HUT55223A - Process for producing pharmaceutical composition comprising fatty acids and monoglycerides with antiviral and antibacterial effect - Google Patents
Process for producing pharmaceutical composition comprising fatty acids and monoglycerides with antiviral and antibacterial effect Download PDFInfo
- Publication number
- HUT55223A HUT55223A HU891084A HU108488A HUT55223A HU T55223 A HUT55223 A HU T55223A HU 891084 A HU891084 A HU 891084A HU 108488 A HU108488 A HU 108488A HU T55223 A HUT55223 A HU T55223A
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- fatty acids
- virus
- monoglycerides
- antiviral
- fatty acid
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
- A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
- A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/20—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms, e.g. stearic, palmitic, arachidic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/21—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates
- A61K31/215—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids
- A61K31/22—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin
- A61K31/23—Esters, e.g. nitroglycerine, selenocyanates of carboxylic acids of acyclic acids, e.g. pravastatin of acids having a carboxyl group bound to a chain of seven or more carbon atoms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/04—Antibacterial agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Emergency Medicine (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Virology (AREA)
- Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
Description
A találmány tárgya zsírsavak és monogliceridek antivirális és antibakteriális hatásán alapszik és fenti vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények előállítására vonatkozik. A találmány lényege főképpen a zsírsavak és a monogliceridek azon hatása, miszerint a burokkal rendelkező vírusokat inaktiválják, valamint sejteket pusztítanak el.
Számos publikáció foglalkozik az anyatej azon tulajdonságával, hogy képes megvédeni a csecsemőt a gasztrointesztinális fertőzésektől (lásd A.S. Cunningham: Halálozás anyatejjel és mesterségesen táplált csecsemőknél, 3. Pediatr., 1979. 95. kötet, 685-689., M.G. Myers és munkatársai: Légzési és gasztrointesztinális megbetegedések anyatejjel és tápszerrel táplált csecsemőknél, Am. 3. Dis. Child. , 1984, 138. kötet, 629-632., S.A. Larsen, 3r. : Az anyatejes és a mesterséges táplálás szerepe a gasztroenteritisszel kórházban ápoltaknál egy középosztálybeli populációban az Amerikai Egyesült Államokban, 3. Pediatr., 1978., 92. kötet, 417-418., M.E. Fallot és munkatársai: Az anyatejes táplálás csökkenti a csecsemők kórházi ápolással járó fertőzéses megbetegedéseinek arányát, Pediatr., 1980., 65. kötet, 1121-1124., A.S. Cunningham: Az anyatejes táplálás és az egészség, 3. Pediatr., 1987., 110. kötet, 658-659.). Ezen védőhatást túlnyomórészt a tejben található immunoglobulinoknak tulajdonították (lásd G.A. Loslonsky és munkatársai: Anya-ujszülött kölcsönhatások és az anyatej, az N. Gleicher által szerkesztett Reproductive Immunology c. könyvben meg jelent: New York, Alán R. Riss kiadásában, 1981, 171-182., A gazdaszervezet védekezése: Fejlődés és az anyai hozzájárulás, a L.A. Barness által szerkesztett Advance in Pediatricsban, 32. kötet, 1985, 71-100.). Mindazonáltal, arra is rámutattak már, hogy a tejben nemspecifikus faktorok is jelen vannak, amelyek képesek a kórokozók elpusztítására, illetve szaporodásuk lelassítására. Ezen védő faktorok közül egyesek tápanyagként is szolgálnak, mint például a monogliceridek és a zsírsavak. Mivel a csecsemőtápszer nem tartalmaz immunoglobulint, azt feltételezték, hogy nem is fejt ki védőhatást a gasztrointesztinális fertőzésekkel szemben. Azonban a tápszerek tartalmaznak triglicerideket, amelyekből a gyomorban és a belekben végbemenő lipolizist követően szabad zsírsavak és monogliceridek szabadulnak fel, amelyek közül néhányról bebizonyosodott, hogy inaktiválják a burokkal rendelkező vírusokat és a Giardia lamblia-t, ha az anyatejben vagy a tehéntejben jelen vannak (lásd J.K. Welsh és munkatársai: Semiliki Forest vírus alkalmazása lipidközvetitett antivirális aktivitás és anti-alfavirus immunoglobulin-A azonosítására az anyatejben, Infect. Immun. 1978., 19. kötet, 395-401. /1/, J.K. Welsh és munkatársai: Az antivirális lipidek, a hő és a fagyasztás hatása az anyatejben jelenlevő vírusok aktivitására, J. Infect. Dis., 1979., 140. kötet, 322-328. /11/, C.E. Isaacs és munkatársai: Az anyatej membránromboló hatása: a burokkal rendelkező vírusok inaktiválása, J. Infect. Dis., 1986., 154. kötet, 966-971., a fent említett cikkek mindegyike szerepel hivatkozásként).
Az anyatej számos antivirális faktort tartalmaz, amelyek nem immunoglobulinok (lásd W.A. Falkler, 3r.: A dengue-virus egy lipid inhibitora az előtejben és az anyatejben, Arch. Virol. 1975., 47. kötet, 3-10., A.H. Fieldsteel: Arbovirus és egér-leukémia vírus elleni antivirális anyagok az anyatejben, Cancer Rés., 1974., 34. kötet, 712-715., T.H. Matthews és munkatársai: Lehetséges klinikai jelentőségű antivirális aktivitás az anyatejben, Láncét,
1976., II. kötet, 1387-1389., N.H. Sarkar és munkatársai: Az anyatej hatása az egér-emlődaganat vírusra, Cancer Rés.,
1973., 33. kötet, 626-629.). Ezek faktorok közül néhány a tej nemlipid frakciójában található, de a tanulmányok többsége a lipid frakcióhoz kötött antivirális aktivitásról számol be. Az antivirális hatású lipideket legjobban Welch és munkatársai /11/ jellemezték, akik azt találták, hogy az anyatejben található telítetlen szabad zsírsavak és monogliceridek inaktiválják a burokkal rendelkező, de nem inaktiválják a burokkal nem rendelkező vírusokat.
Amint arról C.E. Isaacs és munkatársai cikkükben (Az anyatej membránroncsoló hatása: a burokkal rendelkező vírusok inaktiválása, 3. Infect. Dis., 1986., 154. kötet, 966-971. - itt kifejezetten hivatkozásként megemlítve) beszámolnak róla, Welsh és munkatársai munkáját megerősítették és továbbfejlesztették. Bebizonyosodott, hogy a friss anyatejből származó lipidek nem antivirális hatásúak, de °C-on történő tárolás hatására és a csecsemőgyomorban aktívvá válnak a burokkal rendelkező vírusokkal szemben, valószínűleg a tej trigliceridjeiből történő zsirsavfelszabadulás hatására.
Az la-lc. ábrák a VSV (vesicularis stomatitis vírus) részecskék negatív festődését mutatják, amely a linolsav hatására utal. VS vírust 37 °C-on 30 percig inkubáltunk
a) fenntartó tápoldatban (FTO), b) linolsavban (5 mg/ml, FTO-ban) és c) linolsavban (1 mg/ml, FTO-ban).
a) Tüskékkel borított szabályos érintetlen részecskék,
b) a virusburok már nem érintetlen, ezáltal a festék a legtöbb részecskébe behatol,
c) virusrészecskék a szétesés különböző fázisaiban.
A szakasz hossza 0,1 mikrométer.
A 2a-2d. ábrák a sejtkulturák pásztázó elektronmikroszkóppal készített képeit mutatják, amelyeken az anyatej és a linolsav hatása látható. Verő sejteket 37 °C-on 30 percig inkubáltunk a) anyatejben, b) 4 °C-on 4 napig tárolt anyatejben, c) FTO-ban és d) linolsavval (1 mg/ml, FTO-ban). A tejmintákat 1:5 arányban FTO-ban hígítottuk.
(a és c): érintetlen sejtmembránok mikrobolyhokkal, (b és d): részben vagy teljesen szétesett membránok.
A szakasz hossza 1,0 mikrométer.
A friss anyatejben található lipidek nem inaktiválják a vírusokat, de a tej 4 vagy 23 °C-on pár napig történő tárolása során antivirális hatásúvá válnak. Az antivirális akti- 6 vitás megjelenése az aktív lipázok jelenlététől függ és öszszefüggésben van a szabad zsírsavaknak a tejbe történő kibocsátásával. Egy sor zsírsavat - amelyek az anyatej lipidjeinek természetes alkotói - teszteltünk burokkal rendelkező vírusok, mint a vesicularis stomatitis vírus, a herpes simplex vírus és a visna vírus, valamint egy burokkal nem rendelkező vírus, a poliovirus ellen. A rövid és a hosszú láncú telitett zsírsavaknak nagyon kicsi vagy semmi antivirális hatása nincs a legnagyobb alkalmazott koncentrációban. Ugyanakkor, a közepes lánchosszuságu telitett és a hosszuláncu telítetlen zsírsavak valamennyien igen aktívak voltak a burokkal rendelkező vírusok ellen, habár a maximális vírus-inaktiváláshoz szükséges zsirsavkoncentráció husz-szoros tartományban változott. Ezen zsírsavak monogliceridjei szintén igen aktívaknak bizonyultak, egyes esetekben ráadásul tízszer kisebb koncentrációban mint a megfelelő szabad sav. Egyik zsírsav sem inaktiválta a poliovirust. Úgy találtuk, hogy az antivirális hatású zsírsavak a vírus burkát támadják meg, miáltal az átjárhatóvá válik, magasabb zsirsavkoncentrációknál pedig a burok és a virusrészecskék teljesen szétesnek. Ezen zsírsavak a sejtkulturában tartott sejtek plazmamembránjának szétesését is előidézik, amely a sejt liziséhez, majd halálához vezet. Ugyanez a jelenség lép fel, ha a kultúrában tartott sejteket tárolt, antivirális hatású anyatejjel inkubáljuk. Az anyatej lipidjeinek in vitro antimikrobiális hatása ennek alapján legvalószínűbben a sejt- és virusmembránok zsírsavak által okozott szétesésének tulajdonítható.
Anyagok és módszerek:
Sejtkulturák
A Verő sejteket (afrikai zöld majom vesesejt-vonal, Flow Laboratories Inc., McLean, Va.) Eagle-féle alap-tápoldatban (Eagle basal médium = BME, GIBCO Laboratories, Grand Island, New York, USA) tenyésztettük, amelyhez 10 % inaktivált foetalis borjuszérumot (GIBCO) adtunk. A juh fibroblaszt kultúrákat bárányagy choroid plexusából nyertük és 15 % juhszérumot (Colorado Serum Co.) tartalmazó BME tápoldatban tenyésztettük. A Verő sejtek fenntartó tápoldata (FTO) BME volt 2 % foetalis borjuszérummal, a juhsejtek esetében BME 2 % juhszérummal. Minden tápoldathoz 0,1 % Gentamicint adtunk.
Vírusok
A vesicularis stomatitis vírus (VSV) Indiana törzsét és az 1. tipusu herpes simplex vírus Mclntyre törzsét az Amerikai Tipusu Sejtkulturagyüjteményből (American Type Culture Collection, Rockville, Md., USA) szereztük be és Verő sejtekben tenyésztettük. A Visna vírus K796 törzsét juh choroid plexus sejtekben tenyésztettük. Az 1. tipusu poliovirus Chat törzsét R.I.Carp-tól (New York Institute fór Basic Research) kaptuk és Verő sejtekben tenyésztettük.
Virustitrálás
A vírusokat tízszeres hígítások 96-lyuku mikrotiter-sejtkulturalapokra (Becton Dickinson Labware, Oxnard, California, USA) történő beoltásával titráltuk (a VSV, a poliovirus és a HSV-1 esetén Verő sejtekbe, a visna vírus esetén juh choroid plexus sejtekbe történt a beoltás). 0,1 ml virushigitást (FTO-ban) oltottunk egy-egy lyukba és hígításonként négy lyukat használtunk. A mikrotiter lapokat a vírustól függően 2-12 napig tartottuk, naponta vizsgálva a citopatikus hatást. A virustitert Reed és Muench módszerével számítottuk (L.J. Reed és munkatársai: Am. J. Hyg., 1938., 27. kötet, 493-497.).
Tejminták
Az 1., 2. és 3. tejmintákat steril körülmények között gyűjtötték szülés után 1-5 hónappal lévő anygáktól és -86 °C-on mélyhütve tároltuk a kísérletekben történő felhasználásig.
Vegyszerek
A zsírsavakat és a monoglicerideket a Sigma Chemical Co.-tól (St. Louis, Mo., USA) vásároltuk, legtisztább (puriss.) minőségben. Közvetlenül használat előtt megolvasztottuk és 10 % foetális borjuszérumot tartalmazó BME oldattal emulgeáltuk 1 perces, legnagyobb fokozaton történő vortexezéssel. A 100 mg/ml töménységű emulziókat FTO-ban hígítottuk a kívánt koncentrációra. A rövidláncu zsírsavak emulzióját 1 M NaOH hozzáadásával pH = 7-ig semlegesítettük.
A telítetlen zsírsavakat és a monoglicerideket nitrogén alatt tartottuk és az emulziókat az elkészítés után néhány percen belül felhasználtuk. Az eserine-szulfátot (fizosztigmin, Sigman) és a NaCl-ot vízben oldottuk és FTO-ban hígítottuk a kísérletekben való felhasználás előtt.
Az antivirális aktivitás meghatározása
A vírus kb. 10^ 5 %-os sejtkultura-fertőző dózisát (SFD^8) összekevertük FTO-ban ötször hígított anyatejjel vagy zsírsavak és monogliceridek FTO-ban készített emulziójával és 37 °C-on 30 percig inkubáltuk. Kontrollként FTO-val összekevert vírust használtunk. Inkubálás után minden egyes elegy fertőzőképességét meghatároztuk a sorozatos higitásos -2 -5 végpontmeghatározás módszerét alkalmazva. A 10 -10 hígításokat Verő sejtek egysejtrétegü kultúrájába oltottuk és a virustitert a fentiekben leirt módon meghatároztuk. A kontroll-virus, valamint a tej-virus és a lipid-virus keverékek titere (log^g) közötti különbséget, azaz a virustiter csökkentését használtuk az antivirális aktivitás jellemzésére .
A vírusok feldolgozása elektronmikroszkópiához
A VSV vírusokat betöményitettük és részlegesen tisztítottuk Beckman L2-65B tipusu ultracentrifugával történő differenciál-centrifugálással és a mintákat (10^0 SFD^O/ml) 37 °C-on 30 percig inkubáltuk FTO-ban, emulgeált zsírsavak jelenlétében vagy anélkül. A virus-szuszpenziókat szénnel bevont rácsra vittük fel és 7-es pH-ju 2 %-os • · • · · • *· » « • · · · • · · ·
- 10 foszfowolframmal negatívan festettük. A mintákat Hitachi HS 8-2-tipusu elektronmikroszkóppal vizsgáltuk 50 kV-nál.
A sejtek feldolgozása elektronmikroszkópiához
A sejtek egyrétegű kulturált 30 percig 37 °C-on inkubáltuk FTO-val vagy tej-, illetve zsírsav-emulzióval. A sejtrétegeket ezután óvatosan lemostuk Hank-féle egyensúlyi sóoldattal (Hank’s balanced salt solution) és 2 % glutáraldehidet tartalmazó 0,1 M kakodilát-pufferral fixáltuk. Pufferral való mosás és 2 %-os ozmium-tetroxidos utófixálás után a sejteket etanollal történő átmosással majd az etanol elpárologtatásával szárítottuk és fröcsköléssel 10,5 nm arannyal borítottuk. Az igy feldolgozott sejteket ISI-ISS40 pásztázó elektronmikroszkóppal 20 kV-nál vizsgáltuk.
A szabad zsirsavtartalom meghatározása
A tejminták 100 mikroliteréből 0,5 ml kloroform-metanol (2:1) eleggyel extraháltuk a lipideket. A felső fázist eltávolitottuk és a kloroform-réteg egy alikvotját vékonyrétegkromatográfiával választottuk el Silica Gél G lemezen (Merek and Co., Inc., Rahway, N.J., USA), olajsavat használva kvantitatív standardként hexán/dietil-éter/ecetsav (70:30:1,5) oldószerrendszerben. A kifejlesztett lemezeket krómkénsavval való bepermetezés után elszenesitettük és a szabad zsírsavakat denzitometriásan határoztuk meg.
Eredmények:
Összefüggés a lipolizis és az antivirális aktivitás
- 11 között
Megelőző eredmények (Isaacs és munkatársai) azt mutatták, hogy az anyatej 4, 23 vagy -20 °C-on különböző időkig való tárolás után válik csak aktívvá a burokkal rendelkező vírusokkal szemben. Az antivirális aktivitás a zsírokat tartalmazó frakcióhoz kapcsolódik, bár a zsírmentes frakcióra is szükség van ahhoz, hogy a lipidek antivirális hatásúvá váljanak. Acélból, hogy kiderítsük, az antivirális aktivitás megjelenése valóban összefüggésben van-e a tej lipáz enzimjeivel, az 1., 2. és 3. tejmintákat 4 napig 4 °C-on tartottuk két lipáz-inhibitor, 5 mM eserine-szulfát és 1 M NaCl jelenlétében, illetve anélkül. A virus-titer (VSV esetén) 10^ SFD^-ről 10^’5 SFD^O-re csökkent az inhibitor nélkül tárolt tejjel történt inkubálás után, ami 105’5 SFD^-nel való csökkenést jelent. Ezzel szemben a lipáz-inhibitorokkal tárolt tejjel történt inkubálás után az alkalmazott koncentrációk mellett nem tapasztaltunk fertőzőképesség-csökkenést. Az inhibitorok nem voltak hatással a már antivirálissá vált anyatejre.
Egy másik, arra utaló jel, hogy az antivirális aktivitás megjelenése a tárolt anyatejben kapcsolatban áll a lipolizissel, az 1. táblázatból olvasható ki. A mélyhűtött 1. anyatejmintában nem volt kimutatható zsírsav, de 4 napos tárolás után 4 °C esetén 7, 23 °C esetén 12 mg/ml-re nőtt a szabad zsírsavak koncentrációja. Mindkét tárolt minta erősen antivirális hatású volt. Ugyanakkor a 3. tejminta szabad • * • ·
- 12 zsirsavtartalma a tárolás hatására csak 2 mg/ml-re emelkedett és a tej nem vált antivirálissá. A 3. mintával szemben az 1. tejmintában sokkal magasabb volt a lipoprotein lipáz-tartalom, amiről az előzőekben megmutattuk, hogy összefügg a tej antivirális aktivitásának megjelenésével.
A zsírsavak és monogliceridek antivirális aktivitása
A 2. táblázatban egy sor, a tejben található zsírsav antivirális aktivitásának összehasonlítása található. A rövid láncú (vaj-, kapron- és kaprilsav) és a hosszú láncú telitett (palmitin- és sztearinsav) zsírsavak semmi, vagy csak nagyon kicsi antivirális hatással rendelkeznek az alkalmazott legnagyobb koncentrációkban is. Másrészről, a közepes széláncu telített és a hosszú láncú telítetlen zsírsavak mindegyike antivirális hatású volt, de más-más koncentrációban. A 2. táblázatban láthatók a VSV-titerben tízezerszeres csökkenést okozó legkisebb koncentrációk. Kétszer kisebb koncentráció vagy nem inaktiválta a vírust, vagy csak tízszeres csökkenést okozott a titerben. Hasonló eredményeket kaptunk a HSV-1 és a visna vírus esetében is (utóbbi egy rektovirus). Ezzel szemben, ha poliovirust inkubáltunk 37 °C-on 30 percig kapronsav, laurinsav, mirisztinsav, palmitinsav, olajsav, linolsav, linolénsav, illetve arachidonsav jelenlétében, mindegyik esetben 8 mg/ml-es koncentrációban, nem történt jelentős virustiter-csökkenés a zsírsav nélkül inkubált poliovirus titeréhez képest (10^.7 SFD^Q). Az olajsav és a linolénsav nátriumsójának antivirális hatása hasonló volt a szabad savéhoz.
A lipolizis más termékeit, mint például a zsírsavak 1-monogliceridjeit is teszteltük antivirális aktivitás szempontjából (3. táblázat). Az összes tesztelt monoglicerid (a monomirisztin és a monoolein kivételével) antivirális hatású volt, mégpedig 5-10-szer alacsonyabb koncentrációban (millimólban), mint a megfelelő zsírsav.
A fenti, anyatejjel, csecsemő-gyomortartalommal és tisztított lipidekkel végzett kísérletek arra utalnak, hogy az anyatej trigliceridjeiből tárolás során vagy a gyomor-bél traktusban keletkező monogliceridek és zsírsavak elpusztítják a burokkal rendelkező vírusokat és nagyon valószínű, hogy in vivő védő hatást fejtenek ki az anyatejjel táplált csecsemőkre.
Kísérleteket végeztünk acélból is, hogy meghatározzuk a vírus inaktiválásához szükséges időt. A vírust monolaurinnal inkubáltuk FTO-ban:
3a. táblázat
A virus-inaktiválás időfüggése
Inkubációs idő (perc)_______A HSV-1 titer csökkenése ^4,0 >4,0 >4,0 >4,0 >4,0
0,5 • · * · • *· · · » * · · • * · ·
- 14 Ezek az eredmények arra utalnak, hogy a vírus elpusztítása igen gyorsan végbemegy és valószínűleg megtörténik, mihelyt a monoglicerid vagy a szabad zsírsav érintkezésbe kerül a virusburokkal. Linolsavval inkubált VSV negatívan festett elektronmikroszkópos képe azt mutatja, hogy 0,5 mg/ml-es koncentrációnál a virusburok átjárhatóvá vált és ezáltal a festék több részecskébe be tud jutni. A hatás sokkal kifejezettebb 1 mg/ml linolsavkoncentrációnál, amikor a részecskék már szét is esnek.
A zsírsavak hatása a virusrészecskékre
A zsírsavak virusrészecskékre gyakorolt hatásának tanulmányozása céljából VSV-t betöményitettünk és részlegesen tisztítottunk, majd 37 °C-on 30 percig inkubáltuk FTO-ban linolsavval és anélkül. A zsírsav nélkül inkubált vírus negatív festése azt mutatta, hogy jellegzetes, tüskékkel borított lövedék alakú részecskék jellemzőek, amelyek összetekeredett nukleokapszidokat tartalmaznak (la. ábra).
0,5 mg/ml linolsavval való inkubálás átjárhatóvá teszi a virusburkot, ezáltal festék juthat be sok részecskébe (lb. ábra). A hatás sokkal kifejezettebb, ha 1 mg/ml linolsavat használunk (le. ábra), ekkor a részecskék szétesése is megtörténik. Az elektronmikroszkópos vizsgálatokhoz használt minták titrálása alapján 0,5 mg/ml linolsav esetén a virus-titer tízszeresen csökken, míg 1 mg/ml ezerszeres csökkenést okoz. Hasonló eredmények kaphatók, ha VSV-t alacsony koncentrációban arachidonsavval inkubáljuk, majd a viruso* « • *
- 15 kát negatív festéssel vizsgáljuk.
A sejtmembrán zsírsavak hatására történő szétesése
A zsírsavakkal kezelt VSV negatív festése arra mutat, hogy a vírus inaktiválása a virusburok szétesésének a következménye, amely virusburok a gazdasejt plazmamembránjából jön létre. A sejtmembránra kifejtett hatás tanulmányozása céljából Verő sejtek vagy juh fibroblasztok egyrétegű kulturált 37 °C-on 30 percig inkubáltuk FTO-ban, linolsav nélkül, illetve 1 mg/ml linolsav jelenlétében, majd pásztázó elektronmikroszkóppal vizsgáltuk. A kontrollsejtek esetében, amelyeket csak FTO-val inkubáltunk, a sejtmembrán érintetlen (2c. ábra), mig az 1 mg/ml linolsavval kezelt sejteknél a sejtmembrán részben vagy teljesen szétesett, a sejt lizisét okozva. Ugyanez a hatás figyelhető meg a 4 °C-on 4 napig tartott tejjel kezelt sejteknél is (2b. ábra). Ez a tejminta (az 1. számú) (1. táblázat) 7 mg/ml zsírsavat tartalmazott és erősen antivirális hatású volt. Másrészről, a 4 napig 86 °C-on tárolt 1. tejminta (1. táblázat) semmiféle hatással nem volt a sejtmembránra (2a. ábra).
Az la-lc. ábrák mikroszkópos felvételei a linolsav hatását mutatják negatívan festett VSV részecskékre. Az elektronmikroszkópos felvételekhez használt minták titrálása 0,5 mg/ml linolsav esetén tízszeres virustiter-csökkenést mutat, mig 1 mg/ml koncentrációnál a csökkenés tízezerszeres. Hasonló eredmények kaphatók alacsony koncentrációban alkalmazott arachidonsavval történő inkubálás után • ·· • ·
- 16 végzett negatív festésű VSV vírusoknál.
Ezután azt vizsgáltuk meg, vajon az antivirális zsírsavak hatása additiv-e, tehát egy keverék egyik antivirális komponense koncentrációjának csökkenése kompenzálható-e egy másik zsírsav hozzáadásával vagy annak a koncentrációjának növelésével. Olyan zsirsavkeverékeket állítottunk össze, amelyekben az egyes zsírsavak koncentrációja akkora volt, amely vagy nem inaktiválja a vírust, vagy csak kevesebb, mint tízszeres csökkenést okoz a titerben. A zsirsavkeverékeket FTO-ban inkubáltuk a vírussal. Az eredményeket a 4. táblázatban foglaltuk össze. Az a tény, hogy lehetséges antivirális hatású keveréket összeállítani közepes hosszúságú és hosszú láncú zsírsavakból, azt jelzi, hogy a magas koncentrációban használt közepes hosszúságú zsírsavak in vivő potenciális toxikus hatása és az antivirális hatású hosszú láncú zsírsavak szérumalbumin vagy más plazmafehérjék által történő megkötéséből származó aktivitáscsökkenés között egyensúly állítható be.
Antivirális tejminták hatása a HIV-titerre
Anyatej- és csecsemőgyomor-tartalom-mintákat, amelyek HSV-1 és VSV ellen hatásosnak bizonyultak HÍV (AIDS-virus) ellen teszteltünk. Az eredményeket az 5. táblázat tartalmazza .
Mint a többi burokkal rendelkező vírus tesztelésénél, a HÍV vírusokat ötszörösen hígítottuk slgA-ra kimerített anyatejjel vagy gyomortartalommal. Ezért a higitatlan minta • · ·· • 9 · ··· « · ·» ♦ · » ·« · * anti-HIV aktivitása nagyobb, mint a teszt-elegyben mért ezer-százezerszeres titercsökkenés. Az eredmények azt is mutatják, hogy a HÍV ugyanannyira érzékeny a tej lipidjeinek inaktiváló hatásával szemben, mint a többi burokkal rendelkező vírus, amelyeket teszteltünk. Ezért lehetséges lenne nagyszámú lipidkeverék-mintát például HSV-l-gyel szemben tesztelni, ami sokkal olcsóbb, mint a HÍV elleni tesztelés, majd azután csak az ígéretes keverékeket kellene az AIDS-virus ellen tesztelni.
Egy antivirális monoglicerid hatása a CMV titerre Monokaprint (10:1), amely előzőleg 2 mM koncentrációban a HSV-1 hatásos inaktivátorának bizonyult, három különböző CMV törzs ellen teszteltünk. A vírusokat 10 % foetális borjuszérumot tartalmazó fenntartó tápoldatban inkubáltuk. Az eredmények, melyeket a 6. táblázatban foglaltunk össze, arra utalnak, hogy a CMV, csakúgy mint más burokkal rendelkező vírusok, mint a HSV-1 és a HÍV, inaktiválható szérumtartalmu tápoldatban.
HSV-1 inaktiválása monogliceridek által humán szérumban
HSV-1 vírust közvetlenül humán szérumhoz adtunk és a vírus inaktiválását monokaprin (10:0), illetve monolaurin (12:0) jelenlétében inkubáltuk. Az eredmények a 7. táblázatban láthatók.
A monolaurin 4 mg/ml koncentrációban csak századrészére csökkentette a HSV-1 titert, míg a monokaprin ugyanebben a ·· ·4 • · · ··· · · • ♦ · · ·· ·· koncentrációban tízezerszeres titercsökkenést idézett elő. In vitro kísérleteinkben a monolaurin nagyobb antivirális aktivitást mutatott moláris koncentrációra vonatkoztatva, mint a monokaprin. A szérumban kapott eredmények azt sugallják, hogy a nem-specifikus kölcsönhatások, amelyek a szérumban fellépnek, valamint a plazma és más vértermékek legalább olyan fontosak, mint az eredendő antivirális aktivitás, annak meghatározásában, hogy mely monoglicerideket kell alkalmazni az emberi vér és vértermékek esetén a virus-kórokozók inaktiválása céljából.
A HSV-1 monogliceridek által történő inaktiválása csecsemőtápszerben
Ha monoglicerideket adunk egy másik összetett folyadékrendszerhez, a csecsemőtápszerhez (Enfamil), különbségeket figyelhetünk meg a HSV-1 elpusztításában, a szérumhoz hasonlóan. Amint a 8. táblázatban összefoglalt adatokból látható, a csecsemőtápszerben, csakúgy, mint a humán szérumban, a monokaprin tűnik a leghatékonyabbnak a burokkal rendelkező vírusokkal szemben. A fenntartó tápoldatban a monolinolein ugyanolyan virustitercsökkenést okozott, mint a monokaprin, de harmadakkora koncentrációban (moláris koncentráció). A csecsemőtápszerben a monokaprin az alkalmazott koncentrációban több mint hatvanszor volt hatékonyabb, mint a monolinolein.
• · · ·ν· ·· • 4 ·· ··44
Monogliceridek hozzáadásának hatása az emberi vér vörös- és fehérvérsejtjeire mg/ml-es koncentrációban, amely előzőleg antivirálisnak bizonyult, monokaprint adtunk emberi teljes vérmintákhoz és az össz-vörösvérsejtszámot és az össz-fehérvérsejtszámot összehasonlítottuk az ugyanerre a mintára a lipid-hozzáadás előtt kapott értékekkel. A 9. táblázatban felsorolt adatok azt mutatják, hogy a monokaprin olyan koncentrációban, amely a burokkal rendelkező vírusokból 4,0 log^g egyedet elpusztít, ha humán szérumhoz adjuk, a teljes vérben nem okozza sem a vörös-, sem a fehérvérsejtek lizisét.
Az anyatej és a tisztított monogliceridek antibakteriális hatása
A zsírsavak és a monogliceridek nemcsak antivirális, hanem antibakteriális hatással is rendelkeznek. Anyatejjel táplált csecsemők gyomorszondával nyert gyomortartalmát (amelyet Dr. William C. Heird-től, a Columbia Presbiteriánus Orvosi Központból kaptunk) antibakteriális hatás szempontjából Staphylococcus epidermis (Gram +), Escherichia coli (Gram -) és Salmonella enteritidis (Gram -) ellen teszteltük. Az eredmények a 10. táblázatban láthatók.
Az antivirális gyomortartalmak egyben antibakteriális hatásúak is voltak, egyaránt elpusztítva a Gram + és Gram baktériumokat. Mivel az anyatej mind közepes, mind hosszú láncú zsírsavakat tartalmaz, ezután azt határoztuk meg, hogy a Gram + és Gram - baktériumok egyformán érzékenyek-e a kü20 lönböző lánchosszuságu zsírsavakra. Az eredményeket a 11. táblázat tartalmazza.
A Gram + baktériumokat összemérhetően inaktiválták a közepes láncú telített és a hosszú láncú telítetlen monogliceridek. Ugyanakkor, a Gram - baktériumok, az E. coli és a S. enteritidis esetében a hosszú láncú telítetlen zsírsavak és a monolaurin hatástalannak bizonyultak. A H. influenza vírust azonban inaktiválta a monolaurin, tehát a különböző Gram - baktériumok eltérő érzékenységüek lehetnek a monogliceridekkel szemben. A baktériumok inaktiválásában fellépő különbségek oka a baktériumok fala, membránja vagy mindkettő lehet. Pásztázó elektronmikroszkópos felvételeket készítettünk (nem közöltük) monolaurinnal kezelt S. epidermidisről, amelyeken látható, hogy a baktériumok teljesen szétestek. Ezért lehetséges úgy manipulálni a különböző monogliceridekkel és koncentrációjukkal, hogy bizonyos membránokat szétroncsoljunk, másokat viszont érintetlenül hagyjunk.
Az anyatej nemcsak tárolás során, hanem a csecsemőgyomorban is antivirális hatásúvá válik az etetéstől számított egy órán belül. A tárolt tejben fellépő antivirális aktivitás a tejben található lipoprotein-lipázok szintjével van összefüggésben, arra utalva, hogy oka a lipid hidrolízis során felszabaduló zsírsavakban és más termékekben rejlik. Hasonló eredményekről számoltak be előzőleg Welsh és munka21 társai /1, II/. Az itt közölt adatok azt mutatják, hogy a tárolt anyatej antivibrális hatását a lipolizis okozza, az anyatejben leggyakrabban megtalálható kilenc zsírsav közül pedig hét igen aktivan pusztítja el a burokkal rendelkező vírusokat. Legaktivabbnak a többszörösen telítetlen hosszú láncú zsírsavak bizonyultak, de a közepes hosszúságú telített zsírsavak, különösen a laurinsav és a mirisztinsav szintén mutattak aktivitást. A monokaprin és a monolaurin a megfelelő szabad zsírsavaknál tízszer alacsonyabb koncentrációban mutatott aktivitást, mig a monomirisztin egyenletesen kevésbé aktívnak bizonyult. A hosszú láncú zsírsavak, amelyek az anyatejben található zsírsavak mintegy 30 %-át teszik ki, és a rövid láncú zsírsavak, amelyek elterjedtebbek a tehéntejben, nem, vagy csak alig voltak antivirális hatásúak. A zsirsavkoncentráció, amely tízezerszeres csökkenést okoz a virustiterekben in vitro (2. táblázat), az anyatejben található zsirsavkoncentrációk tartományába esik. Az eredmények arra utalnak, hogy amint a tej trigliceridjeinek lipolizise előrehalad, tárolás során vagy a gyomor-bél traktusban, az antivirális lipidek két fajtája, monogliceridek és szabad zsírsavak keletkeznek. Lehetséges, hogy a lipidek ezen két fajtája különböző hatékonysággal rendelkezik, a belekben található kórokozók ellen. Ez igaz lehet az egyes lipidosztályok tagjai esetében is.
Az eredmények hasonlóak a különböző vírusokkal korábban végzett tanulmányokéihoz és megerősítik a tejben található legtöbb zsírsav antivirális hatását. Az elektronmikroszkópos vizsgálatok azt mutatják, hogy az antivirális hatást elsősorban a virusburok zsírsavak hatására bekövetkező szétesése okozza. Hasonló eredményekről számolnak be Sarkar és munkatársai, akik az anyatej tejszín-frakciójával egér emlődaganat vírusát kezelték és a virusburok szétesését figyelték meg. A jelen tanulmány beszámol kultúrában tartott sejtek plazmamembránjának széteséséről, zsírsavakat és tárolt tejet olyan koncentrációban alkalmazva, amelyek inaktiválják a burokkal rendelkező vírusokat. Az erősen antivirális hatásúnak bizonyult zsírsavak és monogliceridek esetében azt találták, hogy sejtmembránok fúzióját idézik elő. Bár a pontos mechanizmus még nem tisztázott, a jelek arra utalnak, hogy a zsírsavak és monoésztereik beépülnek a lipidmembránba és a kettős réteg destabilizálását okozzák. Egy hasonló mechanizmus a sejtmembrán és a virusburok teljes széteséséhez vezethet. A jelen tanulmányban nem vizsgáltuk a sejtek és a burokkal rendelkező vírusok érzékenységét különböző zsirsavkoncentrációknál. Mindazonáltal, egy, hidrofób alkoholokat vizsgáló tanulmány azt mutatta, hogy a vírusok már olyan koncentrációknál elpusztulnak, amelyek látszólag semmiféle hatással nincsenek a tenyésztett sejtekre.
Számos tanulmány azt mutatta, hogy az anyatejjel táplált csecsemőknél sokkal kisebb a fertőzések, különösen a gasztrointesztinális fertőzések előfordulási aránya, mint a mesterségesen táplált csecsemőknél. Mindazonáltal, az anya23 tej zsírsavainak és azok származékainak betegségmegelőző hatása még nem elfogadott tény, annak ellenére, hogy in vitro antimikrobiális hatásuk jól ismert. Bár a legtöbb gasztrointesztinális vírusnak nincs burka, a csecsemők nekrotizációs enterocolitisét egy burokkal rendelkező vírus, a humán bél-koronavírus okozza. A Giardia lamblia, egy belekben élősködő protozoa, amely gyermekeket fertőz meg, in vitro elpusztul az anyatej zsírsavainak hatására, jelezve a zsírsavaknak egy lehetséges anti-giardiális hatását a belekben. Mivel a zsírsavak a sejteket plazmamembránjuk szétroncsolásával pusztítják el, valószínű, hogy nemcsak a Giardiát, hanem más élősködő protozoákat is képesek elölni. Habár néhány tanulmány az emberi és állati, tejfogyasztás utáni gyomortartalom antimikrobiális hatására utal, kiterjedtebb vizsgálatok szükségesek az aktív faktorok jellemzésére és szerepük tisztázására a gasztrointesztinális fertőzések megelőzésében és e fertőzésekből való felgyógyulásban.
A találmány lényege, hogy a zsírsavak és azok monogliceridjei antivirális és/vagy antibakteriális hatással rendelkeznek. Az alkalmazott vegyületek a 4-22 szénatomig terjedő hosszúságú telitett vagy telítetlen zsírsavak csoportjából, valamint az említett zsírsavak glicerinnel alkotott észterei közül választhatók. Előnyben részesített vegyületek a 6-14 szénatomos telitett zsírsavak, valamint ezek monogliceridjei, és a 16-20 szénatomos egyszeresen és többszörösen telítetlen zsírsavak, valamint ezek monogliceridjei.
A zsírsavak és azok monogliceridjei könnyen hozzáférhetők. Ha mégis szükséges, a kivánt monogliceridek előállíthatok a megfelelő zsírsav vagy zsírsavak glicerinnel történő észterezésével, az ismert módszerek szerint.
A fent leirt vegyületek antivirális és/vagy antibakteriális hatást mutatnak. A jelen találmány szerint virusvagy baktériumtartalmu közegek, mint például a vér zsírsavaknak és/vagy azok monogliceridjeinek hatásos mennyiségével kezelhetők. Szintén a találmány tárgyához tartozik, hogy vírussal vagy baktériummal fertőzött emberek vagy melegvérű állatok a találmány szerint előállított elegy alkalmazásával kezelhetők a fertőzés ellen.
Megelőzés célját szolgáló kezelésre a fent említett vegyületek közül egy vagy több alkalmazható ember vagy melegvérű állat esetében, orálisan, parenterálisan, intravénásán, topikusan vagy rektálisan, szokványos gyógyszerkészítmény, azaz olyan készítmény hatóanyagaként, amely alapvetően egy közömbös gyógyszerhordozóból és a hatóanyag hatásos mennyiségéből áll, mint például a tabletta, a drazsé, a kapszula, az ostya, a por, az oldat, a szuszpenzió, az emulzió, a végbélkúp, a krém és hasonlók. A jelen találmányban szereplő vegyületek ilyen alkalmazásra szolgáló hatásos mennyisége nagyságrendileg a kb. 0,001-4 mg/testtömegkg tartományba esik, kedvezőbben kb. a 0,01-3 mg/testtömegkg tartományba, naponta egy-négyszer alkalmazva.
Ha jelen találmányba szereplő vegyületeket megelőzési célokra használjuk, olyan közegekben, mint például a vér, különösen kémcsőben vagy más szokványos kórházi vagy orvosi edényt vagy fémeszközt alkalmazva, a vegyületeket célszerű töményebb dózisokban beadni. Ajánlatos a vegyületeket kb.
mikrogramm/ml-500 mikrogramm/ml vérkoncentrációban, kedvezőbben kb. 25 mg/ml-200 mg/ml vérkoncentrációban, legkedvezőbben kb. 75 mg/ml-100 mg/ml vérkoncentrációban alkalmazni .
1. táblázat
Szabad zsírsavak és a tejben3 mérhető antivirális aktivitás
| T ejminta | Tárolási | Szabad zsír- | VSV-titer | Lipoprotein |
| hőm./idő | savak | csökkenése | lipáz | |
| (°C/nap) | (mg/ml) | (íoSk,) | (U/ml) | |
| 1. | -86/4 | 0,5 | 0 | 336 |
| 23/4 | 12,0 | 4,0 | ||
| 4/4 | 7,0 | 4,0 | ||
| 3. | -86/4 | 0,5 | 0 | 20 |
| 23/4 | 2,0 | 0 | ||
| 4/4 | 2,0 | 0 | ||
| a = Ugyanezeket az | eredményeket | kaptuk a friss | és a -86 °C- |
-on tárolt tej esetében.
2. táblázat
Virusinaktiválás zsírsavakkal 37 °C-on 30 percig történő inkubálás után
Zsírsav Koncentráció3 A virustiter csökkenése
| mg/ml-ben | HSV-1 | vvb | ||
| (mM-ban) | VSV | |||
| vajsav(4:0)c | 10(113) | 0 | N.A.d | N.A. |
| kapronsav(6:0) | 10(86) | 0 | N.A. | N.A. |
| kaprilsav(8:0) | 10(69) | 1,8 | N.A. | 3,2 |
| kaprinsav(10:0) | 4(22) | £ 4,0e | >4,0 | > 3,2 |
| laurinsav(12:0) | 2(10) | £ 4,0 | >4,0 | £3,2 |
| mirisztinsav(14:0) | 4(16) | £ 4,0 | £4,0 | 1,7 |
| palmitinsav(16:0) | 20(78) | 1,0 | 1,0 | 0,7 |
| palmitolsav(16:1) | 2(15) | £ 4,0 | £4,0 | £ 3,2 |
| sztearinsav(18:0) | 20(70) | 0 | N.A. | N.A. |
| olajsav(18:1,cisz) | 2(7) | £ 4,0 | £4,0 | £ 3,2 |
| elaidsav(18:1, | ||||
| transz) | 2(7) | a 4, o | N.A. | N.A. |
| linolsav(18 :2) | 1(3,5) | £ 4,0 | £4,0 | >3,2 |
| linolénsav(18:3) | 1(3,6) | 2 4,0 | £4,0 | £3,2 |
| arachidonsav(20:4) | 0,5(1,6) | £4,0 | N.A. | N.A. |
a = A zsírsav koncentrációja a 37 °C-on 30 percig inkubált viruskeverékekben. Minden zsírsavat két koncentrációban teszteltünk. Az itt szereplő vagy a legkisebb koncentráció, amely 4,0 log^g egységgel csökkentette a virustitert, vagy a legnagyobb vizsgált koncentráció (a vajsav, a kapronsav, a kaprilsav, a palmitinsav és a sztearinsav esetében) b = VV = Visna vírus c = szénatomok száma: kettős kötések száma d = N.A. = nincs adat e = A kontrollvirus titere (log^g), amelyet csak FTO-ban inkubáltunk, 5,5 volt, mig a zsírsav-vírus keverék
-2 -5
-10 hígításában nem volt kimutatható a vírus.
Nem volt lehetséges ezeket a keverékeket kisebb hígításban (10 1 vagy higitatlan) tesztelni, mert toxikusak voltak a sejttenyészetekre. Feltéve, hogy a 10-1 hígításban volt fertőzőképes vírus, a zsirsav-virus
5 keverék legmagasabb lehetséges titere 10 ’ SFD volt, és a virustiter csökkenése (log^g) 4,0-gyel egyenlő (5,5-1,5 = 4,0). Ha a keverék titere kevesebb volt, mint 101’5, a titercsökkenés nagyobb, mint 4,0.
3. táblázat
Virusinaktiválás monogliceridekkel 37 °C-on 30 percig történt inkubálás után
| Monoglicerid | Koncentráció3 (mg/ml-ben, mM-ban) | Virustiter csökkenése | |
| VSV | HSV-1 | ||
| monokaprilin(8:0)d | 2,0(9) | ^4,0 | N.A.C |
| monokaprin(10:0) | 0,5(2) | 4,0 | 3,7 |
| monolaurin(12:0) | 0,25(0,9) | ^4,0 | ^3,7 |
| monomirisztin(14:0) | 2,0(13) | 3,0 | N.A. |
| monoolein(18:1) | l,0(2,8d) | 2,3 | N.A. |
| monolinolein(18:2) | 0,25(0,7) | ^4,0 | N.A. |
a = A legkisebb koncentráció, amely 3,0 log^-szeres csökkenést okoz a virustiterben.
b = szénatomok száma: kettős kötések száma c = N.A. = nincs adat d = A vizsgált koncentrációk (0,5-4 mg/ml) legmagasabb antivirális aktivitása. Ugyanezt az eredményt kaptuk, ha a monogliceridet etanolban oldottuk és a vírushoz való hozzáadása előtt hígítottuk 1:100 arányban FTO-ban.
·· ♦ ·
4. táblázat
Zsirsavkeverékek antivirális aktivitása
| Zsírsav- | Az egyes | Ossz zsír- | A VSV titer |
| keverék | zsírsavak | savkoncent- | csökkenése |
| koncentr. | ráció | (logi0) | |
| (mg/ml) | (mg/ml) | ||
| kaprinsav | 2 | 3 | A3,7 |
| laurinsav | 1 | ||
| laurinsav | 1 | 2 | 3,7 |
| mirisztinsav | 1 | ||
| laurinsav | 1 | 2 | > 3,7 |
| olajsav | 1 | ||
| olajsav | 1 | 1,5 | 3,7 |
| linolsav | 0,5 | ||
| laurinsav | 0,7 | ||
| olajsav | 0,7 | 1,7 | ^3,7 |
| linolsav | 0,3 |
5. táblázat
HÍV inaktiválása antivirális anyatejjel
| Minta | Tárolás a HIV-titer csökkenése (iogi0) | |
| 1. | friss | 0 |
| 1. | 4° | 5,0 |
| 2. | friss | 0 |
| 2. | 4° | 5,0 |
| 3. | friss | 0 |
| 3. | 4° | 3,5 |
| 4. | friss | 0 |
| 4. | gyomortartalom (3 órás | ) 3,0 |
| 6. táblázat | ||
| CMV | -inaktiválás tisztított | lipidekkel |
| Tesztelt | CMV törzs A | CMV-titer csökkenése |
| (log1Q SFD 50 %)x | ||
| AD 169 | ^3,69 | |
| Espilat | .6 3,50 | |
| T owne | ^2,67 |
SFD 50 %-os sejtkultura fertőző dózis • ♦ ·
- 31 7. táblázat
HSV-1 inaktiválás humán szérumban
Hozzáadott monogliceridx
A HSV-1 titer csökkenése kontroll monokaprin 1 mg/ml 0,8 monokaprin 2 mg/ml 1,8 monokaprin 4 mg/ml -^4,0 monolaurin 1 mg/ml 0,8 monolaurin 2 mg/ml 1,5 monolaurin 4 mg/ml 2,0 x = Az inkubációs keverék humán szérumot, HSV-l-et (titer: 5,5) és a jelzett monogliceridet tartalmazta .
*
8. táblázat
HSV-1 elölése csecsemőtápszerben
Hozzáadott monogliceridx A HSV-1 titer csökkenése (iog10)
| monokaprin 0,5 mg/ml | 0 |
| monokaprin 1 mg/ml | 0,3 |
| monokaprin 2 mg/ml | 2,3 |
| monolaurin 0,5 mg/ml | 0,3 |
| monolaurin 1 mg/ml | 0,3 |
| monolaurin 2 mg/ml | 1,0 |
| monoolein 0,5 mg/ml | 0 |
| monoolein 1 mg/ml | 0 |
| monoolein 2 mg/ml | 0 |
| monolinolein 0,5 mg/ml | 0 |
| monolinolein 1 mg/ml | 0,3 |
| monolinolein 2 mg/ml | 0,5 |
x = Az inkubációs keverék csecsemőtápszert, HSV-l-et (titer: 5,5) és a jelzett monogliceridet tartalmazta.
9. táblázat
Vérsejtek stabilitása a hozzáadott monogliceridekkel szemben
Minta Vörösvérsejtekx Fehérvérsejtekx
| kezeletlen | kezelt | kezeletlen | kezelt | |
| 1. | 4,59 | 4,46 | 8,8 | 10,2 |
| 2 . | 5,10 | 4,78 | 6,9 | 7,7 |
| 3. | 5,30 | 5,19 | 7,7 | 8,5 |
| 4. | 4,94 | 4,74 | 6,3 | 7,4 |
| 5. | 5,08 | 4,36 | 10,3 | n,i |
| x = egység | - 10^/mm^ | x = egység | - 10^/mm |
10. táblázat
Anyatej-gyomortartalom antivirális és antibakteriális aktivitásax
Minta l°9ig csökkenés a HSV-l-titerben log^g csökkenés a bakteriális titerben 1 órás humán gyomor1 órás humán gyoX X tartalomban mortartalomban
5. epider- E. coli S. enterimidis tidis
| 1. | > 4,0 | ^5,0 | |
| 2. | ? 4,0 | ^5,0 | >4,0 |
| 3. | > 4,0 | ,>4,0 | |
| 4. | ? 4,0 |
x = Maga az elfogyasztott tej antivirális és antibakteriális hatásra vizsgálva nem mutatott aktivitást.
xx = Valamennyi mintát nem teszteltük ismét valamennyi baktériumtörzsre, mert a gyomortartalom nem volt elegendő mennyiségű.
«« ·· « * · « 4 • · · · • · *·
11. táblázat
Gram + és Gram - baktériumok inaktiválása monogliceridekkel
Monoglicerid^
A baktériumkoncentráció csökkenése
E. S.entecoli1 2 ritiH. influ2 3 enzez’
S. epidermidis
B csoport strepto coccus monokapriloil
| (8:0) | ^5.0 | |
| monokaprin | ||
| (10:0) | 25,0 | - |
monolaurin
| (12:0) | 0 | 0 |
| monoolein | ||
| (18:1) | 0 | 0 |
| monolinolein | ||
| (18:2) | - | - |
| monoeikozenoin | ||
| (20:1) | 0 | 0 |
| 2 8,0 | ^4,0 | |
| >8,0 | 2 4,0 | 4,5 |
| ^8,0 | 2 4,0 | 4,5 |
| - | 24,0 | - |
| - | - | 4,5 |
| 24,0 |
= minden monogliceridet 2 mg/ml-ben alkalmaztunk, = Gram 3 = Hemophilus influenzáé, = Gram +.
··· ·
Claims (16)
1. Eljárás antivirális és/vagy antibakteriális gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve , hogy inért gyógyszerhordozókat, egy vagy több zsírsavat és ezek monogliceridjeit hatásos mennyiségben összekeverjük.
2. Az 1. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve , hogy 1-6 ilyen vegyületet keverünk össze.
3. Az 1. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve , hogy 1-4 ilyen vegyületet keverünk össze.
4. Az 1. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve , hogy zsírsavként 6-14 szénatomos telitett zsírsavat alkalmazunk.
5. Az 1. igénypont szerinti készítmény, azzal jellemezve , hogy zsírsavként 16-20 szénatomos egyszeresen vagy többszörösen telítetlen zsírsavat használunk.
6. Eljárás emberben vagy melegvérű állatban fellépő vagy fennálló vírusos vagy bakteriális fertőzés megelőzésére vagy kezelésére, azzal jellemezve , hogy az említett egyedek a zsírsavak és azok monogliceridjei közül választott egy vagy több vegyület hatásos antivirális vagy antibakteriális mennyiségét orálisan, parenterálisan, intravénásán vagy rektálisan adagolva kapják.
7. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy zsírsavként 6-14 szénatomos telitett zsírsavat használunk.
·» ··
9 · · ··· · · • · « · «· ··
8. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy zsírsavként 16-20 szénatomos egyszeresen vagy többszörösen telítetlen zsírsavat használunk.
9. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy a vírusfertőzés AIDS vírussal történt.
10. A 6. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy a vírusfertőzés herpes vírussal történt.
11. Eljárás vérben kialakuló vagy fennálló vírusos vagy bakteriális aktivitás megelőzésére vagy kezelésére, azzal jellemezve , hogy az említett vért a zsírsavakból és azok monogliceridjeiből álló csoportból választott egy vagy több vegyület hatékony antivirális vagy antibakteriális mennyiségével hozzuk érintkezésbe.
12. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy zsírsavként 6-14 szénatomos telitett zsírsavat használunk.
13. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy zsírsavként 16-20 szénatomos egyszeresen vagy többszörösen telítetlen zsírsavat használunk.
14. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy a vírus az AIDS vírus.
15. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve , hogy a vírus a herpes vírus.
16. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jelle mezve , hogy a vér kémcsövekben van.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/140,078 US4997851A (en) | 1987-12-31 | 1987-12-31 | Antiviral and antibacterial activity of fatty acids and monoglycerides |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU891084D0 HU891084D0 (en) | 1990-03-28 |
| HUT55223A true HUT55223A (en) | 1991-05-28 |
Family
ID=22489651
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU891084A HUT55223A (en) | 1987-12-31 | 1988-12-29 | Process for producing pharmaceutical composition comprising fatty acids and monoglycerides with antiviral and antibacterial effect |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4997851A (hu) |
| EP (1) | EP0346451A4 (hu) |
| JP (1) | JPH02502915A (hu) |
| KR (1) | KR900700094A (hu) |
| AU (2) | AU619797B2 (hu) |
| HU (1) | HUT55223A (hu) |
| WO (1) | WO1989006124A1 (hu) |
Families Citing this family (51)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5466714A (en) * | 1987-12-31 | 1995-11-14 | Research Foundation For Mental Health Hygiene, Inc. | Spermicidal and cytocidal fatty acid compositions |
| US5641503A (en) * | 1989-04-27 | 1997-06-24 | Mcneil-Ppc, Inc. | Additives to tampons |
| FI902821A0 (fi) * | 1989-06-12 | 1990-06-06 | Res Found Mental Hygiene | Foerminskning av infektionsspridning medelst blodbehandlingsapparatur. |
| FI912955A (fi) * | 1990-06-25 | 1991-12-26 | Res Found Mental Hygiene | Antimikroba fettsyrasammansaettningar. |
| NZ264247A (en) * | 1990-10-30 | 1996-07-26 | Mcneil Ppc Inc | Absorbent product containing mono- or diesters of a polyhydric alcohol and a c8-18 fatty acid having at least one free hydroxyl group in sufficient amount to inhibit the production of enterotoxins a, b and c by staph. aureus |
| NZ250714A (en) * | 1990-10-30 | 1996-05-28 | Mcneil Ppc Inc | Liquid composition comprising esters of higher fatty acids for use as a vaginal douche and to prevent toxic shock toxin production |
| EP0591303B1 (en) * | 1991-06-24 | 2000-12-06 | Women's And Children's Hospital | Methods and compositions for treating malaria and other diseases |
| SE500777C2 (sv) * | 1992-04-14 | 1994-08-29 | Hydro Pharma Ab | Antimikrobiell komposition med potentierad effekt innehållande bl a vissa monoglycerider, förfarande för framställning därav samt användning därav |
| GB9304746D0 (en) * | 1993-03-09 | 1993-04-28 | Scotia Holdings Plc | Treatment of viral infections |
| EP0760650B1 (en) * | 1994-05-20 | 2002-07-31 | Novavax, Inc. | Antimicrobial oil-in-water emulsions |
| US5681802A (en) * | 1994-06-01 | 1997-10-28 | Lever Brothers Company, Division Of Conopco, Inc. | Mild antimicrobial liquid cleansing formulations comprising buffering compound or compounds as potentiator of antimicrobial effectiveness |
| US6008228A (en) * | 1995-06-06 | 1999-12-28 | Hoffman-La Roche Inc. | Pharmaceutical compositions containing proteinase inhibitors |
| DE19538402A1 (de) * | 1995-10-14 | 1997-04-17 | Boehringer Mannheim Gmbh | Lipidalkohole als neue immunsuppressive und antivirale Arzneimittel |
| SE9602280D0 (sv) * | 1996-06-10 | 1996-06-10 | Pharmatrix Ab | Immunstimulerande lipidformulering |
| WO1998016217A1 (en) * | 1996-10-17 | 1998-04-23 | Isaacs Charles E | Disinfecting contact lenses |
| US6232333B1 (en) | 1996-11-21 | 2001-05-15 | Abbott Laboratories | Pharmaceutical composition |
| AUPO410696A0 (en) * | 1996-12-06 | 1997-01-09 | Csl Limited | Inactivation of viruses by incubation with caprylate |
| AU717541B2 (en) * | 1996-12-06 | 2000-03-30 | Csl Limited | Inactivation of viruses by incubation with caprylate |
| US6455586B1 (en) * | 1998-12-15 | 2002-09-24 | Leonard L. Kaplan | Topical immunomodulating compositions for treatment of aids, Hepatitis B & C, other infectious diseases, and cancer |
| FR2792201B1 (fr) * | 1999-04-15 | 2001-11-02 | Donatien Mavoungou | Procede du renforcement immunitaire et du developpement d'un transporteur lipidique pour une therapie genique anti-vih et anti-bacterienne |
| JP5259905B2 (ja) * | 2000-06-20 | 2013-08-07 | エヌ・ブイ・ニュートリション・サイエンシス | 抗菌剤として適用可能な中鎖脂肪酸 |
| US20100056628A1 (en) * | 2006-09-07 | 2010-03-04 | Stockel Richard F | Preservative compositions |
| US8193244B1 (en) | 2008-05-29 | 2012-06-05 | Nevada Naturals, Inc. | Antimicrobial agents |
| US8795638B1 (en) | 2003-08-26 | 2014-08-05 | Nevada Naturals Inc. | Compositions for dental care |
| JP4091566B2 (ja) * | 2003-06-03 | 2008-05-28 | 株式会社マンダム | 防腐殺菌剤並びに該防腐殺菌剤を配合した化粧料、医薬品及び食品 |
| CN102845422A (zh) * | 2003-09-09 | 2013-01-02 | 3M创新有限公司 | 抗菌组合物和方法 |
| BRPI0414198B1 (pt) * | 2003-09-09 | 2014-09-30 | 3M Innovative Properties Co | Composição antimicrobiana, kit antimicrobiano e métodos de usar o kit e a composição e método de tratar carne de boi moída |
| US20050058673A1 (en) * | 2003-09-09 | 2005-03-17 | 3M Innovative Properties Company | Antimicrobial compositions and methods |
| WO2005047475A2 (en) * | 2003-11-11 | 2005-05-26 | Regents Of The University Of Minnesota | Regulation of cell membrane-mediated effects |
| US8796332B2 (en) | 2004-08-03 | 2014-08-05 | Regents Of The University Of Minnesota | Compositions and methods for controlling infections |
| JP2008533048A (ja) * | 2005-03-10 | 2008-08-21 | スリーエム イノベイティブ プロパティズ カンパニー | 耳の感染症の治療方法 |
| KR20070113281A (ko) * | 2005-03-10 | 2007-11-28 | 쓰리엠 이노베이티브 프로퍼티즈 컴파니 | 항미생물성 조성물 및 방법 |
| US20060229364A1 (en) * | 2005-03-10 | 2006-10-12 | 3M Innovative Properties Company | Antiviral compositions and methods of use |
| WO2006099359A2 (en) * | 2005-03-10 | 2006-09-21 | 3M Innovative Properties Company | Methods of reducing microbial contamination |
| CA2598985A1 (en) * | 2005-03-10 | 2006-09-21 | 3M Innovative Properties Company | Antimicrobial pet wipes and methods |
| US7670997B2 (en) * | 2006-06-08 | 2010-03-02 | Bausch & Lomb Incorporated | Ophthalmic compositions comprising a branched, glycerol monoalkyl compound and a fatty acid monoester |
| US20080075793A1 (en) * | 2006-09-21 | 2008-03-27 | Dunshee Wayne K | Antiviral compositions and methods of use |
| US20080200890A1 (en) * | 2006-12-11 | 2008-08-21 | 3M Innovative Properties Company | Antimicrobial disposable absorbent articles |
| JP2009155257A (ja) * | 2007-12-26 | 2009-07-16 | Taiyo Corp | 抗菌剤及びそれを含有する口腔用組成物並びに飲食品 |
| JP5687187B2 (ja) * | 2008-04-30 | 2015-03-18 | シーカ・テクノロジー・アーゲー | エポキシ樹脂組成物のための活性剤 |
| US9023891B2 (en) | 2008-05-29 | 2015-05-05 | Nevada Naturals, Inc. | Synergistic antimicrobial agents |
| JP2010163397A (ja) * | 2009-01-16 | 2010-07-29 | Japan Ecologia Co Ltd | 抗菌性組成物 |
| WO2010119966A1 (ja) * | 2009-04-17 | 2010-10-21 | シャボン玉石けん株式会社 | 抗ウイルス剤及び洗浄剤 |
| JP5506023B2 (ja) * | 2009-05-07 | 2014-05-28 | 理研ビタミン株式会社 | インフルエンザウイルス感染防止剤 |
| US20110268761A1 (en) | 2010-03-02 | 2011-11-03 | Hapten Pharmaceuticals, Llc | Effective Sensitizing Dose of a Gelled Immunomodulating Topical Composition |
| WO2012058795A1 (zh) * | 2010-11-02 | 2012-05-10 | 广州白云山和记黄埔中药有限公司 | 不饱和脂肪酸用于抑制病毒复制和/或感染的用途 |
| US8834857B1 (en) | 2011-01-18 | 2014-09-16 | Nevada Naturals Inc. | Deodorizing and skin cleaning |
| JP7505883B2 (ja) | 2016-06-20 | 2024-06-25 | カプレット エーホーエフ． | 脂質の抗微生物効果を増大する相乗効果 |
| US10624368B1 (en) | 2018-02-01 | 2020-04-21 | Nevada Naturals Inc. | Control of pathogenic bacteria in foods |
| US11197824B2 (en) * | 2020-01-16 | 2021-12-14 | David Changaris | Solution and method for reducing the virulence of viruses, bacteria,yeasts, or fungus |
| WO2024053654A1 (ja) * | 2022-09-07 | 2024-03-14 | 積水化学工業株式会社 | ウイルス感染阻止剤、樹脂組成物、合成樹脂成形用マスターバッチ及びウイルス感染阻止製品 |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4489097A (en) * | 1976-07-28 | 1984-12-18 | The Procter & Gamble Company | Intravenous solutions with antimicrobial agent |
| EP0049354A3 (en) * | 1980-09-08 | 1983-02-23 | Sterling Drug Inc. | Composition for therapeutic virucidal use, and articles and packages containing said composition |
| US4406884A (en) * | 1981-06-23 | 1983-09-27 | The Procter & Gamble Company | Topical antimicrobial composition |
| DK315482A (da) * | 1981-07-20 | 1983-01-21 | Kimberly Clark Co | Fremgangsmaade til hindring af spredning af aandedraetsvira og middel til anvendelse ved fremgangsmaaden |
| US4513008A (en) * | 1982-07-30 | 1985-04-23 | The Vinoxen Company, Inc. | Virucidal compositions and therapy |
| US4520132A (en) * | 1982-09-27 | 1985-05-28 | Pennwalt Corporation | Use of undecylenic acid to treat herpes labialis |
| FR2588187B1 (fr) * | 1985-10-07 | 1989-04-14 | Rochas Parfums | Nouvelles compositions cosmetiques ou dermatologiques riches en acides gras essentiels presents a la fois sous forme de triglycerides et sous forme libre ou salifiee |
| US4806352A (en) * | 1986-04-15 | 1989-02-21 | Ribi Immunochem Research Inc. | Immunological lipid emulsion adjuvant |
| US4841023A (en) * | 1986-06-25 | 1989-06-20 | New York Blood Center, Inc. | Inactivation of viruses in labile protein-containing compositions using fatty acids |
-
1987
- 1987-12-31 US US07/140,078 patent/US4997851A/en not_active Expired - Lifetime
-
1988
- 1988-12-29 AU AU29463/89A patent/AU619797B2/en not_active Ceased
- 1988-12-29 EP EP19890901646 patent/EP0346451A4/en not_active Withdrawn
- 1988-12-29 AU AU29463/89A patent/AU2946389A/en active Granted
- 1988-12-29 JP JP89501625A patent/JPH02502915A/ja active Pending
- 1988-12-29 KR KR1019890701641A patent/KR900700094A/ko not_active Application Discontinuation
- 1988-12-29 HU HU891084A patent/HUT55223A/hu unknown
- 1988-12-29 WO PCT/US1988/004696 patent/WO1989006124A1/en not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HU891084D0 (en) | 1990-03-28 |
| EP0346451A1 (en) | 1989-12-20 |
| AU619797B2 (en) | 1992-02-06 |
| WO1989006124A1 (en) | 1989-07-13 |
| US4997851A (en) | 1991-03-05 |
| KR900700094A (ko) | 1990-08-11 |
| EP0346451A4 (en) | 1991-04-10 |
| AU2946389A (en) | 1989-08-01 |
| JPH02502915A (ja) | 1990-09-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HUT55223A (en) | Process for producing pharmaceutical composition comprising fatty acids and monoglycerides with antiviral and antibacterial effect | |
| US5434182A (en) | Antibacterial fatty acid compositions | |
| EP0465423A2 (en) | Antimicrobial fatty compositions | |
| Isaacs et al. | Antimicrobial activity of lipids added to human milk, infant formula, and bovine milk | |
| Thormar et al. | Inactivation of enveloped viruses and killing of cells by fatty acids and monoglycerides | |
| JP5006886B2 (ja) | 広域抗菌スペクトルを有する改変ココナッツ油 | |
| BERGSSON et al. | Killing of Gram‐positive cocci by fatty acids and monoglycerides Note | |
| Isaacs et al. | Addition of lipases to infant formulas produces antiviral and antibacterial activity | |
| Isaacs | The antimicrobial function of milk lipids | |
| US4997761A (en) | Phosphatidyl treatment of viral disease | |
| EP0429645A1 (en) | Reducing the spread of infection by blood handling equipment | |
| JP4976307B2 (ja) | 新規な抗ウイルス性および免疫刺激性の医薬組成物 | |
| JP2022121438A (ja) | 脂質の抗微生物効果を増大する相乗効果 | |
| Shoji et al. | Allyl compounds selectively killed human immunodeficiency virus (type 1)-infected cells | |
| US5466714A (en) | Spermicidal and cytocidal fatty acid compositions | |
| US20030133829A1 (en) | Process for inactivating pathogens in a biological material | |
| Dayrit et al. | The Potential of coconut oil and its derivatives as effective and safe antiviral agents against the novel coronavirus | |
| US20220304916A1 (en) | Modified black soldier fly larvae oil with modified lauric acid for treatment against biofilm formation and microorganism growth | |
| EP0139551B1 (fr) | Medicament immunomodulateur d'origine biologique et son procédé de préparation | |
| WO2021229533A1 (en) | A fatty acid based composition for treatment and/or prevention of enveloped-virus related infections | |
| US4992475A (en) | Butylhydroxyanisoles for the treatment of retroviral diseases | |
| JP2000515892A (ja) | 抗微生物剤として水混和性脂質誘導体を含有する栄養剤 | |
| US20220160758A1 (en) | Antiviral, antibacterial and/or anti fungal compositions, applications and therapy | |
| ISAACS et al. | Stuten IsIrrnd, zyxwvutsrqponmlkjih | |
| Winterrowd et al. | Effects of Bile Salt‐Stimulated Lipase‐Treated Triglycerides and Free Fatty Acids on Extracellular Stages of Eimeria tenella |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| DFC4 | Cancellation of temporary prot. due to refusal |