HU227572B1 - Process and modified media for preparing callus- and cell suspension cultures of hypericum perforatum l. - Google Patents
Process and modified media for preparing callus- and cell suspension cultures of hypericum perforatum l. Download PDFInfo
- Publication number
- HU227572B1 HU227572B1 HU0600245A HUP0600245A HU227572B1 HU 227572 B1 HU227572 B1 HU 227572B1 HU 0600245 A HU0600245 A HU 0600245A HU P0600245 A HUP0600245 A HU P0600245A HU 227572 B1 HU227572 B1 HU 227572B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- medium
- modified
- acid
- amount
- sucrose
- Prior art date
Links
- 206010020649 Hyperkeratosis Diseases 0.000 title claims abstract description 42
- 244000141009 Hypericum perforatum Species 0.000 title claims abstract description 23
- 235000017309 Hypericum perforatum Nutrition 0.000 title claims abstract description 21
- 238000004114 suspension culture Methods 0.000 title claims abstract description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 10
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims abstract description 27
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 claims abstract description 20
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims abstract description 17
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 177
- 239000000725 suspension Substances 0.000 claims description 25
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 24
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 22
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 22
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 22
- KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N boric acid Chemical compound OB(O)O KGBXLFKZBHKPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 239000004327 boric acid Substances 0.000 claims description 19
- 239000005556 hormone Substances 0.000 claims description 19
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 claims description 19
- 239000003375 plant hormone Substances 0.000 claims description 19
- 230000000408 embryogenic effect Effects 0.000 claims description 16
- 235000021073 macronutrients Nutrition 0.000 claims description 15
- 239000005631 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid Substances 0.000 claims description 13
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 claims description 13
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 claims description 12
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 claims description 12
- 230000003050 macronutrient Effects 0.000 claims description 11
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 10
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 9
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 claims description 7
- 239000005018 casein Substances 0.000 claims description 6
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 claims description 6
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 claims description 6
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 claims description 6
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 claims description 6
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 claims description 6
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 claims description 5
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 claims description 5
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 claims description 5
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 claims description 4
- 241000189662 Calla Species 0.000 claims description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N acetic acid Substances CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 238000009395 breeding Methods 0.000 claims description 4
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 claims description 4
- 239000011785 micronutrient Substances 0.000 claims description 4
- 235000013369 micronutrients Nutrition 0.000 claims description 4
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 claims description 3
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 3
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 claims description 3
- -1 BAF compound Chemical class 0.000 claims description 2
- 239000002211 L-ascorbic acid Substances 0.000 claims description 2
- 235000000069 L-ascorbic acid Nutrition 0.000 claims description 2
- 206010029897 Obsessive thoughts Diseases 0.000 claims description 2
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 claims description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 claims description 2
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 claims description 2
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims description 2
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims description 2
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims description 2
- 239000007640 basal medium Substances 0.000 claims 4
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims 4
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims 3
- 239000011591 potassium Substances 0.000 claims 3
- 229910052700 potassium Inorganic materials 0.000 claims 3
- 230000001172 regenerating effect Effects 0.000 claims 3
- 244000205574 Acorus calamus Species 0.000 claims 2
- 235000011996 Calamus deerratus Nutrition 0.000 claims 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 claims 2
- NAVWVHRQSDHCHD-UHFFFAOYSA-N 2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;potassium Chemical compound [K].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O NAVWVHRQSDHCHD-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 240000003291 Armoracia rusticana Species 0.000 claims 1
- 235000011330 Armoracia rusticana Nutrition 0.000 claims 1
- 241000833016 Ballus Species 0.000 claims 1
- 229910021260 NaFe Inorganic materials 0.000 claims 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 241000863480 Vinca Species 0.000 claims 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 claims 1
- 239000002199 base oil Substances 0.000 claims 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 claims 1
- 239000003518 caustics Substances 0.000 claims 1
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims 1
- 239000000796 flavoring agent Substances 0.000 claims 1
- 235000019634 flavors Nutrition 0.000 claims 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 claims 1
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 claims 1
- 239000008267 milk Substances 0.000 claims 1
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 claims 1
- 239000003607 modifier Substances 0.000 claims 1
- 150000002814 niacins Chemical class 0.000 claims 1
- 239000003921 oil Substances 0.000 claims 1
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 claims 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 claims 1
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims 1
- 235000014107 unsaturated dietary fats Nutrition 0.000 claims 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 23
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 abstract description 18
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N iron Substances [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 17
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 abstract description 14
- 239000000463 material Substances 0.000 abstract description 3
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 abstract description 2
- 229930195732 phytohormone Natural products 0.000 abstract 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 abstract 1
- REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N Quercetin Chemical compound C=1C(O)=CC(O)=C(C(C=2O)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 REFJWTPEDVJJIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 12
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 12
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 9
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N Quercetagetin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C(O)=C(O)C=C2O1 ZVOLCUVKHLEPEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N Rhynchosin Natural products C1=C(O)C(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=CC(O)=C(O)C=C2O1 HWTZYBCRDDUBJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 6
- MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N kaempferol Natural products OC1=C(C(=O)c2cc(O)cc(O)c2O1)c3ccc(O)cc3 MWDZOUNAPSSOEL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229960001285 quercetin Drugs 0.000 description 6
- 235000005875 quercetin Nutrition 0.000 description 6
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 5
- 150000002215 flavonoids Chemical class 0.000 description 5
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 5
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 4
- PHOKTTKFQUYZPI-UHFFFAOYSA-N hypericin Natural products Cc1cc(O)c2c3C(=O)C(=Cc4c(O)c5c(O)cc(O)c6c7C(=O)C(=Cc8c(C)c1c2c(c78)c(c34)c56)O)O PHOKTTKFQUYZPI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- BTXNYTINYBABQR-UHFFFAOYSA-N hypericin Chemical compound C12=C(O)C=C(O)C(C(C=3C(O)=CC(C)=C4C=33)=O)=C2C3=C2C3=C4C(C)=CC(O)=C3C(=O)C3=C(O)C=C(O)C1=C32 BTXNYTINYBABQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229940005608 hypericin Drugs 0.000 description 4
- SSKVDVBQSWQEGJ-UHFFFAOYSA-N pseudohypericin Natural products C12=C(O)C=C(O)C(C(C=3C(O)=CC(O)=C4C=33)=O)=C2C3=C2C3=C4C(C)=CC(O)=C3C(=O)C3=C(O)C=C(O)C1=C32 SSKVDVBQSWQEGJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000002002 slurry Substances 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 4
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 3
- 239000013065 commercial product Substances 0.000 description 3
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 229940062606 hyperici herba Drugs 0.000 description 3
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 3
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 3
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N Bioquercetin Natural products CC1OC(OCC(O)C2OC(OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5)C(O)C2O)C(O)C(O)C1O JMGZEFIQIZZSBH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000219357 Cactaceae Species 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- OVSQVDMCBVZWGM-SJWGPRHPSA-N Hyperin Natural products O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OVSQVDMCBVZWGM-SJWGPRHPSA-N 0.000 description 2
- FVQOMEDMFUMIMO-UHFFFAOYSA-N Hyperosid Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2OC1C1=CC=C(O)C(O)=C1 FVQOMEDMFUMIMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- LUJAXSNNYBCFEE-UHFFFAOYSA-N Quercetin 3,7-dimethyl ether Natural products C=1C(OC)=CC(O)=C(C(C=2OC)=O)C=1OC=2C1=CC=C(O)C(O)=C1 LUJAXSNNYBCFEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- PUTDIROJWHRSJW-UHFFFAOYSA-N Quercitrin Natural products CC1OC(Oc2cc(cc(O)c2O)C3=CC(=O)c4c(O)cc(O)cc4O3)C(O)C(O)C1O PUTDIROJWHRSJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- OXGUCUVFOIWWQJ-XIMSSLRFSA-N acanthophorin B Natural products O[C@H]1[C@H](O)[C@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OXGUCUVFOIWWQJ-XIMSSLRFSA-N 0.000 description 2
- 235000010419 agar Nutrition 0.000 description 2
- 230000001430 anti-depressive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N eriodictyol 7-O-rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C=C3C(C(C(O)=C(O3)C=3C=C(O)C(O)=CC=3)=O)=C(O)C=2)O1 IVTMALDHFAHOGL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 2
- NQYPTLKGQJDGTI-FCVRJVSHSA-N hyperoside Natural products OC[C@H]1O[C@@H](OC2=C(Oc3cc(O)cc(O)c3[C@H]2O)c4ccc(O)c(O)c4)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O NQYPTLKGQJDGTI-FCVRJVSHSA-N 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 2
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 2
- 239000006870 ms-medium Substances 0.000 description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 2
- 150000002978 peroxides Chemical class 0.000 description 2
- OVSQVDMCBVZWGM-DTGCRPNFSA-N quercetin 3-O-beta-D-galactopyranoside Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OVSQVDMCBVZWGM-DTGCRPNFSA-N 0.000 description 2
- OEKUVLQNKPXSOY-UHFFFAOYSA-N quercetin 3-O-beta-D-glucopyranosyl(1->3)-alpha-L-rhamnopyranosyl(1->6)-beta-d-galactopyranoside Natural products OC1C(O)C(C(O)C)OC1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OEKUVLQNKPXSOY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N quercetin rutinoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 FDRQPMVGJOQVTL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QPHXPNUXTNHJOF-UHFFFAOYSA-N quercetin-7-O-beta-L-rhamnopyranoside Natural products OC1C(O)C(O)C(C)OC1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(O)=C(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)OC2=C1 QPHXPNUXTNHJOF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- BBFYUPYFXSSMNV-UHFFFAOYSA-N quercetin-7-o-galactoside Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OC1=CC(O)=C2C(=O)C(O)=C(C=3C=C(O)C(O)=CC=3)OC2=C1 BBFYUPYFXSSMNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OXGUCUVFOIWWQJ-HQBVPOQASA-N quercitrin Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@H]1OC1=C(C=2C=C(O)C(O)=CC=2)OC2=CC(O)=CC(O)=C2C1=O OXGUCUVFOIWWQJ-HQBVPOQASA-N 0.000 description 2
- ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N rutin Natural products CC1OC(OCC2OC(O)C(O)C(O)C2O)C(O)C(O)C1OC3=C(Oc4cc(O)cc(O)c4C3=O)c5ccc(O)c(O)c5 ALABRVAAKCSLSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N rutin Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](C)O[C@@H]1OC[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](OC=2C(C3=C(O)C=C(O)C=C3OC=2C=2C=C(O)C(O)=CC=2)=O)O1 IKGXIBQEEMLURG-BKUODXTLSA-N 0.000 description 2
- 235000005493 rutin Nutrition 0.000 description 2
- 229960004555 rutoside Drugs 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 1-palmitoyl-2-arachidonoyl-sn-glycero-3-phosphocholine Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OC[C@H](COP([O-])(=O)OCC[N+](C)(C)C)OC(=O)CCC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCCC IIZPXYDJLKNOIY-JXPKJXOSSA-N 0.000 description 1
- 241001184547 Agrostis capillaris Species 0.000 description 1
- 241000167854 Bourreria succulenta Species 0.000 description 1
- 235000011299 Brassica oleracea var botrytis Nutrition 0.000 description 1
- 240000003259 Brassica oleracea var. botrytis Species 0.000 description 1
- 229920000018 Callose Polymers 0.000 description 1
- 240000004160 Capsicum annuum Species 0.000 description 1
- 235000008534 Capsicum annuum var annuum Nutrition 0.000 description 1
- 241000336500 Caridae Species 0.000 description 1
- 208000035484 Cellulite Diseases 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 description 1
- 241000195955 Equisetum hyemale Species 0.000 description 1
- 241001658031 Eris Species 0.000 description 1
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 1
- 241000206672 Gelidium Species 0.000 description 1
- 241000546188 Hypericum Species 0.000 description 1
- 206010020751 Hypersensitivity Diseases 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N Lithium Chemical compound [Li] WHXSMMKQMYFTQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000289581 Macropus sp. Species 0.000 description 1
- 241000218922 Magnoliophyta Species 0.000 description 1
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 1
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 description 1
- ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N Molybdenum Chemical compound [Mo] ZOKXTWBITQBERF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N N-benzyladenine Chemical compound N=1C=NC=2NC=NC=2C=1NCC1=CC=CC=C1 NWBJYWHLCVSVIJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000772415 Neovison vison Species 0.000 description 1
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 1
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 1
- 206010049752 Peau d'orange Diseases 0.000 description 1
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 1
- 244000088415 Raphanus sativus Species 0.000 description 1
- 235000006140 Raphanus sativus var sativus Nutrition 0.000 description 1
- 241000246123 Retama raetam Species 0.000 description 1
- 241001061106 Sargocentron rubrum Species 0.000 description 1
- 244000297179 Syringa vulgaris Species 0.000 description 1
- 235000004338 Syringa vulgaris Nutrition 0.000 description 1
- 241001441723 Takifugu Species 0.000 description 1
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 1
- JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N Thiamine Natural products CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N JZRWCGZRTZMZEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Natural products NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 208000026935 allergic disease Diseases 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N aminothiocarboxamide Natural products NC(N)=S UMGDCJDMYOKAJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000000975 bioactive effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 238000009933 burial Methods 0.000 description 1
- 239000001511 capsicum annuum Substances 0.000 description 1
- 230000036232 cellulite Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000004081 cilia Anatomy 0.000 description 1
- 239000003245 coal Substances 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 208000018459 dissociative disease Diseases 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- 239000011888 foil Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035784 germination Effects 0.000 description 1
- 229910052735 hafnium Inorganic materials 0.000 description 1
- VBJZVLUMGGDVMO-UHFFFAOYSA-N hafnium atom Chemical compound [Hf] VBJZVLUMGGDVMO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000009610 hypersensitivity Effects 0.000 description 1
- 235000015243 ice cream Nutrition 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 1
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 1
- IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N kaempferol Chemical compound C1=CC(O)=CC=C1C1=C(O)C(=O)C2=C(O)C=C(O)C=C2O1 IYRMWMYZSQPJKC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000787 lecithin Substances 0.000 description 1
- 229940067606 lecithin Drugs 0.000 description 1
- 235000010445 lecithin Nutrition 0.000 description 1
- 239000003077 lignite Substances 0.000 description 1
- 229910052744 lithium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007774 longterm Effects 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 description 1
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 229910052750 molybdenum Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011733 molybdenum Substances 0.000 description 1
- 230000004899 motility Effects 0.000 description 1
- 229930014626 natural product Natural products 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000021049 nutrient content Nutrition 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 208000005026 persistent vegetative state Diseases 0.000 description 1
- 239000000447 pesticide residue Substances 0.000 description 1
- 238000000554 physical therapy Methods 0.000 description 1
- 238000004161 plant tissue culture Methods 0.000 description 1
- 230000035935 pregnancy Effects 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 230000029058 respiratory gaseous exchange Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 230000001932 seasonal effect Effects 0.000 description 1
- 229930000044 secondary metabolite Natural products 0.000 description 1
- 239000000932 sedative agent Substances 0.000 description 1
- 230000001624 sedative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000050 smooth muscle relaxant Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 1
- 230000030118 somatic embryogenesis Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 239000000021 stimulant Substances 0.000 description 1
- 239000004575 stone Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 description 1
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 description 1
- 235000019157 thiamine Nutrition 0.000 description 1
- KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N thiamine Chemical compound CC1=C(CCO)SCN1CC1=CN=C(C)N=C1N KYMBYSLLVAOCFI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000011721 thiamine Substances 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000004614 tumor growth Effects 0.000 description 1
- 230000009105 vegetative growth Effects 0.000 description 1
- 230000017260 vegetative to reproductive phase transition of meristem Effects 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000029663 wound healing Effects 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/0018—Culture media for cell or tissue culture
- C12N5/0025—Culture media for plant cell or plant tissue culture
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H4/00—Plant reproduction by tissue culture techniques ; Tissue culture techniques therefor
- A01H4/008—Methods for regeneration to complete plants
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Botany (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Breeding Of Plants And Reproduction By Means Of Culturing (AREA)
Abstract
Description
Eljárás és síódositott táptalajok közönséges orfoáncfú (Hypericum perforstum L.) kalluss és sejtsamsstpsnzxós kultúráinak létrshosásársProcedure and ladder acquisition of callus and cellulose cultures of common orphan (Hypericum perforstum L.) cultures
A találmány tárgya eljárás közönséges orbáncfű ynypeckcum perforatum L.) bal fuss és se j fszuszpenzibs kultijráinek létrehozására ?tődo ártott táptalajokon megnő veit biomat sas illette hatóanyag termelése céljából, a találmány a módosított táptalaj okra is vonat kötik.FIELD OF THE INVENTION The present invention relates to a method for producing cultivars of left-winged and common suspension St. John's wort (Ynypeckcum perforatum L.) cultivated in supernatant media for the production of biomass or active ingredient, and the invention also relates to modified media.
A Hypericum perforatum L. egy gyógyhatású évelő faj, amely te menetesen Európa, Ázsia és Sszak-Afríka mérsékelt zónáiban fordul elő, és amelyet gyógynövényként már a görög-rónai idők óta használnak, Joi-ismert a növény gyulladáscsökkentő, diaretzkus, szedativ és sebgyógyítő hatása (Fizoterapia 66, 43-68 ílóSók? . Kapjainkbani a közönséges orbáncfüvet főként a mérsékelt depresszió: kezelésére alkalmazzák (húr. henropsyohopbarmaool . 90 6) , 5öl~ö0o 11999'} ; . Kezdetben a hl.pericint es a rokon vegyuleteket találták a iegaktívaóoaknak a tíorioaEiin-oxidáz és kát ekei -o-metil- transz férsz enzimek gátlásában. Ezeknek a mstahoiitoknak vírus- és rétrovirueeilenes hatását is kimutatták íAntiviral. Rés. 15, 101 <19910;, amely fény besugárzással fokozható. Újabban a figyelem középpontjába a híperforin került, mint az antidepresszáns hatásáért felelős legaktívabb komponens ÍLife Sci, 63, 499-516 11993}i. Jelenleg úgy tűnik, hogy az antidepresszáns hatásért számos, a teljes drog exfraktumban előforduló kémiai anyag, igy naftoörantrenok thipericin és származékai j, híperfőrinek, nsnionot, flavonoidok és prooáanidinek, és ezek relatív bioaktivítása felelős. A flavonoidok közűi a rutin, hiperozid, kveroitrin, kampóéról rs termelődik, melyek simaizomrelaxáiők, gyulladáscsökkentők, aizeiekhajtők, azti-mákroüááiís és antioxidáns hatásnak. A kvercetin ágiikon a tomsorsejtek növekedését gátolja.Hypericum perforatum L. is a herbaceous perennial species that occurs in temperate zones of Europe, Asia and North Africa, and has been used as a medicinal plant since the Greek-Roman era, Joi is known for its anti-inflammatory, diaretic, sedative and wound healing properties. (Physiotherapy 66, 43-68) Salts? In our gates, common St. John's wort is used mainly for the treatment of moderate depression (ch. Henropsyohopbarmaool. 90 6), 5-100-1999 '}; inhibition of thiourea amino acid oxidase and catecholomimethyl trans male enzymes. These viruses have been shown to have antiviral and retroviral effects, Antiviral, Sl. 15, 101 <19910;, which can be enhanced by irradiation of light. , as the most active component responsible for the antidepressant effect ÍLife Sci, 63, 499-516 11993} (i) At present, many of the chemicals present in the whole drug extract, such as thimericin and derivatives of naphthoerantrenes, are known to be responsible for the antidepressant effect, and their relative bioactivation. Among flavonoids, rs are produced from rutin, hyperoside, quoerythrin, hooks, which have smooth muscle relaxant, anti-inflammatory, algal motility, anti-macrolytic and antioxidant effects. Quercetin icon icon inhibits the growth of tumor cells.
φ ·» ί φφφ φ * .♦«.φ · »ί φφφ φ *. ♦«.
φ « φ βφ «φ β
ΦΦ φΚ « ΦΦ ··>ΦΦ φΚ «ΦΦ ··>
Ezért igen nagy igény ven e közönséges crfeáncföböl származő győgyásvatl komponensekre, érni szükségessé teszi, négy altétnatív, bioteshnolegiai elzárásokat keressünk az eiöáinitésekra.Therefore, the high demand for these non-healing components from the common crephe-head requires four alternative, biotechniological closures for the pathologies.
Újabban igen nagy szerepék van a növényi sejteknek ee szerv-tenyészeteknek, mint hatékony in vitro rendszereknek a természetes termékek nagymennyiségben történő szintetazáiásáoan, in vitro növényi szövettenyésztéssei és sejtszuszpenziös kultúrákkal, mint egy alternativ hatóanyag előállítási technolőgiával, kíkerülhetők a növénytermesztést. befolyásoló különböző tényezők, így az éghajlati viszonyok, az évjárat és tanon hatása a fenoiógiar fázisok bekövetkésésének idejére, az évszakhoz kötött kihajtási perióöus, .a vegetatív növekedési szakasz, a virágzás elhúzódó fenofázisa és a generatív fenofázások. továbbá a termesztett orbáncfű drog mind morfológiailag mind beltartalmilag heterogén, é drog tisztasági követelményeknél figyelembe kell vennr a peszticid maradékot, a mikrobioiögiaá szennyezettséget és a nehézf ém-tarts irtat is. é. növénytermesztéssel szemben a közönséges orbáncfű in vitro sejt- és szövettenyészeteivel növényi anyagot tudunk előálli~ tani stazöardzzáit, ellenőrzött és optimalizált külső feltételek mellett, idöjárástől és kérokozóköői függetienül, szabályozott körülmények kozott, hegbe le lő ától tás sai, folyamatos· életben tartással állandóan fejlődd tenyészeteket hozhatónk létre, miközben vizsgálhatjók a hatóanyagok bioszintézisét befolyásoló tényezőket és^ növelhetjük a hatóanyagok hozamát.More recently, plant cells have a major role to play in the cultivation of these organ cultures as efficient in vitro systems for the large-scale synthesis of natural products, in vitro plant tissue culture, and cell suspension cultures as an alternative active ingredient production technology. influencing factors such as climatic conditions, the effect of vintage and tannon on the time of occurrence of the phenologic phases, the seasonal outgrowth period, the vegetative growth phase, the prolonged flowering phenophase and the generative phenophases. furthermore, the cultivated St. John's wort drug is heterogeneous both morphologically and internally, and the purity criteria of the drug must also take into account pesticide residues, microbial contamination and heavy metal control. y. In contrast to plant cultivation, in vitro cell and tissue cultures of St. John's wort produce plant material under controlled and optimized external conditions, independently of the weather and its application, under controlled conditions, with continuous, continuous survival. while investigating factors influencing the biosynthesis of the active ingredients and increasing the yield of the active ingredients.
Szamos közönséges orbáncfű sejt- és szövet termeszetben végeztek vizsgálatokat a másodlagos metaboiátok termelésének tannlmányozasára (lásd pl, őianta bed. 58, hl 1-Sző Π092/; mhytoohemistry áh, llöö~ií€ö jlvűSjj. Ezekben s vizsgálatoköan gyakran az MS táptalajt és ennek kiegészített változatait alkalmazták.A number of common St. John's wort cell and tissue studies have been conducted to study the production of secondary metabolites (see, for example, Bedan 58, hl 1-Sz0929 / mhytoohemistry, llöiiiii), and this study frequently extended versions were used.
Karínig és mtsai (tlanta bed, Sl, öi-hi ílSSőjt által Sáv (111^0( és KÉS U0~; Ml tartaimd folyékony MS táptalajon létre* * * ♦ « » » * > ❖ » * * X *Karine et al (tlanta bed, lane by Sl, hi ílSSőjt-ol (111 ^ 0 (and KNIFE U0 ~; Ml content of liquid MS medium created ♦ * «» »*> ❖» * * X *
Í««» « ♦ «4*Í «« »« ♦ «4 *
V, » X- β *♦ ♦ » »♦ * «χ«φ »* hozott sejtkuitórák 24'C-on, folyamatos 200ο itt megvilágítás εϊοΙΙοΟΙ., 3-4 hetente való passzálással Os törzsenként eltérő, 30-500z-os növekedési rátával, ner mutattak Osszofűggést a növekedési Otem és a hatóanyag termelés között,V, »X-β * ♦ ♦» »♦ *« χ «φ» * brought cell lines at 24'C, continuous 200ο here illumination εϊοΙΙοΟΙ., Passage every 3-4 weeks, different Os strain, 30-500z growth rate, ner showed no correlation between growth Otem and drug production,
Pasqoa és mtsai (Plánt Science 135, 533-932 (2003(( vegetatív riigyekben szintetizálódott flavonordokat és népetleint Edirt ek.Pasqoa et al., Plant Science 135, 533-932 (2003 ((Flavonords and Ethyl Tetin synthesized in vegetative states) ed. Ed.
Kirakosyan és mtsai (Phytochemistry 50, 345—040 (2000(( a hipericin temetést, vizsgálták mannán elicltálás esetén, valamint a hrperigln óioszínéézá.se és a differenciált struktúrák in vitro fejlettsége közötti taposol atom.. BPP-ot és fhóá-t, valamint 2,4-D-t és KlO-t használtak a hajtásszerv kultúrák létrehozásánál, mais és mtsai (In Vitro Cell, Ser, Bioi. - Plánt 30, 50-35 (2002( ( hiperieint nyertek Hypericam. perforarum L. sej taggregátomaibéi (1000 μη( sötétben és fényen neveit kultúrák eseten,Kirakosyan et al. (Phytochemistry 50, 345-040 (2000 ((hypericin burial, studied in mannitol elutriation, and the direct synthesis of hrperigln and the in vitro development of differentiated structures). BPP and pho. 2,4-Dt and KlO were used in the generation of sprout cultures, by ma et al. (In Vitro Cell, Ser, Biol. - Plant 30, 50-35 (2002 (Hypericin was obtained from Hypericam. Perforarum L. cell aggregates (1000 μη (in the dark and in the light of names of cultures,
Oias és mtsai (Journal of fúgáié okroEmtography and Peiated Technologies 22(2(, 215-22? (1997(( által létrehozott kallóst össz-flavonoíd tartalma 2,5-0,7 mg/g szárazanyag volt, tóval alacsonyabb a vadon éld növényben találhatónál, amelyOias et al., Journal of Fugues of OkroEmtography and Peiated Technologies 22 (2 (, 215-22? (1997 () had a total flavonoid content of 2.5-0.7 mg / g dry matter, much lower in wild-type plants). located which
14-70 mg/g szárazanyag.14-70 mg / g dry matter.
u fenti cikkekben leírt kúsérietekben létrehozott kallóazok folyamatosan nem tarthatók fenn, aktit hatóanyag tartalmuk viszonylag alacsony és a kultúrák néhány átoltás után elöregednek, Ezért továbbra is fennáll az igény az oroáncfo olyan sejt- és szervtenyészeteinek erősíti fására, amelyek hatékony rendszerek a természetes aktív komponensek termelésében.u callallases created in the meat series described in the above articles are unsustainable, their active ingredient content is relatively low, and the cultures grow old after a few inoculations. Therefore, there is a continuing need for amplifying cellular and organ cultures of Aryansfo that are efficient systems for producing natural active components.
é találmány feladata és célja olyan in vitro termeid rendszerek létrehozása, amelyek fokozott biomassza termeléssel agyz.úejöúeq az orbáncfű biológiailag aktív kompon ettsez.f zs termei 1k.It is an object and object of the present invention to provide in vitro termid systems that are biologically active components of St. John's wort through increased biomass production.
Kisér let cink során azt találtak, nogy ha az Isnmrt 255, Kh és 05 táptalajban a rsakro- ás mikroelemek arányát megváltoztatjuk, továbbá EDIA-Ka-Fe seiecton vassal és amott esetben »0 * X « ♦ **♦ >0 +* * 0**0 β» növényi hormonokkal kiégéssítjük, olyan fölyamatosan termeié in vitro rendsserekhes intőnk, amelyek a növényi anyaggal egyidejűleg as orbáncfű szinergisstikusan ható, biológiailag aktív komponenseit is termelik, igy & flavonoidok kősói a ratint, hiperosidot, kveroltrint, kvercetinb, kempferoit, a naftodiantromok kősói pedig a hiperieint.Experiments with zinc have found that by changing the proportion of macronutrients in Isnmrt 255, Kh, and 05 medium, and with EDIA-Ka-Fe selecton iron and in that case, "0 * X" ♦ ** ♦> 0 + * * 0 ** 0 β »burns with plant hormones, we produce in vitro systemic gestations that produce synergistically active, biologically active components of St. John's wort, such as the rock salts of flavonoids, ratine, hyperoside, and the rock salts of the naphtodiandromes are hyperinein.
A fentiek alapján a találmány egyik tárgya kősónséges orbáncfű kallóst- és sejtssosspensrös kontúréinak létrehozására alkalmas módosított NS-62 táptalaj, melyre jeliemső, hogy as alaptápéaiajhos képest a makro- és mikroelemeket megvá.ltosott arányban tartalmassá és ki. van egészítve: 5-15 mg/l FöTé-Na~Fe tTHp-sai és 0,1-10 mg/l egy vagy több növényi hormonnal,.Accordingly, one object of the present invention is to provide a modified NS-62 medium for creating callus and cellular contours of St John's wort, which is characterized in that the basic nutrient is rich in and out of the macronutrient and micronutrients. supplemented with 5-15 mg / l of FöTé-Na ~ Fe tTHp and 0.1-10 mg / l with one or more plant hormones.
Előnyösen a találmány sserinti módosított éS~62 táptalaj as aiaptáptaiajhos képest fa) fele mennyiségű borsavat tartalmas ás ki van egészítve 40 mg/I FDTé-Na-Fe-sal, továbbá 1 mg/l léé, 0,2 mg/i kéé és Cél mg/l KIM növényi hormonokkal íi. táptalaj;; vagyPreferably, according to the invention, the modified and? 62 medium has a content of 40% boric acid relative to the nutrient medium supplemented with 40 mg / l FDTe-Na-Fe, and 1 mg / l juice, 0.2 mg / l blue and mg / l KIM with plant hormones. medium ;; obsession
ObO fele mennyiségű bórsavat tartalmas és ki van egessitvo 40 mg/i EoTé-Fa-Fe-sai, továbbá 0,5-10 mg/i léé, 0,1-0,4 mg/! NAA, 0,5-2,0: mg/l 2,4-1, 0, n mg/i Béé vagy KIN növényi bormonokkai (2. táptalajj; vagy le? fele mennyiségű bórsavat tartalmaz és ki van egáositve -10 mg/i FDFé-Na-Fe-sai, továbbá 0,8 mg/l Néé és/vagy 1 mg/iObO contains half of the boric acid and has a total concentration of 40 mg / l EoTe-Fa-Fe, and 0.5-10 mg / l juice, 0.1-0.4 mg / l. NAA, 0.5-2.0: mg / l 2.4-1, 0, n mg / l Bé or KIN with plant bormon monoclonal medium 2 or less containing boric acid and clarified at -10 mg / l FDFe-Na-Fe, 0.8 mg / l Nle and / or 1 mg / l
2,4-D és 0,5 mgyi KIN növényi hormonokkal /2. táptalaj?; vagy ?d; fele mennyiségű bórsavat tartalmas és ki van egéssitve 4 0 mg/l SDTA-l^a-Fe-sal, továbbá 1 mg/i Néé, 1 mg/l 2,4—D és 0,1 mg/i KIN növényi hormonokkal /4, táptalaj;; vagy (e) negyed mennyiségű makroeiemet, fele mennyiségű bórsavat tartalmas és ki van egészítve 10; mg/l FDTé-Na-Fe-sai, továbbá 0,8 mg/l léé és 1,6 mg/i BéP növényi hormonokkal ;5. táptalaj;; vagy íf; negyed mennyiségű makroelem.et, fele mennyiségű bórsavat tartalmas és ki van egészítve 10 mg/i EDTé-Na-Fe-sai, továbbá 0,8 mg/l 2,4-D és 1,6 mg/l Béé növényi hormonokkal ;6, * tt-:*2,4-D and 0.5 mg KIN with plant hormones / 2. medium ?; or? d; contains half of boric acid and is supplemented with 4 0 mg / l SDTA-1 ^ a-Fe plus 1 mg / l Nee, 1 mg / l 2,4-D and 0.1 mg / l KIN plant hormones / 4, culture medium ;; or (e) a quarter amount of macronutrient, half of which is boric acid and 10 ; mg / l FDTe-Na-Fe, plus 0.8 mg / l juice and 1.6 mg / l BPP plant hormones; medium ;; or if; a quarter of the amount of macronutrient, half of boric acid and supplemented with 10 mg / l EDTe-Na-Fe, 0.8 mg / l 2,4-D and 1.6 mg / l Bée plant hormones; , * tt -: *
33 0 5 3 5 C6 -30 táptalaj),· vagy lg) negyed mennyiségű makroelenet , kétszeres mennyiségű Mikroelemet, azonos Mennyiségű bérsavat tassaln-st és ka, van egészítve 10 mg/l SDTh-Na-űe-sai, továbbá 0,5-0,5 mg/l Ián és Kié növényi hormonokkal 07, táptalaj ) .33 0 5 3 5 C6 -30 medium), · or lg) quarter amount of macroelement, double amount of Trace elements, equal amount of salic acid in tassaln and ka, supplemented with 10 mg / l SDTh-Na -0.5 mg / l with Ian and Kee with plant hormones 07, medium).
Még előnyösebben a találmány szerinti módosított MS-Oz táptalaj at 1, táblázatban neonácit összetételé 1-7.. táptalaj, á találmány mási k tárgya közönséges orbáncfű kai lösz- és se átszősz pe n ti.es ka 11 ű rá 1 na k 1 ét r eb o z á s á r a a 1 ka I ma s mö d o s i t o 11 MS-62 táptalaj, melyre jellemző,, hogy az aiaptáptais jhoz képesé ho-t, Cz~t és Co-t nem tartalmat, 0-1650 mg/l öh,lioy-ct 1/4-re csökkentett bérsavat, 1/5-re osökkenteft MnSly-ot, 1/7re csökkentett 2n5Cy~ot, l-o-ssöres mennyiségű inozitot és vitaminokat tartalmas, és ki van egészitve 250-500 mg/i assperaginnal vagy proiinnai, 35-45 mg/i űDTá-Na-Fe-sal és ö,0/0,5 /1,0 mg/1 2,4-0 nevényi bormon na1.More preferably, the modified MS-Oz medium according to the present invention comprises medium 1-7 of Table 1 for the composition of neo-Naziite, and the present invention relates to St. John's wort. R EGULATION PRICE 1 ka I S u m e n t e r 11 MS-62 medium characterized by its ability to contain ho, Cz and Co with no nutrient content, 0-1650 mg / l h , lioy-ct reduced to 1/4 wage acid, reduced to 1/5 MnSly, reduced to 1/7 2n5Cy, contains a large amount of inositol and vitamins and is supplemented with 250-500 mg / l of assperagine or with proline, 35-45 mg / L of DTA-Na-Fe and δ, 0 / 0.5 / 1.0 mg / L of 2.4-0 Novel Bormon na1.
á találmány szerinti möacsitott MS-62 táptalaj egyik erényes kiviteli formájában Ho~, űz.-, Ce~ és Inbhcb-hiányos, 1,6 mg/i HjBűz-at, ii mg/i MnaöznfbO-ot, 1, 5 mg/I ΰηΒΟ,χΟίόΟ-Ι, 40 mg/i EDTA-Ba-Fe-t, 100 mg/l inozitot, 1 mg/i oikotinsavat, 1 mg/I piridoóin.nűl-t, 10 mg/l tiamin.HCl-t, 0,0/0,5/1,0 mg/iIn one of the virtuous embodiments of the cleaved MS-62 medium of the present invention, H 1, H 2, C 6, and Inbhcb are deficient, 1.6 mg / L HjBu, ii mg / L MnaöznfbO, 1.5 mg / L ΰηΒΟ, χΟίόΟ-Ι, 40 mg / l EDTA-Ba-Fe, 100 mg / l inositol, 1 mg / l iacotinic acid, 1 mg / l pyridone-n-ll, 10 mg / l thiamine.HCl, 0.0 / 0.5 / 1.0 mg / i
5,4-D-t, 500 mg/i aszparagint, továbbá 30 g/l szacharózt ás 01,0 g/i kazeint tartalmaz t8. táptalaj).Contains 5,4-D, 500 mg / l asparagine, 30 g / l sucrose and 01.0 g / l casein t8. medium).
.á, találmány szerinti mőboaitot.t 113-02 táptalaj egy másik előnyös kiviteli alakjában Mo-, Űz- és Co-brányos, 1050 mg/l hHndűy-ot, 1,0 mg/l. FBBüz-at, 4,4 mg/i MnSlyxihO-ot, 1,5 mg/i znSOjx7FPO-t, 40 mg/i Ebrá-Ma-Ee-t, 500 mg/i inozitot, I mg/i nikotinsavat, 1 mg/i piridoxirnHŰi-t, 10 mg/i riamin.BCl-t, 1,0 mg/i 2,4o-t, 250 mg/i proiint és 50 g/i szacharózt tartalmaz tű. táptalaj/.In another preferred embodiment of the inventive culture medium 113-02, the Mo, H, and Co ratio is 1050 mg / l hHndűy, 1.0 mg / l. FBBuz, 4.4 mg / ml MnSlyxihO, 1.5 mg / ml znSO4x7FPO, 40 mg / ml Ebra-Ma-Ee, 500 mg / inositol, 1 mg / n nicotinic acid, 1 mg needles containing 10 mg / l PyridoxirnHUI, 10 mg / l laminin BCl, 1.0 mg / l 2.4o, 250 mg / l proline and 50 g / l sucrose. medium /.
a találmány további tárgyát közönséges orbáncfű kaliaszés sejcszzszpenziös kultúráinak létrehozására alkalmas módosított 516 táptalaj képezi, melyre jellemző, hogy az ai.aptáptaiajhoz képest ki van egészítve moiibdénnei, rézzel, és kobalttal 85-mikroeiemek tormájában, továbbá 55-45 mg/l EDTA~Na~Ee« Jf ·» sál, 0,5-1,0 mg/l ni köti nsa vya 1 és 20-3ÍÍ g/I szacharózzal .A further object of the present invention is to provide a modified 516 medium for producing cell suspension cultures of common St. John's wort callus, characterized in that it is supplemented with molybdenum, copper, and cobalt in the horsetail of 55 microelements / l of 55 microelements compared to ali Ee <RTIgt; Jf </RTI>, 0.5-1.0 mg / L bound to 1 and 20-3 g / L sucrose.
Előnyösen a találmány szerinti r;ddcsitott Í56 táptalaj egy 66-78 hormohmentes táptalaj, amely kiegészítésképpen. 0,15 mg/l ka:?Po02xHk>'t, 0,025 mg/i CuSOnxiipO-Ot es 0,025 mg/i CoCl?x6í-bQot, továbbá 10 mg/l ED2A-Ba~Ee~t, 0,5 mg/l nikotinsavat és 3i;Preferably, the digested medium of the invention is a hormone-free medium of 66-78 which is in addition. 0.15 mg / l ka:? PoO 2 x H 2 O, 0.025 mg / l CuSOnxiIPO, and 0.025 mg / l CoCl? X 6 -bQot; and 10 mg / l ED 2A-Ba-Ee, 0.5 mg / l. nicotinic acid and 3i;
g/i szacharózt tartalmaz öíh táptalaj i .g / l sucrose containing medium i.
A. találmány további tárgyát közönséges orbáncfű kalluszés sejtszuszpenziós kultúráinak létrehozására alkalmas módosított 35-66 táptalaj képezi, melyre jellemco, hogy sz alaptáptál ághoz képest növelt mennyiség'! 2söy~ot és kiegészí tésképpen 35-4 5 g/I EDTA-da-Fe--t, 0,5-1,0 mg/i nifcot insavat, 0-1 mg/TA further object of the present invention is to provide a modified 35-66 medium for culturing cell suspension cultures of common St. John's wort, characterized in that it is an increased amount compared to the base medium branch. 2 and so on, and 35-4 5 g / l EDTA-da-Fe, 0.5-1.0 mg / l nifcotic acid, 0-1 mg / T
2,4-D~t és 15-25 g/1 szacharózt tartalmaz.Contains 2,4-D and 15-25 g / L sucrose.
Előnyösen a találmány szerinti módosított B5 táptalaj egy B5-5S hormonmentes táptalaj, amely ióO mg/l. CsCl-tzh-b-ot, mg/l őDTA-Ba-Fe-t, 1 mg/i nikotinsavat és 20 g/1 szacharózt tartalmaz 011. táptalaj;.Preferably, the modified B5 medium of the invention is a B5-5S hormone-free medium which is 10 mg / L. CsCl-tzh-b, mg / l of DTA-Ba-Fe, 1 mg / l of nicotinic acid and 20 g / l of sucrose Medium 011;
A taiálmányóan alaptáptalaj-ként hivatkozott és kontrollként használt MS-.62, $6-78 és 35-68 táptalajok összetétele Dudits Dénes és heszky Lászlót no vényezőt eoőnolögia. o. könyvében (Mezőgazdasági Kiadó, Budapest, 1950; megtalálható. Továbbá az MS táptalajt T, durashige és 11 Skoog illant Fhysroi, 15, 473-393 {19621, az 16 táptalajt C. Ebe ős mtsaiThe composition of MS-.62, $ 6-78 and 35-68 media, which was cited as the reference medium and used as a control, was décollected by Dénes Dudits and László Heszky. She. (Agricultural Publisher, Budapest, 1950; found. In addition, MS medium T, durashige and 11 Skoog illant Fhysroi, 15, 473-393 {19621, 16 medium C. Ebe et al.
OScient. Sin. 11 , 18, 659-666 {1975/ és a B5 táptalajt 01 1,, eamborg {Exp. Cell, Rés. 50, 151-156 (19681 ismertetik,OScient. Rail. 11, 18, 659-666 (1975) and B5 medium 01 1, eamborg {Exp. Cell, Slit. 50, 151-156 (19681,
A találmány szerint módosított táptalajokra példaként szolgálnak az 1, táblázatban megadott összetételű 1-9. B3-62 táptalaj, a 10, K6-79 táptalaj és a 11. B5-66 táptalaj. A táblázatban fel tintet tat a tenyésztés koráimenyeit is.Examples of media modified according to the present invention are those of formulas 1-9 of Table 1. Medium B3-62, Medium 10, K6-79 and Medium 11 B5-66. The table also inkes the early stages of breeding.
A leírásban használt röviöltését jelentése az alábbi: BA? - benzil-amino-purinThe brief used in this description has the following meaning: BA? - benzylaminopurine
2,á-D - 2 4-di klór-f enoxz-seet sav2, α-D-2 4-dichlorophenoxoxylic acid
1AA - in dó 1 - 3 - e e e t a a v1AA - in dó 1 - 3 - e e e t a a v
Kid kinetinKid kininet
MAA naftái--ecetsavMAA Naphtha - Acetic Acid
-Λ?-Λ?
.táblázat: Módúsített .1-11. táptalaj összetételeTable: Modified .1-11. composition of culture medium
é találmány tárgya továbbá egy eljárás közönséges orbánofú kelless kultúráinak létrehozására., amely abban áll, rogy közönséges orbáncfű magját nedves szűrőpapíron 20-23eC~on vagy bormonmentes módosított B5 táptalaj on csíráztat jak , sterilen módosított Μο-ο2 táptalajra iph 5,31 oltjuk és 24, 1-25, zdC~on sötétben kalluszt indukálunk, majd a primer kallussotbói szekunder karinatokat botunk létre, a kallóst kultúrákat módosított MS-62 táptalajon pH 5.0-5,8 értéken, 20-272t-on, sötét és fény ciklusok váltogatása mellett tenyésztjük, friss közegre oltjuk vagy leszúreteijük, és a szárazanyag- illetve hatőenyag-tartaImát meghatározzuk.The present invention also provides a method for producing appropriate cultures of common orangoon, comprising germinating the seeds of common St. John's wort on wet filter paper at 20-23 e C or boron-free modified B5 medium, sterile modified Μο-ο2 medium iph 5. and 24, 1-25 at zdC in the dark induce callus, and create secondary carinae from the primary callus, and calli cultures on modified MS-62 medium at pH 5.0-5.8 at 20-272t, alternating dark and light cycles and inoculate or strain the fresh medium and determine the dry matter and active ingredient content.
Egy másik előnyös kiviteld. módban in vitro kallusz kultúrákat hozunk létre orbánofú szikiévé!, fiatal iomblevél, az in vitro regenerált növény gyökérének riietve leveles hajtásának expiantátumalből (szilárd tápközegre való ieoltás;, valamint az intakt növény virágos hajtásának felső harmadában fejlődött levelekből iniciálással a találmány szerinti modosiuolt tápköregeken, igy pl, a 2 . táptalajon pH z, @~on és 24, 5--zo, u’o-on sötétben primer kaiiuszl indukálunk, majd a primer kslluszokbél szekunder kai leszokat Itozunk létre 20,1-21,121 hőmérsékleten történő inkubáiássai, Így a 12 módosított 22-62 táptalajon 2,1-D, léé, béé, 3éa vagy Köb hormonokkal, 1,2-1,1 pH-jú közegben, sötétben és fényen tartott kultúrákban; a 6. módosatott MS-62 tápkbzeqen Eél, 2,4-ú hormonokkal, 5,0 pH-jú közegben, fényen tartott kultúrákban; a 3, módosdtott bS-22 táptalajon 2, 4-D és: Klb hormonokkal pH 1, 2-on, sötétben és fényen történő tenyésztéssel vagy a '2. modositott 22-62 tápkbzeqen léé és Kid hormonokkal pH 1,8-on, fényen nevelve a keitúrákat. Sötétben fehér széné, embriogén kailtiszt nyerünk, sötétről fényre kerülve a kaktuszok zöldödnek, pirosodnak.Another advantageous embodiment. In vitro mode, in vitro callus cultures are produced as an orbánofus seedling, from a young leaflet, an in vitro regenerated plant root from an expanse of shoot shoot (inoculation into a solid medium; and from the leaves developed in the upper third of an intact plant , medium 2 was induced in the dark at pH z, @ 2 and 24, 5 - 5, u'o in the dark, and then incubated in the primary xylus gut by secondary incubation at 20,1-21,121. modified media 22-62 with hormones 2,1-D, juice, bee, 3ea or Köb, in culture medium at pH 1,2-1,1, in dark and light cultures; 4 hormones, pH 5.0 medium, light cultures, 3, modified bS-22 medium cultures with 2, 4-D and: Klb hormones at pH 1, 2, dark and light yeast or Modified 22-62 Nutrition Bee Juice 2 and Kid Hormones at pH 1.8, light cultures. In the dark we get white coal, an embryogenic fur, and when the light is dark, the cacti turn green and red.
az alkalmazott serkentő anyagok, növényi hormonok befolyásolják a légzést, az enzim-aktrvitásf és a nitrogén anyagcserét. Kísér léteink során azt találtuk, hogy az léé, béé és Kid blokkolja az orbáncfű fásodést a 2. táptalajon, é nagy léékoncentráció növeli a juveniI.i s jelleget kai lesében a megnoveit hormontar ta.ímá 2. táptalajon.. A sötét elősegíti az enzimet ikus konverziót. A makroelemek mennyiségének egynegyedére való csökkentésével, valamint kétszeres mikroelem tartalommal, illetve a szacharóz mennyiségének 5 g/l-re történő csökkentésével és u,o~ö,S mgZi 1AA és Kik hormonokkal. a 7. táptalajon növelhető a batőanyagtermelés. A pH csökkentése S,8-rö.Í 5,0-ra a 2. táptalajnál és pH 5,0 alkalmazása a 8. ésstimulants, plant hormones used affect respiration, enzyme activity and nitrogen metabolism. During our existence, we found that juice, intestine and Kid block St. John's wort on Medium 2, and high juice concentration enhances the juvenile nature of the improved hormone content in Medium 2. Dark promotes enzymatic conversion. By reducing the amount of macronutrients to one quarter and by double the amount of micronutrients and by reducing the amount of sucrose to 5 g / l and the hormones u, o ~, S mgZi 1AA and Kik. the 7th medium can increase the production of shoe materials. Lowering the pH to S, 8.5 to 5.0 at Medium 2 and using pH 5.0 at 8 and
1. táptaiajóknál növekedést indukál, kiküszöboii a szuboptimális fizikai körülményeket, valamint genetikai stabilitást, hosszútávü regenerációs képességet biztosit, gyors biomassza t e r m éledést .idézve ele,1. induces growth in nutrients, eliminates suboptimal physical conditions and provides genetic stability, long-term regeneration ability, inducing rapid biomass recovery,
A találmány érteimében szuszpenziós kultúrákat úgy hozunk létre, hogy a legjobb növekedésű kallusz vonalakat tovább oltjuk, majd a kalluszböl szuszpenziöt hozunk létre a találmány szerinti kütönböoö összetételű és hormontartalmű táptalajokon, igy az 1. módosított MS-62 táptalajon lAA, HAA, H'IH bormontartalommal, pH 5,8~on; a 2. módosított MS-82: táptalajon 2,4-D, 1AA, PAA, BAH vagy ΚΓΗ hormonösssetétériéi, pH 5,2 - 5,8 között; a 3. módosított ÖS-62 tépközegen HAA, KIH hormonokkal, pH 5,8-on; a 4. módosított ÁS-62 táptalajon 2,4-n, HAA, KIN hormonok alkalmazásával, 5,8 pH-ju: közegben; az 5. módosított dS-62 táptalajon BAB, 1AA hormonokkal, pH 5,ö-n; a 8. mödositott HíS-62 táptalajon, 2,é-D hormon és pH 4,8-5,2 alkalmazásával; a s. módosított MS-62 táptalajon 2,i-ö hormonnal, pH 5,8oro A szuszpenzidkat trlenmeyer lombikban , 23,5-2 5' C-on, sötétben és tényen, 102 rord/pero sebességgel laboratóriumi rázógépen tenyésztjük. További 21-28 napos kalinsz inkubálás, illetve 14-21 napos szuszpenzic rázatás után a kaílaszokat, se j ísztíszpenzíökaí friss közegre oltjuk vagy le szüretel jak a szárazanyag meghatarozása és a hatóanyag-tartalom vizsgálata céljából, A szárazanyag-megbatározás taoyaoziva szárítással, a hatóanyag tartalom vizsgálata HBoü-vei történik.In accordance with the present invention, suspension cultures are obtained by further inoculating the best-growing callus lines and then making a callus slurry on the different composition and hormone content media of the invention, such as Modified MS-62 Medium 1AA, HAA, H'IH. pH 5.8 ~ on; Modified MS-82: Hormone Assay Set of 2,4-D, 1AA, PAA, BAH or ΚΓΗ, pH 5.2 to 5.8 on Medium 2; 3 modified ÖS-62 with HAA, KIH hormones, pH 5.8; 4, modified ÁS-62 at 2,4, using HAA, KIN, pH 5.8: medium; 5, modified dS-62 medium with BAB, 1AA hormones, pH 5, δ; 8, modified HIS-62 medium using 2, h-D and pH 4.8-5.2; dig. modified MS-62 medium with 2 hormone, pH 5.8 A The suspensions were cultured in a trlenmeyer flask at 23.5-25 ° C in the dark and in fact at a rate of 102 rpm on a laboratory shaker. After an additional 21-28 days of calinas incubation and 14-21 days of suspension shaking, the strains or slurry suspension are inoculated or harvested on fresh medium to determine dry matter content and active ingredient content. is tested with HBoo.
« φ φ«Φ φ
1η1η
Ί *** * rf * > X ♦ * * φΧφφ XXΊ *** * rf *> X ♦ * * φΧφφ XX
Vizsgálataink során azt találtak, hogy a találmány szerints. 1, táptalaj gazdag, uniformizálödb, emdri.ogén jellegű, pirosodó sárgás-zöld sejtszuszpenzió aggregátumokat eredményez pH 5,8-on, 2i,5-z5'C hőmérsékleten, fényen kevés lizissei,In our investigations, it has been found that the invention is believed. 1, medium-rich, more uniform, emdri.ogenous, reddish-yellow-green cell suspension aggregates at pH 5.8, 2i, 5-z5'C, light lysis,
A találmány szerinti 21 táptalaj növeli a biomassza menynyiségét, hat a szín kiaiaknlására, valamint a hatóanyagszint növekedésére pH 5,S-nál. Ez a tápközeg pH 5,0 esetén növeli az embriogén jelleget és bet a hatóanyagtermeiésre is. ügyanebben a táska regben ípK 5,0; 2,1--0, Iáé, bán, KIN hormonveriáoiő esetén, meiyzöld kallusz jön létre természetes fényen, 24,528,5°C~on, mig sötétben 24f5-25vC-on jól preiiferáiódó, sárgás-fehér kall asz képződik., A 2,4-D, 1AA, NAA, Bá? hormonösszetétel embriogén jellegű, gazdag sejttömegő, fehérszinü kallaszt termel sötétben, 21,5-va Vi-on, fényen viszont 24,52b, IdO-on zöldszinű kaiiuszt termel később kissé pirosodó sejtekkel, vaiasiznt hajtás regenerálódást ís indákéi. A kai lösz szárazanyag-tartalma is jelentős növekedést matat a kiindulási leoltasz, szinthez viszonyítva.The culture medium 21 according to the invention increases the amount of biomass, affects color recovery and increases the active ingredient level at pH 5,5. This medium increases the embryogenic character at pH 5.0 and also increases the production of the active ingredient. more cleverly, the bag has a reg 5.0p; From 2.1 to 0, IAE, Ban, KIN hormonveriáoiő case, meiyzöld callus is formed of natural light, 24,528,5 ~ ° C, until the dark for 24 f formed from 5 to 25 v C preiiferáiódó good, yellowish-white ascorbic Kall ., A 2,4-D, 1AA, NAA, Baa? hormone composition produces an embryogenic, rich cellular, white-colored callus in the dark at 21.5 on Vi and 24.52b on light, producing a green callus on IdO at a later stage with slightly reddish cells, and regeneration and tendon of the shoots. The dry matter content of the cat's loaf also shows a significant increase in the level of the initial leachate.
A találmány szerinti 3. táptalaj 1 mg/i 2,4-1; és 0,5 mg/i KIN hormontartalom mellett, pH 5,5-ca, jói fejlődő fehéres sárga kallusz termelődéséi segíti elő sötétben, 21,5~2oűc~on, illetve zöldszinű kaiiuszt indukál fényen, 24,5-26,5*C~on, Szeszpénzlóban az 1 mg/i 2, 4-D 0,8 mg/i NAA-val történő beiyettesitese gazdag biomassza- és hatőanyag-termeiőőésr eredményez sötétben 25, 5-25 vj~on .Medium 3 according to the invention is 1 mg / l 2.4-1; and 0.5 mg / l KIN hormone, pH 5.5-ca, promotes the production of well-developed whitish yellow callus in the dark at 21.5 ~ 2oC and induces greenish callus, 24.5-26.5 * Substitution of 1 mg / L of 2, 4-D with 0.8 mg / L of NAA in Cysteine will result in rich biomass and active ingredient production in the dark at 25, 5-25.
A találmány szerinti 4. táptalajon 2,4-1, NAA és KIN hormonokkal és 250 g/i aszkorblnsavval történő kiegészítés eredményeként pH 5,H-en gazdag, kissé plrosodö, embriogén jellegű sejttömeg termelődik fényen, szaszpenziöban, 25,5~25&G-ormSupplementation with 2.4-1, NAA and KIN hormones and 250 g / l ascorbic acid on culture medium 4 of the present invention produces a light, suspensive, 25.5-25 > H-rich, slightly fluffy, embryogenic cell mass. G-orm
A: találmány szerinti 5, táptalajon 1,5 mg/i HAH ás 0, S mg/i 1AA alkalmazása 0,25 PS makroeiem-tartalom énegyedére ehökkentett makroelem-tartaiomö mellett, pH 5,v~on sárgaszlnü, embriogén jellegű, közei ann. forrni záit kisebb méretű aggregátu** mok tömegét tartalmazó gazdag biomassza. növekedik sznszpenzloben, 2 3,5-2 5C-on.A: Application of 5 mg / l HAH and 0, 5 mg / l 1AA of medium according to the invention to 0.25 PS macronutrient per liter at a reduced macronutrient content, pH 5, yellowish yellow, embryogenic, . rich biomass containing mass of boiled smaller aggregates **. It grows in spenzenslob, 2 at 3.5-25C.
A találmány szerinti 6, táptalajon, 1,6 mg/1 Bár és 0,5 mg/I 2,4-D kiegészítés, ugyanakkor 0,25 hiS makroelen--tartalom mellett, pH .5,0-on. nagyobb termelékenységű, sárgás-fehér színű biomassza jön létre 23,5-25:ű-an; és megindul a hatöanyagtermelédés rázatott kultúra esetén fényen és sötétben, mrg ksilnsznál fényen, mélyzöiö, illetve pirosodé felületű seibbömeg képződik 24,5~26aC~on és hatékonyság mutatkozik a hafbanyag-termelődésben is,The 6 media according to the invention contain 1.6 mg / L Bar and 0.5 mg / L 2,4-D, but at a content of 0.25 hiS at a pH of 5.0. higher productivity, yellowish-white biomass is formed from 23.5 to 25 U-an; and the production of the active substance begins in shaky culture under light and dark conditions, at high light levels, deep green or reddish surface masses are formed at 24.5 ~ 26 at C and efficiency is also observed in the production of hafnium,
A találmány szerinti 71 táptalajon az iái és Kid hormonkombináció, a 0,25 MS makroeiera-tariaios, a 2-szere.s bő mikröeism-tartalom és a csökkentett szacharóz-mennyiség pH 5,S-on növeli a hatóanyag-termelést, a. színanyag kialaknlést, be gátolta a kaiiusz növekedést fényen, 24,526°C--on,In the 71 media according to the invention, the combination of Ial and Kid hormone, 0.25 MS macronutrient, 2 times more microbial content, and reduced sucrose at pH 5, increases drug production, a. color development, inhibited the growth of the kelus in light at 24,526 ° C,
A találmány szerinti 0. táptalajon 0,5 mg/1 illetve 1 mg/1 2,4~o hormon-koncenrráciönái, illetve horrronmentesen, aazparaginnel, kazeinnel vagy anélkül, pH 4,3-5,2-n, 23,5-2ó*C-on a biomassza termelődéssel egyidejiiieg lizis, valamint intenzív liíás barnaszén kialakulása figyelhető meg, ami magas hatóanyagszzntre fbiperioin; utal.The medium 0 according to the invention contained 0.5 mg / l and 1 mg / l of 2.4-hormone h At 2 ° C, lysis and intense lithium lignite formation, which is a high active ingredient fbiperioin, is observed at the same time as biomass production; hate.
A találmány szerinti 9, táptalaj 1 mg/1 2,4-0 és aszparagin helyett prolin aikatmazásávai, 500 mg/i mezoinozittai, pH 5,3-on gazdag, barnáié sárgás sejttömeget eredményez szaszpenzíéban fényen, 23, ő-ltél-on ,The 9 media according to the invention, using 1 mg / l 2.4-0 and asparagine instead of asparagine, 500 mg / l meso-inositol, pH 5.3, gives a brownish yellowish cell mass in light suspension at 23, in the winter,
A találmány szerinti 10. táptalaj: egy hormonmentes tápközeg, amely 30 g/l szacharózt és 0,5 mg/1 níkotinsavat tartalmaz, pá 5,f-on és 24,5~25öC~on fényen gyors hajtás-eiongáciot eredményez a híg tápközegre helyezett, előzőleg pH 5,0-on es SAH-tartaimá táptalajon fényen nevelt, embriogén jellegű, intenzív zöidszinű kall asz darabkákon, 3-7 nap alatt ,Medium 10 of the present invention: a hormone-free medium containing 30 g / l sucrose and 0.5 mg / 1 nicotinic acid, pá 5-one and 24.5 f ~ C ~ 25 ° C in light of the results in speeding-eiongáciot light medium cultured on diluted medium, previously grown to pH 5.0 in SAH contents, in medium-light kangaroo chips for 3-7 days,
A találmány szerinti il. táptalaj 44ö mg/1 CaCM~ot és 20 g/l szacharózt tartalmazó hormonmentes tápközeg, amely pH 5,6on 14-26,oaC hőmérsékleten és fényen hajtás/gyökeres hajtás »ϊIn accordance with the invention, il. Hormone-free medium containing culture medium 44 ° mg / CACM ~ 1 and 20 g / l sucrose, pH 5,6on to 14-26 o C in temperature and light conditions shoot / root shoot "ϊ
Λ *» φΦ φ ΧΦ*0 ΦΦ céljából ereoményes a bormontertaimű tápközegröi származó, embricgén jellegű, regenerálóéi kallósé esetén.ΦΦ Λ »» φ ΧΦ 0 ΦΦ om 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 * 0 0
A fenntartásos kísérleteket a 11 különféle táptalajon, különböző környezeti teltételek tellett végezzük, pH 1,1-5,8 kötött. Inkubációs paraméterek a következők: 54 óra sötét (kontroll; 24,5~2S:'C hőmérsékleten; 16 óra fény/8 ára sötét fotoperiodicitás 1.8,5-58 :CÜ~on, no ccoi Oay Ligát él ő fénycső' használatával.Maintenance experiments were performed on 11 different media under different environmental conditions, pH 1.1-5.8 bound. Incubation parameters are as follows: 54 hours dark (control; 24.5 ~ 2S : 'C; 16 hours light / 8 hours dark photoperiodicity 1.8-5-58 : C Ü ~ on, no ccoi Oay League live fluorescent lamp').
Az orbáncfű kallusr és szuszpenzlöa kultúrájának biomassza tömeg növekedése a viragáit 11. vonalon az iöö függvényében a növekedési görbe felvéve lével jól nyomon, követhető. A zo^C-on végzett kísérletekben a szekunder kallusz szöveteket Oy 2 g oltási tömeggel 40 ml találmány szerinti 2, tápközeget tartaimarő Petri csészékbe helyezzük. A 5-5 naponkénti, mérés véletlenszerűen kiválasztott szövet friss- illetve 72 órás liofil.izálás otáni. szárazanyag tömegéből történik. A mérések kalloezok esetén 58 napig, szuszpenziok esetén 21 napig folynak. Az eredményeket az la;-cl ábrán mutatják be.The increase in biomass mass of St. John's wort callus and slurry culture on the blossomed line 11 versus IoE can be well monitored by plotting the growth curve. In experiments performed at zC, the secondary callus tissues were placed in 2 ml of medium according to the invention in Petri dishes containing 2 g of inoculum weight. The tissues are randomly selected every 5 to 5 days after fresh or 72 hours of lyophilization. of dry matter. Measurements are carried out for 58 days for kalloys and 21 days for suspensions. The results are shown in Figure 1a; -cl.
Abrak leírása:Description of Abrak:
la; ábra: bemutatja a H. perforatum kallusz növekedési görbéjét a 2. táptalajon, tétható, hogy a 58 napos tenyésztésű kallusz friss tömege 5,28 g, liofiiizáit. szárazanyag tartalma 0,4 8 g. Hz azt jelenti, hogy a kallusz tenyészet friss tömege 56,1™szeresére nőtt a leoltásl 0,5 q-hoz, szárazanyaga pedig 43-szorosára az eredetileg leoltott tömeg 0,01 g szárazanyagtartalmához képest.la; Fig. 5A shows the growth curve of H. perforatum callus in medium 2, assuming that the 58-day-grown callus weighs 5.28 g freshly lyophilized. dry matter content 0.4 to 8 g. Hz means that the fresh weight of the callus culture increased 56.1 ™ from inoculation to 0.5 q and its dry matter was 43 times the original content of the inoculated mass of 0.01 g.
1b; ábra: bemutatja a ü, perforatum swszpenzlő növekedési görbéjét a 2, táptalajon. Láthatő, hogy a H. perforatum sárgás barna tetőse)tea, valamint kisebb aggregátumokat tartaimazö, a 51 táptalajon, sötétben, 21 napig rázatott szuszpenziöi a kezdeti 2 g-os lecitást kővetően 10,50 g friss tömeget termelnek (80-100 ml-berö és 0,74' g szárazanyagot, Hz 5,3-szoros növekedésnek, illetve 3,5-szeres * X* χ» * * * Α * χ * » β «.1b; Fig. 3B shows the growth curve of the perforatum swirl on medium 2. It can be seen that H. perforatum's yellowish brown top) tea and suspensions of small aggregates in 51 media, shaken for 21 days in the dark, produce an initial mass of 10.50 g (80-100 ml) after an initial 2 g lecithin. and 0.74 ′ g of dry matter, Hz for a 5.3-fold increase, and 3.5 * x χ Α * * * β χ »β«.
* ♦ * * » * * « Φ ψ * ♦ '·* Φ* Λ »»„» χ* növekedésnek felel meg tn ki indulási anvusu 0,.19 g száraz tömegéhez viszonyítva? .* ♦ * * »* *« Φ ψ * ♦ '· * Φ * Λ »» "" χ * is equivalent to an increase of 0, .19 g dry weight? .
lc; ábra; bemutat j a s H. perit remit szuszpenzió növekedését alc; figure; illustrates the increase in H. perit remit suspension a
3. táptalajon, mely pirosas barna soksejtes és aggregátumokat is tarta1 tor. A görbéből látható, hogy a kezdeti 2 g -os ieoifást követően 21,90 g friss tömeg, valamint 1,30 g szárazanyag termeiödik a 21, napra, igy a friss tömeg 11szsresére, a szárazanyagtartalom pedig 7,8-szorosára né ta kiindulási anyag 0,17 g száraz tömegéhez vrszonyiiva!.3. medium containing reddish brown multicellular cells and aggregates. The curve shows that after an initial 2 g desiccation, 21.90 g of fresh weight and 1.30 g of dry matter are produced by day 21, 11 times the fresh weight, and the dry matter content is 7.8 times higher. 0.13 g dry weight yeast !.
A II. vonal által termelt biomassza tömegét 2 éves periédósban követtok nyomon. Az ossz-kallosz friss tömege a. 2 év alatt 1068 g, az 1, évben viszonylag csekély, de a 2. évben 25-szörösére nőtt. Az ossz-;szuszpenzió friss tömege a 2 év évben kb, r kp ,·:> <;II. The biomass produced by the line is monitored in a 2-year periwort. Fresh weight of all-callose a. 1068 g in 2 years, relatively low in year 1, but increased 25 times in year 2. The fresh mass of the suspension in the 2-year year is approximately, r kp, ·:> <;
alatt kb, 2230 g, melyből az I. év termelése a 2, 050-szeresére nőtt, A szárazanyag átlaga kailusznál szoszpenziönáI 7,79 ti a nyomon követett 2 éves időszakban (lásd 4. táblázat?- A táblázatból látható a találmány szerinti módosított táptalajokoö létrehozott kaiiusz- és szoszpenzíös kultúrák igen jelentős mennyiségé biomasszát képesek termelni hosszantartó 1dö s z a kb a n.2230 g, of which the production in the first year increased by 2,050 times. The average solids content of the loaf was 7.79 ti over the 2-year period monitored (see Table 4? - The table shows the modified nutrient medium according to the invention). The cultivated kelus and spp. cultures are capable of producing a very significant amount of biomass over a long period of time.
A találmány szerinti táptalajokon; termelt biomassza i kai lösz, szuszpenzió és toliam; hotőanyagtartalmáz is meghatároztuk nkrG-vel és összehasonlítottuk a kereskedelmi forgalomban léve· öyperiei borba (gyártó: Gydyynövénykozatö intézet, Budakalász? termékkel. Az I,( II, és III. vonallal kapott eredményeket a 2, és 3, táblázatban mutatjuk be, Az összes mért flavonoidtartalom 13,33%-ot, a hiperIcin-tartalom pedig Cguézé-ot ér el a vizsgált, találmány szerinti táptalajokon (1. táblázati a BkLC elemzések átlagértéke 1 alapján (2, és 3, táblázati, a figyelembe vett két éves periódusban (3 minta átlaga 2-szeri ismétlési, A kultúrákban detektált összes flavonoid-tartarom 9,«9-8,96% kai.busznál és 0,33-2,12% szuszpenzió eseten egyéves periódusban. A százalékok tomegt-ra vonatkoznak.The media according to the invention; produced biomass loess, slurry and toluene; was also assayed for nkrG and compared to commercially available · Öperperi wine (produced by Gydyynövénykozatö Institut, Budakalász?). The results obtained with lines I, ( II, and III) are shown in Tables 2 and 3, the flavonoid content reached 13.33% and the hyperincin content reached Cguézé in the media according to the invention (Table 1 based on the mean value of BkLC analyzes 1) (Table 2 and 3, Table 2 over the two year period considered). average of 2 times the replicate, The total flavonoid content detected in the cultures was 9, 9-8.96% in the case of ca.bus and 0.33-2.12% in the one-year period, the percentages refer to tomegt.
é ♦ *·»· r*·é ♦ * · »· r * ·
Í.4I.4
2. tábládat: TaXáls&ány szerinti H. porfora tim k&llus®, sgussspanxió és folium hatóanyag-spakfcrtma & HFLC-visssgálatok alapién iH ·· berba. kereskedelmi termék, F - Π. és Hi. föfneveit növény magjáról indított leveles· hajtás feliama. .................Feiimnhez i Herbátféz Yíszcnyitott * érték növekedés, - közei megegyező értékTable 2: H. porfora tim k & llus®, sgussppanxion, and folium spakfcrtma & commercial product, F - Π. and Hi. ................. Feiimnhez i Herbatézé Opened * increase in value, - approximate value
ί ♦ '· ·> χ «ν* X*ί ♦ '· ·> χ «ν * X *
Η.2{?Η5,δ P,iS feíííS I ícvcLszssszpcns:,! ! 1Η.2 {? Η5, δ P, iS superimposed I ícvcLszsSZpcns:,! ! 1
OpSTö........íus b.usv pá...........jáw.........púOpSTö ........ íus b.usv pá ........... jáw ......... pú
JcvéLszsiszpersz.; I IJcvéLszsiszpersz .; I I
OpH5,ő «US levél. s?.«s.yj.»affii-Í fény iOpH5, he «US letter. s?. «s.yj.» affii-Í light i
ÍHeSá $10.35$ 10.35
OY.MX.I. 3! éjOY.MX.I. 3! night
Wl>XeOraOM«meOC«M&kra<eOOOOOOOCeOOOa»Xl>XlO>>M&ÚOOO0UCWUUUM>M*«AAAMUl>AAAAAAMAA«Z'&W«A«*AA*AMAAA**.«AM*AS>'V*^^ b,03S h.5S felSS |1,QS JMÖ5 »71 «, ** fe. χ >{. -♦ fe * :·>. ν* 'Wl> XeOraOM «meOC« M & kra <eOOOOOOOCeOOOa »Xl> XlO >> M & ÚOOO0UCWUUUM> M *« AAAMUl> AAAAAAMAA «Z '& W« A «* AA * AMAAA **.« AM * AS>' V * ^^ b, 03S. h.5S felSS | 1, QS JMÖ5 »71«, ** fe. χ> {. - ♦ fe *: ·>. ν * '
4. táblázatTable 4
H. perfomtum 11. vonal biomassza produkciója 2003-2008 periódusbanBiomass production of H. perfomtum line 11 in the period 2003-2008
Sötét ! Fény | Össz. szuszpenzió 2003 - 2004It's dark! Light Total suspension 2003 - 2004
> ΧΦ 4* * - * V Φ X * * **} * Ίί ~ »«· »- » »—».> ΧΦ 4 * * - * V Φ X * * **} * Ίί ~ »« · »-» »-».
A táblázatok adatai azt matatják, hogy a ratin-szintézist. a 3. záptalajon a Nak és Kid növelte a 2. táptalajnál. íkontroli; alkalmazott 2,1-1, lAA, NAA és BAl hormonokhoz képest, Ugyancsak növelték a rétin felkaimazödást a 6, táptalaj 0,251 menny rs épben alkaimazott kS -éra kroe lévai, illetve a Bét és 2,4D aránya rázatott keltára esetén sötétben es lényen. Növekedett a rutin-tartalom a 3» táptalajon is 2j4~D alkaimazásánál szuszpenziöban vényen. Kaliusznál a 2. tápközeg béé, léé, kéé és 2,4-D tartalma ugyancsak rutin-növekedést indokáét sdtétden as ίόηνηη.The data in the tables show that ratin synthesis. on Medium 3, Nak and Kid increased it on Medium 2. íkontroli; 2.1-1, lAA, NAA and BAl were also used to increase meadow germination at 6, 0.251 hrs of freshly-digested kS, and the ratio of Beta to 2.4D in shaken Celtic beings. Increased routine content was also found in 3 µl of 2j4 D preparation in suspension. In Kalius, the intestinal, juice, blue, and 2,4-D content of medium 2 is also a reason for routine growth sdtétden as ίόηνηη.
A kvezcitrin mennyisége is nett a kontrolihoz <?, táptalajé viszonyítva szuszpenziö esetén a megváltoztatott pB-jú, 2,é~D, léé, BAA, Bét hormontartalmü 2. tápközegen sötétben és iéa.yen, valamint a 2,4-D-tartalmú 6. tápközegen fényen. Kailasznái a megváltoztatott pH-já 2. táptalajok Ion 5,0-5,83 esetén rs emelkedett a kvercitrin-szint sötétben és fényen.The amount of quezcitrine in the suspension was also altered relative to the control in the presence of the modified pB, 2, é-D, juice, BAA, Beta-2 medium in the dark and in the dark, and the 2,4-D-containing medium. 6. medium under light. Kailasna changed pH to 2. Medium Ion 5.0-5.83 rs increased quercitrin levels in dark and light.
A kvercetin mennyisége is növekedett szuszpenzíóban a sötétben rásatott komtrolihoz íz. táptalaj! képest: a 2, táptalajnál fényen, a 8. tápkczeonéi sötétben és fényen, a 0. táptalajnál fényen. Kaliusznál a 2. táeközegnéi mutat kozott kvercetin mennyiségi növekedés sötétben ss fényen.The amount of quercetin in the suspension also increased with the taste of comtrol in the dark. medium! relative to: medium 2 for light, medium 8 for dark and light, and medium 0 for light. In Kalius, medium 2 shows an increase in quercetin in the dark under ss light.
A kempferoi szintézise optimálisnak mutat kozott szuszpenziók esetén, Így a 3. táptalajon sötétben,, a 5, táptarajon sötétben és fényen és a 8» táptalajon fényen, kall asznál a 2. táptalajon növekedett kurtára fényen és sötétbon mutatott kempferei-szint növekedést a más Időpontban indított 2. táptalajon növe11 ka11úrákboz képest,The synthesis of Kempferol appears to be optimal for suspensions such as Medium 3 in the dark, Medium 5 in the dark and light, and 8 »in the light, call, and Medium 2 in the dark. started on Medium 2 compared to 11 cages,
á. hiperlein-termelés a ű. és 8, táptalajakon, a sötétben és fényen rázatott szaszpenzl.ókban volt nagyobb a kontrolihoz ;2, táptalaj) képest.the. hyperlein production. and 8 were higher on control media, shaken in the dark and light than control; 2, medium).
3\ rutin-termelődés, amely Kypericum fajtátör függő, a magról indított tollúmnál, a 11» vonalnál O/zi-os, a 111, vonalnál 1,26%-os növekedést eredményezett<3 \ routine production, which resulted in a kernel of the kernel Kypericum, increased by O / zi at 11 », 1.26% at 111»
Az együtt detektált rutin- és hiperozio-mennyiség 1,32%-ra » φ is nőtt. ka Húsznál a 6. tápközegen fényen tartott kői tórában. A Hyperici herba GVUKI 315 Eh. Sut. 4 kereskeéeimi mrrdaoan a rutin és hiperozití együttes mennyisége 1,035% volt. Et art jelenti, hogy a találmány szerinti módosított táptalajon igen jelentés rutinenu perozid. növekedés: érhető el.The amount of co-detected routine and hyperosis increased to 1.32% »φ. ka Twenty of the six stone stacks lit with medium 6. Hyperici herba GVUKI 315 Eh. Bake. The total amount of routine and hypersensitivity was 1.035% by 4 trade-markers. Et art means that the modified medium according to the invention is highly meaningful to routine peroside. growth: available.
A hiperoztd-tarbalom magról inditott teliuítnái 1,111 a vizsgált 11. vonalnál és 0,70% a ill. vonalnál, A hiperozidsrint kaliusznál lg 1% és 0,611 között mozog a 2. táptalaj esetén sötétben, 0,4% a 0. táptalaj esetén fényen a 11. vonalnál, és lényegesen magasabb, 2,61% a 6, táptalaj esetén fényen a Ili vonalnál,Hyperdistribution induced by seed would result in 1.111 at test line 11 and 0.70% at or 11.0%, respectively. at Hyperosidine Ridge, it ranges from 1% to 0.611 lg for Medium 2 in the dark, 0.4% for Medium 0 at light 11, and significantly higher at 2.61% at 6, Medium II at light line,
A kveroit rin·-tartalom fői rumnál 2,131 a vizsgált II, vonalnál és 0,81% a III, vonalnál, A Hyperiol herba kereskedelmi termék 0,1501 k verni trónt tart au. ma zott . A találmány szerinti táptalajokon fényen nevelt kailuszok esetén a kverettran menynyisége 0,4il -1,011, ami lényegesen meghaladja az ismeri térmékét.The queroline rin · content in the main line is 2.131 for the tested line II, and 0.81% for the line III. The commercial product Hyperiol herba holds a throne of 0.1501k. today. In the case of light cultures grown on medium according to the invention, the amount of queretran is 0.4 µl -1.0101, which is significantly higher than the known volume.
A. kvex-eetin-tartalom felinmnái 0,21% a vizsgáit II. vonalnál és 0,201 a 111. vonalnál, A hyperici herba kereskedelmi termék ugyanosak bELC-vel detektált kvercetln-tartalma 0,1051. A találmány szerinti táptalajokon sötétben nevelt kallusz esetén a kvercetan-tartalom 0,31, mig fényen neveit kaarasz esetén 1,01%-nak adódott. Ez art jelzi, hogy a találmány szerinti táptalajokon megtöbbszöröződik a kailnsz kvercetin-tartaima.A has a quinoxetine content of 0.21% in the II. line and 0.201 at line 111, The commercial product hyperici herba has the same quercetin content of 0.1051 detected by bELC. The content of quercetan in callus cultivated in the dark on medium according to the invention was 0.31, while in the case of callus cultivated on light it was 1.01%. This art indicates the presence of quail quercetin in the media according to the invention.
A kempferői mennyisége a Hyperici herba-bán 0,031%. A találmány szerinti 2. táptalajon a fényen neveit kallasz kvercetin-tartaima az rsneru termekének kb, a fele i 0,036%). Azonban szciszpenzioné 1 sötétben és fényen egyaránt igen jelentés kempf erol-tartaiom. fö, 1.015 detektálható a 6. és S. táptalajon, ami több mént 2, S-szerese a kereskedelmi. termékének.The amount of campers in the Hyperici herb is 0.031%. In the medium of the present invention, the content of the light-called callas quercetin in the medium of the invention is about one-half (0.036%) of the rsneru product. However, the suspension in the dark and in the light is very meaningful in campfire content. major, 1,015 can be detected on media 6 and S. which is 2, 5 times more commercially available. product.
A hiperlcin mennyisége 0,619% a hyperici herba kereskedelmi mintában. Ezzel szemben a hipericin-tartaiom a találmány szerinti foliumnái 0,61% a vizsgáit II. vonalnál es 0,51% a Ha, vonalnál. A találmány szeranti szoszpenzida tenyészetekThe amount of hyperlcin was 0.619% in the hyperici herba commercial sample. In contrast, the hypericin content of the foil according to the invention is 0.61% of the tested II. line and 0.51% for the line Ha,. The invention relates to serant sppenside cultures
htperioin-tarteima Q , 07-0,2:02¾. a kaiiuszok hiper lóin-tartairm; eb 01 -0,04%. Be 1 s e t a1. f e at-ez1ite t a o2 kkébea a fén yen és s ö tétben nevelt n. perforatum sejtszúszpenziós tenyészetek hiperboin--tartalma 0,012%. Tehát a találmány szerinti módosított táptalajokon nevelt kultúrák hipericin-tartaima felülmúlja a Bafs-féle tápbözegen nevelt szuszpenziős kultúrákét.htperioin tarteima Q, 07-0.2: 02¾. hyperlonic content of keluses; eb 01 -0.04%. Without 1 s e t a1. f e at-ez1ite t the o2 kkébea is light and raised in st. Hyperboin content of perforatum cell pellet suspension cultures was 0.012%. Thus, the hypericin content of the cultures grown on the modified media according to the invention is superior to that of the suspension cultures grown on Bafs's medium.
ősszel ogi.ai va a lentieket elmondható, hogy a találmány szerinti fel inatokban, kallaszókban, valamint sejtszuszpenzlös tenyészetekben jelentősen megnővekedett az egyes hatóanyagok mennyisége es ezáltal az ösozhotóanyag-mennyi segaIn the autumn, it can be said that in the cultures of the invention, in callas and in cell suspension cultures, the amount of the individual active ingredients and thus the amount of
A találmány tárgya továbbá egy eljárás közönséges orbúztofű in vitro reqeneráfására embrionén jellegű kai tárábólf amely abban áll, hőgy egy találmány szerinti, mbdositott bS-nz táptalajon létrehozott kalluszbói módosított N6-72 vagy módosított Bö-aB hormonmentes táptalajon fényen baj fást vagy gyökeres hagtást regenerálónk.The invention also kai library of a process common orbúztofű in nature embryo vitro reqeneráfására f which is to kalluszbói created BS-nz medium according to the invention, mbdositott modified N6-72 or modified BO-aB hormone-free medium in light trouble FastA or rooted hagtást regenerator .
A nypericom perforatum 1,> kultúrák tenyésztéséhez létrehozott, találmány szerinti módosított táptalajok előnyei az alábbiakban foglalhatók össze;The advantages of the modified media according to the invention for the cultivation of nypericom perforatum 1, 1 cultures can be summarized as follows;
folyamatosan termelő in vitro rendszerek, melyekkel dedifferenciált és dif térénél .ált struktúrák hozhatók létre ás tarthatók fent folyamatosan;continuously producing in vitro systems for creating and maintaining dedifferentiated and differential structures;
a találmány szerinti rendszerekben létrehozott kallusz- és szaszpenziös tenyészetekkel,,· illetve in vitro regenerált növényekkel termettethetök a d. perforatum hatóanyagai;can be grown with callus and suspensive cultures created in the systems of the present invention, or with in vitro regenerated plants. agents of perforatum;
az ezeken végzett tenyésztés fokozott biomassza termelődést és egyidejűleg fokozott hatóanyag ífiavonoiö és hipericlnv termelést eredményez;cultivating them results in increased biomass production and, at the same time, increased drug production and hypericline production;
jól kontrodiálható rendszerek standardizált, ellenőrzött és optimalizált kúisö feltételek mellett;well-contradictory systems under standardized, controlled and optimized cure conditions;
nagyléptékben történő tenyésztésre is alkalmasak.they are also suitable for large-scale breeding.
A találmányt - az oltalmi kör korlátozása nélkül - az alábbi példákkal közelebbről ismertetiak.The invention is further illustrated by the following non-limiting examples.
Közönséges orbáncfű kaliusz- és ssjtszusspensiős kultúráinak létrehozásaEstablishing callus and cellulite cultures of St. John's wort
Közönséges orbáncfű (byperleum perforatum L.j sz1élővelébői, fiatal lonbieveléböi. az in tízre regenerált növény gyökeréből, leveles hajtásából vagy ez intakt növény virágos bajfásának felső harmadában 130 emu fejlődőit levélből a, 5 cm-es szegmentumokat készítünk és ezeket 5 percig 3D3~os etilalkohollal; 10 percig nátrium-bipoklorit-oidattal sterilizáljak, majd ötször steril desztillált vízzel átmossuk, steril szűrőpapíron szárítjuk es 10 cm átmérőjű Petrd.-csészébe 30-40 ml agar-agarral szilárdított találmány szerinti módosított Maiz táptalajra (például at 1. táblázatban megadott összetételű;St John's wort (byperleum perforatum Lj germline, young lonelium leaf). From the root, leafy shoot or top third of the flowering plant of this intact plant, we develop 130 emu leaflets up to 5 cm3 in 3 cm by 5 cm3 and 5 cm sterilize with sodium bipochlorite solution for 5 minutes, then wash five times with sterile distilled water, dry on sterile filter paper, and in 30-40 ml agar agar solidified with the modified Maiz medium according to the invention (for example, as shown in Table 1;
5, ö pb-jű 2. sm taptalajd leolt ják primer kaliusz Iniciálása céljából, a Petri-osészéfcef 24,ő~25“'C hőmérsékleten sötétben tartják; a tápközeg pH-ját ö,2h KaOH-dai vagy 0,1b HCi-Iei szabályozzuk. 3-t hetes Inkubálás után primer kaliusz inbukálődrk, ezt követően 3-1 hét után a kalluszoket friss tápközegre átoltjuk és a kultúrát sötétben tartják, minek eredményeképpen szekunder kaliusz proli fezéIdőik.5, pb-2 2. sm tapioca inoculum for primary callus Initialization of the petri dish is kept in the dark at 24 ° C to 25 ° C; the pH of the medium was adjusted with δ, 2h KaOH or 0.1b HCl. After 3 weeks of incubation, primary callus inoculants are incubated, and after 3 to 1 weeks, the calli are inoculated into fresh medium and the culture is kept in the dark, resulting in secondary callus proliferation.
További 3,5-4 bét után a folyamatosan sötétben tartott tenyészeteket friss tápközegre oltják ügy, hogy csak a legjobban no v e k v o kai1aszó ka t s z eIek fcá1jak.After a further 3.5-4 beta, cultures kept in the dark are inoculated with fresh medium to ensure that only the most well grown cultures are exposed.
Újabb 3,5-4 bet máévá a kallaszok egyik felét sötétben 24, 5-25 C hőmérsékleten tovább növel jak, például 2, táptalajön (pH 0, 3, kontroll'; vagy 3, táptalajon (pH 3, ö(,mig a kaíluszok másik felét fényen Ínkubáljuk 24,5-25oc-on, például 2, táptalajon (pH 5,0: és pH ö,S0 vagy 6. táptalajon (pH 3,00, illetve 3, táptalajon (pH 5,30, valamint 7. táptalajon (pb 5,21 .Another half of the callus is further increased in the dark at 24-25 C, for example 2, medium (pH 0, 3, control '; or 3, medium (pH 3, δ (, the other half of the rays are incubated in light at 24.5-25 ° C, for example 2, pH 5.0 : and pH 5, S0 or 6 (pH 3.00 and 3, pH 5.30, and Medium 7 (pb 5.21.
További 3,5-0 hét eltelte után a sötétben növekvő kairaszokat tovább szelektáljuk, és a szelektált kaktuszokat 20,525öC-en például a 2. táptalajon (pH 5,80 vagy a 3, táptalajon (pb 5, öj ismét sötétben tenyésztjük, aközben egy részűkből szuszpenziöt hozunk létre sötétben beföilázott 250 mi-esAfter additional 3.5 to 0 in the dark weeks growing kairaszokat further selected and the selected cacti o C via e.g. medium Öj 20.525 again cultured in medium 2 (pH 5.80 or 3, (5 pb dark, the mean to form a suspension of particles, 250 ml, dark-plated
- - 21 06 1 0 05- - 21 06 1 0 05
Erlenmeyer-lombiköan 60 mi tápfalajon, B,ό-ζο'Ή-οη, laboratóriuma törüimények között, löt főmön lat/part; .ráhatással, laboratóriumi rázőgépen, így pólóéul a 2. tápfslagon (pH 5,8 vagy pH 6,8(, a 5. táptalajon ion 5,60, a 6, táptalaton (pH 5,8( vagy a 3. tápközegen (pH 4,3-6,2(, A sötétben záratott szuszpenziók agy részét 13/8 íotoperiodioivassal is tenyésztjük ugyanezeken a táptalajokon,Erlenmeyer flask with 60 ml of nutrient medium, B, ό-ζο'Ή-οη, laboratory under fragile conditions, predominantly lat / shore; on a laboratory shaker such as a T-shirt on Medium 2 (pH 5.8 or pH 6.8), Medium 5 on ion 5.60, Medium 6 on pH 5.8 (or Medium 3) 4.3-6.2 (, The brain portion of the dark-locked suspensions is also cultured with 13/8 phosphotiodiodes on the same media,
A fényen nevelt kaliuszok közül is 3,5-4 hét eltelte után a legjobb növekedésűékét tovább oltjuk, az inkubációs paraméterek a kővetkezők; 25-26,3 '7', relatív páratartalom kb. 75%, fotoperlodicitás 16/6, a fényintenzitás 50-63 gK/nl/s novemberfebruár között (szomatikus embriogenézishezO, ll-zidü; 88-103 ué/vt/s március-május között ízölcüiő, pirosodé ka ll úszókhoz ; , 2 i, 5-24 , 5'3(; 800-200 pM/zO/s jánias-szept ember' között, relatív páratartalom 60-78% (mély tőié és piros kailussokhoz( , 2526, 5éj; ?z éra megvilágítás fénypoloon növény szobában, a megvilágé zás 36 ρΗ/ηύ/η (Ligát mater ié~i30 HSA; , FI Cooi Day Light 36 H fényesé alatt, 40 cm polctávclság, relatív páratartalom 20% (világos zöld és lliás piros kalluszekboz;, 24-26''C, 8. táptalajon; és 16/8 fctoperrodicitás pl, 2. táptalajon (pH 5,3(, 2, táptalajon (pb 5,8;, 6, táptalajon (pH 5,3(, 3. táptalajon^ (pH 5,8; , 5, táptalajon (pH 5,.0( vagy 7, táptalajon (pH 5,60.Even in the case of light-bred calluses, after 3.5-4 weeks, the best-growing wedges were inoculated, with the following incubation parameters; 25-26.3 '7', relative humidity approx. 75%, photoperlodicity 16/6, light intensity 50-63 gK / nl / s in November (for somatic embryogenesis, ll-zidyl; 88-103 u / w / s between March and May, for taste, reddish-ll for swimmers; , 5-24, 5'3 (; 800-200 pM / zO / s Janian-Sept human ', relative humidity 60-78% (for deep vole and red coat) (, 2526, 5n ; zz illumination in light poloon plant room , illumination 36 ρΗ / ηύ / η (Ligate materié i30 HSA;, FI Cooi Day Light under 36 H gloss, 40 cm shelf space, 20% relative humidity; light green and lilac red callus box ;, 24-26 '' C, Medium 8; and 16/8 fctoperrodicity, e.g., Medium 2 (pH 5.3 (, 2), Medium (pb 5.8; 6.6, Medium (pH 5.3), Medium 3 (pH 5) , 8;, 5, medium (pH 5, .0 (or 7, medium, pH 5.60).
A fényen nevelt kairussokbél is létrehozunk szuszpanziót laboratóriumi körülmények között, rázőgépen, 100 fordulat/perc rázatással, szűrt fényen, 23,5-25:>C-tt, 250 ml-es lombikban 68 ml táptalajon, például az 1. táptalajon (pH 5,8(, a 2. táptalajon (pH 5.3(, a 4, táptalajon (pH 5,8(, az 5. táptalajon (pH 6,0(, a 6. táptalajon (pH 5,0(, illetve a 8. táptalajon (pH 4,3-5,2( és a 9, táptalajon (pH 5,81.The light cultured Cairo intestine is also made in laboratory under suspension on a shaker, shaking at 100 rpm, filtered light, 23.5-25 : C, in a 250 mL flask on 68 mL of medium such as pH 5 , 8 (, Medium 2 (pH 5.3), Medium 4, pH 5.8, Medium 5 (pH 6.0, Medium 6 (pH 5.0, and 8)). medium (pH 4.3-5.2) and 9, pH 5.81.
Újabb 3,5-4 hét eltelte után a sötétben nevelt kallusz kultúrákból növekedési görbét veszünk fel, mely az laö függvényében mért biomassza nyers tömeg és szárazanyag növekedését jelenti. A sötétben neveit kalluszt 3,2 g kiindulási nyers tömeggel indítjuk és 28-29 napig inkuháijuk, miközben 3 naponta:After another 3.5-4 weeks, a growth curve is obtained from dark cultured callus cultures, which represents the increase in crude mass and dry matter of biomass as a function of lao. The callus in the dark is called with a starting weight of 3.2 g and incubated for 28-29 days, with every 3 days:
* »*♦ * A »* * ♦ ♦ # *** «< 4« ♦ χβ * »* ♦ * A» * * ♦ ♦ # *** «<4« ♦ χβ
Petri—csésze tartalmát felszámoljak a friss és száraz tömeg megás táró zás? céljából. A sőtetbet rávetet t sejtszuszpenziő növekedési rátáját, pssszálász peribdusát is msegállepit juk a ié-zi napos tenyésztést kővetően, itt a kiindulási tömeg 2 g 60 mi tápközegben, Megállapítjuk a sötétben termelődött biomassza friss tömegét és száraz tömegét (iisíiiizárással; például e 2. táptalajon (pH 5,6; és a öv táptalajon (pH 5,2;.Petri-cup contents of liquidation of fresh and dry mass digestion storage? for the purpose. The seedlings were also challenged with the growth rate of the cell suspension and the peribus of the psylserase after the lysis of the sun, with a starting weight of 2 g in 60 ml medium, pH 5.6; and belt medium (pH 5.2 ;.
2, példaExample 2
Intakt növény leveles hajtásának (foliwr) létrehozásaCreating an intact plant with a leaf shoot (foliwr)
Nedves szöröpapfron 2ő-~zSaC~en fényen turbáncin magot csiráztaöunk. A csirsnövények egyik részéből felületi sberilevés után agaros táptalajon kaiiuszt hozunk létre, a másik részükből tüzdeiéssel közönséges virágfölében leveles hajtást hozunk létre. Erről ieszuretei jóik a foiiomot (levelet;, és egyik részéből kaiiuszt indukálunk, a másik részéből pedig iiofz11 rálássál szárazanyag-meghatározást és összehasoniitö vizsgalatokhoz hatöauyagmsghatározást. végzünk,On wet wet paprika, 2 to 2 zS of C light was germinated with a turban seed. One surface of the cherry plants, after superficial sberration, forms a cauliflower on an agar medium, and the other half produces a leafy shoot on a common flower bed. From this, it is good for the folios (letter; and, from one part, to induce cilia, and from the other, to determine the solids and to determine the effect on the comparative tests,
3.. példaExample 3
Közönséges orbáncfű in vitro regenerálásaIn vitro regeneration of St. John's wort
Az 1. példában nyert, fényen neveit, embriogén jellege kalluszókböl a következő 5,5-1 hőt elteltével hajtás, gyökeres hajtás regenerálását vaiósitjnk meg 4-n hét leforgása alatt a találmány szerinti 11. mödositott 35-68 hormonmentes táptalajon pH 5,6-on,The embryogenic nature of the light-named embryogenic product obtained in Example 1 from the following 5.5-1 heat is regenerated in 4 to 7 weeks in the form of hormone-free 35-68 medium according to the invention at pH 5.6. you,
A szuszpenzhóba helyezett emórrogén kallusz darabkákból 3? nap alatt, természetes fényen, a találmány szerznti 10. módosított 36-16 hormmnmentes tápközegben es a 11. módosított B5-S8 táptalajon is pk 5,2 mellett leveles hajtást regenerálna tank .Of the emorogenic callus fragments placed in suspension snow, 3? During the day, in natural light, the invention would regenerate a leafy shoot in a modified 36-16 hormone-free medium 10 and a modified B5-S8 medium in addition to pk 5.2.
4. példaExample 4
Bioesssa fösaegának meghatározása .Determination of Bioesssa fossil.
Az 1, példa szerint létrehozott sötétben ás tényen nevelt kaliuszcrat lesz lset eljük és meghatárazzak a friss tömegüket, valamint 72 órás iiof ilizáiássai. a szárazanyag-tartalmat.The dark well created in Example 1 will be harvested and digested with fresh weight and 72 hours of lyophilization. the dry matter content.
Az 1. példa szerint létrehozott sötétben és fényen tatatett szaszpenz1ókat 14-2.1 nap után les átvetellük és méréssel meghatározzak a biomassza, friss tömegét, majd 22 órás iiofiitrálássál a szárazanyag-tartalmát.The dark and light suspended suspensions produced in Example 1 were harvested after 14-2.1 days, and the biomass fresh weight was measured and the dry matter content was lyophilized for 22 hours.
A H. perfóratom 11. vonal biomassza tertelosére 2 éves serrodasöan az alábbi átlagértékeket mértük: kalinsznál a friss tömeg ledé, 3® g, a szárazanyag rl, 02 g (0, 521? ; szaszpenzic esetén a friss tömeg 2195,19 g, a szárazanyag tömege 171,54 g í 7,7 91} ,The mean values for the tertiary biomass of H. perfora atom line 11 at 2 years were the following: fresh weight ice cream, 3 g, dry matter rl, 02 g (0, 521?), Fresh weight 2195.19 g, dry weight 171.54 g 7.7 91},
Az 1 , példa szerint létrehozott kallaszokat vagy fényen rázatotf szaszpenziőkat 14-21 nap után (táptalaj töt függően} leszüreteljak, iiofiilzáljak és üaLC-vei meghatározzak az orbáncfű bioicgíaiiaq aktív komponenseit.After 14-21 days (depending on culture medium), the callas or light shaken suspensions created in Example 1 are harvested, lyophilized and determined with the help of <RTIgt; ylAcc </RTI> bioactive ingredients of St. John's wort.
A hzLC-méréseket az alábbiak szerint végezzük.HzLC measurements are performed as follows.
Extrakcic: 0,2 g iicfliizaif szárazanyagot 3x5 ml metanolban szonikálank 3x30 percig, majd -5vC-ra előhűtött centrifugában 50(10 ford/perc-oel. 10 percig centrifugáitok. Ezután a mintát vákuum bepárióban betöményit4ak és 1 mi-s appendorf csövekben metanolban felvesszük, centrifugáltak és felalúszöt reverz fázisú C15- oszlopra visszük.Extract: Sonicate 0.2 g of lycafluizide solids in 3x5 ml methanol for 3x30 minutes and centrifuge in a centrifuge pre-cooled to -5 v C for 50 minutes (10 rpm for 10 minutes). The sample was then concentrated in vacuo to 4 ml and appendorf for 1 min. was taken up in methanol, centrifuged and the supernatant applied to a C15 reverse phase column.
HFLC rendszer:: programozható Pharmacia LK3 foiyadékkromatográf, oidószerpampákkal és OO-detektorral felszerelve. A hatóanyagokat szobahömérsékleten. szitrkagéit tartalmazö reverz fázisú C IS oszlopon keresztül eluáijuk. Az izokratikus mozgó fázis 35% (tf/tf; acetonitrilt és 15% (tf/tfl Ea-aoetátpaffert (pH 4; Illetve 0,1 A arzröníum-acetát-puffert tartalmazó eluens. Az átfolyási sebesség 1 ml/perc, a detektálás 254 nm-en, 270 nm-en illetve 590 nm-en történik.HFLC System :: Programmable Pharmacia LK3 Liquid Chromatograph equipped with solventamps and OO detector. The active ingredients are at room temperature. eluted through a reversed phase CIS column containing citrate gels. The isocratic mobile phase was eluted with 35% (v / v; acetonitrile and 15% (v / v) Ea-acetoacetate buffer, pH 4; and 0.1 A-arronium acetate buffer. Flow rate was 1 ml / min, detection 254). nm, 270 nm and 590 nm, respectively.
Claims (2)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU0600245A HU227572B1 (en) | 2006-03-23 | 2006-03-23 | Process and modified media for preparing callus- and cell suspension cultures of hypericum perforatum l. |
| PCT/HU2007/000026 WO2007107803A2 (en) | 2006-03-23 | 2007-03-21 | Process and modified media for preparing callus- and cell suspension cultures of hypericum perforatum l. |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU0600245A HU227572B1 (en) | 2006-03-23 | 2006-03-23 | Process and modified media for preparing callus- and cell suspension cultures of hypericum perforatum l. |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU0600245D0 HU0600245D0 (en) | 2006-05-29 |
| HUP0600245A2 HUP0600245A2 (en) | 2008-01-28 |
| HU227572B1 true HU227572B1 (en) | 2011-08-29 |
Family
ID=89986663
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU0600245A HU227572B1 (en) | 2006-03-23 | 2006-03-23 | Process and modified media for preparing callus- and cell suspension cultures of hypericum perforatum l. |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| HU (1) | HU227572B1 (en) |
| WO (1) | WO2007107803A2 (en) |
Families Citing this family (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101180950B (en) * | 2007-12-26 | 2010-12-08 | 浙江森禾种业股份有限公司 | Tissue cultivation rapid breeding method of spring dendrobium stem |
| CN109496841B (en) * | 2018-11-13 | 2022-03-22 | 中国林业科学研究院林业研究所 | Tissue culture and rapid propagation method for golden silk plum |
| CN114303944B (en) * | 2020-09-30 | 2023-08-11 | 伽蓝（集团）股份有限公司 | Callus culture medium and extract of rosa tenuifolia, preparation method and application |
| CN114667933A (en) * | 2022-04-28 | 2022-06-28 | 蒙草生态环境(集团)股份有限公司 | Culture medium for tissue culture of sillima-type chenopodium camellinum |
| CN116034876A (en) * | 2023-01-10 | 2023-05-02 | 重庆市铜梁区果之王园艺研究院 | GF677 peach stock culture medium and cultivation method thereof |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JPS603826B2 (en) * | 1980-10-06 | 1985-01-30 | クロレラ工業株式会社 | Plant tissue or cell culture methods |
| WO2000022138A1 (en) * | 1998-10-14 | 2000-04-20 | Agriculture And Agri-Food Canada | Genetic factor of s. meliloti usda 1170 containing nodulation efficiency factor |
| DE60006367T2 (en) * | 1999-03-25 | 2004-08-12 | University Of Guelph, Guelph | MICROPROPAGATION AND PRODUCTION OF PHYTOPHARMACEUTICAL PLANTS |
-
2006
- 2006-03-23 HU HU0600245A patent/HU227572B1/en unknown
-
2007
- 2007-03-21 WO PCT/HU2007/000026 patent/WO2007107803A2/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2007107803A3 (en) | 2007-11-22 |
| WO2007107803A2 (en) | 2007-09-27 |
| HU0600245D0 (en) | 2006-05-29 |
| HUP0600245A2 (en) | 2008-01-28 |
| WO2007107803B1 (en) | 2008-01-24 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Abbasi et al. | Echinacea biotechnology: challenges and opportunities | |
| CN103843662B (en) | A kind of promote Herba Dendrobii tissue cultured seedling strong sprout and the method taken root | |
| CN101766122B (en) | Method for cultivating sweet sorghum tissue and special culture medium thereof | |
| Rathore et al. | Plantlet regeneration from callus cultures of selected genotype of Aloe vera L.—an ancient plant for modern herbal industries | |
| HU227572B1 (en) | Process and modified media for preparing callus- and cell suspension cultures of hypericum perforatum l. | |
| Castillo et al. | Plant regeneration from callus and suspension cultures of Valeriana edulis ssp. procera via simultaneous organogenesis and somatic embryogenesis | |
| US20020142463A1 (en) | Method for the mass propagation of adventitious roots of ginseng, camphor ginseng and wild ginseng by tissue culture and the improvement of their saponin content | |
| CN106106160A (en) | A kind of Radix Hemsleyae Macrospermae fast breeding culture medium and application thereof | |
| Nikam et al. | Multiple shoot regeneration and alkaloid cerpegin accumulation in callus culture of Ceropegia juncea Roxb. | |
| CN107155886A (en) | A kind of cultural method of virus-free snakegourd | |
| Aung et al. | Effects of Different Natural Extracts and Plant Growth Regulators on Plant Regeneration and Callus Induction from Pseudobulbs Explants through in vitro Seed Germination of Endangered Orchid Bulbophyllum auricomum Lindl. | |
| US20230200323A1 (en) | NOVEL SYSTEM FOR RAPID, ROBUST, AND EFFICIENT IN VITRO MASS PROPAGATION OF MISCANTHUS x GIGANTEUS | |
| CN104542309A (en) | Special culture medium for rooting and seedling strengthening of dendrobium officinale | |
| Fleck et al. | Immunoadjuvant saponin production in seedlings and micropropagated plants of Quillaja brasiliensis | |
| CN104255495B (en) | A kind of cultural method of Chinese torreya tissue cultured seedling | |
| CN109757377A (en) | A kind of cultural method for accelerating fritillaria thunbergii reproduction speed | |
| CN101401550A (en) | Method for inducing eggplant sporidiolum to form embryoid and special culture medium thereof | |
| Krishnan et al. | Establishment of cell suspension culture in Marchantia linearis Lehm & Lindenb. for the optimum production of flavonoids | |
| KR20010044236A (en) | The method for mass production and proliferation of adventitious roots by plant tissue culture in ginseng | |
| Thangjam et al. | Induction of callus and somatic embryogenesis from cotyledonary explants of Parkia timoriana (DC.) Merr., a multipurpose tree legume | |
| Henry et al. | Glycyrrhiza glabra L.(Licorice): cell culture, regeneration, and the production of glycyrrhizin | |
| JPS6317689A (en) | Method and medium for plant tissue culture and cell culture | |
| Hook | Leontopodium alpinum Cass.(Edelweiss): In vitro culture, micropropagation, and the production of secondary metabolites | |
| Robinson et al. | In vitro seed germination and protocorm development of Dendrobium aqueum Lindl. a rare orchid species from eastern ghats of Tamil Nadu | |
| SU1711735A1 (en) | Method for clonal micropropagation of citric wormwood |