FR3021218A1 - Utilisation du cinnamaldehyde en association avec de l'eugenol et/ou du carvacrol pour lutter contre la resistance aux antibiotiques - Google Patents

Abstract

La présente invention a pour objet du transcinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol destiné à une utilisation dans la prévention de l'émergence d'un phénotype de résistance chez un agent pathogène, elle a également pour objet le transcinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol destiné à une utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une infection par un pathogène, dans laquelle l'apparition d'un phénotype de résistance chez un agent pathogène est empêchée.

Description

UTILISATION DU CINNAMALDEHYDE EN ASSOCIATION AVEC DE L'EUGENOL ET/OU DU CARVACROL POUR LUTTER CONTRE LA RESISTANCE AUX ANTIBIOTIQUES.

La présente invention concerne une nouvelle utilisation du cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol pour lutter contre la résistance aux antiobiotiques. L'OMS a publié récemment (30 avril 2014) un rapport sur la résistance aux antibiotiques (Rapport mondial de l'OMS sur la résistance aux antimicrobiens, site Internet : www.who.int/mediacentre/news/release/2014/amrreport) "Antimicrobial resistance: global report on surveillance"), qui regroupe les données provenant de 114 pays. Ce rapport fait état d'une menace grave pour la santé humaine du fait de la présence avérée d'une résistance aux antibiotiques dans toutes les régions du monde. Selon le Dr Keiji Fukuda, sous-directeur général de l'OMS pour la sécurité sanitaire, « le monde s'achemine vers une ère post-antibiotiques, où les infections courantes et des blessures mineures qui ont été soignées depuis des décennies, pourraient à nouveau tuer, à moins que les nombreux acteurs concernés n'agissent d'urgence et de manière coordonnée ».

La surconsommation d'antibiotiques, et en particulier d'antibactériens, est la cause principale des infections nosocomiales ; la généralisation de l'utilisation des antibiotiques, en particulier dans les hôpitaux, crée une pression de sélection qui favorise la sélection de souches de bactéries résistantes à certains antibiotiques, et contribue à l'émergence de souches hospitalières multirésistantes, qui peuvent se transmettre d'un patient à l'autre. Ce phénomène a atteint une telle ampleur que certaines maladies, qui étaient initialement traitées avec succès avec des antibiotiques, deviennent incurables. L'OMS appelle l'attention sur la nécessité de mettre au point de nouveaux produits diagnostiques, de nouveaux antibiotiques et d'autres outils pour permettre aux professionnels de la santé de garder leur avance sur la progression des résistances. Parmi ces outils, l'évitement de l'antibio- résistance est une voie explorée par de nombreux chercheurs et industriels. Les co-thérapies peuvent également s'avérer une voie efficace pour contrer certaines résistances à un antibiotique donné. Dans le cadre des travaux sur la recherche d'alternatives thérapeutiques au traitement des tuberculoses résistantes aux antibiotiques (www.inserm.fr, communiqué de presse du 23 mars 2010, citant les travaux de Jean-Emmanuel Hugonnet), on citera par exemple l'efficacité thérapeutique de l'association d'un carbapénème, à savoir le méroprénème (famille des 8- lactamines inhibitrices des L,D-transpeptidases), avec un inhibiteur de S-lactamase, à savoir l'acide clavulanique, afin de traiter les tuberculoses résistantes aux antibiotiques.

D'autres auteurs ont tenté d'utiliser des huiles essentielles ou des mélanges d'huiles essentielles connues pour leurs activités anti-bactériennes, mais ils se sont heurtés aux deux difficultés majeures suivantes. D'une part, en raison de leur nature lipophile, la difficulté est de trouver une formulation permettant une biodisponibilité optimale. D'autre part, du fait de leur origine naturelle, elles peuvent présenter des différences de compositions quantitatives ou qualitatives d'un lot à l'autre, et présentent toujours un risque de toxicité incontrôlée. En effet, les huiles essentielles contiennent dans leur totum, des molécules en très faible quantité qui peuvent exprimer une forte toxicité. C'est le cas de l'huile essentielle de girofle eugenia caryophyllata (clou de girofle) qui contient majoritairement de l'eugénol (75%) et du méthyl eugénol en faible quantité qui est muta-carcinogène. Les huiles essentielles sont donc difficiles à mettre en oeuvre dans des compositions pharmaceutiques du fait des exigences règlementaires. Certaines équipes (Benoit J.P. et al : WO 201211420) ont mis en oeuvre une formulation spécifique d'encapsulation dans des lipides d'huiles essentielles associées à des antibactériens avec une description d'un large spectre d'activités antibactérienne, antifongique et antiparasitaire in vitro. Cette solution a montré son efficacité in vitro mais les essais in vivo sur un modèle murin ont révélé ses limites, la reproductibilité des résultats s'étant avérée aléatoire en raison notamment de la stabilité aléatoire des nanocapsules. D'autres auteurs ont essayé de préparer des nanoémulsions sans ajout d'émulsifiant en imposant un régime vibaratoire à l'aide d'un transducteur opérant à une fréquence de plus de 900kHz, mais cette technique ne s'est pas avérée reproductible industriellement, la formation et la stabilité des émulsions n'étant pas assurées de façon reproductible (W02010/149668). Afin de s'affranchir de résultats aléatoires et non transposables in vivo, les auteurs de la présente invention ont décidé de travailler sur des molécules de haute pureté chimique afin d'éliminer la présence de toxiques connus ou suspects. Ils ont également décidé d'explorer des formes galéniques originales dans le but d'obtenir des résultats fiables et reproductibles aussi bien in vitro que in vivo. Les auteurs ont découvert qu'en opérant une sélection parmi les molécules pures d'origine naturelle présentes dans les huiles essentielles les plus courantes, il était possible d'obtenir des compositions actives sur un grand nombre de pathogènes. Les auteurs de la présente invention ont concentré leurs recherches sur des molécules de haute pureté chimique provenant d'huiles essentielles de plantes, à savoir le trans-cinnamaldéhyde, l'eugénol et le carvacrol, et ont découvert de façon tout à fait surprenante que le trans-cinnamaldéhyde, éventuellement associé à l'eugénol et/ou au carvacrol, empêchait l'apparition d'un phénotype de résistance chez différents agents pathogènes. Ils ont également découvert qu'in vivo une association trans-cinnamaldéhyde avec eugénol et/ou carvacrol permettait d'éviter toute apparition d'un phénotype de résistance chez un agent pathogène tout en traitant l'infection causée par ledit agent pathogène. Résumé de l'invention Ainsi, selon un premier objet, la présente invention porte sur le trans-cinnamaldéhyde, éventuellement en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol, destiné à une utilisation dans la prévention de l'émergence d'un phénotype de résistance chez un agent pathogène. Selon un autre objet, l'invention porte également sur le trans-cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol destiné à une utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une infection par un pathogène, dans laquelle l'apparition d'un phénotype de résistance à un antibiotique chez un agent pathogène est empêchée. Selon un troisième objet, l'invention porte sur le trans-cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol destiné à être utilisé en tant qu'antibiotique ne développant pas de phénotype de résistance. Enfin, un autre objet de l'invention est un procédé pour empêcher l'apparition d'un phénotype de résistance à un antibiotique chez un agent pathogène caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à: - fournir du trans-cinnamaldéhyde, éventuellement en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol ; mettre en contact le trans-cinnamaldéhyde, éventuellement en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol, avec ledit agent pathogène. Finalement, l'invention porte également sur une forme galénique particulière du trans-cinnamaldéhyde, éventuellement en association avec l'eugénol et /ou le carvacrol, pour une utilisation pour empêcher l'apparition de phénotype de résistance chez des pathogènes.

Description détaillée de l'invention : Selon un premier aspect, la présente invention porte sur le trans-cinnamaldéhyde destiné à une utilisation dans la prévention de l'émergence d'un phénotype de résistance chez un agent pathogène.

Elle porte également sur le trans-cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol destiné à une utilisation dans la prévention de l'émergence d'un phénotype de résistance chez un agent pathogène.

Par « trans-cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol », on entend les différentes associations suivantes : trans-cinnamaldéhyde et eugénol; trans-cinnamaldéhyde et carvacrol ; trans-cinnamaldéhyde et eugénol et carvacrol. Dans les différentes associations ci-dessus, les ratios volumiques suivants sont utilisés : trans-cinnamaldéhyde/eugénol : 20/80 à 80/20, de préférence de 30/70 à 70/30 et plus préférentiellement de 50/50 ; trans-cinnamaldéhyde/carvacrol : 20/80 à 80/20, de préférence de 30/70 à 70/30 et plus préférentiellement de 50/50 ; trans-cinnamaldéhyde /eugénol/ carvacrol : 10/10/80 à 80/10/10, de préférence de 15/15/70 à 70/15/15 et plus préférentiellement de 33/33/33. Les constituants de ces différentes associations peuvent se présenter sous une seule ou même forme galénique, c'est-à-dire être présents simultanément dans la même composition ou formulation. Ladite composition ou formulation pourra comprendre des excipients. Cependant, avantageusement, la quantité d'agents excipients et leur nombre sera aussi faible que possible.

Ils pourront également se présenter sous des formes séparées de façon à pouvoir être administrés séparément ou séquentiellement. Dans la présente invention, le trans-cinnamaldéhyde est une molécule obtenue par extraction d'huile essentielle de cannelle de Chine et purification jusqu'à une pureté d'au moins 98%, de préférence d'au moins 99%% et plus préférentiellement encore de plus de 99,5%.

Le trans-cinnamaldéhyde peut également, de façon avantageuse, être une molécule de synthèse. Dans la présente invention, on pourra utiliser le terme cinnamaldéhyde pour désigner également l'isomère trans du cinnamaldéhyde. L'isomère cis- et les mélanges racémiques ne sont pas incorporés par le terme général « cinnamaldéhyde » dans la présente invention. De la même manière, le caravacrol est une molécule obtenue par extraction d'huile essentielle d'origan et purification jusqu'à une pureté d'au moins 98%, de préférence d'au moins 99%% et plus préférentiellement encore de plus de 99,5%. Le carvacrol peut également, de façon avantageuse, être une molécule de synthèse.

L'eugénol est une molécule obtenue par extraction d'huile essentielle de girofle eugenia caryophyllata et purification jusqu'à une pureté d'au moins 98%, de préférence d'au moins 99%% et plus préférentiellement encore de plus de 99,5%.

L'eugénol peut également, de façon avantageuse, être une molécule de synthèse. Au sens de la présente invention, il y a « émergence d'un phénotype de résistance aux antibiotiques chez un agent pathogène » si une augmentation de la Concentration Minimale d'Inhibition (CMI) de l'antibiotique d'au moins 2 fois la CMI de départ apparaît avant 50 passages lors de l'essai suivant : L'agent pathogène est cultivé en présence de concentrations sub-inhibitrices (1/4 de la CMI) du produit à tester, la CMI étant régulièrement déterminée tous les 4 à 6 passages. L'émergence d'une résistance correspond à une augmentation stable de la CMI égale à au moins 2 fois la CMI de départ.

La CMI caractérise l'effet bactériostatique d'un produit, en particulier d'un antibiotique. La CMI d'un produit pour une souche donnée est la concentration la plus faible qui inhibe complètement la croissance de ladite souche dans des conditions standardisées in vitro. Par « agent pathogène » dans la présente invention on entend des bactéries, champignons ou parasites. En particulier, la présente invention permet de lutter contre le développement de phénotype de résistance chez des bactéries. L'expression "bactérie", "souche bactérienne" ou "souche de bactéries" telle qu'utilisée dans la présente demande désigne toute souche de bactéries capable de provoquer une infection et, en particulier, toute souche de bactéries potentiellement pathogène pour un mammifère et plus particulièrement pour un être humain. Sont également incluses les mycobactéries. A titre d'exemple de bactérie, on peut citer une souche bactérienne gram positif choisie parmi les familles suivantes : - la famille des Staphylococcaceae, en particulier le genre Staphylococcus, représenté par les espèces Staphylococcus aureus (S.aureus ou staphylocoque doré) et Staphylococcus epidermidis; - la famille des Enterococcaceae, en particulier le genre Enterococcus, représenté par les espèces Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Enterococcus avium et Enterococcus gallinarum; - la famille des Clostridiaceae, en particulier le genre Clostridium, représenté par les espèces Clostridium difficile et Clostridium sp; - la famille des Streptococcaceae, y compris les Streptocoques hémolytiques A et B, en particulier le genre Streptococcus, représenté par les espèces Streptococcus pneumoniae, Streptococcus agalactiae, Streptococcus viridans, Streptococcus et Streptococcus pyogenes ; - la famille des Aerococcaceae, en particulier le genre Aerococcus représenté par l'espèce Aerococcus viridans ; - la famille des Micrococcaceae, en particulier le genre Micrococcus ; - la famille des Lactobacillaceae, en particulier le genre Lactobacillus ; - la famille des Nocardiaceae, en particulier le genre Nocardia, représenté par les espèces Nocardia astéroïdes, Nocardia brasiliensis et Nocardia caviae - la famille des Listeriaceae, en particulier le genre Listeria, représenté par l'espèce Listeria monocytogenes; - la famille des Corynebacteriaceae, en particulier le genre Corynebacterium ; - la famille des Bacillaceae, en particulier le genre Bacillus, représenté par les espèces Bacillus anthracis et Bacillus cereus ; - la famille des Propionibacteriaceae, en particulier le genre Propionibacterium, représenté par l'espèce Propionibacterium acnés ; et - la famille des Peptococcaceae, en particulier le genre Peptococcus, représenté par l'espèce Peptococcus magnus. A titre d'exemple, on peut également citer une souche bactérienne gram négatif choisie parmi les souches des familles suivantes : - la famille des Moraxellaceae, en particulier le genre Acinetobacter, représenté par les espèces Acinetobacter baumannii et Acinetobacter calcoaceticus - la famille des Legionellaceae, en particulier le genre Legionella, représenté par les espèces Legionella Pneumophila, Legionella longbeachae, Legionella bozmanii, et Legionella micdader ; - la famille des Enterobacteriaceae, en particulier le genre Enterobacter, représenté par l'espèces Enterobacter cloacae, le genre Escherichia, représenté par les espèces Escherichia cou et Escherichia hermannii, le genre Klebsiella, représenté par les espèces Klebsiella pneumoniae et Klebsiella oxytoca, le genre Serratia, représenté par l'espèce Serratia marcescens, le genre Citrobacter, représenté par les espèces Citrobacter freundii et Citrobacter koseri, et les genres Salmonella, Shigella et Proteus; - la famille Pseudomonadaceae, en particulier le genre Pseudomonas, représenté par les espèces Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa), Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida et Pseudomonas stutzeri ; - la famille Alcaligenaceae, en particulier le genre Achromobacter, représenté par les espèces Achromobacter xylosoxidans et Achromobacter denitrificans; - la famille Sphingomonadaceae, en particulier le genre Sphingomonas, représenté par l'espèce Sphingomonas paucimobilis; - la famille des Pasteurellaceae, en particulier le genre Haemophilus, représenté par les espèces Haemophilus influenzae et Haemophilus parainfluenzae; - la famille des Moraxellaceae, en particulier le genre Moraxella, représenté par l'espèce Moraxella catarrhalls; - la famille des Neisseriaceae, en particulier le genre Kingella, représenté par l'espèce Kingella kingae - la famille des Pasteurellaceae, en particulier le genre Pasteurella, représenté par l'espèce Pasteurella mul ticida; - la famille des Flavobacteriaceae, en particulier le genre Capnocytophaga, représenté par l'espèce Capnocytophaga canimorsus; - la famille des Neisseriaceae, en particulier le genre 5 Neisseria, représenté par les espèces Neisseria gonorrhoeae et Neisseria lactamica ; - le genre Campylobacter, représenté par les espèces C. jejuni, et C. cou ; - la famille des Bacteroidaceae, en particulier le genre 10 Bacteroides, représenté par l'espèce Bacteroides fragilis; - la famille des Stenotrophomonas, en particulier, les espèces S. nitritireducens et S. maltophilia ; - la famille des méningoccoques, en particulier les 15 espèces Neisseria meningitidis; et - la famille des Fusobacteriaceae, en particulier le genre Fusobacterium. Des exemples particuliers de souches d'intérêt sont choisis parmi les souches appartenant aux genres 20 suivants : - genre Acinetobacter, représenté par les espèces Acinetobacter baumannii et Acinetobacter calcoaceticus ; - genre Staphylococcus, représenté par les espèces Staphylococcus aureus (S.aureus ou staphylocoque doré) et 25 Staphylococcus epidermidis; - genre Escherichia, représenté par les espèces Escherichia cou et Escherichia hermannii ; - genre Klebsiella, représenté par les espèces Klebsiella pneumoniae et Klebsiella oxytoca ; 30 - genre Listeria, représenté par l'espèce Listeria monocytogenes; - genre Salmonella, représenté par l'espèce Salmonella enteritidis; et genre Pseudomonas, représenté par les espèces Pseudomonas aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida et Pseudomonas stutzeri. De façon particulièrement avantageuse, le trans- cinnamaldéhyde seul et en association avec l'eugénol et/ou le carvacrol s'est avéré efficace pour empêcher le développement d'un phénotype de résistance chez les bactéries des familles suivantes - la famille Pseudomonadaceae, en particulier le genre Pseudomonas, représenté par les espèces Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa), Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida et Pseudomonas stutzeri ; - la famille des Moraxellaceae, en particulier le genre Acinetobacter, représenté par les espèces Acinetobacter baumannii et Acinetobacter calcoaceticus et - la famille des Staphylococcaceae, en particulier le genre Staphylococcus, représenté par les espèces Staphylococcus aureus (S.aureus ou staphylocoque doré) et Staphylococcus epidermidis. A titre d'exemples spécifiques de souches, on peut citer Acinetobacter baumannii RCH Acinetobacter baumannii SAN008 Acinetobacter baumannii souche 12 Acinetobacter baumannii AYE Acinetobacter baumannii CIP7034 Acinetobacter baumannii CIP107292 Acinetobacter baumannii CIP5377 Staphylococcus aureus ATCC25923 Staphylococcus aureus résistant à la méticilline (SARM) 070600025 SARM 0702E0196 SASM 0703H0036 SASM 070170095 Escherichia cou ATCC25922 Escherichia cou 0705A0434 Enterobacter cloacae 0705A1743 Enterobacter aerogenes 0705A0867 Klebsiella oxytoca 0705C0187 Salmonella enteritidis 4 Pseudomonas aeruginosa ATCC27853 Pseudomonas aeruginosa 0704C0134 Pseudomonas aeruginosa 0703CO259 Listeria monocytogenes N° 58 souchier interne. En particulier, le trans-cinnamaldéhyde en association avec l'eugénol et/ou le carvacrol permet d'empêcher l'apparition du phénotype de résistance chez Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter baumannii et Staphylococcus aureus. De façon tout à fait surprenante, le trans- cinnamaldéhyde seul permet d'empêcher l'émergence d'un phénotype de résistance chez toutes les souches bactériennes mais il permet également, lorsqu'il est associé à l'eugénol et/ou au carvacrol d'empêcher l'émergence d'une résistance qui se développe lorsque le carvacrol d'une part ou l'eugénol d'autre part sont utilisés seuls. Ainsi, il a été démontré d'une part que le carvacrol ne permet pas d'empêcher l'émergence d'une résistance au carvacrol chez P.aeruginosa et d'autre part que l'eugénol ne permet pas d'empêcher l'émergence d'une résistance à l'eugénol chez P.aeruginosa, mais que l'association trans-cinnamaldéhyde avec eugénol et/ou carvacrol permet d'empêcher l'émergence d'une résistance chez P.aeruginosa. Selon un autre aspect, l'invention porte sur le Trans-cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol destiné à une utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une infection par un pathogène, notamment une infection bactérienne, dans laquelle l'apparition d'un phénotype de résistance à un antibiotique chez un agent pathogène est empêchée.

Elle porte également sur une méthode de prévention et/ou de traitement d'une infection par un pathogène notamment une infection bactérienne, dans laquelle l'apparition d'un phénotype de résistance chez un pathogène est empêchée par l'administration d'une quantité thérapeutiquement efficace de trans- cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol à un mammifère, en particulier à l'homme, présentant une infection. Une "infection bactérienne" au sens de la présente invention désigne une infection provoquée par une souche bactérienne telle que définie précédemment et inclut aussi bien les phases les plus précoces de la contamination bactérienne, en particulier la colonisation de l'hôte (par exemple un mammifère, en particulier un humain) par ladite souche bactérienne, que les phases les plus tardives, notamment les pathologies diverses qui sont la conséquence de la colonisation par ladite souche bactérienne; une fois qu'une souche bactérienne a colonisé un hôte ou un tissu de l'hôte, sa prolifération a généralement pour conséquence des réactions cellulaires, tissulaires ou générales, qui se traduisent habituellement par un syndrome inflammatoire. L'expression "infection bactérienne" englobe donc tout effet néfaste, signe clinique, symptôme ou toute maladie apparaissant chez un mammifère et en particulier chez un humain suite à la colonisation dudit mammifère ou dudit patient par une souche bactérienne.

Le terme "traitement" inclut la destruction du microorganisme, ainsi que l'amélioration des signes cliniques ou des symptômes observés chez un mammifère, en particulier chez un humain, de même que l'amélioration de l'état dudit mammifère. Il couvre également le ralentissement, l'interruption, ainsi que l'arrêt de la progression de l'infection ainsi que l'inhibition, l'atténuation ou la prévention des conséquences néfastes de l'infection telles que les dommages cellulaire ou physiologiques provoqués par les toxines produites par certaines souches bactériennes au niveau des tissus infectés ou avoisinants. Ainsi, le terme "traitement" s'applique au point d'infection principal et/ou au(x) point(s) d'infection secondaire(s), de même qu'aux symptômes découlant de l'infection. La présente invention trouve son application dans le traitement des souches dites "sensibles", "intermédiaires" ou "résistantes" à un antibiotique donné, ainsi que les souches "multirésistantes aux antibiotiques" ou "pan résistantes". La susceptibilité d'une souche bactérienne donnée à un ou plusieurs antibiotiques supposé(s) ou connu(s) peut être notamment déterminée in vitro en réalisant un antibiogramme. "Sensible" signifie qu'une bactérie ou une souche de bactéries peut être tuée ou que sa croissance peut être inhibée par l'antibiotique testé. "Intermédiaire" signifie que l'antibiotique n'est efficace que dans certaines conditions, à fortes doses, contre ladite souche bactérienne. "Résistante" signifie que l'antibiotique est inefficace contre ladite souche bactérienne. L'expression "multirésistante aux antibiotiques" (ou BMR) s'applique à une bactérie ou une souche de bactéries résistante à tous les antibiotiques testés dans au moins deux classes d'antibiotiques; suite à l'accumulation de résistances naturelles (mutations) et/ou de résistances acquises (notamment par l'acquisition de plasmides), une bactérie ou une souche de bactéries n'est plus sensible qu'à un petit nombre d'antibiotiques habituellement actifs en thérapeutique. Plus spécifique, "pan résistante" (ou "toto résistante") signifie que la bactérie ou la souche bactérienne est résistante à tous les antibiotiques classiques testés.

De façon tout à fait surprenante, le trans- cinnamaldéhyde en association avec l'eugénol et/ou le carvacrol permet de traiter une infection due à une souche multirésistante et même toto-résistance sans développer de nouvelle résistance.

Une "quantité thérapeutiquement efficace" de principe actif est une quantité suffisante pour obtenir un effet significatif et en particulier apporter un bénéfice significatif à un mammifère et, en particulier, à un humain, dans le cadre d'une application pour la prévention ou le traitement tel que défini dans la présente demande. L'infection bactérienne peut être, par exemple, choisie parmi une infection des voies respiratoires (telle qu'une pneumopathie ou une pneumonie), une infection urinaire, une infection de la peau ou des tissus mous, une légionellose nosocomiale, une infection du système nerveux central, une aspergillose invasive, une méningo-encéphalite, une empyème, une infection gastro-intestinale, une complication cardiopulmonaire (telle qu'une endocardite), une bactériémie, une infection du site opératoire ou une infection généralisée (telle qu'une septicémie).

Ainsi, selon l'invention, le trans-cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol est destiné à être utilisé en tant qu'antibiotique ne développant pas de phénotype de résistance. L'association trans-cinnamaldéhyde avec de l'eugénol et/ou du carvacrol joue le rôle d'antibiotique, c'est-à- dire qu'elle est active sur les souches bactériennes pathogènes, mais elle présente l'avantage considérable par rapport aux antibiotiques actuellement connus, de ne développer aucun phénotype de résistance chez la souche bactérienne pathogène. Cet effet est obtenu de façon tout à fait avantageuse sur des souches bactériennes multi- ou toto-résistantes. Dans tous les aspects de l'invention décrits ci-dessus, le trans-cinnamaldéhyde en association avec l'eugénol et/ou le carvacrol peut être formulé de façon à faciliter son administration et en particulier, peut être formulé avec un ou plusieurs véhicule(s) ou diluant(s) pharmaceutiquement acceptable(s). Dans le cas d'une administration injectable, on peut notamment choisir une formulation dans une solution aqueuse, non aqueuse ou isotonique. Les véhicules utilisés peuvent être, par exemple, de l'eau, une solution saline, de l'albumine sérique, une solution Ringer, le polyéthylène glycol, des solvants miscibles dans l'eau, des sucres, des liants, des excipients, des huiles végétales ou minérales, des polymères solubles dans l'eau, des agents tensioactifs, des agents épaississants ou gélifiants, des agents de solubilisation, des agents stabilisation, des agents conservateurs, ou une de leurs combinaisons. Selon un mode de réalisation particulier, un minimum d'excipients ou véhicules sont utilisés. De façon avantageusement, les seuls excipients sont un agent régulateur de pH, éventuellement avec un stabilisant d'émulsion non ionique à propriétés tensio-actives, tel que le Poloxamer. De façon tout à fait avantageuse, aucun excipient n'est ajouté.

De façon particulièrement avantageuse, le trans- cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou le carvacrol est fourni sous forme d'une émulsion, et de préférence sous forme d'une nanoémulsion. L'émulsion est une émulsion de type huile dans eau qui présente des gouttelettes hydrophobes de taille moyenne inférieure à 10 à 500 nm, de préférence de 20 à 350 nm et plus préférentiellement encore de 50 à 250 nm et ayant un potentiel zeta allant de -2 mV à -80 mV, de préférence de -5 mV à -60 mv et plus préférentiellement encore de -lOmV à -40mV. Le potentiel Zeta est mesuré par électrophorèse à l'aide d'un appareil Malvern de type zeta-sizer. De façon particulière, l'émulsion est dépourvue de tout agent stabilisant.

La taille moyenne de particules, est mesurée par diffusion dynamique ou viscoélastique de la lumière ou spectrométrie par corrélation de photons à l'aide d'un appareil de type Malvern. Selon un autre aspect, la présente invention porte sur une nano-émulsion qui est obtenue par : mise en contact d'eau avec du cinnamaldéhyde, éventuellement en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol, afin d'obtenir des phases immiscibles, - éventuellement ajustement du pH à 7,0 +/- 0,3 à l'aide d'un régulateur de pH, de préférence une base minérale ; - éventuellement ajout d'un stabilisant d'émulsion à propriétés tensio-actives, tel que le poloxamer ; - homogénéisation des phases immiscibles ainsi obtenues dans un homogénéiseur haute pression, ladite pression allant de 300 à 5000 bars, de préférence de 500 à 3000 bars et plus préférentiellement encore de 800 à 2000 bars. La base minérale permet l'ajustement du pH au pH physiologique de 7,0 +/-0,3. Elle est choisie parmi l'hydroxyde de sodium, de lithium, de potassium, de magnésium ou de calcium.

Sans vouloir être liée par aucune théorie, les inventeurs sont d'avis que la présence du cation minéral introduit par le régulateur de pH, participe également à la stabilisation de la nano-émulsion finalement obtenue.

Afin d'augmenter les effets du traitement, des administrations successives peuvent être répétées à une ou plusieurs occasions, après un intervalle de temps particulier. On peut, par exemple, procéder à plusieurs administrations par jour ou par semaine.

Les voies d'administration et les posologies varient en fonction d'une variété de paramètres, par exemple en fonction de l'état du patient, du type d'infection et de la sévérité de l'infection à traiter. Le trans-cinnamaldéhyde en association avec l'eugénol et/ou le carvacrol est administré par voie entérale, parentérale (intraveineuse, intramusculaire ou sous-cutanée), transcutanée (ou transdermique ou percutanée), cutané, orale, mucosale, en particulier transmuqueuse-buccale, nasale, ophtalmique, otologique (dans l'oreille), vaginale, rectale, ou encore les voies intragastrique, intracardiaque, intrapéritonéale, intrapulmonaire ou intratrachéale.

De façon préférée, l'administration est faite par voie parentérale avec la nanoémulsion décrite ci-dessus. On peut utiliser des doses allant de 20 à 100 mg/kg de poids corporel, de préférence de 40 à 80 mg/kg par jour réparties en une ou plusieurs prises' Selon un autre aspect, l'invention porte sur un procédé pour empêcher l'apparition d'un phénotype de résistance chez un agent pathogène caractérisé en ce qu'il comprend : -fournir du trans-cinnamaldéhyde, éventuellemnt en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol ; mettre en contact le trans-cinnamaldéhyde, éventuellement en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol, avec ledit agent pathogène. 20 Toutes les caractéristiques décrites précédemment en relation avec les différents aspects de l'invention sont également applicables à ce dernier aspect de l'invention. L'invention va être décrite de façon détaillée ci- 25 après à l'aide d'exemples qui sont donnés à titre d'illustration seulement et ne sauraient limiter la portée de l'invention. EXEMPLES 30 Dans les exemples on utilise les produits suivants : EP1010: Eugénol commercialisé par Merck sous la dénomination « eugenol for synthesis », lot 56393655 301 - Masse volumique :1,0670 g/ml - pureté supérieure ou égale à 99%. EP1011: Carvacrol commercialise par Sigma-Aldrich sous la désignation Carvacrol-Kosher, lot STBD2891V - masse volumique: 0,9901 g/ml - pureté supérieure ou égale à 98%. EP1012: trans-Cinnamaldéhyde commercialisé par Merck sous la désignation « Trans-cinnamaldéhyde for synthesis », lot 56154305 121 - masse volumique: 1,0723 g/ml - pureté supérieure ou égale à 98%. EP1020: Cinnamaldéhyde:Eugénol 50:50 v/v, Lot E1775 préparé par simple mélange des produits ci-dessus - masse volumique: 1,076 g/ml. EP1021: Carvacrol:Cinnamaldéhyde 50:50 v/v, Lot E1776 - préparé par simple mélange des produits ci-dessus - masse volumique 1,087 g/ml. EP1030: Carvacrol:Cinnamaldéhyde:Eugénol 33:33:33 v/v. Lot E1777 - préparé par simple mélange des produits ci-dessus - masse volumique:1,035 g/ml.

POLOXAMER : poloxamer commmercialisé par BASF sous l'appellation Kolliphor P 407 ; Exemple 1 : émulsion eugénol/carvacrol/trans-cinna- maldéhyde 70/15/15 (en poids) : On prépare un mélange eugénol/carvacrol/transcinnamaldéhyde 70/15/15 (en poids). 12 g de ce mélange sont additionnés sur 200g d'eau (6% en poids). Le milieu biphasé est homogénéisé à 25000 t/mn sur agitateur IKA ultraturrax. Le pH, initialement de 4,6 est amené entre 7,0 et 7,2 avec de la potasse 0,1M. Le pH est ajusté sur une période de 2 heures. La température du milieu est maintenue entre 25 et 30°C. Après stabilisation du pH, le lait obtenu est homogénéisé à 1000 bars avec un appareil GEA niro Soasi type Panda plus 1000, pendant 30 minutes, tout en maintenant la température à l'intérieur de l'homogénéiseur à 25-30°C. On obtient une nanoémulsion présentant les caractéristiques suivantes : Taille moyenne des particules : 250 nm mesurée par un appareil Malvern de type zeta-sizer.

Potentiel Zeta : -47 mV mesuré par appareil Malvern à 25°C. Le milieu est ensuite conditionné puis utilisé tel quel pour test chez le mammifère.

Exemple 2 : émulsion eugénol/carvacrol/cinnamaldéhyde 70/15/15 avec 6% de POLOXAMER On prépare un mélange eugénol/carvacrol/transcinnamaldéhyde 70/15/15 (en poids). 12 g de ce mélange sont additionnés sur 200g d'eau (6% en poids). Le milieu biphasé est homogénéisé à 25000 t/mn sur agitateur IKA ultraturrax. Le pH, initialement de 4,6 est amené entre 7,0 et 7,2 avec de la potasse 0,1M. Le pH est ajusté sur une période de 2 heures. La température du milieu est maintenue entre 25 et 30°C. Après stabilisation du pH, on ajoute 12g de POLOXAMER Kolliphor P 407 de BASF (6% en poids). Le milieu est maintenu sous agitation jusqu'à obtention d'un lait homogène (environ 30 min). Puis ce lait est homogénéisé pendant 30 minutes à 1000 bars avec un appareil GEA Niro Soasi type panda plus 1000. On obtient une nanoémulsion présentant les caractéristiques suivantes : Taille moyenne des particules :44 nm mesurée en volume à l'aide d'un appareil Malvern de type zeta size à 25°C. Potentiel Zeta : -64mV mesuré par un appareil Malvern de type zeta size à 25°C. Le milieu obtenu est translucide et présente une température de 72°C. Le milieu est refroidi à la température ambiante, conditionné puis utilisé tel que pour test chez le mammifère. Exemple 3 : émulsion de trans-cinnamaldéhyde 100% avec 6% Poloxamer Sur 200 g d'eau sont additionnés 12g (6% en poids) de trans-cinnamaldéhyde. Le milieu biphasé est homogénéisé à 15 25000 t/mn sur agitateur IKA ultraturrax. Le pH, initialement de 3,8 est amené entre 7,0 et 7,2 avec de la potasse 0,1M. Le pH est ajusté sur une période de 2 heures. La température du milieu est maintenue entre 25 et 30°C. Après stabilisation du pH, sur le lait obtenu 20 sont additionnés 12g de POLOXAMER (6% en poids). Le milieu est maintenu sous agitation jusqu'à obtention d'un lait homogène (environ 30 minutes), puis est homogénéisé pendant 30 minutes, à 1000 bars avec un appareil GEA niro Soasi type Panda plus 1000. 25 Le milieu obtenu est translucide et présente une température de 72°C. On obtient une nanoémulsion présentant les caractéristiques suivantes : Taille moyenne des particules :44 nm mesurée en volume 30 à l'aide d'un appareil Malvern de type zeta sizer à 25°C. Potentiel Zeta : -5mV mesuré par un appareil Malvern de type zeta sizer à 25°C. 10 Le milieu est refroidi à la température ambiante, conditionné puis utilisé tel que pour test chez le mammifère.

Exemple 4: Emergence de résistance in vitro chez Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa et Staphylococcus aureus.

L'objectif de cet exemple est d'évaluer l'émergence de résistance in vitro chez les 3 souches bactériennes Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa et Staphylococcus aureus en présence de Carvacrol, eugénol, trans-cinnammaldéhyde seuls et dans les mélanges EP1020, EP1021 et EP1030. Comme témoin positif, un antibiotique différent pour chaque souche a été choisi : imipénème pour Pseudomonas aeruginosa, tigécycline pour Acinetobacter baumannii et rifampicine pour Staphylococcus aureus.

L'émergence de la résistance sera induite par culture des bactéries en présence du produit à tester à des concentrations sub-inhibitrices (1/4 de la CMI) (Luz et al. 2012). La CMI sera ensuite régulièrement déterminée tous les 4 à 6 passages. L'émergence d'une résistance au cours de 50 passages correspondra à une augmentation stable de la CMI correspondant à au moins 2 fois la CMI de départ. Matériels and Méthodes milieu de culture - 0.85% NaC1, 2 ml, ref. 20070, BioMerieux - Milieu BHI (BHI-T), 9 ml, ref. 42081, BioMerieux - Milieu Mueller-Hinton (MH), 200 ml, ref. 64884, BioRad Blood agar, ref. PB5039A, Oxoid Mueller-Hinton agar, ref. 63824, BioRad - Eau Type 1 dans tubes en verre de 10 ml, ELGA PURELAB ref. 526000, BioMerieux - E-test rifampicine, - E-test imipénème, ref. MA0115F, Oxoid - E-test tigécycline, ref. 412475, BioMerieux - NaC1 0,9% Versol, ref. 600020, Laboratoire Aguettant Produits à tester Pour chaque produit testé, on procède comme décrit ci-dessous pour le trans-cinnamldéhyde :reconstitution extemporanée de la solution dans du DMSO à 40% (solution à 400 mg/ml) ajouter 400 p1 de cinnamaldéhyde à 600 p1 de DMSO. Ajouter 1 ml de la solution à 400mg/ml à 9 ml de BHI, de manière à obtenir une concentration de 40 mg/ml.

Pour les antibiotiques, ils sont dilués dans NaCl. Bactéries Acinetobacter baumannii: référence de la souche CIP 7034, sensible à la tigécycline. Pseudomonas aeruginosa: souche Clinique 0703CO259, sensible à l'imipénème. Staphylococcus aureus: référence de la souche ATCC 25923, sensible à la rifampicine.

Antibiotiques Imipénème (Tienam®, MSD, 500 mg), lot 2094910. Tigécycline (Tygacil®, Wyeth, 50 mg), lot F47009.

Rifampicine (Rifadine®, Sanofi Aventis, 600 mg), lot A2451. Les CMI en carvacrol, Cinnamaldéhyde and Eugénol seuls et dans les mélanges EP1020, EP1021 et EP1030 des différentes souches bactériennes ont été mesurées par culture sur Mueller-Hinton. Les CMI initiales des 3 souches bactériennes pour les antibiotiques ont été mesurées à l'aide d'E-test classique. Pour chaque produit à tester, on a procédé ainsi : Exposition des souches au produit à des doses subinhibitrices (1/4 CMI) en milieu liquide (milieu BHI) par passage toutes les 24 heures, pendant 50 passages. Exposition des souches au produit à 2 fois sa CMI tous les 4 à 6 passages en milieu gélosé (milieu MH) afin de déterminer l'apparition d'une souche résistante.

Détermination de la nouvelle CMI en milieu gélosé si apparition d'une souche résistante. En cas d'augmentation de la CMI, la souche sélectionnée sera soumise à l'exposition d'une dose sub-inhibitrice correspondant à 1/4 de la nouvelle CMI. Les cultures sont faites à 37°C. L'ensemble des manipulations se fait sous Poste de Sécurité Microbiologique. A la fin des essais, les souches bactériennes ont été inoculées sur Cryo-Billes ( AES Laboratoires) et stockées à -80°C. Le système Cryo-Billes consiste en un petit tube contenant des billes dans lesquelles les microorganismes adhèrent, entourés d'une solution hypertonique cryoconservatrice. Résultats Les résultats pour chaque souche bactérienne sont présentés séparément ci-dessous Acinetobacter baumannii Les résultats sont rassemblés dans les tableaux 1 et 2 ci-dessous.

Après 50 passages, il n'y avait pas d'augmentation de la CMI en carvacrol, eugénol ou cinnamaldéhyde pour A. baumannii. Après 50 passages, il n'y avait pas d'augmentation de la CMI en les combinaisons Cinnamaldéhyde/Eugénol, carvacrol/cinnamaldéhyde, ou carvacrol/cinnamaldéhyde/eugénol pour A. baumannii. Pour tigécycline, la CMI pour A. baumannii a augmenté de 1,5 mg/1 à 8 mg/1 (passage 8), à 16 mg/1 (passage 19), à 48 mg/1 (passage 24).

Tableau 1. CMI en carvacrol, eugénol, cinnamaldéhyde, seuls et en mélange, et de tigécycline pour A. baumannii. A. baumannii No.de CMI CMI Méthodologie passages Initiale Finale Carvacrol 50 0.25 mg/ml 0.25 mg/ml 1/4 CMI Initiale Eugénol 50 0.75 mg/ml 0.75 mg/ml 1/4 CMI Initiale Cinnamaldéhyde EP1020 50 0.5 mg/ml 0.5 mg/ml 1/4 CMI Initiale 50 0.5 mg/ml 0.5 mg/ml 1/4 CMI initiale 50 0.5 mg/ml 0.5 mg/ml 50 0.5 mg/ml 0.5 mg/ml 8 1.5 mg/1 8 mg/1 24 8 mg/1 48 mg/1 EP1021 EP1030 Tigécycline 1/4 CMI initiale 1/4 CMI initiale 1/4 CMI initiale 1/4 CMI augmentée Tableau 2. Evolution des CMI en Tigécycline pour Acinetobacter baumannii (CMI en mg/I) CMI Initiale Nombre de Passages CMI 1.5 (PO) P3 1.5 P10 8 P21 16 P8 P13 P18 P22 P27 48 P36 P41 P46 P50 CMI augmentée 8 P25 8 8 8 8 8 P31 8 8 8 8 (P8)1 48 P15 P19 P24 P28 P33 8 P43 P47 CMI augmentée 16 : P32 8 16 48 48 48 P38 48 48 (P19)2 48 P25 P30 P35 P40 P44 48 CMI augmentée MIC' 16 48 48 48 48 48 (P24)3 P30 P35 P40 P44 48 48 48 P37 P41 48 48 CMI augmentée 48 (P30)4 1 nouvelle sous-série avec CMI initiale de 8 mg/1 Chaque case dans le Tableau ci-dessus montre 2 nouvelle sous-série avec CMI initiale de 16 mg/1 Le nombre de the passages et la CMI 3 nouvelle sous-série avec CMI initiale de 48 mg/1 4 nouvelle sous-série avec CMI initiale de 48 mg/1 La zone grisée montre où la CMI a augmenté Nombre de passages 1.5 <----_______ CMI Pseudbmonas aeruginosa Les résultats sont résumés dans les tableaux 3 et 4 ci-dessous. Tableau 3. CMI de carvacrol, eugénol, cinnamaldéhyde, seuls et en mélange et d' imipénème pour P. aeruginosa. P. aeruginosa No. de CMI Initiale CMI Finale Méthodologie passages Carvacrol 18 1 mg/ml 10 mg/ml 1/4 CMI initiale 22 2 mg/ml 10 mg/ml 1/4 CMO 18 3 mg/m1 10 mg/m1 augmentée 1/4 CMI initiale Eugénol 50 0.75 mg/ml 0.75 mg/ml 1/4 CMI initiale Cinnam aldéhyde EP1020 50 1 mg/ml 1 mg/ml 1/4 CMI initiale (cinn/eug) EP1021 50 1 mg/ml 1 mg/ml 1/4 CMI initiale (carv/cinn) EP1030 50 1.5 mg/ml 1.5 mg/ml 1/4 CMI initiale (carv/cinn/eug) 22 0.25 mg/1 16 mg/1 1/4 CMI initiale Imipénème 8 8 mg/1 16 mg/1 1/4 CMI augmentée Tableau 4. Evolution des CMI pour imipénème et Pseudomonas aeruginosa (CMI en mg/I) CMI Initiale Nombre de Passages CMI 0.25 (P0) CMI augmentée 2 (P3)1 CMI augmentée 4 (P5)2 CMI augmentée 8 (P8)3 CMI augmentée 8 (P10)4 CMI augmentée 8 (P7)5 P3 P8 P13 P18 P22 2 8 8 8 P5 P10 P15 P19 4 8 8 16 P7 P12 8 16 P10 16 P11 P15 8 16 P8 16 16 1 nouvelle sous-série de passages avec CMI initiale de 2 mg/1 2 nouvelle sous-série de passages avec CMI initiale de f 4 mg/1 3 nouvelle sous-série de passages avec CMI initiale de 8 mg/1 4 nouvelle sous-série de passages avec CMI initiale de 8 mg/1 La zone grisée montre où la CMI a augmenté Chaque case dans le Tableau ci-dessus montre Le nombre de the passages et la CMI p3 < Nombre de passages 2 <---_____ CMI La CMI en carvacrol pour P. aeruginosa a augmenté de la valeur initiale de 1 mg/ml à 2 mg/ml au passage 18 et à 10 mg/ml au passage 22.

La CMI en Eugénol pour P. aeruginosa a augmenté d' une valeur initiale de 3 mg/ml à 10 mg/ml au passage 18. Il n' y a eu aucun changement de la CMI du Cinnamaldéhyde pour P. aeruginosa sur 50 passages.

Il n' y a eu aucune augmentation de la CMI des mélanges E1020, E1021 et E 1030 pour P. aeruginosa sur les 50 passages. Pour imipénème, la CMI pour P. aeruginosa a augmenté de 0,25 mg/1 à 2 mg/1 (passage 3) , à 8 mg/1 (passage 8) , et à 16 mg/1 (passage 22) . Staphylococcus aureus Les résultats sont présentés dans le Tableau 5 ci - dessous. Tableau 5. CMI de carvacrol, eugénol, cinnamaldéhyde, seuls et en mélange et de rifampicine contre S. aureus. S. aureus No. de CMI Initiale CMI Finale Méthodologie passages 50 0.5 mg/m1 0.5 mg/m1 1/4 CMI initiale Carvacrol 50 0.5 mg/m1 0.5 mg/m1 1/4 CMI initiale Eugénol 50 1 mg/ml 1 mg/ml 1/4 CMI initiale Cinnamaldéhyde EP1020 50 1 mg/ml 1 mg/ml 1/4 CMI initiale (cinn/eug) EP1021 50 0.75 mg/ml 0.75 mg/ml 1/4 CMI initiale (carv/cinn) EP1030 50 0.75 mg/ml 0.75 mg/ml 1/4 CMI initiale (carv/cinn/eug) 8 0.016 mg/1 32 mg/1 1/4 CMI initiale Rifampicine Il n'y a eu aucune augmentation de la CMI de carvacrol, Cinnamaldéhyde ou Eugénol pour S. aureus sur les 50 passages. Il n'y a eu aucune augmentation de la CMI des mélanges EP1020, EP1021 et EP1030 pour P. aeruginosa sur les 50 passages. Pour la rifampicine, la CMI pour S. aureus a augmenté de 0,016 mg/1 à 32 mg/1 après 8 passages, soit une augmentation d'un facteur de 2000.

Conclusions Carvacrol: aucune résistance ne s'est développée chez A. baumannii, et S. aureus après 50 passages. Une résistance s'est développée chez P. aeruginosa après 18 passages.

Cinnamaldéhyde: aucune résistance ne s'est développée chez aucune souche parmi A. baumannii, P. aeruginosa et S. aureus après 50 passages.

Eugénol: aucune résistance ne s'est développée chez A. baumannii, et S. aureus après 50 passages. Une résistance s'est développée chez P. aeruginosa après 18 passages. EP1020 Cinnamaldéhyde/Eugénol 50/50: aucune résistance ne s'est développée chez aucune souche parmi A. baumannii, P. aeruginosa et S. aureus après 50 passages. EP1021 carvacrol/Cinnamaldéhyde 50/50: aucune résistance ne s'est développée chez aucune souche parmi A. baumannii, P. aeruginosa et S. aureus après 50 passages. EP1030 carvacrol/Cinnamaldéhyde/Eugénol 33/33/33: aucune résistance ne s'est développée chez aucune souche parmi A. baumannii, P. aeruginosa et S. aureus après 50 passages. Tigécycline: A. baumannii est devenu résistant à la tigécycline après 8 passages et la CMI a augmenté à 48 mg/1 après 24 passages. Imipénème: P. aeruginosa a montré une résistance initiale à l'imipénème après 3 passages. P. aeruginosa était résistant à l'imipénème après 8 passages et la CMI a augmenté à 16 mg/1 après 22 passages. Rifampicine: S. aureus est devenu résistant à la rifampicine après 8 passages et la CMI a augmenté à 32 mg/l. Exemple 5 : L'objectif de cet exemple est d'évaluer in vitro l'émergence de la résistance de 3 souches bactériennes (Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa et Staphylococcus aureus) vis-à-vis du cinnamaldéhyde à la suite de l'exemple 4, sur 50 passages supplémentaires, soit 100 passages au total (du 50ème passage au 100ème passage).

L'émergence de la résistance sera induite par culture des bactéries en présence du produit à des concentrations sub-inhibitrices (1/4 de la CMI) (Luz et al. 2012). La CMI sera ensuite régulièrement déterminée tous les 4 à 6 passages. L'émergence d'une résistance au cours de 50 passages supplémentaires correspondra à une augmentation stable de la CMI correspondant à au moins 2 fois la CMI de départ.

Matériels et Méthodes Souches bactériennes - Acinetobacter baumannii : souche de référence CIP 7034, stockée sur cryobille à la fin de l'exemple 4 - Pseudomonas aeruginosa : souche clinique 0703CO259, stockée sur cryobille à la fin de l'exemple 4 - Staphylococcus aureus souche de référence ATCC 25923, stockée sur cryobille à la fin de l'exemple 4.

Réactifs et milieux de culture - Ampoules Api NaC1 0,85% Médium, 2 ml, réf.20070, BioMérieux - Milieu BHI-T, 9 ml, réf.42081, BioMérieux - Milieu Mueller-Hinton (MH), 200 ml, réf.64884, BioRad - Géloses au sang, réf.PB5039A, Oxoid - Eau qualité 1 en tubes en verre de 10 ml autoclavés provenant du réservoir ELGA couplé à un système PURELAB - Versol NaC1 0,9% pour irrigation, réf.600020, Laboratoire Aguettant Produits à tester Reconstitution extemporanée de la solution de transcinnamaldéhyde dans du DMSO à 40% (solution à 400 mg/ml) : ajouter 400 pl de cinnamaldéhyde à 600 pl de DMSO. Ajouter 1 ml de la solution à 400mg/ml à 9 ml de BHI, de manière à obtenir une concentration de 40 mg/ml. Méthodes Afin d'étudier l'émergence de résistance, les 3 souches bactériennes sont cultivées en présence du cinnamaldéhyde du passage 50 jusqu'au passage 100 de la même façon que dans l'exemple 4.

L'ensemble des manipulations se fait sous PSM. Résultats Aucune émergence de résistance au cinnamaldéhyde n'est observée après 100 passages, pour les 3 souches bactériennes. Exemple 6 : Efficacité du mélange EP1030 chez des souris présentant une septicémie induite par Acinetobacter baumannil Dans cet exemple, le produit utilisé est l'émulsion de l'exemple 1 qui est utilisée sans délai après sa préparation. La souche utilisée Acinetobacter baumannii est une souche clinique de référence multirésistante, réf. SAN 005, CHU Angers, France. Cette souche cause 90-100% de mortalité dans un modèle murin de septicémie. Les souris utilisées sont 12 souris femelles C3H/HeN SPF de Janvier LABS, agées de 6 semaines et pesant 20g (+/-4g). Elles ont été acclimatées pendant 7 jours avant le début de l'étude. Les souris ont été réparties au hasard en 2 groupes de 6, chaque groupe de 6 étant dans des cages séparées, dans des conditions de température, d'humidité et de luminosité contrôlées.

L'émulsion préparée dans l'exemple 1 a été diluée sans délai dans une solution physiologique pour injection à 8mg/ml, appelée par la suite EP1031-P A.baumannii est stockée congelée à -80°C surdes CryoBilles.

Au jour J1, une cryobille a été placée sur gélose de sang (Blood agar, ref PB5039A, Oxoid) et incubée pendant 24 h à 37°C sous conditions aérobie. On a ensuite préparé une suspension des bactéries dans une solution saline physiologique pour obtenir une concentration de 5,6 CFU de A.baumannii dans 50p1. Infection : Groupe 1 : A TO, chez 6 souris, dans la partie droite de l'abdomen on a injecté par voie intrapéritonéale 5,6 CFU de A.baumannii dans 50p1. On a procédé de la même façon pour le Groupe 2.

Traitement : Groupe 1 : A TO, c'est-à-dire immédiatement après l'infection par A.baumannii, on a injecté aux 6 souris par voie intrapéritonéale 100pL de EP1031-P soit 40mg/kg, dans le côté gauche de l'abdomen. A T-3heures, on a injecté aux 6 souris, par voie intrapéritonéale 100pL de EP1031-P soit 40mg/kg, dans le côté droit de l'abdomen. La dose totale était donc de 80 mg/Kg.

Groupe 2 : A TO, c'est-à-dire immédiatement après l'infection par A.baumannii, on a injecté aux 6 souris par voie intrapéritonéale 100pL de solution physiologique stérile, dans le côté gauche de l'abdomen. A T-3heures, on a injecté aux 6 souris, par voie intrapéritonéale 100pL de solution physiologique stérile, dans le côté droit de l'abdomen. La dose totale était donc de 80 mg/Kg.

La mortalité a été observée à 24 et 48 heures. Les résultats sont présentés dans le tableau ci-dessous : Groupe Nombre de Nombre de Mortalité de morts à morts à 48 h totale survivants à 48h 24h EP1031-P 0 0 0/6 100% (groupe 1) Témoin (groupe 2) 1 3 3/6 50% Cet essai a été dupliqué et les mêmes résultats ont été obtenus.

L'injection par voie intrapéritonéale d'une nano-émulsion contenant trans-cinnamaldéhyde, eugénol et carvacrol à 80mg/kg a protégé les souris contre la septicémie aigue induite par A.baumannii résistant aux antibiotiques classiques.

EXEMPLE 7 :Evaluation de nanoémulsions dans un modèle de sepsis à Acinetobacter baumannii L'objectif est d'évaluer l'efficacité de plusieurs produits issus de la recherche pharmaceutique en tant que thérapeutique antibiotique, administrés par voie intrapéritonéale, dans un modèle de sepsis à Acinetobacter baumannii. Le sepsis est défini comme une réaction systémique en réponse à l'agression d'un micro-organisme dont les symptômes traduisent l'atteinte de l'endothélium et des tissus, aboutissant à la défaillance d'organe. Le sepsis sévère est une cause principale de morbidité et mortalité à travers le monde, avec une incidence estimée à 0,3% aux Etats-Unis, en France et en Allemagne (Angus et al, 2001, Schuerholz et al, 2008).

Le premier modèle expérimental animal de sespsis a été validé et publié en 1989 (Obana et al). Le choix des souris C3H/HeN explicité dans la publication de 1997 (Jolly-Guillou et al) se fonde sur une sensibilité particulière de ces souris au MPS d'Acinetobacter baumannii augurant d'une bonne reproductibilité des résultats et donc d'une analyse statistique fiable. Acinetobacter baumannii est un germe opportuniste, responsable d'infections nosocomiales variées et parfois sévères : pneumonie, infection urinaire et infection des tissus mous. Il est inoculé par voie intrapéritonéale. Un état septique persistant est observé. L'infection progresse rapidement, causant la mort des animaux entre 24 et 48 heures. 1. Matériels et Méthodes Animaux 36 souris femelles C3H/HeN SPF, provenant de l'élevage Janvier LABS et âgées de 6 semaines, pèsent en moyenne 20 grammes +/- 4 grammes. Elles sont choisies en raison de leur sensibilité particulière vis-à-vis d'Acinetobacter baumannii, et en raison de la reproductibilité des résultats de par la consanguinité de la race. Le temps d'acclimatation des animaux est de 7 jours avant toute expérimentation. Les souris sont randomisées (répartition aléatoire dans les différents groupes thérapeutiques) en groupe de 6 souris par cage. Les cages sont placées dans des enceintes ventilées et contrôlées en atmosphère (température, hygrométrie), dans une salle spécifiquement dédiée à l'hébergement des animaux réservés à l'expérimentation animale.

Souche bactérienne Acinetobacter baumannii : souche clinique de référence du laboratoire de microbiologie du CHU d'Angers : SAN 005, 5 générant une mortalité entre 80% et 100% et multirésistante aux antibiotiques. Acinetobacter baumannii SAN est résistante aux : -bêta-lactamines : amoxicilline et augmentin 10 -céphalosporines de troisième génération : cefixime et ceftriaxone -céphalosporine de première génération : cefalotine -monobactames : aztreonam -quinolones : acide nalidixique, ofloxacine, 15 ciprofloxacine, norfloxacine -aminosides: tobramycine, gentamycine, netilmicine, kanamycine -carbapénèmes : ertapénème -cyclines : doxycycline 20 -furanes -carboxypénicilline : temocilline -céphamycines : cefotixine -fosfomycine -cotrimoxazole 25 Réactifs et milieux de culture - Ampoules Api NaC1 0,85% Médium, 2 ml, réf.20070, BioMérieux 30 - Géloses au sang, réf.PB5039A, Oxoid - Eau qualité 1 en tubes en verre de 10 ml autoclavés provenant du réservoir ELGA couplé à un système PURELAB - Versol NaC1 0,9% pour irrigation, réf.600020, Laboratoire Aguettant Produits à tester EP 1031 est une combinaison d'actifs : eugénol (70%), carvacrol (15%), cinnamaldéhyde (15%). A2 : EP1031 à 30 mg/m1 d'actifs + 10 mg/m1 de stabilisant (poloxamer). Formulation blanche présentant un début de déphasage huileux vers le fond à reception A3 : EP1031 à 30 mg/m1 d'actifs + 30 mg/m1 de stabilisant (poloxamer). Formulation blanche stable à réception. A4 : EP1031 à 60 mg/m1 d'actifs + 60 mg/m1 de stabilisant (poloxamer). Formulation translucide stable à réception. Les formulations Al à A4 ont été préparées en utilisant le même procédé que dans l'exemple 2 ci-dessus. Les quantités d'actifs et de stabilisant (Poloxamer) sont adaptées. EP1032 est une combinaison d'actifs : carvacrol (70%), eugénol (15%), cinnamaldéhyde (15%). B1 : EP1032 à 60 mg/m1 + 60 mg/m1 de stabilisant (Poloxamer). Formulation blanche stable à réception. EP1012 contient du cinnamaldéhyde (100%) Cl : EP1012 à 60 mg/m1 d'actif + 60 mg/m1 de stabilisant (Poloxamer). Formulation blanche déphasée à réception : présence d'une quantité importante de poudre blanche au fond du flacon.

Méthodes Le modèle de sepsis à Acinetobacter baumannii a pour objectif de permettre de travailler sur des souches bactériennes responsables d'infections nosocomiales possiblement multi-résistantes voire toto-résistantes. Ce modèle rend possible le criblage de molécules anti infectieuses en 48 heures et donc d'évaluer rapidement l'efficacité thérapeutique de nouveaux agents anti- microbiens. Préparation des souches bactériennes Les souches sont conservées sous la forme de cryobilles à -80°C. A J-1, chaque souche est sortie du congélateur et ensemencée sur une bille encore congelée sur une gélose au sang à l'aide d'une oese. La gélose est mise à l'étuve à 37°C et cultivée en aérobie pendant 24 heures.

Déroulement de l'étude 36 souris CH3/HeN femelles sont réparties en 6 groupes de 6 animaux : -Groupe 1 : 6 souris reçoivent deux injections par jour pendant 1 jour par IP à 3h d'intervalle de 100 pl de sérum physiologique 3h avant l'inoculation et juste après inoculation. -Groupe 2 : 6 souris reçoivent deux injections par jour pendant 1 jour par IP à 3h d'intervalle de A2 (40mg/kg dans 100 pl, soit 80 mg/kg par jour), 3h avant l'inoculation et juste après inoculation. -Groupe 3 : 6 souris reçoivent deux injections par jour pendant 1 jour par IP à 3h d'intervalle de A3 (40mg/kg dans 100 pl, soit 80 mg/kg par jour), 3h avant l'inoculation et juste après inoculation. -Groupe 4 : 6 souris reçoivent deux injections par jour pendant 1 jour par IP à 3h d'intervalle de A4 (40mg/kg dans 100 pl, soit 80 mg/kg par jour), 3h avant l'inoculation et juste après inoculation. -Groupe 5 : 6 souris reçoivent deux injections par jour pendant 1 jour par IP à 3h d'intervalle de B1 (40mg/kg dans 100 pl, soit 80 mg/kg par jour), 3h avant l'inoculation et juste après inoculation. -Groupe 6 : 6 souris reçoivent deux injections par jour pendant 1 jour par IP à 3h d'intervalle de Cl (40mg/kg dans 100 pl, soit 80 mg/kg par jour), 3h avant l'inoculation et juste après inoculation. 15 a. TO Administration des produits: 20 -Groupe 1 : 100 pl de sérum physiologique sont injectés par voie IP à chacune des 6 souris du groupe 1 dans le flanc droit -Groupe 2 : 266 pl de A2 à 30 mg/ml sont ajoutés à 734 pl 25 de sérum physiologique stérile (solution à 8 mg/ml) et 100 pl sont injectés par voie IP à chacune des 6 souris du groupe 2 (soit 40 mg/kg), dans le flanc droit. -Groupe 3 : 266 pl de A3 à 30 mg/ml sont ajoutés à 734 pl 30 de sérum physiologique stérile (solution à 8 mg/ml) et 100 pl sont injectés par voie IP à chacune des 6 souris du groupe 3 (soit 40 mg/kg), dans le flanc droit. 10 -Groupe 4 : 133 pl de A4 à 60 mg/ml sont ajoutés à 867 pl de sérum physiologique stérile (solution à 8 mg/ml) et 100 pl sont injectés par voie IP à chacune des 6 souris du groupe 4 (soit 40 mg/kg), dans le flanc droit. -Groupe 5 : 133 pl de B1 à 60 mg/ml sont ajoutés à 867 pl de sérum physiologique stérile (solution à 8 mg/ml) et 100 pl sont injectés par voie IP à chacune des 6 souris du groupe 5 (soit 40 mg/kg), dans le flanc droit. -Groupe 6 : 133 pl de Cl à 60 mg/ml sont ajoutés à 867 pl de sérum physiologique stérile (solution à 8 mg/ml) et 100 pl sont injectés par voie IP à chacune des 6 souris du groupe 6 (soit 40 mg/kg), dans le flanc droit. b. T3 : 3 heures après TO - Inoculation bactérienne : l'inoculum bactérien est une suspension en sérum physiologique de 5.106 CFU 20 dans 50 pl, administré en intrapéritonéal dans le flanc droit, à chacune des 12 souris. - Administration des produits: 25 -Groupe 1 : 100 pl de sérum physiologique sont injectés par voie IP à chacune des 6 souris du groupe 1 dans le flanc gauche -Groupe 2 : 266 pl de A2 à 30 mg/ml sont ajoutés à 734 pl 30 de sérum physiologique stérile (solution à 8 mg/ml) et 100 pl sont injectés par voie IP à chacune des 6 souris du groupe 2 (soit 40 mg/kg), dans le flanc gauche. 10 15 -Groupe 3 : 266 pl de A3 à 30 mg/ml sont ajoutés à 734 pl de sérum physiologique stérile (solution à 8 mg/ml) et 100 pl sont injectés par voie IP à chacune des 6 souris du groupe 3 (soit 40 mg/kg), dans le flanc gauche. -Groupe 4 : 133 pl de A4 à 60 mg/ml sont ajoutés à 867 pl de sérum physiologique stérile (solution à 8 mg/mi) et 100 pl sont injectés par voie IP à chacune des 6 souris du groupe 4 (soit 40 mg/kg), dans le flanc gauche. -Groupe 5 : 133 pl de B1 à 60 mg/m1 sont ajoutés à 867 pl de sérum physiologique stérile (solution à 8 mg/mi) et 100 pl sont injectés par voie IP à chacune des 6 souris du groupe 5 (soit 40 mg/kg), dans le flanc gauche. -Groupe 6 : 133 pl de Cl à 60 mg/m1 sont ajoutés à 867 pl de sérum physiologique stérile (solution à 8 mg/mi) et 100 pl sont injectés par voie IP à chacune des 6 souris du groupe 6 (soit 40 mg/kg), dans le flanc gauche. La mortalité est relevée à 24 heures et à 48 heures. 2. Résultats morts dans morts dans les nombre morts de les 24 h 48 h Témoins (Groupe 1) 3 3 6 sur 6 A2 (Groupe 2) 0 1 1 sur 6 A3 (Groupe 3) 0 1 1 sur 6 A4 (Groupe 4) 0 0 0 sur 6 B1 (Groupe 5) 0 2 2 sur 6 Cl (Groupe 6) 1 3 4 sur 6 -Dans le lot témoin, 3 souris sur 6 meurent dans les 24 heures, et 3 souris sur 6 meurent dans les 48 heures. -Dans le lot de souris traitées avec A2 à la posologie de 40 mg/kg, 3 heures avant l'inoculation bactérienne et juste après l'inoculation, 1 souris sur 6 meurt dans les 48 heures. -Dans le lot de souris traitées avec A3 à la posologie de 40 mg/kg, 3 heures avant l'inoculation bactérienne et juste après l'inoculation, 1 souris sur 6 meurt dans les 48 heures. -Dans le lot de souris traitées avec A4 à la posologie de 40 mg/kg, 3 heures avant l'inoculation bactérienne et juste après l'inoculation, aucune souris ne meurt. -Dans le lot de souris traitées avec B1 à la posologie de 40 mg/kg, 3 heures avant l'inoculation bactérienne et juste après l'inoculation, 2 souris sur 6 meurent dans les 48 heures. -Dans le lot de souris traitées avec Cl à la posologie de 40 mg/kg, 3 heures avant l'inoculation bactérienne et juste après l'inoculation, 1 souris sur 6 meurt dans les 24 heures, et 3 souris sur 6 meurent dans les 48 heures. -Toutes les souris du lot témoins sont mortes au bout de 48 heures. -Le traitement par A2 à la posologie de 40 mg/kg, 3 heures avant l'inoculation bactérienne et juste après l'inoculation, permet de sauver 83 % des souris. -Le traitement par A3 à la posologie de 40 mg/kg, 3 heures avant l'inoculation bactérienne et juste après l'inoculation, permet de sauver 83 % des souris. -Le traitement par A4 à la posologie de 40 mg/kg, 3 heures avant l'inoculation bactérienne et juste après l'inoculation, permet de sauver 100 % des souris. -Le traitement par B1 à la posologie de 40 mg/kg, 3 heures avant l'inoculation bactérienne et juste après l'inoculation, permet de sauver 66 % des souris. -Le traitement par A4 à la posologie de 40 mg/kg, 3 heures avant l'inoculation bactérienne et juste après l'inoculation, permet de sauver 33 % des souris. Conclusion L'administration de A4 permet de sauver 100% des souris, et aucune souris n'a montré de signe de maladie ou défaillance au long de ces 48 heures.

Claims (13)

1. REVENDICATIONS1. Trans-cinnamaldéhyde, éventuellement en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol destiné à une utilisation dans 5 la prévention de l'émergence d'un phénotype de résistance chez un agent pathogène.
2. 2. Trans-cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol destiné à une utilisation dans la prévention et/ou le traitement d'une infection par un 10 pathogène, dans laquelle l'apparition d'un phénotype de résistance chez ledit agent pathogène est empêchée.
3. 3. Trans-cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol destiné à être utilisé en tant qu'antibiotique ne développant pas de phénotype de résistance. 15
4. 4. Procédé in vitro pour empêcher l'apparition d'un phénotype de résistance chez un agent pathogène caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à: - fournir du trans-cinnamaldéhyde, éventuellement en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol ; 20 - mettre en contact le trans-cinnamaldéhyde, éventuellement en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol, avec ledit agent pathogène.
5. 5. Procédé selon la revendication 4, trans-cinnamaldéhyde destiné à une utilisation selon la revendication 1, ou Trans- 25 cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol destiné à une utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisé en ce que le transcinnamaldéhyde, éventuellement en association avec de l'eugénol et/ou le carvacrol, est fourni sous forme d'une 30 émulsion, et de préférence sous forme d'une nanoémulsion.
6. 6. Procédé selon la revendication 5, trans-cinnamaldéhyde destiné à une utilisation selon la revendication 5, ou Transcinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou duNotif irr_Sept14 47 carvacrol destiné à une utilisation selon la revendication 5, caractérisé en ce que la nano-émulsion est obtenue par : - mise en contact d'eau avec du cinnamaldéhyde, éventuellement en association avec de l'eugénol et/ou du 5 carvacrol afin d'obtenir des phases immiscibles ; - éventuellement ajustement du pH à 7, 0 +/- 0,3 à l'aide d'une base minérale ; - éventuellement ajout d'un agent stabilisant, de préférence un agent stabilisant non ionique à propriétés tensio-actives ; 10 - homogénéisation des phases immiscibles ainsi obtenues dans un homogénéiseur haute pression, ladite pression allant de 300 à 5000 bars, de préférence de 500 à 3000 bars et plus préférentiellement encore de 800 à 2000 bars.
7. 7. Procédé selon l'une quelconque des revendications 4 à 6, 15 ou Trans-cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol ou du carvacrol destiné à une utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 6, caractérisé en ce que le transcinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol ou du carvacrol est fourni dans un ratio massique de 20/80 à 80/20, 20 de préférence de 30/70 à 70/30 et plus préférentiellement de 50/50.
8. 8. Procédé selon l'une quelconque des revendications 4 à 6 ou Trans-cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et du carvacrol destiné à une utilisation selon l'une quelconque des 25 revendications 1 à 6, caractérisé en ce que le transcinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et du carvacrol est fourni dans un ratio massique de 10/10/80 à 80/10/10, de préférence de 15/15/70 à 70/15/15 et plus préférentiellement de 33/33/33. 30
9. 9. Procédé selon l'une quelconque des revendications 4 à 8, trans-cinnamaldéhyde destiné à une utilisation selon la revendicatiOn 1, ou Trans-cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol destiné à une utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractériséNotif irr_Sept14 48 en que l'agent pathogène est une bactérie choisie dans les familles suivantes : - la famille des Staphylococcaceae, en particulier le genre Staphylococcus, représenté par les espèces Staphylococcus 5 aureus (S.aureus ou staphylocoque doré) et Staphylococcus epidermidis; - la famille des Enterococcaceae, en particulier le genre Enterococcus, représenté par les espèces Enterococcus faecalis, Enterococcus faecium, Enterococcus avium et 10 Enterococcus gallinarum; - la famille des Clostridiaceae, en particulier le genre Clostridium, représenté par les espèces Clostridium difficile et Clostridium sp; - la famille des Streptococcaceae, y compris les 15 Streptocoques hémolytiques A et B, en particulier le genre Streptococcus, représenté par les espèces Streptococcus pneumoniae, Streptococcus agalactiae, Streptococcus viridans, Streptococcus et Streptococcus pyogenes ; - la famille des Aerococcaceae, en particulier le genre 20 Aerococcus représenté par l'espèce Aerococcus viridans ; - la famille des Micrococcaceae, en particulier le genre Micrococcus ; - la famille des Lactobacillaceae, en particulier le genre Lactobacillus ; 25 - la famille des Nocardiaceae, en particulier le genre Nocardia, représenté par les espèces Nocardia astéroïdes, Nocardia brasiliensis et Nocardia caviae ; - la famille des Listeriaceae, en particulier le genre Listeria, représenté par l'espèce Listeria monocytogenes; 30 - la famille des Corynebacteriaceae, en particulier le genre Corynebacterium ; - la famille des Bacillaceae, en particulier le genre Bacillus, représenté par les espèces Bacillus anthracis et Bacillus cereus ;Notif irr_Sept14 49 la famille des Propionibacteriaceae, en particulier le genre Propionibacterium, représenté par l'espèce Propionibacterium acnés ; - la famille des Peptococcaceae, en particulier le genre 5 Peptococcus, représenté par l'espèce Peptococcus magnus ; - la famille des Mbraxellaceae, en particulier le genre Acinetobacter, représenté par les espèces Acinetobacter baumannii et Acinetobacter calcoaceticus ; - la famille des Legionellaceae, en particulier le genre 10 Legionella, représenté par les espèces Legionella Pneumophila, Legionella longbeachae, Legionella bozmanii, et Legionella micdader ; - la famille des Enterobacteriaceae, en particulier le genre Enterobacter, représenté par l'espèces Enterobacter cloacae, 15 le genre Escherichia, représenté par les espèces Escherichia coli et Escherichia hermannii, le genre Klebsiella, représenté par les espèces Klebsiella pneumoniae et Klebsiella oxytoca, le genre Serratia, représenté par l'espèce Serratia marcescens, le genre Citrobacter, représenté par les espèces 20 Citrobacter freundii et Citrobacter koseri, et les genres Salmonella, Shigella et Proteus; - la famille Pseudomonadaceae, en particulier le genre Pseudomonas, représenté par les espèces Pseudomonas aeruginosa (P. aeruginosa), Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida 25 et Pseudomonas stutzeri ; - la famille Alcaligenaceae, en particulier le genre Achromobacter, représenté par les espèces Achromobacter xylosoxidans et Achromobacter denitrificans; - la famille Sphingomonadaceae, en particulier le genre 30 Sphingomonas, représenté par l'espèce Sphingomonas paucimobilis; - la famille des Pasteurellaceae, en particulier le genre Haemophilus, représenté par les espèces Haemophilus influenzae et Haemophilus parainfluenzae;Notif irr_Sept14 50 - la famille des Moraxellaceae, en particulier le genre Moraxella, représenté par l'espèce Moraxella catarrhalis; - la famille des Neisseriaceae, en particulier le genre Kingella, représenté par l'espèce Kingella kingae ; la famille des Pasteurellaceae, en particulier le genre Pasteurella, représenté par l'espèce Pasteurella multicida; - la famille des Flavobacteriaceae, en particulier le genre Capnocytophaga, représenté par l'espèce Capnocytophaga canimorsus; - la famille des Neisseriaceae, en particulier le genre Neisseria, représenté par les espèces Neisseria gonorrhoeae et Neisseria lactamica ; - le genre Campylobacter, représenté par les espèces C. jejuni, et C. cou ; - la famille des Bacteroidaceae, en particulier le genre Bacteroides, représenté par l'espèce Bacteroides fragilis; - la famille des Stenotrophomonas, en particulier, les espèces S. nitritireducens et S. maltophilia ; - la famille des méningoccoques, en particulier les espèces 20 Neisseria meningitidis; et - la famille des Fusobacteriaceae, en particulier le genre Fusobacterium.
10. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications 4 à 9, trans-cinnamaldéhyde destiné à une utilisation selon la 25 revendication 1, ou Trans-cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol destiné à une utilisation selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en que l'agent pathogène est une bactérie choisie parmi les souches appartenant aux genres suivants : 30 - genre Acinetobacter, représenté par les espèces Acinetobacter baumannii et Acinetobacter calcoaceticus ; - genre Staphylococcus, représenté par les espèces Staphylococcus aureus (S.aureus ou staphylocoque doré) et Staphylococcus epidermidis;Notif irr_S ept14 51 - genre Escherichia, représenté par les espèces Escherichia coli et Escherichia hermannii ; - genre Klebsiella, représenté par les espèces Klebsiella pneumoniae et Klebsiella oxytoca ; - genre Listeria, représenté par l'espèce Listeria monocytogenes; - genre Salmonella, représenté par l'espèce Salmonella enteritidis; et - genre Pseudomonas, représenté par les espèces Pseudomonas 10 aeruginosa, Pseudomonas fluorescens, Pseudomonas putida et Pseudomonas stutzeri.
11. 11. Trans-cinnamaldéhyde destiné à une utilisation selon la revendication 5, ou Trans-cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol destiné à une utilisation 15 selon la revendication 5, caractérisé par le fait que l'émulsion est administrée par la voie parentérale, orale, transmuqueuse, percutanée, pulmonaire, et plus particulièrement par la voie intraveineuse.
12. 12. Procédé selon la revendication 5, Trans-cinnamaldéhyde 20 destiné à une utilisation selon la revendication 5 ou 11, ou Trans-cinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol destiné à une utilisation selon la revendication 5 ou 11, caractérisé par le fait que l'émulsion est une nanoémulsion de type huile dans eau qui présente des 25 gouttelettes hydrophobes de taille moyenne inférieure à 10 à 500 nm, de préférence de 20 à 350 nm et plus préférentiellement encore de 50 à 250 nm et ayant un potentiel zeta allant de -2 mV à -80 mV, de préférence de -5 mV à -60 mv et plus préférentiellement encore de -10mV à -40mV. 30
13. 13. Procédé selon la revendication 11 ou 12, Transcinnamaldéhyde destiné à une utilisation selon l'une quelconque des revendications 5, 11 à 12, ou Transcinnamaldéhyde en association avec de l'eugénol et/ou du carvacrol destiné à une utilisation selon l'une quelconque desNotif irr_S ept 1 4 52 revendications 5, 11 à 12, caractérisé par le fait que l'émulsion est dépourvue de tout agent stabilisant.