HU183266B - Process for the extraction of non-filtered fermentation liquors produced by strains of claviceps purpurea - Google Patents
Process for the extraction of non-filtered fermentation liquors produced by strains of claviceps purpurea Download PDFInfo
- Publication number
- HU183266B HU183266B HU802986A HU298680A HU183266B HU 183266 B HU183266 B HU 183266B HU 802986 A HU802986 A HU 802986A HU 298680 A HU298680 A HU 298680A HU 183266 B HU183266 B HU 183266B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- extraction
- alkaloids
- fermentation broth
- extracted
- fermentation
- Prior art date
Links
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 title claims abstract description 56
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 title claims abstract description 56
- 238000000605 extraction Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 241000221751 Claviceps purpurea Species 0.000 title claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 20
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 claims abstract description 41
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 16
- 150000003797 alkaloid derivatives Chemical class 0.000 claims abstract description 13
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 239000003960 organic solvent Substances 0.000 claims abstract description 6
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 235000010633 broth Nutrition 0.000 claims description 37
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 3
- 150000008280 chlorinated hydrocarbons Chemical class 0.000 claims description 2
- 240000009226 Corylus americana Species 0.000 claims 1
- 235000001543 Corylus americana Nutrition 0.000 claims 1
- 235000007466 Corylus avellana Nutrition 0.000 claims 1
- 125000003262 carboxylic acid ester group Chemical class [H]C([H])([*:2])OC(=O)C([H])([H])[*:1] 0.000 claims 1
- RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N dihydroxyacetone Chemical compound OCC(=O)CO RXKJFZQQPQGTFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 239000000284 extract Substances 0.000 abstract description 14
- XLMJRFCCCWFQRE-SJRQCXNHSA-N ecboline Chemical class C([C@H]1[C@]2(O)O3)CCN1C(=O)CN2C(=O)[C@]3(C(C)C)NC(=O)[C@@H](CN(C)[C@@H]1C2)C=C1C1=C3C2=CNC3=CC=C1 XLMJRFCCCWFQRE-SJRQCXNHSA-N 0.000 abstract 1
- 229960003133 ergot alkaloid Drugs 0.000 abstract 1
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 47
- 235000019439 ethyl acetate Nutrition 0.000 description 16
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- WVVSZNPYNCNODU-CJBNDPTMSA-N Ergometrine Natural products C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@@H](C=2)C(=O)N[C@@H](CO)C)C2)=C3C2=CNC3=C1 WVVSZNPYNCNODU-CJBNDPTMSA-N 0.000 description 10
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 10
- WVVSZNPYNCNODU-XTQGRXLLSA-N Lysergic acid propanolamide Chemical compound C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@@H](C=2)C(=O)N[C@H](CO)C)C2)=C3C2=CNC3=C1 WVVSZNPYNCNODU-XTQGRXLLSA-N 0.000 description 9
- 229960001405 ergometrine Drugs 0.000 description 9
- 235000011389 fruit/vegetable juice Nutrition 0.000 description 8
- YDOTUXAWKBPQJW-UHFFFAOYSA-N ergocryptine Chemical compound C1=CC(C=2C(N(C)CC(C=2)C(=O)NC2(C(=O)N3C(C(N4CCCC4C3(O)O2)=O)CC(C)C)C(C)C)C2)=C3C2=CNC3=C1 YDOTUXAWKBPQJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 7
- NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Chemical compound CC(C)CC(C)=O NTIZESTWPVYFNL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N Methyl isobutyl ketone Natural products CCC(C)C(C)=O UIHCLUNTQKBZGK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940043265 methyl isobutyl ketone Drugs 0.000 description 6
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 5
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 5
- 229930015720 peptide alkaloid Natural products 0.000 description 5
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 5
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 4
- 239000002024 ethyl acetate extract Substances 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 4
- 239000003053 toxin Substances 0.000 description 4
- 231100000765 toxin Toxicity 0.000 description 4
- UJYGDMFEEDNVBF-UHFFFAOYSA-N Ergocorninine Natural products C1=CC(C=2C(N(C)CC(C=2)C(=O)NC2(C(=O)N3C(C(N4CCCC4C3(O)O2)=O)C(C)C)C(C)C)C2)=C3C2=CNC3=C1 UJYGDMFEEDNVBF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 3
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 3
- XQUUDUKVJKNJNP-OGGGUQDZSA-N ergocornine Chemical compound C([C@H]1N(C)C2)C([C]34)=CN=C4C=CC=C3C1=C[C@H]2C(=O)N[C@@]1(C(C)C)C(=O)N2[C@@H](C(C)C)C(=O)N3CCC[C@H]3[C@]2(O)O1 XQUUDUKVJKNJNP-OGGGUQDZSA-N 0.000 description 3
- -1 ergometrine Natural products 0.000 description 3
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 3
- 239000000047 product Substances 0.000 description 3
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 3
- YREISLCRUMOYAY-BKQYHRSVSA-N (6ar)-n-(1-hydroxypropan-2-yl)-7-methyl-6,6a,8,9-tetrahydro-4h-indolo[4,3-fg]quinoline-9-carboxamide;(z)-but-2-enedioic acid Chemical compound OC(=O)\C=C/C(O)=O.C1=CC(C=2[C@H](N(C)CC(C=2)C(=O)NC(CO)C)C2)=C3C2=CNC3=C1 YREISLCRUMOYAY-BKQYHRSVSA-N 0.000 description 2
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M Acetate Chemical compound CC([O-])=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L Magnesium chloride Chemical compound [Mg+2].[Cl-].[Cl-] TWRXJAOTZQYOKJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229950001817 alpha-ergocryptine Drugs 0.000 description 2
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- WVVSZNPYNCNODU-PLQHRBFRSA-N (6ar,9s)-n-[(2s)-1-hydroxypropan-2-yl]-7-methyl-6,6a,8,9-tetrahydro-4h-indolo[4,3-fg]quinoline-9-carboxamide Chemical compound C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@H](C=2)C(=O)N[C@H](CO)C)C2)=C3C2=CNC3=C1 WVVSZNPYNCNODU-PLQHRBFRSA-N 0.000 description 1
- SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 1,1-Dichloroethane Chemical compound CC(Cl)Cl SCYULBFZEHDVBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ILSYTMBVJDPAKS-UHFFFAOYSA-N 2,3-dihydroxybutanedioic acid;propan-2-one Chemical compound CC(C)=O.OC(=O)C(O)C(O)C(O)=O ILSYTMBVJDPAKS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 235000000604 Chrysanthemum parthenium Nutrition 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241000207925 Leonurus Species 0.000 description 1
- 235000000802 Leonurus cardiaca ssp. villosus Nutrition 0.000 description 1
- 241001503485 Mammuthus Species 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N Potassium Chemical compound [K] ZLMJMSJWJFRBEC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000007933 aliphatic carboxylic acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000001931 aliphatic group Chemical group 0.000 description 1
- YDOTUXAWKBPQJW-NSLWYYNWSA-N alpha-ergocryptine Chemical compound C1=CC(C=2[C@H](N(C)C[C@@H](C=2)C(=O)N[C@]2(C(=O)N3[C@H](C(N4CCC[C@H]4[C@]3(O)O2)=O)CC(C)C)C(C)C)C2)=C3C2=CNC3=C1 YDOTUXAWKBPQJW-NSLWYYNWSA-N 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M asparaginate Chemical compound [O-]C(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- JUCVMCNRABNRJD-UHFFFAOYSA-N azane;ethyl acetate Chemical compound N.CCOC(C)=O JUCVMCNRABNRJD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 1
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 238000003306 harvesting Methods 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 229910001629 magnesium chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002689 maleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000000693 micelle Substances 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 239000012074 organic phase Substances 0.000 description 1
- 238000005191 phase separation Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M potassium chloride Inorganic materials [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000005185 salting out Methods 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M sodium chloride Inorganic materials [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D457/00—Heterocyclic compounds containing indolo [4, 3-f, g] quinoline ring systems, e.g. derivatives of ergoline, of the formula:, e.g. lysergic acid
- C07D457/04—Heterocyclic compounds containing indolo [4, 3-f, g] quinoline ring systems, e.g. derivatives of ergoline, of the formula:, e.g. lysergic acid with carbon atoms having three bonds to hetero atoms with at the most one bond to halogen, e.g. ester or nitrile radicals, directly attached in position 8
- C07D457/06—Lysergic acid amides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00
- C07D519/02—Ergot alkaloids of the cyclic peptide type
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Nitrogen Condensed Heterocyclic Rings (AREA)
Abstract
Description
A találmány tárgya új eljárás Claviceps purpurea törzsek szaprofita körülmények között való alkalmazásakor keletkező szüretien fermentlevek kivonaíolására. A szaprolila körülmények között termelő Claviceps purpurea törzsek elsősorban peptid-alkaloidokat, vagy más néven ergotoxin típusú alkaloidokat, ezek közül is főként ergokornint és epimerjét, az ergokominint, valamint a- és /3-ergokriptint és ezek epimerjeit, az a- és /3-ergokriptinint, továbbá adott esetben nem peptid típusú alkaloidokat, így ergometrint cs epimerjét, az ergometrinint állítanak elő. Az előállított alkaloidok közül az ergometrin és epimerje vizoldható,The present invention relates to a novel process for the extraction of non-harvesting fermentation broths produced by the use of Claviceps purpurea strains under saprophytic conditions. The strains of Claviceps purpurea producing under saprolilic conditions are predominantly peptide alkaloids, also known as ergotoxin-type alkaloids, including, in particular, ergocornine and its epimer, ergocominine, and? And? Ergocriptine and their epimers,? ergocriptinine, and optionally non-peptide alkaloids such as ergometrine, the epimer of ergometrinin, are produced. Of the alkaloids produced, ergometrine and its epimer are water soluble,
Vízoldékony alkaloidok előállítására vonatkozik a 164 658 számú magyar szabadalmi leírás, melyeket a szűrt fermentléből lúgos pH-értéken, extrakciós úton nyernek ki. A kiszűrt micélium feldolgozását ez az eljárás nem oldja meg.The preparation of water-soluble alkaloids is described in Hungarian Patent No. 164,658, which is obtained from the filtered fermentation broth by alkaline pH extraction. Processing of the screened mycelium is not solved by this procedure.
Főként ergotoxin típusú alkaloidok előállítására vonatkozik az 1 !58 380 számú brit szabadalmi leírás, mely szerint a fermentlevet szűrik, és a szűrletet, valamint a miccliumot külön-külön extrahálják. Az ergotoxin típusú alkaloidokat a micéliumból 2 %-os vizes borkősav és aceton elegyével kivonatolják, a kivonatot besűrítik, majd lúgos pH-értéken kloroformmal oldják ki az ergotoxin típusú alkaloidokat, melyeket ezután kromatografálással tisztítanak. A szűrt fermentléből kloroformmal további ergotoxin típusú alkaloidokat nyernek ki.The preparation of ergot toxin-type alkaloids is described in particular in British Patent No. 1,588,380, according to which the fermentation broth is filtered and the filtrate and the micelles are separately extracted. Ergotoxin-type alkaloids are extracted from the mycelium with a 2% aqueous tartaric acid-acetone mixture, the extract is concentrated and the ergot-toxin-type alkaloids are dissolved in chloroform at an alkaline pH, which is then purified by chromatography. Further ergot toxin-type alkaloids are recovered from the filtered fermentation broth with chloroform.
Ugyancsak szűrt fermentlé feldolgozására vonatkozik a 171 659 számú magyar szabadalmi leírás, mely szerint az ergotoxin típusú alkaloidokat a szűréssel elkülönített micéliumból lúgos pH-értékén ammóniás etilacetáttal oldják ki.The processing of filtered fermentation juice is also disclosed in Hungarian Patent No. 171,659, according to which alkaloids of the ergot toxin type are dissolved from ammonia ethyl acetate at an alkaline pH of the separated myel.
Minthogy a nagy mennyiségű fermentlé szűrése elég komoly szűrőkapacitást igényel, és a fermentlé szűrhetősége nagymértékben befolyásolta az egyes alkaloidok kinyerhetőségét, az újabb eljárások kidolgozásánál a szűrés elkerülésére törekedtek.Since filtration of a large amount of fermentation juice requires quite a large filtration capacity and the filterability of the fermentation juice greatly influenced the recoverability of the individual alkaloids, efforts were made to avoid filtration in the development of new methods.
A szűrés nélküli eljárásoknál azonban a vízoldékony és az ergotoxin típusú alkaloidok együtt jelentek meg az extraktumban, illetve mindkét alkaloid típusból marad a micéliumban is, ezért a két alkaloid típus szétválasztásához újabb fáziscserékre van szükség.However, in unfiltered processes, water-soluble and ergotoxin-type alkaloids appeared together in the extract, or remain in both mycelia of both types of alkaloids, and further phase changes are required to separate the two alkaloid types.
Ilyen jellegű, szüretien fermentlé feldolgozási módszeren alapul a 164 116 számú magyar szabadalmi leírásban ismertetett eljárás, mely szerint a szüretien fermentlé pH-értékét 7-re állítják be, majd ammóniumszulfáttal telítik, és acetonnal extrahálják. Az extraktum pH-értékét 3,5-re állítják be, részlegesen bepárolják, majd a maradékból kloroformos kivonatolással különítik el az ergotoxin típusú alkaloidokat, melyeket kromatografálással tisztítanak.Such a method for processing non-fermented fermentation juice is based on the process described in Hungarian Patent No. 164,116, whereby the pH of the non-fermented fermentation juice is adjusted to 7 and then saturated with ammonium sulfate and extracted with acetone. The pH of the extract is adjusted to 3.5, partially evaporated and then extracted from the residue by chloroform extraction to give the ergot toxin-type alkaloids which are purified by chromatography.
A 180 287 lajstromszámú magyar szabadalmi leírás is részben olyan módszert ismertet, mely szüretien fermentlé feldolgozásán alapul. A szüretien fermentlé pH-értékétHungarian Patent Application No. 180 287 also describes in part a method based on the processing of non-fermented juice. PH of the non-harvested fermentation broth
9—I()-rc állítják, majd metil-izobutilketonnal extrahálják a peptidalkaloidokat, melyeket ezután savas vízbe, majd ismét kloroformba oldanak át.9-I () - rc and then extracted with methyl isobutyl ketone, the peptide alkaloids are then dissolved in acidic water and then again in chloroform.
Kísérleteink során azt találtuk, hogy a pepíidalkaloidók kinyerésére alkalmazott három lépés egyetlen extrakciós lépésre összevonható, ha a szüretien fermentlevet savanyú pH-tartományban, pH 4,0-5,5 között extraháljuk.In our experiments, it has been found that the three steps used to obtain the peptide alkaloids can be combined into a single extraction step when the non-fermented broth is extracted in an acidic pH range of 4.0 to 5.5.
A peptidalkaloidok extrakciója ebben a jellemző pHtartományban még megfelelően szelektív, azaz a korábbihoz képest (pH 3,5, borkősavas közeg) emelt pH ellenére, a vízoldékony alkaloidok a vizes fázisban maradnak.Extraction of peptide alkaloids at this characteristic pH range is still sufficiently selective, i.e., despite the higher pH compared to the former (pH 3.5, tartaric acid medium), the water-soluble alkaloids remain in the aqueous phase.
Ugyanakkor meglepő módon a választott pH 4,0-5,5 közötti tartomány esetében a peptidalkaloid extrakció hatásfoka kedvezőbb, mint lúgos pH-η végzett extrakcióknál.However, surprisingly, for the selected pH range of 4.0-5.5, the efficiency of peptidalkaloid extraction is better than that of alkaline pH η.
Ennek magyarázatául részletes vizsgálataink során azt találtuk, hogy amennyiben a fermentlevet extrakció előtt vagy extrakció közben lúgosítjuk, úgy abból nagy molekulasúlyú szerves anyagok csapódnak ki, melyek az alkaloidok jelentős részét adszorbeálni képesek. Amennyiben a lúgos tartományban végzett extrakcióná! kisózást is alkalmaznak, ezen csapadékok képződése tovább erősödik, és az elválaszthatóság és nyeredék egyaránt romlik.In order to explain this, it has been found in our detailed studies that if the fermentation broth is made alkaline before or during extraction, high molecular weight organic matter is precipitated from it, which is capable of adsorbing a large proportion of the alkaloids. If you were doing extraction in the alkaline range! salting out, the formation of these precipitates is further enhanced, and both separability and yield are deteriorated.
Eljárásunk lényegének tekintjük tehát, hogy az extrakciót pH-emelés nem előzheti meg, a fermentáció vitelében kell biztosítani, hogy leállításakor a fermentlé pH-ja a kívánt 4,0-5,5 tartományba essék.Thus, it is considered essential that the extraction should not be preceded by an increase in pH, and that the fermentation broth should be brought to a desired pH of 4.0-5.5 when stopped.
További lényeges megfigyelés, hogy micéliumot tartalmazó fermentlé extrakciója közben két folyamat együttes lefutása zajlik le. Az extrakció során egyrészt meg kell hogy történjék a sejíek alkaloid-tartalmának kivonatolása, másrészt meg kell hogy történjék a vizes közegből oldószeres közegbe való alkaloid-átvitel. Emiatt az extrakció során nem elegendő az alkaloidok megoszlásából és az extraháló berendezés jellegéből következő tartózkodási idő beállítása, hanem többletidőre van szükség ahhoz, hogy a sejtek kivonatolását is teljessé tegyük. Meglepő, és korábban egyetlen esetben sem felismert jellemző tehát, hogy az extrakció időszükségletét a sejtkivonatolás hatásfoka szabja meg. így az extrakció során a sejtkívonatoláshoz szükséges idő biztosítása az, amelyre feltétlenül ügyelni kell.Another important observation is that the extraction of mycelium containing mycelium is accompanied by two processes. During the extraction, both the alkaloid content of the cells must be extracted and the alkaloid transfer from the aqueous medium to the solvent medium must take place. Therefore, during the extraction, it is not sufficient to adjust the residence time due to the distribution of alkaloids and the nature of the extraction apparatus, but additional time is required to complete cell extraction. It is therefore surprising, and not previously recognized, that the time required for extraction is determined by the efficiency of cell extraction. Thus, the extraction time required for cell extraction during extraction is something that must be carefully observed.
Az extrakció bármely műveleti megoldásban kivitelezhető. Szakaszos extrakciót alkalmazva, az oldószeres kikeverést 2-3 ismétlésben végezzük. Extrahálhatjuk továbbá a szüretien fermentlevet például RDC extraktorban, vagy ellenáramú forgódobos (például Podbielniak) extraktoron.The extraction can be carried out in any operational solution. Using batch extraction, the solvent mixing is carried out in 2-3 replicates. Further, the non-harvested fermentation broth may be extracted, for example, in an RDC extractor or a countercurrent rotary drum (e.g., Podbielniak) extractor.
A találmány szerinti pH 4,0-5,5 tartomány betartása a műveletek elvégzésénél azt a műszaki előnyt hozza, hogy elkerülve a csapadékképződést, a fázisok szétválasztása lényegesen egyszerűbb feladattá válik.Compliance with the pH range of 4.0-5.5 according to the present invention provides the technical advantage that phase separation becomes a much simpler task while avoiding precipitation.
A találmány tárgya tehát eljárás Claviceps purpurea törzsek által termelt szüretien fermentlevek vízzel nem, vagy csak korlátoltan elegyedő szerves oldószerrel történő kivonaíolására, azzal jellemezve, hogy a szüretien fermentlevet, melynek pH-értéke a fermentáció befejezésekor 4,0-5,5, vízzel nem, vagy csak korlátoltan elegyedő, szerves oldószerrel a fermentlé saját pH-értékén a gombasejtek kivonatolásához szükséges ideig extrahálunk, az extraktumból a főként ergotoxin típusú alkaloidokat tartalmazó alkaloidkeveréket kinyerjük, és kívánt esetben a kiextrahált fermentléből, előnyösen a pH-érték 7-9-re történő beállítása után, a főként vízoldékony anyarozsalkaloidokat tartalmazó alkaloidkeveréket kinyerjük.The present invention relates to a process for extracting non-aqueous or only slightly miscible organic solvents produced by Claviceps purpurea strains, characterized in that the non-aqueous fermentation broth having a pH of 4.0 to 5.5 at the end of the fermentation is not, or extracting the fermentation broth with a slightly miscible organic solvent at its own pH for the time necessary to extract the fungal cells, recovering from the extract a mixture of alkaloids containing mainly ergot toxin-type alkaloids and adjusting the pH to 7-9 if desired. afterwards, a mixture of alkaloids containing mainly water-soluble motherweed alkaloids is recovered.
A találmány szerinti eljárás értelmében Claviceps purpurea gombatörzsek által termelt szüretien fermenticvekből indulunk ki. Gombatörzsként főként ergotoxin típusú alkaloidokat, ezek közül is főként ergokornint és epimerjét, a- és /3-ergokriptint, valamint ezek epimerjeit, továbbá adott esetben vízoldékony anyarozsalkaloidokat is termelő Claviceps purpurea törzseket alkalmazunk. Előnyösen az OKI-nál MNG 00022, MNG 00088 és MNG 0Ü186 deponált törzset alkalmazhatunk.According to the method of the present invention, we start from non-harvested fermentic cultures produced by Claviceps purpurea fungal strains. The fungal strain used is mainly strains of ergot toxin-type alkaloids, especially strains of Claviceps purpurea, which also produce ergocornine and its epimer, ergocriptine α and β-ergocin and their epimers and optionally water-soluble motherwort alkaloids. Preferably, the strain deposited with OKI is MNG 00022, MNG 00088 and MNG 0Ü186.
-2183 266-2183 266
A fermentációt önmagában ismert módon, például a 164 016 számú magyar szabadalmi leírásban leírt módon végezhetjük, ügyelve azonban arra, hogy a fermentáció befejeztével a fermentlé pH-értéke 4,0-5,5 között, előnyösen 4,7-5,2 között legyen. A fermentléhez kívánt esetben a táptalaj ozmózisos nyomását megnövelő valamely adalékot adunk a 153 739 számú magyar szabadalmi leírásban ismertetett módszer szerint. Ozmózisos nyomást növelő adalékként elsősorban szervetlen vagy szerves sókat, így nátrium-, kálium-, kalcium- és magnézium-kloridot, -szulfátot, -karbonátot, -foszfátot, -acetátot. -szukcinátot vagy -aszparaginátot, vagy mono- vagy díszaeharidokat, így mamutot, szorbitot, glukózt vagy szacharózt használhatunk.The fermentation may be carried out in a manner known per se, for example as described in Hungarian Patent No. 164,016, provided that the pH of the fermentation broth at the end of the fermentation is between 4.0 and 5.5, preferably between 4.7 and 5.2. . If desired, an additive for increasing the osmotic pressure of the medium is added to the fermentation broth according to the method described in Hungarian Patent No. 153,739. As the osmotic pressure-increasing additive, it is preferably inorganic or organic salts such as sodium, potassium, calcium and magnesium chloride, sulfate, carbonate, phosphate, acetate. succinate or asparaginate, or mono- or di-saccharides such as mammoth, sorbitol, glucose or sucrose.
A fermentáció lezajlása után a szüretien fermentlevet szakaszos vagy folyamatos üzemű extraktorban vízzel nem, vagy csak korlátoltan elegyedő oldószerrel extraháljuk, anélkül, hogy előzőleg a fermentlé pH-ján változtatnánk. Extrahálószerként elsősorban vízzel nem, vagy csak korlátoltan elegyedő rövid szénláncú alifás ketonokat, előnyösen metil-izobutil-ketont, vagy rövid szénláncú alifás karbonsavésztereket, előnyösen etilacetátot, vagy valamely klórozott szénhidrogént, előnyösen kloroformot vagy diklóretánt alkalmazhatunk.After fermentation, the non-harvested fermentation broth is extracted in a batch or continuous extraction solvent with no or only slightly miscible solvent without first changing the pH of the fermentation broth. In particular, the aliphatic lower aliphatic ketones, preferably methyl isobutyl ketone or lower aliphatic carboxylic acid esters, preferably ethyl acetate, or a chlorinated hydrocarbon, preferably chloroform or dichloroethane, are used as the extraction agent.
Az extrakció során ügyelünk arra, hogy a szűetlen fermentlé és az extrahálószer a gombasejtek megfelelő kivonatolásához szükséges ideig érintkezzék egymással. Az extrakciót célszerűen keverés közben és előnyösen az extrakíor elé beiktatott előkeverő tartály alkalmazásával hajtjuk végre, úgy, hogy az extrahálószer és a szüretien fermentlé megfelelő ideig tartózkodjon együtt. Műveleíileg elfogadható keverési viszonyok mellett körülbelül 3 perc alatt elérhető a gombasejtek max. extrahálhatósági fokának 95 %-a. Általában, és a keverési viszonyoktól függően 3-15, előnyösen 3-8 perc az optimális extrakciós idő.During extraction, care is taken to ensure that the unfilled fermentation broth and the extractant are in contact with each other for the time necessary to properly extract the fungal cells. The extraction is conveniently carried out under stirring and preferably using a pre-mixing tank placed in front of the extraction plant so that the extraction agent and the non-harvested fermentation broth are kept together for a sufficient time. Under culturally acceptable mixing conditions, max. 95% of the degree of extractability. Generally, and depending on the mixing conditions, the optimum extraction time is 3 to 15 minutes, preferably 3 to 8 minutes.
Az extraktumból bepárlás és/vagy petroléteres kicsapással nyerhetjük kí az ergotoxin típusú alkaloidokat.Ergotoxin-type alkaloids can be recovered from the extract by evaporation and / or petroleum ether precipitation.
A kiextrahált fermentlé pH-értékét ezután pH 7-9-re állítjuk be, majd önmagában ismert módon, célszerűen maleinsav só alakjában kinyerjük a vízoldékony alkaloidokat.The pH of the extracted fermentation broth is then adjusted to pH 7-9, and water-soluble alkaloids are recovered in a manner known per se, preferably in the form of a maleic acid salt.
Eljárásunkat közelebbről a következő példákkal szemléltetjük, anélkül, hogy igényünket a példákra korlátoznánk.The following examples are intended to illustrate the process, but are not intended to limit the scope of the examples.
1. példaExample 1
A 164 816 számú magyar szabadalmi leírás szerinti eljárással, MNG 00088 számon deponált Claviceps purpurea törzs, és a 153 739 számú magyar szabadalmi leírás szerinti, a táptalaj ozmózisos nyomását növelő adalék alkalmazásával kapott 250 liter szubmerz tenyészetet, melynek alkaloidtartalma 0,812 mg/ml ergotoxin típusú alkaloid és 0,350 mg/ml ergometrin, a fermentáció befejezésekor a fermentlé saját 4,8-as pH-értékén 125 liter metil-izobutilketonnal 10 percig extrahálunk keverés közben. Ezután az extrahált fermentlevet.és micéliumot, valamint az extraktumot tartalmazó keveréket szűrőcentrifugán szűrjük, majd a fázisokat szétválasztjuk. A vizes fázishoz ismét 125 litei metilizobutilketont adunk, ismét hozzáadjuk a micéliumot és a keveréket 10 percig ismét keverjük, majd szűrés után a fázisokat szétválasztjuk.Claviceps purpurea strain MNG 00088 deposited by the method described in Hungarian Patent No. 164,816 and additive according to U.S. Patent No. 153,739, which increases the osmotic pressure of the medium, obtained 250 liters of submersible culture with an alkaloid content of 0.812 mg / ml of ergot toxin type. and 0.350 mg / ml ergometrine, at the end of the fermentation, the fermentation broth was extracted with 125 liters of methyl isobutyl ketone at pH 4.8 for 10 minutes with stirring. The extracted fermentation broth and mycelium as well as the mixture containing the extract are then filtered through a filter centrifuge and the phases are separated. 125 L of methyl isobutyl ketone are again added to the aqueous phase, the mycelium is added again, and the mixture is stirred again for 10 minutes, and after filtration the phases are separated.
Az oldószeres fázist vákuumban max. 40 °C-on 2 literre bepároljuk, majd a bepárlási maradékot intenzív keverés közben 20 liter petroléterbe öntjük. A kivált csapadékot percig állni hagyjuk, szűrjük, kétszer 0,1 liter petroléterrel mossuk, majd vákuumban max. 40 °C-on megszárítjuk. A kapott termék 279,5 g. A termék összetétele:The solvent phase was vacuum dried to max. The mixture is concentrated to 2 liters at 40 [deg.] C. and the residue is poured into 20 liters of light petroleum with vigorous stirring. The precipitate was left to stand for a minute, filtered, washed twice with 0.1 L of light petroleum and then vacuum dried to max. Dry at 40 ° C. 279.5 g. Product composition:
730 mg/g ergotoxin típusú alkaloid és 20 mg/g ergometrin.730 mg / g of ergot toxin type alkaloid and 20 mg / g of ergometrine.
A vizes fázis és a micélium keverékének pH-értékét ezután 8-ra állítjuk be tömény vizes ammóniumhidroxid» oldattal, majd kétszer 125 liter metil-izobutilketonnal keverés közben extraháljuk. A reakciókeverékből szűréssel, majd a folyadékfázisok szétválasztásával nyerjük a vízoldható alkaloidokat tartalmazó extraktumokat. Az egyesített szerves fázist vákuumban max. 40 °C-on 5 literre bepároljuk, majd pH 4 érték eléréséig intenzív keverés közben metil-izobutilketonos maleinsav-oidatot adunk a bepárlási maradékhoz. A kivált ergometrinmaleátot szűrjük, 2x300 ml metil-izobutilketonnal mossuk, majd vákuumban max. 40 °C-on megszárítjuk. A kapott termékThe pH of the mixture of the aqueous phase and mycelium was then adjusted to pH 8 with concentrated aqueous ammonium hydroxide solution and extracted twice with 125 liters of methyl isobutyl ketone with stirring. Extracts containing water-soluble alkaloids were obtained from the reaction mixture by filtration and separation of the liquid phases. The combined organic phase is concentrated under vacuum to max. The reaction mixture is concentrated to 5 liters at 40 [deg.] C. and, with vigorous stirring, a solution of methyl isobutylketone maleic acid is added to the residue with vigorous stirring. The precipitated ergometrine maleate was filtered, washed with methyl isobutyl ketone (2 x 300 mL), and then vacuum dried to max. Dry at 40 ° C. The product obtained
116,4 g, mely 683 mg/g ergometrint tartalmaz ergometrin-maleát formájában.116.4 g containing 683 mg / g of ergometrine as ergometrine maleate.
2. példaExample 2
A 164 816 számú magyar szabadalmi leírásban ismertetett fermentációs eljárással, de MNG 00186 számon deponált Claviceps purpurea variáns törzs alkalmazásával előállított 100 liter fermentlevet, melyben az ergokomin és epimerje 0,351 mg/ml, az α-ergokriptin és epimerje 0,137 mg/ml és a /3-ergokriptin és epimerje 0,152 mg/ml koncentrációban van jelen, a fermentáció leállítása után, a fermentlé saját pH-ján (5,2) keverős extraktorba nyomatunk 40 liter/óra sebességgel és egyidejűleg 30 liter/óra sebességgel etilacetátot adagolunk hozzá. Ezután a kevert elegyet kamrás, önürítős szeparátorra! etilacetátos és vízes-micéliumos fázisra választjuk szét. A műveletet úgy irányítjuk, hogy a fermentlé tartózkodási ideje az extraktorban 6—8 perc legyen. A szeparálás után az etilacetátos extraktuinban az ergokomin és epimerje 0,427 mg/ml, az α-ergokriptin és epimerje 0,172 mg/ml és a /3-ergokriptin és epimerje 0,187 mg/ml koncentrációban van jelen.100 liters of fermentation broth produced by the fermentation process described in Hungarian Patent No. 164,816 but using MNG 00186 strain Claviceps purpurea, containing 0.351 mg / ml of ergocomin and epimer, 0.137 mg / ml of α-ergocriptine and epimer and -ergocriptine and its epimer are present at a concentration of 0.152 mg / ml, after the fermentation is stopped, the fermentation broth is pressed at 40 L / h at the same pH (5.2) and ethyl acetate is added at the same time. Then, mix the mixture into a chamber self-discharge separator! ethyl acetate and aqueous mycelial phase. The operation is controlled so that the residence time of the fermentation broth in the extractor is 6-8 minutes. After separation, the ethyl acetate extract contained ergocomine and its epimer at 0.427 mg / ml, α-ergocriptine and its epimer at 0.172 mg / ml and α-ergocriptine and its epimer at 0.187 mg / ml.
3. példaExample 3
A 164 816 számú magyar szabadalmi leírás szerinti eljárással, MNG 00022 számon deponált Claviceps purpurea törzs alkalmazásával nyert 10 m3 fermentlevet, melyben az ergokomin és epimerje 0,423 mg/ml, az α-ergokriptin, és epimerje 0,381 mg/ml és a 0-ergokriptin és epimerje 0,093 mg/ml koncentrációban van jelen, a szüretien fermentlé saját pH-ján (az adott esetben pH 4,5) kétszer extrahálunk. Az extrakciót 1500/perc fordulatszámmal üzemeltetett Podbielniak D 36 extraktorban etilacetáttal végezzük; 1 m3 fermentlére számítva 2x400 liter etilacetátot alkalmazunk. Átlagosan 6 perces tartózkodási idő biztosítására egy elökeverő tartályt alkalmazunk, melyben a szüretien fermentlevet 40 térfogat % etilacetáttal, illetve az extrakció beindulása után 40 térfogat0/.) etilacetátos extraktummal keverjük. Azextraktort oly ír dón üzemeltetjük, hogy az extraktorban az etilaceta, képezze a folytonos fázist, s ebben legyen diszpergálva a fermentlé; az extraktoron belüli aktív szakaszban tehát 0,1-0,15 liter fermentlére körülbelül 1 liter etil310 m 3 of fermentation broth was obtained by the method of Hungarian Patent No. 164,816 using Claviceps purpurea strain MNG 00022, in which ergocomine and its epimer were 0.423 mg / ml, α-ergocriptine and its epimer were 0.381 mg / ml and 0-ergocriptine and its epimer is present at a concentration of 0.093 mg / ml, extracted twice at its own pH (optionally pH 4.5). The extraction was carried out in a Podbielniak D 36 extractor operated at 1500 rpm with ethyl acetate; Per 1 m 3 of fermentation broth is used 2x400 L of EtOAc. To provide an average residence time of 6 minutes using a premix tank, where the unfiltered fermentation broth at 40 in 40 volumes v 0 /.)% Ethyl acetate extract with ethyl acetate, and after the start of extraction. The extractor is operated in such a way that the ethyl acetate in the extractor forms a continuous phase in which the fermentation broth is dispersed; thus, in the active phase within the extractor, 0.1-0.15 liters of fermentation broth is approximately 1 liter of ethyl3
-3183 266 acetát jut. Az etilacetátos extraktumokat egyesítjük, és továbbfeldolgozásra eitesszük (a továbbiakban: savas pH-értéken nyert extraktum). A visszamaradt fermentlé pH-értékét ezután 8,5-re állítjuk be tömény vizes ammóniumliidroxid-oldatta!, majd etilacetáttal újra kétszer extraháljuk. Az extraktumokat egyesítjük.-3183 266 acetate. The ethyl acetate extracts were combined and subjected to further work-up (hereinafter referred to as "acidic extract"). The pH of the remaining fermentation broth was adjusted to 8.5 with concentrated aqueous ammonium hydroxide solution and extracted twice with ethyl acetate. The extracts were combined.
A savas pH-η nyert etilacetátos extraktumot vákuumban max. 40 °C-on 50 liter térfogatúra bepároljuk, majd intenzív keverés közben 500 liter petroléterbe öntjük a bepárlási maradékot. A kivált alkaioidkeveréket szűrőcentrifugán szűrjük, kétszer 15 liter petroléterrel mossuk, majd vákuumban max. 40 °C-on megszárítjuk. A kapott termék 12,19 kg, melynek összetétele:The acidic pH η was extracted with ethyl acetate in vacuo to max. The reaction mixture is concentrated to 50 liters at 40 [deg.] C. and, with vigorous stirring, is poured into 500 liters of light petroleum. The precipitated alkaloid mixture was filtered through a filter centrifuge, washed twice with 15 liters of light petroleum and then vacuum dried to max. Dry at 40 ° C. The product obtained is 12.19 kg, consisting of:
302 mg/g ergokornin és epimerje,302 mg / g ergocornine and its epimer,
270 mg/g α-ergokríptin és epimerje és 68 mg/g /3-ergokriptin és epimerje.270 mg / g of α-ergocryptine and its epimer and 68 mg / g of 3-ergocryptine and its epimer.
4. példaExample 4
A 164 816 számú magyar szabadalmi leírás szerinti eljárással, MNG 00088 számon deponált Claviceps purpurea törzs alkalmazásával készült 250 liter fermentlevet, mely 822 mg/ml ergotoxin típusú alkaloidot cs 0,150 mg/ml ergometrint tartalmaz, a szüretien fermentlé saját pH-ján (ez az adott esetben 4,7) RDC (rotating disc colurnn) rendszerű extraktorban etilacetáttal extrahálunk.250 liters of fermentation broth containing 822 mg / ml of ergot toxin alkaloid and 0.150 mg / ml of ergometrine at the pH of the non-harvested fermentation broth was prepared using the method described in Hungarian Patent No. 164,816, using Claviceps purpurea strain deposited under number MNG 00088. in case 4.7) was extracted with ethyl acetate in an RDC (rotating disc colurnn) extractor.
Az extraktor belső átmérője 150 mm, a keverő fórdulaíszáma 150/perc, az aktív cellák száma 50. Az extraktor elé 5 perces átlagos tartózkodási időt biztosító előkeverő tartályt iktatunk be, melyben a szüretien fermentlevet 40 térfogat% etilacetáttal, illetve az extrakció beindulása után 40 térfogat% etilacetátos extraktumma! keverjük. Az extrakció során a felső 0. cellába 60 liter/óra sebességgel az előkevert fermentlevet, az alsó 50. cellába 48 liter/óra sebességgel az etilacetátot tápláljuk be a folyamatos, ellenáramú RDC extraktorba. 100 liter fermentíére számolva 80 liter etilacetátot alkalmazunk. Az extraktorban az etilacetát a folytonos fázis, és az extraktor aktív (kevert) szakaszában 1 liter etilacetátban 0,1—0,25 liter fermentlé van diszpergálva. Körülbelül 90 perc felfutási idő után a kilépő extraktum (a felső cellánál kilépő etilacetátos fázis), illetve raffinátum (az alsó cellánál kilépő kiextraktált fermentlé) alkaloidkoncentrációja állandósul, azaz az extraktor egyensúlyi működésűnek tekinthető. Ekkor szedőedényt cserélünk és az extraktort gyakorlatilag tetszés szerinti ideig üzemeltetve, a szedőedényekbe mindig az egyensúlyi össze tételű extraktumot, illetve raffinátumot gyűjtjük. Pontosan 100 liter fermentlé betáplálása során nyert extraktumot és raffinátumot gyűjtve az extraktum térfogataThe extractor has an internal diameter of 150 mm, a stirrer spindle speed of 150 rpm, and an active cell number of 50. A pre-mixing tank is provided in front of the extractor, in which the unfermented fermentation broth contains 40% ethyl acetate and 40 volumes after start of extraction. % ethyl acetate extract! stirred. During the extraction, premixed fermentation broth was fed to the upper cell 0 at a rate of 60 liters / hour, and to the lower cell 50 to the ethyl acetate in a continuous countercurrent RDC extractor at 48 liters per hour. 80 liters of ethyl acetate are used per 100 liters of fermenter. Ethyl acetate in the extractor is dispersed in the continuous phase and 0.1 to 0.25 liter of fermentation broth is dispersed in 1 liter of ethyl acetate in the active (mixed) phase of the extractor. After a rise time of about 90 minutes, the alkaloid concentration of the effluent extract (the ethyl acetate phase exiting the upper cell) and raffinate (the extracted fermentation juice exiting the lower cell) is constant, i.e. the extractor is considered to be equilibrium. At this point, the receptacle is changed and the extractor is operated with the extractor or raffinate in equilibrium composition, practically at any time. The volume of extract and raffinate collected during the feeding of exactly 100 liters of fermentation juice
63 liter, a raffinátumé 110,5 liter.63 liters, raffinate 110.5 liters.
A főként ergotoxin típusú alkaloidokat tartalmazó extraktum 1,217 mg/ml ergotoxin típusú alkaloidot és 0,011 mg/ml ergometrint tartalmaz. A főként ergometrint tartalmazó raffinátum 0,0529 ing/m! ergotoxin típusú alkaloidot és 0,133 mg/ml ergometrint tartalmaz.The extract, which contains mainly ergotoxin-type alkaloids, contains 1.217 mg / ml ergotoxin-type alkaloid and 0.011 mg / ml ergometrine. The raffinate containing mainly ergometrine is 0.0529 shirt / m! Ergotoxin-type alkaloid and 0.133 mg / ml ergometrine.
Claims (4)
Priority Applications (7)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU802986A HU183266B (en) | 1980-12-15 | 1980-12-15 | Process for the extraction of non-filtered fermentation liquors produced by strains of claviceps purpurea |
| BE1/10371A BE891421A (en) | 1980-12-15 | 1981-12-10 | PROCESS FOR THE EXTRACTION OF NON-FILTERED FERMENTATION BROTHS |
| FR8123261A FR2496123B1 (en) | 1980-12-15 | 1981-12-14 | PROCESS FOR THE EXTRACTION OF NON-FILTERED FERMENTATION BROTHS |
| CH7955/81A CH650531A5 (en) | 1980-12-15 | 1981-12-14 | Process for the extraction of unfiltered fermentation broths |
| IT25583/81A IT1142098B (en) | 1980-12-15 | 1981-12-14 | PROCEDURE FOR THE EXTRACTION OF FERMENTATION BRODS N / N FILTERED |
| JP56201032A JPS57150398A (en) | 1980-12-15 | 1981-12-15 | Extraction of unfiltered fermentation liquid |
| CS819346A CS250211B2 (en) | 1980-12-15 | 1981-12-15 | Method of non-filtered fermenting substrates extraction |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| HU802986A HU183266B (en) | 1980-12-15 | 1980-12-15 | Process for the extraction of non-filtered fermentation liquors produced by strains of claviceps purpurea |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU183266B true HU183266B (en) | 1984-04-28 |
Family
ID=10962008
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU802986A HU183266B (en) | 1980-12-15 | 1980-12-15 | Process for the extraction of non-filtered fermentation liquors produced by strains of claviceps purpurea |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JPS57150398A (en) |
| BE (1) | BE891421A (en) |
| CH (1) | CH650531A5 (en) |
| CS (1) | CS250211B2 (en) |
| FR (1) | FR2496123B1 (en) |
| HU (1) | HU183266B (en) |
| IT (1) | IT1142098B (en) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB0218578D0 (en) | 2002-08-09 | 2002-09-18 | Glaxo Group Ltd | Novel method |
| DE102010060382B4 (en) | 2010-11-05 | 2013-05-29 | Bundesanstalt für Materialforschung und -Prüfung (BAM) | Analytical method for isolating mycotoxins with an ergoline basic structure, in particular ergot alkaloids |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4086141A (en) * | 1976-11-08 | 1978-04-25 | Veb Arzneimittelwerk Dresden | Process for the fermentation production of ergoline derivatives |
-
1980
- 1980-12-15 HU HU802986A patent/HU183266B/en not_active IP Right Cessation
-
1981
- 1981-12-10 BE BE1/10371A patent/BE891421A/en not_active IP Right Cessation
- 1981-12-14 IT IT25583/81A patent/IT1142098B/en active
- 1981-12-14 CH CH7955/81A patent/CH650531A5/en not_active IP Right Cessation
- 1981-12-14 FR FR8123261A patent/FR2496123B1/en not_active Expired
- 1981-12-15 CS CS819346A patent/CS250211B2/en unknown
- 1981-12-15 JP JP56201032A patent/JPS57150398A/en active Granted
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CH650531A5 (en) | 1985-07-31 |
| BE891421A (en) | 1982-06-10 |
| JPH0141314B2 (en) | 1989-09-05 |
| JPS57150398A (en) | 1982-09-17 |
| FR2496123B1 (en) | 1985-08-09 |
| FR2496123A1 (en) | 1982-06-18 |
| IT8125583A0 (en) | 1981-12-14 |
| CS250211B2 (en) | 1987-04-16 |
| IT1142098B (en) | 1986-10-08 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0672669B1 (en) | Process for the preparation of potassium clavulanate | |
| RU2206613C2 (en) | Method of isolation of clavulanic acid | |
| NO763474L (en) | ||
| EP0813536B2 (en) | Process for the preparation of pharmaceutically acceptable salts of clavulanic acid | |
| NO314505B1 (en) | Process for preparing a salt of clavulanic acid | |
| HU183266B (en) | Process for the extraction of non-filtered fermentation liquors produced by strains of claviceps purpurea | |
| US4014994A (en) | Process for the recovery and purification of partricin | |
| CN103012344B (en) | Method of recovering lovastatin from lovastatin crystal mother liquor | |
| EP0941229B1 (en) | Purification of fermented clavulanic acid | |
| US6417352B1 (en) | Process for the isolation of a pharmaceutically acceptable alkali metal salt of clavulanic acid | |
| WO2000004028A1 (en) | Improved process for the preparation of salts and esters of clavulanic acid | |
| US20010029038A1 (en) | Purification of fermented clavulanic acid | |
| RU2088586C1 (en) | Method of preparing clavulanic acid or its pharmaceutically acceptable salts or esters | |
| CN115536672A (en) | Extraction method and application of tacrolimus crude product | |
| US2935520A (en) | Recovery of steroids from fermentation broth | |
| WO1998042858A1 (en) | Process for the isolation of a pharmaceutically acceptable alkali metal salt of clavulanic acid | |
| MXPA01000439A (en) | Improved process for the preparation of salts and esters of clavulanic acid | |
| WO2006113768A1 (en) | Fermentation broth extraction of k-252a | |
| EP2106448A1 (en) | Process for the production of clavulanic acid |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HU90 | Patent valid on 900628 | ||
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |