM) -O-, -NR-P (O) (OM) -O-, -O Denotes -P (O) (OM) -NR- or -NR-P (O) (OM) -NR- groups when x is 1 and X _{3 is} not a direct bond; R H, ₃ Ο -Ο ₆ alkyl, phenyl or benzyl; Áll H, C ₂ -C 8 -alkyl, phenyl or benzyl, alkali metal or ammonium; and x is 0 or 1. 22. A 21. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol az I. általános képletben X₃ közvetlen kötés és előnyösen Cj-C₄-alkilén-, fenilén- vagy benzilénosoportot jelent, ahol az alkilén-csoportot -0(0)-0- vagy -C(0)NH-csoportok szakíthatják meg; X₂ 0(0)-0-, -C(O)-NH-, -NH-C(0)-NH- vagy -NH-C(S)-NH-; X₃ C₂-C₁₈-alkilén-, előnyösen C₂-C₁₂-alkilén-csoportot szemléltet; X₄ -0-P(0)(OM)-O-, -NR-P (0) (OM)-0-, -0-P (0) (OM)-NR- vagy -NR-P (0) - (OM)-NR- csoportokat jelent.The oligonucleotide of claim 21, wherein in formula I, X _{3 is a} direct bond and preferably represents a C 1 -C ₄ alkylene, phenylene or benzylene group, wherein the alkylene group is -O (O) -O- or - It may be interrupted by C (O) NH groups; X ₂ 0 (0) -0-, -C (O) -NH-, -NH-C (0) -NH- or -NH-C (S) -NH-; X _{3 represents} C ₂ -C ₁₈ alkylene, preferably C ₂ -C ₁₂ alkylene; X ₄ -O-P (O) (OM) -O-, -NR-P (O) (OM) -O-, -O-P (O) (OM) -NR- or -NR-P (O) ) - (OM) -NR-. 23. Az 1. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol az oligonukleotidhoz kötődő katalizátorok esetében polipeptiöekről, fémsókról és fém-komplexekről van szó.The oligonucleotide of claim 1, wherein the oligonucleotide binding catalysts are polypeptides, metal salts and metal complexes. 24. A 23. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol a fémeket az elemek periódusos rendszerének mellékcsoportjaiból, valamint főcsoportjaiból, In, TI, Sn, Pb és Bi választjuk ki.The oligonucleotide of claim 23, wherein the metals are selected from the subgroups and major groups of the periodic system of elements, In, TI, Sn, Pb and Bi. 25. A 23. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol a fémeket szkandium, ittrium, lantán, lantanidák, Ti, Zr, Hf, V, Nb, Ta, • r 9 ♦ · ··♦ · · *The oligonucleotide of claim 23, wherein the metals are scandium, yttrium, lanthanum, lanthanides, Ti, Zr, Hf, V, Nb, Ta,? Cr, Mo, W, Mn, Fe, Ru, Os, Co, Rh, ír, Ni, Pd, Pt, Cu, Ag, Au,Cr, Mo, W, Mn, Fe, Ru, Os, Co, Rh, Irish, Ni, Pd, Pt, Cu, Ag, Au, Zn, Cd és Hg közül választjuk ki.Zn, Cd and Hg are selected. 26. A 23. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol a fémeket szkandium, ittnum, lantán, lantanidák, Cu és ólom közül választjuk ki.The oligonucleotide of claim 23, wherein the metals are selected from scandium, herenum, lanthanum, lanthanides, Cu and lead. 27. A 23. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol lantanida fémekként a Ce, Eu, Gd és Sm csoportját választjuk ki.27. The oligonucleotide of claim 23, wherein the lanthanide metals are selected from the group consisting of Ce, Eu, Gd and Sm. 28. A 23. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol a fémsókhoz és fémsó-komplexekhez megfelelő anionokat a következő csoportból választunk: halogenid, oxisavak anionja, BF₄ , PF₆ , SiF₆ ésThe oligonucleotide of claim 23, wherein the anions suitable for the metal salts and metal salt complexes are selected from the group consisting of halide, anion of oxy acids, BF ₄ , PF ₆ , SiF ₆ and AsF₆.AsF ₆ . 29. A 23. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol a fémkomplex katalizátorok előnyösen hetero-organikus vegyületekkel, mint komplexképzőkkel képzett fémsó-komplexként állnak rendelkezésre, ahol a komplexképző az oligonukleotidhoz kapcsolódik.29. The oligonucleotide of claim 23, wherein the metal complex catalysts are preferably provided as metal salt complexes with heterologous compounds such as complexing agents, wherein the complexing agent is attached to the oligonucleotide. 30. A 29.. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol a komplexképzőknél az 0, S, N és P csoportból kiválasztott hetero-atomokat tartalmazó nyiltláncú vagy ciklusos szerves vegyületekről van szó .30. The oligonucleotide of claim 29, wherein the complexing agents are single chain or cyclic organic compounds containing heteroatoms selected from the group consisting of O, S, N and P. 31. A 29. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol a komplexképzőknél összesen 8-26 gyűrűtagot tartalmazó és 2-12 hetero-atommal rendelkező ciklusos vagy policiklusos szerves vegyületekről van szó.31. The oligonucleotide of claim 29, wherein the complexing agents are cyclic or polycyclic organic compounds having a total of 8-26 ring members and having 2-12 heteroatoms. 32. A 29. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol a komplexképzőknél koronaéter, cianin, ftálo-cianin, porfirin, fenantrolin, nyílt és ciklusos di- és terpiridin, etilén-diamin-tetraecetsav és dietilén-uriamin-pentaacetát jön szóba.32. The oligonucleotide of claim 29, wherein the complexing agents include crown ether, cyanine, phthalocyanine, porphyrin, phenanthroline, open and cyclic di- and terpyridine, ethylenediaminetetraacetic acid and diethyleneuriamine pentaacetate. β« · * · « ·♦ # • · « * < ·· ·»β «· * ·« · ♦ # • · «* <·· ·» 33. Az 1. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol a konjugátum a33. The oligonucleotide of claim 1, wherein the conjugate is a II. általános képletnek felel meg,II. corresponds to a general formula, A-B-oligó (II.) amelyben A a B-hez előnyösen szénatomon keresztül kötődő ciklusos vagy policiklusos fémsókomplex, amelyet olyan komplexképzővel állítunk elő, amely a gyűrűben legalább 12 gyűrűatomot és legalább 4 hetero-atomot — N és 0 csoportból — tartalmaz kétértékű vagy háromértékű fémionokhoz kötve, amelyeket a szkandiumot, ittnumot, lantánt és lantanida fémeket tartalmazó csoportból választottunk ki; B az I . általános képlet hídképző csoportjául szolgál és oligó olyan oligonukleotidot jelent, amelynek belső szekvenciája cél-RNS-sel részben nem-komplementer.AB-Oligo (II) wherein A is a cyclic or polycyclic metal salt complex, preferably carbon-bonded to B, which is prepared by a complexing agent containing at least 12 ring atoms and at least 4 heteroatoms from the N and O ring in a divalent or trivalent bonded to metal ions selected from the group consisting of scandium, sinum, lanthanum and lanthanide metals; B is I. serves as a bridging group of the general formula EMI3.1 and oligonucleotide is an oligonucleotide whose internal sequence is partially non-complementary to the target RNA. 34. A 33. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol a komplexképző összesen legfeljebb 22 gyűrűatomot tartalmaz, és a gyűrűatomok a hetero-atomokon kívül előnyösen C-atomok.34. The oligonucleotide of claim 33, wherein the complexing agent comprises a total of up to 22 ring atoms, and the ring atoms are preferably C atoms other than heteroatoms. 35. A 34. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol a komplexképző 4-12 hetero-atomot tartalmaz az 0 és N csoportból.35. The oligonucleotide of claim 34, wherein the complexing agent comprises 4 to 12 heteroatoms selected from the group consisting of O and N. 36. A 33. igénypont szerinti oligonukleotid, ahol a komplexképző összesen 16-20 gyűrűatomot, valamint 6-10 N-atomot tartalmaz, ahol a fennmaradó gyűrűtagok esetében C-atomokról van szó, és az36. The oligonucleotide of claim 33, wherein the complexing agent comprises a total of 16-20 ring atoms and 6-10 N atoms, wherein the remaining ring members are C atoms and 3/33/3