HU217083B - Virus-inactivated blood-product - Google Patents

Abstract

A találmány vírűsinaktivált vérkészítményre vőnatkőzik – kivéve azalbűminkészítményeket –, amely vérkészítmény össz-vírűsredűkciósfaktőra legalább 40, biőlógiai aktivitása a fertőző anyagőkinaktiválásának a megvalósítása előtti aktivitására vőnatkőztatvalegalább 50%-ős, és amely egy őlyan inaktiválókezeléssel állíthatóelő, amelynek a sőrán (a) a vérkészítményt 2–25 tömeg% detergensttartalmazó vizes őldattal kezelik, majd – adőtt esetben víz-, metanől-vagy etanőltartalmának 5 és 70 tömeg% közötti értékre történőbeállítása űtán – szilárd állapőtban 50 řC fölötti hőmérsékletenmelegítik, vagy (b) a vérkészítményt – adőtt esetben víz-, metanől-vagy etanőltartalmának 5 és 70 tömeg% közötti értékre történőbeállítása űtán – szilárd állapőtban 50 řC fölötti hőmérsékletenmelegítik, majd 2–25 tömeg% detergenst tartalmazó vizes őldattalkezelik. ŕThe present invention relates to a viral-activated blood composition, except for the asalbutomycin preparations, which is at least 40% bioavailable for the activity of infectious material inactivation prior to realization of total viral fracture factor, and which is adjustable by an inactivating inactivation, wherein the broth (a) is a blood composition 2 to 25% by weight of water containing a detergent containing water and then, in the case of water, methane or ethanol content of between 5 and 70%, is heated in a solid state at a temperature above 50 ° C, or (b) in the case of water, in water, methane. or adjusting its ethanol content to between 5 and 70% by weight in a solid state is heated to a temperature above 50 CC and then treated with an aqueous brick containing 2 to 25% by weight of detergent. ŕ

Description

A találmány vírusinaktivált vérkészítményre vonatkozik.The invention relates to a virus-inactivated blood composition.

Vérkészítmény alatt olyan emberi vagy állati vér-, illetve plazmaeredetű termékeket értünk, amelyeket terápiás, profílaktikus vagy diagnosztikus alkalmazásra szánunk. Az ilyen termékek enzimeket, proenzimeket, beleértve az alvadási faktorokat, továbbá enzimkofaktorokat, enziminhibitorokat, immunglobulinokat, albumint, plazminogént, fibrinogént, fibronektint vagy plazmát tartalmazhatnak.Blood products are products of human or animal blood or plasma intended for therapeutic, prophylactic or diagnostic use. Such products may contain enzymes, proenzymes, including clotting factors, and enzyme cofactors, enzyme inhibitors, immunoglobulins, albumin, plasminogen, fibrinogen, fibronectin, or plasma.

A vérkészítmények alkalmazása fertőzési kockázatot rejt magában, a véradó plazmájában esetleg jelen lévő fertőző anyagok, így a hepatitis- vagy AIDS-vírus miatt. Ha kizárólag olyan plazma kerül is feldolgozásra, amelynek a vizsgálata azt mutatta, hogy ezen fertőző anyagoktól mentes, a vizsgálati módszerek korlátozott érzékenysége miatt mégsem lehet kizárni a betegeknél a fertőzési veszélyt. A vérkészítmények előállítása során arra kényszerülnek, hogy az esetleg jelen lévő fertőző anyagokat különböző műveletekkel inaktiválják.The use of blood products carries a risk of infection due to the presence of infectious substances, such as hepatitis or AIDS virus, in the blood plasma. However, even if only plasma that has been tested free from these infectious agents is processed, the risk of infection in patients cannot be excluded due to the limited sensitivity of the test methods. During the preparation of blood products, they are forced to inactivate any infectious agents that may be present.

A vérkészítményekben lévő kórokozók inaktiválásával bőséges szakirodalom foglalkozik.There is ample literature on the inactivation of pathogens in blood products.

A különböző eljárások az alábbi módszereket tartalmazzák :The various procedures include the following:

vérkészítmények hevítése vizes oldatban, adott esetben virucid anyagok hozzáadása mellett, vérkészítmények hevítése vizes oldatban, stabilizátorok jelenlétében, vérkészítmények kezelése szerves oldószerekkel és/vagy detergensekkel, vérkészítmények hevítése száraz vagy nedves állapotban, vérkészítmények kombinált kezelése szerves oldószer/detergens használatával, és e vérkészítmények hevítése száraz állapotban.heating blood products in an aqueous solution, optionally with the addition of virucides, heating blood products in an aqueous solution, in the presence of stabilizers, treating blood products with organic solvents and / or detergents, combining blood products with an organic solvent / detergent, in condition.

Ezen inaktiváló eljárásokkal arra törekednek, hogy a készítmények potenciális fertőzőképességét megszüntessék biológiai aktivitásuk messzemenő megtartása mellett. Ezt a célt eddig azonban csak albuminkészítmények esetén lehetett elérni, mégpedig úgy, hogy a vizes albuminoldatokat 10 órán át 60 °C hőmérsékleten hevítették, minthogy az albumin lényegesen stabilabb hőbehatással szemben, mint az összes többi vérprotein.These inactivating methods seek to eliminate the potential infectivity of the formulations while maintaining their biological activity to a great extent. However, this goal has been achieved so far only in the case of albumin formulations by heating aqueous albumin solutions at 60 ° C for 10 hours, since albumin is significantly more stable to heat than all other blood proteins.

A technika mai állását illetően például az alábbi szakirodalmi adatokat ismertetjük.For example, in the state of the art, the following literature data are provided.

A DE 29.16.711 számú szabadalmi bejelentés eljárást ír le véralvadási faktorokat tartalmazó készítmények vizes oldatban való kezelésére 30-100 °C hőmérséklet alkalmazásával, amikor is a véralvadási faktorok oldatához egy aminosavat és egy mono- vagy oligoszacharidot vagy cukoralkoholt adnak.DE 29.16.711 describes a process for treating compositions containing coagulation factors in an aqueous solution using a temperature of 30-100 ° C, wherein an amino acid and a mono- or oligosaccharide or sugar alcohol are added to the solution of the coagulation factors.

Az EP 0.053.338 számú szabadalmi bejelentés IX és X faktort tartalmazó készítményekben a hepatitisvírus inaktiválására ismertet eljárást, amely szerint a vérkészítmény vizes oldatát kalciumionok és adott esetben egy aminosav és/vagy egy szacharid vagy cukoralkohol jelenlétében melegítik egészen 100 °C hőmérsékletig.EP 0.053.338 discloses a method for inactivating the hepatitis virus in formulations containing factor IX and X, wherein the aqueous solution of the blood product is heated to 100 ° C in the presence of calcium ions and optionally an amino acid and / or a saccharide or sugar alcohol.

Az EP 0.035.204 számú szabadalmi bejelentésben vizes proteinoldatok inaktiválására szolgáló eljárás szerepel. Ezek az oldatok VIII faktort, fibronektint, globulint, fibrinogént és más proteineket tartalmazhatnak. A készítményhez egy poliolt kevernek, és a keveréket 60-75 °C hőmérsékletre hevítik fel.EP 0.035.204 discloses a method for inactivating aqueous protein solutions. These solutions may contain factor VIII, fibronectin, globulin, fibrinogen and other proteins. A polyol is mixed into the composition and the mixture is heated to a temperature of 60-75 ° C.

Az EP 0.052.827 számú szabadalmi bejelentés hepatitisvírusok inaktiválására szolgáló eljárást ír le, II és VII faktort tartalmazó vizes oldatban, kelátképző anyag és adott esetben egy aminosav és/vagy egy szacharid vagy cukoralkohol jelenlétében.EP0.0522.827 discloses a method for inactivating hepatitis viruses in an aqueous solution containing Factors II and VII in the presence of a chelating agent and optionally an amino acid and / or a saccharide or sugar alcohol.

Az US 4.379.085 számú szabadalmi bejelentés eljárást ír le plazmaproteinek - ilyen a Q-inhibitor vagy a IX faktor - hőinaktiválására vizes oldatban, kalciumcitrát vagy ammónium-citrát jelenlétében.U.S. Patent No. 4,379,085 describes a method for heat inactivating plasma proteins, such as Q-inhibitor or factor IX, in aqueous solution in the presence of calcium citrate or ammonium citrate.

Az EP 0.077.870 számú szabadalmi bejelentés inaktiváló eljárást ír le, ebben egy VIII faktort tartalmazó vizes oldatot aminosavakkal, monoszacharidokkal, oligoszacharidokkal, cukoralkoholokkal és 3-10 szénatomos szénhidrogén- vagy hidroxi-szénhidrogén-karbonsavakkal 50-80 °C hőmérsékletre hevítenek.EP0.077.870 discloses an inactivation process in which an aqueous solution containing Factor VIII is heated to 50-80 ° C with amino acids, monosaccharides, oligosaccharides, sugar alcohols and C3-C10 hydrocarbons or hydroxycarboxylic acids.

A WO 83/04371 számon nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi bejelentés hepatitisvírusok inaktiválására szolgáló eljárást ismertet. A vírust tartalmazó készítményt 4-40 °C hőmérsékleten halogénezett szénhidrogénnel, főként kloroformmal kezelik.International Patent Publication No. WO 83/04371 discloses a method for inactivating hepatitis viruses. The virus-containing composition is treated at 4-40 ° C with a halogenated hydrocarbon, especially chloroform.

Az EP 0.015.055 számú szabadalmi leírás eljárást ír le vérkészítmény kezelésére. Az eljárás szerint a terméket vízmentes állapotban mikrohullám-besugárzásnak vetik alá a jelen lévő mikroorganizmusok inaktiválása céljából.EP 0.015.055 describes a method for treating a blood product. In this method, the product is subjected to microwave irradiation in anhydrous state to inactivate the microorganisms present.

A XII. Nemzetközi Vértranszfüziós Kongresszusra készített értekezésben [„MIR” Kiadó, Moszkva (1969), Kivonatok, 473-475. oldal] Rosenberg és munkatársai leírtak egy eljárást albumintartalmú készítmények és fibrinogén inaktiválására száraz állapotban, 10 órán át 60 °C-on végzett kezeléssel.XII. In Proceedings for the International Blood Transfusion Congress ["MIR" Publisher, Moscow (1969), Abstract, 473-475. Rosenberg, et al., describe a method for inactivating albumin-containing formulations and fibrinogen in a dry state for 10 hours at 60 ° C.

Az EP 0.094.611 számú közrebocsátási irat VIII faktort tartalmazó készítmény kezelésére - a jelen lévő hepatitisvírusok inaktiválására - szolgáló eljárást ismertet. A készítményt száraz állapotban - például liofilizáltan - legalább 60 °C hőmérsékleten kezelik.EP 0.0944.611 discloses a method for treating a composition comprising factor VIII by inactivating the hepatitis viruses present. The composition is treated in a dry state, such as lyophilized, at a temperature of at least 60 ° C.

A WO 82/03871 számon nyilvánosságra hozott nemzetközi szabadalmi bejelentés véralvadási enzimeket tartalmazó készítmények kezelésére szolgáló eljárást ír le. A készítményeket száraz állapotban hevítik a jelen lévő fertőző vírusok inaktiválása céljából, a száraz állapotot úgy határozták meg, hogy az 5 tömeg%-nál kevesebb vizet jelent.International patent application WO 82/03871 describes a method for treating compositions containing blood coagulation enzymes. The compositions are heated in a dry state to inactivate the infectious viruses present, the dry state being defined as less than 5% by weight of water.

Kitűnt, hogy a liofilizált VIII faktorkoncentrátum száraz hővel 10 órán át 60 °C-on végzett kezelésének ugyan van bizonyos vírusinaktiváló hatása, azonban a száraz hővel kezelt termék beadásával hepatitis- és AIDS-vírust is át lehet vinni [Eur. J. Epidemiol., 3., 103/118. (1987.)]. Annak érdekében, hogy a száraz hővel végzett kezelés hatásfokát emeljék, a WO 88/08710 számon nyilvánosságra hozott nemzetközi bejelentésben a hőkezelések sorozatát javasolják. Ez az eljárás sem eredményez azonban vírusbiztos terméket.It has been found that the treatment of lyophilized Factor VIII concentrate with dry heat for 10 hours at 60 ° C has some viral inactivating activity, but it is also possible to transmit hepatitis and AIDS virus by administering the dry heat treated product [Eur. J. Epidemiol., 3, 103/118. (1987)]. In order to increase the efficiency of the dry heat treatment, a series of heat treatments is proposed in WO 88/08710. However, this procedure does not result in a virus-safe product either.

Az EP 0.378.208 számú közrebocsátási iratban a proteintartalmú készítményeknél ugyancsak száraz hővel végzett kezeléssel kombinált trialkil-foszfátos kezelést írnak elő.EP 0.378.208 also provides trialkyl phosphate treatment combined with dry heat treatment of proteinaceous compositions.

HU 217 083 ΒHU 217 083 Β

Az EP 0.159.311 számú közrebocsátási irat szerint a vérkészítményeket szilárd vagy nedves állapotban hidroxilcsoportot tartalmazó vegyület jelenlétében hőkezelik. A készítmény víz-, metanol- vagy etanoltartalmát 5-70 tömeg%-ra állítják be, például a készítményt gőzzel kezelik, majd zárt edényben 50-121 °C hőmérsékleten hevítik.EP 0.159.311 discloses that blood products are heat treated in the presence of a compound containing a hydroxyl group in a solid or wet state. The water, methanol or ethanol content of the composition is adjusted to 5 to 70% by weight, for example, the composition is steam-treated and then heated in a closed vessel at 50 to 121 ° C.

Megállapítható azonban, hogy a hőkezelést alkalmazó eljárások egyike sem ad megbízható eredményt.However, it can be stated that none of the processes using heat treatment produces reliable results.

Az EP 0.050.061 számú közrebocsátási irat biológiai készítmények és gyógyszerek nem denaturáló amfifil (detergens) 0,12-10 tömeg% mennyiségével való kezelését ismerteti. Az EP 0.031.740 számú szabadalmi leírás azonban bemutatja, hogy vírusinaktiválás céljából az egyedül egy detergenssel végzett kezelés viszonylag hatástalan. A hatékony kezeléshez ez a szabadalmi leírás egy detergenssel és egy di- vagy trialkilfoszfát oldószerrel végzett kezelést javasol. Itt a detergens koncentrációja 1%, az oldószeré 0,1%.EP 0.050.061 discloses the treatment of non-denatured amphiphilic (detergent) in biological formulations and drugs in an amount of 0.12-10% by weight. However, EP0.031,740 discloses that treatment with a detergent alone for virus inactivation is relatively ineffective. For effective treatment, this patent proposes treatment with a detergent and a di- or trialkyl phosphate solvent. Here the concentration of the detergent is 1% and that of the solvent 0.1%.

A szakirodalomban [American Journal of Hematology, 35., 142. (1990.)] is egy szerves oldószeres/detergenses kezelés (úgynevezett S/D eljárás) és hőkezelés kombinálását ismertetik. Az S/D eljárásban, amint az az EP 0.031.170 számú szabadalmi leírásban is szerepel, a detergens az oldószer hatását növeli, mennyisége nem lényeges. Az S/D eljárás hátránya, hogy a szerves oldószer mérgező, ezért a vírusinaktiváló lépés után el kell választani.The combination of an organic solvent / detergent treatment (so-called S / D process) and heat treatment is also described in the American Journal of Hematology, 35, 142 (1990). In the S / D process, as disclosed in EP 0.031.170, the detergent increases the action of the solvent and is not essential. The disadvantage of the S / D process is that the organic solvent is toxic and therefore has to be separated after the viral inactivation step.

Ma azt a vírusinaktiváló eljárást nevezik hatékonynak, amikor egy vérkészítménymintához nagy dózisban tesztvírust adnak (például véralvadásifaktor-készítményben körülbelül 10⁵ maximális lehetséges titemek megfelelően), és az illető eljárás alkalmazásával való kezelés után a mintában már nem lehet vírust kimutatni, minthogy a vírustiter a kimutathatósági határ alá csökkent.Today, a virus inactivation method is called effective when a high dose of test virus is added to a blood sample (for example, about 10 ⁵ maximal titres in a blood coagulation factor formulation), and after treatment with that method, no virus can be detected in the sample. fell below the limit.

Az inaktiválás mértékéül az úgynevezett redukciós faktor szolgál, amelyet egy tesztvírus egyszeri hozzáadása után a kezdeti és végső vírustiter hányadosának tizes alapú logaritmusából számítanak ki. Az Európai Közösség bizottságának EC III/8115/89-EN jelű irányelveiből is ismeretes az úgynevezett összredukciós faktor. Ezt a faktort az egyes egymást követő inaktiválási eljárások redukciós faktorainak az összegéből számítják ki.The degree of inactivation is the so-called reduction factor, which is calculated after a single addition of a test virus from a titer based logarithm of the ratio of initial and final viral titer. The so-called total reduction factor is also known from the EC Commission Directive EC III / 8115/89-EN. This factor is calculated as the sum of the reduction factors of each successive inactivation process.

A modem orvoslásban fennáll annak a szükségessége, hogy számos vérkészítményt hosszú ideig - sok esetben tartós kezelésként - nagy mennyiségben, megelőzésre is alkalmazzanak. Ez szükségszerűen a fertőző partikulák felhalmozódásához vezet, ezáltal lényegesen megnő a fertőződés kockázata még a már vírusinaktivált készítmények adása esetén is.In modem medicine, there is a need for many blood products to be used in large quantities for long periods of time, often for long-term treatment, for prevention. This necessarily leads to the accumulation of infectious particles, thereby significantly increasing the risk of infection, even when administered with virus inactivated formulations.

A redukciós faktorokat a teljes plazmapool vírus fertőzöttségét tekintve az úgynevezett „worst case situation” eshetőséggel kell összevetni. A szakirodalomból [Allgemeine Medizin, 65., 429-433. (1989)] ismert, hogy vizsgált és HIV-negatívnak talált plazma feldolgozása esetén a plazmaszármazékoknak 10⁵ ID/ml (ID-infektív dózis) HIV-tartalma lehet. Feltételezve, hogy egy betegnek élete folyamán összesen körülbelül 100 literThe reduction factors should be compared with the so-called "worst case situation" in terms of total plasma bile virus infection. From the literature (Allgemeine Medizin, 65, 429-433). (1989)] it is known that plasma derivatives may have an HIV content of 10 ⁵ IDU / ml (ID-infectious dose) when processed and tested negative for HIV. Assuming a patient has a lifetime of about 100 liters

VIII faktorkészítményt adnak be, a plazmaszármazékokat olyan vírusinaktiváló eljárásnak kell alávetni, amely legalább 10¹⁰ vírustiter-redukciót biztosít, hogy a betegFactor VIII preparations are administered, plasma derivatives must be submitted to a viral inactivation procedure that provides at least 10 to ¹⁰

AIDS-vírussal való megfertőzése elkerülhető legyen.Infection with the AIDS virus should be avoided.

A találmány azt a feladatot tűzi ki célul, hogy olyan vírusbiztos vérkészítményt - kivéve az aibuminkészítményeket - bocsásson rendelkezésre, amelytől el lehet várni, hogy a fertőző anyagok átvitele még nagy mennyiségű vérkészítmény adása esetén is ki van zárva, és amely mégis nagy biológiai hatásfokkal rendelkezik.It is an object of the present invention to provide a virus-safe blood product, other than alibumin compositions, which is expected to be transmissible even when a large amount of blood product is administered and yet has a high biological efficiency.

A találmány szerint ezt a feladatot olyan vírusinaktivált vérkészítménnyel - kivéve az albuminkészítményeket - oldjuk meg, amelynek az össz-vírusredukciós faktora legalább 40, és biológiai aktivitása, a fertőző anyagok inaktiválásának megvalósítása előtti aktivitásra vonatkoztatva, legalább 50%-os. Ez a vérkészítmény olyan inaktiváló kezeléssel állítható elő, amelynek a során:According to the invention, this object is solved by a virus-inactivated blood composition, with the exception of albumin preparations, having a total viral reduction factor of at least 40 and a biological activity of at least 50% relative to the activity prior to the inactivation of infectious agents. This blood product may be prepared by an inactivating treatment in which:

(a) a vérkészítményt 2-25 tömeg%, előnyösen 5-25 tömeg% detergenst tartalmazó vizes oldattal kezeljük, majd adott esetben víz-, metanol- vagy etanoltartalmának 5 és 70 tömeg% közötti értékre történő beállítása után, szilárd állapotban 50 °C fölötti hőmérsékleten melegítjük, vagy (b) a vérkészítményt, adott esetben víz-, metanolvagy etanoltartalmának 5 és 70 tömeg% közötti értékre történő beállítása után, szilárd állapotban 50 °C fölötti hőmérsékleten melegítjük, majd 2-25 tömeg%, előnyösen 5-25 tömeg% detergenst tartalmazó vizes oldattal kezeljük.(a) treating the blood composition with an aqueous solution containing from 2% to 25% by weight, preferably from 5% to 25% by weight, of detergent, optionally after adjusting its water, methanol or ethanol content to 5% to 70% by weight; or (b) after adjusting the water, methanol, or ethanol content, if appropriate, to 5 to 70% by weight, the solid is heated at a temperature above 50 ° C and then 2-25% by weight, preferably 5-25% by weight. aqueous detergent solution.

A találmány szerinti készítményt előnyösen úgy állíthatjuk elő, hogy a vérkészítményt több mint 10 tömeg% detergenst tartalmazó vizes oldattal kezeljük és szilárd állapotban melegítjük.Preferably, the composition of the invention may be prepared by treating the blood composition with an aqueous solution containing more than 10% by weight of detergent and heating it in a solid state.

A biológiai aktivitást mint enzimatikus aktivitást (például véralvadási enzimek és kofaktorok esetén) vagy mint aviditást (immunglobulinok esetén), vagy mint antigénaktivitást - esetleg aktivitásmarker, illetve antigénmarker alkalmazása révén - határozzuk meg.Biological activity is defined as enzymatic activity (e.g., for coagulation enzymes and cofactors) or avidity (for immunoglobulins) or antigenic activity, possibly using an activity marker or antigenic marker.

A találmány szerinti vérkészítményeket a hagyományos vérkészítményekből úgy állíthatjuk elő, hogy az inaktiválást annyi ideig végezzük, amennyi elégséges ahhoz, hogy elérjük a legalább 40-es össz-vírusredukciós faktort. Az időtartamot a vérkészítmény egy mintáján kísérletileg határozhatjuk meg. A kísérleti kezelés alatt meghatározott mennyiségű tesztvírust adunk ismételten a mintához, és minden kezeléshez csak akkor fogunk hozzá, ha a vírustiter egy meghatározott értékre - előnyösen a kimutathatósági határ alá - csökkent. Az össz-vírusredukciós faktor az egyes redukciós faktorok összegéből adódik.Blood compositions of the present invention may be prepared from conventional blood products by inactivation for a time sufficient to achieve a total viral reduction factor of at least 40. The duration may be experimentally determined on a sample of the blood product. During the experimental treatment, a defined amount of test virus is repeatedly added to the sample and each treatment is only initiated if the virus titer has fallen to a specific value, preferably below the limit of detection. The total viral reduction factor is the sum of the individual reduction factors.

Ha tehát a vírusinaktiválást célzó kezelés folyamán tesztvírust adunk meghatározott időközönként egy biológiai termékhez, a kezdeti és végső vírustiter meghatározása után a vírustiterarányok tízes alapú logaritmusát az időközök számával megszorozzuk, és a redukciós faktorokat hozzáadjuk az össz-vírusredukciós faktorhoz. Ez a számítás feltételezi, hogy az utolsó tesztvírus adása után a vírustiterredukció nem nagyobb, mint az előző titerredukció volt. Ez így is volt.Thus, if a test virus is added to a biological product at defined intervals during treatment for viral inactivation, after the initial and final virus titers are determined, the titer-based logarithm of the virus titer ratios is multiplied by the number of intervals and the reduction factors are added to the total virus reduction factor. This calculation assumes that the virus titer reduction after administration of the last test virus is not greater than the previous titer reduction. That was the case.

HU 217 083 ΒHU 217 083 Β

Tesztvírusként felhasználható például az AIDS-vírus vagy a Sindbis-vírus (a hepatitisvírusok modellvírusa).Examples of test viruses are AIDS virus or Sindbis virus (model virus of hepatitis viruses).

A találmány alapja az a felismerés, hogy a technika állása szerinti egyetlen kezelés detergens használatával, amit 10% alatti detergenskoncentrációval hajtunk végre, nem vezet megnyugtató eredményre, ha a vérkészítményt további vírusinaktiváló módszerrel nem kezeljük. Ez arra vezethető az inaktiváló hatóanyagokkal, így a detergensekkel szemben. Ezt a védőhatást azonban magasabb detergenskoncentrációval ki lehet küszöbölni anélkül, hogy a proteinek biológiai aktivitása lényegesen károsodna. Egy ilyen eljárásmód lehetővé teszi, hogy további anyagok adagolását, például olyan oldószerekét, amelyeknek toxikus hatása ismert, elkerüljük.The present invention is based on the discovery that a single treatment in the prior art using a detergent at a concentration of less than 10% detergent will not produce a satisfactory result if the blood product is not treated with an additional viral inactivation method. This can be inferred from inactivating agents such as detergents. However, this protective effect can be eliminated with higher concentrations of detergent without substantially impairing the biological activity of the proteins. Such a procedure makes it possible to avoid the addition of additional substances, such as solvents having known toxic effects.

Előnyösnek bizonyult, ha a detergenssel való kezelést 10 tömeg%-nál magasabb és 25 tömeg%-nál alacsonyabb koncentrációval hajtjuk végre, 1—30 perc időtartam alatt, leginkább 5,5-8 pH-értéken, 0 °C és 56 °C közötti hőmérsékleten, és adott esetben 7-20 mS vezetőképesség mellett.It has been found advantageous to carry out the detergent treatment at a concentration of greater than 10% by weight and less than 25% by weight over a period of 1 to 30 minutes, preferably at pH 5.5 to 8, between 0 ° C and 56 ° C. temperature and optionally with a conductivity of 7-20 mS.

Detergensként biológiailag elviselhető anionos, kationos, nemionos vagy ikerionos detergenseket alkalmazhatunk. Példaképpen megemlítjük az alábbiakat: polioxi-etilén-szorbitán-észterek (Tween-készítmények), alkil-fenol-polietilén-glikol-éterek és azok formaldehidpolimeijei, poli-oxi-etilén-poli-oxi-propilén tömbpolimerek, alkil-glükozidok, savamid-származékok, a nátriumdezoxi-kolát mint anionos detergens, a benzil-trimetilammónium-klorid vagy benzil-dimetil-2-hidroxi-etil-ammónium-klorid mint kationos detergens és az N-dodecilN’,N-dimetil-ammonio-3-propán-szulfonát mint ikerionos detergens.Biologically acceptable anionic, cationic, nonionic or zwitterionic detergents may be used. Examples include: polyoxyethylene sorbitan esters (Tween formulations), alkylphenol polyethylene glycol ethers and their formaldehyde polymers, polyoxyethylene polyoxypropylene block polymers, alkyl glucosides, derivatives, sodium deoxycholate as anionic detergent, benzyltrimethylammonium chloride or benzyldimethyl-2-hydroxyethylammonium chloride as a cationic detergent, and N-dodecyl-N ', N-dimethylammonio-3-propane-. sulfonate as a zwitterionic detergent.

A találmány szerinti inaktivált vérkészítmények előállításának egy előnyös foganatosítási módja abban áll, hogy a vérkészítmény víz-, metanol- vagy etanoltartalmát 5 tömeg% és 70 tömeg% közötti értékre állítjuk be, például a szilárd állapotú vérkészítményt vízgőzzel kezeljük, majd zárt tartályban 50-121 °C hőmérséklet-tartományon belül hevítjük.A preferred embodiment of the preparation of the inactivated blood compositions of the present invention consists in adjusting the water, methanol or ethanol content of the blood composition to between 5% and 70% by weight, e.g. It is heated to a temperature range of C.

A találmányt az alábbi példákkal szemléltetjük, anélkül azonban, hogy a találmány oltalmi körét ezekre a példákra korlátoznánk.The invention is illustrated by the following examples, without, however, limiting the scope of the invention to these examples.

7. példaExample 7

Humán plazmából VIII faktort tartalmazó krioprecipitátum-oldatot állítunk elő az AT 391.808 számú szabadalmi leírás szerint. Az oldat Tween 80 koncentrációját 8 tömeg%-ra állítjuk be és HIV-1 vírusszuszpenziót adunk hozzá hétszer 2 perces időközönként. Az összinkubációs idő 14 percig tart 25 °C-on, majd ezután a vírust centrifugáljuk és titerét meghatározzuk. A kontrollminta titerértéke Tween hozzáadása nélkül 10⁵>^l volt. Tween-kezelés után a vírustiter a 10°>⁵ kimutathatósági határ alá csökkent, és a negatív reverz transzkriptáz teszt alapján 0-nak minősült. Ez 7x5,1=35,7 vírusredukciós faktornak felel meg.From human plasma, a cryoprecipitate solution containing factor VIII is prepared according to AT 391.808. The concentration of Tween 80 in the solution was adjusted to 8 wt% and HIV-1 virus suspension was added seven times at 2 minute intervals. The total incubation time is 14 minutes at 25 ° C, after which the virus is centrifuged and the titer is determined. The control titer without the addition of Tween 10 was ^{5> l.} After tween treatment, the viral titer fell below the detection limit of 10 °> ⁵ and was considered 0 by the negative reverse transcriptase assay. This corresponds to a virus reduction factor of 7x5.1 = 35.7.

A Tween-mentesített oldathoz újból HIV-1 vírusszuszpenziót adunk, majd az oldatot liofílizáljuk, és azHIV-1 virus suspension was again added to the Tween-depleted solution, lyophilized and

EP 0.159.311 számú közrebocsátási iratban leírt módon vízgőzzel kezelve víztartalmát 8 tömeg%-ra beállítjuk, ezután 10 órán át 60 °C-on hevítjük. A vírustiter 10⁶·² értékről 0-ra csökkent.The water content is adjusted to 8% by weight as described in EP 0.159.311 and then heated at 60 ° C for 10 hours. The virus titer decreased from 10 ⁶ · ^{2 to} 0.

Tehát a két inaktiváló lépés után az ossz-vírusredukciós faktor 41,9. Ezzel bemutattuk, hogy egy VIII faktorkészítménynek, amelyet a fenti feltételek mellett detergenssel és hővel kezeltünk, össz-vírusredukciós faktora 41,9 és vírusbiztosnak tekinthető.Thus, after the two inactivation steps, the osse virus reduction factor is 41.9. Thus, it has been shown that a Factor VIII preparation treated with detergent and heat under the above conditions has a total virus reduction factor of 41.9 and is considered virus-safe.

A VIII faktor maradék aktivitásának a meghatározását a tromboplasztinképződési vizsgálat (2 lépcsős vizsgálat) segítségével végeztük el. A VIII faktor maradék aktivitását a hevített minta VIII faktor-aktivitásának és a Tween-kezelés előtti kiindulási anyag VIII faktor-aktivitásának a hányadosából számítottuk ki. A kapott aktivitás 80%-os volt.The residual factor VIII activity was determined using the thromboplastin formation assay (2-step assay). The residual Factor VIII activity was calculated by dividing the Factor VIII activity of the heated sample by the factor VIII activity of the pre-Tween treatment starting material. The activity obtained was 80%.

2. példaExample 2

Emberi plazmából a Vox Sanguinis [33., 37/50. (1977)] című folyóiratban leírt módszer szerint II, IX és X alvadási faktort tartalmazó készítményt (parciális protrombinkomplex, PPK) állítunk elő DEAE-Sephadexre való adszorbeálással, az ioncserélő mosásával és a komplex eluálásával.From human plasma, Vox Sanguinis [33, 37/50]. (1977)] prepared a composition containing coagulation factors II, IX and X (partial prothrombin complex, PPK) by adsorption to DEAE-Sephadex, washing of the ion exchanger and elution of the complex.

A PPK-oldathoz, amely 22% Tween 80-at tartalmazott, HIV-1 vírust adunk, és az oldatot 25 °C-on inkubáljuk. A vírusszuszpenziót 20 másodperces időközönként 15-ször adagoljuk. A Tweent nem tartalmazó kontrollvírus titere 10⁵>⁷ volt. A Tween-kezelés utáni végső vírustiter a 10°>⁵ kimutathatósági határ alá esett. Az ebből számított össz-vírusredukciós faktor legalább 15 χ 5,2=78. Tehát egy PPK-készítménynél, amelynél a fenti Tween-kezelést alkalmaztuk, az össz-vírusredukciós faktor 78-at tett ki, és ezt a készítményt vírusbiztosnak tekintjük.To the PPK solution containing 22% Tween 80 was added HIV-1 virus and the solution was incubated at 25 ° C. The virus suspension was added 15 times at 20-second intervals. The control virus without Twen had a titre of 10 ⁵ > ⁷ . The final viral titer after Tween treatment fell below the detection limit of 10 °> ⁵ . The calculated total virus reduction factor is at least 15 χ 5.2 = 78. Thus, for a PPK formulation using the above Tween treatment, the total viral reduction factor was 78 and this formulation is considered to be virus safe.

Az alvadási faktorok aktivitását a IX faktor példáján határoztuk meg oly módon, hogy a vizsgálandó mintát egy IX faktor hiányos plazmához adtuk hozzá, és meghatároztuk az aktivált parciális tromboplasztinidőt (1 lépcsős vizsgálat), amelyet a Tween-kezelés alig befolyásolt. A kezelt minta aktivitásának és a kezeletlen PPK IX faktor aktivitásának a viszonya közel 100%-os volt.The activity of clotting factors was determined using the example of factor IX by adding the test sample to a factor IX deficient plasma and determining the activated partial thromboplastin time (1-step assay), which was hardly affected by Tween treatment. The ratio of the activity of the treated sample to that of untreated PPK Factor IX was approximately 100%.

3. példaExample 3

A 2. példa szerinti PPK-készítményt modellvírusok jelenlétében (Sindbis, illetve vezikuláris stomatitis vírus - VSV) 12% dimetil-oktil-amin-N-oxiddal inkubáltuk 25 °C-on. A vírusszuszpenziót 5 perces időközönként 10-szer adagoltuk. Detergenskezelés után a vírustiter mindig a 10°>⁵ kimutathatósági határ alatt volt. A kontrollértékek detergensadagolás nélkül az alábbiak voltak: IO⁶-⁴, illetve 10⁶>^l. Az ebből számított össz-vírusredukciós faktor legalább 10x4,9=49, illetve 10x4,6=46.The PPK preparation of Example 2 was incubated with 12% dimethyloctylamine N-oxide at 25 ° C in the presence of model viruses (Sindbis and vesicular stomatitis virus - VSV). The virus suspension was added 10 times at 5 minute intervals. After detergent treatment, the virus titer was always below the detection limit of 10 °> ⁵ . Control values without detergent addition were: IO ⁶ - ⁴ and 10 ⁶ > ¹ . The total virus reduction factor calculated from this is at least 10x4.9 = 49 and 10x4.6 = 46, respectively.

A biológiai aktivitást a detergenskezelés alig károsította és közelítőleg 100%-os maradt.The biological activity was hardly affected by detergent treatment and remained approximately 100%.

4. példaExample 4

Plazmát Cohn szerint frakcionálunk és fibrinogént tartalmazó Cohn I frakcióhoz modellvírust (Sindbis, illetve VSV) adunk. Liofílizálás után a 8% vizet tartal4Plasma is fractionated according to Cohn and model virus (Sindbis and VSV) is added to Cohn I fraction containing fibrinogen. After lyophilization, it contains 8% water

HU 217 083 Β mazó koncentrátumot az EP 0.159.311 számú közrebocsátási iratban leírt eljárás szerint kezeljük, ezután 10 órán át 60 °C-on, majd 3 órán át 80 °C-on hevítjük. A vírustiter 10⁵>⁵-ről, illetve 10⁶-ról a liofilizálás révén 10⁴’⁹-re, illetve 10⁵-⁵-re csökkent, majd a 60 °C-on végzett kezelés után a 10°·⁵ kimutathatósági határ alá csökkent.The concentrate was treated according to the procedure described in EP 0.159.311, then heated at 60 ° C for 10 hours and then at 80 ° C for 3 hours. The virus titer was reduced from 10 ⁵ > ⁵ and 10 ⁶ by lyophilization to 10 ⁴ ' ⁹ and 10 ⁵ - ⁵ , respectively, and after treatment at 60 ° C, the detection limit was 10 ° · ⁵ fell below.

A 80 °C-on végzett második inaktiváló kezelés kapacitását párhuzamos mintában határoztuk meg: liofilizálás után a vírustiter 10⁵’⁵-ről, illetve 10⁶-°-ról újból lOT’-re, illetve 10^{5 *}>⁵-re csökkent, és az ezt követő 80 °C-os kezelés hatására a kimutathatósági határ alá csökkent.The capacity of the second inactivation treatment at 80 ° C was determined in a duplicate sample: after lyophilization, the viral titer was reduced from 10 ⁵ ' ⁵ and 10 ⁶ - ⁵ to 10 ^{5 * 5} , and subsequently, below 80 ° C treatment, fell below the limit of detection.

A redukciós faktor a kétszeri redukció logaritmusából számítva 5, illetve 5,5 mínusz 0,6, illetve 0,5, mivel a fibrinogén készítményt a kétlépcsős kezelés folyamán csak egyszer liofilizáltuk. Tehát a redukciós faktor 9,4, illetve 10,5.The reduction factor is 5 and 5.5 minus 0.6 and 0.5, respectively, calculated from the logarithm of the double reduction, since the fibrinogen preparation was lyophilized only once during the two-step treatment. So the reduction factors are 9.4 and 10.5, respectively.

A port ezután 5% oktil-glükozidot tartalmazó közegben oldjuk fel, és az oldathoz 5 perces időközönként 9-szer adunk Sindbis-vírust, illetve VSV-t. Inkubálás után (összesen 45 perc 25 °C-on) meghatározzuk a vírustitert. A detergenskezelés a vírustitert a 10°·⁵ kimutathatósági határ alá csökkentette. A kontrollminta - detergensadás nélkül - titere 10⁶·⁹, illetve 10⁶>° volt. A számított vírusredukciós faktor tehát legalább 57,6, illetve 49,5, az ossz-vírusredukciós faktor 67,0, illetve 60,0. Tehát olyan fibrinogén készítmény esetén, amelynél a fenti feltételek mellett hőkezelést és detergenskezelést alkalmazunk, az össz-vírusredukciós faktor legalább 60,0 és a készítmény vírusbiztosnak tekinthető.The powder is then dissolved in media containing 5% octyl glucoside and 9 times Sindbis virus or VSV is added to the solution at 5 minute intervals. After incubation (45 minutes total at 25 ° C), the virus titer is determined. Detergent treatment lowered the viral titer below the detection limit of 10 ° · ⁵ . The titre of the control sample without detergent was 10 ⁶ · ⁹ and 10 ⁶ > °, respectively. Thus, the calculated viral reduction factor is at least 57.6 and 49.5, respectively, and the ossi virus reduction factor is 67.0 and 60.0, respectively. Thus, in the case of a fibrinogen composition using heat treatment and detergent treatment under the above conditions, the total viral reduction factor is at least 60.0 and the composition can be considered virus-resistant.

A fibrinogén biológiai aktivitását az oktil-glükozidot tartalmazó frakció 8% etil-alkohollal kicsapott csapadékában határoztuk meg a fibrin-alfa-láncok hálósodásának vizsgálatával [Seelich, T., Redl, H.: „Theoretische Grundlagen des Fibrinklebers”, a „Fibrinogén, Fibrin und Fibrinkleber” c. kiadványban, szerkesztette Schimpf, K., Schattauer Verlag, Stuttgart-New York, 199-208. oldal (1980)] és trombelasztográfiával [Hátér, H. értekezése a „Thrombosis and Bleeding Disorders c. kiadványban, szerkesztették: Bang, N. U. és munkatársai, Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Acad. Press New York, London, 70-76. oldal (1971)], minden esetben a XIII alvadási faktor hozzáadásával.The biological activity of fibrinogen was determined in a precipitate of 8% ethyl alcohol in the octyl glucoside fraction by precipitation of fibrin alpha chains [Seelich, T., Redl, H .: Theoretics Grundlagen des Fibrinklebers, Fibrinogen, Fibrin und Fibrinkleber ”c. in Schimpf, K., Schattauer Verlag, Stuttgart-New York, 199-208. (1980)] and thrombolastography [Background, H. Thesis in Thrombosis and Bleeding Disorders. Ed., Bang, N. U., et al., Georg Thieme Verlag, Stuttgart, Acad. Press New York, London, 70-76. (1971), each with the addition of coagulation factor XIII.

A Cohn I frakció biológiai aktivitására vonatkoztatva a kezelt fibrinogén biológiai aktivitása 87%-os volt hálósodási vizsgálattal és 56%-ot mértünk trombelasztográfiával.With respect to the biological activity of the Cohn I fraction, the biological activity of the treated fibrinogen was 87% by crosslinking assay and 56% was measured by thrombolytics.

5. példaExample 5

Megfelelően választott plazmát Cohn szerint frakcionálunk. A Cohn III frakcióhoz, amely tetanusz toxoid elleni gamma-globulint tartalmaz, 15% Triton X-100 jelenlétében HIV-1, illetve Sindbis-vírust adunk, majd a frakciót 25 °C-on inkubáljuk. A vírusadagolást perces időközönként végezzük 30-szor. Az összesen 30 perces inkubációs idő után a vírustiter a 10²>⁵, illetveProperly selected plasma is fractionated according to Cohn. To Cohn III fraction containing gamma globulin against tetanus toxoid was added HIV-1 and Sindbis virus in the presence of 15% Triton X-100 and incubated at 25 ° C. The virus is dosed at 30-minute intervals. After a total incubation time of 30 minutes, the virus titer was 10 ² > ⁵ , respectively

10¹-⁵ kimutathatósági határ alá csökkent. A detergens nélküli kontrollminta titere 10⁵-⁷, illetve 10⁷·⁵ volt. Az ebből számított össz-vírusredukciós faktor legalább10 below ¹ to ⁵ limits of detection. The titre of the control without detergent was 10 ⁵ - ⁷ and 10 ⁷ · ^5, respectively. The calculated total virus reduction factor is at least

30x3,2=96, illetve 30x6=180. Egy gamma-globulinkészítmény össz-vírusredukciós faktora, ha azt a fenti detergenskezelésnek vetjük alá, legalább 96, és vírusbiztosnak tekinthető.30x3.2 = 96 and 30x6 = 180 respectively. The total viral reduction factor of a gamma globulin composition, when subjected to the above detergent treatment, is at least 96 and is considered virus-safe.

A biológiai aktivitást aviditási vizsgálattal határozzuk meg. Tetanusztoxoidot mikrotitráló lemezre abszorbeálunk, zselatinnal fedjük és mossuk. A vizsgálandó gamma-globulin hígításait rávisszük az előkészített lemezre, és a nem adszorbeálódott immunglobulint kimossuk. A tetanusztoxoidhoz kötött gamma-globulin meghatározását úgy végezzük, hogy az immunglobulin F_c részéhez egy antihumán IgG-peroxidáz konjugátumot adszorbeálunk, ezt követően a peroxidáz színreakciót ad a diamino-benzidinnel és H₂O₂-dal, és ennek a reakciónak az extinkcióját méijük.Biological activity is determined by an avidity assay. The tetanus toxoid is absorbed onto a microtiter plate, covered with gelatin and washed. Dilutions of the gamma globulin to be tested are transferred to the prepared plate and the unabsorbed immunoglobulin is washed. Definition bound tetanus toxoid gamma globulin is carried out, that portion of F _c adsorbed onto an anti-human IgG peroxidase conjugate to immunoglobulin, followed by peroxidase gives color with diaminobenzidine and H ₂ O _2, azide, and is measured by the absorbance of this reaction.

A gamma-globulin aviditását a tetanusztoxoidhoz a detergenskezelés alig befolyásolja. Nem észleltünk jelentős különbséget a kezelés előtt és után mért aviditás között.The avidity of gamma globulin to tetanus toxoid is hardly affected by detergent treatment. No significant difference was observed between avidity before and after treatment.

6. példaExample 6

C_részteráz inhibitort [amelyet a Vogelaar, E. F. és munkatársai által leírt módon állítottunk elő, Vox Sang., 26., 118-127., (1973), „Contributions to the Optimál Use of Humán Blood”] tartalmazó oldat 0,95 ml-éhez hozzáadunk 20 mg Triton Χ-100-at, és az oldatot 25 °Con inkubáljuk. A vírusinaktiváló kapacitás meghatározása céljából az oldathoz 5 perces időközönként VSV vírust (10 μΐ) adunk. Ötször ismételt vírusadagolás után a vírustiter a 10°,⁵ kimutathatósági határ alá csökkent. A detergensadagolás nélküli kontrollminta titere 10⁷·⁵ volt. Az ebből számított vírusredukciós faktor legalább 5x7=35.Solution [prepared as described by Vogelaar, EF et al, Vox Sang., 26, 118-127. (1973), "Contributions to the Optimal Use of Human Blood"] containing esterase inhibitor C _r 0.95 Add 20 mg Triton Χ-100 per ml and incubate at 25 ° C. To determine the virus inactivation capacity, VSV virus (10 μΐ) is added to the solution at 5 minute intervals. After repeated administration of the virus five times, the virus titer was below the detection limit of 10 °, ⁵ . The titre of the non-detergent control sample was 10 ⁷ · ⁵ . The calculated virus reduction factor is at least 5x7 = 35.

A C_részteráz inhibitort DEAE-Sephadexre adszorbeáljuk és 8,89 g/liter nátrium-kloridot tartalmazó oldattal addig mossuk, amíg detergensmentes nem lesz. Az inhibitor deszorpcióját 59 g/liter nátrium-kloridot tartalmazó oldattal végezzük, majd az inhibitoroldatot 1,0 g/liter nátrium-citrátot és 0,4 g/liter nátrium-kloridot tartalmazó oldattal (pH=6,8) szemben dializáljuk. Ehhez az oldathoz liofilizálás előtt újra VSV vírust adunk. A készítményt száraz állapotban 24 órán át 72 °C-on hevítjük. A liofilizálás folyamán és az ezt követő hőkezelés alatt a vírustiter 10⁷’²-ről a 10°-⁵ kimutathatósági határ alá csökkent. A vírusredukciós faktor tehát legalább 6,7.The esterase inhibitor C _{r was} adsorbed onto DEAE-Sephadex and washed with a solution containing 8.89 g / l of sodium chloride until detergent-free. The inhibitor is desorbed with a solution of 59 g / l of sodium chloride and the inhibitor solution is dialyzed against a solution of 1.0 g / l of sodium citrate and 0.4 g / l of sodium chloride, pH 6.8. To this solution is added VSV virus again before lyophilization. The composition is heated in a dry state for 24 hours at 72 ° C. During lyophilization and subsequent heat treatment, the viral titer decreased from 10 ⁷ ' ² to a detection limit of 10 ° to ⁵ . Therefore, the virus reduction factor is at least 6.7.

A detergenssel és hővel való kezelés vírusredukciós faktorából számított össz-vírusredukciós faktor legalább 41,7. Az inhibitor biológiai aktivitását a VSV vírusok inaktiválása alig károsította. Az aktivitás közel 100%-os maradt.The total viral reduction factor calculated from the viral reduction factor of detergent and heat treatment is at least 41.7. The biological activity of the inhibitor was barely impaired by inactivation of VSV viruses. Activity remained almost 100%.

Claims (4)

SZABADALMI IGÉNYPONTOKPATENT CLAIMS 1. Vírusinaktivált vérkészítmény - kivéve az albuminkészítményeket -, amely vérkészítmény össz-vírusredukciós faktora legalább 40, biológiai aktivitása a fertőző anyagok inaktiválásának a megvalósítása előtti aktivitására vonatkoztatva legalább 50%-os, és amely egy olyan, tenzid felhasználásával és melegítéssel végzett inaktiváló kezeléssel állítható elő, amelynek a során1. A viral inactivated blood product, excluding albumin preparations, which has a total viral reduction factor of at least 40, has a biological activity of at least 50% relative to its activity before the inactivation of infectious agents, and is prepared by an inactivating treatment using a surfactant and heating. during which HU 217 083 Β (a) a vérkészítményt 2-25 tömeg%, előnyösen 5-25 tömeg% detergenst tartalmazó vizes oldattal kezeljük, majd - adott esetben víz-, metanol- vagy etanoltartalmának 5 és 70 tömeg% közötti értékre történő beállítása után - szilárd állapotban 50 °C fölötti hőmérsékleten melegítjük, vagy (b) a vérkészítményt - adott esetben víz-, metanolvagy etanoltartalmának 5 és 70 tömeg% közötti értékre történő beállítása után - szilárd állapotban 50 °C fölötti hőmérsékleten melegítjük, majd 2-25 tömeg%, előnyösen 5-25 tömeg% detergenst tartalmazó vizes oldattal kezeljük.EN 217,083 Β (a) The blood product is treated with an aqueous solution containing from 2% to 25% by weight, preferably from 5% to 25% by weight, of detergent, and after adjusting its water, methanol or ethanol content to 5% to 70% by weight. or (b) after adjusting the water, methanol, or ethanol content, if appropriate, to 5 to 70% by weight, the blood composition is heated at a solid temperature above 50 ° C, and then 2-25% by weight, preferably It is treated with an aqueous solution containing 5-25% by weight of detergent. (Módosítási elsőbbsége: 1994. 07. 01.)(Priority of Amendment: 07/07/1994) 2. Az 1. igénypont szerinti, vírusinaktivált vérkészítmény, ahol a vérkészítményt 10-25 tömeg% detergenst tartalmazó vizes oldattal kezeljük és szilárd állapotban melegítjük.The virus inactivated blood composition according to claim 1, wherein the blood composition is treated with an aqueous solution containing 10-25% by weight of detergent and heated in a solid state. (Módosítási elsőbbsége: 1994. 07. 01.)(Priority of Amendment: 07/07/1994) 3. Az 1. igénypont szerinti, vírusinaktivált vérkészít5 mény, amely egy olyan inaktiváló kezeléssel állítható elő, amely két eltérő inaktiváló eljárásból áll, ahol az egyik eljárás a vérkészítmény szilárd és nedves, 5-70 tömeg% víztartalmú állapotban, 50 °C fölötti hőmérsékleten történő hőkezeléséből áll.The viral inactivated blood composition according to claim 1, which is prepared by an inactivation treatment comprising two different inactivation processes, wherein one of the processes is a solid and a wet preparation having a water content of 5-70% by weight at a temperature above 50 ° C. heat treatment. 10 (Módosítási elsőbbsége: 1994. 07. 01.)10 (Priority of Amendment: 07/07/1994) 4. A 3. igénypont szerinti, vírusinaktivált vérkészítmény, ahol a másik inaktiváló eljárás a vérkészítmény 2-25 tömeg%, előnyösen 5-25 tömeg% detergenst tartalmazó, vizes detergensoldattal történő kezeléséből áll.The viral inactivated blood composition according to claim 3, wherein the other inactivation method comprises treating the blood composition with an aqueous detergent solution containing from 2% to 25% by weight, preferably from 5% to 25% by weight. 15 (Módosítási elsőbbsége: 1994. 07. 01.)15 (Priority of Amendment: 07/07/1994)