HU202579B - Process for closing in gel microorganisma or parts of microorganisma utilizable in fermentations - Google Patents

Process for closing in gel microorganisma or parts of microorganisma utilizable in fermentations Download PDF

Info

Publication number
HU202579B
HU202579B HU883987A HU398788A HU202579B HU 202579 B HU202579 B HU 202579B HU 883987 A HU883987 A HU 883987A HU 398788 A HU398788 A HU 398788A HU 202579 B HU202579 B HU 202579B
Authority
HU
Hungary
Prior art keywords
microorganisms
gel
organic solvent
mixture
agar
Prior art date
Application number
HU883987A
Other languages
Hungarian (hu)
Other versions
HUT50866A (en
Inventor
Zoltan Bende
Andrea Egresi
Ilona Harsanyi
Laszlo Nagy
Bela Szajani
Csaba Sisak
Original Assignee
Reanal Finomvegyszergyar
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Reanal Finomvegyszergyar filed Critical Reanal Finomvegyszergyar
Priority to HU883987A priority Critical patent/HU202579B/en
Priority to JP1175394A priority patent/JPH0276581A/en
Priority to DE3924446A priority patent/DE3924446A1/en
Priority to FR8909979A priority patent/FR2634785A1/en
Priority to SU894614585A priority patent/SU1760985A3/en
Priority to IT8921320A priority patent/IT1230999B/en
Publication of HUT50866A publication Critical patent/HUT50866A/en
Publication of HU202579B publication Critical patent/HU202579B/en

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0006Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N11/00Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
    • C12N11/02Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier
    • C12N11/04Enzymes or microbial cells immobilised on or in an organic carrier entrapped within the carrier, e.g. gel or hollow fibres

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Dispersion Chemistry (AREA)
  • Immobilizing And Processing Of Enzymes And Microorganisms (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Microorganisms or parts of microorganisms are enclosed in a gel by mixing the microorganisms or parts with a liq. agar soln. at 40-50 deg.C and adding the mixt. dropwise to a gel-forming liq. medium which is a solvent (or mixt) with no harmful effects on the microorganisms and with less than 10g/100 g solubility in water, density less than 1.2 g/cc, viscosity 10-100 mPa.s at 20 deg.C and b.pt. 75-250 deg.C, and in which the rate of settling of the droplets is more than 0.01 cm/sec. USE/ADVANTAGE - The microorganisms can be used in fermentation processes. Gel particles with uniform spherical shape and narrow size range (generally 1-5mm) are obtd.

Description

A találmány tárgya eljárás fermentációban felhasználható mikroorganizmusok vagy mikroorganizmus-részek gélbe zárására.The present invention relates to a process for encapsulating microorganisms or parts of microorganisms useful in fermentation in a gel.

Ismert, hogy a fermentációs műveletekben igen előnyösen használhatók fel rögzített mikroorganizmusok vagy mikroorganizmus-részek, például fermentációra alkalmas spóraszuszpenziók, sejttörmelékek, légmicéliumok, teljes vegetatív sejttenyészetek vagy növekedésben lévő tenyészetek. A rögzítés célja az, hogy a mikroorganizmusókat vagy mikroorganizmus-részeket (amelyek a fermentációhoz szükséges biokatalizátorokat szolgáltatják) a reaktortérben lokalizálja, és meggátolja, hogy azok az áramló fázisba kerüljenek át. Rögzített mikroorganizmusok, illetve mikroorganizmus-részek alkalmazásával javítható a biokatalizátor stabilitása (élettartama), növelhető a katalizált reakció térfogati termelékenysége, és a fermentáció folyamatos üzemmódban is megvalósíthatóvá válik.It is known that fixed microorganisms or parts of microorganisms, such as spore suspensions for fermentation, cell debris, aerial mycelia, whole vegetative cell cultures or growth cultures, can be used very favorably in fermentation operations. The purpose of the fixation is to localize the microorganisms or parts of the microorganisms (which provide the biocatalysts needed for fermentation) in the reactor space and prevent them from entering the flow phase. The use of fixed microorganisms or parts of microorganisms can improve the stability (lifetime) of the biocatalyst, increase the volumetric productivity of the catalyzed reaction, and make fermentation possible in a continuous mode.

A rögzítés egyik lehetséges módszere a biokatalizátomak szálak vagy gélek üregeibe történő bezárása. Erre a célra szintetikus gélek (például poli-akrilamid) vagy természetes eredetű gélképzők alkalmazhatók. Ismert például, hogy a Penicillium chrysogeneum-konidiumok, -micéliumok és -protoplasztok gélbe zárt állapotban is felhasználhatók penicillin G bioszintéziséhez. A bezáráshoz a Biotechnoi. Bioeng. 26,318 (1984) közlemény szerint K-karragenátot, a Biotechnoi. Bioeng. 27, 261 (1979) közlemény szerint poli-akrilamidot, az Eur. J. Appl. Microbiol. Biotechnoi. 75, 211 (1982) közlemény szerint kalcium-alginát gélt használnak. Az Eur. J. Appl. Microbiol. 2, 153 (1976) közlemény poli-akrilamidba bezárt Escherichia coli sejtek használatát ismerteti 6-amino-penicillánsav előállításában. A Biotechnoi. Lett 4, 293 (1982) közlemény szerint 6-amino-penicillánsav előállításához kitozánba bezárt Pleurotus ostreatus-sejteket használnak. A Biotechnoi. Bioeng. 23, 2747 (1981) közlemény poli-akrilamidba bezárt Streptomyces clavuligerus sejtek felhasználását ismerteti cefalosporin C előállításában. Az Antimicrob. Agents Chemother. 75, 126 (1979) és Biotechnoi. Bioeng. 22, 1015 (1980) közlemények szerint poli-akrilamid gélbe zárt Bacillus sp. baktériumsejtekkel bacitracint lehet termeltetni. Az Eur. J. Appl. Microbiol. Biotechnol. 75, 206 (1982) közlemény kalcium-alginátba rögzített Streptomyces sejtek felhasználását ismerteti tilozin és nikkomicin termelésében. A Biotechnoi. Lett. 5, 125 (1983) és 5, 785 (1983) közlemények szerint K-karragenátba zárt Penicillium urticae konidiumok patulin glükózból történő előállítására alkalmazhatók.One possible method of attachment is to enclose the biocatalysts in the cavities of the fibers or gels. For this purpose, synthetic gels (e.g., polyacrylamide) or natural gelling agents may be used. For example, it is known that penicillium chrysogeneum conidia, mycelia and protoplasts can be used in gel-encapsulated form for penicillin G biosynthesis. To close, Biotechnoi. Bioengineering. 26,318 (1984), K-Carrageenate, Biotechnol. Bioengineering. 27, 261 (1979), Polyacrylamide, Eur. J. Appl. Microbiol. Biotechnol. 75, 211 (1982) use calcium alginate gel. Eur. J. Appl. Microbiol. 2, 153 (1976) describes the use of Escherichia coli cells encapsulated in polyacrylamide in the preparation of 6-aminopenicillanic acid. Biotechnol. Lett 4, 293 (1982), Pleurotus ostreatus cells encapsulated in chitosan are used to produce 6-aminopenicillanic acid. Biotechnol. Bioengineering. 23, 2747 (1981) describes the use of Streptomyces clavuligerus cells encapsulated in polyacrylamide in the preparation of cephalosporin C. The Antimicrob. Agents Chemother. 75, 126 (1979) and Biotechnol. Bioengineering. 22, 1015 (1980), Bacillus sp., Encapsulated in a polyacrylamide gel. bacterial cells can be used to produce bacitracin. Eur. J. Appl. Microbiol. Biotechnol. 75, 206 (1982) discloses the use of Streptomyces cells immobilized in calcium alginate for the production of tylosin and niccomycin. Biotechnol. Became. 5, 125 (1983) and 5, 785 (1983), can be used for the preparation of Penicillium urticae conidia encapsulated in K-carrageenan from patulin glucose.

A fenti ismert eljárások hátrányai a következők:The disadvantages of the above known processes are as follows:

A poli-akrilamid gélbe történő bezárásnál a gélesedés során keletkező szabad gyökök súlyos sejtkárosodást okoznak, illetve egyes enzimekre gátló hatást fejtenek ki. Az ionotróp gélképzők, így például az alginátok és karragenátok esetén a gélesítéshez szükséges fémionok citotoxikusak lehetnek. Ezért ezek az eljárások a fermentációs célokra alkalmas mikroorganizmusok, illetve mikroorganizmus-részek csak egy szűk körénél alkalmazhatók eredményesen.When enclosed in a polyacrylamide gel, free radicals formed during gelation cause severe cell damage and inhibit certain enzymes. In the case of ionotropic gelling agents such as alginates and carrageenans, the metal ions required for gelling may be cytotoxic. Therefore, these methods can be successfully applied to only a limited number of microorganisms or parts of microorganisms suitable for fermentation purposes.

Célszerű megoldás lenne a fermentációra alkalmas mikroorganizmusokat, illetve mikroorganizmus-részeket agar-gélbe zárva rögzíteni. Az agar-gél ugyanis ami a mikroorganizmusok tenyésztésére használt táptalajok leggyakoribb komponense - a mikroorganizmusokra semmiféle káros hatást nem gyakorol, biztosítja az élő sejtek és spórák számára az optimális feltételeket, és a gélhálózat is megfelelő a micélium in situ kifejlődéséhez.It would be convenient to fix the microorganisms or parts of microorganisms suitable for fermentation in an agar gel. The agar gel, which is the most common component of the medium used for the cultivation of microorganisms, has no adverse effect on microorganisms, provides optimal conditions for living cells and spores, and the gel network is also suitable for the in situ development of the mycelium.

Mikroorganizmusok agar-gélbe zárását ismerteti a Biotechnoi. Bioeng. 77, 1729 (1975) és aMicrobiologiya 49,479 (1980) közlemény. Az ott közöltek szerint 2-4%-os vizes agar oldatot a gélesedési hőmérséklethez közel eső hőmérsékletre hűtve Escherichia coli, illetve Methylomonas sejtszuszpenzióval homogenizálnak, és a homogenizátumot hideg desztillált vízbe vagy foszfátpufferbe csepegtetik, vagy tömb fomájában dermedni hagyják és utólag aprítják.Incorporation of microorganisms in agar gel is described in Biotechnol. Bioengineering. 77, 1729 (1975) and Microbiologiya 49,479 (1980). As disclosed therein, a 2-4% aqueous agar solution is homogenized by cooling with a cell suspension of Escherichia coli and Methylomonas at a temperature close to the gelling temperature, and the homogenate is added dropwise to the distilled water or phosphate buffer and left to solidify.

A megoldás hátránya, hogy a vízbe csepegtetett gél változó méretben és alakban dermed meg. Az így képződött, rendkívül heterogén alakú (szál-, félgömb- vagy szabálytalan formájú) és méreteloszlású gélrészecskék felhasználása fermentációs célokra nem előnyös, mert nem teszik lehetővé a közeg egyenletes áramoltatását, a részecskék átsodródhatnak az áramló fázisba, és elkülönítésük nehézkes. A megdermedt agar-géltömbök aprítása időigényes, nehézkes művelet A fermentációs célokra optimálisan felhasználható, szabályos gömb alakú, szűk mérettartományba eső átmérőjű gélrészecskék ezekkel a módszerekkel nem állíthatók elő.The disadvantage of this solution is that the gel dripped into the water will freeze in varying sizes and shapes. The use of the resulting gel particles of extremely heterogeneous shape (fiber, hemispherical or irregular shape) and size distribution for fermentation purposes is not advantageous because they do not allow a smooth flow of the medium, the particles can drift into the flow phase and are difficult to separate. Crushing of frozen agar gel blocks is a time consuming, laborious operation. The use of regular spherical, narrow-diameter gel particles which are optimally usable for fermentation purposes cannot be achieved by these methods.

Vizsgálataink során megállapítottuk, hogy a képződő gélrészecskék alakja és mérete szempontjából döntő szerepe van a gélképzés közegeként felhasznált folyadék fizikai jellemzőinek. Tapasztalataink szerint szabályos gömb alakú, szűk mérettartományba eső (rendszerint 1-5 mm méretű) gélrészecskék akkor állíthatók elő, ha a fermentációs célokra használt mikroorganizmus vagy mikroorganizmus-részek 45-50 ’C hőmérsékletű folyékony agar-oldatlal képezett keverékét olyan, a mikroorganizmust nem károsító szerves oldószerbe vagy oldószer-elegybe csepegtetjük, amelynek vízben való oldhatósága 0,03-10 g/100 g, sűrűsége 0,61,2 g/cm3, 20 ’C-on meghatározott viszkozitása 0,4510 cP, forráspontja 75-250 ’C, és amelyben a cseppek ülepedést sebessége 0,01-10 cm/sec.In our investigations, it was found that the physical properties of the fluid used as the gelling medium play a decisive role in the shape and size of the gel particles formed. In our experience, regular spherical, narrow size (usually 1 to 5 mm) gel particles can be prepared when a mixture of the microorganism or parts of the microorganism used for fermentation in a liquid agar solution at 45-50 ° C is not harmful to the microorganism. is added dropwise to an organic solvent or mixture of solvents having a water solubility of 0.03 to 10 g / 100 g, a density of 0.61.2 g / cm 3 , and a viscosity of 0.4510 cP at boiling point of 75 to 250 '. C, and wherein the droplets settle at a rate of 0.01 to 10 cm / sec.

A leírásban és az igénypontsorozatban a „fermentációra alkalmas mikroorganizmus vagy mikroorganizmusrész” megjelölésen az adott mikroorganizmusnak fermentációs célra felhasználható összes lehetséges formáját, így például a mikroorganizmus vegetatív tenyészetét, spóraszuszpenzióját, izolált sejtjeit, konidiumait, miccliumait, sejttörmelékeit, növekedésben lévő tenyészeteit, sejtkomponenseit stb. értjük.As used herein and in the claims, the term "microorganism or microorganism suitable for fermentation" refers to all possible forms of the microorganism that can be used for fermentation, such as vegetative culture, spore suspension, isolated cells, conidia, micelles, cell debris, growths, etc. We understood.

A gélképzés közegeként felhasznált szerves oldószer vagy oldószer-elegy vízben való oldhatósága célszerűen 0,1-10 g/100 g, sűrűsége pedig célszerűen 0,81,1 g/cm3 lehet További alapvető követelmény, hogy a szerves oldószeibe csepegtetett gélcseppek ne lebegjenek a szerves oldószerben; a cseppek ülepedést sebessége célszerűen 0,05-10 cm/sec.The water solubility of the organic solvent or solvent mixture used as the gelling medium is preferably 0.1 to 10 g / 100 g and the density is preferably 0.81.1 g / cm 3 Another basic requirement is that the gel droplets added to the organic solvents should not float in an organic solvent; the droplet settling rate is preferably 0.05 to 10 cm / sec.

A találmány szerinti eljárásban a gélképzés közegeként például etil-acetátot, izooktanolt, n-butil-acetátot, n-amil-alkoholt, benzil-alkoholt, acetecetésztert, a felsorolt oldószerek keverékeit, vagy 10 térfogat% metil-izobutil-ketont tartalmazó acetecetésztert használhatunk.Gel formation media used in the process of the present invention include, for example, ethyl acetate, isooctanol, n-butyl acetate, n-amyl alcohol, benzyl alcohol, acetacetate, mixtures of the solvents listed, or acetone containing 10% by volume of methyl isobutyl ketone.

A gélgyöngy-képződés gyorsítása céljából a gélképzés közegét célszerűen 0-10 ’C-ra hűtjük. Kívánt esetben a gélképzés közegébe lassú ütemben inért gázt vezethetünk annak érdekében, hogy megakadályozzuk a gélgyöngyök egymáshoz tapadását. A képződött gcl-2HU 202 579 Β gyöngyöket szűréssel különíthetjük el, majd desztillált vízzel oldószermentesre mossuk, és kívánt esetben szárítjuk.In order to accelerate gel bead formation, the gelling medium is preferably cooled to 0-10 ° C. If desired, a slow injection of gas may be introduced into the gel formation medium to prevent the gel beads from adhering to one another. The gcl-2HU 202 579 Β formed beads can be isolated by filtration, washed with distilled water to remove solvent and dried if desired.

A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül az alábbi példákban részletesen ismertetjük.The invention is illustrated in detail by the following non-limiting Examples.

1. példaExample 1

Streptomyces lavendulae ATCC 12 950 7-8 napos ferde agar tenyészetéiül steril desztillált vízzel 5x x 107 spóra/cm3 koncentrációjú spóraszuszpenziót készítünk. 10 cm3 így kapott spóraszuszpenziót 90 cm3, előzetesen 121 ’C-on 30 percig sterilizált, majd 50 ’C-ra hűtött 4%-os agar oldathoz adunk. Ezt a keveréket perisztaltikus pumpa segítségével - steril eszközök alkalmazásával - 1000 cm3 5 ’C-ra hűtött izo-oktanolba (2-etil-hexanoIba) csepegtetjük. A keletkező gélgyöngyök egymáshoz tapadását nitrogéngáz lassú átbutorékoltatásával gátoljuk. A csepegtetés befejezése után a nitrogéngáz átáramoltatását még 4-5 percig folytatjuk, majd a gélgyöngyöket kiszűrjük, 0,02 tömeg% Tween 80-at tartalmazó steril desztillált vízzel oldószermentesre mossuk. Szabályos gömb alakú, 1-5 mm átmérőjű gélgyöngyöket kapunk.Streptomyces lavendulae ATCC 12,950 is prepared by culturing a 7-8 day slant agar with sterile distilled water at a concentration of 5 x 10 7 spores / cm 3 . 10 cm 3 of the spore suspension thus obtained was added to 90 cm 3 of a 4% agar solution, previously sterilized at 121 ° C for 30 minutes and then cooled to 50 ° C. This mixture was added dropwise to 1000 cm 3 of isoctanol (2-ethylhexanol) cooled to 5 ° C using a peristaltic pump. The resulting gel beads are prevented from adhering to each other by slowly bubbling nitrogen gas through. After completion of the dropwise addition, the nitrogen gas was bubbled through for 4 to 5 minutes, and the gel beads were filtered and washed with sterile distilled water containing 0.02% Tween 80 to remove solvent. Regular spherical beads of 1-5 mm diameter are obtained.

Megismételjük a fenti sejtrögzítési eljárást azzal a különbséggel, hogy kicsapószerként i-oktanol helyett azThe above cell fixation procedure is repeated, except that instead of i-octanol as a precipitant,

I. táblázatban felsorolt oldószereket használjuk. Az 1. példában megadottakkal azonos eredményeket kapunk.The solvents listed in Table I are used. The same results as in Example 1 were obtained.

/. táblázat/. spreadsheet

Oldószer Solvent Vízold- hatóság g/lOOg víz Vízold- authorities g / lOOg water Sűrűség g/cm3 Density g / cm 3 Visz- kozi- tás cP Carry- kozi- OTING cP Forrás pont ’C Source point 'C Ülepedési sebesség cm/sec sedimentation speed cm / sec i-oktanol i-octanol 0,1 0.1 0,834 0.834 7,0 7.0 1835 1835 0,8-1,2 0.8-1.2 benzil- -alkohol benzyl -alcohol 4,0 4.0 1,050 1,050 5(2 5 (2 205,2 205.2 0,4-0,8 0.4-0.8 n-amil- -alkohol n-amyl -alcohol 2,7 2.7 0,814 0.814 4,3 4.3 138,1 138.1 2,8-3,4 2.8-3.4 ciklo- hexanon cyclo cyclohexanone 2,4 2.4 0,948 0.948 5,8 5.8 156,7 156.7 0,8-15 0.8 to 15 n-butil- -acetát n-butyl -acetate 05 05 0,882 0.882 0,7 0.7 126,1 126.1 1,7-25 1.7 to 25 toluol toluene 0,047 0,047 0,867 0.867 0,58 0.58 180,0 180.0 2,3-2,9 2.3-2.9 acetecet- -észter acetecet- -ester 2,85 2.85 1,025 1,025 1,74 1.74 180,0 180.0 05-0,7 05-0.7 etil- -acetát ethyl- -acetate 7,76 7.76 0,900 0,900 0,45 0.45 77,0 77.0 1,8-2,4 1.8-2.4 2. példa 05% porszóját, 1,0% glükózt és 2,0% szálas agart Example 2 05% powders, 1.0% glucose and 2.0% fibrous agar

tartalmazó ferde agar táptalajon tenyésztett Streptomyces aigillaceum ATCC 12956 spóraszuszpenziójával az alábbi összetételű, 121 ’C-on 20 percig sterilizált, majd szobahőmérsékletre hűtött táptalajt oltjuk be:Inoculate with Streptomyces aigillaceum ATCC 12956 on a slanted agar medium the following composition, sterilized at 121 ° C for 20 minutes and then cooled to room temperature:

mogyoróliszt 2,0% hidrolizált kazein 0,2% glicerin 4,0% nátrium-klorid 0,3% kalcium-karbonát 0,5% (A csapvízzel feltöltött táptalaj pH-ja sterilizálás előtt 7,0).hazelnut meal 2.0% hydrolyzed casein 0.2% glycerol 4.0% sodium chloride 0.3% calcium carbonate 0.5% (pH of the broth filled with tap water before sterilization is 7.0).

A tenyészetet 48 órán át 32 ’C-on 360 fordulat/perc sebességgel rázzuk. Az így kifejlődött vegetatív tenyészetből 10 cm3-t adunk 90 cm3 45 ’C hőmérséklet 0,4%os agar oldathoz, majd a keverékből az 1. példában leírtak szerint gélgyöngyöket készítünk.The culture was shaken for 48 hours at 32 ° C and 360 rpm. 10 cm 3 of the resulting vegetative culture was added to 90 cm 3 of a 0.4% agar solution at 45 ° C and gel beads were prepared from the mixture as described in Example 1.

3. példaExample 3

Streptomyces diastatochromogenes var. RO-31 [NCAIM (Ρ) B 00366] mikroorganizmust az alábbi összetételű ferde agar táptalajon spóráztatunk:Streptomyces diastatochromogenes var. RO-31 [NCAIM (Ρ) B 00366] is sporulated on slanted agar medium with the following composition:

élesztőkivonat 0,1 % húskivonat 0,1 % tripton 0,2 %yeast extract 0.1% meat extract 0.1% tripton 0.2%

FeSO4 3 x 104% glükóz 1,0 %FeSO 4 3 x 10 4 % glucose 1.0%

Na2HPO4 0,713%Na 2 HPO 4 0.713%

KHjPCL 0,363% mosott, szálas agar 2,0 % (A csapvízzel feltöltött táptalaj pH-ja sterilizálás előtt 7,0.)KHjPCL 0.363% Washed Fiber Agar 2.0% (pH of the broth filled with tap water before sterilization is 7.0)

A kb. 7-8 napos spórás tenyészetet steril desztillált vízzel vagy fiziológiás sóoldattal lemossuk, és a spóraszuszpenzió koncentrációját 3 x 10* spóra/cm3-re állítjuk be. Az így kapott spóraszuszpenzióból az 1. példában leírt módon készítünk agar-gélgyöngyöket.The approx. The 7-8 day spore culture was washed with sterile distilled water or physiological saline and the spore suspension concentration was adjusted to 3 x 10 * spores / cm 3 . From the spore suspension thus obtained, agar gel beads were prepared as described in Example 1.

4. példaExample 4

Rhodococcus sp. NCAIM (Ρ) B 001003 kb. 4 napos ferde agar tenyészetéről steril desztillált vízzel 8 x x 10* sejt/cm3 koncentrációjú sejtszuszpenziót készítünk. A szuszpenzió 10 cm3-ét 90 cm3 45 ’C hőmérsékletű steril 4%-os agar oldathoz adjuk, majd a keverékből az 1. példában leírtak szerint gélgyöngyöket képezünk.Rhodococcus sp. NCAIM (Ρ) B 001003 kb. A culture suspension of 8 x 10 x 10 * cells / cm 3 was prepared from a 4-day slant culture with sterile distilled water. 10 cm 3 of the suspension is added to 90 cm 3 of a sterile 4% agar solution at 45 ° C and the mixture is formed into gel beads as described in Example 1.

A gélgyöngyökkel az alábbi összetételű, 121 ’C-on 25 percig sterilizált, majd szobahőmérsékletre hűtött táptalajt oltjuk be:The gel beads are inoculated with the following medium, sterilized at 121 ° C for 25 minutes and then cooled to room temperature:

koleszterin 1,0 % kristálycukor 0,5 % szójaliszt 0,7 % nyers napraforgó lecitin 0,5 %cholesterol 1.0% crystal sugar 0.5% soybean meal 0.7% raw sunflower lecithin 0.5%

Tween 60 0,2 %Tween 60 0.2%

KH2PO4 0,1 %KH 2 PO 4 0.1%

CaCO3 0,1 %CaCO 3 0.1%

NaCl 0,1 %NaCl 0.1%

MgSO4.7H2O 0,05%MgSO 4 .7H 2 O 0.05%

Struktol B-2020 0,1 % (habzásgátló, gyártja: Kőbányai Gyógyszerárugyár) (pH sterilizálás előtt: 6,0)Struktol B-2020 0.1% (antifoam, manufactured by Kőbánya Pharmaceutical Factory) (before sterilization: 6.0)

A beoltott lombikokat 30 ’C-on síkrázógépen 300 fordulat/perc sebességgel rázatjuk 3 napig. A koleszterin-oxidáz szintet Allain és munkatársai eljárása szerint méijük.The inoculated flasks are shaken on a flat shaker at 300 rpm for 3 days. Cholesterol oxidase levels were measured according to the procedure of Allain et al.

5. példaExample 5

A 3. példában leírt összetételű ferde agar táptalajon Streptomyces rubrifaciens törzset spóráztatunk. A kb. 4-5 napos spórás tenyészetet steril desztillált vízzel vagy fiziológiás sóoldáttal lemossuk, és a spóraszuszpenzió koncentrációját 5x10* spóra/cm3-re állítjuk be. Az így kapott spóraszuszpenzióval az 1. példában leírt módon agar gélgyöngyöket képezünk. A gélgyöngyökkel az alábbi összetételű, 121 ’C-on 25 percig sterilizált, majd szobahőmérsékletre hűtött táptalajt oltjuk be: élesztőkivonat 0,1% húskivonat 0,1% tripton 0,2%The strain of Streptomyces rubrifaciens was sporulated on a slant agar medium as described in Example 3. The approx. The spore culture for 4 to 5 days is washed with sterile distilled water or physiological saline and the spore suspension concentration is adjusted to 5 x 10 * spores / cm 3 . The spore suspension thus obtained forms agar gel beads as described in Example 1. The gel beads are inoculated with the following medium, sterilized at 121 ° C for 25 minutes and then cooled to room temperature: yeast extract 0.1% meat extract 0.1% tryptone 0.2%

HU 202 579 ΒHU 202 579 Β

FeSO4 3 x 104% glükóz 1,0% agar 2,0% (pH sterilizálás előtt: 7,2)FeSO 4 3 x 10 4 % glucose 1.0% agar 2.0% (pH before sterilization: 7.2)

A beoltott lombikokat 28 ’C-on 280 fordulat/perc 5 sebességgel 5-6 napig rázatjuk. A termelt sztreptomicin antibiotikum vékonyrétegkromatográfiás módszerrel kimutatható.The inoculated flasks are shaken at 28 ° C and 280 rpm for 5 to 6 days. The streptomycin antibiotic produced can be detected by thin layer chromatography.

6. példaExample 6

A 3. példában leírt összetételű ferde agar táptalajon Micromonospora inoyensis ATCC 27600 törzset spóiáztatunk.Micromonospora inoyensis ATCC 27600 was spooled on a slant agar medium as described in Example 3.

A 7-8 napos tenyészetet steril desztillált vízzel lemossuk, a spóraszuszpenzió koncentrációját 6 x 106 15 spóra/cm3-re állítjuk be, és az így kapott spóraszuszpenzióval az 1. példában leírt módon gélgyöngyöket képezünk.The 7-8 day culture is washed with sterile distilled water, the spore suspension is adjusted to a concentration of 6 x 10 6 spores / cm 3 , and the spore suspension thus obtained forms gel beads as described in Example 1.

A gélgyöngyökkel az 5. példában leírt összetételű steril folyékony táptalajt oltjuk be, és a lombikokat 20 síkrázógépen 28 ‘C-on 280 fordulat/perc sebességgel rázzuk 5-6 napig.The gel beads were inoculated with sterile liquid medium of the composition described in Example 5 and the flasks were shaken on 20 flat shakers at 28 ° C at 280 rpm for 5-6 days.

A keletkező sziszomicin antibiotikum ismert biológiai értékméréssel, Bacillus subtilis mérőorganizmus segítségével kimutatható.The resulting sisomycin antibiotic can be detected by known biological assays using the Bacillus subtilis assay.

Claims (6)

1. Eljárás fermentációban felhasználható mikroorganizmusok vagy mikroorganizmus-részek gélbe zárására, 30 amelynek során a fermentációra alkalmas mikroorganizmusokat vagy mikroorganizmus-részeket 45-50 ’C hőmérsékletű folyékony agar-oldattal összekeverjük, és a keveréket 0-15 ’C hőmérsékletű folyadékba csepegtetjük, azzal jellemezve, hogy folyadékként olyan, a mikroorganizmust nem károsító szerves oldószert vagy oldószer-elegyet használunk, amelynek vízben való oldhatósága 0,03-10 g/100 g, sűrűsége 0,6-1,2 g/cm3, 20 ’C-on meghatározott viszkozitása 0,45-10 cP, for10 ráspontja 75-250 ’C, és amelyben a cseppek ülepedési sebessége 0,01-10 cm/sec.CLAIMS 1. A method of gel sealing microorganisms or microorganisms portions useful in fermentation comprising mixing microorganisms or microorganisms suitable for fermentation with a liquid agar solution at 45-50 ° C and dropping the mixture into a liquid at 0-15 ° C. for use as a liquid organic solvent or mixture of solvents having a water solubility of 0.03 to 10 g / 100 g and a density of 0.6 to 1.2 g / cm 3 , determined at 20 ° C. has a viscosity of 0.45-10 cP, with a point of fusion of 75 to 250 ° C, and in which the droplets have a sedimentation rate of 0.01-10 cm / sec. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan szerves oldószert vagy oldószer-clegyct használunk, amelynek vízben való oldhatósága 0,ΙΙΟ g/100 g.2. A process according to claim 1, wherein the organic solvent or solvent complex has a water solubility of 0.1 g / 100 g. 3. Az 1. vagy 2. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan szerves oldószert vagy oldószerelegyet használunk, amelynek sűrűsége 0,8-1,1 g/cm3.Process according to claim 1 or 2, characterized in that the organic solvent or solvent mixture has a density of 0.8 to 1.1 g / cm 3 . 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy olyan szerves oldószert vagy oldószer-elegyet használunk, amelyben a cseppek ülepedési sebessége 0,05-10 cm/sec.4. A process according to any one of claims 1 to 3, characterized in that an organic solvent or mixture of solvents is used in which the drop rate of drops is 0.05 to 10 cm / sec. 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy szerves oldószerként etil-acetá25 tot, izo-oktanolt, ciklohexanont, n-butil-acetátot, n- amil-alkoholt, benzil-alkoholt vagy acetecet-észtert használunk.5. Process according to any one of claims 1 to 4, characterized in that the organic solvent is ethyl acetate, isooctanol, cyclohexanone, n-butyl acetate, n-amyl alcohol, benzyl alcohol or acetate acetate. 6. Az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az agartartalmú keveréket 010 ’C-os szerves oldószerbe csepegtetjük.6. A process according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the agar-containing mixture is added dropwise to an organic solvent at 0 ° C.
HU883987A 1988-07-27 1988-07-27 Process for closing in gel microorganisma or parts of microorganisma utilizable in fermentations HU202579B (en)

Priority Applications (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU883987A HU202579B (en) 1988-07-27 1988-07-27 Process for closing in gel microorganisma or parts of microorganisma utilizable in fermentations
JP1175394A JPH0276581A (en) 1988-07-27 1989-07-06 Method for including microorganism
DE3924446A DE3924446A1 (en) 1988-07-27 1989-07-24 Encasing microorganisms or parts by mixing with liq. agar soln. - and dropwise addn. to organic solvent with specified properties
FR8909979A FR2634785A1 (en) 1988-07-27 1989-07-25 METHOD OF INCLUSION IN A GEL OF MICROORGANISMS OR PARTS THEREOF, USEFUL IN FERMENTATION PROCESSES
SU894614585A SU1760985A3 (en) 1988-07-27 1989-07-26 Method for preparation of microorganism immobilized cells or theirs parts
IT8921320A IT1230999B (en) 1988-07-27 1989-07-26 METHOD FOR TRAPPING MICROORGANISMS OR THEIR PARTS, USEFUL IN FERMENTATION PROCESSES, IN A GEL

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
HU883987A HU202579B (en) 1988-07-27 1988-07-27 Process for closing in gel microorganisma or parts of microorganisma utilizable in fermentations

Publications (2)

Publication Number Publication Date
HUT50866A HUT50866A (en) 1990-03-28
HU202579B true HU202579B (en) 1991-03-28

Family

ID=10966373

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
HU883987A HU202579B (en) 1988-07-27 1988-07-27 Process for closing in gel microorganisma or parts of microorganisma utilizable in fermentations

Country Status (6)

Country Link
JP (1) JPH0276581A (en)
DE (1) DE3924446A1 (en)
FR (1) FR2634785A1 (en)
HU (1) HU202579B (en)
IT (1) IT1230999B (en)
SU (1) SU1760985A3 (en)

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4208482A (en) * 1976-04-23 1980-06-17 Anheuser-Busch, Incorporated Immobilization of glucose isomerase
US4399219A (en) * 1981-01-29 1983-08-16 Massachusetts Institute Of Technology Process for isolating microbiologically active material
NL8103168A (en) * 1981-07-01 1983-02-01 Tno METHOD FOR PERFORMING AN ENZYMATIC REACTION
SE441009B (en) * 1982-03-08 1985-09-02 Kjell Nilsson WAY TO IMMOBILIZE LIVING BIOMATERIAL IN PEARLY POLYMERS
JPS61260883A (en) * 1985-05-15 1986-11-19 Kikuchi Keiji Production of agar bead entrapping live yeast fungus and continuous production of alcohol
PT83746B (en) * 1985-11-15 1988-08-17 Gist Brocades Nv PROCESS FOR THE PREPARATION OF NEW IMMOBILIZED BIOCATALYZERS AND FOR THE PRODUCTION OF ETHANOL BY FERMENTATION

Also Published As

Publication number Publication date
DE3924446A1 (en) 1990-02-01
FR2634785A1 (en) 1990-02-02
SU1760985A3 (en) 1992-09-07
JPH0276581A (en) 1990-03-15
HUT50866A (en) 1990-03-28
IT1230999B (en) 1991-11-08
IT8921320A0 (en) 1989-07-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Veelken et al. Production of tylosin and nikkomycin by immobilized Streptomyces cells
US3912589A (en) Preparation of cephalosporin compounds
US4687742A (en) Xylose isomerase (glucose isomerase) from Streptomyces murinus cluster
SE409469B (en) PROCEDURE FOR PERFORMING AN ENZYME CATALYZED TRANSFORMATION OF A SUBSTRATE
Ogaki et al. Continuous production of oxytetracycline by immobilized growing Streptomyces rimosus cells
Bartoshevich et al. Acremonium chrysogenum differentiation and biosynthesis of cephalosporin
Goyal et al. Optimal conditions for production of dextransucrase from Leuconostoc mesenteroides NRLL B‐512F and its properties
HU202579B (en) Process for closing in gel microorganisma or parts of microorganisma utilizable in fermentations
RU2397247C1 (en) Lipase biosynthesis method
RU2729410C1 (en) Industrial method for microbiological synthesis of penicillin g acylase escherichia coli enzyme
Manolov Influence of agitation rate on growth and ribonuclease production by free and immobilized Aspergillus clavatus cells
US3116218A (en) Process for the production of penicillin-splitting enzyme preparations
Igam et al. Single-step conversion of cephalosporin-C to 7-aminocephalosporanic acid by free and immobilized cells of Pseudomonas diminuta
HU182255B (en) Process for producing mycophenolic acid derivatives
CN110819575A (en) Culture method of bacillus for producing nattokinase
Porter [1] Cultural conditions for antibiotic-producing microorganisms
FI110518B (en) Levan sucrose enzyme, process for its preparation, microorganisms producing it and compositions containing it
KR100378362B1 (en) Method for immobilization of concentrated culture broth including whole microbial cells in capsules and a capsule prepared thereby
EP0371408B1 (en) Biocatalysts and process for their preparation
CN1644012A (en) Serration and its use in preparation of chiral precurser for dielzepin
JP2525529B2 (en) Method for increasing riboflavin content in spray-dried products from riboflavin fermentation
Abu‐Shady et al. Studies on rifamycin production by Amycolatopsis mediterranei cells immobilized on glass wool
US3798127A (en) Medium for the culture of the escherichia coli strain
RU2160992C1 (en) Dry biopreparation and method of its preparing
EP0258038A2 (en) Use of cellulase preparations in the cultivation and use of cellulose-producing micro-organisms

Legal Events

Date Code Title Description
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee
HNF4 Restoration of lapsed final prot.
HMM4 Cancellation of final prot. due to non-payment of fee