HU221824B1 - Process for determination of the antibiotic sensitivity of oxygen using microorganisms - Google Patents
Process for determination of the antibiotic sensitivity of oxygen using microorganisms Download PDFInfo
- Publication number
- HU221824B1 HU221824B1 HU9802148A HUP9802148A HU221824B1 HU 221824 B1 HU221824 B1 HU 221824B1 HU 9802148 A HU9802148 A HU 9802148A HU P9802148 A HUP9802148 A HU P9802148A HU 221824 B1 HU221824 B1 HU 221824B1
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- oxygen
- antibiotic
- phosphorescent
- weight
- medium
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 61
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 title claims abstract description 51
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 title claims abstract description 35
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 title claims abstract description 35
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 34
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 33
- 230000008569 process Effects 0.000 title claims description 20
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 title abstract description 5
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 claims abstract description 18
- 150000004033 porphyrin derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 16
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims abstract description 13
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 11
- IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L erythrosin B Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(I)C(=O)C(I)=C2OC2=C(I)C([O-])=C(I)C=C21 IINNWAYUJNWZRM-UHFFFAOYSA-L 0.000 claims abstract description 10
- RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 3,7-bis(dimethylamino)phenothiazin-5-ium Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC2=[S+]C3=CC(N(C)C)=CC=C3N=C21 RBTBFTRPCNLSDE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- ZLFVRXUOSPRRKQ-UHFFFAOYSA-N chembl2138372 Chemical compound [O-][N+](=O)C1=CC(C)=CC=C1N=NC1=C(O)C=CC2=CC=CC=C12 ZLFVRXUOSPRRKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 8
- 229960000907 methylthioninium chloride Drugs 0.000 claims abstract description 8
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 36
- 238000005259 measurement Methods 0.000 claims description 19
- 229940011411 erythrosine Drugs 0.000 claims description 8
- 235000012732 erythrosine Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000004174 erythrosine Substances 0.000 claims description 8
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 claims description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 4
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 claims description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 claims description 4
- 229920003229 poly(methyl methacrylate) Polymers 0.000 claims description 3
- 239000004926 polymethyl methacrylate Substances 0.000 claims description 3
- -1 polypropylene Polymers 0.000 claims 2
- 239000004698 Polyethylene Substances 0.000 claims 1
- 239000004743 Polypropylene Substances 0.000 claims 1
- 229920000573 polyethylene Polymers 0.000 claims 1
- 229920001155 polypropylene Polymers 0.000 claims 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 claims 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 claims 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 5
- 229920006254 polymer film Polymers 0.000 abstract description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 abstract 2
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 14
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 13
- 230000008859 change Effects 0.000 description 11
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 10
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 9
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 9
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 8
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 8
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 7
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 6
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 230000036284 oxygen consumption Effects 0.000 description 4
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 4
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 4
- 238000005476 soldering Methods 0.000 description 4
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 4
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 4
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 239000003973 paint Substances 0.000 description 3
- 229920002379 silicone rubber Polymers 0.000 description 3
- 239000004945 silicone rubber Substances 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- AZUYLZMQTIKGSC-UHFFFAOYSA-N 1-[6-[4-(5-chloro-6-methyl-1H-indazol-4-yl)-5-methyl-3-(1-methylindazol-5-yl)pyrazol-1-yl]-2-azaspiro[3.3]heptan-2-yl]prop-2-en-1-one Chemical compound ClC=1C(=C2C=NNC2=CC=1C)C=1C(=NN(C=1C)C1CC2(CN(C2)C(C=C)=O)C1)C=1C=C2C=NN(C2=CC=1)C AZUYLZMQTIKGSC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N Erythromycin Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](C)C(=O)O[C@@H]([C@@]([C@H](O)[C@@H](C)C(=O)[C@H](C)C[C@@](C)(O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@H](C[C@@H](C)O2)N(C)C)O)[C@H]1C)(C)O)CC)[C@H]1C[C@@](C)(OC)[C@@H](O)[C@H](C)O1 ULGZDMOVFRHVEP-RWJQBGPGSA-N 0.000 description 2
- 108010093965 Polymyxin B Proteins 0.000 description 2
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 2
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 2
- 239000005018 casein Substances 0.000 description 2
- BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N casein, tech. Chemical compound NCCCCC(C(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CC(C)C)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(C(C)O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=O)N=C(O)C(COP(O)(O)=O)N=C(O)C(CCC(O)=N)N=C(O)C(N)CC1=CC=CC=C1 BECPQYXYKAMYBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000021240 caseins Nutrition 0.000 description 2
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 2
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 2
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 2
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 241000589291 Acinetobacter Species 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 description 1
- 241000193738 Bacillus anthracis Species 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000588807 Bordetella Species 0.000 description 1
- 241000222120 Candida <Saccharomycetales> Species 0.000 description 1
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 1
- 241000224431 Entamoeba Species 0.000 description 1
- 241000233866 Fungi Species 0.000 description 1
- 241000224466 Giardia Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 241001454354 Kingella Species 0.000 description 1
- 241000588748 Klebsiella Species 0.000 description 1
- 241000589248 Legionella Species 0.000 description 1
- 208000007764 Legionnaires' Disease Diseases 0.000 description 1
- 241000588621 Moraxella Species 0.000 description 1
- 241000186362 Mycobacterium leprae Species 0.000 description 1
- SBKRTALNRRAOJP-BWSIXKJUSA-N N-[(2S)-4-amino-1-[[(2S,3R)-1-[[(2S)-4-amino-1-oxo-1-[[(3S,6S,9S,12S,15R,18R,21S)-6,9,18-tris(2-aminoethyl)-15-benzyl-3-[(1R)-1-hydroxyethyl]-12-(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,17,20-heptaoxo-1,4,7,10,13,16,19-heptazacyclotricos-21-yl]amino]butan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxobutan-2-yl]-6-methylheptanamide (6S)-N-[(2S)-4-amino-1-[[(2S,3R)-1-[[(2S)-4-amino-1-oxo-1-[[(3S,6S,9S,12S,15R,18R,21S)-6,9,18-tris(2-aminoethyl)-15-benzyl-3-[(1R)-1-hydroxyethyl]-12-(2-methylpropyl)-2,5,8,11,14,17,20-heptaoxo-1,4,7,10,13,16,19-heptazacyclotricos-21-yl]amino]butan-2-yl]amino]-3-hydroxy-1-oxobutan-2-yl]amino]-1-oxobutan-2-yl]-6-methyloctanamide sulfuric acid Polymers OS(O)(=O)=O.CC(C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](Cc2ccccc2)NC(=O)[C@@H](CCN)NC1=O)[C@@H](C)O.CC[C@H](C)CCCCC(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCN)C(=O)N[C@H]1CCNC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CCN)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](Cc2ccccc2)NC(=O)[C@@H](CCN)NC1=O)[C@@H](C)O SBKRTALNRRAOJP-BWSIXKJUSA-N 0.000 description 1
- 241000588652 Neisseria gonorrhoeae Species 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000224016 Plasmodium Species 0.000 description 1
- 229940123573 Protein synthesis inhibitor Drugs 0.000 description 1
- 241000588769 Proteus <enterobacteria> Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 241000607142 Salmonella Species 0.000 description 1
- 241000607768 Shigella Species 0.000 description 1
- 241000191940 Staphylococcus Species 0.000 description 1
- 241000191963 Staphylococcus epidermidis Species 0.000 description 1
- 241001221452 Staphylococcus faecalis Species 0.000 description 1
- 241000194017 Streptococcus Species 0.000 description 1
- 241000193996 Streptococcus pyogenes Species 0.000 description 1
- 241001312524 Streptococcus viridans Species 0.000 description 1
- 241000224527 Trichomonas vaginalis Species 0.000 description 1
- 241000223104 Trypanosoma Species 0.000 description 1
- 241000607626 Vibrio cholerae Species 0.000 description 1
- 241000607734 Yersinia <bacteria> Species 0.000 description 1
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 description 1
- 210000001015 abdomen Anatomy 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000000149 argon plasma sintering Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008033 biological extinction Effects 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000004566 building material Substances 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 229960005091 chloramphenicol Drugs 0.000 description 1
- WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N chloramphenicol Chemical compound ClC(Cl)C(=O)N[C@H](CO)[C@H](O)C1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 WIIZWVCIJKGZOK-RKDXNWHRSA-N 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000001332 colony forming effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 230000007797 corrosion Effects 0.000 description 1
- 238000005260 corrosion Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 238000009792 diffusion process Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229920001971 elastomer Polymers 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 238000006911 enzymatic reaction Methods 0.000 description 1
- 229960003276 erythromycin Drugs 0.000 description 1
- 230000005284 excitation Effects 0.000 description 1
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 201000004792 malaria Diseases 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000017074 necrotic cell death Effects 0.000 description 1
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 description 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000002926 oxygen Chemical class 0.000 description 1
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002985 plastic film Substances 0.000 description 1
- 229920000024 polymyxin B Polymers 0.000 description 1
- 229960005266 polymyxin b Drugs 0.000 description 1
- 229960003548 polymyxin b sulfate Drugs 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000000007 protein synthesis inhibitor Substances 0.000 description 1
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 1
- 238000010791 quenching Methods 0.000 description 1
- 230000000171 quenching effect Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 201000008827 tuberculosis Diseases 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
- 229940118696 vibrio cholerae Drugs 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Landscapes
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
A találmány tárgya eljárás oxigént felhasználó mikroorganizmusokantibiotikumérzékenységének meghatározására. A találmány szerintieljárást az jellemzi, hogy ismert táptalajba beoltják az oxigéntfelhasználó mikroorganizmust és 100 tömegrész táptalajhoz hozzáadnakfoszforeszcens jelzőként legalább 0,08 ?mol mennyiségű Pd-coproporfirint, illetve egyéb porfirinszármazékot, vagy 100 tömegrésztáptalajhoz hozzáadnak 5–20 tömegrész mennyiségben polimer hordozóvalelegyített Pd-copro- porfirint, illetve egyéb porfirinszármazékot vagyeozint, eritrozint, metilénkéket, toluidinvöröst vagy más fosz-foreszcens festéket – foszforeszcens jelzőként, vagy a mérőedénybenolyan polimer filmet helyeznek el vagy olyan polimeralapú rétegeketlétesítenek – foszforeszcens jelzőként, amelynek egyik polimer rétege0,01–5 tömeg% mennyiségben Pd-coproporfirint vagy egyéb porfirinszár-mazékot, illetve 0,01–8 tömeg% mennyiségben eozint, eritrozint,metilénkéket, toluidinvöröst vagy más fosz- foreszcens festékettartalmaz, az elegyhez hozzáadják az adott antibiotikumot, a rendszerthermetikusan lezárják, majd megvilágítják és detektálják afoszforeszcenciafényt, mérve azt a jellemző időtartamot, míg azoxigénkoncentráció a kezdeti érték 10%-ára vagy az alá csökken. ŕThe subject of the invention is a method for determining the antibiotic sensitivity of microorganisms that use oxygen. The method according to the invention is characterized by the fact that the microorganism that uses oxygen is inoculated into a known culture medium and at least 0.08 ?mol of Pd-coproporphyrin or other porphyrin derivatives are added to 100 parts by weight of culture medium as a phosphorescence indicator, or 5-20 parts by weight of Pd-coproporphyrin mixed with a polymer carrier are added to 100 parts by weight of culture medium , or other porphyrin derivatives or eosin, erythrosin, methylene blue, toluidine red or other phosphorescent dyes - as a phosphorescent indicator, or a polymer film is placed in the measuring vessel or polymer-based layers are created - as a phosphorescent indicator, one of the polymer layers of which is Pd-coproporphyrin in an amount of 0.01-5% by weight or other porphyrin derivatives, or eosin, erythrosin, methylene blue, toluidine red or other phosphorescent dyes in amounts of 0.01–8% by weight, the specific antibiotic is added to the mixture, the system is hermetically sealed, then the phosphorescence light is illuminated and detected, measuring the characteristic period until the azoxygen concentration drops to 10% or less of the initial value. ŕ
Description
A találmány tárgya eljárás oxigént felhasználó mikroorganizmusok antibiotikumérzékenységének meghatározására.The present invention relates to a method for determining the antibiotic susceptibility of oxygen-consuming microorganisms.
Oxigént felhasználó mikroorganizmusok antibiotikumérzékenysége több módszenei vizsgálható.Several methods can be used to investigate the antibiotic sensitivity of oxygen-using microorganisms.
Napjainkban használatos vizsgálati módszerek:Test methods used today:
1. Tenyésztéses eljárás1. Breeding procedure
- szilárd táptalajt alkalmazó módszer ésmethod using solid medium, and
- folyékony táptalajt alkalmazó eljárás.- method using liquid medium.
Mindkét esetben a vizsgálandó mikroorganizmusokból előre elkészített, lehetőleg színtenyészetet tartalmazó törzsoldatot alkalmaznak a tesztekhez.In both cases, a stock solution of the microorganisms to be examined, preferably containing a color culture, is used for the tests.
Szilárd táptalajos módszer esetén a tesztelni kívánt mikroorganizmusnak megfelelő táptalajt Petri-csészében kiöntik, majd ha ez megszilárdult, szélesztik rajta a törzsoldatból vett mikroorganizmust.In the solid medium method, the medium corresponding to the microorganism to be tested is discarded in a petri dish and, once solidified, the microorganism taken from the stock solution is plated on it.
Ezután vagy a vizsgálandó antibiotikum ismert mennyiségével átitatott korongokat helyeznek el a táptalaj felszínén, vagy henger alakú lyukakat vágnak a lemezbe és ebbe öntik az antibiotikumos törzsoldatot.Then either discs impregnated with a known amount of the antibiotic to be tested are placed on the surface of the medium or cylindrical holes are cut into the plate and the antibiotic stock solution is poured into it.
Az antibiotikum diffúzióval eljut a táptalaj környező részeibe, így helye körül a mikroorganizmusok nem szaporodnak, ha a kérdéses szer az adott koncentrációban a vizsgált mikroorganizmustörzsre hatékony, ami úgy észlelhető, hogy az egyenletesen növekvő pázsitszerű mikrobatelepek helyett az antibiotikum körül üres, elhalási zóna lesz látható.The antibiotic diffuses to the surrounding parts of the culture medium so that microorganisms do not proliferate around the site if the agent in question is effective at the particular microorganism strain tested, which can be seen as a blank dead zone around the antibiotic instead of steadily growing lawn-like colonies.
Oldatos módszer esetén egyedi kémcsöveket oltunk be a törzsoldattal, mindegyik kémcső a kérdéses antibiotikum meghatározott dózisát tartalmazza, a növekedést az oldat zavarosodása jelzi, ez marad el hatékony szer esetében. Mindkét eljárással a tényleges szaporodást mérik.In the solution method, individual test tubes were inoculated with the stock solution, each tube containing a specific dose of the antibiotic in question, the increase being indicated by turbidity of the solution, which is absent in the case of an effective agent. Both methods measure actual reproduction.
A folyékony táptalajos tenyésztéses eljárásnak van egy úgynevezett mikrodilúciós formája. Ebben az esetben egy műanyag lemezbe mélyedéseket vájnak (például 12x8 db-ot). Ezekbe a lyukakba 500-800 μΐ táptalaj fér. A technika egyébként azonos a fent leírt folyékony táptalajra vonatkozó módszerrel.Liquid culture medium cultivation has a so-called microdilution form. In this case, recesses (for example 12x8 pieces) are carved into a plastic sheet. These wells contain 500-800 μΐ medium. Otherwise, the technique is the same as that described above for liquid media.
2. E-teszt révén végzett meghatározás2. Determination by e-test
Az eljárás teljes neve angolul „DM-Epsilometer”rel végzett eljárás, a szakirodalomban azonban csak Etesztként referálják.The full name of the procedure is "DM-Epsilometer" in English, but is only referred to in the literature as Test.
Az eljárás lényegében azonos a fent említett úgynevezett korongos eljárással, de korongok helyett egy, az antibiotikumot egy vonal mentén emelkedő koncentrációban tartalmazó csíkot alkalmaznak, ezt a táptalajra fektetik és így leolvasható lesz az úgynevezett minimális gátló koncentráció (MIC) is. Ugyanis az elhalási zóna csak a csík azon tartománya körül alakul ki, ahol a bediffundált antibiotikum koncentrációja elégséges a gátláshoz (vagyis elérte vagy meghaladta a kérdéses mikroorganizmusnak erre az antibiotikumra vonatkozó MIC-értékét).The procedure is essentially the same as the aforementioned disk-like procedure, but instead of the disk a strip containing the antibiotic in increasing concentration along a line is applied to the medium so that the so-called minimum inhibitory concentration (MIC) can be read. In fact, the necrosis zone develops only around the region of the strip where the concentration of the diffused antibiotic is sufficient to inhibit (i.e., reaches or exceeds the MIC value for the microorganism in question for that antibiotic).
3. Csak speciális esetekben alkalmazott módszerek3. Methods used only in special cases
- Valamely anyagcseretermék mennyiségének változásának mérésén alapuló eljárások- Procedures based on measurement of changes in the amount of a metabolite
- Direkt anyagcseremérés- Direct metabolic measurement
- Valamely, a mikroba által szekretált enzim jelenlétének mérése.- Measurement of the presence of an enzyme secreted by a microbe.
Ezek a módszerek közvetve követik a mikroorganizmusok szaporodását, az egyes anyagcseretermékeket számtalan különböző módszerrel lehet követni, enzimek jelenléte például valamilyen specifikus színes terméket eredményező reakcióban spektrofotometriásán mérhető.These methods indirectly follow the growth of microorganisms, and each metabolic product can be monitored by a number of different methods, for example the presence of enzymes can be measured spectrophotometrically in a reaction that produces a specific colored product.
A mikrobákat szilárd és folyékony táptalajon egyaránt fenntarthatják.Microbes can be maintained on both solid and liquid media.
Hatékony antibiotikum jelenlétében az anyagcsere megváltozik, például a keresett enzim szintje csökken (ami azután az enzimreakcióban látható) vagy a keresett anyagcseretermék (például valamilyen szekretált sejtfalfelépítő anyag) szintje változik meg, a kontroll(antibiotikummentes) mintához viszonyítva.In the presence of an effective antibiotic, the metabolism is altered, for example, the level of the desired enzyme is reduced (which is then seen in the enzyme reaction) or the level of the desired metabolite (e.g., secreted cell wall building material) is changed relative to the control (antibiotic-free) sample.
Ezeket a meghatározási eljárásokat számos szabadalmi leírás is ismerteti.These assays are described in numerous patents.
Az 5 618 729 számú USA-beli szabadalmi leírás a klasszikus korongdiffúziós eljárás továbbfejlesztését ismerteti.U.S. Patent No. 5,618,729 discloses an improvement on the classical disk diffusion process.
Az inkubált lemezekről videokamerával felvételeket készítenek, majd ezeket elektronikus úton értékelik, felhasználva a kioltási zóna és a lemez többi része közötti világosság elérését.The incubated discs are recorded with a video camera and evaluated electronically, using light to reach the extinction zone and the rest of the disc.
Az 5 340 747 számú USA-beli szabadalmi leírás szerint a szelektív fluoreszcens táptalaj alkalmazásával érhető el, hogy egy adott mikroorganizmus növekedése esetén a táptalaj optikai jellemzői megváltozzanak, ezen alapulva vizsgálható a mikroorganizmusok növekedése.U.S. Patent No. 5,340,747 discloses the use of selective fluorescent media to alter the optical characteristics of a medium upon growth of a particular microorganism, and may be used to test for growth of the microorganism.
A 4 784 947 számú USA-beli szabadalmi leírás szerint a mikroorganizmusok növekedése nefelometrikus módszerrel követhető.In U.S. Patent No. 4,784,947, the growth of microorganisms can be monitored by nephelometry.
Ennek módosított változatában egy erős fényimpulzus segítségével nefelometriás fényképfelvétel készíthető a mintákról, ezek kiértékelésével lehet következtetni a mikroorganizmusok növekedési képességére.In its modified version, a strong pulse of light can be used to obtain nephelometric photographic images of the samples and to evaluate the ability of microorganisms to grow.
A 3 832 532 számú USA-beli szabadalmi leírás ismerteti a fényszórásmérésen alapuló módszert.U.S. Patent 3,832,532 discloses a method based on light scattering.
A növekedési fázisban lévő tenyészetek fényszórását adott időtartamig folyamatosan regisztrálják, majd a kezeletlen kontroll és az antibiotikumot is tartalmazó minták közötti eltérésből következtetnek az antibiotikumok hatékonyságára.The light scatter of the cultures in the growth phase is continuously recorded for a period of time and then the difference between the untreated control and the samples containing the antibiotic is inferred from the efficacy of the antibiotics.
Az ismert eljárásoknak számos hátránya van, ezek többek között az eljárások nagy időszükséglete, a kiértékelés nehézkessége és sok esetben annak szubjektív volta.Known methods have many drawbacks, including the time-consuming procedures, the difficulty of evaluation, and in many cases the subjective nature of the procedures.
The Journal of Biological Chemistry, Vol. 262, No. 12 1987, 5476-5482 folyóiratban megjelent cikk eljárást ismertet oxigéntartalom fluoreszcenciával történő meghatározására, porfirinszármazékok alkalmazásával.262, No. 12 1987, 5476-5482 describes a method for determining oxygen content by fluorescence using porphyrin derivatives.
Ez az oxigénmeghatározási módszer azonban csak optikailag tiszta és a jelző molekulával kölcsönhatásba nem lépő közeg esetén ad pontos eredményt az oxigéntartalom vonatkozásában.However, this oxygen determination method only gives an accurate result with respect to oxygen content in an optically pure medium that does not interact with the signaling molecule.
Célul tűztük egy olyan új eljárás kidolgozását, amely az ismert eljárások hiányosságait kiküszöböli és emellett még számos előnnyel is jár.It is an object of the present invention to provide a novel process which overcomes the drawbacks of the known processes and has several advantages.
A találmány szerinti eljárás azon alapul, hogy az oxigén mennyiségének változását foszforeszcenciakioltás segítségével követi.The method of the present invention is based on monitoring the change in the amount of oxygen by quenching phosphorescence.
HU 221 824 Β1HU 221 824 Β1
A foszforeszcens festék által kibocsátott fényjelenség élettartama követi az oxigén koncentrációjának változását, ebből pedig az antibiotikumok hatékonyságára lehet következtetni.The lifetime of the light phenomenon emitted by the phosphorescent dye follows the change in the oxygen concentration, which suggests the effectiveness of the antibiotics.
A találmány szerinti eljárás lényege, hogy élettevékenységük során oxigént felhasználó mikroorganizmusok életképessége azok oxigénfogyasztásával követhető, és hogy erre a célra foszforeszcens technikát alkalmazunk.The essence of the process according to the invention is that the viability of oxygen-consuming microorganisms in their life activity can be monitored by their oxygen consumption and that a phosphorescent technique is used for this purpose.
Az oxigénfogyasztás alapján működő antibiotikumhatékonysági teszt elve ismert (például Antibiotic Chemotherapy 1957,7,140-145; 4,160-165; 4,166-171).The principle of an antibiotic efficacy test based on oxygen consumption is known (e.g., Antibiotic Chemotherapy 1957,7,140-145; 4,160-165; 4,166-171).
Eszerint minden olyan behatás, amely a vizsgált mikroorganizmus súlyos károsodását okozza, azzal jár együtt, hogy az oxigént fogyasztó képesség drasztikusan csökken vagy teljesen megszűnik.Accordingly, any effect which causes serious damage to the micro-organism under study involves a drastic reduction or complete elimination of the oxygen consuming capacity.
A találmány lényege az, hogy az oxigén mennyiségének a változását követjük foszforeszcencia segítségével.The essence of the invention is to monitor the change in the amount of oxygen by means of phosphorescence.
Kihasználjuk azt a jelenséget, hogy egyéb mérési módszerekkel szemben, a táptalaj hátrányos optikai tulajdonságai kevéssé zavarják a foszforeszcenciás eljárást.We take advantage of the phenomenon that, contrary to other methods of measurement, the phosphorescent procedure is unlikely to be adversely affected by the optical properties of the medium.
Felismertük azt a tényt, hogy nincs szükségünk az oxigénkoncentráció pontos meghatározására, ugyanis a károsodott és az ép mikroorganizmusok oxigénfogyasztási sebessége jelentősen eltér, ezért az antibiotikum hatásosságának eldöntéséhez elegendő az oxigén fogyásának mértékét meghatározni.We have recognized the fact that we do not need to accurately determine the oxygen concentration, since the rate at which oxygen is consumed by damaged and intact microorganisms varies significantly, so it is sufficient to determine the rate of oxygen depletion to determine the efficacy of the antibiotic.
E módszer elvi alapja a következő.The principle of this method is as follows.
Foszforeszkáló molekulát a geijesztőfénnyel impulzusszerűen megvilágítva a gerjesztés megszűnte után a meghatározott úgynevezett emissziós hullámhosszon egy exponenciálisan csökkenő intenzitású fényjel mérhető, az exponenciális függvény időállandója pedig szoros összefüggésben áll az oxigén koncentrációjával: tq/r=kqroO[O2] (az úgynevezett Stern-Volmeregyenlet) ahol tq a nulla oxigénkoncentrációhoz tartozó időállandó (úgynevezett élettartam), τ a mindenkori időállandó, k,, egy anyagra jellemző állandó, [O2] pedig az oxigén koncentrációja mol/l-ben.Phosphorescent molecules pulsed illuminating the geijesztőfénnyel after excitation lapse measured exponentially decaying light intensity signal, the exponential time constant for the so-called emission wavelength defined and is closely related to oxygen concentrations: t q / r = s q r o o [O 2] (the so-called Stern-Volmer equation) where t q is the time constant for the zero oxygen concentration (so-called lifetime), τ is the constant time constant, k ,, is the constant for a substance and [O 2 ] is the concentration of oxygen in mol / l.
Ez az összefüggés ideális esetben áll fenn, ha a foszforeszkáló molekulát egyéb anyagok jelenléte nem befolyásolja.This relationship is ideal if the phosphorescent molecule is not affected by the presence of other substances.
Ez a tény azonban a találmány szerint alkalmazott táptalajok esetében nem áll fenn.However, this is not the case with the media used according to the invention.
A találmány szerinti eljárás kapcsán azt tapasztaltuk, hogy az észlelt változást döntően az oxigén mennyiségének változása okozza, így az élettartam változása valóban alkalmas jellemző a mikroorganizmusok élettevékenységének követésére.In the process of the present invention, it has been found that the observed change is mainly caused by a change in the amount of oxygen, so that the change in life span is indeed a suitable characteristic for monitoring the activity of microorganisms.
Az alkalmazható foszforeszcens jelzők:Applicable phosphorescent markers include:
1. foszforeszkáló porfirinszármazékok oldata (például1. solution of phosphorescent porphyrin derivatives (e.g.
Pd-coproporfirin, Pd-meso-tetrakarboxi-fenil-porfirin stb.),Pd-coproporphyrin, Pd-meso-tetracarboxyphenylporphyrin, etc.),
2. az előbbiek valamely átlátszó műanyagba keverésével előállított szilárdtest-szenzorok,2. solid state sensors made by mixing the former with a transparent plastic;
3. eozin és származékainak valamely átlátszó műanyagba keverésével előállított szilárdtest-szenzorok.3. Solid state sensors made by mixing eosin and its derivatives with a transparent plastic.
A találmány tárgya tehát eljárás oxigént felhasználó mikroorganizmusok antibiotikumérzékenységének meghatározására, az oxigén mennyiségének foszforeszcenciás méréssel történő követésével, porfirinszármazék alkalmazása révén.The invention thus relates to a method for determining the antibiotic sensitivity of microorganisms using oxygen by monitoring the amount of oxygen by phosphorescence measurement using a porphyrin derivative.
Az eljárást az jellemzi, hogy az ismert táptalajba beoltjuk az oxigént felhasználó mikroorganizmust ésThe process is characterized by inoculating an oxygen-consuming microorganism and a known culture medium
100 tömegrész táptalajhoz hozzáadunk foszforeszcens jelzőként legalább 0,08 pmol mennyiségű Pdcoproporfirint, illetve egyéb porfirinszármazékot, vagyAdd at least 0.08 pmol of Pdcoproporphyrin or other porphyrin derivatives to 100 parts by weight of medium, or
100 tömegrész táptalajhoz hozzáadunk 5-20 tömegrész mennyiségben polimer hordozóval elegyített Pdcoproporfirint, illetve egyéb porfirinszármazékot vagy eozint, eritrozint, metilénkéket, toluidinvöröst vagy más foszforeszcens festéket - foszforeszcens jelzőként, vagy a mérőedényben olyan polimer filmet helyezünk el vagy olyan polimeralapú rétegeket létesítünk - foszforeszcens jelzőként, amelynek egyik polimer rétege 0,01-5 tömeg% mennyiségben Pd-coproporfirint vagy egyéb porfirinszármazékot, illetve 0,01-8 tömeg% mennyiségben eozint, eritrozint, metilénkéket, toluidinvöröst vagy más foszforeszcens festéket tartalmaz, az elegyhez hozzáadjuk az adott antibiotikumot, a rendszert hermetikusan lezárjuk, majd megvilágítjuk és detektáljuk a foszforeszcenciafényt, mérve azt a jellemző időtartamot, míg az oxigénkoncentráció a kezdeti érték 10%-ára vagy az alá csökken.Add 5-20 parts by weight of Pdcoproporphyrin or other porphyrin derivative or eosin, erythrosine, methylene blue, toluidine red or other phosphorescent dye mixed with a polymeric carrier to 100 parts of culture medium as a phosphorescent marker or as a polymer one layer of polymer containing 0.01 to 5% by weight of Pd-coproporphyrin or other porphyrin derivatives and 0.01 to 8% by weight of eosin, erythrosine, methylene blue, toluidine red or other phosphorescent dye, the antibiotic, the system is added to the mixture hermetically sealed, then illuminated and detected the phosphorescent light over a representative period of time until the oxygen concentration drops to 10% or less of the initial value.
A találmány szerint az eljárást a következő módon vitelezzük ki.According to the invention, the process is carried out as follows.
A kérdéses mikroorganizmushoz hozzáadjuk a vizsgálandó antibiotikum adott mennyiségét, majd hozzátesszük a foszforeszcens jelzőt, ezután a rendszert hermetikusan lezárjuk.To the microorganism in question is added an appropriate amount of the antibiotic to be tested, the phosphorescent label is added and the system is hermetically sealed.
Ekkor, ha az antibiotikum hatásos volt, nem - vagy alig - fogunk élettartam-változást észlelni, míg ha az antibiotikum hatástalan volt, a mikroorganizmusok elfogyasztják az oxigént, így az élettartam megváltozik.At this point, if the antibiotic was effective, there would be no, or little, change in life span, while if the antibiotic was ineffective, the microorganisms would consume oxygen, so the life span would change.
Mivel az oxigén koncentrációja és a foszforeszcencia élettartama között fordított arányosság áll fent, az oxigén „elfogyása” az élettartam megugrását eredményezi.Because there is an inverse relationship between the concentration of oxygen and the lifetime of phosphorescence, the "depletion" of oxygen results in an increase in lifetime.
Elég tehát azt detektálni, hogy a hermetikus lezárást követően mikor lehet a kezdeti értéknél lényegesen nagyobb élettartamot mérni.Therefore, it is sufficient to detect when, after hermetic sealing, a lifetime substantially greater than the initial value can be measured.
Mivel csak az élettartam jelentős megváltozásához tartozó időt mérjük, ezért az oxigén koncentrációjának pontos meghatározása nem szükséges, nem kell az élettartamot sem nagy pontossággal mérni, elég csupán a kiindulási értékhez képest fellépő jelentős változást detektálni.Since only the time for a significant change in life span is measured, it is not necessary to accurately determine the oxygen concentration, nor does it need to measure the life span accurately, it is sufficient to detect a significant change from the baseline.
Ez jelentős zavarérzéktelenséget biztosít a foszforeszcenciát kismértékben zavaró jelenségekkel szemben.This provides a high degree of insensitivity to phenomena that slightly interfere with phosphorescence.
Ahhoz, hogy a jelentős változást számszerűen is reprezentálni lehessen, kiszámítunk egy becsült oxigénkoncentrációt (tudván, hogy ez tájékoztató jellegű) és azt az időpontot tekintjük jellemzőnek, amikor ez a becsült érték a kezdeti értéknek 10%-ára vagy ez alá csökken.To represent a significant change numerically, we calculate an estimated oxygen concentration (knowing that this is indicative) and consider the time when this predicted value drops to 10% or less of the initial value.
Ez megfelel annak, hogy a foszforeszcencia-élettartam jelentősen megnő.This corresponds to a significant increase in phosphorescence lifetime.
Ez hatásos antibiotikum esetében több nap is lehet (kémiai oxidációs folyamatok is fogyasztanak oxigént,This can take several days for an effective antibiotic (chemical oxidation processes also consume oxygen,
HU 221 824 Β1 csak sokkal lassabban), hatástalan esetében azonban közel ugyanakkor fog bekövetkezni, mint kezeletlen esetben.EN 221 824 Β1 only much slower), but in the case of ineffective it will occur almost at the same time as in the untreated case.
Ha ez a kezeletlen esethez tartozó idő két-háromszorosát megvárva sem következik be, az az antibiotikum hatékonyságát már megbízhatóan jelzi.If this does not happen after waiting two to three times for the untreated case, it is already a reliable indicator of the effectiveness of the antibiotic.
Tehát lényeges, hogy a jellemző időtartamra jelentkező eltérés képezi a döntés alapját.So, it is important that the difference over a typical period of time is the basis for the decision.
Az eljárás alkalmazása a következők szerint történik.The procedure is as follows.
1. Táptalajok elkészítése1. Preparation of culture media
Minden a tenyésztéses eljárásokból ismert folyékony vagy gélállományú táptalajféleség alkalmazható, a teszthez mindig az adott mikrobának megfelelő táptalajt kell kiválasztani, ismeretlen mikrobák esetében a szabványos tenyésztési eljárásokhoz használatos táptalajokat kell alkalmazni.Any liquid or gel medium known from the culture methods can be used, the medium to be used for the test should always be the one appropriate for the particular microbe, and for unknown microbes the media used for the standard culture methods should be used.
A táptalajok a szokásos módszerekkel oltandóak be.The media should be inoculated using standard techniques.
2. A foszforeszcens jelző hozzáadása2. Add the phosphorescent marker
2.1 Oldott festék alkalmazása2.1 Applying Dyed Paint
Például Pd-coproporfirin és egyéb porfirinszármazékok : 0,8-2 mikromól/liter koncentrációban alkalmazható (a maximális értéket az oldhatóság szabja meg).For example, Pd-coproporphyrin and other porphyrin derivatives may be used at a concentration of 0.8 to 2 micromoles / liter (maximum value determined by solubility).
2.2 Szuszpenzió alkalmazása2.2 Application of the suspension
Szuszpenzióban mikronizált műanyag szenzort kell keverni a táptalajhoz, 5-20 g/g%-ban.The suspension should be mixed with a micronized plastic sensor at 5-20 g / g%.
2.3 Előkezelt tartóedény alkalmazása2.3 Use of a pretreated container
Ebben az esetben a tartóedények tartalmazzák a műanyag szenzort filmbevonat vagy behelyezett film formájában, a táptalajhoz semmit sem kell keverni.In this case, the containers contain the plastic sensor in the form of a film-coated or embedded film, with no need to mix with the medium.
A műanyag szenzor olyan polimer film lehet, amelybe be van ágyazva a foszforeszcens festék.The plastic sensor may be a polymer film embedded with phosphorescent dye.
Műanyag szenzorként azonban olyan bonyolult rendszert is alkalmazhatunk, amelynek egyik polimer rétegébe be van ágyazva a foszforeszcens festék, valamint egy LED és fotodióda is, valamint a mérőműszerhez csatlakozó kábel. Egyik kiviteli mód szerint a polimeralapú rétegbe LED és/vagy fotodióda helyett fénykábelt ágyazunk be, ilyenkor a méréshez használt optikai rendszer tartalmazza a LED-et és/vagy a fotodiódát.However, a sophisticated system may be used as a plastic sensor, with a phosphorescent paint embedded in one of its polymer layers, as well as an LED and a photodiode as well as a cable connected to the meter. In one embodiment, a fiber optic cable is embedded in the polymer-based layer instead of an LED and / or photodiode, in which case the optical system used for the measurement comprises the LED and / or the photodiode.
A fentiek szerint előállított polimer réteget rendszerint egy olyan korrózióálló polimer külső burokkal vesszük még körül, amely fényelnyelő festéket tartalmaz.The polymer layer prepared as above is usually surrounded by an outer casing of a corrosion-resistant polymer that contains a light-absorbing paint.
3. Antibiotikumok hozzáadása3. Addition of antibiotics
Az antibiotikumokat a terápia során a hatás helyén várható koncentrációban kell alkalmazni.Antibiotics should be administered at the expected site of action during therapy.
Új antibiotikumok fejlesztése esetén célszerű a lehetséges maximális koncentráció alkalmazása.When developing new antibiotics, it is advisable to use the maximum possible concentration.
4. A mérés kivitelezése4. Perform the measurement
A megfelelő antibiotikummal kezelt és a kezeletlen (kontroll) oldatokból megfelelő várakozási idő elteltével (ezalatt az antibiotikum hatása kifejlődik) a tartóedényekbe kell tölteni az egyes mintákból és azokat hermetikusan le kell zárni. Ezután az edényeket a mérőműszerbe helyezve, meg kell határozni az élettartamot.After appropriate waiting time (during which the antibiotic action develops) from the appropriate antibiotic-treated and untreated (control) solutions, the individual samples should be filled into containers and hermetically sealed. Then place the vessels in the measuring instrument to determine the service life.
Az edényeket váltakozva kell mérni, először a kontrollt, majd az antibiotikumokat tartalmazóakat sorban egymás után, majd az egész sorozatot addig kell ismételni, amíg vagy az összes edényekben elfogy az oxigén, vagy pedig letelik a mérési idő.The vessels should be measured alternately, first with the control and then with the antibiotics in succession, and then the whole series repeated until either all of the vessels are depleted of oxygen or the measuring time expires.
A mérési időt a következő adja meg: mt=5 kt, ahol mt a mérési idő, kt pedig a mérés kezdete és a kontrolimintában az oxigén elfogyásához tartozó időpont között eltelt idő.Enter the measurement time as follows: mt = 5 kt, where mt is the measurement time, and kt is the time between the start of the measurement and the time for the oxygen uptake in the control sample.
Az oxigént akkor tekintjük elfogyottnak, ha a becsléssel kapott oxigénkoncentráció a kiindulási érték 10%-ára esik le, ez megfelel a foszforeszcencia-élettartam jelentős növekedésének a kezdethez képest.Oxygen is considered depleted when the estimated oxygen concentration drops to 10% of the baseline value, which corresponds to a significant increase in phosphorescence lifetime from the start.
5. A mérés értékelése5. Evaluation of the measurement
Minél hatékonyabb a kérdéses antibiotikum, annál később fogy el az adott edényekből az oxigén. Előfordulhat, hogy a mérési idő az előtt telik le, mielőtt az összes edényekből elfogy az oxigén, ekkor a terápiához az ilyen edényekhez tartozó antibiotikumból egyéb szempontok szerint választhat az orvos.The more effective the antibiotic in question, the later will be the oxygen depletion in the vessels. It may be that the measurement time elapses before all the vessels are depleted of oxygen, in which case the physician may select other antibiotics for therapy from such vessels.
Az értékek függenek a táptalaj összetételétől, a kiindulási baktériummennyiségtől, a lezárás előtti várakozási időtől, vagyis alapvetően attól, hogy a lezáráskor mennyi a mintában a mikroorganizmusok száma és milyen azok oxigénfogyasztási sebessége, ez pedig sarzsonként eltérő.The values depend on the composition of the medium, the amount of bacterial starting material, the waiting time before sealing, i.e. essentially the number of microorganisms in the sample at the time of sealing and their oxygen consumption rate, which varies from batch to batch.
Az antibiotikumra mutatott érzékenység (vagyis például a MIC értéke) szintén a kiindulási mikroorganizmusszám és a táptalaj függvénye.The sensitivity to the antibiotic (i.e., the MIC value) is also a function of the starting microorganism and the culture medium.
Minél alacsonyabb a kiindulási CFU- (telepképző egység) koncentráció és minél „gyengébb” a táptalaj, annál alacsonyabb lesz az egyes antibiotikumok MICértéke, ennek fordítottja is.The lower the initial CFU (colony forming unit) concentration and the "weaker" the medium, the lower the MIC of each antibiotic, and vice versa.
Az egyes baktériumsarzsok közötti eltérés viszonylag nagy lehet, például E. coli 35 034 esetén Streptomycin MIC-érték 8...20 pg/ml volt, függően a CFU-koncentrációtól és a tenyésztési feltételektől.The difference between individual strains of bacteria can be relatively large, for example, for E. coli 35 034, the Streptomycin MIC was 8-20 pg / ml, depending on CFU concentration and culture conditions.
A találmány szerinti eljárás az alábbi területeken alkalmazható.The process of the invention is applicable in the following areas.
Rutinszerű antibiogramfelvétel.Routine antibiogram recording.
Háziorvosi rendelőkből származó anyagok feldolgozása, epidemiológiai vizsgálatok, terápia helyességének vizsgálata, akár közvetlenül a háziorvosi rendelőben az antibiotikus terápia helyek megválasztásához segítségképpen.Processing of materials from general practitioners, epidemiological examinations, testing of the correctness of therapy, even directly in the general practitioner's office to assist in the selection of antibiotic therapy sites.
Új antibiotikumok fejlesztésében.In the development of new antibiotics.
HTS (nagyteljesítményű screenelés) rendszer felépítésében eddigi módszerek kiegészítéseképpen.HTS (High Performance Screening) system in addition to existing methods.
A vizsgálható mikroorganizmusok az alábbiak lehetnek:Test micro-organisms may include:
Streptococcus család (S. pyogenes, S. faecalis, S. viridans csoport, S. pneumoniae stb.)Streptococcus family (S. pyogenes, S. faecalis, S. viridans group, S. pneumoniae, etc.)
Staphylococcus család (S. aureus, S. epidermidis stb.)Staphylococcus family (S. aureus, S. epidermidis, etc.)
Nisseria család (N. gonorrhoeae, N. meningtidis stb.)Nisseria family (N. gonorrhoeae, N. meningtidis, etc.)
Moraxella, Acinetobacter, Kingella családok,Moraxella, Acinetobacter, Kingella families,
Escherichia coli és patogén törzsei (EPEC, EIEC, ETEC, EHEC, EAEC, EAggEC)Escherichia coli and pathogenic strains (EPEC, EIEC, ETEC, EHEC, EAEC, EAggEC)
Salmonella családSalmonella family
Shigella családShigella family
Klebsiellák, Yersiniák (Y. pestis), Vibrio cholerae, ProteusokKlebsiella, Yersinia (Y. pestis), Vibrio cholerae, Proteus
Pseudomonas család (P. aeruginosa)Pseudomonas (P. aeruginosa)
Legionellák, Bordetellák, Bacillusok (B. anthracis)Legionella, Bordetella, Bacillus (B. anthracis)
Mycobacteriumok (M. tuberculosis, M. leprae stb.)Mycobacteria (M. tuberculosis, M. leprae, etc.)
HU 221 824 Β1HU 221 824 Β1
Protozoonok:protozoa:
Entamoeba hyswtolytica, Entamobea coki, Giardia lambria, Trichomonas vaginalisEntamoeba hyswtolytica, Entamobea coki, Giardia lambria, Trichomonas vaginalis
Trypanosoma fajok, Leischmania fajok, Malaria plasmodium fajokTrypanosoma species, Leischmania species, Malaria plasmodium species
Férgek:worms:
Gombák:mushrooms:
Dermatophytonok, Candida fajok, Cryptococcusok stb.Dermatophytons, Candida species, Cryptococci, etc.
Zuzmók, algák is vizsgálhatók.Lichens and algae can also be examined.
A találmány tárgya tehát eljárás oxigént felhasználó mikroorganizmusok antibiotikumérzékenységének meghatározására.The invention thus relates to a method for determining the antibiotic susceptibility of oxygen-consuming microorganisms.
Az eljárást az jellemzi, hogy ismert táptalajba beoltjuk az oxigént felhasználó mikroorganizmust ésThe process is characterized by inoculating an oxygen-consuming microorganism and a known culture medium
100 tömegrész táptalajhoz hozzáadunk foszforeszcens jelzőként legalább 0,08 pmol mennyiségű Pdcoproporfirint, illetve egyéb porfirinszármazékot, vagyAdd at least 0.08 pmol of Pdcoproporphyrin or other porphyrin derivatives to 100 parts by weight of medium, or
100 tömegrész táptalajhoz hozzáadunk 5-20 tömegrész mennyiségben polimer hordozóval elegyített Pdcoproporfirint, illetve egyéb porfirinszármazékot vagy eozint, eritrozint, metilénkéket, toluidinvöröst vagy más foszforeszcens festéket - foszforeszcens jelzőként, vagy a mérőedényben olyan polimer filmet helyezünk el vagy olyan polimeralapú rétegeket létesítünk - foszforeszcens jelzőként, amelynek egyik polimer rétege 0,01-5 tömeg% mennyiségben Pd-coproporfirint vagy egyéb porfirinszármazékot, illetve 0,01-8 tömeg% mennyiségben eozint, eritrozint, metilénkéket, toluidinvöröst vagy más foszforeszcens festéket tartalmaz, az elegyhez hozzáadjuk az adott antibiotikumot, a rendszert hermetikusan lezárjuk, majd megvilágítjuk és detektáljuk a foszforeszcenciafényt úgy, hogy meghatározzuk azt az időt, ami alatt a becsült oxigénkoncentráció a kiindulási érték 10%-ára vagy az alá esik vissza.Add 5-20 parts by weight of Pdcoproporphyrin or other porphyrin derivative or eosin, erythrosine, methylene blue, toluidine red or other phosphorescent dye mixed with a polymeric carrier to 100 parts of culture medium as a phosphorescent marker or as a polymer one layer of polymer containing 0.01-5% by weight of Pd-coproporphyrin or other porphyrin derivatives and 0.01-8% by weight of eosin, erythrosine, methylene blue, toluidine red or other phosphorescent dye, the antibiotic, the system is added to the mixture hermetically sealing, then illuminating and detecting the phosphorescent light by determining the time at which the estimated oxygen concentration falls to 10% or less of the initial value.
Az ismert eljárási módszerekkel szemben a találmány szerinti eljárás előnyei az alábbiak.The advantages of the process according to the invention over the known process methods are as follows.
1. Gyorsabb, mint az általánosan alkalmazott tenyésztésen alapuló eljárás. Egy méréshez szükséges az idő közelítőleg a következő módon határozható meg:1. It is faster than the standard breeding method. The time required for a measurement can be approximated as follows:
tm = w+tt+5 kt ahol w az előkészítési munkákhoz szükséges idő, tt az antibiotikum által támadott enzimrendszer úgynevezett tumover-time-ja kt pedig a kontrollmintához tartozó jellemző időpont.t m = w + tt + 5 kt where w is the preparation time, tt is the so-called tumor-time of the enzyme system attacked by the antibiotic and kt is the typical time for the control sample.
Ez például E. coli 35 034 esetében összesen 3-4 óra, szemben a tenyésztéses eljáráshoz szükséges 12-18 órával.This is, for example, a total of 3-4 hours for E. coli 35 034, compared with 12-18 hours for the culture process.
2. Az alkalmazási körön belül egységes a méréstechnika.2. The measurement technique is uniform within the scope.
3. Az eljárással egyaránt tesztelhetőek nemcsak mikrobák, de gombák, protozoonok és más aerob vagy fakultatív aerob kórokozók.3. The procedure can be used to test not only microbes but also fungi, protozoans and other aerobic or facultative aerobic pathogens.
4. Alacsonyabb táptalajigény.4. Lower media requirement.
Az eljáráshoz 100-400 mikroliter minta elegendő.100-400 microliters of sample is sufficient for the procedure.
5. Az eljárás automatizálható.5. The process can be automated.
A találmány szerinti eljárást az alábbi példákkal mutatjuk be.The following examples illustrate the process of the invention.
1. példaExample 1
Escherichia coli 35 034 törzs antibiotikummal szembeni érzékenységét vizsgáljuk.The susceptibility of Escherichia coli strain 35 034 to the antibiotic was tested.
Antibiotikumként a sejtmembránt pusztító Polymyxin B-szulfátot (P4932 Sigma) alkalmazunk.Polymyxin B sulfate (P4932 Sigma), a cell membrane killer, is used as an antibiotic.
Táptalajként M9-et 2,5%-os (g/100 ml) táptalaj savasán hidrolizált kazeint és 3%-os (g/100 ml) táptalaj glükózt alkalmazunk.M9 medium is acidified hydrolyzed casein in 2.5% (g / 100 ml) medium and glucose in 3% (g / 100 ml) medium.
Az M9 táptalaj adalék összetétele 1000 ml desztillált vízben 0,13 g MgSO4,1 g NH4C1, 3 g KH2PO4, 6 g Na2HPO4.The composition of the M9 medium in 1000 ml of distilled water was 0.13 g MgSO 4 , 1 g NH 4 Cl, 3 g KH 2 PO 4 , 6 g Na 2 HPO 4 .
A táptalajba az Escherichia coli 35 034-et 106 CFU ml/ml táptalaj-koncentrációban alkalmazzuk.Escherichia coli 35 034 was added to the medium at a concentration of 10 6 CFU ml / ml.
Az antibiotikumot az l.a példa szerint 4 IU/ml táptalaj-koncentrációban, az l.b példa szerint 5 IU/ml táptalaj-koncentrációban alkalmazzuk.The antibiotic was used at a concentration of 4 IU / ml in Example 1a, and at 5 IU / ml in Example 1a.
Kontrollként antibiotikummentes mintát alkalmazunk (l.c).The control was an antibiotic-free sample (1c).
Az eljárás lefolytatására az 1. ábra szerinti edényt alkalmazzuk.The vessel of Figure 1 is used to carry out the process.
Az 1 edény henger alakú, 1,5 mm falvastagságú kvarcból készül és hasának külső átmérője 10 mm.The container 1 is made of cylindrical, 1.5 mm thick quartz and has an outside diameter of 10 mm.
Az edény teljes magassága 25 mm.The total height of the vessel is 25 mm.
Az 1 edény 2 nyakának belső átmérője 3 mm, a 2 nyak magassága 14 mm.The neck 2 of the vessel 1 has an inside diameter of 3 mm and the neck 2 has a height of 14 mm.
Az edény feneke lapos, azt teljes átmérőjében kitölti a 2 mm vastagságú 3 tömeg% eozint tartalmazó PMMA [poli(metil-metakrilát)] 3 polimeralapú réteg.The bottom of the vessel is flat, filled with PMMA [Poly (methyl methacrylate)] 3 polymer based layer containing 2% by weight of 3% by weight eosin.
Az 1 edény sterilizált és 2 mm vastag 4 szilikongumi fedéllel van lezárva, a lezárást még az 5 alumíniumsapka is biztosítja.The container 1 is sterilized and sealed with a 2 mm thick silicone rubber lid 4, which is further secured by an aluminum cap 5.
A mintákat sterilizált (autokláv) 1 ml-es PP-anyagú Eppendorf-csövekben (T 9661 Sigma) készítjük elő 400 pL méretben steril térben (laminar flow box). A csöveket a tt idejére is nyitva hagyjuk.Samples were prepared in sterilized (autoclave) 1 ml PP Eppendorf tubes (T 9661 Sigma) in 400 pL sterile space (laminar flow box). The tubes are also left open for tt.
A tt eltelte után az egyes edényekből külön-külön egy-egy egyszer használatos fecskendő segítségével visszük át a mintákat a méréshez használt tartóedénybe. Az 1 edényekbe 340 μΐ mintát töltünk úgy, hogy a sterilen lezárt 1 edény 4 szilikongumi fedelét a 340 μΐ mintát tartalmazó egyszer használatos fecskendő 2 mm átmérőjű tűjével átszúrjuk, és a mintát az 1 edénybe nyomjuk. A megtöltött 1 edények egy 22 db-ot befogadó forgókorongra kerülnek, a korongon 22 db tartóhely van, ezek alul lyukasak (7 mm átmérőjű lyukat tartalmazó mélyedés, amibe az 1 edény kerül).After the passage, transfer the samples from each vial into a measuring container using a disposable syringe. Fill a 340 μΐ sample into the container 1 by puncturing the sterile sealed lid 4 of the silicone rubber container 4 with a 2 mm diameter needle of a disposable syringe containing 340 μΐ sample and pushing the sample into the container 1. The filled containers 1 are placed on a rotating disc that holds 22 pieces, the disc has 22 holding holes, which are perforated below (a recess with a diameter of 7 mm into which the container 1 is inserted).
A korong forgásával egy-egy edény kerül a 2. ábrán látható optikai rendszer fölé, ahol a készülék kibocsátja a gerjesztő villanást és detektálja az emittált foszforeszcenciás fényt.As the disc rotates, a vessel is placed over the optical system shown in Figure 2, where the device emits an excited flash and detects the phosphorescent light emitted.
A korong forgását úgy szabályozza a készülék, hogy egy-egy 1 edény 10 másodpercet tölt az optikai rendszer felett, majd a korong elfordulásával a következő 1 edény kerül mérésre.The rotation of the disk is controlled so that each vessel 1 is filled for 10 seconds over the optical system, and the next 1 vessel is measured as the disk rotates.
Ez a folyamat a beállított mérési idő alatt periodikusan ismétlődik. Az optikai rendszert 2. ábrán mutatjuk be.This process is repeated periodically over the set measuring time. The optical system is shown in Figure 2.
HU 221 824 Β1HU 221 824 Β1
Az egész rendszert 2 mm vastag 25x25 mm-es 6 kvarcüveg lap fedi, ez alatt helyezkedik el a 18 mm átmérőjű 7 lencse, e mögött pedig a SSL-LK1OO133PGC típusú 8 LED és a SV4L típusú 9 fotodióda.The whole system is covered with 2mm 25x25mm 6 quartz glass sheets, below which is the 18mm diameter 7 lens, behind which is the SSL-LK1OO133PGC type 8 LED and the SV4L type 9 photodiode.
A 7 lencse úgy kerül elhelyezésre, hogy a 8 LED fényét az 1 edény alján elhelyezkedő foszforeszcens 3 polimeralapú rétegre fókuszálja, az emittált fény pedig ugyanezen a 7 lencsén át a 9 fotodiódára fokuszálódik.The lens 7 is positioned so that the light of the LED 8 is focused on a phosphorescent polymer-based layer 3 located at the bottom of the vessel 1, and the emitted light is focused through the same lens 7 to the photodiode 9.
A 8 LED adja a gerjesztő villanásokat, az emittált fényt pedig a 600 nm-es felüláteresztő szűrővel felszerelt 9 fotodióda fogja fel.The 8 LEDs generate excited flashes and the emitted light is captured by 9 photodiodes equipped with a 600 nm high pass filter.
A rendszer vezérlését és az adatok értékelését a 10 kábellel kapcsolódó mikroszámítógép végzi.The system is controlled and the data is evaluated by a microcomputer connected to the cable 10.
A kísérlet mérési eredményei a következők.The results of the experiment are as follows.
Kísérlet jele Jellemző időtartam (perc) la. 45±5 lb. 85±10 le. 9±1Experiment Symptom Typical Duration (minutes) la. 45 ± 5 lb. 85 ± 10 le. 9 ± 1
A kísérleteknél a mérést 5 kt idő letelte után állítottuk meg.In the experiments, the measurement was stopped after 5 kt.
A kísérlet eredményéből kitűnik, hogy már 4 IU/mL koncentrációban a Polymyxin B hatékonyan gátolta a mikroorganizmusokat, ez 5 IU/mL koncentrációban még kifejezettebb.The results of the experiment show that at concentrations of 4 IU / mL, Polymyxin B was effective in inhibiting microorganisms, which is even more pronounced at 5 IU / mL.
2. példaExample 2
A mérést az 1. példában leírtak szerint végezzük, azzal az eltéréssel, hogy antibiotikumként a fehérjeszintézist gátló és a sejtmembránt pusztító streptomycint (S9137 Sigma) alkalmazzuk.The assay was carried out as described in Example 1, except that protein synthesis inhibitor and cell membrane destruction streptomycin (S9137 Sigma) were used as antibiotics.
A 2a. példában 8 pg/ml táptalaj-antibiotikum koncentrációt, a 2b. példában 30 pg/ml táptalaj-antibiotikum koncentrációt alkalmazunk, míg a 2c. példa az antibiotikummentes kontroll.2a. 8b / ml medium antibiotic concentration; In Example 2c, a concentration of 30 pg / ml of medium antibiotic was used, while in Example 2c. An example is the antibiotic-free control.
Ez a kísérlet még abban is különbözik az 1. példában leírttól, hogy a 3 polimeralapú réteg 2,5 tömeg% eritrozint tartalmazó polisztirol.This experiment differs from that described in Example 1 in that the polymer-based layer 3 is polystyrene containing 2.5% by weight of erythrosine.
Az optikai rendszer is azonos az 1. példában leírttal, azonban a detektorrendszerben a 8 LED helyett egy 600 MMS aluláteresztő szűrővel felszerelt villanólámpát alkalmazunk.The optical system is the same as that described in Example 1, but using a 600 MMS low pass filter instead of the LED 8 in the detector system.
A mérési eredmények az alábbiak.The measurement results are as follows.
Kísérlet jele Jellemző időtartam (perc)Experiment Signal Typical Duration (Minutes)
2a. 8±22a. 8 ± 2
2b. 20±52b. 20 ± 5
2c. 1,5±12c. 1.5 ± 1
Az eredmények azt mutatják, hogy mind a 2a., mind a 2b. példa szerinti antibiotikummennyiséggel látható az oxigénfogyasztás sebességének csökkenése, amely nyilvánvalóan nagyobb a magasabb antibiotikumkoncentráció esetén.The results show that both 2a and 2b. The amount of antibiotic described in Example 1A shows a decrease in the rate of oxygen consumption, which is obviously greater at higher antibiotic concentrations.
3. példaExample 3
Mindenben a 2. példában leírtak szerint járunk el, azonban a táptalaj egy standard húslé (bouillon), amely N 7519 márkanevű, gyártja: Sigma, US.All procedures were carried out as described in Example 2, but the medium was a standard bouillon (N 7519) manufactured by Sigma, US.
A mérés még abban is különbözik a 2. példában leírtaktól, hogy az 1 edény egy 1 mm falvastagságú 40 mm hosszú 0,2 mm belső átmérőjű középen egy 15 mm hosszú 6 mm átmérőjű hasat tartalmazó kapilláris, amely a 3. ábrán látható 11 forgókorongra fektetve helyezkedik el, a 11 forgókorong tartalmaz egy vízszintes 40 mm hosszú 8 mm átmérőjű 6 mm mély 12 vágatot, amely minden tartóhelynél a kör alakú 13 lyuk középpontjában halad át és lehetővé teszi, hogy ne csak az 1. példában leírt 1 edény befogadására legyen alkalmas a 11 forgókorong, hanem a fent leírt kapilláriséra is.The measurement differs from that described in Example 2 in that the vessel 1 has a capillary containing a 15 mm long 6 mm diameter abdomen in the center of a 40 mm long 0.2 mm inner diameter of 1 mm wall thickness, mounted on the rotating disc 11 shown in FIG. The rotating disk 11 is provided with a horizontal 40 mm long 8 mm diameter 6 mm deep cut 12 which passes through the center of the circular hole 13 at each holding position and allows it to accommodate not only the container 1 described in Example 1. 11 rotating discs, but also the capillary described above.
A kapilláris egyik végén egy 8 mm hosszú 6 mm belső átmérőjű szakasz van, ez csatlakoztatható egy szilikongumi csővel (2 mm falvastagság, 80 mm hosszú 8 mm belső átmérőjű, ráhúzható a kapilláris vastagabbik végére és a pipetta végére is).At one end of the capillary there is an 8 mm long 6 mm inner diameter section which can be connected with a silicone rubber tube (2 mm wall thickness, 80 mm long 8 mm inner diameter, can be pulled to the thicker end of the capillary and to the end of the pipette).
A kapilláris megtöltése úgy történik, hogy az Eppendorf-csőbe lógatjuk a kapilláris vékonyabbik végét, a másik végéhez csatlakoztatott pipettával lehet a kapillárist teleszívni a mintával.The capillary is filled by hanging the thinner end of the capillary into the Eppendorf tube, and the pipette attached to the other end can be used to aspirate the capillary with the sample.
A hermetikus zárást a kapilláris két végének leforrasztásával érhetjük el, mégpedig úgy, hogy először a vékony véget forrasztjuk le, miközben a pipetta a vastagabbik véghez még csatlakozik.Airtight closure can be achieved by soldering the two ends of the capillary by first soldering the thin end while the pipette is still attached to the thicker end.
A forrasztás után a csatlakozást a gumicsövet a kapillárisról lehúzva megbontjuk, majd a kapillárist úgy zárjuk le, hogy a forrasztás során a vastag végződést eltávolítjuk.After soldering, the connection is opened by pulling the rubber tube off the capillary and closing the capillary by removing the thick end during soldering.
Eltérés továbbá a 2. példához képest, hogy a kapilláris nem tartalmaz 3 polimeralapú bevonatot, helyette a táptalaj 0,01 g/mL táptalaj-koncentrációban Pd-coproporfirint tartalmaz.Another difference from Example 2 is that the capillary does not contain 3 polymer-based coatings, instead the medium contains Pd-coproporphyrin at a concentration of 0.01 g / mL.
A 3a. példában a táptalaj Streptomycin-koncentrációja 10 pg/ml táptalaj, a 3.b példában az antibiotikumkoncentráció 20 pg/ml táptalaj, míg a 3.c példa az antibiotikummentes kontroll.3a. In Example 3, the concentration of Streptomycin in the medium is 10 pg / ml of medium, in Example 3b the concentration of antibiotic is 20 pg / ml of medium, and in Example 3c the antibiotic-free control is used.
A kísérlet eredménye az alábbi.The result of the experiment is as follows.
Kísérlet jele Jellemző időtartam (perc)Experiment Signal Typical Duration (Minutes)
3a. 45±23a. 45 ± 2
3b. 60±53b. 60 ± 5
3c. 15±53c. 15 ± 5
4. példaExample 4
Mindenben az 1. példában leírtak szerint járunk el, de az Escherichia coli 35 034 103 CUF/ml koncentrációban van jelen és a táptalaj nem tartalmaz savasan hidrolizált kazeint.The procedure described in Example 1, but Escherichia coli is present in a concentration of 35 034 10 3 CUF / ml and the medium does not contain acid hydrolysed casein.
Az alkalmazott antibiotikum Streptomycin (S9137 Sigma), a 4a. példa szerint az antibiotikum koncentrációja 8 pg/ml táptalaj, míg a 4b. példa az antibiotikumot nem tartalmazó kontroll.The antibiotic used is Streptomycin (S9137 Sigma), a 4a. Example 4 shows an antibiotic concentration of 8 pg / ml of medium, while the concentration of antibiotic is shown in Figure 4b. example: control without antibiotic.
A mérés még abban is különbözik az 1. példában leírtaktól, hogy az optikai rendszer a 9 fotodióda helyett photomultiplier (PM) csövet tartalmaz.The measurement differs from that described in Example 1 in that the optical system contains a photomultiplier (PM) tube instead of a photodiode 9.
A kísérlet eredménye az alábbi.The result of the experiment is as follows.
Kísérlet jele Jellemző időtartam (perc)Experiment Signal Typical Duration (Minutes)
4a. 420±104a. 420 ± 10
4b. 225 ±54b. 225 ± 5
5. példaExample 5
Mindenben az 1. példa szerint járunk el, azonban a táptalajba beoltott mikroorganizmus Escherichia coli 35 034 104 CFU/ml táptalaj-koncentrációban. Az optikai rendszerben a 8 LED helyett 600 nm-es aluláteresz6One proceeds as in Example 1 was inoculated into the medium a microorganism of Escherichia coli culture medium at a concentration of 35 034 10 4 CFU / ml. The optical system is 600 nm low pass6 instead of 8 LEDs6
HU 221 824 Β1 tő szűrővel felszerelt villanólámpát és a 9 fotodióda helyett photomultiplier csövet alkalmazunk.A flash lamp equipped with a szűr1 filter and a photomultiplier tube instead of the photodiode 9 are used.
Az 5 a. példa szerint 15 pg/ml táptalaj-koncentrációban alkalmazzuk a Chloramfenikol antibiotikumot, míg az 5b. példa az antibiotikummentes kontroll mérési eredményét mutatja be.5a. Example 5 uses the antibiotic Chloramphenicol at a concentration of 15 pg / ml in the medium, while the compound of Example 5b is used. Example 4 shows the result of an antibiotic-free control.
A kísérletek eredményei az alábbiak.The results of the experiments are as follows.
Kísérlet jele Jellemző időtartam (perc)Experiment Signal Typical Duration (Minutes)
5a. >3805a. > 380
5b. 100±105b. 100 ± 10
6. példaExample 6
Mindenben az 5. példa szerint járunk el, azonban antibiotikumként a 6a. példában 4 pg/ml táptalaj-koncentrációban Erythromycin antibiotikumot alkalmazunk, míg a 6b. példa az antibiotikummentes kontroll eredményét mutatja be.In all cases, the procedure of Example 5 was followed, but the procedure of Example 6a was used as an antibiotic. Example 6b used Erythromycin antibiotic at a concentration of 4 pg / ml in the medium, while Example 6b. Example 4 shows the result of an antibiotic-free control.
A kísérletek szerinti mérési eredmények az alábbiak.The measurement results of the experiments are as follows.
Kísérlet jele Jellemző időtartam (perc)Experiment Signal Typical Duration (Minutes)
6a. >3006a. > 300
6b. 90±106b. 90 ± 10
Claims (4)
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU9802148A HU221824B1 (en) | 1998-09-25 | 1998-09-25 | Process for determination of the antibiotic sensitivity of oxygen using microorganisms |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU9802148A HU221824B1 (en) | 1998-09-25 | 1998-09-25 | Process for determination of the antibiotic sensitivity of oxygen using microorganisms |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9802148D0 HU9802148D0 (en) | 1998-12-28 |
| HUP9802148A2 HUP9802148A2 (en) | 2000-06-28 |
| HUP9802148A3 HUP9802148A3 (en) | 2000-09-28 |
| HU221824B1 true HU221824B1 (en) | 2003-01-28 |
Family
ID=89997130
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9802148A HU221824B1 (en) | 1998-09-25 | 1998-09-25 | Process for determination of the antibiotic sensitivity of oxygen using microorganisms |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| HU (1) | HU221824B1 (en) |
-
1998
- 1998-09-25 HU HU9802148A patent/HU221824B1/en not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| HU9802148D0 (en) | 1998-12-28 |
| HUP9802148A3 (en) | 2000-09-28 |
| HUP9802148A2 (en) | 2000-06-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2862556B2 (en) | Apparatus and device for detecting microorganisms | |
| US9068976B2 (en) | Integrated filtration bioanalyzer | |
| CA2035728C (en) | Device and methods for detecting microorganisms | |
| US20080166753A1 (en) | Microbial Growth Assay | |
| US8557539B2 (en) | Optical method and device for the detection and enumeration of microorganisms | |
| US5366873A (en) | Device and method for use in detecting microorganisms in a sample | |
| JPH0773510B2 (en) | Microorganism monitoring device | |
| Ludwicka et al. | Bioluminescent assay for measurement of bacterial attachment to polyethylene | |
| JP3109740B2 (en) | Microorganism detector | |
| BG61400B1 (en) | Means for detecting residual quantities of bactericidal compounds in liquids | |
| EP0538450A1 (en) | Method and apparatus to detect bacterial contamination of transfusable blood | |
| JP7383079B2 (en) | Cell detection device | |
| EP1529213B1 (en) | The method and apparatus for determining the number of living cells in a test fluid | |
| WO1989008714A1 (en) | Qualititive or quantititive process for researching microorganisms, installation for application of said process | |
| EP2737076B1 (en) | Method and device for detection and quantification of thermoduric microorganisms in a product | |
| Liu et al. | Antimicrobial susceptibility testing by measuring bacterial oxygen consumption on an integrated platform | |
| CA2528901A1 (en) | Improved test system for the determination of the presence of an antibiotic in a fluid | |
| GB2059990A (en) | Enhancement of the sensitivity of viable microbial cell count by bioluminescent assay of ATP and its use for identification of microbes by means of a short incubation in nutrient media | |
| WO2013155525A1 (en) | Ultra rapid blood culturing and susceptibility testing system | |
| JP2002034595A (en) | Method for living cell detection | |
| HU221824B1 (en) | Process for determination of the antibiotic sensitivity of oxygen using microorganisms | |
| JP2002501363A (en) | Microbial monitoring method | |
| JP4439837B2 (en) | Microorganism weighing method | |
| FR2719905A1 (en) | Measuring device for the control of bacteriological quality of water. | |
| JPH11146798A (en) | Quick discrimination of microorganism cell and discrimination kit for microorganism cell |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HFG4 | Patent granted, date of granting |
Effective date: 20021112 |
|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee | ||
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |