FR3035329A1 - La prevention ou le traitement d'une infection par bacteroides thetaiotaomicron - Google Patents

Abstract

La présente invention concerne une composition comprenant une quantité thérapeutiquement efficace de Bacteroides thetaiotaomicron ou d'un extrait de celle-ci pour son utilisation dans la prévention ou le traitement d'une infection chez un sujet. Les infections concernées sont principalement les infections intestinales, en particulier celles qui touchent les mammifères non-humains et/ou les humains.

Description

1 La présente invention relève du domaine de la médecine et plus spécifiquement du domaine des infections, en particulier les infections intestinales. ARRIERE-PLAN TECHNOLOGIQUE DE L'INVENTION Une infection désigne l'envahissement puis la multiplication de microorganismes au sein d'un organe du corps vivant. Ces microorganismes peuvent être des virus, des bactéries, des parasites ou des levures. L'organisme va mettre en place des procédés de défense pour éradiquer le microorganisme indésirable. Les infections intestinales sont des infections affectant un ou plusieurs des segments qui constituent l'intestin (intestin grêle, coecum, colon, rectum). Ces infections peuvent être causées par un virus (par exemple le Rotavirus), une bactérie (comme les salmonelles, les staphylocoques, ou les shigelles), un parasite (comme les amibes, les lamblias, ou les vers) ou une levure (par exemple, candida albicans). Suivant la partie de l'intestin touchée, le nom donné à l'infection diffère, on parle ainsi d'entérite lorsque l'intestin grêle est touché, de colite pour le côlon, de sigmoïdite pour la partie basse du côlon, ou encore de rectite pour le rectum. Ces infections se manifestent, en général, par des diarrhées et des vomissements, qui peuvent s'accompagner de nausées, de douleurs abdominales et de fièvre. L'une des principales complications des infections intestinales est la déshydratation, surtout chez les jeunes enfants et les personnes âgées. Certaines de ces infections sont particulièrement graves. On peut ainsi citer le cas du Choléra, infection intestinale aigüe très contagieuse et mortelle qui touche actuellement l'Afrique Centrale et de l'Ouest, ou encore la tuberculose intestinale. Les infections intestinales causent pas moins de 1,7 milliard de cas de diarrhée chaque année dans le monde et sont la deuxième cause de mortalité chez l'enfant de moins de cinq ans (760 000 décès d'enfants par an). Dans les pays en développement, les enfants de moins de trois ans souffrent en moyenne de trois épisodes diarrhéiques par an, chacun de ces épisodes les prive d'éléments nutritifs indispensables à leur croissance. Ainsi, les infections intestinales sont également une des causes majeures de malnutrition chez l'enfant (OMS, voir le site de l'OMS au lien suivant : http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs330/fr/). Au-delà de ces aspects purement médicaux, les infections intestinales ont également un coût économique et social très important.

3035329 2 La lutte contre les infections, et en particulier les infections intestinales, représente donc un enjeu de santé publique majeur et il existe encore aujourd'hui un grand besoin de développer de nouveaux traitements pour prévenir ou guérir ces infections.

5 Même si les mammifères naissent stériles (leur tube digestif est exempte de microorganisme), aussitôt après leur naissance, leurs muqueuses sont colonisées par toute une variété de microorganismes. Ainsi, la colonisation de la surface des muqueuses intestinales croit rapidement après la naissance pour former une microflore 10 intestinale contenant approximativement 1014 microorganismes. Une relation mutuellement bénéfique s'établit alors entre l'hôte et les microorganismes qui occupent son intestin. Cependant, la muqueuse intestinale constitue un environnement a l'équilibre fragile, elle peut en effet être envahie par des microorganismes pathogènes qui utilisent cette muqueuse comme une voie d'entrée dans l'organisme et provoquent 15 par la même des infections. C'est le rôle du système immunitaire que de mettre en place des réponses différenciées vis-à-vis des microorganismes commensaux (bénéfiques) et pathogènes. La flore intestinale de l'adulte constitue ainsi un premier rideau de défense contre les infections en offrant, de par sa simple présence, une résistance à toute 20 colonisation par des microorganismes pathogènes. La flore intestinale participe également à la digestion des aliments et au métabolisme énergétique. Lorsque des traitements antibiotiques sont utilisés contre des pathogènes afin de lutter contre des infections, la flore intestinale se retrouve partiellement détruite, les antibiotiques n'étant en général pas assez sélectifs. Cette destruction a paradoxalement 25 pour effet de favoriser le développement de nouvelles infections intestinales. Par ailleurs, le développement de résistances aux antibiotiques rend l'utilisation de ces derniers de moins en moins efficace. Il est donc urgent de proposer et de développer de nouvelles méthodes de prévention et de traitement des infections intestinales qui permettront de lutter 30 efficacement contre les microorganismes pathogènes, responsables des infections, tout en préservant l'intégrité de la microflore intestinale.

3035329 3 RESUME DE L'INVENTION L'objectif de la présente invention est de proposer une nouvelle composition permettant de lutter efficacement contre les infections tout en préservant la microflore intestinale. Les inventeurs ont découvert que l'administration de Bacteroides 5 thetaiotaomicron (B. thetaiotaomicron) permet de maturer le système immunitaire et ainsi de lutter contre les infections. Par ailleurs, la bactérie B. thetaiotaomicron étant une des espèces de bactérie naturellement présente dans la microflore intestinale, son administration ne va pas altérer la microflore mais aura, au contraire, pour effet de renforcer les défenses de la microflore intestinale contre les bactéries pathogènes.

10 Ainsi, la présente invention concerne, dans un premier aspect, une composition comprenant B. thetaiotaomicron ou un extrait de celle-ci, pour son utilisation dans la prévention ou le traitement d'une infection chez un sujet. De préférence, l'infection selon la présente invention est une infection 15 intestinale, de manière encore préférée une infection sélectionnée dans le groupe constituée de l'oesophagite, la gastrite, l'entérite, la colite, la sigmoïdite, la rectite, la péritonite, ou une combinaison de celles-ci. L'infection selon la présente invention peut être une infection bactérienne, virale, parasitaire, causée par une levure, ou une combinaison de celles-ci.

20 En particulier, l'infection peut être une infection bactérienne, de préférence sélectionnée dans le groupe constituée de Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus, Escherichia cou, Shigella sonnei, Shigella flexnerii, Shigella dysenteriae, Clostridium difficile, Clostridium perfringens, Clostridium botulinum, Clostridium difficile, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi, Salmonella paratyphi, Yersinia enterocolitica, 25 Yersinia pseudotuberculosis, Campylobacter jejuni, Campylobacter Campylobacter Je tus, Helicobacter pylori, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Aeromonas, Mycobacterium tuberculosis ou d'une combinaison de celles-ci. L'infection peut également être une infection virale, de préférence sélectionnée 30 dans le groupe constituée du Rotavirus, du Virus de Norwalk, de l'Adénovirus, du Calicivirus, des Coronavirus, de l'Enterovirus, de l'Astrovirus, ou d'une combinaison de ceux-ci.

3035329 4 L'infection peut encore être causée par un parasite, de préférence sélectionné dans le groupe constituée d'Entamoeba histolytica, Ascaris lumbricoides, Strongyloides stercoralis, Ancylostoma duodenale, Cyclospora cayetanensis, Cryptosporidium parvum, Microsporidium, Enterobius vermicularis, Giardia lamblia, Ancylostoma 5 duodenale, Necator americanus, Taenia solium , Taenia saginata, Diphyllobothrium latum, Coccidie et Trichinella spiralis, ou d'une combinaison de ceux-ci. L'infection peut enfin être causée par une levure, de préférence sélectionnée dans le groupe constituée de Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, Candida krusei, Candida guillermondii, Torulopsis glabrata, ou de 10 combinaisons de celles-ci. La composition selon l'invention peut en outre être administrée par voie orale. Le sujet de l'invention est un animal, de préférence un mammifère non humain, de manière encore préférée un mammifère sélectionné dans le groupe constitué des chiens, chats, chevaux, vaches, cochons, moutons, chèvres, lapins, hamsters, cochons 15 d'inde, poules, poulets, et primates non-humains. De manière tout particulièrement préférée, le sujet de l'invention est un animal nouveau-né ou dans la période néonatale. Alternativement, le sujet de l'invention est un humain, de préférence un humain sélectionné dans le groupe constitué d'un nouveau-né, d'un enfant et d'une personne âgée.

20 La composition selon l'invention peut en outre être un alicament ou un complément alimentaire. La composition selon l'invention peut être administrée en combinaison avec un prébiotique, de préférence sélectionné dans le groupe constitué de l'oligofructose, de l'inuline, des galacto-oligosaccharides, du lactulose, des oligosaccharides du lait 25 maternel, des dérivés ou des combinaisons de ceux-ci. La composition selon l'invention peut également être administrée en combinaison avec un antibiotique, de préférence sélectionné dans le groupe constitué de l'Amoxicilline, de l'Ampicilline, de la Vancomycine, de la Neomycine sulfate, de la Metronidazole, de l'Alatrofloxacine, de la Tetracycline, de la Moxifloxacine, de 30 l'Azithromycine, de la Bacampicilline, de l'Oxacilline, de la Benzylpenicilline, de la Clarithromycine, de la Carbenicilline, de la Cefadroxile, de la Cephalexine, de la Cefditorene, de la Cefepime, de la Cefmetazole, de la Cefoperazone, de la Cefprozile, de la Cephalexine, de la Ciprofloxacine, de la Clarithromycine, de la Clindamycine, de 3035329 5 la Daptomycine, de la Dicloxacilline, de l'Erythromycine, de la Fidaxomycine, de la Gemifloxacine, de la Sulfamethoxazole, de la Kanamycine, de la Levofloxacine, de la Lincomycine, de la Lomefloxacine, de l'Ofloxacine, de la Vancomycine, de la Meropeneme, du Metronidazole, de la Nafcilline, de la Nalidixice acide, de la 5 Tobramycine, de la Piperacilline, de la Polymyxine, de la Trimethoprime, de la Rifampine, de la Streptomycine, de la Trovafloxacine, de dérivés ou de combinaisons de ceux-ci. La composition selon l'invention peut enfin être administrée en combinaison avec une autre bactérie ou un extrait de celle-ci, de préférence une bactérie sélectionnée 10 dans le groupe constitué de Bacteroides ovatus, Bacteroides fragilis, Bacteroides intestinalis, Bacteroides vulgatus, Bacteroides caccae, Bacteroides massiliensis, Parabacteroides diastasonis, Odoribacter splanchnicus, Faecahbacterium prausnitzii, Escherichia cou, Ruminococcus gnavus, Roseburia intestinalis, Fusobacterium necrogenes, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium breve, 15 Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus salivarius, Streptococcus thermophilus, Bacillus clausii, Enterococcus faecium, et des combinaisons de celles-ci.

20 BREVE DESCRIPTION DES DESSINS Figure 1. Etude de l'expression des gènes dans le colon de souris monocolonisées par une technique de puce à ADN. L'expression des gènes dans le colon de souris monocolonisées (monoxénique), stériles (groupe axénique), et conventionnalisées a été analysée par microarray et 25 représentés en utilisant une analyse en composantes principales. Les ellipses délimitent les groupes de souris étudiés : souris monocolonisées (groupe monoxénique, en vert), stériles (groupe axénique, en noir), et conventionnalisées (groupe conventionnel, en rouge). Les axes correspondent aux composantes principales 1 (axe des x) et 2 (axe des y). Les souris ont été monocolonisées par Escherichia cou, Ruminococcus gnavus, 30 Bacteroides thetaiotaomicron, Roseburia intestinalis, Saccharomyces boulardii ou Candida albicans.

3035329 6 Figure 2. Etude de l'expression de gènes clefs du système immunitaire dans le colon de souris monocolonisées. Pour confirmer les résultats de puces à ADN, les gènes de 8 protéines du système immunitaire ont été sélectionnés : T-bet, Gata3, IFNy, TLR4, FoxP3, RORyt, 5 IL-113, et CCL2. L'expression de ces gènes a été déterminée dans le colon par RT-qPCR à partir de leurs ARNs. La méthode du AACt a été utilisée pour les quantifier en utilisant GAPDH comme gène de référence et le groupe de souris stériles pour calibrer le système. Les résultats sont exprimés sous forme de moyennes ± SEM (n=5 par groupe). Une comparaison statistique a été réalisée avec le groupe des souris stériles en 10 utilisant un test de Mann-Whitney (*/**/***: p < 0.05/0.01/0.001). Figure 3. Etude de la mise en place du système immunitaire dans le colon de souris monocolonisées. Des échantillons de colon ont été fixés à l'acide de paraformaldéhyde, puis 15 inclus dans de la paraffine avant d'être découpés en quatre sections micrométriques. Ces sections ont ensuite été incubées pour une analyse immuno-histochimique avec des anticorps polyclonaux de lapin anti-CD3 (cellules T, FIG 3A), des anticorps monoclonaux de rat anti-CD45R (cellules B, FIG 3B), et des anticorps monoclonaux de rat anti-F4/80 (macrophages, FIG 3C); La production d'Immunoglobulines A (IgA) 20 a été déterminée par un test d'ELISA réalisé sur des échantillons de fèces (FIG 3D). Les résultats sont exprimés sous forme de moyennes ± SEM (n=5 par groupe). Une comparaison statistique a été réalisée avec le groupe des souris stériles en utilisant un test de Mann-Whitney (*/**/***: p < 0.05/0.01/0.001). Des photos représentatives ont été prises (grossissement X100).

25 DESCRIPTION DETAILLEE DE L'INVENTION De façon surprenante, les inventeurs ont découvert que l'administration de B. thetaiotaomicron dans l'intestin de souris axéniques, c'est-à-dire des souris stériles (dépourvues de tout microorganisme), entraîne une maturation du système immunitaire 30 de leur hôte qui est tout à fait comparable à celle observée chez des souris conventionnalisées, c'est-à-dire des souris axéniques auxquelles une microflore intestinale complète a été transférée. En particulier, les inventeurs ont noté une 3035329 7 infiltration de la muqueuse intestinale de l'hôte par des lymphocytes T, des lymphocytes B et des macrophages mais également une maturation du système des Immunoglobulines A (IgA). Cette maturation du système immunitaire est indispensable à une lutte efficace contre les infections.

5 La bactérie B. thetaiotaomicron est une des espèces les plus représentées du phylum Bacteroidetes, aussi bien chez l'homme que chez la souris, le phylum Bacteroidetes étant l'un des trois phyla majeurs de la microflore intestinale (Qin J et al, 2010, Nature, 464, pp. 59-65). Etant naturellement présente dans la microflore intestinale, son administration n'aura pas d'effet délétère sur la microflore mais aura, au 10 contraire, pour effet de renforcer la stimulation du système immunitaire et les défenses de la microflore intestinale contre les bactéries pathogènes et ainsi de renforcer la lutte contre une infection ou de prévenir une nouvelle infection. Ainsi, la présente invention concerne, dans un premier aspect, une composition 15 comprenant B. thetaiotaomicron ou un extrait de celle-ci, pour son utilisation dans la prévention ou le traitement d'une infection chez un sujet. De préférence, B. thetaiotaomicron est présent en une quantité thérapeutiquement efficace. La présente invention concerne également l'utilisation de B. thetaiotaomicron ou d'un extrait de celle-ci pour prévenir ou traiter une infection chez un sujet.

20 La présente invention concerne également l'utilisation de Bacteroides thetaiotaomicron ou d'un extrait de celle-ci pour la préparation d'un médicament destiné à la prévention ou au traitement d'une infection chez un sujet. Enfin, la présente invention concerne encore une méthode de prévention ou de traitement d'une infection chez un sujet comprenant une étape d'administration de 25 Bacteroides thetaiotaomicron audit sujet. Tel qu'utilisé ici, le terme « Bacteroides thetaiotaomicron » se réfère à toute souche de bactérie appartenant à l'espèce Bacteroides thetaiotaomicron, en particulier la souche VPI-5482 (ATCC 29149).

30 Tel qu'utilisé ici, le terme « extrait » ou « extrait cellulaire » se réfère à toute fraction obtenue à partir de la cellule bactérienne, notamment un surnageant cellulaire, un débris cellulaire, une paroi cellulaire, un extrait d'ADN, une molécule ou un complexe moléculaire produit par la bactérie, des enzymes ou une préparation 3035329 8 d'enzymes obtenues à partir des cellules bactériennes par traitement chimique, physique ou enzymatique, et qui est substantiellement sans cellules vivantes. De préférence, ce terme se réfère à un extrait capable de reproduire tous ou une partie des effets de Bacteroides thetaiotaomicron.

5 La composition selon l'invention peut également comprendre un mélange de Bacteroides thetaiotaomicron et d'extraits de Bacteroides thetaiotaomicron, l'ajout d'extraits permettant de renforcer l'effet de Bacteroides thetaiotaomicron sans augmenter la quantité de bactérie administrée au sujet.

10 La composition selon l'invention peut en outre être administrée en combinaison avec un autre agent thérapeutique, de préférence sélectionné dans le groupe constitué d'un prébiotique, d'un antibiotique, d'un autre microorganisme, d'un extrait de celui-ci, ou d'une combinaison de ceux-ci. La composition selon l'invention et l'agent thérapeutique additionnel peuvent être administrés simultanément ou séquentiellement.

15 Lorsqu'ils sont administrés séquentiellement, l'agent thérapeutique additionnel peut être administré avant ou après administration de la composition selon l'invention. Dans un mode de réalisation particulier, ladite composition est administrée en combinaison avec un prébiotique. Tel qu'utilisé ici, le terme de « prébiotique » se réfère à toute molécule ayant un effet prébiotique, c'est à dire favorisant la croissance ou 20 l'activité des microorganismes intestinaux bénéfiques à la santé de leur hôte. Les prébiotiques sont généralement des oligosaccharides ou des polysaccharides à courtes chaînes constitués approximativement de deux à vingt unités de monosaccharides. Ils échappent à la digestion dans l'intestin grêle et sont des substrats potentiels pour l'hydrolyse et la fermentation par les bactéries intestinales. Le prébiotique employé dans 25 l'invention peut spécifiquement cibler une espèce ou un genre de microorganismes intestinaux comme plusieurs espèces ou genres de microorganismes, ce qui permet de moduler le nombre total ou la proportion relative d'un ou de plusieurs microorganismes intestinaux. Les prébiotiques selon l'invention peuvent en particulier être des substrats de Bacteroides thetaiotaomicron. De préférence, les prébiotiques selon l'invention sont 30 sélectionnés dans le groupe constitué de l'oligofructose, de l'inuline, de galacto- oligosaccharides, de le lactulose, d'oligosaccharides du lait maternel, de dérivés ou de combinaisons de ceux-ci.

3035329 9 Dans un autre mode de réalisation particulier, ladite composition est administrée en combinaison avec un antibiotique. L'antibiotique employé peut spécifiquement cibler une espèce ou un genre de microorganismes intestinaux comme plusieurs espèces ou genres de microorganismes, afin de moduler le nombre total ou la proportion relative 5 d'un ou de plusieurs microorganismes intestinaux. De préférence, les antibiotiques selon l'invention sont sélectionnés dans le groupe constitué de l'Amoxicilline, de l'Ampicilline, de la Vancomycine, de la Neomycine sulfate, de la Metronidazole, de l'Alatrofloxacine, de la Tetracycline, de la Moxifloxacine, de l'Azithromycine, de la Bacampicilline, de l'Oxacilline, de la Benzylpenicilline, de la Clarithromycine, de la 10 Carbenicilline, de la Cefadroxile, de la Cephalexine, de la Cefditorene, de la Cefepime, de la Cefmetazole, de la Cefoperazone, de la Cefprozile, de la Cephalexine, de la Ciprofloxacine, de la Clarithromycine, de la Clindamycine, de la Daptomycine, de la Dicloxacilline, de l'Erythromycine, de la Fidaxomycine, de la Gemifloxacine, de la Sulfamethoxazole, de la Kanamycine, de la Levofloxacine, de la Lincomycine, de la 15 Lomefloxacine, de l'Ofloxacine, de la Vancomycine, de la Meropeneme, du Metronidazole, de la Nafcilline, de la Nalidixice acide, de la Tobramycine, de la Piperacilline, de la Polymyxine, de la Trimethoprime, de la Rifampine, de la Streptomycine, de la Trovafloxacine, de dérivés ou de combinaisons de ceux-ci. Dans un autre mode de réalisation particulier, ladite composition est administrée 20 en combinaison avec un autre microorganisme, un extrait de microorganisme ou des combinaisons de ceux-ci. Ledit microorganisme est de préférence compatible avec la microflore intestinale du sujet, de manière encore préférée, c'est un microorganisme commensal. Tel qu'utilisé ici, le terme de « microorganisme » se réfère à des êtres vivants 25 microscopiques tel que les bactéries, les virus, les champignons unicellulaires (levures), et les protistes. Les termes de « microbe », et de « microorganisme » sont équivalents et peuvent être employés indifféremment l'un pour l'autre dans le cadre de la présente invention. Tel qu'utilisé ici, le terme de «microflore intestinale » se réfère à l'ensemble des 30 microorganismes qui se trouvent naturellement présents dans les organes composants le tube digestif Les termes de « microflore intestinale », de « flore intestinale » et de « microbiote intestinal » sont équivalents dans le cadre de la présente invention et peuvent s'employer indifféremment l'un pour l'autre.

3035329 10 Tel qu'utilisé ici, le terme de « microorganisme commensal » se réfère à des microorganismes naturellement présents dans la microflore intestinale du sujet et sont, en général, bénéfique à leur hôte. Il se distingue du microorganisme pathogène qui a, en général, un effet néfaste 5 sur son hôte. Les microorganismes pathogènes sont, en particulier, responsables des infections. Le microorganisme selon l'invention peut être une bactérie, une levure, des extraits ou des combinaisons de celles-ci, de préférence une bactérie ou un extrait de bactérie. Le microorganisme peut-être une levure sélectionné dans la liste constituée de 10 Saccharomyces boulardii, Saccharomyces cerevisiae, Candida albicans, des extraits de celles-ci et des combinaisons de celles-ci. De préférence, le microorganisme est une bactérie ou un extrait de bactérie, en particulier une bactérie ou un extrait de bactérie appartenant à un phylum sélectionné dans le groupe constitué de Bacteroidetes, Firmicutes, Actinobacteria, et Proteobacteria. De manière encore préféré, le 15 microorganisme est une bactérie ou un extrait de bactérie appartenant à un genre sélectionné dans la liste constituée de Bacteroides, Parabacteroides, Clostridium, Fusobacterium, Eubacterium, Faecalibacterium, Ruminococcus, Peptococcus, Peptostreptococcus, Bifidobacterium, Escherichia, Lactobacillus, Odoribacter, Roseburia, Streptococcus, Bacillus, et Enterococcus. De manière tout particulièrement 20 préférée, le microorganisme est une bactérie ou un extrait de bactérie sélectionnée dans le groupe constitué de Bacteroides ovatus, Bacteroides fragilis, Bacteroides intestinalis, Bacteroides vulgatus, Bacteroides caccae, Bacteroides massiliensis, Parabacteroides diastasonis, Odoribacter splanchnicus, Faecalibacterium prausnitzii, Escherichia cou, Ruminococcus gnavus, Roseburia intestinalis, Fusobacterium necrogenes, 25 Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium animalis, Bifidobacterium breve, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum, Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophints, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, Lactobacillus salivarius, Streptococcus thermophints, 30 Bacillus clausii, Enterococcus faecium, et des combinaisons de celles-ci. Tel qu'utilisé ici, le terme « quantité thérapeutiquement efficace » se réfère à une quantité de Bacteroides thetaiotaomicron et/ou d'extraits de celle-ci capable de 3035329 11 prévenir ou de retarder l'apparition d'une infection, ou de guérir ou de réduire les effets d'une infection. Il est évident que la quantité à administrer peut être adaptée par l'homme du métier, en fonction du sujet à traiter, de la nature de l'infection, etc. En particulier, les doses et régimes d'administration dépendent de la nature, du stade de 5 développement et de la sévérité de l'infection à traiter, ainsi que du poids, de l'âge et de l'état de santé général du sujet à traiter, ou encore du jugement du médecin prescripteur. Tel qu'utilisé ici, le terme de « traitement » se réfère à tout acte visant à améliorer le statut médical d'une personne atteinte d'une infection. Le traitement peut viser aussi bien à une amélioration de l'état du patient, c'est-à-dire à une régression de 10 l'infection ou de certains de ses symptômes, qu'à une éradication de l'infection ou de certains de ses symptômes. Le traitement peut également avoir pour effet d'empêcher ou de ralentir la progression d'une infection. Tel qu'utilisé ici, le terme de « prévention » se réfère à tout acte visant à prévenir ou à retarder l'apparition d'une infection. Les termes de « prévention » et de 15 « traitement prophylactique » sont équivalents et peuvent s'employer l'un pour l'autre dans le cadre de la présente invention. La prévention peut viser aussi bien des sujets présentant une prédisposition à des infections, de préférence à des infections intestinales, que des sujets non prédisposés. Afin d'assurer une prévention et/ou un traitement efficace des infections, la 20 composition selon l'invention peut être délivrée au niveau de son site d'action intestinal soit sous forme d'un suppositoire, soit sous forme d'un lavement, soit par voie orale, de préférence par voie orale. L'homme du métier est capable de sélectionner toute formulation, véhicule, excipient, diluent ou stabilisateur approprié. En particulier, des formulations de la composition incluent, sans y être limité, des formulations solides 25 comme des cachets, des pilules, des capsules ou des gélules, des formulations liquides comme des boissons, ainsi que des suspensions. De préférence, la composition est délivrée oralement et parvient à son site d'action intestinal sans être endommagée par l'acidité de l'estomac, par exemple grâce à un enrobage gastro-résistant. Alternativement, la composition peut être administrée sous la forme d'un alicament, 30 d'un complément alimentaire, d'un nutraceutique, d'un yaourt, d'une barre diététique, ou d'autres produits du même genre. La composition selon l'invention peut être administrée à raison d'une dose unique, ou à raison de plusieurs doses en fonction de la formulation, du sujet, de son 3035329 12 état de santé et de l'infection à traiter. Lorsque plusieurs doses de la composition sont administrées, celles-ci peuvent être réparties sur un ou plusieurs jours. De préférence, la composition selon l'invention est administrée à raison d'une dose unique par jour d'administration. Alternativement, le sujet reçoit plusieurs doses de la composition par 5 jour de traitement. La composition selon l'invention peut être administrée tous les jours, tous les deux jours, une fois par semaine, une fois par mois, ou une fois par an, de préférence une fois par jour. La périodicité de prise de la composition dépend de nombreux paramètres tels que la durée globale prévue de prise de la composition, l'âge du sujet 10 et/ou la gravité de l'infection à prévenir ou à traiter. La périodicité de prise de la composition peut également évoluer au cours du temps, chez un sujet donné, notamment en fonction de l'évolution de son infection, de son risque d'infection, et/ou de son état de santé global. La composition selon l'invention peut être administrée pendant une durée 15 maximale d'environ 31 jours, pendant une période d'environ 1 à environ 24 mois ou pendant au moins deux ans. Dans un premier mode de réalisation, la composition selon l'invention peut être administrée au sujet pendant une période de 1 à environ 31 jours, de préférence pendant une période d'environ 2 à environ 21 jours, de manière encore préférée pendant une 20 période d'environ 7 à environ 14 jours. Une durée d'administration de la composition inférieure ou égale à un mois est particulièrement adaptée au traitement aigu d'une infection ou à la prévention d'un risque immédiat d'infection. Alternativement, la composition selon l'invention peut être administrée pendant toute la durée de l'infection ou toute la durée du risque d'infection.

25 Dans un deuxième mode de réalisation, la composition selon l'invention peut également être administrée au sujet pendant une période d'environ 1 à environ 24 mois, de préférence pendant une période d'environ 2 à environ 12 mois, de manière encore préférée pendant une période d'environ 3 à environ 6 mois. Une durée d'administration de la composition d'environ 1 à environ 24 mois est particulièrement adaptée à la 30 prévention d'une infection. Alternativement, la composition selon l'invention peut être administrée pendant toute la période où le sujet présente un risque accru d'infection. Dans un troisième mode de réalisation, la composition selon l'invention peut enfin être administrée au sujet pendant au moins deux ans, de préférence pendant au 3035329 13 moins 5 ans, de manière encore préférée pendant au moins 8 ans. Une durée d'administration de la composition d'au moins deux ans est particulièrement adaptée à la prévention ou au traitement d'une infection chronique. Alternativement, la composition selon l'invention peut être administrée pendant toute la vie du sujet.

5 La composition selon l'invention peut être administrée pour la prévention ou le traitement de toute infection, de préférence une infection intestinale. Une infection intestinale est une infection touchant un des organes de l'intestin, à savoir l'oesophage, l'estomac, l'intestin grêle, le coecum, le colon, ou le rectum. Suivant l'organe de l'intestin touché, le nom donné à l'infection peut différer, on parle ainsi d'oesophagite 10 lorsque l'oesophage est touché, de gastrite lorsque l'estomac est touché, d'entérite lorsque l'intestin grêle est touché, de colite pour le côlon, de sigmoïdite pour la partie basse du côlon, ou encore de rectite pour le rectum. L'infection intestinale selon l'invention est de préférence sélectionnée dans le groupe constitué de l'oesophagite, de la gastrite, de l'entérite, de la colite, de la sigmoïdite, de la rectite, de la péritonite, de la 15 tuberculose intestinale, ou d'une combinaison de celles-ci. Une infection intestinale peut être causée par différents microorganismes pathogènes, il peut s'agir de virus, de bactéries, de parasites, de levures ou de combinaisons de ceux-ci. Dans un mode de réalisation particulier, l'infection intestinale peut être causée 20 par un virus, de préférence un virus sélectionné dans le groupe constitué du Rotavirus, du Virus de Norwalk, de l'Adénovirus, du Calicivirus, des Coronavirus, de l'Enterovirus, de l'Astrovirus, ou d'une combinaison de ceux-ci. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'infection intestinale peut être causée par une bactérie, de préférence une bactérie sélectionnée dans le groupe 25 constitué de Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus, Escherichia cou, Shigella sonnei, Shigella flexnerii, Shigella dysenteriae, Clostridium difficile, Clostridium perfengens, Clostridium botulinum, Clostridium difficile, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi, Salmonella paratyphi, Yersinia enterocolitica, Yersinia pseudotuberculosis, Campylobacter jejuni, Campylobacter cou, Campylobacter fetus, 30 Helicobacter pylori, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Aeromonas, Mycobacterium tuberculosis, ou d'une combinaison de celles-ci. Dans un autre mode de réalisation particulier, l'infection intestinale peut être causée par un parasite, de préférence un parasite sélectionné dans le groupe constitué 3035329 14 d'Entamoeba histolytica, Ascaris lumbricoides, Strongyloides stercoralis, Ancylostoma duodenale, Cyclospora cayetanensis, Cryptosporidium parvum, Microsporidium, Enterobius vermicularis, Giardia lamblia, Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Taenia solium , Taenia saginata, Diphyllobothrium latum, Coccidie et 5 Trichinella spiralis, ou d'une combinaison de ceux-ci. Dans encore un autre mode de réalisation particulier, l'infection intestinale peut être causée par une levure, de préférence une levure sélectionnée dans le groupe constitué de Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, Candida krusei, Candida guillermondii, Torulopsis glabrata, ou d'une combinaison de celles-ci.

10 La composition selon l'invention peut être destinée à un usage pharmaceutique ou à un usage vétérinaire. Tels qu'utilisé ici, le terme de « sujet » fait référence à un animal, de préférence à un mammifère. Les termes de « sujet » et de « patient » sont équivalents et peuvent indifféremment être employés l'un pour l'autre dans le cadre de 15 la présente invention. Le sujet de l'invention peut-être sain ou atteint d'une infection. Dans un mode de réalisation particulier, le sujet de l'invention peut être atteint d'une infection, de préférence le sujet de l'invention est atteint d'une infection intestinale. Dans un mode de réalisation alternatif, le sujet de l'invention ne présente pas d'infection, de 20 préférence, il ne présente pas d'infection intestinale. Cependant, le sujet peut présenter un risque accru d'infection, notamment en raison d'une fragilité ou d'un système immunitaire immature ou affaibli. En particulier, le sujet peut être immunodéprimé ou immunosupprimé. Tel qu'utilisé ici, le terme « fragilité » se réfère à un syndrome clinique reflétant 25 une diminution des capacités physiologiques de réserve qui altère les mécanismes d'adaptation au stress, son expression clinique est modulée par les co-morbidités et des facteurs psychologiques, sociaux, économiques et comportementaux. Le syndrome de fragilité est un marqueur de risque de mortalité et d'événements péjoratifs, notamment d'incapacités, de chutes, d'hospitalisation et d'entrée en institution. L'âge est un 30 déterminant majeur de fragilité mais n'explique pas à lui seul ce syndrome. La prise en charge des déterminants de la fragilité peut réduire ou retarder ses conséquences. Le sujet de l'invention peut être un animal présentant une microflore anormale, c'est-à-dire impropre à protéger efficacement le sujet contre les infections intestinales.

3035329 15 Un tel sujet peut présenter une microflore anormale suite à un traitement antibiotique. Cette microflore anormale peut également être la conséquence d'une anomalie congénitale. Le sujet de l'invention peut être un mammifère non-humain ou bien un 5 mammifère humain. Dans un mode de réalisation particulier, le sujet de l'invention est un humain. Il peut ainsi s'agir d'un nouveau-né, d'un enfant, d'un adolescent, d'un adulte ou d'une personne âgée. Dans un mode de réalisation préféré, le sujet est un humain nouveau-né. Tel qu'utilisé ici, le terme de « nouveau-né » se réfère à un être humain âgé de moins de 12 mois, de préférence âgé de moins de 6 mois, de manière 10 encore préféré âgé de moins de 3 mois. Dans un autre mode de réalisation préféré, le sujet humain est un enfant. Tel qu'utilisé dans la présente invention, le terme « d'enfant » se réfère à un être humain âgée de 1 à 12 ans, de préférence à un être humain âgée de 1 à 8 ans, et de manière encore préféré à un être humain âgée de 1 à 5 ans. Dans encore un autre mode de réalisation préféré, le sujet humain est une personne 15 âgée. Tel qu'utilisé dans la présente invention, le terme de « personne âgée » se réfère à un être humain âgée de 60 ans ou plus, de préférence à un être humain âgée de 65 ans ou plus, et de manière encore préféré à un être humain âgée de 70 ans ou plus. Dans le domaine des applications vétérinaires, le sujet de l'invention peut être un mammifère non-humain, de préférence un animal de compagnie ou d'élevage, de 20 manière encore préféré un animal sélectionné dans le groupe constitué des chiens, chats, chevaux, vaches, cochons, moutons, chèvres, lapins, hamsters, cochons d'inde, poules, poulets, et primates non-humains. De manière tout particulièrement préférée, le sujet de l'invention est de surcroit un nouveau-né. Tel qu'utilisé ici, le terme de « nouveau-né » se réfère à un animal âgé de moins de 12 mois, de préférence âgé de moins de 6 mois, 25 de manière encore préféré âgé de moins de 3 mois. En particulier, le sujet de l'invention peut ne pas être sevré. Dans un deuxième aspect, la présente invention concerne également un kit de traitement ou de prévention d'une infection chez un sujet, ledit kit comprenant (i) une 30 composition comprenant une quantité thérapeutiquement efficace de B. thetaiotaomicron ou d'un extrait de celle-ci, ainsi qu'optionnellement (ii) un prébiotique, et/ou (iii) un antibiotique, et/ou (iv) un autre microorganisme ou un extrait 3035329 16 de celle-ci, et également de façon optionnel (v) une notice détaillant les précautions d'usage d'un tel kit. Les modes de réalisation décrits pour le premier aspect de cette invention sont également compris dans ce second aspect.

5 Toutes les références citées dans cette demande, y compris les articles de journaux ou les résumés, les demandes de brevets publiées, les brevets délivrés ou tout autre référence, sont entièrement incorporées ici par référence, ce qui inclus tous les résultats, tables, figures et textes présentés dans ces références.

10 Bien qu'ayant des sens différents, les termes « comprenant », « ayant », « contenant » et « consistant en » peuvent être remplacés l'un par l'autre dans toute la description de l'invention. Dans le cadre de la présente description, toutes les molécules et cellules peuvent optionnellement être isolées et/ou purifiées.

15 D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaîtront mieux à la lecture des exemples suivants donnés à titre illustratif et non limitatif EXEMPLES Les inventeurs ont étudié l'effet de quatre bactéries du microbiote intestinal, 20 Escherichia cou, Ruminococcus gnavus, Bacteroides thetaiotaomicron, et Roseburia intestinalis, et de deux levures, Saccharomyces boulardii et Candida albicans, sur le système immunitaire colique en utilisant des modèles de souris monoxeniques. Des souris monoxéniques sont des souris dont l'intestin n'a été colonisé que par un seul microorganisme, en l'occurrence, une bactérie ou une levure.

25 Matériel et Méthodes Microorganismes Quatre bactéries et deux levures ont été utilisées dans cette étude : Escherichia 30 cou i AIEC LF82, Ruminococcus gnavus ATCC 29149, Bacteroides thetaiotaomicron VPI-5482 (ATCC 29148), Roseburia intestinalis L1-82 (DSM 14610), Saccharomyces 3035329 17 boulardii CNCM I-745 (syn. HANSEN CBS 5926, Biocodex Laboratories) et Candida albicans SC5314. Mono-associations 5 Des souris femelles axéniques (dépourvues de tout microorganisme) C3H/HeN (plateforme ANAXEM, INRA, France) ont été élevées dans des incubateurs stériles. Des suspensions bactériennes (108-109 ufc dans 400 !IL), des suspensions de levures (107-108 ufc dans 400 !IL), des fèces de souris conventionnelles, ou un milieu control ont été administrés à des souris de 6 semaines par gavage intra-gastrique (8 souris par 10 groupe). Après 6 semaines d'implantation, les souris ont été euthanasiées et plusieurs échantillons ont été prélevés, à savoir les pièces et le contenu du jéjunum, de l'iléon, du coecum et du colon. Histologie 15 Les échantillons de colon destinés aux études histologiques ont été fixés dans de l'acide paraformaldéhyde à 4 % (Electron Microscopy Sciences), puis inclues dans de la paraffine, avant d'être découpés en sections micrométriques. Ces sections ont ensuite été incubées en vue d'analyses histologiques et immunohistochimiques.

20 La quantification des immunoglobulines Les fèces ont été homogénéisés dans du PBS (1 ml pour 100 mg) et centrifugées. Tous les surnageants ont été collectés puis congelés à -80°C jusqu'à leur utilisation. La quantification des immunoglobulines A a été réalisée par ELISA, en suivant les recommandations du fabriquant (MabTech).

25 Expression des gènes L'ARN total a été isolé à partir des échantillons de colons grâce au kit RNeasy Mini (Qiagen), en suivant les recommandations du fabriquant. L'intégrité de l'ARN a été vérifiée sur un Bioanalyzer 2100 en utilisant des nanopuces RNA 6000 (Agilent 30 Technologies), et tous les échantillons présentaient un résultat au test de calcul de l'intégrité de leur ARN supérieur à 8. L'analyse des profils de transcription a été réalisée sur des échantillons de colons de souris en utilisant des puces à ADN G3 Mouse GE 8x60K de SurePrint 3035329 18 (Design ID: 028005, Agilent Technologies). Les résultats de puces à ADN obtenus ont été soumis sur GEO (numéro d'accession : GSE63299). Par ailleurs, l'expression d'une sélection de gènes de souris a été étudiée dans des cellules de colon de souris par RTqPCR.

5 Analyse des résultats et statistiques Tous les résultats présentés sous la forme de graphiques sont exprimés sous la forme de moyennes ou de moyennes ± SEM (n=3 à 8 par groupe) et une comparaison statistique avec une condition contrôle a systématiquement été réalisée avec un test de 10 Mann-Whitney. Résultats Analyse transcriptomique globale 15 Une analyse par une technique de puce à ADN (microarray) a été réalisée sur le colon de souris monocolonisées (6 groupes correspondant aux six microorganismes d'intérêts) ainsi que sur celui de souris axéniques (aucun microorganisme) et conventionalisées (colonisées par un microbiote entier normal). Le profil transcriptomique des souris monocolonisées avec B. thetaiotaomicron, contrairement à 20 ceux obtenus avec d'autres microorganismes, est très proche de celui des souris conventionnalisées (cf Figure 1). Les annotations fonctionnelles des données de puces à ADN, réalisées grâce au logiciel Cytoscape, ont permis de montrer que B. thetaiotaomicron stimule tout particulièrement les gènes impliqués dans les fonctions immunitaires.

25 Stimulation de l'expression de gènes impliqués dans des fonctions immunitaires majeures par B. thetaiotaomicron Les inventeurs ont confirmé par qPCR la stimulation de l'expression d'une 30 sélection de gènes impliqués dans des fonctions immunitaires majeures par B. thetaiotaomicron (cf Figure 2).

3035329 19 Analyse des populations immunitaires coliques et des immunoglobulines A luminales Par une analyse immunohistochimique, les inventeurs ont montré que B. thetaiotaomicron induit une infiltration de la muqueuse colique par différentes 5 populations de cellules immunitaires : des lymphocytes T, des lymphocytes B et des macrophages. Cela traduit une maturation du système immunitaire. De plus, B. thetaiotaomicron induit également la maturation du système des IgA au niveau de la muqueuse intestinale (cf Figure 3). Bien que certains des aspects de maturation du système immunitaire soient également observés avec certains des autres 10 microorganismes étudiés, B. thetaiotaomicron est le seul à avoir un impact global, sur tous les paramètres étudiés. Les inventeurs ont ainsi découvert que la bactérie B. thetaiotaomicron, à elle seule, était parfaitement capable de maturer le système immunitaire intestinal de leur 15 hôte.

Claims (15)

1. REVENDICATIONS1. Composition comprenant B. thetaiotaomicron ou un extrait de celle-ci pour son utilisation dans la prévention ou le traitement d'une infection chez un sujet.
2. 2. Composition selon la revendication 1, dans laquelle ladite infection est une infection intestinale, de préférence sélectionnée dans le groupe constituée de l'oesophagite, la gastrite, l'entérite, la colite, la sigmoïdite, la rectite, la péritonite, ou une combinaison de celles-ci.
3. 3. Composition selon la revendication 1 ou 2, dans laquelle ladite infection est une infection bactérienne, virale, parasitaire, causée par une levure, ou une combinaison de celles-ci.
4. 4. Composition selon la revendication 3, dans laquelle ladite infection est une infection bactérienne, de préférence sélectionnée dans le groupe constituée de Vibrio cholerae, Vibrio parahaemolyticus, Escherichia cou, Shigella sonnei, Shigella flexnerii, Shigella dysenteriae, Clostridium difficile, Clostridium perfrin gens, Clostridium botulinum, Clostridium difficile, Salmonella enteritidis, Salmonella typhi, Salmonella paratyphi, Yersinia enterocolitica, Y ersinia pseudotuberculosis, Campylobacter jejuni, Campylobacter cou, Campylobacter fetus, Helicobacter pylori, Listeria monocytogenes, Staphylococcus aureus, Bacillus cereus, Aeromonas, Mycobacterium tuberculosis, ou d'une combinaison de celles-ci.
5. 5. Composition selon la revendication 3, dans laquelle ladite infection est une infection virale, de préférence sélectionnée dans le groupe constituée du du Rotavirus, du Virus de Norwalk, de l'Adénovirus, du Calicivirus, des Coronavirus, de l'Enterovirus, de l'Astrovirus, ou d'une combinaison de ceux-ci.
6. 6. Composition selon la revendication 3, dans laquelle ladite infection est une infection causée par un parasite, de préférence sélectionné dans le groupe constituée d'Entamoeba histolytica, Ascaris lumbricoides, Strongyloides 3035329 21 stercoralis, Ancylostoma duodenale, Cyclospora cayetanensis, Cryptosporidium parvum, Microsporidium, Enterobius vermicularis, Giardia lamblia, Ancylostoma duodenale, Necator americanus, Taenia solium , Taenia saginata, Diphyllobothrium latum, Coccidie et Trichinella spiralis, ou d'une combinaison 5 de ceux-ci.
7. 7. Composition selon la revendication 3, dans laquelle ladite infection est une infection causée par une levure, de préférence sélectionnée dans le groupe constituée de Candida albicans, Candida parapsilosis, Candida tropicalis, 10 Candida krusei, Candida guillermondii, Torulopsis glabrata, ou de combinaisons de celles-ci.
8. 8. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, dans laquelle ladite composition est administrée par voie orale. 15
9. 9. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans laquelle ledit sujet est un animal, de préférence un mammifère non humain, de manière encore préféré un mammifère sélectionné dans le groupe constitué des chiens, chats, chevaux, vaches, cochons, moutons, chèvres, lapins, hamsters, cochons d'inde, 20 poules, poulets, et primates non-humains.
10. 10. Composition selon la revendication 9, dans laquelle ledit animal est un nouveau-né ou un animal dans la période néonatale. 25
11. 11. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, dans laquelle ledit sujet est un humain, de préférence sélectionné dans le groupe constitué d'un nouveau-né, d'un enfant et d'une personne âgée.
12. 12. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 11, dans laquelle 30 ladite composition est un alicament ou un complément alimentaire.
13. 13. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 12, dans laquelle ladite composition est administrée en combinaison avec un prébiotique, de préférence sélectionné dans le groupe constitué de l'oligofructose, de l'inuline, 3035329 22 des galacto-oligosaccharides, du lactulose, des oligosaccharides du lait maternel, des dérivés ou des combinaisons de ceux-ci.
14. 14. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 13, dans laquelle 5 ladite composition est administrée en combinaison avec un antibiotique, de préférence sélectionné dans le groupe constitué de l' l'Amoxicilline, de l'Ampicilline, de la Vancomycine, de la Neomycine sulfate, de la Metronidazole, de l'Alatrofloxacine, de la Tetracycline, de la Moxifloxacine, de l'Azithromycine, de la Bacampicilline, de l'Oxacilline, de la Benzylpenicilline, 10 de la Clarithromycine, de la Carbenicilline, de la Cefadroxile, de la Cephalexine, de la Cefditorene, de la Cefepime, de la Cefmetazole, de la Cefoperazone, de la Cefprozile, de la Cephalexine, de la Ciprofloxacine, de la Clarithromycine, de la Clindamycine, de la Daptomycine, de la Dicloxacilline, de l'Erythromycine, de la Fidaxomycine, de la Gemifloxacine, de la Sulfamethoxazole, de la 15 Kanamycine, de la Levofloxacine, de la Lincomycine, de la Lomefloxacine, de l'Ofloxacine, de la Vancomycine, de la Meropeneme, du Metronidazole, de la Nafcilline, de la Nalidixice acide, de la Tobramycine, de la Piperacilline, de la Polymyxine, de la Trimethoprime, de la Rifampine, de la Streptomycine, de la Trovafloxacine, de dérivés ou de combinaisons de ceux-ci. 20
15. 15. Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, dans laquelle ladite composition est administrée en combinaison avec une autre bactérie ou un extrait de celle-ci, de préférence une bactérie sélectionnée dans le groupe constitué Bacteroides ovatus, Bacteroides fragilis, Bacteroides intestinalis, 25 Bacteroides vulgatus, Bacteroides caccae, Bacteroides massiliensis, Parabacteroides diastasonis, Odoribacter splanchnicus, Faecalibacterium prausnitzii, Escherichia cou, Ruminococcus gnavus, Roseburia intestinalis, Fusobacterium necrogenes, Bifidobacterium infantis, Bifidobacterium Bifidobacterium breve, Bifidobacterium lactis, Bifidobacterium longum, 30 Bifidobacterium bifidum, Lactobacillus rhamnosus, Lactobacillus helveticus, Lactobacillus casei, Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus, Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus plantarum, Lactobacillus reuteri, 3035329 23 Lactobacillus salivarius, Streptococcus thermophilus, Bacillus clausii, Enterococcus faecium, et des combinaisons de celles-ci.