HU195917B - Process for preparing medicinal premixes by using environment-polluting mycelium comprising antibiotic - Google Patents

Abstract

Prophylactic and therapeutic veterinary premixes are prepd. from environmentally polluting fermentation mycelia, having an antibiotics content. Mycelia are mixed with organic acids pref. propionic acid contg. meal or pearlite in a proportion to reach 30-65 wt.% dry matter or to attain a predetermined level of activity specific to an antibiotic. - Premixes are stable microbiologically for several months and constant activity is maintained in case of neomycin and nebramycin-complex.

Description

Találmányunk szerinti eljárás alkalmas ontíbiolikum fermentációk környezetszennyező hulladékaként képződő micéliumának állatgyógyászatban alkalmazható gyógypremixsze történő feldolgozására. Közelebbről, eljárásunk lehetővé teszi pl. oxitetraciklin, neomicin és nebramicin hatóanyagot kis mennyiségben még tartalmazó szűrt, nedves mic.éliumok gazdaságos feldolgozását és állatgyógyászati célú felhasználását.The process of the present invention is suitable for the treatment of mycelium formed as an environmental pollutant waste of ontibiotic fermentations with a veterinary drug premix. In particular, our process allows e.g. economical processing and veterinary use of filtered, wet micelles, containing small amounts of oxytetracycline, neomycin and nebramycin.

A fermentációs antibiotikum termelés hazánkban és világszerte felfutóban van. Ezt nemcsak a fermentációval előállított hatóanyag évente növekvő mennyisége, hanem a fermentált térfogatok növekvő nagysága is mutatja. Jelenleg sajnos nem állnak rendelkezésre olyan hatóanyag kinyerési technológiák, amelyek inaktív micéliumot hagynának hátra, ezért általánosan fenn áll a hatóanyagot még tartalmazó hulladékok felhasználásának és elhelyezésének problémája. Az antibiotikum-tartalmú micéliumok állati táplálékként való, a korábbi gyakorlatnak megfelelő felhasználása ma már egészségügyi rendeletekbe ütközik.The production of fermentation antibiotics is booming in Hungary and worldwide. This is illustrated not only by the increasing amount of active compound produced each year, but also by the increasing volume of fermented volumes. Unfortunately, there are currently no active drug recovery technologies that leave inactive mycelium, so there is a general problem with the use and disposal of waste still containing the active ingredient. The use of antibiotic-containing mycelia for animal nutrition, in line with previous practice, is now in violation of health regulations.

A fentiek értelmében számos kísérlet történt arra, hogy inaktiválják a micélium hatóanyagát, azonban a béta-laktám tartalmú micéliumok kivételével kevés sikert értek el. Penicillium micéliumok inaktiválására iparilag is gazdaságosan alkalmazható eljárást ír le a T/38.232 számú magyar közzétételi irat. További kísérleteket folytattunk tetraciklin és aminoglikozid tartalmú micéliumok hatóanyagmenleBÍlésére, azonban teljes hatóanyag mentesítést nem sikerült elérni.As stated above, many attempts have been made to inactivate the mycelial agent, but little success has been achieved with the exception of beta-lactam-containing mycelia. A process which is commercially applicable to the inactivation of penicillium mycelia is described in Hungarian Patent Publication No. T / 38.232. Further attempts were made to control the mycelial content of tetracycline and aminoglycoside-containing mycelium, but complete drug release was not achieved.

Ez abból is következett, hogy a tetraciklin és az aminoglikozid típusú antibiotikumok jóval stabilabbak és viszonylag egyszerű kémiai és/vagy hőhatásra nem hasadnak inaktív termékké.This was also due to the fact that tetracycline and aminoglycoside antibiotics are much more stable and do not cleave into relatively inactive products by relatively simple chemical and / or thermal effects.

Ismertek előttünk azok a törekvések, amelyek az aktív micéliumot állatgyógyászati célra kívánják felhasználhatóvá tenni. Ezek közé tartozik az a Magyarországon ismert eljárás, amely szerint az oxitetraciklin fermentációban keletkező hatóanyagot eleve oly mó45 don kez.elik, hogy az rátapadjon a micélium felületére és a szűrést kővetően így magos hatóanyagtarlolmú szűrt, nedves micéliumot kapnak. A szűrt, nedves micéliumot azután porlasztva szál!tjük és állatgyógyászati célra alkalmazzák.Efforts to make the active mycelium useful for veterinary purposes are well known to us. These include the process known in Hungary for treating the active ingredient formed in the fermentation of oxytetracycline in such a way that it adheres to the surface of the mycelium and, after filtration, produces a filtered, moist mycelium containing the active ingredient. The filtered wet mycelium is then sprayed and used for veterinary purposes.

A fent ismertetett eljárások közös jellemzője, hogy az aktív micéliumot beszáritják cs por vagy granulátum formájában kerülnek kereskedelmi forgalomba. Ismeretes az, hogy a szárítás rendkívül energiaigényes folyamat {a szűrt, nedveB micélium kb. 70% vizet tartalmaz), ami aránytalanul megdrágítja a terméket.A common feature of the above-described processes is that the dried active mycelium is commercially available in the form of powder or granules. It is known that drying is a very energy-intensive process {the filtered, wet mycelium takes approx. Contains 70% water) which makes the product disproportionately expensive.

Célul tűztük ki olyan eljárás kidolgozását, amellyel gazdaságosan és egyszerűen kiv i tele zh élőén tudjuk a környezetszennyező ás jelenleg hulladékanyagként jelentkező szűrt, nedves micéliumot állatgyógyászati célú felhasználásra alkalmassá tenni.Our aim is to develop a process for rendering the filtered, wet mycelium, which is a pollutant and is currently waste, economically and easily accessible for veterinary use.

Kitűzött célunk elérése érdekéhen kísérleteket. végeztünk egyrészről a micéliumok g imbás és bakteriális fertőzésének megakadályozására, másrészről stabilizálására.Attempts to achieve our goal. on the one hand to prevent g microbial and bacterial infection of the mycelium and on the other hand to stabilize it.

Λ micéliumok magas víztartalmuk és az esetenkénti magas növényi olaj tartalmuk következtében nehezen kezelhető, mechanikai behatásra pasztaszerűen össze!apadó anyagok, haLóanyagtarlalrnukat tekintve erősen inhomogének és keletkezésük állapotában csak rövid ideig, néhány napig tárolhatók. A néhány napig tartó stabilitást a viszonylag magas antibioLikuin tartalom magyarázza.Λ Mycelia, due to their high water content and occasionally high vegetable oil content, are difficult to handle, mechanically effective paste-like materials, which are highly inhomogeneous in their material content and can only be stored for a few days in their state of formation. The stability for several days is explained by the relatively high content of antibioLikuin.

A micéliumok bakteriális és gombás fertőződésének megakadályozására csak olyan vegyszerek jöhetnek számításba, amelyek a későbbi felhasználóst nem akadályozzák, azaz az állatokra veszélytelenek. A nedves micéliumok biológiai stabilizálása érdekében többféle anyagot, főleg szerves savakat próbáltunk ki. Azt tapasztaltuk, hogy a legjobb eredmények szerves savak, előnyösen propionsav hozzáadásával érhetők el. Λ propionsavas kezelések eredményét, az 1. táblázat mulatja. A kezelt m leéli uniókat polietilén tasakokban, levegőtől elzárva szobahőmérsékleten tároltuk.To prevent bacterial and fungal infection of mycelium, only chemicals that do not hinder the downstream user, i.e., harmless to animals, can be used. In order to biologically stabilize wet mycelia, a variety of materials, especially organic acids, have been tested. It has been found that the best results are obtained by the addition of organic acids, preferably propionic acid. Λ the results of propionic acid treatments are given in Table 1. The treated m unions were stored in polyethylene sachets, sealed at room temperature.

1. táblázatTable 1

Micélium fajta mycelium species kezelés * treatment * 7 7 a zárolás ideje (nap) lock time (days) 14 14 21 21 28 28 OTC OTC 0.1 t% propionsav 0.1% propionic acid stabil stabile stabil stabile stabil stabile enyhén fertőzött slightly infected micélium mycelium 0.3 t% propionsav 0.3% propionic acid stabil stabile stabil stabile stabil stabile stabil stabile Neomicin neomycin 0.1 t% propionsav 0.1% propionic acid stabil stabile stabil stabile enyhén fertőzött slightly infected romlott depraved micélium mycelium 0.3 1% propionsav 0.3 1% Propionic Acid stabil stabile slabí 1 slabí 1 stabil stabile stabil stabile nebramicin nebramycin 0.1 t% propionsav 0.1% propionic acid stabil stabile stabil stabile stabil stabile stabil stabile micélium mycelium 0.3 t% propionsav 0.3% propionic acid stabil stabile stabil stabile stabil stabile stabil stabile

» a szűrt, nedves micélium tömegére számítva»By weight of filtered, wet mycelium

Mini a táblázatból leolvasható, a szűri, nedves in ic.éliu ni tömegére számítottan 0,1-0,3%-os propionsav koncentráció megbízhatóan stabilizálja bármelyik micéliúmmasszát.Mini reads from the table, with a concentration of 0.1-0.3% propionic acid, based on the weight of the filtered wet in ice, reliably stabilizes any mycelial mass.

A gyógypremixekkel kapcsolatos további fontos követelmény az állandó halöanyagtartalom, azaz folyamatosan azonos minőségű készítmény előállítása. Ismert az a tény, hogy a fermentációk hatóanyagtiterei nem minden esetben azonosak.Another important requirement for medicated premixes is the production of a constant fish content, that is, a consistently high quality formulation. It is known that the active ingredient titers of fermentations are not always the same.

Ennek továbbá az alkalmaz,ott szűrési eljárások hiányosságainak következtében a szűrt, nedves micélium hatóanyagtartnlma sem azonos az egymást kővető sarzsok esetében.In addition, due to the shortcomings of the filtration process, the content of the filtered wet mycelium is not the same for successive batches.

A hatóanyagtartalom különbségek kiküszöbölésére eljárásokat dolgoztunk ki. Egyik eljárásunk szerint a micéliumot propionsav-kénsav eleggyel kezelt takarmányliszttel keverjük össze. A keverés hatására a micélium állaga kedvezően változik, és makroszkopikusan homogén anyagot kapunk. Az, apró mirelium golyócskákat takarmányliszt veszi körül, emiatt a keverék száraz,anyagtartalma a valódi értéknél magasabbnak tűnik. Ebből a keverékből biológiai módszerrrel (F. Kavanagh (1975) Methods in Enzymology vo). 43,, p.Methods have been developed to eliminate differences in drug content. In one method, the mycelium is mixed with feed meal treated with a mixture of propionic acid and sulfuric acid. Upon mixing, mycelium changes favorably and a macroscopically homogeneous material is obtained. The tiny mirelium spheres are surrounded by fodder flour, which makes the mixture dry and its content seems to be higher than its true value. From this mixture by biological method (F. Kavanagh (1975) Methods in Enzymology vo). 43 ,, p.

55-69. Ed.: J. M. Mash, Acad. Tress, New York) határoztuk meg az antibiotikns aktivitást. Az antibiotikum aktivitás mértékét n különböző micéliumok esetén oxiletracjklin10 -hidroklorid, neomicin-szulfál, és apramicin-szulfát. meg/g értékben fejeztük ki. A biológiai aktivitás értékek birtokában a keverékhez annyi további takarmánylisztet kevertünk, hogy az előre meghatározott, hotó15 anyagszint beálljon. Az így nyert kukoricaliszt. tartalmi) gyógypremix polietilén zsákban, levegőtől elzárva, szobahőmérsékleten több hónapon keresztül biológiailag stabil marad, nem fertőződik.55-69. Ed .: J.M. Mash, Acad. Tress, New York) for antibiotic activity. The degree of antibiotic activity in n different mycelia is oxyletracycline10 hydrochloride, neomycin sulfal, and apramycin sulfate. expressed in g / g. With the biological activity values, additional feed meal was added to the mixture to achieve a predetermined level of heat 15. The maize flour thus obtained. contents) The drug premix in a polyethylene bag, when kept out of the air, remains biologically stable for several months at room temperature and does not become contaminated.

A stabilitási vizsgálatok eredményeit a takarmánylisztes keverékben a 2. táblázat mutalja.The results of the stability studies in the feed meal mix are shown in Table 2.

2. táblázatTable 2

micclium micclium tárolás ideje (hónap) storage time (month) 3. Third fajta species kezelés treatment 1. First 2. Second kukoricaliszt cornflour OTC OTC +0.5% prepioneav + 0.5% prepioneav stabil stabile stabil stabile stabil stabile micélium mycelium +0.5% propionsav ”) + 1.0% kénsav (48%)j + 0.5% propionic acid ") + 1.0% sulfuric acid (48%) j stabil stabile stabil stabile stabil stabile szójaliszt soybean meal neomicin neomycin +0,5% propionsav + 0.5% propionic acid stabil stabile stabil stabile stabil stabile micélium mycelium +0.5% propionsav Ό + 1.0% kénsav (48%)J + 0.5% propionic acid Ό + 1.0% sulfuric acid (48%) J stabil stabile stabil stabile stabil stabile kukoricaliszt cornflour kezdődő starting nebramicin nebramycin +0.5% propionsav + 0.5% propionic acid romlás ruin romlott depraved romlott depraved micélium mycelium +0.5% propionsav “) + 1.0% kénsav (48%)j + 0.5% propionic acid ") + 1.0% sulfuric acid (48%) j stabil stabile stabil stabile stabil stabile

A micélium és a savakkal kezelt takarmányliszt összemérését az alábbiak szerint végeztük:The mycelium and the acid-treated feed meal were weighed as follows:

tömegrész takarmánylisztben elkevertünk 10% propionsavat és 2,0 t% kénsavat (48%-os). Az ily módon előállított savas takarmánylisztet 1 tőmegrész szűrt, nedves micéliummal kevertük össze.10% propionic acid and 2.0% sulfuric acid (48%) were mixed in a part of the feed meal. The acid fodder meal thus obtained was mixed with 1 part by weight of filtered, wet mycelium.

Mint az a táblázatból leolvasható, a kénsavas kezelés a nebramicin komplexet tartalmazó keverék esetén a pH savasra állítása révén teszi lehetővé a propionsav hatásának kifejeződését.As can be seen from the table, the sulfuric acid treatment of the mixture containing the nebramycin complex allows the effect of propionic acid to be expressed by adjusting the pH to acid.

A stabilitás vizsgálatot olyan mintákon íb elvégeztük, ahol takarmányliszt helyett propionsavat tartalmazó perlitet kevertünk a micéliumhoz. Penészedést egyik esetben sem tapasztaltunk. A perlit jó nedvszívó hatása következtében kis mennyiségben is kedvezően befolyásolja a micélium állagát, ezáltal a gyógypremix kezelhetőségét.The stability test was performed on samples in which perlite containing propionic acid was mixed with mycelium instead of feed meal. In no case did mold occur. Due to its good absorbency, perlite also has a small effect on the consistency of the mycelium and thus on the manageability of the drug premix.

A másik eljárás szerint a szűrt, nedves micéliumot a fermentáció titerétől függő mennyiségű vízben suszpendóljuk fel, hogy az ujraszűróskor keletkező micélium hatóanyagtartalma az előírt tartományon belül le50 gyen. Ebben az esetben a propionsavat vagy más alkalmazott szerves savat az újraszűréskor porlasztjuk a micéliumra. Az ily módon nyert tartósított micélium kénsavas kukoricaliszttel vagy perlittel keverhető, de adott esetben közvetlenül önmagában is csomagolható.Alternatively, the filtered wet mycelium is suspended in a quantity of water depending on the fermentation titer to maintain the active substance content of the mycelium produced during the re-filtration within the prescribed range. In this case, propionic acid or other organic acid used is sprayed onto the mycelium during re-filtration. The preserved mycelium thus obtained may be mixed with sulfuric acid maize flour or perlite but may be packaged directly on its own.

Ezen eljárásunk alkalmazása esetén a második szűrésnél keletkező Rzűriet sok esetben olyan mennyiségű hatóanyagot tar60 lalmaz, amelynek kinyerése a feldolgozási folyamat hatékonyságát növeli. Ilyen esetekben a reszuszpendálást az újra szűrést gyakran célszerű a főmüveletektől eltérő körülmények között végezni (pl. savazás, melegítés).In this process, the filtrate formed during the second filtration often contains an amount of the active ingredient, the recovery of which increases the efficiency of the processing process. In such cases, resuspension is often performed in conditions other than the main operation (e.g. acidification, heating).

Vizsgáltuk az általunk kidolgozott eljárásokkal előállított gyógypremixek antibiotikum tartalmának változását a tárolási idő alatt (vizsgálati módszer: mint fenn). Azt tapasztaltuk, hogy a neomicin és a nebramicin-komplcx hatóanyagot tartalmazó gyógypremixek esetén az antibiotikum aktivilás két hónap elteltével sem csökken. Λζ, oxilelracikHnt tartalmazó gyógypremix esetén a hatóanyag csekély mértékű bomlása, az aktivitás csökkenése volt tapasztalható. Az eredményeket a 3. táblázat mutatja.Changes in the antibiotic content of the medicated premixes prepared by the methods developed by us were investigated during the storage period (test method as above). It has been found that in the case of drug premixes containing the active ingredient neomycin and nebramycin complex, the antibiotic activity is not reduced after two months. Λζ In the case of a drug premix containing oxyelracycline, a slight degradation of the active ingredient and a decrease in activity were observed. The results are shown in Table 3.

3. táblázatTable 3

A gyógypremix hatóanyaga It contains the active ingredient of the medicated premix 0 nap hatóanyagtartalom 0 days drug content tárolási idő 14 nap mg/g storage time 14 days mg / g 30 nap 30 days 60 nap 60 days neomicin neomycin 500 500 510 510 500 500 480 480 nebramicin nebramycin 1400 1400 1390 1390 1380 1380 1350 1350 OTC OTC 3500 3500 3000 3000 2500 2500 2100 2100

PéldákExamples

1. példa kg szűrt, nedves nebramicin-komplex tartalmú micéliumhoz 0,5 kg 1,5% propionsavat és 1% kénsavat tartalmazó kukoricalisztet keverünk. Homogenizálás után a keverék hatóanyagtartalmát biológiai értékmérési módszerrel meghatároztuk, ez 1600 meg/g-nek adódott. 0,6 kg takarmány kukoricaliszt hozzákeverésével a hatóanyagtartalomExample 1 To a kg of filtered, wet nebramycin complex mycelium was mixed 0.5 kg of corn flour containing 1.5% propionic acid and 1% sulfuric acid. After homogenization, the active ingredient content of the mixture was determined by a bioassay method, which was 1600 meg / g. 0.6 kg of compound feedingstuff containing maize flour

1000 meg/g. A készítmény szárazanyagtartalma 57%. Polietilén zsákban leforrasztva 2 hónapi tárolás során a készítmény mind biológiailag, mind hatóanyagtartalmát tekintve stabil marad.1000 meg / g. The dry matter content of the preparation is 57%. When sealed in a polyethylene bag for 2 months, the formulation remains stable both biologically and in terms of active ingredient content.

2. példa l kg szűrt, nedves neomicin tartalmú micéliumhoz 0,2 kg 3% propionsav tartalmú perlitel keverünk. Homogenizálás után hatóanyagtartalmát biológiai érlékmérési módszerrel meghatároztuk, ez 1250 meg/g-nek adódott. 0,25 kg 1% kénsav tartalmú kukoricaliszt hozzákeverésével a hatóanyagtartalom 1000 meg/g. A készítmény szárazanyagturtalmn 46%. Polietilén zsákban leforrasztva 2 hónapi tárolás során a készítmény mind biológiailag, mind hatóanyagtartalmát tekintve stabil maradt.Example 2 1 kg of filtered, wet neomycin-containing mycelium was mixed with 0.2 kg of 3% propionic acid perlite. After homogenization, the active ingredient content was determined by biological maturity assay at 1250 meg / g. The active ingredient content is 1000 meg / g by adding 0.25 kg of corn flour containing 1% sulfuric acid. The product has a dry matter content of 46%. When sealed in a polyethylene bag, the formulation remained stable both biologically and in terms of active ingredient content over 2 months.

3. példa ml, tobrnmicin gyártásból származó 6000 mcg/ml koncentrációjú kanamicin B-t tartalmazó hulladék eluátumhoz 1 ml propionsavat és 3 ml 5N kénsavat adunk, majd hozzákeverünk 15 g perlitel és 31 g kukorica25 lisztet. Az így elkészített keverék 100 g-ját összekeverjük 100 g nebratnicin niicóiiuminal.Example 3 To a waste eluate containing 6000 mcg / ml kanamycin B from the manufacture of tobrnmycin was added 1 ml of propionic acid and 3 ml of 5N sulfuric acid, followed by the addition of 15 g of perlite and 31 g of corn flour. 100 g of the mixture thus prepared are mixed with 100 g of nebratnicin nicolium.

Az így kapott előkeverék hatóanyagtartalma 2400 mc.g/g (npramicin-szulfátban kifejezve).The resulting premix has an active ingredient content of 2400 mcg / g (expressed as npramycin sulfate).

Az előkeverékbez további 40 g kukoricalisz30 let keverve homogenizálunk, majd a terméket csomagoljuk. Szárazanyagtartalom 44%, hatóanyagtartalom 2050 meg/g. Polietilén zsákban leforrasztva 2 hónapi tárolás során a készítmény mind biológiailag, mind hatóanyag tarta’mát tekintve stabil marad.An additional 40 g of corn flour is homogenized in the premix and the product is packaged. Dry matter content 44%, active substance content 2050 meg / g. When sealed in a polyethylene bag for 2 months, the formulation remains stable both biologically and in terms of active ingredient content.

Claims (5)

1. Eljárás antibiotikum tartalmú micéliumok felhasználásával gyógypremixek előállítására, azzal jellemezve, hogy az oxitetraciklin, neomicin vagy nebramicin fermentációkból származó szűrt nedves micéliumot, valamelyA process for the preparation of medicated premixes using antibiotic-containing mycelia, characterized in that the filtered wet mycelium from the fermentations of oxytetracycline, neomycin or nebramycin 45 szerves és/vagy szervetlen savval előkezelt 15-55 t% mennyiségű takarmányliszttel, célszerűen kukoricaliszttel és adott esetben perlittel keverjük 30-65 t% szárazanyagtartalom és kívánt antibiotikum koncentráció elé5θ réséig.It is mixed with 15-55% by weight of feed flour pre-treated with 45 organic and / or inorganic acids, preferably maize flour and optionally perlite, up to a concentration of 30-65% dry matter and desired antibiotic concentration. 2. Az 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a hatóanyagként neomicint tartalmazó gyógypremixben a hatóanyag koncentrációját 200-1500 meg/g, előnyösen2. The process according to claim 1, wherein the concentration of the active ingredient in the pharmaceutical premix containing neomycin is 200-1500 µg / g, preferably 55 400- 1200 meg/g-re állítjuk be.55 to 1200 meg / g. 3. Λζ 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a hatóanyagként nebramicint tartalmazó gyógypremixben a hatóanyag koncentrációját 800-2500 meg/g, előnyösen θθ 1900-2300 meg/g-re állítjuk be.3. The process according to claim 1, wherein the concentration of the active ingredient in the pharmaceutical premix containing nebramycin is 800-2500 µg / g, preferably θθ 1900-2300 µg. 4. Λζ 1. igénypont szerinti eljárás azzal jellemezve, hogy a hatóanyagként oxitetraeiklinl tartalmazó gyógypremixben π halóanyag koncentrációját 1500-4500 mcg/g, előnyösen 2000-3500 meg/g-re állítjuk be.4. The process according to claim 1, wherein the concentration of π halogenating agent in the medicament premix containing oxytetraeiklinl is 1500 to 4500 mcg / g, preferably 2000 to 3500 mcg. 5. Λζ. 1, igénypont, szerinti eljárás azzal jellemez.ve, hogy szerves és/vagy szervetlen savként propionsavat és/vagy kénsaval használunk.5. Λζ. The process according to claim 1, wherein the organic and / or inorganic acid is propionic acid and / or sulfur.