FR2989085A1 - RADIOTRACTERS, METHODS OF PREPARATION AND APPLICATIONS - Google Patents

Abstract

La présente invention est relative à de nouveaux radiotraceurs de formule (III) : lesdits composés de formule (III) étant susceptibles d'être obtenus à partir de nouveaux agents complexants de formule (II), eux-mêmes susceptibles d'être obtenus à partir de nouveaux précurseurs de formule (I), ainsi que leurs procédés de préparation. L'invention concerne également un kit susceptible d'être utilisé en milieu hospitalier. Enfin, l'invention vise des composés de formule (III) pour leur utilisation comme radiotraceur diagnostique, et plus particulièrement pour leur utilisation comme radiotraceur non-ciblant pour l'imagerie médicale ou comme radiotraceur ciblant intégré, ainsi que leur utilisation comme médicament, et plus particulièrement pour des traitements radio-thérapeutiques ciblés utilisant des agents chélatants bifonctionnels.The present invention relates to novel radiotracers of formula (III): said compounds of formula (III) being capable of being obtained from new complexing agents of formula (II), themselves capable of being obtained from new precursors of formula (I), as well as their methods of preparation. The invention also relates to a kit that can be used in a hospital environment. Finally, the invention relates to compounds of formula (III) for their use as a diagnostic radiotracer, and more particularly for their use as a non-targeting radiotracer for medical imaging or as an integrated targeting radiotracer, as well as their use as a medicament, and more particularly for targeted radiotherapeutic treatments using bifunctional chelating agents.

Description

La présente invention concerne de nouveaux radiotraceurs de formule (III), susceptibles d'être obtenus à partir de nouveaux agents complexants de formule (II), eux- mêmes susceptibles d'être obtenus à partir de nouveaux précurseurs de formule (I), ainsi que leurs procédés de préparation. L'invention concerne également un kit susceptible d'être utilisé en milieu hospitalier. Enfin, l'invention vise des composés de formule (III) pour leur utilisation comme radiotraceur diagnostique, et plus particulièrement pour leur utilisation comme radiotraceur non-ciblant pour l'imagerie médicale ou comme radiotraceur ciblant intégré, ainsi que leur utilisation comme médicament, et plus particulièrement pour des traitements radio-thérapeutiques ciblés utilisant des agents chélatants bifonctionnels. The present invention relates to new radiotracers of formula (III), obtainable from new complexing agents of formula (II), themselves obtainable from new precursors of formula (I), and as their preparation processes. The invention also relates to a kit that can be used in a hospital environment. Finally, the invention relates to compounds of formula (III) for their use as a diagnostic radiotracer, and more particularly for their use as a non-targeting radiotracer for medical imaging or as an integrated targeting radiotracer, as well as their use as a medicament, and more particularly for targeted radiotherapeutic treatments using bifunctional chelating agents.

La connaissance du fonctionnement des organismes vivants est conditionnée par le développement de méthodes d'exploration non invasives. La radioactivité artificielle fournit des outils d'imagerie médicale qui permettent de visualiser les phénomènes chimiques et biologiques au sein même des organismes. Dès lors, le développement de radiotraceurs (ou radio-pharmaceutiques) est devenu un domaine très étudié de la recherche médicale. Il s'agit d'après la définition officielle de médicaments à visée diagnostique, pronostique, voire thérapeutique qui émettent des ondes radioactives. Les radiotraceurs contiennent un ou plusieurs isotopes radioactifs (ou radio-isotopes), les radionucléides (ou radioéléments métalliques), incorporés à des fins médicales, et un vecteur (une molécule ou un ensemble supramoléculaire présentant une activité biologique sur les organismes vivants). Knowledge of the functioning of living organisms is conditioned by the development of non-invasive exploration methods. Artificial radioactivity provides medical imaging tools that visualize chemical and biological phenomena within organisms. Since then, the development of radiotracers (or radio-pharmaceuticals) has become a highly studied area of medical research. This is according to the official definition of drugs for diagnostic, prognostic or even therapeutic purposes that emit radioactive waves. Radiotracers contain one or more radioactive isotopes (or radioisotopes), radionuclides (or metal radioelements), incorporated for medical purposes, and a vector (a molecule or supramolecular group with biological activity on living organisms).

La médecine nucléaire est actuellement utilisés dans trois grands domaines médicaux : l'imagerie fonctionnelle (ou scintigraphie), la radiothérapie, et la radio-immunologie. Utilisée en imagerie, elle permet de visualiser la présence ou non de la cible dans l'organisme, une cellule tumorale par exemple, ou de constater une anomalie anatomique (1231 ou Tc04- par exemple permettent de surveiller la taille de la glande thyroïdienne, Spencer R. et al., Clinical Nuclear Medicine, 1997. 22(8) : p. 519-522 ; Arnold, J. E. et al., Journal of Nuclear Medicine, 1976. 17(4) : p. 261-267). Grâce à un dispositif d'acquisition externe (f3-imager, y-camera, scanner), le rayonnement émis par le radionucléide peut être enregistré et, après traitement informatique, une image en deux ou trois dimensions permet de visualiser les niveaux de concentration en radiotraceurs. L'imagerie nucléaire est une méthode d'imagerie dite fonctionnelle ou dynamique. Elle permet, par exemple, de visualiser en temps réel les écoulements sanguins (intracérébraux, cardiaques...), permettant ainsi de prévenir l'apparition d'infarctus (Iida, H. et al., European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging, 2008. 35(5) : p. 896-905) et d'étudier certaines maladies dégénératives comme la maladie d'Alzheimer (Hanyu, H., et al., Journal of the Neurological Science, 2010. 290(1) : p. 96-101) ou de Parkinson (Stoessl, A., Neurotherapeutics, 2011. 8(1) : p. 72-81). Elle est un outil précieux dans l'étude de certains métabolismes et est aussi utilisée pour évaluer la réponse à la chimiothérapie (Cachin, F. et al., Bull. Cancer, 2006. 93 : p. 1191). L'imagerie isotopique est couramment utilisée dans l'industrie pharmaceutique pour réaliser les preuves de concepts de nouveaux médicaments en phase préclinique, ou pour évaluer les posologies en phase clinique (Wong, D.F., J. Nucl. Med., 2008. 49(6) : p. 26N-28 ; Hwang, D.-R. et al., J. Nucl. Med., 2008. 49(6) : p. 24N-25). En sélectionnant un radiotraceur ayant une affinité élevée pour une cible choisie, on peut mettre en évidence cette cible sur une image 2D ou 3D du patient. L'énorme avantage des techniques d'imagerie impliquant un radiotraceur, dites internes, par rapport aux techniques d'imagerie classiques (RX...), dites externes, est leur très grande sensibilité. En effet des quantités de radiotraceurs de l'ordre du nanogramme sont détectables. Les premières scintigraphies ont été développées à l'aide d'émetteurs y. En effet le rayonnement émis possède les caractéristiques essentielles pour l'imagerie : TEL (Transfert d'Energie Linéique) faible qui limite l'effet destructeur du rayonnement, pouvoir pénétrant élevé afin de détecter le rayonnement hors du corps, et une énergie comprise entre 100 et 400 keV (idéalement 150 keV). Trois méthodes sont utilisées en fonction de la nature bidimensionnelle ou tridimensionnelle des images souhaitées : Les images 2D sont obtenues à l'aide d'une y-caméra située au-dessus du patient. Les rayonnements issus du radiotraceurs sont recueillis au travers d'un collimateur par un cristal d'iodure de sodium dopé au thallium qui présente une forte sensibilité aux rayonnements. Un dispositif informatique permet alors d'obtenir l'image 2D de la zone observée. Cette technique permet l'acquisition d'images dynamiques et peut donc être utilisée pour visualiser des écoulements ou étudier des métabolismes. Nuclear medicine is currently used in three major medical fields: functional imaging (or scintigraphy), radiotherapy, and radioimmunology. Used in imaging, it allows to visualize the presence or absence of the target in the body, for example a tumor cell, or to note an anatomical anomaly (1231 or Tc04- for example to monitor the size of the thyroid gland, Spencer R. et al., Clinical Nuclear Medicine, 1997. 22 (8): pp. 519-522, Arnold, JE et al., Journal of Nuclear Medicine, 1976. 17 (4): 261-267). Thanks to an external acquisition device (f3-imager, y-camera, scanner), the radiation emitted by the radionuclide can be recorded and, after computer processing, an image in two or three dimensions makes it possible to visualize the concentration levels. radiotracers. Nuclear imaging is a so-called functional or dynamic imaging method. It allows, for example, to visualize in real time the blood flows (intracerebral, cardiac ...), thus making it possible to prevent the appearance of infarction (Iida, H. et al., European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging , 2008. 35 (5): 896-905) and to study certain degenerative diseases such as Alzheimer's disease (Hanyu, H., et al., Journal of the Neurological Science, 2010. 290 (1): 96-101) or Parkinson's (Stoessl, A., Neurotherapeutics, 2011. 8 (1): 72-81). It is a valuable tool in the study of certain metabolisms and is also used to evaluate the response to chemotherapy (Cachin, F. et al., Bull Cancer, 2006. 93: 1191). Isotope imaging is commonly used in the pharmaceutical industry to provide evidence of concepts of new drugs in the preclinical phase, or to evaluate dosages in the clinical phase (Wong, DF, J. Nucl Med, 2008. 49 (6 ): 26N-28, Hwang, D.R., et al., J. Nucl Med, 2008. 49 (6): 24N-25). By selecting a radiotracer with a high affinity for a chosen target, this target can be highlighted on a 2D or 3D image of the patient. The huge advantage of imaging techniques involving a radiotracer, called internal, compared to conventional imaging techniques (RX ...), called external, is their very high sensitivity. Indeed, quantities of radiotracers of the nanogram order are detectable. The first scintigraphies were developed using emitters y. In fact, the emitted radiation has the essential characteristics for imaging: weak TEL (Linear Energy Transfer) which limits the destructive effect of the radiation, high penetrating power in order to detect the radiation outside the body, and an energy of between 100 and 400 keV (ideally 150 keV). Three methods are used depending on the two-dimensional or three-dimensional nature of the desired images: 2D images are obtained using a y-camera located above the patient. Radiation from radiotracers is collected through a collimator by a thallium doped sodium iodide crystal which has a high sensitivity to radiation. A computer device then makes it possible to obtain the 2D image of the area observed. This technique allows the acquisition of dynamic images and can be used to visualize flows or study metabolisms.

La méthode TEMP (Tomographie d'Emission Monophotonique) ou SPECT en anglais (Single Photon Emission Computed Tomography) consiste à appliquer la technique du scanner couplée à l'utilisation d'une ou plusieurs y-caméras. Celles-ci tournent autour du patient et réalisent régulièrement une acquisition 2D, l'ensemble de ces acquisitions est ensuite traité pas un algorithme informatique de façon à obtenir une reconstruction 3D dont le spécialiste pourra extraire les coupes 2D nécessaires pour formuler son diagnostic. La méthode TEP (Tomographie d'Emission de Positrons) ou PET en anglais (Positron Emission Tomography), analogue à la méthode TEMP permet, à l'aide d'une couronne de y-caméras, de détecter sélectivement les photons antiparallèles d'annihilation (y - 511 keV) provenant de l'interaction avec les électrons environnants de positrons émis par un radionucléide émetteur 13+. Le signal tridimensionnel donne, après retraitement informatique, une image en 3D. L'utilisation de radionucléides émettant des rayonnements plus ionisants peut également permettre de détruire les cellules situées au voisinage du radiotraceur. C'est le principe de la radiothérapie dirigée. On distingue quatre types de radiothérapie : - La radiothérapie métabolique qui utilise une molécule marquée participant au métabolisme comme dans le cas de 131I. L'iode est directement assimilé au niveau de la glande thyroïdienne et va permettre le traitement du cancer de la thyroïde (Parthasarathy, K. The TEMP (Monophotonic Emission Tomography) or SPECT (Single Photon Emission Computed Tomography) method consists in applying the scanner technique coupled to the use of one or more y-cameras. These revolve around the patient and regularly perform a 2D acquisition, all of these acquisitions is then treated by a computer algorithm to obtain a 3D reconstruction which the specialist can extract the 2D sections necessary to formulate its diagnosis. The PET (Positron Emission Tomography) or PET (Positron Emission Tomography) method, analogous to the TEMP method, allows, using a ring of y-cameras, to selectively detect antiparallel photons of annihilation. (y-511 keV) from the interaction with surrounding electrons of positrons emitted by a 13+ emitting radionuclide. The three-dimensional signal gives, after computer processing, a 3D image. The use of radionuclides emitting more ionizing radiation can also destroy the cells located in the vicinity of the radiotracer. This is the principle of directed radiotherapy. There are four types of radiotherapy: - Metabolic radiotherapy that uses a marked molecule participating in the metabolism as in the case of 131I. Iodine is directly assimilated at the level of the thyroid gland and will allow the treatment of thyroid cancer (Parthasarathy, K.

L. et al., Journal of Nuclear Medicine Technology, 2002. 30(4) : p. 165-171). La radiothérapie locale qui consiste à injecter le radiotraceur directement au niveau de la cible pour un effet très localisé. C'est une technique préconisée pour le traitement de l'arthrite rhumatoïde par injection dans l'articulation (Liepe, K. et al., Aimais of Nuclear Medicine, 2011. 25(5) : p. 317-323 ; Das, B., Biomedical Imaging and Intervention Journal, 2007. 3(4) : p. 1). - La radio-immunothérapie consiste à atteindre la cible via un anticorps marqué visant un antigène particulier. Il peut s'agir par exemple d'un antigène exprimé à la surface de cellules tumorales. Cette technique présente l'avantage d'être très précise en raison de la haute spécificité des anticorps (Schubiger, P.A. et al., Bioconjugate Chemistry, 1996. 7(2) : p. 165-179 ; Perkins, A.C., Biomedical Imaging and Intervention Journal, 2005 : p. 2), mais connaît des limitations liées à la fois à la diffusion lente des anticorps vers leur cible biologique, et à l'hétérogénéité de marquage des anticorps liée à la bioconjugaison non régiospécifique des résidus lysine de surface. - La radiothérapie vectorisée est la plus répandue. Elle consiste à utiliser une structure servant de vecteur qui va assurer la spécificité du traceur pour la cible. Cette structure peut avoir de multiples formes : un composé chimique comme un peptide (GarcïaGarayoa, E. et al., Nuclear Science and Techniques, 2007. 18(2) : p. 88-100) ou une structure résultant d'une formulation particulière connue comme un liposome (Bao, A., et al., J Nucl Med, 2003. 44(12) : p. 1992-1999). L. et al., Journal of Nuclear Medicine Technology, 2002. 30 (4): p. 165-171). Local radiotherapy which involves injecting the radiotracer directly at the target for a very localized effect. This is a preferred technique for the treatment of rheumatoid arthritis by injection into the joint (Liepe, K. et al., Aimais of Nuclear Medicine, 2011. 25 (5): 317-323; Biomedical Imaging and Intervention Journal, 2007. 3 (4): 1). - Radioimmunotherapy consists of reaching the target via a labeled antibody targeting a particular antigen. It may be for example an antigen expressed on the surface of tumor cells. This technique has the advantage of being very accurate because of the high specificity of the antibodies (Schubiger, PA et al., Bioconjugate Chemistry, 1996. 7 (2): pp. 165-179; Perkins, AC, Biomedical Imaging and Intervention Journal, 2005: 2), but has limitations related to both the slow diffusion of antibodies to their biological target, and the heterogeneity of antibody labeling related to non-regiospecific bioconjugation of surface lysine residues. - Vectorized radiotherapy is the most widespread. It consists in using a structure serving as a vector that will ensure the specificity of the tracer for the target. This structure can have multiple forms: a chemical compound such as a peptide (GarcïaGarayoa, E. et al., Nuclear Science and Techniques, 2007. 18 (2): 88-100) or a structure resulting from a particular formulation known as a liposome (Bao, A., et al., J Nucl Med, 2003. 44 (12): 1992-1999).

Enfin, la radio-immunologie consiste à utiliser des anticorps marqués par un traceur radioactif afin d'effectuer des dosages immunologiques. C'est l'extrême sensibilité de la médecine nucléaire qui est ici mise à profit. Elle rend possible le dosage de composés à des concentrations beaucoup plus faibles que par les techniques classiques. Finally, radioimmunology consists of using antibodies labeled with a radioactive tracer to perform immunological assays. It is the extreme sensitivity of nuclear medicine that is used here. It makes it possible to assay compounds at much lower concentrations than by conventional techniques.

Chaque domaine d'application requiert des radionucléides aux propriétés physicochimiques différentes. Le choix d'un radionucléide doit aussi tenir compte de ses propriétés chimiques. Le marquage doit en effet être rapide, s'effectuer en une étape, et être quantitatif. En effet, la demi-vie faible des radionucléides utilisés en imagerie interdit toute synthèse longue. Pour les applications de diagnostic et d'imagerie fonctionnelle par scintigraphie, le radionucléide le plus utilisé est le 99mTe (plus de 85% des examens de routine actuels) qui présente toutes les caractéristiques du radionucléide idéal en terme de coût, de disponibilité, de demi-vie et d'énergie. Le 99mTc présente en effet de nombreux avantages : c'est un émetteur y présentant des caractéristiques radiochimiques idéales pour l'imagerie (période : 6 heures, énergie y : 155 keV), qui est disponible sous forme de générateur portable, à un coût très abordable. Les radiotraceurs obtenus par complexation du radionucléide peuvent être classés en plusieurs catégories comme indiqué sur le Schéma L Traceurs métallés Complexes métal-essentiels Complexes bifonctionnels Ciblants Non ciblants (Complexes intégrés) Traceurs de flux Traceurs de flux anatomique métaboliques (non spécifiques) Schéma 1 : Les différentes catégories de radiotraceurs obtenus par complexation d'un radioélément On distingue deux grandes catégories de radiotraceurs préparés par complexation. Les complexes de type « métal-essentiels » et les complexes bifonctionnels. - Les complexes métal-essentiels : Dans ce premier type de radiotraceurs, le métal occupe une position centrale. Il est complexé par un agent chélatant pouvant améliorer sa stabilité in vivo et/ou lui conférer une affinité pour un tissu particulier. Each field of application requires radionuclides with different physicochemical properties. The choice of a radionuclide must also take into account its chemical properties. The marking must indeed be fast, be carried out in one step, and be quantitative. Indeed, the low half-life of the radionuclides used in imaging prohibits any long-term synthesis. For diagnostic and functional imaging scintigraphy applications, the most widely used radionuclide is 99mTe (more than 85% of current routine examinations), which has all the characteristics of the ideal radionuclide in terms of cost, availability, half life and energy. The 99mTc has many advantages: it is a transmitter with radiochemical characteristics ideal for imaging (period: 6 hours, energy y: 155 keV), which is available as a portable generator, at a very low cost. affordable. Radiotracers obtained by complexing the radionuclide can be classified into several categories as shown in Figure L Metallic tracers Metal-essential complexes Bifunctional complexes Non-target targets (Integrated complexes) Flow tracers Metabolic anatomical flow tracers (non-specific) Diagram 1: The Different categories of radiotracers obtained by complexation of a radioelement There are two main categories of radiotracers prepared by complexation. "Metal-essential" complexes and bifunctional complexes. - The metal-essential complexes: In this first type of radiotracers, the metal occupies a central position. It is complexed by a chelating agent that can improve its stability in vivo and / or confer an affinity for a particular tissue.

Les complexes métal-essentiels ciblants : Lorsque l'agent chélatant est fonctionnalisé par des groupements chimiques jouant un rôle dans son interaction spécifique avec une cible biologique, on parle de complexes intégrés. Dans ces structures, le métal joue le double rôle de radionucléide et d'agent structurant pour le radiotraceur. En l'absence de métal, la structure n'a habituellement que peu d'affinité pour la cible. Lorsque le métal est complexé, les groupements fonctionnels portés par l'agent chélatant adoptent une disposition spatiale adaptée à la reconnaissance par la cible. La structure chélatant le métal est donc incluse dans la structure ciblante. Divers radiotraceurs de ce type ont été étudiés avec des résultats assez variables. L'exemple le plus visuel de cette approche se trouve dans le domaine des stéroïdes. Plusieurs études ont en effet été réalisées dans le but de développer des mimes de stéroïdes afin de visualiser les cellules tumorales qui surexpriment leurs récepteurs. Dans ces études, les mimes de stéroïdes sont obtenus sous forme de complexes mixtes de type NS/NS représentés au Schéma 2 (Hom, R.K. et al., The Journal of Organic Chemistry, 1997. 62(18) : p. 6290-6297 ; Chi, D.Y. et al., Journal of Medicinal Chemistry, 1994. 37(7) : p. 928-937). Targeting metal-essential complexes: When the chelating agent is functionalized by chemical groups playing a role in its specific interaction with a biological target, we speak of integrated complexes. In these structures, the metal plays the dual role of radionuclide and structuring agent for the radiotracer. In the absence of metal, the structure usually has little affinity for the target. When the metal is complexed, the functional groups carried by the chelating agent adopt a spatial arrangement adapted to the recognition by the target. The chelating metal structure is therefore included in the target structure. Various radiotracers of this type have been studied with rather variable results. The most visual example of this approach is in the field of steroids. Several studies have been carried out with the aim of developing mimes of steroids in order to visualize the tumor cells that overexpress their receptors. In these studies, the steroid mimics are obtained as NS / NS-type mixed complexes shown in Scheme 2 (Hom, RK et al., The Journal of Organic Chemistry, 1997, 62 (18): 6290-6297). Chi, DY et al., Journal of Medicinal Chemistry, 1994. 37 (7): 928-937).

Schéma 2 : Approche intégrée : progestérone naturelle (à gauche) et mime de la progestérone (à droite) Le double rôle du métal peut être observé puisque, sans lui, les deux parties de la structure ne seraient pas solidaires. Si le radiotraceur obtenu présente sur le papier une structure très proche de celle de la progestérone, la réalité est toute autre. Cette molécule dont la structure diffère trop de la progestérone n'a que peu d'affinité pour le récepteur (103 fois moins active que le stéroïde naturel). Diagram 2: Integrated approach: natural progesterone (left) and mime progesterone (right) The dual role of metal can be observed since without it, the two parts of the structure would not be interdependent. If the radiotracer obtained on paper has a structure very close to that of progesterone, the reality is quite different. This molecule whose structure differs too much from progesterone has little affinity for the receptor (103 times less active than the natural steroid).

D'autres radiotraceurs intégrés sont obtenus par complexation directe du métal par la molécule biologique. Ce sont les groupes fonctionnels de la molécule utilisée qui assurent la complexation : il n'est pas nécessaire de modifier chimiquement la molécule. Par exemple, dans le cas du marquage de peptides, ce sont les groupements chélatants libres des chaînes latérales des acides aminés qui viennent complexer le radionucléide. On peut notamment citer l'exemple du marquage au 99mTc de peptides tels que l'adrénomédulline, un peptide vasodilatateur long de 52 acides aminés dont la structure comporte un enchaînement de 5 acides aminés formant un cycle grâce à un pont disulfure. Des tests d'affinité réalisés après délétion de ce cycle montrent que ce dernier est indispensable à l'affinité du peptide pour son récepteur. Dans les conditions de marquage direct, en milieu réducteur, le pont disulfure est rompu mais pourtant, l'affinité du peptide marqué est encore élevée. Ceci s'explique par le fait que les thiols libérés par la réduction du pont agissent dans la chélation du métal, reformant ainsi le cycle en n'affectant que très peu l'affinité (Fu, Y. et al., European journal of pharmacology, 2009. 617: p. 118-123). Un autre exemple est celui du marquage d'anticorps monoclonaux par le 99mTc (Goldenberg, D. et al., Cancer, 2000. 89(104) : p. 104- 115 ; Dias, C.R. et al., Brazilian Archives of Biology and Technology, 2005. 48 : p. 29-35). Le principal inconvénient de cette méthode est qu'il est en général impossible de connaître la structure exacte du complexe qui est formé (en général différents sites de complexation sont possibles). Dans certains cas, jusqu'à 20% du marquage est non spécifique, c'est-à-dire qu'il 20 ne correspond pas à une insertion du métal au site souhaité et conduit à des sous-produits qui peuvent s'accumuler dans le foie ou altérer l'efficacité du traceur (John, E. et al., Journal of Nuclear Medicine, 1994. 35(5) : p. 876-881). De plus, l'insertion du radionucléide dans la structure du vecteur qui s'en trouve modifiée entraîne généralement une perte d'affinité. A titre d'exemple, le marquage direct de 25 l'hormone peptidique a-MSH (a-melanocyte stimulating hormone) a entrainé une forte modification structurale en particulier au niveau de la séquence reconnue par les récepteurs biologiques (Schéma 3). Ainsi marquée, la MSH s'est avérée avoir une affinité réduite â 1% de l'affinité de l'hormone libre (Giblin, M.F. et al., Proceedings of the National Academy of Sciences, 1998. 95(22) : p. 12814-12818). Other integrated radiotracers are obtained by direct complexation of the metal by the biological molecule. It is the functional groups of the molecule used that ensure the complexation: it is not necessary to modify the molecule chemically. For example, in the case of peptide labeling, it is the free chelating groups of the side chains of the amino acids which complex the radionuclide. One example is the 99mTc labeling of peptides such as adrenomedullin, a 52 amino acid long vasodilator peptide whose structure comprises a chain of 5 amino acids forming a ring through a disulfide bridge. Affinity tests carried out after deletion of this cycle show that the latter is essential for the affinity of the peptide for its receptor. Under direct labeling conditions, in a reducing medium, the disulfide bridge is broken, but yet the affinity of the labeled peptide is still high. This is because the thiols released by the bridge reduction act in the chelation of the metal, thereby reforming the cycle with little effect on affinity (Fu, Y. et al., European Journal of Pharmacology , 2009. 617: 118-123). Another example is the labeling of monoclonal antibodies by 99mTc (Goldenberg, D. et al., Cancer, 2000. 89 (104): 104-155, Dias, CR et al., Brazilian Archives of Biology and Technology, 2005. 48: 29-35). The main drawback of this method is that it is generally impossible to know the exact structure of the complex that is formed (in general, different complexation sites are possible). In some cases, up to 20% of the labeling is nonspecific, i.e. it does not correspond to an insertion of the metal at the desired site and leads to by-products which can accumulate in the liver or impair tracer efficacy (John, E. et al., Journal of Nuclear Medicine, 1994. 35 (5): 876-881). In addition, insertion of the radionuclide into the modified vector structure generally results in loss of affinity. By way of example, the direct labeling of the α-melanocyte stimulating hormone α-MSH has resulted in a strong structural change, particularly at the level of the sequence recognized by the biological receptors (Scheme 3). Thus labeled, MSH has been found to have a reduced affinity to 1% of free hormone affinity (Giblin, MF et al., Proceedings of the National Academy of Sciences, 1998. 95 (22): p. 12814-12818).

Schéma 3 : Le radiomarquage entraîne de fortes modifications structurelles de l'a-MSH. A gauche : structure de l'a-MSH, à droite : Re-MSH D'autres radiotraceurs ont donné des résultats beaucoup plus concluants. On peut citer par exemple un composé cyclique pseudopeptidique présentant le motif tripeptidique RGD (Schéma 4 (a)). Ce motif est reconnu par l'intégrine avp, qui est surexprimée au niveau des cellules cancéreuses. Dans cette structure c'est le métal, ici le technétium, qui assure la cyclisation. Son rôle dans la structure tridimensionnelle obtenue est donc primordial. L'affinité de ce composé cyclique pour l'intégrine s'est avérée très intéressante (IC50 = 60 nm) (Aufort, M., et al., Synthesis and biochemical evaluation of a cyclic RGD oxorhenium complex as new ligand of av/33 integrin. European Journal of Medicinal Chemistry, 2009. 44(9): p. 3394-3401 ; Aufort, M. et al., European Journal of Medicinal Chemistry, 2011. 46(5): p. 1779-1788). Des agent chélatants de la cyclophiline hCyp-18 (Schéma 4 (b)) qui présentent une affinité pour la protéine comparable à celle préalablement observée dans le cas d'inhibiteurs non marqués ont également été développés (Clavaud, C. et al., ChemBioChem, 2006. 7(9): p. 1352-1355 ; Clavaud, C. et al., ChemBioChem, 2008. 9(11): p. 1823-1829 ; Clavaud, C. et al., Bioconjugate Chemistry, 2006. 17(3) : p. 807-814).15 NH2+ H2N HN NH CN/ Re -S (a) HN N NO2 (b) Schéma 4 : Exemples de complexes métal-essentiels développés au laboratoire : (a) pseudopeptide cyclique mime de RGD ; b) agent chélatant linéaire de la cyclophiline hCyp-18 Le développement de complexes de type « métal-essentiels » ciblants est une approche élégante qui se heurte pour l'heure à certaines limites liées à la chimie employée dans les synthèses, aux pertes d'affinité induites par la présence du métal qui vient déformer la structure de manière difficilement prédictible, et l'introduction du coeur métallique (Tc03+ par exemple) qui modifie l'hydrophilie du composé et donc sa biodistribution. Les complexes métal-essentiels non-ciblants : Dans les complexes de cette catégorie, le rôle de l'agent chélatant n'est pas de conférer des propriétés ciblantes au radiotraceur mais de lui assurer une stabilité élevée en milieu biologique. La biodistribution du complexe ainsi formé est liée à ses propriétés physicochimiques (taille, charge, lipophilie...) plutôt qu'à une affinité structurale pour la cible. Parmi ces complexes, les traceurs de flux métaboliques vont être accumulés et permettront de visualiser certaines fonctions métaboliques dans l'organisme. D'autres sont simplement transportés par le milieu circulant et permettent de visualiser des écoulements (irrigation cérébrale, écoulements intracardiaques...) : ce sont des traceurs de flux anatomiques. Parmi les traceurs de flux anatomiques, on peut citer le Myoview ou 99mTcTetrofosmin (Fragasso, G. et al., The International Journal of Cardiovascular Imaging (formerly Cardiac Imaging), 2002. 18(1) : p. 31-40 ; Athanasoulis, T. et al. European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging, 2003. 30(5) : p_ 798-799 ; Jain, D. et al., Journal of Nuclear Cardiology, 2009. 16(4) : p. 540-548) et le Cardiolite ou 99mTc-Sestamibi (Maddahi, J. et al., The American Journal of Cardiology, 1991. 67(14) : p. 27D-34D ; Ito, Y. et al., European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging, 2003. 30(2) : p. 281287) qui ciblent le coeur (Schéma 5 (a) et (b)) et sont fréquemment utilisés lors d'examens cardiaques. Après injection, le patient est soumis à un exercice physique et l'imagerie permet de visualiser l'activité des deux ventricules cardiaques afin de déceler une éventuelle anomalie (Shaw, L. J. et aL, Journal of Nuclear Medicine, 2003. 44(2) : p. 134-139). Le complexe [99mTc0(MAG3)]- (Schéma 5 (c)) présente une accumulation très forte au niveau des reins et extrêmement réduite dans le foie (Vivier, P.-H. et al., Am. J. Roentgenol., 2009. 193(4) : p. W361-). Il est utilisé pour la mise en évidence d'insuffisances rénales (Palmer, M. R. et al., Nuclear Medicine Communications, 2011. 32(8) : p. 738-744, 10.1097/MNM.0b013e328347e958) en se basant sur les variations locales de sa biodistribution (Taylor, A. et al., Urology, 2010. 76(6): p. 1512-1516). Figure 3: Radiolabeling leads to strong structural changes in α-MSH. Left: structure of the a-MSH, right: Re-MSH Other radiotracers gave much more conclusive results. For example, a pseudopeptide cyclic compound having the tripeptide motif RGD (Scheme 4 (a)) can be mentioned. This motif is recognized by the integrin avp, which is overexpressed at the level of cancer cells. In this structure it is the metal, here the technetium, which ensures the cyclization. Its role in the three-dimensional structure obtained is therefore essential. The affinity of this cyclic compound for integrin was found to be very interesting (IC 50 = 60 nm) (Aufort, M., et al., Synthesis and biochemical evaluation of a cyclic RGD oxorhenium complex as new ligand of av / 33 European Journal of Medicinal Chemistry, 2009. 44 (9): 3394-3401, Aufort, M. et al., European Journal of Medicinal Chemistry, 2011. 46 (5): 1779-1788). Cyclophilin hCyp-18 chelating agents (Scheme 4 (b)) which have a protein affinity comparable to that previously observed in the case of unlabeled inhibitors have also been developed (Clavaud, C. et al., ChemBioChem). , 2006. 7 (9): pp. 1352-1355, Clavaud, C. et al., ChemBioChem, 2008. 9 (11): pp. 1823-1829, Clavaud, C. et al., Bioconjugate Chemistry, 2006. 17 (3): 807-814) .15 NH2 + H2N HN NH CN / Re-S (a) HN N NO2 (b) Scheme 4: Examples of metal-essential complexes developed in the laboratory: (a) mime cyclic pseudopeptide RGD; b) linear chelating agent of cyclophilin hCyp-18 The development of targeted "metal-essential" complexes is an elegant approach which is hitting for the time being with certain limits related to the chemistry used in syntheses, the losses of affinity induced by the presence of the metal that deforms the structure in a manner that is difficult to predict, and the introduction of the metal core (TcO 3 + for example) which modifies the hydrophilicity of the compound and therefore its biodistribution. Non-target metal-essential complexes: In the complexes of this category, the role of the chelating agent is not to confer targeting properties on the radiotracer but to ensure a high stability in the biological medium. The biodistribution of the complex thus formed is related to its physicochemical properties (size, charge, lipophilicity, etc.) rather than to a structural affinity for the target. Among these complexes, metabolic flux tracers will be accumulated and will allow to visualize certain metabolic functions in the body. Others are simply transported by the circulating medium and make it possible to visualize flows (cerebral irrigation, intracardiac flows ...): they are anatomical flow tracers. Among the anatomical flow tracers, mention may be made of Myoview or 99mTcTetrofosmin (Fragasso, G. et al., The International Journal of Cardiovascular Imaging, 2002. 18 (1): 31-40; T. et al., European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging, 2003. (5): 798-799, Jain, D. et al., Journal of Nuclear Cardiology, 2009. 16 (4): 540-7. 548) and Cardiolite or 99mTc-Sestamibi (Maddahi, J. et al., The American Journal of Cardiology, 1991. 67 (14): 27D-34D, Ito, Y. et al., European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging, 2003. 30 (2): 281287) which target the heart (Diagram 5 (a) and (b)) and are frequently used in cardiac examinations. After injection, the patient is exercised and imaging allows the activity of both cardiac ventricles to be visualized for abnormality (Shaw, LJ et al., Journal of Nuclear Medicine, 2003. 44 (2): pp. 134-139). The complex [99mTc0 (MAG3)] - (Scheme 5 (c)) has a very strong accumulation in the kidneys and is extremely reduced in the liver (Vivier, P.-H. et al., Am. J. Roentgenol., 2009. 193 (4): pp. W361-). It is used to demonstrate renal insufficiency (Palmer, MR et al., Nuclear Medicine Communications, 2011. 32 (8): 738-744, 10.1097 / MNM.0b013e328347e958) based on local variations its biodistribution (Taylor, A. et al., Urology, 2010. 76 (6): 1512-1516).

Les traceurs utilisés pour visualiser l'irrigation cérébrale ont un fonctionnement plus complexe car ils visent à traverser la barrière hémato-encéphalique sans être rétrodiffusés à travers celle-ci par la suite. C'est ce que parviennent à faire deux radiotraceurs non dirigés : le Ceretec (99mTc-HMPAO, Ogasawara, K. et al., AJNR Am. J. Neuroradiol., 1999. 20(4): p. 626-628 ; Lee, A. et al., Clinical Nuclear Medicine, 1989. 14(7) : p. 482-483) et le Neurolite (99mTc-EDC) (Schéma 5 (d) et (e)). Dans le cas du Neurolite, il a été montré qu'un mécanisme enzymatique provoque l'hydrolyse d'un des groupements esters de la forme L-L du complexe rendant celui-ci suffisamment hydrophile pour ne pas être rétrodiffusé au travers de la barrière hémato-encéphalique (Dilworth, J. R. et al., Chemical Society Reviews, 1998. 27(1) : p. 4355 ; Walovitch, R. et al., Journal of Cerebral Blood Flow Metabolism, 1994. 1994(S4-11) : p. The tracers used to visualize cerebral perfusion have a more complex function because they aim to cross the blood-brain barrier without being backscattered thereafter. This is achieved by two non-directed radiotracers: Ceretec (99mTc-HMPAO, Ogasawara, K. et al., AJNR Am., J. Neuroradiol., 1999. 20 (4): 626-628; , A. et al., Clinical Nuclear Medicine, 1989. 14 (7): pp. 482-483) and Neurolite (99mTc-EDC) (Scheme 5 (d) and (e)). In the case of Neurolite, it has been shown that an enzymatic mechanism causes the hydrolysis of one of the ester groups of the LL form of the complex making it sufficiently hydrophilic not to be backscattered across the blood-brain barrier. (Dilworth, JR et al., Chemical Society Reviews, 1998. 27 (1): 4355, Walovitch, R. et al., Journal of Cerebral Blood Flow Metabolism, 1994. 1994 (S4-11): p.

S4-11). Quant au Ceretec, c'est une réaction chimique avec le glutathion cérébral qui augmente son hydrophilie et bloque la rétrodiffusion (Neirinckx, R.D. et al., J. Cereb. Blood Flow Metab., 1988. 8(S1) : p. S4-S12). S4-11). As for Ceretec, it is a chemical reaction with cerebral glutathione that increases its hydrophilicity and blocks backscattering (Neirinckx, RD et al., J. Cereb, Blood Flow Metab., 1988. 8 (S1): P. S4- S12).

R,R R R ° ,P 0 p. R R' R R R CH2CH2OCH2CH3 10 (C(Me2)0Me ui Me0(Me2)C----S,_ y '..,N"---'C(Wle2)0Me Me0(Me2)C---../ C Me0(Me2)C) C(Me2)0Me Tc S /0 \ L'CO2H (a) (b) (c) TC I IO I o I , ,,, / \ Et0 C N /N CO2Et Tc 3/6-\S"--- H20-Gê-0 H20.1".. H/ OH2 ,, OH R, R R R 0, P 0, p. ## STR1 ## wherein R (CH 2 CH 2 OCH 2 CH 3) (C (Me 2) 0 MeO (Me 2) C] S, N, C (Wle 2) 0 MeO (Me 2) C --- / C Me0 (Me2) C) C (Me2) 0Me Tc S / 0 \ CO2H (a) (b) (c) TC I IO I,,,, EtO CN / N CO2Et Tc 3 / ## STR2 ##

(d) (e) Schéma 5 : Quelques exemples de radiotraceurs non dirigés : (a) Ceretec (99mTc-HMPAO), (b) Neurolite (99mTc-EDC), (c) Mioview (99mTc-Tetrofosmin), (d) Cardiolite (99mTcSestamibi), (e) [99mTc0(MAG3)]-, (f) 67Ga-Citrate. Un dernier exemple de cette famille de radiotraceurs est le 67Ga-Citrate (Schéma 5 (0) qui permet l'imagerie des foyers infectieux (Hughes, D. K., Journal of Nuclear Medicine Technology, 2003. 31(4) : p. 196-201 ; Ercan, M.T. et al., Nuclear Medicine and Biology, 1993. 20(7) : p. 881-887). Son mode d'action est différent puisqu'il repose sur une transchélation du gallium vers la transferrine exprimée au niveau de l'infection. Ce n'est donc pas le complexe du citrate qui est observé mais le complexe 67Ga-transferrine (Nanni, C. et al., Journal of Nuclear Medicine, 2010. 51(12) : p. 1932-1936 ; Goldsmith, S. J. et al., Seminars in nuclear medicine, 2009. 39(1): p. 2-10). Ce type de radiotraceurs représente l'essentiel des traceurs actuellement sur le marché. Les traceurs de flux dits métaboliques mettent en jeu une molécule destinée à être métabolisée par l'organisme (peptide...) qui est marquée par un radioélément. Si le métabolisme de ces composés est accentué ou réduit lors de pathologies, ils peuvent être utilisés pour préparer des traceurs. C'est le cas du Fluorodesoxyglucose marqué au 18F. Les cellules tumorales métabolisent beaucoup plus de glucose que les cellules quiescentes afin d'assurer leur croissance. Le [18F]-FDG est donc très souvent utilisé en imagerie TEP pour la détection de tumeurs.20 D Les complexes bifonctionnels C'est l'approche qui est actuellement la plus répandue pour le développement de nouveaux agents d'imagerie. Elle est souvent appelée approche BFCA (BiFunctional Chelating Agent). Son principe consiste à relier une molécule ayant une affinité prouvée pour la cible choisie (molécule ciblante ou vecteur) à un motif de complexation de radionucléide, via un linker de taille et type variable (Schéma 6). Radionucléide Molécule ciblante Structure complexante Schéma 6 Principe de l'approche bifonctionnelle Le choix de la molécule ciblante est varié : il peut s'agir d'un anticorps ou simplement d'un fragment, d'un agent chélatant peptidique ou non-peptidique. La présence d'un linker de taille variable permet de séparer les deux parties du radiotraceur et de minimiser ainsi au maximum les interférences de la structure chélatante sur l'affinité de la molécule ciblante pour son substrat. De plus, le choix de la structure du linker (PEG, polylysine...) peut orienter le mode d'élimination du composé vers les reins ou améliorer sa solubilité et sa biodistribution, modifiant ainsi sa pharmacocinétique (Liu, S. et al., Chemical Reviews, 1999. 99(9) : p. 2235-2268). Un exemple d'utilisation de linker métabolisable a été décrit dans la littérature. Cette approche permet une élimination accrue du composé du milieu circulant (Smith-Jones, P. M. et al., Nuclear Medicine and Biology, 1997. 24(8) : p. 761-769). Parmi les inconvénients de cette approche, la taille importante des composés obtenus est gênante puisqu'elle augmente la probabilité de générer une réponse immunitaire de l'organisme. D'autre part, ces traceurs ne peuvent cibler que des récepteurs membranaires ou des protéines circulantes car leur taille limite fortement leur passage dans le milieu intracellulaire (Hom, R. K. et al., Nuclear Medicine and Biology, 1997. 24(6) : p. 485-498). 11 est également nécessaire d'identifier sur le vecteur un site où l'on puisse fixer le linker sans en altérer l'affinité. Le choix de ce site peut être guidé par la modélisation moléculaire ou des études de relation structure-activité, mais doit tenir compte de la faisabilité chimique de cette fixation et de la régiosélectivité de celle-ci. Enfin, la disponibilité des molécules vectrices peut s'avérer être un obstacle au développement de ces approches et nécessiter par exemple la mise au point de nouvelles voies de synthèse. (d) (e) Figure 5: Some examples of undirected radiotracers: (a) Ceretec (99mTc-HMPAO), (b) Neurolite (99mTc-EDC), (c) Mioview (99mTc-Tetrofosmin), (d) Cardiolite (99mTcSestamibi), (e) [99mTc0 (MAG3)] -, (f) 67Ga-Citrate. A final example of this family of radiotracers is 67Ga-Citrate (Scheme 5 (0) which allows imaging of infectious foci (Hughes, DK, Journal of Nuclear Medicine Technology, 2003. 31 (4): 196-201 Ercan, MT et al., Nuclear Medicine and Biology, 1993. (7): 881-887) Its mode of action is different since it relies on a transchelement of gallium to transferrin expressed at the level of Thus, it is not the citrate complex that is observed but the 67 Ga-transferrin complex (Nanni, C. et al., Journal of Nuclear Medicine, 2010. 51 (12): 1932-1936; Goldsmith, SJ et al., Seminars in Nuclear Medicine, 2009. 39 (1): 2-10.) This type of radiotracers represents most of the tracers currently on the market.The so-called metabolic flow tracers involve a molecule intended to be metabolized by the body (peptide ...) which is marked by a radioelement.If the metabolism of these compounds is accentuated or r Duit at pathologies, they can be used to prepare tracers. This is the case of 18F-labeled Fluorodesoxyglucose. Tumor cells metabolize much more glucose than quiescent cells to ensure their growth. [18F] -FDG is therefore very often used in PET imaging for the detection of tumors.20 D Bifunctional complexes This is the approach that is currently the most widespread for the development of new imaging agents. It is often called the BiFunctional Chelating Agent (BFCA) approach. Its principle consists of linking a molecule with proven affinity for the chosen target (targeting molecule or vector) to a radionuclide complexing motif via a linker of variable size and type (Scheme 6). Radionuclide Targeting Molecule Complexing Structure Scheme 6 Principle of the bifunctional approach The choice of the targeting molecule is varied: it may be an antibody or simply a fragment, a peptide or non-peptide chelating agent. The presence of a linker of variable size makes it possible to separate the two parts of the radiotracer and thus minimize the interference of the chelating structure on the affinity of the target molecule for its substrate. In addition, the choice of the structure of the linker (PEG, polylysine, etc.) can guide the mode of elimination of the compound to the kidneys or improve its solubility and biodistribution, thus modifying its pharmacokinetics (Liu, S. et al. , Chemical Reviews, 1999. 99 (9): 2235-2268). An example of use of metabolizable linker has been described in the literature. This approach allows for increased removal of the circulating medium compound (Smith-Jones, P.M. et al., Nuclear Medicine and Biology, 1997. 24 (8): 761-769). Among the disadvantages of this approach, the large size of the compounds obtained is troublesome since it increases the probability of generating an immune response of the body. On the other hand, these tracers can target only membrane receptors or circulating proteins because their size strongly limits their passage in the intracellular medium (Hom, RK et al., Nuclear Medicine and Biology, 1997. 24 (6): p 485-498). It is also necessary to identify on the vector a site where the linker can be fixed without altering its affinity. The choice of this site can be guided by molecular modeling or structure-activity relationship studies, but must take into account the chemical feasibility of this fixation and its regioselectivity. Finally, the availability of vector molecules may prove to be an obstacle to the development of these approaches and require, for example, the development of new synthetic routes.

Une autre limitation de l'utilisation de ce type de composé réside dans leur application pour la réalisation de kits utilisés en milieu hospitalier. Contrairement à un complexe « métal-essentiel » où l'agent chélatant peut être introduit en forte quantité puisqu'il ne présente aucune affinité pour la cible en l'absence de métal, un large excès d'agent chélatant fonctionnel non marqué peut entrer en compétition avec le traceur et diminuer son efficacité. Il est alors essentiel d'améliorer les conditions de marquage pour tendre vers un rendement stoechiométrique. Malgré la relative facilité de marquage au technétium, la conception de traceurs demeure empirique puisqu'il est relativement difficile de prévoir leur comportement in vivo. 10 Le développement d'un traceur utilisable chez l'homme relève donc souvent d'une longue et coûteuse optimisation. Le développement de traceurs in vivo nécessite le marquage isotopique d'une molécule biologique (peptides, protéines, liposomes, petites molécules non peptidiques...) ayant une affinité marquée pour la cible à imager et qui va jouer le rôle de vecteur. Ce 15 marquage peut parfois être réalisé par substitution isotopique ou par marquage direct en utilisant l'aptitude naturelle de la molécule à complexer le radioélément. L'adjonction de ces structures complexantes à une molécule biologique requiert le plus souvent une mise au point assez longue liée au caractère imprévisible du comportement de ces conjugués in vivo. L'ingénierie moléculaire visant à affiner la structure des traceurs 20 nécessite très souvent leur resynthèse complète, induisant un coût et une durée de développement élevés. D'autres travaux ont également montré que le meilleur ligand d'une cible biologique (meilleurs résultats in vitro) n'est pas toujours le meilleur traceur in vivo. Le passage au modèle animal nécessite en effet de prendre en compte les critères de biodistribution, d'excrétion, de métabolisation. Le développement de traceurs par chimie 25 combinatoire nécessite de choisir des structures et une chimie compatibles avec cette approche. En pratique, il s'agira donc d'utiliser par exemple la synthèse peptidique, qui permet de préparer de façon rapide et efficace des banques de composés sur support solide ou des réactions dites de « chimie click » (Mincit, T. L. et al., ChemMedChem, 2009. 4(4) : p. 529-539 ; Mincit, T. L. et al., Journal of the American Chemical Society, 2006. 128(47) : p. 30 15096-15097) qui permettent en une seule étape de conjuguer deux molécules. Cette deuxième possibilité est actuellement en plein essor car elle présente un réel potentiel de par sa simplicité d'utilisation et ses performances (Moses, J. et al., Chemical Society Reviews, 2007. 36 : p. 1249-1262 ; Tron, G. C. et al., Medicinal Research Reviews, 2008. 28(2) : p. 278-308). Des radiotraceurs dans lesquels le radioélément est introduit via la chimie click ont déjà été décrits, notamment le '8F (Hausner, S. H. et al., Journal of Medicinal Chemistry, 2008. 51(19) : p. 5901-5904 ; Hong, V. et al., Bioconjugate Chemistry, 2010. 21(10) : p. 1912-1916 ; Ross, T. L. et al., Bioconjugate Chemistry, 2008. 19(12) : p. 2462-2470) pour le TEP. L'objectif que se sont fixés les Inventeurs consiste en la mise au point de nouveaux radiotraceurs susceptibles d'être utilisés comme médicaments pour l'imagerie médicale ou des applications radio-thérapeutiques. Ils ont ainsi mis en évidence des structures spécifiques à base de triazole, présentant des propriétés de biodistribution particulièrement attractive et nettement améliorées par rapport aux complexes sans groupe triazole de type N2S2 et N3S. En outre, les structures identifiées présentent l'avantage d'être facilement synthétisable par une approche combinatoire directe, simple et versatile : la chimie-click. Cette technique permet ainsi une optimisation des traceurs par chimie combinatoire en vue d'applications diverses : préparation de traceurs sur support solide ou en solution, dans diverses conditions, compatible avec de nombreuses fonctions chimiques. Les Inventeurs se sont plus particulièrement intéressés à la préparation de traceurs technétiés intégrés et bifonctionnels en utilisant une approche combinatoire. En effet, le technétium apparaît, tant sur ses propriétés radiochimiques que par sa facilité d'utilisation, comme un « radioisotope idéal » pour l'imagerie diagnostique. Another limitation of the use of this type of compound lies in their application for the production of kits used in hospitals. In contrast to a "metal-essential" complex where the chelating agent can be introduced in large amounts since it has no target affinity in the absence of metal, a large excess of unlabeled functional chelating agent may enter compete with the tracer and decrease its effectiveness. It is then essential to improve the marking conditions to tend towards a stoichiometric performance. Despite the relative ease of labeling with technetium, the design of tracers remains empirical since it is relatively difficult to predict their behavior in vivo. The development of a tracer for use in humans is therefore often a long and expensive optimization. The development of tracers in vivo requires the isotopic labeling of a biological molecule (peptides, proteins, liposomes, small nonpeptide molecules, etc.) having a marked affinity for the target to be imaged and which will play the role of vector. This labeling may sometimes be accomplished by isotopic substitution or direct labeling using the natural ability of the molecule to complex the radioelement. The addition of these complexing structures to a biological molecule most often requires a rather long development linked to the unpredictability of the behavior of these conjugates in vivo. Molecular engineering to refine the tracer structure very often requires complete resynthesis, resulting in high cost and development time. Other studies have also shown that the best ligand of a biological target (better results in vitro) is not always the best tracer in vivo. The transition to the animal model indeed requires taking into account the criteria of biodistribution, excretion, metabolism. The development of combinatorial chemistry tracers requires the selection of structures and chemistry compatible with this approach. In practice, it will therefore be necessary to use, for example, peptide synthesis, which makes it possible to rapidly and efficiently prepare solid support compound libraries or so-called "click chemistry" reactions (Mincit, TL et al., ChemMedChem, 2009. 4 (4): pp. 529-539, Mincit, TL et al., Journal of the American Chemical Society, 2006. 128 (47): 15096-15097) which allow in a single step of conjugate two molecules. This second possibility is currently in full swing because it has a real potential because of its simplicity of use and its performance (Moses, J. et al., Chemical Society Reviews, 2007. 36: pp. 1249-1262; Tron, GC et al., Medicinal Research Reviews, 2008. 28 (2): 278-308). Radiotracers in which the radioelement is introduced via click chemistry have already been described, including 8F (Hausner, SH et al., Journal of Medicinal Chemistry, 2008. 51 (19): 5901-5904; Hong, V et al., Bioconjugate Chemistry, 2010. 21 (10): pp. 1912-1916, Ross, TL et al., Bioconjugate Chemistry, 2008. 19 (12): pp. 2462-2470) for PET. The objective set by the inventors is the development of new radiotracers that can be used as medicaments for medical imaging or radiotherapy applications. They have thus demonstrated specific structures based on triazole, having particularly attractive biodistribution properties and significantly improved compared to complexes without N2S2 and N3S triazole groups. In addition, the structures identified have the advantage of being easily synthesizable by a direct, simple and versatile combinatorial approach: chemistry-click. This technique thus makes it possible to optimize the tracers by combinatorial chemistry for various applications: preparation of tracers on solid support or in solution, under various conditions, compatible with numerous chemical functions. The inventors have been particularly interested in the preparation of integrated and bifunctional technetium tracers using a combinatorial approach. Indeed, technetium appears, both on its radiochemical properties and by its ease of use, as an "ideal radioisotope" for diagnostic imaging.

Les complexes ayant vocation à être utilisés en imagerie médicale, leur préparation à partir d'un agent chélatant devait être effectuée de façon efficace (complexation quantitative), rapide (une seule étape, avec un temps de réaction faible à l'échelle de la période du 99mTc (6.02 h), si possible sans nécessiter de purification supplémentaire) et suffisamment simple pour être utilisée en milieu hospitalier par un médecin-manipulateur. The complexes intended to be used in medical imaging, their preparation from a chelating agent had to be performed efficiently (quantitative complexation), fast (a single step, with a reaction time low at the time scale 99mTc (6.02 h), if possible without requiring additional purification) and simple enough to be used in hospital by a physician-manipulator.

Les complexes fi:mués devaient être utilisables in vivo, et donc impérativement présenter une stabilité élevée en milieu biologique. Les structures retenues devaient par conséquent être les plus stables possibles vis-à-vis de la démétallation ou de l'oxydation. En particulier les réactions d'échange des agents chélatants avec le glutathion ou la cystéine endogènes devraient être minimisées. En effet, les fluides circulants, et notamment le sang, contiennent du glutathion à des concentrations assez variable (environ 250 nM en moyenne mais 2 à 3 mM au niveau cérébral par exemple (Samuelsson, M. et al. Neuropeptides, 2011. 45 : p. 287-292). The resolved complexes had to be usable in vivo, and therefore necessarily have a high stability in biological medium. The structures chosen should therefore be as stable as possible with regard to demetallation or oxidation. In particular the exchange reactions of chelating agents with endogenous glutathione or cysteine should be minimized. Indeed, circulating fluids, and especially blood, contain glutathione at fairly variable concentrations (approximately 250 nM on average but 2 to 3 mM at the brain level for example (Samuelsson, M. et al., Neuropeptides, 2011. 45: pp. 287-292).

Les structures des agents chélatants candidats devaient présenter un maximum de sites permettant d'introduire une fonctionnalisation permettant d'orienter leur bioactivité. C'est au niveau de ces sites qu'il sera possible de modifier chimiquement lors d'une nouvelle synthèse la plateforme de départ pour la transformer en un traceur intégré ou la relier à une molécule biologique dans le cas d'une approche bifonctionnelle, sans affecter ses propriétés de chélation. Le choix de ces sites et les méthodes de fonctionnalisation sont souvent déterminés de façon empirique. Dans cette optique, il était souhaitable qu'un ou plusieurs de ces sites permette la mise en oeuvre de chimie combinatoire afin d'envisager la préparation simple et rapide de chimiothèques des agents chélatants fonctionnalisés. The structures of the chelating agents candidates had to present a maximum of sites allowing to introduce a functionalization allowing to orient their bioactivity. It is at these sites that it will be possible to chemically modify, during a new synthesis, the starting platform to transform it into an integrated tracer or link it to a biological molecule in the case of a bifunctional approach, without affect its chelating properties. The choice of these sites and the methods of functionalization are often determined empirically. In this context, it was desirable that one or more of these sites allow the implementation of combinatorial chemistry in order to consider the simple and fast preparation of chemical libraries of functionalized chelating agents.

Lors de la mise au point de la structure de base utilisée pour le développement de la famille d'agents chélatants de l'invention, deux types de complexes décrits dans la littérature ont plus particulièrement été étudiés : - Les complexes Triazole-technétium tricarbonyle : Depuis quelques aimées, des complexes de technétium tricarbonyle mettant en jeu un agent chélatant tridentate présentant au sein de sa structure un ou plusieurs noyaux 1,2,3- triazoles directement impliqués dans la complexation du technétium ont été développés (Mindt, T.L. et aL, Journal of the American Chemical Society, 2006. 128(47) : p. 1509615097 ; Struthers, H. et al., Chemistry - A European Journal, 2008. 14(20) : p. 6173-6183 ; Mindt, T. L. et al., ChemMedChem, 2009. 4(4) : p. 529-539) (Schéma 7). Ces complexes se forment de façon quantitative et ne nécessitent aucune purification. En outre, le noyau 1,2,3- triazole est introduit par une réaction de chimie click, la cycloaddition dipolaire de Huisgen catalysée au cuivre. Cette stratégie permet d'introduire au niveau du noyau triazole une large variété de substituants via des méthodes combinatoires. Néanmoins l'obtention de ces complexes de Tc(I) nécessite des conditions délicates avec notamment la manipulation sous atmosphère de monoxyde de carbone ou de précurseurs de monoxyde de carbone libéré par chauffage (Journal of the American Chemical Society, 2001, 123 (13) : p. 3135-3136 ; Dalton Transactions 2007 (17), 1651-1660). In the development of the basic structure used for the development of the chelating agent family of the invention, two types of complexes described in the literature have been more particularly studied: Triazole-technetium tricarbonyl complexes: Since a few years ago, technetium tricarbonyl complexes involving a tridentate chelating agent having within its structure one or more 1,2,3-triazole rings directly involved in the complexation of technetium have been developed (Mindt, TL et al., Journal of the American Chemical Society, 2006. 128 (47): 1509615097; Struthers, H. et al., Chemistry - A European Journal, 2008. 14 (20): 6173-6183; Mindt, TL et al. ChemMedChem, 2009. 4 (4): 529-539) (Scheme 7). These complexes are formed quantitatively and do not require purification. In addition, the 1,2,3-triazole ring is introduced by a click chemistry reaction, the copper catalysed Holesen dipolar cycloaddition. This strategy makes it possible to introduce at the level of the triazole ring a wide variety of substituents via combinatorial methods. However, obtaining these complexes of Tc (I) requires delicate conditions including handling under an atmosphere of carbon monoxide or precursors of carbon monoxide released by heating (Journal of the American Chemical Society, 2001, 123 (13) : pp. 3135-3136; Dalton Transactions 2007 (17), 1651-1660).

Ph o 0- 10 -----1SHMe NH ----N'---/-'1 ------'' 0 N - N N 1 '0 -..N-'..:- li,,Tc',0 Ph \ f \ OUI.' I FCO e.. N------N11,,,,.RIe,,,%iNH OC/ 1 CO R1 N."-N<>N1','-re:.."\N'N'N."-R2 co OCIee 1 CO CO Schéma 7 : Complexes Tc-Tricarbonyles à agent chélatants triazoles > Les complexes Tc(V)-N3S à noyau pyridyle ou imidazolyle : Ce second type de complexes regroupe des complexes du Tc(V) contenant des agents chélatants tétradentates de types N3S dans lesquels un des atomes d'azote chélatant le métal appartient à un cycle hétéroaromatique de type pyridyle ou imidazoyle (Schéma 8) (Rajagopalan, R. et al., Bioconjugate Chemistry, 1997. 8(3) : p. 407-415). Ces complexes sont obtenus avec d'excellents rendements (supérieurs à 90%) et sont particulièrement stables lors de tests de compétition par la cystéine (moins de 10% de dégradation après 24h). Le coeur oxotechnetium présente l'avantage par rapport au coeur technétium tricarbonyle d'être obtenu très facilement par réduction du pertechnétate de sodium en présence de l'agent chélatant. ## STR2 ## ## STR2 ## ## STR2 ## li ,, Tc ', 0 Ph \ f \ YES.' ## EQU1 ##, ## STR1 ## ## STR2 ## FIG. 7: Tc-Tricarbonyl complexes with triazole chelating agents Tc (V) -N3S complexes with pyridyl or imidazolyl nucleus: This second type of complexes groups together complexes of Tc (V) ## STR1 ## containing N3S tetradentate chelating agents in which one of the metal chelating nitrogen atoms belongs to a pyridyl or imidazoyl heteroaromatic ring (Scheme 8) (Rajagopalan, R. et al., Bioconjugate Chemistry, 1997. 8 (3)). These complexes are obtained with excellent yields (greater than 90%) and are particularly stable in competition tests with cysteine (less than 10% degradation after 24 hours). has the advantage over the heart technetium tricarbonyl to be obtained very easily by reducing sodium pertechnetate in the presence of the chelating agent.

Enfin, la structure de ces complexes est plus rigide et plus variée que les complexes Te- tricarbonyles, permettant ainsi d'envisager diverses approches de fonctionnalisation via des méthodes combinatoires. HO 1:(9 0 N/ /.' 0 0 N 0 N\ N '-,---- "..- '---, Tc N","-:-----'-- 8 \ , Schéma 8 : Complexe 99mTc-N3S à noyau pyridyle ou imidazoyle Les Inventeurs ont maintenant découvert une structure de base conjuguant les propriétés de ces deux types de complexes. Il s'agit de complexes de radioéléments métalliques de type N3X où X = N, O, S dans lesquels un noyau 1,2,3-triazole participe directement à la complexation via l'azote 3. L'obtention de ce noyau triazole par chimie click permet d'introduire facilement de la diversité sur cette position par chimie combinatoire lors d'étapes de fonctionnalisation ultérieures. CO2H Tc /O RN \ &I\1 H Ainsi, la présente invention a pour objet les composés précurseurs répondant à la formule (I) suivante : (I) dans laquelle : - l'unité A est choisie parmi les groupements de formule : R3 .54 ou OU OU OU OU ou R6 0 OH R6 Ris;'''NH2 R6 R6 R6 ''SH 0 R7 l'unité B est choisie parmi les groupements de formule : R 4 0 3 4%1 CH ou OU ou R5, OU R.K OU 0 OH n est égal à 0 ou 1, Ri, R2, R3, R4, R5, R6 et R7 identiques ou différents, sont choisis parmi H, un radical alkyle, alcoxy, aryle, aralkyle, hétéroalkyle, hétéroaryle, hétéroaralkyle, un groupe hydrocarboné ou hétérocarboné mono- ou polycyclique saturé ou insaturé, un mono- ou un polysaccharide, ou un dérivé aminé de mono- ou de polysaccharides, un polyéther tel que le polyoxyde d'éthylène glycol (PEG) ou le polypropylène glycol (PPG), un polyamide, lesdits radicaux et/ou groupes étant optionnellement substitués par un ou plusieurs groupes hydroxyles, acides, amines, aminoalkyles, aminoacides, thiols, thioalkyles, uréthanes, urées, halogènes, ou un groupement L-V dans lequel L est un bras espaceur (ou linker) et V est un vecteur, et à la condition que : V soit l'unité A représente le groupement acétylénique suivant : R3 R4 V soit l'unité B représente l'un des groupements acétyléniques suivants : R4 'H OU Au sens de la présente invention, on entend par : - Alkyle : un groupe aliphatique hydrocarboné saturé, linéaire ou ramifié, ayant de préférence 1 à 12 atomes de carbone, de préférence de 1 à 6 atomes de carbone. Le terme « ramifié » signifie qu'au moins un groupe alkyle inférieur tel qu'un méthyle ou un éthyle est porté par une chaîne alkyle linaire. A titre de groupe alkyle, on peut mentionner par exemple les groupes méthyle, éthyle, n-propyle, i-propyle, n-butyle, t-butyle et n-pentyle. - Alcoxy : un groupe 0-alkyle dans lequel le groupe alkyle peut prendre la même signification que celle indiquée ci-dessus. A titre d'exemple de groupes alcoxy, on peut notamment citer les groupes méthoxy, éthoxy, n-propoxy, iso-propoxy, n-butoxy et pentoxy. - Aryle : tout groupe fonctionnel ou substituant dérivé d'au moins un cycle aromatique ; un cycle aromatique correspond à tout groupe mono- ou polycyclique plan comportant un système n délocalisé dans lequel chaque atome du cycle comporte une orbitale p, lesdites orbitales p se recouvrant les unes les autres. Parmi de tels groupes aryle, on peut mentionner les groupes phényle, benzyle, benzylcyclobutène, pentalène, naphthalène, benzylphényle, et anthracène. Les groupes aryles de l'invention comprennent de préférence 1 à 12 atomes de carbone, et plus préférentiellement 5 ou 6 atomes de carbone. - Aralkyle : tout groupe dérivé d'un groupe alkyle tel que défini ci-dessus dans lequel un atome d'hydrogène est remplacé par un groupe aryle. - Hétéroaryle : tout groupe fonctionnel ou substituant dérivé d'au moins un cycle aromatique tel que défini ci-dessus et contenant au moins un hétéroatome choisi parmi P, S, et N ; parmi les groupes hétéroaryle, on peut mentionner les groupes furane, pyridine, pyrrole, thiophène, imidazole, pyrazole, oxazole, isoxazole, thiazole, isothiazole, pyridine, pyrazine, pyrimidine, pyridazine, benzofurane, isobenzofurane, indole, isoindole, benzothiophène, benzo[c]thiophène, benzimidazole, indazole, benzoxazole, benzisoxazole, benzothiazole, quinoléine, isoquinoléine, quinoxaline, quinazoline, cinnoline, purine, et acridine. - Groupe hydrocarboné ou hétérocarboné mono- ou polycyclique saturé ou insaturé : tout groupe fonctionnel ou substituant dérivé d'un cycle non aromatique comportant au moins 10 3 atomes de carbone, et de préférence 1 à 12 atomes de carbone, comportant éventuellement, de façon optionnelle, un ou plusieurs hétéroatomes choisis parmi P, S, O et N. Parmi de tels groupes, on peut notamment citer le cyclopropyle, le cyclobutyle, le cyclopentyle, le cyclohexyle ; le groupe cyclohexyle étant préféré. Parmi les monosaccharides utilisables selon la présente invention, on peut citer : le 15 glucose, le lactose, le fructose, le mannose, le galactose, le ribose, le maltose, le saccharose. On peut également citer les monosaccharides à chaîne ouverte. Parmi les dérivés aminés de sucres, on peut citer notamment la glucosamine, la galactosamine. Parmi les polysaccharides utilisables selon la présente invention, on peut citer les chaînes constituées de plusieurs unités monosaccharidiques comme par exemple : le saccharose, le maltose et l'acide lactobionique. 20 Lorsque l'on parle de polyéther, tel que le polyoxyde d'éthylène glycol (PEG) ou le polypropylène glycol (PPG), celui-ci comprend avantageusement de 30 à 100 unités EG ou PG, et de préférence de 50 à 60 unités_ Lorsque l'on parle de polyamide, celle-ci comprend avantageusement 30 à 100 unités monomériques. 25 Selon une forme de réalisation avantageuse, les composés précurseurs de l'invention répondent à la formule (IA) suivante : (TA) dans laquelle l'unité A est choisie parmi les groupements de formule : OU OU 5 ou ou R6 R6 0 OH NH2 Re R6 R6 La présente invention se rapporte également à des composés, aussi appelés agents chélatants, susceptibles d'être obtenus à partir d'un composé de formule (I) selon l'invention, et répondant à la formule (II) suivante : (II) dans laquelle n, Rh R2, R3, R4, R5, et R7 sont tels que définis précédemment, et : l'unité A' est choisie parmi les groupements de foimule : R3 \)ziz" 4 N N-N Y ou R6 ou 1::%;\ ou R6 OU R6 OU R6,,)i1/44 OU R6 R5 ~NH2 R6 0 OH 0 R7 - l'unité B' est choisie parmi les groupements de formule : NV OU NV Y Il / N-N Y OU R6 -\shi OU Y est choisi parmi un radical alkyle, alcoxy, aryle, aralkyle, hétéroalkyle, hétéroaryle, hétéroaralkyle, un groupe hydrocarboné ou hétérocarboné mono- ou polycyclique saturé ou insaturé, un mono- ou un polysaccharide, ou un dérivé aminé de mono- ou de polysaccharides, un polyéther tel que le polyoxyde d'éthylène glycol (PEG) ou le polypropylène glycol (PPG), une polyamine, un polythioéther, un polyester, lesdits radicaux et/ou groupes étant optionnellement substitués par un ou plusieurs groupes hydroxyles, acides, amines, aminoalkyles, aminoacides, thiols, thioalkyles, uréthanes, urées, halogènes, ou un groupement L-V dans lequel L est un bras espaceur (ou linker) et V est un vecteur tels que définis précédemment, et à la condition que : ,/ soit l'unité A' représente le groupement triazole suivant : R3 )1.111" N" Il N N Y ,/ soit l'unité B' représente l'un des groupements triazoles suivants : R3 4 N 11 N-N Y OU N-N Y Selon un mode de réalisation préféré, les agents chélatants de l'invention répondent à la formule (IIA) suivante A'-NH NH (IIA) dans laquelle n, R1, R2, R3, R4, R5, R6 et R7 sont tels que définis précédemment, et : l'unité A' est choisie parmi les groupements de formule : OU OU OU SH 5 R6 R5b. OU R6 0 OH OU R$ NEI2 Re >NH R6 R6 0R7 De manière encore plus préférée, les agents chélatants de l'invention répondent à la formule (IIB) suivante : R5 R6 (IIB) dans laquelle n, RI, R2, R3, R4, R5, R.6 et Y sont tels que définis précédemment. Le procédé de préparation d'un composé de formule (II) selon l'invention par chimie click par cycloaddition 1,3-dipolaire entre l'azoture et la fonction alcyne du composé de formule (I) (cycloaddition de Huisgen) fait également partie de l'invention. Plus précisément, ce procédé consiste en la réaction d'un composé de formule (I) selon l'invention avec un azoture organique de type Y-N3, ce dernier pouvant être généré in situ à partir d'azoture de sodium et d'un halogénure de type Y-Hal dans lequel Hal représente un atome d'halogène, et Y est tel que défini précédemment, ladite réaction étant réalisée en présence de cuivre (Organic Letters 2004, 6(22) : p. 3897-3899 ; Biorganic & Medicinal Chemistry Letters 2008, 18(3) : p. 1195-1198). De préférence, l'atome d'halogène Hal est l'atome de brome. L'invention concerne donc un radiotraceur susceptible d'être obtenu à partir d'un composé de formule (II) selon l'invention, et répondant à la formule (III) suivante : (III) dans laquelle n, R1, R2, R3, R4, R5, R6 et Y sont tels que définis précédemment, et : - M est un radioélément métallique, - n' et n", identiques ou différents, sont égaux à 0 ou 1. Lorsque l'un des radicaux Ri, R2, R3, R4, R5, R6 ou Y est un groupement L-V dans lequel L est un bras espaceur (ou linker) et V est un vecteur : le bras espaceur (ou linker) L est de préférence choisi parmi une chaîne polycarbonée aliphatique ou aromatique substituée ou non substituée, un polyéther tel que le polyoxyde d'éthylène (PEG), une polyamine, une polylysine, un dendrimère, un polypeptide, une plateforme peptidique linéaire ou cyclique structurée de type RAFT (Reversible Addition-Fragmentation chain Transfer), un polysaccharide, un phospholipide, un acide nucléique ou un acide nucléique peptidique (PNA), et le vecteur V est une molécule biologiquement active, telle que : un peptide ou un dérivé peptidique, et notamment les pseudopeptides, les composés peptidomimétiques ou encore les polymères peptidiques et pseudopeptidiques, une protéine, un acide nucléique, un liposome, un oligonucléotide d'ADN ou d'ARN modifié ou non modifié, un nucléotide, un nucléoside, un aptamère, ou un acide nucléique peptidique (PNA) modifié ou non modifié, une vitamine, un stéroïde, un phospholipide, un récepteur du système nerveux central, une polyamine, un polyester, un polythioéther, un polymère aliphatique, aromatique ou hétéroaromatique substitué ou non substitué. De manière avantageuse, le bras espaceur (ou linker) L est un peptide ou un dérivé peptidique ayant de préférence 1 à 12 résidus acides aminés, un polyéther tel que le 5 polyoxyde d'éthylène glycol (PEG) ou le polypropylène glycol (PPG) ayant de préférence 1 à 40 unités EG ou PG, une polyamine ayant de préférence 1 à 20 unités monomériques, un mono- ou un polysaccharide ayant de préférence 1 à 20 unités saccharidiques. De manière particulièrement avantageuse, le radioélément métallique M est choisi parmi 94mTc, "gTc, 99mTc, 1"Re, 186Re, 187Re et 188Re, et n et n' sont égaux à 1. 10 Le radioélément métallique M peut également être choisi parmi 67Ga ou 68Ga, et dans ce cas n et n' sont égaux à 0. Le procédé de préparation d'un composé de formule (III) fait également partie de l'invention, ledit procédé étant réalisé par réaction d'un composé de formule (II) selon l'invention avec un radioélément métallique sous forme d'oxyde, en présence d'une base, 15 telle que le chlorure d'étain ou l'hydrosulfite de sodium. Le radioélément métallique sous forme d'oxyde peut avantageusement être le pertechnétate de sodium (Tc04, Na) ou le perrhénate de sodium (Re04-, Na). Un autre objet de l'invention concerne un kit constitué de : un conteneur comprenant un composé de formule (II) selon l'invention et un 20 agent réducteur tel que le chlorure d'étain ou l'hydrosulfite de sodium, et - un générateur portable comprenant une solution de radioélément métallique, de préférence choisi parmi 94mTc, 99gTc, 99mTc, 185Re, 186Re, 187Re et 188Re, ledit radioélément métallique étant sous forme d'oxyde, et - un conteneur comprenant une base, telle que la triéthylamine dans un solvant 25 adéquate ou un tampon, permettant de ramener le pH du mélange final à une valeur comprise entre 7,2 et 7,6. De manière avantageuse, le composé de formule (II) est présent dans le conteneur sous forme de poudre amorphe ou cristalline, ou éventuellement sous forme d'huile. Un dernier objet de l'invention concerne un composé de formule (III) selon l'invention 30 pour son utilisation in vivo comme radiotraceur diagnostique. Le composé de formule (III) selon l'invention peut être utilisé in vivo comme agent de contraste pour le diagnostic, notamment par imagerie médicale par Tomographie d'Emission MonoPhotonique (TEMP) ou par Tomographie d'Emission de Positrons (TEP). Le composé de formule (II) peut également être utilisé comme agent radio-thérapeutique pour la radiothérapie ciblée de diverses pathologies, ou encore comme agent thérapeutique potentiel. L'invention concerne plus particulièrement le composé de formule (III) pour son utilisation comme radiotraceur non-ciblant, comme par exemple comme radiotraceur de flux circulatoires et métaboliques, ou comme marqueur tissulaire, et notamment pour l'imagerie moléculaire des fonctions cardiaques, rénales, hépatiques, sanguines, cérébrales. Le composé de formule (III) selon l'invention peut également être utilisé comme médicament, et plus particulièrement : - comme agent radio-thérapeutique ciblant intégré, par exemple pour le traitement de cancers, de maladies neurodégénératives, de pathologies du système nerveux central, d'athérosclérose et de thrombose, de maladies cardiovasculaires, de pathologies hépatiques, rénales ou cardiaques, d'hypoxie ou d'inflammation, ou - comme agent radio-thérapeutique bifonctionnel pour des traitements radio- thérapeutiques ciblés, tels que la radiothérapie métabolique, la radiothérapie locale, la radiothérapie vectorisée, la radio-immunothérapie et la radio-immunologie, par exemple pour le traitement de cancers, de maladies neurodégénératives, de pathologies du système nerveux central, d'athérosclérose et de thrombose, d'hypoxie, d'inflammation, de maladies cardiovasculaires, ou de pathologies hépatiques, rénales ou cardiaques. Le radioélément métallique M est de préférence choisi parmi 94mTc et 99mTc pour les applications radio-diagnostiques, 185Re et 187Re pour les applications pharmaceutiques, et 1g6Re et 188Re pour les applications de radiothérapie. Outre les dispositions qui précèdent, l'invention comprend encore d'autres dispositions qui ressortiront du complément de description qui suit, qui se rapporte à des exemples mettant en évidence les propriétés avantageuses des composés de l'invention, ainsi qu'aux Figures annexées dans lesquelles : - la Figure 1 représente les radiochromatogrammes montrant la stabilité de TriaS-99mTe (99mTe-1) en milieu acide dans les conditions de précipitations des protéines plasmatiques, la Figure 2 montre les radiochromatogrammes de TriaS-99mTc (99mTe-1) après 30 incubation en plasma murin à 37°C, - la Figure 3 représente les cinétiques de dégradation en plasma murin (concentration nanomolaire, 37°C, 6h) d'un radiotraceur selon l'invention (99mTe-1 : -) et des deux références (N2S2, 99mTc-13 : À et N3S, 99mTc-14 : la Figure 4 montre l'évolution du pourcentage de complexe résiduel après 2h d'incubation en plasma murin lorsque la proportion initiale de complexe varie, - la Figure 5 représente la biodistribution observée pour le Trias-99mTc (a) et le 99mTc-réduit (^) 2h après injection chez la souris (n=3), - la Figure 6 est une visualisation au f3-imager en utilisant la radiation 0- minoritaire associée à la décroissance du 99mTc. A gauche : coupe de souris sacrifiée 2h après injection de TriaS-99mTc - A droite : coupe de souris après injection d'un traceur ayant une accumulation résiduelle importante dans les organes du tractus gastrointestinal, la Figure 7 est une analyse par radio-HPLC des urines de souris saines recueillies 2h après injection, le Figure 8 représente le profil en radio-HPLC du complexe TriaS-99(m+g)Te après 2h d'incubation dans de l'urine de souris saine à 37°C, la Figure 9 est un radiochromatogramme étudiant la stabilité de TriaS99mTe dans le sang murin (37°C, 2h), - le Figure 10 représente les chromatogrammes HPLC et radio-HPLC de : A : des composés 51a et 99mTc-51a ; B : des composés 51b et 99mTc-51b ; C : des composés 53 et 99mTc-53. PARTIE EXPER1MENTALE : Divers agents chélatants contenant un motif triazole et répondant à la définition des composés de formule (II) de l'invention ont été synthétisés à partir de précurseurs de formule (I). Parmi ces agents chélatants, un a été utilisé pour la réalisation d'un radiotraceur répondant à la définition des composés de formule (III). Ce composé a ensuite été étudié in vitro et in vivo, puis son potentiel pour la réalisation de traceurs illustré par une application à l'imagerie de l'intégrine 433. I/ PROCEDURES DE CYCLOADDITION 1,3-DIPOLAIRE DE HUISGEN A PARTIR DE PRECURSEUR DE FORMULE (I) ^ La formation de triazoles via la cycloaddition de Huisgen peut s'effectuer dans des conditions très variées. Dans le cas présent, deux types de conditions ont été mis en oeuvre. Finally, the structure of these complexes is more rigid and more varied than the tetricarbonyl complexes, thus making it possible to envisage various approaches of functionalization via combinatorial methods. ## STR1 ## Scheme 8: 99mTc-N3S complex with a pyridyl or imidazoyl nucleus The inventors have now discovered a basic structure combining the properties of these two types of complexes: they are complexes of N3X-type metal radioelements in which X = N, O, S in which a 1,2,3-triazole nucleus directly participates in the complexation via nitrogen 3. Obtaining this triazole nucleus by click chemistry makes it easy to introduce diversity into this position by combinatorial chemistry during Subsequently, the subject of the present invention is the precursor compounds corresponding to the following formula (I): (I) in which: the unit A is chosen among the groups of formula: R 3 .54 or OR OR OR OR or R 6 OH R 6 R 6 R 6 R 6 R 6 SH 6 R 7 R 6 R 6 R 6 R 6 R 6 SH 6 R 7 B is chosen from the groups of formula: R 4 0 3 4 % 1 CH or OR or R5, OR RK Where n is 0 or 1, R 1, R 2, R 3, R 4, R 5, R 6 and R 7, which may be identical or different, are chosen from H, an alkyl, alkoxy, aryl, aralkyl, heteroalkyl, heteroaryl or heteroaralkyl radical; saturated or unsaturated mono- or polycyclic hydrocarbon or heterocarbon group, a mono- or polysaccharide, or an amine derivative of mono- or polysaccharides, a polyether such as polyethylene glycol oxide (PEG) or polypropylene glycol (PPG) a polyamide, said radicals and / or groups being optionally substituted by one or more hydroxyl groups, acids, amines, aminoalkyls, amino acids, thiols, thioalkyls, urethanes, ureas, halogens, or an LV group in which L is a spacer arm ( or linker) and V is a vector, and with the proviso that: V is unit A represents the following acetylenic group: R3 R4 V or unit B represents one of the following acetylenic groups: R4 'H OR of the present invention, by: - Alkyl: a linear or branched saturated hydrocarbon aliphatic group, preferably having 1 to 12 carbon atoms, preferably 1 to 6 carbon atoms. The term "branched" means that at least one lower alkyl group such as methyl or ethyl is carried by a linear alkyl chain. As an alkyl group, there may be mentioned, for example, methyl, ethyl, n-propyl, i-propyl, n-butyl, t-butyl and n-pentyl groups. Alkoxy: an O-alkyl group in which the alkyl group can have the same meaning as that indicated above. By way of example of alkoxy groups, mention may especially be made of methoxy, ethoxy, n-propoxy, iso-propoxy, n-butoxy and pentoxy groups. Aryl: any functional group or substituent derived from at least one aromatic ring; an aromatic ring corresponds to any planar mono- or polycyclic group comprising a delocalized system in which each atom of the cycle comprises an orbital p, said orbital p overlapping each other. Among such aryl groups, there may be mentioned phenyl, benzyl, benzylcyclobutene, pentalene, naphthalene, benzylphenyl, and anthracene groups. The aryl groups of the invention preferably comprise 1 to 12 carbon atoms, and more preferably 5 or 6 carbon atoms. Aralkyl: any group derived from an alkyl group as defined above in which a hydrogen atom is replaced by an aryl group. - Heteroaryl: any functional group or substituent derived from at least one aromatic ring as defined above and containing at least one heteroatom selected from P, S, and N; among the heteroaryl groups, mention may be made of furan, pyridine, pyrrole, thiophene, imidazole, pyrazole, oxazole, isoxazole, thiazole, isothiazole, pyridine, pyrazine, pyrimidine, pyridazine, benzofuran, isobenzofuran, indole, isoindole, benzothiophene, benzo [ c] thiophene, benzimidazole, indazole, benzoxazole, benzisoxazole, benzothiazole, quinoline, isoquinoline, quinoxaline, quinazoline, cinnoline, purine, and acridine. Saturated or unsaturated mono- or polycyclic hydrocarbon or heterocarbon group: any functional group or substituent derived from a non-aromatic ring comprising at least 10 3 carbon atoms, and preferably 1 to 12 carbon atoms, optionally optionally comprising one or more heteroatoms selected from P, S, O and N. Among such groups, there may be mentioned cyclopropyl, cyclobutyl, cyclopentyl, cyclohexyl; the cyclohexyl group being preferred. Among the monosaccharides which can be used according to the present invention, mention may be made of: glucose, lactose, fructose, mannose, galactose, ribose, maltose, sucrose. One can also mention open-chain monosaccharides. Amino derivatives of sugars include glucosamine and galactosamine. Among the polysaccharides that may be used according to the present invention, there may be mentioned chains consisting of several monosaccharide units, for example: sucrose, maltose and lactobionic acid. When polyether, such as polyethylene glycol oxide (PEG) or polypropylene glycol (PPG) is used, it advantageously comprises from 30 to 100 EG or PG units, and preferably from 50 to 60 units. When speaking of polyamide, it advantageously comprises 30 to 100 monomeric units. According to one advantageous embodiment, the precursor compounds of the invention correspond to the following formula (IA): (TA) in which the unit A is chosen from the groups of formula: OR OR 5 or or R 6 R 6 OH The present invention also relates to compounds, also known as chelating agents, obtainable from a compound of formula (I) according to the invention, and corresponding to the following formula (II): ## STR2 ## (II) wherein n, Rh, R2, R3, R4, R5, and R7 are as defined above, and: the unit A 'is selected from the groups of foimule: R3 \) ziz "4 N NN Y or R6 or 1 ::%; \ or R6 OR R6 OR R6 ,,) i1 / 44 OR R6 R5 ~ NH2 R6 0 OH 0 R7 - Unit B 'is selected from groups of formula: NV OR NV Y Il / NN Wherein Y is selected from alkyl, alkoxy, aryl, aralkyl, heteroalkyl, heteroaryl, heteroaralkyl, saturated mono- or polycyclic hydrocarbon or heterocarbon o u unsaturated, a mono- or a polysaccharide, or an amine derivative of mono- or polysaccharides, a polyether such as polyethylene glycol oxide (PEG) or polypropylene glycol (PPG), a polyamine, a polythioether, a polyester said radicals and / or groups being optionally substituted by one or more hydroxyl, acid, amine, aminoalkyl, amino acid, thiol, thioalkyl, urethane, urea, halogen groups, or an LV group in which L is a spacer arm (or linker) and V is a vector as defined above, and with the proviso that:, / is the unit A 'represents the following triazole group: R3) 1.111 "N" II NNY, / is the unit B' represents one triazole groups according to a preferred embodiment, the chelating agents of the invention have the following formula (IIA) A'-NH NH (IIA) in which n, R1, R2, R3, R4, R5, R6 and R7 are as previously defined, and the unit A 'is chosen from the groups of formula: OR OR OR SH 5 R6 R5b. Or more preferably, the chelating agents of the invention have the following formula (IIB): R5 R6 (IIB) in which n, R1, R2, R3 , R4, R5, R.6 and Y are as defined above. The method for preparing a compound of formula (II) according to the invention by click chemistry by 1,3-dipolar cycloaddition between the azide and the alkyne function of the compound of formula (I) (cycloaddition of Huisgen) is also part of of the invention. More specifically, this process consists in the reaction of a compound of formula (I) according to the invention with an organic azide of type Y-N3, the latter being able to be generated in situ from sodium azide and from a sodium azide. Y-Hal halide in which Hal represents a halogen atom, and Y is as defined above, said reaction being carried out in the presence of copper (Organic Letters 2004, 6 (22): 3897-3899; Medicinal Chemistry Letters 2008, 18 (3): 1195-1198). Preferably, the Hal halogen atom is the bromine atom. The invention therefore relates to a radiotracer capable of being obtained from a compound of formula (II) according to the invention, and corresponding to the following formula (III): (III) in which n, R1, R2, R3 , R4, R5, R6 and Y are as defined above, and: - M is a metal radioelement, - n 'and n ", identical or different, are equal to 0 or 1. When one of the radicals R 1, R 2 , R3, R4, R5, R6 or Y is an LV group in which L is a spacer arm (or linker) and V is a vector: the spacer arm (or linker) L is preferably selected from an aliphatic or aromatic polycarbonate chain substituted or unsubstituted, a polyether such as polyethylene oxide (PEG), a polyamine, a polylysine, a dendrimer, a polypeptide, a structured linear or cyclic peptide platform of the RAFT type (Reversible Addition-Fragmentation Chain Transfer), a polysaccharide, a phospholipid, a nucleic acid or a peptide nucleic acid (PNA ), and the vector V is a biologically active molecule, such as: a peptide or a peptide derivative, and in particular pseudopeptides, peptidomimetic compounds or else peptide and pseudopeptide polymers, a protein, a nucleic acid, a liposome, an oligonucleotide modified or unmodified DNA or RNA, a nucleotide, a nucleoside, a aptamer, or a modified or unmodified peptide nucleic acid (PNA), a vitamin, a steroid, a phospholipid, a receptor of the central nervous system, a polyamine, a polyester, a polythioether, a substituted or unsubstituted aliphatic, aromatic or heteroaromatic polymer. Advantageously, the spacer arm (or linker) L is a peptide or a peptide derivative preferably having 1 to 12 amino acid residues, a polyether such as polyethylene glycol oxide (PEG) or polypropylene glycol (PPG). preferably having 1 to 40 EG or PG units, a polyamine preferably having 1 to 20 monomeric units, a mono- or polysaccharide preferably having 1 to 20 saccharide units. Particularly advantageously, the metal radioelement M is selected from among 94mTc, gTc, 99mTc, 1Re, 186Re, 187Re and 188Re, and n and n are equal to 1. The metal radioelement M may also be selected from 67Ga. or 68Ga, and in this case n and n 'are equal to 0. The process for preparing a compound of formula (III) is also part of the invention, said process being carried out by reaction of a compound of formula ( II) according to the invention with a metal radioelement in oxide form, in the presence of a base, such as tin chloride or sodium hydrosulfite. The metal radioelement in oxide form may advantageously be sodium pertechnetate (TcO4, Na) or sodium perrhenate (ReO4-, Na). Another subject of the invention relates to a kit consisting of: a container comprising a compound of formula (II) according to the invention and a reducing agent such as tin chloride or sodium hydrosulfite, and - a generator portable device comprising a metal radioelement solution, preferably selected from 94mTc, 99gTc, 99mTc, 185Re, 186Re, 187Re and 188Re, said metal radioelement being in oxide form, and - a container comprising a base, such as triethylamine in a suitable solvent or buffer, to bring the pH of the final mixture back to a value between 7.2 and 7.6. Advantageously, the compound of formula (II) is present in the container in the form of amorphous or crystalline powder, or optionally in the form of an oil. A final subject of the invention relates to a compound of formula (III) according to the invention for its use in vivo as a diagnostic radiotracer. The compound of formula (III) according to the invention can be used in vivo as a contrast agent for the diagnosis, in particular by medical imaging by MonoPhotonic Emission Tomography (TEMP) or by Positron Emission Tomography (PET). The compound of formula (II) may also be used as a radio-therapeutic agent for targeted radiotherapy of various pathologies, or as a potential therapeutic agent. The invention relates more particularly to the compound of formula (III) for its use as a non-targeting radiotracer, for example as a radiotracer of circulatory and metabolic flux, or as a tissue marker, and in particular for the molecular imaging of cardiac and renal functions. , hepatic, sanguine, cerebral. The compound of formula (III) according to the invention may also be used as a medicament, and more particularly: as an integrated targeting radiotherapeutic agent, for example for the treatment of cancers, neurodegenerative diseases, pathologies of the central nervous system, atherosclerosis and thrombosis, cardiovascular diseases, hepatic, renal or cardiac pathologies, hypoxia or inflammation, or - as a bifunctional radiotherapeutic agent for targeted radiotherapy treatments, such as metabolic radiotherapy, local radiotherapy, vector radiotherapy, radioimmunotherapy and radioimmunology, for example for the treatment of cancers, neurodegenerative diseases, diseases of the central nervous system, atherosclerosis and thrombosis, hypoxia, inflammation , cardiovascular diseases, or liver, kidney or heart diseases. The metal radioelement M is preferably selected from 94mTc and 99mTc for radio-diagnostic applications, 185Re and 187Re for pharmaceutical applications, and 1g6Re and 188Re for radiotherapy applications. In addition to the foregoing, the invention also comprises other arrangements which will become apparent from the additional description which follows, which relates to examples showing the advantageous properties of the compounds of the invention, as well as to the accompanying figures in FIG. which: FIG. 1 represents the radiochromatograms showing the stability of TriaS-99mTe (99mTe-1) in an acidic medium under the precipitation conditions of the plasma proteins; FIG. 2 shows the radiochromatograms of TriaS-99mTc (99mTe-1) after incubation in murine plasma at 37 ° C, - Figure 3 represents the kinetics of degradation in murine plasma (nanomolar concentration, 37 ° C, 6h) of a radiotracer according to the invention (99mTe-1: -) and two references (N2S2, 99mTc-13: A and N3S, 99mTc-14: Figure 4 shows the evolution of the percentage of residual complex after 2 hours of incubation in murine plasma when the initial proportion of complex varies, - the F Fig. 5 shows the biodistribution observed for Trias-99mTc (a) and 99mTc-reduced (^) 2h after injection in mice (n = 3), - Fig. 6 is a visualization at f3-imager using radiation 0 - minority associated with the decay of 99mTc. Left: sac sac sacrificed 2h after injection of TriaS-99mTc - Right: mouse section after injection of a tracer with significant residual accumulation in the organs of the gastrointestinal tract, Figure 7 is a radio-HPLC analysis of urine of healthy mice collected 2 h after injection, FIG. 8 represents the radio-HPLC profile of the complex TriaS-99 (m + g) Te after 2 h of incubation in healthy mouse urine at 37 ° C., FIG. 9 is a radiochromatogram studying the stability of TriaS99mTe in murine blood (37 ° C, 2h); Figure 10 shows the HPLC and radio-HPLC chromatograms of: A: compounds 51a and 99mTc-51a; B: 51b and 99mTc-51b compounds; C: 53 and 99mTc-53 compounds. EXPERIMENTAL PART: Various chelating agents containing a triazole unit and meeting the definition of the compounds of formula (II) of the invention were synthesized from precursors of formula (I). Among these chelating agents, one has been used for producing a radiotracer which meets the definition of the compounds of formula (III). This compound was then studied in vitro and in vivo, then its potential for the production of tracers illustrated by an application to the 433 integrin imaging. I / PROCEDURES FOR THE 1.3-DIPOLAR CYCLOADDITION OF HUISGEN FROM PRECURSOR FORMULA (I) The formation of triazoles via the cycloaddition of Huisgen can be carried out under a wide variety of conditions. In the present case, two types of conditions have been implemented.

Un protocole 1 réalisé dans un mélange DMSO/eau (9/1) en formant l'azoture de benzyle in situ à partir de bromure de benzyle et d'azoture de sodium a été réalisé. Le catalyseur utilisé est CuSO4, 5H20 en présence d'ascorbate de sodium (Procédure 1, Schéma 9) (Feldrnan, A. K. et al., Organic Letters, 2004. 6(22) : p. 3897-3899 ; Aufort, M. et al. A protocol 1 made in a DMSO / water (9/1) mixture forming benzyl azide in situ from benzyl bromide and sodium azide was carried out. The catalyst used is CuSO 4, 5H 2 O in the presence of sodium ascorbate (Procedure 1, Scheme 9) (Feldmann, AK et al., Organic Letters, 2004. 6 (22): 3897-3899; al.

Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2008. 18(3) : p. 1195-1198). H (1.0 équiv) (1.0 équiv.) NaN3 (1.4 équiv.) CuSO4.5H20 (0.2 équiv.) sodium ascorbate (1.2 équiv.) L-Proline (0.2 équiv..) Na2CO3 (0.2 équiv.) DMSO:H20 (9:1) 60°C Schéma 9 : Procédure de cycloaddition de Huisgen n°1 : DMSO/H20 (9/1), 60°C. Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 2008. 18 (3): p. 1195-1198). H (1.0 equiv) (1.0 equiv.) NaN3 (1.4 equiv.) CuSO4.5H2O (0.2 equiv.) Sodium ascorbate (1.2 equiv.) L-Proline (0.2 equiv.) Na2CO3 (0.2 equiv.) DMSO: H2O ( 9: 1) 60 ° C Scheme 9: Huisgen # 1 cycloaddition procedure: DMSO / H 2 O (9/1), 60 ° C.

Protocole 1 : L'alcyne (1.0 équiv.) est mis en solution dans le minimum d'un mélange EtOH/H20 (7/3). La L-Proline (0.2 équiv.), le carbonate de sodium (0.2 équiv.), le bromure de benzyle (1.0 équiv.), l'ascorbate de sodium (0.2 équiv., solution aqueuse molaire), CuSO4,5H20 (0.2 équiv., solution aqueuse molaire) et l'azoture de sodium (1.4 équiv.) sont ajoutés au mélange qui devient vert pâle. Le mélange est placé sous agitation au micro-onde (300W, 80°C) dans un flacon scellé durant 30 minutes. Le solvant est alors éliminé sous pression réduite et la solution brune obtenue est reprise dans l'acétate d'éthyle puis lavée par une solution saturée de NaCl. Les phases organiques sont regroupées, séchées sur sulfate de sodium anhydre et le solvant est évaporé sous pression réduite pour conduire au composé désiré. Protocol 1: The alkyne (1.0 equiv.) Is dissolved in the minimum of an EtOH / H 2 O mixture (7/3). L-Proline (0.2 equiv.), Sodium carbonate (0.2 equiv.), Benzyl bromide (1.0 equiv.), Sodium ascorbate (0.2 equiv., Molar aqueous solution), CuSO4.5H2O (0.2 equiv.) equiv., molar aqueous solution) and sodium azide (1.4 equiv.) are added to the mixture which becomes pale green. The mixture is stirred in the microwave (300W, 80 ° C) in a sealed flask for 30 minutes. The solvent is then removed under reduced pressure and the brown solution obtained is taken up in ethyl acetate and then washed with a saturated solution of NaCl. The organic phases are combined, dried over anhydrous sodium sulphate and the solvent is evaporated under reduced pressure to yield the desired compound.

Un protocole 2 utilisant les micro-ondes en flacon scellé (300W, 80°C, 30 min) afin de réduire considérablement les temps de réaction (Klein, M. et al., Organic & Biomolecular Chemistry, 2009. 7(17) : p. 3421-3429) a également été mis en oeuvre (Schéma 10). En outre, cette réaction est effectuée dans un mélange EtOH : H2O (7 : 3) permettant une bonne solubilisation des réactifs et un traitement beaucoup plus efficace. Protocol 2 using microwaves in sealed vial (300W, 80 ° C, 30 min) to significantly reduce reaction times (Klein, M. et al., Organic & Biomolecular Chemistry, 2009. 7 (17): 3421-3429) has also been implemented (Scheme 10). In addition, this reaction is carried out in a mixture EtOH: H 2 O (7: 3) allowing a good solubilization of the reagents and a much more effective treatment.

H R (1.0 équiv) (1.2 équiv.) NaN3 (1.4 équiv.) CuSO4.5H20 (0.2 équiv.) sodium ascorbate (0.2 équiv.) L-Proline (0.2 équiv..) Na2CO3 (0.2 équiv.) EtOH:H20 (7:3) MW, 300W, 80°C, 30 min N N Schéma 10 : Procédure de cycloaddition de Huisgen n°2 : EtOH/H20 (7/3), MW, 300W, 80°C, 30 min. HR (1.0 equiv) (1.2 equiv) NaN3 (1.4 equiv.) CuSO4.5H2O (0.2 equiv) sodium ascorbate (0.2 equiv) L-Proline (0.2 equiv.) Na2CO3 (0.2 equiv) EtOH: H2O ( 7: 3) MW, 300W, 80 ° C, 30 min NN Scheme 10: Huisgen No. 2 Cycloaddition Procedure: EtOH / H2O (7/3), MW, 300W, 80 ° C, 30 min.

Protocole 2 L'alcyne (1.0 équiv.) est mis en solution dans le minimum d'un mélange Et0H/H20 (7/3). La L-Proline (0.2 équiv.), le carbonate de sodium (0.2 équiv.), le bromure de benzyle (1.0 équiv.), l'ascorbate de sodium (0.2 équiv., solution aqueuse molaire), CuSO4,5H20 (0.2 équiv., solution aqueuse molaire) et l'azoture de sodium (1.4 équiv.) sont ajoutés au mélange qui devient vert pâle. Le mélange est placé sous agitation au micro-onde (300W, 80°C) dans un flacon scellé durant 30 minutes. Le solvant est alors éliminé sous pression réduite et la solution brune obtenue est reprise dans l'acétate d'éthyle puis lavée par une solution saturée de NaCl. Les phases organiques sont regroupées, séchées sur sulfate de sodium anhydre et le solvant est évaporé sous pression réduite pour conduire au composé désiré. Protocol 2 The alkyne (1.0 equiv.) Is dissolved in the minimum of EtOH / H 2 O (7/3). L-Proline (0.2 equiv.), Sodium carbonate (0.2 equiv.), Benzyl bromide (1.0 equiv.), Sodium ascorbate (0.2 equiv., Molar aqueous solution), CuSO4.5H2O (0.2 equiv.) equiv., molar aqueous solution) and sodium azide (1.4 equiv.) are added to the mixture which becomes pale green. The mixture is stirred in the microwave (300W, 80 ° C) in a sealed flask for 30 minutes. The solvent is then removed under reduced pressure and the brown solution obtained is taken up in ethyl acetate and then washed with a saturated solution of NaCl. The organic phases are combined, dried over anhydrous sodium sulphate and the solvent is evaporated under reduced pressure to yield the desired compound.

Dans les deux protocoles, la formation du triazole est toujours l'avant dernière étape de la synthèse des agents chélatants. Le composé est alors déprotégé par un mélange TFA/TIPS/eau sans purification préalable afin de dévoiler les fonctions polaires chélatantes protégées. Une fois déprotégé, le composé est alors purifié par RP-HPLC semi-préparative. In both protocols, the formation of triazole is still the penultimate step in the synthesis of chelating agents. The compound is then deprotected with a TFA / TIPS / water mixture without prior purification in order to reveal the protected chelating polar functions. Once deprotected, the compound is then purified by semi-preparative RP-HPLC.

II/ SYNTHESES DES AGENTS CHELATANTS DE FORMULE (II) Douze agents chélatants de foimule (II) (1 - 12) subdivisés en deux séries : série A et série B, et deux agent chélatants de références non triazole, respectivement de type N2S2 (13) et N3 S (14), ont été synthétisés. II / SYNTHESES OF THE CHELATING AGENTS OF FORMULA (II) Twelve chelating agents of foimule (II) (1 - 12) subdivided into two series: series A and series B, and two non-triazole reference chelating agents, respectively of N2S2 type (13) ) and N3 S (14) were synthesized.

Tableau I : Série A ,,o N o,..---\ os.....'...,), o......--\ Al \-Ph -., --., .......,. SH NH2 NHAc \ N.....-NH H1.4 N li N ,-À \ ..-.A A2 *-..', 011 ''''"'. SH OH 0 OH Série B 0 1-..., / HO /.,... B1 HS/ HO --. 0 / ---NH N li r N-- N HN--1 Ph-/ 0,....., NH o / / /^,,, B2 (7'-'...; N-N HN.-../ el le _z_....' Ph-" HS HO HO" -"-0 III A- Synthèse des agents chélatants de la Série A Les six agents chélatants de formule (II) de la série A peuvent être séparés en deux catégories : d'une part des agents chélatants diamide-triazole (1 et 2) ou triamide-triazole (3) obtenus par un double couplage peptidique et qui constituent la série Al, d'autre part trois agents chélatants de type amide-amine-triazole (4 - 6) formant la série A2 (Tableau I). Table I: Series A ,, o N o, ..--- \ os .....'...,), o ......-- \ Al \ -Ph -., -. , .......,. SH NH2 NHAc N H N N H N N N, A A, A 0, 0, 0, 0, SH OH 0 OH Series B 0 1 -..., / HO /., ... B1 HS / HO -. 0 / --- NH N li r N-- N HN - 1 Ph- / 0, ....., NH o ## STR1 ## Synthesis of Chelating Agents ## STR1 ## The six chelating agents of formula (II) of series A can be separated into two categories: on the one hand diamine-triazole (1 and 2) or triamide-triazole (3) chelating agents obtained by a double peptidic coupling and which constitute the Al series, on the other hand three amide-amine-triazole chelating agents (4-6) forming the A2 series (Table I).

Série Al (agents chélatants 1- 3) : Les synthèses des agents chélatants 1 et 2 sont réalisées en 4 étapes par un double couplage peptidique suivi d'une réaction de cycloaddition de Huisgen. Le composé 3 est obtenu directement à partir du composé 2 par acylation afin de pouvoir étudier l'effet d'un agent chélatant triamide sur la complexation du technétium (Schéma 11). 15 0 a HS OH TrIS OH h Schéma 11 : Synthèse des agents chélatants de la série Al : (a) TrtOH, TFA, rt, 3h, 92% ; (b) BoeG1y0H, DCC, DIPEA, THF, rt, 24h, 64% ; (c) 1) DCM/TFA (2/1), 0°C, 1.5h, 2) 15, DCC, DIPEA, DCM, rt, 24hn 50% ; (d) CuAAC procédure n°1, 38% ; (e) TFA/TIPS/H20 (95/2.5/2.5), rt, 2h ; (f) 1) DCM/TFA (2/1), rt, lh, 2) BocGly0H, DCC, DIPEA, DMF, rt, 48h, 73% ; (g) CuAAC procédure n°2, 78% ; (h) (Ac0)20, DIPEA, rt, 2h, 93%. Le triphénylméthanol (5.2 g, 20.0 mmol) est dissous dans 60 mL de TFA et l'acide mercaptoacétique (1.39 mL, 20.0 mmol, 1.0 équiv.) est ajouté. Après 3h d'agitation à température ambiante sous atmosphère d'argon, le TFA est éliminé sous pression réduit. Du toluène est chassé à 3 reprises sur le solide orange obtenu conduisant à 15 sous la forme d'un solide blanc (6.12 g,18.3 mmol, 92%). 'H RMN (CDCI3, 250 MHz) : 5 7.31 (m, 15H, Trt), 3.05 (s, 2H, CH2); 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : ô 176.0 (CO), 143.9 (C, Ph), 129.7 (C, mea Trt), 128.2 (C, ortho Trt), 127.1 (C, para Trt), 67.3 (C, Trt), 34.6 (CH2). Al series (chelating agents 1-3): The syntheses of the chelating agents 1 and 2 are carried out in 4 steps by a double peptide coupling followed by a Huisgen cycloaddition reaction. Compound 3 is obtained directly from compound 2 by acylation in order to study the effect of a triamide chelating agent on the complexation of technetium (Scheme 11). ## STR2 ## Scheme 11: Synthesis of Al Series Chelating Agents: (a) TrtOH, TFA, rt, 3h, 92%; (b) BoeG1yOH, DCC, DIPEA, THF, rt, 24h, 64%; (c) 1) DCM / TFA (2/1), 0 ° C, 1.5h, 2) 15, DCC, DIPEA, DCM, rt, 24% 50%; (d) CuAAC procedure # 1, 38%; (e) TFA / TIPS / H20 (95 / 2.5 / 2.5), rt, 2h; (f) 1) DCM / TFA (2/1), rt, 1H, 2) BocGlyOH, DCC, DIPEA, DMF, rt, 48h, 73%; (g) CuAAC procedure # 2, 78%; (h) (AcO) 20, DIPEA, rt, 2h, 93%. Triphenylmethanol (5.2 g, 20.0 mmol) is dissolved in 60 mL of TFA and mercaptoacetic acid (1.39 mL, 20.0 mmol, 1.0 equiv) is added. After stirring for 3 hours at room temperature under an argon atmosphere, the TFA is removed under reduced pressure. Toluene was chased 3 times on the resulting orange solid resulting in 15 as a white solid (6.12 g, 18.3 mmol, 92%). 1 H NMR (CDCl3, 250 MHz): 7.31 (m, 15H, Trt), 3.05 (s, 2H, CH2); 13 C NMR (CDCl 3, 62.5 MHz):? 176.0 (CO), 143.9 (C, Ph), 129.7 (C, mea Trt), 128.2 (C, ortho Trt), 127.1 (C, para Trt), 67.3 (C, Trt), 34.6 (CH2).

La Boc-Glycine (2.63 g, 15.0 mmol) est dissoute dans 20 mL de THF. La propargylamine (960 uL ; 15.0 mmol, 1.0 équiv.) est additionnée, suivie de la DIPEA (3.9 mL, 22.5 mmol, 1.5 équiv.) et du DCC (3.71 g, 18.0 mrnol, 1.2 équiv.) puis l'ensemble est agité à température ambiante durant une nuit. Après filtration du précipité, le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit est dissous dans le DCM et lavé par une solution d'acide citrique 10% (3 fois) et par une solution saturée de NaCl. Les phases organiques sont e NHBoc NHBoc e STrt Ph 16 BocHNi OH RucHN HN 17 ° NH 1N STrt 19 0 20 g NF{ H1,1 NH HN C d regroupées, séchées sur sulfate de sodium anhydre, filtrées et le solvant est évaporé sous pression réduite. Une purification par chromatographie-flash (éluent : hexane/AcOEt 6/4, Rf = 0.37) conduit au composé 16 (2.04 g, 9.62 mmol, 64 %). RMN (CDC13, 250 MHz) : 6.41 (s, 1H, N-CO), 5.30 (s, 1H, NH-000), 4.08 (dd, J = 5.2, J' = 2.5, 2H, CH2-C), 3.82 (d, J = 5.8, 211, CH2-CO), 2.24 (t, J = 2.5, 1H, CE-CH), 1.46 (s, 9H, Bac) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 8 169.3 (CO amide), 79.3 (C, Bac), 77.4 (CECH), 71.9 (CECH), 29.2 (CH2-CECH), 28.4 (CH3, Boc). Le composé 16 (950 mg, 4.5 mmol) est déprotégé par 30 mL d'un mélange DCM/TFA (2/1) durant 1h30 à 0°C. Après évaporation du solvant, du toluène est chassé à 3 reprises. Le réactif déprotégé est séché sous pression réduite et ajouté à 20 mL de DCM contenant le composé 15 (1.503 g, 4.5 mmol ; 1.0 équiv.), la DIPEA (4.7 mL, 27.0 mmol, 6.0 équiv.) et le DCC (1.114 g, 5.4 mmol, 1.2 équiv.). Le mélange est agité une nuit à température ambiante. Après filtration du précipité, le filtrat est lavé par une solution d'acide citrique 10% à 3 reprises et par une solution saturée de NaCI. Les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de sodium anhydre et filtrées. Le solvant est éliminé sous pression réduite et l'huile obtenue est purifiée par chromatographie flash (éluent : hexane/AcOEt 4/6) pour conduire au composé 17 sous la forme d'un solide brun (0.963 g, 2.25 mmol, 50%). 'H RMN (CDC13, 250 MHz) : 8 7.27 (m, 15H, Trt), 3.99 (s, 2H, CH2-CEC), 3.59 (s, 2H, N-CH2-CO), 3.17 (s, 2H, S-CH2-CO), 2.15 (s, 1H, CECH) ; '3C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 8 169.1, 168.0 (2 CO), 143.8 (C, Trt), 129.4, 128.2, 128.0 (CH, Trt), 77.2 (CECH), 71.8 (C-CH), 43.5 (CH2- N), 35.5 (CH2-S), 29.1 (CH2-CEC). Le composé 17 (214 mg, 0.5 mmol) est dissous dans 2.5 mL de DMSO/eau (9/1) et la L-proline (11.5 mg, 0.1 mmol, 0.2 équiv.), le bromure de benzyle (59.4 uL, 0.5 mmol, 1.0 équiv.), le carbonate de sodium (63.6 mg, 0.6 mmol, 1.2 équiv.), l'ascorbate de sodium (50 !IL de solution 1M, 0.1 équiv.), CuSO4,5H20 (25 µL de solution 1M, 0.1 équiv.) et l'azoture de sodium (39.0 mg, 0.6 mmol, 1.2 équiv.) sont ajoutés suivant la procédure de cycloaddition n°1 pour conduire au composé 18 sous la forme d'un solide brun (107 mg, 0.19 mmol, 38%). 30 'H RMN (d6-DMSO, 250 MHz) : 6 8.34 (t, J = 5.5, 1H, NH -CO), 8.17 (t, = 5.7, 1H, NH-CO), 7.92 (s, 1H, CH triazole), 7.32 (m, 20H, CH Trt + Ph), 5.54 (s, 2H, CH2-Ph), 4.26 (d, J = 5.5, 2H, N-CH2-00), 3.58 (d, J = 5.5, 2H, N-CH2-C=C), 2.83 (s, 2H, S-CH2-00) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 8 169.01 168.0 (CO, amide), 143.7 (C, triazole), 129.4 - 127.8 (CH Ar, Trt + Ph), 127.0 (CH, triazole), 71.6 (C, Trt), 60.3 (CH2, Bn), 35.4 (CH2-C-C), 33.8 (N-CH2-CO), 29.0 (S-CH2-00) ; ES (positive mode) : m/z = 562.2 (MF11, 54%), 584.2 (MNa±, 100%), 600.1 (MI({, 21%). Boc-Glycine (2.63 g, 15.0 mmol) is dissolved in 20 mL of THF. Propargylamine (960 μL, 15.0 mmol, 1.0 equiv) is added, followed by DIPEA (3.9 mL, 22.5 mmol, 1.5 equiv) and DCC (3.71 g, 18.0 mmol, 1.2 equiv.), Then the whole is stirred at room temperature overnight. After filtration of the precipitate, the solvent is evaporated under reduced pressure. The product is dissolved in DCM and washed with 10% citric acid solution (3 times) and with saturated NaCl solution. The organic phases are grouped together, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and the solvent is evaporated under pressure, and the organic phases are combined and dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and the solvent is evaporated under pressure. scaled down. Purification by flash chromatography (eluent: hexane / AcOEt 6/4, Rf = 0.37) gave compound 16 (2.04 g, 9.62 mmol, 64%). NMR (CDCl3, 250 MHz): 6.41 (s, 1H, N-CO), 5.30 (s, 1H, NH-000), 4.08 (dd, J = 5.2, J '= 2.5, 2H, CH2-C), 3.82 (d, J = 5.8, 211, CH 2 -CO), 2.24 (t, J = 2.5, 1H, CE-CH), 1.46 (s, 9H, Bac); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 8169.3 (CO amide), 79.3 (C, Bac), 77.4 (CECH), 71.9 (CECH), 29.2 (CH2-CECH), 28.4 (CH3, Boc). Compound 16 (950 mg, 4.5 mmol) is deprotected with 30 ml of a DCM / TFA mixture (2/1) for 1 h 30 at 0 ° C. After evaporation of the solvent, toluene is removed 3 times. The deprotected reagent was dried under reduced pressure and added to 20 mL of DCM containing compound 15 (1.503 g, 4.5 mmol, 1.0 equiv), DIPEA (4.7 mL, 27.0 mmol, 6.0 equiv) and DCC (1.114 g). 5.4 mmol, 1.2 equiv.). The mixture is stirred overnight at room temperature. After filtration of the precipitate, the filtrate is washed with a solution of 10% citric acid 3 times and with a saturated solution of NaCl. The organic phases are combined, dried over anhydrous sodium sulphate and filtered. The solvent is removed under reduced pressure and the oil obtained is purified by flash chromatography (eluent: hexane / AcOEt 4/6) to give compound 17 in the form of a brown solid (0.963 g, 2.25 mmol, 50%) . 1H NMR (CDCl3, 250 MHz): 7.27 (m, 15H, Trt), 3.99 (s, 2H, CH2-CEC), 3.59 (s, 2H, N-CH2-CO), 3.17 (s, 2H, S-CH 2 -CO), 2.15 (s, 1H, CECH); NMR (CDCl3, 62.5 MHz):? 169.1, 168.0 (2 CO), 143.8 (C, Trt), 129.4, 128.2, 128.0 (CH, Trt), 77.2 (CECH), 71.8 (C-CH), 43.5? (CH2-N), 35.5 (CH2-S), 29.1 (CH2-CEC). Compound 17 (214 mg, 0.5 mmol) is dissolved in 2.5 mL of DMSO / water (9/1) and L-proline (11.5 mg, 0.1 mmol, 0.2 equiv.), Benzyl bromide (59.4 μL, 0.5). mmol, 1.0 equiv.), sodium carbonate (63.6 mg, 0.6 mmol, 1.2 equiv.), sodium ascorbate (50 μM of 1M solution, 0.1 equiv.), CuSO 4 · 5H 2 O (25 μL of 1M solution). , 0.1 equiv.) And sodium azide (39.0 mg, 0.6 mmol, 1.2 equiv) are added according to the cycloaddition procedure No. 1 to give compound 18 as a brown solid (107 mg, 0.19). mmol, 38%). 1H NMR (d6-DMSO, 250 MHz): 8.34 (t, J = 5.5, 1H, NH-CO), 8.17 (t = 5.7, 1H, NH-CO), 7.92 (s, 1H, CH); triazole), 7.32 (m, 20H, CH Trt + Ph), 5.54 (s, 2H, CH2-Ph), 4.26 (d, J = 5.5, 2H, N-CH2-00), 3.58 (d, J = 5.5). , 2H, N-CH 2 -C = C), 2.83 (s, 2H, S-CH 2 -C 2); 13 C NMR (CDCl 3, 62.5 MHz):? 169.01 168.0 (CO, amide), 143.7 (C, triazole), 129.4-127.8 (CH Ar, Trt + Ph), 127.0 (CH, triazole), 71.6 (C, Trt) , 60.3 (CH2, Bn), 35.4 (CH2-CC), 33.8 (N-CH2-CO), 29.0 (S-CH2-00); ES (positive mode): m / z = 562.2 (MF11, 54%), 584.2 (MNa ±, 100%), 600.1 (MI ({, 21%).

Le composé 18 est déprotégé par un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) pendant 2h à température ambiante. Le solvant est évaporé sous pression réduite et le produit est repris dans un mélange eau/ACN (4/1) et purifié par RP-HPLC semi-préparative (tR - 17.4 min) pour conduire au composé 1 (3.0 mg). RP-HPLC analytique : tR = 14.6 min (pureté = 99%) ; 111 RMN (CDCI3, 250 MHz) : S 7.45 (s, 1H, CH-N-N=N), 7.39 (m, 2H, NH-CO), 7.25 (m, 5H, CH Ar), 5.50 (s, 2H, CH2Ph), 4.51 (d, .1= 5.5 Hz, 2H, C112-C-C), 3.95 (d, J = 5.5 Hz, 2H, N-CH2-CO), 3.27 (d, J = 9.0 Hz, 2H, S-CH2-00). ; 13C RMN (CDCI3, 62.5 MHz) : 6 168.5, 167.6 (CO), 145.1 (C, triazole), 144.0, 129.1, 128.8, 128.1 (CH Ar),123.0 (CH triazole), 65.9 (CH2 Bn), 40.0 (CH2, Gly). MALDI/TOF : m/z = 319.9 (MH±, 100%). Compound 18 is deprotected with a TFA / TIPS / water mixture (95 / 2.5 / 2.5) for 2 hours at room temperature. The solvent is evaporated under reduced pressure and the product is taken up in a water / ACN mixture (4/1) and purified by semi-preparative RP-HPLC (tR-17.4 min) to yield compound 1 (3.0 mg). Analytical RP-HPLC: tR = 14.6 min (purity = 99%); NMR (CDCl3, 250 MHz): S 7.45 (s, 1H, CH-NN = N), 7.39 (m, 2H, NH-CO), 7.25 (m, 5H, CH Ar), 5.50 (s, 2H, CH2Ph), 4.51 (d, .1 = 5.5 Hz, 2H, C112-CC), 3.95 (d, J = 5.5 Hz, 2H, N-CH2-CO), 3.27 (d, J = 9.0 Hz, 2H, S). -CH2-00). ; 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 6168.5, 167.6 (CO), 145.1 (C, triazole), 144.0, 129.1, 128.8, 128.1 (CH Ar), 123.0 (CH triazole), 65.9 (CH2 Bn), 40.0 ( CH2, Gly). MALDI / TOF: m / z = 319.9 (MH +, 100%).

Le composé 16 (424.2 mg, 2.0 mmol, 1.0 équiv.) est déprotégé par une solution de TFA/DCM 1/1 (5 mL) durant 1h à température ambiante. Après évaporation sous pression réduite, du toluène est chassé sur le produit pour conduire à une huile rouge. Après dissolution dans le DCM, la solution est neutralisée par ajout de triéthylamine puis le solvant est évaporé pour conduire à une huile jaune qui est utilisée sans purification. Cette huile est reprise dans 20 mL de DMF sec, la Boc-Gly-OH (350 mg, 2.0 mmol, 1.0 équiv.) est ajoutée puis le pH est ajusté à 8 par addition de DIPEA. La DIPEA (420 .1.1_' 2.4 mmol, 1.2 équiv.), est ajoutée suivie du DCC (0.454 g, 2.2 mmol, 1.1 équiv.). Le mélange est agité durant 2 jours à température ambiante. Après filtration du précipité, le solvant est éliminé sous pression réduite. Le produit obtenu est dissout dans le DCM est lavé par une solution d'acide citrique 10% à trois reprises, et par une solution saturée de NaCl. Les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de sodium anhydre et le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit est précipité dans l'hexane à 0°C et le composé 19 est obtenu par filtration sous la forme d'un solide blanc (390 mg, 1.45 mmol, 73%). 11I RMN (CDC13, 250 MHz) : S 7.15 (s, 1H, NH-CO), 7.07 (s, 1H, NH-CO), 5.44 (s, 1H, NH Boc), 4.04 (m, 4H, CH2 Gly + CH2C.--C), 3.85 (d, J=5.7, 2H, BocN-CH2), 2.20 (t, 1H, J = 2.5, C--=CH), 1.46 (s, 9H, Boc) ; 13C RMN (CDCI3, 62.5 MHz) : S 170.5 (N-COO), 168.7 (N-CO), 71.5 (C--CH), 43.1 (CH2 Gly), 29.2 (CH2-CC), 28.4 (CH3 Bac). Compound 16 (424.2 mg, 2.0 mmol, 1.0 equiv.) Is deprotected with a 1/1 TFA / DCM solution (5 mL) for 1 h at room temperature. After evaporation under reduced pressure, toluene is removed on the product to yield a red oil. After dissolution in DCM, the solution is neutralized by addition of triethylamine and the solvent is evaporated to yield a yellow oil which is used without purification. This oil is taken up in 20 ml of dry DMF, the Boc-Gly-OH (350 mg, 2.0 mmol, 1.0 equiv) is added then the pH is adjusted to 8 by addition of DIPEA. DIPEA (420 .1.1. 2.4 mmol, 1.2 equiv.) Is added followed by DCC (0.454 g, 2.2 mmol, 1.1 equiv.). The mixture is stirred for 2 days at room temperature. After filtration of the precipitate, the solvent is removed under reduced pressure. The product obtained is dissolved in DCM is washed with a 10% citric acid solution three times, and with a saturated solution of NaCl. The organic phases are combined, dried over anhydrous sodium sulphate and the solvent is evaporated under reduced pressure. The product is precipitated in hexane at 0 ° C and the compound 19 is obtained by filtration in the form of a white solid (390 mg, 1.45 mmol, 73%). 1H NMR (CDCl3, 250 MHz): S 7.15 (s, 1H, NH-CO), 7.07 (s, 1H, NH-CO), 5.44 (s, 1H, NH Boc), 4.04 (m, 4H, CH2 Gly) + CH2C .-- C), 3.85 (d, J = 5.7, 2H, BocN-CH2), 2.20 (t, 1H, J = 2.5, C- = CH), 1.46 (s, 9H, Boc); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): S 170.5 (N-COO), 168.7 (N-CO), 71.5 (C-CH), 43.1 (CH2 Gly), 29.2 (CH2-CC), 28.4 (CH3 Bac) .

Le composé 19 (161.5 mg, 0.6 mmol) est dissous dans 4 mL d'EtOH/eau 7/3 et traité par la L-proline (11.5 mg, 0.1 mmol, 0.2 équiv.), Na2SO4 (10.6 mg, 0.1 mmol, 0.2 équiv.), le bromure de benzyle (59.4 pL, 0.5 mmol, 1.0 équiv.), l'ascorbate de sodium (39.6 mg, 0.2 mmol, 0.2 équiv), CuSO4,5H20 (100 pl de solution 1M, 0.2 équiv.), et l'azoture de sodium (45.5 mg, 0.7 mmol, 1.4 équiv.) selon la procédure de cycloaddition n°2 pour conduire à 20 sous la forme d'une huile jaune (45.5 mg, 0.39 mmol, 78%). 111 RMN (CDCI3, 250 MHz) : 8 7.82 (s, 1H, CH triazole), 7.54 (s, 2H, NH-CO), 7.33 (m, 5H, Ph), 5.77 (s, 1H, NH-000), 5.44 (s, 2H, CH2 Bn), 4.43 (s, 2H, CH2-C.C), 3.94 (s, 2H, CH2 Gly), 3.78 (d, J = 4.3, 2H, CH2 Gly), 1.39 (s, 9H, Boc) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 8 170.3, 169.2 (CO amide), 134.3 (C, triazole), 129.0 - 128.1 (CH Ar, Bn), 80.0 (C, tBu), 54.2 (CH2, Bn), 49.1 (N-CH2- CO), 44.2 (CH2-C=C), 42.8 (N-CH2-CO), 28.2 (CH3, tBu). Le composé 20 est traité par 10 mL d'un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) pendant 2h à température ambiante puis le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit est dissous dans 5 mL d'un mélange ACN/eau (1/4) et purifié par RP-HPLC semi-préparative (tR = 15.0 min) pour conduire à 9.2 mg de composé 2. RP-HPLC analytique : tR = 14.4 min, pureté = 99%; 111 RMN (CDC13, 250 MHz) : ô 7.69 (s, 1H, CH triazole), 7.37 (m, 5H, Ar Bn), 5.50 (s, 2H, CH2 Bn), 4.40 (s, 2H, CH2), 3.87 (s, 2H, CH2 Gly), 3.72 (s, 2H, CH2 Gly); 13C RMN (CDCI3, 623 MHz) : 3 182.8 (CO), 155.1 (CH triazole), 128.4, 127.8, 127.4 (Ar CH), 46.6 (CH2 Gly), 40.3 (CH2-C=C) ; MALDI/TOF : m/z = 303.2 (MH+, 100%). Le composé 2 (4.6 mg, 0.015 mmol) est dissous dans 200 pt de DCM sec et traité successivement par la DIPEA (15.6 [J,L, 0.090 mmol, 6.0 équiv.) et l'anhydride acétique (4.25 pL, 0.045 mmol, 3.0 équiv.). Le mélange est agité durant 2h à température ambiante. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le composé 3 est obtenu sous forme d'un solide blanc (4.8 mg, 13.9 mmol, 93%). RP-HPLC analytique : tR = 17.3 min, pureté = 100% ; 111 RMN (CD3CN, 250 MHz) : S 7.67 (s, 2H, 2 NH-CO), 7.25 (m, 5H, Ph), 6.83 (s, 1H, CH triazole), 5.48 (s, 2H, Bn), 4.58 (m, 2H, CH2-C=C), 2.02 (s, 3H, CH3) ; 13C RMN (CDCI3, 62.5 MHz) : 8 168.9 (CO), 154.9 (C, triazole), 131.4, 128.4, 127.4 (CH Ar), 123.9 (CH triazole), 39.2 (CH2 Gly), 22.4 (CH3 Ac) ; ES/MS (mode positif) : m/z = 345.3 (MH+, 100%), 367.3 (MNa+, 25%) , 383.2 (MK+, 7%). Compound 19 (161.5 mg, 0.6 mmol) is dissolved in 4 mL of EtOH / water 7/3 and treated with L-proline (11.5 mg, 0.1 mmol, 0.2 equiv), Na 2 SO 4 (10.6 mg, 0.1 mmol, 0.2 equiv), benzyl bromide (59.4 μL, 0.5 mmol, 1.0 equiv), sodium ascorbate (39.6 mg, 0.2 mmol, 0.2 equiv), CuSO4.5H2O (100 μL of 1M solution, 0.2 equiv. ), and sodium azide (45.5 mg, 0.7 mmol, 1.4 equiv.) according to the cycloaddition procedure No. 2 to give 20 as a yellow oil (45.5 mg, 0.39 mmol, 78%). 111 NMR (CDCl3, 250 MHz): δ 7.82 (s, 1H, CH triazole), 7.54 (s, 2H, NH-CO), 7.33 (m, 5H, Ph), 5.77 (s, 1H, NH-000) , 5.44 (s, 2H, CH2 Bn), 4.43 (s, 2H, CH2-CC), 3.94 (s, 2H, CH2 Gly), 3.78 (d, J = 4.3, 2H, CH2 Gly), 1.39 (s, 9H, Boc); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 8170.3, 169.2 (CO amide), 134.3 (C, triazole), 129.0-128.1 (CH Ar, Bn), 80.0 (C, tBu), 54.2 (CH2, Bn), 49.1 (N-CH2-CO), 44.2 (CH2-C = C), 42.8 (N-CH2-CO), 28.2 (CH3, tBu). The compound is treated with 10 ml of a TFA / TIPS / water mixture (95 / 2.5 / 2.5) for 2 hours at room temperature and the solvent is then evaporated off under reduced pressure. The product is dissolved in 5 mL of an ACN / water mixture (1/4) and purified by semi-preparative RP-HPLC (tR = 15.0 min) to yield 9.2 mg of compound 2. Analytical RP-HPLC: tR = 14.4 min, purity = 99%; 111 NMR (CDCl3, 250 MHz): δ 7.69 (s, 1H, CH triazole), 7.37 (m, 5H, Ar Bn), 5.50 (s, 2H, CH2 Bn), 4.40 (s, 2H, CH2), 3.87 (s, 2H, CH 2 Gly), 3.72 (s, 2H, CH 2 Gly); 13C NMR (CDCl3, 623 MHz): 3 182.8 (CO), 155.1 (CH triazole), 128.4, 127.8, 127.4 (Ar CH), 46.6 (CH2 Gly), 40.3 (CH2-C = C); MALDI / TOF: m / z = 303.2 (MH +, 100%). Compound 2 (4.6 mg, 0.015 mmol) is dissolved in 200 μl of dry DCM and treated successively with DIPEA (15.6 μM, 0.090 mmol, 6.0 equiv) and acetic anhydride (4.25 μL, 0.045 mmol, 3.0 equiv.). The mixture is stirred for 2 hours at room temperature. After evaporation of the solvent under reduced pressure, compound 3 is obtained in the form of a white solid (4.8 mg, 13.9 mmol, 93%). Analytical RP-HPLC: tR = 17.3 min, purity = 100%; NMR (CD3CN, 250 MHz): S, 7.67 (s, 2H, 2 NH-CO), 7.25 (m, 5H, Ph), 6.83 (s, 1H, CH triazole), 5.48 (s, 2H, Bn), 4.58 (m, 2H, CH 2 -C = C), 2.02 (s, 3H, CH 3); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 8168.9 (CO), 154.9 (C, triazole), 131.4, 128.4, 127.4 (CH Ar), 123.9 (CH triazole), 39.2 (CH2 Gly), 22.4 (CH3 Ac); ES / MS (positive mode): m / z = 345.3 (MH +, 100%), 367.3 (MNa +, 25%), 383.2 (MK +, 7%).

Série A2 (agents chélatants 4 -6) : Les agents chélatants de la série A2 (4 à 6), de type amine-amide-triazole, sont obtenus en trois étapes à partir du bromure de bromoacétyle. Après une première réaction d'acylation en présence de propargylamine, le motif variable de ces agents chélatants est fixé par alkylation (réaction lente nécessitant un chauffage à 50°C) (Schéma 12). H2N 21 SH a e Br HN Br Br 22 h 7 e d NH HN O HN-N, O 23 OH 24 NH OIBL2 26 cNH STrt Schéma 12 : Synthèse des agents chélatants 4 à 6 : (a) TrtOH, TFA, rt, 2h, 86% ; (b) Propargylamine, Cs2CO3, DCM, 0°C, 30 min, quant. ; (c) 2-aminophenol, Cs2CO3, DMF, 50°C, 7j, 38% ; (d) CuAAC Procédure n°1, 24%, (e) chlorhydrate de tert-butylglycine, Cs2CO3, DMF, 50°C, 3j, 19% ; CuAAC, Procédure n°1, 63% ; (g) TFA/TIPS/H20 (95/2.5/2.5), rt, 2h ; (h) 21, Na2CO3, DMF, 50°C, 24h, 48% ; (i) CuAAC, Procédure n°2, 54%. Series A2 (chelating agents 4 -6): The amine-amide-triazole type A2 (4 to 6) chelating agents are obtained in three steps from bromoacetyl bromide. After a first acylation reaction in the presence of propargylamine, the variable pattern of these chelating agents is fixed by alkylation (slow reaction requiring heating at 50 ° C) (Scheme 12). Example 12: Synthesis of chelating agents 4-6: (a) TrtOH, TFA, rt, 2h, 86%; (b) Propargylamine, Cs 2 CO 3, DCM, 0 ° C, 30 min, quant. ; (c) 2-aminophenol, Cs 2 CO 3, DMF, 50 ° C, 7, 38%; (d) CuAAC Procedure No. 1, 24%, (e) tert-butylglycine hydrochloride, Cs 2 CO 3, DMF, 50 ° C, 3%, 19%; CuAAC, Procedure No. 1, 63%; (g) TFA / TIPS / H20 (95 / 2.5 / 2.5), rt, 2h; (h) 21, Na2CO3, DMF, 50 ° C, 24h, 48%; (i) CuAAC, Procedure # 2, 54%.

Le chlorure de cystéamine (4.99g, 44.0 mmol, 1.1 equiv.) est traité par le triphenylméthanol (10.41 g, 40.0 mmol) dans le TFA (100 mL) à température ambiante durant 2h. Une coloration orange intense se forme. Le TFA est éliminé sous pression réduite et 100 mL d'eau puis 50 mL de DCM sont ajoutés. Une solution saturée de NaHCO3 est ajoutée jusqu'à pH 7, un précipité blanc se forme. Après filtration, le solide blanc est séché sous pression réduite pour conduire au composé 21 (15.45 g, 34.5 mmol, 86%). 111 RMN (CDC13, 250 MHz) : 8 7.24 (m, 15H, Trt), 4.24 (s, 3H, NH3), 2.47 (d, J 5.5, 2H, CH2-N), 2.35 (d, J = 5.5, C1-12-S) ; 13C RMN (CD30D, 62.5 MHz) : 5 145.4 (C, Ar Trt), 130.4 ; 128.9, 127.8 (CH, Ar Trt), 68.0 (C, Trt), 39.4 (CH2, N-CH2-CH2-S), 30.3 (CH2, N-CH2-CH2-S). La propargylamine (320 p.L, 5.0 mmol) est dissoute dans 10 mL de DCM sec à 0°C. The cysteamine chloride (4.99 g, 44.0 mmol, 1.1 equiv) is treated with triphenylmethanol (10.41 g, 40.0 mmol) in TFA (100 mL) at room temperature for 2 h. An intense orange color is formed. TFA is removed under reduced pressure and 100 mL of water and then 50 mL of DCM are added. A saturated solution of NaHCO 3 is added until pH 7, a white precipitate is formed. After filtration, the white solid is dried under reduced pressure to yield 21 (15.45 g, 34.5 mmol, 86%). NMR (CDCl3, 250 MHz): 7.24 (m, 15H, Trt), 4.24 (s, 3H, NH3), 2.47 (d, J 5.5, 2H, CH2-N), 2.35 (d, J = 5.5, C1-12-S); 13C NMR (CD30D, 62.5 MHz): 145.4 (C, Ar Trt), 130.4; 128.9, 127.8 (CH, Ar Trt), 68.0 (C, Trt), 39.4 (CH2, N-CH2-CH2-S), 30.3 (CH2, N-CH2-CH2-S). Propargylamine (320 μL, 5.0 mmol) is dissolved in 10 mL dry DCM at 0 ° C.

Le chlorure de césium (3.258 g, 10.0 mmol, 2.0 équiv.) et le bromure de bromoacétyle (436 uL, 5.0 mmol) sont ajoutés et le mélange est agité durant 30 min à 0°C. Après filtration, le solvant est évaporé sous pression réduite et le composé 22 est isolé quantitativement sans purification. 'H RMN (CDC13, 250 MHz) : 5 6.70 (s, 1H, NH-00), 4.09 (dd, J = 2.5, J' =- 5.0, 2H, CH2CEC), 2.27 (t, J = 2.5, 1H, CECH) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 5 167.0 (CO), 77.9 (CECH), 72.6 (C=CH), 30.2 (CH2-C=C), 27.7 (CH2-CO). Le composé 22 (5.0 mmol) est mis en solution dans 10 mL de DMF et le carbonate de césium (1.629 g, 5.0 mmol, 1.0 équiv.) puis le 2-aminophénol (0.546 g, 5.0 mmol, 1.0 équiv.) sont ajoutés. Le mélange est placé sous agitation à 50°C pendant 7 jours. Après filtration, le solvant est évaporé sous pression réduite et le produit obtenu est purifié par chromatographie flash (éluent : hexane/AcOEt 6/4, Rf = 0.12) pour conduire au composé 23 (0.387 g, 1.9 mmol, 38%) : 1H RMN (CDC13, 250 MHz) : 8 8.0 (s, 1H, OH), 7.25 (s, 1H, NH amide), 6.81 (m, 2H, CH arom), 6.68 (m, 1H, CH arom), 6.48 (m, 1H, CH arom), 4.06 (dd, J - 5.5 Hz, J' -- 2.5 Hz, 2H, CH2-CEC), 3.83 (s, 2H, CH2C0), 2.18 (t, J = 2.5 Hz, 1H C=CH); '3C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 5 171.6 (CO) ; 143.9 (CarOH), 136.1 (CA,NH), 121.0-111.5 (CH arom), 79.0 (CECH), 71.6 (C=CH), 48.8 (C-CO), 36.7 (CH2-CEC). Le composé 23 (0.102 g, 0.5 mmol) est mis en solution dans 2 mL de DMSO/eau (9/1). La L-proline (11.5 mg, 0.1 mmol, 0.2 équiv.), Na2CO3 (63.6 mg, 0.6 mmol, 1.2 équiv.), le bromure de benzyle (59.4 pl, 0.5 mmol, 1.0 équiv.), l'ascorbate de sodium (100 ut de solution 1M, 0.2 équiv.), CuSO4,5H20 (100 1..tL de solution 1M, 0.2 équiv), et l'azoture de sodium (39.0 mg, 0.6 mmol, 1.2 équiv.) sont ajoutés successivement et le mélange est agité une nuit à. 65°C sous argon selon la procédure de cycloaddition n°1 pour conduire au composé 4 (39 mg, 0.12 mmol, 24%). RP-HPLC analytique : tR = 19.4 min, pureté = 93%; 'H RMN (CDCI3, 250 MHz) : 5 7.81 (s, 1H amide), 7.46 (s, 1H, CH triazole), 7.28 (m, 5H, Ar Bn), 6.89 (m, 4H, CH Ar), 5.42 (s, 2H, CH2 Bn), 4.35 (s, 2H, CH2-C-C), 4.08 (s, 2H, CH2C0), 2.20 (s, 1H, NH amine); 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 5 171.8 (CO), 137.9 (CH-C-C, triazole), 136.9 (COR), 136.4 (CNH), 134.4 (C, Ph), 129.2 - 125.9 (CH Bn), 123.3 (CH- C=CH, triazole), 122.5 - 116.3 (CH Phenol), 59.3 (CH2 Bn), 57.6 (CCO), 32.0 (CH2triazole) ; MALDI/TOF : m/z = 338.2 (Mr1+, 100%). Le composé 22 (875 mg, 5.0 mmol) est mis en solution dans 20 mL de DMF et le carbonate de césium (3.258 g, 10.0 mmol, 2.0 équiv.) puis la tert-butylglycine (1.006g, 6.0 mmol, 1.2 équiv.) sont ajoutés. L'ensemble est agité durant 3 jours à 50°C. Après filtration, le solvant est éliminé sous pression réduite. Le produit obtenu est repris dans le DCM et lavé par une solution d'acide citrique 10% à 3 reprises puis par une solution saturée de NaCI. Les phases organiques sont regroupées et séchées sur sulfate de sodium anhydre. Après filtration, le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit est repris dans le DCM et purifié par chromatographie flash (éluent hexane/AcOEt 4/6) pour conduire au composé 24 (256 mg, 1.13 mmol , 19%). 'H RMN (CDC13, 250 MHz) : S 3.99 (2H, dd, J = 5.75 Hz, J' = 3.25 Hz2H, CH2-CC)), 3.89 (d, J = 5.25 Hz, 2H, CH2-CON), 3.24 (s, 2H, CH2C00), 2.17 (t, J 2.5 Hz, 1H, CECH), 1.39 (s, 9H, tBu) ; 13C RMN (CDCI3, 623 MHz) : a 171.2 (CO-N), 161.2 (C0-0), 81.8 (C, tBu), 79.6 (ÇECH), 71.3 (CECH), 52.1 (C-CON), 51.6 (C-COO), 28.6 (C-CEC), 28.0 (CH, tBu). Le composé 24 (113 mg, 0.5 mmol) est dissout dans 2 mL de DMSO/eau (9/1). La L- proline (11.5 mg, 0.1 mmol, 0.2 équiv.), Na2CO3 (63.6 mg, 0.6 mmol, 1.2 équiv.), le bromure de benzyle (59.4 pL, 0.5 mmol, 1.0 équiv.), l'ascorbate de sodium (100 jiL de solution 1M, 0.2 équiv.), CuSO4,5H20 (100 RL de solution 1M, 0.2 équiv.) et l'azoture de sodium (39.0 mg, 0.6 mmol, 1.2 équiv.) sont ajoutés successivement selon la procédure de cycloaddition n°2 pour conduire au composé 25 (113 mg, 0.314 mmol, 63%). 'H RMN (CDCI3, 250 MHz) : S 8.11 (s, 1H, NH-CO), 7.44 (s, 1H, CH triazole), 7.35 (m, 5H, Ph), 5.49 (s, 2H, CH2Ph), 4.52 (d, J = 5.8, 2H,CH2-CEC), 3.29 (s, 2H, CH2), 2.93 (s, 2H, CH2-CO2tBu), 2.02 (s, 1H, NH amine), 1.48 (s, 9H, tBu) ; 13C RMN (CDCI3, 62.5 MHz) : 5 166.2, 164.8 (CO), 132.0 - 126.5 (CH Ar, Bn), 122.3 (CH, triazole), 80.2 (C, tBu), 61.7 (CH2, Bn), 36.1 (CH2C=C), 28.2 (CH3, tBu). Cesium chloride (3.258 g, 10.0 mmol, 2.0 equiv) and bromoacetyl bromide (436 μL, 5.0 mmol) are added and the mixture is stirred for 30 min at 0 ° C. After filtration, the solvent is evaporated under reduced pressure and the compound is isolated quantitatively without purification. 1H NMR (CDCl3, 250 MHz): 6.70 (s, 1H, NH-00), 4.09 (dd, J = 2.5, J '= - 5.0, 2H, CH2CEC), 2.27 (t, J = 2.5, 1H); , CECH); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 167.0 (CO), 77.9 (CECH), 72.6 (C = CH), 30.2 (CH2-C = C), 27.7 (CH2-CO). Compound 22 (5.0 mmol) is dissolved in 10 ml of DMF and cesium carbonate (1.629 g, 5.0 mmol, 1.0 equiv) and then 2-aminophenol (0.546 g, 5.0 mmol, 1.0 equiv) are added. . The mixture is stirred at 50 ° C for 7 days. After filtration, the solvent is evaporated under reduced pressure and the product obtained is purified by flash chromatography (eluent: hexane / AcOEt 6/4, Rf = 0.12) to yield 23 (0.387 g, 1.9 mmol, 38%): 1H NMR (CDCl3, 250 MHz): 8.0 (s, 1H, OH), 7.25 (s, 1H, NH amide), 6.81 (m, 2H, CH arom), 6.68 (m, 1H, CH arom), 6.48 ( m, 1H, CH arom), 4.06 (dd, J - 5.5 Hz, J '- 2.5 Hz, 2H, CH2-CEC), 3.83 (s, 2H, CH2C0), 2.18 (t, J = 2.5 Hz, 1H; C = CH); NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 171.6 (CO); 143.9 (CarOH), 136.1 (CA, NH), 121.0-111.5 (CH arom), 79.0 (CECH), 71.6 (C = CH), 48.8 (C-CO), 36.7 (CH2-CEC). Compound 23 (0.102 g, 0.5 mmol) is dissolved in 2 mL of DMSO / water (9/1). L-proline (11.5 mg, 0.1 mmol, 0.2 equiv), Na2CO3 (63.6 mg, 0.6 mmol, 1.2 equiv), benzyl bromide (59.4 μl, 0.5 mmol, 1.0 equiv.), Sodium ascorbate (100 μl of 1M solution, 0.2 equiv.), CuSO4.5H2O (100 μl of 1M solution, 0.2 equiv), and sodium azide (39.0 mg, 0.6 mmol, 1.2 equiv) are added successively and the mixture is stirred overnight at. 65 ° C under argon according to the cycloaddition procedure No. 1 to give compound 4 (39 mg, 0.12 mmol, 24%). Analytical RP-HPLC: tR = 19.4 min, purity = 93%; 1 H NMR (CDCl3, 250 MHz): 7.81 (s, 1H amide), 7.46 (s, 1H, CH triazole), 7.28 (m, 5H, Ar Bn), 6.89 (m, 4H, CH Ar), 5.42. (s, 2H, CH 2 Bn), 4.35 (s, 2H, CH 2 -C CC), 4.08 (s, 2H, CH 2 CO), 2.20 (s, 1H, NH amine); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 171.8 (CO), 137.9 (CH-CC, triazole), 136.9 (COR), 136.4 (CNH), 134.4 (C, Ph), 129.2-125.9 (CH Bn), 123.3 (CH-C = CH, triazole), 122.5 - 116.3 (CH phenol), 59.3 (CH2 Bn), 57.6 (CCO), 32.0 (CH2triazole); MALDI / TOF: m / z = 338.2 (Mr1 +, 100%). Compound 22 (875 mg, 5.0 mmol) is dissolved in 20 ml of DMF and cesium carbonate (3.258 g, 10.0 mmol, 2.0 equiv) and then tert-butylglycine (1.006 g, 6.0 mmol, 1.2 equiv. ) are added. The whole is stirred for 3 days at 50 ° C. After filtration, the solvent is removed under reduced pressure. The product obtained is taken up in DCM and washed with a 10% citric acid solution 3 times and then with a saturated solution of NaCl. The organic phases are combined and dried over anhydrous sodium sulphate. After filtration, the solvent is evaporated under reduced pressure. The product is taken up in DCM and purified by flash chromatography (eluent hexane / AcOEt 4/6) to yield compound 24 (256 mg, 1.13 mmol, 19%). 1 H NMR (CDCl 3, 250 MHz): δ 3.99 (2H, dd, J = 5.75 Hz, J = 3.25 Hz 2 H, CH 2 -C CC), 3.89 (d, J = 5.25 Hz, 2H, CH 2 -CON), 3.24 (s, 2H, CH 2 CO 2), 2.17 (t, J 2.5 Hz, 1H, CECH), 1.39 (s, 9H, tBu); 13C NMR (CDCl3, 623 MHz):? 171.2 (CO-N), 161.2 (C0-O), 81.8 (C, tBu), 79.6 (CHC), 71.3 (CECH), 52.1 (C-CON), 51.6 ( C-COO), 28.6 (C-CEC), 28.0 (CH, tBu). Compound 24 (113 mg, 0.5 mmol) is dissolved in 2 mL of DMSO / water (9/1). L-proline (11.5 mg, 0.1 mmol, 0.2 equiv), Na2CO3 (63.6 mg, 0.6 mmol, 1.2 equiv), benzyl bromide (59.4 μL, 0.5 mmol, 1.0 equiv), sodium ascorbate (100 μL of 1M solution, 0.2 equiv.), CuSO4.5H2O (100 RL of 1M solution, 0.2 equiv) and sodium azide (39.0 mg, 0.6 mmol, 1.2 equiv) are added successively according to the procedure of Cycloaddition No. 2 to give compound 25 (113 mg, 0.314 mmol, 63%). 1 H NMR (CDCl3, 250 MHz): δ 8.11 (s, 1H, NH-CO), 7.44 (s, 1H, CH triazole), 7.35 (m, 5H, Ph), 5.49 (s, 2H, CH 2 Ph), 4.52 (d, J = 5.8, 2H, CH2-CEC), 3.29 (s, 2H, CH2), 2.93 (s, 2H, CH2-CO2tBu), 2.02 (s, 1H, NH amine), 1.48 (s, 9H). , tBu); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 166.2, 164.8 (CO), 132.0-126.5 (CH Ar, Bn), 122.3 (CH, triazole), 80.2 (C, tBu), 61.7 (CH2, Bn), 36.1 ( CH2C = C), 28.2 (CH3, tBu).

Le composé 25 est déprotégé par une solution de TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) à température ambiante durant 2h. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le solide obtenu est dissout dans un mélange eau/ACN (4/1) et purifié par RP-HPLC semi-préparative (tR = 14.6 min) pour conduire au composé 5 (7.1 mg). RP-HPLC analytique : tR = 14.3 min (pureté = 97%) ; 1H RMN (CDC13, 250 MHz) : S 7.35 (m, 5H, Ph), 5.48 (s, 2H, CH2Ph), 4.47 (s, 2H, CH2-C=C), 4.25 (s, 2H, CH2 Gly), 3.81 (s, 2H, CH2C00) ; 13C RMN (CDCI3, 62.5 MHz) : 5 163.4, 162.0 (2 CO), 129.5, 128.4, 127.3 (CH Ar), 121.5 (CH triazole), 53.2 (CH2Ph), 51.8 (CH2-CO-N), 48.9 (CH2-CO2H), 42.0 (CH2-C=C) ; MALDI/TOF : m/z = 304.1 (MH+, 100%). Le composé 22 (5.0 mrnol, 1.0 equiv.) est mis en solution dans 20 mL de DMF et traité par NaCO3 (1.06 g, 10.0 mmol, 2.0 équiv.). Après agitation durant 10 min à température ambiante, le composé 21 (2.58 g, 6.0 mmol, 1.2 équiv.) est ajouté. L'ensemble est agité durant 24h à température ambiante puis le milieu réactionnel est filtré et le DMF est évaporé sous pression réduite pour conduire à une huile incolore. Après purification par chromatographie flash, le composé 26 (0.986 g, 2.38 mmol, 48%) est obtenu. 1H RMN (CDC13, 250 MHz) : 6 7.60 (s, 1H, NH-CO), 7.23 (m, 15H, Trt), 3.99 (dd, J = 5.5, J' = 2.5, 2H, CH2-C=-C), 3.10 (s, 2H, N-CH2-CO), 2.42 (m, 2H, N-CH2-CH2-S), 2.36 (m, 2H, N-CH2- CH2-S), 2.11 (t, J = 2.5, 1H, C=C-H), 1.79 (s, 1H, NH-Trt) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 6 170.7 (CO), 144.7 (C, Trt), 126.8-129.6 (CH, Trt), 79.4 (C, C=CH), 71.5 (CH, C=-CH), 66.9 (C, Trt), 51.4 (N-C1-12-C-C), 48.3 (S-CH2-CH2-N), 32.0 (CH2-C=C), 28.8 (S-CH2-CH2-N). Le composé 26 (248.7 mg, 0.6 mmol, 1.2 équiv.) est dissout dans 2.5 mL d'un mélange Et0H/eau (7/3). La L-proline (11.5 mg, 0.1 mmol, 0.2 équiv.), Na2CO3 (10.6 mg, 0.1 mmol, 0.2 équiv.), le bromure de benzyle (59.4 0.5 mmol, 1.0 équiv.), l'ascorbate de sodium (39.6 mg, 0.2 mmol, 0.2 équiv/), CuSO4, 5H20 (100 'IL de solution 1M, 0.2 équiv.) et l'azoture de sodium (45.5 mg, 0.7 mmol, 1.4 équiv.) sont introduits successivement selon la procédure de cycloaddition n°2. L'huile brune obtenue est précipitée dans l'hexane à 0°C pour conduire au composé 27 sous la forme d'un solide brun (176 mg, 0.32 mmol, 54%). 1H RMN (CDCI3, 250 MHz) : 5 7.81 (s, 1H, CH triazole), 7.35 (m, 15H, Trt), 5.37 (s, 2H, Ar Bn), 4.46 (s, 2H, CH2-C=C), 3.40 (s, 2H, N-CH2-00), 2.93 (s, 2H, N-CF12-CH2-S), 2.47 (s, 2H, N-CH2-CH2-S); MALDI/TOF : m/z = 548.2 (MH±, 100%). Compound 25 is deprotected with a solution of TFA / TIPS / water (95 / 2.5 / 2.5) at room temperature for 2 hours. After evaporation of the solvent under reduced pressure, the solid obtained is dissolved in a water / ACN mixture (4/1) and purified by semi-preparative RP-HPLC (tR = 14.6 min) to yield compound 5 (7.1 mg). Analytical RP-HPLC: tR = 14.3 min (purity = 97%); 1H NMR (CDCl3, 250 MHz): S 7.35 (m, 5H, Ph), 5.48 (s, 2H, CH2Ph), 4.47 (s, 2H, CH2-C = C), 4.25 (s, 2H, CH2 Gly) 3.81 (s, 2H, CH2C00); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 163.4, 162.0 (2 CO), 129.5, 128.4, 127.3 (CH Ar), 121.5 (CH triazole), 53.2 (CH2Ph), 51.8 (CH2-CO-N), 48.9 ( CH2-CO2H), 42.0 (CH2-C = C); MALDI / TOF: m / z = 304.1 (MH +, 100%). Compound 22 (5.0 mmol, 1.0 equiv.) Is dissolved in 20 ml of DMF and treated with NaCO3 (1.06 g, 10.0 mmol, 2.0 equiv). After stirring for 10 min at room temperature, compound 21 (2.58 g, 6.0 mmol, 1.2 equiv) is added. The mixture is stirred for 24 hours at room temperature, then the reaction medium is filtered and the DMF is evaporated under reduced pressure to give a colorless oil. After purification by flash chromatography, compound 26 (0.986 g, 2.38 mmol, 48%) is obtained. 1H NMR (CDCl3, 250 MHz): 6.60 (s, 1H, NH-CO), 7.23 (m, 15H, Trt), 3.99 (dd, J = 5.5, J '= 2.5, 2H, CH2-C = - C), 3.10 (s, 2H, N-CH 2 -CO), 2.42 (m, 2H, N-CH 2 -CH 2 -S), 2.36 (m, 2H, N-CH 2 -CH 2 -S), 2.11 (t, J = 2.5, 1H, C = CH), 1.79 (s, 1H, NH-Trt); 13 C NMR (CDCl 3, 62.5 MHz): 6170.7 (CO), 144.7 (C, Trt), 126.8-129.6 (CH, Trt), 79.4 (C, C = CH), 71.5 (CH, C = -CH), 66.9 (C, Trt), 51.4 (N-Cl-12-CC), 48.3 (S-CH2-CH2-N), 32.0 (CH2-C = C), 28.8 (S-CH2-CH2-N). Compound 26 (248.7 mg, 0.6 mmol, 1.2 equiv) is dissolved in 2.5 mL of EtOH / water (7: 3). L-proline (11.5 mg, 0.1 mmol, 0.2 equiv), Na2CO3 (10.6 mg, 0.1 mmol, 0.2 equiv), benzyl bromide (59.4 0.5 mmol, 1.0 equiv), sodium ascorbate (39.6 mg, 0.2 mmol, 0.2 equiv /), CuSO 4, 5H 2 O (100 μl of 1M solution, 0.2 equiv) and sodium azide (45.5 mg, 0.7 mmol, 1.4 equiv.) are introduced successively according to the cycloaddition procedure. # 2. The resulting brown oil is precipitated in hexane at 0 ° C to yield compound 27 as a brown solid (176 mg, 0.32 mmol, 54%). 1H NMR (CDCl3, 250 MHz): 7.81 (s, 1H, CH triazole), 7.35 (m, 15H, Trt), 5.37 (s, 2H, Ar Bn), 4.46 (s, 2H, CH2-C = C) ), 3.40 (s, 2H, N-CH2-00), 2.93 (s, 2H, N-CH2-CH2-S), 2.47 (s, 2H, N-CH2-CH2-S); MALDI / TOF: m / z = 548.2 (MH +, 100%).

Le composé 27 est déprotégé par un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) durant 2h à température ambiante. Après élimination du solvant sous pression réduite, le solide est repris dans un mélange eau/ACN (4/1) et purifié par RP-HPLC semi-préparative (tR = 15.7 min) pour conduire au composé 6 (7.7 mg). RP-HPLC analytique : tR = 14.1 min (pureté = 97 %) ; 11I RMN (CDC13, 250 MHz) : 51H RMN (CDC13, 250 MHz) : 7.46 (s, 1H, CH-NN=N), 7.34 (m, 4H, Ph), 5.44 (s, 2H, CH2Ph), 4.42 (s, 2H, CH2-C=C), 3.84 (s, 2H, CH2-CON), 3.24 (m, 2H, CH2, N-CH,-C112-S), 2.87 (m, 2H, CH2, N-CH2-CH2-S); 13C RMN (CDCI3, 62.5 MHz) : Ô 168.6 (CO amide), 137.3 (C, Triazole), 134.4 (C, Ar), 129.0 - 127.6 (CH Ar, Bn), 122.1 (CH, triazole), 59.1 (CH2, Bn), 57.9 (N-CH2-00), 56.1 (S-CH2-CH2-N), 40.5 (CH2-C-C), 34.4 (S-CH2-CH2-N); MALDI/TOF : in/z = 306.2 (MH+, 100%). II/ B- Synthèse des agents chélatants de la Série B Les six agents chélatants de formule (II) de la série B ont également été séparés en deux catégories : ceux de la série B1 et ceux de la série B2. Série Bi (agents chélatants 7 - 9) : Pour ces composés, le bloc fonctionnel est introduit par couplage peptidique sur la Cbz-Glycine ou acylation par le bromure de bromoacétyle. L'alcyne précurseur du noyau triazole est introduit via une réaction d'alkylation faisant intervenir la propargylamine ou le bromure de propargyle (Schéma 13). 0 29 C f 5H - HN9 HO HO 30 31 32 o NH HN 8 e g HO HI/ NH NH - HN !eut) ° # HN 1131..10 tOu0 9 NH N HS 35 ° 0 33 34 I /_4 es',,'', h es gb-s NH HN Schéma 13 : Synthèse des agents chélatants 7 à 9 : (a) 2-aminophénol, DCC, DIPEA, THF, rt, 6h, 86% ; (b) 1)H2,Pd/C, Me0H, 89%, 2) Bromure de propargyle, rt, 48h, 24% ; (c) CuAAC Procédure n°1 ; (d) Chlorohydrate de tert-butylglycine, Cs2CO3, DCM, 0°C, 30 min ; (e) Propargylamine, Cs2CO3, DCM , 50°C, 5j, 38% ; (f) CuAAC, Procédure n°2, 50% ; (g) TFA/TIPS/H20 (95/2.5/2.5), rt, 2h ; (h) FmocGlyOH, DCC, DMF, rt, 24h ; (i) 1) DMF/Pipéridine (4/1), rt, 3x5 min, 2) chlorure de propargyle, DCC, DMF, rt, 24h ; (j) TFA/TIPS/H20 (95/2.5/2.5), rt, 2x1h ; (k) CuAAC, Procédure n°2, 24%. The compound 27 is deprotected with a TFA / TIPS / water mixture (95 / 2.5 / 2.5) for 2 hours at room temperature. After removal of the solvent under reduced pressure, the solid is taken up in a water / ACN mixture (4/1) and purified by semi-preparative RP-HPLC (tR = 15.7 min) to give compound 6 (7.7 mg). Analytical RP-HPLC: tR = 14.1 min (purity = 97%); 11H NMR (CDCl3, 250MHz): 51H NMR (CDCl3, 250MHz): 7.46 (s, 1H, CH-NN = N), 7.34 (m, 4H, Ph), 5.44 (s, 2H, CH2Ph), 4.42 (s, 2H, CH2-C = C), 3.84 (s, 2H, CH2-CON), 3.24 (m, 2H, CH2, N-CH, -C112-S), 2.87 (m, 2H, CH2, N) -CH2-CH2-S); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): δ 168.6 (CO amide), 137.3 (C, Triazole), 134.4 (C, Ar), 129.0 - 127.6 (CH Ar, Bn), 122.1 (CH, triazole), 59.1 (CH2) , Bn), 57.9 (N-CH2-00), 56.1 (S-CH2-CH2-N), 40.5 (CH2-CC), 34.4 (S-CH2-CH2-N); MALDI / TOF: in / z = 306.2 (MH +, 100%). II / B- Synthesis of the chelating agents of the B series The six chelating agents of the formula (II) of the B series were also separated into two categories: those of the B1 series and those of the B2 series. Bi series (chelating agents 7-9): For these compounds, the functional block is introduced by peptide coupling to Cbz-Glycine or acylation by bromoacetyl bromide. The precursor alkyne of the triazole ring is introduced via an alkylation reaction involving propargylamine or propargyl bromide (Scheme 13). ## STR2 ## ## STR2 ## ## STR1 ## ## STR2 ## Figure 13: Synthesis of chelating agents 7 to 9: (a) 2-aminophenol, DCC, DIPEA, THF, rt, 6h, 86%; (b) 1) H2, Pd / C, MeOH, 89%, 2) Propargyl bromide, rt, 48h, 24%; (c) CuAAC Procedure # 1; (d) tert-butylglycine hydrochloride, Cs 2 CO 3, DCM, 0 ° C, 30 min; (e) Propargylamine, Cs 2 CO 3, DCM, 50 ° C, 5%, 38%; (f) CuAAC, Procedure # 2, 50%; (g) TFA / TIPS / H20 (95 / 2.5 / 2.5), rt, 2h; (h) FmocGlyOH, DCC, DMF, rt, 24h; (i) 1) DMF / piperidine (4/1), rt, 3x5 min, 2) propargyl chloride, DCC, DMF, rt, 24h; (j) TFA / TIPS / H20 (95 / 2.5 / 2.5), rt, 2x1h; (k) CuAAC, Procedure # 2, 24%.

La Cbz-Glycine (4.18 g, 20.0 mmol) est mise en solution dans 60 mL de THF anhydre. Le 2-aminophenol (2.18 g, 20.0 mmol, 1.0 équiv.), et le DCC (5.54 g, 22.0 mmol, 1.1 équiv.) sont ajoutés et le mélange est ajouté à température ambiante durant 6h. Après filtration du précipité, le solvant est évaporé sous pression réduite. Le résidu obtenu est précipité dans un mélange AcOEt /huile de pétrole 2/1 (200 mL) pour conduire au composé 28 sous la forme d'un solide blanc (5.15 g, 17.1 mmol, 86%). 1H RMN (d6-DMSO, 250 MHz) : 3 7.87 (s, 1H, amide), 7.35 (m, 5H, Ar Cbz), 7.22 (s, 1H, carbamate), 6.90 (m, 2H, CH Ar), 6.79 (m, 1H, CH Ar), 5.05 (s, 2H, CH2 Cbz), 3.83 (s, 2H, CH2); 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 8 170.1 (CO amide), 148.9 (CO carbamate), 127.3 - 119.9 (CH Ar, Cbz, Ar), 56.5 (CH2, Cbz), 43.6 (CH2, Gly). The Cbz-Glycine (4.18 g, 20.0 mmol) is dissolved in 60 mL of anhydrous THF. 2-aminophenol (2.18 g, 20.0 mmol, 1.0 equiv), and DCC (5.54 g, 22.0 mmol, 1.1 equiv) are added and the mixture is added at room temperature for 6 h. After filtration of the precipitate, the solvent is evaporated under reduced pressure. The residue obtained is precipitated in a mixture AcOEt / petroleum oil 2/1 (200 mL) to yield compound 28 in the form of a white solid (5.15 g, 17.1 mmol, 86%). 1H NMR (d6-DMSO, 250 MHz): 7.87 (s, 1H, amide), 7.35 (m, 5H, Ar Cbz), 7.22 (s, 1H, carbamate), 6.90 (m, 2H, CH Ar), 6.79 (m, 1H, CH Ar), 5.05 (s, 2H, CH 2 Cb 2), 3.83 (s, 2H, CH 2); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 8170.1 (CO amide), 148.9 (CO carbamate), 127.3-119.9 (CH Ar, Cbz, Ar), 56.5 (CH2, Cbz), 43.6 (CH2, Gly).

Le composé 28 (0.9 g, 3.0 mmol) est dissous partiellement dans 35 mL de méthanol. Du Pd/C 10% (135 mg, 15% w/w) est ajouté et le mélange est agité vigoureusement sous atmosphère d'hydrogène (4 bar) durant 1.5 h jusqu'à dissolution complète du composé 28. Après filtration sur célite, le solvant est évaporé sous pression réduite pour conduire à un NH Mem. solide jaune pale (447 mg, 2.68 mmol, 89%). Dissout dans 15 mL de DMF, ce solide est traité par le bromure de propargyle (0.289 mL, 2.68 mmol, 1.0 équiv.) durant 2 jours à température ambiante. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le composé obtenu est purifié par chromatographie flash (éluant : hexane/AcOEt 7/3, Rf = 0.32) pour conduire au composé 29 (0.132 g, 0.65 mmol, 24%). 1H RMN (d6-DMSO, 250 MHz) : 5 9.22 (s, 1H, NH amide), 7.0 (m, 4H, CH Ar), 3.55 (d, J = 2.5, 2H, CH2), 3.43 (s, 2H, CH2), 2.32 (t, J = 2.3, 1H, alcyne) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 5 171.6 (CO), 148.3 (C-OH, Ar), 126.7 - 118.8 (CH Ar), 80.5 (CH2-C=C), 72.6 (CH2-C=C), 50.9 (N-CH2-00), 38.3 (CH2-C=C) Le composé 29 (113 mg, 0.55 mmol) est mis en solution dans 1 mL d'un mélange DMSO/eau (9/1). La L-proline (12.6 mg, 0.11 mmol, 0.2 équiv.), Na2CO3 (70.1 mg, 0.66 mmol, 1.2 équiv.), le bromure de benzyle (65.4 .tL, 0.55 mmol, 1.0 équiv.), l'ascorbate de sodium (110 pl de solution aqueuse molaire, 0.2 équiv.), CuSO4,5H20 (110 pi, de solution aqueuse molaire, 0.2 équiv.) et l'azoture de sodium (42.9 mg, 0.66 mmol, 1.2 équiv.) sont ajoutés successivement selon la procédure de cycloaddition n°1 pour conduire au composé 7 sous la forme d'un solide blanc. Ce solide est dissout dans 5 inL de mélange eau/ACN (4/1) et purifié par RP-HPLC semi-préparative (tR = 21.7 min, 3.6 mg). RP-HPLC analytique : tR = 19.8, pureté = 93% ; 111 RMN (d6-DMSO, 250 MHz) : 8 8.11 (s, 1H, CH triazole), 7.25 (m, 5H, Ph), 7.18 (m, 4H, CH Ar), 5.53 (s, 2H, CH2-Ph), 3.78 (s, 2H, CH2), 3.18 (s, 2H, CH2) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 5 170.2 (CO amide), 147.9 (C-OH, Ar), 137.0 (C=C-CH2), 134.2 - 127.8 (CH Ar), 125.6 (C=C-CH2), 59.1 (CH2, Bn), 49.1 (CH2-CO), 45.6 (C=C-CH2) ; MALDI/TOF : m/z = 338.2 (MH+, 100%). L'hydrochlorure de tert-butyl glycine (0.546 g, 5.0 mmol) est traité par la DIPEA (1.39 mL, 10.0 mmol, 2.0 équiv.) dans 10 mL de DCM durant 20 min à température ambiante. Le solvant est éliminé sous pression réduite et le résidu est dissout dans le DCM sec. Le carbonate de césium (3.2 g, 10.0 mmol, 2.0 équiv.) puis le bromure de bromoacétyle (426 1..LL, 5.0 mmol, 1.0 équiv.) sont ajoutés successivement et le mélange est agité à 0°C pendant 30 min. Après filtration, le solvant est éliminé sous pression réduite pour conduire quantitativement au composé 30 sous la forme d'un solide blanc utilisé directement. 111 RMN (CDCI3, 250 MHz) : 5 7.00 (s, 1H, NH amide), 3.93 (d, J = 5.0, 2H, CH2-N), 3.89 (s, 2H, CH2-Br), 1.45 (s, 9H, Su) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 8 170.1, 168.9 (CO), 82.6 (C, tBu), 41.5 CH2-000), 30.6 (CH2Br), 28.1 (CI-13, tBu). Compound 28 (0.9 g, 3.0 mmol) is partially dissolved in 35 mL of methanol. 10% Pd / C (135 mg, 15% w / w) is added and the mixture is stirred vigorously under a hydrogen atmosphere (4 bar) for 1.5 h until complete dissolution of compound 28. After filtration on celite, the solvent is evaporated under reduced pressure to yield an NH Mem. pale yellow solid (447 mg, 2.68 mmol, 89%). Dissolved in 15 mL of DMF, this solid is treated with propargyl bromide (0.289 mL, 2.68 mmol, 1.0 equiv) for 2 days at room temperature. After evaporation of the solvent under reduced pressure, the compound obtained is purified by flash chromatography (eluent: hexane / AcOEt 7/3, Rf = 0.32) to give compound 29 (0.132 g, 0.65 mmol, 24%). 1H NMR (d6-DMSO, 250 MHz): 9.22 (s, 1H, NH amide), 7.0 (m, 4H, CH Ar), 3.55 (d, J = 2.5, 2H, CH 2), 3.43 (s, 2H); , CH2), 2.32 (t, J = 2.3, 1H, alkyne); 13 C NMR (CDCl 3, 62.5 MHz): 171.6 (CO), 148.3 (C-OH, Ar), 126.7 - 118.8 (CH Ar), 80.5 (CH 2 -C = C), 72.6 (CH 2 -C = C), 50.9 (N-CH2-00), 38.3 (CH2-C = C) Compound 29 (113 mg, 0.55 mmol) is dissolved in 1 mL of a DMSO / water (9/1) mixture. L-proline (12.6 mg, 0.11 mmol, 0.2 equiv), Na2CO3 (70.1 mg, 0.66 mmol, 1.2 equiv.), Benzyl bromide (65.4 .tL, 0.55 mmol, 1.0 equiv.), Ascorbate sodium (110 μl of molar aqueous solution, 0.2 equiv.), CuSO 4 · 5H 2 O (110 μl of molar aqueous solution, 0.2 equiv) and sodium azide (42.9 mg, 0.66 mmol, 1.2 equiv) are added successively according to the cycloaddition procedure No. 1 to give the compound 7 in the form of a white solid. This solid is dissolved in 5 μl of water / ACN (4/1) and purified by semi-preparative RP-HPLC (tR = 21.7 min, 3.6 mg). Analytical RP-HPLC: tR = 19.8, purity = 93%; NMR (d 6 -DMSO, 250 MHz): δ 8.11 (s, 1H, CH triazole), 7.25 (m, 5H, Ph), 7.18 (m, 4H, CH Ar), 5.53 (s, 2H, CH 2 -Pi) ), 3.78 (s, 2H, CH 2), 3.18 (s, 2H, CH 2); 13 C NMR (CDCl 3, 62.5 MHz): 5170.2 (CO amide), 147.9 (C-OH, Ar), 137.0 (C = C-CH 2), 134.2-127.8 (CH Ar), 125.6 (C = C-CH 2) 59.1 (CH 2, Bn), 49.1 (CH 2 -CO), 45.6 (C = C-CH 2); MALDI / TOF: m / z = 338.2 (MH +, 100%). Tert-butyl glycine hydrochloride (0.546 g, 5.0 mmol) is treated with DIPEA (1.39 mL, 10.0 mmol, 2.0 equiv) in 10 mL of DCM for 20 min at room temperature. The solvent is removed under reduced pressure and the residue is dissolved in dry DCM. The cesium carbonate (3.2 g, 10.0 mmol, 2.0 equiv) and bromoacetyl bromide (426 1..LL, 5.0 mmol, 1.0 equiv) are added successively and the mixture is stirred at 0 ° C. for 30 min. After filtration, the solvent is removed under reduced pressure to quantitatively conduct the compound 30 as a white solid used directly. NMR (CDCl3, 250 MHz):? 7.00 (s, 1H, NH amide), 3.93 (d, J = 5.0, 2H, CH2-N), 3.89 (s, 2H, CH2-Br), 1.45 (s, 9H, Su); 13C NMR (CDCl3, 62.5MHz): 8170.1, 168.9 (CO), 82.6 (C, tBu), 41.5 CH2-000), 30.6 (CH2Br), 28.1 (Cl-13, tBu).

Le composé 30 (5.0 mmol, 1.0 équiv) est mis en solution dans 10 mL de DMF. Le carbonate de césium (3.2 g, 10.0 mmol, 2.0 équiv.) et la propargylamine (386 !IL, 6.0 mmol, 1.2 équiv.) sont ajoutés successivement et le mélange est agité pendant 5 jours à 50°C. Après filtration, le solvant est évaporé sous pression réduite et le produit obtenu est repris dans le DCM puis lavé trois fois par une solution d'acide citrique 10% et par une solution saturée de NaCl. Les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de sodium anhydre, filtrées et le solvant est évaporé sous pression réduite. L'huile obtenue est purifiée par chromatographie - flash (éluent : hexane/AcOEt 3/7) pour donner le composé 31 (434 mg, 1.92 mmol, 38%). 111 RMN (CDC13, 250 MHz) : ô 7.49 (s, 1H, NH amide), 3.97 (d, J = 5.5, 2H, CH2CO2113u), 3.46 (d, J' = 2.5, 2H, CH2-CC), 3.33 (s, 2H, CH2 Gly), 2.24 (t, J' = 2.5, 1H, alcyne), 1.82 (s, 1H, NH amine). 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 8 165.8, 164.3 (CO), 84.6 (C 'Bu), 79.5 (C CH), 78.0 (Ca-CH), 39.0 (0-12 Gly), 29.9 (CH3 Su); ES/positive mode : m/z = 360.3 (MEI+, 100%). Compound 30 (5.0 mmol, 1.0 equiv) is dissolved in 10 mL of DMF. Cesium carbonate (3.2 g, 10.0 mmol, 2.0 equiv) and propargylamine (386 μL, 6.0 mmol, 1.2 equiv) are added successively and the mixture is stirred for 5 days at 50 ° C. After filtration, the solvent is evaporated off under reduced pressure and the product obtained is taken up in DCM and then washed three times with a 10% citric acid solution and with a saturated NaCl solution. The organic phases are combined, dried over anhydrous sodium sulphate, filtered and the solvent is evaporated under reduced pressure. The oil obtained is purified by flash chromatography (eluent: hexane / AcOEt 3/7) to give compound 31 (434 mg, 1.92 mmol, 38%). NMR (CDCl3, 250 MHz): δ 7.49 (s, 1H, NH amide), 3.97 (d, J = 5.5, 2H, CH2CO2113u), 3.46 (d, J '= 2.5, 2H, CH2-CC), 3.33 (s, 2H, CH 2 Gly), 2.24 (t, J '= 2.5, 1H, alkyne), 1.82 (s, 1H, NH amine). 13C NMR (CDCl3, 62.5MHz):? 165.8, 164.3 (CO), 84.6 (C? Bu), 79.5 (C? CH), 78.0 (Ca-CH), 39.0 (0-12 Gly), 29.9 (CH3 Su)? ; ES / positive mode: m / z = 360.3 (MEI +, 100%).

Le composé 31 (135.7 mg, 0.36 mmol, 1.2 équiv.) est mis en solution dans 1.5 mL d'un mélange éthanol/eau (7/3). La L-proline (6.9 mg, 0.06 mmol, 0.2 équiv.), Na2CO3 (6.36 mg, 0.06 mmol, 0.2 équiv.), le bromure de benzyle (35.6 p.L, 0.3 mmol), l'ascorbate de sodium (23.7 mg, 0.12 mmol, 0.2 équiv.), CuSO4,5H20 (60 uL d'une solution aqueuse molaire, 0.2 équiv.) et l'azoture de sodium (28.1 mg, 0.45 mmol, 1.5 équiv.) sont ajoutés successivement selon la procédure de cycloaddition n°2 pour conduire au composé 32 (57 mg, 0.169 mmol, 50%). 111 RMN (CDCI3, 250 MHz) : S 7.46 (s, 1H, CH triazole), 7.40 (s, 1H, NH, amide), 7.35 (m, 5H, Ar Bn), 5.53 (s, 2H, CH2 Bn), 3.96 (d, J = 5.5, 2H, CH2CON), 3.92 (s, 2H, CH2COO), 1.48 (s, 9H, `Bu) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : S 129.6, 129.2, 128.9 (CH Ar), 57.4 (C1-12 Bn), 54.3 (CH2CON), 49.8 (CH2-CC), 41.5 (CH2COO), 28.5 (tBu); ES/mode positif : 360.3 (MH+, 100%). Le composé 32 est déprotégé par un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) à température ambiante pendant 2h puis le solvant est évaporé sous pression réduite et le produit obtenu est séché. Le solide obtenu est dissous dans 5 mL d'un mélange eaulACN 30 (4/1) et purifié par RP-HPLC semi-préparative (tR = 17.3 min) pour mener au composé 8 (7.6 mg). RP-HPLC analytique : tR = 15.7 min, pureté = 98% ; 11I RMN (CD3OD, 62.5 MHz) : 8.07 (s, 1H, CH-N-N=N), 7.37 (m, 5H, Ar, Ph), 4.26 (s, 2H, N-CH2-CO-O), 3.87 (s, 2H, CH2-C=C), 3.74 (s, N-CH2-CO-N), 2.16 (s, 1H, NH amine); 13C RMN (CDCI3, 62.5 MHz) : 8 171.0 (CO, acide), 169.0 (CO, amide), 144.6 (C-C-CH2), 137.4 - 127.4 (CH Ar, Bn), 122.8 (C=C-CH2), 58.7 (CH2, Bn), 54.1 (CH2-CO-N), 49.2 (C=C-CH2), 41.3 (CH2-COOH) ; (ES/mode positif : m/z = 304.2 (MH E, 100%). Compound 31 (135.7 mg, 0.36 mmol, 1.2 equiv.) Is dissolved in 1.5 mL of ethanol / water (7/3). L-proline (6.9 mg, 0.06 mmol, 0.2 equiv), Na2CO3 (6.36 mg, 0.06 mmol, 0.2 equiv), benzyl bromide (35.6 μL, 0.3 mmol), sodium ascorbate (23.7 mg, 0.12 mmol, 0.2 equiv), CuSO4.5H2O (60 μl of a molar aqueous solution, 0.2 equiv) and sodium azide (28.1 mg, 0.45 mmol, 1.5 equiv) are added successively according to the cycloaddition procedure. No. 2 to give compound 32 (57 mg, 0.169 mmol, 50%). 111 NMR (CDCl3, 250 MHz): S 7.46 (s, 1H, CH triazole), 7.40 (s, 1H, NH, amide), 7.35 (m, 5H, Ar Bn), 5.53 (s, 2H, CH2 Bn) , 3.96 (d, J = 5.5, 2H, CH 2 CON), 3.92 (s, 2H, CH 2 COO), 1.48 (s, 9H, Bu); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 129.6, 129.2, 128.9 (CH Ar), 57.4 (C1-12 Bn), 54.3 (CH2CON), 49.8 (CH2-CC), 41.5 (CH2COO), 28.5 (tBu); ES / positive mode: 360.3 (MH +, 100%). The compound 32 is deprotected with a TFA / TIPS / water mixture (95 / 2.5 / 2.5) at ambient temperature for 2 h, then the solvent is evaporated off under reduced pressure and the product obtained is dried. The resulting solid is dissolved in 5 mL of eaulACN (4/1) and purified by semi-preparative RP-HPLC (tR = 17.3 min) to afford compound 8 (7.6 mg). Analytical RP-HPLC: tR = 15.7 min, purity = 98%; NMR (CD3OD, 62.5 MHz): 8.07 (s, 1H, CH-NN = N), 7.37 (m, 5H, Ar, Ph), 4.26 (s, 2H, N-CH2-CO-O), 3.87 ( s, 2H, CH 2 -C = C), 3.74 (s, N-CH 2 -CO-N), 2.16 (s, 1H, NH amine); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz):? 171.0 (CO, acid), 169.0 (CO, amide), 144.6 (CC-CH2), 137.4-127.4 (CH Ar, Bn), 122.8 (C = C-CH2), 58.7 (CH 2, Bn), 54.1 (CH 2 -CO-N), 49.2 (C = C-CH 2), 41.3 (CH 2 -COOH); (ES / positive mode: m / z = 304.2 (MH E, 100%).

La résine 4-méthoxytrityl eystéamine (0.7 mmol.g1, 1.0 g, 0.7 mmol) est conditionnée dans le DCM (3 x 1 min) puis le DMF (3 x 1 min). Une solution de Fmoc-Gly-OH (2.08 g, 7.0 mmol, 1.0 équiv.) dans 15 mL de DMF puis de la DIPEA (1.2 mL, 7.0 mmol, 10.0 équiv.) sont ajoutés et le mélange est agité durant 10 min. Le DCC (1.45 g, 7.0 mmol, 10 équiv.) est ajouté et le mélange est agité durant une nuit à température ambiante. Le test Kaiser est alors négatif. Les réactifs sont éliminés par filtration et la résine est lavée successivement par le DMF (3 x 1 min), le DCM (3 x 1 min), et le méthanol (3 x 1 min). La résine est ensuite conditionnée dans le DCM (3 x 1 min) puis le DMF (3 x 1 min) et traitée par un mélange pipéridine/DMF (1/4) (3 x 5 min) puis lavée successivement par le DMF (3 x 1 min), le DCM (3 x 1 min) et à nouveau le DMF (3 x 1 min). Le test Kaiser est alors positif. La résine est traitée par le chlorure de propargyle (774 uL de solution à 70% dans le toluène, 7.0 mmol, 10.0 équiv.) et la DIPEA (1.2 mL, 10.0 équiv.) dans 10 m1, de DMF à température ambiante durant une nuit. Le test Kaiser est alors négatif. Après lavage par le DMF (3 x 1 min) et le DCM (3 x 1 min), le composé est décroché de la résine par une solution de TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) durant 2 x 1h. Les filtrats sont réunis et le solvant est évaporé sous pression réduite pour mener au composé 35. 'H RMN (CD3OD, 62.5 MHz) : 8 4.11 (m, 2H, CH2CO), 4.02 (m, 2H, CH2-CECH), 3.47 (m, 1H, SH), 3.02 (s, 2H, CH2-N), 2.92 (s, 2H, CH2-S); 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 5 164.4 (CO), 78.1 (C=-CH), 72.2 (CE-CH), 56.2 (CH2CO), 37.6 (CH2-CEC), 32.4 (ÇH2-N), 29.7 (CH2-S) ; MALDI/TOF : miz = 414.2 (MH+, 100%). The 4-methoxytrityl eysteamine resin (0.7 mmol / g, 1.0 g, 0.7 mmol) is packaged in DCM (3 x 1 min) and then DMF (3 x 1 min). A solution of Fmoc-Gly-OH (2.08 g, 7.0 mmol, 1.0 equiv) in 15 mL of DMF followed by DIPEA (1.2 mL, 7.0 mmol, 10.0 equiv) is added and the mixture is stirred for 10 min. DCC (1.45 g, 7.0 mmol, 10 equiv) is added and the mixture is stirred overnight at room temperature. The Kaiser test is then negative. The reagents are removed by filtration and the resin is washed successively with DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min), and methanol (3 x 1 min). The resin is then packaged in DCM (3 x 1 min) then DMF (3 x 1 min) and treated with a piperidine / DMF mixture (1/4) (3 x 5 min) and then washed successively with DMF (3). x 1 min), DCM (3 x 1 min) and again DMF (3 x 1 min). The Kaiser test is then positive. The resin is treated with propargyl chloride (774 μl of 70% toluene solution, 7.0 mmol, 10.0 equiv) and DIPEA (1.2 ml, 10.0 equiv) in 10 ml of DMF at room temperature for a period of one hour. night. The Kaiser test is then negative. After washing with DMF (3 x 1 min) and DCM (3 x 1 min), the compound is removed from the resin by a solution of TFA / TIPS / water (95 / 2.5 / 2.5) for 2 x 1h. The filtrates are combined and the solvent is evaporated under reduced pressure to yield compound 35.1H NMR (CD3OD, 62.5 MHz): 4.11 (m, 2H, CH2CO), 4.02 (m, 2H, CH2-CECH), 3.47 (m, 1H, SH), 3.02 (s, 2H, CH 2 -N), 2.92 (s, 2H, CH 2 -S); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 164.4 (CO), 78.1 (C = -CH), 72.2 (CH-CH), 56.2 (CH2CO), 37.6 (CH2-CEC), 32.4 (CH2-N), 29.7. (CH2-S); MALDI / TOF: miz = 414.2 (MH +, 100%).

Le composé 35 (103 mg, 0.6 mmol, 1.2 équiv.) est mis en solution dans 2.5 mL d'un mélange EtOH/eau (7/3). La L-proline (11.5 mg, 0.1 mmol, 0.2 équiv.), Na2CO3 (39.6 mg, 0.2 mmol, 0.2 équiv.), le bromure de benzyle (59.4 pt, 0.5 mmol, 1.0 équiv.), l'ascorbate de sodium (39.6 mg, 0.2 mmol, 0.2 équiv.), CuSO4,5H20 (100 p.L d'une solution aqueuse molaire, 0.2 équiv.) et l'azoture de sodium (45.5 mg, 0.7 mmol, 1.4 équiv.) sont ajoutés 30 successivement selon la procédure de cycloaddition n°2 pour conduire à une huile brune (36 mg) qui est purifiée par RP-HPLC semi-préparative (tR = 21.2 min) pour mener au composé 9 (5.2 mg). RP-HPLC analytique : tR = 19.0 min, pureté = 94%; 'H RMN (CD3OD, 62.5 MHz) : 8 7.89 (s, 1H, CH-N-N=N), 7.34 (m, 5H, Ar Ph), 5.55 (s, 2H, CH2Ph), 4.49 (s, 2H, CH2-C=C), 3.87 (s, 2H, N-CH2-CO), 3.42 (t, J = 6.75 Hz, 2H, N-CHI-CH2-S), 3.09 (t, J 6.75 Hz, 2H, N-CH2-CH,-S) ; MALDI/TOF : m/z = 306.4 (M1-1+, 100%). Série B2 (agents chélatants 10 -12) : Les composés 10 et 11 ont été préparés à partir de la Cbz-Glycine. Le groupement carboxybenzyle présente en effet l'avantage d'être éliminé très proprement par hydrogénation catalytique et de conduire au produit déprotégé sans résidu de déprotection tout en fournissant une amine libre non protonnée. Ainsi le couplage de l'acide propiolique peut être réalisé sur un intermédiaire réactionnel obtenu pur. Cette approche particulière n'a tout de fois pas pu être utilisée pour l'obtention du composé 12 puisque les protections carboxybenzyle et trityle ne sont pas toujours orthogonales, le trityle pouvant réagir au cours de l'hydrogénation. Cette dernière synthèse a donc été réalisée à partir de la Fmoc-Glycine (Schéma 14). Compound 35 (103 mg, 0.6 mmol, 1.2 equiv) is dissolved in 2.5 mL of EtOH / water (7/3). L-proline (11.5 mg, 0.1 mmol, 0.2 equiv), Na2CO3 (39.6 mg, 0.2 mmol, 0.2 equiv), benzyl bromide (59.4 pt, 0.5 mmol, 1.0 equiv), sodium ascorbate (39.6 mg, 0.2 mmol, 0.2 equiv), CuSO4.5H2O (100 μL of a molar aqueous solution, 0.2 equiv.) And sodium azide (45.5 mg, 0.7 mmol, 1.4 equiv.) Are added successively. according to the cycloaddition procedure No. 2 to yield a brown oil (36 mg) which is purified by semi-preparative RP-HPLC (tR = 21.2 min) to yield compound 9 (5.2 mg). Analytical RP-HPLC: tR = 19.0 min, purity = 94%; 1 H NMR (CD3OD, 62.5 MHz): 7.89 (s, 1H, CH-NN = N), 7.34 (m, 5H, Ar Ph), 5.55 (s, 2H, CH2Ph), 4.49 (s, 2H, CH2); -C = C), 3.87 (s, 2H, N-CH 2 -CO), 3.42 (t, J = 6.75 Hz, 2H, N-CHI-CH 2 -S), 3.09 (t, J 6.75 Hz, 2H, N). -CH2-CH, -S); MALDI / TOF: m / z = 306.4 (M1-1 +, 100%). B2 series (chelating agents 10 -12): Compounds 10 and 11 were prepared from Cbz-Glycine. The carboxybenzyl group indeed has the advantage of being eliminated very cleanly by catalytic hydrogenation and to lead to the deprotected product without deprotection residue while providing a free unprotected amine. Thus the coupling of propiolic acid can be carried out on a reaction intermediate obtained pure. This particular approach could not be used to obtain compound 12 since the carboxybenzyl and trityl protections are not always orthogonal, the trityl being able to react during the hydrogenation. This last synthesis was therefore made from Fmoc-Glycine (Scheme 14).

Schéma 14 : Synthèse des agents chélatants 10 à 12 : (a) 2-aminophénol, DCC, DIPEA, THF, rt, 6h, 86% ; (b) 1) H2, Pd/C, Me0H, 1.5h, 2) acide propiolique, DCC, DCM, 0°C, lh, puis rt, 24h, 7% ; (c) CuAAC, Procédure n°2, 58% ; (d) Chorohydrate de tert-butylglycine, DCC, DIPEA, THF, rt, 5h, 46% ; (e) 1)H2, Pd/C, Me0H, 1.5h, 2) acide propioliqe, DCC, DCM, 0°C, lh, puis rt, 24h, 12% ; (f) CuAAC, Procédure n°2, 56% ; (g) TFA/TIPS/H20 (95/2.5/2.5), rt, 2h ; (h) TrtOH, TFA, DCM, rt, 2h, 88% ; (i) 40, DCC, THF, rt, 24h, 72% ; (j) 1) DMF/Pipéridine (4/1), 2) acide propiolique, DCC, DCM, 0°C, lh, puis rt, 24h, 28% ; (k) CuAAC, Procédure n°1, 22% ; (1) TFA/TIPS/H20 (9512.5/2.5), rt, 2h. Scheme 14: Synthesis of chelating agents 10 to 12: (a) 2-aminophenol, DCC, DIPEA, THF, rt, 6h, 86%; (b) 1) H2, Pd / C, MeOH, 1.5h, 2) propiolic acid, DCC, DCM, 0 ° C, 1 h, then rt, 24h, 7%; (c) CuAAC, Procedure # 2, 58%; (d) tert-butylglycine hydrochloride, DCC, DIPEA, THF, rt, 5h, 46%; (e) 1) H2, Pd / C, MeOH, 1.5h, 2) propiolic acid, DCC, DCM, 0 ° C, 1 h, then rt, 24h, 12%; (f) CuAAC, Procedure # 2, 56%; (g) TFA / TIPS / H20 (95 / 2.5 / 2.5), rt, 2h; (h) TrtOH, TFA, DCM, rt, 2h, 88%; (i) 40, DCC, THF, rt, 24h, 72%; (j) 1) DMF / piperidine (4/1), 2) propiolic acid, DCC, DCM, 0 ° C, 1 h, then rt, 24h, 28%; (k) CuAAC, Procedure # 1, 22%; (1) TFA / TIPS / H20 (9512.5 / 2.5), rt, 2h.

Le composé 28 (1.50 g, 5.0 mmol) est mis en solution dans 50 mL de méthanol et le Pd/C 10% (225.0 mg, 15% w/w) est ajouté. Le mélange est agité pendant 2h sous atmosphère d'hydrogène (4 bar). Après filtration sur célite, le solvant est évaporé sous pression réduite et le composé obtenu (833 mg, 5.0 mmol, quant.) est dissout dans 20 mL de DCM. L'anhydride symétrique est préalablement préparé par agitation durant 10 min à 0°C d'un mélange d'acide propiolique (307.5 mt, 5.0 mmol, 1.0 équiv), et de DCC (1.134 mg, 5.5 mmol, 1.1 équiv.) dans 25 mL de DCM). L'anhydride symétrique ainsi formé est ajouté au composé 36 déprotégé et agité durant lh à 0°C puis une nuit à température ambiante. Après filtration de la DCU, le solvant est éliminé sous pression réduite et le composé obtenu est purifié par chromatographie flash (éluent hexane/AcOEt 3/7) pour mener au composé 27 (78.5 mg, 0.36 mmol, 7%). 'H R1VIN (CDCI3, 250 MHz) : 5 7.44 (d, J = 7.5, 1H, amide), 7.25 (s, 1H, amide), 7.07 - 6.80 (m, 4H, CH Ar), 4.19 (s, 2H, CH2), 2.90 (s, 1H, CH alcyne). h 4(1 HzN TAS TAS 0 CbzHN OH d HO g o 41 0 ->" OH FmocHN HN cHN/ TAS 43 0 NH HN TAS Le composé 27 (78.5 mg, 0.36 mmol, 1.2 équiv.) est mis en solution dans 1.5 mL de mélange EtOH/eau (7/3). La L-proline (6.9 mg, 0.06 mmol, 0.2 équiv.), Na2CO3 (6.36 mg, 0.06 mmol, 0.2 équiv.), le bromure de benzyle (35.6 1.1.1', 0.3 mmol, 1 équiv.), l'ascorbate de sodium (23.7 mg, 0.06 mmol, 0.2 équiv), CuSO4,5H20 (60 !IL de solution aqueuse molaire, 0.2 équiv.) et l'azoture de sodium (28.1 mg, 0.45 mmol, 1.5 équiv.) sont ajoutés successivement selon la procédure de cycloaddition n°2 pour conduire au composé 10 (73 mg, 0.21 mmol) qui est dissout dans 5 mL d'un mélange ACN/eau (4/1). La solution est purifiée par RP-HPLC semi-préparative (tR = 22.5 min) pour mener au composé 16 (7.6 mg). RP- HPLC analytique : tR =18.1 min, pureté = 96%); 111 RMN (CDC13, 250 MHz) : 5 8.92 (s, 1H, NH amide), 8.20 (s, 1H, NH amide), 7.99 (s, 1H, CH triazole), 7.40 - 6.60 (m, 9H, Bn, Ar), 5.49 (s, 2H, CH2 Bn), 4.30 (s, 2H, CH2); MALDI/TOF : m/z = 352.2 (MH±, 100%). La Cbz-Gly-OH (2.09 g, 10.0 mmol) est mise en solution dans 20 mL de THF sec puis l'hydrochlorure de tert-butyl glycine (1.67 g, 10.0 mmol, 1.0 équiv.) et le DCC (2.27 g, 11.0 mmol, 1.1 équiv.) sont successivement ajoutés. Le mélange est agité durant 5h à température ambiante sous atmosphère d'argon. Après filtration de la DCU, le solvant est évaporé sous pression réduite et l'huile incolore obtenue est purifiée par chromatographie flash (éluent : hexane/AcOEt 5/5, Rf = 0.32) pour mener au composé 37 (1.48 g, 4.6 mmol, 46%). 1H RMN (CDC13, 250 MHz) : 5 7.44 (s, 1H, NH amide), 7.34 (m, 5H, Ph), 6.52 (s, 1H, NH carbamate), 5.12 (s, 2H, CH2-Ph), 3.92 (m, 4H, 2 CH2-CO), 1.47 (s, 9H, tBu) ; '3C RMN (CDCI3, 62.5 MHz) : 5 169.7, 168.6 (CO amide), 156.5 (CO carbamate), 135.9 (C Ph), 127.9 - 127.5 (CH Ar), 81.4 (C tBu), 66.3 (CH2 Bn), 43.7 (CH2CON), 41.3 (CH2C00), 27.4 (CH3, tBu). Compound 28 (1.50 g, 5.0 mmol) is dissolved in 50 mL of methanol and 10% Pd / C (225.0 mg, 15% w / w) is added. The mixture is stirred for 2 h under a hydrogen atmosphere (4 bar). After filtration on celite, the solvent is evaporated under reduced pressure and the compound obtained (833 mg, 5.0 mmol, quant.) Is dissolved in 20 ml of DCM. The symmetrical anhydride is previously prepared by stirring for 10 min at 0 ° C a mixture of propiolic acid (307.5 mt, 5.0 mmol, 1.0 equiv), and DCC (1.134 mg, 5.5 mmol, 1.1 equiv) in 25 mL of DCM). The symmetrical anhydride thus formed is added to the deprotected compound 36 and stirred for 1 h at 0 ° C. and then overnight at room temperature. After filtration of the DCU, the solvent is removed under reduced pressure and the compound obtained is purified by flash chromatography (eluent hexane / AcOEt 3/7) to give compound 27 (78.5 mg, 0.36 mmol, 7%). 1H, R1VIN (CDCl3, 250 MHz): 7.44 (d, J = 7.5, 1H, amide), 7.25 (s, 1H, amide), 7.07 - 6.80 (m, 4H, CH Ar), 4.19 (s, 2H). , CH2), 2.90 (s, 1H, CH alkyne). The compound 27 (78.5 mg, 0.36 mmol, 1.2 equiv.) is dissolved in 1.5 ml of water (1 HzN TAS TAS 0 CbzHN OH d HO go 41 0 -> "OH FmocHN HN cHN / TAS 43 0 NH HN TAS EtOH / water (7/3), L-proline (6.9 mg, 0.06 mmol, 0.2 equiv), Na2CO3 (6.36 mg, 0.06 mmol, 0.2 equiv), benzyl bromide (35.6 1.1.1). , 0.3 mmol, 1 equiv.), Sodium ascorbate (23.7 mg, 0.06 mmol, 0.2 equiv), CuSO4.5H2O (60 mL of molar aqueous solution, 0.2 equiv) and sodium azide (28.1 mg 0.45 mmol, 1.5 equiv.) Are added successively according to the cycloaddition procedure No. 2 to give the compound 10 (73 mg, 0.21 mmol) which is dissolved in 5 ml of a mixture of ACN / water (4/1). The solution was purified by semi-preparative RP-HPLC (tR = 22.5 min) to give compound 16 (7.6 mg) RP-analytical HPLC: tR = 18.1 min, purity = 96%) 111 NMR (CDCl 3, 250 MHz ): 8.92 (s, 1H, NH amide), 8.20 (s, 1H, NH amide), 7.99 (s, 1H, CH triazole), 7.40 - 6.60 (m, 9H, Bn, Ar), 5.49 (s, 2H, CH2 Bn ), 4.30 (s, 2H, CH 2); MALDI / TOF: m / z = 352.2 (MH +, 100%). The Cbz-Gly-OH (2.09 g, 10.0 mmol) is dissolved in 20 ml of dry THF and then tert-butyl glycine hydrochloride (1.67 g, 10.0 mmol, 1.0 equiv.) And the DCC (2.27 g, 11.0 mmol, 1.1 equiv.) Are successively added. The mixture is stirred for 5 hours at room temperature under an argon atmosphere. After filtration of the DCU, the solvent is evaporated off under reduced pressure and the colorless oil obtained is purified by flash chromatography (eluent: hexane / AcOEt 5/5, Rf = 0.32) to give compound 37 (1.48 g, 4.6 mmol, 46%). 1H NMR (CDCl3, 250 MHz): 7.44 (s, 1H, NH amide), 7.34 (m, 5H, Ph), 6.52 (s, 1H, NH carbamate), 5.12 (s, 2H, CH2-Ph), 3.92 (m, 4H, 2 CH 2 -CO), 1.47 (s, 9H, tBu); 3 C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 169.7, 168.6 (CO amide), 156.5 (CO carbamate), 135.9 (C Ph), 127.9 - 127.5 (CH Ar), 81.4 (C tBu), 66.3 (CH2 Bn) , 43.7 (CH2CON), 41.3 (CH2C00), 27.4 (CH3, tBu).

Le composé 37 (1.135 g, 3.0 mmol) est mis en solution dans 20 mL de méthanol et le Pd/C 10% (170 mg, 15% w/w) est ajouté. Le mélange est agité durant 1h30 sous atmosphère d'hydrogène (4 bar). Après filtration sur célite, le solvant est évaporé sous pression réduite et le résidu est dissout dans 10 mL de DCM. L'anhydride symétrique de l'acide propiolique est préalablement préparé par action du DCC (0.742 g, 3.6 mmol, 1.2 équiv.) sur l'acide propiolique (221.4 1.1L, 3.0 mmol, 1.0 équiv.) dans 15 mL de DCM. L'anhydride symétrique est ajouté au composé 38 déprotégé et le mélange est agité durant une nuit à température ambiante. Après filtration du précipité, le solvant est éliminé par pression réduite et le produit obtenu est purifié par chromatographie flash (éluent : hexane/AcOEt 3/7) pour mener au composé 38 (84 mg, 0.35 mmol, 12 %). 111 RMN (CDC13, 250 MHz) : 8 4.03 (s, 2H, CH2), 3.93 (d, J - 5, 2H, CH2), 1.45 (s, 9H, tBu) ; 13C RMN (CDCI3, 62.5 MHz) : 5 168.8, 168.5 (CO, amide + ester), 152.7 (C=C-00), 82.5 (C=-CH), 74.8 (C=-CH), 42.8 (CH2-CO-N), 42.0 (CH2-00-0), 24.7 (CH3, tBu). Le composé 38 (60.0 mg, 0.25 mmol) est mis en solution dans 1.5 mL d'un mélange DMSO/eau (9/1). La L-proline (5.7 mg, 0.05 mmol, 0.2 équiv.), Na2CO3 (31.8 mg, 0.3 mmol, 1.2 équiv.), le bromure de benzyle (29.7 0.25 mmol, 1.0 équiv.), l'ascorbate de sodium (50 i.t1, de solution aqueuse molaire, 0.2 équiv.), CuSO4,5H20 (50 uL de solution aqueuse molaire, 0.2 équiv.) et l'azoture de sodium (19.5 mg, 0.3 mmol, 1.2 équiv.) sont ajoutés successivement selon la procédure de cycloaddition n°1 pour mener au composé 39 (52 mg, 0.14 mmol, 56%). 111 RMN (CDC13, 250 MHz) : 5 7.95 (s, 1H, CH-N-N=N), 7.32 (m, 5H, Ar Ph), 5.54 (s, 2H, CH2Ph), 4.33 (s, 2H, CH2-C0-O), 3.78 (s, 2H, CH2-CO-N), 1.24 (s, 9H, tBu) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 5 168.9, 168.8 (CO, amide + ester), 160.8 (C=C-CO), 142.9 (C=C-00), 133.8 (C=C-00), 129.4 - 125.8 (CH Ar, Bn), 82.6 (C, tBu), 54.7 (CH2 , Bn), 43.0 (CH2-CO-N), 42.1 (CH2-00-0), 28.1 (CH3, tBu). Le composé 39 est déprotégé par 10 mL d'un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) pendant 2h à température ambiante. Le solvant est évaporé sous pression réduite et le produit obtenu est repris dans 5 mL d'un mélange eau/ACN (4/1) puis purifié par RP-HPLC analytique (tR = 21.7 min) pour mener au composé 11 (5.1 mg). RP-HPLC analytique : tR = 19.1 min, pureté = 100%; 1H RMN (CDCI 3, 62.5 MHz) : 5 7.72 (s, 1H, CH-N-N=N), 7.35 (m, 5H, Ar Ph), 5.59 (s, 2H, CH2Ph), 4.18 (s, 2H, CH2-CO-O), 3.62 (s, 2H, N-CH2-CO-N) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 8 167.1, 166.0 (CO, amide + ester), 141.3 (C-C-00), 128.7 (C=C-CO), 128.7 - 128.1 (CH, Bn), 54.6 (CH2, Bn), 33.7 (CH2-CO-N), 31.8 (CH2-00-0). MALDI/TOF : m/z = 318.3 (MH+, 100%). Le 2-aminothiophénol (3.756 g, 30.0 mmol) est mis en solution dans 2.5 mL de DCM et traité par le triphénylméthanol (7.8 g, 30.0 mmol, 1.0 équiv.) dans 25 mL de TFA durant 2h à température ambiante. Le solvant est évaporé sous pression réduite et l'huile obtenue est versée dans 200 mL d'une solution saturée d'hydrogénocarbonate de sodium. Le produit est extrait au DCM à 3 reprises et les phases organiques sont réunies et lavées par une solution saturée de NaC1 puis séchées sur sulfate de sodium anhydre. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le composé 40 est obtenu sous la forme d'un solide blanc (9.64 g, 26.25 mmol, 88%). 'H RMN (CDC13, 250 MHz) : 8 7.25 - 7.35 (m, 15H, Trt), 7.04 (m, 2H, meta CH Ph), 6.55 (m, 1H, ortho CH Ph), 7.45 (m, 1H, para CH Ph), 3.85 (s, 2H, NH2 amine) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 8 150.1 (C-N, Ph), 144.4, 130.0, 127.8, 126.9 (Trt), 118.9 (C-S, Ph), 117.2, 116.0 (CH, Ph), 71.0 (C, Trt). La Fmoc-Gly-OH (1.485 g, 5.0 mmol, 1.0 équiv.) est dissoute dans 20 mL de THF anhydre. Le composé 40 (1.83 g, 5.0 mmol, 1.0 équiv.) puis le DCC (1.135 g, 5.5 mmol, 1.1 équiv) sont ajoutés successivement et le mélange est agité durant une nuit à température ambiante. Après filtration de la DCU, le solvant est évaporé sous pression réduite. L'huile obtenue est reprise dans le DCM et purifiée par chromatographie flash (éluent : hexane/AcOEt 7/3). Une huile incolore est alors obtenue qui précipite dans l'hexane à 0°C pour mener au composé 41 (2.334 g, 3.61 mmol, 72%) sous forme d'un sorlide brun. 'H RMN (CDC13, 250 MHz) : 3 7.75 (m, 2H, Fmoc), 7.59 (m, 2H, Fmoc), 7.40 (m, 2H, Fmoc), 7.27 (m, 18H, Trt 3 CH Ar), 6.83 (m, CH Ar), 4.39 (d, J - 2.5, 2H, CH2 Fmoc), 4.10 (t, J 2.5, 1H, Fmoc), 3.62 (d, J = 5.0, 2H, CH2) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 8 143.5 (C, Fmoc), 141.3 (C-N, Ph), 137.6 (C, Frnoc), 129.6 (CH meta Trt), 127.8 (CH, ortho Trt), 125.0 (CH, Ph), 123.7 (CH, Ph), 120.0 (CH, para Trt), 61.2 (CH2, Fmoc), 44.9 (CH2, G1y). Compound 37 (1.135 g, 3.0 mmol) is dissolved in 20 mL of methanol and 10% Pd / C (170 mg, 15% w / w) is added. The mixture is stirred for 1 h 30 under a hydrogen atmosphere (4 bar). After filtration on celite, the solvent is evaporated off under reduced pressure and the residue is dissolved in 10 ml of DCM. The symmetrical anhydride of propiolic acid is prepared by the action of DCC (0.742 g, 3.6 mmol, 1.2 equiv) on propiolic acid (221.4 1.1L, 3.0 mmol, 1.0 equiv) in 15 mL of DCM. The symmetrical anhydride is added to the deprotected compound 38 and the mixture is stirred overnight at room temperature. After filtration of the precipitate, the solvent is removed under reduced pressure and the product obtained is purified by flash chromatography (eluent: hexane / AcOEt 3/7) to give compound 38 (84 mg, 0.35 mmol, 12%). NMR (CDCl 3, 250 MHz): δ 4.03 (s, 2H, CH 2), 3.93 (d, J - 5, 2H, CH 2), 1.45 (s, 9H, tBu); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 168.8, 168.5 (CO, amide + ester), 152.7 (C = C-00), 82.5 (C = -CH), 74.8 (C = -CH), 42.8 (CH2- CO-N), 42.0 (CH2-00-0), 24.7 (CH3, tBu). Compound 38 (60.0 mg, 0.25 mmol) is dissolved in 1.5 mL of a DMSO / water (9/1) mixture. L-proline (5.7 mg, 0.05 mmol, 0.2 equiv), Na2CO3 (31.8 mg, 0.3 mmol, 1.2 equiv), benzyl bromide (29.7 0.25 mmol, 1.0 equiv), sodium ascorbate (50 i.t1, molar aqueous solution, 0.2 equiv.), CuSO4.5H2O (50 μl of molar aqueous solution, 0.2 equiv) and sodium azide (19.5 mg, 0.3 mmol, 1.2 equiv) are added successively according to cycloaddition procedure No. 1 to give compound 39 (52 mg, 0.14 mmol, 56%). NMR (CDCl 3, 250 MHz):? 7.95 (s, 1H, CH -NN = N), 7.32 (m, 5H, Ar Ph), 5.54 (s, 2H, CH 2 Ph), 4.33 (s, 2H, CH 2 CO-O), 3.78 (s, 2H, CH 2 -CO-N), 1.24 (s, 9H, tBu); 13 C NMR (CDCl 3, 62.5 MHz): 168.8, 168.8 (CO, amide + ester), 160.8 (C = C-CO), 142.9 (C = C-00), 133.8 (C = C-00), 129.4 - 125.8 (CH Ar, Bn), 82.6 (C, tBu), 54.7 (CH2, Bn), 43.0 (CH2-CO-N), 42.1 (CH2-00-0), 28.1 (CH3, tBu). The compound 39 is deprotected with 10 ml of a TFA / TIPS / water mixture (95 / 2.5 / 2.5) for 2 hours at room temperature. The solvent is evaporated off under reduced pressure and the product obtained is taken up in 5 ml of a water / ACN mixture (4/1) and then purified by analytical RP-HPLC (tR = 21.7 min) to give compound 11 (5.1 mg) . Analytical RP-HPLC: tR = 19.1 min, purity = 100%; 1 H NMR (CDCl 3, 62.5 MHz): 7.72 (s, 1H, CH -NN = N), 7.35 (m, 5H, Ar Ph), 5.59 (s, 2H, CH 2 Ph), 4.18 (s, 2H, CH 2) -CO-O), 3.62 (s, 2H, N-CH 2 -CO-N); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): δ 167.1, 166.0 (CO, amide + ester), 141.3 (CC-00), 128.7 (C = C-CO), 128.7 - 128.1 (CH, Bn), 54.6 (CH2, Bn), 33.7 (CH2-CO-N), 31.8 (CH2-00-0). MALDI / TOF: m / z = 318.3 (MH +, 100%). The 2-aminothiophenol (3.756 g, 30.0 mmol) is dissolved in 2.5 ml of DCM and treated with triphenylmethanol (7.8 g, 30.0 mmol, 1.0 equiv.) In 25 ml of TFA for 2 hours at room temperature. The solvent is evaporated off under reduced pressure and the oil obtained is poured into 200 ml of a saturated solution of sodium hydrogencarbonate. The product is extracted with DCM 3 times and the organic phases are combined and washed with a saturated solution of NaCl and then dried over anhydrous sodium sulphate. After evaporation of the solvent under reduced pressure, the compound 40 is obtained in the form of a white solid (9.64 g, 26.25 mmol, 88%). 1 H NMR (CDCl 3, 250 MHz): 7.25 - 7.35 (m, 15H, Trt), 7.04 (m, 2H, meta CH-CH), 6.55 (m, 1H, orthoCH Ph), 7.45 (m, 1H, para CH 3 H), 3.85 (s, 2H, NH 2 amine); 13C NMR (CDCl3, 62.5MHz):? 150.1 (CN, Ph), 144.4, 130.0, 127.8, 126.9 (Trt), 118.9 (CS, Ph), 117.2, 116.0 (CH, Ph), 71.0 (C, Trt)? . Fmoc-Gly-OH (1.485 g, 5.0 mmol, 1.0 equiv.) Is dissolved in 20 mL of anhydrous THF. Compound 40 (1.83 g, 5.0 mmol, 1.0 equiv) and then the DCC (1.135 g, 5.5 mmol, 1.1 equiv) are added successively and the mixture is stirred overnight at room temperature. After filtration of the DCU, the solvent is evaporated under reduced pressure. The oil obtained is taken up in DCM and purified by flash chromatography (eluent: hexane / AcOEt 7/3). A colorless oil is then obtained which precipitates in hexane at 0 ° C to yield compound 41 (2.334 g, 3.61 mmol, 72%) as a brown sorlide. 1 H NMR (CDCl 3, 250 MHz): 7.75 (m, 2H, Fmoc), 7.59 (m, 2H, Fmoc), 7.40 (m, 2H, Fmoc), 7.27 (m, 18H, Trt 3 CH Ar), 6.83 (m, CH Ar), 4.39 (d, J-2.5, 2H, CH 2 Fmoc), 4.10 (t, J 2.5, 1H, Fmoc), 3.62 (d, J = 5.0, 2H, CH 2); 13 C NMR (CDCl 3, 62.5 MHz): δ 143.5 (C, Fmoc), 141.3 (CN, Ph), 137.6 (C, Frnoc), 129.6 (CH meta Trt), 127.8 (CH, ortho Trt), 125.0 (CH, Ph), 123.7 (CH, Ph), 120.0 (CH, para Trt), 61.2 (CH2, Fmoc), 44.9 (CH2, G1y).

Le composé 41 (1.62 mg, 2.5 mmol) est déprotégé par 20 mL d'un mélange pipéridine/DMF (114). Après évaporation du solvant sous pression réduite, le produit brut obtenu est repris dans 10 mL de DCM sec. L'anhydride symétrique de l'acide propiolique est préparé par la réaction de l'acide propiolique (184.5 [.[L, 2.5 mmol, 1.0 équiv.) sur le DCC (257.9 mg, 1.25 mmol, 0.5 équiv.) dans 10 mL de DCM sec puis ajouté au composé 61 déprotégé. Le mélange est agité durant 10 minutes à 0°C puis une nuit à température ambiante. Après évaporation du solvant, le produit brut obtenu est purifié par chromatographie flash (éluent : hexane/AcOEt 3/7) pour mener au composé 42 (0.337 g, 0.71 mmol, 28%). ln RMN (CDC13, 250 MHz) : 3 8.21 (s, 1H, NH amide), 8.09 (s, 1H, NH amide), 7.25 (m, 15H, Trt), 3.68 (d, J = 5.0, 2H, CH2), 2.84 (s, 1H, alcyne) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 8 169.3 (CO, amide), 147.2 (HC=C-CO), 131.7 - 123.1 (CH, Ar), 88.1 (HC=C), 76.2 (HC=C), 62.3 (C, Trt), 47.1 (CH2-CO-N). Compound 41 (1.62 mg, 2.5 mmol) is deprotected with 20 mL of piperidine / DMF (114). After evaporation of the solvent under reduced pressure, the crude product obtained is taken up in 10 mL of dry DCM. The symmetrical anhydride of propiolic acid is prepared by the reaction of propiolic acid (184.5 [. [L, 2.5 mmol, 1.0 equiv.)) On DCC (257.9 mg, 1.25 mmol, 0.5 equiv) in 10 mL. dry DCM then added to deprotected compound 61. The mixture is stirred for 10 minutes at 0 ° C. and then overnight at room temperature. After evaporation of the solvent, the crude product obtained is purified by flash chromatography (eluent: hexane / AcOEt 3/7) to give compound 42 (0.337 g, 0.71 mmol, 28%). NMR (CDCl3, 250 MHz): 8.21 (s, 1H, NH amide), 8.09 (s, 1H, NH amide), 7.25 (m, 15H, Trt), 3.68 (d, J = 5.0, 2H, CH2); ), 2.84 (s, 1H, alkyne); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz):? 169.3 (CO, amide), 147.2 (HC = C-CO), 131.7-123.1 (CH, Ar), 88.1 (HC = C), 76.2 (HC = C), 62.3 (C, Trt), 47.1 (CH2-CO-N).

Le composé 42 (0.238 g, 0.5 mmol, 1.0 équiv.) est mis en solution dans 2 mL d'un mélange DMSO/eau (9/1). La L-proline (11.5 mg, 0.1 mmol, 0.2 équiv.), Na2CO3 (63.6 mg, 0.6 mmol, 1.2 équiv.), le bromure de benzyle (59.4 p.L, 0.5 mmol, 1.0 équiv.), l'ascorbate de sodium (100 pL de solution aqueuse molaire, 0.2 équiv.), CuSO4,5H20 (100 !al., d'une solution aqueuse molaire, 0.2 équiv.) et l'azoture de sodium (39.0 mg, 0.6 mmol, 1.2 équiv.) sont ajoutés successivement selon la procédure de cycloaddition n°1 pour mener au composé 43 (69 mg, 0.11 mmol, 22%). 1H RIVIN (CDCI3, 250 MHz) : 8 8.48 (s, 1H, NH amide), 8.32 (d, J = 8.2, 1H, NH amide), 8.10 (s, 1H, CH triazole), 7.30 (m, 22H, Trt + 2 CH Ar + Ph), 6.82 (t, J = 7.4, 2H, CH Ar), 5.55 (s, 2H, CH2-Ph), 3.91 (d, J = 8.2, 2H, CH2 Gly) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 8 164.9 (CO, amide), 152.0 (C=C-00), 143.4 (C Arom, Trt), 141.4 (C=C-CO), 137.6 (C-C-00), 129.6 - 119.4 (CH, Ar), 59.0 (C, Trt), 53.5 (CH2, Bn), 43.3 (CH2-CO-N). Le composé 43 est déprotégé par un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) durant 2h à température ambiante. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le comosé brut obtenu est repris dans 5 mL d'un mélange eaulACN (4/1) et purifié par RP-HPLC semipréparative (tR = 23.9 min) pour conduire au composé 12 (4.7 mg). RP-HPLC analytique : tR = 23.0 min, pureté = 98%; 1H RMN (CDC13, 250 MHz) : 8 8.24 (s, 1H, NH-CO), 8.03 (d, J = 8.5 Hz, 1H, NH-CO), 7.88 (s, 1H, CH-N-N=N), 7.25 (m, 7H, Ar Bn + Ar), 6.78 (m, 2H, 20 Ar), 5.50 (s, 2H, CH2Ph), 3.41 (s, 2H, CH2-CO-N) ; 13C RMN (CDCI3, 62.5 MHz) : 6 164.9 (CH2-CO), 162.1 (C=C-CO), 146.7 (C-NH, Ph), 141.1 (C=C-00), 130.8, 129.2, 127.1 (CH, Ar), 121.9 (C=C-CO), 52.3 (CH2-Ph),43.0 (CH2-00) ; MALDI/TOF : m/z --- 368.4 (Mle, 100%). 25 III C- Synthèse de deux agents chélatants de référence Les deux références 13 et 14 ont été synthétisées grâce à une synthèse convergente en phase solide sur résine 4-méthoxytrityl cystéamine par un double couplage peptidique (Schéma 15). 46 o oy,,)-1.1 NH NNB. I d a 44 NHz NNFMOC Schéma 15 : Synthèse des agents chélatants références 13 (N2S2) et 14 (N3S) sur phase solide : (a) FmocGlyOH, DCC, rt, 3h ; (b) 1) DMF/Pipéridine (4/1), 2) BocGlyOH, DCC, DIPEA, NMP, rt, 24h ; (e) 1) DMF/Pipéridine (4/1), 2) 15, DCC, DIPEA, NMP, rt, 24h ; (d) TFA/TIPS/H20 (95/2.5/2.5), rt, 2x30 min. La résine méthoxytrityle cystéamine (1.0 g, 0.7 mmol.g-1, 0.7 mmol) est conditionnée dans le DCM (3 x 1 min), puis le DMF (3 x 1 min). La Fmoc-Gly-OH (2.08 g, 7.0 mmol, 10.0 équiv.), la DIPEA (1.2 mL, 7.0 mmol, 10.0 équiv.), puis le DCC (1.45 g, 7.0 mmol, 10.0 équiv.) sont ajoutés successivement dans 20 mL de DMF et l'ensemble est agité durant 3h à température ambiante. La réaction est répétée une seconde fois pour assurer un couplage quantitatif (mêmes quantités de réactifs). Le test Kaiser est alors négatif. Les réactifs sont éliminés par filtration et la résine est lavée par le DMF (3 x 1 min), le DCM (3 x 1 min) puis le DMF (3 x 1 min). La résine est ensuite déprotégée par une solution de pipéridine dans la DMF (20%, 3 x 5 min). Le test Kaiser est alors positif. Après des lavages successifs par le DMF (3 x 1 min), le DCM (3 x 1 min), et la NMP (3 x 1 min), la Boc-Gly-OH (1.23 g, 7.0 mmol, 10.0 équiv.) en solution dans 20 mL de NMP puis la DIPEA (1.2 mL, 7.0 mmol, 10.0 équiv.) et le DCC (1.45 g, 7.0 mmol, 10.0 équiv.) sont successivement ajouté. L'ensemble est agité durant une nuit à température ambiante. La résine est alors lavée par la NMP (3 x 1 min) et le DCM (3 x 1 min). Le test Kaiser est alors négatif. La résine est traitée à deux reprises par un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) durant 30 min. Les solutions sont regroupées et le solvant est évaporé sous pression réduite. Le produit brut ainsi obtenu est alors repris dans 5 mL d'un mélange eau/ACN (4/1) et purifié par RP-HPLC semi-préparative (tg = 11.5 min) pour mener au composé 14 (9.4 mg). RP-HPLC analytique tR = 7.1 min, pureté = 97%) ; 'H RMN (CDCI3, 250 MHz) : 8 4.33 (d, J = 6.8, N-CH2-CO), 4.01 (s, 2H, NH2-CH2-00), 3.29 (m, 2H, CH2-N), 2.92 (s, 2H, CH2-S) 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : 6 171.7, 169.4 (CO, amide), 44.2 (N-CH2-CO-N), 43.4 (S-CH2-CO-N), 41.2 (N-CH2-CH2-S), 26.2 (N-CH2- CH2-S). ; ES/mode positif : rn/z = 191.9 (MH+, 100%), 213.9 (MNa+, 24.5%), 229.9 (MK+, 7.1%). Compound 42 (0.238 g, 0.5 mmol, 1.0 equiv.) Is dissolved in 2 ml of a DMSO / water (9/1) mixture. L-proline (11.5 mg, 0.1 mmol, 0.2 equiv), Na2CO3 (63.6 mg, 0.6 mmol, 1.2 equiv), benzyl bromide (59.4 μL, 0.5 mmol, 1.0 equiv), sodium ascorbate (100 μl of molar aqueous solution, 0.2 equiv), CuSO 4 · 5H 2 O (100 μl of a molar aqueous solution, 0.2 equiv) and sodium azide (39.0 mg, 0.6 mmol, 1.2 equiv) are added successively according to the cycloaddition procedure No. 1 to lead to the compound 43 (69 mg, 0.11 mmol, 22%). 1H RIVIN (CDCl3, 250 MHz): 8.48 (s, 1H, NH amide), 8.32 (d, J = 8.2, 1H, NH amide), 8.10 (s, 1H, CH triazole), 7.30 (m, 22H, Trt + 2 CH Ar + Ph), 6.82 (t, J = 7.4, 2H, CH Ar), 5.55 (s, 2H, CH2-Ph), 3.91 (d, J = 8.2, 2H, CH2 Gly); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz):? 164.9 (CO, amide), 152.0 (C = C-00), 143.4 (C Arom, Trt), 141.4 (C = C-CO), 137.6 (CC-00), 129.6-119.4 (CH, Ar), 59.0 (C, Trt), 53.5 (CH2, Bn), 43.3 (CH2-CO-N). The compound 43 is deprotected with a TFA / TIPS / water mixture (95 / 2.5 / 2.5) for 2 hours at room temperature. After evaporation of the solvent under reduced pressure, the crude compound obtained is taken up in 5 ml of a mixture eaulACN (4/1) and purified by RP-HPLC semipréparative (tR = 23.9 min) to yield compound 12 (4.7 mg). Analytical RP-HPLC: tR = 23.0 min, purity = 98%; 1H NMR (CDCl3, 250 MHz): 8.24 (s, 1H, NH-CO), 8.03 (d, J = 8.5Hz, 1H, NH-CO), 7.88 (s, 1H, CH-NN = N), 7.25 (m, 7H, Ar Bn + Ar), 6.78 (m, 2H, Ar), 5.50 (s, 2H, CH 2 Ph), 3.41 (s, 2H, CH 2 -CO-N); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 164.9 (CH2-CO), 162.1 (C = C-CO), 146.7 (C-NH, Ph), 141.1 (C = C-00), 130.8, 129.2, 127.1 ( CH, Ar), 121.9 (C = C-CO), 52.3 (CH2-Ph), 43.0 (CH2-C0); MALDI / TOF: m / z --- 368.4 (Mle, 100%). III C-Synthesis of two reference chelating agents The two references 13 and 14 were synthesized by a solid phase convergent synthesis on 4-methoxytrityl cysteamine resin by a double peptide coupling (Scheme 15). 46, where n = 1.1 NH NNB. Figure 15: Synthesis of solid state reference 13 (N2S2) and 14 (N3S) chelating agents: (a) FmocGlyOH, DCC, rt, 3h; (b) 1) DMF / piperidine (4/1), 2) BocGlyOH, DCC, DIPEA, NMP, rt, 24h; (e) 1) DMF / Piperidine (4/1), 2) 15, DCC, DIPEA, NMP, rt, 24h; (d) TFA / TIPS / H2O (95 / 2.5 / 2.5), rt, 2x30 min. The methoxytrityl cysteamine resin (1.0 g, 0.7 mmol.g-1, 0.7 mmol) is packaged in DCM (3 x 1 min) and then DMF (3 x 1 min). Fmoc-Gly-OH (2.08 g, 7.0 mmol, 10.0 equiv.), DIPEA (1.2 mL, 7.0 mmol, 10.0 equiv.) And then DCC (1.45 g, 7.0 mmol, 10.0 equiv.) Are added successively to 20 ml of DMF and the whole is stirred for 3h at room temperature. The reaction is repeated a second time to ensure quantitative coupling (same amounts of reagents). The Kaiser test is then negative. The reagents are removed by filtration and the resin is washed with DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min) then DMF (3 x 1 min). The resin is then deprotected with a solution of piperidine in DMF (20%, 3 x 5 min). The Kaiser test is then positive. After successive washes with DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min), and NMP (3 x 1 min), Boc-Gly-OH (1.23 g, 7.0 mmol, 10.0 equiv.) in solution in 20 mL of NMP then DIPEA (1.2 mL, 7.0 mmol, 10.0 equiv) and DCC (1.45 g, 7.0 mmol, 10.0 equiv) are successively added. The whole is stirred overnight at room temperature. The resin is then washed with NMP (3 x 1 min) and DCM (3 x 1 min). The Kaiser test is then negative. The resin is treated twice with TFA / TIPS / water (95 / 2.5 / 2.5) for 30 minutes. The solutions are combined and the solvent is evaporated under reduced pressure. The crude product thus obtained is then taken up in 5 ml of a water / ACN mixture (4/1) and purified by semi-preparative RP-HPLC (tg = 11.5 min) to give compound 14 (9.4 mg). Analytical RP-HPLC tR = 7.1 min, purity = 97%); 1 H NMR (CDCl3, 250 MHz): 4.33 (d, J = 6.8, N-CH2-CO), 4.01 (s, 2H, NH2-CH2-C0), 3.29 (m, 2H, CH2-N), 2.92 (s, 2H, CH 2 -S) 13 C NMR (CDCl 3, 62.5 MHz): 171.7, 169.4 (CO, amide), 44.2 (N-CH 2 -CO-N), 43.4 (S-CH 2 -CO-N) , 41.2 (N-CH 2 -CH 2 -S), 26.2 (N-CH 2 -CH 2 -S). ; ES / positive mode: rn / z = 191.9 (MH +, 100%), 213.9 (MNa +, 24.5%), 229.9 (MK +, 7.1%).

La résine méthoxytrityle cystéamine (1.0 g, 0.7 mmol.g-1, 0.7 mmol) est conditionnée dans le DCM (3 x 1 min), puis le DMF (3 x 1 min). La Fmoc-Gly-OH (2.08 g, 7.0 mmol, 10.0 équiv.), la DIPEA (1.2 mL, 7.0 mmol, 10.0 équiv.), puis le DCC (1.45 g, 7.0 mmol, 10.0 équiv.) sont ajoutés successivement dans 20 mL de DMF et l'ensemble est agité durant 3h à température ambiante. La réaction est répétée une seconde fois pour assurer un couplage quantitatif (mêmes quantités de réactifs). Le test Kaiser est alors négatif. Les réactifs sont éliminés par filtration et la résine est lavée par le DMF (3 x 1 min), le DCM (3 x 1 min) puis le DMF (3 x 1 min). La résine est ensuite déprotégée par une solution de pipéridine dans la DMF (20%, 3 x 5 min). Le test Kaiser est alors positif. Après des lavages successifs par le DMF (3 x 1 min), le DCM (3 x 1 min), et le DMF (3 x 1 min), le composé 52 (2.08 g, 7.0 mmol, 10.0 équiv.) dans 15 mL de DMF, la DIPEA (1.2 mL, 7.0 mmol, 10.0 équiv.) et le DCC (1.45 g, 7.0 mmol, 10.0 équiv.) sont successivement ajoutés et l'ensemble est agité durant une nuit à température ambiante. Les réactifs sont éliminés par filtration et la résine est lavée par le DMF (3 x 1 min) et le DCM (3 x 1 min). Le test Kaiser est alors négatif. La résine est alors traitée par un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5), les filtrats sont regroupés et le solvant est évaporé sous pression réduite pour conduire à un produit brut qui est repris dans 5 mL d'un mélange eau/ACN (4/1) et purifié par RP-HPLC semi-préparative (tR = 11.5 min) pour conduire au composé 13 (12.0 mg). RP-HPLC analytique : tR = 11.5 min, pureté 95% ; 1H RMN (CDC13, 250 MHz) : b 4.38 (s, 2H, N-CH2-CO), 3.88 (t, J = 7.0, 2H, CH2-N), 3.80 (s, 2H, S-CH2-00), 3.14 (t, J = 7.0, CH2-S) ; MALDI/TOF : m/z = 209.2 (MH+, 100%) ; 13C RMN (CDC13, 62.5 MHz) : l 172.4, 170.1 (2 x CO, amide), 43.4 (N-CH2-CO-N), 41.8 (N-CH2-C112-S), 27.9 (S-CH2-CO-N), 24.0 (N-CH2-CH2-S). Les caractéristiques des composés synthétisés sont récapitulées dans le Tableau II ci- après :30 Tableau II : Composés Fonction caractéristique HPLC analytique (tR en min) Pureté HPLC MS (MH+) observé) 1 SH 14,6 99% 319,9 2 NH2 17,3 99% 303,2 3 NHAc 14,4 93% 345,2 4 Phénol 19,4 93% 338,2 COOH 14,3 97% 304,1 6 SH 14,1 97% 306,2 7 Phénol 19,8 93% 338,2 8 COOH 15,7 98% 304,2 9 SH 19 94% 306,4 Phénol 18,1 96% 352,2 11 COOH 19,1 100% 318,3 12 Thiophénol 23 98% 368,4 13 N2 S2 (référence) 11,3 97% 191,9 14 N3S (référence) 6,9 95% 209,2 20 III/ SYNTHESES DES RADIOTRACEURS DE FORMULE (III) L'agent chélatant 1 précédemment préparé a été utilisé comme base de départ pour la réalisation de traceurs technétiés pour l'imagerie médicale utilisable aussi bien pour des traceurs BFCA que pour des traceurs ciblants intégrés (Te-essentiels). 25 Les traceurs technétiés issus des composés de référence 13 et 14 ont également été étudiés comparativement. III/ A- Synthèse de radiotraceurs technétiés 30 III/ A- 1. Préparation des radiotraceurs 99mTe-1 (TriaS-99"Tc), 99'"Tc-1 3 et 99InTe-1 4 Dans un tube Eppendorf®, sont ajoutés dans cet ordre : 20 pL de l'agent chélatant à 1 mg/mL (20 ;_ig, 62.6 nmol), 80 lut d'eau mQ, 35 piL de SnC12 à 1 mg/mL préparée 5 1015 extemporanément (35 itg, 184.2 nmol, 3.0 équiv.), 7011.1_, de soude 0.1M, et 75 µL de solution de Na99mTcO4 fraichement éluée du générateur. Après 5 minutes d'incubation à température ambiante, la solution est neutralisée par ajout de 7.1 pt de solution de HC1 1M et analysée par RP-HPLC analytique (gradient : 0-100%B en 30 min, A = H2O + 0.1% TFA, B = ACN + % TFA). III/ A- 2. Préparation et caractérisation du radiotraceur 99mTc-1 (TriaS-99mTc) La solution de Na99g Te04 est dosée par UV : E = 6220 114-1.cm'1 à 245 nm. Le ligand TriaS (5 mg, 15.6 p,mol) est dissous dans 25 mL d'eau. SnC12 (46.0 pmol, 3.0 équiv., 8.75 mL d'une solution aqueuse à 0.1 mg/mL), la soude (17.5 mL de solution aqueuse molaire) puis Na99gTc04 (2.1 mL d'une solution à 7.5 mM) sont ajoutés et le mélange est agité à température ambiante pendant 5 minutes. On observe une légère coloration jaune. Après purification par RP-HPLC semi-préparative (tR = 19.8 min), et lyophilisation, le complexe Trias-99gTc est obtenu. 1.9 mg (4.4 pmol, 28.2%). 1H RMN (CDCI3, 250 MHz) : S 7.72 (s, 1H, CH-N-N=N), 7.49 (m, 5H, Ph), 5.78 (dd, J = 26 Hz, J' = 14 Hz, 2H), 5.35 (d, J - 18 Hz, 2H), 4.75 (m, 3H), 4.10 (dd, J = 50 Hz, J' = 17 Hz, 1H).; 13C RMN (CDCI3, 250 MHz) : 174.6 (CH2-C=C), 135.9 - 128.9 (CH Ai- + CH2-C=C), 62.1 (C1-12, Bn), 50.8 (N-CH2-CO), 47.4 (CH2-C=C), 25.1 (8-CH2-00) ; ES/MS (mode positif) : m/z = 431.9 (MH+, 100%), 20 453.9 (MNe, 7.2%), 469.9 (MIC, 1.8%). III/ B- Synthèse de radiotraceurs rhéniés Une solution de chorure d'étain (63 mg, 1.05 équiv.) dans HCl 0.05 M (1.5 mL) 25 soigneusement dégazé est ajoutée sous argon à une suspension de perrhénate de sodium (92 mg, 0.318 mmol) et de gluconate de sodium (8503 mg, 8.8 équiv.) dans de l'eau soigneusement dégazée (4.8 mL). La solution (concentration finale théorique en oxorhénium 50 mmol) est agitée 1 heure à température ambiante sous argon (changement de couleur d'incolore à bleu de prusse). La solution de gluconate de rhénium obtenue doit être exempte 30 de tout précipité noir pour être utilisée. Le ligand (50 pimol) en solution dans du méthanol soigneusement dégazé (100-500 pl) est ensuite traité par la solution de gluconate de sodium (1 mL, 1.0 équiv) sous argon pendant 15 min à température ambiante. Le pH est ajusté à 10 par ajout de triéthylamine et le mélange est agité pendant 1 heure à température ambiante sous argon. Le précipité vert formé est alors isolé par centrifugation puis purifié par trois cycles successifs de lavage au méthanol et centrifugation. Le produit est alors séché sous vide et conservé à -18 °C. The methoxytrityl cysteamine resin (1.0 g, 0.7 mmol.g-1, 0.7 mmol) is packaged in DCM (3 x 1 min) and then DMF (3 x 1 min). Fmoc-Gly-OH (2.08 g, 7.0 mmol, 10.0 equiv.), DIPEA (1.2 mL, 7.0 mmol, 10.0 equiv.) And then DCC (1.45 g, 7.0 mmol, 10.0 equiv.) Are added successively to 20 ml of DMF and the whole is stirred for 3h at room temperature. The reaction is repeated a second time to ensure quantitative coupling (same amounts of reagents). The Kaiser test is then negative. The reagents are removed by filtration and the resin is washed with DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min) then DMF (3 x 1 min). The resin is then deprotected with a solution of piperidine in DMF (20%, 3 x 5 min). The Kaiser test is then positive. After successive washes with DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min), and DMF (3 x 1 min), compound 52 (2.08 g, 7.0 mmol, 10.0 equiv) in 15 mL of DMF, DIPEA (1.2 mL, 7.0 mmol, 10.0 equiv.) and DCC (1.45 g, 7.0 mmol, 10.0 equiv) are successively added and the mixture is stirred overnight at room temperature. The reagents are removed by filtration and the resin is washed with DMF (3 x 1 min) and DCM (3 x 1 min). The Kaiser test is then negative. The resin is then treated with a TFA / TIPS / water (95 / 2.5 / 2.5) mixture, the filtrates are combined and the solvent is evaporated under reduced pressure to yield a crude product which is taken up in 5 ml of a water mixture. / ACN (4/1) and purified by semi-preparative RP-HPLC (tR = 11.5 min) to yield 13 (12.0 mg). Analytical RP-HPLC: tR = 11.5 min, purity 95%; 1H NMR (CDCl3, 250 MHz): b 4.38 (s, 2H, N-CH2-CO), 3.88 (t, J = 7.0, 2H, CH2-N), 3.80 (s, 2H, S-CH2-00) , 3.14 (t, J = 7.0, CH2-S); MALDI / TOF: m / z = 209.2 (MH +, 100%); 13C NMR (CDCl3, 62.5 MHz): 172.4, 170.1 (2 x CO, amide), 43.4 (N-CH2-CO-N), 41.8 (N-CH2-C112-S), 27.9 (S-CH2-CO) -N), 24.0 (N-CH 2 -CH 2 -S). The characteristics of the synthesized compounds are summarized in Table II below: Table II: Compounds Analytical HPLC Characteristic Function (tR in min) HPLC HPLC (MH +) observed) 1 SH 14.6 99% 319.9 2 NH2 17 , 3 99% 303.2 3 NHAc 14.4 93% 345.2 4 Phenol 19.4 93% 338.2 COOH 14.3 97% 304.1 6 HS 14.1 97% 306.2 7 Phenol 19, 8 93% 338.2 8 COOH 15.7 98% 304.2 9 SH 19 94% 306.4 Phenol 18.1 96% 352.2 11 COOH 19.1 100% 318.3 12 Thiophenol 23 98% 368, 4 13 N2 S2 (reference) 11.3 97% 191.9 14 N3S (reference) 6.9 95% 209.2 III / SYNTHESES OF THE FORMULA (III) RADIOTRACTORS The previously prepared chelating agent 1 was used as the basis for the production of technically-based tracers for medical imaging that can be used for both BFCA tracers and for integrated target tracers (Te-essentials). The technically derived tracers from reference compounds 13 and 14 have also been studied comparatively. III / A Synthesis of Technotreated Radiotracers III / A- 1. Preparation of the 99mTe-1 (TriaS-99 "Tc), 99 '" Tc-1 3 and 99InTe-1 4 Radiotracers In an Eppendorf® tube, are added in this order: 20 μl of the chelating agent at 1 mg / ml (20 μg, 62.6 nmol), 80 ml of water mQ, 35 μl of SnC12 at 1 mg / ml prepared extemporaneously (35 μg, 184.2 nmol). , 3.0 equiv.), 7011.1_, 0.1M sodium hydroxide, and 75 μL of Na99mTcO4 solution freshly eluted from the generator. After incubation for 5 minutes at room temperature, the solution is neutralized by adding 7.1 μl of 1M HCl solution and analyzed by analytical RP-HPLC (gradient: 0-100% B in 30 min, A = H2O + 0.1% TFA). , B = ACN +% TFA). III / A- 2. Preparation and characterization of the 99mTc-1 radiotracer (TriaS-99mTc) The Na99g TeO4 solution is determined by UV: E = 6220 114-1.cm'1 at 245 nm. The TriaS ligand (5 mg, 15.6 μ, mol) is dissolved in 25 mL of water. SnC12 (46.0 pmol, 3.0 equiv., 8.75 mL of a 0.1 mg / mL aqueous solution), sodium hydroxide (17.5 mL of molar aqueous solution) and then Na99gTcO4 (2.1 mL of a 7.5 mM solution) are added and the The mixture is stirred at room temperature for 5 minutes. A slight yellow color is observed. After purification by semi-preparative RP-HPLC (tR = 19.8 min), and lyophilization, the Trias-99gTc complex is obtained. 1.9 mg (4.4 pmol, 28.2%). 1H NMR (CDCl3, 250 MHz): δ 7.72 (s, 1H, CH-NN = N), 7.49 (m, 5H, Ph), 5.78 (dd, J = 26Hz, J '= 14Hz, 2H), 5.35 (d, J = 18Hz, 2H), 4.75 (m, 3H), 4.10 (dd, J = 50Hz, J = 17Hz, 1H); 13 C NMR (CDCl3, 250 MHz): 174.6 (CH2-C = C), 135.9 - 128.9 (CH3- + CH2-C = C), 62.1 (C1-12, Bn), 50.8 (N-CH2-CO) , 47.4 (CH 2 -C = C), 25.1 (8-CH 2 -0); ES / MS (positive mode): m / z = 431.9 (MH +, 100%), 453.9 (Mne, 7.2%), 469.9 (MIC, 1.8%). III / B- Rhenic Radiotracer Synthesis A solution of tin choride (63 mg, 1.05 equiv.) In carefully degassed 0.05 M HCl (1.5 mL) was added under argon to a suspension of sodium perrhenate (92 mg, 0.318). mmol) and sodium gluconate (8503 mg, 8.8 equiv.) in carefully degassed water (4.8 mL). The solution (theoretical final concentration of oxorhenium 50 mmol) is stirred for 1 hour at room temperature under argon (color change from colorless to prussian blue). The resulting rhenium gluconate solution should be free of any black precipitates for use. The ligand (50 pimol) dissolved in carefully degassed methanol (100-500 μl) is then treated with sodium gluconate solution (1 mL, 1.0 equiv) under argon for 15 min at room temperature. The pH is adjusted to 10 by adding triethylamine and the mixture is stirred for 1 hour at room temperature under argon. The green precipitate formed is then isolated by centrifugation and then purified by three successive cycles of washing with methanol and centrifugation. The product is then dried under vacuum and stored at -18 ° C.

IV/ ETUDE IN VITRO DES RADIOTRACEURS TECHNÉTIÉS DE FORMULE (III) Le sang utilisé a été prélevé sur des souris Balb-C femelles de 20 à 25 g et utilisé dans l'heure. Le plasma utilisé a été obtenu à partir de prélèvements sanguins de souris BalbC femelles de 20 à 25g. Ces échantillons sont d'abord centrifugés pendant 15 minutes à 1600 tr.min et le surnageant est à son tour centrifugé pendant 15 min à 1500 tr.rnin-1. Le plasma ainsi obtenu est conservé à -20°C pour une utilisation sous 3 jours ou -80°C dans une limite de 1 mois. IV / IN VITRO STUDY OF THE TECHNICATED RADIOTRACTERES OF FORMULA (III) The blood used was taken from female Balb-C mice of 20 to 25 g and used within one hour. The plasma used was obtained from blood samples of female BalbC mice from 20 to 25 g. These samples are first centrifuged for 15 minutes at 1600 rpm and the supernatant is in turn centrifuged for 15 min at 1500 rpm. The plasma thus obtained is stored at -20 ° C. for use within 3 days or -80 ° C. within a limit of 1 month.

IV/ A- Etude cinétique Le plasma est préalablement placé à 37°C. A t = 0 min, une solution test est réalisée en ajoutant 50 tL de solution de complexe préparée d'après le protocole décrit ci-dessus (4.92 MBq dans le cas de TriaS-99mTc (99mTc-1) à 450 p.L de plasma. Le mélange est homogénéisé et un premier échantillon de 50 j.t.L est prélevé (t = 0 min). Cet échantillon est versé dans 150 Ill, de solution de TFA 10%. On observe la précipitation des protéines du plasma. Après centrifugation durant 5 minutes, le surnageant est séparé du précipité et l'activité de chacun d'eux est mesurée. 50 lit, de surnageant sont dilués dans 150 [IL d'eau et injectés en radioRP-HPLC analytique (gradient : 0-100%B en 30 min, A = H20 + 0.1% TFA, B = ACN + 0.1 % TFA). La même procédure est répétée pour t = 30 min, 1h, 2h, 4h et 6h et l'aire du pic correspondant au complexe est évaluée. Le rapport de cette aire avec celle mesurée à t + 0 min permet d'obtenir les courbes de stabilité. Cette étude est réalisée en duplicate. Afin de s'assurer qu'aucune dissociation des complexes n'a lieu, une étude de stabilité 30 dans les conditions de précipitation en l'absence de plasma (remplacé par un volume équivalent d'eau) a été réalisée. Les radiochromatogrammes obtenus avec le composé TriaS99mTc sont représentés sur la Figure 1. IV / A- Kinetic study The plasma is previously placed at 37 ° C. At t = 0 min, a test solution is made by adding 50 μl of complex solution prepared according to the protocol described above (4.92 MBq in the case of TriaS-99mTc (99mTc-1) to 450 μl of plasma. The mixture is homogenized and a first sample of 50 μL is taken (t = 0 min) This sample is poured into 150 μl of 10% TFA solution The precipitation of the proteins from the plasma is observed After centrifugation for 5 minutes, the supernatant is separated from the precipitate and the activity of each of them is measured, 50 μl of supernatant are diluted in 150 μl of water and injected into radioRP-analytical HPLC (gradient: 0-100% B in 30 min , A = H20 + 0.1% TFA, B = ACN + 0.1% TFA.) The same procedure is repeated for t = 30 min, 1h, 2h, 4h and 6h and the area of the peak corresponding to the complex is evaluated. of this area with that measured at t + 0 min allows the stability curves to be obtained.This study is done in duplicate. To ensure that no dissociation of the complexes takes place, a stability study under precipitation conditions in the absence of plasma (replaced by an equivalent volume of water) was carried out. The radiochromatograms obtained with the compound TriaS99mTc are shown in FIG.

On constate qu'après 2h, les échantillons prélevés ne contiennent aucun produit de dégradation, le complexe est toujours présent et intact (Figure 1). L'étude cinétique a ensuite été réalisée en utilisant du plasma murin frais de souris Balb-C, obtenu par centrifugation de prélèvements sanguins. Une solution fraîchement préparée de complexe (nanomolaire) est ajoutée au plasma (complexe/plasma 1/9) et incubée à 37°C pendant 6h. A intervalles de temps réguliers, un échantillon de la solution est prélevé et les protéines sont séparées par précipitation et centrifugation. L'échantillon est alors analysé par radio-HPLC. La Figure 2 montre l'allure des chromatogrammes obtenus, ici dans le cas du TriaS-"mTc en tenant compte de la décroissance du technétium entre les deux injections. Les courbes reflétant l'évolution en fonction du temps d'incubation à 37°C du pourcentage de complexe résiduel dans les échantillons prélevés est également représenté à la Figure 3. Les complexes étudiés présentent une stabilité supérieure à 60% après 6h d'incubation 15 en plasma murin à 37°C. Pour le composé TriaS-99mTc, on observe plus de 90% de complexe résiduel après 6h d'incubation. Compte tenu des difficultés techniques inhérentes à la mesure effectuée à t = 0 min et de l'allure de pallier observée par la suite, on peut penser que cette variation soudaine dans la première demi-heure d'incubation est le résultat d'un artefact lié à l'expérience. Cette 20 analyse est d'autant plus légitime que les radiochromatogrammes obtenus lors de l'étude cinétique n'indiquent aucune formation de produit de dégradation, toute l'activité mesurée dans le surnageant correspondant au composé TriaS99mTe. IV/ B- Effet de la concentration en TriaS99mTc sur le pallier cinétique 25 Le plasma est préalablement conditionné à 37°C. Une gamme d'échantillons de plasma dans laquelle la concentration en complexe varie est préparée en mélangeant dans des tubes Eppendorf « low bind » respectivement 30pL, 201.1L, 1011E, 5p1, et 2pL de solution de complexe préparée dans les conditions décrites au Ille.1 à 70pL, 801..LL, 90pL, 95pL, et 98g, 30 de plasma. It is found that after 2 hours, the samples taken contain no degradation products, the complex is always present and intact (Figure 1). The kinetic study was then performed using murine murine plasma Balb-C fresh, obtained by centrifugation of blood samples. A freshly prepared complex solution (nanomolar) is added to the plasma (1/9 complex / plasma) and incubated at 37 ° C for 6h. At regular time intervals, a sample of the solution is taken and the proteins are separated by precipitation and centrifugation. The sample is then analyzed by radio-HPLC. Figure 2 shows the shape of the chromatograms obtained, here in the case of TriaS-mTc, taking into account the decay of technetium between the two injections, the curves reflecting the evolution as a function of the incubation time at 37 ° C. the percentage of residual complex in the samples taken is also shown in FIG. 3. The complexes studied have a stability greater than 60% after 6 hours' incubation in murine plasma at 37 ° C. For the compound TriaS-99mTc, it is observed more than 90% of residual complex after 6h of incubation Given the technical difficulties inherent to the measurement carried out at t = 0 min and the pace of palliation observed later, we can think that this sudden variation in the first half an hour of incubation is the result of an artefact related to the experiment.This analysis is all the more legitimate as the radiochromatograms obtained during the kinetic study indicate no formation of degradation product, all the activity measured in the supernatant corresponding to the compound TriaS99mTe. IV / B- Effect of the concentration of TriaS99mTc on the kinetic plateau 25 The plasma is pre-conditioned at 37 ° C. A range of plasma samples in which the complex concentration varies is prepared by mixing in Eppendorf tubes "low bind" respectively 30pL, 201.1L, 1011E, 5p1, and 2pL of complex solution prepared under the conditions described in Ille. 1 to 70 μL, 80 μL, 90 μL, 95 μL, and 98 μg of plasma.

Tableau III : Plasma (g) Solution de complexe (i.IL) Facteur de dilution 70 30 0.3 80 20 0.2 90 10 0.1 95 5 0.05 98 2 0.02 A t = 0 min, 50 1.11_, de mélange sont prélevés et versés dans 150 uL de solution de TFA (10%). Les protéines du plasma précipitent. Après 5 minutes de centrifugation, surnageant et précipité sont séparés et leurs activités sont mesurées. 50 III, de surnageant sont alors dilués dans 150 µL d'eau et injectés en RP-HPLC analytique (gradient 0 - 100`)/0B en 30 min, A = H2O + 0.1% TFA, B = ACN + 0.1 % TFA). La même procédure est répétée à t = 2h pour chacun des échantillons. Pour chaque échantillon, le pourcentage résiduel de complexe après 2h en plasma murin à 37°C est évalué par le rapport des aires des pics complexe à t = 0 min et t = 2h. Cette étude est réalisée en duplicate. La Figure 4 montre l'évolution du pourcentage résiduel de complexe TriaS-99mTe après 2h d'incubation en plasma murin à 37°C. On constate que ce pourcentage résiduel n'évolue pas et reste égal à la valeur obtenue dans le cas de l'étude cinétique (10% de solution de complexe dans le plasma) malgré les dilutions successives qui correspondent à une augmentation du ratio [Protéines plasmatiques] / [Complexe]. V/ ETUDE IN VIVO DU RADIOTRACEUR TriaS-991nTe DE FORMULE (III) L'évaluation du complexe TriaS-99mTc a été complétée par une étude in vivo chez la souris saine dans le but d'évaluer le comportement du traceur et sa biodistribution. En effet, les études précédemment réalisées sur des complexes du coeur oxotechnétiums comportant un noyau pyridyle à la place du triazole ont révélé une rétention élevée du complexe dans les tissus, et une élimination lente du sang. En outre ces complexes étaient éliminés essentiellement par voie hépatobilliaire. Dans le cas de ligands à noyau imidazoyle, cette rétention dans les tissus s'est avérée être bien moindre et le complexe était éliminé beaucoup plus rapidement du sang (Rajagopalan, R. et al., Bioconjugate Chemistry, 1997. 8(3) : p. 407415). Les études animales ont été réalisées sur des souris BalbC femelles de 20 à 25g dans le respect du Décret sur l'Expérimentation Animale (Décret 87-848, 19 octobre 1987). Les manipulations ont été réalisées par une personne habilitée pour l'expérimentation animale. Les solutions de complexes sont injectées par voie intra veineuse au niveau de la veine caudale de la souris. Ces solutions sont à pH physiologique sans solvant organique. Pour les analyses de biodistribution, les souris sont anesthésiées au bout de 2h à l'isoflurane 2% puis sacrifiées par exsanguination. Les liquides biologiques sang/urine sont recueillis puis l'ensemble des organes sont prélevés. Pour l'acquisition au f3-imager, la souris a été anesthésiée à l'isoflurane 2% puis sacrifiée par congélation à -80°C. Des coupes « full body » sont réalisées au microtome et visualisées au [3-imager (Biospace I3-imager 2000) en utilisant l'émission minoritaire j3- du 99mTc (E = 2 keV) permettant une meilleure résolution que l'imagerie y. Table III: Plasma (g) Complex solution (i.IL) Dilution factor 70 30 0.3 80 20 0.2 90 10 0.1 95 5 0.05 98 2 0.02 At t = 0 min, 50 1.11_, of mixture are taken and poured into 150 μL of TFA solution (10%). The proteins of the plasma precipitate. After 5 minutes of centrifugation, supernatant and precipitate are separated and their activities are measured. 50 μl of supernatant are then diluted in 150 μl of water and injected into analytical RP-HPLC (gradient 0-100 μl / 0B in 30 min, A = H2O + 0.1% TFA, B = ACN + 0.1% TFA). . The same procedure is repeated at t = 2h for each sample. For each sample, the residual percentage of complex after 2 hours in murine plasma at 37 ° C is evaluated by the ratio of complex peak areas at t = 0 min and t = 2h. This study is done in duplicate. Figure 4 shows the evolution of the residual percentage of TriaS-99mTe complex after 2 hours incubation in murine plasma at 37 ° C. It is found that this residual percentage does not change and remains equal to the value obtained in the case of the kinetic study (10% of complex solution in the plasma) despite the successive dilutions corresponding to an increase in the ratio [Plasma proteins ] / [Complex]. V / IN VIVO STUDY OF THE TRIA-991nTe RADIOTRACER OF FORMULA (III) The evaluation of the TriaS-99mTc complex was completed by an in vivo study in healthy mice in order to evaluate the behavior of the tracer and its biodistribution. Indeed, previously conducted studies on oxotechnetium core complexes with a pyridyl ring in place of triazole revealed high retention of the complex in the tissues, and slow elimination of blood. In addition, these complexes were essentially eliminated by the hepatobillary route. In the case of imidazoyl ligands, this tissue retention was found to be much lower and the complex was eliminated much more rapidly from the blood (Rajagopalan, R. et al., Bioconjugate Chemistry, 1997, 8 (3): 407415). Animal studies were carried out on female BalbC mice from 20 to 25 g in accordance with the Decree on Animal Experimentation (Decree 87-848, 19 October 1987). The manipulations were carried out by a person authorized for animal experimentation. Complex solutions are injected intravenously into the caudal vein of the mouse. These solutions are at physiological pH without organic solvent. For the biodistribution analyzes, the mice are anesthetized after 2 hours with 2% isoflurane and then sacrificed by exsanguination. Blood / urine biological fluids are collected and all organs are removed. For f3-imager acquisition, the mouse was anesthetized with 2% isoflurane and then sacrificed by freezing at -80 ° C. "Full body" sections are made by microtome and visualized with [3-imager (Biospace I3-imager 2000) using the minority emission j3- 99mTc (E = 2 keV) allowing a better resolution than the y imaging.

VI A- Biodistribution L'étude de biodistribution du complexe TriaS-99mTc a été réalisée sur un lot de 3 souris Balb-C femelles, lignée régulièrement utilisée lors d'études en modèle tumoral (tumeur xénogreffée sur des souris athymiques Balb-C Nu/Nu). Afin d'évaluer précisément l'influence de la complexation par le ligand TriaS par rapport à du technétium libre réduit, la même étude a été réalisée après injection de 99mTc-réduit (99mTe03+) dans les mêmes conditions en l'absence de ligand. Deux heures après injection par voie intraveineuse caudale, les animaux sont sacrifiés par exsanguination et les différents organes sont prélevés, pesés et la radioactivité associée est mesurée par comptage y. La Figure 5 représente la biodistribution observée dans chaque cas (Trias 99mTcet 99mTc-réduit) deux heures après injection. On constate que le technétium libre (réduit en l'absence du ligand TriaS) s'accumule essentiellement dans le foie (60%) et l'estomac (5%), ce qui suggère une métabolisation hépatique de 99mTc03-' et de ses éventuels produits de réoxydation. En revanche, dans le cas de Trias 99mTc, l'activité mesurée dans le foie ne correspond qu'à environ 2% de l'activité injectée. L'essentiel de la dose injectée est récupérée dans les urines et les reins (80% au total). Le complexe semble donc être éliminé essentiellement par voie rénale et ne pas se répartir significativement dans les autres organes fixant habituellement les composés technétiés. Ce résultat est très intéressant car dans de nombreux cas, une part importante de l'activité est observée, quelques heures après injection, dans les organes du tractus gastrointestinal, réduisant ainsi le contraste en imagerie et rendant même difficile voire impossible la visualisation d'une cible située dans la cavité abdominale. Il convient également de comparer ces résultats à ceux observés dans le cas de complexes mettant en jeu des ligands à noyau pyridyles et imidazoyle. Le Tableau IV présente une comparaison entre les biodistributions de TriaS-99mTe et des complexes de ces deux types (comparaison des biodistributions à 2h de complexes à ligands triazoyle, pyridyle, et imidazoyle en pourcentage de la dose injectée). Tableau IV : HO HOOC e 0 N O~N\ /N Tc / 0Il S S/13 \N Organe TriaS-99mTc A : Pyr-OH A' : Pyr-COOH B : lmi-OH Sang 1.2 17.5 20.5 0.3 Foie 2.7 25.5 10.1 5.0 Reins 4.5 7.9 8.5 0.3 Rate 0.3 0.5 NA NA Muscle 0.0 8.6 10.2 0.3 Urine 74.4 24.5(*) 35.2(*) 44.4(*) Feces NA 16.9(*) 51.5(*) 46.3(*) Total excreté 74.4 41.4(*) 86.8(*) 90.6(*) Les valeurs d'excrétions marquées par .(*) correspondent à une mesure effectuée 24h après injection On constate que deux heures après injection, les complexes à motifs pyridyles A et A' sont très présents dans le sang, le foie et les muscles. A l'inverse, dans les cas de complexes à ligands imidazoyles B, aucune accumulation dans ces organes n'est observée : les complexes à ligands pyridyles ont donc une élimination lente. Ces complexes sont donc moins intéressants car après deux heures, ils conduiront à une visualisation moins efficace de la cible du fait d'un contraste plus faible. Le complexe TriaS-99mTc donne des résultats comparables aux complexes à ligands imidazoles du point de vue de la rétention dans les tissus et les organes du tractus gastrointestinal. Nous pouvons aussi remarquer que les complexes à ligands pyridyle sont éliminés beaucoup moins efficacement de l'organisme que les complexes à ligand imidazole ou triazole (TriaS99mTe) : après 24h, seule 41% de l'activité injectée a été éliminée de l'organisme. Cette valeur monte à 87% lorsqu'une fonction acide carboxylique est ajoutée à sa structure (A'). Cette donnée confirme qu'il sera possible d'améliorer l'élimination des complexes par l'ajout de groupements hydrophiles par exemple. TriaS99mTc se démarque néanmoins de ces analogues puisque près de 75% de l'activité injectée a été éliminée après seulement deux heures. Enfin, dans le cas de TriaS99mTc, le complexe est essentiellement éliminé par voie rénale. Ceci contraste avec les résultats des trois autres complexes présentés pour lesquels 40 à 60 % de l'activité est détectée dans les fèces, indiquant une élimination par la voie hépatobilliaire. TriaS-99mTc apparait donc comme une structure de complexes très intéressante en comparaison à ses analogues pirydyle et imidazoyle car il bénéficie d'une faible accumulation dans les tissus et le sang et d'une élimination rénale rapide. Afin de confirmer cette observation, une 4ème souris ayant reçu le complexe TriaS- 99mTc a été sacrifiée puis congelée afin de réaliser des coupes au microtome. Ces coupes ont ensuite été visualisées après une nuit d'acquisition au (3-imager en utilisant le faible caractère émetteur 13 de 99mTc (E = 2 keV). Le I3-imager est un dispositif permettant de visualiser une émission 13- avec une extrème sensibilité et une résolution largement supérieure à celle d'une y-caméra. L'échantillon à analyser est placé dans une chambre dans laquelle circule un gaz (argon 98%, triéthylamine 2%). Dans la chambre d'analyse, deux grilles peiniettent d'appliquer un fort champ électrique. Les particules 5- émises par l'échantillon ionisent le gaz, produisant une lumière ultraviolette détectée par une caméra CCD qui reconstitue une image (source : biospacelab.com). La Figure 6 à gauche montre l'un des clichés obtenu lors de la visualisation d'une coupe de souris sacrifiée deux heures après injection de TriaS-99mTc. On y distingue très nettement la forme d'un rein plus lumineuse qui contraste avec le reste du corps. Pour cette mesure, la sensibilité choisie était très élevée, pourtant aucune radioactivité résiduelle significative n'est observée en dehors des reins. Ceux-ci sont donc visibles de façon très nette. A titre de comparaison, la Figure 6 à droite montre le cas d'un traceur présentant une forte accumulation dans les organes du tractus gastrointestinal : le contraste est moins bon et une cible située à proximité d'un de ces organes pourrait ne pas être visible. L'élimination rapide du complexe du milieu circulant est donc un résultat très positif. Cette observation confirme les résultats de l'étude de biodistribution : le complexe TriaS-99mTe est donc éliminé très efficacement par voie rénale sans accumulation significative dans d'autres tissus. V/ B- Etude de stabilité V/ B- 1. Analyse des urines Analyse des urines recueillies deux heures après injection : Après avoir montré que le complexe TriaS-99mTe était éliminé chez la souris par voie rénale, il restait à déterminer si ce complexe était excrété intact ou sous une forme métabolisée. Pour cela, la composition des urines recueillies chez la souris 2h après injection de TriaS99mTe a été analysée. Les échantillons d'urine ont été neutralisés et injectés en radio-HPLC analytique (Figure 7). Il s'avère que plus de 60% de la dose recueillie dans les urines correspond au complexe Trias-99mTe excrété intact bien que trois autres pics moins importants correspondant à des composés plus hydrophiles soient observés. La majorité du complexe ne semble donc pas subir une quelconque dégradation métabolique. Le pic à environ 5 min (6% environ de la dose recueillie) peut être attribué au technétium libre réduit. VI A-Biodistribution The biodistribution study of the TriaS-99mTc complex was carried out on a batch of 3 female Balb-C mice, a line regularly used in tumor model studies (xenografted tumor on athymic Balb-C Nude mice). Bare). In order to precisely evaluate the influence of the complexation by the TriaS ligand with respect to reduced free technetium, the same study was carried out after injection of 99mTc-reduced (99mTeO3 +) under the same conditions in the absence of ligand. Two hours after caudal intravenous injection, the animals are sacrificed by exsanguination and the various organs are removed, weighed and the associated radioactivity is measured by counting y. Figure 5 shows the biodistribution observed in each case (99mTcet 99mTcet 99mTc-reduced) two hours after injection. It is found that free technetium (reduced in the absence of TriaS ligand) accumulates mainly in the liver (60%) and the stomach (5%), suggesting a hepatic metabolism of 99mTc03- 'and its possible reoxidation products. On the other hand, in the case of Trias 99mTc, the activity measured in the liver corresponds to only about 2% of the injected activity. Most of the injected dose is recovered in the urine and kidneys (80% in total). The complex thus appears to be essentially eliminated by the renal route and not to be significantly distributed in the other organs usually fixing the technetium compounds. This result is very interesting because in many cases, a significant part of the activity is observed, a few hours after injection, in the organs of the gastrointestinal tract, thus reducing the contrast in imaging and making it even difficult or impossible to visualize a target located in the abdominal cavity. These results should also be compared to those observed for complexes involving pyridyl and imidazoyl ligands. Table IV presents a comparison between the biodistributions of TriaS-99mTe and complexes of these two types (comparison of biodistributions at 2 hours of triazoyl, pyridyl, and imidazoyl ligand complexes as a percentage of the injected dose). Table IV: HO HOOC e 0 NO ~ N / / N Tc / 0Il SS / 13 \ N Organ TriaS-99mTc A: Pyr-OH A ': Pyr-COOH B: lmi-OH Blood 1.2 17.5 20.5 0.3 Liver 2.7 25.5 10.1 5.0 Reins 4.5 7.9 8.5 0.3 Rate 0.3 0.5 NA NA Muscle 0.0 8.6 10.2 0.3 Urine 74.4 24.5 (*) 35.2 (*) 44.4 (*) Feces NA 16.9 (*) 51.5 (*) 46.3 (*) Total excretion 74.4 41.4 (*) ) 86.8 (*) 90.6 (*) The excretion values marked by (*) correspond to a measurement carried out 24 hours after injection It is found that two hours after injection, the complexes with pyridyl units A and A 'are very present in the blood, liver and muscles. On the other hand, in the case of imidazoyl B ligand complexes, no accumulation in these organs is observed: the pyridyl ligand complexes therefore have a slow elimination. These complexes are therefore less interesting because after two hours, they will lead to a less effective visualization of the target due to a lower contrast. The TriaS-99mTc complex gives comparable results to imidazole ligand complexes from the point of view of retention in the tissues and organs of the gastrointestinal tract. We can also note that pyridyl ligand complexes are eliminated much less effectively from the body than imidazole or triazole ligand complexes (TriaS99mTe): after 24 hours, only 41% of injected activity was eliminated from the body. This value rises to 87% when a carboxylic acid function is added to its structure (A '). This data confirms that it will be possible to improve the elimination of the complexes by the addition of hydrophilic groups, for example. However, TriaS99mTc differs from these analogues in that nearly 75% of injected activity was eliminated after only two hours. Finally, in the case of TriaS99mTc, the complex is essentially eliminated by the renal route. This contrasts with the results of the other three complexes presented for which 40 to 60% of the activity is detected in the feces, indicating elimination by the hepatobillary route. TriaS-99mTc therefore appears to be a very interesting complex structure in comparison to its piridyl and imidazoyl analogues as it has low tissue and blood accumulation and fast renal elimination. In order to confirm this observation, a 4th mouse that received the TriaS-99mTc complex was sacrificed and then frozen to make microtome sections. These sections were then visualized after one night of acquisition at (3-imager using the weak transmitter character 13 of 99mTc (E = 2 keV) .The I3-imager is a device making it possible to visualize an emission 13- with an extreme sensitivity and a resolution much higher than that of a y-camera.The sample to be analyzed is placed in a chamber in which a gas circulates (argon 98%, triethylamine 2%) .In the analysis chamber, two grids peiniettent The particles 5 emitted by the sample ionize the gas, producing ultraviolet light detected by a CCD camera that reconstructs an image (source: biospacelab.com) Figure 6 on the left shows the image one of the images obtained during the visualization of a sac of sacrificed mouse two hours after injection of TriaS-99mTc.It clearly distinguishes the shape of a brighter kidney that contrasts with the rest of the body.For this measurement, theselected sensitivity was very high, yet no significant residual radioactivity was observed outside the kidneys. These are therefore clearly visible. By way of comparison, Figure 6 on the right shows the case of a tracer with a strong accumulation in the organs of the gastrointestinal tract: the contrast is worse and a target located near one of these organs might not be visible. . The rapid elimination of the circulating medium complex is therefore a very positive result. This observation confirms the results of the biodistribution study: the TriaS-99mTe complex is therefore eliminated very effectively by the renal route without significant accumulation in other tissues. V / B- Stability study V / B- 1. Urine analysis Analysis of the urine collected two hours after injection: After having shown that the TriaS-99mTe complex was eliminated in the mouse by the renal route, it remained to be determined whether this complex was excreted intact or in a metabolized form. For this, the composition of the urine collected in the mouse 2h after injection of TriaS99mTe was analyzed. Urine samples were neutralized and injected into analytical HPLCLC (Figure 7). It appears that more than 60% of the dose collected in the urine corresponds to the intact Trias-99mTe complex excreted although three other less important peaks corresponding to more hydrophilic compounds are observed. The majority of the complex does not seem to undergo any metabolic degradation. The peak at about 5 min (about 6% of the collected dose) can be attributed to reduced free technetium.

Etude de la stabilité de TriaS-99mTc et TriaS-99(m'g)Tc en urine de souris saine : L'étude est réalisée sur deux souris Balb-C femelles (20 à 25g) de la même lignée que celles utilisées lors du test de biodistribution. TriaS-99mTe est préparé dans les conditions décrites précédemment puis la solution est filtrée sur Sep-Pak Light QMA (Waters). Un volume V = 100 !IL est injecté à chacune des deux souris et celles-ci sont placées dans des cages métaboliques afin de récupérer leurs excrétions durant les deux heures de l'étude. Deux heures après injection, les urines sont prélevées. Un échantillon de 200 µL d'urine est neutralisé par ajout de HCL (1M) puis injecté en RP-HPLC analytique (gradient : 0 - 100')/0 B en 30 min, A = H20 + 0.1% TFA, B ACN + % TFA). En parallèle, une solution de TriaS-99(m+e)Tc est préparée en ajoutant successivement dans un tube Eppendorfe : 20 pL de TriaS à 1 mglmL (20 pg, 62.6 nmol), 80 pL d'eau mQ, 35 pL de SnC12 à 1 mg/mL préparée extemporanément (35 pg, 184.2 nmol, 3.0 équiv.), 70 p,L de soude 0.1M, 75 µL de solution Na99mTc04 fraichement éluée et 8.4 faL Na99gTc04 (1.0 équiv.). De l'urine de souris Balb-C femelle saine (même lignée que celles utilisées précédemment) est placée à 37°C. La solution test est préparée en ajoutant 10 1.1L de solution de complexe à 90 pl, d'urine puis placée à 37°C. Après 2h d'incubation, le mélange est neutralisé par ajout d'une solution de HCl 1M puis dilué dans 100 1..tL d'eau avant d'être injecté en radio-RP-HPLC analytique (gradient : 0 - 100% B en 30 min, A = H20 + 0.1% TFA, B = ACN + % TFA). Cette étude est réalisée en duplicate. L'utilisation d'un mélange 99mTc + 99gTc a permis de visualiser nettement par radio- HPLC les pics correspondants aux produits de métabolisation grâce à 99mTc tout en rendant possible leur caractérisation par MALDI-TOF après décroissance des fractions prélevées. Dans ces conditions, on parle de ligand marqué intégralement, Trias-99mTc étant en concentration namolaire et TriaS-99gTc en concentration micromolaire. La Figure 8 montre le radiochromatogramme obtenu dans ces conditions. Les quatre pics sont toujours présents dans des proportions différentes. Le composé identifié à 17.7 min s'est avéré avoir une masse m/z = 432.1 : il s'agit de TriaS-Te excrété intact. Les masses des deux autres composés ont pu être déterminées : m/z = 534.0 pour le composé observé à 9 min, et deux masses mlz = 713.3 et mlz = 743.3 pour le composé observé à 11.8 min. Study of the stability of TriaS-99mTc and TriaS-99 (μg) Tc in healthy mouse urine: The study is carried out on two female Balb-C mice (20 to 25 g) of the same line as those used during the study. biodistribution test. TriaS-99mTe is prepared under the conditions described above then the solution is filtered on Sep-Pak Light QMA (Waters). A volume V = 100 μl is injected into each of the two mice and these are placed in metabolic cages in order to recover their excretions during the two hours of the study. Two hours after injection, the urine is removed. A sample of 200 μL of urine is neutralized by addition of HCl (1M) and then injected into analytical RP-HPLC (gradient: 0-100 ') / 0 B in 30 min, A = H20 + 0.1% TFA, B ACN + % TFA). In parallel, a solution of TriaS-99 (m + e) Tc is prepared by successively adding in an Eppendorf tube: 20 μl of TriaS at 1 μg / ml (20 μg, 62.6 nmol), 80 μl of water mQ, 35 μl of SnC12 at 1 mg / mL prepared extemporaneously (35 μg, 184.2 nmol, 3.0 equiv), 70 μl 0.1 M sodium hydroxide, 75 μl of freshly eluted Na99mTcO4 solution and 8.4 μL Na99gTcO4 (1.0 equiv.). Balb-C healthy female mouse urine (same line as previously used) is placed at 37 ° C. The test solution is prepared by adding 10 μl of complex solution to 90 μl of urine and then placed at 37 ° C. After 2 hours of incubation, the mixture is neutralized by adding a solution of 1M HCl and then diluted in 100 μl of water before being injected into analytical radio-RP-HPLC (gradient: 0 - 100% B). in 30 min, A = H20 + 0.1% TFA, B = ACN +% TFA). This study is done in duplicate. The use of a 99mTc + 99gTc mixture made it possible to clearly visualize by means of radio-HPLC the peaks corresponding to the metabolization products by means of 99mTc while making it possible to characterize them by MALDI-TOF after decay of the fractions taken. Under these conditions, there is talk of ligand labeled integrally, Trias-99mTc being in the concentration of ncolaire and TriaS-99gTc micromolar concentration. Figure 8 shows the radiochromatogram obtained under these conditions. The four peaks are always present in different proportions. The compound identified at 17.7 min was found to have a mass m / z = 432.1: this is TriaS-Te excreted intact. The masses of the two other compounds could be determined: m / z = 534.0 for the compound observed at 9 min, and two masses mlz = 713.3 and mlz = 743.3 for the compound observed at 11.8 min.

V/ B- 2. Etude de la stabilité de TriaS-99#7e dans le sang de souris saine Le sang de souris Balb-C utilisé est fraichement prélevé (une demi-heure avant utilisation). Un volume de 50 ILtL de solution de complexe est ajouté à 450 pl de sang. Le mélange est homogénéisé et mis à incubation à 37°C. Après 2h d'incubation, le mélange est centrifugé durant 15 minutes à 1600 tr.rnin'i puis le surnageant est prélevé délicatement. Un volume de 50 pt de ce plasma est alors ajouté à 150 1.11., de solution de TFA à 10% afin d'entrainer la précipitation des protéines plasmatiques. Après centrifugation pendant 5 min, le surnageant est prélevé. 50 pi, de surnageant sont dilués dans 150 iL d'eau puis injectés en radio-RP-HPLC analytique (gradient : 0 - 100% B en 30 min, A = H2O + 0.1% TFA, B ACN + % TFA). Après précipitation des protéines plasmatiques, l'échantillon a été analysé par radioHPLC et les radiochromatogrammes de la Figure 9 ont été obtenus. V / B- 2. Study of the stability of TriaS-99 # 7e in healthy mouse blood The Balb-C mouse blood used is freshly collected (half an hour before use). A volume of 50 μl of complex solution is added to 450 μl of blood. The mixture is homogenized and incubated at 37 ° C. After 2 hours of incubation, the mixture is centrifuged for 15 minutes at 1600 rpm and the supernatant is removed gently. A volume of 50 μL of this plasma is then added to 150 μl of 10% TFA solution in order to bring about the precipitation of the plasma proteins. After centrifugation for 5 min, the supernatant is removed. 50 μl of supernatant are diluted in 150 μl of water and then injected into analytical radio-RP-HPLC (gradient: 0-100% B in 30 min, A = H2O + 0.1% TFA, B ACN +% TFA). After precipitation of the plasma proteins, the sample was analyzed by radioHPLC and the radiochromatograms of Figure 9 were obtained.

On observe la formation d'un produit de dégradation ayant un temps de rétention de 1.4 min qui semble correspondre au dernier pic visible dans l'urine excrétée. D'après la Figure 9, la dégradation dans le sang semble très importante, le produit de dégradation étant très largement majoritaire après 2h d'incubation. Cependant, dans cette expérience, l'ensemble du complexe reste au contact du sang durant les deux heures d'incubation, il est donc normal d'observer une dégradation bien supérieure. Cette dégradation dans le sang, pourra être mise à profit dans le cas d'une cible protéique extracellulaire, le traceur non lié à la cible étant dégradé et éliminé par voie rénale. Sans avoir précisément identifié la structure de ce second produit de dégradation, nous avons néanmoins pu en expliquer l'origine, à savoir une dégradation ayant lieu dans le sang. The formation of a degradation product with a retention time of 1.4 min is observed which seems to correspond to the last visible peak in the excreted urine. According to FIG. 9, the degradation in the blood seems very important, the degradation product being very largely in the majority after 2 hours of incubation. However, in this experiment, the whole complex remains in contact with the blood during the two hours of incubation, so it is normal to observe a much higher degradation. This degradation in the blood can be exploited in the case of an extracellular protein target, the tracer unrelated to the target being degraded and eliminated by the renal route. Without having specifically identified the structure of this second degradation product, we have nevertheless been able to explain its origin, namely a degradation taking place in the blood.

D'après les résultats de l'étude cinétique menée dans le plasma, celle-ci n'est pas liée à un composant du plasma mais sans doute à une métabolisation par les érythrocytes. Cependant, la nature exacte du métabolite n'a pu être déterminée. A la lumière de tous ces résultats, et en particulier de l'analyse de la composition des urines recueillies après injection chez la souris saine, il semble que cette dégradation n'ait que peu d'incidence sur l'utilisation de TriaS pour la réalisation de traceurs in vivo. En effet, plus de 60% de l'activité recueillie dans les urines correspond à 99mTe-TriaS intact. En outre, la visualisation au 13-imager d'une coupe de souris après injection du composé montre un excellent rapport signal/bruit, les reins apparaissent très nets par rapport au reste de la coupe où très peu d'activité résiduelle apparait. Ceci montre bien que le ou les complexes de dégradation ne se sont pas accumulés dans un tissu ou au niveau hépatique mais ont été éliminés dans les urines. According to the results of the kinetic study carried out in the plasma, it is not linked to a plasma component but probably to a metabolism by the erythrocytes. However, the exact nature of the metabolite could not be determined. In light of all these results, and in particular the analysis of the composition of the urine collected after injection in the healthy mouse, it seems that this degradation has little effect on the use of TriaS for the realization tracers in vivo. Indeed, more than 60% of the activity collected in the urine corresponds to 99mTe-TriaS intact. In addition, the 13-imager visualization of a mouse section after injection of the compound shows an excellent signal / noise ratio, the kidneys appear very clear compared to the rest of the section where very little residual activity appears. This shows that the degradation complex (s) did not accumulate in tissue or liver but were eliminated in the urine.

VII APPLICATION DU TriaS DE FORMULE (II) POUR LE DEVELOPPEMENT DE RADIOTRACEURS IN VIVO DE L'INTEGRINE a VII A- Généralités sur les intégrines et leurs ligands Les intégrines sont des récepteurs membranaires impliqués dans les processus d'adhésion cellulaires. Elles régissent les interactions cellule-cellule et cellule-matrice extra-cellulaire. Ces glycoprotéines hétérodimériques intégrales sont constituées de deux sous-unités a et p. Chaque sous-unité se compose d'un domaine cytoplasmique court sans activité catalytique et d'un long domaine extracellulaire responsable de la liaison aux ligands endogènes (J. Xiong et al., Science 2001, 294(5541), p. 339-345 ; J. Xiong et al., Science 2002, 296(6656), p. 151-155 ; T. Xiao et al., Nature 2004, 432(7013), p. 59-97). Chez les mammifères, on dénombre 18 sous-unités a et 8 sous-unités i3 conduisant à 24 combinaisons distinctes. Celles-ci peuvent être classées en familles selon la nature des ligands. La plus importante famille est celle des récepteurs se liant au tripeptide RGD qui comprend notamment les intégrines a, (33, a'(35, et ri R - 3. Les intégrines sont des protéines d'adhésion qui interviennent dans un grand nombre de mécanismes biologiques de l'individu sain. Leur structure transmembranaire leur permet de participer à la transmission de signaux entre le cytoplasme et la matrice extracellulaire (inside-out) (F. Ye et al., Journal of Thrombosis and Haemostasis, 2011. 9: p. 20-25) et inversement (outside-in) (F. G. Giancotti et al., Science, 1999. 285(5430): p. 1028-1033). A l'inverse, la liaison de l'extrémité extracellulaire conduit à un phénomène de clusterisation (rassemblement local d'intégrines qui forment un oligomère) permettant la transmission de signaux intracellulaires qui conditionnent entre autres la survie, la mobilité et la polarité cellulaire. Les intégrines jouent donc un rôle clé dans les phénomènes d'adhésion, de polarisation et de motilité cellulaire. Les intégrines participent également aux processus angiogéniques (J. T. Yang et al., Development, 1995, 121(2), p. 549-560), notamment la néoangiogénèse tumorale qui conditionne le développement des tumeurs en formation, et sont impliquées dans diverses autres pathologies (Wehrle-Haller et al., Journal of Pathology, 2003, 200, p. 481-487). Certaines études ont également montré que la présence d'intégrines, en particulier av133, peut être associée à la formation active de métastases (B. Felding-Habermann et al., Clinical and Experimental Metastasis, 2002. 19(5): p. 427-436 ; P. Clezardin, Cellular and Molecular Life Sciences, 1998. 54(6): p. 541-548). Le Tableau V ci-dessous indique les profils d'expression en intégrines de diverses tumeurs et des métastases associés (G. Mizejewski, Proceedings of the society for experimental biology and medicine, 1999. 222(2): p. 124-138). Tableau V : Cancer Foyer tumoral principal Métastases Sein Colon Rein Poumon Mélanome Ovaire Peau Cerveau NA if coi NA a5131 a6134 a3Pi 431 NAalterna a3131 a41:31 a'133 421131 OE2PI a5131 aubPaia av133 a61134 a3131 a3Pi 433 a2131 1 a313i 426 31 a6134 a' X33 avf33 Les intégrines 433 jouent un rôle essentiel dans la néoangiogenèse tumorale, en particulier. Cette dernière étant surexprimée au niveau de la tumeur et très peu dans les cellules saines, elle constitue donc une cible privilégiée pour la détection précoce des tumeurs primaires, des récidives tumorales et des métastases (W. L. Rust et al., Journal of Biomedicine and Biotechnology, 2002. 2(3): p. 124-130 ; H. Jin et al., Br J Cancer, 2004. 90(3): p. 561-565 ; R. Haùbner, European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging, 2006. 33(0): p. 54-63 ; A. Malter, Drug Discovery Today, 2001. 6(19): p. 1005- 1024). L'intégrine 003 fait partie des huit intégrines reconnaissant le motif tripeptidique ArgGly-Asp (ou RGD) structuré (Schéma 16) présent dans de nombreuses protéines de la matrice extracellulaire telles que la vitronectine, la fibronectine, ou le fibrinogène (E. Ruoslahti, Matrix Biology, 2003. 22(6): p. 459-465).20 Schéma 16 : Tripeptide RGD « Arg-Gly-Asp » Les ligands de l'intégrine ct,f33 développés actuellement sont de différents types : Les anticorps monoclonaux tels que la Vitaxine (Phase I et II) qui sont très sélectifs et peuvent être marqué par divers radioéléments pour une utilisation en imagerie. - Les ligands peptidiques ou pseudopeptidiques présentant la séquence RGD linéaire ou cyclique sont utilisés in vivo. - Les ligands non peptidiques mimant le motif RGD. Ces composés sont souvent obtenus par criblage de chimiothèques. - Les disintégrines comme la Leberagine-C ou l'Acurhagine-C sont des toxines également étudiées actuellement (I. Limam et al., Matrix Biology, 2010. 29(2): p. 117-126 ; W. J. Wang, British Journal of Pharmacology, 2010. 160(6): p. 1338-1351). Afin de démontrer les potentialités de la plateforme TriaS de formule (II) pour la préparation de radiotraceurs in vivo, deux types de radiotraceurs technétiés ciblant l'intégrine 433, marqueur couramment utilisé pour l'imagerie moléculaire du cancer, ont été développés. VII APPLICATION OF THE TRIAL OF FORMULA (II) FOR THE DEVELOPMENT OF IN VIVO RADIOTRACERS OF INTEGRIN A VII A- Generalities on integrins and their ligands Integrins are membrane receptors involved in cellular adhesion processes. They govern cell-cell and extracellular cell-matrix interactions. These integral heterodimeric glycoproteins consist of two α and β subunits. Each subunit is composed of a short cytoplasmic domain with no catalytic activity and a long extracellular domain responsible for binding to endogenous ligands (J. Xiong et al., Science 2001, 294 (5541), pp. 339-345). J. Xiong et al., Science 2002, 296 (6656), pp. 151-155, T. Xiao et al., Nature 2004, 432 (7013), pp. 59-97). In mammals, there are 18 subunits a and 8 subunits 13 leading to 24 distinct combinations. These can be classified into families according to the nature of the ligands. The most important family is that of the tripeptide-binding receptors RGD, which includes the α, β, β-, and R-3 integrins. Integrins are adhesion proteins that are involved in a large number of mechanisms. The transmembrane structure allows them to participate in the transmission of signals between the cytoplasm and the extracellular matrix (inside-out) (F. Ye et al., Journal of Thrombosis and Haemostasis, 2011. 9: p 20-25) and inversely (outside-in) (FG Giancotti et al., Science, 1999. 285 (5430): pp. 1028-1033) In contrast, the binding of the extracellular end leads to a clustering phenomenon (local assembly of integrins that form an oligomer) allowing the transmission of intracellular signals that determine, among other things, cell survival, mobility and polarity, so integrins play a key role in adhesion and polarization phenomena. and of Cellular otility Integrins also participate in angiogenic processes (J. T. Yang et al., Development, 1995, 121 (2), p. 549-560), including tumor neoangiogenesis which conditions the development of tumors in formation, and is implicated in various other pathologies (Wehrle-Haller et al., Journal of Pathology, 2003, 200, pp. 481-487). Some studies have also shown that the presence of integrins, particularly av133, may be associated with active metastasis formation (Felding-Habermann et al., Clinical and Experimental Metastasis, 2002. 19 (5): 427). -436, P. Clezardin, Cellular and Molecular Life Sciences, 1998. 54 (6): 541-548). Table V below shows the integrin expression profiles of various tumors and associated metastases (G. Mizejewski, Proceedings of the Society for Experimental Biology and Medicine, 1999. 222 (2): pp. 124-138). Table V: Cancer Main tumor focus Metastases Breast Colon Kidney Lung Melanoma Ovary Skin Brain NA if co NA a5131 a6134 a3Pi 431 NAalterna a3131 a41: 31 a'133 421131 OE2PI a5131 aubPaia av133 a61134 a3131 a3Pi 433 a2131 1 a313i 426 31 a6134 a 'X33 The integrins 433 play an essential role in tumor neoangiogenesis, in particular. As the latter is overexpressed at the level of the tumor and very little in healthy cells, it is therefore a preferred target for the early detection of primary tumors, tumor recurrence and metastases (WL Rust et al., Journal of Biomedicine and Biotechnology, 2002. 2 (3): pp. 124-130, H. Jin et al., Br J Cancer, 2004. 90 (3): 561-565, R. Haibner, European Journal of Nuclear Medicine and Molecular Imaging, 2006. 33 (0): 54-63, A. Malter, Drug Discovery Today, 2001. 6 (19): 1005-1024). Integrin 003 is one of eight integrins recognizing the structured ArgGly-Asp (or RGD) tripeptide motif (Scheme 16) present in many extracellular matrix proteins such as vitronectin, fibronectin, or fibrinogen (E. Ruoslahti, Matrix Biology, 2003. 22 (6): 459-465) .20 Scheme 16: RGD Tripeptide "Arg-Gly-Asp" The integrin ligands ct, f33 currently being developed are of different types: Monoclonal antibodies such as as Vitaxin (Phase I and II) which are highly selective and can be labeled with various radioelements for use in imaging. Peptide or pseudopeptide ligands having the linear or cyclic RGD sequence are used in vivo. Non-peptide ligands mimicking the RGD motif. These compounds are often obtained by screening chemical libraries. Disintegrins such as Leberagin-C or Acurhagin-C are toxins also currently being studied (I. Limam et al., Matrix Biology, 2010. 29 (2): 117-126; WJ Wang, British Journal of Pharmacology, 2010. 160 (6): 1338-1351). In order to demonstrate the potential of the TriaS platform of formula (II) for the preparation of in vivo radiotracers, two types of technetium radiotracers targeting integrin 433, a marker commonly used for molecular imaging of cancer, have been developed.

Deux approches distinctes ont été étudiées : - une première approche qui met à profit le concept de traceurs Tc-essentiels, et qui consiste en la réalisation de traceurs intégrés mimes de RGD construits à partir de la structure TriaS de formule (II) par introduction d'un motif guanidium et d'un mime aspartate via la chimie-click, et - une seconde approche qui aborde la conception de composés bifonctionnels modulaires, et qui consiste à développer des traceurs bifonctionnels construits à partir du cyclopentapeptide c(RGDfK). VI/ B- Développement de traceurs intégrés de l'intégrine 433 Plusieurs complexes intégrés (« Tc-essentiels ») mimant le tripeptide RGD dans lesquels la chélation du métal apporte sa rigidité à la structure ont été synthétisés. Le résidu arginine est conservé tandis qu'un mime d'aspartate est introduit au niveau du noyau triazole G 63 R NI-12+ H2N N H HN par chimie-click. Trois complexes ont ainsi été préparés parmi lesquels 99mTc-51a (Schéma 17). NH2 -FH2N-( NH /0 ON\ /r\I Tc S 0 N' N-N"? Schéma 17 : 99mTc-51a Le complexe fonctionnalisé 99mTc-51a a également été évalué en plasma murin. Cette étude a mis en évidence une stabilité supérieure à 50% après 6h d'incubation à 37°C. En outre, aucun produit de dégradation n'a été observé. Bien que la stabilité des complexes TriaS fonctionnalisés semble inférieure à celle de TriaS, ce résultat suggère que l'incorporation de fonctions guanidinium et carboxylate ne perturbe pas le processus de chélation du technétium et déstabilise peu le complexe obtenu. VI/ B- L Stratégie de synthèse Le composé 49, précurseur acétylénique a été préparé en deux étapes à partir de la Fmoc-Arg(Pb0-0H par couplages successifs de la propargylarnine et de l'acide mercaptoacétique tritylé 15 (Schéma 18). b, c +1-12N NHPbf NH 49 NHPbf 0 +1-12r4 NH HN NH STrt FmocHN FÎP N-\\ 48 NHPbf 1-12N NH Schéma 18 : Préparation du précurseur acétylénique des traceurs intégrés. a) Propargylamine, DCC, DIPEA, DCM, rt, 24h, 82%; b) DMF/Pipéridine (4/1), rt, 2h ; c) 15, DCC, DIPEA, rt, 24h, 88% Ce composé a ensuite été engagé dans la synthèse de la série de ligands alkylcarboxylates 51a-c et du ligand benzoïque substitué en position para 53 (Schéma 19). NH2 ->H2N NH NHPbf H2N( NH NH2 NH NH STrt OR 50a-c n R Rdt 1 d3u 50a 49% 2 il3u 50b 34% 3 H 50c - 51 a-c n 1 51a 2 51b 3 51c Tc "S/8 N 99mTc-51a-c n 1 "'Tc-51a 2 99r"Tc-51b NHPbf NH 0 NE1 HN STrt 49 Schéma 19 : Fixation du mime d'aspartate par chimie combinatoire via la chimie-click : a) Cycloaddition de Huisgen (procédure n°2) : Bromoacétate de tert-butyle (resp. bromopropionate de tert-butyle et acide 4-bromobutyrique), NaN3, Cu(II), Et0H/H20 (9/1), MW, 80°C, 30 min ; b) Cycloaddition de Huisgen (procédure n°2) : Bromoacétate de tert-butyle (resp. bromopropionate de tert-butyle et acide 4-bromobutyrique), NaN3, Cu(II), EtOH/H20 (9/1), MW, 80°C, 30 min ; c) TFA/TIPS/H20 (95/2.5/2.5), rt, lh ; d) NaTc04, SnCl2, NaOH, rt, 5 min. Two distinct approaches have been studied: - a first approach which makes use of the concept of Tc-essential tracers, and which consists of the realization of integrated tracer mimics of RGD constructed from the structure TriaS of formula (II) by introduction of a guanidium pattern and a mime aspartate via chemistry-click, and - a second approach which addresses the design of modular bifunctional compounds, and which consists in developing bifunctional tracers constructed from cyclopentapeptide c (RGDfK). VI / B- Development of Integrin Integral Tracer 433 Several integrated complexes ("Tc-essential") mimicking the tripeptide RGD in which the chelation of the metal brings its rigidity to the structure have been synthesized. The arginine residue is conserved while an aspartate mime is introduced at the triazole ring G 63 R NI-12 + H2N N H HN by chemistry-click. Three complexes were thus prepared among which 99mTc-51a (Scheme 17). The functionalized 99mTc-51a complex was also evaluated in murine plasma, which showed a high degree of stability. greater than 50% after 6h of incubation at 37 ° C. In addition, no degradation product was observed, although the stability of the functionalized TriaS complexes seems lower than that of TriaS, this result suggests that the incorporation of Guanidinium and carboxylate functions do not interfere with the chelation process of technetium and cause little destabilization of the complex obtained VI / B-L Synthesis strategy Compound 49, an acetylenic precursor, was prepared in two stages from Fmoc-Arg (Pb0- 0H by successive coupling of propargylamine and tritylated mercaptoacetic acid (Scheme 18) .beta. 12N NH Scheme 18: Preparation of the acetylenic tracer precursor integrated a) Propargylamine, DCC, DIPEA, DCM, rt, 24h, 82%; b) DMF / piperidine (4/1), rt, 2h; c) 15, DCC, DIPEA, rt, 24h, 88% This compound was then involved in the synthesis of the series of alkylcarboxylate ligands 51a-c and para-substituted benzoic ligand 53 (Scheme 19). NH2 -> H2N NH NH2b NH2N (NH NH2 NH NH STrt OR 50a-cn R Rt 1 d3u 50a 49% 2 il3u 50b 34% 3 H 50c - 51 ac n 1 51a 2 51b 3 51c Tc "S / 8 N 99mTc- 51a-cn 1 "Tc-51a 2 99r" Tc-51b NHPbf NH 0 NE1 HN STrt 49 Figure 19: Attachment of aspartate miming by combinatorial chemistry via chemistry-click: a) Cycloaddition of Huisgen (procedure n ° 2) ): Tert-butyl bromoacetate (resp. Tert-butyl bromopropionate and 4-bromobutyric acid), NaN 3, Cu (II), EtOH / H 2 O (9/1), MW, 80 ° C, 30 min; b) Cycloaddition Huisgen (procedure 2): tert-butyl bromoacetate (resp. tert-butyl bromopropionate and 4-bromobutyric acid), NaN 3, Cu (II), EtOH / H 2 O (9/1), MW, 80 ° C. 30 min, c) TFA / TIPS / H2O (95 / 2.5 / 2.5), rt, 1h, d) NaTCO4, SnCl2, NaOH, rt, 5 min.

Enfin, le complexe 99mTc-51a ainsi que les deux complexes 99gTc-51b et 99gTe-53 ont été préparés dans les mêmes conditions que pour TriaS-Te (Schéma 19). VI/ B- 2. Méthodes de synthèses Synthèse du précurseur acétylénique 49 : La FmocArg(Pbf)OH (8.11g, 12.5 mmol, 1.0 équiv.) est dissoute dans 50 mL de DCM sec. La propargylamine (0.8 mL, 12.5 mmol, 1.0 équiv.) et HOBt (2.025 g, 15.0 mmol, 1.2 équiv.) sont ajoutés puis le pH est ajusté à 8 par ajout de DIPEA. Après addition de la DIPEA (8.7 mL, 15.0 mmol, 1.2 équiv.), le DCC (3.1 g, 15.0 mmol, 1.2 équiv.) est introduit et l'ensemble est agité sous atmosphère d'argon à température ambiante pendant 24 h. On observe la formation d'un précipité blanc de DCU. La DCU est éliminée par filtration puis le DCM est évaporé et l'huile obtenue est reprise dans AcOEt puis lavée par une solution saturée de chlorure de sodium, et par une solution d'acide citrique à 10%. Les fractions organiques sont réunies et séchées au sulfate de sodium anhydre puis évaporées. Le composé (huile) obtenu est repris dans le DCM et purifiée par chromatographie sur colonne de silice (éluant hexane / AcOEt 20/80, révélation UV, Rf = 0.3). Le produit est séché une nuit sous pression réduite pour conduire à 48 sous forme d'un solide blanc. 7.04g, 10.3 mmol, Rdt = 82%. IH RMN (CDC13) : 6 7.72 (d, 2H, J = 6.8 Hz, CH Ar, Fmoc), 7.54 (d, 2H, J ---- 6.8 Hz, CH Ar, Fmoc), 7.352 (t, 2H, J = 6.5 Hz, CH Ar, Fmoc), 7.25 (d, 2H, J = 7.8 Hz, CH Ar, Fmoc), 4.27 (m, 3H, CH2 Fmoc + Glycyl), 3.97 (s, 2H, CH,-C=CH), 3.26 (m, 2H, CH2 Arg (e)), 2.89 (s, 2H, CH2 Pbf), 2.57 (s, 3H, CH3 Pbf (a)), 2.50 (s, 3H, CH3 Pbf (c)), 2.12 (s, 1H, CH2-C=CH) ; 2.05 (s, 3H, CH3 Pbf (b)), 1.7 - 1.5 (m, 4H, CH2 Arg (f,g)), 1.41 (s, 3H, CH3 Pbf (d)) ; 13C RMN (CDC13) : 8 158.8 (CO amide), 156.5 (CO carbamate), 143.6 - 117.6 (C Arom, Pbf + Fmoc), 86.4 (C, Pbf), 79.5 (-C CH), 71.3 (-C=---CH), 67.0 (CH2 Fmoc), 49.9 (CH2 Are)), 46.9 (C, Fmoc), 43.0 (CH2, Pbf), 28.7 (CH2, Arg(g)), 28.5 (CH2 Pbf(d)), 24.6 (CH2, Arg(f)), 19.3 (CH3, Pbf(a)), 18.0 (CH3, Pbf(b)), 12.4 (CH3, Pbf(c)) ; ( MALDI/TOF : nilz = 419.3 [MLÉ I. Finally, the 99mTc-51a complex as well as the two complexes 99gTc-51b and 99gTe-53 were prepared under the same conditions as for TriaS-Te (Scheme 19). VI / B- 2. Synthesis Methods Synthesis of the acetylenic precursor 49: The FmocArg (Pbf) OH (8.11 g, 12.5 mmol, 1.0 equiv.) Is dissolved in 50 ml of dry DCM. Propargylamine (0.8 mL, 12.5 mmol, 1.0 equiv) and HOBt (2.025 g, 15.0 mmol, 1.2 equiv) are added and the pH is adjusted to 8 by addition of DIPEA. After addition of the DIPEA (8.7 mL, 15.0 mmol, 1.2 equiv.), The DCC (3.1 g, 15.0 mmol, 1.2 equiv.) Is introduced and the mixture is stirred under an argon atmosphere at room temperature for 24 h. The formation of a white precipitate of DCU is observed. The DCU is removed by filtration and then the DCM is evaporated and the oil obtained is taken up in AcOEt and then washed with a saturated solution of sodium chloride, and with a 10% citric acid solution. The organic fractions are combined and dried with anhydrous sodium sulphate and then evaporated. The compound (oil) obtained is taken up in DCM and purified by chromatography on a silica column (eluent hexane / AcOEt 20/80, UV revelation, Rf = 0.3). The product is dried overnight under reduced pressure to yield 48 as a white solid. 7.04 g, 10.3 mmol, yield = 82%. 1 H NMR (CDCl 3): δ 7.72 (d, 2H, J = 6.8 Hz, CH Ar, Fmoc), 7.54 (d, 2H, J = 6.8 Hz, CH Ar, Fmoc), 7.352 (t, 2H, J = 6.5 Hz, CH Ar, Fmoc), 7.25 (d, 2H, J = 7.8 Hz, CH Ar, Fmoc), 4.27 (m, 3H, CH 2 Fmoc + Glycyl), 3.97 (s, 2H, CH 2 -C, = CH), 3.26 (m, 2H, CH 2 Arg (e)), 2.89 (s, 2H, CH 2 Pbf), 2.57 (s, 3H, CH 3 Pbf (a)), 2.50 (s, 3H, CH 3 Pbf (c) )), 2.12 (s, 1H, CH2-C = CH); 2.05 (s, 3H, CH 3 Pbf (b)), 1.7-1.5 (m, 4H, CH 2 Arg (f, g)), 1.41 (s, 3H, CH 3 Pbf (d)); 13 C NMR (CDCl3): δ 158.8 (CO amide), 156.5 (CO carbamate), 143.6-117.6 (C Arom, Pbf + Fmoc), 86.4 (C, Pbf), 79.5 (-C CH), 71.3 (-C = --- CH), 67.0 (CH2 Fmoc), 49.9 (CH2 Are)), 46.9 (C, Fmoc), 43.0 (CH2, Pbf), 28.7 (CH2, Arg (g)), 28.5 (CH2 Pbf (d) ), 24.6 (CH2, Arg (f)), 19.3 (CH3, Pbf (a)), 18.0 (CH3, Pbf (b)), 12.4 (CH3, Pbf (c)); (MALDI / TOF: nilz = 419.3 [MLI I.

Le composé 48 (4.19 g, 10.0 mmol, 1.0 équiv.) est dissout dans 20 mL de DMF/Pipéridine (4/1) et agité durant 2h à température ambiante. Le suivi de cette déprotection est assuré par CCM (éluant : hexane/AcOEt 20/80, Rf = 0.3). Le DMF est évaporé sous pression réduite. L'huile obtenue (10.0 mmol, 1.0 équiv.) est reprise dans 25 mL de DCM sec et 15 (3.34 g, 10.0 mmol, 1.0 équiv.) puis HOBt (1.62 g, 12.0 mmol, 1.2 équiv.) sont ajoutés. Le pH est ajusté à 8 par ajout de DIPEA puis la DIPEA (5.8 mL, 10.0 mmol, 1.0 équiv.) est ajoutée et enfin le DCC (2.48 g, 12.0 mmol, 1.2 équiv.). Le mélange est agité durant 24 h à température ambiante sous atmosphère d'argon. On observe la formation d'un précipité blanc de DCU. La DCU est éliminée par filtration puis le DCM est évaporé sous pression réduite. L'huile obtenue est reprise dans l'AeOEt et lavée par une solution saturée de chlorure de sodium puis par une solution d'acide citrique 10%. Les fractions organiques sont regroupées, séchées et évaporées. Le produit obtenu est repris dans le DCM est purifié par chromatographie sur colonne de silice (éluant : AcOEt / hexane 80/20, révélation UV). Après évaporation et séchage, le composé 49 est obtenu sous la forme d'un solide blanc. 4.48 g, 8.75 mmol, Rdt = 88%. III RMN (CDC13) : 8 7.89 (t, 1H, J = 2.5 Hz, NH amide (i)), 7.4 - 7.1 (m, 15H, CH Ar, Trt), 7.07 (d, 1H, J = 7.5 Hz, NH amide (h), 4.33 (d, 1H, J = 5 Hz, CH, Glycyl) , 3.90 (s, 1H, CH2-CECH), 3.10 (m, 2H, CH2, Arg -e)), 3.03 (s, 2H, CH2S), 2.92 (s, 2H, CH2, Pbf), 2.54, 2.47 (s, 3H, CH3 Pbf x2), 2.07 (s, 4H, CH3 Pbf (b) + CH2CECH), 1.44 (s, 6H, 2 CH3 Pbf (d)). 13C RMN (CDC13) : 5 171.3 (CO amide (i)), 168.9 (CO amide (h)), 158.8 (C Pbf), 143.9 (C Arom, Trt), 132.2 (C Ar Pbf), 129.5-126.8 (CH Ar, Trt), 124.7 (C Ar, Pbf), 117.6 (C Ar Pbf), 86.4 (C, Pbf), 79.5 (CECH), 71.3 (CECH), 67.7 (C, Trt), 53.5 (CH2, Pbf), 36.17 (CH2, Arg (e)), 30.4 (CH2, Arg (g)), 28.6 (CH3, 2 x Pbf (d)), 25.3 (CH2, Arg (f)), 19.39 (CH3, Pbf (a)), 18.0 (CH3, Pbf (b)), 12.4 -CH3, Pbf (c)) ; MALDI/TOF : m/z = 513.2 [MH1. Synthèse des agents chélatants 51a, 51b et 53 : Le composé 49 (93.6 mg, 0.12 mmol, 1.2 équiv.) est mis en solution dans l'éthanol (750 !AL). La procédure n°2 de cycloaddition dipolaire de Huisgen est appliquée avec les composés halogénés respectifs (0.1 mmol, 1.0 équiv.) pour conduire au ligand protégé 50a (resp 50b, et 52) puis aux agents chélatants déprotégés 51a, 51b et 53. Le composé halogéné utilisé est le bromoacétate de tert-butyle (5.4 p.L, 0.1 mmol, 1.0 équiv.). 50a est obtenu sous forme d'une huile marron (46 mg, 48.9 punol, Rdt = 49 %). Après 1 h sous agitation dans un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5), le solvant est évaporé. Le solide est repris dans un mélange eau/ACN (4/1) et purifié par RP-HPLC semi-préparative. Le produit est lyophilisé pour conduire à 51a sous forme d'une poudre blanche (10.4 mg). RP- HPLC analytique : tR = 8.5 min ; 1H RMN (MeOD) : S 7.99 (s, 1H, NH amide), 7.81 (s, 1H, CH triazole), 5.34 (s, 2H, CH2-000), 4.58 (m, 1H, CH2-CC), 4.05 -m, 1H, CH Arg), 3.31 (s, 2H, CH2S), 1.95-1.75 (m, 6H, 3 x CH2 Arg) ; 13C RMN (Me0D) : ô 173.8, 171.8 (CO amides), 158.6 (CN, Arg), 146.1 (CH2-C-C), 125.8 (CH2-C-C), 54.5 (CH2-000), 52.0 (CH, Arg), 41.9 (CH2-C-C), 35.3 (CH2, Arg), 30.2 (CH2S), 26.3, 26.1 (2 x CH2, Arg) MALDI/TOF : m/z = 387.1 [ML1+]. Le composé halogéné utilisé est le bromopropionate de tert-butyle (12.8 uL, 0.1 mmol, 1.0 équiv.). 50b est obtenu sous forme d'une huile marron (32 mg, 34.0 umol, Rdt 34 %). Après lh sous agitation dans un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5), le solvant est évaporé. Le solide est repris dans un mélange eau/ACN (4/1) et purifié par RP-HPLC semipréparative. Le produit est lyophilisé pour conduire à 51b sous forme d'une poudre blanche (3.1 mg). RP-HPLC analytique : tR = 9.8 min ; MALDI/TOF : m/z - 401.1 [MH÷]. Compound 48 (4.19 g, 10.0 mmol, 1.0 equiv) is dissolved in 20 mL of DMF / piperidine (4/1) and stirred for 2 h at room temperature. This deprotection is monitored by TLC (eluent: hexane / AcOEt 20/80, Rf = 0.3). The DMF is evaporated under reduced pressure. The oil obtained (10.0 mmol, 1.0 equiv.) Is taken up in 25 ml of dry DCM and 15 (3.34 g, 10.0 mmol, 1.0 equiv) and then HOBt (1.62 g, 12.0 mmol, 1.2 equiv) are added. The pH is adjusted to 8 by addition of DIPEA then the DIPEA (5.8 mL, 10.0 mmol, 1.0 equiv) is added and finally the DCC (2.48 g, 12.0 mmol, 1.2 equiv). The mixture is stirred for 24 h at room temperature under an argon atmosphere. The formation of a white precipitate of DCU is observed. The DCU is removed by filtration and the DCM is evaporated under reduced pressure. The oil obtained is taken up in AeOEt and washed with a saturated solution of sodium chloride and then with a 10% citric acid solution. The organic fractions are combined, dried and evaporated. The product obtained is taken up in DCM and purified by chromatography on a silica column (eluent: AcOEt / hexane 80/20, UV revelation). After evaporation and drying, the compound 49 is obtained in the form of a white solid. 4.48 g, 8.75 mmol, yield = 88%. III NMR (CDCl3): δ 7.89 (t, 1H, J = 2.5 Hz, NH amide (i)), 7.4-7.1 (m, 15H, CH Ar, Trt), 7.07 (d, 1H, J = 7.5 Hz, NH amide (h), 4.33 (d, 1H, J = 5Hz, CH, Glycyl), 3.90 (s, 1H, CH 2 -CHECH), 3.10 (m, 2H, CH 2, Arg-e)), 3.03 (s). , 2H, CH 2 S), 2.92 (s, 2H, CH 2, Pbf), 2.54, 2.47 (s, 3H, CH 3 Pbf x 2), 2.07 (s, 4H, CH 3 Pbf (b) + CH 2 CHCH), 1.44 (s, 6H). , 2 CH3 Pbf (d)). 13 C NMR (CDCl3):? 171.3 (CO amide (i)), 168.9 (CO amide (h)), 158.8 (C Pbf), 143.9 (C Arom, Trt), 132.2 (C Ar Pbf), 129.5-126.8 ( CH Ar, Trt), 124.7 (C Ar, Pbf), 117.6 (C Ar Pbf), 86.4 (C, Pbf), 79.5 (CECH), 71.3 (CECH), 67.7 (C, Trt), 53.5 (CH2, Pbf) ), 36.17 (CH2, Arg (e)), 30.4 (CH2, Arg (g)), 28.6 (CH3, 2 x Pbf (d)), 25.3 (CH2, Arg (f)), 19.39 (CH3, Pbf ( a)), 18.0 (CH3, Pbf (b)), 12.4-CH3, Pbf (c)); MALDI / TOF: m / z = 513.2 [MH1. Synthesis of Chelating Agents 51a, 51b and 53: Compound 49 (93.6 mg, 0.12 mmol, 1.2 equiv) is dissolved in ethanol (750 μL). Huisgen dipolar cycloaddition procedure 2 is applied with the respective halogenated compounds (0.1 mmol, 1.0 equiv) to yield the protected ligand 50a (resp 50b, and 52) and then the deprotected chelating agents 51a, 51b and 53. The The halogenated compound used is tert-butyl bromoacetate (5.4 μL, 0.1 mmol, 1.0 equiv). 50a is obtained in the form of a brown oil (46 mg, 48.9 punol, yield = 49%). After stirring for 1 h in a TFA / TIPS / water (95 / 2.5 / 2.5) mixture, the solvent is evaporated. The solid is taken up in a water / ACN mixture (4/1) and purified by semi-preparative RP-HPLC. The product is lyophilized to yield 51a as a white powder (10.4 mg). RP-analytical HPLC: tR = 8.5 min; 1 H NMR (MeOD): δ 7.99 (s, 1H, NH amide), 7.81 (s, 1H, CH triazole), 5.34 (s, 2H, CH 2 - 000), 4.58 (m, 1H, CH 2 -C), 4.05. -m, 1H, CH Arg), 3.31 (s, 2H, CH 2 S), 1.95-1.75 (m, 6H, 3 x CH 2 Arg); 13C NMR (MeOd):? 173.8, 171.8 (CO amides), 158.6 (CN, Arg), 146.1 (CH2-CC), 125.8 (CH2-CC), 54.5 (CH2-000), 52.0 (CH, Arg), 41.9 (CH2-CC), 35.3 (CH2, Arg), 30.2 (CH2S), 26.3, 26.1 (2 x CH2, Arg) MALDI / TOF: m / z = 387.1 [ML1 +]. The halogenated compound used is tert-butyl bromopropionate (12.8 μL, 0.1 mmol, 1.0 equiv). 50b is obtained in the form of a brown oil (32 mg, 34.0 μmol, yield 34%). After stirring in TFA / TIPS / water (95 / 2.5 / 2.5), the solvent is evaporated. The solid is taken up in a water / ACN mixture (4/1) and purified by RP-HPLC semipréparative. The product is lyophilized to yield 51b as a white powder (3.1 mg). Analytical RP-HPLC: tR = 9.8 min; MALDI / TOF: m / z - 401.1 [MH +].

Le composé halogéné utilisé est l'acide para-bromométhylbenzoïque (21.4 mg, 0.1 mmol, 1.0 équiv.). 52 est obtenu sous forme d'un solide brun (22.1 mg, 23.0 jamol, Rdt 23%). Après lh sous agitation dans un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5), le solvant est évaporé. Le solide est repris dans un mélange eau/ACN (4/1) et purifié par RP-HPLC semipréparative. Le produit est lyophilisé pour conduire à 53 sous forme d'une poudre blanche (1.3 mg). RP-HPLC analytique : tR = 16.3 min ; MALDI/TOF : 462.1 [MH1. Synthèse des radiotraceurs 99gTc-51a, 99gTc-51b, 99gTe-53 et 99mTe-51a : Le composé 51a (20 lig, 52 nmol, 20pL de solution à 1 mg/mL) est mis en solution dans 60 1_11, d'eau distillée. Après ajout de 27 µL de solution de SnC12 à. 1 mg/ml, et 54 pt de solution de NaOH 0.1 M, une solution de Na99gTc04 est ajoutée (1.0 équiv.) et la solution est placée 5 minutes à incubation à 37°C. Après ajout de 5.4 lit de solution d'HCL 1M, le complexe est analysé par RP-HPLC. RP-HPLC analytique : tR = 11.4 min ; MALDI/TOF : m/z = 499.0 [MFFI. The halogenated compound used is para-bromomethylbenzoic acid (21.4 mg, 0.1 mmol, 1.0 equiv). 52 is obtained in the form of a brown solid (22.1 mg, 23.0 μmol, yield 23%). After stirring in TFA / TIPS / water (95 / 2.5 / 2.5), the solvent is evaporated. The solid is taken up in a water / ACN mixture (4/1) and purified by RP-HPLC semipréparative. The product is lyophilized to yield 53 as a white powder (1.3 mg). Analytical RP-HPLC: tR = 16.3 min; MALDI / TOF: 462.1 [MH1. Synthesis of the 99gTc-51a, 99gTc-51b, 99gTe-53 and 99mTe-51a radiotracers: Compound 51a (20 lig, 52 nmol, 20 μl of 1 mg / ml solution) is dissolved in 60 μl of distilled water. . After adding 27 μL of SnC12 solution to. 1 mg / ml, and 54 μl of 0.1 M NaOH solution, a solution of Na99gTcO4 is added (1.0 equiv.) And the solution is incubated for 5 minutes at 37 ° C. After adding 5.4 liters of 1M HCl solution, the complex is analyzed by RP-HPLC. Analytical RP-HPLC: tR = 11.4 min; MALDI / TOF: m / z = 499.0 [MFFI.

Le composé 51b (20 ug, 50 nmol, 201.1.L de solution à 1 mg/mL) est mis en solution dans 64 e d'eau distillée. Après ajout de 28 pt de solution de SnC12 à 1 mg/ml, et 56 mt de solution de NaOH 0.1 M, une solution de Na99gTc04 est ajoutée (1.0 équiv.) et la solution est placée 5 minutes à incubation à 37°C. Après ajout de 5.6 ut de solution d'HCL 1M, le complexe est analysé par RP-HPLC. RP-HPLC analytique : tR = 11 6 min ; MALDI/TOF : mh = 513.0 [MI-11. Compound 51b (20 μg, 50 nmol, 201 μl of 1 mg / ml solution) is dissolved in 64 μl of distilled water. After adding 28 μg of 1 mg / ml SnC12 solution and 56 ml of 0.1 M NaOH solution, a solution of Na99gTcO4 is added (1.0 equiv.) And the solution is incubated for 5 minutes at 37 ° C. After adding 5.6 μl of 1M HCl solution, the complex is analyzed by RP-HPLC. Analytical RP-HPLC: tR = 11 6 min; MALDI / TOF: mh = 513.0 [MI-11.

Le composé 53 (20 lig, 43.2 nrnol, 201.1.L de solution à 1 mglmL) est mis en solution dans 64 !IL d'eau distillée. Après ajout de 24 III, de solution de SnC12 à 1 mg/ml, et 48 !IL de solution de NaOH 0.1 M, une solution de Na99gTc04 est ajoutée (1.0 équiv.) et la solution est placée 5 minutes à incubation à 37°C. Après ajout de 4.8 ptl, de solution d'HCL 1M, le complexe est analysé par RP-HPLC. RP-HPLC analytique : tR - 17.0 min ; MALDI/TOF : mlz = 575.0 [M11+]. Le composé 51a (20 tg, 52 nmol, 201.IL de solution à 1 mg/mL) est mis en solution dans 60 g, d'eau distillée. Après ajout de 27 ItiL de solution de SnC12 à 1 mg/ml, et 54 1.1L de solution de NaOH 0.1 M, 75 .tL d'une solution de Na99mTe04 est ajoutée et la solution est placée 5 minutes à incubation à 37°C. Après ajout de 5.4 i.t1_, de solution d'HCL 1M, le complexe est analysé par RP-HPLC. RP-HPLC analytique : tR = 11.2 min et tR = 11.6 min. VI/ B- 3. Résultats Les complexes 99mTe-51a, 99gTe-51b et 99gTe-53 ont été étudiés par RP-HPLC analytique. Les chromatogrammes obtenus sont représentés à la Figure 10. Les trois complexes ont été caractérisé en masse (MALDI-TOF). On constate que dans le cas de la complexation des deux ligands 51a et 51b, aucun signal n'est présent à 4-5 min, et ce même signal est très faible dans le cas de la complexation de 53. Il n'y a donc plus de technétium réduit résiduel : le marquage est quantitatif. L'adjonction de groupements fonctionnels à la structure de TriaS, susceptibles d'interférer dans la chélation du métal, n'a donc pas d'influence négative sur celle-ci. Compound 53 (20 μg, 43.2 mmol, 201 μl of 1 mg / ml solution) is dissolved in 64 μl of distilled water. After addition of 24 μl of 1 mg / ml SnC12 solution and 48 μl of 0.1 M NaOH solution, a solution of Na99gTcO4 is added (1.0 equiv.) And the solution is placed for 5 minutes at 37 ° incubation. C. After adding 4.8 μl of 1M HCl solution, the complex is analyzed by RP-HPLC. Analytical RP-HPLC: tR - 17.0 min; MALDI / TOF: mlz = 575.0 [M11 +]. Compound 51a (20 μg, 52 nmol, 201 μl of 1 mg / ml solution) is dissolved in 60 g of distilled water. After addition of 27 μl of SnC12 solution at 1 mg / ml, and 54 μl of 0.1 M NaOH solution, 75 μl of Na99mTeO4 solution is added and the solution is incubated for 5 minutes at 37 ° C. . After addition of 5.4 μl of 1M HCl solution, the complex is analyzed by RP-HPLC. Analytical RP-HPLC: tR = 11.2 min and tR = 11.6 min. VI / B- 3. Results The 99mTe-51a, 99gTe-51b and 99gTe-53 complexes were studied by analytical RP-HPLC. The chromatograms obtained are shown in FIG. 10. The three complexes were characterized by mass (MALDI-TOF). It is found that in the case of the complexation of the two ligands 51a and 51b, no signal is present at 4-5 min, and this same signal is very weak in the case of the complexation of 53. There is therefore no more residual reduced technetium: the labeling is quantitative. The addition of functional groups to the structure of TriaS, likely to interfere in the chelation of the metal, therefore has no negative influence on it.

VII C- Développement de traceurs bifonctionnels de l'intégrine avj33 VI/ C- 1. Stratégie de synthèse De nombreux ligands de l'intégrine 433 ont été identifiés présentant de bonnes affinités et une sélectivité intéressante pour cette intégrine par rapport à l'intégrine une. Le choix de la molécule ciblante est très large, et c'est le cyclopentapeptide c(RGDfV) qu'il a été choisi d'exemplifier. VII C- Development of bifunctional tracers of the integrin avj33 VI / C- 1. Synthesis strategy Numerous ligands of the integrin 433 were identified having good affinities and an interesting selectivity for this integrin with respect to the integrin. . The choice of the targeting molecule is very wide, and it is the cyclopentapeptide c (RGDfV) that it has been chosen to exemplify.

VI/ C- 2. Méthodes de synthèse Synthèse sur support des cyclopentapeptides c(RGDfK) et c(RGDf(N-Me)K) : Les cyclopentapeptides utilisés ont été préparés sur support solide en stratégie Fmoc 15 d'après le schéma de synthèse indiqué au Schéma 20 ci-dessous : OH FmocHN-Asp-OAll 54 1 b, c, b, d, b, e 71 Fe FrnocHN -Lys (Mmt)-Arg (Pbf)-Gly-Asp-OAll Me b, f X = H 55 X = Me 55b X = H 56 FmocHN-(D)-Phe-Lys (Mmt)-Arg (Pbf)-Gly-Asp-OAll X = Me 56b X g X = H 57 FrnocHN-(D)-Phe-Lys (Mmt)-Arg (Pbf)-Gly-Asp-COOH X = Me 57b X b, h N H H HN +H2N N NH2 X F-I 56 X = Me 58b NHMmt - OMe NHMmt Schéma 20 : Synthèse sur support des peptides c(RGDfK) et c(RGDf(N-Me)K) : a) FmocAsp(0A11)0H, DIC, DMAP, DCM/DMF (1/2), rt, 24h ; b) DMF/Pipéridine (4/1), rt, 5 min, 5x ; c) FmocGly0H, DIC, DIPEA, NMP, rt, 24h ; d) FmocArg(Pbf)OH, DIC, DIPEA, NMP, rt, 24h ; e) FmocLys(Mmt)OH, DIC, DIPEA, NMP, rt, 24h ; f) Fmoc-(D)-PheOH, DIC, DIPEA, NMP, rt, 24h ; g) tetrakis-triphenylphosphine paladium, AcOH, NMM, CHCI3, rt, 24h ; h) HAUT, DIPEA, NMP, rt, 24h ; i) o-NBS-C1, collidine, NMP, rt, 15 min, 3x ; j) 1)DBU, NMP - 2)(CH3)2SO4, NMP x2 ; k) mercaptoéthanol, DBU, NMP, rt, 5 min, 2x La résine Wang (1.14g, 0.5 mmol) est conditionnée dans le DCM (1 x 15 min, 2 x 1 min), puis lavée pas le DMF (3 x 1 min). La DMAP (6.1 mg, 0.05 mmol, 0.1 équiv.) est ajoutée en solution dans 10 mL de DMF et la résine est agitée durant 20 min. Le FmocAsp(0A11)0H (1.98g, 5.0 mmol, 10 équiv.) est mis en solution dans 10 mL de DCM et 4 à 5 gouttes de DMF. Le mélange est placé à 0°C pendant 5 min le DIC (390e, 2.5 mmol, 5.0 équiv.) est ajouté sous atmosphère d'argon. Le mélange est agité à température ambiante pendant 20 min puis versé sur la résine. La résine est agitée durant 24h à température ambiante puis lavée par DMF (3 x 1 min) et DCM (3 x 1 min). La substitution de la résine est évaluée par dosage UV à 290 nm. S = 0.412 mmol.g-1, Rdt 94%. VI / C- 2. Synthesis methods Support synthesis of cyclopentapeptides c (RGDfK) and c (RGDf (N-Me) K): The cyclopentapeptides used were prepared on solid support in Fmoc strategy according to the synthesis scheme shown in Scheme 20 below: ## STR1 ## wherein: X = H 55 X = Me 55b X = H 56 FmocHN- (D) -Phe-Lys (Mmt) -Arg (Pbf) -Gly-Asp-OAll X = Me 56b Xg X = H 57 FrnocHN- (D) -Phe-Lys (Mmt) -Arg (Pbf) -Gly-Asp-COOH X = Me 57b X b, h NHH HN + H2N N NH2 X FI 56 X = Me 58b NHMmt-OMe NHMmt Scheme 20: Supported synthesis of c (RGDfK) and c (RGDf (N-Me) K) peptides: a) FmocAsp (0A11) 0H, DIC, DMAP, DCM / DMF (1/2), rt, 24h; b) DMF / piperidine (4/1), rt, 5 min, 5x; c) FmocGlyOH, DIC, DIPEA, NMP, rt, 24h; d) FmocArg (Pbf) OH, DIC, DIPEA, NMP, rt, 24h; e) FmocLys (Mmt) OH, DIC, DIPEA, NMP, rt, 24h; f) Fmoc- (D) -PheOH, DIC, DIPEA, NMP, rt, 24h; g) tetrakis-triphenylphosphine palladium, AcOH, NMM, CHCl3, rt, 24h; h) HIGH, DIPEA, NMP, rt, 24h; i) o -NBS-Cl, collidine, NMP, rt, 15 min, 3x; j) 1) DBU, NMP - 2) (CH3) 2SO4, NMP x2; k) mercaptoethanol, DBU, NMP, rt, 5 min, 2x The Wang resin (1.14 g, 0.5 mmol) is packaged in DCM (1 x 15 min, 2 x 1 min), then washed with DMF (3 x 1 min). The DMAP (6.1 mg, 0.05 mmol, 0.1 equiv.) Is added in solution in 10 ml of DMF and the resin is stirred for 20 min. FmocAsp (0A11) 0H (1.98 g, 5.0 mmol, 10 equiv) is dissolved in 10 ml of DCM and 4 to 5 drops of DMF. The mixture is placed at 0 ° C for 5 min. DIC (390e, 2.5mmol, 5.0 equiv) is added under argon atmosphere. The mixture is stirred at room temperature for 20 min and then poured onto the resin. The resin is stirred for 24 hours at room temperature and then washed with DMF (3 x 1 min) and DCM (3 x 1 min). Substitution of the resin is evaluated by UV assay at 290 nm. S = 0.412 mmol.g-1, yield 94%.

La résine est conditionnée dans le DCM (3 x 1 min) puis DMF (3 xl min). Le bromure de benzyle (297 piL, 2.5 mmol, 5.0 équiv.) puis la DIPEA (870 iaL, 5.0 mmol, 10 équiv.) sont ajoutés et le mélange est agité à température ambiante pendant lh. Après lavage par DMF (3 x 1 min), DCM (3x1 min) la résine est conditionnée dans le DMF (3 x 1 min) et déprotégée par un mélange DMF/Pipéridine (4/1) (5 x 5 min). Après lavages au DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min), un test Kaiser est réalisé et donne une coloration bleue (positif). La FmocGly0H (1.486g, 5.0 mmol, 10.0 équiv.) est ajoutée en solution dans la NMP, puis la DIPEA (870 5.0 mmol, 10 équiv.), C1HOBt (848 mg, 5.0 mmol, 10 équiv.) et DIC (775e, 5.0 mmol, 10.0 équiv.) sont ajoutés successivement. Après 24h d'agitation, la résine est lavée par la NMP (3 x 1 min) puis DCM (3 x 1 min). Le test Kaiser est alors négatif. Cette opération déprotection/couplage est répétée successivement avec les acides aminés suivants : FmocArg(Pbf)OH (3.24g, 5.0 mmol, 10.0 équiv.) et FmocLys(Mmt)OH (1.60g, 2.5 mmol, 5.0 équiv.) pour conduire à la résine 53. Un aliquot de résine est clivé par un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) durant lh à température ambiante. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le composé est repris dans un mélange ACN/eau et analysé en masse. MALDI/TOF : m/z = 737.3 [M11+]. La résine (0.25 mmol) est conditionnée dans le DCM (1 x 30 min, 2 x 1 min) puis le DMF (3 x 1 min). La déprotection est réalisée par un mélange DMF/Pipéridine (4/1) (5 x 5 min) puis la résine est lavée par DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min) et NMP (3 x 1 min). Test Kaiser positif. 0-NBSC1 (222 mg, 1.0 mmol, 4.0 équiv.) et la collidine (162.5 111_, ; 2.5 mmol, 10.0 équiv.) sont mis en solution dans la NMP (5 mL) et ajoutés à la résine. Après 2 x 15 min d'agitation à température ambiante, le solvant est éliminé par filtration. Test Kaiser négatif. The resin is packaged in DCM (3 x 1 min) then DMF (3 xl min). Benzyl bromide (297 μL, 2.5 mmol, 5.0 equiv) and then DIPEA (870 μL, 5.0 mmol, 10 equiv) are added and the mixture is stirred at room temperature for 1 h. After washing with DMF (3 x 1 min), DCM (3x1 min) the resin is packaged in DMF (3 x 1 min) and deprotected with a DMF / Piperidine (4/1) mixture (5 x 5 min). After washing with DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min), a Kaiser test is performed and gives a blue color (positive). FmocGlyOH (1.486 g, 5.0 mmol, 10.0 equiv) is added in solution in NMP, then DIPEA (870 5.0 mmol, 10 equiv), C1HOBt (848 mg, 5.0 mmol, 10 equiv) and DIC (775e). 5.0 mmol, 10.0 equiv.) Are added successively. After 24h stirring, the resin is washed with NMP (3 x 1 min) then DCM (3 x 1 min). The Kaiser test is then negative. This deprotection / coupling operation is repeated successively with the following amino acids: FmocArg (Pbf) OH (3.24 g, 5.0 mmol, 10.0 equiv) and FmocLys (Mmt) OH (1.60 g, 2.5 mmol, 5.0 equiv.) To lead to Resin 53. A resin aliquot is cleaved with TFA / TIPS / water (95 / 2.5 / 2.5) for 1h at room temperature. After evaporation of the solvent under reduced pressure, the compound is taken up in an ACN / water mixture and analyzed by mass. MALDI / TOF: m / z = 737.3 [M11 +]. The resin (0.25 mmol) is packaged in DCM (1 x 30 min, 2 x 1 min) then DMF (3 x 1 min). The deprotection is carried out with a DMF / Piperidine mixture (4/1) (5 x 5 min) and then the resin is washed with DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min) and NMP (3 x 1 min) . Kaiser test positive. 0-NBSC1 (222 mg, 1.0 mmol, 4.0 equiv) and collidine (162.5 mmol, 2.5 mmol, 10.0 equiv) are dissolved in NMP (5 mL) and added to the resin. After stirring for 2 x 15 min at room temperature, the solvent is removed by filtration. Kaiser negative test.

La résine est ensuite lavée par la NMP (3 x 1 min) et du DBU (115 p,L, 0.75 rnmol, 3 équiv.) est ajouté dans 5 mL de NMP. Après 3 min d'agitation, Me2SO4 (240 p,L, 2.5 mmol, 10.0 équiv.) est ajouté puis la résine est agitée durant 2 x 2 min. Enfin, une solution de DBU (190 j..LL, 1.25 mmol, 5.0 équiv.) et de mercaptoéthanol (175 pL, 2.5 mmol, 10.0 équiv.) est ajoutée dans la NMP et la résine est agitée durant 2 x 5 min. La résine 55b obtenue est lavée par la NMP (3 x 1 min), le DCM (3 x 1 min). Un aliquot de résine est clivé par un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) durant 1h à température ambiante. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le composé est repris dans un mélange ACN/eau et analysé en masse. ESI : m/z = 265.2 [M+ 211-1 et 529.3 [M+H+]. The resin is then washed with NMP (3 x 1 min) and DBU (115 μL, 0.75 mmol, 3 equiv) is added in 5 mL of NMP. After stirring for 3 minutes, Me2SO4 (240 μL, 2.5 mmol, 10.0 equiv) is added and the resin is stirred for 2 x 2 min. Finally, a solution of DBU (190 μL, 1.25 mmol, 5.0 equiv) and mercaptoethanol (175 μL, 2.5 mmol, 10.0 equiv) is added to the NMP and the resin is stirred for 2 x 5 min. The resulting resin 55b is washed with NMP (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min). An aliquot of resin is cleaved with a TFA / TIPS / water mixture (95 / 2.5 / 2.5) for 1 h at room temperature. After evaporation of the solvent under reduced pressure, the compound is taken up in an ACN / water mixture and analyzed by mass. ESI: m / z = 265.2 [M + 211-1 and 529.3 [M + H +].

La résine 55 (resp. 55b) (0.25 mmol) est conditionnée dans le DCM (1 x 30 min, 2 x 1 min) puis la NMP (3 x 1 min). La Fmoc-(D)-PheOH (0.49 g, 2.5 mmol, 10.0 équiv.) est ajoutée en solution dans la NMP, puis la DIPEA (218 l'IL, 2.5 mmol, 10 équiv.), C1HOBt (212 mg, 2.5 mmol, 10 équiv.) et DIC (194 2.5 mmol, 10.0 équiv.) sont ajoutés successivement. Après 24h d'agitation, la résine est lavée par la NMP (3 x 1 min) puis DCM (3 x 1 min). Un aliquot de résine est clivé par un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) durant 1h à température ambiante. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le composé est repris dans un mélange ACN/eau et analysé en masse. 56 X = H : ESI : m/z = 884.5 [M+ 56b X = Me : ESI : m/z = 449.9 [M+ 2F11, 898.5 [M+11±] La résine 56 (resp. 56b) est conditionnée dans le DCM (1 x 30 min, 2 x I min) puis CHC13 (3 x 1 min). Le Pd(PPh3)4 (174 mg, 0.15 mmol, 3.0 équiv.) est dissous dans 8 mL d'un mélange CHC13 / NMM / AcOH (92.5% / 2.5% / 5.0%) et ajouté à la résine. La résine est agitée durant 24h à température ambiante et à l'abri de la lumière. Après lavages successifs par une solution de DIPEA à 0.5% dans le DMF (3 x 1 min), une solution de diéthyldithiocarbamate de sodium à 0.5% dans le DMF (3 x 1 min), le DMF (3 x 1 min), une solution de DIPEA à 8% dans le DMF (3 x 1 min), le DMF (3 x 1 min), et le DCM (3 x 1 min), un aliquot est clivé par un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) durant lh à température ambiante. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le composé est repris dans un mélange ACN/eau et analysé en masse. - 57 X ---- H : EST : m/z = 844.5 [M+ - 57b X = Me : ESI m/z = 429.7 [M+ 2I11], 858.4 [M+H+] La résine 57 (resp. 57b) est conditionnée dans le DCM (1 x 30 min, 2 x 1 min) puis le DMF (3 x 1 min). La déprotection est réalisée par un mélange DMF/Pipéridine (4/1) (5 x 5 5 min) puis la résine est lavée par DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min) et NMP (3 x 1 min). La DIPEA (35 111,, 0.2 mmol, 4 équiv.) puis HATU (38 mg, 0.1 mmol, 2 équiv.) sont ajoutés en solution dans la NMP. Après 24h d'agitation, la résine est lavée par la NMP (3 x 1 min) puis DCM (3 x 1 min). Un aliquot de résine est clivé par un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) durant 1 h à température ambiante. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le 10 composé est repris dans un mélange ACN/eau et analysé en masse. - 58 X = H : ESI : m/z = 604.2 [M+ - 58b X = Me : ESI : mlz = 309.2 [M+ 2H+], 618.3 [M+H1 Les deux cyclopentapeptides 58 et 58b ont ainsi pu être obtenus et caractérisés en 15 masse (MALDI-TOF) : m/z = 604.2 [MI ri et 618.3 [MEI+] respectivement (Schéma 21). 0- NH3+ NH3+ 58 - m/z = 604.2 [MF1±] 58b - 618.3 [MH4] Schéma 21 : Cyclopentapeptide c(RGDfK) (58) et sa forme N-méthylée (58b) Synthèse du traceur bifonctionnel c(RGDfK)-Lys-99mTcTriaS-PEG : Un traceur bifonetionnel à partir du cyclopeptide non méthylé 58 a ensuite été 20 synthétisé. Dans cet exemple, le traceur présentera un motif polyéthylèneglycol permettant d'orienter sa biodistribution. Nous avons choisi le 0-(2-Aminoethyl)-0'42-azidoethyl)- pentaéthylène glycol ou azido-PEG-NH2 (n = 6) qui est un polyéthylèneglicol présentant déjà la fonction azoture et pourra donc être introduit par chimie-click. Il a été désigné PEG-N3 par la suite (Schéma 22). H2N 6 Schéma 22 : Structure de PEG-N3 Dans le complexe synthétisé, la structure TriaS comporte un motif acide glutamique à la place de la lysine. La fonction acide carboxylique libre ainsi ajoutée permet de relier la structure au cyclopentapeptide par couplage peptidique. Le composé 60 qui sera couplé à la résine est préparé au préalable en solution par couplage de la propargylamine sur l'acide glutamique (Schéma 23). FrnocHN 60 FiN FelocHN 59 H NI OtBu Schéma 23 : Préparation du synthon 60 a) Propargylamine, DCC, CI-HOBt, DIPEA, DCM, rt, 24h ; b) TFA/DCM, rt, 30 min La synthèse du complexe c(RGDfK)-Lys-99mTcTriaS-PEG est décrite au Schéma 24. Resin 55 (or 55b) (0.25 mmol) is packaged in DCM (1 x 30 min, 2 x 1 min) followed by NMP (3 x 1 min). Fmoc- (D) -PheOH (0.49 g, 2.5 mmol, 10.0 equiv) is added in solution in NMP, then DIPEA (218 IL, 2.5 mmol, 10 equiv.), C1HOBt (212 mg, 2.5). mmol, 10 equiv.) and DIC (194 2.5 mmol, 10.0 equiv.) are added successively. After 24h stirring, the resin is washed with NMP (3 x 1 min) then DCM (3 x 1 min). An aliquot of resin is cleaved with a TFA / TIPS / water mixture (95 / 2.5 / 2.5) for 1 h at room temperature. After evaporation of the solvent under reduced pressure, the compound is taken up in an ACN / water mixture and analyzed by mass. 56 X = H: ESI: m / z = 884.5 [M + 56b X = Me: ESI: m / z = 449.9 [M + 2F11, 898.5 [M + 11 ±] Resin 56 (respectively 56b) is packaged in DCM (1 x 30 min, 2 x I min) then CHC13 (3 x 1 min). Pd (PPh3) 4 (174 mg, 0.15 mmol, 3.0 equiv) is dissolved in 8 mL of CHC13 / NMM / AcOH (92.5% / 2.5% / 5.0%) and added to the resin. The resin is stirred for 24 hours at room temperature and protected from light. After successive washes with a solution of 0.5% DIPEA in DMF (3 x 1 min), a solution of 0.5% sodium diethyldithiocarbamate in DMF (3 x 1 min), DMF (3 x 1 min), a 8% DIPEA solution in DMF (3 x 1 min), DMF (3 x 1 min), and DCM (3 x 1 min), an aliquot is cleaved with a TFA / TIPS / water mixture (95 / 2.5 / 2.5) during lh at room temperature. After evaporation of the solvent under reduced pressure, the compound is taken up in an ACN / water mixture and analyzed by mass. - 57 X ---- H: EST: m / z = 844.5 [M + - 57b X = Me: ESI m / z = 429.7 [M + 2I]], 858.4 [M + H +] Resin 57 (resp. packaged in DCM (1 x 30 min, 2 x 1 min) then DMF (3 x 1 min). The deprotection is carried out with a DMF / piperidine (4/1) mixture (5 x 5 min) and the resin is then washed with DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min) and NMP (3 x 1 min). ). DIPEA (35 mm, 0.2 mmol, 4 equiv) and then HATU (38 mg, 0.1 mmol, 2 equiv) are added in solution in NMP. After 24h stirring, the resin is washed with NMP (3 x 1 min) then DCM (3 x 1 min). An aliquot of resin is cleaved with a TFA / TIPS / water mixture (95 / 2.5 / 2.5) for 1 h at room temperature. After evaporation of the solvent under reduced pressure, the compound is taken up in an ACN / water mixture and analyzed by mass. X = H: ESI: m / z = 604.2 [M + - 58b X = Me: ESI: mlz = 309.2 [M + 2H +], 618.3 [M + H] The two cyclopentapeptides 58 and 58b could thus be obtained and characterized in Mass (MALDI-TOF): m / z = 604.2 [MI ri and 618.3 [MEI +] respectively (Scheme 21). 0 - NH3 + NH3 + 58 - m / z = 604.2 [MF1 +] 58b - 618.3 [MH4] Scheme 21: Cyclopentapeptide c (RGDfK) (58) and its N-methylated form (58b) Synthesis of the bifunctional tracer c (RGDfK) - Lys-99mTcTriaS-PEG: A bifunctional tracer from unmethylated cyclopeptide 58 was then synthesized. In this example, the tracer will have a polyethylene glycol pattern to guide its biodistribution. We have chosen 0- (2-aminoethyl) -0'-42-azidoethyl) -pentaethylene glycol or azido-PEG-NH 2 (n = 6) which is a polyethylene glycol having already the azide function and can therefore be introduced by chemistry-click . He was subsequently designated PEG-N3 (Figure 22). H2N 6 Scheme 22: Structure of PEG-N3 In the synthesized complex, the TriaS structure has a glutamic acid motif in place of lysine. The free carboxylic acid function thus added makes it possible to connect the structure to the cyclopentapeptide by peptide coupling. Compound 60 which will be coupled to the resin is prepared beforehand in solution by coupling propargylamine to glutamic acid (Scheme 23). FrnocHN 60 FiN FelocHN 59 H NI OtBu Scheme 23: Synthon 60 Preparation a) Propargylamine, DCC, CI-HOBt, DIPEA, DCM, rt, 24h; b) TFA / DCM, rt, 30 min The synthesis of the c (RGDfK) -Lys-99mTcTriaS-PEG complex is described in Scheme 24.

HcNyNH 66 "mTc-66 Schéma 24 : Synthèse de c(RGDff()-Lys-99mTcTriaS-PEG : a) CI-HOBt (0.6 M), DCM/TFE, rt, 2x 30 min; b) BocLysOH, DIC, HOBt, NMP, DIPEA, rt, 24h ; c) DMF/Pipéridine (4/1), rt, 5x 5 min ; d) 60, DIC, DIPEA, NMP, rt, 24h ; e) 15, HATU, DIPEA, NMP, rt, 24h ; f) Cycloaddition de Huisgen (Procédure n°2) : PEG-N3 (Fig. IV.37.), Cu(II), MW, NMP, 80°C, 30 min ; g) TFA/TIPS/H20 (95/2.5/2.5) ; h) Na99mTc04, SnC12, NaOH, H20, rt, 5 min Dans un premier temps, la résine 58 a été déprotégée dans des conditions douces (CJHOBt (0.6M), AcOH, NMM, rt, 2 x 30 min) de façon à retirer le groupement protecteur Mmt sans cliver la résine ou supprimer en partie la protection Pbf de l'arginine. La chaîne est 5 alors allongée par couplage de la Boc-Lys(Fmoc)-0H. La fonction acide carboxylique permet de greffer 60 sur la résine conduisant au composé 63. La structure TriaS est ensuite constituée par couplage peptidique de l'acide mercaptoacétique tritylé 15. La réaction de Huisgen avec le PEG-N3 peiuiet de conduire au composé 65. Après déprotection et clivage par acidolyse, le ligand 66 devait ainsi être engagé dans la complexation du coeur oxotechnétium pour conduire 10 à c(RGDfl()-Lys-99mTe-TriaS-PEG (99mTe-66). a, 6, c, 0 PleHN O 65 64 11211-H PC-IN 9 76 0 0 NHBoc H HN '^/ °J\_' He ° ° NH STM1 O NH 56 PbIHN NH sTrt 0 NH IHHH NHEoc NH H HN.,...'..--Ny'...',,H ° k o O O NH SH o H HI NH HN 0 ° O 0 _,f0 H NH,' N HN C Pi Hr/ ° ° NH j O NH SH 1(1.1..1,(.0.---'yr's11-,* La résine 58 (0.25 mmol) est conditionnée dans le DCM (1 x 30 min, 2 x 1 min), puis un mélange TFE/DCM 1/1 (3 x 1 min). 25 mL de solution de HOBt à 0.6M dans le TFE/DCM (1/1) sont ajoutés et la résine est agitée durant 30 minutes à température ambiante. Cette étape est répétée à deux reprises. La résine est rincée par un mélange DCM/TFE 1/1 (3 x 1 min), le DCM (3 x 1 min), et la NMP (3 x 1 min). La Boc-Lys(Fmoc)OH (1.17 g, 2.5 mmol, 10 équiv.) est dissoute dans 20 mL de NMP, puis Cl-HOBt (0.43 g, 2.5 mmol , 10 équiv.), la DIPEA (435 2.5 mmol, 10 équiv.) et le DIC (390 ut, 2.5 mmol, 10 équiv.) et ce mélange est ajouté à la résine. Après agitation à température ambiante durant 24h, la résine est lavée par la NMP (3 x 1 min), le DCM (3 x 1 min), et le DMF (3 x 1 min), puis déprotégée 10 par un mélange DMF/Pipéridine 4/1 (5 x 5 min). Le composé 60 (1.20 g, 2.5 mmol, 10 équiv.) est mis en solution dans 20 mL de NMP avec le DIC (390 2.5 mmol, 10 équiv.) et la DIPEA (435 1.1L, 2.5 mmol, 10 équiv.) puis ajouté à la résine. Après 24h d'agitation à température ambiante, la résine est lavée par la NMP (3 x 1 min) puis DCM (3 x 1 min). Un aliquot de résine est clivé par un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) durant lh à température 15 ambiante. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le composé est repris dans un mélange ACN/eau et analysé en masse. MALDI/TOF : 1120.5 [M+H+]. La résine 63 est (0.25 mmol) est conditionnée dans le DCM (1 x 30 min, 2 x 1 min), puis le DMF (3 x 1 min), puis déprotégée par un mélange DMF/Pipéridine 4/1 (5 x 5 min) et 20 lavée par le DMF (3 x 1 min), le DCM (3 x 1 min) et la NMP (3 x 1 min). Le composé 15 (835 mg, 2.5 mmol, 10.0 équiv.) est mis en solution dans 10 mL de NMP, puis le HATU (952 mg, 2.5 mmol, 10.0 équiv.), et la DIPEA (435 pl, 2.5 mmol, 10.0 équiv.) sont ajoutés. Le mélange est ajouté à la résine. Après 24h d'agitation à température ambiante, la résine est lavée par la NMP (3 x 1 min) puis DCM (3 x 1 min). Un aliquot de résine est clivé par un 25 mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) durant 1h à température ambiante. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le composé est repris dans un mélange ACN/eau et analysé en masse. MALDI/TOF : 972.0 [M+H+]. La résine 64 (0.125 mmol) est conditionnée dans le DCM (1 x 30 min, 2 x 1 min) puis 30 la NMP (3 x 1 min). La résine est mise en solution dans 2.3 mL de NMP puis la L-proline (25 pl, de solution 1M, 0.025 rnmol, 0.2 équiv.), Na2CO3 (25 1.11_, de solution 1M, 0.025 mmol, 0.2 équiv.), l'ascorbate de sodium (50 uL de solution 1M, 0.05 mmol, 0.4 équiv.), CuSO4.5H20 (25 ut de solution 1M, 0.025 mmol, 0.2 équiv.), le O-(2-aminoethyl)-O'-(2- azidoethyl) pentaethylène glycol (45.8 mg, 0.125 mmol, 1.0 équiv.) et 130 µL d'eau sont ajoutés. La résine est alors placée au micro-onde (80°C, 300W, 30 min) puis lavée par la NMP (3 x 1 min), et le DCM (3 x 1 min). Un aliquot de résine est clivé par un mélange TFA/TIPS/eau (95/2.5/2.5) durant 1h à température ambiante. Après évaporation du solvant sous pression réduite, le composé est repris dans un mélange ACN/eau et analysé en masse. MALDI/TOF : 1322.6 [M+Hl. VI/ D- Tests d'évaluation V/ D- L Test de liaison des intégrines Les tests in vitro ont été réalisés selon un protocole adapté tel que décrit ci-après. L'intégrine etv133 (Chemicon, Temecula, CA) est diluée à 1000 ng/mL dans du tampon 1 (20 mM Tris HC1 pH 7,4, 150 mM NaCl, 2 rnM CaC12, 1 mM MgC12, 1 mM MnC12). Un aliquot de 100 !IL/puits est ajouté sur une plaque à 96-puits (Millipore, Multiscreen-IP HTS) et l'ensemble est incubé une nuit à 4°C. La plaque est lavée avec un tampon 2 (50 mM Tris HC1 pH 7,4, 100 mM NaC1, 2 mM CaC12, 1 mM MgCl2, 1 mM MnC12 et 1% d'albumine bovine sérique puis incubée pendant 2 h à température ambiante. La plaque est ensuite incubée pendant 3 h en présence de différentes quantités de ligands (de 0,1 nM à 10 !IM) et avec 0,06 nM de [125I]-iodoéchistatine. Après incubation, les puits sont lavés deux fois avec du tampon 2 et comptés en présence de liquide à scintillation (appareil Top count NXT, PerkinElmer). V/ D- 1. Test in vivo sur souris xénogreffées ayant développés une tumeur de type 25 U87MG Culture cellulaire : La lignée cellulaire U87MG a été fournie par l'European Collection of Cell Culture 30 (SIGMA) et a été conservée dans de l'azote liquide avant d'être mise en culture. Le milieu de culture contient les éléments suivants (pour 500 mL) : - EMEM (Eagle's minimum essential medium) : 500 mL; - 2 mM de L-glutamine : 5 mL d'une solution 200 mM; - 1% d'acides aminés non-essentiels : 5 ml de solution commerciale ; - 1 mM de pyruvate de sodium : 5 mL d'une solution 100 mM; - 10% de SVF (Sérum de Veau Foetal) : 50 mL ; - pénicilline (100 U/mL) et streptomycine (100 µg/mL) : 5 mL d'une solution à 10 000 5 U/mL de pénicilline et à 10 mg/mL de streptomycine dans NaC1 0,9%. Le milieu est filtré et peut se conserver 15 jours à +4°C. Les cellules sont adhérentes, et sont donc cultivées dans des flacons. Elles sont maintenues à 37°C dans une atmosphère humidifiée à 5% de CO2. 10 Mise en culture : L'ampoule de cellules est sortie de l'azote liquide et placée immédiatement dans de la glace. Elle est décongelée sous l'eau, et son contenu est transvasé dans un flacon de 15 mL et l'ampoule est rincée avec un peu de milieu de culture. Le volume est complété à 10 mL avec 15 du milieu de culture. Le mélange est centrifugé (5 min à 1500 tr/min) pour éliminer le DMSO qui était présent pour la congélation. Le surnageant est éliminé et les cellules sont remises en suspension. 5 mL de milieu de culture sont ajouté et l'ensemble est homogénéisé avant d'être transféré dans un flacon de 50 mL. Celui-ci est placé à l'étuve et son bouchon dévissé. Le premier passage doit être effectué après 24 h. 20 Passages : pour un flacon de 275 mL (75 cm3). La trypsine, le milieu et la solution saline de Hank' s doivent être utilisés à température ambiante. (1) Le flacon est sorti de l'étuve en conditions stériles et les cellules sont observées au microscope pour vérifier qu'elles sont arrivées à confluence. 25 (2) Le flacon est vidé dans un bêcher d'eau de Javel et rincé précautionneusement avec mL de solution saline de Hank's. (3) 5 mL de trypsine sont ajoutés et le flacon est placé 5 min à l'étuve pour favoriser le décollement des cellules. Les cellules encore adhérentes sont ensuite décollées en tapotant la boîte sur la paillasse. 30 (4) 5 mL de milieu sont ajoutés et le mélange est homogénéisé en essayant de briser le maximum d'amas cellulaires (Vw1= 10 mL). (5) Pour un passage au 1/10, 1 mL du mélange précédent est introduit dans un nouveau flacon de 275 mL contenant 19 mL de milieu. Après homogénisation, le flacon est placé à l'étuve. Suivant les besoins, le passage peut être fait dans différentes proportions à partir de Vtot= 10 mL : passage 1/2 : 5 mL cellules + 15 mL de milieu passage 1/3 : 3 mL cellules + 17 mL de milieu passage 1/5 : 2 mL cellules + 18 mL de milieu passage 1/10 : 1 mL cellules + 19 mL de milieu Lors de la mise en culture, le premier passage se fait à partir d'un flacon de 50 mL. Le rinçage est alors réalisé avec 3 mL de solution saline de Hank' s, les cellules sont décollées 10 avec 2 mL de trypsine, puis 2 mL de milieu sont ajoutés (Vtot = 4 mL). Dans le nouveau flacon de 275 mL, les 4 mL précédents sont introduits dans 16 mL de milieu. Différents comptages ont été réalisés pour des boîtes passées au 1/10 une fois par semaine. Il y a de 10.106 à 12.106 cellules par boîtes (cellule de comptage de Malassez). 15 Préparation des cellules pour les xénogreffes Les tumeurs sont obtenues par injection sous-cutanée d'environ 5.106 cellules U87MG suspendues dans 150 pL d'EMEM. Le nombre de boîtes nécessaires est déterminé en fonction du nombre de tumeurs à former. En général, on prévoit deux tumeurs surnuméraires par sécurité. 20 Le nombre de boîtes approprié est traité comme décrit ci-dessus jusqu'à l'étape (4). Les suspensions de cellules sont alors rassemblées dans des falcons de 50 mL (à adapter selon le volume total). Après centrifugation (5 min à 1500 tr/min), le surnageant est éliminé et les culots sont rassemblés par mise en suspension dans du milieu de culture, avec un volume total de 50 mL. Le nombre de cellules est évalué par comptage sur une cellule de Malassez. Le 25 volume correspondant au nombre de cellules nécessaire pour les injections est prélevé. La suspension est centrifugée et le surnageant éliminé. Les cellules sont remises en suspension dans un volume d'EMEM pour qu'il y ait 150 iaL par injection. Implantation des tumeurs et études in vivo : 30 Les études animales ont été réalisées conformément au Décret sur l'Expérimentation Animale (Décret 87-848, 19 octobre 1987). Les tumeurs ont été développées sur des souris femelles athymiques (BaIbC nu/nu) obtenues auprès des Laboratoires Charles River. Les souris sont livrées âgées de 6 semaines (s 20 g). Elles sont utilisées 1 semaine après leur arrivée. Pour les études in vivo, une injection sous-cutanée d'environ 5.106 cellules U87MG, suspendues dans 150 µL d'EMEM est réalisée sur l'épaule avant droite des souris. Lorsque des tumeurs doivent être prélevées pour des études in vitro, 2 à 3 tumeurs peuvent être implantées sur chaque animal : une sur chaque épaule et une au milieu du dos. Dans tous les cas, les animaux sont utilisés 15 jours après l'injection des cellules. Les tumeurs formées ont un diamètre allant de 2 à 4 mm, les plus grosses étant les plus vascularisées. Etude de biodistribution : Les ligands sont marqués au 99mTc selon le protocole décrit à la partie III/A-2 ci- dessus. Pour chaque traceur, une injection de 100 FtL est réalisée dans la veine de la queue d'une souris vigile ayant développé une tumeur U87MG. Après 1,5 h, les 4 souris ont été anesthésiées à l'isoflurane (2%). Les urines puis le sang (400 à 800 pL) sont tout d'abord prélevés, suivis du pancréas, de la rate, des reins, du coeur, des poumons, de la bile et du foie. HcNyNH 66 "mTc-66 Scheme 24: Synthesis of c (RGDff () - Lys-99mTcTriaS-PEG: a) CI-HOBt (0.6 M), DCM / TFE, rt, 2x 30 min; b) BocLysOH, DIC, HOBt NMP, DIPEA, rt, 24h, c) DMF / piperidine (4/1), rt, 5x5 min, d) 60, DIC, DIPEA, NMP, rt, 24h, e) 15, HATU, DIPEA, NMP, rt, 24h, f) Cycloaddition of Huisgen (Procedure # 2): PEG-N3 (Fig. IV.37), Cu (II), MW, NMP, 80 ° C, 30 min, g) TFA / TIPS / H20 (95 / 2.5 / 2.5) h) Na99mTcO4, SnCl2, NaOH, H2O, rt, 5 min At first, resin 58 was deprotected under mild conditions (CJHOBt (0.6M), AcOH, NMM, rt 2 x 30 min) so as to remove the protective group Mmt without cleaving the resin or partially removing the Pbf protection from arginine, the chain is then extended by coupling the Boc-Lys (Fmoc) -OH. The carboxylic acid function makes it possible to graft 60 onto the resin leading to compound 63. The TriaS structure is then constituted by peptide coupling of tritylated mercaptoacetic acid 15. The reaction of Hu isgen with PEG-N3 to lead to compound 65. After deprotection and cleavage by acidolysis, the ligand 66 had to be engaged in the complexation of the heart oxotechnetium to drive 10 to c (RGDfl () - Lys-99mTe-TriaS-PEG (99mTe-66). a, 6, c, 0 PleHN O 65 64 11211-H PC-IN 9 76 0 0 NHBoc H HN '^ / ° J \ _' He ° ° NH STM1 O NH 56 PbIHN NH sTrt 0 NHHHH NHEoc NH H HN ## STR2 ## ## STR2 ## ## STR2 ## Resin 58 (0.25 mmol) is packaged in DCM (1 x 30 min, 2 x 1 min), followed by TFE / DCM 1/1 mixture (3 x 1 min) 25 mL of 0.6M HOBt solution in TFE / DCM (1/1) are added and the resin is stirred for 30 minutes at room temperature. The resin is rinsed with DCM / TFE 1/1 (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min), and NMP (3 x 1 min) Boc-Lys (Fmoc OH (1.17 g, 2.5 mmol, 10 equiv) is dissolved in 20 mL of NMP, followed by Cl-HOBt (0.43 g, 2.5 mmol, 10 equiv), DIPEA (435 mmol, 10 equiv), and DIC (390 μ, 2.5 mmol, 10 equiv) and this mixture is added to the resin After stirring at room temperature for 24 hours, the resin is washed By NMP (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min) and DMF (3 x 1 min) and then deprotected by 10 DMF / Piperidine 4/1 (5 x 5 min). Compound 60 (1.20 g, 2.5 mmol, 10 equiv) is dissolved in 20 mL of NMP with DIC (390 mmol, 10 equiv) and DIPEA (435 L, 2.5 mmol, 10 equiv). then added to the resin. After 24h stirring at room temperature, the resin is washed with NMP (3 x 1 min) then DCM (3 x 1 min). An aliquot of resin is cleaved with TFA / TIPS / water (95 / 2.5 / 2.5) for 1h at room temperature. After evaporation of the solvent under reduced pressure, the compound is taken up in an ACN / water mixture and analyzed by mass. MALDI / TOF: 1120.5 [M + H +]. Resin 63 (0.25 mmol) is packaged in DCM (1 x 30 min, 2 x 1 min), then DMF (3 x 1 min), and then deprotected with a 4/1 DMF / Piperidine mixture (5 x 5 min) and washed with DMF (3 x 1 min), DCM (3 x 1 min) and NMP (3 x 1 min). Compound 15 (835 mg, 2.5 mmol, 10.0 equiv) is dissolved in 10 mL of NMP, followed by HATU (952 mg, 2.5 mmol, 10.0 equiv), and DIPEA (435 μL, 2.5 mmol, 10.0). equiv.) are added. The mixture is added to the resin. After 24h stirring at room temperature, the resin is washed with NMP (3 x 1 min) then DCM (3 x 1 min). A resin aliquot is cleaved with TFA / TIPS / water (95 / 2.5 / 2.5) for 1h at room temperature. After evaporation of the solvent under reduced pressure, the compound is taken up in an ACN / water mixture and analyzed by mass. MALDI / TOF: 972.0 [M + H +]. Resin 64 (0.125 mmol) is packaged in DCM (1 x 30 min, 2 x 1 min) followed by NMP (3 x 1 min). The resin is dissolved in 2.3 ml of NMP and then L-proline (25 μl of 1M solution, 0.025 mmol, 0.2 equiv), Na 2 CO 3 (25 μl of 1M solution, 0.025 mmol, 0.2 equiv). sodium ascorbate (50 μl of 1M solution, 0.05 mmol, 0.4 equiv), CuSO4.5H2O (25 μl of 1M solution, 0.025 mmol, 0.2 equiv.), O- (2-aminoethyl) -O'- (2-azidoethyl) pentaethylene glycol (45.8 mg, 0.125 mmol, 1.0 equiv.) And 130 μL of water are added. The resin is then placed in the microwave (80 ° C, 300W, 30 min) then washed with NMP (3 x 1 min), and DCM (3 x 1 min). An aliquot of resin is cleaved with a TFA / TIPS / water mixture (95 / 2.5 / 2.5) for 1 h at room temperature. After evaporation of the solvent under reduced pressure, the compound is taken up in an ACN / water mixture and analyzed by mass. MALDI / TOF: 1322.6 [M + Hl. VI / D- Evaluation Tests V / D-L Integrin Binding Assay The in vitro tests were performed according to a suitable protocol as described below. Et133 integrin (Chemicon, Temecula, CA) is diluted to 1000 ng / mL in buffer 1 (20 mM Tris HCl pH 7.4, 150 mM NaCl, 2 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 1 mM MnCl2). An aliquot of 100 μL / well is added to a 96-well plate (Millipore, Multiscreen-IP HTS) and the whole is incubated overnight at 4 ° C. The plate is washed with buffer 2 (50 mM Tris HCl pH 7.4, 100 mM NaCl, 2 mM CaCl2, 1 mM MgCl2, 1 mM MnCl2 and 1% bovine serum albumin and incubated for 2 h at room temperature. The plate is then incubated for 3 h in the presence of different amounts of ligands (from 0.1 nM to 10 μM) and with 0.06 nM [125I] iodoechistatin.When incubated, the wells are washed twice with buffer 2 and counted in the presence of scintillation fluid (Top count NXT apparatus, PerkinElmer) V / D- 1. In vivo test on xenografted mouse having developed a U87MG type tumor Cell culture: The U87MG cell line was supplied by the European Collection of Cell Culture (SIGMA) and was stored in liquid nitrogen before being cultured The culture medium contains the following elements (for 500 ml): EMEM (Eagle's minimum essential medium) ): 500 mL; 2 mM L-glutamine: 5 mL of a 200 mM solution; 1% amino acids non-essential: 5 ml of commercial solution; 1 mM sodium pyruvate: 5 mL of a 100 mM solution; - 10% FCS (Fetal Calf Serum): 50 mL; penicillin (100 U / mL) and streptomycin (100 μg / mL): 5 mL of a 10,000 penicillin U / mL solution and 10 mg / mL streptomycin in 0.9% NaCl. The medium is filtered and can be stored for 15 days at + 4 ° C. The cells are adherent, and are therefore cultured in flasks. They are maintained at 37 ° C. in a humidified atmosphere at 5% CO 2. Culturing: The cell bulb was removed from the liquid nitrogen and placed immediately in ice. It is thawed under water, and its contents are transferred to a 15 mL vial and the ampoule is rinsed with a little culture medium. The volume is supplemented to 10 mL with culture medium. The mixture is centrifuged (5 min at 1500 rpm) to remove the DMSO that was present for freezing. The supernatant is removed and the cells are resuspended. 5 ml of culture medium are added and the mixture is homogenized before being transferred to a 50 ml flask. It is placed in an oven and its cap unscrewed. The first pass must be made after 24 hours. 20 Passages: for a 275 mL (75 cm3) bottle. Trypsin, medium and Hank 's saline should be used at room temperature. (1) The vial is taken out of the oven under sterile conditions and the cells are observed under a microscope to verify that they have reached confluence. (2) The vial is emptied into a beaker of bleach and carefully rinsed with mL of Hank's saline solution. (3) 5 ml of trypsin are added and the flask is placed for 5 minutes in an oven to promote cell detachment. The still adherent cells are then peeled off by tapping the box on the bench. (4) 5 mL of medium is added and the mixture is homogenized trying to break up the maximum of cell clusters (Vw1 = 10 mL). (5) For a 1/10 passage, 1 mL of the above mixture is introduced into a new 275 mL vial containing 19 mL of medium. After homogenization, the flask is placed in an oven. Depending on the needs, the passage can be done in different proportions from Vtot = 10 mL: passage 1/2: 5 mL cells + 15 mL passage medium 1/3: 3 mL cells + 17 mL passage medium 1/5 2 mL cells + 18 mL of 1/10 passage medium: 1 mL cells + 19 mL of medium When culturing, the first pass is from a 50 mL vial. Rinsing is then carried out with 3 ml of Hank's saline solution, the cells are peeled off with 2 ml of trypsin and then 2 ml of medium are added (Vtot = 4 ml). In the new 275 mL vial, the previous 4 mL is added to 16 mL of media. Different counts were carried out for boxes passed at 1/10 once a week. There are 10,106 to 12,106 cells per box (Malassez counting cell). Preparation of cells for xenografts Tumors are obtained by subcutaneous injection of approximately 5 × 10 6 U87MG cells suspended in 150 μl of EMEM. The number of boxes needed is determined according to the number of tumors to be formed. In general, two supernumerary tumors are predicted for safety. The appropriate number of boxes is treated as described above until step (4). The cell suspensions are then pooled in 50 mL falcons (to be adapted according to the total volume). After centrifugation (5 min at 1500 rpm), the supernatant is removed and the pellets are combined by suspending in culture medium, with a total volume of 50 ml. The number of cells is evaluated by counting on a Malassez cell. The volume corresponding to the number of cells required for the injections is taken. The suspension is centrifuged and the supernatant removed. The cells are resuspended in a volume of EMEM to 150 μl per injection. Implantation of tumors and in vivo studies: The animal studies were carried out in accordance with the Decree on Animal Experimentation (Decree 87-848, 19 October 1987). Tumors were developed on athymic female mice (BaIbC nu / nu) obtained from Charles River Laboratories. The mice are delivered aged 6 weeks (20 g). They are used 1 week after their arrival. For in vivo studies, a subcutaneous injection of approximately 5.106 U87MG cells suspended in 150 μL of EMEM is performed on the right front shoulder of the mice. When tumors are to be collected for in vitro studies, 2 to 3 tumors can be implanted on each animal: one on each shoulder and one in the middle of the back. In all cases, the animals are used 15 days after the injection of the cells. The tumors formed have a diameter ranging from 2 to 4 mm, the largest being the most vascularized. Biodistribution study: The ligands are labeled with 99mTc according to the protocol described in Part III / A-2 above. For each tracer, an injection of 100 FtL is made in the vein of the tail of a vigilant mouse that has developed a U87MG tumor. After 1.5 h, the 4 mice were anesthetized with isoflurane (2%). The urine and then the blood (400 to 800 μL) are taken first, followed by the pancreas, spleen, kidneys, heart, lungs, bile and liver.

Les organes sont comptés puis congelés et conservés à -20°C. Ils ont été pesés après décroissance radioactive. La tumeur est également prélevée et comptée. Elle est ensuite introduite dans un potter contenant 150 laL de tampon PBS et 1,5 µL d'un cocktail d'inhibiteurs de protéases. Elle est broyée, puis 600 p1_, de Me0H sont ajoutés (MeOH/PBS 8/2). Après un nouveau broyage, l'homogène de tumeur est transvasé dans un tube ependorf, compté puis centrifugé. Le surnageant est prélevé, compté, de même que le culot. Le surnageant est ensuite analysé par radio-HPLC (HPLC Varian) avec un gradient 0-100% B en 30 min. Les traceurs sont analysés dans les mêmes conditions. The organs are counted then frozen and stored at -20 ° C. They were weighed after radioactive decay. The tumor is also removed and counted. It is then introduced into a potter containing 150 μl of PBS buffer and 1.5 μl of a cocktail of protease inhibitors. It is milled, then 600 μl of MeOH are added (MeOH / PBS 8/2). After further grinding, the homogeneous tumor is transferred into an ependorf tube, counted and then centrifuged. The supernatant is taken, counted, as well as the pellet. The supernatant is then analyzed by radio-HPLC (Varian HPLC) with a 0-100% B gradient in 30 min. The tracers are analyzed under the same conditions.

Claims (19)

REVENDICATIONS1. Composé répondant à la fomiule (I) suivante : R2 R1') A-NH n NH-B (I) dans laquelle : - l'unité A est choisie parmi les groupements de formule : R3 .54 OU O lz R5 - `1114 ou R6 O OH OU OU - R6 Re..'"«.."N H R6 SH R6 R6 (DI R7 10 - l'unité B est choisie parmi les groupements de formule : R3 Ra 0 OU CH H OU R6 OU R5/ 10* OU R6 ou 0 OH - n est égal à 0 ou 1, - RI, R2, R3, R4, R5, R6 et R7, identiques ou différents, sont choisis parmi H, un radical alkyle, alcoxy, aryle, aralkyle, hétéroalkyle, hétéroaryle, hétéroaralkyle, un groupe 15 hydrocarboné ou hétérocarboné mono- ou polycyclique saturé ou insaturé, un mono-ou un polysaccharide, ou un dérivé aminé de mono- ou polyéther, un polyamide, lesdits radicaux et/ou groupes substitués par un ou plusieurs groupes hydroxyles, acides, aminoacides, thiols, thioalkyles, uréthanes, urées, halogènes, de polysaccharides, un dans lequel L est un bras espaceur (ou linker) et V est un vecte étant optionnellement et à la condition que : amines, aminoalkyles, ou un groupement L-V ur, V soit l'unité A représente le groupement acétylénique suivant : V soit l'unité B représente l'un des groupements acétyléniques suivants : R4 3 ou O tex, CH REVENDICATIONS1. Compound corresponding to the following formula (I): ## STR2 ## in which: unit A is chosen from the groups of formula: R 3 .54 OR O lz R 5 - 1114 or R 6 R 6 R 6 R 6 (DI R 7 - unit B is chosen from the groups of formula: Or R 6 or OH - n is 0 or 1, - R 1, R 2, R 3, R 4, R 5, R 6 and R 7, which may be identical or different, are chosen from H, an alkyl, alkoxy, aryl or aralkyl radical; heteroalkyl, heteroaryl, heteroaralkyl, a saturated or unsaturated mono- or polycyclic hydrocarbon or heterocarbon group, a mono- or a polysaccharide, or an amine derivative of mono- or polyether, a polyamide, said radicals and / or groups substituted by one or more several hydroxyl, acidic, amino acid, thiol, thioalkyl, urethane, urea, halogen, polysaccharide groups, one in which L is a spacer arm (or linker) and V is a vecte optionally and co It is intended that: amines, aminoalkyls, or an L-V ur group, V is unit A represents the following acetylenic group: V or unit B represents one of the following acetylenic groups: R4 3 or O tex, CH 2. Composé selon la revendication 1 répondant à la formule (IA) suivante : (IA) dans laquelle l'unité A est choisie parmi les groupements de formule : Omo` OU R6 OU OU OU OU R6 Ri ~SH 0 OH R6 2. Compound according to claim 1 corresponding to the following formula (IA): (IA) in which the unit A is chosen from the groups of formula: Omo` OR R6 OR OR OR OR R6 Ri ~ SH 0 OH R6 3. Composé susceptible d'être obtenu à partir d'un composé de formule (I) selon la revendication 1 ou la revendication 2, répondant à la foimule (II) suivante : C ln NH-B'(II) dans laquelle n, R1, R2, R3, R4, R5, R6 et R7, sont tels que définis à la revendication 1, et : l'unité A' est choisie parmi les groupements de formule : N-N Y 0,.........z.z)zzi, o -.,-1-zz,., o -111.4 OU ou RY'''...'"SH Ri' ''''''NH2 Ri''''NFI R6 R6 Re OU OU OU R6\ OU R6 0.-'''OH 0 l'unité B' est choisie parmi les groupements de formule R3 \)111.1 Kr'. N \\ N---N Y OU OU OU OU - Y est choisi parmi un radical alkyle, alcoxy, aryle, aralkyle, hétéroalkyle, hétéroaryle, hétéroaralkyle, un groupe hydrocarboné ou hétérocarboné mono- ou polycyclique saturé ou insaturé, un mono- ou un polysaccharide, ou un dérivé aminé de mono- ou de polysaccharides, un polyether, une polyamine, un polythioéther, un polyester, lesdits radicaux et/ou groupes étant optionnellement substitués par un ou plusieurs groupes hydroxyles, acides, amines, aminoalkyles, aminoacides, thiols, thioalkyles,uréthanes, urées, halogènes, ou un groupement L-V dans lequel L est un bras espaceur (ou linker) et V est un vecteur, et à la condition que : i( soit l'unité A' représente le groupement triazole suivant : R3 N)Le/i, 4 N N----N Y ,7 soit l'unité B' représente l'un des groupements triazoles suivants : R3 OU N7 N-N Y 3. A compound obtainable from a compound of formula (I) according to claim 1 or claim 2, corresponding to the following formula (II): ## STR2 ## wherein R1, R2, R3, R4, R5, R6 and R7 are as defined in claim 1, and: the unit A 'is chosen from the groups of formula: NN Y 0, ........ .zz) zzi, o -., - 1-zz,., o -111.4 OR or RY '' '...' "SH Ri '' '' '' 'NH2 Ri' '' 'NFI R6 R6 Re OR OR OR R6 OR R6 0 .- '' 'OH O' unit B 'is selected from the groups of formula R3 \) 111.1 Kr'. N \\ N --- NY OR OR OR OR - Y is selected from an alkyl, alkoxy, aryl, aralkyl, heteroalkyl, heteroaryl, heteroaralkyl radical, a saturated or unsaturated mono- or polycyclic hydrocarbon or heterocarbon group, a mono- or polysaccharide, or an amine derivative of mono- or polysaccharides, a polyether, a polyamine, a polythioether, a polyester, said radicals and / or groups being optionally substituted with one or more hydroxyl groups, acids, amines, aminoalkyls, amino acids, thiols, thioalkyls, urethanes, ureas, halogens, or an LV group in which L is a spacer arm (or linker) and V is a vector, and provided that: (or unit A 'represents the following triazole group: R3 N) The / i, 4 N N ---- NY, 7 or unit B' represents one of the following triazole groups: R3 OR N7 NN Y 4. Composé selon la revendication 3, répondant à la formule (lIA) suivante : (HA) dans laquelle l'unité A' est choisie parmi les groupements de formule : Rs ou 0,14 Rr'NFI2R OU OU R5<:eizza R(<«"SH OU OU R6 0 OH 4. Compound according to claim 3, corresponding to the following formula (IA): (HA) in which the unit A 'is chosen from the groups of formula: Rs or 0,14 Rr' NFI2R OR OR R5 <: eizza R (<"" SH OR OR R6 0 OH 5. Composé selon la revendication 3 ou la revendication 4, répondant à la formule (IIB) suivante :R2 Ri, R3 R6, NH NH-HR4 R6 sH Y 5. A compound according to claim 3 or claim 4 having the following formula (IIB): R 2 R 1, R 3 R 6, NH NH-HR 4 R 6 sH Y 6. Procédé de préparation d'un composé de formule (II) selon l'une des revendications 3 à 5 par réaction d'un composé de formule (I) selon la revendication 1 ou la revendication 2 avec un azoture organique de type Y-N3 dans lequel Y est tel que défini à la revendication 3, ladite réaction étant réalisée en présence de cuivre. 6. Process for the preparation of a compound of formula (II) according to one of claims 3 to 5 by reaction of a compound of formula (I) according to claim 1 or claim 2 with a Y-type organic azide. N3 wherein Y is as defined in claim 3, said reaction being carried out in the presence of copper. 7. Composé susceptible d'être obtenu à partir d'un composé de formule (II) selon l'une des revendications 3 à 5, répondant à la formule (III) suivante : (III) dans laquelle n, RI, R2, R3, R4, R5, R6 et Y sont tels que définis aux revendications 1 et 3, et : - M est un radioélément métallique, - n' et n", identiques ou différents, sont égaux à 0 ou 1. 7. Compound obtainable from a compound of formula (II) according to one of claims 3 to 5, corresponding to formula (III) below: (III) wherein n, RI, R2, R3 , R4, R5, R6 and Y are as defined in claims 1 and 3, and: - M is a metal radioelement, - n 'and n ", identical or different, are equal to 0 or 1. 8. Composé selon la revendication 7 dans lequel Y est un groupement L-V dans lequel : le bras espaceur L est choisi parmi une chaîne polycarbonée aliphatique ou aromatique substituée ou non substituée, un polyéther, une polyamine, une polylysine, un dendrimère, un polypeptide, une plateforme peptidique linéaire ou cyclique de typeRAFT, un polysaccharide, un phospholipide, un acide nucléique ou un acide nucléique peptidique, et le vecteur V est une molécule biologiquement active choisie parmi un peptide ou un dérivé peptidique, une protéine, un acide nucléique, un liposome, un oligonucléotide d'ADN ou d'ARN modifié ou non modifié, un nucléotide, un nucléoside, un aptamère, ou un acide nucléique peptidique modifié ou non modifié, une vitamine, un stéroïde, un phospholipide, un récepteur du système nerveux central, une polyamine, un polyester, un polythioéther, un polymère aliphatique, aromatique ou hétéroaromatique substitué ou non substitué. The compound of claim 7 wherein Y is an LV group wherein: the spacer arm L is selected from a substituted or unsubstituted aliphatic or aromatic polycarbonyl chain, a polyether, a polyamine, a polylysine, a dendrimer, a polypeptide, a linear or cyclic peptide platform of ARFT type, a polysaccharide, a phospholipid, a nucleic acid or a peptide nucleic acid, and the vector V is a biologically active molecule chosen from a peptide or a peptide derivative, a protein, a nucleic acid, a liposome, a modified or unmodified DNA or RNA oligonucleotide, a nucleotide, a nucleoside, a aptamer, or a modified or unmodified peptide nucleic acid, a vitamin, a steroid, a phospholipid, a central nervous system receptor , a polyamine, a polyester, a polythioether, a substituted or unsubstituted aliphatic, aromatic or heteroaromatic polymer. 9. Composé selon la revendication 8 dans lequel le bras espaceur L est choisi parmi un peptide ou un dérivé peptidique comprenant 1 à 12 résidus acides aminés, le polyoxyde d'éthylène glycol (PEG) ou le polypropylène glycol (PPG) comprenant 1 à 40 unités EG ou PG, une polyamine comprenant 1 à 20 unités monomériques, un mono- ou un polysaccharide comprenant 1 à 20 unités saccharidiques. 9. Compound according to claim 8 wherein the spacer arm L is chosen from a peptide or a peptide derivative comprising 1 to 12 amino acid residues, polyethyleneglycol oxide (PEG) or polypropylene glycol (PPG) comprising 1 to 40 EG or PG units, a polyamine comprising 1 to 20 monomeric units, a mono- or polysaccharide comprising 1 to 20 saccharide units. 10. Composé selon l'une des revendications 7 à 9 dans lequel M est choisi parmi 99cr, 99rn--. 185- 186 - 187 1 C, ° 1 C, 1 c, xe, Re et 188Re, et n et n' sont égaux à 1. 10. Compound according to one of claims 7 to 9 wherein M is selected from 99cr, 99rn--. 185-186-187 1 C, 1C, 1c, xe, Re and 188Re, and n and n 'are equal to 1. 11. Composé selon l'une des revendications 7 à 10 dans lequel Y est un groupement L-V dans lequel L est un bras espaceur et V est un vecteur choisi parmi les molécules biologiquement actives. 11. The compound of claim 7, wherein Y is an L-V group in which L is a spacer arm and V is a vector selected from biologically active molecules. 12. Kit constitué de : - un conteneur comprenant un composé de formule (II) tel que défini selon les revendications 3 à 5 et un agent réducteur, et - un générateur portable comprenant une solution de radioélément métallique, de préférence choisi parmi 94mTc, 99gTc, 99mTc, 185Re, '86Re, 187Re, et 188Re, ledit radioélément métallique étant sous forme d'oxyde, et - un conteneur comprenant une base dans un solvant ou un tampon. 12. Kit consisting of: - a container comprising a compound of formula (II) as defined in claims 3 to 5 and a reducing agent, and - a portable generator comprising a metal radioelement solution, preferably selected from 94mTc, 99gTc , 99mTc, 185Re, 86Re, 187Re, and 188Re, said metal radioelement being in oxide form, and - a container comprising a base in a solvent or a buffer. 13. Composé de formule (III) selon l'une des revendications 7 à 11 pour son utilisation in vivo comme radiotraceur diagnostique. 13. Compound of formula (III) according to one of claims 7 to 11 for its use in vivo as a diagnostic radiotracer. 14. Composé de formule (III) pour son utilisation selon la revendication 13, comme agent de contraste pour le diagnostic, comme agent thérapeutique potentiel, ou comme agent radio-thérapeutique pour la radiothérapie ciblée de pathologies. 14. Compound of formula (III) for its use according to claim 13, as a contrast agent for diagnosis, as a potential therapeutic agent, or as a radiotherapeutic agent for targeted radiotherapy of pathologies. 15. Composé de formule (III) pour son utilisation selon la revendication 14, comme agent de contraste pour le diagnostic par Tomographie d'Emission MonoPhotonique (TEMP) ou Tomographie d'Emission de Positrons (TEP), et de préférence comme radiotraceur de flux circulatoires et métaboliques, ou comme marqueur tissulaire. Compound of formula (III) for its use according to claim 14, as a contrast agent for the diagnosis by MonoPhotonic Emission Tomography (TEMP) or Positron Emission Tomography (PET), and preferably as a flow radiotracer. circulatory and metabolic, or as a tissue marker. 16. Composé de formule (III) selon l'une des revendications 7 à 11 pour son utilisation comme médicament. 16. Compound of formula (III) according to one of claims 7 to 11 for use as a medicament. 17. Composé de formule (III) pour son utilisation selon la revendication 16, comme agent radio-thérapeutique ciblant intégré pour le traitement de cancers, de maladies neurodégénératives, de pathologies du système nerveux central, d'athérosclérose et de thrombose, de maladies cardiovasculaires, de pathologies hépatiques, rénales ou cardiaques, d'hypoxie ou d'inflammation. 17. Compound of formula (III) for its use according to claim 16, as integrated targeting radiotherapeutic agent for the treatment of cancers, neurodegenerative diseases, diseases of the central nervous system, atherosclerosis and thrombosis, cardiovascular diseases. , liver, kidney or heart disease, hypoxia or inflammation. 18. Composé de formule (III) pour son utilisation selon la revendication 16, comme agent radio-thérapeutique bifonctionnel pour des traitements radio-thérapeutiques ciblés choisis parmi la radiothérapie métabolique, la radiothérapie locale, la radiothérapie vectorisée, la radio-immunothérapie et la radio-immunologie. 18. Compound of formula (III) for its use according to claim 16, as a bifunctional radiotherapeutic agent for targeted radiotherapeutic treatments chosen from metabolic radiotherapy, local radiotherapy, vector radiotherapy, radioimmunotherapy and radio. -immunology. 19. Composé de formule (III) pour son utilisation selon la revendication 18, pour le traitement de cancers, de maladies neurodégénératives, de pathologies du système nerveux central, d'athérosclérose et de thrombose, d'hypoxie, d'inflammation, de maladies cardiovasculaires, de pathologies hépatiques, rénales ou cardiaques. 19. Compound of formula (III) for its use according to claim 18, for the treatment of cancers, neurodegenerative diseases, pathologies of the central nervous system, atherosclerosis and thrombosis, hypoxia, inflammation, diseases cardiovascular, hepatic, renal or cardiac pathologies.