HUT67693A

HUT67693A - Hemostatic composition for arresting local bleedings

Info

Publication number: HUT67693A
Application number: HU9401008A
Authority: HU
Inventors: Ulla Karin Elisabeth Hedner; Erik Hogsbro Ostergaard; Martin William Edwards
Original assignee: Novo Nordisk As
Priority date: 1991-10-11
Filing date: 1992-10-09
Publication date: 1995-04-28
Also published as: CA2121028A1; AU2793292A; NO941285L; HU9401008D0; JPH07500095A; EP0613377A1; CZ83194A3; WO1993006855A1; FI941628A; FI941628A0; NO941285D0

Abstract

Method for arresting local bleedings by topical use of FVIIa and a hemostatic composition containing FVIIa together with a biologically compatible carrier which permits said FVIIa to remain in contact with said bleeding wound.

Description

A találmány tárgya eljárás lokális vérzések megállítására Vlla faktor, valamint e faktort tartalmazó hemosztatikus készítmények alkalmazása utján.The present invention relates to a method for stopping local bleeding by the use of factor VIIa and hemostatic compositions containing this factor.

Amikor a véredényeket fizikai traumák - beleértve a sebészeti beavatkozást - károsítják, vérzés lép fel. Normális fiziológiai folyamatsor, mint vazokontrakció, vérlemezke letapadás és összecsapzódás a sérült érfalon, a plazma alvadási faktorainak aktiválódása következtében a véredény sérülését elzáró dugó¹' alakul ki. E folyamatot fiziológiai hemosztázisnak /véralvadás/ nevezik, melyet alább részletesen ismertetünk.When blood vessels are damaged by physical trauma, including surgery, bleeding occurs. Normal physiological pathways as vazokontrakció, platelet adhesion and aggregation to the injured vessel wall and the coagulation factors of the plasma activation due to blood vessel damage to the shut-off plug ¹ 'is formed. This process is called physiological hemostasis, which is described in detail below.

A véralvadást két különálló folyamat, az intrinsic és az extrinsic alvadási ut segíti elő.Coagulation is facilitated by two separate processes, intrinsic and extrinsic.

Az intrinsic folyamatban csak a plazmában jelenlevő véralvadási faktorok vesznek részt. Az intrinsic útvonal egyik közbenső lépésében az inaktív IX faktor IXa faktorrá aktiválódik; e reakciót a Xla faktor és kalciumionok katalizálják. Ezután a IXa faktor résztvesz a X faktor Xa faktorrá történő aktiválásában Villa faktor, foszfolipid és kalciumionok jelenlétében.Only coagulation factors present in plasma are involved in the intrinsic process. In an intermediate step in the intrinsic pathway, inactive factor IX is activated to factor IXa; this reaction is catalyzed by factor Xla and calcium ions. Factor IXa then participates in the activation of Factor X to Factor Xa in the presence of Factor VIIIa, phospholipid and calcium ions.

Az extrinsic útvonalban plazmafaktorok, valamint szövetkivonatok komponensei játszanak szerepet. A VII faktor - a plazmában jelenlevő proenzim - a véralvadás extrinsic folyamatában is résztvesz, amikor Vlla faktorrá aktiválódva a X faktort Xa faktorrá alakítja át szöveti faktor és kalcium ionok jelenlétében.Plasma factors and components of tissue extracts play a role in the extrinsic pathway. Factor VII, a proenzyme in plasma, is also involved in the extrinsic process of coagulation, when it is activated to factor VIIa and converts factor X into factor Xa in the presence of tissue factor and calcium ions.

A Xa faktor azután a protrombin-trombin átalakulást segíti elő kalciumionok és foszfolipid jelenlétében. Végül a trombin a plazma-fibrinogént fibrinné alakítja át, amely a XlIIa faktor és kalciumionok jelenlétében rostos hálózattá poliraerizálódik és ezáltal véralvadékot képez.Factor Xa then promotes the conversion of prothrombin-thrombin in the presence of calcium ions and phospholipid. Finally, thrombin converts plasma fibrinogen to fibrin, which in the presence of Factor XIIIa and calcium ions, polyserizes into a fibrous network and thereby forms a blood clot.

A természetes forrásokból tisztítással kinyert, vagy rekombináns technikákkal előállított plazma-faktorokat, mint a VIII:C faktort /lásd a 4,831,119; 4,868,112; 4,886,876; 4,657,894; Re. 32,011 és 4,649,132 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi bejelentéseket/ és a Vlla faktort /lásd a 4,784,950. 4,382,083; 4,479,938 és 4,357,321 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi bejelentést/ betegek kezelésére, igy alvadási faktorok szintézisének hiánya vagy nem kielégítő mértéke miatt kialakult hemofilia, vagy gátlótesthemofilia kezelésére használják. E véralvadási faktorokat a kezelésre szoruló betegnek vizes oldat formájáéban infúzióval vagy bólusz injekcióval adják be, függően az alkalmazandó plazmafaktoroktól és a beteg állapotától. A véralvadási faktor beadása után a vérzés jellemzően 14 perc és 3 óra közötti időn belül, vagy később szűnik meg.Plasma factors obtained from natural sources or purified by recombinant techniques, such as factor VIII: C / see 4,831,119; 4,868,112; 4,886,876; 4,657,894; Re. U.S. Patent Nos. 32,011 and 4,649,132; and Factor VIIa, see U.S. Patent 4,784,950. 4,382,083; U.S. Patent Nos. 4,479,938 and 4,357,321 are used to treat patients with haemophilia or inhibitory body hemophilia due to lack or insufficient synthesis of coagulation factors. These coagulation factors are administered to the patient in need of treatment in the form of an aqueous solution by infusion or bolus injection, depending on the plasma factors to be used and the patient's condition. Typically, after the administration of the coagulation factor, the bleeding ceases within 14 minutes to 3 hours or later.

Azonban a vérzés gyorsabb megálli’-tása szükséges nagyobb artériák kiterjedtebb sérüléséből eredő súlyos vérzések, vagy nagyobb nyálkahártya-felszínekből szivárgó vérzések, vagy kivezetés nélküli üregekből származó vérzések esetében.However, faster stopping of bleeding is required in the case of severe bleeding from extensive lesions of larger arteries, or bleeding from larger mucosal surfaces, or bleeding from unexcavated cavities.

Még ha a vérzés rövidebb ideig tart is, túlságos vérveszteséget okozhat, amely károsan befolyásolhatja a test normális működését. Csontos, nem táguló üregekben létrejövő vérzés estén is a kiszivárgott vér felhalmozódása a fokozott nyomás következtében helyileg károsíthatja a lágy szöveteket. Ilyen állapotok szokásos kezelése sebészeti és/vagy gyógyszeres vérzéscsillapitásból áll.Even if the bleeding is shorter, it can cause excessive blood loss, which can adversely affect the normal functioning of the body. Even in the case of bleeding in bony, non-expanding cavities, accumulation of leaking blood can cause localized soft tissue damage due to increased pressure. Conventional treatment of such conditions involves surgical and / or medicated hemorrhage.

A sebészi vérzéscsillapitás a szétszakadt véredények elkötéséből vagy összevarrásiből, az üregek tamponálásából, a szövetfelszinek - beleértve a széttört véredényekkel érintkezőket - hevített műszerekkel való megalvasztásából, vagy kauterező szerek vagy hevített levegő alkalmazásából áll.Surgical sedation consists of ligation or suture of ruptured blood vessels, swabing of cavities, coagulation of tissue surfaces, including contacts of ruptured blood vessels, or use of cautery agents or heated air.

A sebészeti hemosztázis megfelelő méretű blokkok, lemezek, vagy biológiai utón felszívódó hemosztatikus szivacsok használata utján is elősegíthető.Surgical hemostasis can also be facilitated by the use of appropriately sized blocks, plates, or bio-absorbable haemostatic sponges.

Egyes helyeken sebészeti hemosztatikus segédanyagként ökör-trombint vagy más véralvadást aktiváló faktorokat, mint VIII, XIII faktort vagy kalciuraionokat tartalmazó gyógyászati készítményeket használnak. E segédanyagokat például oldat formájában permetezik a vérző helyre /4,298,598 számú Amerikai Egyesült Allamok-beli szabadalmi leírás/. Az alkalmazás előtt egy vagy több hemosztatikus vegyületbe beáztatott textilanyagok, mint géz vagy gyapotvatta vagy biológiailag felszívódó szivacsok is használatosak /4,363,319 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírás/.In some places, pharmaceutical preparations containing oxythrombin or other coagulant activating factors such as factor VIII, XIII or calcium ions are used as surgical hemostatic excipients. These excipients are, for example, sprayed into solution at the bleeding site (U.S. Patent No. 4,298,598). Textiles soaked in one or more hemostatic compounds, such as gauze or cotton wool or bio-absorbent sponges, are also used prior to use (U.S. Patent No. 4,363,319).

• · · ♦ ·• · · ♦ ·

- 5 A 2,558,395 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban trombint tartalmazó, nem denaturált zselatinból álló, használatra kész szivacsokat ismertetnek. A 4,265,233 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban zselatinból, kollagénből, poliglikolsavból és poliecetsavból álló sebgyógyitó anyagot írnak le, melyhez kovalens kötéssel FXIII-at kapcsoltak. Az EP 277096 A számú szabadalmi bejelentésben sebkötöző anyagot írnak le, amely stabil trombinkészitményt és szubsztrátumot, mint kollagént vagy denaturált zselatint tartalmazó porózus szivacsból áll. A WO 90/13320 számú szabadalmi bejelentés hatásos vérzéscsillapító mennyiségű trombint és trombintól eltérő egy vagy több véralvadási faktort tartalmazó porózus szivacsot ir le. A 4,563,387 illetve a 4,642,111 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi bejelentések daganatkezelésre szolgáló eljárásra és eszközre vonatkoznak, és struktúrához, mint polimerhez rögzített daganatgátló szert és véralvadási faktort Írnak le, amely injekció utján adható be a tumorkezelés által közvetlenül okozott vérzés helyén.U.S. Pat. No. 2,558,395 discloses ready-to-use sponges consisting of undenatured gelatin containing thrombin. United States Patent 4,265,233 describes a wound healing agent consisting of gelatin, collagen, polyglycolic acid and polyacetic acid, to which FXIII is covalently bonded. EP 277096 A discloses a wound dressing comprising a porous sponge containing a stable thrombin composition and a substrate such as collagen or denatured gelatin. WO 90/13320 describes an effective antihypertensive amount of a porous sponge containing thrombin and one or more coagulation factors other than thrombin. U.S. Patent Nos. 4,563,387 and 4,642,111, respectively, relate to a method and device for treating tumors and disclose an anticancer agent attached to a structure such as a polymer and a blood coagulation factor that can be administered by injection at the site of bleeding directly induced by tumor treatment.

Az 59-116213 számú japán szabadalmi bejelentésben FXIII-at és trombint tartalmazó aeroszolt, és a 02-167234 számú japán szabadalmi bejelentésben élő szövetek számára fibrinogént, protrombint, FVII, FIX, FX, FXIII faktort, antitrombint, proteáz-bénitót és kalciumionokat tartalmazó ragasztóanyagot írnak le.Adhesive containing an aerosol containing FXIII and thrombin in Japanese Patent Application No. 59-116213, and adhesive for living tissues in Japanese Patent Application 02-167234, containing fibrinogen, prothrombin, FVII, FIX, FX, FXIII, antithrombin, protease benzoate and calcium ions. are described.

• * • · ·« • · · · · ······ · «· ·• * • · · «• · · · ······· ·« · ·

- 6 Az utóbbi években fokozódó aggodalom alakult ki ökör-eredetű termékek, például trombin vagy protrombin biztonságos használatát illetően emberi alkalmazásra szánt gyógyszerekben. Több közlemény Írja le a marhában előforduló és az ökör szivacsszerü agyvelőbántalmát /Bovine spongiform encephalopathy, BSS/ okozó fertőző anyag emberre való átvitelének lehetséges kockázatát, ahol a virusszerü anyag degenerativ encephalopathiával járó egy vagy több jól ismert betegség, például Creutzfeldt-Jacob betegség és kuru kialakulását okozhatja. Ezenfelül klinikai kutatók megfigyelték, hogy ökörtrombin alkalmazása embernél ellenanyagok képződéséhez vezet, melyek keresztreakciót adnak az emberi trombinnal és vérzési problémákat okozhatnak.- 6 In recent years, there has been increasing concern about the safe use of ox products, such as thrombin or prothrombin, in medicinal products for human use. Describe the potential risk of transmitting infectious material to cattle and ox spongiform encephalopathy (Bovine spongiform encephalopathy), which is one or more well-known diseases associated with degenerative encephalopathy, such as Creutzfeldt's disease. cause. In addition, clinical researchers have observed that the use of oxytrombin in humans leads to the production of antibodies that cross-react with human thrombin and may cause bleeding problems.

Ezért találmányunk célkitűzése, hogy biztonságos és hatásos eszközt fejlesszünk ki vérzések helyi elállítására a sérülés helyén.Therefore, it is an object of the present invention to provide a safe and effective means of locally producing bleeding at the site of injury.

Találmányunk alapját az a meglepő felismerés képezi hogy a sérülés helyén alkalmazva az FVIIa pillanatszerüen képes a vérzés megállítására trombin és más alvadási faktorok jelenléte nélkül, és biológiailag összeegyeztethető hordozóhaz /készítményhez vagy anyaghoz/ kapcsolódva, vagy abba beépülve a hordozó meg tudja akadályozni, hogy az FVIIa kimosódjék a sérülés helyéről.The present invention is based on the surprising discovery that, when applied at the site of injury, FVIIa is capable of instantly stopping bleeding in the absence of thrombin and other coagulation factors, and when incorporated or incorporated into a biocompatible carrier (s) or substance (s). wash away from the site of injury.

Találmányunk szerint az FVIIa-t olyan hordozó«····· · anyagba dolgozzuk be, amely nem tartalmaz trombint és nem kísérik vagy szennyezik egyéb véralvadási faktorok.According to the present invention, FVIIa is incorporated into a carrier material which is free of thrombin and is not accompanied or contaminated by other coagulation factors.

így találmányunk hemosztatikus készítményre vonatkozik, amely biológiailag összeegyeztethető hordozóba beépülve hatásos mennyiségű FVIIa-t tartalmaz és a készítményben nincs trombin.Thus, the present invention relates to a hemostatic composition which, when incorporated into a biocompatible carrier, contains an effective amount of FVIIa and does not contain thrombin.

Közelebbről meghatározva találmányunk a vérző seb helyén hemosztázist előidéző vérzéscsillapító készítményre vonatkozik, melyet egyéb véralvadási faktorok nem szennyeznek vagy kisérnek, és a vérzésmegállitó hatás kiváltásához önmagában elegendően aktiv FVIIa-t tartalmaz olyan biológiailag összeegyeztethető hordozóval együtt, amely lehetővé teszi, hogy a Vlla faktor a seb helyéhez rögzítve, ahhoz kötődve vagy azzal érintkezésben maradjon.More particularly, the present invention relates to a haemostatic haemostatic hemostatic composition which is not contaminated or coagulated by other coagulation factors and contains FVIIa sufficiently active to produce a haemorrhagic effect in combination with a biocompatible carrier that allows attached to, attached to, or in contact with.

A találmány ismertetése előtt, annak jobb megértése céljából szükség lehet bizonyos alább használt meghatározások értelmezésére.Before describing the invention, it may be necessary to interpret certain of the definitions used below in order to better understand it.

Hemosztatikum vagy hemosztatikus szer: vérzést elállitó szer.Haemostatic or haemostatic agent: a haemostatic agent.

Hemosztatikum vagy hemosztatikus készítmény: vérzéscsillapítót vagy vérzéselállitó szert tartalmazó készítmény.Haemostatic or haemostatic preparation: A preparation containing a haemostatic or haemostatic agent.

Véralvadék: a véralvadási folyamat kaszkádrendszerének végeredménye, amely az oldható plazma-fibrinogén oldhatatlan fibrinné való átalakulásából áll. A fibrin fizikailag *Blood clot: the end result of the cascade system of the blood coagulation process, which consists in the conversion of soluble plasma fibrinogen to insoluble fibrin. Fibrin Physically *

• · · · · ··· · ·« állítja le a vérzést. A véralvadék befedi a felületet, a seb széleit összetartja és mátrixot képez a későbbi sejtproliferáció és sebgyógyulás számára.It stops bleeding. The blood clot covers the surface, holds the edges of the wound together and forms a matrix for subsequent cell proliferation and wound healing.

Véralvadási faktorok: a véralvadási kaszkádban résztvevő plazmafehérjék.Coagulation factors: plasma proteins involved in the coagulation cascade.

Aktivált véralvadási faktorok: valamely aktivátor hatására aktív enzimekké átalakuló véralvadási faktorok, ahol az aktivátor gyakran maga is aktivált véralvadási faktor. A faktor aktív alakja általában a indexet kap /például Vlla faktor/.Activated Coagulation Factors: Coagulation factors that are converted to active enzymes by an activator, where the activator is often an activated coagulation factor itself. The active form of the factor is usually given the index (e.g. factor VIIa).

Proenzimek: enzimek általában inaktív előalakjai, amelyek peptidkötés/ek/ felhasadása után alakulnak át aktív enzimekké.Proenzymes: Inactive preforms of enzymes that are converted to active enzymes after peptide bond (s) / cleavage.

Biológiailag felszívódó anyag: a testben kisebb molekulákra lebomló anyag, ahol a molekulák mérete lehetővé teszi a véráramba történő transzportot és az alkalmazás helyéről történő fokozatos eltávozást.Biodegradable material: A substance that is degraded to smaller molecules in the body, where the size of the molecules allows for transport to the bloodstream and gradual removal from the application site.

Szivacs: porózus, hálózatos szerkezet, melynek belső felülete jelentősen nagyobb a külső felületnél. A porózus struktúra a hálószerű szerkezeten belül üreges helyeket tartalmaz, és saját tömegének sokszorosát kitevő folyadékmennyiséget tud abszorbeálni.Sponge: A porous, networked structure with a significantly larger internal surface than the outer surface. The porous structure contains hollow spaces within the mesh-like structure and is capable of absorbing a volume of fluid that is many times its own weight.

Kovalens kötés: két atom közös elektronpár képzésével egyesül molekulává úgy, hogy a kötést létesítő két elektron a molekulát alkotó mindkét atomhoz tartozik.Covalent bond: Two atoms combine to form a common pair of electrons so that the two electrons that make up the bond belong to both atoms that make up the molecule.

« · ·«· ·

Kötszer: seben alkalmazott anyag, amely helyhez rögzítve védelmet nyújt és elősegíti a gyógyulást.Bandage: A wound-applied substance that, when fixed in place, provides protection and promotes healing.

Lokális: helyi.Local: Local.

Biológiailag összeegyeztethető: test által befogadott anyag, amely bizonyos időszakon át kilökődés nélkül funkcióképes marad.Biocompatible: a substance absorbed by the body that remains functional for a period without rejection.

Gél: szilárd és folyékony fázist tartalmazó kolloid rendszer, amely szilárd vagy félszilárd tömeg formájában fordul elő.Gel: A colloidal system consisting of a solid and a liquid phase in the form of a solid or semi-solid mass.

Paszta: egy vagy több hidrogél- vagy zsiralapu anyagból álló kenőcsszerü készítmény. A kenőcsnél kevésbbé zsiros és jobban szívódik fel.Paste: An ointment consisting of one or more hydrogel or grease based substances. It is less greasy than ointment and absorbs better.

Szemcse: apró részecske vagy tömeg.Granule: a small particle or mass.

Film: vékony bevonat vagy réteg.Film: Thin coating or layer.

Tapasz: külsőleg alkalmazandó anyag, mely anyagánál és állagnál fogva a bőrhöz tapad.Patch: A substance for external use that adheres to the skin by its material and texture.

Pólya: gézből, muszlinból, flanelből vagy más anyagból álló esik, amely kötések rögzítésére vagy vérzés megállítására használatos.Bandage: a gauze, muslin, flannel or other material used to fix the bandages or stop bleeding.

Az FVIIa hatásos hemosztatikus mennyiségben alkalmazandó. A hatásos hemosztatikus mennyiség előnyösen elállitja a vérzést, ha a sérülés helyével elegendő időn át hagyjuk érintkezni; ez az idő normális véralvadási mechanizmus esetén legalább mintegy 60 másodperc, és ha az alvadási folyamat * < · * • · · · • · · «« ·FVIIa is administered in an effective hemostatic amount. An effective hemostatic amount preferably stops bleeding when left in contact with the site of injury for a sufficient period of time; this time is at least about 60 seconds for a normal coagulation mechanism, and if the coagulation process is * <* *.

-10nem megy végbe hibátlanul, rövidebb mintegy 10 percnél. Az FVIIa alkalmazásonként mintegy 0,2 - 2,0 mg, előnyösen mintegy 0,5 - 1,5 mg, legelőnyösebben mintegy 0,9 - 1,1 mg menynyiségben használandó.-10 does not run flawlessly, less than about 10 minutes. FVIIa is to be administered in an amount of about 0.2 to 2.0 mg, preferably about 0.5 to 1.5 mg, most preferably about 0.9 to 1.1 mg per application.

Az PVIIa a plazmából nyerhető /EP 0082182B számú szabadalmi bejelentés/ vagy rekombináns DNS-technikával állítható elő /EP 0200421A számú szabadalmi bejelentés/. Tisztított humán Vlla faktor előnyösen Broze és Majerus módszereivel /J. Bioi. Chem. 255, 1242-1247 /1980// és Hedner és Kisiel szerint /J. Clin. Invest. 71, 1836-1841 /1983// állítható elő. Ezekkel az eljárásokkal a VII faktor kimutatható mennyiségű egyéb véralvadási faktor nélkül állítható elő.PVIIa can be obtained from plasma (EP 0082182B) or by recombinant DNA technology (EP 0200421A). Purified human factor VIIa is preferably by the methods of Broze and Majerus / J. Biol. Chem. 255, 1242-1247 (1980) and according to Hedner and Kisiel, J. Clin. Invest. 71, 1836-1841 (1983). By these methods, factor VII can be produced without detectable levels of other coagulation factors.

Tovább tisztított VII faktor készítmény nyerhető gélszürést magában foglaló végső tisztítás utján. A VII faktor ezután aktivált Vlla faktorrá alakítható át ismert eljárásokkal, például különféle plazmafehérjék, mint Xlla, IXa vagy Xa segítségével. Bjoern és munkatársai szerint /Activation of Coagulation Pactor VII to Vlla, Research Disclosure 269, 564-565 /1986// a VII faktor ioncserélő kromatográfiával, mint MonoQ-oszloppal /Pharmacia Pine Chemicals, Uppsala, Svédország/ és másokkal is aktiválható.Further purified Factor VII formulations may be obtained by a final purification involving gel filtration. Factor VII can then be converted to activated Factor VIIa by known methods, for example, various plasma proteins such as XIIa, IXa or Xa. Bjoern et al., Activation of Coagulation Pactor VII to VIIa, Research Disclosure 269, 564-565 / 1986, can be activated by ion exchange chromatography such as MonoQ column (Pharmacia Pine Chemicals, Uppsala, Sweden) and others.

A szakember előtt nyilvánvaló, hogy a találmány szerint használható Vlla faktor rekombináns DNS-technológiával is előállítható, például a cDNS-t vagy VII faktort kódoló gént /Hagen és munkatársai, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, 2412-2410 * · • ··· · · ·· • · * · · ·♦···· · ·· ·One skilled in the art will recognize that the factor VIIa useful in the present invention may also be produced by recombinant DNA technology, e.g., the gene encoding cDNA or factor VII / Hagen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, 2412-2410 * · • · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ·ics · what →

- 11 /1986// alkalmas vektorba beékelve, alkalmas sejtvonalakat vektorral transzformálva és a transzformált sejteket megfelelő tápközegben tenyésztve, majd az expresszált terméket izolálva és Vlla faktorrá aktiválva. Az FVII rekombináns DNS-technológiával való előállítását a 4,784,950 számú Amerikai Egyesült Államok-beli szabadalmi leírásban is közlik, melyre itt tájékoztatásképpen hivatkozunk. A rekombináns DNS-technológiával nyert Vlla faktor autentikus Vlla faktor, vagy többé-kevésbbé módosított Vlla faktor lehet, amennyiben a módosított Vlla faktor a véralvadásban azonos biológiai hatást fejt ki, mint az autentikus Vlla faktor. Az ilyen módosított Vlla faktor előállítása a VII faktort kódoló DNS-sorrend módosításával történhet az aminosav-kodonok megváltoztatása, vagy a természetes génben meglévő aminosav-kodonok némelyikének eltávolítása utján,_r ismert eszközöket, például hely-specifikus mutagenezist alkalmazva.- 11/1986 // by inserting into a suitable vector, transforming suitable cell lines with a vector and culturing the transformed cells in a suitable medium, then isolating the expressed product and activating it into factor VIIa. The preparation of FVII by recombinant DNA technology is also disclosed in U.S. Patent No. 4,784,950, which is incorporated herein by reference. Factor Vlla obtained by recombinant DNA technology may be authentic Factor VIIa or more or less modified Factor VIIa, provided that the modified Factor VIIa has the same biological activity as authentic Factor VIIa. The preparation of such modified factor VIIa occur encoding Factor VII DNA sequence is modified by altering the amino acid codons or remove existing amino acid codons in the natural gene by means of some, _r using known means, such as site-directed mutagenesis.

Nyilvánvaló, hogy a fenti módszerek végrehajtása független a Vlla faktor kinyerésének módjától és ezért találmányunk kiterjed a találmány szerinti felhasználásra alkalmas bármely Vlla faktorra.It will be appreciated that the above methods are independent of the method of recovering factor VIIa and therefore the invention encompasses any factor VIIa suitable for use in the present invention.

Hordozóanyagként gél, paszta, szilárd vagy más megfelelő, biológiailag összeegyeztethető/elfogadható hordozó használható gyógyszerek vagy egyéb biológiailag aktív készítmények helyi alkalmazásához.The carrier may be a gel, paste, solid or other suitable biocompatible / acceptable carrier for topical administration of drugs or other biologically active compositions.

A gél vagy paszta viszkozitása előnyösen 0,2 - 30 ···· ··«♦Preferably, the gel or paste has a viscosity of from 0.2 to 30 ···· ···········································iting date (s)

- 12 Pa · s.- 12 Pa · s.

A biológiailag összeegyeztethető hordozót jellemzően természetes makromolekulák, raint zselatin, kollagén, alginsav, cellulóz, kitin, fibrinogén, fibrin hasitási termékek, fibronektin fragmensek, globulin, mioglobulin, kazein, keratin, albumin, poliszacharidok, például dextránok, glikozaminoglikánok agar, pektin, keményítő, vagy kémiailag módosított természetes molekulák, mint denaturált zselatin, alginsav—alginátok, például kalcium-alginát, oxidált cellulóz, szubsztituált cellulóz-éterek, például glikol-cellulóz, metil-cellulóz, etil-cellulóz, hidroxi-metil-cellulóz, hidroxi-etil-cellulóz, hidroxi-propil-metil-cellulóz, szubsztituált cellulóz-észterek, például acetilezett cellulóz, szubsztituált cellulóz-éter-észterek, például acetilezett etil-cellulóz, kitozán, vagy szintetikus polimerek, mint vinil-polimerek, például poliakrilsav, polimetakrilsav, polivinilpirrolidon és polivinilalkohol, poliglikolsav, poliecetsav, polidextrózok vagy kopolimerek, mint polioxietilén-polioxioropilén kopolimerek, vagy természetes íostok, szintetikus rostok vagy a fenti anyagok/vegyületek keverékei alkotják.Typically, the biocompatible carrier will comprise natural macromolecules, raint gelatin, collagen, alginic acid, cellulose, chitin, fibrinogen, fibrin cleavage products, fibronectin fragments, globulin, myoglobulin, casein, keratin, albumin, polysaccharides, dextrans, glycosarines, or chemically modified natural molecules such as denatured gelatin, alginic acid alginates such as calcium alginate, oxidized cellulose, substituted cellulose ethers such as glycol cellulose, methyl cellulose, ethyl cellulose, hydroxymethyl cellulose, hydroxyethyl cellulose, hydroxypropylmethylcellulose, substituted cellulose esters such as acetylated cellulose, substituted cellulose ether esters such as acetylated ethyl cellulose, chitosan, or synthetic polymers such as vinyl polymers such as polyacrylic acid, polymethacrylic acid, polyvinyl alcohol, polyglycolic acid, polyacetic acid, polidex ropes or copolymers such as polyoxyethylene-polyoxyioropylene copolymers or natural fibers, synthetic fibers or mixtures of the above substances / compounds.

A szilárd, biológiailag összeegyeztethető hordozók előnyösen szemcsék, porok, szivacsok, filmek, tapaszok, sebészeti kötszerek vagy pólyák.Solid, biocompatible carriers are preferably granules, powders, foams, films, patches, surgical dressings or bandages.

A szilárd, biológiailag összeegyeztethető hordozókat általában hemosztatikuraokként használatosak közül választjuk ki.Solid biocompatible carriers are generally selected from those used as haemostats.

♦ «<··· ···« ·····4 ·· · · é ·· ♦ · · · 4 ·4 «♦ «<··· ···« ····· 4 ··· · · · · · · · · · · · ·

Közéjük tartozik a módosított cellulóz, kollagén, zselatin, alginát vagy szintetikus polimerek.These include modified polymers of cellulose, collagen, gelatin, alginate or synthetic.

A biológiailag összeegyeztethető hordozó ezenfelül fibrinolizist gátló anyagot, például aprotinint, £-kapronsavat vagy tranexámsavat tartalmazhat. Stabilizátort, mint természetes előfordulású aminosavakat, mono- vagy diszacharidokat, poliglikolokat, glicerint, fehérjéket vagy fémsót, mint kalciumsókat is tartalmazhatnak, valamint a fentiek keverékét. Pufferező sók is hozzáadhatok, igy alkálifém-acetátok, alkálifém-karbonátok vagy -hidrogén-karbonátok, alkálifém-citrátok, alkálifém-foszfátok vagy -hidrogén-foszfátok, alkálifém-szukcinátok, imidazol, trisz/hidroxi-metil/-amino-metán és ikeranionos pufferező rendszerek és keverékeik. Ezenfelül mikrobaellenes vagy baktériumölő szerek, mint antibiotikumok, szulfonamidok, gombaölő szerek, vírusellenes vegyületek és tartósítószerek is alkalmazhatók.The biocompatible carrier may further comprise a fibrinolysis inhibitor, such as aprotinin, ε-capric acid or tranexamic acid. They may also contain a stabilizer such as naturally occurring amino acids, mono- or disaccharides, polyglycols, glycerol, proteins or metal salts as calcium salts, and mixtures of the above. Buffering salts may also be added, such as alkali metal acetates, alkali metal carbonates or bicarbonates, alkali metal citrates, alkaline metal phosphates or hydrogen phosphates, alkali metal succinates, imidazole / methane hydroxy, buffering systems and mixtures thereof. In addition, antimicrobial or bactericidal agents such as antibiotics, sulfonamides, antifungal agents, antiviral compounds and preservatives may be used.

A találmány szerinti eljárás és hemosztatikus készítmény a véralvadás elősegítésére használható műtéti beavatkozások vagy egyéb sérülések, mint a bőr és/vagy a környező szövetek vagy nagyobb hasi szervek /máj, lép vagy belek/ véletlen sérülése; tüdősebészet; az agy- és idegszövetek nyomás okozta károsodását megelőző idegsebészet; ortopédiai sebészet esetében, melyek során más utón nehezen meggátolható, gyakran kiterjedt vérzések léphetnek fel; továbbá az érsebészetben a a varrás helyéről történő szivárgás megállítására; száj- és fogsebészetben, mint foghúzásnál; és orrvérzésnél /epistaxis/ használható.The method and haemostatic composition of the present invention are surgical interventions or other injuries such as accidental injuries to the skin and / or surrounding tissues or major abdominal organs / liver, spleen or intestines that may be used to promote blood coagulation; Lung Surgery; neurosurgery to prevent pressure damage to brain and nerve tissue; in the case of orthopedic surgery, which may be otherwise difficult to prevent, often extensive bleeding may occur; and to stop leakage from the suture site in vascular surgery; in oral and dental surgery as in tooth extraction; and epistaxis.

Használatra kész készítménynél az FVIIa különböző ismert módon dolgozható be a hordozóanyagba, igy együttes precipitáció, duzzasztás, diszpergálás, keverés, átitatás, porlasztás, beágyazás, injekció vagy ezek kombinálása utján.In ready-to-use formulations, FVIIa can be incorporated into the carrier in a variety of known ways, such as co-precipitation, swelling, dispersing, mixing, impregnating, spraying, embedding, injection, or a combination thereof.

Ha a hordozóanyag gél vagy paszta, a Vlla faktort előnyösen fertőzésmentes körülmények között juttatjuk be a hordozóba. Ez úgy történhet, hogy az PVIIa alkalmas oldatát hozzáadjuk a hordozóanyaghoz, majd megfelelő eszközzel óvatosan keverjük, hogy az PVIIa egyenletesen eloszoljék a gélben vagy pasztában. Az PVIIa-t tartalmazó hordozóanyagot azután alkalmas kiszerelési formába visszük át, például csőbe, müanyagtartályba vagy fecskendőbe. A végső sterilezés például hővel vagy ionizáló sugárzással történhet.If the carrier is a gel or a paste, the factor VIIa is preferably introduced into the carrier under non-infectious conditions. This may be accomplished by adding a suitable solution of PVIIa to the carrier and then gently agitating with a suitable device so that PVIIa is uniformly distributed in the gel or paste. The PVIIa-containing carrier is then transferred to a suitable formulation, for example, in a tube, plastic container or syringe. The final sterilization may be carried out, for example, by heat or ionizing radiation.

Ha a hordozó szilárd, a Vlla faktort úgy juttatjuk be, hogy a hordozót az PVIIa alkalmas oldatába helyezzük a Vlla faktor-oldattal való megfelelő átitatódáshoz szükséges időre. Az FVIIa a szilárd hordozóba permetezés, beágyazás vagy többszöri befecskendezés utján is bevihető. Miután az FVIIaval impregnált hordozóból a viz feleslegét vákuumszáritással vagy gyorshütő szárítással eltávolitottuk, megfelelően kiszereljük például papirtasakba vagy un. buborék-csomagolásba, és végül sterilezzük például hő, etilén-oxid vagy ionizáló sugárzás segítségével.When the carrier is solid, factor VIIa is delivered by placing the carrier in a suitable solution of PVIIa for a period of time sufficient to impregnate with factor VIIa solution. FVIIa can also be introduced into the solid support by spraying, embedding or multiple injections. After the excess water has been removed from the FVII impregnated substrate by vacuum drying or by rapid-drying, it is suitably packaged in, for example, a paper bag or so-called. in a blister pack and finally sterilized by, for example, heat, ethylene oxide or ionizing radiation.

Az FVIIa a hordozóhoz az FVIIa és a hordozóanyag közötti elektrosztatikus kölcsönhatás révén is rögzíthető.FVIIa can also be attached to the support by electrostatic interaction between FVIIa and the support.

Az FVIIa kovalens kötéssel is hozzákapcsolható a hordozóhoz kémiai, keresztkötéseket létesítő reagensek, mint bifunkciós N-hidroxi-szukcinimid-észterek vagy egyéb bifunkciós kémiai térhálósitó reagensek segítségével.FVIIa may also be covalently linked to the support by chemical crosslinking reagents such as bifunctional N-hydroxysuccinimide esters or other bifunctional chemical crosslinking reagents.

Végül az FVIIa a hordozóhoz fizikai utón, mint abszorpcióval, diszperzióval vagy adszorpcióval rögzíthető.Finally, FVIIa can be attached to the carrier by physical post-absorption, dispersion or adsorption.

A Vlla faktor közvetlenül a használat előtt is hozzáadható a hordozóhoz. így például az FVIIa alkalmas oldatát a hordozóanyagra permetezzük, vagy a hordozót beágyazzuk az FVIIa-oldatba. Az FVIIa-oldat a hordozóba befecskendezéssel is bejuttatható.Factor VIIa may be added to the carrier immediately prior to use. For example, a suitable solution of FVIIa is sprayed onto the carrier or embedded in the FVIIa solution. The FVIIa solution may also be injected into the vehicle.

Előnyös hordozó a biológiailag lebomló hemosztatikus szivacsként ismert szivacsanyag. Hemosztatikus szivacsok előállításához biológiai utón lebomló vagy felszívódó vegyületeket alkalmazunk, mint kollagént, zselatint, kitint, cellulózt, poliglikolsavat és poliecetsavat. Az ilyen felszívódásra képes hemosztatikumok a vérzés helyén hagyhatók belső sérülések összevarrása után is, és hatásukat vizoldékonyságuktól, lebomlási képességüktől és méretüktől függően bizonyos időtartamon át fejtik ki.A preferred carrier is a sponge material known as a biodegradable haemostatic sponge. Biodegradable or absorbable compounds such as collagen, gelatin, chitin, cellulose, polyglycolic acid and polyacetic acid are used to produce hemostatic sponges. Such absorbable hemostatic agents may be left at the site of bleeding after suturing internal injuries, and may act over a period of time depending upon their water solubility, degradability, and size.

A fenti anyagok jellemzői különböző kémiai vagy fizikai kezelésekkel szabályozhatók, ami például a szerkezet tökéletesebb mechanikai szilárdságához vezet, vagy csökkenti az anyag vizoldhatóságát, késleltetve ezáltal az abszorpció sebességét, ami megnyujtja a hemosztatikus hatás időtartamát.The properties of the above materials can be controlled by various chemical or physical treatments, for example leading to improved mechanical strength of the structure or reducing the water solubility of the material, thereby delaying the rate of absorption, which prolongs the duration of the hemostatic effect.

A zselatin például néhány órán át 100 - 160°C-on denaturálható. Ξ kezelés után az eredetileg vizoldékony zselatin lényegében vízben oldhatatlanná válik, de a test fehérjebontó enzimjei még felszívódásra képes molekulákká tudják lebontani.For example, gelatin can be denatured at 100-160 ° C for several hours. Ξ After treatment, the initially water-soluble gelatin becomes essentially insoluble in water, but the body's protein-degrading enzymes can still break it down into absorbable molecules.

Ezzel szemben a nem denaturált zselatinból eló'állitott hemosztatikus szivacsok meglehetősen gyorsan oldódnak, és vizes oldatokkal vagy vérző sebekkel érintkezve lágy géllé alakulnak át.In contrast, hemostatic sponges made from non-denatured gelatin dissolve quite rapidly and, upon contact with aqueous solutions or bleeding wounds, convert to a soft gel.

Az FVIIa-t tartalmazó hemosztatikus szivacsot úgy állítjuk elő, hogy a nem denaturált zselatinból és FVIIa-ból habot készítünk és a habot fagyaszta szárítjuk, vagy az előformázott megszáritott szivacsot FVIIa-oldattal telítjük és a nedves szivacsot azután fagyasztva szárítjuk.The hemostatic foam containing FVIIa is prepared by foaming the non-denatured gelatin and FVIIa and freeze-drying the foam, or saturating the preformed dried foam with FVIIa solution and then freeze-drying the foam.

Az utóbbi technika lehetőséget nyújt vízben oldhatatlan szivacsanyag alkalmazására, arai azért előnyös, mert az ilyen szivacsok a vérzés helyén alkalmazva lényegesen hoszszabb ideig tartják meg fizikai szerkezetüket, mint a nem denaturált szivacsok.The latter technique allows the use of a water-insoluble sponge material, which is advantageous because such sponges, when applied at the site of bleeding, retain a much longer physical structure than non-denatured sponges.

A találmány egy előnyös kivitelezésénél a hordozó használatra kész hemosztatikus szivacs, melyhez a VHa faktort kiszerelés és végső sterilezés előtt adjuk hozzá.In a preferred embodiment of the invention, the carrier is a ready-to-use haemostatic sponge to which VHa factor is added prior to formulation and final sterilization.

1. példaExample 1

Zselatinszivacsból /Spongostan, Novo Nordisk A/S7 lyukasztót használva négy 5 mm-es magot vágunk ki. Közülük kettőt steril vízbe, a másik kettőt 1,13 mg Vlla faktort tartalmazó 2 ml steril vízbe áztatunk be. A vérző helyen való, alább leirt alkalmazás előtt az áztatási idő körülbelül 5 perc.Four 5 mm cores were cut from a gelatin sponge / Spongostan using Novo Nordisk A / S7 punch. Two of these were soaked in sterile water and the other two in 2 ml of sterile water containing 1.13 mg factor VIIa. Before application to the bleeding site as described below, the soaking time is approximately 5 minutes.

450 g súlyú Sprague-Dawley patkányt halothannal narkotizálunk, majd az állatnak intraperitoneálisan 0,2 ml/kg érzéstelenitőszer-törzsoldatot adunk be.Sprague-Dawley rats (450 g) were anesthetized with halothane and administered 0.2 ml / kg of anesthetic stock solution intraperitoneally.

A patkányt melegitőpárnára helyezzük és a hasat hosszanti középvonalu vágással megnyitva láthatóvá tesszük a májat. A béltartalmat meleg sóoldattal átitatott tamponnal távolitjuk el.The rat is placed on a heating pad and the liver is exposed by opening the abdomen with a longitudinal centerline cut. The intestinal contents were removed with a swab moistened with warm saline.

A máj mögé helyezett acéldarab segítségével szilárd ágyat hozunk létre. Négy 5 mm-es szövetmagot vágunk ki a máj teljes vastagsán keresztül és a lyukakba behelyezzük a négy elkészített zselatinszivacsot.Using a piece of steel placed behind the liver, a solid bed is formed. Four 5 mm tissue cores were cut through the entire thickness of the liver and the four prepared gelatin sponges were inserted into the wells.

Ξ négy helyet 20 percen át figyeljük, majd a májat kivágjuk és finom fogazásu csipesszel, óvatosan huzva megkíséreljük a zselatindugók eltávolítását.Ξ Observe four sites for 20 minutes, then cut the liver and attempt to remove the gel plugs with a fine-toothed tweezer and gently pull.

A Vlla faktorral átitatott zselatinszivaccsal betömött két helyen a vérzés elállt, míg a másik két helyen a szivárgás folyatódik. A májbiopszia helyeiről egyik dugót sem volt nehéz eltávolítani, de a Vlla faktorral átitatott dugó eltávolítása nehezebbnek tűnt.At two sites filled with gelatin sponge impregnated with factor VIIa, bleeding stopped and the other two sites continued to leak. None of the plugs in the liver biopsy sites were difficult to remove, but removal of the factor VIIa-plated plug appeared to be more difficult.

• ·• ·

- 18 2, példa- 18 2, Example

A sebészeti beavatkozás előtt kis darabokat /45 x 20 x 10 mm/ vágunk ki a száraz zselatinszivacsból /Spongostan standard/. A fenti méretet annak biztosítása céljából választottuk, hogy a szivacs a 25 mm hosszú bemetszést 10 mm átfedéssel pontosan befedje.Prior to surgery, small pieces (45 x 20 x 10 mm) were cut from the dry gelatin sponge (Spongostan standard). The above dimension was chosen to ensure that the sponge accurately covers the 25mm long incision with 10mm overlap.

A fagyasztva szárított Vlla faktorból kalciumionokat /10,0 mmol koncentráció/ tartalmazó vizes oldatot /1,0 mg per ml/ készítünk és a műtét előtt szobahőmérsékleten tartjuk.Freeze-dried Factor VIIa was prepared in an aqueous solution (1.0 mg per ml) containing calcium ions (10.0 mmol) and stored at room temperature prior to surgery.

Elaltatott tengerimalac hasüregét középvonalu metszéssel megnyitjuk és a lépet a sebben láthatóvá tesszük. 3,0 mm mély és 25 mm hossu bemetszést végzünk speciális eszközt használva, melyet záróblokkal összeszerelt és hosszirányú vályattal ellátott szikéból készítettünk. Az első bemetszés ellenőrző bemetszésként szolgál, melyet 12 percen át vérezni hagyunk, hogy kizárjuk a spontán alvadás lehetőségét.The abdominal cavity of the anesthetized guinea pig is opened by a midline incision and the spleen is visualized in the wound. A 3.0 mm deep and 25 mm hossu incision was made using a special tool made of scalpels assembled with locking blocks and longitudinal grooves. The first incision serves as a control incision, which is left to bleed for 12 minutes to exclude the possibility of spontaneous coagulation.

Ezután az első vágástól 30 mm-re egy másik bemetszést csinálunk és 60 másodpercen át szabadon vérezni hagyjuk. Utána óvatosan zselatinszivacs darabot helyezünk a bemetszésre, 1,0 ml Vlla faktor-oldatot csepegtetünk rá és 30 másodpercen át enyhe ujjnyomással óvatosan bemasszirozzuk a szivacsba. Azonnal teljes véralvadás következik be.A second incision is then made 30 mm from the first cut and left to bleed freely for 60 seconds. Then, a piece of gelatin sponge is carefully placed on the incision, 1.0 ml of factor VIIa solution is added dropwise and gently massaged into the sponge for 30 seconds with gentle finger pressure. Full blood coagulation occurs immediately.

A tesztsorozatban négy különböző, kereskedelmileg beszerezhet hemosztatikus szivacsot is alkalmazunk, melyeketFour different commercially available haemostatic sponges are used in the test series.

izotóniás nátrium-klorid-oldattal itatunk át. A hemosztázis sajátos ideje 1,8 és 7,5 perc között változott.isotonic with sodium chloride solution. The specific time of hemostasis ranged from 1.8 to 7.5 minutes.

Hasonló teszteljárásban a vizes oldatban levő ökör-trombin /50 NIH E/ml_7 szintén hirtelen hemosztázist idéz elő.In a similar test procedure, oxygen thrombin / 50 NIH E / ml_7 in aqueous solution also causes sudden hemostasis.

3. néldaExample 3

Mátrixba való beépítés nélkül spray formájában helyileg vizes FVIIa-oldatot alkalmazunk az epehólyag-ágyból és hasi sebészeti bemetszésekből származó vénás vérzés megállítása céljából. A vizsgálatot két csoportra osztott, összesen 8 betegen végezzük el randomizált kettős vakkisérlet formájában /a kezelőorvos sem tudja, hogy hatásos szert, vagy placebót ad a betegnek/.Without incorporation into the matrix, an aqueous solution of FVIIa is sprayed locally to stop venous bleeding from the gallbladder bed and abdominal surgery. The study is conducted in a total of 8 patients divided into two groups, randomized to a double-blind study (the clinician does not know whether it is effective or gives the patient a placebo).

562,5 ug liofilizált Vlla faktort vagy a Vlla faktorhoz hasonlító placebo készítményeket tartalmazó fiolák tartalmát közvetlenül a felhasználás előtt 3,7 ml steril vízzel feloldjuk és permetező tűkkel ellátott fecskendőkbe viszszük át. Minden alkalmazásnál a teljes 3,7 ml térfogatot bef ecskendezzük.The contents of vials containing 562.5 µg of lyophilized Factor VIIa or placebo formulations similar to Factor VIIa were reconstituted with 3.7 ml sterile water immediately before use and transferred to syringes with spray needles. For each application, a total volume of 3.7 ml is injected.

Epehólyag műtéti eltávolításán átesett 4 beteget vizsgálunk, közülük kettó'-kettő Vlla faktort ill. placebót kap. Az epehólyag eltávolítása után a Vlla faktort vagy a placebót az epehólyag-ágyra fecskendezzük. A hatékonyságot 2 perc múlva értékeljük. Minden esetben a készítmény hatékony20 ságát az alkalmazás előtti és utáni szivárgás összehasonlítása alapján állapítjuk meg.Four patients undergoing surgical removal of the gallbladder were examined, two of whom had Factor VIIa. receive a placebo. After removal of the gallbladder, factor VIIa or placebo is injected onto the gallbladder bed. Efficacy was evaluated after 2 minutes. In each case, the efficacy of the formulation is determined by comparing the leak before and after application.

Általános elektiv hasi műtéten áteső négy másik beteget vizsgálunk. A bemetszéseket lefelé meghosszabbítjuk a hashártyáig a hashártya átvágása nélkül, és az artériás fröcskölést szokásos sebészeti technikával gátoljuk meg. Közvetlenül a sebészi bemetszés után a seb közepét vastag tamponnal lefedjük és a Vlla faktort a seb egyik végére, a kontroll placebót pedig a másik végére fecskendezzük. A seb befecskendezése után 3 perc múlva értékeljük a hatékonyságot. A sebész vakon” Ítéli meg, hogy a seb melyik vége vérzik kevésbbé.Four other patients undergoing general elective abdominal surgery are being examined. The incisions are extended down to the peritoneum without perforation of the peritoneum, and arterial spattering is prevented by conventional surgical techniques. Immediately after the surgical incision, the middle of the wound is covered with a thick swab and Factor VIIa is injected at one end of the wound and the control placebo at the other end. Effectiveness is evaluated 3 minutes after wound injection. The Surgeon Blindly ”Judges which end of the wound is bleeding less.

E kísérletekben a Vlla faktor nem befolyásolta a vénás vérzést. Ennek valószínű oka, hogy a Vlla faktor kimosódik a sebről, ha csak vizes oldatban alkalmazzuk és nem dolgozzuk be mátrixba vagy biológiailag összeegyeztethető hordozóba, amely lehetővé tenné, hogy az FVIIa érintkezésben maradjon a vérző sebbel.In these experiments, factor VIIa did not affect venous bleeding. This is probably because Factor VIIa is washed away from the wound when applied only in aqueous solution and not incorporated into a matrix or biocompatible carrier that would allow FVIIa to remain in contact with the bleeding wound.

A találmány hatókörét nem korlátozzák a fenti példák, melyeknek célja csak a találmány illusztrálása. A fenti leírásból a szakember számára nyilvánvaló, hogy a találmányon különböző módosítások hajthatók végre a bemutatottakon és leírtakon kívül. Szándékunk szerint az ilyen módosítások beletartoznak az igénypontok hatókörébe.The scope of the invention is not limited by the above examples, which are intended to illustrate the invention only. From the foregoing description, it will be apparent to those skilled in the art that various modifications may be made to the invention other than those disclosed and described. Such modifications are intended to be within the scope of the claims.

Claims

Szabadalmi igénypontokClaims

1. Vérzéscsillapító készítmény vérző seb hemosztázisának előidézésére, azzal j ellemezve, hogy más véralvadási faktoroktól mentes és a hemosztatikus hatás kifejtéséhez önmagában is eléggé aktív Vlla faktor hatásos mennyiségét alkalmazzuk olyan biológiailag összeegyeztethető hordozóval együtt, amely a Vlla faktort a vérző sebbel érintkezésben tudja tartani.A hemostatic composition for inducing haemostasis of a bleeding wound, characterized in that an effective amount of factor VIIa alone, sufficiently free of other coagulation factors and sufficient to exert a hemostatic effect, is used together with a biocompatible carrier capable of maintaining factor VIIa in contact with the bleeding wound.

2. Az 1. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal jellemezve, hogy a biológiailag összeegyeztethető hordozóanyag gél vagy paszta.The hemostatic composition of claim 1, wherein the biocompatible carrier is a gel or paste.

3. A 2. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal j ellemezve , hogy a gél vagy paszta viszkozitása körülbelül a 0,2 - 30 Pa«s tartományba esik.The hemostatic composition of claim 2, wherein the gel or paste has a viscosity in the range of about 0.2 to about 30 Pa.

4. Az 1. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal j ellemezve , hogy a biológiailag összeegyeztethető hordozó szilárd halmazállapotú.4. The hemostatic composition of claim 1, wherein the biocompatible carrier is in a solid state.

5. Az 1. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal jellemezve, hogy a biológiailag összeegyeztethető hordozót természetes makromolekulák, kémiailag módosított természetes molekulák, szintetikus polimerek, természetes vagy szintetikus rostok vagy ezek keverékei képezik.5. The hemostatic composition of claim 1, wherein the biocompatible carrier is a natural macromolecule, a chemically modified natural molecule, a synthetic polymer, a natural or synthetic fiber, or mixtures thereof.

6. Az 5. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal jellemezve, hogy a biológiailag • · ·6. The haemostatic composition of claim 5, wherein said biologically active agent is a biologically active agent.

- 22 összeegyeztethető hordozót poliszacharidok vagy fehérjék vagy keverékeik alkotják.22 compatible carriers are polysaccharides or proteins or mixtures thereof.

7. A 4. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal jellemezve, hogy a biológiailag összeegyeztethető hordozó szemcse, por, szivacs, film, tapasz, sebészeti kötszer vagy pólya.7. The haemostatic composition of claim 4, wherein the biocompatible carrier is a granule, powder, sponge, film, patch, surgical dressing or bandage.

8. A 4. igénypont szerinti vérzéscsillapító késiztmény, azzal jellemezve, hogy a biológiailag összeegyeztethető hordozót módosított cellulóz, kollagén, zselatin vagy természetes vagy szintetikus rostok alkotják.8. The hemostatic delay according to claim 4, characterized in that the biocompatible carrier is composed of modified cellulose, collagen, gelatin or natural or synthetic fibers.

9. Az 1. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal jellemezve, hogy a Vlla faktor a biológiailag összeegyeztethető hordozóhoz az FVIIa és a biológiailag összeegyeztethető hordozó közötti elektrosztatikus kölcsönhatás utján rögzül, vagy a Vlla faktort kovalens kötés kapcsolja a biológiailag összeegyeztethető hordozóhoz.The hemostatic composition of claim 1, wherein the factor Vlla is fixed to the biocompatible carrier by electrostatic interaction between FVIIa and the biocompatible carrier, or covalently linked to the biocompatible carrier.

10. A 9. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal jellemezve, hogy a Vlla faktor kémiai térhálósitó reagensek, mint bifunkciós N-hidroxi-szukcinimid-észterek vagy más bifunkciós kémiai térhálósitó reagensek utján kovalensen kötődik a biológiailag összeegyeztethető hordozóhoz.10. The haemostatic composition of claim 9, wherein factor VIIIa is covalently bound to a biocompatible carrier by chemical crosslinking agents such as bifunctional N-hydroxysuccinimide esters or other bifunctional chemical crosslinking agents.

11. Az 1. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal jellemezve, hogy az FVIIa a biológiai lag összeegyeztethető hordozóhoz fizikai utón, mint abszorpció- val, diszperzióval vagy adszorpcióval kötődik.11. The haemostatic composition of claim 1, wherein the FVIIa binds to the biocompatible carrier by physical means such as absorption, dispersion or adsorption.

12. Az 1. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal j elle mezve, hogy az FVIIa mennyisége mintegy 0,2 - 2,0 mg.12. The hemostatic composition of claim 1, wherein the amount of FVIIa is from about 0.2 mg to about 2.0 mg.

13. A 12. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal jellemezve, hogy az FVIIa mennyisége mintegy 0,9 - 1,1 mg.13. The hemostatic composition of claim 12, wherein the amount of FVIIa is from about 0.9 to about 1.1 mg.

14. Az 1. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal jellemezve, hogy fibrinolizist gátló faktort, mint aprotinint, E-amino-kapronsavat vagy tranexámsavat tartalmaz.14. The antihypertensive composition of claim 1, wherein the fibrinolysis inhibitor is selected from the group consisting of aprotinin, E-aminocaproic acid and tranexamic acid.

15. Az 1. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal jellemezve, hogy stabilizátort is tartalmaz.15. The hemostatic composition of claim 1, further comprising a stabilizer.

16. A 15. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal jellemezve, hogy a stabilizátort természetes előfordulású aminosavak, mono- vagy diszacharidok, poliglikolok, glicerin, fehérjék vagy kétértékű fémionok vagy keverékeik képezik.The hemostatic composition according to claim 15, wherein the stabilizer is naturally occurring amino acids, mono- or disaccharides, polyglycols, glycerol, proteins, or divalent metal ions or mixtures thereof.

17. Az 1. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal j ellenezve, hogy egy vagy több pufferező, mint alkálifém-acetátokat, alkálifém-karbonátokat vagy -hidrogén-karbonátokat, alkálifém-szukcinátokat, imidazolt, tris-puffert vagy ikeranionos pufferező rendszert tartalmaz, vagy ezek keverékei alkotják.The hemostatic composition according to claim 1, wherein it contains one or more buffering agents such as alkali metal acetates, alkali metal carbonates or bicarbonates, alkali metal succinates, imidazole, tris buffer or a twin anionic buffer system, or mixtures of these.

18. Az 1. igénypont szerinti vérzéscsillapító készítmény, azzal jellemezve, hogy egy vagy több mikrobaellenes vagy baktériumölő' szert, mint antibiotikumot, szulfonamidot, gombaellenes szert, vírusellenes vegyűletet és tartósítószereket tartalmaz.The hemostatic composition according to claim 1, characterized in that it contains one or more antimicrobial or bactericidal agents such as antibiotics, sulfonamides, antifungal agents, antiviral compounds and preservatives.

19. Eljárás hemosztázis létrehozására a vérzó' seb helyén, azzal jellemezve, hogy a vérzó' seb helyén más véralvadási faktoroktól mentes és hemosztatikus hatás kifejtéséhez önmagában is eléggé aktív Vlla faktort alkalmazunk olyan biológiailag összeegyeztethető' hordozóval együtt, amely lehetővé teszi, hogy az FVIIa a vérző sebbel érintkezésben maradjon.19. A method of generating haemostasis at the site of a bleeding wound, wherein, at the site of the bleeding wound, a factor VIIa sufficiently active alone is used to exert a haemostatic effect and is compatible with a biocompatible carrier that allows FVIIa to stay in contact with bleeding wounds.

20. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal j ellenezve, hogy a biológiailag összeegyeztethető hordozó gél vagy paszta.20. The method of claim 19, wherein the biocompatible carrier is a gel or paste.

21. A 20. igénypont szerinti eljárás, azzal j ellemezve, hogy a gél vagy paszta viszkozitása a mintegy 0,2 - 30 Pa«s tartományba esik.21. The method of claim 20, wherein the gel or paste has a viscosity in the range of about 0.2 to about 30 Pa.

22. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal j ellemezve, hogy a biológiailag összeegyeztethető hordozó szilárd halmazállapotú.22. The method of claim 19, wherein the biocompatible carrier is a solid.

23. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jel 1 e m e z v e , hogy a biológiailag összeegyeztethető hordozót természetes makromolekulák, kémiailag módosított természetes molekulák, szintetikus polimerek, természetes vagy szintetikus rostok vagy ezek keverékei képezik.23. The method of claim 19, wherein the biocompatible carrier comprises natural macromolecules, chemically modified natural molecules, synthetic polymers, natural or synthetic fibers, or mixtures thereof.

• · ·• · ·

24. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal j e 1-24. The method of claim 19, wherein

1 e m e ζ v e , hogy a biológiailag összeegyeztethető hordozót poliszacharidok vagy fehérjék vagy ezek keverékei alkotják.It is understood that the biocompatible carrier consists of polysaccharides or proteins or mixtures thereof.

25. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a biológiailag összeegyeztethető hordozó szemcse, por, szivacs, film, tapasz, sebészeti kötszer vagy pólya.25. The method of claim 19, wherein the biocompatible carrier is a granule, powder, sponge, film, patch, surgical dressing, or bandage.

26. A 25. igénypont szerinti eljárás, azzal j e 1-26. The method of claim 25, wherein

1 e m e ζ v e , hogy a biológiailag elfogadható hordozót módosított cellulóz, kollagén, zselatin vagy természetes vagy szintetikus rostok alkotják.It is understood that the biologically acceptable carrier is modified cellulose, collagen, gelatin or natural or synthetic fibers.

27. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a Vlla faktor a biológiailag összeegyeztethető hordozóhoz az FVIIa és a biológiailag összeegyeztethető hordozó közötti elektrosztatikus kölcsönhatás utján rögzül, vagy a Vlla faktort kovalens kötés kapcsolja a biológiailag összeegyeztethető hordozóhoz.27. The method of claim 19, wherein the factor VIIa is attached to the biocompatible carrier by electrostatic interaction between FVIIa and the biocompatible carrier, or covalently linked to the biocompatible carrier.

28. A 27. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a Vlla faktor kémiai térhálósitó reagensek, mint bifunkciós N-hidroxi-szukcinimid-észterek vagy más bifunkciós kémiai térhálósitó reagensek utján kovalensen kötődik a biológiailag összeegyeztethető hordozóhoz.28. The method of claim 27, wherein factor VIIa is covalently bound to a biocompatible carrier by chemical crosslinking agents such as bifunctional N-hydroxysuccinimide esters or other bifunctional chemical crosslinking reagents.

29. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az FVIIa a biológiailag összeegyeztethető hordozóhoz fizikai utón, mint abszorpcióval, diszperzióval vagy adszorpcióval kötó'dik.29. The method of claim 19, wherein the FVIIa binds to the biocompatible carrier by physical means such as absorption, dispersion, or adsorption.

• · · · · ·9 * *·4 ^Λ ··· • 9 9 9 9· «·*·«« « ·· ·• · · · · · 9 * * · 4 ^Λ ··· • 9 9 9 9 · «· * ·« «« ·· ·

30. A 19. igénypont szerinti eljárás, azzal jel- lemezve, hogy az FVIIa mennyisége mintegy 0,2 - 2,0 mg.30. The method of claim 19, wherein the amount of FVIIa is from about 0.2 mg to about 2.0 mg.

31. A 30. igénypont szerinti eljárás, azzal j e 1- hogy az FVIIa mennyisége mintegy 0,9 - 1,1 mg.31. The method of claim 30, wherein the amount of FVIIa is from about 0.9 to about 1.1 mg.