FR3099178A1 - High oleic acid sunflower and process for obtaining it - Google Patents
High oleic acid sunflower and process for obtaining it Download PDFInfo
- Publication number
- FR3099178A1 FR3099178A1 FR1908408A FR1908408A FR3099178A1 FR 3099178 A1 FR3099178 A1 FR 3099178A1 FR 1908408 A FR1908408 A FR 1908408A FR 1908408 A FR1908408 A FR 1908408A FR 3099178 A1 FR3099178 A1 FR 3099178A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- plant
- sunflower
- nucleotide sequence
- sequence
- seq
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01H—NEW PLANTS OR NON-TRANSGENIC PROCESSES FOR OBTAINING THEM; PLANT REPRODUCTION BY TISSUE CULTURE TECHNIQUES
- A01H6/00—Angiosperms, i.e. flowering plants, characterised by their botanic taxonomy
- A01H6/14—Asteraceae or Compositae, e.g. safflower, sunflower, artichoke or lettuce
- A01H6/1464—Helianthus annuus [sunflower]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/01—Preparation of mutants without inserting foreign genetic material therein; Screening processes therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
- C12Y114/19—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with oxidation of a pair of donors resulting in the reduction of molecular oxygen to two molecules of water (1.14.19)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
- C12Y114/19—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with oxidation of a pair of donors resulting in the reduction of molecular oxygen to two molecules of water (1.14.19)
- C12Y114/19006—DELTA12-fatty-acid desaturase (1.14.19.6), i.e. oleoyl-CoA DELTA12 desaturase
Abstract
La présente invention concerne des séquences de nucléotides isolées qui codent une protéine oléate désaturase de tournesol tronquée. La présence de ces séquences de nucléotides permet ainsi de conduire à des plantes de tournesol ayant, de manière stable, une teneur élevée en acides oléiques. La présente invention concerne donc également les plantes, parties de plantes ou graines qui contiennent ces séquences, leur obtention et leurs utilisations dans des procédés d’introgression et/ou pour obtenir de l’huile à teneur élevée en acide oléique. Figure à publier : NEANTThe present invention relates to isolated nucleotide sequences which encode a truncated sunflower oleate desaturase protein. The presence of these nucleotide sequences thus makes it possible to lead to sunflower plants having, in a stable manner, a high content of oleic acids. The present invention therefore also relates to the plants, parts of plants or seeds which contain these sequences, their obtaining and their uses in introgression processes and / or for obtaining oil with a high oleic acid content. Figure to be published: NONE
Description
DOMAINE TECHNIQUE DE L'INVENTIONTECHNICAL FIELD OF THE INVENTION
L'invention concerne des séquences de nucléotides isolées qui codent une protéine Δ12-oléate désaturase de tournesol tronquée. En particulier ces séquences de nucléotides contiennent un codon stop prématuré qui conduit à la production de cette protéine tronquée. La présence de ces séquences de nucléotides permet ainsi de conduire à des plantes de tournesol ayant, de manière stable, une teneur élevée en acide oléique dans l’huile de graines. La présente invention concerne donc également les plantes, parties de plantes ou graines qui contiennent ces séquences, leur obtention et leurs utilisations dans des procédés d’introgression et/ou pour obtenir de l’huile à teneur élevée en acide oléique.The invention provides isolated nucleotide sequences that encode a truncated sunflower Δ12-oleate desaturase protein. In particular, these nucleotide sequences contain a premature stop codon which leads to the production of this truncated protein. The presence of these nucleotide sequences thus makes it possible to lead to sunflower plants having, in a stable manner, a high content of oleic acid in the seed oil. The present invention therefore also relates to the plants, parts of plants or seeds which contain these sequences, their production and their uses in introgression processes and/or to obtain oil with a high oleic acid content.
ARRIERE-PLAN TECHNIQUETECHNICAL BACKGROUND
Le tournesol est le plus souvent cultivé pour obtenir des huiles qui contiennent des acides gras saturés et insaturés. Les acides gras saturés possèdent 16 ou 18 atomes de carbones (C16 ou C18). Les acides gras en C16 sont généralement saturés comme l’acide palmitique (16:0). Les acides gras en C18 sont soit saturés, comme l’acide stéarique (18:0), soit insaturés avec 1, 2 ou 3 doubles liaisons, comme l’acide oléique (18:1), l’acide linoléique (18:2), l’acide linolénique (18:3).Sunflower is most commonly grown for oils that contain saturated and unsaturated fatty acids. Saturated fatty acids have 16 or 18 carbon atoms (C16 or C18). C16 fatty acids are usually saturated like palmitic acid (16:0). C18 fatty acids are either saturated, like stearic acid (18:0), or unsaturated with 1, 2 or 3 double bonds, like oleic acid (18:1), linoleic acid (18:2 ), linolenic acid (18:3).
Les huiles provenant de variétés de tournesol dits oléique faible (low oleicou LO) contiennent principalement de l’acide linoléique. Des lignées et des hybrides,dits oléique élevé (high oleicou HO) qui possèdent une teneur 18:1 élevée dans leurs graines ont été obtenues par sélection à partir du mutant Pervenets.Oils from sunflower varieties called low oleic ( low oleic or LO) contain mainly linoleic acid. Lines and hybrids, called high oleic (HO) which have a high 18:1 content in their seeds have been obtained by selection from the Pervenets mutant.
Le mutant Pervenets a été obtenu par mutagenèse chimique par Soldatov en 1976 sur une population tournesol. Le contenu moyen en 18:1 dans les graines de cette population est supérieur à 65 %, les contenus individuels allant entre 60 et 90 %, comparé à un contenu moyen de 20 % dans les variétés normales LO.The Pervenets mutant was obtained by chemical mutagenesis by Soldatov in 1976 on a sunflower population. The average 18:1 content in seeds from this population is over 65%, with individual contents ranging between 60 and 90%, compared to an average content of 20% in normal LO varieties.
La population Pervenets a été distribuée dans le monde entier et utilisée dans de nombreux programmes de sélection afin de convertir des génotypes sélectionnés avec un contenu 18:1 faible en des génotypes ayant un contenu 18:1 supérieur à 80 % dans leurs graines.The Pervenets population has been distributed worldwide and used in many breeding programs to convert selected genotypes with low 18:1 content to genotypes with over 80% 18:1 content in their seeds.
Il a été montré que le phénotype HO est associé à une diminution marquée de l’activité de l’enzyme Δ12-oléate désaturase, qui catalyse la désaturation du 18:1 vers 18:2 au cours des stades critiques de la construction du stock de lipides, ce qui explique l’accumulation de 18:1 (Garces R. et Mancha M., 1991). L’enzyme Δ12-oléate désaturase (EC 1.3.1.35) est également connue sous les noms de : acide oléique désaturase, linoléate synthase, oléoyle CoA désaturase, oleoylphosphatidylcholine désaturase, oleoyl-PC désaturase, FAD2. Chez le tournesol, trois gènesfad2ont été identifiés (fad2-1, fad2-2,etfad2-3) codant pour des Δ12-désaturase microsomales.The HO phenotype has been shown to be associated with a marked decrease in the activity of the enzyme Δ12-oleate desaturase, which catalyzes the desaturation of 18:1 to 18:2 during critical stages of stock building. lipids, which explains the accumulation of 18:1 (Garces R. and Mancha M., 1991). The enzyme Δ12-oleate desaturase (EC 1.3.1.35) is also known as: oleic acid desaturase, linoleate synthase, oleoyl CoA desaturase, oleoylphosphatidylcholine desaturase, oleoyl-PC desaturase, FAD2. In sunflower, three fad2 genes have been identified ( fad2-1, fad2-2, and fad2-3 ) encoding microsomal Δ12-desaturases.
L’enzyme Δ12-oléate désaturase (EC 1.3.1.35) est codée par le gène Δ12-désaturase correspondant au gènefad2-1.The enzyme Δ12-oleate desaturase (EC 1.3.1.35) is encoded by the Δ12-desaturase gene corresponding to the fad2-1 gene.
Par ailleurs, l’analyse moléculaire a montré que la mutation Pervenets est associée à une duplication du gène Δ12-désaturase, conduisant à une mise sous silence génétique ousilencing. Cette diminution de transcription explique la diminution du niveau d’enzyme et ainsi la diminution de l’activité Δ12- oléate désaturase qui produit une plus grande accumulation d’acide oléique dans les graines de tournesol (Hongtrakul et al., 1998). Des marqueurs moléculaires associés à cette mutation ont été développés pour être utilisés dans les programmes de croisement basé sur la sélection des génotypes HO (WO 2005/106022 ; Lacombe et al. 2001).Furthermore, molecular analysis has shown that the Pervenets mutation is associated with a duplication of the Δ12-desaturase gene, leading to genetic silencing or silencing . This decrease in transcription explains the decrease in the enzyme level and thus the decrease in Δ12-oleate desaturase activity which produces a greater accumulation of oleic acid in sunflower seeds (Hongtrakul et al., 1998). Molecular markers associated with this mutation have been developed for use in breeding programs based on the selection of HO genotypes (WO 2005/106022; Lacombe et al. 2001).
Pour obtenir une teneur à la fois plus élevée en acide oléique et aussi plus stable, une mutation knock-down dans le gène Δ12-désaturase a été isolée par les inventeurs. Les documents WO2013004280 et WO2013004281 décrivent une mutation obtenue par traitement chimique dans le gène Δ12-désaturase sélectionnée pour un phénotype d’augmentation du contenu oléique comparé à celui de la mutation Pervenets. Différentes mutations ont été obtenues chez le tournesol, créant un codon STOP dans la phase de lecture, et conduisant à une protéine tronquée. Toutes ces mutations conduisent cependant à une protéine tronquée d’une longueur inférieure ou égale à 110 acides aminés.To obtain a content that is both higher in oleic acid and also more stable, a knock-down mutation in the Δ12-desaturase gene was isolated by the inventors. Documents WO2013004280 and WO2013004281 describe a mutation obtained by chemical treatment in the Δ12-desaturase gene selected for a phenotype of increased oleic content compared to that of the Pervenets mutation. Different mutations have been obtained in sunflower, creating a STOP codon in the reading phase, and leading to a truncated protein. All these mutations, however, lead to a truncated protein with a length less than or equal to 110 amino acids.
Il est donc intéressant d’explorer si d’autres mutations peuvent aboutir à une teneur élevée en acide oléique et/ou à une meilleure stabilité chez le tournesol.It is therefore of interest to explore whether other mutations may lead to high oleic acid content and/or better stability in sunflower.
Selon un premier aspect, la présente invention concerne une séquence de nucléotides isolée qui comprend un codon stop aux positions 484 à 486 en référence à la séquence de nucléotides sauvage SEQ ID NO : 1, et qui code une protéine Δ12- oléate désaturase qui présente au moins 95% d’identité avec SEQ ID NO 4 :According to a first aspect, the present invention relates to an isolated nucleotide sequence which comprises a stop codon at positions 484 to 486 with reference to the wild-type nucleotide sequence SEQ ID NO: 1, and which encodes a Δ12-oleate desaturase protein which presents at least 95% identity with SEQ ID NO 4:
MGAGEYTSVTNENNPLDRVPHAKPPFTIGDLKKAIPPHCFQRSLTRSFSYVLSDLTITAVLYHIATTYFHHLPTPLSSIAWASYWVVQGCVLTGVWVIAHECGHHAFSDYQWVDDTVGFVLHSSLLVPYFSWKYSHHRHHSNTGSLERDEVFVPKSRSKVP.MGAGEYTSVTNENNPLDRVPHAKPPFTIGDLKKAIPPHCFQRSLTRSFSYVLSDLTITAVLYHIATTYFHHLPTPLSSIAWASYWVVQGCVLTGVWVIAHECGHHAFSDYQWVDDTVGFVLHSSLLVPYFSWKYSHHRHHSNTGSLERDEVFVPKSRSKVP.
De préférence, la séquence de nucléotides selon l’invention est de séquence SEQ ID NO : 2 : ATGGGTGCAGGAGAATACACGTCTGTGACCAACGAAAACAACCCACTCGATCGAGTCCCTCATGCAAAACCACCCTTCACCATCGGCGATCTGAAAAAAGCCATCCCACCACACTGCTTCCAGCGGTCGCTAACCCGTTCGTTCTCCTACGTGCTGTCTGACCTCACCATAACCGCTGTCCTCTACCACATTGCCACCACCTACTTCCACCACCTCCCCACCCCTTTGTCATCCATCGCATGGGCCTCTTACTGGGTAGTCCAAGGCTGCGTCCTCACCGGAGTCTGGGTCATCGCCCACGAATGTGGTCACCATGCGTTTAGTGATTATCAATGGGTCGACGACACTGTGGGCTTTGTTCTCCACTCGTCTTTACTCGTCCCTTACTTTTCGTGGAAATATAGTCACCACCGCCACCATTCCAACACTGGATCACTCGAGCGGGACGAGGTTTTCGTCCCCAAATCCCGATCGAAAGTCCCGTAGTACTCGAAATACTTTAACAACACAGTGGGCCGCATTGTCAGTATGTTCGTCACTCTCACTCTCGGCTGGCCCTTGTACTTAGCTTTCAATGTGTCGGGCCGACCCTATGACCGTTTCGCCTGCCACTACGTCCCAACCAGCCCTATGTACAATGAACGTAAACGTTACCAGATAGTCATGTCCGACATCGGGATTGTTATCACATCGTTCATCCTTTATCGTGTTGCTATGGCAAAAGGGTTGGTTTGGGTGATTTGCGTCTATGGGGTTCCGTTGATGGTTGTGAACGCGTTTCTGGTGTTGATCACTTATCTTCAACATACTCACCCTGGCTTGCCGCATTATGATAGCTCGGAATGGGAATGGTTAAAGGGAGCATTGGCGACAGTGGACCGTGACTATGGTGTGTTGAACAAGGTGTTCCATCATATTACCGACACACATGTGGTGCACCATTTGTTTTCGACAATGCCTCATTATAATGCGATGGAAGCACAGAAGGCGCTGAGACCGGTGCTTGGGGAGTATTATCGGTTTGACAAGACCCCGTTTTATGTAGCCATGTGGAGAGAGATGAAGGAATGTTTGTTTGTGGAGCAAGATGATGAAGGGAAAGGAGGTGTGTTTTGGTACAAGAATAAGATGAATTAA.De préférence, la séquence de nucléotides selon l’invention est de séquence SEQ ID NO : 2 : ATGGGTGCAGGAGAATACACGTCTGTGACCAACGAAAACAACCCACTCGATCGAGTCCCTCATGCAAAACCACCCTTCACCATCGGCGATCTGAAAAAAGCCATCCCACCACACTGCTTCCAGCGGTCGCTAACCCGTTCGTTCTCCTACGTGCTGTCTGACCTCACCATAACCGCTGTCCTCTACCACATTGCCACCACCTACTTCCACCACCTCCCCACCCCTTTGTCATCCATCGCATGGGCCTCTTACTGGGTAGTCCAAGGCTGCGTCCTCACCGGAGTCTGGGTCATCGCCCACGAATGTGGTCACCATGCGTTTAGTGATTATCAATGGGTCGACGACACTGTGGGCTTTGTTCTCCACTCGTCTTTACTCGTCCCTTACTTTTCGTGGAAATATAGTCACCACCGCCACCATTCCAACACTGGATCACTCGAGCGGGACGAGGTTTTCGTCCCCAAATCCCGATCGAAAGTCCCGTAGTACTCGAAATACTTTAACAACACAGTGGGCCGCATTGTCAGTATGTTCGTCACTCTCACTCTCGGCTGGCCCTTGTACTTAGCTTTCAATGTGTCGGGCCGACCCTATGACCGTTTCGCCTGCCACTACGTCCCAACCAGCCCTATGTACAATGAACGTAAACGTTACCAGATAGTCATGTCCGACATCGGGATTGTTATCACATCGTTCATCCTTTATCGTGTTGCTATGGCAAAAGGGTTGGTTTGGGTGATTTGCGTCTATGGGGTTCCGTTGATGGTTGTGAACGCGTTTCTGGTGTTGATCACTTATCTTCAACATACTCACCCTGGCTTGCCGCATTATGATAGCTCGGAATGGGAATGGTTAAAGGGAGCATTGGCGACAGTGGACCGTGACTATGGTGTGTTGAACAAGGTGTTCCATCATATTACCGACACACATGTGGTGCACCATTTGTTTTCGACAATGCCTCATTATAATGCGATGGAAGCACAGAAGGCGCTGAGACCGGTGCTTGGGGAGTATTATCGGTTTGACAAGACCCCGTTTTATGTAGCCATGTGGAGAGAGATGAAGGAATGTTTGTTTGTGGAGCAAGATGATGAAGGGAAAGGAGGTGTGTTTTGGTACAAGAATAAGATGAATTAA.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne une protéine Δ12-oléate désaturase de tournesol tronquée de séquence SEQ ID NO : 4.According to another aspect, the present invention relates to a truncated sunflower Δ12-oleate desaturase protein of sequence SEQ ID NO: 4.
Selon encore un autre aspect, la présente invention se rapporte à une plante de tournesol comprenant une séquence de nucléotides selon l’invention, qui peut être présente soit à l’état hétérozygote soit à l’état homozygote dans le génome de ladite plante. De préférence, la séquence des nucléotides selon l’invention est présente à l’état homozygote.According to yet another aspect, the present invention relates to a sunflower plant comprising a nucleotide sequence according to the invention, which may be present either in the heterozygous state or in the homozygous state in the genome of said plant. Preferably, the nucleotide sequence according to the invention is present in the homozygous state.
Les graines produites par les plantes de tournesol selon l’invention constituent également un autre aspect de la présente invention, ainsi que leur descendance dès lors qu’elles comprennent au moins une séquence de nucléotides selon la présente invention. De telles graines possèdent une teneur en acide oléique d’au moins 85 %, par rapport au pourcentage total d’acides gras desdites graines, et de préférence une teneur en acide oléique comprise dans une gamme allant de 85 % à 95 %, en particulier lorsqu’elles comprennent la séquence selon l’invention à l’état homozygote.The seeds produced by the sunflower plants according to the invention also constitute another aspect of the present invention, as well as their offspring when they comprise at least one nucleotide sequence according to the present invention. Such seeds have an oleic acid content of at least 85%, relative to the total percentage of fatty acids of said seeds, and preferably an oleic acid content comprised in a range going from 85% to 95%, in particular when they comprise the sequence according to the invention in the homozygous state.
Selon encore un autre aspect, la présente invention concerne un procédé d’obtention d’une plante de tournesol comprenant une séquence de nucléotides selon l’invention, ledit procédé comprenant les étapes suivantes :
a) Procéder à la mutagenèse d’une partie de plante de tournesol pour qu’elle comprenne une séquence de nucléotides selon l’invention,
b) Générer une plante à partir de ladite partie de plante ayant subi ladite mutagenèse,
c) Obtenir au moins une descendance à partir de la plante générée à l’étape b), et
d) Identifier et sélectionner au moins une plante obtenue à l’étape b) ou c) comprenant ladite séquence de nucléotides selon l’invention.According to yet another aspect, the present invention relates to a method for obtaining a sunflower plant comprising a sequence of nucleotides according to the invention, said method comprising the following steps:
a) Carry out the mutagenesis of a part of a sunflower plant so that it comprises a sequence of nucleotides according to the invention,
b) Generate a plant from said plant part having undergone said mutagenesis,
c) Obtain at least one progeny from the plant generated in step b), and
d) Identifying and selecting at least one plant obtained in step b) or c) comprising said nucleotide sequence according to the invention.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé d’identification de la présence, ou de l’absence, d’une séquence de nucléotides ou d’acides aminés selon l’invention dans une plante de tournesol, comprenant l’extraction de l’ADN génomique, de l’ARN ou de l’ensemble des protéines du protéome de la plante de tournesol et l’utilisation de moyens d’identification de ladite séquence.According to another aspect, the present invention relates to a method for identifying the presence, or the absence, of a sequence of nucleotides or amino acids according to the invention in a sunflower plant, comprising the extraction of genomic DNA, RNA or all the proteome proteins of the sunflower plant and the use of means for identifying said sequence.
Les moyens d’identification d’une plante, partie de plante selon l’invention constituent également un des aspects de la présente invention. L’utilisation de ces moyens permet ainsi d’identifier et/ou de sélectionner des plantes de tournesol ou des graines selon l’invention.The means of identifying a plant, part of a plant according to the invention also constitute one of the aspects of the present invention. The use of these means thus makes it possible to identify and/or select sunflower plants or seeds according to the invention.
Dans un autre aspect, la présente invention concerne un procédé de croisement par sélection dite «forward» d’une plante de tournesol comprenant une séquence de nucléotides selon l’invention; ledit procédé comprenant les étapes suivantes :
a) Croisement de ladite plante avec toute autre plante de tournesol présentant des caractéristiques agronomiques pour obtenir une plante F1,
b) Autofécondation d’une plante F1 comprenant ladite séquence de nucléotides selon l’invention,
c) Répétition de l’étape b) pour obtenir une descendance comprenant ladite séquence de nucléotides selon l’invention et présentant au moins une desdites caractéristiques agronomiques.In another aspect, the present invention relates to a method of crossing by so-called “ forward ” selection of a sunflower plant comprising a sequence of nucleotides according to the invention; said method comprising the following steps:
a) Crossing of said plant with any other sunflower plant with agronomic characteristics to obtain an F1 plant,
b) Self-fertilization of an F1 plant comprising said nucleotide sequence according to the invention,
c) Repetition of step b) to obtain progeny comprising said nucleotide sequence according to the invention and exhibiting at least one of said agronomic characteristics.
Selon encore un autre aspect, l’invention concerne un procédé d’introgression par rétrocroisement d’un fragment de génome comprenant une séquence de nucléotides selon l’invention telle que décrite ci-dessus, à partir d’une plante de tournesol donneuse vers une plante de tournesol receveuse qui ne contient pas ladite séquence de nucléotides dans son génome, ledit procédé comprenant les étapes suivantes :
a) Croisement de la plante de tournesol donneuse avec la plante receveuse,
b) Obtention d’un hybride F1,
c) Rétrocroisement dudit hybride F1 avec la plante receveuse,
d) Sélection d’une plante comprenant ladite séquence de nucléotides selon l’invention,
e) Rétrocroisement de la plante sélectionnée à l’étape d) avec la plante receveuse
f) Optionnellement, autofécondation des plantes obtenues en e) pour obtenir une plante comprenant ladite séquence de nucléotides selon l’invention à l’état homozygote.According to yet another aspect, the invention relates to a process for introgression by backcrossing of a genome fragment comprising a nucleotide sequence according to the invention as described above, from a donor sunflower plant to a recipient sunflower plant which does not contain said nucleotide sequence in its genome, said method comprising the following steps:
a) Crossing the donor sunflower plant with the recipient plant,
b) Obtaining an F1 hybrid,
c) Backcrossing of said F1 hybrid with the recipient plant,
d) Selection of a plant comprising said nucleotide sequence according to the invention,
e) Backcrossing of the plant selected in step d) with the recipient plant
f) Optionally, self-fertilization of the plants obtained in e) to obtain a plant comprising said nucleotide sequence according to the invention in the homozygous state.
Enfin, selon un dernier aspect, la présente invention concerne l’utilisation de graines de tournesol selon l’invention telles que décrites ci-dessus, pour obtenir de l’huile, et en particulier de l’huile ayant une teneur élevée en acide oléique, c’est-à-dire d’au moins 85 % d’acide oléique par rapport à la quantité totale d’acides gras présents dans cette huile.Finally, according to a last aspect, the present invention relates to the use of sunflower seeds according to the invention as described above, to obtain oil, and in particular oil having a high oleic acid content. , that is to say at least 85% oleic acid relative to the total amount of fatty acids present in this oil.
DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTIONDETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
La présente invention concerne une séquence de nucléotides isolée qui comprend un codon stop aux positions 484 à 486 en référence à la séquence de nucléotides sauvage SEQ ID NO : 1, et qui code une protéine Δ12- oléate désaturase qui présente au moins 95% d’identité avec SEQ ID NO : 4.The present invention relates to an isolated nucleotide sequence which comprises a stop codon at positions 484 to 486 with reference to the wild-type nucleotide sequence SEQ ID NO: 1, and which encodes a Δ12-oleate desaturase protein which has at least 95% of identity with SEQ ID NO: 4.
La Δ12-oleate désaturase de tournesol (Helianthus annuus)selon la présente invention est exprimée à partir du gènefad2-1muté dont la structure est représentée sur la Figure 1. La mutation correspond au changement du codon correspondant à l’acide aminé tryptophane « W » en un codon STOP. Ce codon STOP est prématuré par rapport à la séquence sauvage SEQ ID NO : 1. La séquence de nucléotides selon l’invention code une protéine tronquée Δ12-oleate désaturase de tournesol qui comprend plus de 110 acides aminés, en particulier plus de 130 acides aminés, et de manière préférée plus de 160 acides aminés.The sunflower ( Helianthus annuus) Δ12-oleate desaturase according to the present invention is expressed from the mutated fad2-1 gene, the structure of which is shown in Figure 1. The mutation corresponds to the change in the codon corresponding to the amino acid tryptophan " W” into a STOP codon. This STOP codon is premature compared to the wild-type sequence SEQ ID NO: 1. The nucleotide sequence according to the invention encodes a truncated protein Δ12-oleate desaturase from sunflower which comprises more than 110 amino acids, in particular more than 130 amino acids , and preferably more than 160 amino acids.
La séquence de nucléotides qui code une protéine Δ12-oleate désaturase de tournesol tronquée de séquence SEQ ID NO : 4 selon l’invention peut être toute séquence de nucléotides de séquence SEQ ID : 1, dans laquelle un quelconque codon STOP est présent aux positions 484 à 486, et notamment un codon choisi parmi TAA, TAG et TGA. De préférence, la séquence de nucléotides selon l’invention est la séquence SEQ ID NO : 2.The nucleotide sequence which encodes a truncated sunflower Δ12-oleate desaturase protein of sequence SEQ ID NO: 4 according to the invention can be any nucleotide sequence of sequence SEQ ID: 1, in which any STOP codon is present at positions 484 at 486, and in particular a codon chosen from TAA, TAG and TGA. Preferably, the nucleotide sequence according to the invention is the sequence SEQ ID NO: 2.
Dans ce contexte, selon un premier aspect, la présente invention concerne une séquence de nucléotides comprenant un codon stop aux positions 484 à 486 en référence à la séquence nucléotidique sauvage SEQ ID NO :1 et, qui code une protéine Δ12-oleate désaturase qui présente au moins 95% d’identité avec SEQ ID NO : 4, et préférentiellement, une protéine Δ12-oleate désaturase qui présente au moins 96%, 97%, 98% ou au moins 99% d’identité avec SEQ ID NO : 4.In this context, according to a first aspect, the present invention relates to a nucleotide sequence comprising a stop codon at positions 484 to 486 with reference to the wild-type nucleotide sequence SEQ ID NO: 1 and, which encodes a Δ12-oleate desaturase protein which presents at least 95% identity with SEQ ID NO: 4, and preferably, a Δ12-oleate desaturase protein which exhibits at least 96%, 97%, 98% or at least 99% identity with SEQ ID NO: 4.
De manière particulièrement préférée, la protéine de tournesol selon l’invention est la séquence de 161 acides aminés de séquence SEQ ID NO : 4. La protéine sauvage est la séquence SEQ ID NO : 3 (Figure 1) de 378 acides-aminés codée par la séquence nucléotidique sauvage SEQ ID NO : 1.Particularly preferably, the sunflower protein according to the invention is the sequence of 161 amino acids of sequence SEQ ID NO: 4. The wild type protein is the sequence SEQ ID NO: 3 (FIG. 1) of 378 amino acids encoded by the wild-type nucleotide sequence SEQ ID NO: 1.
Les pourcentages d’identité auxquels il est fait référence dans le cadre de l’exposé de la présente invention sont déterminés après alignement optimal des séquences à comparer, qui peuvent donc comprendre une ou plusieurs additions, délétions, troncatures et/ou substitutions. Ce pourcentage d’identité peut être calculé par toute méthode d’analyse de séquences bien connue de l’homme du métier.The percentages of identity to which reference is made in the context of the description of the present invention are determined after optimal alignment of the sequences to be compared, which may therefore comprise one or more additions, deletions, truncations and/or substitutions. This percentage of identity can be calculated by any sequence analysis method well known to those skilled in the art.
De préférence, le pourcentage d’identité défini dans le cadre de la présente invention est déterminé au moyen d’un alignement global des séquences à comparer sur toute leur longueur. Il peut notamment être évalué à l’aide du programme BLASTP, plus spécifiquement BLASTP 2.2.29, Altschul et al, 1997 et Altschul et al, 2005, avec la séquence mutante tronquée SEQ ID NO : 4. Ainsi, on peut notamment utiliser les paramètres suivants de l’algorithme :Preferably, the percentage of identity defined in the context of the present invention is determined by means of an overall alignment of the sequences to be compared over their entire length. It can in particular be evaluated using the BLASTP program, more specifically BLASTP 2.2.29, Altschul et al, 1997 and Altschul et al, 2005, with the truncated mutant sequence SEQ ID NO: 4. Thus, it is possible in particular to use the following parameters of the algorithm:
“Seuil attendu (Expected threshold) : 10
Longueur de mot (Word size) : 3
Nombre maximum de concordances dans une zone de la requête (Max matches in a query range) : 0
Matrice (Matrix) : BLOSUM62
Coûts des trous (Gap Costs) : Existence 11, Extension 1.
Ajustements des compositions (Compositional adjustments) : ajustement de la matrice de scores sur la composition conditionnelle (Conditional compositional score matrix adjustment)
Pas de filtre des régions de faible complexité (No filter for low complexity regions)”.“ Expected threshold : 10
Word length ( Word size ): 3
Maximum number of matches in a query range ( Max matches in a query range ): 0
Matrix ( Matrix ): BLOSUM62
Gap Costs : Existence 11, Extension 1.
Compositional adjustments : Conditional compositional score matrix adjustment
No filter for low complexity regions ”.
Selon un autre aspect, la présente invention se rapporte à une plante de tournesol comprenant une séquence de nucléotides comprenant un codon STOP aux positions 484 à 486 en référence à la séquence nucléotidique sauvage SEQ ID NO : 1 et qui code une protéine Δ12-oleate désaturase qui présente au moins 95% d’identité avec SEQ ID NO : 4, et préférentiellement, une protéine Δ12-oleate désaturase qui présente au moins 96%, 97%, 98% ou au moins 99% d’identité avec SEQ ID NO : 4.According to another aspect, the present invention relates to a sunflower plant comprising a nucleotide sequence comprising a STOP codon at positions 484 to 486 with reference to the wild-type nucleotide sequence SEQ ID NO: 1 and which encodes a Δ12-oleate desaturase protein which has at least 95% identity with SEQ ID NO: 4, and preferably, a Δ12-oleate desaturase protein which has at least 96%, 97%, 98% or at least 99% identity with SEQ ID NO: 4.
La présente invention est relative à toute plante de tournesol qui possède au moins un allèle muté du gène codant la protéine Δ12-oleate désaturase correspondant à une séquence de nucléotides selon l’invention. En particulier, la plante de tournesol selon l’invention possède cette séquence de nucléotides dans son génome, à l’état hétérozygote ou homozygote.The present invention relates to any sunflower plant which has at least one mutated allele of the gene encoding the Δ12-oleate desaturase protein corresponding to a nucleotide sequence according to the invention. In particular, the sunflower plant according to the invention has this nucleotide sequence in its genome, in the heterozygous or homozygous state.
La plante de tournesol selon l’invention peut être une lignée ou un hybride.The sunflower plant according to the invention can be a line or a hybrid.
Lorsque la séquence nucléotides selon l’invention est présente à l’état hétérozygote, ladite plante peut éventuellement comprendre un autre allèle qui conduit à une inhibition du gène codant la protéine Δ12-oleate désaturase et qui permet, en combinaison avec la mutation selon l’invention, de produire des graines ayant une teneur en acide oléique d’au moins 85 % par rapport au pourcentage total d’acides gras desdites graines. Parmi les exemples d’autre allèle connu de l’art antérieur qui conduit à une inhibition du gène codant la protéine Δ12-oleate désaturase, on peut notamment citer la mutation Pervenets. Par « inhibition du gène codant la protéine Δ12-oleate désaturase », on entend une inhibition de l’expression du transcrit, de sa traduction, ou l’absence de protéine fonctionnelle. De manière avantageuse, la séquence de nucléotides selon l’invention est présente à l’état homozygote dans la plante de tournesol de l’invention, ladite plante produisant des graines comprenant cette séquence de nucléotides selon l’invention et ayant une teneur en acide oléique d’au moins 85 % par rapport au pourcentage total d’acides gras desdites graines.When the nucleotide sequence according to the invention is present in the heterozygous state, said plant may optionally comprise another allele which leads to inhibition of the gene encoding the Δ12-oleate desaturase protein and which allows, in combination with the mutation according to invention, to produce seeds having an oleic acid content of at least 85% relative to the total percentage of fatty acids of said seeds. Among the examples of another allele known from the prior art which leads to an inhibition of the gene encoding the Δ12-oleate desaturase protein, mention may in particular be made of the Pervenets mutation. By “inhibition of the gene encoding the Δ12-oleate desaturase protein”, is meant an inhibition of the expression of the transcript, of its translation, or the absence of functional protein. Advantageously, the nucleotide sequence according to the invention is present in the homozygous state in the sunflower plant of the invention, said plant producing seeds comprising this nucleotide sequence according to the invention and having an oleic acid content at least 85% relative to the total percentage of fatty acids of said seeds.
De préférence, la teneur en acide oléique de ces graines est comprise dans une gamme allant de 85 % à 95 %, par rapport au pourcentage total d’acides gras desdites graines.Preferably, the oleic acid content of these seeds is within a range from 85% to 95%, relative to the total percentage of fatty acids of said seeds.
Un autre objet de la présente invention concerne donc également des graines de tournesol susceptible d’être obtenues à partir d’une plante de tournesol telle que décrite ci-dessus. Ces graines contiennent au moins un allèle muté du gène codant la protéine Δ12-oleate désaturase correspondant à une séquence de nucléotides selon l’invention. Lorsque la séquence nucléotides selon l’invention est présente à l’état hétérozygote, ladite graine peut éventuellement comprendre un autre allèle qui conduit à une inhibition du gène codant la protéine Δ12-désaturase et qui permet, en combinaison avec la séquence nucléotides selon l’invention, d’obtenir des graines ayant une teneur en acide oléique d’au moins 85 % par rapport au pourcentage total d’acides gras desdites graines. Parmi les exemples d’autre allèle connu de l’art antérieur qui conduit à une inhibition du gène codant la protéine Δ12-désaturase, on peut notamment citer la mutation Pervenets.Another object of the present invention therefore also relates to sunflower seeds which can be obtained from a sunflower plant as described above. These seeds contain at least one mutated allele of the gene encoding the Δ12-oleate desaturase protein corresponding to a nucleotide sequence according to the invention. When the nucleotide sequence according to the invention is present in the heterozygous state, said seed may optionally comprise another allele which leads to inhibition of the gene encoding the Δ12-desaturase protein and which allows, in combination with the nucleotide sequence according to invention, to obtain seeds having an oleic acid content of at least 85% relative to the total percentage of fatty acids of said seeds. Among the examples of another allele known from the prior art which leads to inhibition of the gene encoding the Δ12-desaturase protein, mention may in particular be made of the Pervenets mutation.
De façon préférée, les graines possèdent la séquence de nucléotides selon l’invention à l’état homozygote et ont une teneur en acide oléique d’au moins 85 % par rapport au pourcentage total d’acides gras desdites graines. De préférence, ces graines possèdent une teneur en acide oléique comprise dans une gamme allant de 85 % à 95 %.Preferably, the seeds have the nucleotide sequence according to the invention in the homozygous state and have an oleic acid content of at least 85% relative to the total percentage of fatty acids of said seeds. Preferably, these seeds have an oleic acid content in a range from 85% to 95%.
Toute descendance d’une graine selon l’invention telle décrite ci-dessus constitue un autre objet de la présente invention dès lors qu’elle comprend une séquence de nucléotides selon l’invention comme décrit ci-dessus.Any progeny of a seed according to the invention as described above constitutes another object of the present invention when it comprises a sequence of nucleotides according to the invention as described above.
Selon encore un autre aspect, la présente invention concerne un procédé d’obtention d’une plante de tournesol comprenant une séquence de nucléotides selon l’invention, comprenant les étapes suivantes :
a) Procéder à la mutagenèse d’une partie de plante de tournesol pour qu’elle comprenne une séquence de nucléotides selon l’invention,
b) Générer une plante à partir de ladite partie de plante ayant subi ladite mutagenèse,
c) Obtenir au moins une descendance à partir de la plante générée à l’étape b), et
d) Identifier et sélectionner au moins une plante obtenue à l’étape b) ou c) comprenant ladite séquence de nucléotides selon l’invention.According to yet another aspect, the present invention relates to a process for obtaining a sunflower plant comprising a sequence of nucleotides according to the invention, comprising the following steps:
a) Carry out the mutagenesis of a part of a sunflower plant so that it comprises a sequence of nucleotides according to the invention,
b) Generate a plant from said plant part having undergone said mutagenesis,
c) Obtain at least one progeny from the plant generated in step b), and
d) Identifying and selecting at least one plant obtained in step b) or c) comprising said nucleotide sequence according to the invention.
En particulier, le procédé permettra d’obtenir une plante de tournesol à teneur élevée en acide oléique.In particular, the process will make it possible to obtain a sunflower plant with a high oleic acid content.
Plus particulièrement, le procédé d’obtention pourra comprendre une étape supplémentaire, comme par exemple une autofécondation, pour permettre d’obtenir une plante à teneur élevée en acide oléique comprenant la séquence de nucléotides selon l’invention à l’état homozygote.More particularly, the process for obtaining may comprise an additional step, such as for example self-fertilization, to make it possible to obtain a plant with a high oleic acid content comprising the nucleotide sequence according to the invention in the homozygous state.
Dans ce cadre, on entend par « plante de tournesol à teneur élevée en acide oléique », une plante dont la teneur en acide oléique des graines est d’au moins 85 %, par rapport à la teneur totale en acide gras de ces graines et préférentiellement dans une gamme allant d’au moins 85 à 95% ou plus préférentiellement d’au moins 86 à 95%, ou d’au moins 87 à 95% ou d’au moins 88 à 95% ou d’au moins 89 à 95%. Plus spécifiquement, le teneur pourra être comprise dans une gamme allant d’au moins 89 à 94% ou d’au moins 89 à 93% ou d’au moins 89 à 92% ou d’au moins 89 à 91% ou d’au moins 89 à 90%.In this context, the term "sunflower plant with a high oleic acid content" means a plant whose oleic acid content of the seeds is at least 85%, relative to the total fatty acid content of these seeds and preferentially in a range going from at least 85 to 95% or more preferentially from at least 86 to 95%, or from at least 87 to 95% or from at least 88 to 95% or from at least 89 to 95%. More specifically, the content may be within a range going from at least 89 to 94% or from at least 89 to 93% or from at least 89 to 92% or from at least 89 to 91% or from at least 89-90%.
Pour procéder à la mutagenèse d’une partie de plante de tournesol, toute technique bien connue de l’homme du métier peut être utilisée. On peut notamment utiliser des techniques de mutagenèse aléatoire telles que la mutagenèse induite par un agent chimique ou physique comme le traitement au éthyl-méthanesulfonate (EMS) ou l’irradiation ou encore des méthodes telles que le TILLING (Targeting Induced Local Lesions in Genomes) (Till et al, 2003), ou encore telle que la technique de recombinaison aléatoire ou «DNA shuffling» (Stemmer, 1994). Il est également possible d’utiliser toute technique d’édition de gènes, permettant une modification ciblée des gènes, telle que TALENs, telle que décrite dans WO2011072246 ou la technologie CRISPR comme décrite par exemple dans WO2013181440, ou grâce aux technologies comme celles décrites dans WO2017004375 ou WO2018015956 couplant la technologie d’édition et l’induction d’haploïdes.To carry out the mutagenesis of a part of a sunflower plant, any technique well known to those skilled in the art can be used. It is in particular possible to use random mutagenesis techniques such as mutagenesis induced by a chemical or physical agent such as treatment with ethyl-methanesulfonate (EMS) or irradiation or even methods such as TILLING ( Targeting Induced Local Lesions in Genomes ) (Till et al, 2003), or such as the random recombination technique or " DNA shuffling " (Stemmer, 1994). It is also possible to use any gene editing technique, allowing targeted modification of genes, such as TALENs, as described in WO2011072246 or CRISPR technology as described for example in WO2013181440, or using technologies such as those described in WO2017004375 or WO2018015956 coupling editing technology and haploid induction.
Dans le cas d’utilisation de technologie d’édition ciblée, la mutation selon l’invention pourra être générée directement sur des lignées élites de tournesol qui seront utilisées comme géniteurs dans la production d’hybrides.In the case of use of targeted editing technology, the mutation according to the invention can be generated directly on elite lines of sunflower which will be used as progenitors in the production of hybrids.
De préférence, on utilise une cellule, un tissu cellulaire, un cal ou une graine issue de la plante comme partie de plante du tournesol pour procéder à l’étape a) de mutagenèse dans le cadre du procédé d’obtention d’une plante de tournesol selon l’invention.Preferably, a cell, a cellular tissue, a callus or a seed derived from the plant as plant part of the sunflower is used to carry out step a) of mutagenesis within the framework of the process for obtaining a plant of sunflower according to the invention.
Les méthodes permettant de générer une plante à partir d’une partie de plante ayant subi une mutagenèse, ainsi que pour produire une descendance à partir de celle-ci, sont bien connues de l’homme du métier.Methods for generating a plant from a plant part which has undergone mutagenesis, as well as for producing progeny therefrom, are well known to those skilled in the art.
L’identification et la sélection d’une plante obtenue à l’étape b) peuvent être réalisées par toute technique bien connue de l’homme du métier. Notamment, par des techniques d’amplification PCR,Northern BlotouSouthern Blot, puces, «ligase chain reaction» (LCR), et «genotyping-by-sequence» (GBS), ou une combinaison de ces techniques.The identification and selection of a plant obtained in step b) can be carried out by any technique well known to those skilled in the art. In particular, by PCR, Northern Blot or Southern Blot , chip, “ ligase chain reaction ” (LCR), and “ genotyping-by-sequence ” (GBS) amplification techniques, or a combination of these techniques.
Différentes méthodes de PCR sont connues de l’homme du métier, comme la RT-PCR ou la méthode mettant en œuvre des amorces de type Kaspar (KBioscience (LGC Group, Teddington, Middlesex, UK).Different PCR methods are known to those skilled in the art, such as RT-PCR or the method using Kaspar-type primers (KBioscience (LGC Group, Teddington, Middlesex, UK).
La méthode de génotypageKompetitive Allele SpecificPCR « KASP™ » utilise trois amorces cibles spécifiques : deux amorces, chacune étant spécifique de chaque forme allélique d’un SNP donné (Single Nucleotide Polymorphism) et une troisième amorce pour permettre l’amplification reverse pour chaque forme allélique.The Kompetitive Allele Specific PCR “KASP™” genotyping method uses three specific target primers: two primers, each specific for each allelic form of a given SNP ( Single Nucleotide Polymorphism ) and a third primer to allow reverse amplification for each allelic form.
Les moyens d’identification selon l’invention qui sont décrits ci-dessous sont avantageusement utilisés dans le procédé d’obtention ou d’identification d’une plante de tournesol à teneur élevée en acide oléique selon l’invention.The identification means according to the invention which are described below are advantageously used in the process for obtaining or identifying a sunflower plant with a high oleic acid content according to the invention.
Selon un autre aspect, la présente invention concerne un procédé d’identification de la présence, ou de l’absence, d’une séquence de nucléotides ou d’acides d’aminés selon l’invention dans une plante de tournesol, qui comprend l’extraction du matériel génétique de la plante tel que l’ADN génomique, l’ARN ou le protéome, et l’utilisation de moyens d’identification de la séquence de nucléotides ou d’acides aminés selon l’invention.According to another aspect, the present invention relates to a method for identifying the presence, or the absence, of a sequence of nucleotides or amino acids according to the invention in a sunflower plant, which comprises the extraction of the genetic material of the plant such as genomic DNA, RNA or proteome, and the use of means for identifying the sequence of nucleotides or amino acids according to the invention.
Par marqueur moléculaire, on entend par exemple un fragment spécifique d'une séquence pouvant être identifiée au sein du génome d’une plante à l’aide de différents moyens d’identification tels que des sondes ou amorces. Le marqueur peut être un fragment de séquence de protéine, pouvant être identifiée au sein de l’ensemble des protéines d’une cellule ou protéome d’une plante, notamment à l’aide d’anticorps. En particulier, un marqueur moléculaire spécifique de la séquence nucléotides selon l’invention correspond à un fragment d’au moins 20 nucléotides de la séquence nucléotides selon l’invention, ledit fragment comprenant la mutation correspondant au codon STOP aux positions 484 à 486 en référence à la séquence sauvage SEQ ID NO : 1. Le marqueur peut être dominant, co-dominant.By molecular marker is meant, for example, a specific fragment of a sequence that can be identified within the genome of a plant using different means of identification such as probes or primers. The marker can be a protein sequence fragment, which can be identified within all the proteins of a cell or proteome of a plant, in particular using antibodies. In particular, a specific molecular marker of the nucleotide sequence according to the invention corresponds to a fragment of at least 20 nucleotides of the nucleotide sequence according to the invention, said fragment comprising the mutation corresponding to the STOP codon at positions 484 to 486 in reference to the wild-type sequence SEQ ID NO: 1. The marker can be dominant, co-dominant.
L’identification de la séquence d’intérêt, ou sa non-identification, permet de sélectionner les plantes présentant le gène ou l’allèle d'intérêt ou la caractéristique particulière, ou au contraire, de ne pas sélectionner les plantes ne présentant pas la séquence d'intérêt.The identification of the sequence of interest, or its non-identification, makes it possible to select the plants presenting the gene or the allele of interest or the particular characteristic, or on the contrary, not to select the plants not presenting the sequence of interest.
Dans la présente invention, les moyens d’identification peuvent être des sondes ou des amorces d’au moins 12 nucléotides jusqu’à 30 nucléotides complémentaires du brin d’ADN que l’on souhaite amplifier, hybrider ou encore séquencer. Ces moyens d’identification sont en l’occurrence spécifique du marqueur que l’on souhaite identifier et permettent de détecter rapidement la présence de la mutation selon l’invention dans le génome de plantes issues de croisements donnés, ou les parties de plantes.In the present invention, the identification means can be probes or primers of at least 12 nucleotides up to 30 nucleotides complementary to the DNA strand that it is desired to amplify, hybridize or even sequence. These means of identification are in this case specific to the marker that it is desired to identify and make it possible to rapidly detect the presence of the mutation according to the invention in the genome of plants resulting from given crosses, or parts of plants.
Ces moyens d’identification peuvent constituer des moyens d’identification et/ou de sélection de plantes de tournesol qui contiennent au moins un allèle de la séquence selon l’invention décrite ci-dessus, De préférence, ils permettent d’identifier et/ou de sélectionner des plantes de tournesol qui produisent des graines ayant une teneur en acide oléique d’au moins 85%, et de préférence comprise dans une gamme allant de 85 % à 95%. En particulier, lorsque ladite plante comprend une séquence nucléotides selon l’invention à l’état héterozygote, ladite plante peut comprendre un autre allèle qui conduit à une inhibition du gène codant la protéine Δ12-désaturase et qui permet, en combinaison avec la séquence nucléotides selon l’invention, d’obtenir des graines ayant une teneur en acide oléique d’au moins 85 % par rapport au pourcentage total d’acides gras desdites graines. Parmi les exemples d’autre allèle connu de l’art antérieur qui conduit à une inhibition du gène codant la protéine Δ12-désaturase, on peut notamment citer la mutation Pervenets.These means of identification can constitute means of identification and/or selection of sunflower plants which contain at least one allele of the sequence according to the invention described above. Preferably, they make it possible to identify and/or to select sunflower plants which produce seeds having an oleic acid content of at least 85%, and preferably comprised in a range extending from 85% to 95%. In particular, when said plant comprises a nucleotide sequence according to the invention in the heterozygous state, said plant may comprise another allele which leads to inhibition of the gene encoding the Δ12-desaturase protein and which allows, in combination with the nucleotide sequence according to the invention, to obtain seeds having an oleic acid content of at least 85% relative to the total percentage of fatty acids of said seeds. Among the examples of another allele known from the prior art which leads to inhibition of the gene encoding the Δ12-desaturase protein, mention may in particular be made of the Pervenets mutation.
De façon préférée, ces moyens d’identification permettent d’identifier et/ou de sélectionner des plantes de tournesol qui produisent des graines qui possèdent la séquence nucléotides selon l’invention à l’état homozygote et ont une teneur en acide oléique d’au moins 85 % par rapport au pourcentage total d’acides gras desdites graines, et de préférence comprise dans une gamme allant de 85 % à 95%.Preferably, these identification means make it possible to identify and/or select sunflower plants which produce seeds which possess the nucleotide sequence according to the invention in the homozygous state and have an oleic acid content of at least 85% with respect to the total percentage of fatty acids of said seeds, and preferably comprised in a range going from 85% to 95%.
Les moyens d’identification d’une plante, partie de plante selon l’invention, constituent également un des aspects de la présente invention. Préférentiellement, ces moyens d’identification sont capables de détecter spécifiquement la mutation dans la séquence nucléotidique selon l’invention, à savoir la présence d’un codon STOP aux positions 484 à 486 en référence à la séquence SEQ ID NO : 1. Comme indiqué ci-dessus, ces moyens peuvent consister en des amorces ou des sondes spécifiques de la mutation décrite ci-dessus selon l’invention. Plus particulièrement, le jeu d’amorces qui peut être utilisé dans les procédés selon l’invention est le jeu d’amorces KASP de séquences SEQ ID NO : 7, 8 et 9.The means of identifying a plant, part of a plant according to the invention, also constitute one of the aspects of the present invention. Preferably, these identification means are capable of specifically detecting the mutation in the nucleotide sequence according to the invention, namely the presence of a STOP codon at positions 484 to 486 with reference to the sequence SEQ ID NO: 1. As indicated above, these means may consist of primers or probes specific for the mutation described above according to the invention. More particularly, the set of primers which can be used in the methods according to the invention is the set of KASP primers of sequences SEQ ID NO: 7, 8 and 9.
Selon un autre aspect, la présente invention couvre également un procédé de croisement par sélection dite «forward» d’une plante de tournesol comprenant une séquence de nucléotides selon l’invention; ledit procédé comprenant les étapes suivantes :
a) Croisement de ladite plante avec toute autre plante de tournesol présentant des caractéristiques agronomiques pour obtenir une plante F1,
b) Autofécondation d’une plante F1 comprenant ladite séquence de nucléotides selon l’invention,
c) Répétition de l’étape b) pour obtenir une descendance comprenant ladite séquence de nucléotides selon l’invention et présentant au moins une desdites caractéristiques agronomiques.According to another aspect, the present invention also covers a method of crossing by so-called “ forward ” selection of a sunflower plant comprising a sequence of nucleotides according to the invention; said method comprising the following steps:
a) Crossing of said plant with any other sunflower plant with agronomic characteristics to obtain an F1 plant,
b) Self-fertilization of an F1 plant comprising said nucleotide sequence according to the invention,
c) Repetition of step b) to obtain progeny comprising said nucleotide sequence according to the invention and exhibiting at least one of said agronomic characteristics.
De préférence, la descendance présente la séquence nucléotides selon l’invention à l’état homozygote.Preferably, the offspring has the nucleotide sequence according to the invention in the homozygous state.
Le croisement peut être réalisé par toute méthode classique bien connue dans le domaine. L’étape c) peut être répétée autant de fois que nécessaire pour obtenir une descendance comprenant la séquence de nucléotides selon l’invention. Par caractéristique agronomique, on entend tout trait d’intérêt permettant d’améliorer une plante ou une variété, comme par exemple des résistances aux herbicides ou à des pathogènes ou tout autre trait permettant d’améliorer des caractères quantitatifs ou qualitatifs.Crossing can be carried out by any conventional method well known in the field. Step c) can be repeated as many times as necessary to obtain offspring comprising the nucleotide sequence according to the invention. By agronomic characteristic, we mean any trait of interest allowing the improvement of a plant or variety, such as resistance to herbicides or pathogens or any other trait allowing the improvement of quantitative or qualitative characteristics.
De préférence, cette descendance comprend un gène codant une protéine de séquence SEQ ID NO : 4.Preferably, this lineage comprises a gene encoding a protein of sequence SEQ ID NO: 4.
La sélection «forward» est généralement utilisée pour améliorer les performances agronomiques d’une variété ou d’une lignée portant une mutation ou un trait spécifique alors que la sélection par rétrocroisement est utilisée pour introduire une mutation ou un trait spécifique dans le contexte génotypique particulier d’une variété ou lignée. Une comparaison des deux procédés est décrite dans Mumm et al, 2007. Forward breeding is generally used to improve the agronomic performance of a variety or line carrying a specific mutation or trait while backcross breeding is used to introduce a specific mutation or trait into the particular genotypic context. of a variety or line. A comparison of the two methods is described in Mumm et al, 2007.
Selon encore un autre aspect, l’invention concerne un procédé d’introgression par rétrocroisement d’un fragment de génome comprenant une séquence de nucléotides selon l’invention telle que décrite ci-dessus, à partir d’une plante de tournesol donneuse vers une plante de tournesol receveuse qui ne contient pas ladite séquence de nucléotides dans son génome, ledit procédé comprenant les étapes suivantes :
a) Croisement de la plante de tournesol donneuse avec la plante receveuse,
b) Obtention d’un hybride F1,
c) Rétrocroisement dudit hybride F1 avec la plante receveuse,
d) Sélection d’une plante comprenant ladite séquence de nucléotides selon l’invention,
e) Rétrocroisement de la plante sélectionnée à l’étape d) avec la plante receveuse,
f) Optionnellement, autofécondation des plantes obtenues en e) pour obtenir une plante comprenant ladite séquence de nucléotides selon l’invention à l’état homozygote.According to yet another aspect, the invention relates to a process for introgression by backcrossing of a genome fragment comprising a nucleotide sequence according to the invention as described above, from a donor sunflower plant to a recipient sunflower plant which does not contain said nucleotide sequence in its genome, said method comprising the following steps:
a) Crossing the donor sunflower plant with the recipient plant,
b) Obtaining an F1 hybrid,
c) Backcrossing of said F1 hybrid with the recipient plant,
d) Selection of a plant comprising said nucleotide sequence according to the invention,
e) Backcrossing of the plant selected in step d) with the recipient plant,
f) Optionally, self-fertilization of the plants obtained in e) to obtain a plant comprising said nucleotide sequence according to the invention in the homozygous state.
La plante receveuse ne contient pas dans son génome la séquence de nucléotides selon l’invention, c’est-à-dire une séquence de nucléotides présentant un codon STOP aux positions 484 à 486 en référence à la séquence nucléotidique sauvage SEQ ID NO : 1 et codant une protéine Δ12-désaturase qui présente au moins 95% d’identité avec SEQ ID NO : 4, et préférentiellement, qui présente au moins 96%, 97%, 98% ou au moins 99% d’identité avec SEQ ID NO : 4. Ainsi, la plante receveuse ne contient pas dans son génome la mutation décrite ci-dessus, à savoir un codon STOP aux positions aux positions 484 à 486 en référence à la séquence SEQ ID NO : 1.The recipient plant does not contain in its genome the nucleotide sequence according to the invention, that is to say a nucleotide sequence having a STOP codon at positions 484 to 486 with reference to the wild-type nucleotide sequence SEQ ID NO: 1 and encoding a Δ12-desaturase protein which exhibits at least 95% identity with SEQ ID NO: 4, and preferentially, which exhibits at least 96%, 97%, 98% or at least 99% identity with SEQ ID NO : 4. Thus, the recipient plant does not contain in its genome the mutation described above, namely a STOP codon at positions 484 to 486 with reference to the sequence SEQ ID NO: 1.
Les rétrocroisements effectués visent à accroître le pourcentage de génome de la plante récurrente ou receveuse. Le nombre d’autofécondation ou rétrocroisements effectués est répété autant de fois pour obtenir un pourcentage d'au moins 80% du génome de la plante receveuse utilisée dans le croisement, de préférence d’au moins 98%.The backcrosses carried out aim to increase the percentage of genome of the recurrent or recipient plant. The number of self-fertilizations or backcrosses carried out is repeated as many times as to obtain a percentage of at least 80% of the genome of the recipient plant used in the cross, preferably at least 98%.
Enfin, selon un dernier aspect, la présente invention concerne l’utilisation de graines de tournesol selon l’invention telles que décrites ci-dessus ou leur descendance, pour obtenir de l’huile, et en particulier de l’huile ayant une teneur élevée en acide oléique, c’est-à-dire d’au moins 85 % d’acide oléique par rapport à la quantité totale d’acides gras présents dans cette huile.Finally, according to a last aspect, the present invention relates to the use of sunflower seeds according to the invention as described above or their progeny, to obtain oil, and in particular oil having a high in oleic acid, that is to say at least 85% oleic acid relative to the total quantity of fatty acids present in this oil.
Les techniques d’obtention d’huile à partir de graines de tournesol sont bien connue dans le domaine de l’invention.The techniques for obtaining oil from sunflower seeds are well known in the field of the invention.
EXEMPLESEXAMPLES
EXEMPLE 1 : Création et criblage d’une population TILLING de tournesol.EXAMPLE 1: Creation and screening of a TILLING population of sunflower.
La population TILLING a été obtenue en 2015 à partir de 2 variétés de tournesol selon le protocole Kumar A. et al (2013). La population comprend initialement 18407 familles M2 à partir desquelles 10000 familles M2 ayant plus de 50 graines par famille ont été sélectionnées pour isoler l’ADN génomique et réaliser le criblage. L’extraction d’ADN a été réalisée à partir de matériel foliaire de 5 plantes individuelles par familles M2. L’ADN est normalisé à 5 ng/µl pour les expérimentations suivantes.The TILLING population was obtained in 2015 from 2 sunflower varieties according to the Kumar A. et al (2013) protocol. The population initially comprises 18,407 M2 families from which 10,000 M2 families with more than 50 seeds per family were selected for genomic DNA isolation and screening. DNA extraction was performed from leaf material of 5 individual plants per M2 family. The DNA is normalized to 5 ng/µl for the following experiments.
EXEMPLE 2 : Identification in silico de codons STOP potentiels dans la séquence sauvage du gènefad2-1:EXAMPLE 2: In silico identification of potential STOP codons in the wild-type sequence of the fad2-1 gene:
La séquence du gène fad2-1 sauvage HanXRQChr14g0452931 ou autrement décrite dans SEQ ID NO :1) a été analysées pour identifier l’ensemble des codons STOP pouvant être générés par le traitement EMS. 34 potentielles mutations ponctuelles EMS générant chacune un codon STOP pouvant produire une protéine FAD2 tronquée ont été identifiées. Des amorces spécifiques ciblant spécifiquement chacune des 34 mutations ont été générés pour le criblage des familles M2.The sequence of the wild-type fad2-1 gene HanXRQChr14g0452931 or otherwise described in SEQ ID NO:1) was analyzed to identify the set of STOP codons that can be generated by the EMS treatment. 34 potential EMS point mutations each generating a STOP codon that can produce a truncated FAD2 protein have been identified. Specific primers specifically targeting each of the 34 mutations were generated for screening M2 families.
EXEMPLE 3 : Identification de la mutationEXAMPLE 3: Identification of the mutation
L’identification de la mutation a été réalisée à partir de pool d’ADNs issus de 96 familles M2 par amplification PCR. Puis, grâce à l’analyse des pools, la présence de mutations potentielles a été vérifiée chez 10 graines individuelles M2. Une seule famille mutante (HABT-3816 M2) a été confirmée et la mutation a été identifiée par séquençage Sanger. La mutation identifiée correspond à une modification G en A localisée à la position nucléotidique 485 dans la séquence décrite dans SEQ ID NO : 1. La mutation ponctuelle créé un codon STOP qui produit une protéine tronquée de 161 acides-aminés décrites dans la séquence SEQ ID NO : 4, au lieu des 378 acides-aminés de la protéine sauvage décrite dans la séquence SEQ ID NO : 3 (Figure 1). Les séquences contextes mutante et sauvage utilisées pour l’identification de la mutation STOP dans la famille mutante sont décrites dans les séquences SEQ ID NO : 5 (ACCACCGCCACCATTCCAACACTGGATCACTCGAGCGGGACGAGGTTTTCGTCCCCAAATCCCGATCGAAAGTCCCGTAGTACTCGAAATACTTTAACAACACAGTGGGCCGCATTGTCAGTATGTTCGTCACTCTCACTCTCGGCTGGCCCTTGTACTTAGCTTTCAATGTGTCGGG) et SEQ ID NO : 6 (ACCACCGCCACCATTCCAACACTGGATCACTCGAGCGGGACGAGGTTTTCGTCCCCAAATCCCGATCGAAAGTCCCGTGGTACTCGAAATACTTTAACAACACAGTGGGCCGCATTGTCAGTATGTTCGTCACTCTCACTCTCGGCTGGCCCTTGTACTTAGCTTTCAATGTGTCGGG).The identification of the mutation was carried out using DNA pools from 96 M2 families by PCR amplification. Then, through pool analysis, the presence of potential mutations was checked in 10 individual M2 seeds. A single mutant family (HABT-3816 M2) was confirmed and the mutation was identified by Sanger sequencing. The identified mutation corresponds to a G to A modification located at nucleotide position 485 in the sequence described in SEQ ID NO: 1. The point mutation creates a STOP codon which produces a truncated protein of 161 amino acids described in the sequence SEQ ID NO: 4, instead of the 378 amino acids of the wild-type protein described in the sequence SEQ ID NO: 3 (FIG. 1). Les séquences contextes mutante et sauvage utilisées pour l’identification de la mutation STOP dans la famille mutante sont décrites dans les séquences SEQ ID NO : 5 (ACCACCGCCACCATTCCAACACTGGATCACTCGAGCGGGACGAGGTTTTCGTCCCCAAATCCCGATCGAAAGTCCCGTAGTACTCGAAATACTTTAACAACACAGTGGGCCGCATTGTCAGTATGTTCGTCACTCTCACTCTCGGCTGGCCCTTGTACTTAGCTTTCAATGTGTCGGG) et SEQ ID NO : 6 (ACCACCGCCACCATTCCAACACTGGATCACTCGAGCGGGACGAGGTTTTCGTCCCCAAATCCCGATCGAAAGTCCCGTGGTACTCGAAATACTTTAACAACACAGTGGGCCGCATTGTCAGTATGTTCGTCACTCTCACTCTCGGCTGGCCCTTGTACTTAGCTTTCAATGTGTCGGG).
Ces séquences génomiques flanquants la mutation d’intérêt G485A peuvent être utilisées pour développer un test de génotypage pour suivre la mutation dans une procédure de sélection assistée par marqueur. Dans cet exemple, des marqueurs codominants “KASP” (Ha_FAD2-1_2439_E1_485) ont été développés et les amorces pour l’identification de la mutation G485A dans le gène fad2-1 sont décrites dans le tableau 1. Ils permettent de différentier entre elles, les plantes homozygotes pour l’allèle mutant, les plantes homozygotes pour l’allèle normal et les plantes hétérozygotes.These genomic sequences flanking the G485A mutation of interest can be used to develop a genotyping test to track the mutation in a marker-assisted selection procedure. In this example, “KASP” codominant markers (Ha_FAD2-1_2439_E1_485) were developed and the primers for identifying the G485A mutation in the fad2-1 gene are described in Table 1. They make it possible to differentiate between them, the plants homozygous for the mutant allele, plants homozygous for the normal allele and heterozygous plants.
marqueurmarker pen
EXEMPLE 4 : Validation phénotypique et utilisation en sélection.EXAMPLE 4: Phenotypic validation and use in selection.
Afin d’évaluer l’effet de la mutation, la composition en huile saturée a été mesurée à partir de 73 graines ségrégées à partir d’une plante hétérozygote au locus HABT-3816. Pour chaque graine, lune moitié est utilisée pour mesurer la composition en acides saturés par Chromatographie en Phase Gazeuse (CPG) et l’autre moitié est semée pour réaliser le génotypage sur feuilles.In order to evaluate the effect of the mutation, the saturated oil composition was measured from 73 seeds segregated from a heterozygous plant at the HABT-3816 locus. For each seed, one half is used to measure the saturated acid composition by Gas Chromatography (GC) and the other half is sown to perform genotyping on leaves.
La CPG est réalisée à l’aide du dispositif GC Thermo 1310 GC_1 et GC_2 selon le protocole suivant :GC is performed using the GC Thermo 1310 GC_1 and GC_2 device according to the following protocol:
Des broyats de graines de tournesol sont aliquotés dans des boites 96 de type Collection Microtubes racked 10x96.Ground sunflower seeds are aliquoted in 10×96 Racked Microtube Collection type 96 dishes.
Dans une première étape les acides gras sont dissolus dans l’isooctane (2,2,4 -Trimethyl pentane) puis conversion en esters méthyliques par ajout de l’hydroxyde de potassium méthanolique (2N KOH/MeOH).In a first step, the fatty acids are dissolved in isooctane (2,2,4 -Trimethyl pentane) then converted into methyl esters by adding methanolic potassium hydroxide (2N KOH/MeOH).
Une fois la réaction terminée, l’hydroxyde de potassium est neutralisé avec de l’hydrogénosulfate de sodium, afin d’éviter la saponification des esters méthyliques.Once the reaction is complete, the potassium hydroxide is neutralized with sodium hydrogen sulphate, in order to avoid the saponification of the methyl esters.
Enfin, les esters méthyliques sont séparés et quantifiés par CPG.Finally, the methyl esters are separated and quantified by GPC.
Pour le génotypage, des feuilles de jeunes plantes ont été échantillonnées en vue du génotypage à l’aide des marqueurs Ha_FAD2-1_2439_E1_485 KASP décrits dans l’exemple 3. 29 graines sont des plantes mutantes homozygotes (A : A), 44 graines sont hétérozygotes (A : G) et 10 graines sont des plantes sauvages homozygotes (G : G) ont été respectivement analysées pour leur teneur en acides grasFor genotyping, leaves from young plants were sampled for genotyping using the Ha_FAD2-1_2439_E1_485 KASP markers described in Example 3. 29 seeds are homozygous mutant plants (A:A), 44 seeds are heterozygous (A:G) and 10 seeds are homozygous wild plants (G:G) were respectively analyzed for fatty acid content
Les résultats de correspondance entre génotype et phénotype sont présentés dans le tableau 2 qui regroupe les moyennes des teneurs en acides gras des plantes mutantes homozygotes (A:A), hétérozygotes (A:G) et des plantes sauvages homozygotes (G:G) (s.e.: écart-type). La mutation est récessive avec un effet majeur sur la teneur en acide Oléique et linoléique. Les graines homozygotes qui portent la mutation ont une teneur stable en acide oléique supérieure à 90% (moyenne de 92.8 +/- 0.17 %) et un très faible niveau en acide linoléique.The results of correspondence between genotype and phenotype are presented in Table 2, which groups together the average fatty acid contents of homozygous (A:A), heterozygous (A:G) mutant plants and homozygous wild plants (G:G) ( se .: standard deviation). The mutation is recessive with a major effect on Oleic and Linoleic acid content. Homozygous seeds that carry the mutation have a stable oleic acid content above 90% (average of 92.8 +/- 0.17%) and a very low level of linoleic acid.
REFERENCESREFERENCES
Altschul et al, (1997), Nucleic Acids Res. 25:3389-3402Altschul et al, (1997), Nucleic Acids Res. 25:3389-3402
Altschul et al, (2005) FEBS J. 272:5101-5109)Altschul et al, (2005) FEBS J. 272:5101-5109)
Garces R, Mancha M (1991) "In vitro oleate desaturase in sunflower seeds developing" Phytochemistry 30:2127-2130Garces R, Mancha M (1991) "In vitro oleate desaturase in sunflower seeds developing" Phytochemistry 30:2127-2130
Hongtrakul et al. (1998) « A seed specific Δ 12 oleate-desaturase gene is duplicated, rearranged and weakly expressed in high oleic acid sunflower lines”. Crop Sci 38:1245-1249Hongtrakul et al. (1998) “A seed specific Δ 12 oleate-desaturase gene is duplicated, rearranged and weakly expressed in high oleic acid sunflower lines”. Crop Sci 38:1245-1249
Kumar A et al. (2013) SMART – Sunflower Mutant population And Reverse genetic Tool for crop improvement. BMC Plant Biol. 13: 38. Lacombe et al. (2001) « An oleate-desaturase and a suppressor locus direct high oleic acid content of sunflower (Helianthus annuus L.) oil in the Pervenets mutant”. C.R. Acad. Sci, Life Sci 324:839-845.Kumar A et al. (2013) SMART – Sunflower Mutant population And Reverse genetic Tool for crop improvement. BMC Plant Biol. 13:38. Lacombe et al. (2001) “An oleate-desaturase and a suppressor locus direct high oleic acid content of sunflower (Helianthus annuus L.) oil in the Pervenets mutant”. C.R. Acad. Sci, Life Sci 324:839-845.
Mumm et al (2007) “Backcross versus Forward Breeding in the Development of Transgenic Maize Hybrids: Theory and Practice”. Crop Sci (Suppl 3) 47: S164-S171.Mumm et al (2007) “Backcross versus Forward Breeding in the Development of Transgenic Maize Hybrids: Theory and Practice”. Crop Sci (Suppl 3) 47: S164-S171.
Soldatov (1976) “Chemical mutagenesis in sunflower breeding”. InProc. VIIthInt. Sunflower Conference, June 27th - July 3, Krasnodar.Soldatov (1976) “Chemical mutagenesis in sunflower breeding”. InProc. VIIthInt. Sunflower Conference, June 27th - July 3, Krasnodar.
Claims (14)
a) Procéder à la mutagenèse d’une partie de plante de tournesol pour qu’elle comprenne ladite séquence de nucléotides par une technique de mutagenèse aléatoire ou d’édition de gènes,
b) Générer une plante à partir de ladite partie de plante ayant subi ladite mutagenèse
c) Obtenir au moins une descendance à partir de la plante générée à l’étape b), et
d) Identifier et sélectionner au moins une plante obtenue à l’étape b) ou c) comprenant ladite séquence de nucléotides .Process for obtaining a sunflower plant comprising an isolated nucleotide sequence which comprises a stop codon at positions 484 to 486 with reference to the wild-type nucleotide sequence SEQ ID NO: 1 and which encodes a Δ12-oleate desaturase protein which presents at least 95% identity with SEQ ID NO: 4, said method comprising the following steps:
a) Mutagenesis of a sunflower plant part to include said nucleotide sequence by random mutagenesis or gene editing technique,
b) Generate a plant from said plant part having undergone said mutagenesis
c) Obtain at least one progeny from the plant generated in step b), and
d) Identifying and selecting at least one plant obtained in step b) or c) comprising said nucleotide sequence.
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1908408A FR3099178A1 (en) | 2019-07-24 | 2019-07-24 | High oleic acid sunflower and process for obtaining it |
| PCT/EP2020/071026 WO2021014010A1 (en) | 2019-07-24 | 2020-07-24 | Sunflower with high oleic acid content and method for obtaining same |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR1908408A FR3099178A1 (en) | 2019-07-24 | 2019-07-24 | High oleic acid sunflower and process for obtaining it |
| FR1908408 | 2019-07-24 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR3099178A1 true FR3099178A1 (en) | 2021-01-29 |
Family
ID=69810895
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR1908408A Withdrawn FR3099178A1 (en) | 2019-07-24 | 2019-07-24 | High oleic acid sunflower and process for obtaining it |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| FR (1) | FR3099178A1 (en) |
| WO (1) | WO2021014010A1 (en) |
Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6342658B1 (en) * | 1995-12-14 | 2002-01-29 | Cargill, Incorporated | Fatty acid desaturases and mutant sequences thereof |
| WO2005106022A2 (en) | 2004-04-29 | 2005-11-10 | Institut National De La Recherche Agronomique | Method of selecting sunflower genotypes with high oleic acid content in seed oil |
| WO2011072246A2 (en) | 2009-12-10 | 2011-06-16 | Regents Of The University Of Minnesota | Tal effector-mediated dna modification |
| WO2013004281A1 (en) | 2011-07-01 | 2013-01-10 | Advanta International Bv | Nucleotide sequences mutated by insertion that encode a truncated oleate desaturase protein, proteins, methods and uses |
| WO2013004280A1 (en) | 2011-07-01 | 2013-01-10 | Advanta International Bv | Isolated mutated nucleotide sequences that encode a modified oleate destaurase sunflower protein, modified protein, methods and uses |
| WO2013181440A1 (en) | 2012-05-30 | 2013-12-05 | Baylor College Of Medicine | Supercoiled minivectors as a tool for dna repair, alteration and replacement |
| WO2017004375A1 (en) | 2015-06-30 | 2017-01-05 | Regents Of The University Of Minnesota | Haploid inducer line for accelerated genome editing |
| WO2018015956A1 (en) | 2016-07-21 | 2018-01-25 | Kaiima Bio Agritech Ltd. | Compositions and methods for generating a haploid of a target plant |
-
2019
- 2019-07-24 FR FR1908408A patent/FR3099178A1/en not_active Withdrawn
-
2020
- 2020-07-24 WO PCT/EP2020/071026 patent/WO2021014010A1/en active Application Filing
Patent Citations (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6342658B1 (en) * | 1995-12-14 | 2002-01-29 | Cargill, Incorporated | Fatty acid desaturases and mutant sequences thereof |
| WO2005106022A2 (en) | 2004-04-29 | 2005-11-10 | Institut National De La Recherche Agronomique | Method of selecting sunflower genotypes with high oleic acid content in seed oil |
| WO2011072246A2 (en) | 2009-12-10 | 2011-06-16 | Regents Of The University Of Minnesota | Tal effector-mediated dna modification |
| WO2013004281A1 (en) | 2011-07-01 | 2013-01-10 | Advanta International Bv | Nucleotide sequences mutated by insertion that encode a truncated oleate desaturase protein, proteins, methods and uses |
| WO2013004280A1 (en) | 2011-07-01 | 2013-01-10 | Advanta International Bv | Isolated mutated nucleotide sequences that encode a modified oleate destaurase sunflower protein, modified protein, methods and uses |
| WO2013181440A1 (en) | 2012-05-30 | 2013-12-05 | Baylor College Of Medicine | Supercoiled minivectors as a tool for dna repair, alteration and replacement |
| WO2017004375A1 (en) | 2015-06-30 | 2017-01-05 | Regents Of The University Of Minnesota | Haploid inducer line for accelerated genome editing |
| WO2018015956A1 (en) | 2016-07-21 | 2018-01-25 | Kaiima Bio Agritech Ltd. | Compositions and methods for generating a haploid of a target plant |
Non-Patent Citations (11)
| Title |
|---|
| ALBERIO CONSTANZA ET AL: "A new sunflower high oleic mutation confers stable oil grain fatty acid composition across environments", EUROPEAN JOURNAL OF AGRONOMY, ELSEVIER, AMSTERDAM, NL, vol. 73, 11 November 2015 (2015-11-11), pages 25 - 33, XP029377029, ISSN: 1161-0301, DOI: 10.1016/J.EJA.2015.10.003 * |
| ALTSCHUL ET AL., FEBS J., vol. 272, 2005, pages 5101 - 5109 |
| ALTSCHUL ET AL., NUCLEIC ACIDS RES., vol. 25, 1997, pages 3389 - 3402 |
| GARCES RMANCHA M: "In vitro oleate desaturase in sunflower seeds de-veloping", PHYTOCHEMISTRY, vol. 30, 1991, pages 2127 - 2130, XP026631299, DOI: 10.1016/0031-9422(91)83599-G |
| HONGTRAKUL ET AL.: "A seed spécifié Δ 12 oleate-desaturase gene is duplicated, rearranged and weakly expressed in high oleic acid sunflower lines", CROP SCI, vol. 38, 1998, pages 1245 - 1249, XP008035350 |
| KUMAR A ET AL.: "SMART - Sunflower Mutant population And Reverse genetic Tool for crop improvement", BMC PLANT BIOL., vol. 13, 2013, pages 38, XP021140940, DOI: 10.1186/1471-2229-13-38 |
| LACOMBE ET AL.: "An oleate-desaturase and a suppressor locus direct high oleic acid content of sunflower (Helianthus annuus L.) oil in the Pervenets mutant", C.R. ACAD. SCI, LIFE SCI, vol. 324, 2001, pages 839 - 845 |
| MUMM ET AL.: "Backcross versus Forward Breeding in the Development of Transgenic Maize Hybrids: Theory and Practice", CROP SCI, vol. 47, no. 3, 2007, pages S164 - S171, XP002503385, DOI: 10.2135/CROPSCI2007.04.0014IPBS |
| SÃ VERINE LACOMBE ET AL: "An insertion of oleate desaturase homologous sequence silences via siRNA the functional gene leading to high oleic acid content in sunflower seed oil", MOLECULAR GENETICS AND GENOMICS, SPRINGER, BERLIN, DE, vol. 281, no. 1, 28 October 2008 (2008-10-28), pages 43 - 54, XP019658427, ISSN: 1617-4623 * |
| SOLDATOV: "Chemical mutagenesis in sunflower breeding", PROC. VIITHINT. SUNFLOWER CONFÉRENCE, 27 June 1976 (1976-06-27) |
| UNKNOWN: "Tour", 10 May 2015 (2015-05-10), XP055693603, Retrieved from the Internet <URL:http://www.open-source-biology.com/Synthese_high-oleic_final_27-06-2015.pdf> [retrieved on 20200511] * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2021014010A1 (en) | 2021-01-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Micke et al. | Induced mutations for crop improvement | |
| EP2173887B1 (en) | Maize having improved digestibility | |
| Zhou et al. | Genetic dissection of fatty acid components in the Chinese peanut (Arachis hypogaea L.) mini-core collection under multi-environments | |
| EP2461666A1 (en) | Brassica plant for restoring fertility in an ogura cytoplasmic male-sterility system, method for producing same, and use of said plant | |
| JP6038040B2 (en) | Protein having glycoalkaloid biosynthetic enzyme activity and gene encoding the same | |
| EP2087122B1 (en) | Maize with good digestibility and disease resistant | |
| FR3099178A1 (en) | High oleic acid sunflower and process for obtaining it | |
| Razeghi-Jahromi et al. | Sequence characterization and temporal expression analysis of different SADs and FAD2-2 genes in two Iranian olive cultivars | |
| Yang et al. | Removal of a 10-kb Gret1 transposon from VvMybA1 of Vitis vinifera cv. Chardonnay | |
| WO2009065863A1 (en) | Maize with increased tolerance to fungal diseases | |
| EP3653640A1 (en) | Plants with increased performance and method for obtaining such plants | |
| JP5902801B2 (en) | Gene encoding enzyme reducing position 24 of steroid skeleton and plant body in which expression of said gene is reduced | |
| JP6519728B2 (en) | DNA for suppressing browning of lettuce | |
| CARPENTIERI-PIPOLO et al. | Genetic removal of trypsin inhibitor and lipoxygenase isozymes form soybean seeds (Glycine max) by simple sequence repeat marker assisted selection. | |
| WO2004039988A1 (en) | Ppr peptide sequences capable of restoring male fertility of plants bearing a male sterility-inducing cytoplasm | |
| JP5951004B2 (en) | Plants in which the expression of a glycoalkaloid biosynthetic enzyme gene is suppressed or the activity of the enzyme is altered | |
| WO2001055395A1 (en) | Identifying genes associated with a qtl corn digestibility locus | |
| FR3059870A1 (en) | HIGH OMEGA-3 FLAX PLANTS | |
| Yang et al. | Removal of a 10-kb Gret1 transposon from VvMybA1 of Vitis vinifera cv. Chardonnay Yingzhen Yang, John Ke, Xiaoyan Han 2, Wegi A Wuddineh, Guo-qing Song 2, Gan-Yuan Zhong | |
| FR2875677A1 (en) | BUT HAVING AN IMPROVED DIGESTIBILITY | |
| EP2366791A1 (en) | Method for modifying the flowering date of a plant | |
| FR3068710A1 (en) | PROCESS FOR RE-ESTABLISHING SEXUAL REPRODUCTION IN TRICHODERMA REESEI FUNGUS | |
| FR2832290A1 (en) | Cultivated Cichorium plant, useful for production of hybrid seeds and plants, has a male sterility allele at locus MS, linked to specific markers | |
| EP1601690A2 (en) | Production of plants with improved digestibility having an inactive peroxidase |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 2 |
|
| PLSC | Publication of the preliminary search report |
Effective date: 20210129 |
|
| PLFP | Fee payment |
Year of fee payment: 3 |
|
| ST | Notification of lapse |
Effective date: 20230305 |