HUT62197A

HUT62197A - Process for producing pharmaceutical compositions comprising fibroblast growth factor for preventing and treating viral infections

Info

Publication number: HUT62197A
Application number: HU913022A
Authority: HU
Inventors: Maria Antonietta Verini; Domenico Ungheri; Carlo Battistini; Paolo Carminati; Guy Mazue
Original assignee: Erba Carlo Spa
Priority date: 1989-12-22
Filing date: 1990-12-18
Publication date: 1993-04-28
Also published as: JPH04504581A; AU6970491A; IT8922804A0; ZA9010337B; IL96667A0; CA2047203A1; IT1237795B; WO1991009610A1; EP0460161A1; AU632890B2; IE904593A1; HU913022D0

Abstract

This invention refers to fibroblast growth factors useful in the prevention and treatment of viral infections caused by enveloped viruses such as, for example, type 2 herpes simplex virus (HSV2), human respiratory syncytial virus (HRSV), Semliki Forest virus (SFV), the virus responsible for the acquired immuno deficiency syndrome (HIV) and the virus responsible for the Moloney Sarcoma (MSV).

Description

A találmány tárgya eljárás fibroblaszt növekedési faktorokat (FGF) tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítására a burkolatos vírusként ismert vírusok által okozott vírusfertőzések megelőzésére és kezelésére; az ilyen vírusok közé értjük pl. az alfa típusú herpeszvírusokat, pl. a 2. típusú Herpes simplex vírust (HSV2) és a herpesz Varicella zostert, a béta vagy gamma típusú herpeszvírusokat, pl. citomegalovírust, az ortomixovírusokat, pl. humán légzőrendszeri szincitiális vírust (HRSV), a trópusi vírusokat, amelyek felelősek a bőrkiütéses lázért és/vagy az enkefalitiszért, pl. a Semliki Forest vírust (SFV), vagy felelősek más trópusi betegségekért, pl. a vírusok Alfa, Flavi vagy Arena csoportjába tartozó vírusokat, a retrovírusokat, pl. a szerzett immunhiány szindrómáért felelős HÍV vírust, és azt a vírust, amely a Moloney szarkómáért felelős (MSV).The present invention relates to a process for the preparation of a pharmaceutical composition comprising fibroblast growth factors (FGF) for the prevention and treatment of viral infections caused by viruses known as enveloped viruses; such viruses include e.g. alpha-type herpesviruses, e.g. Herpes simplex virus type 2 (HSV2) and herpes Varicella zoster, beta or gamma herpesviruses, e.g. cytomegalovirus, orthomixoviruses, e.g. human respiratory syncytial virus (HRSV), tropical viruses responsible for skin rash fever and / or encephalitis, e.g. Semliki Forest Virus (SFV), or are responsible for other tropical diseases, e.g. viruses belonging to the Alpha, Flavi or Arena group of viruses, retroviruses, e.g. the HIV virus responsible for acquired immune deficiency syndrome and the virus responsible for Moloney sarcoma (MSV).

Bár eddig már sok erőfeszítést tettek, hogy harcoljanak a fentebb említett vírusok által okozott fertőzések, különösen pl. HSV£ által okozott fertőzések ellen, valóban hatásos gyógyszert ezekre eddig még nem azonosítottak.Although many efforts have been made so far to fight the infections caused by the above mentioned viruses, especially eg. A truly effective drug against HSV £ infections has not yet been identified.

A fibroblaszt növekedési faktorok pl. a humán és szarvasmarha bázisos fibroblaszt növekedési faktor (bFGF) és a humán és szarvasmarha savas fibroblaszt növekedési faktor (aFGF).Fibroblast growth factors e.g. human and bovine basic fibroblast growth factor (bFGF); and human and bovine acidic fibroblast growth factor (aFGF).

Az említett faktorokról ismeretes, hogy erőteljes mitogének nagyon sokféle, különböző sejtre, beleértve a fibrob1asztokat és véredény hámsejteket. Említést tettek már ezek angi1These factors are known to be potent mitogens on a wide variety of different cells, including fibroblasts and vascular epithelial cells. They have already been mentioned by angi1

ogenikus hatásáról, pontosabban ezek burjánzáskeltő hatásáról a véredények hámsejtjeire, valamint ezek felhasználásáról sebek behegesztésére és szövetek regenerálására, ide értve a csont- és idegszöveteket is.and their use in the proliferation of epithelial cells in blood vessels, and their use in welding wounds and regenerating tissues, including bone and nerve tissues.

Kaner és munkatársai /Science 248, 1410-1413 (1990)/ nemrégiben leírták a fibroblaszt növekedési faktorok és analógjaik aktivitását 1 típusú Herpes simplexvírusra (HSV₁), úgy vélve, hogy ez az aktivitás nagy mértékben fajlagos, mert csak a HSV^ típusú vírusra találták meg ezt az aktivitást.Kaner et al., Science 248, 1410-1413 (1990), have recently described the activity of fibroblast growth factors and their analogs against Herpes simplex virus type 1 (HSV ₁ ), believing that this activity is highly specific because it is only against HSV ^ type virus they found this activity.

A növekedési faktor kötődése fajlagos celluláris receptoraihoz megakadályozhatja, hogy a vírusok receptoraikhoz kötődjenek, amelyek pedig arra tennék képessé ezeket, hogy interna1izá1 ódj anak.Binding of growth factor to its specific cellular receptors can prevent viruses from binding to their receptors, which in turn would allow them to become internalized.

Mivel már beszámoltak arról, hogy a HSV^ és HSV^ receptorok eltérőek /Vahlne A. és munkatársai: J. Gén. Virology 44, 217-225 (1979)/, nem jósolható meg, vajon a HSV₁ típusú vírusra a növekedési faktor által gyakorolt vírusellenes tevékenység kiterjed-e a HSV£ típusú vírusokra is. Ezt igazolja az a tény is, hogy egy gyógyszer különböző módon hathat HSV^-re és HSí^-re /Langeland N. és munkatársai: Biochem. Biophys. Rés. Comm. 141, 198-203 (1986)/.Since it has been reported that the HSV ^ and HSV ^ receptors are different / A. Vahlne et al., J. Gene. Virology 44, 217-225 (1979) /, it is not predictable whether the growth factor antiviral activity of HSV type ₁ virus extends to HSV E1 viruses. This is also evidenced by the fact that a drug can act in different ways on HSV1 and HS1 / Langeland, N. et al., Biochem. Biophys. Gap. Comm. 141: 198-203 (1986).

Most arra jöttünk rá, hogy a fibroblaszt növekedési faktorok (FGF) és analógjaik képesek megakadályozni bizonyos vírusok növekedését és fertőzőképességét.We have now discovered that fibroblast growth factors (FGFs) and their analogues are capable of inhibiting the growth and infectivity of certain viruses.

A jelen találmány tárgya eljárás fibroblaszt növekedési ·· ·· ···· ·· · ····· · « · • ·· ··· · · · · • · · ·· ····· ···· ·· · · · ·· · faktort (FGF) tartalmazó gyógyszerkészítmény előállítására burkolatos vírusok által okozott vírusfertőzések megelőzésére és kezelésére, az ilyen vírusok közé értjük pl. az alfa típusú herpeszvírusokat, pl. a 2. típusú Herpes simplex vírust (HSV₂), és a herpesz Varicella zostert, a béta vagy gamma típusú herpeszvírusokat, pl. citomegalovírust, az ortomixovírusokat, pl. influenza vírust, vagy paramixovírusokat, pl. humán légzőrendszeri szincitiális vírust (HRSV), a trópusi vírusokat, amelyek felelősek a bőrkiütéses lázért és/vagy az enkefalitíszért, pl. a Semliki Forest vírust (SFV), vagy felelősek más trópusi betegségekért, pl. a vírusok Alfa, Flavi vagy Aréna csoportjába tartozó vírusokat, a rétrovírusokat, pl. a szerzett immunhiány szindrómáért felelős HÍV vírust, és azt a vírust, amely a Moloney szarkómáért felelős (MSV).The present invention relates to a method for the growth of fibroblasts, such as fibroblast growth. For the preparation of a pharmaceutical composition containing FGF (FGF) for the prophylaxis and treatment of viral infections caused by enveloped viruses. alpha-type herpesviruses, e.g. herpes simplex virus type 2 (HSV ₂ ); and herpes varicella zoster, herpes viruses beta or gamma, e.g. cytomegalovirus, orthomixoviruses, e.g. influenza virus or paramixoviruses, e.g. human respiratory syncytial virus (HRSV), tropical viruses responsible for skin rash fever and / or encephalitis, e.g. Semliki Forest Virus (SFV), or are responsible for other tropical diseases, e.g. viruses belonging to the alpha, flavi or arena group of viruses, retroviruses, e.g. the HIV virus responsible for the acquired immune deficiency syndrome and the virus responsible for Moloney sarcoma (MSV).

Jó példák azokra a vírusokra, amelyekre a fibroblaszt növekedési faktorokat a jelen találmány szerint kipróbálták és hatékonynak találták pl. a 2. típusú Herpes simplex vírus (HSV₂), a humán légzőrendszeri szincitiális vírus (HRSV), a Semliki Forest vírus (SFV), a szerzett immunhiány szindrómáért felelős vírus (HÍV) és a Moloney szarkómáért felelős vírus (MSV).Good examples of viruses for which fibroblast growth factors have been tested and found to be effective according to the present invention are e.g. Herpes simplex virus type 2 (HSV ₂ ), human respiratory syncytial virus (HRSV), Semliki Forest virus (SFV), acquired immune deficiency syndrome (HVV), and Moloney sarcoma virus (MSV).

A jelen találmány szerinti fibroblaszt növekedési faktor (FGF) lehet vagy bázisos FGF (bFGF) (humán vagy szarvasmarha), vagy savas FGF (aFGF) (humán vagy szarvasmarha), vagy lehet a fentebb említett bFGF vagy a FGF valamely analógja.The fibroblast growth factor (FGF) of the present invention may be either basic FGF (bFGF) (human or bovine) or acidic FGF (aFGF) (human or bovine), or an analog of the aforementioned bFGF or FGF.

A fentebb említett növekedési faktorok, nevezetesen a humán és szarvasmarha bFGF és humán és szarvasmarha aFGF ismert faktorok, amelyeket pl. a PCT W086/07955 és PCT W087/01728 számú szabadalmi közrebocsátási iratokban, a 226 481 , 237 966 és 259 953 számú európai szabadalmi közrebocsátási iratokban, valamint különböző tudományos közleményekben írtak le; az említett tudományos közlemények között találjuk pl. az alábbiakat:The aforementioned growth factors, namely human and bovine bFGF and human and bovine aFGF, are known factors, e.g. PCT WO86 / 07955 and PCT WO87 / 01728; European Patent Specifications 226,481; 237,966; and 259,953; and various scientific publications; these scientific publications include e.g. the followings:

Science 233, 565-568 ( 1986. augusztus 1), EMBO Journal 5^ (10), 2523-2528 (1986), Biochemical and Biophysical Rés. Communications 140 (3), 874-880 (1980), Biochemical and Biophysical Rés. Communications, 133 (2), 554-562 (1985), Science 230, 1385- 1 388 ( 1985. december 20.).Science 233, 565-568 (1 August 1986), EMBO Journal 5 (10), 2523-2528 (1986), Biochemical and Biophysical Cell. Communications 140 (3): 874-880 (1980), Biochemical and Biophysical Cell. Communications, 133 (2), 554-562 (1985), Science 230, 1385-1388 (December 20, 1985).

Az FGF faktorok meghatározására alkalmas nomenklatúra amelyre a jelen találmányi leírásban utalunk, a Schroder és Lubke által megadott nomenklatúra: The Peptides, Academic Press (kiadó) (1965), ahol a hagyományos megjelenítés szerint a szabad alfa-aminocsoport az N-terminá1isná1 van a bal oldalon, míg az alfa-karboxicsoporttal bíró gyök a C-terminá1isná1 a jobb oldalon van.The nomenclature for the determination of FGF factors referred to in the present specification is the nomenclature of Schroder and Lubke, The Peptides, Academic Press (ed.) (1965), whereby the free alpha amino group is conventionally shown to be the left terminal. and the alpha-carboxy radical at the C-terminus is to the right.

így pl. a humán bFGF 146 aminosavval bíró polipeptid, tso e.g. a polypeptide having 146 amino acids of human bFGF, t

amelynek szekvenciáját az alábbiakban mutatjuk be:whose sequence is shown below:

1010

Pro Pro Alá Leu Down Leu Pro 20 Pro 20 Glu Asp Gly Gly Glu Asp Gly Gly Ser Ser Gly Gly Alá Phe Al Phe Pro Pro Pro 30 Pro 30 Gly Gly His His Phe Phe Lys Lys Asp asp Pro Pro Lys Lys Arg Arg Leu Leu Tyr Tyr Cys Cys Lys Lys Asn Asn Gly Gly Gly Gly Phe Phe Phe Phe Leu Leu 40 40 Arg Arg Ile Ile His His Pro Pro Asp asp Gly Gly Arg Arg Val With Asp asp Gly Gly Val With Arg Arg Glu Glu Lys Lys Ser Ser Asp asp 50 50 60 60

Pro His Ile Lys Leu Gin Leu Gin Alá Glu Glu Arg Gly Val Val Ser ·· · · ··· · ·· « • · · ·· · ·· • ·· ··· · ··· • · · ·· ····· • · · · · · · · · ·· ·Pro His Ile Lys Leu Gin Leu Gin Alá Glu Glu Arg Gly Val Val Ser ······················································································ ····· · · · · · · · · · ·

8080

He Lys They Lys Gly Val Gly Val Cys Alá Cys Alá Asn Arg Tyr Asn Arg Tyr Leu Alá Met 90 Leu Alá Met 90 Lys Glu Asp Gly Lys Glu Asp Gly Arg Arg Leu Leu Leu Leu Alá below Ser Ser Lys Lys Cys Cys Val With Thr Thr Asp asp Glu Glu Cys Cys Phe Phe Phe Phe Phe Phe Glu Glu 100 100 440 440 Arg Arg Leu Leu Glu Glu Ser Ser Asn Asn Asn Asn Tyr Tyr Asn Asn Thr Thr Tyr Tyr Arg Arg Ser Ser Arg Arg Lys Lys Tyr Tyr Thr Thr 120 120 Ser Ser Trp Trp Tyr Tyr Val With Alá below Leu Leu Lys Lys Arg Arg Thr Thr Gly Gly Gin Gin Tyr Tyr Lys Lys Leu Leu Gly Gly Ser Ser 130 130 140 140 Lys Lys Thr Thr Gly Gly Pro Pro Gly Gly Gin Gin Lys Lys Alá below He He Leu Leu Phe Phe Leu Leu Pro Pro Met Met Ser Ser Alá below

146146

Lys Ser.Lys Ser.

A szarvasmarha bFGF közel azonos szekvenciával bír, a különbség csak annyi, hogy a humán bFGF 112. helyénél levő Thr aminosav Ser-rel van helyettesítve a szarvasmarha bFGF-ben, és a humán bFGF 128. helyénél levő Ser aminosav Pro-val van helyettesítve a szarvasmarha bFGF-ben.Bovine bFGF has nearly the same sequence except that the Thr amino acid at position 112 of human bFGF is replaced by Ser in bovine bFGF and the amino acid Pro at position 128 of human bFGF is replaced by Ser. bovine bFGF.

A humán bFGF molekulája, valamint a szarvasmarha bFGF molekulája rendelkezhet N-terminális kiterjesztéssel, amely tartalmazhatja az alábbi M aminosav szekvenciájának egészét vagy részét:The human bFGF molecule as well as the bovine bFGF molecule may have an N-terminal extension that may contain all or part of the following M amino acid sequence:

(i) Gly-Thr-Met-Ala-Ala-Gly-Ser-Ue-Thr-Thr-Leu elsősorban pl. az alább^aminosavat:(i) Gly-Thr-Met-Ala-Ala-Gly-Ser-Ue-Thr-Thr-Leu is preferably, e.g. below ^ amino acids:

(ii) Met-Ala-Ala-Gly-Ser-Ile-Thr-Thr-Leu vagy az alábbi 8 aminosavat:(ii) Met-Ala-Ala-Gly-Ser-Ile-Thr-Thr-Leu or the following 8 amino acids:

(iíi) Ala-Ala-Gly-Ser-Ile-Thr-Thr-Leu vagy az alábbi 7 aminosavat:(iii) Ala-Ala-Gly-Ser-Ile-Thr-Thr-Leu or the following 7 amino acids:

(iv) Ala-Gly-Ser-Ile-Thr-Thr-Leu.(iv) Ala-Gly-Ser-Ile-Thr-Thr-Leu.

A humán és szarvasmarha bFGF-ból hiányozhat is egy vagy több aminosavgyök az N-terminálisról.Human and bovine bFGF may also lack one or more amino acid residues at the N-terminus.

A humán aFGF-nek 140 aminosava van, ez az alábbi szekvenciával bír:Human aFGF has 140 amino acids and has the following sequence:

¹ 10 ¹ 10

Phe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr CysPhe Asn Leu Pro Pro Gly Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr Cys

20 20 30 30 Ser Ser Asn Asn Gly Gly Gly Gly His His Phe Phe Leu Leu Arg Arg Ile Ile Leu Leu Pro Pro Asp asp Gly Gly Thr Thr Val With Asp asp 40 40 Giy Gly Thr Thr Arg Arg Asp asp Arg Arg Ser Ser Asp asp Gin Gin His His Ile Ile Gin Gin Leu Leu Gin Gin Leu Leu Ser Ser Alá below 50 50 60 60 Glu Glu Ser Ser Val With Gly Gly Glu Glu Val With Tyr Tyr Ile Ile Lys Lys Ser Ser Thr Thr Glu Glu Thr Thr Gly Gly Gin Gin Tyr Tyr 70 70 80 80 Leu Leu Ála Ala Met Met Asp asp Thr Thr Asp asp Gly Gly Leu Leu Leu Leu Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Gin. Gin. .Thr .Thr Pro Pro Asn Asn 90 90 Glu Glu Glu Glu Cys Cys Leu Leu Phe Phe Leu Leu Glu Glu Arg Arg Leu Leu Glu Glu Glu Glu Asn Asn His His Tyr Tyr Asn Asn Thr Thr 100 100 110 110 Tyr Tyr Ile Ile Ser Ser Lys Lys Lys Lys His His Alá below Glu Glu Lys Lys Asn Asn Trp Trp Phe Phe Val With Gly Gly Leu Leu Lys Lys 120 120 Lys Lys Asn Asn Gly Gly Ser Ser Cys Cys Lys Lys Arg Arg Gly Gly Pro Pro Arg Arg Thr Thr His His Tyr Tyr Gly Gly Gin Gin Lys Lys · · 130 130 140 140

Alá Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp.Alá Ile Leu Phe Leu Pro Leu Pro Val Ser Ser Asp.

«44 · 4««44 · 4«

4 44 4

4 · 4 4 • 4 44 · 4 4 • 4 4

4 4 4 4 • · • 4444 4 4 4 • · • 444

A szarvasmarha aFGF szintén 140 aminosavas polipeptid, amelynek aminosavszekvenciája az alábbi, és amelyet nagy mértékű homológia jellemez a humán aFGF-fel:Bovine aFGF is also a 140 amino acid polypeptide having the following amino acid sequence and a high degree of homology to human aFGF:

1010

Phe Phe Asn Leu Pro Leu 20 Asn Leu Pro Leu 20 Gly Gly Asn Tyr Asn Tyr Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr 30 Lys Lys Pro Lys Leu Leu Tyr 30 Cys Cys Ser Ser Asn Asn Gly Gly Gly Gly Tyr Tyr Phe Phe Leu Leu Arg Arg Ile Ile Leu Leu Pro Pro Asp asp Gly Gly Thr Thr Val With Asp asp 40 40 Gly Gly Thr Thr Lys Lys Asp asp Arg Arg Ser Ser Asp asp Gin Gin His His Ile Ile Gin Gin Leu Leu Gin Gin Lea Lea Cys Cys Alá below · · 50 50 50 50 - - Glu Glu Ser Ser Ile Ile Gly Gly Glu Glu Val With Tyr Tyr Ile Ile Lys Lys Ser Ser Thr Thr Glu Glu Thr Thr Gly Gly Gin Gin Phe Phe 70 70 80 80 Leu Leu Alá below Met Met Asp asp Thr Thr Asp asp Gly Gly Leu Leu Leu Leu Tyr Tyr Gly Gly Ser Ser Gin Gin Thr Thr Pro Pro Asn Asn 90 90 Glu Glu Glu Glu Cys Cys Leu Leu Phe Phe Leu Leu Glu Glu Arg Arg Leu Leu Glu Glu Glu Glu Asn Asn His His Tyr Tyr Asn Asn Thr Thr 100 100 110 110 Tyr Tyr Ile Ile Ser Ser Lys Lys Lys Lys His His Alá below Glu Glu Lys Lys His His Trp Trp Phe Phe Val With Gly Gly Leu Leu Lys Lys i i 120 120 Lys Lys Asn Asn Gly Gly Arg Arg Ser Ser Lys Lys Leu Leu Gly Gly Pro Pro Arg Arg Thr Thr His His Phe^ ^ Phe Gly Gly Gin Gin Lys Lys 130 130 140 140 Mind all a humán, human, mind a both a szarvasmarha cattle aFGF rendelkezhet bizonyos aFGF may have some

kiterjesztésekkel és kiiktatásokkal az N-terminá1isná1 hasonlóképpen, mint ahogyan ezt a bFGF molekuláknál leírtuk.extensions and deletions to the N-terminus in the same manner as described for bFGF molecules.

A jelen találmány szerinti fibroblaszt növekedési faktorok lehetnek amidálva is C-terminá1isukná1 .The fibroblast growth factors of the present invention may also be amidated to the C-terminus.

• · ·· ···· ·· · • · · · 9 · · « • ·· ··· · · · · • · · ·· ·«·«« «··· » ··· ·· ·· ························································································································ · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ·

A fentebb említett fibroblaszt növekedési faktorok analógja lehet pl. a teljes FGF molekula bármely fragmentuma, akár amidéit formában is, amely megtartja azt a képességet, hogy a receptorához kötődjék.An analog of the aforementioned fibroblast growth factors may be e.g. any fragment of the entire FGF molecule, even in its amidated form, that retains the ability to bind to its receptor.

Az ilyen fragmentumokra példákat írnak le a 246753 számú európai szabadalmi közzétételi iratban. Ezek főleg az alábbi aminosavszekvenciákból összeállított polipeptidek lehetnek:Examples of such fragments are described in European Patent Publication No. 246753. These may be, in particular, polypeptides composed of the following amino acid sequences:

mint a humán, mind a szarvasmarha bFGF 93.-120., 97.-120.,like human and bovine bFGF 93-120, 97-120,

106.-115. ,106th-115th .

106.-146. , és 107.-110.106th-146th , and 107-110.

aminosavszekvenciái , mind szabad, mind amidéit formában.amino acid sequences, both in free and in amide form.

A jelen találmány szerinti fibroblaszt növekedési faktorok analógja lehet valamely mutein is, amely a fentebb említett FGF polipeptidekből vagy analógjaikból - legyenek ezek akár amidéit, akár nem-amidált formában - származik egy vagy több aminosav helyettesítésével és/vagy kiiktatásával, és amely megtartja a növekedési faktor megfelelő tulajdonságait, elsősorban megfelelő képességét, hogy az FGF receptorhoz kötődjék. így pl. a 112. helyen levő aminosav lehet vagy Thr, vagy Ser, a 128. helyen levő aminosav lehet Ser vagy Pro, a 113. helyen levő aminosav lehet Alá vagy Ser, a 114. helyen levő aminosav lehet Met vagy Trp, és a 115. helyen levő aminosav lehet Phe vagy Tyr. Az FGF különböző formáinak, elsősorban a korábban hivatkozott, az N-terminál isnál különböző típusú kitérjesztésekke 1 vagy kiiktatásokkal bíró formáinak keverékeit szintén úgy tekintjük, hogy a jelen találmány keretein belül vannak. A fibroblaszt növekedési tAn analogue of the fibroblast growth factors of the present invention may also be a mutein derived from the aforementioned FGF polypeptides or analogs thereof, whether in amide or non-amidated form, by substitution and / or deletion of one or more amino acids and retaining the growth factor. and, in particular, its ability to bind to the FGF receptor. so e.g. the amino acid at position 112 may be either Thr or Ser, the amino acid at position 128 may be Ser or Pro, the amino acid at position 113 may be Al or Ser, the amino acid at position 114 may be Met or Trp, and the amino acid at position 115; The amino acid at position 2 is Phe or Tyr. Mixtures of different forms of FGF, in particular the aforesaid, other forms of extension or deletion other than the N-terminal, are also contemplated as being within the scope of the present invention. Fibroblast growth t

• · · · • · · ·*· · ··· • · · ·· ····· ···· ·* ··· ·· · faktor kifejezés tehát utal minden fentebb említett analógra és keverékre is.Thus, the term "factor" refers to all the above analogs and mixtures as well.

Amint korábban említettük, a jelen találmány szerint alkalmazott növekedési faktorok ismert faktorok, ennek megfelelően ismert eljárásokkal állíthatók elő, pl. rekombináns DNS technikával, elsősorban olyan eljárásokkal, amelyek hasonlóak a korábban már említett PCT WO 86/07595 és PCT W087/01728 számú PCT szabadalmi közrebocsátási iratokban és a 226181, 237966 és 259953 számú európai szabadalmi közrebocsátási iratokban leírt eljárásokhoz.As mentioned above, the growth factors used in the present invention are known factors and may accordingly be prepared by known methods, e.g. by recombinant DNA techniques, in particular methods similar to those described in PCT WO 86/07595 and PCT WO87 / 01728 and EP 226181, 237966 and 259953, mentioned above.

Ismert technikák alkalmazhatók ahhoz is, hogy FGF analógokat kapjunk, pl. olyan FGF fragmentumokat, amelyek a jelen találmányban alkalmazást nyerhetnek. Lehet használni pl. olyan eljárásokat, amelyek a fentebb említett 246753 számú európai szabadalmi közrebocsátási iratban és az ebben említett szabadalmi utalásokban vannak leírva, ilyen pl. az eljárás szilárd fázisú szintézis segítségével, amint ezt a JACS 85, 2149 (1963) irodalmi helyen leírják.Known techniques can also be used to obtain FGF analogs, e.g. FGF fragments which may be useful in the present invention. Can be used eg. processes described in the aforementioned European Patent Publication No. 246753 and the references cited therein, e.g. the process by solid phase synthesis as described in JACS 85, 2149 (1963).

A kémiai szintézis olyan fragmentumoknál előnyös, amelyeknek aminosav-1ánca rövid, pl. 40 aminosavnál kevesebbet tartalmaznak, míg az előállítás rekombináns DNS technikával akkor előnyös, ha pl. teljes hosszúságú natív FGF molekulákat vagy analógjaikat szándékozunk elkészíteni, amelyek pl. 40 aminosavnál többet tartalmaznak.Chemical synthesis is preferred for fragments having a short amino acid chain, e.g. They contain less than 40 amino acids, while production by recombinant DNA technology is advantageous if e.g. We intend to prepare full-length native FGF molecules or analogs thereof, e.g. They contain more than 40 amino acids.

Abból a célból, hogy a jelen találmány szerint bemutassuk aFor the purpose of presenting a

I • · » · • · · · · · · · • · a a a · a aaa a a a aa · · a · · aaaa aa aaa ·· a fibroblaszt növekedési faktorok vírusellenes aktivitását, vizsgálatokat hajtunk végre különböző típusokhoz és családokhoz tartozó, DNS és RNS természetű vírusokat alkalmazva. Példaként azokat a kísérleteket adjuk meg, amelyeket sokféle, jelen találmány szerinti fibroblaszt növekedési faktor aktivitásának bizonyítására végzünk HSV^,, SFV, HRSV, HÍV és MSV vírusok ellen. Ezekben a kísérletekben az alábbi törzseket használjuk: humán sima artéria izomsejtek diploid törzse (A617), epiteloid karcinóma heteroploid törzse (Hep 2), humán primer limfociták tenyészete, és Balb C egér primer fibroblasztok tenyészete.The antiviral activity of the fibroblast growth factors, DNA and RNA of various types and families are tested for the antiviral activity of the fibroblast growth factors. using viruses of a nature. By way of example, experiments are performed to demonstrate the activity of various fibroblast growth factors of the present invention against HSV1, SFV, HRSV, HIV and MSV. The strains used in these experiments were the diploid strain of human smooth artery muscle cells (A617), the heteroploid strain of epitheloid carcinoma (Hep 2), the culture of human primary lymphocytes, and the culture of Balb C mouse primary fibroblasts.

Az első két törzs azonos tűrőképességet mutat a Herpes simplex vírus 2. típúsú törzsével (HSV£) és a Semliki Forest vírussal (SFV) szemben, ezt megfigyelhetjük mind a 24 órára stabilizált egy-rétegben, mind a tripszinezésse 1 kapott sejtszuszpenziókban, mégpedig 96 üreges (szővet/tenyészet) lemezeken titrálva és megfigyelve a citopatikus hatás végpontokat (C EP ) .The first two strains show the same tolerance to Herpes simplex virus type 2 strain (HSV £) and Semliki Forest virus (SFV), both in monolayers stabilized for 24 hours and in 96 wells of trypsinized cell suspensions. (tissue / culture) plates and titrated for cytopathic effect endpoints (C EP).

Az A617 nem tűrőképes a humán légzőrendszeri szincitiális vírussal (HRSV) szemben, ezért csak a Hep 2 sejteket alkalmazhatjuk ebben a fertőzésben, akár egy-rétegben, akár szuszpenzióban. Az egy-rétegekke 1 végzett kísérletekben a vizsgálandó anyagok különböző koncentrációit inkubáljuk a tenyészközeg eltávolítása után a tenyészetekben, amelyek a 96 üregben nőttek.A617 is not tolerant to human respiratory syncytial virus (HRSV) and therefore only Hep 2 cells can be used in this infection, either in monolayers or in suspension. In monolayer experiments, different concentrations of test substances were incubated in cultures grown in 96 wells after removal of the culture medium.

órás, 37°C hőmérsékleten és 5% CO^-ben végzett inkubálás • · ····· ··· • ·· ··· · · · · • · · ·· ····· ···· ·· ··· · · · után 50-100 tarfoltképző egység (PFU) HSVz-t, vagy 50-100 50%-os fertőző egység (ID_5Q) SFV-t vagy HRSV-t adunk hozzá.hour incubation at 37 ° C and 5% CO 2 · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · After · ··· · · 50-100 plaque forming units (PFU) HSVz or 50-100 50% infectious units (ID _5Q ) SFV or HRSV are added.

Más kísérletekben a sejtszuszpenziót közvetlenül kezeljük a vizsgálandó anyagok különböző koncentrációival 96 üreges lemezeken.In other experiments, the cell suspension is directly treated with various concentrations of test substance in 96-well plates.

Két órás, 37°C·hőmérsék1eten és 5% C0₂-ben végzett inkubálás után fertőzést indukálunk, amint fentebb leírtuk.After incubation for two hours at 37 ° C and 5% CO ₂ , infection was induced as described above.

A CPE mértékét 24-96 órás inkubálási időtartam után határozzuk meg az alkalmazott vírus típusától függően olyan módon, hogy területeket jelölünk meg a friss készítményeknél, amikor fordított mikroszkóppal megfigyeljük (35-szörös nagyítás). A CPE csökkenésének százalékát a kezelt tenyészetben a fertőzött kontrol lókkal összehasonlítva átvisszük féllogaritmusos koordinátapapírra.After an incubation period of 24-96 hours, CPE is determined, depending on the type of virus used, by marking areas on fresh preparations when observed under a reverse microscope (35x magnification). The percentage of CPE decrease in the treated culture relative to the infected controls is transferred to semi-logarithmic coordinate paper.

Ugyanezeket a tenyészeteket azután lefagyasztjuk abból a célból, hogy a vírustartalmakat különböző kísérleti körülmények közt titrálhassuk (I.V. titrálás).The same cultures were then frozen for titration of the virus contents under different experimental conditions (I.V. titration).

A kriolizátumokat valamely standard technikával titráljuk, amely alkalmas arra, hogy a Leighton csövekben levő lemezeken nőtt Hep 2 összefolyó egy-rétegein a tarfoltokat meghatározzuk .The cryolysates are titrated by a standard technique suitable for the determination of plaques on single layers of Hep 2 confluent grown on plates in Leighton tubes.

Az I.V. titert PFU értékben adjuk meg különböző kísérleti körülmények között, és a kontrollok, valamint kezelt teI nyészetek közti különbségek szignifikancibját a Dunnett ·· · · ···· ·· · ·«··· ··· • ·· ··· · ··· • · · ·· ····· ···· · · · · · · · · vizsgálat szerint értékeljük (JASA, 1955. december, 1096-1121).The I.V. titer in PFU under different experimental conditions, and the significance of differences between controls and treated cultures were determined by Dunnett · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ··················································································· Added: - - - (JASA, December 1955, 1096-1121).

Az aktivitást HÍV vírusra humán perifériás limfociták primer tenyészetein vizsgáljuk, ahol a limfocitákat gradiens centrifugálással izoláljuk és mitogénekkel stimuláljuk.Activity against HIV virus is assayed in primary cultures of human peripheral lymphocytes, where lymphocytes are isolated by gradient centrifugation and stimulated with mitogens.

A fertőzést HÍV standard preparátummal végezzük, és a fertőzött tenyészeteket 4 napon át inkubáljuk a gyógyszer jelen létében.Infection was performed with HIV standard preparation and the infected cultures were incubated for 4 days in the presence of the drug.

Az eredmények értékelését úgy végezzük, hogy a fertőzéstől számított harmadik és negyedik napon mérjük P24 mag (core) vírusfehérje-mennyiségét (Elisa-val), és a szintetizált RNS teljes mennyiségét (nuk 1 einsavva 1 való molekuláris hibridizációs technikával) a kontrollal összehasonlítva.Results were evaluated by measuring the amount of P24 core viral protein (by Elisa) and total synthesized RNA (by nucleic acid 1 molecular hybridization technique) on the third and fourth days after infection compared to control.

Az aktivitást Moloney szarkóma vírusra (MSV) standard mennyiségű MSV vírussal fertőzött Balb C egerek embrionális fibrob1 ásztjainak primer tenyészetein vizsgáljuk. Az eredmények értékelésének alapja a transzformációs gócpontok csökkenése a kezelt tenyészetekben a kontroll tenyészetekkel összehason1ítva .Activity was assayed in primary cultures of embryonic fibroblast aesthetics of Balb C mice infected with a standard amount of MSV virus for Moloney Sarcoma Virus (MSV). The results are evaluated based on the reduction of the transformation foci in the treated cultures as compared to the control cultures.

A fentebb említett kísérletek eredményeit a mellékelt 1.-9. ábrákban adjuk meg.The results of the above-mentioned experiments are shown in the attached Figures 1-9. Figs.

Az ábrákkal kapcsolatban az alábbi magyarázatokat adjuk meg.The following explanations are given in connection with the figures.

········

Az FCE 26184 anyag (1. anyag) egy 153-154 aminosavból álló humán bFGF-et képvisel, pontosabban mintegy 50:50 arányú keverékét az alábbiaknak: a., egy 153 aminosavból álló molekula, amely a humán bFGF korábban bemutatott 146 aminosavas szekvenciáját tartalmazza, tartalmaz továbbá egy 7 aminosavból álló kitérjesztést, amelyet az előbbiekben már ismertettünk (ív) szekvencia néven, és b., egy 154 aminosavból álló molekula, amely a humán bFGF korábban bemutatott 146 aminosavas szekvenciáját tartalmazza, tartalmaz továbbá egy 8 aminosavból álló kitérjesztést, amelyet az előbbiekben már ismertettünk (iii) szekvencia néven.FCE 26184 (Substance 1) represents a human bFGF of 153-154 amino acids, more specifically, a 50:50 mixture of: a. A 153 amino acid molecule comprising the previously reported 146 amino acid sequence of human bFGF. , further comprising a 7 amino acid extension, previously described as the (arc) sequence, and b., a 154 amino acid molecule comprising the previously disclosed 146 amino acid sequence of human bFGF, further comprising an 8 amino acid extension, previously described as sequence (iii).

Ennek az anyagnak az előállítását a későbbiekben, a kiviteli példákban ismertetjük.The preparation of this material is described below in the Examples.

A 89-0925 anyag (2. anyag) egy 145 aminosavból álló humán bFGF-et képvisel, vagyis egy olyan vegyületet, amely a humán bFGF korábban bemutatott 146 aminosavas szekvenciáját tartalmazza, de az N -terminálisról hiányzik a Pro aminosav.Substance 89-0925 (Substance 2) represents a 145 amino acid human bFGF, i.e., a compound containing the previously disclosed 146 amino acid sequence of human bFGF but lacking the N-terminal Pro amino acid.

Ennek az anyagnak az elkészítéséhez azt a munkamenetet használhatjuk fel, amelyet a 363675 számú európai szabadalmi közrebocsátási irat ismertet.The preparation of this material can be carried out using the procedure described in European Patent Application 363675.

Az Amersham bovine-ként bemutatott anyag (3. anyag) egy kereskedelmi forgalomban levő, 146 aminosavból álló szarvasmarha rekombináns bFGF (az Amersham cég termék).The material presented as Amersham bovine (Material 3) is a commercially available 146 bovine recombinant bFGF (product of Amersham).

A (Serval) bovine-ként bemutatott anyag (3’. anyag) egy • · ·· ···· ·· · • · · ·· · ·· • ·· ··· · ··· • · · ·· · · · · ···· ·· ··· ·· · kereskedelmi forgalomban levő szarvasmarha bFGF, amelyet hipofízisből extraháltak (a Serva cég terméke).The material presented as (Serval) bovine (material 3 ') is a · · · · · · · ························································································································ · Commercial bovine bFGF extracted from the pituitary gland (product of Serva).

Az 1A. és 1B. ábrák az 1. anyag (folytonos vonal: — 0-) és1A. 1B and 1B. Figures 1 to 5 (solid line: - 0 -) and

2. anyag (szaggatott vonal: --O--) CPE-jének gátlási százalékát mutatják be HSV₂ (592. törzs) vírusfertőzésre, amelyet A617 sejtek (1A. ábra) illetve Hep#2 sejtek (1B. ábra) szuszpenziójában kapunk; a CPE csökkenés százalékos értékei az ordinátán, míg a bFGF koncentráció értékei az abszcisszán szerepelnek.Figure ₂ shows the percentage inhibition of CPE of substance 2 (dashed line: --O--) for HSV ₂ (strain 592) virus suspension obtained in a suspension of A617 cells (Figure 1A) and Hep # 2 cells (Figure 1B); the percentages of CPE decrease on the ordinate and bFGF concentrations on the abscissa.

A 2A. és 2B. ábrák az 1. anyag CPE-jének gátlási százalékát mutatják be HSV₂ (592. törzs) vírusfertőzésre, amelyet A617 sejtek 2A. ábra) illetve Hep$2 sejtek (2B.ábra) sejtszuszpenziójában (szaggatott vonal --O--) és — párhuzamosan egy-rétegén (folyamatos vonal -Cl—) kapunk; a CPE csökkenés százalékos értékei az ordinátán, míg a bFGF koncentráció értékei az abszcisszán szerepelnek.2A. 2B and 2B. Figures 2A-4A show the percentage inhibition of CPE of substance 1 for HSV ₂ (strain 592) infection by A617 cells in Figure 2A. and) in a cell suspension of Hep $ 2 cells (Figure 2B) (dashed line - O--) and - in parallel on a single layer (continuous line -Cl--); the percentages of CPE decrease on the ordinate and bFGF concentrations on the abscissa.

A 3A. és 3B. ábrák a 2. anyag CPE-jének gátlási százalékát mutatják be HSV₂ (592. törzs) vírusfertőzésre, amelyet A617 sejtek (3A. ábra) illetve Hep+ 2 sejtek (3B. ábra) sejtszuszpenziójában (szaggatott vonal -- 0 --) és— párhuzamosan - egy-rétegén (folyamatos vonal -D—) kapunk; a CPE csökkenés százalékos értékei az ordinátán, míg a bFGF koncentráció értékei az abszcisszán szerepelnek.3A. 3B and 3B. Figures 3A-4B show the percentage inhibition of CPE of substance 2 for HSV ₂ (strain 592) virus in a cell suspension of A617 cells (Figure 3A) and Hep + 2 cells (Figure 3B) (dashed line - 0 -) and - in parallel, one-layer (continuous line -D—) is obtained; the percentages of CPE decrease on the ordinate and bFGF concentrations on the abscissa.

A 4. ábra az 1. anyag (középső hisztogram) és a 2. anyag (jobboldali hisztogram) aktivitását mutatja be a kontrollal (baloldali hisztogram) összehasonlítva, a HSV₂ (592. törzs) ♦ · ···· ·· · • ·· ·· « ·· • ·· φ Φ V · Φ Φ · • · · φ φ φ φ φ φ ···· ·· ··· ·· φFigure 4 shows the activity of substance 1 (center histogram) and substance 2 (right histogram) versus control (left histogram), HSV ₂ (strain 592) ♦ · ···· ·· · ···········································································································•

- ;-;

fertőző vírus termelődésének csökkenése alapján becsülve Hep 2=^sejttenyész etekben; a hisztogramokon az ordinátán a különböző kísérleti csoportokban talált vírus-index van megadva 10⁴ pfu/ml-ben, míg az abszcisszán a bFGF koncentráció értékek vannak megadva.estimated from a decrease in the production of infectious virus in Hep 2 = cells in culture; the histograms show the viral index of the ordinate in the various experimental groups at 10 ⁴ pfu / ml, while the abscissa shows the bFGF concentration values.

Az 5. ábra az 1. anyag (—®— vonal), 2. anyag (--O-- vonal) és 3’. anyag (-Δ— vonal) CPE-jének gátlási százalékát mutatja be HRSV vírusfertőzésre, amelyet Hep 2 sejtek egy-rétegén kapunk; a CPE csökkenés százalékos értékei az ordinátán, míg a bFGF koncentráció értékei az abszcisszán szerepelnek.Figure 5 is Material 1 (—® line), Material 2 (—O— line), and 3 '. shows the percent inhibition of CPE of substance (-Δ- line) for HRSV virus infection obtained on a monolayer of Hep 2 cells; the percentages of CPE decrease on the ordinate and bFGF concentrations on the abscissa.

A 6. ábra az 1. anyag vonal), 2. anyag (-- 0 -- vonal) és 3’. anyag (--Δ -- vonal) CPE-jének gátlási százalékát mutatja be SFV vírusfertőzésre, amelyet A617 sejtek egy-rétegén kapunk; a CPE csökkenés százalékos értékei az ordinátán, míg a bFGF koncentráció értékei az abszcisszán szerepelnek.Figure 6 is Material 1), Material 2 (- 0 - line) and 3 '. shows the percent inhibition of CPE of substance (--Δ - line) for SFV virus infection obtained on a monolayer of A617 cells; the percentages of CPE decrease on the ordinate and bFGF concentrations on the abscissa.

A 7. ábra az ordinátán az 1. anyag százalékos gátlását mutatja be a P24 vírusfehérje szintézisre οι harmadik napon (fehér területek) és a negyedik napon (pontozott területek) a HÍV vírussal végzett fertőzés időpontjától számítva; az abszcisszán a bFGF koncentráció szerepel.Figure 7 shows the percent inhibition of substance 1 on the ordinate for P24 viral protein synthesis on day three (white areas) and day four (dotted areas) from the time of infection with HIV; the abscissa contains the concentration of bFGF.

A 8. ábra az ordinátán az 1. anyag százalékos gátlását mutatja be a vírus RNS szintézisre a harmadik napon (fehér területek) és a negyedik napon (pontozott területek) a HÍV • · · · • · · • ·· ··· · ··· • · · ·· ···· ···· ·· ··· ·· · vírussal végzett fertőzés időpontjától számítva; az abszcisszán a bFGF koncentráció szerepel.Figure 8 shows the percent inhibition of viral RNA synthesis on ordinate on day three (white areas) and day four (dotted areas) in the HIV. ··· · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · the abscissa contains the concentration of bFGF.

A 9. ábra az 1. vegyület százalékos gátlását mutatja be az MSV (Moloney szarkóma vírus) által indukált transzformációs gócpontokra; az ordinátán szerepelnek a százalékos gátlási értékek, míg az abszcisszán szerepelnek a bFGF koncentráció értékek.Figure 9 shows the percentage inhibition of Compound 1 at MSV (Moloney Sarcoma Virus) -induced transformation foci; the ordinate shows the percentage inhibition values and the abscissa the bFGF concentration values.

A jelen találmány szerinti növekedési faktorokat egy vagy több említett faktort tartalmazó gyógyászati kompozíció formájában adhatjuk be; ilyen pl. egy olyan kompozíció, amely aktív anyagként a nevezett növekedési faktorokat vagy gyógyászatilag elfogadható sóikat tartalmazza egy vagy több segédanyaggal, pl. gyógyászatilag elfogadható hordozókkal és/vagy hígítókkal és/vagy kötőanyaggal együtt.The growth factors of the present invention may be administered in the form of a pharmaceutical composition comprising one or more of these factors; such as a composition comprising, as active ingredient, said growth factors or pharmaceutically acceptable salts thereof with one or more excipients, e.g. pharmaceutically acceptable carriers and / or diluents and / or excipients.

A gyógyászatilag elfogadható sók gyógyászatilag elfogadható szervetlen savak, pl. sósav, bróm-hidrogén, kénsav vagy foszforsav, vagy gyógyászatilag elfogadható szerves savak, pl. ecetsav, citromsav, m&leinsav, almasav, borostyánkősav, aszkorbinsav vagy borkősav sói lehetnek.Pharmaceutically acceptable salts are pharmaceutically acceptable inorganic acids, e.g. hydrochloric acid, hydrobromic acid, sulfuric acid or phosphoric acid; or pharmaceutically acceptable organic acids, e.g. salts of acetic acid, citric acid, m & leic acid, malic acid, succinic acid, ascorbic acid or tartaric acid.

Ezeket be lehet adni helyileg, vagy parenterális, intravénás, intratekális vagy orális úton.They may be administered topically or parenterally, intravenously, intrathecally or orally.

A beadásnak különösen előnyös útja a helyileg végzett beadás, amelyet pl. HS)^ által okozott genitális fertőzés vagy HRSV által okozott légzőrendszeri fertőzések kezelésében • · · · • ·· ·· · ·· • ·· ··♦ · ··· • · · ·· · · · · · ···· ·· ··· ·· · ·· · · alkalmazhatunk.A particularly preferred route of administration is by topical administration, e.g. HS) ^ for the treatment of genital infection or respiratory tract infections caused by HRSV • · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ·

A helyi beadáshoz alkalmas kompozíciók lehetnek pl. krémek, kenőcsök, balzsamok, vagy borogatóvizek dermato1ógiai kezeléshez', hüvelykúpok vagy pesszáriumok a hüvelyi fertőzések kezeléséhez; szemcseppek szemfertőzések kezeléséhez; vagy aeroszolok a légzési rendszer fertőzéseinek kezeléséhez, különösen pl. HRSV fertőzések kezeléséhez újszülöttekben.Compositions suitable for topical administration may be, e.g. creams, ointments, balms or lotions for dermatological treatment, suppositories or pessaries for the treatment of vaginal infections; eye drops for treating eye infections; or aerosols for the treatment of respiratory tract infections, in particular e.g. Treatment of HRSV infections in newborns.

Ezeket a készítményeket ismert technikák szerint készíthetjük el, így pl. a krémeket, kenőcsöket, balzsamokat vagy borogatóvizeket az aktív vegyület összekeverésével kaphatjuk meg hagyományos olajos vagy emulgeáló segédanyagokkal.These compositions may be prepared according to known techniques, e.g. creams, ointments, balms or lotions can be obtained by mixing the active compound with conventional oily or emulsifying excipients.

Az intravénás vagy intratekális beadáshoz alkalmas kompozíciók lehetnek pl. steril vizes oldatok vagy steril izotóniás, fiziológiás sóoldatok.Compositions suitable for intravenous or intrathecal administration include sterile aqueous solutions or sterile isotonic, physiological saline solutions.

A parenterális beadáshoz alkalmas kompozíció lehet pl. szuszpenzió vagy oldat, amely az aktív anyagot és egy gyógyászatilag elfogadható hordozót, pl. steril vizet, olívaolajat, glikolokat, mint propilén—g 1 ikolt tartalmaz, és ha szükséges, tartalmaz megfelelő mennyiségű 1idókain-hidrok1or idót i s.A composition suitable for parenteral administration may be, e.g. suspension or solution containing the active ingredient and a pharmaceutically acceptable carrier, e.g. sterile water, olive oil, glycols such as propylene-g 1 icol and, if necessary, an appropriate amount of lidocaine hydrochloride.

Az orális beadáshoz alkalmas kiszerelés lehet pl. gyomor- és bé1-rézisztens réteggel borított tabletta vagy kapszula, amelyben az aktív anyag el van keverve pl. hígítókkal, mint laktózzal, glükózzal és hasonlókkal; csusztatóanyagokka 1 , mint kovafölddel, talkummal, sztearinsavva1 és hasonlókkal;Formulations suitable for oral administration may be presented, e.g. a tablet or capsule coated with a gastric and enteric layer in which the active ingredient is mixed with e.g. diluents such as lactose, glucose and the like; lubricants 1 such as diatomaceous earth, talc, stearic acid1 and the like;

• · ·· ···· · 9 ····« · * · • · 9 9 99 9 9 99• · ·· ···· · 9 ···· «· * · • 9 9 99 9 9 99

9 9 9 9 999999 9 9 9 99999

9999 99 99 9 9 99 kötőanyagokkal, mint keményítővel; szétesést elősegítő anyagokkal, mint alginsavval és a 1 g i nátokka 1’, és más segédanyagokkal, amelyeket általában alkalmaznak ilyen típusú ki szerelésekben.9999 99 99 9 9 99 binders such as starches; disintegrants such as alginic acid and 1 g of naphtha 1 ', and other excipients commonly used in formulations of this type.

A jelen találmány szerinti gyógyászati kompozíciókat általában ismert technikákkal és a galenusi készítmények területében általánosan használt munkamenetekkel állíthatjuk elő.The pharmaceutical compositions of the present invention are generally prepared by known techniques and procedures commonly used in the field of galenic formulations.

Az előnyös dózis függ a kezelendő beteg betegségi állapotától és kondíciójától, az alkalmazott kiszerelés típusától, és a kezelés időtartamának hosszúságától.The preferred dosage will depend on the disease state and condition of the patient being treated, the type of formulation used, and the duration of the treatment.

így pl. helyi beadásoknál, pl. krémek, kenőcsök, balzsamok, borogatóvizek, hüvelypesszárumok, hüvely-golyócskák és szemcseppek beadásánál a jelen találmány szerinti növekedési faktorokat 1 mikromól és 1 millimól közti koncentrációtartományban alkalmazhatjuk.so e.g. for topical administration, e.g. For administration of creams, ointments, balms, lotions, vaginal lotions, vaginal balls and eye drops, the growth factors of the present invention may be used in a concentration range of 1 micromolar to 1 millimole.

A jelen találmány szerinti növekedési faktorok beadása hasznos lehet mind a vírus elterjedésének megakadályozásában, mind a már fertőzött betegek kezelésében.Administration of the growth factors of the present invention may be useful in both preventing the spread of the virus and treating already infected patients.

Amikor kezelést igénylő sérülések is vannak, a bFGF és a FGF különösen kívánatos ezen faktorok ismert behegesztési és szövet-helyreállító tulajdonságai miatt.When there are injuries requiring treatment, bFGF and FGF are particularly desirable because of the known welding and tissue repair properties of these factors.

Az alábbi kiviteli példák nem korlátozó jelleggel bemutatják ··· ·« ·« • · · · • ·· • · · ···· «· ··« ·· « a jelen találmány szerinti FGF növekedési faktorok és az ezeket tartalmazó gyógyszerkészítmények előállítási eljárásait.The following embodiments illustrate, but are not limited to, the preparation of FGF growth factors of the present invention and pharmaceutical compositions containing them. procedures.

1. példa b-FGF előállítása: FCE 26185Example 1 Preparation of b-FGF: FCE 26185

A b-FGF-hez tartozó szintetikus szekvencia és az ezt a szekvenciát hordozó kifejező plazmid megalkotását az EP-A-363675 számú európai szabadalmi közrebocsátási iratban leírt munkamenet szerint hajtjuk végre. A fermentációs és tisztítási folyamatot az alábbiak szerint végezzük.The construction of the synthetic sequence for b-FGF and the expression plasmid carrying this sequence is carried out according to the procedure described in EP-A-363675. The fermentation and purification process is carried out as follows.

(a) Fermentációs folyamat(a) Fermentation process

B típusú E.coli baktériumtörzset (a Pasteur Institute gyűjteményéből) transzformálunk egy olyan plazmiddal, amely hordozza mind a b-FGF-et kódoló humán gént, mind a tetraciklin rezisztencia génjét. Ezt a transzformált törzset alkalmazzuk rekombináns, nem g1ikozi1ezett h-b-FGF (humán b-FGF) előállítására. Elkészítjük ennek a törzsnek a minta sejtbankját (Master Cell Bank) (15 fagyasztva szárított ampulla) és működő sejtbankját /Working Cell Bank (W.C.B)/ (70 ampulla folyékonyjnitrogénben tárolva -190°C hőmérsékleten). Egy W.C.6.ampulla tartalmát alkalmazzuk inokulumként a fermentációs fázisban.E. coli strain type B (from the Pasteur Institute collection) was transformed with a plasmid carrying both the human gene encoding b-FGF and the tetracycline resistance gene. This transformed strain is used to produce recombinant, non-glycosylated h-b-FGF (human b-FGF). Prepare a Master Cell Bank (15 freeze-dried ampoules) and a Working Cell Bank (W.C.B) of this strain (70 ampoules stored in liquid nitrogen at -190 ° C). The contents of a W.C.6 ampoule are used as inoculum during the fermentation phase.

A fermentációs folyamatot 10 literes, 4 liter tenyésztő tápközeggel töltött fermentorokban végezzük.The fermentation process is carried out in 10 liters of fermentation media filled with 4 liters of culture medium.

• · ····· · · · • ·· ··· * ··· • » · ·· ····« •·<9 ·» ··» ·· · ·« «··· *• · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · · ····

A tápközeghez tetraciklin hidrokloridot : adunk abból a célból, hogy fenntartsuk a törzsszelekció körülményeit.Tetracycline hydrochloride is added to the medium in order to maintain the strain selection conditions.

órás, 37°C hőmérsékleten végzett növesztés után a végső biomassza 42-2 g/1 száraztömeg, és a bFGF termelése 2500^500 mg/1, amint ezt összehasonlító gé1e1ektroforézisse 1 mérj ük.after 37 hours at 37 ° C, the final biomass is 42-2 g / l dry weight, and bFGF production is 2500-500 mg / l as measured by comparative gel electrophoresis.

A fermentációs fázisjsorón szükséges a dúsítás tiszta oxigénben, hogy lehetővé tegyük a jelentős baktérium-növekedést.Enrichment with pure oxygen is required in the fermentation phase to allow significant bacterial growth.

(b) Kezdeti tisztítás(b) Initial cleaning

A sejteket (mikroorganizmusokat) centrifugálással elkülönítjük a teljes fermentációs tápközegből. Az így létrejövő üledéket újra szuszpendá1juk nátrium¥oszfát pufferban, amely nátrium-kloridot is tartalmaz.The cells (microorganisms) are separated from the complete fermentation medium by centrifugation. The resulting pellet was resuspended in sodium phosphate buffer, which also contained sodium chloride.

Legalább három átbocsátás szükséges nagynyomású homogenizátoron, hogy a sejteket hatásosan összezúzzuk. Az így létrejövő sejt-1izátumot centrifugálással tisztítjuk és a felülúszót összegyűjtjük a további feldolgozáshoz.At least three passes through a high pressure homogenizer are required to effectively crush the cells. The resulting cell lysate is purified by centrifugation and the supernatant is collected for further processing.

(c) T i sztítás(c) Cleaning

A tisztított felülúszót Sepharose S Fást Flow oszlopra (kationcserélő) visszük fel és a terméket erről az oszlopról foszfátpufferban levő növekvő nátrium-klorid koncentráció gradienst alkalmazva eluáljuk. A terméket tovább tisztítjuk • · ·· ·· · · ·· • · · · · · • · · ··· · ··· • · · ·· «···· ···· ·· ··· · · ·The purified supernatant was loaded onto a Sepharose S Whip Flow column (cation exchanger) and the product eluted from this column using a gradient of increasing sodium chloride in phosphate buffer. The product will be further cleaned · ·······································································• · ·

Heparin Sepharose 6 B oszlopon, foszfátpufferban levő, növekvő nátrium-k1orid koncentrációgradienst alkalmazva. Végül puffer-cserét végzünk Sephadex G25 gyantán, hogy nagy tömegű termék-pufferban (nátrium-foszfát-EDTA) levő terméket kapj unk.Heparin Sepharose 6 B column, using a gradient of increasing concentration of sodium chloride in phosphate buffer. Finally, a buffer exchange was performed on Sephadex G25 resin to obtain a bulk product buffer (sodium phosphate EDTA).

(d) Oszlop tisztítás (regenerálás)(d) Column cleaning (regeneration)

A Sepharose S Fást Flow és Sephadex G25 oszlopokat olyan módon regeneráljuk, hogy nátrium-hidroxid oldattal mossuk.The Sepharose S Wood Flow and Sephadex G25 columns are regenerated by washing with sodium hydroxide solution.

A Heparin Sepharose oszlopot felváltva mossuk 3 mól/1 nátrium-kloridot tartalmazó 8,5, illetve 5,5 pH értékű oldatokkal .The Heparin Sepharose column was washed alternately with pH 8.5 and 5.5 with 3M sodium chloride.

Végül az FCE 26184 jelű bFGF anyagot kapjuk. Ez mintegy 50:50 arányú keveréke az alábbi két vegyületnek:Finally bFGF FCE 26184 is obtained. This is a 50:50 mixture of the following two compounds:

egy 154 aminosavbó 1 álló humán bFGF, amely megfelel az Abraham és munkatársai által leírt 155 aminosavas forma aminosav-szekvenciájának (ez az ott mellékelt 1. ábrának felel meg), de annak N-terminális Met gyöke nélkül, és egy 153 aminosavból álló humán bFGF, amely lényegében a fenti 154 aminosavból álló formát tartalmazza, de az 1. helyen levő Alá gyök nélkül.a human bFGF consisting of 154 amino acid residues corresponding to the amino acid sequence of the 155 amino acid form described by Abraham et al. containing essentially the form of the above 154 amino acids, but without the Ala residue at position 1.

• ·• ·

2. példa bFGF fragmentumok előállításaExample 2 Construction of bFGF fragments

A bFGF 93.-120. fragmentumának, amelynek képlete: H-Phe-Phe-Phe-Glu-Arg-Leu-Glu-Ser-Asn-Asn-Tyr-Asn-Thr-TyrArg-Ser-Arg-Lys-Tyr-Ser-Ser-Trp-Tyr-Val-Ala-Leu-Lys-Arg-Nl^, szintézisét egymást követő lépésekben hajtjuk végre, peptid szintetizáló berendezést és MBHA gyantát alkalmazva. A gyantához való kötődést BOC-Val-lal érjük el, a 4,292,313 lajstromszámú amerikai egyesült államok-beli szabadalmi leírásban ismertetett munkamenet szerint. A gyantához való kötődés után az amino védőcsoportot trif1uor-ecetsavas₍0°C hőmérsékleten végzett kezeléssel eltávolítjuk. A védőcsoport eltávolítása és semlegesítése után a peptidláncot lépésről-lépésre megalkotjuk a gyantán, a 3,904,594 lajstromszámú amerikai egyesült államok-beli munkamenetet követve.93 to 120 of bFGF. fragment of the formula H-Phe-Phe-Phe-Glu-Arg-Leu-Glu-Ser-Asn-Asn-Tyr-Asn-Thr-TyrArg-Ser-Arg-Lys-Tyr-Ser-Trp-Tyr The synthesis of Val-Ala-Leu-Lys-Arg-N11 is performed in sequential steps using a peptide synthesizer and MBHA resin. Binding to the resin is achieved with BOC-Val according to the procedure described in U.S. Patent No. 4,292,313. After binding to the resin, the amino protecting group is removed by treatment with trifluoroacetic acid ₍ 0 ° C).

Hasonló eljárást alkalmazhatunk az alábbi peptidek előállításához :A similar procedure can be used to prepare the following peptides:

1. A bFGF 97.-120. fragmentuma az alábbi képlettel:1. A bFGF 97-120. fragment of the formula:

H-Arg-Leu-Glu-Ser-Asn-Asn-Tyr-Asn-Thr-Tyr-Arg-Ser-Arg-LysIArg-Leu-Glu-Ser-Asn-Asn-Tyr-Asn-Thr-Tyr-Arg-Ser-Arg-Lysine

Tyr-Ser-Ser-Trp-Tyr-Val-Ala-Leu-Lys-Arg-NH₂;Tyr-Ser-Ser-Trp-Tyr-Val-Ala-Leu-Lys-Arg-NH ₂ ;

2. A bFGF 100.-120. fragmentuma az alábbi Képlettel':2. BFGF 100-120. fragment of the following formula ':

H-Ser-Asn-Asn-Tyr-Asn-Thr-Tyr-Tyr-Arg-Ser-Arg-Lys-Tyr-SerSer-Trp-Tyr-Val-Ala-Leu-Lys-Arg-NH₂.H-Ser-Asn-Asn-Tyr-Asn-Thr-Tyr-Tyr-Arg-Ser-Arg-Lys-Tyr-SerSer-Trp-Tyr-Val-Ala-Leu-Lys-Arg-NH ₂ .

3. A 103.-120. fragmentum az alábbi képlettel:3. From 103 to 120. fragment with the following formula:

H-Tyr-Asn-Thr-Tyr-Arg-Ser-Arg-Lys-Tyr-Ser-Ser-Trp-Tyr-ValAla-Leu-Lys-Arg-NH₂;H-Tyr-Asn-Thr-Tyr-Arg-Ser-Arg-Lys-Tyr-Ser-Ser-Trp-Tyr-ValAla-Leu-Lys-Arg-NH ₂ ;

ι • β ·· ···· · · · • · · ·· · ·· « ·· ··· · · · · • · · · · ···· ··«· ·· ··· ·· ·ι • β ·· ············································································································································································································································································• ·

4. Α 103.-146. fragmentum az alábbi képlettel:4. Α 103.-146. fragment with the following formula:

H-Tyr-Asn-Thr-Tyr-Arg-Ser-Arg-Lys-Tyr-Ser-Ser-Trp-Tyr-ValAla-Leu-Lys-Arg-Thr-Gly-Gln-Tyr-Lys-Leu-Gly-Pro-Lys-ThrGly-Pro-Gly-Gln-Lys-Ala-Ile-Leu-Phe-Leu-Pro-Met-Ser-Ala- Lys-Ser-NH₂;H-Tyr-Asn-Thr-Tyr-Arg-Ser-Arg-Lys-Tyr-Ser-Ser-Trp-Tyr-for-Leu-Lys-Arg-Thr-Gly-Gln-Tyr-Lys-Leu-Gly Pro-Lys-ThrGly-Pro-Gly-Gln-Lys-Ala-Ile-Leu-Phe-Leu-Pro-Met-Ser-Ala-Lys-Ser-NH ₂ ;

5. A 1Ο6.-Ί15. fragmentum az alábbi képlettel:5. A 1Ο6.-Ί15. fragment with the following formula:

H-Tyr-Arg-Ser-Arg-Lys-Tyr-Ser-Ser-Trp-Tyr-NH₂;H-Tyr-Arg-Ser-Arg-Lys-Tyr-Ser-Ser-Trp-Tyr-NH ₂ ;

6. A 106.-118. fragmentum az alábbi képlettel:6. A pp. 106-118. fragment with the following formula:

H-Tyr-Arg-Ser-Arg-Lys-Tyr-Ser-Ser-Trp-Tyr-Val-Ala-Leu-NH₂:H-Tyr-Arg-Ser-Arg-Lys-Tyr-Ser-Ser-Trp-Tyr-Val-Ala-Leu-NH ₂ :

7. A 106.-120. fragmentum az alábbi képlettel:7. fragment with the following formula:

H-Tyr-Arg-Ser-Arg-Lys-Tyr-Ser-Ser-Trp-Tyr-Val-Ala-Leu-LysH-Tyr-Arg-Ser-Arg-Lys-Tyr-Ser-Ser-Trp-Tyr-Val-Ala-Leu-Lys

-Arg-NH₂;-Arg-NH ₂ ;

8. 8th a the bFGF bFGF 106. 106th -125. -125. amidált amidated fragmentuma, fragment, 9. 9th a the bFGF bFGF 106 . 106. -130. -130. amidált amidated fragmentuma, fragment, 10. 10th a the bFGF bFGF 106. 106th -135. -135. amidált amidated fragmentuma, fragment, 1 1 . 1 1 a the bFGF bFGF 106. 106th -140. -140. amidált amidated fragmentuma, fragment, 12. 12th a the bFGF bFGF 106. 106th -146. -146. amidált amidated fragmentuma, fragment, 13. 13th a the bFGF bFGF 107 . 107. -110. -110. amidált amidated fragmentuma, fragment,

Kiszerelési példaPackaging example

FGF szemcseppet készítünk, amely az alábbi alkotórészekből áll :FGF eye drops are made up of the following ingredients:

2., anyag 2/tg2, substance 2 / tg

Dextrán-szu 1 f át 600y<gDextran su 1 f over 600y <g

Injekció minőségű víz 10 mlWater for injection 10 ml

Ezt az oldatot 1iofi 1 ezhetjük , és 10 ml megfelelő steril hígító folyadékkal közvetlenül a felhasználás időpontjában á 11 í thatj uk helyre.This solution may be reconstituted with 10 ml of suitable sterile diluent immediately at the time of use.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOKPATENT CLAIMS

1. Fibroblaszt növekedési faktor alkalmazása gyógyszerkészítmények előállítására azzal jellemezve, hogy burkolatos vírusok, mégpedig alfa típusú herpesz vírus - kivéve az 1. típusú Herpes simplex vírust (HSVj)-, bétavagy gamma típusú herpesz vírus, ortomixovírus vagy paramixovírus, valamely trópusi vírus vagy retrovírus, által okozott vírusfertőzések megelőzésére és kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására alkalmazzuk.Use of a fibroblast growth factor for the manufacture of a medicament comprising enveloped viruses, namely, herpes simplex virus type alpha (except Herpes simplex virus type 1 (HSVj)), herpes virus beta or gamma, orthomixovirus or paramixovirus, a tropic virus, used to prevent and treat viral infections caused by.

2. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás azzal jellemezve, hogy a fibroblaszt növekedési faktort alfa típusú herpesz vírus, mégpedig 2. típusú Herpes simplex vírus (HSV^) által okozott vírusfertőzések megelőzésére és kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására alkalmazzuk.Use according to claim 1, characterized in that the fibroblast growth factor is used for the preparation of a medicament for the prophylaxis and treatment of viral infections caused by herpes simplex virus alpha type 2 (HSV1).

3. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás azzal jellemezve, hogy a fibroblaszt növekedési faktort alfa típusú herpesz vírus, mégpedig Herpes varicella/zoster által okozott vírusfertőzések megelőzésére és kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására alkalmazzuk.3. The use according to claim 1, wherein the fibroblast growth factor is used for the preparation of a medicament for the prophylaxis and treatment of viral infections caused by the herpes alpha virus, namely Herpes varicella / zoster.

4. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás azzal jellemezve, hogy a fibroblaszt növekedési faktort béta vagy gamma típusú herpesz vírus, mégpedig citomega1ovírus által okozott vírusfertőzések megelőzésére és kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására alkalmazzuk.4. The use according to claim 1, wherein the fibroblast growth factor is used for the manufacture of a medicament for the prophylaxis and treatment of viral infections caused by beta or gamma herpes virus, namely cytomega1 virus.

5. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás azzal jellemezve, hogy a fibroblaszt növekedési faktort ortomixovírus, mégpedig influenza vírus által okozott vírusfertőzések megelőzésére és kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására alkalmazzuk.Use according to claim 1, characterized in that the fibroblast growth factor is used for the manufacture of a medicament for the prevention and treatment of viral infections caused by orthomixovirus, namely influenza virus.

6. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás azzal jellemezve, hogy a fibroblaszt növekedési faktort paramixovírus, mégpedig humán légzőrendszeri szincitiális vírus (HRSV) által okozott vírusfertőzések megelőzésére és kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására alkalmazzuk.6. The use according to claim 1, wherein the fibroblast growth factor is used for the manufacture of a medicament for the prophylaxis and treatment of viral infections caused by paramixovirus, a human respiratory syncytial virus (HRSV).

7. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás azzal jellemezve, hogy a fibroblaszt növekedési faktort valamely trópusi vírus, mégpedig Semliki Forest vírus (SFV) által okozott vírusfertőzések megelőzésére és kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására alkalmazzuk.7. The use according to claim 1, wherein the fibroblast growth factor is used for the preparation of a pharmaceutical composition for preventing and treating viral infections caused by a tropical virus, Semliki Forest virus (SFV).

8. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás azzal jellemezve, hogy a fibroblaszt növekedési faktort retrovírus, mégpedig HÍV vírus által okozott vírusfertőzések megelőzésére és kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására alkalmazzuk.8. The use according to claim 1, wherein the fibroblast growth factor is used for the preparation of a medicament for the prophylaxis and treatment of viral infections caused by a retrovirus, namely HIV.

9. Az 1. igénypont szerinti alkalmazás azzal jellemezve, hogy a fibroblaszt növekedési faktort retrovírus, mégpedig Moloney szarkóma vírus (MSV) által okozott vírusfertőzések megelőzésére és kezelésére alkalmas gyógyszerkészítmények előállítására alkalmazzuk.9. The use according to claim 1, wherein the fibroblast growth factor is used for the manufacture of a medicament for the prophylaxis and treatment of viral infections caused by a retrovirus, namely Moloney Sarcoma Virus (MSV).

i.i.

• * *- ···· ····« ··· • ·· ··· · ··· • · · · · ···· ···« ·· ··· ·« ·• * * - ···· ···· «··· • ··············································•

10. Az 1.-9. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás azzal jellemezve, hogy fibroblaszt növekedési faktorként bázisos fibroblaszt növekedési faktort (bFGF) alkalmazunk.10. Use according to any one of claims 1 to 3, wherein the fibroblast growth factor is basic fibroblast growth factor (bFGF).

11. A 10. igénypont szerinti alkalmazás azzal jellemezve, hogy bázisos fibroblaszt növekedési faktorként humán bFGF-et alkalmazunk vagy ennek valamely analógját alkalmazzuk.11. Use according to claim 10, wherein the basic fibroblast growth factor is human bFGF or an analogue thereof.

12. A 10. igénypont szerinti alkalmazás azzal jellemezve, hogy bázisos fibroblaszt növekedési faktorként szarvasmarha bFGF-et alkalmazunk vagy ennek valamely analógját alkalmazzuk.Use according to claim 10, wherein the basic fibroblast growth factor is bovine bFGF or an analogue thereof.

13. Az 1.-9. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás azzal jellemezve, hogy fibroblaszt növekedési faktorként savas fibroblaszt növekedési faktort (aFGF) alkalmazunk.13. Use according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the fibroblast growth factor is acid fibroblast growth factor (aFGF).

14. A 13. igénypont szerinti alkalmazás azzal jellemezve, hogy savas fibroblaszt növekedési faktorként humán aFGF-et alkalmazunk, vagy ennek valamely analógját alkalmazzuk.Use according to claim 13, wherein the acidic fibroblast growth factor is human aFGF or an analogue thereof.

15. A 11., 12., vagy 14. igénypontok bármelyike szerinti alkalmazás azzal jellemezve, hogy analógként a teljes molekula valamely fragmentumát alkalmazzuk.Use according to any one of claims 11, 12 or 14, characterized in that a fragment of the whole molecule is used as an analogue.

16. A 10.-15. igénypontok bármelyikében meghatározott fibroblaszt növekedési faktor azzal jellemezve, hogy az * * *· ' ···« • · · · «·· • · · «4 · ·· · • · · · · « · • · ·<*··· • ·« · · ·16. At 10-15. The fibroblast growth factor as defined in any one of claims 1 to 5, characterized in that the fibroblast growth factor is characterized by the fact that · • · «· · ·

1.-9. igénypontok bármelyikében meghatározott burkolatos vírusok által okozott vírusfertőzések megelőzésére és kezelésére alkalmazzuk ezeket.1st-9th They are used to prevent and treat viral infections caused by enveloped viruses as defined in any one of claims 1 to 3.

17. Eljárás az 1.-9. igénypontokban meghatározott burkolatos vírusok által okozott vírusfertőzések megelőzésére és kezelésére betegekben azzal jellemezve, hogy a betegnek a 10.-15. igénypontok bármelyike szerinti fibroblaszt növekedési faktor hatékony mennyiségét adjuk be.17. Procedure 1-9. The method of preventing and treating viral infections caused by enveloped viruses as defined in claims 1 to 10, wherein An effective amount of a fibroblast growth factor according to any one of claims 1 to 6.