HRP950488A2

HRP950488A2 - Combination therapy for hypercholesterolemia

Info

Publication number: HRP950488A2
Application number: HR08/308,908A
Authority: HR
Inventors: Lee A Morehouse
Original assignee: Pfizer
Priority date: 1994-09-20
Filing date: 1995-09-20
Publication date: 1997-08-31
Also published as: MX9702175A; WO1996009827A3; EP0782451A1; AU2453295A; US5807834A; BR9504072A; JPH09511753A; FI971151A0; ZA957879B; IL115310A0; WO1996009827A2; CA2200436A1; FI971151A

Description

Područje izuma

Izum je iz područja farmaceutske kemije i tehnologije.

Ovaj izum se odnosi na farmaceutski kompozit kolesterol apsorpcijskih inhibitora i kolesterol sintetskih inhibitora, pribore koji sadrže takve kompozite i upotrebu takvih kompozita za liječenje hiperkolesterolemije i ateroskleroze u sisavaca.

Tehnički problem

Razina plazmatskog kolesterola je pozitivno korelirana u vezi sa kliničkim događajima povezanim sa koronarnim bolestima srca (KBS). Na taj način, farmakološke intervencije koje smanjuju razinu kolesterola kod sisavaca imaju koristan efekt na KBS. Posebno, smanjenje plazmatske razine kolesterola, lipoproteina niske gustoće (LNG) povezano je sa smanjenjem ateroskleroze i smanjenjem rizika od KBS, a hipolipidni agensi upotrebljeni u imunoterapiji ili kombiniranoj terapiji su djelotvorni pri smanjenju plazmatske razine LNG, kolesterola i smanjenju rizika od KBS.

Metabolizam kolesterola kod sisavaca obuhvaća serije putanja koje uključuju apsorpciju kolesterola u tankom crijevu, biosintezu kolesterola u različitom tkivu (prvenstveno u jetri i tankom crijevu), sintezu žučne kiseline u jetri i reapsorpciju u tankom crijevu, sintezu kolesterola, koji sadrži plazmatske lipoproteine, u jetri i crijevu, katabolizam kolesterola, koji sadrži plazmatske lipoproteine, u jetri i ekstrahepatičnom tkivu i izlučivanje kolesterola i žučne kiseline u jetri. Ovi procesi su međusobno povezani, tako da je njihova regulacija isprepletana i ima za cilj održavanje razina celularnog i plazmatskog kolesterola u pogodnom uskom opsegu. Prema tome, promjene u jednom nivou metabolizma kolesterola mogu imati višestruke efekte.

Takav je slučaj sa apsorpcijom kolesterola u tankom crijevu. Na primjer, povećanje ili smanjenje postotka fluksa crijevnog kolesterola koji je apsorbiran, konačno povećava ili smanjuje koncentraciju plazmatskog kolesterola. Primjeri agenasa koji inhibiraju apsorpciju kolesterola uključuju ACAT inhibitore kao CI-976 (Krause, B.R. et al., Clin. Biochem., 25, 371-377,1992), 58- 035 (Heiden, J.G. et al., J. Lip. Res., 24, 1127-1134, 1983) i melinamid, stigmastanil fosforilkolin i analozi dani u EP-430, 078A, β-lactam kolesterol apsorpcijski inhibitori dani u WO 93/02048 i EP 524,595A, sulfonirani polisaharidi dani u U.S. Pat. No. 5,063,210 i drugi spojevi, kao što je neomicin i prirodno rasprostranjeni biljni saponini. Zatim, steroidni glikozidi opisani u WO 93/07167-A1 i U.S. Pat. No. 4,602,003 i 4,602,005 preporučuju se kao korisni za kontrolu hiperkolesterolemije. Također, drugi steroidni glikozidi koji imaju superiornu hiperkolesterolemičnu aktivnost su dani u PCT aplikaciji PCT/LT.S. 93/04092 objavljenoj kao WO 94/00480 (izumi koji su ovdje obuhvaćeni kao reference) i PCT aplikacije PCT/IB94/00349 i PCT/IB94/00348 (izumi koji su ovdje obuhvaćeni kao reference). Steroidni glikozidi specificirani iznad inhibiraju apsorpciju kolesterola smanjenjem razine plazmatskog kolesterola.

Inhibicija biosinteze kolesterola je također djelotvorna u smanjenju LNG modaliteta kod čovjeka. Sinteza kolesterola se odvija u različitom tkivu, ali u principu u jetri i crijevu. To je složen proces koji počinje od acetilkoenzima A koji je kataliziran od strane enzima uključujući hidroksimetilglutarilkoenzim A (HMG—CoA) reduktazu, HMG-CoA sintetazu, skvalan sintetazu, skvalan epoksidazu, skvalan ciklazu i lanosteril dimetilazu. Inhibicija katalize ovih enzima ili blokiranje HMG-CoA reduktaze prijenosa gena predstavlja efikasan način za redukciju biosinteze kolesterola (vode se kao inhibitori sinteze kolesterola) i može voditi ka smanjenju razine kolesterola. Na primjer, poznati su inhibitori HMG-CoA reduktaze (npr., lovastatin, simvastatin, pravastatin, fluvastatin) koji se koriste za liječenje hiperkolesterolemije.

Stanje tehnike

Skoro usvojeni National Ckolesterol Education Program preporučuje agresivnu terapiju za smanjenje lipida kod pacijenata sa prethodnim kardiovaskularnim oboljenjima ili kod onih sa većim brojem faktora koji povećavaju rizik. Sadašnja monoterapija je obično nedovoljna za smanjenje LNG kolesterola do poželjnih razina, tako da je kombinirana terapija postala veoma moćna. GB 2,227,662A otkriva kombinaciju inhibitora HMG-CoA reduktaze sa sekvestrantom žučne kiseline. WO 93/175.57A otkriva kombinaciju inhibitora skvalan sintetaze sa inhibitorom HMG-CoA reduktaze ili drugim hipolipidemičnim agensom. WO 88/05296 otkriva kombinaciju inhibitora HMG-CoA reduktaze sa gemfibrozilom. Novije kombinirane terapije 5-C-hidroksimetil heksoze sterola i vezača žučne kiseline ili inhibitora sinteze kolesterola predloženi su u PTC aplikaciji No. PCT/US92/08290 (štampano kao WO 93/07167). Također, kombinirane terapije inhibitora sinteze kolesterola i β-lactamski kolesterol apsorpcionih inhibitora su opisane u PCT aplikaciji No. PCT/L1593/12291 (štampano kao WO 94/14433) i imaju sinergističko hipolipidemični efekat. U praksi, mnoge kombinacije postojećih hipolipidemičnih agenasa su kontraindicirane, što ograničava mogućnosti liječnicima za veće smanjenje razina plazmatskog LNG kolesterola kod pacijenata u odnosu na ono što se postiže monoterapijom.

Tako, iako postoji veći broj hiperkolesterolemičnih terapija postoji kontinuirana potreba i za kontinuirano istraživanje u ovoj oblasti za alternativnim terapijama.

Opis rješenja tehničkog problema s primjerima izvođenja

Ovaj izum se odnosi na farmaceutske kompozite koji uključuju inhibitore apsorpcije kolesterola i inhibitore sinteze kolesterola za liječenje hiperkolesterolemije i ateroskleroze. Kombinacija obuhvaća terapeutski učinkovitu količinu prve komponente, pri čemu je navedena prva komponenta inhibitora apsorpcije kolesterola izabrana iz GRUPE IA i GRUPE III gdje

GRUPA IA

obuhvaća spojeve Formule IA

[image]

i njihove farmaceutski prihvatljive soli i hidrate

Q1 predstavlja metilen, karbonil,

[image]

Q2 predstavlja metilen, karbonil,

[image]

R1, R2 i R3 su nezavisno svaki vodik, hidroksi, halogen, amino, azido, (C1-C6)alkoksi(C1-C6)alkoksi ili

–Z-R4;

Z je pri svakom pojavljivanju nezavisno –NH-C(=O), -O-C(=O), -O-C(=O)-N(R5)- NH-C(=O)-N(R5)- ili -O-C(=S)-N(R5)-’

R4 je pri svakom pojavljivanju nezavisno aril, aril(C1-C6)alkil, (C2-C4)alkenil, (C1-C6)alkil, ciklo(C3-C7)alkil ili ciklo(C3-C7)alkil(C1-C6)alkil; svaki R4 je proizvoljno mono-, di- ili trisupstituiran nezavisno sa halogenim, C1-C6)alkil, hidroksi, fenoksi, trifluorometil, nitro, (C1-C4)alkoksi, metilendioksi, okso, (C1-C4)alkilsulfanil, (C1-C4)alkilsulfinil, (C1-C4)alkilsulfonil, dimetilamino, mono- ili di-(C1-C4)alkilaminokarbonil, (C1-C6)alkilkarbonil, (C1-C4)alkoksi-karbonil, pirolidinilkarbonil gdje je aril vezan preko ugljika i predstavlja fenil, furil, tienil, pirolil, oksazolil, izoksazolil, oksadiazolil, tiazolil, izotiazolil, benzotiazolil, tiadiazolil, pirazolil, imidazolil ili piridil; i

R5 je pri svakom pojavljivanju nezavisno vodik, (C1-C6)alkil ili R5 je takav da kada je zajedno sa dušikom za koji je vezan i sa R4, gdje je R4 kovalentna veza, stvara pirolidinil, piperidinil, N-metilpiperazinil, indolil ili morfolinil i takva ciklična grupa može biti supstituirana na ugljiku sa (C1-C6)alkoksikarbonil; uz uvjet da R1, R2 i R3 nisu sve hidroksi; i

GRUPA III

obuhvaća spojeve Formule IB

[image]

gdje

Q1 predstavlja metilen, karbonil,

[image]

Q2 predstavlja metilen, karbonil

[image]

Q3 predstavlja

[image]

i gdje

R1 predstavlja

β-D-glukopiranozil,

β-D-glukopiranurozil,

β-D-2-acetamido-2-deoksi-glukopiranozil,

β-D-galaktopiranozil,

β-D-fukopiranozil,

β-L-fukopiranozil,

β-D-ksilopiranozil,

β-L-ksilopiranozil,

α-D-arabanopiranozil, α-L-arabanopiranozil,

α-D-celobiozil,

β-D-celobiozil,

β-D-laktozil, β-D-maltozil,

β-D-gentobiozil,

3-O-β-D-glukopiranozil-α-Darabanopiranozil ili ,

β-D-maltotriozil; i

terapeutska djelotvorna količina drugog spoja, navedeni spoj je inhibitor HMG-CoA reduktaze, inhibitor HMG-CoA sintetaze, inhibitor HMG-CoA reduktaze gena, inhibitor skvalen sintetaze, inhibitor skvalen epoksidaze, inhibitor skvalen ciklaze ili inhibitor lanosterol demetilaze.

Prva grupa poželjnih farmaceutskih kompozita sadrži kompozicije gdje je spoj Grupe IA inhibitor apsorpcije kolesterola iz GRUPE I i GRUPE II gdje

GRUPA I

obuhvaća spojeve Formule I

[image]

i njihove farmaceutski prihvatljive soli i hidrate gdje

Q2 predstavlja metilen, karbonil,

[image]

R1, R2 i R3 su svaki nezavisno vodik, hidroksi, halogen, amino, azido, (C1-C6)alkoksi(C1-C6)alkoksi ili -Z-R4;

Z je –NH-C(=O), -O-C(=O), -O-C(=O)-N(R5)-, -NH-C(=O)-N(R5)- ili –O-C(=S)-N(R5)-;

R4 je (C1-C6)alkil, (C2-C10)hidroksialkil, aril(C1-C6)alkil, trifluorometil(C1-C6)alkil, alkoksi(C1-C4) karbonil, ili aril vezan preko ugljika i predstavlja fenil, furil, tienil, pirolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, izotiazolil, pirazolil, imidazolil ili piridil i aril može biti mono-, di ili tri-supstituiran sa hidroksi, (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkoksi, halogenom, nitro ili trifluorometil; i

R5 je vodik, (C1-C6)alkil ili R5 je takav da kada zajedno sa dušikom za koji je vezan i sa R4, gdje je R4 kovalentna veza, stvara pirolidinil, piperidinil, N-metil-piperazinil, indolil ili morfolinil;

uz uvjet da R1, R2 i R3 nisu sve hidroksi; i

GRUPA II

obuhvaća spojeve Formule IA

[image]

i njihove farmaceutski prihvatljive soli i hidrate gdje

Q1 predstavlja karbonil,

[image]

Q2 predstavlja metilen, karbonil,

[image]

–Z-R4;

Z je –NH-C(=O), -O-C(=O), -O-C(=O)-N(R5)-, -NH-C(=O)-N(R5)- ili –O-C(=S)-N(R5)-

R4 je (C1-C6)alkil, (C2-C10)hidroksialkil, aril(C1-C6)alkil, ili aril vezan preko ugljika i predstavlja fenil, furil, tienil, pirolil, ili piridil i aril može biti mono- di ili tri-supstituiran sa hidroksi, (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkoksi, halogenom, nitro ili trifluorometil; i

R5 je vodik, (C1-C6)alkil ili R5 je takav da kada je zajedno sa dušikom za koji je vezan i sa R4, gdje je R4 kovalentna veza, stvara pirolidinil, piperidinil, N-metil-piperazinil, indolil ili morfolinil;

uz uvjet da R1, R2 i R3 nisu sve hidroksi.

Druga grupa poželjnih farmaceutskih kompozita sadrži kompozite koje dodatno sadrže farmaceutski nosač.

U okviru ove druge grupe poželjnih farmaceutskih kompozita je prva grupa posebno poželjnih kompozita gdje drugi spoj predstavlja inhibitor HMG-CoA reduktaze.

Pogodne su u okviru prethodne grupe farmaceutskih kompozita gdje je prvi spoj (3β,5α,25R)-3-[(4”,6”-bis-[2 -fluorofenilkarbamoil)-β-D-celobiozil)oksi]spirostan-12-on.

Pogodne su u okviru prethodne grupe farmaceutskih kompozita gdje je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze lovastatin, simvastatin, pravastatin, flurastatin, atorvastatin ili rivastatin.

U okviru prve grupe poželjnih farmaceutskih kompozita je prva grupa posebno poželjnih farmaceutskih kompozita dodatno uključujući farmaceutski nosač, i gdje je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze i prvi spoj je spoj Formule I iz Grupe I

[image]

i njihove farmaceutski prihvatljive soli i hidrati gdje

Q2 predstavlja karbonil, metilen,

[image]

R1, R2 i R3 su svaki nezavisno vodik, hidroksi, halogen, amino, azido, (C1-C6)alkoksi(C1-C6)alkoksi ili

–Z-R4;

R4 je (C1-C6)alkil, (C2-C10)hidroksialkil, aril(C1-C6)alkil, trifluorometil (C1-C6)alkil, (C1-C4)alkoksikarbonil(C1-C4)alkil, ili aril vezan preko ugljika i predstavlja fenil, furil, tienil, pirolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, izotiazolil, pirazolil, imidazolil ili piridil i aril može biti mono- di ili tri-supstituiran sa hidroksi, (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkoksi, halogenom, nitro ili trifluorometil; i

R5 je vodik, (C1-C4)alkil ili R5 je takav da kada je zajedno sa dušikom za koji je vezan i sa R4, gdje je R4 kovalentna veza, stvara pirolidinil, piperidinil, piperazinil ili morfolinil;

uz uvjet da R1, R2 i R3 nisu sve hidroksi.

U okviru prve grupe poželjnih farmaceutskih kompozita je druga grupa posebno poželjnih farmaceutskih kompozita dodatno uključujući farmaceutski nosač, i gdje je prvi spoj spoj Formule IA gdje Q1 predstavlja karbonil,

[image]

Pogodne su u okviru prethodne grupe farmaceutskih kompozita gdje je prvi spoj (3β,5α,25R)-3- [(4”,6”- bis- [tiazol-2-il-metilkarbamoil]-β-D-celobiozil)oksi]spirostan-11-on ili (3β,5α,12β,25R)- 3- [(4”,6”- bis-[2-(metoksikarbonil)etilkarbamoil]-β-D-celobiozil)oksi]-12-hidroksispirostan-11-on.

Pogodni su u okviru prethodne grupe farmaceutski kompozit gdje je drugi spoj lovastatin, simvastatin, pravastatin, flurastatin, atorvastatin ili rivastatin.

U okviru prve grupe poželjnih farmaceutskih kompozita je druga grupa posebno poželjnih farmaceutskih kompozita koja dodatno uključuje i farmaceutski nosač, i gdje je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze i prvi spoj je spoj Formule IA iz Grupe II

[image]

i njihove farmaceutski prihvatljive soli i hidrate gdje

Q1 predstavlja karbonil,

[image]

Q2 predstavlja metilen, karbonil,

[image]

–Z-R4;

R5 je vodik, (C1-C4)alkil ili je R5 takav da kada je zajedno sa dušikom za koji je vezan i sa R4, gdje je R4 kovalentna veza, stvara pirolidinil, piperidinil, piperazinil ili morfolinil;

uz uvjet da R1, R2 i R3 nisu svi hidroksi.

U okviru prve grupe posebno poželjnih farmaceutskih kompozita je treća grupa naročito poželjnih kompozita gdje je prvi spoj iz Grupe III

Pogodne su u okviru prethodne grupe farmaceutski kompoziti gdje je prvi spoj (3β,5α,25R)-3-((β-D -celobiozil) oksi)spirostan-11-on.

Pogodni su u okviru prethodne grupe farmaceutski kompoziti gdje je drugi spoj lovastatin, simvastatin, pravastatin, flurastatin, atorvastatin ili rivastatin.

U okviru prve grupe poželjnih farmaceutskih kompozita je treća grupa posebno poželjnih farmaceutskih kompozita dodatno uključujući farmaceutski nosač, gdje je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze i prvi spoj je spoj Formule IB iz Grupe III

[image]

gdje

Q1 predstavlja karbonil, metilen,

[image]

Q2 predstavlja karbonil, metilen,

[image]

Q3 predstavlja

[image]

i gdje

R1 predstavlja

β-D-glukopiranozil,

β-D-glukopiranurozil,

β-D-2-acetamido-2-deoksi-glukopiranozil,

β-D-galaktopiranozil,

β-D-fukopiranozil,

β-L-fukopiranozil,

β-D-ksilopiranozil,

β-L-ksilopiranozil,

α-D-arabanopiranozil,

α-L-arabanopiranozil,

α-D-celobiozil,

β-D-celobiozil,

β-D-laktozil,

β-D-maltozil,

β-D-gentobiozil,

3-O-β-D-glukopiranozil-α-Darabanopiranozil ili,

β-D-maltotriozil.

U okviru druge grupe poželjnih farmaceutskih kompozita je druga grupa posebno poželjnih farmaceutskih kompozita dodatno uključujući farmaceutski nosač, i gdje je drugi spoj inhibitor skvalan sintetaze iz spoja Formule ZQ

[image]

i farmaceutski prihvatljive kationske i anionske soli, prodrazi i njihovi stereoizomeri

gdje X predstavlja oksi, tio, -S(O)- ili –S(O)2-;

Y je karbonil ili metilen;

R1, R2, R3 i R9 su svaki nezavisno vodik, halogen, hidroksil, trifluormetil, (C1-C4)alkil, fluorirani (C1-C4)alkil koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C4)alkoksi; fluorirani (C1-C4)alkoksi koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C4)alkiltio, (C1-C4)alkilsulfinil, (C1-C4)alkilsulfonil, fenil, amino, mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilamino, karboksil, (C1-C6)alkoksikarbonil, karbamoil, mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilkarbamoil, (C1-C4)alkanoilamino, fluorirani (C1-C4)alkanoilamino koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C4)alkilsulfonilamino ili fluorirani (C1-C4)alkilsulfonilamino koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C6)alkanoil, (C1-C6)alkanoil(C1-C6)alkil, oksazolil, tiazolil, izoksazolil, pirazolil ili izotiazolil gdje su navedeni prethodni heterocikli vezani preko ugljika gdje R1 i R2, mogu stvarati petočlani, šestočlani ili sedmočlani ugljikovodikov prsten ili mogu stvarati zajedno metilendioksil, etilendioksil ili propilendioksil i takvi prsteni nastaju kada se R1 i R2 povezuju u položajima 7 i 8;

R4 je (C1-C7)alkil ili (C3-C4)cikloalkilmetil;

Z je karboksil, (C1-C4)alkoksikarbonil, aminokarbonil, cijano, hidroksiaminokarbonil, C(O)N(H)SO2R5, tetrazol-5-il, 4,5-dihidro-5-okso-1,2,4-oksdiazol-3-il, tetrazol-5-ilaminokarbonil, 3-oksoizoksazolidin-4-il-aminokarbonil,

[image]

R5 je amino ili mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilamino, (C1-C4)alkil proizvoljno supstituiran sa 1 do 9 fluora; amino ili mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilamino, karboksil, (C1-C4)alkoksikarbonil, karbamoil ili mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilkarbamoil, fenil proizvoljno mono- ili di-supstituiran sa metil, metoksil, fluoro, trifluorometoksil, karboksil, (C1-C4)alkoksikarbonil, metiltio, metilsulfinil, metilsulfonil, (C1-C4)alkilsulfonilamino ili mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilaminosulfonil; ili tiazolil, izoksazolil, tienil, furil, piridinil ili takvi heterocikli koji su proizvoljno monosupstituirani sa karboksil, ili mono- ili di-supstituirani sa metil;

R6 je vodik, hidroksil ili metoksil;

T stvara pet do sedmočlani mono-az, zasićeni prsten, prsten koji proizvoljno sadrži tio i proizvoljno je mono-supstituiran na ugljiku sa hidroksil;

U stvara tri do sedmočlani zasićeni karboksilni prsten;

V je –CO2R7, aminokarbonil, cijano, tetrazol-5-il, 4,5-dihidro-5-okso-1,2,4-oksdiazol-3-il, tetrazol-5-il-aminokarbonil, ili 3-oksoizoksazolidin-4-il-aminokarbonil,

R7 je vodik ili (C1-C6)alkil;

p je 1, 2, 3 ili 4;

R8 je hidroksil, tiol, karboksil, (C1-C6)alkoksikarbonil, karbamoil, amino, sulfamoil, (C1-C6)alkoksi, fluorirani (C1-C6)alkoksi koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C6)alkiltio, (C1-C4)alkilsulfonil, (C1-C6)alkilsulfinil, mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilkarbamoil, mono-N- ili di-N,N-(C1-C6)alkilamino, (C1-C6)alkilsulfonilamino, fluorirani (C1-C6)alkilsulfonilamino koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C6)alkanoilamino, fluorirani (C1-C6)alkanoilamino koji ima 1 do 9 fluora, mono-N ili di-N,N-(C1-C6)alkilaminosulfonil, ureido, mono-N- ili di-N-(C1-C6)ureido, imidazolil ili piridili; i

W je piridil, pirimidil,1,3,4-oksadiazolil,1,3,4-tiazolil, tiazolil,1,3,4-triazolil ili oksalil.

Pogodni su u okviru prethodne grupe najpoželjniji farmaceutski kompoziti gdje je prvi spoj izabran od

(3β,5α,25R)-3-[(4”,6”-bis[tiazol-2-il-metilkarbamoil]-β-D-celobiozil)oksi]spirostan-11-on,

(3β,5α,12β,25R)-3-[(4”,6”-bis[2-(metoksikarbonil)etilkarbamoil]-β-D-celobiozil)oksi]spirostan-11-on,

(3β,5α,25R)-3-((β-D-celobiozil)oksi)spirostan-11-on, ili

(3β,5α,25R)-3-[(4”,6”-bis[2-fluorofenilkarbamoil)-β-D-celobiozil)oksi]spirostan-12-on; i

(-)-trans-7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2-okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzotiazepin-3-octena kiselina;

inhibitor skvalan sintetaze je (-)-N-trans-(7-kloro-5-(1-naftil)-1- neopentil-2-okso- 1,2,3,5- tetrahidro- 4,1-benzo tiazepin -3-acetil)-izonipekotinska kiselina;

(-)-trans-7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2-okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoksazepin-3- octena kiselina;

(-)-N-trans-(7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2-okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoksazepin3-acetil)-izonipekotinska kiselina;

(-)-N-trans-(7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2-okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoksazepin3-acetil)-L-glutamil-α-metil ester; ili

(-)-N-trans-(7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoksazepin-3-acetil)-izonipekotinska kiselina.

Poželjni su u okviru najpogodnije grupe farmaceutski kompoziti gdje je drugi spoj

(-)-trans-7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2-okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoksazepin-3-octena kiselina.

(-)-N-trans-(7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2-okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzotiazepin-3-acetil)-izonipekotinska kiselina.

(-)-N-trans-(7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2-okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoksazepin-3-acetil)- izonipekotinska kiselina.

(-)-N-trans-(7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2-okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoksazepin-3-acetil)-L-glutamil-α-metil ester.

Poželjni su u okvitu najpogodnije grupe farmaceutski kompoziti gdje je drugi spoj

(-)-trans-7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2-okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzotiazepin-3-octena kiselina.

Poželjni su u okviru najpogodnije grupe farmaceutski kompoziti gdje je prvi spoj

(3β,5α,25R)-3-((β-D-celobiozil)oksi)spirostan-11-on i drugi spoj (-)-trans-7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2 -okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzotiazepin-3-octena kiselina.

(3β,5α,25R)-3-((β-D-celobiozil)oksi)spirostan-11-on i drugi spoj (-)-N-trans-(7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2 -okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzotiazepin-3-acetil)-izonipekotinska kiselina.

(3β,5α,25R)-3-((β-D-celobiozil)oksi)spirostan-11-on i drugi spoj (-)-trans-7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2 -okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoksazepin-3-octena kiselina.

(3β,5α,25R)-3-((β-D-celobiozil)oksi)spirostan-11-on i drugi spoj (-)-N-trans-(7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2 -okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoksazepin-3-acetil)-izonipekotinska kiselina.

(3β,5α,25R)-3-((β-D-celobiozil)oksi)spirostan-11-on i drugi spoj (-)-N-trans-(7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2 -okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoksazepin-3-acetil)-L-glutamil-α-metil ester.

(3β,5α,25R)-3-((β-D-celobiozil)oksi)spirostan-11-on i drugi spoj (-)-N-trans-(7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil -1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoksazepin-3-acetil)-izonipekotinska kiselina. Drugi aspekt ovog izuma je metoda za tretiranje hiperkolesterolemije kod sisavaca koje obuhvaća davanje sisavcima koji pate od hiperkolesterolemije inhibitor sinteze kolesterola kao što je opisano gore i inhibitor apsorpcije kolesterola kao što je opisano gore.

Još jedan aspekt ovog izuma je metoda za liječenje ateroskleroze kod sisavaca koja obuhvaća davanje sisavcima koji pate od ateroskleroze inhibitor sinteze kolesterola kao što je opisano gore i inhibitor apsorpcije kolesterola kao što je opisano gore.

Još jedan aspekt ovog izuma je pribor koji sadrži inhibitor apsorpcije kolesterola i inhibitor sinteze kolesterola kao što je opisano gore u odvojenom obliku.

I još jedan aspekt ovog izuma je da se bilo koji od prvih spojeva ovoga izuma opisanih gore (ili bilo koji spoj izabran iz bilo koje gornje grupe prvih spojeva) i bilo koji od drugih spojeva ovoga izuma opisanih gore (ili bilo koji spoj izabran iz bilo koje gornje grupe drugih spojeva) može koristiti u sinergističkoj farmaceutskoj kompoziciji ili metodi liječenja za gore navedene bolesti gdje je količina prvog spoja samog i količina drugog spoja samog nedovoljna da postigne terapeutski efekt i gdje je kombinirani efekat količine terapeutskog agensa veći nego suma terapeutskih efekata koji postižu količine individualnih terapeutskih agenasa, i farmakološki prihvatljivo otapalo ili nosač.

Spojevi Formula IA’, I, IA i IB su ovdje definirani kao pojedinačni enantiomeri koji imaju apsolutnu stereokemiju opisanu Formulama IA’, I, IA i IB.

Ovaj izum opisuje steroidne glikozide kod kojih je šećer supstituiran (npr., sa karbamoil, tilkarbamoil acil i silil grupama). U nomenklaturi (vidjeti Primjere i Pripremanje) sve takve grupe su ovdje definirane kao supstituirane na kisiku osim ako nije drugačije dano kao dezoksi.

Z ostatak opisan gore u steroidnom glikozidu je ovdje definiran tako da se čita s lijeva u desno (tj., lijevi ili prvi atom je vezan za molekulu šećera, a ne R6).

C5-C6 isprekidana linija u gornjem steroidnom ostatku ovdje je definirana kao opciona ugljik-ugljik dvostruka veza.

Minus ili plus u zagradi upotrijebljen u nomenklaturi ovdje daje smjer skretanja ravnine polarizirane svjetlosti od strane određenog stereoizomera.

Kemičar uobičajene obučenosti će prepoznati da određene kombinacije heteroatoma koji sadrže supstituente dane u ovom izumu definiraju spojeve koji će biti manje stabilni pri fiziološkim uvjetima (npr., oni koji sadrže acetalne ili amino veze).

Prema tome, takvi spojevi su manje poželjni.

Farmaceutska kombinacija kompozita ovoga izuma daje veću redukciju LNG kolesterola nego što se postiže sa istim dozama samo inhibitora apsorpcije kolesterola ili samo inhibicije sinteze kolesterola. Tako, ove kombinacije imaju sinergističko djeliranje, smanjujući razinu plazmatskog LNG-kolesterola znatno više nego što bi se postiglo upotrebom samo pojedinačnih agenasa. Ovaj izum daje značajan doprinos osiguravajući kompozite koje daju veliko smanjenje koncentracije plazmatskog kolesterola što rezultira u prevenciji, zadržavanju, i/ili regresiji ateroskleroze i smanjujući rizik od KBS.

Druge karakteristike prednosti bit će vidljive iz specifikacija i patentnih zahtjeva koji opisuju izum.

Detaljan opis izuma

SHEMA I

[image]

SHEMA II

[image]

SHEMA III

[image]

Prvi spoj izuma je inhibitor apsorpcije kolesterola kod sisavaca. Primjeri inhibitora apsorpcije kolesterola opisani su u Sadržaju izuma gore. Drugi inhibitori apsorpcije kolesterola mogu se identificirati pomoću njihove sposobnosti da inhibiraju apsorpciju kolesterola kod eksperimentalnih životinja kao što je hrčak (Harwood et al., J. Lip. Res., 1993; 34; 377-95) i bit će jasni onima koji su informirani.

Spojevi Formule IA’ (opisani gore), inhibitori apsorpcije kolesterola, mogu se pripremiti prema slijedećim metodama. Praćenjem ovih metoda, procedura za pripremanje perhidroksi steroidnih glukozidnih intermedijera, i time su opisane procedure za dobivanje spoja Formule IB (opisane gore).

Općenito, spojevi Formule IA’ ovoga izuma mogu se napraviti kupliranjem željenog zaštićenog šećera halogenidom i steroida što je praćeno uklanjanjem zaštite.

Željene funkcionalne grupe/supstituenti se vezuju (prateći proizvoljne selektivne zaštite) i radi se završno uklanjanje zaštite. Slijedeći tekst (koji je povezan sa gornjim shemama) daje detaljan opis.

Prema Reakcijskoj Shemi 1, spojevi željene Formule I i IA gdje je steroid steroidni ostatak spojeva Formule I i IA opisan gore (tj., gdje su Q1, Q2, C3, C5, C25 opisani gore) i C1’, C1’’, R1, R2 i R3 su definirani gore mogu se pripremiti uklanjanjem zaštite (npr., deacetiliranjem) odgovarajućeg spoja Formule II gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore, (mada se u Detaljnom opisu može uočiti da kada je Q1 i/ili Q2 hidroksi, hidroksi može biti u uobičajenom zaštitnom obliku kao rezultat zaštite šećera). C1’ i C1’’ su definirani kao gore i R1, R2 i R3 su definirani kao gore ili su konvencionalna zaštitna hidroksilna grupa (-OAc).

Tipično uklanjanje zaštite (poželjno je deacetiliranje), se postiže spajanje spoja Formule II sa nukleofilnom bazom kao što je natrij-metoksid ili kalij-cijanid u polarnom otapalu kao što je metanol, tetrahidrofuran, n-propanol ili njihova smjesa na temperaturama od oko 0°C do oko 100°C (tipično na temperaturi okoline) i tlaku od oko 0,035 bar do oko 3,5 bar (tipično okoline) za oko 0,25 sati do oko 2 sata.

Dalje, spojevi mogu sadržati silil zaštitnu grupu koja se može ukloniti tretiranjem deaciliranog produkta gore sa kvaternernim amonijum fluoridom tetrabutilamonijumfluorid u anhidriranom otapalu kao što je tetrahidrofuran na temperaturama od oko 0°C do oko 50°C (tipično na temperaturi okoline) za oko 0,1 sati do oko 3 sata.

Poželjni spojevi Formule II gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore C1’ i C1’’ su definirani kao gore i najmanje jedan od R1, R2 i R3 je vodik se mogu pripremiti redukcijom odgovarajućeg halogeniranog spoja. Tipično, redukcija se može izvesti tretiranjem halogeniranog spoja (Br i J su najpovoljniji) sa reducirajućim agensom kao što je tri-n-butil kositar hidrid i inicijatorom radikala kao što je azoizobutilnitril (AIBN) u anhidriranom aprotičnom otapalu kao što je toluen na temperaturi refluksa oko 1 sat do oko 5 sati.

Poželjni spojevi Formule II gdje je steroid ostatak opisan gore, C1’ i C1’’ su definirani kao gore i najmanje jedan od R1, R2 i R3 je halogen (ili hidroksi) se može pripremiti halogeniranjem odgovarajućeg spoja Formule V gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore C1’ i C1’’ su definirani kao gore i najmanje jedan od R1, R2 i R3 su svaki nezavisno hidroksi ili konvencionalna zaštitna hidroksil grupa kao što je –OAc.

Općenito halogeniranje se može izvoditi prvo pripremanjem odgovarajuće aktiviranog i zaštićenog oblika spoja Formule V (npr., mezilat Formule V) uz tretiranje željenim litij-halogenidom. Tipično se mezitiliranje može izvoditi kombiniranjem spoja Formule V i mezilklorida u prisustvu baze, povoljno baznog amina kao što je trietilamin i katalitičke količine katalizatora kao što je dimetilaminopiridin u aprotičnom anhidriranom otapalu kao što je anhidrirani diklormetan na temperaturi od oko -20°C do oko 20°C od oko sata do oko 4 sata. Nastali mezilat se tretira odgovarajućim litij-halidom u polarnom otapalu kao što je N,N-dimetilformamid na temperaturi od oko 70°C do oko 100°C od oko jedan sat do oko tri sata.

Alternativno, jodiranje se može izvesti kombiniranjem joda i odgovarajućeg spoja Formule V u anhidriranom aprotičnom otapalu kao što je toluen (u prisustvu imidazola i trifenilfosfina) uz refluks i tlaku okoline od četiri do oko osam sati.

Alternativno, fluoriranje se može izvesti kombiniranjem odgovarajućeg spoja Formule V sa agensom za fluoriranje kao što je dialkilaminosulfonijum trifluorid (npr. DAST) u anhidriranom aprotičnom otapalu kao što je dimetoksietan ili dikloratan na temperaturi od oko -10°C do oko 10°C i poslije 20 min do oko 2 sata temperatura se podigne do oko 30°C do oko 60°C za oko 1 sat do oko 4 sata.

Alternativno, selektivno bromiranje (tj., R2=Br) se može izvesti tretiranjem odgovarajućeg spoja Formule V (gdje su C6’’ i C4’’ supstituirani sa OH i C6’ je supstituiran sa konvencionalnom zaštitnom hidroksil grupom kao što je –OAc) sa ugljiktetrabromidom i trifenilfosfinom i baznim aminom kao što je piridin u anhidriranom aprotičnom otapalu kao što je diklormetan na temperaturi okoline za oko 6 do oko 48 sati.

Poželjni spojevi Formule II gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore, C1’ i C1’’ su definirani kao gore i najmanje jedan od R1, R2 i R3 je (C1-C6)alkoksi(C1-C6)alkoksi se može pripremiti alkiliranjem zaštićenog spoja Formule V gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore, C1’ i C1’’ su definirani kao gore i R1, R2 i R3 su svaki nezavisno hidroksi (ili konvencionalna zaštitna hidroksil grupa kao što je –OAc).

Tipično, odgovarajući spoj Formule II se kombinira sa viškom odgovarajućeg alkoksialkilhalogenida i trialkil amina kao što je diizopropiletilamin u aprotičnom anhidriranom otapalu kao što je dikloretan na temperaturi od oko 15°C do oko 35°C (tipično na temperaturi okoline) od oko jednog do oko osam sati uz miješanje od jednog do oko 4 sata na temperaturi od oko 40°C do oko 70°C.

Poželjni spojevi Formule II gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore, C1’ i C1’’ su definirani kao gore i najmanje jedan od R1, R2 i R3 je Z-R4 i R4 sadrži keto grupu može se pripremiti oksidacijom odgovarajućeg hidroksi supstituiranog spoja Formule II. Tipično, oksidacija se izvodi tretiranjem hidroksi spoja oksidacijskim sredstvom, kao što je piridinijklorkromat, u anhidriranom halogeniranom otapalu kao što je diklormetan na temperaturi od oko -0°C do oko 30°C, općenito na temperaturi okoline, od oko 2 do oko 24 sata.

Slično, spojevi Formule II opisani u gornjem paragrafu gdje R4 sadrži alkilsulfonil grupu mogu se pripremiti oksidacijom odgovarajućeg alkilsulfanil supstituiranog spoja Formule II. Tipično, odgovarajući spoj Formule II se tretira sa jednim ekvivalentom peroksi kiseline kao što je metaklorbenzojeva kiselina u anhidriranom halogeniranom otapalu kao što je diklormetan na temperaturi okoline od oko jednog do oko 6 sati. Odgovarajući alkilsulfonil spoj Formule II može se pripremiti na analogni način koristeći u višku peroksi kiselinu.

Poželjni spojevi Formule II gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore, C1’ i C1’’ su definirani kao gore i najmanje jedan od R1, R2 i R3 je Z-R4 i R4 je alkilaminokarbonilalkil može se pripremiti iz odgovarajućeg karboksi alkil spoja Formule II preko amida. Tipično, amid se stvara reakcijom karboksilne kiseline sa karboksilnim aktivacijskim agensom kao što je supstituirani karbodiimid i hidroksibenztriazolom i primarnog i sekundarnog amina izabranog tako da da željeni produkt. Reakcija se tipično izvodi u anhidriranom aprotičnom otapalu kao što je diklormetan na temperaturi okoline od oko 0,5 do oko 6 sati. Karboksi alkil spojevi Formule II korišteni u ovoj proceduri se tipično dobivaju iz odgovarajućeg benzil estera (pripremanje benzil estera će biti opisano) hidrolizom. Ovako se ester tretira katalizatorom za hidrogeniranje kao što je paladij na ugljiku u alkoholnom otapalu kao što je metanol i na tlaku od 1 do 4 bar vodika, tipično 2 bar, za oko 0,5 do oko 8 sati.

Poželjni spojevi Formule 1 gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore, C1’ i C1’’ su definirani kao gore i najmanje jedan od R1, R2 i R3 je –O-C(=O)-R4 ili –O-C(=O)-N(R5)-R4 se može pripremiti aciliranjem odgovarajućeg spoja Formule VI kad su Q1, Q2, C1’ i C1’’ definirani kao gore (vidjeti Shemu II). Alternativno, željeni spojevi Formule II gdje je najmanje jedan od R1, R2 i R3 –O-C(=O)-R4 –O-C(=O)-N(R5)-R4 ili -O-C(=S)-N(R5)-R4 mogu se pripremiti aciliranjem odgovarajuće zaštićenog spoja Formule V gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore, C1’ i C1’’ su definirani kao gore i C6’ i C6’’ i C4’’ su svaki nezavisno supstituirani sa hidroksi ili konvencionalno zaštićeni hidroksilnom grupom kao što je -OAc (vidi Shemu I).

Neselektivna smjesa estera i karbamoiloksi supstitucija na R1 i R2 se postiže tretiranjem odgovarajuće zaštićenog perhidroksi šećera Formule VI sa odgovarajućim kiselinskim kloridom ili izocijanatom i aminom koji također djeluje kao anhidrirano otapalo kao što je piridin u prisustvu agensa za suženje kao što su molekulska sita na temperaturi od oko -60°C do oko 25°C od oko 5 min do oko 24 sata pri čemu se temperatura podigne na temperaturu okoline. Različiti produkti i proizvodne smjese nastaju u zavisnosti o količini kiselinskog klorida ili izocijanata koji se koristi, trajanja reakcije i reaktivnosti kiselinskog klorida ili izocijanata.

Alternativno, selektivnije aciliranje se postiže tretiranjem odgovarajuće zaštićenog (npr., -OAc) steroidnog glukozida spoja Formule V sa odgovarajućim izocijanatom ili kiselinskim kloridom u prisustvu baze, pogodno amina kao što je trietilamin ili piridin i katalitičke količine katalizatora za aciliranje kao što je dimetilaminopiridin u anhidriranom aprotičnom otapalu kao što je diklormetan na temperaturi od oko -20°C do oko 20°C. Reakcijska smjesa se ostavi zagrijati do temperature okoline od 10 min do oko 2 sata. Karbamoiliranje se može postići tretiranjem odgovarajućeg zaštićenog spoja Formule V sa odgovarajućim izocijanatom u prisutnosti bakar-klorida u polarnom aprotičnom otapalu kao što je dimetilformamid na temperaturi okoline tijekom 2 do 10 sati.

Karbamoiliranje se može također postići tretiranjem odgovarajuće zaštićenog spoja Formule V sa odgovarajućim izocijanatom u prisustvu organokositrenog katalizatora kao što je dibutil kositar dilaurat u anhidriranom aprotičnom otapalu kao što je diklormetan na temperaturi okoline tijekom 2 do 24 sata.

U nastavku, poželjni spojevi Formule II gdje je najmanje jedan od R1, R2 i R3 karbamoiloksi ili tiokarbamoiloksi ostatak može se pripremiti tretiranjem odgovarajuće zaštićenog spoja (npr., OAc) steroidnog glikozida Formule V sa ekvivalentom fosgena kao što je karbonildiimidazol ili ekvivalent tio-fozgena kao što je tiokarbonildiimidazol u prisustvu baze, pogodno amina kao što je diizopropiletilamin u anhidriranom aprotičnom otapalu kao što je dikloretan na temperaturi od 15°C do oko 30°C (tipično temperatura okoline) od oko 1 do oko 4 sata. Odgovarajući amin se doda i reakcijska smjesa se miješa na istoj temperaturi od oko 1 do oko 6 sati i zagrijava ako je potrebno od oko 40°C do oko 60°C od oko 1 do oko 6 sati.

Poželjni spojevi Formule II gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore, C1’ i C1’’ su definirani kao gore i najmanje jedan od R1, R2 i R3 je –NH-C(=O)-R4 ili NH-C(=O)-N(R5)R4može se pripremiti aciliranjem odgovarajuće zaštićenog spoja Formule III gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore, C1’ i C1’’ su definirani kao gore i najmanje jedan od R1, R2 i R3 je amino ili hidroksi.

Tipično amid se može pripremiti tretiranjem odgovarajuće zaštićenog (npr., OAc) steroidnog glikozidnog amina sa odgovarajućim kiselinskim anhidridom ili kloridom u anhidriranom aprotičnom otapalu kao što je diklormetan (u prisustvu odgovarajućeg amina) za oko 1 do oko 3 sata na temperaturi od 0°C do oko 25°C.

Alternativno, urea se može pripremiti tretiranjem odgovarajuće zaštićenog (npr., OAc) steroidnog glikozidnog amina sa odgovarajućim izocijanatom u prisustvu baze, poželjno amina kao što je trietilamin u anhidriranom aprotičnom otapalu kao što je diklormetan za oko 1 do oko 3 sata na temperaturi od 0°C do oko 25°C.

Poželjni spojevi Formule III gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore, C1’ i C1’’ su definirani kao gore i najmanje jedan od R1, R2 i R3 je amino, azido ili hidroksi mogu se pripremiti iz odgovarajućeg mezilatiranog spoja Formule IV supstitucijom sa azidom uz željenu redukciju.

Tipični mezilatni spoj se podvrgne djeliranju metalnog azida kao što je natrij azid u anhidriranom aprotičnom otapalu kao što je N,N-dimetilformamid (u inertnoj atmosferi) na temperaturi od oko 70°C do oko 150°C od oko 2 do oko 10 sati. Pripremanje takvog mezilatnog spoja je opisano gore za halogeniranje litij-halogenidom. Tipični azido spojevi se reduciraju do odgovarajućih amina kontaktom sa vodikom u prisutnosti plemenitog metala kao katalizatora kao što je paladij na ugljiku na temperaturi okoline za oko 4 do oko 48 sati, pod tlakom od oko 1 do oko 3 bar.

Poželjni spojevi Formule V (odgovarajuće zaštićeni da bi se dobila željena supstitucija) gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore, C1’ i C1’’ su definirani kao gore i C6’ i C6’’ i C4’’ su svaki nezavisno supstituirani sa hidroksi ili konvencionalno zaštićeni hidroksilnom grupom kao što je –OAc mogu se pripremiti pomoću konvencionalne metode zaštitnih grupa u organskoj sintezi koja je poznata iz odgovarajućih spojeva Formule VI gdje su Q1, Q2, C3, C5, C25, C1’ i C1’’ definirani gore.

Za opći opis zaštitnih grupa i njihovu upotrebu, vidjeti T.W. Greene, Protective Groups in Organic Synthesis, John Wiley&Sons, New York, 1991. U nastavku, kao pomoć u pripremanju gore zaštićenih steroidnih glikozida, slijedeći paragrafi opisuju pripremu različitih zaštićenih steroidnih glikozida iz njihovih analoga upotrebom kombinacije različito selektivnih zaštitnih grupa i sekvencijalnih zaštitnih reakcija.

Na primjer, željeni spoj Formule V gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore, C1’ i C1’’su definirani kao gore, C6’ i C6’’ su supstituirani sa hidroksi i C4’’ je supstituiran sa OP gdje je P acil i može se pripremiti iz odgovarajućeg perhidroksi steroidnog glikozida sililiranjem, aciliranjem i desililiranjem. Odgovarajući spoj Formule VI reagira sa bazom, poželjno sa aminom kao što je imidazol, voluminoznijim agensom za sililiranje izabranim za željenu selektivnu zaštitu kao što je trisupstituiran sililhalogenid, posebno t-butildifenilsililklorid i katalitička količina katalizatora za siliranje kao što je dimetilaminopiridin u anhidriranom aprotičnom otapalu kao što je N,N-dimetilformamid na oko -20°C do oko 10°C a zatim uz miješanje na temperaturi okoline od oko 1 do oko 6 sati. Poslije završetka sililiranja, pogodan amin kao što je piridin i agens za aciliranje izabrani da ostvare željenu acil zaštitnu grupu definiranu gore kao što je dodavanje acetanhidrida na temperaturi okoline i tlaku od oko 3 do 12 sati da bi se postiglo acetiliranje da bi se dobio željeni zaštišćeni spoj. Dobijeni produkt se tretira sa HF u anhidriranom aprotičnom otapalu kao što je piridin od oko -20°C do oko 10°C uz miješanje na temperaturi okoline za oko 2 do oko 6 sati da bi se dobio željeni zaštićeni spoj. Ovaj produkt sadrži hidroksilne grupe u položajima C6’ i C6’’ koje se mogu dalje razlikirati reakcijama sa jednim ekvivalentom zaštitne grupe kao što je acetanhidrid u prisustvu baze, kao što je piridin na temperaturi okoline za oko 1 do oko 4 sata. Ovaj postupak daje smjesu spojeva Formule V koja sadrže jednu hidroksilnu grupu bilo u položaju C6’ i C6’’ koja se može razdvojiti kromatografski.

U nastavku, željeni spoj Formule V gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore, C1’ i C1’’ su definirani kao gore, C6’’ i C4’’ su supstituirani sa hidroksi i C6’ je supstituiran sa OP gdje je P acil i može se pripremiti iz odgovarajućeg perhidroksi steroidnog glikozida ketaliziranjem, aciliranjem i deketaliziranjem. Odgovarajući spoj Formule VI reagira sa acetalom ili ketalom izabranim tako da željenu cikličku zaštitnu grupu definiranu gore kao što je benzaldehiddimetilacetal ili anisaldehiddimetilacetal u prisustvu katalitičke količine jake kiseline kao što je kampfosulfonska kiselina u anhidriranom aprotičnom otapalu kao što su kloroform ili dikloretan uz za oko 2 do oko 6 sati na tlaku okoline. Poslije završetka ketalizacije, pogodna baza je amin kao što je piridin, katalitička količina katalizatora za aciliranje kao što je dimetilaminopiridin i agens za aciliranje izabrani da ostvare željenu acil zaštitnu grupu definirnu gore kao što je acetanhidrid ili kloracetanhidrid se doda na temperaturi od oko -20°C do oko 10°C uz miješanje na temperaturi okoline od oko 12 sati da bi se dobio željeni zaštićeni spoj. Dobijeni produkt se tretira sa 80% octenom kiselinom u vodi na 50°C do oko refluksa za oko 1 do oko 4 sata ili sa trifluorooctenom kiselinom u smjesi diklormetana i metanola na temperaturi okoline od oko 2 do oko 8 sati da bi se dobio željeni zaštićeni spoj.

Ovaj produkt se može dalje prevesti u spoj Formule V gdje su C6’ i C6’’ supstituirani sa OP gdje je P acil ili silil zaštitna grupa i C4 je supstituiran sa OH selektivnim sililiranjem. Tipično sililiranje se izvodi tretiranjem odgovarajućeg spoja Formule V gdje su C4’’ i C6’’ supstituirani sa OH i C6’ je supstituiran sa OP gdje je P acil zaštitna grupa sa sililirajućim agensom kao što je terc-butil-dimetilsililklorid i bazom, pogodno aminom kao što je imidazol u polarnom aprotičnom otapalu kao što je dimetilformamid na temperaturi okoline za oko 12 do oko 48 sati.

Željeni spoj Formule V gdje je steroid steroidni ostatak opisan gore, C1’ i C1’’ su definirani kao gore, C6’’ i C4’’ su supstituirani sa hidroksi i C6’ je supstituiran sa OP gdje je P eterska zaštitna grupa može se pripremiti iz odgovarajućeg perhidroksi steroidnog glikozida ketaliziranjem, eterifikacijom i deketaliziranjem. Ketalizacija se izvodi kao što je opisano gore. Poslije završetka, otapalo se ukloni i zamijeni polarnim aprotičnim otapalom kao što je dimetil-formamid. Doda se odgovarajući alkilhalogenid kao što je benzilbromid, uz dodavanje jake baze kao što je natrij-hidrid na temperaturi od oko -20°C do oko 0°C za oko 1 do oko 12 sati. Deketaliziranje se izvodi kao što je opisano gore.

Sljedeći paragrafi opisuju pripremu intermedijera Formule VI za spoja Formule IA’. Oni također opisuju pripremu spoja Formule IB.

Poželjni spojevi Formule VI (i također spojevi Formule IB opisani gore) mogu se pripremiti iz odgovarajućih peracetiliranih steroidnih glikozida Formule VII ili Formule VIII deacetiliranjem kao što je opisano gore. Za ove spojeve Formule VI ili Formule IB gdje C1’ je anomerni hidroksi, alfa anomerizacija se izvodi na odgovarajućem spoju Formule VII gdje je C1’ anomerni hidroksi beta prije deacetiliranja. Stereokemijski termini alfa i beta se odnose na konfiguraciju ugljika u šećeru. Tipično, anomerizacija se izvodi tretiranjem sa mineralnom kiselinom kao što je bromovodična kiselina u anhidriranom aprotičnom otapalu kao što je metilenklorid na temperaturi od 20°C do oko 40°C (tipično okoline) za najmanje 24 sata, tipično sedam dana.

Poželjni spojevi Formule VII mogu se pripremiti kupliranjem odgovarajućeg acetiliranog šećernog halogenida (npr., bromida) i steroida. Specifičnije, za one spojeve Formule VII gdje šećer nije beta-D-maltozil, beta-D-gentobiozil ili beta-D-2-acetamido-2-deoksi-glukopiranozil, cinkfluorid promovira kupliranje odgovarajućeg spoja Formule IX i paracetiliranog šećernog halogenida. Za one spojeve Formule VII gdje je šećer beta-D-maltozil, beta-D-gentobiozil ili beta-D-2-acetamido-2-deoksi-glukopiranozil, merkuribromid i merkuricijanid promoviraju kupliranje odgovarajućeg spoja Formule X (npr., trimetilsilileter spoja Formule IX) i paracetiliranog šećernog halogenida.

Općenito, cinkflurid promovira kupliranje odgovarajućeg spoja Formule IX i paracetiliranog šećernog bromida u ne-protičnom, anhidriranom inertnom otapalu (npr., acetonitrilu) na temperaturi od oko 20°C do oko 100°C za oko 0,5 do oko 12 sati. Tipično oko 0,5 do 4 ekvivalenata (bazirano na spoju Formule IX) cinkfluorida se koristi i koristi se od oko 0,5 do 3 ekvivalenta acetiliranog šećer bromida. Kupliranje je povoljno katalizirano kiselinom i posebno hidrohalogena kiselina, koja nastaje tijekom reakcije, koristi se kao katalizator. Poželjni spojevi mogu se pripremiti pri tlaku od 0,03 do 3,5 bar, mada se tipično koristi tlak okoline. U pogodnoj izolacijskoj tehnici glikozidi se mogu taložiti iz sirove filtrirane reakcijske smjese (npr., nastala acetonitrilna otopina) adicijom od oko 25% do 75% vode i ostatka alkohola (npr., metanol). Taloženje produkta iz vodene otopine metanola/acetomnitrila zahtijeva manje posla nego ekstakcijska izolacija, i osigurava produkt veće čistoće. Općenito, merkuribromid i merkuricijanid promoviraju kupliranje odgovarajućeg spoja Formule X i paracetiliranog šećernog bromida u aprotičnom, anhidriranom otapalu kao što je metilenklorid na temperaturi od oko 20°C do oko 100°C za oko 0,5 do oko 6 sati. Tipično se koristi oko 0,5 do 4 ekvivalenata (bazirano na paracetiliranom šećernom bromidu) merkuribrumida i merkuricijanida i od oko 0,5 do 3 ekvivalenta paracetiliranog šećer bromida. Poželjni spojevi mogu se pripremiti pri tlaku od 0,03 do 3,5 bar, mada se tipično koristi tlak okoline. Pogodno se izoliraju kao što je opisano za cinkfluorid promovirano kupliranjem spoja Formule IX.

Poželjni spojevi Formule X kao što su opisani gore mogu se pripremiti sililiranjem odgovarajućeg spoja Formule IX. Uopće, spoj Formule IX, baza kao što je trietilamin i aktivirano trialkilsilil spoj (npr., trimetilsililtrifluorometansulfonat ili trimetilsililklorid) reagiraju u aprotičnom, anhidriranom otapalu kao što je metilenklorid na temperaturi manjoj od 10°C za oko 0,5 do oko 2 sata.

Općenito, procedure opisane gore mogu se kombinirati da osiguraju spojeve Formule I gdje su R1, R2 i/ili R3 različite grupe (npr., halogeniranje praćeno karbamoilacijom).

Polazni materijal za gore opisane reakcijske sheme (npr., alkoksialkil halogenidi, kiselinski anhidridi, paracetilirani šećerni halogenidi, kiselinski kloridi, izocijanati, steroidi, amini, trialkilsililkloridi, karbonildiimidazoli, tiokarbonildiimidazoli, kiselinski derivati, acetali, ketali, zaštitne grupe) su dostupni gotovi ili se mogu lako sintetizirati uobičajenim metodama organske sinteze. Na primjer neki spojevi ovoga izuma zahtijevaju sintezu supstituiranih amina i karboksilnih kiselina koji će eventualno postati R4 grupe. Takve sinteze su standardne i poznate.

U nastavku, kao pomoć u pripremanju gore navedenih steroida, sljedeći paragrafi opisuju pripremanje različitih spojeva Formule IX. Literaturne reference za pripremanje steroida Formule IX (gdje je Q1 metilen i Q2 i stereokemija C5 vodika (ili nepostojanje C5 vodika) i C25 ugljika su kao što je opisano dolje) su opisani u Tablicama I i II.

TABLICA I

Spojevi formule IX gdje je Q1 metilen i C3 hidroksi grupa je beta

[image]

TABLICA II

[image]

Sljedeći paragrafi opisuju i/ili daju literaturne reference za pripremanje različitih steroida koji se koriste kao polazni materijal (tj., alternativna stereokemija u C3 položaju i oksigenacija i različiti epimeri na C11(Q1) i C12(Q2) zz gornjih spojeva Formule IX opisanih u Tablici I. Općenito pripremanje različitih oksidiranih steroida je nezavisno od stereokemije na C3, C5 (ili bez C5 vodika) i C25 položaju.

Tako, ako se jednom postigne odgovarajuća stereokemija na C3, C5 (ili bez C5 vodika) i C25 položaju gdje su Q1 i Q2 svaka metilen ili Q1 je metilen i Q2 karbonil, različiti oksidacioni produkti spoja na Q1 i Q2 se mogu dobiti od njih.

Neke metode dobivanja opisanih ovdje će zahtijevati zaštitu od daljinske funkcionalnosti (tj., C11(Q1) i C12(Q2). Potreba za ovim zaštitnim grupama će varirati u zavisnosti od prirode daljinske funkcionalnosti i uvjeta metode. Ove potrebe su već određene. Za opći pregled zaštitnih grupa i njihovu upotrebu, vidjeti T.W. Greene, Protective Groups In Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1981.

Spojevi Formule IX gdje je Q1 metilen, Q2 metilen ili karbonil i C3 hidroksi je beta mogu se prevesti u odgovarajuće spojeve Formule VIII gdje je C3 hidroksi alfa pomoću sljedeće dvije procedure. Ove preparativne metode se mogu nezavisno koristiti C25 stereokemiji.

Ako je Q2 karbonil, karbonil se štiti kao ketal (npr., etilenketal), reakcijom steroida sa etilen glikolom i kiselim katalizatorom prema proceduri Engel Rakhit Can. J. Chem, 40, 2153, 1962. Kada je C5 vodik alfa, C3 hidroksi grupa se oksidira do keto koristeći piridinijklorokromat (PHH) u metilenkloridu pri uvjetima okoline. Kada se C3 keton reducira sa sterno ometenim reducirajućim sredstvom kao što je K-Selectride® agens za redukciju, na niskim temperaturama u tetrohidrofuranu pri čemu se dobija C3 alfa alkohol prema Gondos i Orr, J. Chem. Soc. Chem. Commun. 21, 1239, 1982. Ako je pogodno, Q2 zaštitna grupa se uklanja kiselinom, kao što je klorovodična kiselina, u odgovarajućem otapalu kao što je aceton.

Za one spojeve gdje C5 vodik je beta koristi se ista procedura kao i kada je C5 vodik alfa osim što se C3 keton reducira pomoću natrij-borhidrida u etanolu da se dobije C3 alfa alkohol.

Reakcijska Shema III ilustrira reakcijske puteve za dobivanje spoja Formule IX gdje su Q1(C11) i Q2(C12) definirani gore polazeći iz spoja Formule IX gdje je Q1 metilen i Q2 je karbonil.

Općenito, metode za dobivanje ovih spojeva se mogu naći u L.F. Fieser i M. Fieser, Steroids, Reinhold Pub.Corp., New York, 1959 i navedenim referencama, ali sljedeći opisni tekst (koji je ključ za reakcijsku Shemu III) daje specifično objašnjenje.

Ukratko, prema reakcijskoj Shemi III metodi 1, polazni materijal se acilira i bromira prema proceduri opisanoj u J. Chem. Soc, 1956, 4344. Intermedijer se onda reducira sa litijaluminijhidridom i tretira se srebro-oksidom procedurom sličnoj onoj koja je opisana u Helv. Acta. Chim., 1953, 36, 1241. Nastali

β-11,12-epoksid se otvara sa trikloroctenom kiselinom, saponificira i reducira sa cinkom i octenom kiselinom koristeći proceduru opisanu u J. Chem. Soc., 1956, 4330 da se dobije produkt pokazan za metodu 1.

U metodi 2, polazni materijal se selektivno acetilira koristeći proceduru opisanu J. Chem. Soc., 1956, 430. Koristeći proceduru opisanu u Org. Syn., 1976, 55, 84, nastali produkt se oksidira sa krom-trioksidom i piridinom. Koristeći proceduru opisanu u Synhesis, 1973, 790, nastali produkt se saponificira sa kalij-cijanidom u vodi, metanolu i THF pri čemu se dobiva produkt pokazan za metodu 2.

U metodi 3, polazni materijal se prevodi u odgovarajući toluensulfonilhidrazom koji se zatim tretira natrij-metoksidom koristeći proceduru sličnu onoj u J. Am. Chem. Soc., 1954, 76, 4013. Nastali 11-en produkt se oksidira sa osmij-tetraoksidom i N-metilmorfolin-N-oksidom prema proceduri opisanoj u Tetrahedron Letters, 1976, 1973 pri čemu se dobiva produkt pokazan za metodu 3.

U metodi 4, polazni materijal se monobromira koristeći proceduru upisanu u US Pat. No. 3,178, 418. Hidroliza ovog intermedijera je izvršena koristeći proceduru opisanu u J. Chem. Soc., 1956, 4330 pri čemu se dobiva produkt pokazan za metodu 4.

U metodama 5 i 6 polazni materijal se reducira sa litijaluminijhidridom prema proceduri opisanoj u J. Am. Chem. Soc., 1954, 76, 4013. Dva produkta pokazana za metode 5 i 6 se razdvajaju kromatografski.

U metodu 7, polazni materijal se reducira sa litijaluminijhidridom prema proceduri opisanoj u J. Am. Chem. Soc., 1951, 73, 1777 pri čemu se dobiva pokazani produkt.

U metodi 8, polazni materijal se reducira sa litijem i amonijakom prema proceduri opisanoj u J. Am. Chem. Soc., 1953, 75,1282 pri čemu se dobiva pokazani produkt. U metodi 9, polazni materijal se acetilira prema proceduri opisanoj u J. Am. Chem. Soc., 1955, 77, 1632 pri čemu se dobiva smjesa acetata iz koje se može izolirati 3,11-diacetat. Nezaštićeni 12-alkohol se oksidira sa kromtrioksidom i piridinom prema proceduri opisanoj u Org. Syn., 1976, 55, 84. Saponifikacija acetata daje produkt prikazan za metodu 9.

U metodi 10, polazni materijal se diacetilira koristeći proceduru opisanu u J. Chem. Soc., 1956, 4330. Diacetat se reducira sa kalcijem i amonijakom koristeći proceduru opisanu u J. Chem. Soc., 1956, 4334 pri čemu se dobiva produkt pokazan za metodu 10.

U metodi 11 polazni materijal se reducira sa litijom i amonijakom prema proceduri opisanoj u J. Am. Chem. Soc., 1953, 75, 1282 pri čemu se dobiva pokazani produkt.

U metodi 12, polazni materijal se reducira sa litijaluminijhidridom prema proceduri opisanoj u J. Am. Chem. Soc., 1951, 73, 1777 pri čemu se dobiva pokazani produkt.

U metodi 13, polazni materijal se selektivno štiti na 3-alkoholu sa t-butildimetilklorsilanom i imidazolom koristeći proceduru opisanu u J. Am. Chem. Soc., 1972, 94, 6190. Koristeći proceduru opisanu u Org. Syn., 1976, 55, 84, nastali produkt se oksidira sa krom-trioksidom i piridinom. 3-alkohol se onda desililira fluorovodičnom kiselinom u acetonitrilu koristeći proceduru opisanu u J. Am. Chem. Soc., 1972, 94, 6190 pri čemu se dobiva produkt pokazan za metodu 13.

U metodi 14 polazni materijal se selektivno štiti na 3-alkoholu sa t-butildimetilklorsilanom i imidazolom koristeći proceduru opisanu u u J. Am. Chem. Soc., 1972, 94, 6190. Nastali intermedijer se rekira sa litijaluminijhidridom koristeći proceduru opisanu u J. Am. Chem. Soc., 1951, 73, 1777. Nastali intermedijer se selektivno acetilira na 12-alkoholu, sililira na 11-alkoholu sa trimetilsilitriflatom i 2,6-lutidinom koristeći proceduru opisanu u Tetrahedron Letters, 1981, 22, 3455, i onda deacetilira na 12-alkoholu sa litijaluminijhidridom i prigušuje vodenim amonijum-kloridom. 12-alkohol se oksidira sa krom-trioksidom i piridinom u metilenkloridu koristeći proceduru opisanu u Org. Syn., 1976, 55, 84, i onda desililira sa fluorovodičnom kiselinom u acetonitrilu koristeći proceduru opisanu u J. Am. Chem. Soc., 1972, 94, 6190 pri čemu se dobiva produkt pokazan za metodu 14.

Spojevi Formule IA’ koji su dobiveni i imaju asimetričan ugljikov atom mogu se razdvojiti na diastereoizomere na bazi njihovih fizičkokemijskih razlika poznatim metodama per se, na primjer, kromatografijom i/ili frakcionom prekristalizacijom.

Spojevi ovog izuma mogu sadržavati kisele ili bazne funkcionalne grupe koje stvaraju soli. Sve takve soli su u dosegu ovoga izuma i mogu se pripremiti uobičajenim metodama. Na primjer, mogu se pripremiti jednostavnim kontaktom kiseline i baze, obično u stehiometrijskom odnosu, ili u vodenom, nevodenom ili djelomično vodenom mediju, ako odgovara. Soli se izdvajaju ili filtriranjem, taloženjem sa neotapalom uz filtriranje, uparavanjem otapala ili, u slučaju vodenih otopina, liofilizoranjem, ako odgovara.

U nastavku, mnogi spojevi ovog izuma se mogu izolirati kao hidrati.

Dalje, poželjan kristalni monohidrat (3β,5α,25R)-3-[( β -D-celobiozil)oksi-]spirostan-11-on se može pripremiti izlivanjem spoja u metanolu na povišenoj temperaturi uz kristalizaciju.

Konačno, poželjan kristalni oblik (3β,5α,25R)-3-[(β-D-4”,6”-bis[2-fluorofenilkarbamoil]celobiozil)oksi] spirostan-12-on na primjer, može postojati kao tanke ljuskice u smjesi sa štapićima, može se pripremiti izlivanjem spoja u etilacetat ili acetonitril na povišenoj temperaturi uz kristalizaciju.

Drugi spoj ovog izuma je inhibitor sinteze kolesterola kod sisavaca. Sljedeći paragrafi opisuju detaljno primjere inhibitora sinteze kolesterola.

Svaki inhibitor HMG-CoA reduktaze se može upotrijebiti kao drugi spoj ovoga izuma. Termin inhibitor HMG-CoA reduktaze se odnosi na spojeve koji inhibiraju biokonverziju hidroksimetilglutaril-koenzima A u mevalinsku kiselinu kataliziranu enzimom HMG-CoA reduktaze. Takva inhibicija se lako određuje prema standardnim postupcima (npr., Meth. Enzymol. 1981; 71:455-509 i tamo navedene reference). Veći broj ovih spojeva je upisan uz reference dolje, no ostali inhibitori HMG-CoA reduktaze su poznati onima koji se bave ovom materijom. U.S. Pat. No. 4,231,938 (izum koji je uključen preko referenci) daje spojeve izolirane poslije uzgajanja mikroorganizama koji pripadaju rodu Aspergilus, kao što je luvastatin.

Također, U.S. Pat. No. 4,444,784 (izum koji je uključen preko referenci) daje sintetizirane derivate navedenih spojeva, kao što je simvastatin. Također, U.S. Pat. No. 4,739,073 (otkriće koje je uključeno preko referenci) daje supstituirane indole, kao što je fluvastatin. Također, U.S. Pat. 4,346,227 (otkriće koje je uključeno preko referenci) daje ML-236B derivate, kao što je pravastatin. Također, EP-491226A (otkriće koje je uključeno preko referenci) daje određene piridil-dihidroksiheptenske kiseline, kao što je rivastatin. U nastavku, U.S. Pat. No. 4,647,576 (otkriće koje je uključeno preko referenci) daje 6-[2-(supstituirane-pirol-1-il)alkil]piran-2-one, kao što je atorvastatin.

Svaki inhibitor HMG-CoA sintetaze se može upotrijebiti kao drugi spoj ovoga izuma. Termin inhibitor HMG-CoA sintetaze se odnosi na spojeve koji inhibiraju biosintezu hidroksimetilglutaril-koenzima A iz acetil-koenzima A i acetoacetil-koenzima A, kataliziranu enzimom HMG-CoA sintetaza. Takva inhibicija se lako određuje prema standardnim postupcima (npr., Meth. Enzymol.1975; 35:155-160 i tamo navedene reference). Veći broj ovih spojeva je opisan uz reference dolje, no ostali inhibitori HMG-CoA sintetaza su poznati onima koji se bave ovom materijom. U.S. Pat. No. 5,120,729 (otkrića koja su uključena preko referenci) daje beta-laktamske derivate. U.S. Pat. No. 5,064,856 (otkriće koje je uključeno preko referenci) daje spiro-laktonske derivate pripremljene uzgajanjem mikroorganizama (MF5253). U.S. Pat. No. 4,847,271 (izum koji je uključen preko referenci) daje oksetane kao što su derivati 11-(3-hidroksimetil-4-okso-2-oksetail)3,5,7-trimetil-2,4-undekadienske kiseline.

Svaki spoj koji smanjuje HMG-CoA reduktazu prijenosa gena se može upotrijebiti kao drugi spoj ovoga izuma. Ovi agensi mogu biti inhibitori HMG-CoA reduktaza transkripcije koji blokiraju transkripciju sa DNK ili translatorni inhibitori koji spriječavaju translaciju sa mRNK kodova za HMG-CoA reduktazu na protein. Takvi spojevi mogu ili utjecati na transkripciju ili translaciju izravno, ili se mogu biotransformirati u spojeve koji imaju navedenu aktivnost od strane jednog ili više enzima u biosintetskom ciklusu kolesterola ili mogu voditi akumulaciju izoprenskog metabolita koji gore navedene aktivnosti. Takva aktivnost se lako određuje prema standardnim postupcima (npr., Meth. Enzymol.1985;110:9-19). Nekoliko spojeva je opisano uz reference dolje, no ostali inhibitori HMG-CoA reduktaze prijenosa gena su poznati onima koji se bave ovom materijom. U.S. Pat. No. 5,041,432 (otkriće koje je uključeno preko referenci) daje 15-supstituiranih derivata lanosterola. Drugi oksidirani steroli koji sprečavaju sintezu HMG-CoA reduktaze su diskutirani od strane E.I. Mercer (Prog. Lip. Res. 1993; 32:357-416).

Svaki inhibitor skvalen sintetaze se može upotrijebiti kao drugi spoj ovoga izuma. Termin inhibitor skvalen sintetaze se odnosi na spojeve koji inhibiraju kondenzaciju 2-molekule farnesilpirofosfata pri čemu se stvara skvalen, kataliziranu enzimom skvalen sintetaza. Takva inhibicija se lako određuje prema standardnim postupcima (npr., Meth. Enzymol. 1969; 15:393-454 i Meth. Enzymol. 1985; 110:359-373 i tamo navedene reference). Veći broj ovih spojeva je opisan uz reference dolje, no ostali inhibitori skvalen sintetaze su poznati onima koji se bave ovom materijom. U.S. Pat. No. 5,026,554 (otkriće koje je uključeno preko referenci) daje fermentacijske produkte mikroorganizma MF5465 (ATCC 74011) uključujući saragosnu kiselinu. Sadržaj ostalih patenata o inhibitoru skvalen sintetaze je prikazan (Curr. Op. Ther. Patents (1993)861-4).

U suštini inhibitori skvalen sintetaze opisani gore (u Sadržaju izuma) su korisni kao drugi spoj (inhibitori sinteze kolesterola kod sisavaca) ovoga izuma. Ovi spojevi su predmet zajednički predane U.S. aplikacije serija No. 08/362,723 popunjena 23. Decembra 1994 i zajednički predane PCT/IB9S/XXXXX aplikacije (Assignees Docket No. PC8884A) označene za SAD. Izumi ovih aplikacija su uključeni ovdje preko referenci. U nastavku, kao pomoć u pripremi ovih spojeva opis spoja se ovdje ponavlja i sljedeće reakcijske Sheme i prateći tekst opisuju pripremu takvih spojeva. Opis supstituenata ne treba pomiješati sa opisom supstituenata za inhibitore apsorpcije kolesterola opisane gore.

Spoj Formule ZQ

[image]

i njihove farmaceutski prihvatljive kationske i anionske soli, prodrazi i stereoizomeri

gdje X predstavlja oksi, tio, -S(O)- ili -S(O)2-;

Y je karbonil ili metilen;

R1, R; R3 i R9 su svaki nezavisno vodik, halogen, hidroksil, trifluorometil, (C1-C6)alkil, fluorirani (C1-C4)alkil koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C4)alkoksi; fluorirani (C1-C4)alkoksi koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C4)alkiltio, (C1-C4)alkilsulfinil, (C1-C4)alkilsulfonil, fenil, amino, mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilamino, karboksil, (C1-C4)alkoksikarbonil, karbamoil, mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilkarbamoil, (C1-C4)alkanoilamino, fluorirani (C1-C4)alkanoilamino koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C4)alkilsulfonilamino ili fluorirani (C1-C4)alkilsulfonilamino koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C6)alkanoil, (C1-C6) alkanoil(C1-C6)alkil, oksazolil, tiazolil, izoksazolil, pirazolil ili izotiazolil gdje su navedeni prethodni heterocikli vezani preko ugljika i gdje R1 i R2 mogu stvarati peteročlani, šesteročlani ili sedmeročlani ugljikovodikov prsten ili mogu stvarati zajedno metilendioksil, etilendioksil ili propilendioksil i takvi prsteni nastaju kada se R1 i R2 povezuju u položajima 7 i 8;

R4 je (C1-C7)alkil ili (C3-C4)cikloalkilmetil;

[image]

R5 je amino ili mono-N- ili di-N;N-(C1-C4)alkilamino, (C1-C4)alkil proizvoljno supstituiran sa 1 do 9 fluora; amino ili mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilamino, karboksil, (C1-C4)alkoksikarbonil, karbamoil ili mono-N- ili di-N,N-(C1-C4) alkilkarbamoil, fenil proizvoljno mono- ili di-supstituiran sa metil, metoksil, fluoro, trifluorometoksil, karboksil, (C1-C4)alkoksikarbonil, metiltio, metilsulfinil, metilsulfonil, (C1-C4)alkilsulfonilamino ili mono-N ili di-N,N-(C1-C4) alkilaminosulfonil; ili tiazolil, izoksazolil, tienil, furil, piridinil ili takvi heterocikli koji su proizvoljno mono-supstituirani sa karboksil, ili mono- ili di-supstituirani sa metil;

R6 je vodik, hidroksil ili metoksil;

T stvara pet do sedmeročlani mono-az, zasićeni prsten, prsten koji proizvoljno sadrži tio i proizvoljno je mono-supstituiran na ugljiku sa hidroksil;

U stvara tri do sedmeročlani zasićeni karboksilni prsten;

V je -CO2R7, aminokarbonil, cijano, tetrazol-5-il, 4,5-dihidro-5-okso-1,2,4-oksdiazol-3-il, tetrazol-5-il-aminokarbonil, ili 3-oksoizoksazolidin-4-il-aminokarbonil,

R7 je vodik ili (C1-C4)alkil;

p je 1,2,3 ili 4;

R8 je hidroksil, tiol, karboksil, (C1-C4)alkoksikarbonil, karbamoil, amino, sulfamoil, (C1-C4)alkoksi, fluorirani (C1-C4)alkoksi koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C4)alkiltio, (C1-C4)alkilsulfonil, (C1-C4)alkilsulfinil, mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilkarbamoil, mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilamino, (C1-C4)alkilsulfonilamino, fluorirani (C1-C4)alkilsulfonilamino koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C4)alkanoilamino, fluorirani (C1-C4)alkanoilamino koji ima 1 do 9 fluora, mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilaminosulfonil, ureido, mono-N- ili di-N-(C1-C4)ureido, imidazolil ili piridil; i

W je piridil, pirimidil, 1,3,4-oksadiazolil, 1,3,4-tiazolil, tiazolil, 1,3,4-triazolil ili oksalil.

REAKCIJSKA SHEMA I

[image]

REAKCIJSKA SHEMA II

[image]

Prema reakcijskoj Shemi I poželjni spojevi Formule ZQ gdje su R1, R2, R3, R4 i R9 kao što je opisano gore, X predstavlja oksi, Y je karbonil ili metilen i Z je supstituirani amid (dan kao spoj Formule II) mogu se pripremiti aciliranjem odgovarajućeg amina sa odgovarajućim spojem Formule III gdje je Z karbonil.

Općenito, kiselina se kombinira sa odgovarajućim aminom u aprotičnom otapalu kao što je dimetilformamid u prisustvu amina kao što je trietilamin i agensom za kupliranje kao što je dietilcijanofosfat ili propilfosfoanhidrid na temperaturi od oko 0ºC do oko 40ºC za oko 1 do oko 6 sati.

Alternativno, kiselina se spaja sa odgovarajućim amidom u prisustvu karbodiimida (npr.,1-(3 –dimetil amino propil)-3- etilkarbidimidhidroklorid) u internom otapalu kao što je metilenklorid na temperaturi od oko 10ºC do 40ºC za oko 2 do 24 sata.

Poželjni spoj Formule ZQ gdje Z ili V predstavljaju tetrazolil-5-il može se pripremiti iz odgovarajućeg spoja Formule I gdje je Z ili V karboksil prevođenjem karboksilne grupe u karboksamidnu grupu (Z ili V=CONH2), dehidratacijom karboksamida do nitrila (Z ili V=CN) i reakcijom nitrila sa odgovarajućim azidom pri čemu se stvara tetrazol grupa.

Općenito, kiselina se prevodi u imidazol reakcijom sa karbonil diimidazolom u aprotičnom otapalu kao što je metilenklorid na temperaturi od 15ºC do oko 40ºC za oko 30 min do oko 4 sata, uobičajeno na sobnoj temperaturi 1 sat. Nastali imidazol se prevodi u odgovarajući amid uvoðenjem amonijaka u reakcijsku smjesu u plinovitom stanju na temperaturi od 10ºC do oko 40ºC za oko 3 min do oko 30 min, povoljno na sobnoj temperaturi za oko 5 min ili dok reakcija nije završena na osnovu TLC analize. Amid se prevodi u nitril tretiranjem sa trifluoroacetanhidridom i trietilaminom u inertnom otapalu kao što je metilenklorid na 0ºC za oko 25 min do 2 sata, poželjno 30 min. Tretiranje nitrila sa natrijazidom i amonij-kloridom u dimetilformamidu na temperaturi od 120ºC za 24 sata, daje željeni tetrazol.

Poželjni spoj Formule ZQ gdje Z ili V predstavljaju 4,5-dihidro-5-okso-1,2,4-oksadizol-3-il može se pripremiti iz odgovarajućeg spoja Formule I gdje je Z ili V CN prevođenjem nitrila u amidni oksim i reagiranjem oksima sa agensom za karboniliranje pri čemu nastaje 4,5-dihidro-5-okso-1,2,4-oksadizol derivat.

Općenito, nitril se prevodi u oksim reakcijom sa hidroksilaminhidrokloridom u prisutnosti baze kao što je kalij-karbonat u alkoholnom otapalu na temperaturi od oko 60ºC do oko 110ºC za oko 5 do oko 24 sata, uobičajeno uz refluks etanola za 18 sati. Oksim se prevodi u odgovarajući 4,5-dihidro-5-okso-1,2,4-oksadizol derivat reakcijom sa karbonilimidazolom i trietilaminom uz refluks etilacetata tijekom 24 sata.

Prodrazi spoja Formule ZQ koji imaju karboksilnu grupu mogu se pripremiti kombiniranjem kiseline sa odgovarajućim alkilhalogenidom u prisutnosti baze kao što je kalij-karbonat u inertnom otapalu kao što je dimetilformamid na temperaturi od oko 15ºC do oko 100ºC za oko 1 sat do oko 24 sata.

Alternativno, kiselina se miješa sa odgovarajućim alkoholom kao otapalom u prisutnosti katalitičke količine kiseline kao što je konc. sumporna kiselina na temperaturi od oko 20ºC do oko 120ºC, povoljno uz refluks, za oko 1 do oko 24 sata.

Poželjni spojevi Formule III gdje su R1, R2, R3 i R9 kao što je opisano gore, X je oksi, Y je karbonil ili metilen i Z je karboksil mogu se pripremiti iz odgovarajućeg spoja Formule IV ciklizacijom uz hidrolizu. Alternativno, hidroliza se može izostaviti što vodi k željenom prodragu.

Uopćeno, spoj Formule IV se miješa sa bazom kao što je kalij-karbonat u alkoholnom otapalu kao što je etanol na temperaturi od oko 10ºC do oko 40ºC, povoljno okoline, za oko 2 do oko 18 sati uz hidrolizu u vodeno-alkoholnoj otopini kao što je metanol/voda sa bazom kao što je kalij-karbonat na temperaturi od oko 40ºC do oko 80ºC, povoljno uz refluks, za oko 2 sata do oko 18 sati.

Poželjni spojevi Formule IV gdje su R1, R2, R3 i R9 kao što je opisano gore, X je oksi, Y je karbonil ili metilen i P je poznata zaštitna grupa (vidjeti reference dolje) mogu se pripremiti iz odgovarajućeg spoja Formule V aciliranjem ili alkiliranjem po potrebi.

Općenito, za one spojeve gdje je Y karbonil odgovarajući spoj Formule V se kombinira sa odgovarajućom zaštićenom mono kiselinom fumarilkloridom, kao što je fumarilklorid monoalkil ester, u inertnom otapalu kao što je metilenklorid na temperaturi od oko 10ºC do oko 50ºC, tipično okoline, za oko 6 do oko 18 sati.

Općenito, za one spojeve gdje je Y metilen odgovarajući spoj Formule V se miješa sa odgovarajuće zaštićenom 4-halokrotonskom kiselinom, kao što je alkil 4-halokrotonat, u prisustvu baze kao što je kalij-karbonat u aprotičnom otapalu kao što je dimetilformamid na temperaturi od oko 10ºC do oko 50ºC, povoljno okoline, za oko 12 do oko 72 sati.

Poželjni spoj Formule V gdje su R1, R2, R3 i R9 kao što je opisano gore može se pripremiti iz odgovarajućeg spoja Formule VI hidroksialkiliranjem (modificirana Friedel-Crafts-ova reakcija).

Uopćeno, spoj Formule VI se kombinira sa Lewis-ovom kiselinom, kao što je bortriklorid, u inertnom otapalu kao što je benzen ili toluen na temperaturi okoline uz refluks, za oko 1 do oko 6 sati u atmosferi dušika pri čemu se stvara intermedijerni kompleks. Nastali kompleks se miješa sa odgovarajuće supstituiranim naftaldehidom u inertnom otapalu u prisutnosti amina kao što je trietilamin na temperaturi od oko 0ºC do oko 40ºC, povoljno okoline, za oko 30 min do oko 18 sati praćeno kiselinskim raspadom bornog ostatka.

Alternativno, spoj Formule V, gdje je R1 4-trifluorometil i R4 neopentil može se pripremiti tretiranjem spoja Formule VI, gdje je R1 4-trifluorometil i R4 je pivaloil, sa viškom jake baze, pogodno 2,5 ekvivalenta n-butillitija, u anhidriranom eterskom otapalu, poželjno tetrahidrofuranu, na temperaturi okoline do oko 50ºC za oko 1 do oko 3 sata i reakcijom nastalog dianiona sa odgovarajućim naftaldehidom. Nastali, 2-(alfahidroksimetilnaftalen) spoja Formule V, gdje je R4 pivaloil, se prevodi u spoj Formule V, gdje je R1 4-trifluorometil i R4 neopentil, redukcijom pivalimida reducirajućim sredstvom kao što je litijaluminijhidrid ili boran, povoljno boran-tetrahidrofuran kompleks, u eterskom otapalu kao što je tetrahidrofuran na povišenoj temperaturi, tipično refluksa. Alternativno, spoj Formule V, gdje je R1 4-trifluorometil i R4 alkil, uključujući neopentil, može se pripremiti tretiranjem spoja Formule VI, gdje je R1 4-trifluorometil i R4 je t-butoksikarbonil, sa viškom t-butillitija, pogodno 2,4 ekvivalenta, na temperaturi od oko -50ºC do oko 0ºC u eterskom otapalu kao što je anhidrirani tetrahidrofuran, za oko 2 do oko 4 sata i kupliranjem nastalog dianiona sa odgovarajućim naftaldehidom. Nastali 2–(alfa-hidroksimetilnaftalen) spoja Formule V, gdje je R1 4-trifluorometil i R4 t-butoksikarbonil, se tretira kiselinom i prevodi u spoj Formule V, gdje je R1 4-trifluorometil i R4 H. Ovaj spoj se transformira u spoj Formule V, gdje je R1 4-trifluorometil i R4 alkil, reduktivnom aminacijom pod uvjetima sličnim kod pripremanja spoja Formule VI.

Poželjni spoj Formule VI gdje su R1, R2, i R4 kao što je opisano gore može se pripremiti iz odgovarajućeg anilina reduktivnom aminacijom.

Općenito, anilin reagira sa odgovarajućim alkilaldehidom, u protonskom kiselom otapalu kao što je koncentrirana octena kiselina na temperaturi od oko 10ºC do oko 50ºC, tipično okoline, za oko 30 min do oko 4 sati praćeno redukcijom uz upotrebu npr. natrij-borhidrida na temperaturi od oko 0ºC do oko 20ºC za oko 15 min do oko 4 sata.

Alternativno, anilin reagira sa odgovarajućim alkilaldehidom, u aprotičnom otapalu kao što je 1,2-dikloretan u prisustvu kiseline kao što je octena kiselina na temperaturi od oko 15ºC do oko 40ºC, tipično okoline, za oko 1 do oko 20 sati praćeno redukcijom uz upotrebu npr. triacetoksiborhidrida na oko –20ºC do oko temperature okoline za oko 1 do oko 20 sati.

Prema reakcijskoj Shemi II poželjni spojevi Formule VII gdje su R1, R2, R3, R4 i R9 kao što je opisano gore, X predstavlja tio, Y je karbonil ili metilen i Z je supstituirani amid mogu se pripremiti aciliranjem odgovarajućeg amina sa odgovarajućim spojem Formule VIII ili IX gdje je Z karbonil. Općenito, ova reakcija se može izvesti kao što je opisano gore za spojeve Formule II.

Poželjni spojevi Formule VIII gdje su R1, R2, R3, R4 i R9 kao što je opisano gore, X predstavlja oksi, Y je metilen mogu se pripremiti iz odgovarajućeg spoja Formule IX gdje je Y karbonil sekvencijalnom redukcijom/oksidacijom.

Općenito, spojevi Formule IX se reduciraju potpuno upotrebom npr. boran-metilsulfid kompleksa u inertnom rastvaraču kao što je tetrahidrofuran na temperaturi od oko 20ºC do oko 80ºC, tipično uz refluks, za oko 1 do oko 6 sati. Nastali alkohol se onda oksidira do spoja Formule VIII koristeći npr. postupak iz dva stupnja koji prvo obuhvaęa Swern-ovu oksidaciju praćenu oksidacijom sa puferiranim natrij-kloridom u acetonitrilu u vodenom vodik-peroksidu na temperaturi od oko -10ºC do oko 25ºC za oko 30 min do oko 4 sata. Ili alternativno, alkohol se izravno oksidira u kiselinu koristeći t-butilhidroperoksid i cetiltrimetilamonijsulfat u vodenoj smjesi pri pH>13.

Poželjni spoj Formule IX gdje su R1, R2, R3, R4 i R9 kao što je opisano gore može se pripremiti iz odgovarajućeg spoja Formule X alkiliranjem praćenim epimerizacijom i konačno hidrolizom.

Općenito, spoj Formule X se miješa sa bazom kao što je litijdiizipropilamid u inertnom otapalu kao što je cikloheksan/tetrahidrofuran na temperaturi od oko -100ºC do oko -20ºC u dušiku za oko 30 min do oko 3 sata uz dodatak odgovarajućeg alkilhaloacetata kao što je t-butilbromacetat i miješanjem za oko 2 sata do oko 24 sata na temperaturi od oko 10ºC do oko 40ºC, povoljno okoline. Alkilirani produkt se epimerizira u samo trans izomer koristeći bazu kao što je kalij-karbonat u alkoholnom otapalu kao što je metanol za oko 1 do oko 6 sati na temperaturi od oko 40ºC do oko 80ºC, povoljno na 60ºC. Nastali t-butil ester može se hidrolizirati tretiranjem sa kiselinom kao što je trifluorooctena kiselina u inertnom otapalu kao što je diklormetan.

Poželjni spoj Formule X gdje su R1, R2, R3, R4 i R9 kao što je opisano gore može se pripremiti iz odgovarajućeg spoja Formule XI kupliranjem pod karbo-diimidnim uvjetima.

Općenito, spoj Formule XI se miješa sa odgovarajućim karbodiimidom kao što je 1-(3-dimetilaminopropil)-3 -etilkarbodiimidhidroklorid u inertnom otapalu kao što je diklormetan na temperaturi od oko 10ºC do oko 50ºC, obično na temperaturi okoline, za oko 5 do oko 24 sata.

Poželjni spoj Formule XI gdje su R1, R2, R3, R4 i R9 kao što je opisano gore može se pripremiti iz odgovarajućeg spoja Formule V reakcijom solvolitičke supstitucije.

Uopćeno, spoj Formule V se miješa sa merkaptooctenom kiselinom pod vodenim kiselim uvjetima na temperaturi od oko 60ºC do oko 120ºC, obično na temperaturi refluksa, za oko 2 do oko 6 sati.

Alternativno, poželjni spoj Formule IX gdje su R1, R2, R3, R4 i R9 kao što je opisano gore može se pripremiti iz odgovarajućeg spoja Formule V reakcijom solvolitičke supstitucije sa ciklizacijom u laktam praćenom epimerizacijom.

Općenito, spoj Formule V i merkaptojantarna kiselina se miješaju u karboksilnoj kiselini koja služi kao otapalo kao što je propionska kiselina i zagrijava na od oko 100ºC do oko 140ºC za oko 12 do oko 72 sata u cilju uklanjanja vode kao što je čišćenje dušikom prostora u reakcijskoj posudi. Ciklizirani produkt epimerizira u samo trans izomer tretiranjem u inertnom otapalu kao što je tetrahidrofuran sa bazom kao što je metalni alkoksid u odgovarajućem alkoholu, pogodno natrij-metoksid u metanolu, na temperaturi okoline za oko 1 do oko 24 sata.

Polani materijali i reagensi za gore opisane reakcijske sheme (npr., 4-haloanilin, 1-naftaldehid, monoetil ester fumarne kiseline, amino kiselinski esteri, prodrag ostaci, zaštitni oblici) su dostupni ili se mogu lako sintetizirati konvencionalnim metodama organske sinteze.

Neke od metoda dobivanja opisanih ovdje će zahtijevati zaštitu od daljinske funkcionalnosti (tj., karboksil). Potreba za ovim zaštitnim grupama će varirati u zavisnosti od prirode daljinske funkcionalnosti i uvjeta metode. Ove potrebe su već određene. Za opći pregled zaštitnih grupa (npr., halo (C1-C6)alkil, (C1-C4)alkoksimetil, arilmetil i tri(C1-C4)alkilsilil) i njihovu upotrebu, vidjeti T.W. Greene, Protective Groups In Organic Synthesis, John Wiley & Sons, New York, 1991.

Spojevi Formule ZQ imaju asimetričan ugljikov atom i zato su enantiomeri i dijastereomeri. Smjese dijastereomera se mogu razdvojiti na individualne dijastereomere na bazi njihovih fizičko-kemijskih razlika poznatim metodama per se, na primjer, kromatografijom i/ili frakcijskom prekristalizacijom. Enantiomeri (npr., Formule III, VIII ili IX) mogu se razdvojiti prevođenjem enantiomerne smjese u dijastereomerne smjese (npr., ester ili sol) reakcijom sa odgovarajućim optički aktivnim spojem (npr., alkoholom ili aminom), razdvajanjem dijastereomera i prevođenjem (npr., hidrolizom ili zakiseljavanjem) pojedinih dijastereomera do odgovarajuće čistih enantiomera. Svi takvi izomeri, uključujući dijastereomere i enantiomere predstavljaju dio ovoga izuma.

Neki spojevi ovog izuma, gdje npr. Z sadrži kiselu grupu, su kiseli i ona stvaraju soli sa farmaceutski pogodnim kationom. Sve takve soli su u okviru ovoga izuma i mogu se pripremiti uobičajenim metodama. Na primjer, mogu se pripremiti jednostavnim kontaktom kiseline i baze, obično u stehiometrijskom odnosu, ili u vodenom, nevodenom ili djelomično vodenom mediju, ako odgovara.

Soli s izdvajaju ili filtriranjem, taloženjem sa neotapalom uz filtriranjem, uparavanjem otapala, ili, u slučaju vodenih otopina, liofilizacijom, ako odgovara.

Neki spojevi ovog izuma, gdje npr. Y je metilen ili Z sadrži amino grupu su kiseli i oni stvaraju soli sa farmaceutski pogodnim anionom. Sve takve soli su u okviru ovoga izuma i mogu se pripremiti uobičajenim metodama. Na primjer, mogu se pripremiti jednostavnim kontaktom kiseline i baze, obično u stehiometrijskom odnosu, ili u vodenom, nevodenom ili djelomično vodenom mediju, ako odgovara. Soli se izdvajaju ili filtracijom, taloženjem sa neotapalom uz filtriranje, uparavanjem otapala, ili, u slučaju vodenih otopina, liofilizacijom, ako odgovara.

U nastavku, kada spoj ovoga izuma stvara hidrate ili solvate oni su također u okviru cilja izuma.

Svaki inhibitor skvalen epoksidaze se može upotrijebiti kao drugi spoj ovoga izuma. Termin inhibitor skvalen epoksidaze se odnosi na spojeve koji inhibiraju biokonverziju skvalena i molekulskog kisika u skvalen-2,3-epoksid, kataliziranu enzimom skvalen epoksidaza. Takva inhibicija se lako određuje prema standardnim postupcima (npr., Biochim. Biophys. Acta. 1984; 794:466-471. Veći broj ovih spojeva je opisan uz reference dolje, no ostalu inhibitori skvalen epoksidaze su poznati onima koji se bave ovom materijom. U.S. Pat. No.5,011,859 (izum koji je ovdje uključen preko referenci) daje fluoro analoge skvalena. EP publikacija 395,768,A (otkriće koje je uključeno ovdje preko referenci) daje supstituirane alilaminske derivate. PCT publikacija WO 9312069 A (izum koji je ovdje uključen preko referenci) daje određene amino alkoholne derivate. U.S. Pat. No. 5,051,534 (izum koji je ovdje uključen preko referenci) daje ciklopropiloksi-skvalenske derivate. Svaki inhibitor skvalen ciklaze se može upotrijebiti kao drugi spoj ovoga izuma. Termin inhibitor skvalen ciklaze se odnosi na spojeve koji inhibiraju biokonverziju skvalena-2,3-epoksida u lanosterol, kataliziranu enzimom skvalen ciklaza. Takva inhibicija se lako određuje prema standardnim postupcima (npr., FEBS Lett. 1989; 244:347-350. U nastavku, spojevi opisani uz reference dolje su inhibitori skvalen ciklaze, no ostali inhibitori skvalen epoksidaze su poznati onima koji se bave ovom materijom. PCT publikacija 9410150 (izum koji je uključen ovdje preko referenci) daje derivate 1,2,3,5,6,7,8,8a-oktahidro-5,5,8a(beta)-trimetil-6-izokinolinamina, kao što je N-trifluoro acetil- 1,2,3,5, 6,7,8,8a- oktahidro-2-alil-5,5,8a(beta)-trimetil-6(beta)-izokinolinamina. Francuska publikacija 2697250 (izum koji je ovdje uključen preko referenci) daje supstituirane alilaminske derivate. PCT publikacija WO 9312069 A (izum koji je ovdje uključen preko referenci) daje beta,beta-dimetil-4-piperidin etanol derivate kao što je 1-(1,5,9- trimetildecil) beta,beta-dimetil-4-piperidinetanol.

Svaka kombinacija inhibitora skvalen epoksidaze/skvalen ciklaze se može upotrijebiti kao drugi spoj ovoga izuma. Termin kombinacija inhibitora skvalen epoksidaze/skvalen ciklaze se odnosi na spojeve koji inhibiraju biokonverziju skvalena u lanosterol preko skvalen-2,3-epoksidnog intermedijera.

U nekim slučajevima (posebni eksperimentalni uvjeti) nije moguće razlikovati inhibitore skvalen epoksidaze od inhibitora skvalen ciklaze, mada su ovi uvjeti poznati. Takva inhibicija kombinacije inhibitora skvalen epoksidaze/skvalen ciklaze se lako određuje prema standardnim postupcima za inhibitore skvalen epoksidaze ili skvalen ciklaze. Različiti spojevi su opisani uz reference dolje, no ostali inhibitori skvalen epoksidaze/skvalen ciklaze su poznati onima koji se bave ovom materijom. U.S. Pat. No 5,084,461 i 5,278,171 (izum koji je ovdje uključen preko referenci daje azadekalin derivate. EP publikacija 468,434 (izum koji je ovdje uključen preko referenci) daje piperidileterske i tio-eterske derivate kao što je 2-(1-piperidil)pentil izopentilsulfoksid i 2-(1-piperidil)etilsulfid. PCT publikacija WO 9401404 (izum koji je ovdje uključen preko referenci) daje acil-piperidine kao što je 1-(1-oksopentil-5-feniltio)-4-(2-hidroksi-1-metil)-etil)piperidin. U.S. Pat. No. 5,102,915 (izum koje je ovdje uključen preko referenci) daje ciklopropiloksiskvalenske derivate.

Svaki inhibitor lanosterol demetilaze se može upotrijebiti kao drugi spoj ovoga izuma. Termin inhibitor lanosterol demetilaze se odnosi na spojeve koji inhibiraju 14-demetiliranje lanosterola, katalizirano enzimom lanosterol demetilaza. Takva inhibicija se lako određuje prema standardnim postupcima (Biochemistry 1994; 33;4702-4713 i navedene reference). Različiti spojevi su opisani uz reference dolje, no ostali inhibitori lanosterol demetilaze su poznati onima koji se bave ovom materijom. U.S. Pat. No. 4,782,059 i 4,894,375 (izumi koji su ovdje uključeni preko referenci) daju azole kao što je 4-(4-((2-(2,4-diklorofenil)-2-(1H-imidazol-1-ilmetil)1,3-dioksanol-4-il)metoksi)fenil)piperazin (ketokonazol). EP publikacija 492474A (izum koji je ovdje uključen preko referenci) daje nove dioksolane kao što je (2S,4S)-cis-2-(2-(4-klorofenil)etil)-2-imidazol-1-il)metil-4(4-aminofenil-tio)metil-1,3-doksalan. U.S. Pat. No. 5,041,432 (izum koji je ovdje uključen preko referenci) daje 15-supstituirane lanosterol derivate.

Farmaceutske kombinacije ovoga izuma su sve prilagođene terapeutskoj upotrebi kao agensi za smanjenje razina plazmatskog LNG kolesterola kod sisavaca, posebno ljudi. Kako koncentracije kolesterola u krvi jako zavise o razvoju kardiovaskularnih, cerebralno vaskularnih ili periferno vaskularnih poremećaja, ove kombinacije, po moći njihove hipolipodemične aktivnosti, sprečavaju, zaustavljaju i/ili otklanjaju ateriosklerozu.

Kontrolirana aktivnost prema hiperkolesterolemiji ovih spojeva u životinja može se demonstrirati metodama zasnovanima na standardnim procedurama. Na primjer, in vivo aktivnost ovih spojeva u smanjenju razina kolesterola može se odrediti postupkom sličnim onom koji je opisao Harwood et al., (J. Lip. Res. 1993, 34:377-95). Aktivnost (i prema tome doze) mogu se odrediti prema količini kombinacije hipokolesterolemičnog agensa ovoga izuma koji smanjuje razinu kolesterola, u odnosu na kontrolu, kod mužjaka zlatnog sirijskog hrčka. Mužjacima zlatnog sirijskom hrčka se daje ili polu pročišćena praškasta dijeta bez kolesterola (AIN-76C) (kontrolne životinje) ili polu pročišćena praškasta dijeta bez kolesterola obogaćena kombinacijom inhibitora apsorpcije kolesterola i inhibitora sinteze kolesterola ovog izuma. Hrčci se drže u kavezima sa po šest životinja i hrane se dijetom sedam dana. Fekalije hrčaka se skupljaju u periodu od jednog do dva dana na kraju tretmana. Poslije sedam dana, uz anesteziju, uzima se krv za određivanje koncentracije plazmatskog kolesterola.

Ukupni plazmatski kolesterol se analizira spektrofotometrijski koristeći komercijalni pribor (Single Vial, Boehringer Mannheim, Indianapolis, IN) zasnivan na produkciji H2O2 kolesterol oksidaze posle hidrolize kolesterol estera kolesterol esterazom, što će detaljno biti opisano u Primjerima kasnije.

Lipoprotein visoke gustoće (LVG)-kolesterol se određuje taloženjem apolipoproteina B-koji sadrži čestice metodom koju su opisali Assmann et al. (Clin. Chem. 1983; 29:2026-30), što će detaljno biti opisano Primjerima kasnije.

Ne-LVG kolesterol (kombinacija LNG-kolesterola, LIG-kolesterola, VLNG-kolesterola i hilomikrina-derivata kolesterola) se računa oduzimanjem koncentracije LNG-kolesterola od totalnog plazmatskog kolesterola (koji su opisani u prethodnim paragrafima).

Fekalni neutralni steroli se analiziraju gas tekućinskom kromatografijom modifikacijom metode opisanom od Miettinen (Clin. Chim. Acta. 1982; 124:245-8) i Harris et al (Clin. Pharmacol. Ther. 1990; 48:189-94), to će detaljno biti opisano u Primjerima kasnije.

Aktivnost HMG-CoA reduktaze se mjeri mikrosomalnim frakcijama izoliranim iz homogenata tkiva jetre diferancijalnim centrifugiranjem, metodom opisanom detaljno u Primjerima kasnije.

Anti-aterosklerosni efekat spoja (tj., kombinacija aktivnosti i doza) može se odrediti prema količini kombinacionog agensa ovoga izuma koji smanjuje taloženje lipida, u odnosu na kontrolu, u aortama Novozelandskog bijelog zeca. Mužjaci Novozelandskog bijelog zeca se hrane dijetom koja sadrži 40 mg/kg kolesterola i 1g/kg ulja od kikirikija tijekom 3-5 dana (jednom dnevno) i onda se iz krvi određuje ukupni plazmatski kolesterol. Zečevi se obilježavaju u grupe prema odgovoru plazmatskog kolesterola na kolesterol iz dijete tako da su srednja i standardna devijacija svake grupe slični. Da bi se ispitao efekt kombinirane terapije na progresiju ateroskleroze, grupa zečeva se hrani dijetom kolesterol-ulje od kikirikija (kontrolna grupa) ili istom dijetom sa kombinacijskim agensom ovoga izuma 12 tjedana. Alternativno, da bi se utvrdio efekat ovoga izuma na smanjenje ateroskleroze, Novozelandski bijeli zečevi se mogu hraniti dijetom opisanom gore, kolesterol/ulje od kikirikija, u odnosu na grupu koja se liječi uz hranjenje od 6 do 10 mjeseci. U tom trenutku, zečevi se hrane dijetom koja ne sadrži ni kolesterol ni ulje od kikirikija (kontrolna grupa) ili istom dijetom sa kombinacijskim agensom ovoga izuma do 6 mjeseci. Na kraju perioda liječenja se životinje usmrte i aorte uklone od grudnog luka do grananja tankog crijeva. Aorte se očiste od plakova, otvore longitudinalno i podijele na dva jednaka dijela. Smanjena depozicija lipida kod zečeva koju daje kombinacijski agens ovoga izuma u odnosu na kontrolne životinje može se odrediti preko analize lipida aorte za kolesterol i kolesterol ester i/ili bojenjem lipida i analizom pomoću “image” analizatora.

Davanje kombinacije spojeva ovoga izuma može biti bilo kojom metodom koja donosi inhibitor apsorpcije kolesterola u crijevni trakt i inhibitor biosinteze kolesterola u crijeva i jetru. Ove metode obuhvaćaju oralne puteve, intraduodenalne puteve itd.

Dva različita spoja ovoga izuma mogu se davati zajedno simultano ili jedan za drugim u bilo kom redoslijedu, ili kao jedan farmaceutski kompozit koji obuhvaća inhibitor apsorpcije kolesterola i inhibitor biosinteze kolesterola u farmaceutski prihvatljivom nosaču. Tako npr., u jednom načinu davanja inhibitor apsorpcije kolesterola se može davati dva do tri puta na dan sa hranom i inhibitor biosinteze kolesterola (npr., inhibitor HMG-CoA reduktaze) se može davati jednom uvečer prije spavanja. Alternativno, dva spoja se mogu davati simultano (jednom, dva ili tri puta dnevno s hranom ili bez nje). U svakom slučaju količina i vrijeme davanja spoja će, naravno, zavisiti od subjekta koji se liječi, od težine oboljenja, načina davanja i procjene liječnika koji daje lijek. Slijedeći paragrafi daju uvid u poželjne doze za različite komponente ovoga izuma.

Efektivna doza za inhibitor apsorpcije kolesterola opisan gore je u rasponu od 0,001 do 20 mg/kg/dan, povoljno 0,005 do 10 mg/kg/dan, najpovoljnije 0,01 do 5 mg/kg/dan. Za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo 0,00007 do 1,4 g/dan, povoljno 0,00035 do 0,7 g/dan, najpovoljnije 0,0005 do 0,35 g/dan.

Općenito, efektivna doza za inhibitor sinteze kolesterola opisan gore je u rasponu od 0,00001 do 20 mg/kg/dan, povoljno 0,00005 do 10 mg/kg/dan, najpovoljnije 0,00007 do 4 mg/kg/dan. Za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo 0,000007 do 1,4 g/dan, povoljno 0,0000035 do 0,7 g/dan, najpovoljnije 0,000005 do 0,35 g/dan.

Posebno, efektivna doza za inhibitor HMG-CoA reduktazu opisan gore je u rasponu od 0,0001 do 20 mg/kg/dan, povoljno 0,0005 do 2 mg/kg/dan. Za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo 0,0000007 do 1,4 g/dan, povoljno 0,0000035 do 0,14 g/dan.

Najpovoljnije, doza za lovastatin je u rasponu od 0,07 do 1,14 mg/kg/dan i za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo približno 0,005 do 0,08 g/dan.

Najpovoljnije, doza za simvastatin je u rasponu od 0,014 do 0,06 mg/kg/dan i za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo približno 0,001 do 0,04 g/dan.

Najpovoljnije, doza za pravastatin je u rasponu od 0,035 do 0,57 mg/kg/dan i za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo približno 0,0025 do 0,04 g/dan.

Najpovoljnije, doza za fluvastatin je u rasponu od 0,07 do 0,57 mg/kg/dan i za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo približno 0,005 do 0,04 g/dan.

Najpovoljnije, doza za atorvastatin je u rasponu od 0,0071 do 1,14 mg/kg/dan i za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo približno 0,0005 do 0,08 g/dan.

Najpovoljnije, doza za rivastatin je u rasponu od 0,00071 do 0,14 mg/kg/dan i za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo 0,00005 do 0,01 g/dan.

Efektivna doza za inhibitor HMG-CoA sintetaze je u rasponu od 0,285 do 28,57 mg/kg/dan, povoljno 0,285 do 5 mg/kg/dan. Za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo 0,020 do 2 g/dan, povoljno 0,020 do 0,35 g/dan.

Efektivna doza za inhibitor HMG-CoA reduktaze prijenosa gena je u rasponu od 0,005 do 20 mg/kg/dan, povoljno 0,01 do 10 mg/kg/dan, najpovoljnije 0,01 do 5 mg/kg/dan. Za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo 0,00035 do 1,4 g/dan, povoljno 0,0007 do 0,7 g/dan, najpovoljnije 0,0007 do 0,35 g/dan.

Efektivna doza za inhibitor skvalen sintetaze je u rasponu od 0,005 do 20 mg/kg/dan, povoljno 0,01 do 10 mg/kg/dan, najpovoljnije 0,01 do 5 mg/kg/dan. Za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo 0,00035 do 1,4 g/dan, povoljno 0,0007 do 0,7 g/dan, najpovoljnije 0,0007 do 0,35 g/danu.

Efektivna doza za inhibitor skvalen epoksidaze je u rasponu od 0,005 do 20 mg/kg/dan, povoljno 0,01 do 10 mg/kg/dan, najpovoljnije 0,01 do 5 mg/kg/dan. Za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo 0,00035 do 1,4 g/dan, povoljno 0,0007 do 0,7 g/dan, najpovoljnije 0,0007 do 0,35 g/dan.

Efektivna doza za inhibitor skvalen ciklaze je u rasponu od 0,005 do 20 mg/kg/dan, povoljno 0,01 do 10 mg/kg/dan, najpovoljnije 0,01 do 5 mg/kg/dan. Za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo 0,00035 do 1,4 g/dan, povoljno 0,0007 do 0,7 g/dan, najpovoljnije 0,0007 do 0,35 g/dan.

Efektivna doza za kombinirane inhibitore skvalen ciklaze/skvalen epoksidaze je u rasponu od 0,005 do 20 mg/kg/dan, povoljno 0,01 do 10 mg/kg/dan, najpovoljnije 0,01 do 5 mg/kg/dan. Za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo 0,00035 do 1,4 g/dan, povoljno 0,0007 do 0,7 g/dan, najpovoljnije 0,0007 do 0,35 g/dan.

Efektivna doza za inhibitor lanosterol demetilaze je u rasponu od 0,005 do 20 mg/kg/dan, povoljno 0,01 do 5 mg/kg/dan. Za prosječnog čovjeka od 70 kg, to bi iznosilo 0,00035 do 1,4 g/dan, povoljno 0,0007 do 0,35 g/dan.

Ovi spojevi se mogu davati pojedinačno ili zajedno bilo kojem od konvencionalnih oralnih ili parenteralnih doza kao što su kapsule, tablete, prašak, suspenzija ili otopina. Za oralno davanje, koje je povoljnije, farmaceutski kompozit se može uzeti u obliku otopine, suspenzija, tableta, pilula, kapsula, praška, i sl.

U zavisnosti od željenog načina davanja, farmaceutski kompoziti mogu biti u čvrstom, polu-čvrstom ili tekućem obliku, npr. tablete, pilule, kapsule, praškovi, suspenzije i sl., povoljno u obliku jediničnih doza povoljnih za davanje preciznih doza. Farmaceutski kompoziti obuhvaćaju konvencionalni farmaceutski nosač ili ekscipijent i spoj (eve) prema izumu kao aktivni sastojak. U nastavku, mogu sadržavati druge medicinske ili farmaceutske agense, nosače, itd.

Farmaceutski kompoziti prema ovom izumu mogu sadržavati 0,% do 95% spoja ovoga izuma, povoljno je 1-70%. U svakom slučaju, sastav formulacije koja se daje će sadržavati količinu spoja prema izumu u količini efektivne da olakša subjektu koji se liječi znakove hiperkolesterolemije ili ateroskleroze.

Za čvrste farmaceutske kompozite, uobičajeni netoksični čvrsti nosači obuhvaćaju, npr. farmaceutski čist manitol, laktozu, škrob, magnezij-stearat, natrij-saharin, talk, celulozu, glukozu, sukrozu, magnezijum-karbonat i sl.

Tekući farmaceutski kompoziti se mogu pripremiti otapanjem ili dispergiranjem, ili pripremanjem na drugi način spoj (ev)a prema ovom izumu i miješanjem proizvoljno sa adjuvantom u nosaču kao što je npr. voda, slana otopina, otopina dekstroze, glicerol, etanol, i sl, da se dobije otopina ili suspenzija.

Metode za pripremanje različitih farmaceutskih kompozita sa određenom količinom aktivne tvari su poznati, ili će biti očigledni za informirane. Na primjer, vidjeti Remingtons Pharmaceutical Sciences., Mack Publishing Company, Easter, Pa., 15th Edition (1975).

Obzirom da se ovaj izum odnosi na smanjenje razina plazmatskog kolesterola liječenjem sa kombinacijom aktivnih tvari koje se mogu davati odvojeno, izum se također odnosi kombiniranje posebnih farmaceutskih kompozicija u obliku kita. Kit obuhvaća dva posebna farmaceutska kompozita kao što su posebne boce ili posebni paketi. Tipični kit obuhvaća uputstvo za davanje posebnih komponenti. Oblik kita je posebno pogodan kada se posebne komponente daju na različite načine (npr., oralno i parenteralno), daju u različitim intervalima ili kada liječnik određuje kombinaciju individualnih komponenti.

Slijedeći Primjeri demonstriraju da inhibitori apsorpcije kolesterola, (3β, 5α, 25R)-3((β-D-celobiozil)oksi) spirostan-11- on ili tigogenin celobiozid (tikeusid, opisan u U.S. Pat. No. 4,602,003) nisu sposobni da smanje koncentraciju kolesterola kod hrθaka hranjenih dijetom bez kolesterola. Iznenađujuće, kombinacija inhibitora apsorpcije kolesterola i inhibitora sinteze kolesterola smanjuje ukupni plazmatski kolesterol i posebno razinu plazmatskog ne-LDG kolesterola. Efekat kombinirane terapije je usmjeren na ne-LVG frakcije; nema efekta na koncentraciju LVG-kolesterola. Ovo je bitno zato što je pokazano u većem broju epidemioloških studija da je LVG rizik negativnog faktora za kardiovaskularne bolesti.

Inhibitor apsorpcije kolesterola (3β, 5α, 25R)-3((β-D-celobiozil)oksi)spirostan-11-on takoπer poveζava izluθivanje fekalno neutralnog sterola. Iznenađujuće, inhibitor apsorpcije kolesterola u kombinaciji sa inhibitorom sinteze kolesterola povećava lučenje fekalnog neutralnog sterola. Mada ima nekoliko izvještaja u literaturi da inhibitor sinteze kolesterola inhibira apsorpciju kolesterola in vivo ili potrošnju kolesterola u ćelijskoj kulturi, nema efekta samog lovastatina na lučenje fekalnog neutralnog sterola kod hrčaka, tako da je povećanje lučenja fekalnog neutralnog sterola za ovu kombinaciju neočekivano.

Aktivnost jetrene mikrosomalne HMG-CoA reduktaze je mjerena detaljno u slijedećim Primjerima u odnosu na ukupnu količinu prisutnog enzima HMG-CoA reduktaze, i znak je promjene metabolizma kolesterola jetre hipolipidemičnom terapijom. HMG-CoA je glavni regulacijski korak u biosintezi kolesterola, povećano prisustvo proteina HMG-CoA reduktaze javlja se uz hipolipidemičnu terapiju. Postoji varijabilnost u količini do koje indukcija može da se javi i vjeruje se da postoji gornji limit indukcije. Vjeruje se da kombinirana terapija inhibitora apsorpcije kolesterola i inhibitora sinteze kolesterola izaziva veće promjene metabolizma jetrenog kolesterola nego kada su agensi sami, i rezultira u maksimalnom ili skoro maksimalnom povećanju razina proteina HMG-CoA reduktaze kao i smanjenju plazmatskog LNG-kolesterola što se ne javlja kada se agensi koriste odvojeno.

Vjeruje se da hrčak predstavlja odgovarajući životinjski model za demonstraciju ovoga izuma. Ipak, regulacija jetrenog metabolizma kolesterola kod hrčaka je nešto različita nego u čovjeka. To je zbog toga što poznati inhibitori HMG-CoA reduktaze koji su hipolipidemični kod čovjeka nisu hipolipidemični u monoterapiji kod hrčaka hranjenih dijetom bez kolesterola. Vjeruje se da je stupanj do kojeg se može inducirati HMG-CoA reduktaza, i prema tome rezultirajuća sinteza kolesterola, u odgovoru na hipolipidemičnu terapiju veća kod hrčaka nego kod čovjeka. Također se vjeruje da se kod hrčka posebno inducira HMG-CoA reduktaza prije regulacije LNG-receptora dok se kod čovjeka vjeruje da se javljaju obje pojave.

Povećava se regulacija LNG-receptora i nastalo povećanje čišćenja LNG-kolesterola vodi smanjenju plazmatskog kolesterola. Tako se vjeruje da će kod čovjeka, monoterapija bilo sa inhibitorom apsorpcije kolesterola bilo sa inhibitorom sinteze kolesterola smanjiti plazmatski LNG-kolesterol, ali dodatak drugog agensa će osigurati dodatnu hipolipidemičnu aktivnost.

Primjer 1

Četvorodnevno ispitivanje kombinacije tigogenin celobiozida i lovastatina (danih dijetom) na razinu plazmatskog kolesterola i aktivnost jetrene HMG-CoA reduktaze kod hrčaka danih dijetom bez kolesterola je utvrđeno prema Metodama koje su detaljno opisane na kraju Primjera. Podaci su dati dolje.

[image]

Primjer 2

Sedmodnevno ispitivanje kombinacije 0,2% (3β,5α,25R)-3((β-D-celobiozil)oksi)spirostan-11-on (kasnije obilje en u Primjerima kao Spoj A) sa lovastatinom (danih dijetom) na razinu plazmatskog kolesterola kod hrčaka je urađeno prema Metodama koje su detaljno opisane na kraju Primjera. Podaci su dani dolje.

[image]

Primjer 3

Sedmodnevno ispitivanje kombinacije Spoja A i lovastatina danih kroz dijetu hrčaka hranjenih dijetom bez kolesterola je urađeno prema Metodama koje su detaljno opisane na kraju Primjera. Podaci su dani dolje.

[image]

METODE

Životinje: Mužjaci sirijskog zlatnog hrčka su hranjeni polu-pročišćenom praškastom dijetom (AN-76C dijeta) koja ne sadrži kolesterol. Inhibitor apsorpcije kolesterola i/ili inhibitor sinteze kolesterola su davani pomiješani s hranom. Hrčci su držani u kavezima u kojima je bilo 6 životinja i hranjeni su 4-7 dana. Uz anesteziju, vađena je krv za određivanje koncentracije plazmatskog kolesterola a druga tkiva i fekalije su skupljani povremeno.

Mjerenje koncentracije plazmatskih lipida.

Ukupni plazmatski kolesterol (UPH): Cijela količina krvi se sakupi u epruvete koje sadrže litij-heparin. Plazma se izdvoji centrifugiranjem uzoraka na 1500xg tijekom 25 min. Uzorci plazme se analiziraju na UPH koristeći komercijalni pribor (SingleVial, Boehringer Manheim, Indianopolis, IN) baziran na produkciji kolesterol oksidaze H poslije hidrolize kolesterol estera kolesterol esterazom 15μl uzorka se ulije u 96-posudu (u triplikatu) i doda se 200 μl kolesterol reagensa. Poslije 1 sat, intenzitet nastale boje se mjeri na 490 nm koristeći 96-posudni spektrofotometar (Molecular Devices, Menlo Park, CA). Apsorbancija se prevodi u koncentraciju (mg/dl) upoređivanjem sa standardnom krivuljom dobivenom iz standarda koji su dobiveni u kitu.

Lipoprotein visoke gustoće-kolesterol: LVG-kolesterol je mjeren poslije taloženja apoliproteina B-koji sadrži čestice metodom opisanom od strane Assmann-a et al. (Clin. Chem 1983; 29;2026-30). Ukratko, jedan volumen plazme (obično 75 μl) se miješa sa dva volumena fosfotungstične kiseline: MgCl2 (1,06 g/L:25 mM). Uzorci se dobro promiješaju i centrifugiraju na 1500xg 10 min. Preostali kolesterol u tekućini se određuje isto kao što je opisano za ukupni plazmatski kolesterol. Izračunata koncentracija se množi sa 3 da bi izvršila ispravka zbog razrjeđivanja koja se javlja zbog dodavanja agensa za taloženje.

Ne-LVG-kolesterol: Ne-LVG-kolesterol (kombinacija LNG-kolesterola, LIG-kolesterola, LVNG-kolesterola, i hilomikrin-derivata kolesterola se računaju oduzimanjem koncentracije LVG-H od koncentracije UPH.

Određivanje fekalnih neutralnih sterola u izlučevinama: Fekalni neutralni steroli se analiziraju plinskom tekućinom kromatografijom (GLC) modificiranom metodom koju su opisali Miettinen (Clin. Chim. Acta 1982; 124:245-8) i Harris et al (Clin. Pharmacol. Ther. 1990; 48:189-94). Fekalije hrčaka se skupljaju od hrčaka koji se nalaze po 6 u kavezima u toku 1-2 dana na kraju proučavanog perioda. Fekalije se liofiliziraju do konstantne težine i onda usitne tako da se homogeniziraju pomoću loptica u plastičnim bočicama na mućkalici i čuvaju na -20ºC do upotrebe.

50 mg liofiliziranih praškastih fekalija se saponificira u 2 ml 1N NaOH u 90% etanolu na 80ºC u toku 1 sata. 5α-Holestan (50 ili 100 μg/50mg uzorka) se doda prije saponifikacije kao interni standard. Poslije dodavanja 1 ml vode u smjesi za saponifikaciju, neutralni steroli se ekstrahiraju 3 puta sa 5 ml petroletera. Dobiveni ekstrakti se suše pod dušikom, i trimetilsilil (TMS) eteri se pripreme dodavanjem 0,5 ml piridin:heksametildisilazan:trimetilklorsilana (9:3:1) tijekom 30 min na sobnoj temperaturi. Smjesa se suši pod suhim dušikom, i TMS esteri sterola se resuspendiraju u 200 μl etilacetata za GLC ubacivanje. GLC se izvodi na 60mx0,32mm staklenoj kapilarnoj koloni SPB-1 (Supelco, Bellefonte, PA) koristeći temperaturni program 20ºC/min od 190 do 265ºC (Varian Vista 6000, Walnut Creek, CA). Analiza sterola se radi u triplikatu osim kada nema dovoljno fekalija. Pročišćeni koprostanol, kolestanol, kolesterol, koprostanon i β-sitosterol se koriste za identifikaciju neutralnih sterola uspoređivanjem retencijskih vremena. Kvantifikacija neutralnih sterola se postiže uspoređivanjem relativnih površina pikova (normaliziranih 5α-kolestanom) dobijenih na “flame” ionizirajućem detektoru prema poznatim količinama prečišćenih standarda.

Određivanje aktivnosti HMG-CoA reduktaze: Određivanje aktivnosti HMG-CoA reduktaze je izvedeno prema opisu Harwood et al. (J Lip Res 1993; 34:377-95). Ukratko, jetreni mikrosomi se pripremaju homogeniziranjem 0,5-1,0 g komadića jetre odmah po uklanjanju iz životinje koristeći 15 udaraca Dounce tkivnog homogenizatora na 4 ̊C u TEDK puferu [50mM Tris (pH 7.5),1 mM EDTA, SmM ditiotreitola, 70mM KCI; 2 ml po g jetre]. Homogenati se prvo centrifugiraju na 4ºC 20 min na 10,000xg i tekućina dalje centrifugira na 4ºC 90 min na 178,000xg. Dobivene mikrosomalne pelete se resuspendiraju u 1 ml TEDK pufera po g jetre sa 5 udaraca Potter-Elvehjem tučkom i čuvaju smrznuti u tekućem dušiku. Mikrosomalni protein (150 µg) se inkubira 30 min na 37ºC u konaènom volumenu od 75 μl TEDK pufera koji sadr i 3,4 mM NADP+, 30 mM glukoze-6-fosfata, 0,2 U glukoze-6-fosfat dehidrogenaze, 66,7 mM HMG-CoA (sa [14C]HMG-CoA, finalna specifična aktivnost 101 cpm/pmol), 15,000-20,000 cpm [3H] mevalonata (0,6-1.2 Ci/mmol; kao interni standard), i 68 mM EDTA da se spriječi konverzija mevalonata u fosfomevalonat za vrijeme inkubacije. Poslije inkubacije, 10 ml 6N HCl se doda radi prekidanja enzimatske reakcije i prevođenja novostvorenog mevalonata u mevalonolaktam. Mevalonolaktam se onda odvoji od neizreagiranog supstrata silika gel tankoslojnom kromatografijom uz razvijanje u toluen:aceton 1:1. Razdvojeni mevalonlakton (Rf=0,4-1,0) se ispituje na radioaktivnost u LSC brojaču. Aktivnost HMG-CoA reduktaze je izražena kao pmol mevalonata stvorenog od HMG-CoA po min po mg mikrosomalnog proteina.

Treba shvatiti da ovaj izum nije ograničen određenim ovdje uključenim opisima, ali se različite promjene i modifikacije mogu napraviti bez udaljavanja od duha i cilja ovoga novog koncepta kao što je definirano slijedećim patentnim zahtjevima.

Claims

1. Farmaceutska kombinacija kompozita, naznačena time, što je: a. terapeutski djelotvorna količina prvog spoja, pri čemu je navedeni prvi spoj inhibitor apsorpcije kolesterola, izabran iz GRUPE IA i GRUPE III gdje GRUPA IA obuhvaća spojeve formule IA’ [image] i njihove farmaceutski prihvatljive soli i hidrate gdje Q1 predstavlja metilen, karbonil, [image] Q2 predstavlja metilen, karbonil, [image] R1, R2 i R3 su nezavisno svaki vodik, hidroksi, halogen, amino, azido, (C1-C6)alkoksi(C1-C6)alkoksi ili –Z-R4; Z je pri svakom pojavljivanju nezavisno –NH-C(=O), -O-C(=O), -O-C(=O)-N(R5)-, NH-C(=O)-N(R5)-ili –O-C(=S)-N(R5)-’ R4 je pri svakom pojavljivanju nezavisno aril, aril(C1-C6)alkil, (C2-C4)alkenil, (C1-C6)alkil, ciklo(C3-C7)alkil ili ciklo(C3-C7)alkil(C1-C6)alkil; svaki R4 je proizvoljno mono-,di-ili trisupstituiran nezavisno sa halogenim, (C1-C6)alkil, hidroksi, fenoksi, trifluorometil, nitro, (C1-C4)alkoksi, metilendioksi, okso, (C1-C4)alkilsulfonil, (C1-C4)alkilsulfinil, (C1-C4)alkilsulfonil, dimetilamino, mono-ili di-(C1-C4)alkilaminokarbonil, (C1-C6) alkil karbonil, (C1-C4) alkoksi-karbonil, pirolidinilkarbonil gdje je aril vezan preko ugljika i predstavlja fenil, furil, tienil, pirolil, oksazolil, izoksazolil, oksadiazolil, tiazolil, izotiazolil, benzotiazolil, tiadiazolil, pirazolil, imidazolil ili piridil; i R5 je pri svakom pojavljivanju nezavisno vodik, (C1-C6)alkil ili R5 je takav da kada je zajedno sa dušikom za koji je vezan i sa R4, gdje je R4 kovalentna veza stvara pirolidinil, piperidinil, N-metilpiperazinil, indolil ili morfolinil i takva ciklična grupa može biti supstituirana na ugljiku sa (C1-C6)alkoksikarbonil; uz uvjet da R1, R2 i R3 nisu sve hidroksi; i GRUPA III obuhvaća spojeve Formule IB [image] gdje Q1 predstavlja metilen, karbonil, [image] Q2 predstavlja metilen, karbonil, [image] Q3 predstavlja [image] i gdje R1 predstavlja β-D-glukopiranozil, β-D-glukopiranurozil, β-D-2-acetamido-2-deoksi-glukopiranozil, β-D-galaktopiranozil, β-D-fukopiranozil, β-L-fukopiranozil, β-D-ksilopiranozil, β-L-ksilopiranozil, α-D-arabanopiranozil, α-L-arabanopiranozil, α-D-celobiozil, β-D-celobiozil, β-D-laktozil, β-D-maltozil, β-D-gentobiozil, 3-O-β-D-glukopiranozil- α-Darabanopiranozil ili, β-D-maltotriozil; i b. terapeutski djelotvorna količina drugog spoja, navedeni spoj je inhibitor HMG-CoA reduktaze, inhibitor HMG-CoA reduktaze prijenosa gena, inhibitor skvalen epoksidaze, inhibitor skvalen ciklaze ili inhibitor lanosterol demetilaze.

2. Farmaceutski kompozit kao što je navedeno u patentnom zahtjevu 1, naznačen time, što je spoj grupe IA’ inhibitor apsorpcije kolesterola iz GRUPE I i GRUPE II gdje GRUPA I obuhvaća spojeve Formule I [image] i njihove farmaceutski prihvatljive soli i hidrate gdje Q2 predstavlja metilen, karbonil, [image] R1, R2 i R3 su svaki nezavisno vodik, hidroksi, halogen, amino, azido, (C1-C6)alkoksi(C1-C6)alkoksi ili –Z-R4; Z je –NH-C(=O), -O-C(=O), -O-C(=O)-N(R5)-, -NH-C(=O)-N(R5)- ili –O-C(=S)-N(R5)-; R4 je , (C1-C6)alkil, (C2-C10)hidroksialkil, aril(C1-C6)alkil, trifluorometil(C1-C6)alkil, alkoksi, (C1-C4)karbonil, ili aril vezan preko ugljika i predstavlja fenil, furil, tienil, pirolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, izotiazolil, pirazolil, imidazolil ili piridil i aril može biti mono- di ili tri-supstituiran sa hidroksi, (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkoksi, halogenom, nitro ili trifluorometil; i R5 je vodik, (C1-C6)alkil ili R5 je takav da kada je zajedno sa dušikom za koji je vezan i sa R4, gdje je R4 kovalentna veza, stvara pirolidinil, piperidinil, N-metilpiperazinil, indolil ili morfolinil; uz uvjet da R1, R2 i R3 nisu sve hidroksi; i GRUPA II obuhvaća spojeve Formule IA [image] i njihove farmaceutski prihvatljive soli i hidrate gdje Q1 predstavlja karbonil, [image] Q2 predstavlja metilen, karbonil, [image] R1, R2 i R3 su nezavisno svaki vodik, hidroksi, halogen, amino, azido, (C1-C6)alkoksi(C1-C6)alkoksi ili –Z-R4; Z je –NH-C(=O), -O-C(=O), -O-C(=O)-N(R5)-, -NH-C(=O)-N(R5)- ili –O-C(=S)-N(R5)- R4 je, (C1-C6)alkil, (C2-C10)hidroksialkil, aril(C1-C6)alkil, ili aril vezan preko ugljika i predstavlja fenil, furil, tienil, pirolil, ili piridil i aril može biti mono- di ili tri-supstituiran sa hidroksi, (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkoksi, halogenom, nitro ili trifluorometil; i R5 je vodik, (C1-C6)alkil ili R5 je takav da kada je zajedno sa dušikom za koji je vezan i sa R4, gdje je R4 kovalentna veza, stvara pirolidinil, piperidinil, N-metilpiperazinil, indolil ili morfolinil; uz uvjet da R1, R2 i R3 nisu sve hidroksi.

3. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 1, naznačen time, što uključuje dodatno i farmaceutski nosač.

4. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 3, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze.

5. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 4, naznačen time, što je prvi spoj iz Grupe IA gdje je Q1 metilen.

6. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 5, naznačen time, što je prvi spoj (3β,5α,25R)- 3-[(4”,6”-bis- [2-fluorofenilkarbamoil]-β-D-celobiozil)oksi]spirostan-12-on.

7. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 6, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze lovastatin.

8. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 6, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze simvastatin.

9. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 6, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze pravastatin.

10. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 6, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze flurastatin

11. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 6, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze atorvastatin.

12. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 6, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze rivastatin.

13. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 2, naznačen time, što dodatno uključuje farmaceutski nosač i gdje je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze i prvi spoj je spoj Formule I iz Grupe I. [image] i njihove farmaceutski prihvatljive soli i hidrate gdje Q2 predstavlja metilen, karbonil, [image] R1, R2 i R3 su svaki nezavisno vodik, hidroksi, halogen, amino, azido, (C1-C6)alkoksi(C1-C6)alkoksi ili –Z-R4; Z je –NH-C(=O), -O-C(=O), -O-C(=O)-N(R5)-, -NH-C(=O)-N(R5)- ili –O-C(=S)-N(R5)-; R4 je (C1-C6)alkil, (C2-C10)hidroksialkil, aril(C1-C6)alkil, trifluorometil(C1-C6)alkil, alkoksi(C1-C4) karbonil, ili aril vezan preko ugljika i predstavlja fenil, furil, tienil, pirolil, oksazolil, izoksazolil, tiazolil, izotiazolil, pirazolil, imidazolil ili piridil i aril može biti mono- di-ili tri-supstituiran sa hidroksi, (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkoksi, halogenom, nitro ili trifluorometil; i R5 je vodik, (C1-C6)alkil ili R5 je takav da kada je zajedno sa dušikom za koji je vezan i sa R4, gdje je R4 kovalentna veza, stvara pirolidinil, piperidinil, N-metilpiperazinil, indolil ili morfolinil; uz uvjet da R1, R2 i R3 nisu sve hidroksi; i

14. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 4, naznačen time, što je prvi spoj spoj Formule IA gdje Q1 predstavlja karbonil, [image]

15. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 14, naznačen time, što je prvi spoj (3β,5α,25R)-3- [(4”,6”-bis-[tiazol-2-il-metilkarbamoil]-β-D-celobiozil)oksi]spirostan-11-on ili (3β,5α,12β,25R)-3- [(4”,6”-bis-[2-(metoksikarbonil)etilkarbamoil]-β-D-celobiozil)oksi]-12-hidroksispirostan-11-on.

16. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 15, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze lovastatin.

17. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 15, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze simvastatin.

18. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 15, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze pravastatin.

19. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 15, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze flurastatin.

20. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 15, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze atorvastatin.

21. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 15, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze rivastatin.

22. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 2, naznačen time, što dodatno uključuje farmaceutski nosač i gdje je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze i prvi spoj je spoj Formule IA iz Grupe II [image] i njihove farmaceutski prihvatljive soli i hidrate gdje Q1 predstavlja karbonil, [image] Q2 predstavlja metilen, karbonil, [image] R1, R2 i R3 su svaki nezavisno vodik, hidroksi, halogen, amino, azido, (C1-C6)alkoksi(C1-C6)alkoksi ili –Z-R4; Z je –NH-C(=O), -O-C(=O), -O-C(=O)-N(R5)-, -NH-C(=O)-N(R5)- ili –O-C(=S)-N(R5)-; R4 je (C1-C6)alkil, (C2-C10)hidroksialkil, aril(C1-C6)alkil ili aril vezan preko ugljika i predstavlja fenil, furil, tienil, pirolil, ili piridil i aril može biti mono- di-ili tri-supstituiran sa hidroksi, (C1-C6)alkil, (C1-C6)alkoksi, halogenom, nitro ili trifluorometil; i R5 je vodik, (C1-C4)alkil ili R5 je takav da kada je zajedno sa dušikom za koji je vezan i sa R4, gdje je R4 kovalentna veza, stvara pirolidinil, piperidinil, piperazinil ili morfolinil; uz uvjet da R1, R2 i R3 nisu sve hidroksi.

23. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 4, naznačen time, što je prvi spoj iz Grupe III.

24. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 23, naznačen time, što je prvi spoj (3β,5α,25R)-3-((β-D-celobiozil)oksi)spirostan-11-on.

25. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 24, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze lovastatin.

26. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 24, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze simvastatin.

27. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 24, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze pravastatin.

28. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 24, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze flurastatin.

29. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 24, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze atorvastatin.

30. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 24, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze rivastatin.

31. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 2, naznačen time, što dodatno uključuje farmaceutski nosač, i gdje je drugi spoj inhibitor HMG-CoA reduktaze i prvi spoj je spoj Formule IB iz Grupe III [image] gdje Q1 predstavlja karbonil, metilen, [image] Q2 predstavlja karbonil, metilen, [image] Q3 predstavlja [image] i gdje R1 predstavlja β-D-glukopiranozil, β-D-glukopiranurozil, β-D-2-acetamido-2-deoksi-glukopiranozil, β-D-galaktopiranozil, β-D-fukopiranozil, β-L-fukopiranozil, β-D-ksilopiranozil, β-L-ksilopiranozil, α-D-arabanopiranozil, α-L-arabanopiranozil, α-D-celobiozil, β-D-celobiozil, β-D-laktozil, β-D-maltozil, β-D-gentobiozil, 3-O-β-D-glukopiranozil-α-Darabanopiranozil ili, β-D-maltotriozil;

32. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 3, naznačen time, što je drugi spoj inhibitor skvalan sintetaze spoj Formule ZQ [image] i farmaceutski prihvatljive kationske i anionske soli, prodrazi i njihovi stereoizomeri gdje X predstavlja oksi, tio, -S(O)- ili –S(O)2-; Y je karbonil ili metilen; R1, R2, R3 i R9 su svaki nezavisno vodik, halogen, hidroksil, trifluorometil, (C1-C4)alkil, fluorirani (C1-C4)alkil koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C4)alkoksi; fluorirani (C1-C4)alkoksi koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C4)alkiltio, (C1-C4)alkilsulfinil, (C1-C4)alkilsulfonil, fenil, amino, mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilamino, karboksil, (C1-C6)alkoksikarbonil, karbamoil, mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilkarbamoil, (C1-C4)alkanoilamino, fluorirani (C1-C4)alkanoilamino koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C4)alkilsulfonilamino ili fluorirani (C1-C4)alkilsulfonilamino koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C6)alkanoil, (C1-C6)alkanoil(C1-C6)alkil, oksazolil, tiazolil, izoksazolil, pirazolil ili izotiazolil gdje su navedeni prethodni heterocikli vezani preko ugljika i gdje R1 i R2, mogu stvarati petočlani, šestočlani ili sedmočlani ugljikovodikov prsten ili mogu stvarati zajedno metilendioksil, etilendioksil ili propilendioksil i takvi prsteni nastaju kada se R1 i R2 povezuju u položajima 7 i 8; R4 je (C1-C7)alkil ili (C3-C4)cikloalkilmetil; Z je karboksil, (C1-C4)alkoksikarbonil, aminokarbonil, cijano, hidroksiaminokarbonil, C(O)N(H)SO2R5, tetrazol-5-il, 4,5-dihidro-5-okso-1,2,4-oksdiazol-3-il, tetrazol-5-ilaminokarbonil, 3-oksoizoksazolidin-4-il-aminokarbonil, [image] R5 je amino ili mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilamino, (C1-C4)alkil proizvoljno supstituiran sa 1 do 9 fluora; amino ili mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilamino, karboksil, (C1-C4)alkoksikarbonil, karbamoil ili mono-N- ili di-N,N-(C1-C4) alkilkarbamoil, fenil proizvoljno mono- ili di-supstituiran sa metil, metoksil, fluoro, trifluorometoksil, karboksil, (C1-C4)alkoksikarbonil, metiltio, metilsulfinil, metilsulfonil, (C1-C4)alkilsulfonilamino ili mono-N- ili di-N,N- (C1-C4)alkilaminosulfonil; ili tiazolil, izoksazolil, tienil, furil, piridinil ili takvi heterocikli koji su proizvoljno mono-supstituirani sa karboksil, ili mono- ili di-supstituirani sa metil; R6 je vodik, hidroksil ili metoksil; T stvara pet do sedmočlani mono-az, zasićeni prsten, prsten koji proizvoljno sadrži tio i proizvoljno je mono-supstituiran na ugljiku sa hidroksil; U stvara tri do sedmočlani zasićeni karboksilni prsten; V je –CO2R7, aminokarbonil, cijano, tetrazol-5-il, 4,5-dihidro-5-okso-1,2,4-oksdiazol-3-il, tetrazol-5-il- amino karbonil, ili 3-oksoizoksazolidin-4-il-aminokarbonil, R7 je vodik ili (C1-C6)alkil; p je 1, 2, 3 ili 4; R8 je hidroksil, tiol, karboksil, (C1-C6)alkoksikarbonil, karbamoil, amino, sulfamoil, (C1-C6)alkoksi, fluorirani (C1-C6)alkoksi koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C6)alkiltio, (C1-C4)alkilsulfonil, (C1-C6)alkilsulfinil, mono-N- ili di-N,N-(C1-C4)alkilkarbamoil, mono-N- ili di-N,N-(C1-C6)alkilamino, (C1-C6)alkilsulfonilamino, fluorirani (C1-C6)alkilsulfonilamino koji ima 1 do 9 fluora, (C1-C6)alkanoilamino, fluorirani (C1-C6)alkanoilamino koji ima 1 do 9 fluora, mono-N ili di-N,N-(C1-C6)alkilaminosulfonil, ureido, mono-N- ili di-N-(C1-C6)ureido, imidazolil ili piridili; i W je piridil, pirimidil,1,3,4-oksadiazolil,1,3,4-tiazolil, tiazolil,1,3,4-triazolil ili oksalil.

33. Farmaceutski kompozit prema patentnom zahtjevu 3, naznačen time, što je prvi spoj izabran od (3β,5α,25R)-3-[(4”,6”-bis[tiazol-2-il-metilkarbamoil]- β-D-celobiozil)oksi]spirostan-11-on, (3β,5α,12β,25R)-3-[(4”,6”-bis[2-(metoksikarbonil)etilkarbamoil]-β-D-celobiozil)oksi]spirostan-11-on, (3β,5α,25R)-3-((β-D-celobiozil)oksi)spirostan-11-on, ili (3β,5α,25R)-3-[(4”,6”-bis[2-fluorofenilkarbamoil]-β-D-celobiozil)oksi]spirostan-12-on; i (-)-trans-7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2-okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzotiazepin-3-octena kiselina; inhibitor skvalan sintetaze je (-)-N-trans-(7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2-okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1 -benzotiazepin-3-acetil)-izonipekotinska kiselina; (-)-trans-7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2-okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoksazepin-3- octena kiselina; (-)-N-trans-(7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2-okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoksazepin3-acetil)-izonipekotinska kiselina; (-)-N-trans-(7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-2-okso-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoksazepin3-acetil)-L-glutamil-α-metil ester; ili (-)-N-trans-(7-kloro-5-(1-naftil)-1-neopentil-1,2,3,5-tetrahidro-4,1-benzoksazepin-3-acetil)-izonipekotinska kiselina.

34. Metoda za liječenje hiperkolesterolemije kod sisavaca, naznačena time, što obuhvaća davanje sisavcima koji pate od hiperkolesterolemije a. terapeutski djelotvornu količinu inhibitora apsorpcije kolesterola prema patentnom zahtjevu 1; i b. terapeutski djelotvornu količinu drugog spoja, navedeni spoj je inhibitor HMG-CoA reduktaze, inhibitor HMG-CoA sintetaze, inhibitor HMG-CoA reduktaze prijenosa gena, inhibitor skvalen sintetaze, inhibitor skvalen epoksidaze, inhibitor skvalen ciklaze ili inhibitor lanosterol demetilaze.

35. Metoda za liječenje hiperkolesterolemije prema patentnom zahtjevu 34, naznačena time, što se inhibitor apsorpcije kolesterola i drugi spoj daju istovremeno.

36. Metoda za liječenje hiperkolesterolemije kod sisavaca, naznačena time, što obuhvaća davanje sisavcima koji boluju od hiperkolesterolemije farmaceutsku kombinaciju sastava prema patentnom zahtjevu 1.

37. Metoda za liječenje ateroskleroze kod sisavaca, naznačen time, što obuhvaća davanje sisavcima koji pate od ateroskleroze a. terapeutski djelotvornu količinu inhibitora apsorpcije kolesterola prema patentnom zahtjevu 1; i b. terapeutski djelotvornu količinu drugog spoja, navedeni spoj je inhibitor HMG-CoA reduktaze, inhibitor HMG-CoA sintetaze, inhibitor HMG-CoA reduktaze prijenosa gena, inhibitor skvalen sintetaze, inhibitor skvalen epoksidaze, inhibitor skvalen ciklaze ili inhibitor lanosterol demetilaze.

38. Metoda za liječenje ateroskleroze prema patentnom zahtjevu 37, naznačena time, što se inhibitor apsorpcije kolesterola i drugi spoj daju istovremeno.

39. Metoda za liječenje ateroskleroze kod sisavaca, naznačen time, što obuhvaća davanje sisavcima koji boluju od ateroskleroze farmaceutsku kombinaciju sastava prema patentnom zahtjevu 1.

40. Pribor za liječenje hiperkolesterolemije ili ateroskleroze, naznačen time, što sadrži a. terapeutski djelotvornu količinu inhibitora apsorpcije kolesterola prema patentnom zahtjevu 1 i farmaceutski nosač u prvoj jedinici doza; b. erapeutski djelotvornu količinu drugog spoja, navedeni spoj je inhibitor HMG-CoA reduktaze, inhibitor HMG-CoA sintetaze, inhibitor HMG-CoA reduktaze prijenosa gena, inhibitor skvalen sintetaze, inhibitor skvalen epoksidaze, inhibitor skvalen ciklaze ili inhibitor lanosterol demetilaze i farmaceutski prihvatljiv nosač u drugoj jedinici doza; i c. kontejner za navedene prve i druge doze.