FR3025401A1 - ANTI-BOTRYTIS COMPOSITIONS - Google Patents

Abstract

L'invention se rapporte à une composition phytopharmaceutique combinant, en tant qu'agents actifs, un champignon filamenteux du genre Microdochium, et un second composant actif contre ledit pathogène du genre Botrytis, et une méthode de lutte contre le Botrytis utilisant cette composition.The invention relates to a plant protection composition combining, as active agents, a filamentous fungus of the genus Microdochium, and a second component active against said pathogen of the genus Botrytis, and a method for controlling Botrytis using this composition.

Description

1 L'invention se rapporte au domaine de la lutte contre les agents pathogènes des plantes, par utilisation de combinaisons d'organismes biologiques, tels que les insectes, les bactéries, les champignons, pour se débarrasser des ravageurs de cultures, insectes ou mauvaises herbes, afin de remplacer ou entrer en synergie avec les pesticides ou herbicides de synthèse. On distingue 4 principaux types d'agents de bio-contrôle.The invention relates to the field of the fight against plant pathogens, by using combinations of biological organisms, such as insects, bacteria, fungi, to get rid of pests of crops, insects or weeds. , to replace or synergize with synthetic pesticides or herbicides. There are 4 main types of bio-control agents.

Les macro-organismes auxiliaires (ou l'agresseur agressé) sont des invertébrés, insectes, acariens ou nématodes utilisés de façon raisonnée pour protéger les cultures contre les attaques des bio-agresseurs. Les micro-organismes (ou l'agresseur maîtrisé) sont des champignons, bactéries et virus utilisés pour protéger les cultures contre les ravageurs et les 15 maladies ou stimuler la vitalité des plantes. Les médiateurs chimiques comprennent les phéromones d'insectes et les kairomones. Ils permettent le suivi des vols des insectes ravageurs et le contrôle des populations d'insectes par la méthode de confusion sexuelle et le piégeage. Les substances naturelles utilisées comme produits de bio-contrôle sont 20 composées de substances présentes dans le milieu naturel et peuvent être d'origine végétale, animale ou minérale. Botrytis cinerea est un champignon phytopathogène haploïde de la famille des Sclerotiniaceae, de la division des Ascomycota. Il est responsable de la 25 pourriture grise, une maladie cryptogamique qui sévit sur plusieurs cultures d'intérêt agronomique majeur comme la vigne, le tournesol, la tomate, la fraise. Botrytis cinerea attaque un nombre très important (au moins 270 espèces) de plantes sauvages, notamment des Rosacées, mais aussi nombre de plantes cultivées (Vitaceae, Solanaceae, Cucurbitaceae, Rosaceae et Fabaceae). La 30 viticulture, le maraîchage, l'arboriculture et la floriculture sont concernés par la pourriture grise. Ainsi on peut citer les cultures de tomate, framboise, fraise, haricot, concombre, ou la salade (essentiellement des plantes dicotylédones). Parmi les monocotylédones, les graminées sont considérées comme peu sensibles à la différence des bulbes (comme les oignons). La culture du cannabis et des 35 fleurs est aussi touchée, puisque les roses, gerberas, pivoines, oeillets, lis et chrysanthèmes sont vulnérables au botrytis. Bien que la pourriture grise s'attaque 3025401 2 préférentiellement aux fruits, tous les organes de la plante y sont potentiellement sensibles, et les symptômes sont variés : flétrissement des fleurs, taches foliaires, pourriture des racines, des tiges, ou des fruits. 5 D'autres espèces de champignon du genre Botrytis sont également pathogènes de plantes (notamment Botrytis squamosa, Botrytis allii sur l'oignon). Il existe un certain nombre de traitements fongicides anti-botrytis On peut ainsi utiliser des fongicides polyvalents, tels que les phtalimides, 10 ou des fongicides spécifiques à actions préventive et curative (en particulier les imides cycliques) ou à seule action préventive (notamment les pyriméthanil, fludioxonil, fluazinam, ou mépanipyrim). On peut aussi citer en tant que fongicide de synthèse, les krésoxim-méthyl (méthyl (aE)-a-(méthoxyimino)-2-[(2- methylphenoxy)méthyl]benzeneacétate), Iprodione (3-(3,5-dichlorophényI)-N- isopropyl-2,4-dioxoimidazolidine-1-carboxamide), fenhexamide (N-(2,3-dichloro-4- hydroxyphény1)-1-méthyl cyclohexanecarboxamide), ou boscalid (3- pyridinecarboxam ide, 2-chloro-N-(4'chloro[1,1'biphény1]-2-y1)). Il existe par ailleurs un certain nombre d'agents biologiques antagonistes 20 des pathogènes du genre Botrytis, et pouvant être utilisés dans la lutte contre Botrytis cinerea. - les champignons Fusarium spp. et Penicillium claviforme empêchent l'installation de B. cinerea sur des feuilles de laitue - les spores de de Cladosporium herbarum et Penicillium sp. ont permis 25 le contrôle de B. cinerea sur tomates sous serres par pulvérisation d'une suspension des spores - Inoculé sur les débris de fleurs attachés au fruit, C. herbarum contrôle efficacement B. cinerea sur la fraise, en protégeant les fleurs dans les conditions de plein champ 30 - Sur la base d'une observation d'un effet antagoniste de bactéries vis-à- vis de B. cinerea sur les feuilles de chrysanthèmes et de betteraves, les antibiotiques produits par ces bactéries ont été étudiés pour leur effet inhibiteur sur la germination des spores de B. cinerea sur feuilles de betterave. 3025401 3 - Différentes espèces de Trichoderma spp. ont été étudiées pour le contrôle de B. cinerea sur haricot, vigne, fraise et diverses cultures sous abris. * - Les champignons Ulocladium atrum et Gliocladium roseum ont été 5 utilisés pour inhiber la germination des conidies et le développement de B. cinerea sur le cyclamen - La demanderesse a développé, en vue d'une mise sur le marché, le champignon Microdochium dimerum souche L13, qui présente une bonne efficacité pour protéger les plaies d'effeuillage et les feuilles de 10 plants de tomates contre les attaques de B. cirenea en cultures sous abris. - L'isolat 1-112 de la bactérie Pseudomonas chlororaphis et l'isolat IC1270 de la bactérie Enterobacter agglomerans (renommée Serratia plymuthica), tous deux producteurs de pyrrolnitrine sont également des 15 antagonistes de B. cinerea. - Un certain nombre de levures (dont Pichia et Rhodotorula) et de bactéries (dont Bacillus et Pseudomonas) ont également été signalées pour leur efficacité dans le contrôle de B. cinerea en traitement post-récolte. On peut citer notamment la souche de Bacillus subtilis QST 713, commercialisée par Bayer Crop Science sous le nom de Serenade® Max. Ces microorganismes sont des exemples de microorganismes antagonistes de Botrytis cinerea.Auxiliary macro-organisms (or aggressed aggressors) are invertebrates, insects, mites or nematodes used rationally to protect crops against attacks by bio-aggressors. Microorganisms (or the controlled aggressor) are fungi, bacteria and viruses used to protect crops against pests and diseases or to stimulate plant vitality. Chemical mediators include insect pheromones and kairomones. They allow tracking insect pest theft and controlling insect populations by the method of mating disruption and trapping. The natural substances used as bio-control products are composed of substances present in the natural environment and may be of vegetable, animal or mineral origin. Botrytis cinerea is a haploid phytopathogenic fungus of the family Sclerotiniaceae, division Ascomycota. It is responsible for gray mold, a cryptogamic disease affecting several crops of major agronomic interest such as vines, sunflowers, tomatoes and strawberries. Botrytis cinerea attacks a very large number (at least 270 species) of wild plants, including Rosaceae, but also many cultivated plants (Vitaceae, Solanaceae, Cucurbitaceae, Rosaceae and Fabaceae). Viticulture, market gardening, arboriculture and floriculture are affected by gray rot. Thus we can mention tomato, raspberry, strawberry, bean, cucumber, or salad crops (mainly dicotyledonous plants). Among the monocotyledons, grasses are considered insensitive to the difference of bulbs (such as onions). The cultivation of cannabis and flowers is also affected, since roses, gerberas, peonies, carnations, lilies and chrysanthemums are vulnerable to botrytis. Although gray mold tends to attack fruits, all the organs of the plant are potentially susceptible, and the symptoms are varied: wilting of flowers, leaf spots, rot of roots, stems, or fruits. Other species of Botrytis fungus are also plant pathogens (especially Botrytis squamosa, Botrytis allii on the onion). There are a number of fungicidal anti-botrytis treatments. It is thus possible to use polyvalent fungicides, such as phthalimides, or specific fungicides with preventive and curative actions (in particular cyclic imides) or with a single preventive action (especially pyrimethanil). , fludioxonil, fluazinam, or mepanipyrim). Kresoxim-methyl (methyl (aE) -α- (methoxyimino) -2 - [(2-methylphenoxy) methyl] benzeneacetate), Iprodione (3- (3,5-dichlorophenyl) amine) can also be mentioned as a synthetic fungicide. N-isopropyl-2,4-dioxoimidazolidine-1-carboxamide), fenhexamide (N- (2,3-dichloro-4-hydroxyphenyl) -1-methylcyclohexanecarboxamide), or boscalid (3-pyridinecarboxam ide, 2-chloro) -N- (4'chloro [1,1'biphény1] -2-y1)). There are also a number of biological antagonists for Botrytis pathogens, which can be used in the control of Botrytis cinerea. - mushrooms Fusarium spp. and Penicillium claviforme prevent the establishment of B. cinerea on lettuce leaves - the spores of Cladosporium herbarum and Penicillium sp. allowed the control of B. cinerea on glasshouse tomatoes by spraying a suspension of the spores - Inoculated on the flower debris attached to the fruit, C. herbarum effectively controls B. cinerea on the strawberry, protecting the flowers in the flowers. field conditions 30 - Based on an observation of an antagonistic effect of bacteria on B. cinerea on chrysanthemum and beet leaves, the antibiotics produced by these bacteria were studied for their effect. inhibitor on the germination of B. cinerea spores on beet leaves. 3025401 3 - Different species of Trichoderma spp. have been studied for the control of B. cinerea on beans, vines, strawberries and various protected crops. The fungi Ulocladium atrum and Gliocladium roseum have been used to inhibit the germination of conidia and the development of B. cinerea on cyclamen. The applicant has developed for the purpose of placing on the market the fungus Microdochium dimerum strain. L13, which has good efficacy for protecting leaf stripping wounds and leaves of tomato plants against attacks of B. cirenea in protected crops. - Pseudomonas chlororaphis isolate 1-112 and IC1270 isolate of the bacterium Enterobacter agglomerans (fame Serratia plymuthica), both producers of pyrrolnitrin, are also antagonists of B. cinerea. - A number of yeasts (including Pichia and Rhodotorula) and bacteria (including Bacillus and Pseudomonas) have also been reported for their effectiveness in controlling B. cinerea in post-harvest treatment. In particular, mention may be made of Bacillus subtilis strain QST 713, marketed by Bayer Crop Science under the name Serenade® Max. These microorganisms are examples of microorganisms that antagonize Botrytis cinerea.

Par « agent antagoniste d'un agent pathogène », on entend désigner un agent non délétère (en particulier non pathogène lorsque cet agent est un microorganisme) pour une plante, capable de limiter le développement dudit agent pathogène nuisible au développement de la plante. On peut déterminer aisément et rapidement si un agent est antagoniste 30 d'un agent pathogène en effectuant certaines expériences simples et rapides : - Antagonisme in vitro en mettant en présence ledit agent et ledit pathogène - Antagonisme in vivo, en appliquant ledit agent sur la plante cible du pathogène seul (pour vérifier qu'il n'est pas lui-même délétère pour la 35 plante) et en présence du pathogène (pour évaluer la capacité de contrôle de celui-ci).By "pathogen antagonist agent" is meant a non-deleterious agent (particularly non-pathogenic when this agent is a microorganism) for a plant, capable of limiting the development of said harmful pathogen to the development of the plant. One can easily and quickly determine whether an agent is a pathogen antagonist by carrying out certain simple and rapid experiments: In vitro antagonism by bringing said agent and said pathogen-Antagonism into vivo, by applying said agent to the plant target of the pathogen alone (to verify that it is not itself deleterious to the plant) and in the presence of the pathogen (to evaluate the control capacity thereof).

3025401 4 Ces expériences sont parfaitement connues et maîtrisées par l'homme du métier et ne demandent pas d'effort particulier pour être mises en oeuvre. Les modes d'actions des agents biologiques antagonistes du Botrytis sont 5 très variés (d'après Ajouz, 2009, Thèse de doctorat, Estimation du potentiel de résistance de Botrytis cinerea à des biofongicides.). Antibiose, c'est-à-dire la production de métabolites secondaires toxiques pour l'agent pathogène cible ; qui peuvent inhiber la germination, la croissance mycélienne et/ou la sporulation des agents 10 pathogènes. On a pu caractériser de telles substances responsables de l'antibiose chez des souches appartenant à diverses espèces d'agents de lutte biologique (notamment Bacillus subtilis, Serratia plymuthica, Pseudomonas fluorescens). Les espèces de Pseudomonas par exemple produisent de nombreuses substances antifongiques: 15 pyoverdine, pyoluteorine, pheazine, pyrrolnitrine, 2,4- diacetylphloroglucinol. L'antibiotique gramicidine S secrété par l'agent de protection biologique Brevibacillus brevis inhibe par exemple la germination et la croissance mycélienne de B. cinerea. La pyrrolnitrine (3-chloro-4-(2'-nitro-3'-chlorophenyI)-pyrrole) est un antibiotique à large 20 spectre d'action isolé pour la première fois dans les années soixante à partir de Pseudomonas pyrrocinia qui inhibe la croissance des champignons en bloquant le système respiratoire, et s'avère efficace pour lutter contre B. cinerea.These experiments are perfectly known and controlled by those skilled in the art and do not require any particular effort to be implemented. The modes of action of biological antagonistic agents of Botrytis are very varied (according to Ajouz, 2009, Ph.D. thesis, Estimation of the resistance potential of Botrytis cinerea to biofungicides). Antibiosis, that is, the production of toxic secondary metabolites for the target pathogen; which can inhibit germination, mycelial growth and / or sporulation of pathogenic agents. Such antibacterial agents have been characterized in strains belonging to various biological control agents (eg Bacillus subtilis, Serratia plymuthica, Pseudomonas fluorescens). Pseudomonas species, for example, produce many antifungal substances: pyoverdine, pyoluteorine, pheazine, pyrrolnitrine, 2,4-diacetylphloroglucinol. The antibiotic gramicidin S secreted by the biological protection agent Brevibacillus brevis inhibits, for example, germination and mycelial growth of B. cinerea. Pyrrolnitrin (3-chloro-4- (2'-nitro-3'-chlorophenyl) -pyrrole) is a broad spectrum antibiotic isolated for the first time in the 1960s from Pseudomonas pyrrocinia which inhibits fungal growth by blocking the respiratory system, and proving effective against B. cinerea.

25 Hyperparasitisme : dans le cas de l'hyperparasitisme, l'antagoniste est un parasite qui reconnaît spécifiquement sa cible, pénètre dans ces cellules et entraîne sa destruction via la colonisation de ses organes. L'observation en microscopie de l'interaction entre Gliocladium roseum et B. cinerea sur tiges de framboisiers a montré que la protection résultait de la colonisation des conidies et des hyphes de l'agent pathogène par l'antagoniste. Ce mode d'action a aussi été décrit chez Gliocladium catenulatum. Enfin, Pythium periplocum s'est révélé être un mycoparasite de B. cinerea. - Compétition nutritive : B. cinerea est très sensible à l'absence de nutriments: il a, par exemple, besoin de nutriments d'origine extérieure 3025401 5 pour assurer la germination de ses spores. Certains microorganismes (bactéries, levures, champignons filamenteux) peuvent ainsi inhiber la germination des conidies de cet agent pathogène via la compétition pour des éléments nutritifs comme l'azote, le carbone, ou des macro- 5 ou microéléments présents dans le milieu. La réduction de la concentration en nutriments dans le milieu conduit généralement à un taux réduit de spores germées de l'agent pathogène et un ralentissement de la croissance mycélienne, réduisant ainsi le nombre d'infections et l'expansion des lésions. La compétition pour les 10 nutriments ou l'espace a été établie pour différentes levures appliquées sur pommes en traitements postrécoltes, comme par exemple Candida spp., Cryptococcus laurentii, Sporobolomyces roseus et Candida oleophila. Le champignon antagoniste Trichoderma harzianum souche T39 inhibe aussi la germination des conidies de B. cinerea en rentrant 15 en compétition pour les nutriments à des stades précoces de l'interaction. De même, plusieurs souches bactériennes et fongiques réduisent la germination des conidies de B. cinerea ce qui réduit la gravité des symptômes de la pourriture sur des feuilles détachées de tomate et de haricot. La bactérie Pseudomonas sp. peut, par exemple, 20 utiliser les acides aminés plus vite que les conidies de B. cinerea, empêchant ces dernières de germer. Interférence avec le pouvoir pathogène : les agents de protection biologique peuvent interférer avec les facteurs du pouvoir pathogène de 25 champignons en inhibant ou dégradant certaines enzymes hydrolytiques (cutinases, pectinases, etc.), ainsi qu'il a été observé chez T. harzianum T39. De même, la bactérie Bacillus circulans, réduit in vitro l'activité pectinolytique de B. cinerea et en conséquence son infection sur vigne. Certains microorganismes (comme Bacillus pumilus 30 et P. fluorescens) peuvent avoir un effet indirect sur la mise en place de la pathogénèse en modifiant par exemple le pH du milieu. Certains microorganismes dégradant l'acide oxalique, produit par B. cinerea lors de son interaction avec la plante, peuvent protéger le concombre, la tomate, la vigne et Arabidopsis thaliana contre des attaques de B. 35 cinerea. 3025401 6 - Modification des propriétés de surface des feuilles de la plante : certaines bactéries possèdent la capacité de changer les caractéristiques de surface des feuilles des plantes. Ceci a pour conséquence de gêner le processus d'attachement et de croissance 5 des agents pathogènes sur les feuilles. - Stimulation des défenses de la plante : La résistance induite chez la plante est un mode d'action de certains agents de protection biologique. La résistance peut être induite localement ou elle peut être systémique.Hyperparasitism: In the case of hyperparasitism, the antagonist is a parasite that specifically recognizes its target, enters these cells and causes its destruction via the colonization of its organs. Microscopic observation of the interaction between Gliocladium roseum and B. cinerea on raspberry stems showed that protection resulted from colonization of the conidia and hyphae of the pathogen by the antagonist. This mode of action has also been described in Gliocladium catenulatum. Finally, Pythium periplocum has been shown to be a mycoparasite of B. cinerea. - Nutritional competition: B. cinerea is very sensitive to the absence of nutrients: it needs, for example, nutrients of external origin 3025401 5 to ensure the germination of its spores. Certain microorganisms (bacteria, yeasts, filamentous fungi) can thus inhibit the germination of conidia of this pathogen through competition for nutrients such as nitrogen, carbon, or macro- or microelements present in the medium. Reducing the nutrient concentration in the medium generally results in a reduced rate of germinated spores of the pathogen and a slowing of mycelial growth, thereby reducing the number of infections and the expansion of the lesions. The competition for 10 nutrients or space was established for different yeasts applied to apples as post-harvest treatments, such as Candida spp., Cryptococcus laurentii, Sporobolomyces roseus and Candida oleophila. The antagonistic fungus Trichoderma harzianum strain T39 also inhibits conidial germination of B. cinerea by competing for nutrients at early stages of the interaction. Similarly, several bacterial and fungal strains reduce conidial germination of B. cinerea, which reduces the severity of rot symptoms on detached leaves of tomato and bean. The bacterium Pseudomonas sp. For example, amino acids may be used faster than B. cinerea conidia, preventing them from germinating. Interference with Pathogenicity: Biological protection agents may interfere with fungal pathogen factors by inhibiting or degrading certain hydrolytic enzymes (cutinases, pectinases, etc.), as has been observed in T. harzianum T39 . Similarly, the bacterium Bacillus circulans reduces in vitro the pectinolytic activity of B. cinerea and consequently its infection on vines. Certain microorganisms (such as Bacillus pumilus and P. fluorescens) may have an indirect effect on the establishment of pathogenesis by, for example, modifying the pH of the medium. Some oxalic acid-degrading microorganisms, produced by B. cinerea during its interaction with the plant, can protect cucumber, tomato, grapevine and Arabidopsis thaliana against attacks of B. cinerea. 3025401 6 - Modification of surface properties of plant leaves: some bacteria have the ability to change the surface characteristics of plant leaves. This has the effect of hindering the process of attachment and growth of pathogens on the leaves. - Stimulation of the defenses of the plant: The resistance induced in the plant is a mode of action of some biological protection agents. Resistance can be locally induced or it can be systemic.

10 L'induction de résistance systémique chez la plante est décrite chez certains Trichoderma, chez Pythium oligandrum et chez des bactéries. Chez le haricot, Pseudomonas aeruginosa induit une résistance systémique contre B. cinerea. Trichoderma harzianum induit une résistance contre B. cinerea chez la tomate, la laitue, le poivron, le 15 haricot et le tabac. Différentes souches bactériennes ont aussi été caractérisées comme agents de la protection efficace contre B. cinerea dans des conditions in vitro (Acinetobacter lwoffii PTA-113 et PTA-152, Bacillus subtilis PTA-271, Pantoea aggiomerans PTA-AF1 et PTAAF2 et Pseudomonas fluorescens PTA-268 et PTA-CT2). Des cellules 20 mortes de certains antagonistes bactériens ou fongiques (T. harzianum par exemple), sont capables d'induire une résistance locale et la réduction de la pourriture grise sur le haricot vert, la tomate, le poivron et le tabac. 25 - Combinaison de mécanismes d'action : dans certains cas, on peut penser que le contrôle biologique est la résultante de plusieurs modes d'action combinés. Le cas le plus étudié concerne le champignon Trichoderma pour lequel différents modes d'action ont été mis en évidence pour une même souche antagoniste associant par exemple 30 hyperparasitisme et antibiose. Trichoderma harzianum T39 combine à la fois la compétition nutritive, l'interférence avec le pouvoir pathogène de B. cinerea et l'induction de résistance de la plante. Le mode d'action de la levure Candida saitoana impliquée dans la protection post-récolte de fruits combine à la fois compétition nutritive et pour l'espace, 35 hyperparasitisme et induction de résistance. Brevibacillus brevis utilise à la fois un antibiotique, la gramicidine S et un biosurfactant comme 3025401 7 mode d'action contre B. cinerea. Dans le cas de la combinaison de modes d'action chez un agent de lutte biologique, le rôle et l'importance précis de chacun des modes d'action dans le contrôle de la maladie n'est souvent pas connu.The induction of systemic resistance in the plant is described in some Trichoderma, Pythium oligandrum and bacteria. In beans, Pseudomonas aeruginosa induces systemic resistance against B. cinerea. Trichoderma harzianum induces resistance against B. cinerea in tomato, lettuce, pepper, beans and tobacco. Various bacterial strains have also been characterized as agents of effective protection against B. cinerea under in vitro conditions (Acinetobacter lwoffii PTA-113 and PTA-152, Bacillus subtilis PTA-271, Pantoea aggiomerans PTA-AF1 and PTAAF2 and Pseudomonas fluorescens PTA -268 and PTA-CT2). Dead cells of certain bacterial or fungal antagonists (T. harzianum, for example) are able to induce local resistance and reduction of gray mold on green beans, tomatoes, peppers and tobacco. Combination of mechanisms of action: In some cases, it may be thought that biological control is the result of several combined modes of action. The most studied case concerns the Trichoderma fungus for which different modes of action have been demonstrated for the same antagonistic strain associating, for example, hyperparasitism and antibiosis. Trichoderma harzianum T39 combines both nutritive competition, interference with the pathogenicity of B. cinerea and resistance induction of the plant. The mode of action of yeast Candida saitoana involved in post-harvest fruit protection combines both nutrient competition and space, 35 hyperparasitism and induction of resistance. Brevibacillus brevis uses both an antibiotic, gramicidin S and a biosurfactant as a mode of action against B. cinerea. In the case of the combination of modes of action in a biological control agent, the precise role and importance of each mode of action in the control of the disease is often not known.

5 Tous les micro-organismes mentionnés ci-dessus sont donc des agents antagonistes d'un pathogène de genre Botrytis, utilisables dans le cadre des méthode et composition décrites ci-après.All the microorganisms mentioned above are thus antagonistic agents of a Botrytis pathogen, which can be used in the context of the method and composition described below.

10 Un nombre élevé d'agents de protection biologique a ainsi été identifié en laboratoire, mais peu de ces agents ont été mis sur le marché. En France, Serenade®, contenant la souche QST 713 de Bacillus subtilis, est homologué pour utilisation contre B. cinerea sur la vigne (catalogue ACTA, 2008; http://e-phy.agriculture.gouv.fr), ainsi que BOTECTOR®, commercialisé par 15 De Sangosse, (Aureobasidium pullulans souche DSM 14940 et Aureobasidium pullulans souche DSM 14941) qui agit par compétition pour espace et compétition pour les nutriments (http://e-phy.agriculture.gouv.fr/spe/2120082-10024466.htm). D'autres produits sont en cours d'homologation, notamment la souche L13 de Microdochium dimerum (CNCM 1-3141) développée par la société Agrauxine 20 sous la dénomination AntiBot®. Cette souche a notamment été décrite par Nicot et al (Potential for including Microdochium dimerum, a biocontrol agent against Botrytis cinerea, into an integrated protection scheme of greenhouse tomatoes. In: Tomate sous abri. Protection intégrée. Agriculture biologique (p. 19-23). Presented at Colloque 25 International, Avignon, FRA (2003-09-17 - 2003-09-19). Paris, FRA : CTIFL), Bardin et al, (Compatibility between biopesticides used to control grey mould, powdery mildew and whitefly on tomato. Biological Control. 2008, 46 (3) : 476-483), Decognet et Nicot (1999. Effects of fungicides on a Fusarium sp. biological control agent of Botrytis cinerea stem infections in the perspective of an integrated 30 management of fungal diseases in greenhouse tomatoes. 1999; In: J.C. Van Lenteren (Editeur), IOBC, International Organisation for Biological and Integrated Control - West Palearctic Regional Section, Dijon (FRA), Integrated control in glasshouses (p. 49-52). Bulletin OILB SROP, 22 (1). Dijon, FRA : OILB/SROP), Nicot et al (Combined effectif microclimate and dose of application on the efficacy 35 of biocontrol agents for the protection of pruning wounds on tomatoes against Botrytis cinerea. In: Influence of A-biotic and biotic factors on biocontrol agents (p. 3025401 8 73-76). Bulletin OILB SROP, 25 (10). Presented at 7. IOBC Working Group Meeting, Kusadasi, TUR (2002-05-22 - 2002-05-25)). Elle a également été citée dans WO 2013/110591.A high number of biological protection agents has thus been identified in the laboratory, but few of these agents have been placed on the market. In France, Serenade®, containing Bacillus subtilis strain QST 713, is registered for use against B. cinerea on the vine (ACTA catalog, 2008, http://e-phy.agriculture.gouv.fr), as well as BOTECTOR ®, marketed by De Sangosse, (Aureobasidium pullulans strain DSM 14940 and Aureobasidium pullulans strain DSM 14941) which acts by competition for space and competition for nutrients (http://e-phy.agriculture.gouv.fr/spe/2120082 -10024466.htm). Other products are in the process of being approved, in particular Microdochium dimerum strain L13 (CNCM 1-3141) developed by the company Agrauxine under the name AntiBot®. In particular, this strain has been described by Nicot et al (Potential for microdochium dimerum, a biocontrol agent against Botrytis cinerea, in an integrated protection scheme of greenhouse tomatoes in: Tomato under cover, integrated protection, organic farming (pp 19-23). Presented at Colloquium 25 International, Avignon, FRA (2003-09-17 - 2003-09-19), Paris, FRA: CTIFL), Bardin et al, (Compatibility between biopesticides and powdery mildew and whitefly on tomato, Biological Control, 2008, 46 (3): 476-483), Decognet and Nicot (1999. Effects of fungicides on Fusarium sp., biological control agent of Botrytis cinerea, infections in the perspective of an integrated management of fungal 1999 In: JC Van Lenteren (Editor), IOBC, International Organization for Biological and Integrated Control - West Palearctic Regional Section, Dijon (FRA), Integrated Control in Glasshouses (pp. 49-52), Bulletin OILB SROP, 22 (1) Dijon, FRA: OILB / SROP), Nicot et al (Combined effective microclimate and dose of application of efficacy of biocontrol agents for the protection of pruning wounds on tomatoes against Botrytis cinerea. In: Influence of A-biotic and biotic factors on biocontrol agents (pp. 3025401 73-76). OILB Bulletin SROP, 25 (10). Presented at 7. IOBC Working Group Meeting, Kusadasi, TUR (2002-05-22 - 2002-05-25)). It has also been cited in WO 2013/110591.

5 L'invention est basée sur la mise en évidence, par la Demanderesse, d'un effet de synergie lorsque l'on utilise, en combinaison, deux agents antagonistes d'un pathogène de genre Botrytis, l'un de ces deux agents étant un Microdochium, en particulier un Microdochium dimerum, et notamment la souche L13. Cet effet est notamment observé lorsque l'on utilise l'un et/ou l'autre agent à une quantité 10 inférieure à la quantité optimale d'utilisation (ou dose d'efficacité maximale) ou la quantité recommandée dans les homologations et autorisations de mise sur le marché. On dit ainsi que les agents sont utilisés à une dose sub-optimale. L'efficacité maximale d'un agent anti Botrytis est obtenue lorsque l'on n'observe pas une amélioration d'efficacité suite à une augmentation de la dose 15 du produit appliqué. La dose d'efficacité maximale est ainsi définie comme étant la dose minimale permettant d'observer l'efficacité maximale. Lorsque l'on observe une diminution de 80% des symptômes de la maladie, on dit que l'agent présente une efficacité de 80%. Ainsi, un agent présentant une efficacité de 100 % est tel que l'on n'observe pas de symptômes, alors qu'il n'y a 20 pas de différence entre les symptômes observés sur les plantes témoins et les plantes traitées par l'agent lorsque l'efficacité de celui-ci est de 0 %. L'efficacité, sur plants entiers de tomate, peut être évaluée en suivant une grille qualitative et quantitative quant à la présence de symptômes du botrytis. La grille de notation qualitative est composé de 2 niveaux : plants atteints (tige 25 principale nécrosée) et plants non atteints par le pathogène (tige principale indemne). La grille de notation quantitative permet de mesurer la longueur totale des nécroses sur la tige principale provoqués par le pathogène. Un suivi de la progression de développement du pathogène sur plusieurs jours permet de réaliser une analyse du type AUDPC (area under the disease progress curve) qui 30 est également couramment utilisée pour les évaluations d'efficacité des agents fongicides. Les données issues de ces notations sont ensuite analysées à l'aide d'un test statistique adapté afin de déterminer si les modalités de traitement ont une influence sur la présence, absence ou la cinétique de progression des symptômes comparées à la modalité témoin.The invention is based on the assertion by the Applicant of a synergistic effect when two antagonists of a Botrytis-like pathogen are used in combination, one of these two agents being a Microdochium, in particular a Microdochium dimerum, and in particular the L13 strain. This effect is particularly observed when one and / or the other agent is used at less than the optimum amount of use (or maximum efficacy dose) or the amount recommended in the approvals and authorizations of marketing. It is said that the agents are used at a suboptimal dose. The maximum effectiveness of an anti Botrytis agent is obtained when an improvement in efficacy is not observed following an increase in the dose of the applied product. The maximum efficacy dose is thus defined as the minimum dose for observing maximal efficacy. When an 80% decrease in the symptoms of the disease is observed, the agent is said to be 80% effective. Thus, an agent exhibiting 100% efficacy is such that no symptoms are observed, whereas there is no difference between the symptoms observed on the control plants and the plants treated with the plant. agent when the effectiveness of it is 0%. The efficacy, on whole tomato plants, can be evaluated by following a qualitative and quantitative grid for the presence of symptoms of botrytis. The qualitative scorecard is composed of 2 levels: affected plants (main stem necrotic) and plants not affected by the pathogen (uninfected main stem). The quantitative scoring grid is used to measure the total length of necrosis on the main stem caused by the pathogen. Monitoring the developmental progress of the pathogen over several days makes it possible to perform an analysis of the AUDPC (area under the disease progress curve) type which is also commonly used for efficacy evaluations of fungicidal agents. The data from these notations are then analyzed using a suitable statistical test to determine whether the treatment modalities have an influence on the presence, absence or kinetics of progression of symptoms compared to the control modality.

35 Une telle méthode de mesure de l'efficacité et des symptômes liés au botrytis est décrite notamment dans Bardin, Fargues, et Nicot (2008. Compatibility 3025401 9 between biopesticides used to control grey mould, powdery mildew and whitefly on tomato. Biological Control 46: 476-483). Des méthodes équivalentes peuvent aisément être mises en oeuvre pour déterminer l'efficacité d'un agent anti-botrytis sur d'autres plantes.Such a method of measuring the efficacy and symptoms related to botrytis is described in particular in Bardin, Fargues, and Nicot (2008. Compatibility 3025401 9 between biopesticides used to control gray mold, powdery mildew and whitefly on tomato. : 476-483). Equivalent methods can easily be used to determine the effectiveness of an anti-botrytis agent on other plants.

5 Une dose sub-optimale d'un agent anti botrytis est une dose pour laquelle on observe une efficacité inférieure à l'efficacité maximale, de façon plus préférée inférieure à 65%, de façon plus préférée, inférieure à 55 % de façon plus préférée inférieure à 50 % de façon plus préférée inférieure à 45 % de façon plus préférée 10 inférieure à 50 % de l'efficacité maximale. Cette dose sub-optimale est donc inférieure à la dose d'efficacité maximale. Ainsi, et comme décrit dans les exemples, la Demanderesse a démontré que l'utilisation, conjointe des deux composants, et notamment à des doses sub- 15 optimales, peut permettre d'obtenir un effet de synergie. En conséquence, il est préféré que les quantités relatives de ces deux composants soient telles qu'elles permettent l'obtention d'un effet supérieur à l'effet additif, en particulier mesuré par la méthode de Colby.A suboptimal dose of an anti-botrytis agent is a dose for which efficacy is less than the maximum efficacy, more preferably less than 65%, more preferably less than 55% more preferably less than 50%, more preferably less than 45%, more preferably less than 50% of the maximum efficiency. This suboptimal dose is therefore less than the maximum effectiveness dose. Thus, and as described in the examples, the Applicant has demonstrated that the joint use of the two components, and especially at suboptimal doses, can make it possible to obtain a synergistic effect. Accordingly, it is preferred that the relative amounts of these two components be such as to provide an effect superior to the additive effect, in particular measured by the Colby method.

20 La méthode décrite dans la présente demande est donc une méthode de lutte contre ou de prévention contre l'infection par un agent pathogène du genre Botrytis chez une plante, comprenant une étape d'administration, à ladite plante, d'au moins un premier composant constitué d'un microorganisme antagoniste dudit pathogène, ledit microorganisme étant un champignon filamenteux du genre 25 Microdochium, et d'un second composant actif (antagoniste) contre ledit pathogène du genre Botrytis. Le premier composant est évidemment différent du second composant. Les deux composants sont appliqués en combinaison à une dose « efficace », c'est-à-dire à une dose pour laquelle on observe une efficacité 30 maximale de la combinaison. Dans un mode de réalisation préféré, le premier composant (microorganisme du genre Microdochium) est utilisé, dans ladite méthode, à une dose sub-optimale. Dans un mode de réalisation préféré, le second composant actif contre le 35 pathogène de genre Botrytis est appliqué à une dose sub-optimale.The method described in the present application is therefore a method of combating or preventing infection with a pathogen of the genus Botrytis in a plant, comprising a step of administering to said plant at least a first component consisting of a microorganism antagonist of said pathogen, said microorganism being a filamentous fungus of the genus Microdochium, and a second active component (antagonist) against said pathogen of the genus Botrytis. The first component is obviously different from the second component. Both components are applied in combination at an "effective" dose, i.e. at a dose for which maximal combination efficacy is observed. In a preferred embodiment, the first component (microorganism of the genus Microdochium) is used in said method at a suboptimal dose. In a preferred embodiment, the second active component against the Botrytis pathogen is applied at a suboptimal dose.

3025401 10 Dans un mode de réalisation préféré, les deux composants sont appliqués à une dose sub-optimale. Dans ces modes de réalisation, il est clair que la dose sub-optimale pour chaque agent doit être déterminée par rapport à la dose efficace pour cet agent 5 utilisé seul. Dans un mode de réalisation particulier, aucun autre composant ayant un effet contre l'agent pathogène du genre Botrytis n'est apporté à la plante dans la mise en oeuvre de la méthode.In a preferred embodiment, both components are applied at a suboptimal dose. In these embodiments, it is clear that the suboptimal dose for each agent should be determined relative to the effective dose for that agent alone. In a particular embodiment, no other component having an effect against the pathogen of the genus Botrytis is provided to the plant in the practice of the method.

10 Dans un mode de réalisation particulier, ladite méthode est une « méthode biologique ». Par « méthode biologique », on entend désigner une méthode dans laquelle des éléments naturels (en particulier des substances naturelles ou microorganismes) sont appliqués sur des cultures, sans que des produits chimiques ou de synthèse (notamment des petites molécules organiques) ne 15 soient appliquées. Par produits chimiques ou de synthèse, on entend notamment désigner tout agent antibiotique ou fongicide, produit par synthèse chimique ou par purification à partir d'un microorganisme, purifié, et formulé pour application sur la plante. Dans ce mode de réalisation, il apparaît donc que le second composant n'est donc pas un antifongique de synthèse antagoniste du pathogène du genre 20 Botrytis et est alors préférentiellement un autre microorganisme antagoniste du pathogène du genre Botrytis. La méthode selon l'invention est particulièrement adaptée lorsque ledit pathogène est Botrytis cinerea, mais peut aussi être mise en oeuvre contre d'autres 25 pathogènes du genre Botrytis, tels que mentionnés ci-dessus. Ledit second composant peut être notamment choisi parmi les microorganismes antagonistes du Botrytis du genre Aureobasidium, Ulocladium, Gliocladium, Saccharomyces, Trichoderma (notamment T. harzanium T39) Bacillus 30 ou Candida. Ainsi, dans un mode de réalisation, le second composant est un champignon filamenteux. Dans un mode de réalisation, ledit second composant est un Aureobasidium pullulans.In a particular embodiment, said method is a "biological method". The term "biological method" is intended to denote a method in which natural elements (in particular natural substances or microorganisms) are applied to crops without chemical or synthetic products (especially small organic molecules) being applied. . The term "chemical or synthetic" is intended to mean any antibiotic or fungicidal agent, produced by chemical synthesis or purification from a microorganism, purified and formulated for application to the plant. In this embodiment, it therefore appears that the second component is not an antagonistic synthetic antifungal of the pathogen of the genus Botrytis and is then preferentially another microorganism antagonist of the pathogen of the genus Botrytis. The method according to the invention is particularly suitable when said pathogen is Botrytis cinerea, but can also be used against other pathogens of the genus Botrytis, as mentioned above. Said second component may be chosen in particular from the Botrytis antagonist microorganisms of the genus Aureobasidium, Ulocladium, Gliocladium, Saccharomyces, Trichoderma (in particular T. harzanium T39) Bacillus or Candida. Thus, in one embodiment, the second component is a filamentous fungus. In one embodiment, said second component is an Aureobasidium pullulans.

35 Dans un mode de réalisation, ledit second composant est un Gliocladium catenulatum.In one embodiment, said second component is a Gliocladium catenulatum.

3025401 11 Dans un mode de réalisation, ledit second composant est un Ulocladium atrum. Dans un autre mode de réalisation, ledit second composant est une levure.In one embodiment, said second component is an Ulocladium atrum. In another embodiment, said second component is a yeast.

5 Dans un autre mode de réalisation, ledit second composant est une bactérie, préférentiellement du type Bacillus subtilis, et notamment la souche QST 713. Dans un autre mode de réalisation, ledit second composant n'est pas la souche QST 713 de Bacillus subtilis. Dans un autre mode de réalisation, ledit second composant est un 10 antifongique de synthèse. Dans un mode de réalisation particulier, cet antifongique de synthèse est le kresoxim-méthyl. Dans un mode de réalisation particulier, cet antifongique de synthèse est l'iprodione.In another embodiment, said second component is a bacterium, preferably of the Bacillus subtilis type, and in particular the QST 713 strain. In another embodiment, said second component is not Bacillus subtilis strain QST 713. In another embodiment, said second component is a synthetic antifungal. In a particular embodiment, this synthetic antifungal is kresoxim-methyl. In a particular embodiment, this synthetic antifungal is iprodione.

15 Dans un mode de réalisation particulier, cet antifongique de synthèse est le boscalid. Dans un mode de réalisation particulier, cet antifongique de synthèse est la fenhexam ide. Dans un mode de réalisation particulier, cet antifongique de synthèse est la 20 trifloxystrobine Dans un mode de réalisation préféré, ledit premier composant est un Microdochium dimerum, et notamment la souche L13 dont le développement réglementaire et la commercialisation sont effectués par la Demanderesse.In a particular embodiment, this synthetic antifungal is boscalid. In a particular embodiment, this synthetic antifungal is fenhexam ide. In a particular embodiment, this synthetic antifungal is trifloxystrobin. In a preferred embodiment, said first component is a Microdochium dimerum, and in particular the L13 strain whose regulatory development and commercialization are carried out by the Applicant.

25 Ainsi que vu plus haut, et ainsi que démontré dans les exemples, la Demanderesse a démontré que l'utilisation, conjointe des deux composants peut permettre d'obtenir un effet de synergie. En conséquence, il est préféré que les quantités relatives de ces deux composants soient telles qu'elles permettant 30 l'obtention d'un effet supérieur à l'effet additif. Selon un mode de réalisation de la présente invention, l'effet obtenu est supérieur ou égal à 10 %, de préférence à 12, plus préférentiellement de supérieure ou égale à 15 % par rapport à l'effet additif attendu pour chacun des 35 deux composants, utilisé seul, ainsi que calculé selon la méthode décrite dans les exemples. Ceci signifie que le facteur de synergie est supérieur ou égale à 1,1, de 3025401 12 préférence supérieur ou égale à 1,12, de façon plus préféré supérieur ou égale à 1,15. Les exemples montrent que l'on peut observer des facteurs de synergie supérieurs ou égaux à 1,5, 2, 5 ou plus.As seen above, and as demonstrated in the examples, the Applicant has demonstrated that the joint use of the two components can achieve a synergistic effect. Accordingly, it is preferred that the relative amounts of these two components be such as to provide an effect superior to the additive effect. According to one embodiment of the present invention, the effect obtained is greater than or equal to 10%, preferably 12, more preferably greater than or equal to 15% relative to the expected additive effect for each of the two components. , used alone, as well as calculated according to the method described in the examples. This means that the synergy factor is greater than or equal to 1.1, preferably greater than or equal to 1.12, more preferably greater than or equal to 1.15. The examples show that synergistic factors greater than or equal to 1.5, 2, 5 or more can be observed.

5 Il est aisé de déterminer ces quantités relatives, par des méthodes aisément utilisables et mises en oeuvre par l'homme du métier. Ainsi, il est possible de préparer quelques préparations de chacun des deux composants (par exemple, quatre ou cinq préparations en faisant varier la quantité de 1 à 10 (la valeur 10 10 étant la valeur usuelle pour laquelle l'efficacité est observée, par exemple la dose du produit homologué, en utilisant le composant sous sa forme matière active pure ou dans sa formulation commerciale), et de tester indépendamment chacune des préparations pour son efficacité contre Botrytis. On peut ensuite tester les mélanges des composants en faisant varier les 15 concentrations, et déterminer l'effet observé. On peut ainsi détecter l'effet de synergie, notamment en se basant sur les méthodes décrites dans les exemples. Ainsi, dans un mode de réalisation usuel, les deux composants sont appliqués chacun à une dose inférieure (en particulier comprise entre 1/10 et 1/1) 20 à la dose du produit homologuée ou généralement décrite comme présentant la meilleure efficacité (c'est-à-dire pour laquelle on n'observe pas d'amélioration de l'efficacité si l'on augmente la dose), sous sa forme matière active pure ou sa formulation commerciale. Ainsi, pour les produits suivants, les doses efficaces ou homologuées sont 25 les suivantes : - Cantus®WG commercialisé par BASF : Boscalid (500 g/kg) (2-chloro-N(4'-chlorobiphényl-2-yl)nicotinamide), de la famille des carboxamides sous groupe de nicotinamid ; dose homologuée : 1,2 kg/ha. - Rovral Aqua flo® SC, commercialisé par BASF : Iprodione (500 g/1) (3- 30 (3,5-dichlorophény1)-Nisopropy1-2,4-dioxoimidazolidine-1-Carboxamide) de la famille chimique des dicarboximides, groupe des hydantdines ; dose homologuée : 2 1/ha - Teldor® WG, commercialisé par Bayer CropScience : Fenhexamid (50%) (2',3'-dichloro-4'-hydroxy-1-méthylcyclohexanecarboxanilide) de 35 la famille chimique des hydroxi-anilides ; dose homologuée : 1,5 kg/ha. 3025401 13 - Stroby® DF, commercialisé par BASF: krésoxim-méthyl (50%) (méthyl(E)-2-méthoxyimino-242-(o-tolyloxyméthyl)phényl]acétate) de la famille des Strobilurines ; dose homologuée 0,2 kg/ha. - Natchez® WG, commercialisé par Bayer CropScience : Trifloxystrobine 5 (50%) (méthyl(E)-méthoxyimino-{(E)-a41-(a,a,a-trifluoro-m- toly1)éthylidène-aminooxy]-o-tolyl}acétate) de la famille des oximinoacétates (strobilurines) ; dose homologuée : 0,125 kg/ha - Serenade® Max, commercialisé par Bayer CropScience : Bacillus subtils QST 713 (156.7 g/kg) ; dose homologuée 2 kg/ha 10 - Botector®, commercialisé par DE SANGOSSE : Aureobasidium pullulans (250 g/kg) ; dose homologuée 0,4 kg/ha Pour d'autres microorganismes, tels que les levures, la dose théorique serait de l'ordre de 2,5 kg/ha. Il s'agit notamment de la dose efficace pour une souche propriétaire de levure (S. cerevisiae) efficace sur la vigne.It is easy to determine these relative amounts by methods that can be easily used and practiced by those skilled in the art. Thus, it is possible to prepare some preparations of each of the two components (for example, four or five preparations by varying the amount from 1 to 10 (the value being the usual value for which the efficiency is observed, for example the dose of the registered product, using the component in its pure active ingredient form or in its commercial formulation), and to independently test each of the preparations for its efficacy against Botrytis, then the component mixtures can be tested by varying the concentrations The synergistic effect can be detected, in particular on the basis of the methods described in the examples, Thus, in a usual embodiment, the two components are each applied at a lower dose ( in particular between 1/10 and 1/1) at the dose of the approved product or generally described as having the best efficacy (these are ie for which no improvement in efficacy is observed when the dose is increased), in its pure active ingredient form or its commercial formulation. Thus, for the following products, the effective or approved doses are as follows: Cantus®WG marketed by BASF: Boscalid (500 g / kg) (2-chloro-N (4'-chlorobiphenyl-2-yl) nicotinamide) from the carboxamide family under the nicotinamide group; registered dose: 1.2 kg / ha. Rovral Aqua flo® SC, sold by BASF: Iprodione (500 g / l) (3- (3,5-dichlorophenyl) -Nisopropyl-2,4-dioxoimidazolidin-1-carboxamide) from the chemical family of dicarboximides, group hydantdines; registered dose: 2 l / ha - Teldor® WG, marketed by Bayer CropScience: Fenhexamid (50%) (2 ', 3'-dichloro-4'-hydroxy-1-methylcyclohexanecarboxanilide) of the chemical family Hydroxi-anilides; registered dose: 1.5 kg / ha. Stroby® DF, marketed by BASF: kresoxim-methyl (50%) (methyl (E) -2-methoxyimino-242- (o-tolyloxymethyl) phenyl] acetate) of the family Strobilurins; approved rate 0.2 kg / ha. Natchez® WG, sold by Bayer CropScience: Trifloxystrobin 5 (50%) (methyl (E) -methoxyimino-{(E) -α41- (α, α, α-trifluoro-m-tolyl) ethylidene-aminooxy] -o -tolyl} acetate) of the family of oximinoacetates (strobilurins); registered dose: 0.125 kg / ha - Serenade® Max, available from Bayer CropScience: Subtle Bacillus QST 713 (156.7 g / kg); registered dose 2 kg / ha 10 - Botector®, marketed by DE SANGOSSE: Aureobasidium pullulans (250 g / kg); Approved dose 0.4 kg / ha For other microorganisms, such as yeasts, the theoretical dose would be of the order of 2.5 kg / ha. These include the effective dose for a proprietary strain of yeast (S. cerevisiae) effective on the vine.

15 Dans le cadre de la méthode ou de la composition décrites ici, on utilise préférentiellement des doses sub-optimales de chacun des composants. Ainsi, on utilise préférentiellement une dose de Microdochium dimerum inférieure ou égale à 50 % (soit 1/2) de la dose d'efficacité maximale (DEM) (qui est, 20 pour la souche L13, 2x1012 spores /ha ; soit 2,5 kg/ha d'une formulation contenant 8x1011 spores/kg), de préférence inférieure ou égale à 40 % (soit de la dose d'efficacité maximale, de préférence inférieure ou égale à 30 % (soit environ 1/3) de la dose d'efficacité maximale, de façon plus préférée inférieure ou égale à 20 % (soit 1/5) de la dose d'efficacité maximale, de façon encore plus préférée inférieure 25 ou égale à 10 % (soit 1/10) de la dose d'efficacité maximale voire inférieure ou égale à 1/12 de la dose d'efficacité maximale. Les exemples montrent ainsi que l'on peut utiliser le premier composant à une dose égale à 1/15 de la dose d'efficacité maximale, soit de l'ordre de 167 g/ha pour une formulation contenant 8x1011 spores/kg.In the context of the method or composition described herein, suboptimal doses of each of the components are preferably used. Thus, it is preferable to use a dose of Microdochium dimerum less than or equal to 50% (ie 1/2) of the maximum efficacy dose (DEM) (which is, for strain L13, 2x1012 spores / ha, ie 2, 5 kg / ha of a formulation containing 8 × 10 11 spores / kg), preferably less than or equal to 40% (ie the maximum efficacy dose, preferably less than or equal to 30% (ie about 1/3) of the maximum efficacy dose, more preferably less than or equal to 20% (ie 1/5) of the maximum efficacy dose, even more preferably less than or equal to 10% (ie 1/10) of the dose of maximum efficacy or even less than or equal to 1/12 of the maximum effective dose, the examples show that the first component can be used at a dose equal to 1/15 of the maximum efficacy dose, is of the order of 167 g / ha for a formulation containing 8x1011 spores / kg.

30 Pour le second composant (antagoniste du Botrytis), la dose sub-optimale que l'on peut utiliser dépend bien entendu de la nature de ce second composant. Ainsi, on peut utiliser les doses suivantes : 3025401 14 - Boscalid (500 g/kg) : inférieure ou égale à 1/10, de préférence 1/50, de préférence 1/100, de préférence 1/200, de préférence 1/500, voire 1/1000 de la dose homologuée (1,2 kg/ha). - Iprodione (500 g/1) : inférieure ou égale à 1/10, de préférence 1/50, de 5 préférence 1/100, de préférence 1/200, de préférence 1/500, voire 1/1000 de la dose homologuée (2 1/ha). - Fenhexamid (50%) : inférieure ou égale à 1/10, de préférence 1/50, de préférence 1/100, de préférence 1/200, de préférence 1/500, voire 1/1000 de la dose homologuée (1,5 kg/ha). 10 - Trifloxystrobine (50%) : inférieure ou égale à 1/2, de préférence 1/5, de préférence 1/10, de préférence 1/20, de préférence 1/50, voire 1/100 de la dose homologuée (0,125 kg/ha). - Krésoxim-méthyl (50%) : inférieure ou égale à 1/10, de préférence 1/50, de préférence 1/100, de préférence 1/200, de préférence 1/500, voire 15 1/1000 de la dose homologuée (0,2 kg/ha). - Bacillus subtilis QST 713 (156.7 g/kg) : on peut utiliser la dose homologuée (2kg/ha) ou une dose inférieure ou égale à 1/2, voir inférieure ou égale à 1/5 de la dose homologuée. - Saccharomyces cerevisiae (souche propriétaire, nommée 1202, 20 présentant une efficacité sur les atteintes de botrytis sur la vigne) (100%) : on peut utiliser la dose envisagée (2,5 kg/ha) ou une dose inférieure ou égale à 1/10, de préférence 1/50, de préférence 1/100, de préférence 1/200, de préférence 1/500, voire 1/1000 de la dose homologuée.For the second component (Botrytis antagonist), the suboptimal dose that can be used depends, of course, on the nature of this second component. Thus, it is possible to use the following doses: Boscalid (500 g / kg): less than or equal to 1/10, preferably 1/50, preferably 1/100, preferably 1/200, preferably 1 / 500, or 1/1000 of the approved dose (1.2 kg / ha). Iprodione (500 g / l): less than or equal to 1/10, preferably 1/50, preferably 1/100, preferably 1/200, preferably 1/500, or even 1/1000 of the approved dose (2 1 / ha). Fenhexamid (50%): less than or equal to 1/10, preferably 1/50, preferably 1/100, preferably 1/200, preferably 1/500 or 1/1000 of the approved dose (1, 5 kg / ha). Trifloxystrobin (50%): less than or equal to 1/2, preferably 1/5, preferably 1/10, preferably 1/20, preferably 1/50 or 1/100 of the approved dose (0.125 kg / ha). Krésoxim-methyl (50%): less than or equal to 1/10, preferably 1/50, preferably 1/100, preferably 1/200, preferably 1/500 or 1/1000 of the approved dose (0.2 kg / ha). - Bacillus subtilis QST 713 (156.7 g / kg): it is possible to use the approved dose (2kg / ha) or a dose less than or equal to 1/2, or less than or equal to 1/5 of the approved dose. - Saccharomyces cerevisiae (proprietary strain, named 1202, 20 with an effective effect on botrytis on grapevine) (100%): we can use the envisaged dose (2.5 kg / ha) or a dose less than or equal to 1 / 10, preferably 1/50, preferably 1/100, preferably 1/200, preferably 1/500 or 1/1000 of the approved dose.

25 Dans un mode de réalisation, les deux composants sont appliqués simultanément, au sein de la même bouillie de traitement. Ainsi, l'opérateur préparera une composition destinée au traitement de la plante, en incorporant simultanément ou successivement au moins un microorganisme Microdochium et 30 un autre agent antagoniste d'un agent pathogène du type Botrytis avec un ou plusieurs excipients. Ces excipients sont connus dans l'art, et sont, en particulier, des poudres ou granules mouillables. Dans un autre mode de réalisation, les deux composants ne sont pas 35 appliqués simultanément, mais sont appliqués séparément (l'un après l'autre). Ces deux applications distinctes doivent toutefois être réalisées à bref délai, c'est-à-dire 3025401 15 dans un intervalle inférieur à 48 heures, de préférence, inférieur à 26 heures, de préférence inférieur à 24 heures, de préférence inférieur à 16h, de façon plus préférée inférieure à 12 heures. En effectuant ces applications distinctes, on peut permettre au premier composant appliqué de commencer son effet avant l'autre 5 composant. Bien entendu, le premier composant à être ajouté peut être le microorganisme Microdochium, et le second composant à être ajouté peut être le second composant listé ci-dessus (l'autre agent antagoniste du pathogène de type Botrytis). Dans un autre mode de réalisation, le premier composant à être ajouté est le second composant listé ci-dessus (l'autre angent antagoniste du pathogène 10 de type Botrytis) et le second composant à être ajouté est le microorganisme de type Microdochium. Dans un mode de réalisation préféré, les deux composants sont appliqués sur ladite plante pendant une période de risque de développement de Botrytis (que 15 ça soit une période de risque de contamination des plantes ou de risque de développement des symptômes après contamination). La période de risque peut être ainsi déterminée pour la vigne. Les contaminations par Botrytis ont lieu à trois périodes clés du 20 développement de la vigne, Fin floraison (stade A) : les spores ne peuvent pas pénétrer dans la baie, mais la contamination peut se faire par les plaies liées à la chute des capuchons floraux. Fermeture de la grappe (stade B) : les spores ne peuvent toujours pas 25 pénétrer dans les baies, mais elles peuvent être enfermées entre les grains de raisin et sur les rafles. Elles constituent un inoculum qui attend des conditions favorables pour se développer. Véraison (stade C) : A partir de la véraison, la réceptivité des baies à cette maladie est forte, la pellicule de la baie se fragilise et des sucres son synthétisés.In one embodiment, both components are applied simultaneously, within the same process slurry. Thus, the operator will prepare a composition for treating the plant, simultaneously or successively incorporating at least one Microdochium microorganism and another Botrytis-like pathogen antagonist with one or more excipients. These excipients are known in the art, and are, in particular, wettable powders or granules. In another embodiment, the two components are not applied simultaneously, but are applied separately (one after the other). These two distinct applications must, however, be carried out at short notice, that is to say in a range of less than 48 hours, preferably less than 26 hours, preferably less than 24 hours, preferably less than 16 hours, more preferably less than 12 hours. By performing these separate applications, the first applied component can be allowed to begin its effect before the other component. Of course, the first component to be added may be the microdochium microorganism, and the second component to be added may be the second component listed above (the other antagonist of the Botrytis pathogen). In another embodiment, the first component to be added is the second component listed above (the other antagonist agent of the Botrytis pathogen) and the second component to be added is the microdochium microorganism. In a preferred embodiment, both components are applied to said plant during a period of risk of developing Botrytis (whether it is a period of risk of plant contamination or risk of developing symptoms after contamination). The period of risk can thus be determined for the vine. Botrytis contaminations take place at three key periods of vine development, late flowering (stage A): spores can not enter the bay, but contamination can be through wounds associated with falling flower hoods . Closure of the cluster (stage B): the spores still can not penetrate the berries, but they can be enclosed between the grapes and on the stalks. They constitute an inoculum that expects favorable conditions to develop. Véraison (stage C): From the veraison, the receptivity of the berries to this disease is strong, the film of the bay is weakened and sugars are synthesized.

30 Les spores du botrytis qui germent pénètrent à l'intérieur de la baie provoquant des réactions de défense enzymatiques et la libération de laccases par le champignon. Une fois que les baies sont réceptives, elles peuvent être contaminées de deux façons : la première, par le mycélium déjà installé sur des débris végétaux, coincés entre deux baies ou enfermés à l'intérieur de la grappe. La seconde voie de 35 contamination des baies passe par les spores produites par le champignon, qui sont ensuite transportées dans la parcelle par la pluie et le vent. La production de 3025401 16 spores, et donc la contamination par cette seconde voie, s'effectue à une température optimale de 15 à 20 °C, en présence d'eau libre ou d'une humidité relative supérieure à 90 % pendant au moins 15 heures. La période de risque de développement de symptômes de botrytis commence donc à partir de la véraison.The germinating spores of the botrytis enter the bay causing enzymatic defense reactions and the release of the fungal laccase. Once the berries are receptive, they can be contaminated in two ways: the first, by the mycelium already installed on plant debris, stuck between two berries or locked inside the cluster. The second way of contamination of the berries is through spores produced by the fungus, which are then transported into the plot by rain and wind. The production of 3025401 16 spores, and therefore the contamination by this second route, is carried out at an optimum temperature of 15 to 20 ° C, in the presence of free water or relative humidity greater than 90% for at least 15 hours. The period of risk of developing botrytis symptoms therefore starts from veraison.

5 La période de risque pour les cultures maraîchères et ornementales est déterminée par les conditions suivantes : Le botrytis apprécie les températures modérées, et présente un développement optimal entre 18 et 20°C, et notamment en présence d'humidité, pendant des périodes pluvieuses, dans une ambiance 10 humide sous serre ou sous châssis. Une mauvaise aération est également un facteur favorisant, par exemple, au sein de cultures en milieu confiné ou en cas de végétation dense. Dans un mode de réalisation préféré, les composants sont appliqués par 15 pulvérisation sur les parties aériennes des plantes. La bouillie de traitement peut être préparée de la façon suivante : Les deux composants, présentés sous forme de granulés dispersibles, des poudres mouillables ou des formulations liquides, sont versées directement, dans la cuve d'un pulvérisateur à demi remplie d'eau, le système d'agitation étant en 20 marche pour obtenir une bonne mise en suspension. Ensuite on complète par ajout d'eau dans la cuve en ajoutant ce qui est nécessaire à l'application, tout en maintenant l'agitation. La bouillie peut s'utiliser aux volumes/ha habituellement appliqués sur les cultures (100 à 1000 1/ha).5 The risk period for vegetable and ornamental crops is determined by the following conditions: Botrytis appreciates moderate temperatures, and has an optimal development between 18 and 20 ° C, especially in the presence of moisture, during rainy periods, in a humid atmosphere under a greenhouse or under a frame. Poor aeration is also a factor favoring, for example, in cultures in a confined environment or in the case of dense vegetation. In a preferred embodiment, the components are sprayed onto the aerial parts of the plants. The treatment slurry can be prepared in the following way: The two components, presented in the form of dispersible granules, wettable powders or liquid formulations, are poured directly into the tank of a sprayer half filled with water. agitation system being in operation to obtain good suspension. Then it is completed by adding water to the tank by adding what is necessary for the application, while maintaining agitation. The slurry can be used at the volumes / ha usually applied to crops (100 to 1000 1 / ha).

25 La méthode peut être mise en oeuvre sur toute plante susceptible d'être infectée par un Botrytis, et notamment Botrytis cinerea. Ainsi que vu plus haut, cet agent pathogène a un large spectre d'hôtes. La méthode est particulièrement adaptée pour les plantes cultivées, et notamment lorsque lesdites plantes sont 30 choisies dans le groupe constitué des tomate, laitue, fraise, melon, vigne (produisant raisin de table ou raisin de vinification), et arbres fruitiers produisant des fruits à noyau (cerises, pêches abricots, brugnons et nectarines, prunes). Elle peut aussi être appliquée en horticulture.The method can be carried out on any plant susceptible to infection by a Botrytis, and in particular Botrytis cinerea. As seen above, this pathogen has a broad spectrum of hosts. The method is particularly suitable for cultivated plants, and especially when said plants are selected from the group consisting of tomato, lettuce, strawberry, melon, grapevine (producing table grapes or wine grapes), and fruit trees producing fruits with kernel (cherries, apricot peaches, brugnons and nectarines, plums). It can also be applied in horticulture.

35 L'invention se rapporte également à une composition phytopharmaceutique contenant, en tant qu'agents actifs, un premier composant constitué d'un 3025401 17 microorganisme antagoniste d'un pathogène du genre Botrytis, ledit microorganisme étant un champignon filamenteux du genre Microdochium, et un second composant actif contre ledit pathogène, les deux agents actifs étant différents.The invention also relates to a phytopharmaceutical composition containing, as active agents, a first component consisting of a microorganism antagonist of a pathogen of the genus Botrytis, said microorganism being a filamentous fungus of the genus Microdochium, and a second active component against said pathogen, the two active agents being different.

5 Dans un mode de réalisation préféré, le premier composant, le second composant ou les deux composants sont présents, dans cette composition, à une dose ou concentration sub-optimale. De préférence cette composition ne contient que ces deux composants en tant qu'agents actifs, c'est-à-dire qu'il n'y a pas d'autres agents actifs contre 10 Botrytis dans la composition. Dans un autre mode de réalisation, cette composition peut contenir d'autres agents actifs contre Botrytis. Dans un mode de réalisation particulier toutefois, cette composition ne contient aucune molécule de synthèse (c'est-à-dire synthétisée per se en 15 laboratoire, ou isolée en laboratoire à partir d'un agent microbien). La composition est alors dite « biologique » ou « de biocontrôle ». Elle peut ainsi contenir un ou plusieurs autres agents de biocontrôle tels que décrits plus haut, et notamment un ou plusieurs autres microorganismes (levure, champignon filamenteux, ou bactérie).In a preferred embodiment, the first component, the second component or both components are present in this composition at a suboptimal dose or concentration. Preferably this composition contains only these two components as active agents, i.e. there are no other active agents against Botrytis in the composition. In another embodiment, this composition may contain other active agents against Botrytis. In a particular embodiment, however, this composition does not contain any synthetic molecule (that is, synthesized per se in the laboratory, or isolated in the laboratory from a microbial agent). The composition is then called "biological" or "biocontrol". It may thus contain one or more other biocontrol agents as described above, and in particular one or more other microorganisms (yeast, filamentous fungus, or bacteria).

20 Cette composition peut toutefois contenir des adjuvants ou excipients (en particulier des poudres ou granules mouillables). Cette composition est destinée à la mise en oeuvre de la méthode décrite ci-dessus. Elle est donc préférentiellement adaptée à l'administration par pulvérisation sur les parties aériennes des plantes.This composition may however contain adjuvants or excipients (in particular wettable powders or granules). This composition is intended for the implementation of the method described above. It is therefore preferably suitable for spray administration on the aerial parts of plants.

25 Par ailleurs, les quantités du premier composant (microorganisme antagoniste d'un pathogène du genre Botrytis, ledit microorganisme étant un champignon filamenteux du genre Microdochium, en particulier un Microdochium dimerum), et du second composant actif contre ledit pathogène sont choisies pour permettre un effet supérieur à l'effet additif. Les quantités relatives de chaque 30 agent permettent ainsi d'obtenir une synergie d'efficacité. On a vu plus haut comment déterminer ces quantités relatives, ainsi que les quantités à utiliser, dans cette composition. Elles sont également choisies de telle sorte que l'une ou l'autre ou les deux sont inférieures aux quantités que l'on utiliserait pour les agents seuls. On a listé plus haut différents agents antagonistes d'un pathogène du genre 35 Botrytis utilisables dans cette composition, même si l'on préfère qu'il soit un antifongique de synthèse, une bactérie (notamment Bacillus subtilis) ou une levure.Furthermore, the amounts of the first component (microorganism antagonist of a pathogen of the genus Botrytis, said microorganism being a filamentous fungus of the genus Microdochium, in particular a Microdochium dimerum), and the second component active against said pathogen are chosen to allow a effect superior to the additive effect. The relative amounts of each agent thus make it possible to obtain a synergy of effectiveness. We have seen above how to determine these relative quantities, as well as the quantities to be used, in this composition. They are also chosen so that one or the other or both are smaller than the quantities that would be used for the agents alone. Various Botrytis pathogen antagonists usable in this composition have been listed above, although it is preferred that it be a synthetic antifungal, a bacterium (especially Bacillus subtilis) or a yeast.

3025401 18 Dans cette composition, ledit Microdochium et ledit second agent peuvent être mélangés dans un même container ou placés dans deux containers séparés, le mélange étant effectué lors de l'administration (pulvérisation conjointe des deux composants).In this composition, said microdochium and said second agent may be mixed in the same container or placed in two separate containers, the mixing being carried out during the administration (joint spraying of the two components).

5 On a également décrit plus haut le procédé de fabrication d'une telle composition, qui comprend l'incorporation simultanée ou successive d'au moins un Microdochium et d'un autre agent antagoniste d'un agent pathogène du type Botrytis avec un ou plusieurs excipients.The method of making such a composition, which comprises the simultaneous or sequential incorporation of at least one Microdochium and another antagonist agent of a Botrytis pathogen with one or more, has also been described above. excipients.

10 Les exemples montrent donc bien que l'on peut utiliser un microorganisme du genre Microdochium, antagoniste d'un pathogène du genre Botrytis, et en particulier un Microdochium dimerum pour restreindre les doses d'un autre agent antagoniste de ce pathogène, et/ou préparer une composition destinée à la lutte contre, ou au traitement du Botrytis, et/ou à potentialiser l'effet de cet autre agent 15 antagoniste de ce pathogène, notamment en cas d'utilisation à des doses suboptimale. Cette utilisation peut être effectuée dans le cadre d'une méthode de traitement d'une plante par ledit autre agent (ajout de Microdochium dimerum et diminution de la dose de cet autre agent, en maintenant l'activité observée avec la dose de cet autre agent lorsqu'il est utilisé seul), ou dans le cadre d'une 20 préparation d'une composition phytopharmaceutique (diminution de la quantité de cet autre agent dans la composition, dans le but de traiter le même nombre de plantes ou la même surface). On envisage donc l'utilisation d'un microorganisme du genre Microdochium en combinaison avec un autre composé antagoniste d'un agent pathogène du 25 genre Botrytis pour augmenter l'efficacité de lutte ou de traitement contre ledit agent pathogène du genre Botrytis. DESCRIPTION DES FIGURES 30 Figure 1 : La Figure 1 montre des exemples de synergie entre Microdochium dimerum L13 et autres pesticides pour le contrôle de Botrytis cinerea. Colonne 1 : produit antagoniste utilisé ; colonne 2 : Matière active ; colonne 3 : Dose homologuée (dose d'efficacité maximale) ; colonne 4 : Efficacité mesurée du pesticide (dose sub optimale appliquée) ; colonne 5 : Efficacité mesurée de 35 Microdochium dimerum L13 (dose sub-optimale appliquée) ; colonne 6 : Efficacité attendue du mélange aux doses sub-optimales (formule de Colby) ; colonne 7 : 3025401 19 Efficacité mesurée du mélange aux doses sub-optimales ; colonne 8 : Facteur de synergie (SF) Figure 2 : La Figure 2 exemplifie l'effet de synergie observé. A. Témoin de contrôle non traité ; B. M. dimerum L13 (1/15 DEM) ; C. Cantus® (Boscalid) (1/1000 DEM) ; 5 D. M. dimerum L13 (1/15 DEM) et Cantus® (1/1000 DEM). Figure 3 : La Figure 3 exemplifie l'effet de synergie observé. A. Témoin de contrôle non traité ; B. M. dimerum L13 (1/15 DEM) ; C. Rovral Aqua flo® (Iprodione) (1/1000 DEM) ; D. M. dimerum L13 (1/15 DEM) et Rovral Aqua flo® (1/1000 DEM).The examples therefore clearly show that a microorganism of the genus Microdochium, antagonist of a pathogen of the genus Botrytis, and in particular a Microdochium dimerum, may be used to restrict the doses of another antagonist agent of this pathogen, and / or to prepare a composition for the control or treatment of Botrytis, and / or to potentiate the effect of this other antagonist agent of this pathogen, especially when used at suboptimal doses. This use can be carried out as part of a method of treating a plant with said other agent (adding Microdochium dimerum and reducing the dose of this other agent, while maintaining the observed activity with the dose of this other agent when used alone), or in the context of a preparation of a plant protection composition (decrease in the amount of this other agent in the composition, for the purpose of treating the same number of plants or the same surface) . The use of a microorganism of the genus Microdochium in combination with another Botrytis pathogen antagonist compound is therefore contemplated to increase control or treatment efficacy against said Botrytis pathogen. DESCRIPTION OF THE FIGURES FIG. 1: FIG. 1 shows examples of synergy between Microdochium dimerum L13 and other pesticides for the control of Botrytis cinerea. Column 1: antagonist product used; column 2: Active ingredient; column 3: Registered dose (maximum effective dose); column 4: Measured efficacy of the pesticide (suboptimal applied dose); Column 5: Measured efficacy of Microdochium dimerum L13 (suboptimal applied dose); column 6: Expected efficacy of the mixture at suboptimal doses (Colby formula); column 7: 3025401 19 Measured efficacy of the mixture at suboptimal doses; Column 8: Synergistic Factor (SF) Figure 2: Figure 2 exemplifies the observed synergistic effect. A. Untreated control indicator; B. M. dimerum L13 (1/15 DEM); C. Cantus® (Boscalid) (DEM 1/1000); D. M. dimerum L13 (1/15 DEM) and Cantus® (1/1000 DEM). Figure 3: Figure 3 exemplifies the observed synergistic effect. A. Untreated control indicator; B. M. dimerum L13 (1/15 DEM); C. Rovral Aqua flo® (Iprodione) (DEM 1/1000); D. M. dimerum L13 (1/15 DEM) and Rovral Aqua flo® (1/1000 DEM).

10 Figure 4 : La Figure 4 exemplifie l'effet de synergie observé. A. Témoin de contrôle non traité ; B. M. dimerum L13 (1/15 DEM) ; C. Stroby® (krésoxim-méthyl) (1/1000 DEM) ; D. M. dimerum L13 (1/15 DEM) et Stroby® (1/1000 DEM). Figure 5 : La Figure 5 exemplifie l'effet de synergie observé. A. Témoin de contrôle non traité ; B. M. dimerum L13 (1/15 DEM) ; C. Teldor® (Fenhexamid) (1/1000 15 DEM) ; D. M. dimerum L13 (1/15 DEM) et Teldor® (1/1000 DEM). Figure 6 : La Figure 6 exemplifie l'effet de synergie observé. A. Témoin de contrôle non traité ; B. M. dimerum L13 (1/15 DEM) ; C. S. cerevisiae (souche propriétaire 12012) (2,5 kg/ha) ; D. M. dimerum L13 (1/15 DEM) et S. cerevisiae (2,5 kg/ha).Figure 4: Figure 4 exemplifies the observed synergistic effect. A. Untreated control indicator; B. M. dimerum L13 (1/15 DEM); C. Stroby® (kresoxim-methyl) (1/1000 DEM); D. M. dimerum L13 (1/15 DEM) and Stroby® (1/1000 DEM). Figure 5: Figure 5 exemplifies the observed synergistic effect. A. Untreated control indicator; B. M. dimerum L13 (1/15 DEM); C. Teldor® (Fenhexamid) (1/1000 DEM); D. M. dimerum L13 (1/15 DEM) and Teldor® (1/1000 DEM). Figure 6: Figure 6 exemplifies the observed synergistic effect. A. Untreated control indicator; B. M. dimerum L13 (1/15 DEM); C. S. cerevisiae (proprietary strain 12012) (2.5 kg / ha); D. M. dimerum L13 (1/15 DEM) and S. cerevisiae (2.5 kg / ha).

20 EXEMPLES Modes opératoires et principes Définition Synergie : Efficacité inattendue, d'une association de substances actives, supérieure à la somme des activités des substances actives appliquées 25 séparément, et ceci clairement différencié d'un effet d'additivité qui est défini comme le niveau attendu d'efficacité de l'association des substances actives. Méthode de démonstration de l'existence d'une synergie entre deux substances actives ou produits.EXAMPLES Modes of operation and principles Definition Synergy: Unexpected effectiveness of a combination of active substances, greater than the sum of the activities of the active substances applied separately, and this clearly differentiated from an additivity effect which is defined as the level expected effectiveness of the combination of active substances. Demonstration method of the existence of a synergy between two active substances or products.

30 La méthode mathématique retenue pour identifier les synergies d'efficacité de deux produits phytopharmaceutiques utilisés ensemble est dérivée de la formule de Colby (Gowing, 1960 (Comments on tests of herbicide mixtures, Weeds 8:379-391); Colby, 1967 (Calculating synergistic and antagonistic responses of herbicide combinations. Weeds 15 (1967), pp. 20-22) ; Soller et Wedemeir, 2012 35 (Prediction of synergistic multi-compound mixtures - A generalized Colby approach, Crop Protection, Vol 42, 2012, 180-185).The mathematical method used to identify the efficacy synergies of two plant protection products used together is derived from the Colby formula (Gowing, 1960 (Comments on tests of herbicide mixtures, Weeds 8: 379-391), Colby, 1967 (Calculating synergistic and antagonistic responses of herbicide combinations Weeds 15 (1967), pp. 20-22) Soller and Wedemeir, 2012 35 (Prediction of synergistic multi-compound mixtures - A generalized Colby approach, Crop Protection, Vol 42, 2012, 180 -185).

3025401 20 Selon cette méthode, les efficacités de produits phytopharmaceutiques appliqués séparément sont utilisées pour calculer l'efficacité attendue des produits utilisés en combinaison.According to this method, the efficiencies of separately applied plant protection products are used to calculate the expected efficacy of the products used in combination.

5 L'efficacité attendue d'une combinaison de deux produits est calculée de la façon suivante : P1 et P2 sont les efficacités observées de deux produits à une certaine dose d'application (en %), l'efficacité étant la réduction de symptômes provoqués par un pathogène par rapport à un témoin non traité, l'efficacité attendue E de la 10 combinaison des deux produits, en absence d'interaction entre eux, est donnée par la formule Eattendue = P1 + P2 Où P1 correspond au niveau d'efficacité de protection du produit 1 évalué individuellement et P2 correspond au niveau d'efficacité de protection du produit 2 15 évalué individuellement. Selon cette méthode, l'efficacité attendue d'une combinaison de deux produits ne correspond pas à la simple somme des efficacités individuelles, mais à une valeur inférieure. Le calcul de Colby repose sur la notion qu'une simple addition néglige la possibilité qu'une certaine proportion du pathogène soit 20 contrôlée de façon simultanée par les deux produits du mélange. Ce problème est résolu par la soustraction P1P2/100. Eattendue Où SF est le Facteur de Synergie ; Emesurée est l'efficacité mesurée de l'association de substances actives et Eattendue est l'efficacité attendue de l'association.The expected efficacy of a combination of two products is calculated as follows: P1 and P2 are the observed efficiencies of two products at a certain application dose (in%), the effectiveness being the reduction of symptoms caused by a pathogen relative to an untreated control, the expected efficiency E of the combination of the two products, in the absence of interaction between them, is given by the formula E = P1 + P2 Where P1 corresponds to the level of effectiveness of protection of the product 1 evaluated individually and P2 corresponds to the protection effectiveness level of the product 2 evaluated individually. According to this method, the expected efficiency of a combination of two products does not correspond to the simple sum of the individual efficiencies, but to a lower value. Colby's calculation is based on the notion that a simple addition neglects the possibility that a certain proportion of the pathogen is controlled simultaneously by the two products of the mixture. This problem is solved by subtraction P1P2 / 100. Expected Where SF is the Synergy Factor; Emesured is the measured efficacy of the combination of active substances and Expected is the expected efficiency of the association.

30 Le Facteur de Synergie SF est interprété de la façon suivante : Un ratio SF supérieur ou inférieur à 1 indique une déviation de l'hypothèse d'action indépendante des produits, ce qui démontre que biologiquement les deux produits agissent ensemble. Si SF>1 l'interaction est synergique, si SF<1 131132 100 Afin de déterminer la présence de synergies, le ratio SF (synergy factor) entre l'efficacité observée de la combinaison (Emeasurée) et l'efficacité attendue 25 (Eattendue) de la combinaison est calculé de la façon suivante : SF = Emesurée 3025401 21 l'interaction est antagoniste. Un ratio égal à 1 indique une absence d'interaction entre les produits. En bref : SF > 1 : Présence de Synergie 5 SF=1 : Présence d'Additivité SF<1 : Présence d'une interaction antagoniste (efficacité moindre à l'attendu) Mode opératoire pour déterminer l'efficacité d'un produit seul ou d'une 10 combinaison Les exemples présentés ci-dessous ont été menés utilisant des plants entiers de tomate cultivés sous conditions contrôlées favorables au développement du Botrytis cinerea. Les efficacités observées ont été mesurées par rapport à un ensemble de plants témoins n'ayant reçu aucun traitement de protection 15 antifongique. Mode opératoire des essais in planta : Chaque modalité de traitement est composé de 5 à 10 plants entiers de tomate au stade 4 à 5 feuilles. 3 feuilles de chaque un des plants sont sectionnées 20 à l'aide de ciseaux, cet effeuillage est effectué de façon similaire à l'effeuillage réalisé lors de la production commerciale de tomates. Une goutte de 5pL de suspension de spores de Botrytis cinerea calibré à 2x106 ou 8x106 spores par mL est déposée sur chaque pétiole des feuilles 25 sectionnées (soit 10000 ou 80000 spores par pétiole). Ensuite les différents traitements sont appliqués sur les pétioles des feuilles sectionnées, tandis que les plants témoins de contrôle sont traités avec de l'eau pure.The Synergy SF Factor is interpreted as follows: A SF ratio greater than or less than 1 indicates a deviation from the product-independent action hypothesis, demonstrating that the two products biologically work together. If SF> 1 the interaction is synergistic, if SF <1 131132 100 In order to determine the presence of synergies, the ratio SF (synergy factor) between the observed efficiency of the combination (Emeasurée) and the expected efficiency 25 (Expected ) of the combination is calculated as follows: SF = measured 3025401 21 the interaction is antagonistic. A ratio of 1 indicates no interaction between products. In short: SF> 1: Presence of Synergy 5 SF = 1: Presence of SF Additivity <1: Presence of an antagonistic interaction (less efficiency than expected) Procedure to determine the effectiveness of a single product or The examples presented below were conducted using whole tomato plants grown under controlled conditions favorable to the development of Botrytis cinerea. The observed efficiencies were measured against a set of control plants that received no antifungal protection treatment. In planta test procedure: Each treatment modality consists of 5 to 10 whole tomato plants at the 4 to 5 leaf stage. 3 leaves of each one of the plants are sectioned with scissors, this stripping is performed similarly to the stripping performed during the commercial production of tomatoes. A drop of 5 μl of Botrytis cinerea spore suspension calibrated at 2 × 10 6 or 8 × 10 6 spores per ml is deposited on each petiole of the severed leaves (either 10,000 or 80,000 spores per petiole). Then the different treatments are applied to the petioles of the severed leaves, while control control plants are treated with pure water.

30 Préparation de la solution de traitement et traitement La bouillie de traitement est préparée de la façon suivante : Chaque composant (ou les deux composants), présenté sous forme de granulés dispersibles, des poudres mouillables ou des formulations liquides, est 35 versée directement, dans la cuve d'un pulvérisateur à demi remplie d'eau, le système d'agitation étant en marche pour obtenir une bonne mise en suspension.Preparation of the treatment solution and treatment The treatment slurry is prepared in the following manner: Each component (or both components), in the form of dispersible granules, wettable powders or liquid formulations, is poured directly into the the tank of a sprayer half filled with water, the stirring system being operated to obtain a good suspension.

3025401 22 Ensuite on ajoute le volume d'eau nécessaire à l'application dans la cuve, tout en maintenant l'agitation. La bouillie peut s'utiliser aux volumes/ha habituellement appliqués sur les cultures (100 à 1000 1/ha). Dans les exemples, on a utilisé une bouillie équivalente 5 à 100L/ha. On laisse incuber l'ensemble de plants à 19°/20°C, avec une humidité relative de l'air de l'ordre de 99/100% et une photopériode de 16 heures par jour.Thereafter, the volume of water required for application in the tank is added while maintaining agitation. The slurry can be used at the volumes / ha usually applied to crops (100 to 1000 1 / ha). In the examples, an equivalent slurry of 100L / ha was used. The set of plants is incubated at 19 ° / 20 ° C., with a relative humidity of the order of 99/100% and a photoperiod of 16 hours per day.

10 Évaluation de l'efficacité Après une semaine d'incubation chaque plant est noté suivant une grille qualitative et quantitative quant à la présence de symptômes de Botritys cinerea. La grille de notation qualitative est composé de 2 niveaux : plants atteints 15 (tige principale effondrée) et plants non atteints par le pathogène (tige principale indemne) La grille de notation quantitative permet de mesurer la longueur totale des nécroses sur la tige principale provoqués par le pathogène.10 Efficacy Evaluation After one week of incubation, each plant is scored according to a qualitative and quantitative grid for the presence of Botritys cinerea symptoms. The qualitative scoring grid is composed of 2 levels: affected plants 15 (main stem collapsed) and plants not affected by the pathogen (main stem unscathed) The quantitative scoring grid makes it possible to measure the total length of the necroses on the main stem caused by the pathogen.

20 Les données issues de ces notations sont ensuite analysées à l'aide d'un test statistique adapté afin de déterminer si les modalités de traitement ont une influence sur la présence ou absence des symptômes comparées à la modalité témoin.The data resulting from these notations are then analyzed using a suitable statistical test to determine whether the treatment modalities have an influence on the presence or absence of the symptoms compared to the control modality.

25 En raison de la haute efficacité contre Botrytis cinerea des produits antagonistes testés, les recherches de synergies sont effectuées à des doses suboptimales d'application, ce qui permet un contrôle partielle des symptômes de la maladie et rend les données issues des notations aptes pour une utilisation au sein de la Formule de Colby.Because of the high efficacy against Botrytis cinerea of the antagonist products tested, synergies are sought at suboptimal application levels, which allows partial control of the disease symptoms and makes the data from the notations suitable for use within the Colby Formula.

30 La Figure 1 montre des exemples de synergie entre Microdochium dimerum L13 et autres pesticides pour le contrôle de Botrytis cinerea. Chaque ligne du tableau représente les résultats obtenus pour une expérience indépendante. On observe que les efficacités mesurées peuvent varier 35 aux mêmes doses d'application du produit.Figure 1 shows examples of synergy between Microdochium dimerum L13 and other pesticides for control of Botrytis cinerea. Each row of the table represents the results obtained for an independent experiment. It is observed that the measured efficiencies may vary at the same application rates of the product.

Claims (3)

REVENDICATIONS1. Méthode de lutte contre ou de prévention contre l'infection par un agent pathogène du genre Botrytis chez une plante, comprenant une étape d'administration, à ladite plante, d'au moins un premier composant constitué d'un microorganisme antagoniste dudit pathogène, ledit microorganisme étant un champignon filamenteux du genre Microdochium, et d'un second composant actif contre ledit pathogène du genre Botrytis, caractérisée en ce qu'au moins l'un des deux composants est appliqué à une dose suboptimale. Méthode selon la revendication 1, caractérisée en ce que ledit pathogène est Botrytis cinerea. Méthode selon la revendication 1 ou 2, caractérisée en ce que ledit second composant est choisi dans le groupe constitué des levures, antifongiques de synthèse, bactéries, et des autres microorganismes de biocontrôle antagonistes dudit pathogène du genre Botrytis. Méthode selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ledit second composant est une levure, notamment de type Candida albicans ou Saccharomyces cerevisiae. Méthode selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ledit second composant est une bactérie de type Bacillus subtilis. Méthode selon l'une des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que ledit second composant est un antifongique de synthèse, choisi dans le groupe constitué des kresoxim-méthyl, iprodione, boscalid, fenhexamide et trifloxystrobine. Méthode selon l'une des revendications 1 à 5, caractérisée en qu'il s'agit d'une méthode biologique, dans laquelle aucun autre agent actif de synthèse contre Botrytis n'est apporté à la plante. 10REVENDICATIONS1. A method of combating or preventing infection with a pathogen of the genus Botrytis in a plant, comprising a step of administering to said plant at least one first component consisting of a microorganism antagonizing said pathogen, said microorganism being a filamentous fungus of the genus Microdochium, and a second component active against said pathogen of the genus Botrytis, characterized in that at least one of the two components is applied at a suboptimal dose. Method according to claim 1, characterized in that said pathogen is Botrytis cinerea. A method according to claim 1 or 2, characterized in that said second component is selected from the group consisting of yeasts, synthetic antifungals, bacteria, and other biocontrol microorganisms antagonistic to said pathogen of the genus Botrytis. Method according to one of claims 1 to 3, characterized in that said second component is a yeast, in particular of the Candida albicans or Saccharomyces cerevisiae type. Method according to one of claims 1 to 3, characterized in that said second component is a Bacillus subtilis bacterium. Method according to one of claims 1 to 3, characterized in that said second component is a synthetic antifungal selected from the group consisting of kresoxim-methyl, iprodione, boscalid, fenhexamide and trifloxystrobin. Method according to one of claims 1 to 5, characterized in that it is a biological method, in which no other active synthetic agent against Botrytis is provided to the plant. 10 2. 152. 15 3. 204. 5. 25 6. 30 7. 35 3025401 24 8. 5 9. 10. 11. 12. 13. 14. 30 15. 35 Méthode selon l'une des revendications 1 à 7, caractérisée en ce que les deux composants sont appliqués en quantités relatives permettant l'obtention d'un effet supérieur à l'effet additif. Méthode selon l'une des revendications 1 à 8, caractérisée en ce que les deux composants sont appliqués chacun à une dose sub-optimale . Méthode selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisée en ce que les deux composants sont appliqués simultanément, au sein de la même bouillie de traitement. Méthode selon l'une des revendications 1 à 9, caractérisée en ce que les deux composants sont appliqués l'un après l'autre, dans un intervalle inférieur à 48 heures. Méthode selon l'une des revendications 1 à 11, caractérisée en ce que les deux composants sont appliqués sur ladite plante pendant une période de risque de développement de Botrytis. Méthode selon l'une des revendications 1 à 12, caractérisée en ce que les composants sont appliqués par pulvérisation sur les parties aériennes des plantes. Méthode selon l'une des revendications 1 à 13, caractérisée en ce que lesdites plantes sont choisies dans le groupe constitué des tomate, laitue, fraise, melon, vigne (produisant raisin de table ou raisin de vinification), et arbres fruitiers produisant des fruits à noyau (cerises, pêches abricots, brugnons et nectarines, prunes). Composition phytopharmaceutique contenant, en tant qu'agents actifs, un premier composant constitué d'un microorganisme antagoniste dudit pathogène, ledit microorganisme étant un champignon filamenteux du genre Microdochium, et un second composant actif contre ledit pathogène du genre Botrytis, dans laquelle les quantités des deux composants sont choisies pour permettre un effet supérieur à l'effet additif. 16. Compositions selon la revendication 15 , caractérisée en ce que ledit second composant est choisi dans le groupe constitué des levures, antifongiques de 3025401 25 synthèse, bactéries, et des autres microorganismes de biocontrôle antagonistes dudit pathogène du genre Botrytis. 17. Composition selon la revendication 15 ou 16, caractérisée en ce que ledit 5 premier composant et ledit second composant sont mélangés dans un même container ou placés dans deux containers séparés. 18. Composition selon l'une quelconque des revendications 15 à 17, caractérisée en ce qu'elle contient également des excipients tels que des 10 poudres ou granules mouillables. 19. Procédé de fabrication d'une composition selon l'une quelconque des revendications 15 à 18 comprenant l'incorporation simultanément ou successivement d'au moins un premier composant constitué d'un 15 microorganisme antagoniste dudit pathogène, ledit microorganisme étant un champignon filamenteux du genre Microdochium, et d'un second composant actif contre ledit pathogène du genre Botrytis. 20. Utilisation d'un microorganisme du genre Microdochium pour diminuer la 20 dose d'un composé antagoniste d'un agent pathogène du genre Botrytis. 21. Utilisation d'un microorganisme du genre Microdochium en combinaison avec un autre composé antagoniste d'un agent pathogène du genre Botrytis pour augmenter l'efficacité de lutte ou de traitement contre ledit agent 25 pathogène du genre Botrytis.3. 204. 5. 25 6. 30 7. 35 3025401 24 8. 5 9. 10. 11. 12. 13. 14. 30 15. 35 Method according to one of claims 1 to 7, characterized in that the two components are applied in relative amounts to obtain an effect greater than the additive effect. Method according to one of claims 1 to 8, characterized in that the two components are each applied at a suboptimal dose. Method according to one of claims 1 to 9, characterized in that the two components are applied simultaneously, within the same treatment slurry. Method according to one of Claims 1 to 9, characterized in that the two components are applied one after the other in a time interval of less than 48 hours. Method according to one of claims 1 to 11, characterized in that the two components are applied to said plant during a period of risk of Botrytis development. Method according to one of claims 1 to 12, characterized in that the components are applied by spraying on the aerial parts of the plants. Method according to one of claims 1 to 13, characterized in that said plants are selected from the group consisting of tomato, lettuce, strawberry, melon, vine (producing table grape or wine grape), and fruit trees producing fruit with kernel (cherries, peaches apricots, brugnons and nectarines, plums). A phytopharmaceutical composition containing, as active agents, a first component consisting of a microorganism antagonizing said pathogen, said microorganism being a filamentous fungus of the genus Microdochium, and a second component active against said pathogen of the genus Botrytis, wherein the amounts of the two components are chosen to allow an effect superior to the additive effect. 16. Compositions according to claim 15, characterized in that said second component is selected from the group consisting of yeasts, synthetic antifungals, bacteria, and other biocontrol microorganisms antagonistic to said pathogen of the genus Botrytis. 17. Composition according to claim 15 or 16, characterized in that said first component and said second component are mixed in the same container or placed in two separate containers. 18. Composition according to any one of claims 15 to 17, characterized in that it also contains excipients such as wettable powders or granules. 19. A method of manufacturing a composition according to any one of claims 15 to 18 comprising the incorporation simultaneously or successively of at least a first component consisting of a microorganism antagonist said pathogen, said microorganism being a filamentous fungus of genus Microdochium, and a second component active against said pathogen of the genus Botrytis. 20. Use of a microorganism of the genus Microdochium to decrease the dose of an antagonist compound of a Botrytis pathogen. 21. Use of a microorganism of the genus Microdochium in combination with another antagonist compound of a Botrytis pathogen to increase control or treatment efficacy against said Botrytis pathogen.