FR2950532A1 - PROCESS FOR THE PREPARATION OF AN EXTRACT OF PLANTS OF THE GENUS SCLEROLOBIUM, COSMETIC AND PHARMACEUTICAL COMPOSITION COMPRISING THIS EXTRACT AND THE USE OF SAID EXTRACT - Google Patents

Abstract

La présente invention décrit un procédé de préparation d'extraits de plantes appartenant au genre Sclerolobium, des procédés pour les obtenir, et des formulations cosmétiques et pharmaceutiques contenant de tels extraits. Ces extraits peuvent être obtenus par des extractions polaires et/ou non polaires, chaque fraction contenant différents antioxydants, tous utiles dans un traitement par voie topique. Est également décrite l'utilisation de ces extraits dans des formulations cosmétiques et/ou pharmaceutique à usage topique.The present invention describes a process for preparing plant extracts belonging to the genus Sclerolobium, methods for obtaining them, and cosmetic and pharmaceutical formulations containing such extracts. These extracts can be obtained by polar and / or non-polar extractions, each fraction containing different antioxidants, all useful in a topical treatment. Also described is the use of these extracts in cosmetic and / or pharmaceutical formulations for topical use.

Description

Domaine de l'invention La présente invention concerne un procédé pour préparer des extraits obtenus à partir de plantes du genre Sclerolobium, et l'utilisation desdits extraits en tant qu'antioxydants et qu'agents ayant une activité anti-âge dans des compositions cosmétiques et pharmaceutiques. Field of the Invention The present invention relates to a process for preparing extracts obtained from plants of the genus Sclerolobium, and the use of said extracts as antioxidants and agents having anti-aging activity in cosmetic compositions and pharmaceuticals.

Arrière-plan de l'invention La peau est peut-être l'organe humain le plus exposé au stress oxydatif, y compris aux sources endogènes (enzymes, cellules, processus pathologiques et maladies) et aux sources exogènes (contaminants, gaz atmosphériques, radiations et diverses substances chimiques) d'espèces oxygénées réactives (ROS) qui englobent les radicaux superoxyde, les radicaux oxyde nitrique, et l'oxygène singulet. Les dommages oxydatifs des composants de la peau tels que les lipides, l'ADN et les protéines peuvent avoir un impact significatif sur les fonctions normales de la peau, et peuvent aussi déclencher des processus pathologiques tels qu'une inflammation et un cancer. Les mécanismes de défense les plus spécifiques de la peau contre le stress oxydatif comprennent les enzymes à action directe (SOD, catalase et peroxydase) et de support (G6PD, xanthine oxydase), ainsi que les molécules antioxydantes de faible poids moléculaires ayant une action indirecte (agents chélatants) ou une action directe (agents piégeurs de radicaux libres). Ces dernières comprennent des substances synthétisées par les cellules (GSH, NADH, carnosine) et des substances obtenues à partir de sources alimentaires (carotènes, tocophérols, polyphénols, acides ascorbique et lipoïque, etc.). Bien que ce mécanisme de piégeage des radicaux libres soit efficace uniquement si la concentration relative du piégeur de radicaux libres est suffisamment élevée pour entrer en compétition avec la cible biologique sur 1 l'espèce délétère, il possède aussi plusieurs avantages par rapport au système de défense des enzymes oxydatives (KOHEN et al. 1999). Des études ont montré que l'épiderme possède une activité antioxydante bien supérieure à celle du derme, indiquant que l'épiderme est bien plus sensible que le derme à un stress oxydatif. Il a été démontré que le vieillissement de la peau provoque une diminution significative du pouvoir réducteur des antioxydants de faible poids moléculaire dans les tissus cutanée (KOHEN 1999). Par conséquent, il est souhaitable d'appliquer par voie topique des substances contenant un agent antioxydant au cours du processus de vieillissement afin de rétablir ou d'augmenter la concentration locale d'antioxydants sur le tissu cutané. Les agents antioxydants peuvent être fournis par l'alimentation, et on les trouve dans des aliments d'origine végétale tels que la tomate, la pastèque, la betterave à sucre, le poivre vert, la carotte, la cerise des Antilles, l'asimine, la papaye, l'orange, le citron, le melon, le brocoli, la fraise, la mangue, le kiwi, le chou vert, le pois, la noix de cajou, les noix, les noisettes, la patate douce, l'avoine, l'avocat, les céréales complètes, la citrouille, le chou, l'épinard, le cresson d'eau, le thé, le romarin, le thym, ainsi que dans des aliments d'origine animale tels que, par exemple, la viande, les veufs, le lait, le poisson, les huîtres, les volailles et les mollusques et crustacés. Ils peuvent aussi être fournis par un complément alimentaire. BACKGROUND OF THE INVENTION The skin is perhaps the human organ most exposed to oxidative stress, including endogenous sources (enzymes, cells, pathological processes and diseases) and exogenous sources (contaminants, atmospheric gases, radiation). and various chemical substances) reactive oxygen species (ROS) that include superoxide radicals, nitric oxide radicals, and singlet oxygen. Oxidative damage to skin components such as lipids, DNA, and proteins can have a significant impact on normal skin functions, and can also trigger pathological processes such as inflammation and cancer. The most specific defense mechanisms of the skin against oxidative stress include direct-acting (SOD, catalase and peroxidase) and carrier (G6PD, xanthine oxidase) enzymes, as well as low molecular weight antioxidant molecules with indirect action. (chelating agents) or a direct action (scavengers of free radicals). These include substances synthesized by cells (GSH, NADH, carnosine) and substances obtained from food sources (carotenes, tocopherols, polyphenols, ascorbic and lipoic acids, etc.). Although this free radical scavenging mechanism is effective only if the relative concentration of the free radical scavenger is high enough to compete with the biological target for the deleterious species, it also has several advantages over the defense system. oxidative enzymes (KOHEN et al 1999). Studies have shown that the epidermis has an antioxidant activity much higher than that of the dermis, indicating that the epidermis is much more sensitive than the dermis to oxidative stress. It has been shown that skin aging causes a significant decrease in the reducing power of low molecular weight antioxidants in cutaneous tissues (KOHEN 1999). Therefore, it is desirable to topically apply substances containing an antioxidant during the aging process to restore or increase the local concentration of antioxidants on the skin tissue. Antioxidants can be provided by the diet, and are found in foods of plant origin such as tomato, watermelon, sugar beet, green pepper, carrot, cherry of the West Indies, asimine , papaya, orange, lemon, melon, broccoli, strawberry, mango, kiwi, green cabbage, pea, cashew, walnuts, hazelnuts, sweet potato, oats, avocado, whole grains, pumpkin, cabbage, spinach, watercress, tea, rosemary, thyme, as well as in foods of animal origin such as, for example, meat, widows, milk, fish, oysters, poultry and shellfish. They can also be provided by a dietary supplement.

Toutefois, on sait que, dans les étapes d'absorption, de solubilisation et de transport des agents antioxydants, il se produit une perte significative de ces substances, et donc seulement une petite partie de ces substances atteint réellement la peau. L'administration par voie topique a pour avantage de permettre une plus forte 3 concentration des agents antioxydants sur la région de la peau nécessitant une protection plus importante. Toutefois, pour mettre à disposition une formulation contenant des agents antioxydants, destinée à une administration par voie topique, il faut surmonter certains obstacles, comme par exemple l'instabilité des molécules. L'instabilité des molécules empêche l'obtention d'une formulation cosmétique stable adaptée à l'utilisation recherchée. En outre, nombre de ces substances sont très colorées, ce qui limite les caractéristiques esthétiques du produit. Enfin, les antioxydants doivent avoir un effet photoprotecteur, qui englobe la diminution des érythèmes, la diminution de la formation de cellules photodyskératosiques, la diminution de l'endommagement de l'ADN, comme l'apparition de dimères de thymine ou de nucléotides oxydés, la diminution de l'immunosuppression liée aux UV, la diminution des anomalies pigmentaires et, éventuellement, la diminution des cancers de la peau et du photo-vieillissement (Pinnell, et al. 2003). Par conséquent, des agents oxydatifs capables d'éliminer les ROS ou d'inhiber la peroxydation des lipides peuvent être efficacement utilisés pour la protection contre des maladies ou leur traitement, liées à des espèces radicaux libres oxygénés et pour prévenir le vieillissement (ou les symptômes du vieillissement de la peau). On peut aussi obtenir des substances antioxydantes à partir de légumes qui ne sont pas utilisés dans l'alimentation humaine, comme déjà rapporté dans le brevet US 2003/0170332 et le document WO 2004/009575, lesquelles sont obtenues à partir d'espèces de la famille Pinaceae US 2003/0170332), et de la famille Typhaceae (WO 2004/009575). However, it is known that in the steps of absorption, solubilization and transport of antioxidants, there is a significant loss of these substances, and therefore only a small portion of these substances actually reach the skin. Topical administration has the advantage of allowing a higher concentration of antioxidants on the area of the skin requiring greater protection. However, to provide a formulation containing antioxidants for topical administration, it is necessary to overcome certain obstacles, such as the instability of the molecules. The instability of the molecules prevents the obtaining of a stable cosmetic formulation adapted to the desired use. In addition, many of these substances are very colorful, which limits the aesthetic characteristics of the product. Finally, the antioxidants must have a photoprotective effect, which includes the reduction of erythemas, the decrease in the formation of photodysokeratotic cells, the decrease in the damage of the DNA, as the appearance of thymine dimers or oxidized nucleotides, the decrease in UV-related immunosuppression, the decrease in pigment abnormalities and, possibly, the decrease in skin cancer and photo-aging (Pinnell, et al., 2003). Therefore, oxidative agents capable of removing ROS or inhibiting lipid peroxidation can be effectively used for protection against diseases or their treatment, related to oxygenated free radical species and to prevent aging (or symptoms). aging of the skin). Antioxidant substances can also be obtained from vegetables which are not used in the human diet, as already reported in US Patent 2003/0170332 and WO 2004/009575, which are obtained from species of the Pinaceae family US 2003/0170332), and the family Typhaceae (WO 2004/009575).

Il n'existait pas de rapports concernant des substances antioxydantes obtenues à partir d'espèces du genre Sclerolobium spp de la famille Leguminosae, jusqu'aux études effectuées par les demandeurs de la présente demande. There were no reports of antioxidant substances obtained from Sclerolobium species of the Leguminosae family, up to the studies conducted by the applicants of the present application.

Le genre Sclerolobium spp appartient à la famille Leguminosae, sous-famille Caesalpinioideae, et comprend les espèces S. aureum, S. denudatum et S. paniculatum qui sont des arbres. L'espèce S. aureum, également appelée "fede-fede", "gonçalo-do-campo" et "pau-bosta", est de taille moyenne, possède une écorce rugueuse et détachable, est clair, avec de jeunes branches duveteuses ; les feuilles sont alternes, composées, imparipennées, avec cinq à neuf folioles opposées ou sub-opposées, ovales et oblongues, avec une base obtuse et arrondie, à pointe effilée et arrondie, ayant environ 7 cm de long et 3,5 cm de large, glabres et duveteuses. Les fleurs sont jaune or, odoriférantes, disposées en larges panicules terminales. Les fruits ressemblent à des fèves et sont oblongs, aplatis et indéhiscents. L'espèce S. paniculatum, également appelée "taxi-branco", "carvoeiro" et "passariûva", est un arbre de grande taille avec un pied droit, une écorce blanchâtre et rugueuse à striée chez les arbres jeunes, craquelée chez les arbres plus vieux, les jeunes branches étant pubéruleuses ; les feuilles sont alternes, composées, imparipennées, avec 4 à 8 paires de folioles glabres ou de folioles avec des pilosités claires et largement espacées dans la surface intérieure, oblongues, avec une base arrondie à obtuse, légèrement non équilatérale, avec un pic effilé, ayant une largeur d'environ 7 à 3 cm. Elle a de petites fleurs jaune verdâtre qui sont disposées en panicules terminales et des fruits plats, ellipsoïdes, ressemblant à des fèves (DURINGAN, et al. 2004). Les trois espèces citées sont trouvées au Brésil : on trouve S. aureum dans des zones typiques de "Cerrado" et "Cerradâo". On trouve S. paniculatum en Amazonie, mais elle est aussi largement répandue sur tout le territoire brésilien, en occupant différents types de sols. Cette espèce a le potentiel de restaurer un sol dégradé et 5 d'enrichir les sols de forêts secondaires (DIAS et al. 1991). Elle présente une croissance rapide dans les plantations, avec un rendement élevé en couverture morte, et est susceptible de s'associer avec des bactéries du genre Rhizobium, qui sont des fixateurs potentiels de N2. The genus Sclerolobium spp belongs to the family Leguminosae, subfamily Caesalpinioideae, and includes S. aureum, S. denudatum and S. paniculatum which are trees. The species S. aureum, also called "fede-fede", "gonçalo-do-campo" and "pau-bosta", is of medium size, has a rough and detachable bark, is clear, with young downy branches; the leaves are alternate, compound, imparipinnate, with five to nine opposite or sub-opposite leaflets, ovate and oblong, with an obtuse, rounded base, tapered and rounded, about 7 cm long and 3.5 cm wide , glabrous and downy. The flowers are golden yellow, fragrant, arranged in large terminal panicles. The fruits look like beans and are oblong, flattened and indehiscent. The species S. paniculatum, also called "taxi-branco", "carvoeiro" and "passariûva", is a tall tree with a right foot, a whitish bark and rough striated in young trees, cracked in trees older, the young branches being pubescent; the leaves are alternate, compound, imparipinnate, with 4-8 pairs of glabrous leaflets or leaflets with clear, broadly spaced pilosa in the inner surface, oblong, with a rounded to obtuse base, slightly non-equilateral, with a tapered spike, having a width of about 7 to 3 cm. It has small greenish-yellow flowers that are arranged in terminal panicles and flat, ellipsoid, bean-like fruits (DURINGAN, et al., 2004). The three species mentioned are found in Brazil: S. aureum is found in typical areas of "Cerrado" and "Cerradão". S. paniculatum occurs in the Amazon, but it is also widespread throughout Brazil, occupying different types of soils. This species has the potential to restore degraded soil and enrich secondary forest soils (DIAS et al., 1991). It shows rapid growth in plantations, with a high yield in the forest floor, and is likely to associate with bacteria of the genus Rhizobium, which are potential N2 fixers.

S. denudatum est un arbre endémique de Mata Atlântica, et on le trouve plus fréquemment dans des zones de forêt dense équatoriale, bien qu'il soit actuellement rare. On utilise le squalène en tant qu'ingrédient de formulations cosmétiques en raison de ses propriétés photoprotectrices (HE et al. 2002). L'î-tocophérol (vitamine E) est l'un des antioxydants naturels les plus importants, principalement du fait de son effet inhibiteur sur la peroxydation des lipides (KATSANDIS et al. 1999). L'application par voie topique de lupéol à des doses de 1 à 2 mg/souris empêche la formation et la croissance d'un modèle de cancer induit par le 13-acétate de 12-0-tétradécanoyl-phorbol (TPA) (SALEEM et al. 2004). Il a aussi été montré que le lupéol restaure les dommages, induits par des radicaux libres, aux fragments hydrates de carbone d'ADN, et est aussi capable de réduire les taux de peroxydation in vitro des lipides microsomiaux induite par l'ascorbate de fer (SULTANA et al. 2003). L'application de lupéol pendant 10 jours à des doses de 40 à 80 mg/kg de poids corporel d'un animal diminue la concentration d'urée et de créatinine dans le sang, et la peroxydation des lipides. Une augmentation du taux sanguin de glutathion et de l'activité de catalase dans un modèle de néphrotoxicité induite par le cisplatine a également été observée simultanément (SHIRWAIKAR et al. 2004). Ces données permettent de classer le lupéol comme un antioxydant 6 efficace doté d'un effet chimioprotecteur (TOLSTIKOVA et al. 2006). Le lupéol inhibe la peroxydation des lipides induite par les sels de cuivre (ANDRIKOPOULOS et al. 2003). Le lupéol a aussi une activité anti-inflammatoire, puisqu'il interfère dans la biosynthèse des prostaglandines, en agissant comme un inhibiteur de PGE2 (RAMIREZ-APAN et al. 2004, REYES et al. 2006). La lupénone a une activité inhibitrice significative contre le virus de l'herpès simplex HSV-1 et aussi contre le virus de la fièvre porcine africaine (ASFV) (MADUREIRA et al. 2003). Des activités antifongique (Saccharomyces cerevisiae et Microsporum gypseum), antibactérienne (Escherichia coli, Proteus vulgaris, Pseudomonas pyocyanea, Bacillus subtilis et Staphylococcus aureus) et antioxydante (peroxydation des lipides) de la lupénone ont été rapportées (KIM et al. 2001). Les flavonoïdes, plus spécifiquement ceux contenant des fragments catéchol (ortho-dihydroxyphényle) dans leur structure chimique, tels que les dérivés de quercétine et ceux contenant des fragments pyrogallol (1,2,3-trihydroxyphényle, tels que les dérivés de myricétine, peuvent agir comme des micromolécules antioxydantes dans la suppression d'espèces oxygénées réactives en inhibant des enzymes et chélatant des oligo-éléments, ces deux mécanismes étant impliqués dans la production de radicaux libres ; ainsi que dans le piégeage d'espèces oxygénées réactives et aussi dans l'induction et la protection de défenses antioxydantes (PIETTA 2000). De façon plus spécifique, il est avéré que les flavonoïdes inhibent les enzymes responsables de la production d'anions superoxyde, telles que la xanthine oxydase et la protéine C kinase. Les flavonoïdes inhibent aussi les cyclooxygénases, les lipoperoxydases, les monooxygénases mitochondriales, la glutathion-S-transférase, la succinyloxydase mitochondriale, et la NADH oxygénase, toutes impliquées dans la formation d'espèces oxygénées réactives (URSINI et al. 1994, BROWN et al. 1998). Un certain nombre de flavonoïdes chélatent efficacement les métaux à l'état de traces, tels que le fer et le cuivre, qui jouent un rôle important dans la formation d'espèces oxygénées réactives, la présence de fragments catéchol et pyrogallol et des groupes 4-oxo, conjointement avec 5-hydroxy, étant essentielle à l'efficacité de la chélation. En complément, en raison du faible potentiel redox de ces substances (0,23<E7<0,75V), les flavonoïdes sont thermodynamiquement capables de réduire les radicaux libres fortement oxydés, ayant un potentiel redox compris entre 2,13 et 1,0 V, tels que les radicaux superoxyde, peroxy, alcoxy et hydroxy, en donnant un radical hydrogène (BUETTNER 1993; Robak, & Gryglewiski 1988; Hussain et al. 1987; TOREL et al. 1986). L'utilisation de Sclerolobium spp est mentionnée dans deux documents de la littérature des brevets, à savoir WO 00/03749 et WO 00/03748. Dans ces deux documents, ce genre est suggéré en tant que source de triterpènes pour une utilisation dans des procédés pour réguler la croissance capillaire. Par conséquent, il n'existe pas de rapport concernant l'utilisation de Sclerolobium spp en tant que source d'agents antioxydants. S. denudatum is an endemic tree of Mata Atlântica, and is most commonly found in areas of equatorial dense forest, although it is currently rare. Squalene is used as an ingredient in cosmetic formulations because of its photoprotective properties (HE et al., 2002). I-Tocopherol (vitamin E) is one of the most important natural antioxidants, mainly because of its inhibitory effect on lipid peroxidation (KATSANDIS et al., 1999). Topical application of lupeol at doses of 1-2 mg / mouse prevents the formation and growth of a 12-0-tetradecanoyl-phorbol 13-acetate (TPA) 13-acetate-induced cancer model (SALEEM and 2004). It has also been shown that lupeol restores free radical-induced damage to DNA carbohydrate moieties, and is also able to reduce in vitro microbial lipid peroxidation levels induced by iron ascorbate ( Sultana et al., 2003). The application of lupeol for 10 days at doses of 40 to 80 mg / kg body weight of an animal decreases the concentration of urea and creatinine in the blood, and lipid peroxidation. An increase in glutathione blood level and catalase activity in a cisplatin-induced nephrotoxicity model was also observed simultaneously (SHIRWAIKAR et al., 2004). These data make it possible to classify lupeol as an effective antioxidant with a chemoprotective effect (TOLSTIKOVA et al., 2006). Lupeol inhibits lipid peroxidation induced by copper salts (ANDRIKOPOULOS et al., 2003). Lupeol also has anti-inflammatory activity, since it interferes in the biosynthesis of prostaglandins, acting as an inhibitor of PGE2 (RAMIREZ-APAN et al., 2004, REYES et al., 2006). Lupenone has significant inhibitory activity against herpes simplex virus HSV-1 and also against African swine fever virus (ASFV) (MADUREIRA et al., 2003). Anti-fungal (Saccharomyces cerevisiae and Microsporum gypseum), antibacterial (Escherichia coli, Proteus vulgaris, Pseudomonas pyocyanea, Bacillus subtilis and Staphylococcus aureus) and antioxidant (lipid peroxidation) activities of lupenone have been reported (KIM et al., 2001). Flavonoids, more specifically those containing catechol (ortho-dihydroxyphenyl) moieties in their chemical structure, such as quercetin derivatives and those containing pyrogallol (1,2,3-trihydroxyphenyl) moieties, such as myricetin derivatives, may act as antioxidant micromolecules in the suppression of reactive oxygen species by inhibiting enzymes and chelating trace elements, both mechanisms being involved in the production of free radicals, as well as in the trapping of reactive oxygen species and also in the Induction and protection of antioxidant defenses (PIETTA 2000) More specifically, flavonoids have been shown to inhibit the enzymes responsible for the production of superoxide anions, such as xanthine oxidase and protein kinase. cyclooxygenases, lipoperoxidases, mitochondrial monooxygenases, glutathione-S-trans ferase, mitochondrial succinyloxidase, and NADH oxygenase, all involved in the formation of reactive oxygen species (URSINI et al. 1994, BROWN et al. 1998). A number of flavonoids effectively chelate trace metals, such as iron and copper, which play an important role in the formation of reactive oxygen species, the presence of catechol and pyrogallol fragments, and 4- oxo, together with 5-hydroxy, being essential to the effectiveness of chelation. In addition, because of the low redox potential of these substances (0.23 <E7 <0.75V), flavonoids are thermodynamically capable of reducing highly oxidized free radicals, having a redox potential between 2.13 and 1.0 V, such as superoxide, peroxy, alkoxy and hydroxy radicals, giving a hydrogen radical (BUETTNER 1993, Robak & Gryglewiski 1988, Hussain et al 1987, TOREL et al 1986). The use of Sclerolobium spp is mentioned in two documents of the patent literature, namely WO 00/03749 and WO 00/03748. In both of these documents, this genus is suggested as a source of triterpenes for use in methods for regulating hair growth. Therefore, there is no report regarding the use of Sclerolobium spp as a source of antioxidants.

Un objet de la présente invention est de fournir un procédé pour obtenir des extraits bioactifs de plantes Sclerolobium spp et son utilisation pour fournir des substances antioxydantes et/ou anti-inflammatoires. An object of the present invention is to provide a method for obtaining bioactive extracts of Sclerolobium spp plants and its use to provide antioxidant and / or anti-inflammatory substances.

Résumé de l'invention La présente invention concerne un procédé de préparation d'extraits de plantes du genre Sclerolobium, comprenant les étapes consistant à : a) amener un matériau végétal choisi parmi les plantes appartenant au genre Sclerolobium en contact avec 8 au moins solvant d'extraction approprié ; b) agiter le mélange ; et c) séparer la phase liquide de la phase solide. Dans un autre mode de réalisation, l'invention concerne des compositions cosmétiques et pharmaceutiques comprenant un extrait du genre Sclerolobium tel qu'obtenu par le procédé décrit ci-dessus. La présente invention a encore pour objet l'utilisation d'un extrait obtenu par le procédé défini ci-dessus, pour la préparation de formulations cosmétiques ou pharmaceutiques présentant une activité antioxydante. Le procédé de la présente invention permet la préparation d'extraits bioactifs normalisés de plantes Sclerolobium spp. Summary of the Invention The present invention relates to a process for preparing plant extracts of the genus Sclerolobium, comprising the steps of: a) bringing a plant material selected from plants belonging to the genus Sclerolobium into contact with at least 8 solvent appropriate extraction; b) stir the mixture; and c) separating the liquid phase from the solid phase. In another embodiment, the invention relates to cosmetic and pharmaceutical compositions comprising an extract of the genus Sclerolobium as obtained by the method described above. The present invention further relates to the use of an extract obtained by the process defined above, for the preparation of cosmetic or pharmaceutical formulations having antioxidant activity. The process of the present invention allows the preparation of standardized bioactive extracts of Sclerolobium spp.

Un objet de la présente invention consiste à utiliser des plantes du genre Sclerolobium spp pour fournir des substances antioxydantes et/ou anti-inflammatoires. Un objet de la présente invention est aussi de mettre à disposition un procédé pour extraire des extraits végétaux organiques et hydro-alcooliques à partir d'extraits végétaux de Sclerolobium spp. Le procédé pour préparer des extraits organiques à partir d'espèces du genre Sclerolobium comprend les étapes suivantes . a) séchage du tissu végétal ; b) broyage du tissu végétal du point a) ; et c) extraction du matériau du point b) avec un solvant organique. La production d'extraits hydro-alcooliques à partir d'espèces du genre Sclerolobium comprend les étapes suivantes . a) séchage du tissu végétal ; b) broyage du tissu végétal du point a) ; et c) extraction du matériau du point b) avec une solution hydro-alcoolique. 9 Un exemple du tissu végétal comprend, mais sans s'y limiter, les feuilles de l'espèce Sclerolobium spp. An object of the present invention is to use plants of the genus Sclerolobium spp to provide antioxidant and / or anti-inflammatory substances. An object of the present invention is also to provide a method for extracting organic and hydro-alcoholic plant extracts from plant extracts of Sclerolobium spp. The process for preparing organic extracts from Sclerolobium species comprises the following steps. a) drying the plant tissue; b) grinding of the plant tissue of point a); and c) extracting material from point b) with an organic solvent. The production of hydroalcoholic extracts from species of the genus Sclerolobium comprises the following steps. a) drying the plant tissue; b) grinding of the plant tissue of point a); and c) extraction of the material from point b) with an aqueous-alcoholic solution. An example of the plant tissue includes, but is not limited to, leaves of the species Sclerolobium spp.

Brève description des dessins La Figure 1 montre des diagrammes schématiques décrivant les modes opératoires utilisés pour la production des substances antioxydantes et des fractions antioxydantes lipophiles (FAL) issues de l'extrait organique hydrophile (FAH) lui-même issu de l'extrait hydro-alcoolique, à partir de feuilles de l'espèce Sclerolobium spp. PE-DVB : polystyrène-divinylbenzène. La Figure 2 montre les substances antioxydantes présentes dans les extraits et les fractions antioxydantes (FAH et FAL) de Sclerolobium paniculatum, Sclerolobium aureum et Sclerolobium denudatum î-tocophérol (1), squalène (2), lupéol (3), lupénone (4), myricétine-3-0- galactopyranoside (5), myricétine-3-0-rhamnopyranoside (6), quercétine-3-0-galactopyranoside (7), quercétine-3-0- arabinopyranoside (8), quercétine-3-0-rhamnopyranoside (9), myricétine-3-0-(3"-galloil-rhamnopyranoside) (10), myricétine-3-0-(2"-galloil-rhamnopyranoside) (11). La Figure 3 montre les chromatogrammes obtenus par chromatographie liquide haute performance à inversion de phases des extraits organiques de Sclerolobium aureum (A), de Sclerolobium denudatum (B), de Sclerolobium paniculatum (C) et d'agents antioxydants (D) servant d'étalons : y-tocophérol (11,01 min), lupénone (11,96 min), î-tocophérol (12,75 min) et squalène (20,19 min). Brief Description of the Drawings Figure 1 shows schematic diagrams describing the procedures used for the production of antioxidant substances and lipophilic antioxidant moieties (FAL) derived from the hydrophilic organic extract (FAH) itself derived from the hydrophilic extract. alcoholic, from leaves of the species Sclerolobium spp. PE-DVB: polystyrene-divinylbenzene. Figure 2 shows the antioxidant substances present in the extracts and antioxidant fractions (FAH and FAL) of Sclerolobium paniculatum, Sclerolobium aureum and Sclerolobium denudatum 1-tocopherol (1), squalene (2), lupeol (3), lupenone (4) , myricetin-3-O-galactopyranoside (5), myricetin-3-O-rhamnopyranoside (6), quercetin-3-O-galactopyranoside (7), quercetin-3-O-arabinopyranoside (8), quercetin-3-0 -rhamnopyranoside (9), myricetin-3-0- (3 "-galloil-rhamnopyranoside) (10), myricetin-3-O- (2" -glomo-rhamnopyranoside) (11). FIG. 3 shows the chromatograms obtained by reversed-phase high performance liquid chromatography of the organic extracts of Sclerolobium aureum (A), Sclerolobium denudatum (B), Sclerolobium paniculatum (C) and antioxidant agents (D) serving as standards: γ-tocopherol (11.01 min), lupenone (11.96 min), 1-tocopherol (12.75 min) and squalene (20.19 min).

La Figure 4 montre les chromatogrammes obtenus par chromatographie liquide haute performance à inversion de phases des extraits hydro-alcooliques de Sclerolobium aureum (A), de Sclerolobium paniculatum (B), de Sclerolobium denudatum (C) et des étalons utilisés . myricétine (13,06 min), quercétine-3-0-arabinopyranoside (17,03 min), quercétine-2"-O-galloil-rhamnopyranoside (22,38 min) (D). La Figure 5 montre les activités de piégeage du radical DPPH que présentent les extraits hydro-alcooliques de Sclerolobium aureum (W : eau ; EtOH : éthanol). La Figure 6 montre les activités de piégeage du radical DPPH que présentent les extraits hydro-alcooliques de Sclerolobium denudatum (W : eau ; EtOH : éthanol). La Figure 7 montre les activités de piégeage du radical DPPH que présentent les extraits hydro-alcooliques de Sclerolobium paniculatum (W : eau ; EtOH : éthanol). La Figure 8 montre les activités de piégeage du radical DPPH que présentent les flavonoïdes glycosylés, qui correspondent aux numéros 5 à 11 sur la Figure 2. A titre de témoin positif, on a utilisé de la rutine dissoute dans du méthanol. La Figure 9 montre l'évaluation de la protection contre les peroxydases lipidiques, pendant 1 et 2 heures, de liposomes traités avec des échantillons d'extraits obtenus à partir de feuilles de S. aureum. On a administré aux liposomes l'extrait hydro-alcoolique à 50 % (SaHA), l'extrait organique (SaH) et la fraction d'antioxydants lipophiles (SaFAL) à des concentrations situées dans la plage allant de 40 à 400 pg/ml. Figure 4 shows the chromatograms obtained by reversed-phase high performance liquid chromatography of the hydro-alcoholic extracts of Sclerolobium aureum (A), Sclerolobium paniculatum (B), Sclerolobium denudatum (C) and the standards used. myricetin (13.06 min), quercetin-3-0-arabinopyranoside (17.03 min), quercetin-2 "-O-galloil-rhamnopyranoside (22.38 min) (D) Figure 5 shows the trapping activities of the DPPH radical exhibited by the hydro-alcoholic extracts of Sclerolobium aureum (W: water, EtOH: ethanol) Figure 6 shows the DPPH radical scavenging activities exhibited by the hydro-alcoholic extracts of Sclerolobium denudatum (W: water; EtOH). Figure 7 shows the DPPH radical scavenging activities exhibited by the hydroalcoholic extracts of Sclerolobium paniculatum (W: water, EtOH: ethanol) Figure 8 shows the DPPH radical scavenging activities of flavonoids glycosylated, which correspond to numbers 5 to 11 in Figure 2. As a positive control, rutin dissolved in methanol was used Figure 9 shows the evaluation of protection against lipid peroxidases, during 1 and 2 hours, of liposomes s with samples of extracts obtained from leaves of S. aureum. Liposomes were administered with the 50% hydroalcoholic extract (SaHA), the organic extract (SaH) and the lipophilic antioxidant fraction (SaFAL) at concentrations ranging from 40 to 400 μg / ml. .

La Figure 10 montre l'évaluation de la protection contre la peroxydation des lipides, pendant 1 et 2 heures, de liposomes traités avec des mélanges d'agents antioxydants hydrophiles et lipophiles obtenus à partir d'extraits de feuilles de S. aureum extrait hydro- alcoolique à 50 % (SaHa) et extrait organique (SaH) 60/40 (m/m), et le mélange contenant l'extrait hydro-alcoolique à 50 % (SaHA) et la fraction d'antioxydants lipophiles (SaFAL) 50/50 (m/m). Les deux mélanges ont été administrés à une concentration de 40 pg/ml.35 La Figure 11 montre le rendement en tous les flavonoïdes glycosylés obtenus à partir des extraits hydro-alcooliques de trois espèces de Sclerolobium spp en fonction du poids sec des feuilles utilisées. Figure 10 shows the evaluation of the protection against lipid peroxidation, for 1 and 2 hours, of liposomes treated with mixtures of hydrophilic and lipophilic antioxidants obtained from leaf extracts of S. aureum hydrophilic extract. 50% alcoholic (SaHa) and 60/40 (m / m) organic extract (Hg), and the mixture containing the 50% hydroalcoholic extract (SaHA) and the lipophilic antioxidant fraction (SaFAL) 50 / 50 (m / m). Both mixtures were administered at a concentration of 40 μg / ml. Figure 11 shows the yield of all glycosylated flavonoids obtained from the hydroalcoholic extracts of three species of Sclerolobium spp as a function of the dry weight of the leaves used.

La Figure 12 montre le rendement en les dérivés glycosylés des flavonoïdes myricétine et quercétine dans les extraits de feuilles de trois espèces de Sclerolobium. Les résultats sont exprimés en milligrammes de flavonoïdes par gramme de feuilles sèches. Figure 12 shows the yield of the glycosylated derivatives of flavonoids myricetin and quercetin in leaf extracts of three species of Sclerolobium. The results are expressed in milligrams of flavonoids per gram of dry leaves.

La Figure 13 montre des dessins illustrant les fractions et l'image d'une plaque de CCMC sur gel de silice des fractions d'extraits organiques F1, F2 et F3, après extraction en phase solide avec du charbon actif. La Figure 14 montre les chromatogrammes obtenus par chromatographie liquide haute performance (CLHP-UV) des fractions F1, F2 et F3 obtenues à partir de l'extrait de feuilles sèches de Sclerolobium aureum. Les chromatogrammes ont été obtenus à 200 nm avec une colonne C-18 en éluant avec 2,0 ml/min d'acétonitrile. Ont été injectés des volumes de 10 pl de chaque échantillon. La Figure 15 montre les chromatogrammes obtenus par chromatographie liquide haute performance (CLHP-UV) des fractions XAD-A dans l'eau (A), XAD-B dans l'eau/éthanol 1/1 (B), XAD-C dans l'éthanol (C) et XAD-D dans l'acétate de nitrile (D), de l'extrait hydro-alcoolique. Les chromatogrammes ont été obtenus à 254 nm avec une colonne C-18 en éluant avec de l'acétonitrile 16-21 % pendant 13 minutes, de l'acétonitrile 21-35 % pendant 25 minutes, de l'acétonitrile 35 % pendant jusqu'à 30 minutes, à un débit de 1,5 ml/min. Ont été injectés des volumes de 20 pl de chaque échantillon. La Figure 16 représente un graphique donnant l'évaluation de l'action antioxydante des flavonoïdes obtenues à partir de l'extrait hydro-alcoolique.35 Description détaillée de l'invention Pour les propos de la présente invention, on utilise les abréviations et acronymes suivants : ACN - acétonitrile AcOEt - acétate d'éthyle CC - chromatographie sur colonne CCM - chromatographie sur couche mince CCMC - chromatographie sur couche mince comparative CDC13 - chloroforme deutérié CLHP - chromatographie liquide haute performance DAD - détecteur à barrette de diodes DMSO - diméthylsulfoxyde DPPH - 2,2-diphényl-l-picrylhydrazyle EH - extrait non-polaire ou hexanique EHA - extrait polaire ou hydro-alcoolique SM - spectromètre de masse EtOH - éthanol FAH - fraction enrichie en antioxydants hydrophiles FAL - fraction enrichie en antioxydants lipophiles Hex - hexane HOAc - acide acétique ESI - ionisation par électronébuliseur MeOH - méthanol RMN - résonance magnétique nucléaire SVF - sérum de veau foetal SPMH - Sclerolobium paniculatum - extrait mixte (hexanique + hydro-alcoolique) TMS - triméthylsilane UV - ultraviolet VIS - visible La présente invention combine des extraits et des fractions polaires et non polaires, en associant des antioxydants avec des chimioprotecteurs hydrophiles et lipophiles, afin d'obtenir des effets additifs dans la protection contre la peroxydation des lipides. En outre, la présente invention fournit des modes opératoires pour obtenir les fractions antioxydantes FAH et FAL en l'absence de pigments, en permettant ainsi la préparation de formulations cosmétiques plus attrayantes. Figure 13 shows drawings illustrating the fractions and the image of a silica gel CCMC plate of organic extract fractions F1, F2 and F3, after solid phase extraction with activated carbon. Figure 14 shows the chromatograms obtained by high performance liquid chromatography (HPLC-UV) fractions F1, F2 and F3 obtained from the extract of dry leaves of Sclerolobium aureum. Chromatograms were obtained at 200 nm with a C-18 column eluting with 2.0 ml / min of acetonitrile. 10 μl volumes of each sample were injected. Figure 15 shows the chromatograms obtained by high performance liquid chromatography (HPLC-UV) of fractions XAD-A in water (A), XAD-B in water / ethanol 1/1 (B), XAD-C in ethanol (C) and XAD-D in nitrile acetate (D), hydroalcoholic extract. The chromatograms were obtained at 254 nm with a C-18 column eluting with 16-21% acetonitrile for 13 minutes, 21-35% acetonitrile for 25 minutes, 35% acetonitrile for up to 25 minutes. at 30 minutes at a flow rate of 1.5 ml / min. 20 μl volumes of each sample were injected. 16 represents a graph giving the evaluation of the antioxidant action of the flavonoids obtained from the hydroalcoholic extract. DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION For the purposes of the present invention, the following abbreviations and acronyms are used. : ACN - acetonitrile AcOEt - ethyl acetate CC - column chromatography TLC - thin layer chromatography CCMC - comparative thin layer chromatography CDC13 - deuterated chloroform HPLC - high performance liquid chromatography DAD - diode array detector DMSO - dimethylsulfoxide DPPH - 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl EH - nonpolar or hexanic extract EHA - polar or hydroalcoholic extract MS - mass spectrometer EtOH - ethanol FAH - hydrophilic antioxidant enriched fraction FAL - lipophilic antioxidant enriched fraction Hex - hexane HOAc - ESI acetic acid - electrospray ionization MeOH - methanol NMR - nuclear magnetic resonance SVF area - fetal calf serum SPMH - Sclerolobium paniculatum - mixed extract (hexane + hydro-alcoholic) TMS - trimethylsilane UV - ultraviolet VIS - visible The present invention combines polar and non-polar extracts and fractions, combining antioxidants with hydrophilic and lipophilic chemoprotectors, in order to obtain additive effects in the protection against lipid peroxidation. In addition, the present invention provides procedures for obtaining FAH and FAL antioxidant moieties in the absence of pigments, thereby enabling the preparation of more attractive cosmetic formulations.

Les inventeurs de la présente invention ont étudié des espèces provenant du genre Sclerolobium spp, car les espèces provenant de ce genre sont endémiques au Brésil. De plus, la présente invention a pour objet la normalisation d'extraits de Sclerolobium spp, en particulier d'extraits de feuilles, dans le but d'étudier ceux-ci à titre de sources de matières premières d'antioxydants naturels, trouvant application dans des formulations cosmétiques et pharmaceutiques. Le bois de l'espèce Sclerolobium est déjà utilisé par les producteurs de charbon, et le fait de rendre cette invention valable en utilisant un matériau, en particulier des feuilles, d'espèces provenant de ce genre, qui sont actuellement jetées, va permettre d'augmenter la rentabilité de la culture de Sclerolobium spp, en stimulant ainsi l'agriculture familiale et la récupération de la densité arboricole dans des zones dégradées. Le procédé de préparation d'extraits végétaux du genre Sclerolobium de la présente invention, comprend les étapes . a) de mise en contact du matériau végétal choisi parmi des plantes appartenant au genre Sclerolobium avec au moins un solvant d'extraction approprié ; b) d'agitation du mélange ; et c) de séparation de la phase liquide de la phase solide. Selon un mode de réalisation préférée de l'invention, l'agitation de l'étape b) est effectuée par sonification et l'étape de séparation des phases liquide et solide est effectuée par centrifugation. The inventors of the present invention have investigated species from the genus Sclerolobium spp, as species of this genus are endemic to Brazil. In addition, the present invention relates to the normalization of extracts of Sclerolobium spp., In particular extracts of leaves, for the purpose of studying them as sources of raw materials of natural antioxidants, finding application in cosmetic and pharmaceutical formulations. The Sclerolobium species is already used by coal producers, and making this invention valuable by using a material, particularly leaves, of such species, which are currently being thrown away, will allow increase the profitability of Sclerolobium spp. cultivation, thus stimulating family farming and the recovery of tree density in degraded areas. The process for preparing plant extracts of the genus Sclerolobium of the present invention comprises the steps. a) contacting the plant material selected from plants belonging to the genus Sclerolobium with at least one appropriate extraction solvent; b) stirring the mixture; and c) separating the liquid phase from the solid phase. According to a preferred embodiment of the invention, the stirring of step b) is carried out by sonification and the liquid and solid phase separation step is carried out by centrifugation.

Selon un aspect plus spécifique de la présente invention, le procédé peut comprendre les étapes initiales suivantes . - séchage du tissu végétal ; - broyage du tissu végétal séchée ; et - extraction de la matière broyée avec un solvant organique. Des exemples de tissus végétaux sont, mais sans s'y limiter, les feuilles de l'espèce Sclerolobium spp, telle Sclerolobium aureum, Sclerolobium paniculatum, Sclerolobium denudatum et leurs mélanges. Les taux les plus élevés d'agents actifs sont détectés dans les feuilles, mais les fleurs, tiges, racines, fruits, écorces et leurs mélanges peuvent également être utilisés. Des exemples de solvants organiques pouvant être utilisés dans le procédé de la présente invention sont des solvants organiques polaires et non polaires, parmi lesquels les solvants non polaires sont choisis dans l'ensemble comprenant l'hexane, les éthers, le dichlorométhane, le chloroforme, l'acétate d'éthyle, l'hexane étant préféré. Les solvants polaires peuvent être choisis dans l'ensemble comprenant l'eau, le méthanol, l'éthanol, le propanol, le butanol, l'éthylène glycol, le propylène glycol, le glycérol et leurs mélanges. Selon un mode de réalisation de la présente invention, le procédé d'obtention d'extraits hexaniques d'espèces du genre Sclerolobium comprend les étapes suivantes ; - séchage du tissu végétal ; - broyage du tissu végétal séché ; et - extraction de la matière broyée avec une solution hexanique. L'extrait végétal résultant peut éventuellement être décoloré au moyen de matières adsorbantes qui sont des résines décolorantes choisies dans l'ensemble comprenant les résines servant à extraire les pigments des plantes, telles que la Celite® et ses dérivés, le charbon actif, la terre de diatomées, le Divergan®F, le poly(acétate de vinyle), l'éthylcellulose, le poly(méthacrylate de méthyle), les copolymères de méthacryloéthylbétaïne/méthacrylate, les copolymères d'acide méthacrylique, les copolymères de méthacrylate d'aminoalkyle, l'acétophtalate de cellulose, le poly(N- vinylpipéridone), le poly(N-vinyl-2-caprolactame), le poly(N-vinyl-3-méthyl-2-caprolactame), la poly(N-vinyl-3- méthyl-2-pipéridone), le poly(N-vinyl-4-méthyl-2-pipéridone), le poly(N-vinyl-4-méthyl-2-caprolactame), le poly(N-vinyl-3-éthyl-2-pyrrolidone), le poly(N-vinyl-4,5-diméthyl-2-pyrrolidone) et leurs mélanges. Selon un autre mode de réalisation de la présente invention, le procédé pour obtenir les extraits hydro- alcooliques d'espèces du genre Sclerolobium comprend les étapes suivantes . - séchage du tissu végétal ; - broyage du tissu végétal séché ; et - extraction de la matière broyée avec une solution hydro-alcoolique. Un exemple de solution hydro-alcoolique comprend, mais sans s'y limiter, une solution d'éthanol/eau 1/1 (v/v), mais on peut aussi utiliser le méthanol, le propanol ou l'isopropanol, l'éthanol étant préféré. Selon ce mode de réalisation, l'extrait végétal peut éventuellement être décoloré au moyen des matières adsorbantes qui sont des résines décolorantes choisies dans l'ensemble comprenant les résines servant à extraire les pigments des plantes, telles que les résines échangeuses d'ions comme les résines polymères mixtes polystyrène-divinylbenzène (XAD-4®), le charbon actif, le divergan F (PVP), le poly(acétate de vinyle), l'éthylcellulose, le poly(méthacrylate de méthyle), un copolymère de méthacryloéthylbétaïne/méthacrylate, les 16 copolymères d'acide méthacrylique tels qu'Eudragit L 100®, Eudragit L 125®, Eudragit L 100-55®, Eudragit L 30D-55®, les polymères de méthacrylate d'aminoalkyle, l'acétophtalate de cellulose, et leurs mélanges, le poly(N-vinylpipéridone), le poly(N-vinyl-2-caprolactame), le poly(N-vinyl-3-méthyl-2-caprolactame), la poly(N-vinyl- 3-méthyl-2-pipéridone), le poly(N-vinyl-4-méthyl-2-pipéridone), le poly(N-vinyl-4-méthyl-2-caprolactame), le poly(N-vinyl-3-éthyl-2-pyrrolidone), le poly(N-vinyl-4,5- diméthyl-2-pyrrolidone) et analogues, ainsi que leurs mélanges. En général, l'étape éventuelle de décoloration de l'extrait obtenu comprend les étapes spécifiques suivantes . d) dissolution de l'extrait dans un solvant approprié ; e) dépôt de l'extrait dissous obtenu en d) sur une colonne contenant la matière adsorbante ; f) introduction d'une solution d'éluent dans la colonne prévue en e). L'étape de dissolution est effectuée dans un solvant non polaire choisi dans l'ensemble comprenant l'hexane, le tétrachlorure de carbone, le chloroforme, le dichlorométhane et leurs mélanges, ou dans un solvant polaire choisi dans l'ensemble comprenant l'eau, le méthanol, l'éthanol, le propanol, le propylène glycol, le butanol, le glycérol et leurs mélanges. Selon un mode de réalisation préféré de l'invention, la matière absorbante de l'étape e), est le charbon actif quand un extrait non polaire est préparé, ou une résine de polystyrène-divinylbenzène quand un extrait polaire est préparé. L'éluent de l'étape f) est choisi dans l'ensemble comprenant l'hexane, l'acétate d'éthyle, l'eau, l'éthanol et leurs mélanges. De préférence, ledit élément est choisi entre un mélange d'hexane et d'acétate d'éthyle dans un rapport 9 : 1 (v/v) et un mélange d'eau et d' éthanol dans un rapport 1 : 1 (v/v). In a more specific aspect of the present invention, the method may comprise the following initial steps. drying of the plant tissue; - crushing the dried plant tissue; and extracting the milled material with an organic solvent. Examples of plant tissues are, but not limited to, leaves of the Sclerolobium species, such as Sclerolobium aureum, Sclerolobium paniculatum, Sclerolobium denudatum, and mixtures thereof. The highest levels of active agents are detected in the leaves, but flowers, stems, roots, fruits, bark and their mixtures can also be used. Examples of organic solvents that can be used in the process of the present invention are polar and nonpolar organic solvents, of which the nonpolar solvents are selected from the group consisting of hexane, ethers, dichloromethane, chloroform, ethyl acetate, hexane being preferred. The polar solvents may be selected from the group consisting of water, methanol, ethanol, propanol, butanol, ethylene glycol, propylene glycol, glycerol and mixtures thereof. According to one embodiment of the present invention, the process for obtaining hexanic extracts of species of the genus Sclerolobium comprises the following steps; drying of the plant tissue; - crushing the dried plant tissue; and extracting the milled material with a hexane solution. The resulting plant extract may optionally be decolorized by means of adsorbent materials which are bleaching resins selected from the group consisting of resins for extracting pigments from plants, such as Celite® and its derivatives, activated carbon, earth diatoms, Divergan®F, polyvinyl acetate, ethylcellulose, poly (methylmethacrylate), methacryloethylbetaine / methacrylate copolymers, methacrylic acid copolymers, aminoalkyl methacrylate copolymers, cellulose acetophthalate, poly (N-vinylpiperidone), poly (N-vinyl-2-caprolactam), poly (N-vinyl-3-methyl-2-caprolactam), poly (N-vinyl-3) - methyl-2-piperidone), poly (N-vinyl-4-methyl-2-piperidone), poly (N-vinyl-4-methyl-2-caprolactam), poly (N-vinyl-3-ethyl) -2-pyrrolidone), poly (N-vinyl-4,5-dimethyl-2-pyrrolidone) and mixtures thereof. According to another embodiment of the present invention, the process for obtaining the hydroalcoholic extracts of Sclerolobium species comprises the following steps. drying of the plant tissue; - crushing the dried plant tissue; and extracting the milled material with an aqueous-alcoholic solution. An example of an aqueous-alcoholic solution includes, but is not limited to, an ethanol / water solution 1/1 (v / v), but it is also possible to use methanol, propanol or isopropanol, ethanol. being preferred. According to this embodiment, the plant extract may optionally be decolorized by means of the adsorbent materials which are bleaching resins selected from the group consisting of resins for extracting pigments from plants, such as ion exchange resins such as polystyrene-divinylbenzene mixed polymer resins (XAD-4®), activated carbon, divergan F (PVP), polyvinyl acetate, ethylcellulose, poly (methyl methacrylate), a methacryloethylbetaine / methacrylate copolymer methacrylic acid copolymers such as Eudragit L 100®, Eudragit L 125®, Eudragit L 100-55®, Eudragit L 30D-55®, aminoalkyl methacrylate polymers, cellulose acetate phthalate, and the like; mixtures thereof, poly (N-vinylpiperidone), poly (N-vinyl-2-caprolactam), poly (N-vinyl-3-methyl-2-caprolactam), poly (N-vinyl-3-methyl) 2-piperidone), poly (N-vinyl-4-methyl-2-piperidone), poly (N-vinyl-4-methyl) 1- (2-caprolactam), poly (N-vinyl-3-ethyl-2-pyrrolidone), poly (N-vinyl-4,5-dimethyl-2-pyrrolidone) and the like, and mixtures thereof. In general, the optional step of bleaching the extract obtained comprises the following specific steps. d) dissolving the extract in a suitable solvent; e) depositing the dissolved extract obtained in d) on a column containing the adsorbent material; f) introduction of an eluent solution in the column provided for in e). The dissolving step is carried out in a non-polar solvent selected from the group consisting of hexane, carbon tetrachloride, chloroform, dichloromethane and mixtures thereof, or in a polar solvent selected from the group consisting of water , methanol, ethanol, propanol, propylene glycol, butanol, glycerol and mixtures thereof. According to a preferred embodiment of the invention, the absorbent material of step e) is the activated carbon when a non-polar extract is prepared, or a polystyrene-divinylbenzene resin when a polar extract is prepared. The eluent of step f) is selected from the group consisting of hexane, ethyl acetate, water, ethanol and mixtures thereof. Preferably, said element is selected from a mixture of hexane and ethyl acetate in a ratio of 9: 1 (v / v) and a mixture of water and ethanol in a ratio of 1: 1 (v / v). v).

Exemple Matériau végétal - On a collecté des feuilles de Sclerolobium paniculatum à l'Instituto Florestal de Assis, à Assis-SP, le 18 juillet 2003, tandis que l'on a collecté l'espèce Sclerolobium aureum dans un champ, près du km 376 de SP-333, à Assis, Sao Paulo, le même mois. L'espèce Sclerolobium denudatum a été collecté à l'USP Campus, Sào Paulo, en septembre 2003. Exemple 1 Obtention et quantification des extraits hexaniques de feuilles de S. aureum, S. denudatum et S. paniculatum Extrait hexanique - On a extrait 500 mg de feuilles, qui avaient été séchées sans exposition au soleil et broyées, avec 5 ml d'hexane par sonification (30 minutes). Après centrifugation (10 minutes, 1200 t/min), on a retiré le surnageant (extrait hexanique). On a répété ce mode opératoire 5 fois, ce qui a conduit aux extraits hexaniques 1, 2, 3, 4 et 5 que l'on a combinés après échantillonnage pour pesage et analyse CLHP. Dans ces extraits, on a déterminé le tocophérol, le y-tocophérol, le squalène et la lupénone. Exemple 2 A. Décoloration d'extrait hexanique On a soumis l'extrait hexanique de S. aureum à une extraction en phase solide avec trois phases stationnaires distinctes, à savoir du charbon actif, de la Celite® et du Divergan. Le but des extractions était d'obtenir une fraction riche en composants antioxydants, ayant peu ou pas de pigment. B. Décoloration d'extrait hexanique avec du charbon actif 18 On a utilisé une colonne en verre contenant 5,0 g de charbon actif. On a mis en suspension dans l'hexane un mélange de 9,0 g d'échantillon et de 40 g de charbon actif, et on a déposé le tout sur la colonne. On a élué l'échantillon avec 300 ml d'hexane (FI), 250 ml d'hexane/AcOEt (9/1) (F2) et 750 ml d'AcOEt (F3). L'addition de 40 g de charbon actif à 9 g de l'échantillon d'extrait est essentielle pour décolorer l'extrait. On peut aussi utiliser d'autres options de solvants non polaires, comme des mélanges d'hexane avec du chloroforme, du dichlorométhane, de l'acétone, de l'isopropanol, des éthers, mais on utilise de préférence un mélange d'hexane/AcOEt. Les fractions Fl et F2, éluées dans l'hexane et l'hexane/AcOEt (9/1) respectivement, dans le procédé d'extraction en phase solide avec du charbon actif, présentaient visuellement peu ou pas de pigmentation ; et seule la fraction F3 présentait une pigmentation verte plus intense (Figure 13). Toutefois, les analyses CCMC et CLHP (Figures 13 et 14) montrent que toutes les fractions obtenues présentent des substances antioxydantes, puisque Fl est riche en squalène, F2 contient principalement de la lupénone, de l'alpha-tocophérol et du squalène, et F3 est riche en lupénone et squalène. La fraction Fl représente environ 13 % de l'extrait hexanique brut (Tableau 1). Par conséquent, on peut en conclure que le procédé d'extraction en phase solide avec du charbon actif a un bon potentiel pour une utilisation dans le procédé d'élimination des pigments, en permettant l'obtention de fractions riches en substances antioxydantes ayant une faible teneur en pigments. Example Plant material - Sclerolobium paniculatum leaves were collected at the Instituto Florestal de Assis, Assis-SP, on July 18, 2003, while Sclerolobium aureum was collected in a field near km 376. of SP-333, in Assis, Sao Paulo, the same month. The species Sclerolobium denudatum was collected at the USP Campus, Sao Paulo, in September 2003. EXAMPLE 1 Obtaining and Quantifying Hexanic Extracts of Leaves of S. aureum, S. denudatum and S. paniculatum Hexanic Extract - Extracted 500 mg of leaves, which had been dried without sun exposure and crushed, with 5 ml of hexane by sonification (30 minutes). After centrifugation (10 minutes, 1200 rpm), the supernatant (hexane extract) was removed. This procedure was repeated 5 times, which led to hexane extracts 1, 2, 3, 4 and 5 which were combined after sampling for weighing and HPLC analysis. In these extracts, tocopherol, γ-tocopherol, squalene and lupenone were determined. Example 2 A. Discoloration of Hexanic Extract Hexanic extract of S. aureum was subjected to solid phase extraction with three distinct stationary phases, namely activated charcoal, Celite® and Divergan. The purpose of the extractions was to obtain a fraction rich in antioxidant components, having little or no pigment. B. Discoloration of Hexanic Extract with Activated Carbon A glass column containing 5.0 g of activated carbon was used. A mixture of 9.0 g of sample and 40 g of activated charcoal was slurried in hexane and the whole was deposited on the column. The sample was eluted with 300 ml of hexane (F1), 250 ml of hexane / AcOEt (9/1) (F2) and 750 ml of AcOEt (F3). The addition of 40 g of activated carbon to 9 g of the extract sample is essential to discolour the extract. Other non-polar solvent options, such as mixtures of hexane with chloroform, dichloromethane, acetone, isopropanol, ethers, can also be used, but preferably a hexane / hexane mixture is used. AcOEt. Fractions F1 and F2, eluted in hexane and hexane / AcOEt (9/1) respectively, in the solid phase extraction process with activated charcoal, showed visually little or no pigmentation; and only fraction F3 had a more intense green pigmentation (Figure 13). However, the CCMC and HPLC analyzes (FIGS. 13 and 14) show that all the fractions obtained have antioxidant substances, since F1 is rich in squalene, F2 mainly contains lupenone, alpha-tocopherol and squalene, and F3 is rich in lupenone and squalene. The fraction F1 represents about 13% of the crude hexane extract (Table 1). Therefore, it can be concluded that the solid phase extraction process with activated charcoal has a good potential for use in the pigment removal process, allowing to obtain fractions rich in antioxidant substances having a low carbon content. pigment content.

Tableau 1 Rendement, en poids, de la production d'extrait organique obtenu à partir de feuilles sèches de Sclerolobium aureum, en fonction de la fraction/étape du procédé et élimination de pigments en utilisant une extraction en phase solide avec du charbon actif Fraction Extrait Rendement (%) (mg d'extrait/g de feuilles) F1 131 13,1 F2 53 5,3 F3 129 12,9 Total 313 31,3 Exemple 3 Production et quantification d'extraits hydro-alcooliques de feuilles de S. aureum, S. denudatum et S. paniculatum A. Tests d'extraction Dans la recherche du meilleur système solvant pour extraire des flavonoïdes glycosylés à partir de feuilles de Sclerolobium spp, on a utilisé une extraction avec de l'EtOH, de l'eau et de l'EtOH/eau en trois proportions distinctes (25/75, 50/50 et 75/25). On a analysé par CLHP- UV les extraits hydrophiles obtenus dans chaque extraction, et on a quantifié les flavonoïdes glycosylés. Table 1 Yield, by weight, of the organic extract production obtained from dry leaves of Sclerolobium aureum, as a function of the fraction / stage of the process and removal of pigments using solid phase extraction with activated carbon Fraction Extract Yield (%) (mg of extract / g of leaves) F1 131 13.1 F2 53 5.3 F3 129 12.9 Total 313 31.3 Example 3 Production and quantification of hydroalcoholic extracts of leaves of S. aureum, S. denudatum and S. paniculatum A. Extraction tests In the search for the best solvent system to extract glycosylated flavonoids from Sclerolobium spp leaves, extraction with EtOH, water and EtOH / water in three distinct proportions (25/75, 50/50 and 75/25). The hydrophilic extracts obtained in each extraction were analyzed by HPLC-UV, and the glycosylated flavonoids were quantified.

Le taux de flavonoïdes dans chaque extrait végétal est indiqué sur la Figure 11, en milligrammes de flavonoïdes par gramme de feuilles sèches. Dans la même expérience, on a quantifié après hydrolyse les taux des aglicones quercétine et myricétine dans chaque extrait obtenu. Le résultat de cette quantification est indiqué sur la Figure 12. Les taux de flavonoïdes dans les extraits présentent des différences significatives selon les trois plantes étudiées ; toutefois, le meilleur rendement d'extraction pour les trois espèces, en milligrammes de flavonoïdes par grammes de feuilles sèches, a été obtenu lors de l'utilisation d'un mélange EtOH/eau en un rapport de 1/1. Dans les systèmes solvants testés, la quantité des flavonoïdes glycosylés quercétine et myricétine reste pratiquement inaltérée, de sorte que le système solvant ayant le meilleur rendement en flavonoïdes totaux est aussi celui ayant le meilleur rendement en les flavonoïdes glycosylés quercétine et myricétine. The level of flavonoids in each plant extract is shown in Figure 11, in milligrams of flavonoids per gram of dry leaves. In the same experiment, the levels of aglicones quercetin and myricetin in each extract obtained were quantified after hydrolysis. The result of this quantification is indicated in FIG. 12. The levels of flavonoids in the extracts show significant differences according to the three plants studied; however, the best extraction yield for the three species, in milligrams of flavonoids per grams of dry leaves, was obtained when using an EtOH / water mixture at a ratio of 1/1. In the solvent systems tested, the amount of glycosylated flavonoids quercetin and myricetin remains substantially unaltered, so that the solvent system with the best total flavonoid yield is also the one with the best yield of glycosylated flavonoids quercetin and myricetin.

B. Extrait hydro-alcoolique On a soumis le matériau végétal, extrait au préalable à l'hexane, à une extraction avec 5 ml de MeOH/eau 1/1 (v/v) par sonification (30 minutes). Après centrifugation (10 minutes, 1200 t/min), on a retiré le surnageant (extrait hydro-alcoolique). On a répété ce mode opératoire 5 fois, ce qui a donné les extraits hydro-alcooliques 1, 2, 3, 4 et 5 que l'on a regroupés après avoir collecté des aliquotes pour pesage et analyse CLHP. On a mesuré les flavonoïdes glycosylés dans ces extraits. B. Hydroalcoholic Extract The plant material, previously extracted with hexane, was extracted with 5 ml of MeOH / water 1/1 (v / v) by sonification (30 minutes). After centrifugation (10 minutes, 1200 rpm), the supernatant (hydroalcoholic extract) was removed. This procedure was repeated 5 times to give the hydroalcoholic extracts 1, 2, 3, 4 and 5 which were pooled after collecting aliquots for weighing and HPLC analysis. Glycosylated flavonoids were measured in these extracts.

Exemple 4 A. Décoloration de l'extrait hydro-alcoolique On a soumis l'extrait hydro-alcoolique de S. aureum à une extraction en phase solide en utilisant trois phases stationnaires distinctes, à savoir du charbon actif, du XAD-4 et du Divergan F. Le but des extractions était d'obtenir une fraction riche en substances antioxydantes, ayant une pigmentation faible ou nulle. B. Décoloration de l'extrait hydro-alcoolique B.1 Utilisation de charbon actif p.a. (Synth) - On a utilisé une colonne en verre contenant 5,0 g de charbon actif. On a mis en suspension dans l'eau une aliquote de 1,0 g de l'extrait hydro-alcoolique et on l'a déposée sur la colonne. On a élué l'échantillon dans 25 ml d'eau (SAEC1), 25 ml d'EtOH/eau (1/1) (SAEC2), 25 ml d'EtOH (SAEC3) et 25 ml d'AcOEt (SAEC4). Dans un mode de réalisation, on peut remplacer l'EtOH par d'autres alcools, tels que le méthanol, le propanol ou l'isopropanol ; et on peut remplacer l'AcOEt par l'acétone ou l'acétonitrile. Example 4 A. Discoloration of the hydroalcoholic extract The hydroalcoholic extract of S. aureum was subjected to solid phase extraction using three distinct stationary phases, namely activated charcoal, XAD-4 and Divergan F. The purpose of the extractions was to obtain a fraction rich in antioxidant substances, with little or no pigmentation. B. Discoloration of the hydroalcoholic extract B.1 Use of activated carbon p.a. (Synth) - A glass column containing 5.0 g of activated charcoal was used. An aliquot of 1.0 g of the hydroalcoholic extract was suspended in water and deposited on the column. The sample was eluted in 25 ml of water (SAEC1), 25 ml of EtOH / water (1/1) (SAEC2), 25 ml of EtOH (SAEC3) and 25 ml of AcOEt (SAEC4). In one embodiment, EtOH may be substituted with other alcohols, such as methanol, propanol or isopropanol; and the AcOEt can be replaced by acetone or acetonitrile.

B.2 Utilisation de Divergan F (Basf) - On a utilisé une colonne en verre contenant 1,0 g de Divergan F. On a mis en suspension dans l'eau une aliquote de 1,0 g de l'extrait hydro-alcoolique et 5,0 g de Divergan F, et on l'a déposée sur la colonne. On a élué l'échantillon dans 100 ml d'eau (SAED1), 100 ml d'EtOH/eau (25/75) (SAED2), 100 ml d'EtOH (SAED5) et 500 ml d'AcOEt (SAED6). Dans un mode de réalisation alternatif, on peut remplacer l'EtOH par d'autres alcools, tels que le méthanol, le propanol ou l'isopropanol. B.2 Use of Divergan F (Basf) - A glass column containing 1.0 g of Divergan F was used. An aliquot of 1.0 g of the hydroalcoholic extract was suspended in water. and 5.0 g of Divergan F, and deposited on the column. The sample was eluted in 100 ml of water (SAED1), 100 ml of EtOH / water (25/75) (SAED2), 100 ml of EtOH (SAED5) and 500 ml of AcOEt (SAED6). In an alternative embodiment, EtOH may be substituted with other alcohols, such as methanol, propanol or isopropanol.

B.3 Utilisation d'Amberlite XAD-4 (Sigma) - On a utilisé une colonne en verre contenant 5,2 g de XAD-4. On a mis en suspension dans l'eau une aliquote de 1,0 g de l'extrait hydro-alcoolique et on l'a déposée sur la colonne. On a élué l'échantillon dans 25 ml d'eau (XAD-A), 25 ml d'EtOH/eau (1/1) (XAD-B), 25 ml d'EtOH (XAD-C) et 25 ml d'AcOEt (XAD-D). Dans un mode de réalisation alternatif, on peut remplacer l'EtOH par d'autres alcools, tels que le méthanol, le propanol ou l'isopropanol ; on peut remplacer l'AcOEt par l'acétone ou l'acétonitrile. B.3 Use of Amberlite XAD-4 (Sigma) - A glass column containing 5.2 g of XAD-4 was used. An aliquot of 1.0 g of the hydroalcoholic extract was suspended in water and deposited on the column. The sample was eluted in 25 ml of water (XAD-A), 25 ml of EtOH / water (1/1) (XAD-B), 25 ml of EtOH (XAD-C) and 25 ml of water. AcOEt (XAD-D). In an alternative embodiment, EtOH may be substituted by other alcohols, such as methanol, propanol or isopropanol; the AcOEt can be replaced by acetone or acetonitrile.

On a obtenu le meilleur résultat avec le traitement de l'extrait hydro-alcoolique avec le XAD-4. Dans ce test, on a déposé environ 1 g de l'extrait sur 5 g de XAD-4. Les fractions A et B, éluées dans l'eau et l'eau/EtOH 1/1 respectivement, se sont avérées être principalement constituées de flavonoïdes glycosylés, représentant environ 15 % de l'extrait brut de départ (Tableau 2), et ayant une couleur marron clair, permettant ainsi leur utilisation en tant que fraction faiblement colorée enrichie en antioxydants hydrophiles.35 Tableau 2 Rendement de la production d'extrait hydro-alcoolique obtenu à partir de feuilles sèches de Sclerolobium spp, en fonction de la fraction / étape du procédé pour l'élimination de pigments en utilisant une extraction en phase solide avec du XAD-4 ; élution avec de l'eau (XADA), une solution eau/éthanol 1/1 (XAD-B), de l'éthanol (XAD-C) et de l'acétate d'éthyle (XAD-D). Extrait Fraction (mg d'extrait/g de feuilles) Rendement (%) XAD -A 63,0 6,3 XAD -B 96,0 9,6 XAD -C 105,0 10,5 XAD -D 54,4 5,4 Total 318,4 31,8 Les chromatogrammes représentant les fractions obtenues à partir du traitement avec le XAD-4 (Figure 15) montrent le profil de flavonoïdes, qui a des pics plus élevés pour la fraction XAD-B. La co-élution de pigments a lieu à partir de la fraction XAD-C, et la fraction prend une couleur plus sombre et verdâtre. The best result was obtained with the treatment of hydroalcoholic extract with XAD-4. In this test, about 1 g of the extract was deposited on 5 g of XAD-4. Fractions A and B eluted in water and water / EtOH 1/1, respectively, were found to be predominantly composed of glycosylated flavonoids, representing about 15% of the crude starting extract (Table 2), and having a light brown color, thus allowing their use as a weakly colored fraction enriched with hydrophilic antioxidants. Table 2 Yield of the production of hydroalcoholic extract obtained from dry Sclerolobium spp leaves, as a function of the fraction / stage process for pigment removal using solid phase extraction with XAD-4; elution with water (XADA), 1/1 water / ethanol solution (XAD-B), ethanol (XAD-C) and ethyl acetate (XAD-D). Extract Fraction (mg of extract / g of leaves) Yield (%) XAD -A 63.0 6.3 XAD -B 96.0 9.6 XAD-105.0 10.5 XAD -D 54.4 5 , 4 Total 318.4 31.8 Chromatograms representing fractions obtained from treatment with XAD-4 (Figure 15) show the flavonoid profile, which has higher peaks for the XAD-B fraction. The co-elution of pigments takes place from the XAD-C fraction, and the fraction takes a darker and greenish color.

Exemple 5 Analyse quantitative de composants antioxydants polaires et non polaires présents dans les extraits hydro- alcooliques et hexaniques, respectivement, provenant de feuilles de Sclerolobium spp Dans le but de déterminer quantitativement les taux de métabolites antioxydants présents dans les extraits polaires et non polaires provenant de feuilles des trois espèces de Sclerolobium étudiées, on a établi deux procédés chromatographiques utilisant une CLHP-DAD : Analyse qualitative et quantitative par CLHP Extraits hexaniques - On a filtré un échantillon de 1 ml de chacun des trois extraits hexaniques provenant de Sclerolobium aureum, Sclerolobium paniculatum et Sclerolobium denudatum, et on l'a analysé par CLHP-DAD en utilisant les conditions chromatographiques suivantes : Colonne : Phenomenex C-18, 5 pm (25 cm x 4,6 mm DI) Débit : 2,0 ml/min ; volume d'injection : 20 pl Détection : UV-VIS, 200 et 290 nm Elution : acétonitrile Durée de l'analyse : 30 minutes Extraits hydro-alcooliques - On a filtré un échantillon de chacun des extraits éthanoliques provenant de Sclerolobium aureum, Sclerolobium paniculatum et Sclerolobium denudatum, et on l'a analysé par CLHP-DAD en utilisant les conditions chromatographiques suivantes : Colonne : Phenomenex C-18, 5 pm (25 cm x 4,6 mm DI) Débit : 1,5 ml/min ; volume d'injection : 20 pl Détection : UV, barrette de diodes Elution : gradient linéaire : B 16 à 21 % pendant 13 minutes, B 21 à 35 % pendant 25 minutes, B 35 % pendant jusqu'à 30 minutes A : acide acétique à 0,5 % B : acétonitrile Chromatographe - Shimadzu LC-8A binaire, couplé à un auto-échantillonneur SIL-10AF et à un détecteur UV-Vis SPD=10Avp. L'acquisition et le traitement des données ont été effectués au moyen du logiciel Shimadzu CLASS-VP. Les Figures 3 et 4 décrivent les chromatogrammes obtenus pour les extraits hexaniques et hydro-alcooliques de feuilles de Sclerolobium spp., respectivement. En ce qui concerne les extraits hexaniques, un degré de similarité plus important a été détecté pour les extraits obtenus à partir de feuilles de S. aureum et S. paniculatum, cependant que l'extrait hexanique de S. denudatum a un profil plus complexe, présentant des pics plus faibles. D'autre part, les extraits polaires de S. denudatum et S. paniculatum se distinguent aisément de l'extrait polaire de feuilles de S. aureum en raison de l'absence de pics représentatifs des gallates de myricétine (composés 10 et 11, Figure 2). On a démarré les analyses quantitatives après avoir établi les conditions chromatographiques. On a soumis des feuilles de S. aureum, S. paniculatum et S. denudatum à une extraction à l'hexane par sonification et, après centrifugation, on a retiré le surnageant (extrait hexanique). On a répété ce mode opératoire 5 fois, ce qui a conduit aux extraits hexaniques 1, 2, 3, 4 et 5. On a soumis le résidu à une extraction avec EtOH/eau (1/1), par le même mode opératoire, et on a obtenu les extraits hydro-alcooliques 1, 2, 3, 4 et 5. Les rendements obtenus pour chacune des extractions sont présentés dans les Tableaux 3 et 4, en milligrammes d'extrait par gramme de feuilles sèches. EXAMPLE 5 Quantitative Analysis of Polar and Nonpolar Antioxidant Components Present in the Hydroalcoholic and Hexanic Extracts, respectively, from Sclerolobium spp Leaves For the purpose of quantitatively determining the levels of antioxidant metabolites present in the polar and non-polar extracts from Of the three species of Sclerolobium studied, two chromatographic methods using HPLC-DAD were established: HPLC qualitative and quantitative analysis Hexanic extracts - A 1 ml sample of each of the three hexane extracts from Sclerolobium aureum, Sclerolobium paniculatum was filtered. and Sclerolobium denudatum, and analyzed by HPLC-DAD using the following chromatographic conditions: Column: Phenomenex C-18, 5 μm (25 cm x 4.6 mm DI) Flow: 2.0 ml / min; injection volume: 20 μl Detection: UV-VIS, 200 and 290 nm Elution: acetonitrile Duration of analysis: 30 minutes Hydro-alcoholic extracts - A sample of each of the ethanolic extracts from Sclerolobium aureum, Sclerolobium paniculatum was filtered. and Sclerolobium denudatum, and analyzed by HPLC-DAD using the following chromatographic conditions: Column: Phenomenex C-18, 5 μm (25 cm x 4.6 mm ID) Flow rate: 1.5 ml / min; injection volume: 20 μl Detection: UV, diode array Elution: linear gradient: B 16 to 21% for 13 minutes, B 21 to 35% for 25 minutes, B 35% for up to 30 minutes A: acetic acid 0.5% B: Acetonitrile Chromatograph - Shimadzu LC-8A binary, coupled to a SIL-10AF autosampler and a UV-Vis SPD detector = 10Avp. Data acquisition and processing was performed using Shimadzu CLASS-VP software. Figures 3 and 4 describe the chromatograms obtained for the hexane and hydro-alcoholic extracts of leaves of Sclerolobium spp., Respectively. With respect to hexanic extracts, a greater degree of similarity was detected for extracts obtained from leaves of S. aureum and S. paniculatum, while the hexanic extract of S. denudatum has a more complex profile, with weaker peaks. On the other hand, the polar extracts of S. denudatum and S. paniculatum are easily distinguished from the polar extract of S. aureum leaves due to the absence of representative peaks of the myricetin gallates (compounds 10 and 11, Figure 2). Quantitative analyzes were started after establishing the chromatographic conditions. Leaves of S. aureum, S. paniculatum and S. denudatum were extracted with hexane by sonication and, after centrifugation, the supernatant (hexanic extract) was removed. This procedure was repeated 5 times, which led to hexane extracts 1, 2, 3, 4 and 5. The residue was extracted with EtOH / water (1: 1) by the same procedure. and the hydroalcoholic extracts 1, 2, 3, 4 and 5 were obtained. The yields obtained for each of the extractions are shown in Tables 3 and 4, in milligrams of extract per gram of dry leaves.

Tableau 3 Rendement de production d'extraits organiques à partir de feuilles sèches de trois espèces du genre Sclerolobium spp Extraction S. aureum S. paniculatum S. denudatum (mg d'extrait/ (mg d'extrait/ g de feuilles) g de feuilles) (mg d'extrait/ g de feuilles) lère 19,0 27,0 25,8 2ème 8,6 11,6 9,2 Sème 6,9 7,9 6,5 4ème 5,9 5,2 5,1 5ème 5,1 5,1 3,9 Total 45,5 ± 0,5* 56,8 ± 0,3* 50,6 ± 0,4* * Moyenne ± écart type Tableau 4 hydro-alcooliques à espèces du genre Rendement de production d'extraits partir de feuilles sèches de trois Sclerolobium spp Sclerolobium aureum, Sclerolobium paniculatum et Sclerolobium denudatum Extraction S. aureum S. paniculatum S. denudatum (mg d'extrait/ (mg d'extrait/ (mg d'extrait/ g de feuilles) g de feuilles) g de feuilles) lère 158,9 345,6 139,8 2ème 113,2 79,3 61,8 Sème 58,5 31,0 21,8 4ème 16,8 17,3 11,8 5ème 17,9 10,1 6,8 Total 365,2 ± 3,5* 483,4 ± 2,3* 242,0 ± 2,1* * Moyenne ± écart type On a effectué les analyses quantitatives des extraits hexaniques en utilisant des î- et y-tocophérols, de la lupénone et du squalène à titre d'étalons externes (Tableau 5). Afin de quantifier les flavonoïdes glycosylés, on a utilisé trois étalons : le quercétine-3-O-arabinopyranoside pour déterminer la quantité de dérivés de quercétine-3-0-glucopyranoside, la mirycétrine (myricétine-3-0-rhamnopyranoside) pour déterminer les dérivés de myricétine-3-0-glucopyranoside, et le myricétine-O-(2"-galloil-rhamnopyranoside) pour quantifier les gallates de myricitrine (Tableau 6). Toutes les analyses ont été effectuées en triple. Table 3 Yield of organic extracts from dry leaves of three species of the genus Sclerolobium spp Extraction S. aureum S. paniculatum S. denudatum (mg of extract / (mg of extract / g of leaves) g of leaves ) (mg of extract / g of leaves) 1st 19.0 27.0 25.8 2nd 8.6 11.6 9.2 Seme 6.9 7.9 6.5 4th 5.9 5.2 5, 1 5th 5.1 5.1 3.9 Total 45.5 ± 0.5 * 56.8 ± 0.3 * 50.6 ± 0.4 * * Mean ± standard deviation Table 4 Hydro-alcoholic species of the genus Yield yield of extracts from dry leaves of three Sclerolobium spp Sclerolobium aureum, Sclerolobium paniculatum and Sclerolobium denudatum S. aureum S. paniculatum S. denudatum extract (mg of extract / (mg of extract / (mg of extract / g leaves) g leaves g) leaves 158.9 345.6 139.8 2nd 113.2 79.3 61.8 3rd 58.5 31.0 21.8 4th 16.8 17.3 11 , 8 5th 17.9 10.1 6.8 Total 365.2 ± 3.5 * 483.4 ± 2.3 * 242.0 ± 2.1 * * Mean ± standard deviation Quantitative analyzes were performed Hexanic extracts were used with 1- and 4-tocopherols, lupenone and squalene as external standards (Table 5). In order to quantify the glycosylated flavonoids, three standards were used: quercetin-3-O-arabinopyranoside to determine the amount of quercetin-3-O-glucopyranoside derivatives, mirycretin (myricetin-3-O-rhamnopyranoside) to determine the myricetin-3-O-glucopyranoside derivatives, and myricetin-O- (2 "-galloil-rhamnopyranoside) to quantify gallates of myricitrin (Table 6) All assays were performed in triplicate.

Tableau 5 Paramètres analytiques estimés pour les étalons lipophiles î-tocophérol, y-tocophérol, lupénone et squalène Substance Linéarité Limite de Limite de quan- (pg) détection (ng) tification (ng) î-tocophérol 0,05 - 10,5 6,0 20 y-tocophérol 0,03 - 9,0 9,0 30 Lupénone 0,10 - 10,5 6,0 20 Squalène 0,01 - 6,0 0,5 2 Tableau 6 Paramètres analytiques estimés pour les étalons polaires quercétine-3-0-arab, myricétine, myricétine-2"-galloil Substance Linéarité Limite de Limite de quan- (pg) détection tification (ng) (ng) Quercétine-3- 0,08 - 5,0 5,2 16 0-arab Myricétine 0,03 - 5,0 4,3 12 Myricétine-2"- 0,03 - 5,0 4,5 14 galloil 10 Parmi les trois espèces analysées, celle présentant des feuilles ayant le plus fort taux d'antioxydants lipophiles est par conséquent S. paniculatum, avec 0,64 % de tocophérol, 0,1 % de lupénone et 0,2 % de squalène, suivi de S. aureum avec 0,5 % de tocophérol et 0,04 % de 15 squalène. Les feuilles de S. paniculatum présentent aussi 1,4 mg/g de lupénone, non détectée dans S. aureum (Tableau 7). Table 5 Analytical Parameters Estimated for Lipophilic Standards--Tocopherol, γ-Tocopherol, Lupenone and Squalene Substance Linearity Limit of Limitation of Quan (pg) Detection (ng) tification (ng) 1-tocopherol 0.05 - 10.5 6 0.01 - 9.0 9.0 Lupenone 0.10 - 10.5 6.0 Squalene 0.01 - 6.0 0.5 2 Table 6 Estimated analytical parameters for polar standards quercetin-3-0-arab, myricetin, myricetin-2 "-galloil Substance Linearity Limit of Limit of Quan- (pg) detection tification (ng) (ng) Quercetin-3- 0.08 - 5.0 5.2 16 0-arab Myricetin 0.03 - 5.0 4.3 12 Myricetin-2 "- 0.03 - 5.0 4.5 14 galloil 10 Of the three species analyzed, the one with the highest rate of leaf lipophilic antioxidants is therefore S. paniculatum, with 0.64% tocopherol, 0.1% lupenone and 0.2% squalene, followed by S. aureum with 0.5% tocopherol and 0.04% of squalene. Leaves of S. paniculatum also show 1.4 mg / g of lupenone, not detected in S. aureum (Table 7).

Tableau 7 Taux d'î-tocophérol, de y-tocophérol, de lupénone et de squalène dans les extraits organiques obtenus à partir de feuilles sèches de trois espèces du genre Sclerolobium spp. Moyenne ± écart type Substance S. aureum S. denudatum S. paniculatum (mg de subst./ (mg de (mg de subst./g de subst./g de g de feuilles) feuilles) feuilles) î-tocophérol 3,60 ± 0,10 0,50 ± 0,04 5,70 ± 0,20 y-tocophérol 1,13 ± 0,06 0,29 ± 0,04 0,72 ± 0,05 Lupénone ND* 0,08 ± 0,01 1,46 ± 0,03 Squalène 0,35 ± 0,02 0,08 ± 0,01 1,99 ± 0,06 * ND - non détecté Les rendements obtenus pour les extraits hexaniques étaient similaires pour les trois espèces de Sclerolobium, à savoir d'environ 50 mg d'extrait par gramme de feuilles sèches. Les rendements obtenus pour les extraits hydroalcooliques étaient distinctement supérieurs pour les feuilles de S. paniculatum (483,4 mg/g) et S. aureum (365,4 mg/g), par comparaison avec le rendement obtenu pour les feuilles de S. denudatum (242,0 mg/g). Des taux plus élevés de flavonoïdes glycosylés ont aussi été obtenus pour les feuilles de S. aureum (96,5 mg/g) et S. paniculatum (90,7 mg/g) (Tableau 8). Ensuite, l'extrait hydro-alcoolique de S. aureum contient 26,4 % de flavonoïdes glycosylés, tandis que l'extrait hydro- alcoolique de S. paniculatum contient 18,8 % de flavonoïdes glycosylés. La présence de flavonoïdes glycosylés liés à un motif acide gallique (myricétine-3-O-(2"-0-galloil)-oc-rhamnopyranoside et myricétine-3-O-(3"-O- galloil)-î-rhamnopyranoside) dans l'extrait hydro- alcoolique de S. aureum confère à ce dernier une plus grande possibilité d'être utilisé comme un antioxydant, par rapport aux autres extraits testés, puisque lors d'un test avec du DPPH, ces flavonoïdes présentaient une plus forte activité antioxydante que ceux ayant uniquement le motif glycosidique. Tableau 8 Taux de flavonoïdes glycosylés totaux obtenus dans des extraits de feuilles sèches provenant de 3 espèces du genre Sclerolobium spp S. aureum S. denudatum S. paniculatum (mg de subst./ (mg de subst./ (mg de subst./ g de feuilles) g de feuilles) g de feuilles) Flavonoïdes 96,5 ± 0,8 33,4 ± 0,4 90,7 ± 0,5 totaux Exemple 6 Isolement et élucidation de la structure d'autres métabolites antioxydants polaires provenant de l'extrait hydro-alcoolique de feuilles de S. aureum, extrait qui a le profil chimique le plus diversifié Après extraction exhaustive du matériau végétal avec EtOH/eau 1/1 (v/v), c'est-à-dire extraction répétée au moins 5 fois, on a soumis une partie de l'extrait hydroalcoolique (environ 10 grammes) obtenu à partir de feuilles de S. aureum à une extraction en phase solide en utilisant C-18 en tant que phase stationnaire, dans une colonne en verre ayant une hauteur de 10,0 cm et un diamètre de 9,5 cm. On a effectué l'élution conformément à une polarité décroisssante, en utilisant les éluants suivants méthanol/eau (50/50), méthanol/eau (90/10), MeOH, AcOEt et toluène, et les fractions obtenues étaient FM1, FM2, FM3, FM4 et FM5, respectivement (Figure 1). On a soumis la fraction MeOH/eau (90/10) (FM2) à une CLHP préparative et on a isolé les substances FM-P1 (7 mg), FMP2 (24 mg), FM-P3 (3 mg), FM-P4 (25 mg), FM-P61 (13 mg), FM-P53 (5 mg) et FM-P62 (17 mg). A. Fractionnement chromatographique On a effectué une chromatographie sur couche mince en utilisant du gel de silice 60 (Merck) en tant qu'adsorbant, d'une épaisseur de 0,25 mm pour les analyses comparatives, et d'une épaisseur de 1 mm pour les analyses préparatives. On a développé celles-ci par irradiation de lumière ultraviolette à des longueurs d'onde de 254 et 366 nm, avec exposition à de la vapeur d'iode et nébulisation avec une solution à 0,02 % de 13-carotène dans du dichlorométhane. La phase stationnaire utilisée pour la chromatographie sur colonne changeait en fonction de la polarité des échantillons à analyser, avec utilisation préférée du gel de silice Si-60, avec des particules de 80 à 230 mesh, ou de l'amberlite XAD-16. Dans le premier cas, on a effectué l'élution dans un gradient utilisant des mélanges hexane/AcOEt et en outre AcOEt/méthanol, dans un ordre de polarité croissante. Dans le deuxième cas, on a effectué l'élution également dans un gradient, mais en utilisant des mélanges d'eau et de méthanol dans un ordre de polarité décroissante. Table 7 Levels of α-tocopherol, γ-tocopherol, lupenone and squalene in organic extracts obtained from dry leaves of three species of the genus Sclerolobium spp. Mean ± standard deviation Substance S. aureum S. denudatum S. paniculatum (mg of subst./ (mg of (mg of subst./g of subst./g of g of leaves) leaves) leaves) 1-tocopherol 3.60 ± 0.10 0.50 ± 0.04 5.70 ± 0.20 γ-tocopherol 1.13 ± 0.06 0.29 ± 0.04 0.72 ± 0.05 Lupenone ND * 0.08 ± 0 , 01 1.46 ± 0.03 Squalene 0.35 ± 0.02 0.08 ± 0.01 1.99 ± 0.06 * ND - not detected The yields obtained for the hexane extracts were similar for the three species of Sclerolobium, ie about 50 mg of extract per gram of dry leaves. The yields obtained for the hydroalcoholic extracts were distinctly superior for the leaves of S. paniculatum (483.4 mg / g) and S. aureum (365.4 mg / g), compared with the yield obtained for the leaves of S. denudatum (242.0 mg / g). Higher levels of glycosylated flavonoids were also obtained for leaves of S. aureum (96.5 mg / g) and S. paniculatum (90.7 mg / g) (Table 8). Then, the hydroalcoholic extract of S. aureum contains 26.4% glycosylated flavonoids, while the hydroalcoholic extract of S. paniculatum contains 18.8% glycosylated flavonoids. The presence of glycosylated flavonoids linked to a gallic acid motif (myricetin-3-0- (2 "-O-galloil) -oc-rhamnopyranoside and myricetin-3-O- (3" -O-galloil) -I-rhamnopyranoside) in the hydroalcoholic extract of S. aureum confers on the latter a greater possibility of being used as an antioxidant, compared to the other extracts tested, since during a test with DPPH, these flavonoids had a stronger antioxidant activity than those with only the glycosidic pattern. Table 8 Total glycosylated flavonoid levels obtained in dry leaf extracts from 3 species of the genus Sclerolobium spp S. aureum S. denudatum S. paniculatum (mg of subst./ (mg of subst./ (mg of subst./g of leaves) g of leaves) Flavonoids 96.5 ± 0.8 33.4 ± 0.4 90.7 ± 0.5 totals Example 6 Isolation and elucidation of the structure of other polar antioxidant metabolites from the hydroalcoholic extract of leaves of S. aureum, extract which has the most diversified chemical profile After exhaustive extraction of the vegetable material with EtOH / water 1/1 (v / v), that is to say repeated extraction at least 5 times, a portion of the hydroalcoholic extract (about 10 grams) obtained from S. aureum leaves was subjected to solid phase extraction using C-18 as a stationary phase, in a column glass having a height of 10.0 cm and a diameter of 9.5 cm. The elution was carried out in accordance with a decreasing polarity, using the following eluents methanol / water (50/50), methanol / water (90/10), MeOH, AcOEt and toluene, and the fractions obtained were FM1, FM2, FM3, FM4 and FM5, respectively (Figure 1). The MeOH / water (90/10) (FM2) fraction was subjected to preparative HPLC and the substances FM-P1 (7 mg), FMP2 (24 mg), FM-P3 (3 mg), FM- P4 (25 mg), FM-P61 (13 mg), FM-P53 (5 mg) and FM-P62 (17 mg). A. Chromatographic Fractionation Thin layer chromatography was performed using silica gel 60 (Merck) as an adsorbent, 0.25 mm thick for comparative analyzes, and 1 mm thick. for preparative analyzes. These were developed by irradiating ultraviolet light at wavelengths of 254 and 366 nm with exposure to iodine vapor and nebulization with a 0.02% solution of 13-carotene in dichloromethane. The stationary phase used for the column chromatography changed depending on the polarity of the samples to be analyzed, with Si-60 silica gel being preferred, with 80 to 230 mesh particles, or XAD-16 amberlite. In the first case, the elution was carried out in a gradient using hexane / AcOEt mixtures and in addition AcOEt / methanol, in an order of increasing polarity. In the second case, the elution was also carried out in a gradient, but using mixtures of water and methanol in decreasing order of polarity.

B. Chromatographe On a effectué une analyse par chromatographie liquide haute performance (CLHP) à l'échelle analytique avec un chromatographe à système de pompage ternaire Varian ProStar modèle 240, couplé à un détecteur à barrette de diodes (DAD) modèle 230 et à un injecteur Auto Sampler modèle 410. Lors de l'analyse, on a utilisé une colonne C-18 Phenomenex de 4,6 mm x 250 mm avec une granulométrie de 5 pm. Pour l'analyse à l'échelle préparative, on a utilisé un chromatographe préparatif Varian, qui est constitué de 30 deux pompes Dynamax, modèle SD-1 et d'un détecteur UV-Visible modèle ProStar 320. On a utilisé une colonne C-18 Phenomenex de 21,20 mm x 250 mm ayant une granulométrie de 12 pm. B. Chromatograph An analytical high performance liquid chromatography (HPLC) analysis was performed on a Varian ProStar model 240 ternary pumping system chromatograph, coupled to a Model 230 Diode Array Detector (DAD) and a Auto Sampler injector model 410. During the analysis, a C-18 Phenomenex column of 4.6 mm × 250 mm with a particle size of 5 μm was used. For the preparative scale analysis, a Varian preparative chromatograph consisting of two Model SD-1 Dynamax pumps and a ProStar 320 UV-Visible detector was used. A column C was used. Phenomenex 21.20 mm x 250 mm having a particle size of 12 μm.

C. Spectres de résonance magnétique nucléaire On a obtenu les spectres de RMN dans un spectromètre Varian Inova 500, fonctionnant à 500 MHz et 125 MHz dans les fréquences de 1H et 13C, respectivement. L'étalon servant de référence était le TMS, et on a utilisé les solvants CDC13 et DMSO-d6 de Merck. Les déplacements chimiques ont été exprimés en unités 8, et les constantes de couplage (J) en Hz. La substance 1, identifiée comme étant l'a- tocophérol, est l'un des constituants de la vitamine E. C. Nuclear Magnetic Resonance Spectra The NMR spectra were obtained in a Varian Inova 500 spectrometer, operating at 500 MHz and 125 MHz in the 1 H and 13 C frequencies, respectively. The reference standard was TMS, and the Merck CDC13 and DMSO-d6 solvents were used. The chemical shifts were expressed in units 8, and the coupling constants (J) in Hz. Substance 1, identified as α-tocopherol, is one of the constituents of vitamin E.

Les signaux des spectres de RMN-1H (Tableau 9) à 8 2,53 (1H, t, J = 7 Hz) et b 1,70 (1H, t, J = 7 Hz) ont été attribués aux hydrogènes H-4 et H-3, respectivement. Le singulet à 8 1,15 a été attribué aux hydrogènes du groupe méthyle en position 2, et le singulet à 8 2,03 a été attribué aux hydrogènes des groupes méthyle trouvés aux positions 5, 7 et 8. Les signaux se référant à l'hydrogène des groupes méthyle en C-4', C-8' et C-12' apparaissent sous la forme de doublets à 8 0,80. Les hydrogènes H-1' et H-12' apparaissent comme des multiplets entre 5 1,01 et 1,50. Le spectre de RMN-13C présente des signaux correspondant à vingt-neuf atomes de carbone (Tableau 8). Dans les analyses combinées de RMN-13C et DEPT 135°, a été détectée la présence de six signaux qui se réfèrent à des carbones aromatiques quaternaires à 8 117,3, 118,4, 121,0, 122,6, 145,5 et 145,6, lesquels sont attribués aux carbones C-4a, C-5, C-7, C-8, C-6 et C-8a, respectivement. Le signal à 5 74,5 a été attribué à C-2, un carbone sp3 lié à un atome d'oxygène. Ont également été observés des signaux se référant à quatre carbones de méthyle entre b 19,6 et 22,7, lesquels ont été attribués aux groupes méthyle en C-4', C-8' et C-12', respectivement. Des signaux se référant aux méthyles en C-5, C-7 et C-8, liés à un cycle aromatique apparaissent entre b 11,2 et 12,2, tandis que le signal qui se réfère au carbone de méthyle en C-2 apparaît à 6 23,8. Les douze signaux se référant aux carbones de chaîne latérale C-1' à C-12' ont un déplacement chimique compris entre b 24,7 et 40,0. On a confirmé l'identification en comparant les données trouvées à celles disponibles dans la littérature (YEN, 1996). La substance 2, identifiée comme étant le squalène, est un triterpène à chaîne ouverte ayant six insaturations. Le spectre de RMN-1H (Tableau 10) présente des signaux d'hydrogènes liés au carbone sp2 à 6 5,1 et des signaux d'hydrogènes de groupes méthyle à 6 1,61 et b 1,69. Les hydrogènes de groupes méthyle apparaissent à 6 2,1. Le spectre de RMN-13C a des signaux concernant douze carbones sp2 dans la région de b 124, b 131 et b 134. Les signaux qui se réfèrent à huit groupes méthyle apparaissent à 6 15, 98, b 16, 03, b 17, 6, b 25,6 et b 25,7. Les groupes méthylène présentent un déplacement entre b 26,80 et 6 39,76 (Tableau 10). On a confirmé l'identification en comparant les données trouvées à celles disponibles dans la littérature (HE, 2002). The signals of the 1 H-NMR spectra (Table 9) at 8 2.53 (1H, t, J = 7 Hz) and b 1.70 (1H, t, J = 7 Hz) were attributed to the H-4 hydrogens. and H-3, respectively. The singlet at 8 1.15 was assigned to the hydrogens of the methyl group at the 2-position, and the singlet at 8 2.03 was assigned to the hydrogens of the methyl groups found at the 5, 7 and 8 positions. The signals referring to the Hydrogen of the C-4 ', C-8' and C-12 'methyl groups appear as 0.88 doublets. Hydrogen H-1 'and H-12' appear as multiplets between 1.01 and 1.50. The 13 C-NMR spectrum shows signals corresponding to twenty-nine carbon atoms (Table 8). In the combined 13C-NMR and 135 DEPT analyzes, the presence of six signals which refer to quaternary aromatic carbons at 8 117.3, 118.4, 121.0, 122.6, 145.5 has been detected. and 145.6, which are assigned to carbons C-4a, C-5, C-7, C-8, C-6 and C-8a, respectively. The 74.5 signal was assigned to C-2, an oxygen-linked sp3 carbon. Four methyl carbons between 19.6 and 22.7 were also observed, which were assigned to the C-4 ', C-8' and C-12 'methyl groups, respectively. Signals referring to the C-5, C-7 and C-8 methyls linked to an aromatic ring appear between b 11.2 and 12.2, whereas the signal which refers to methyl carbon at C-2 appears at 6 23.8. The twelve signals referring to side chain carbons C-1 'to C-12' have a chemical shift between b 24.7 and 40.0. Identification was confirmed by comparing the data found with those available in the literature (YEN, 1996). Substance 2, identified as squalene, is an open-chain triterpene with six unsaturations. The 1 H-NMR spectrum (Table 10) shows sp2 carbon-bonded hydrogen signals at δ5.1 and methyl hydrogen signals at δ 1.61 and δ 1.69. Hydrogens of methyl groups appear at 6.1. The 13C-NMR spectrum has signals for twelve carbons sp2 in the region of b 124, b 131 and b 134. The signals which refer to eight methyl groups appear at 6, 15, 98, b 16, 03, b 17, 6, b 25.6 and b 25.7. The methylene groups exhibit a displacement between 26.80 and 39.76 (Table 10). Identification was confirmed by comparing the data found with those available in the literature (HE, 2002).

La substance 3 a été identifiée comme étant l'alupéol. Dans le spectre de RMN-1H (Tableau 11), les signaux se référant à l'î-lupéol apparaissent à 6 4,54 (dl, J = 2,0 Hz) et 4,66 (dl, J = 2,0 Hz), lesquels sont caractéristiques de l'hydrogène d'un groupe méthylène terminal. Le triplet à 3,31 (J = 2,5 Hz) est typique de l'hydrogène lié à un carbone carbinolique. Le doublet à 6 1,66 (d, J = 1,5 Hz) et les singulets à 6 I, o ; 0,94 ; 0,90 ; 0,82 ; 0,80 et 0,76 sont caractéristiques d'hydrogènes des groupes méthylène de l'î-lupéol. Les signaux se référant aux hydrogènes des groupes CH et CH2 additionnels sont détectés entre 6 0,9 et 2,4. Le spectre de RMN-13C présente un signal qui est caractéristique d'un carbone carbinolique à 6 76, 7. Un signal se référant à un carbone quaternaire à 6 150,4, est caractéristique d'un carbone sp2. A l'aide d'un DEPT, sept signaux se référant à des groupes méthyle peuvent aussi être observés à 6 28,2 ; 22,0 ; 15,9 ; 16,1 ; 14,6 ; 18,0 et 19, 3, et le signal se référant au carbone de méthylène terminal peut être observé à 6 109,2. On peut aussi noter dix signaux se référant aux groupes méthylène entre 6 18,3 et 40,0, et des signaux se référant à cinq carbones de méthylène à 6 50,4 ; 49,0 ; 48,2 ; 47,9 et 38,0 (Tableau 11). On a confirmé l'identification en comparant les données trouvées à celles disponibles dans la littérature (REYNOLDS, 1986 ; MA, 2004 ; MAHATO, 1994). La substance 4, identifiée comme étant la lup-20(29)-én-3-one (lupénone), est un triterpène de type lupane. Les signaux identifiés dans le spectre de RMN-1H (Tableau 12) à 6 4,5 (1H, dd, J29,30 = 1,5 Hz ; J30,30 = 2,5 Hz) et 6 4,6 (1H, d, J30,30 = 2,5 Hz) ont été attribués aux hydrogènes des groupes méthylène terminaux H-29a et H-29b. Le doublet à 6 1,6 et les singulets à 6 0,95, 6 0,86, 6 0,88 et 6 0,72 ont été attribués aux hydrogènes des groupes méthyle H-30, H-23, H-25, H-27 et H-28, respectivement. Le singulet à 6 0,99 a été attribué aux hydrogènes des groupes méthyle H-24 et H-26. Les signaux se référant à d'autres groupes CH et CH2 sont localisés entre 6 0,9 et 6 2,4. Le spectre de RMN-13C présentait un signal à 6 218,07, qui est caractéristique du carbonyle de cétone et qui a été attribué au carbone C-3. Un signal à 6 150,85, qui se réfère à un carbone quaternaire, est caractéristique d'un carbone sp2 et a été attribué à C-20. A l'aide de DEPT, sept signaux provenant des groupes méthyle à 6 21,03, 6 26, 6, 6 15, 8, 6 15, 9, 6 14, 4, 6 18,0 et 6 19,3 ont été attribués aux carbones C-23 à C-28 et C-30, 33 respectivement, et le signal se référant au méthylène terminal C-29 à 8 109,2 peut également être détecté. On peut aussi noter dix signaux se référant aux carbones additionnels des groupes méthylène entre b 19,6 et b 40,0 et des signaux se référant aux carbones de méthylène 654,97, S 49, 82, 638,21, S 48,28 et S 47,96 correspondant à C-5, C-9, C-13, C-18 et C-19 (Tableau 12). On a confirmé l'identification en comparant les données trouvées à celles disponibles dans la littérature (KIM, 2001 ; MAHATO, 1994). La substance P1, qui est identifiée comme étant le myricétine-3-0-(3-galactopyranoside (5), a, dans le spectre de RMN-1H (Tableau 13), des signaux localisés dans la région correspondant à des hydrogènes aromatiques qui sont typiques dans les flavonoïdes. Le singulet dans la région b 12,6 (1H) a été attribué à l'hydrogène d'hydroxyle en C-5. Les doublets à 6 6,17 (1H) et b 6,35 (1H), ayant des constantes de couplage de 2,0 Hz, ont été attribués à H-6 et H-8 du cycle A. Le singulet à 8 7,20 (2H) a été attribué aux hydrogènes 2' et 6' du cycle B. Les signaux observés (Tableau 13) sont typiques de l'aglicone myricétine, comme rapporté dans la littérature (MARKHAM, 1978). De plus, le spectre de RMN-1H présentait un doublet à 6 5,30 (J = 7,5 Hz), qui a été attribué à l'hydrogène anomère H-1" du fragment sucre. La constante de couplage de cet hydrogène est courante dans une liaison a-glycosidique. Les multiplets dans les régions S 3,38 et 6 3,60 ont été attribués aux hydrogènes de méthyne et de méthylène sur le fragment glysosidique, sur la base d'une comparaison avec des données rapportées dans la littérature. L'analyse du spectre de RMN-13C a révélé 15 signaux correspondant à l'aglicone et six signaux correspondant au glycoside (Tableau 13). Le signal dans la région b 133,7 (C-3), ayant un déplacement diamagnétique, ainsi que les signaux à 8 156,1 (C-2), S 177,3 (C-4) et Ô 161,2 (C-5) ayant des signaux paramagnétiques par comparaison avec la myricétine, définissent typiquement la présence d'un motif glycosidique à C-3-0 du cycle C (AGRAWAL, 1989). La présence de carbones aromatiques oxygénés a été confirmée par la présence de signaux à b 161,2 (C-5), b 164,1 (C-7), b 145,4 (C-3' et C-5') et b 136,7 (C-4'). Le spectre de RMN-13C avait cinq signaux localisés dans la région entre 60,0 et 75,9, en plus du carbone anomère, ce qui est courant dans les hexoses. Le signal correspondant au C-1" anomère présente un déplacement de b 102,2. Le signal à 60,0 a été attribué à C-6" sur la base de l'observation de l'expérience DEPT-135 dans laquelle son signal apparaît inversé, ce qui est caractéristique d'un carbone de méthylène. Les signaux additionnels (Tableau 13) ont été attribués aux carbones de méthyle de sucre après comparaison avec des données de la littérature (AGRAWAL, 1989 ; MARKHAM, 1978). La substance P2, qui est identifiée comme étant le myricétine-3-0-Ct-galactopyranoside (6), a dans son spectre de RMN-1H (Tableau 14) des signaux correspondant au fragment glycone avec des déplacements et multiplicités similaires à ceux de la substance 5, ce qui suggère qu'il contient la même aglycone, la myricétine. La région du spectre concernant l'unité glycosidique montre un large singulet à 6 5,20 attribué à l'hydrogène anomère H-1" du sucre, typique de la liaison Ct-glycosidique. Le doublet absorbé à 6 0,89 (J = 6,5 Hz) se référant à H-6" de méthyle est caractéristique du rhamnose. Les signaux à 63,30, 63,60, 63,81 et 65,47 sont attribués aux hydrogènes glycosidiques en C-4", C-5", C-3" et C-2", respectivement. Les attributions sont effectuées par comparaison avec des données disponibles dans la littérature. Le spectre de RMN-13C a révélé 15 signaux correspondant à l'aglycone et 6 signaux correspondant au glycoside (Tableau 14), les signaux se référant à 35 l'aglycone étant similaires à ceux de 5, ce qui confirme qu'il se réfère à la même aglycone, la myricétine. Les signaux correspondant à la partie glycosidique avec un déplacement chimique à 6102,2 et 617,6 sont attribués aux carbones anomères C-1" et C-6", respectivement, ce dernier étant typique d'un carbone de méthyle de rhamnose. Les signaux additionnels (Tableau 14) ont été attribués aux carbones de méthyne de sucre par comparaison avec les données de la littérature (AGRAWAL, 1989 ; MARKHAM, 1978). Substance 3 has been identified as alupeol. In the 1 H-NMR spectrum (Table 11), the signals referring to l-lupeol appear at 6.54 (d1, J = 2.0 Hz) and 4.66 (d1, J = 2.0). Hz), which are characteristic of the hydrogen of a terminal methylene group. The triplet at 3.31 (J = 2.5 Hz) is typical of hydrogen bonded to a carbinolic carbon. The doublet at 1.66 (d, J = 1.5 Hz) and singlet at 6 I, o; 0.94; 0.90; 0.82; 0.80 and 0.76 are characteristic of hydrogens of methylene groups of l-lupeol. The signals referring to the hydrogens of the additional CH and CH2 groups are detected between 6.0 and 2.4. The 13 C-NMR spectrum shows a signal which is characteristic of a carbonsolic carbon at 76.7. A signal referring to a quaternary carbon at 6150.4 is characteristic of a sp2 carbon. Using a DEPT, seven methyl-referenced signals can also be observed at 6 28.2; 22.0; 15.9; 16.1; 14.6; 18.0 and 19.3, and the signal referring to terminal methylene carbon can be observed at 6109.2. There are also 10 signals referring to the methylene groups between 18.3 and 40.0, and signals referring to five 50.4 methylene carbons; 49.0; 48.2; 47.9 and 38.0 (Table 11). Identification was confirmed by comparing the data found with those available in the literature (REYNOLDS, 1986, MA, 2004, MAHATO, 1994). Substance 4, identified as lup-20 (29) -en-3-one (lupenone), is a lupane triterpene. Signals identified in the 1 H-NMR spectrum (Table 12) at δ 4.5 (1H, dd, J29.30 = 1.5 Hz, J30.30 = 2.5 Hz) and 4.6 (1H, d, J30.30 = 2.5 Hz) were assigned to the hydrogens of the terminal methylene groups H-29a and H-29b. The 6 1,6 doublet and singles at 60,95, 6,866, 6,888 and 6,742 were assigned to the hydrogens of the methyl groups H-30, H-23, H-25, H-27 and H-28, respectively. The singlet at 0.99 was assigned to the hydrogens of the methyl groups H-24 and H-26. The signals referring to other groups CH and CH2 are located between 6 0.9 and 6.4. The 13 C-NMR spectrum showed a signal at 6,218.07, which is characteristic of the ketone carbonyl and was attributed to C-3 carbon. A 6 150.85 signal, which refers to a quaternary carbon, is characteristic of a sp2 carbon and has been assigned to C-20. Using DEPT, seven signals from the methyl groups at 6 21.03, 6 26, 6, 6, 15, 8, 6, 15, 9, 6, 14, 4, 6, 18.0 and 6 19.3 were assigned to carbons C-23 to C-28 and C-30, respectively, and the signal referring to terminal methylene C-29 at 8109.2 can also be detected. Ten signals referring to additional carbons of the methylene groups between b 19.6 and b 40.0 and signals referring to methylene carbons may also be noted 654.97, S 49, 82, 638.21, S 48.28 and S 47.96 corresponding to C-5, C-9, C-13, C-18 and C-19 (Table 12). Identification was confirmed by comparing the data found with those available in the literature (KIM 2001, MAHATO 1994). Substance P1, which is identified as myricetin-3-0- (3-galactopyranoside (5), has, in the 1 H-NMR spectrum (Table 13), signals located in the region corresponding to aromatic hydrogens which are typical in flavonoids The singlet in region b 12.6 (1H) has been assigned to hydroxyl hydrogen at C-5 The doublets at 6 6.17 (1H) and b 6.35 (1H) ), having coupling constants of 2.0 Hz, were assigned to H-6 and H-8 of the A-ring. The singlet at 8.20 (2H) was assigned to the 2 'and 6' hydrogens of the ring B. The observed signals (Table 13) are typical of aglicone myricetin, as reported in the literature (MARKHAM, 1978) In addition, the 1 H-NMR spectrum showed a doublet at 6.30 (J = 7, 5 Hz), which has been assigned to the H-1 "anomeric hydrogen of the sugar moiety The coupling constant of this hydrogen is common in an α-glycosidic bond The multiplets in the S regions 3.38 and 6 3, 60 were attributed to methyne and methylene hydrogens on the glysosidic fragment, based on a comparison with data reported in the literature. Analysis of the 13 C-NMR spectrum revealed 15 signals corresponding to the aglicone and six signals corresponding to the glycoside (Table 13). The signal in region b 133.7 (C-3), having a diamagnetic displacement, as well as the signals at 8 156.1 (C-2), S 177.3 (C-4) and δ 161.2 ( C-5) having paramagnetic signals as compared to myricetin, typically define the presence of a C-3-0 glycosidic ring C (AGRAWAL, 1989). The presence of oxygenated aromatic carbons was confirmed by the presence of signals at b 161.2 (C-5), b 164.1 (C-7), b 145.4 (C-3 'and C-5') and b 136.7 (C-4 '). The 13C-NMR spectrum had five signals located in the region between 60.0 and 75.9, in addition to the anomeric carbon, which is common in hexoses. The signal corresponding to the anomeric C-1 has a displacement of b 102.2 The 60.0 signal has been assigned to C-6 "based on the observation of the DEPT-135 experiment in which its signal appears inverted, which is characteristic of a methylene carbon. Additional signals (Table 13) were assigned to sugar methyl carbons after comparison with literature data (AGRAWAL 1989, MARKHAM 1978). The substance P2, which is identified as myricetin-3-O-α-galactopyranoside (6), has in its 1 H-NMR spectrum (Table 14) signals corresponding to the glycone fragment with displacements and multiplicities similar to those of substance 5, suggesting that it contains the same aglycone, myricetin. The spectral region of the glycosidic unit shows a broad singlet at 65.20 assigned to the H-1 "hydrogen anomers of the sugar, typical of the Ct-glycosidic bond The doublet absorbed at 6.89 (J = 6.5 Hz) referring to methyl H-6 "is characteristic of rhamnose. The signals at 63.30, 63.60, 63.81 and 65.47 are assigned to glycosidic hydrogens at C-4 ", C-5", C-3 "and C-2", respectively. Attributions are made by comparison with data available in the literature. The 13C-NMR spectrum revealed 15 signals corresponding to the aglycone and 6 signals corresponding to the glycoside (Table 14), the signals referring to the aglycone being similar to those of 5, which confirms that it refers to to the same aglycone, myricetin. The signals corresponding to the glycosidic portion with a chemical shift at 6102.2 and 617.6 are assigned to the C-1 "and C-6" anomeric carbons, respectively, the latter being typical of a methyl rhamnose carbon. Additional signals (Table 14) were assigned to sugar methyne carbons compared with literature data (AGRAWAL 1989, MARKHAM 1978).

La substance P3, qui est identifiée comme étant le quercétine-3-0-(3-galactopyranoside (7), présentait un signal dans la région qui correspond aux hydrogènes aromatiques communs aux flavonoïdes dans le spectre de RMN-1H (Tableau 15). Le singulet dans la région 6 12,6 (1H) a été attribué à l'hydrogène d'hydroxyle en C-5. Les doublets à 6 6,19 (1H) et 6 6,38 (1H), ayant des constantes de couplage de 2,0 Hz, ont été attribués à H-6 et H-8 du cycle A, respectivement. Le doublet à 6 7,53 (J = 2,5 Hz) a été attribué à l'hydrogène 2'. Le doublet à 6 6,82 (J = 8,5 Hz) et le doublet double à 6 7,67 (J = 2,5 et 8,5 Hz) ont été attribués à H-5' et H-6', respectivement. Les signaux notés (Tableau 15) sont typiques de l'aglicone quercétine (HARBONE, 1986). Le spectre de RMN-1H présentait un doublet à 6 5,37 (J = 7,5 Hz), qui a été attribué à l'hydrogène anomère H-1" du sucre. La constante de couplage de cet hydrogène est courante pour des liaisons î-glycosidiques. Les multiplets dans la région 6 3,38 et à 6 3,60 ont été attribués aux hydrogènes de méthyne et de méthylène du fragment glycosidique. Dans le spectre de RMN-13C, la substance P3 présentait 15 signaux correspondant à l'aglicone et six signaux correspondant au glycoside (Tableau 15). Le signal dans la région 6 133,4 (C-3), ayant un déplacement diamagnétique, ainsi que les signaux à 6 156,1 (C-2), 6 177,4 (C-4) et 6 161,2 (C-5) ayant des déplacements 36 paramagnétiques par comparaison avec la quercétine, définissent typiquement la présence d'un signal glycosidique à C-3-0 du cycle C (AGRAWAL, 1989). La présence de carbones aromatiques oxygénés a été confirmée par les signaux localisés à 8 161,2 (C-5), S 144,8 (C-3') et b 148,4 (C-4') dans le spectre de RMN-13C. Le signal correspondant à C-7, bien que non observé dans le spectre de RMN-13C, peut être confirmé par l'expérience gHMBC, dans laquelle on observe des corrélations entre ce carbone et les hydrogènes H-6 et H-8. Le spectre présentait aussi, en plus du carbone anomère, cinq signaux dans la région localisée entre b 60,02 et 75,9, qui sont typiques des hexoses. Le signal se référant au C-1" anomère présente un déplacement de b 102,2. Le signal à 6 60,02 a été attribué à C-6". Par comparaison avec les constantes de déplacement et les multiplicités des signaux (Tableau 15), ainsi que par comparaison avec des données rapportées dans la littérature, les signaux additionnels ont été attribués aux carbones de méthyne du sucre (AGRAWAL, 1989 ; MARKHAM, 1978). La substance P4 a été identifiée comme étant le quercétine-3-0-(3-arabinopyranoside (8). Les signaux détectés dans le spectre de RMN-1H (Tableau 16), qui correspondent au fragment aglicone, présentent des déplacements et multiplicités qui sont similaires à ceux que présente la substance P3, suggérant donc qu'il s'agit de la même aglicone, la quercétine. Le spectre de RMN-1H présentait un doublet à 6 5,25 (J = 5,0 Hz) qui a été attribué à l'hydrogène anomère de sucre H-1". La constante de couplage de cet hydrogène est typique de la liaison a-glycosidique. Les multiplets dans les régions S 3,38 et 6 3,60 ont été attribués aux hydrogènes de méthyne et de méthylène du fragment glycosidique par comparaison avec des données disponibles dans la littérature (FRAISSE, 2000). Le spectre de RMN-13C présentait 15 signaux se référant à l'aglicone et six signaux qui se réfèrent au glycoside (Tableau 16), les signaux se référant à l'aglicone étant similaires à ceux de P1, ce qui confirme qu'il s'agit de la même aglicone, à savoir la quercétine. Substance P3, which is identified as quercetin-3-O- (3-galactopyranoside (7), showed a signal in the region corresponding to aromatic hydrogens common to flavonoids in the 1 H-NMR spectrum (Table 15). The singlet in region 6 12.6 (1H) was assigned to the C-5 hydroxyl hydrogen The doublets at 6 6.19 (1H) and 6 6.38 (1H), having coupling of 2.0 Hz, were assigned to H-6 and H-8 of ring A. The doublet at 6 7.53 (J = 2.5 Hz) was assigned to hydrogen 2 '. doublet at 6.82 (J = 8.5 Hz) and the double doublet at 67.67 (J = 2.5 and 8.5 Hz) were assigned to H-5 'and H-6' respectively The signals noted (Table 15) are typical of aglicone quercetin (HARBONE, 1986) .The 1H-NMR spectrum showed a doublet at 65.37 (J = 7.5 Hz), which was attributed to H-1 anomeric hydrogen of the sugar The coupling constant of this hydrogen is common for β-glycosyl bonds The multiplets in region 6.38 and at 3.60 were assigned to methyne and methylene hydrogens of the glycosidic moiety. In the 13 C-NMR spectrum, substance P3 had 15 signals corresponding to the aglicone and six signals corresponding to the glycoside (Table 15). The signal in region 6 133.4 (C-3), having a diamagnetic displacement, as well as the signals at 6 156.1 (C-2), 6 177.4 (C-4) and 6 161.2 ( C-5) having paramagnetic shifts compared to quercetin, typically define the presence of a C-3-0 glycoside signal of the C-ring (AGRAWAL, 1989). The presence of oxygenated aromatic carbons was confirmed by the signals located at 8 161.2 (C-5), S 144.8 (C-3 ') and b 148.4 (C-4') in the NMR spectrum. 13 C. The signal corresponding to C-7, although not observed in the 13 C-NMR spectrum, can be confirmed by the gHMBC experiment, in which correlations are observed between this carbon and the H-6 and H-8 hydrogens. The spectrum also had, in addition to the anomeric carbon, five signals in the region between b 60.02 and 75.9, which are typical of hexoses. The signal referring to the anomeric C-1 has a shift of 102.2 The signal at 6 60.02 was assigned to C-6. Compared with the displacement constants and multiplicities of the signals (Table 15), as well as by comparison with data reported in the literature, the additional signals were attributed to methyne carbons of sugar (AGRAWAL, 1989, MARKHAM, 1978). . Substance P4 has been identified as quercetin-3-0- (3-arabinopyranoside (8).) The signals detected in the 1 H-NMR spectrum (Table 16), which correspond to the aglicone fragment, exhibit displacements and multiplicities which are similar to those of substance P3, suggesting that it is the same aglicone, quercetin.1H NMR spectrum had a doublet at 65.25 (J = 5.0 Hz) which has been assigned to hydrogen-anomeric H-1-sugar. "The coupling constant of this hydrogen is typical of the α-glycosidic bonds.The multiplets in the S regions 3.38 and 3.60 have been attributed to methyne and methylene of the glycosidic moiety compared with data available in the literature (FRAISSE, 2000) The 13C-NMR spectrum showed 15 signals referring to aglicone and six signals that refer to the glycoside (Table 16), the signals referring to the aglicone being similar s to those of P1, which confirms that it is the same aglicone, namely quercetin.

En plus du carbone anomère à 8 101,4, quatre signaux ont été notés dans des régions localisées entre 6 64,3 et 71,1, qui sont typiques d'un pentose. Après comparaison avec des données disponibles dans la littérature, les signaux additionnels (Tableau 16) ont été attribués aux carbones de méthyne de sucre (FRAISSE 2000 ; MARKHAM, 1978). La substance P6.1 a été identifiée comme étant le quercétine-3-0-î-rhamnopyranoside (9). Les signaux observés dans le spectre de RMN-1H (Tableau 17), qui se réfèrent au fragment aglicone, présentent des déplacements et multiplicités similaires à ceux de la substance FM-P4, suggérant donc qu'il s'agit de la même aglicone, à savoir la quercétine. Le spectre de RMN-1H présentait un doublet à 6 5,26, ayant une constante de couplage de 1,0 Hz, qui a été attribué à l'hydrogène anomère de sucre H-1", lequel est typique de la liaison î-glycosidique. Le doublet observé à 6 0,82 (J = 6,0 Hz), qui se réfère au H-6" de méthyle, est caractéristique du rhamnose. Les signaux additionnels dans la région localisée entre b 3,12 et 3,97 ont été attribués aux hydrogènes de méthyne glycosidique, par observation des signaux, de la multiplicité des signaux et des constantes de couplage dans le spectre de RMN-1H. Le spectre de RMN-13C contenait 15 signaux qui se réfèrent à l'aglicone et six signaux se référant au glycoside (Tableau 17), les signaux se référant à l'aglicone étant similaires à ceux de la substance P1, ce qui confirme qu'il s'agit de la même aglicone, à savoir la quercétine. Le spectre de RMN-13C présentait aussi six signaux correspondant au fragment glycosidique, caractérisant par conséquent un hexose. Les signaux ayant 38 les déplacements chimiques b 102,2 et b 17,6 ont été attribués au carbone anomère C-1" et au carbone de méthyle C-6". Après comparaison avec des données disponibles dans la littérature, les signaux additionnels (Tableau 17) ont été attribués aux carbones de méthyle de sucre (AGRAWAL, 1989 ; MARKHAM, 1978). La substance P6.2 a été identifiée comme étant le myricétine-3-0-(2"-0-galloil)-a-rhamnopyranoside (11). Les signaux observés dans le spectre de RMN-1H qui se réfèrent au fragment aglicone présentent des déplacements et multiplicités similaires à ceux de la substance P2 (Tableau 18), ce qui suggère qu'il s'agit de la même aglicone, à savoir la myricétine. La région du spectre correspondant au motif glycosidique présentait un doublet à 6 5,50 (J = 1,5 Hz), qui a été attribué au carbone anomère de sucre H-1", qui est typique de la liaison oc-glycosidique. Le doublet détecté à 6 0,83 (J = 5,5 Hz), qui se réfère au H-6" de méthyle, est caractéristique du rhamnose. Les signaux à 8 3,30, S 3,60, S 3,81 et S 5,47 ont été attribués aux hydrogènes glycosidiques à C-4", C-5", C-3" et C-2", respectivement. Le déplacement chimique observé pour le carbone anomère (6 5,50) et H-2" (b 5,47), ainsi que la présence d'un singulet dans le spectre de RMN-1H à 6,92 (2H), suggèrent la présence d'un groupe aromatique lié au motif glycosidique. Le spectre de RMN-13C présentait des signaux qui sont typiques de l'aglicone myricétine (Tableau 18). En ce qui concerne le fragment glycosidique, le spectre de RMN-13C présente un signal avec un déplacement chimique de b 98,3, qui est attribué au carbone anomère C-1" et un signal à 8 17,6, qui est typique du carbone de méthyle de rhamnose C-6". Par comparaison avec des données disponibles dans la littérature et observation des corrélations des expériences gHMQC et gHMBC, les signaux additionnels (Tableau 18) ont été attribués. La présence d'un signal à 39 Ô 165,7, qui représente un déplacement chimique typique d'un carbonyle d'ester, les signaux à 8 119,4 ; S 108,0 ; 6 145,0 et S 138,6 typiques d'un carbone aromatique, ainsi que le déplacement chimique atypique observé pour C-1" et C-2", indiquent la présence d'un ester d'acide gallique lié au carbone de rhamnose C-2", en identifiant ainsi la substance comme étant le myricétine-3-O-(2"-O-galloil)-arhamnose. On a confirmé l'identification en comparant les données trouvées à celles disponibles dans la littérature (LEE, 2000 ; NICOLIIER, 1983). La substance P5.3 a été identifiée comme étant le myricétine-3-0-(3"-0-galloil)-a-rhamnopyranoside (10). Les signaux observés dans le spectre de RMN-1H (Tableau 19), qui se réfèrent à l'aglicone et à l'ester d'acide gallique, étaient similaires à ceux observés pour P62, une différence étant observée uniquement dans les déplacements chimiques se référant au motif glycosidique. Le spectre de RMN-1H présentait un doublet à 8 5,04 (J = 2,0 Hz), qui est attribué à l'hydrogène anomère C-1". Le doublet observé à 6 0,83 (J = 5,5 Hz), qui se réfère au H-6" de méthyle, est caractéristique du rhamnose. Les signaux localisés à 6 3,67, b 3,50, b 5,03 et b 4,3 ont été attribués à H-5", H-4", H-3" et H-2". Le spectre de RMN-13C présentait des signaux ayant des déplacements chimiques analogues à ceux de P62, des différences significatives étant détectées uniquement dans le déplacement chimique des carbones C-1" (b 102,7), C-2" (6 67,8), C-3" (S 73,9) et C-4" (S 70,8), ceci indiquant que l'ester d'acide gallique est lié au motif glycosidique en position C-3" (Tableau 19). Les données ont été confirmées par comparaison avec celles de la littérature (LEE, 2000). La Figure 2 décrit les structures de toutes les substances qui ont été isolées et/ou identifiées à partir des études phytochimiques dans des feuilles de 5 Sclerolobium. Tableau 9 Données de RMN-1H et 13C pour l'î-tocophérol (1) (500 MHz et 125 MHz, respectivement, CDC13) C RMN-1H RMN-13C 2 74,5 3 1,7 t (J 7,0 Hz) 32,7 4 2,53t (J 7,0 Hz) 20,8 4ème 117,4 118,5 6 145,6 7 121,0 8 -------- 122,6 8ème 145,6 1' d 1,0 m 39,9 2' 21,1 3' 1,0/1,3 (m) 37,5 4' d 1,7 (m) 32,7 5' 1,0/1,3 (m) 37,5 6' 1,1 (m) 24,8 7' 1,0/1,3 (m) 37,3 8' 1,3 (m) 32,8 9' 1,0/1,3 (m) 37,4 10' 1,1 (m) 24,8 11' 1,45 (m) 39,4 12' 28,0 2-CH3 1,15 (s) 23,8 5-CH3 2,03 (s) 11,2 7-CH3 2,03 (s) 12,2 8-CH3 2,03 (s) 11,7 4'-CH3 0,8 (d) 19,6 8'-CH3 0,8 (d) 19,7 12'-CH3 0,8 (d) 22,6 12'-CH3 0,8 (d) 22,7 510 Tableau 10 Données de RMN-1H et 13C pour le squalène (2) (500 MHz et 125 MHz, CDC13) Tableau 11 Données de RMN-1H et 3C pour le lupéol (3) (500 MHz et 125 MHz, respectivement, CDC13) C RMN-1H RMN-13C 1 * 33,2 * 25,4 3,35 (t, J = 2,5 Hz) 76,7 C RMN-1H (ppm) RMN-13C (ppm) 1 et 24 2 et 23 3 et 22 4 et 21 et 20 6 et 19 7 et 18 8 et 17 9 et 16 et 15 11 et 14 12 et 13 25 et 30 26 et 29 27 et 28 1,69 (6H, dd, J = 1,0 et 1,5 Hz) 25,7 131,2 5,10 (2H, m) 124,4 2,10 (4H) 26,7 2,01 (4H) 39,8 134,9 5,11 (2H) 124,3 2,01 (4H) 28,3 2,01 (4H) 39,7 135,1 5,10 (2H) 124,3 2,01 (4H) 28,3 1,61 (6H) 17,7 1,61 (6H) 16,0 1,61 (6H) 16,0 * * 49,0 18,3 34,2 41,0 * * * ------------ C RMN-1H RMN-13C 9 * 50,4 10 ------------ * * 11 * 20,9 12 * 25,2 13 * 38,0 14 42, 9 15 * 27,4 16 * 35,6 17 43,0 18 * 48,2 19 * 47,9 20 150,5 21 * 29,8 22 * 40,0 23 0,94 (3H, s) 28,2 24 1,00 (3H, s) 22,0 25 0,80 (3H, s) 16,1 26 0,99 (3H, s) 15,9 27 0,82 (3H, s) 14,6 28 0,76 (3H, s) 18,0 29& 4,54 (1H, dl, J = 2,0 Hz) 109,3 29b 4,66 (1H, dj, J = 2,0 Hz) 30 1,66 (3H, d, J30,29 = 1,5 Hz) 19,3 * Signaux superposés à ceux de la substance FH62, déplacements chimiques entre b 0,9 et 2,4 ** Signaux superposés Tableau 12 Données de RMN-1H et C pour la lupénone (4) (500 MHz et 125 MHz, respectivement, CDC13) RMN-1H (ppm) RMN-13C (ppm) 39,6 34,1 218,1 47,3 55,0 19,6 33,6 40,8 49,8 36,9 21,5 25,2 38,2 42,9 27,5 35,5 43,0 48,3 48,0 150,8 29,8 40,0 21,0 26,6 15,8 15,9 14,4 18,0 = 2,5 Hz) 109,2 4,60 (1H, dl, J = 2,5 Hz) 1,00 (2H) 1,30 (2H) 0,95 (3H, s) 0,99 (3H, s) 0,86 (3H, s) 0,99 (3H, s) 0,88 (3H, s) 0,72 (3H, s) 4,50 (1H, dl, J 1,30 (2H) 1, 25 (1H) 1,36 (2H) 1,36 (2H) In addition to the 8 101.4 anomeric carbon, four signals were noted in regions located between 64.3 and 71.1, which are typical of a pentose. After comparison with data available in the literature, the additional signals (Table 16) were assigned to methyne carbons of sugar (FRAISSE 2000, MARKHAM, 1978). Substance P6.1 has been identified as quercetin-3-0-1-rhamnopyranoside (9). The signals observed in the 1 H NMR spectrum (Table 17), which refer to the aglicone fragment, exhibit displacements and multiplicities similar to those of the substance FM-P4, thus suggesting that it is the same aglicone, namely quercetin. The 1 H-NMR spectrum showed a 5,26 doublet, having a coupling constant of 1.0 Hz, which was assigned to the H-1 "sugar-anomeric hydrogen, which is typical of the binding. glycoside The doublet observed at 6.82 (J = 6.0 Hz), which refers to methyl H-6 ", is characteristic of rhamnose. Additional signals in the localized region between b 3.12 and 3.97 were attributed to methyne glycosidic hydrogens by observation of signals, multiplicity of signals, and coupling constants in the 1 H-NMR spectrum. The 13C-NMR spectrum contained 15 signals that refer to the aglicone and six signals referring to the glycoside (Table 17), the signals referring to the aglicone being similar to those of the substance P1, which confirms that it is the same aglicone, namely quercetin. The 13 C-NMR spectrum also showed six signals corresponding to the glycosidic moiety, thus characterizing a hexose. Signals with b 102.2 and b 17.6 chemical shifts were assigned to the C-1 "anomeric carbon and the C-6 methyl carbon. After comparison with data available in the literature, the additional signals (Table 17) were assigned to methyl carbons of sugar (AGRAWAL, 1989, MARKHAM, 1978). Substance P6.2 has been identified as myricetin-3-O- (2 "-O-Galloil) -α-rhamnopyranoside (11) .The signals observed in the 1 H-NMR spectrum which refer to the aglicone fragment exhibit displacements and multiplicities similar to those of the substance P2 (Table 18), which suggests that it is the same aglicone, namely myricetin The region of the spectrum corresponding to the glycoside unit had a doublet at 6 5, 50 (J = 1.5 Hz), which was assigned to the H-1 "sugar anomeric carbon, which is typical of the α-glycosidic bond. The doublet detected at 6 0.83 (J = 5.5 Hz), which refers to methyl H-6 ", is characteristic of rhamnose.The signals at 8 3.30, S 3.60, S 3.81 and S 5.47 were assigned to glycosidic hydrogens at C-4 ", C-5", C-3 "and C-2", respectively.The chemical shift observed for the anomeric carbon (6, 5.50) and H -2 "(b 5.47), as well as the presence of a singlet in the 1H-NMR spectrum at 6.92 (2H), suggest the presence of an aromatic group linked to the glycosidic unit. The 13C-NMR spectrum showed signals that are typical of aglicone myricetin (Table 18). With respect to the glycosidic moiety, the 13 C-NMR spectrum shows a signal with a chemical shift of b 98.3, which is attributed to the C-1 "anomeric carbon, and an 8 17.6 signal, which is typical of Rhamnose methyl carbon C-6 ". Compared with data available in the literature and observation of the correlations of the gHMQC and gHMBC experiments, the additional signals (Table 18) were assigned. The presence of a signal at 39 δ 165.7, which represents a typical chemical shift of an ester carbonyl, signals at 11919.4; S, 108.0; 6 145.0 and S 138.6 typical of an aromatic carbon, as well as the atypical chemical shift observed for C-1 "and C-2", indicate the presence of a rhamnose carbon-linked gallic acid ester C-2 ", thereby identifying the substance as myricetin-3-O- (2" -O-galloil) -arhamnose. Identification was confirmed by comparing the data found with those available in the literature (LEE 2000, NICOLIIER 1983). Substance P5.3 was identified as myricetin-3-0- (3 "-O-galloil) -α-rhamnopyranoside (10), and signals observed in the 1 H-NMR spectrum (Table 19), which the aglicone and gallic acid ester were similar to those observed for P62, a difference being observed only in the chemical shifts referring to the glycosidic unit.1H-NMR spectrum exhibited a doublet at 8 , 04 (J = 2.0 Hz), which is attributed to C-1 hydrogen anomer. The doublet observed at 6 0.83 (J = 5.5 Hz), which refers to methyl H-6 ", is characteristic of rhamnose.The signals located at 6 3.67, b 3.50, b 5, 03 and b 4.3 were assigned to H-5 ", H-4", H-3 "and H-2" .The 13C-NMR spectrum showed signals with chemical shifts similar to those of P62, significant differences being detected only in the chemical shift of the C-1 "(b 102.7), C-2" (6 67.8), C-3 "(S 73.9) and C-4" (S 70.8), indicating that the gallic acid ester is bound to the glycosidic unit at the C-3 "position (Table 19). The data were confirmed by comparison with those in the literature (LEE, 2000). Figure 2 depicts the structures of all substances that have been isolated and / or identified from phytochemical studies in Sclerolobium leaves. Table 9 1H-NMR and 13C-NMR data for 1-tocopherol (1) (500 MHz and 125 MHz, respectively, CDCl 3) C 1 H-NMR 13 C NMR 2 74.5 3 1.7 t (J 7.0 Hz) 32.7 4 2.53t (J 7.0 Hz) 20.8 4th 117.4 118.5 6 145.6 7 121.0 8 -------- 122.6 8th 145.6 1 'd 1.0 m 39.9 2' 21.1 3 '1.0 / 1.3 (m) 37.5 4' d 1.7 (m) 32.7 5 '1.0 / 1, 3 (m) 37.5 6 '1.1 (m) 24.8 7' 1.0 / 1.3 (m) 37.3 8 '1.3 (m) 32.8 9' 1.0 / 1.3 (m) 37.4 10 '1.1 (m) 24.8 11' 1.45 (m) 39.4 12 '28.0 2-CH3 1.15 (s) 23.8 5 CH3 2.03 (s) 11.2 7-CH3 2.03 (s) 12.2 8-CH3 2.03 (s) 11.7 4'-CH3 0.8 (d) 19.6 8'- CH3 0.8 (d) 19.7 12'-CH3 0.8 (d) 22.6 12'-CH3 0.8 (d) 22.7 510 Table 1 1H NMR and 13C data for squalene ( 2) (500 MHz and 125 MHz, CDCl3) Table 11 1 H and 3 C NMR Data for Lupeol (3) (500 MHz and 125 MHz, respectively, CDCl 3) C 1 H NMR 13 C NMR * 33.2 * 25.4 3.35 (t, J = 2.5 Hz) 76.7 C 1 H-NMR (ppm) 13 C-NMR (ppm) 1 and 24 2 and 23 3 and 22 4 and 21 and 20 6 and 19 7 and 18 8 and 17 9 and 16 and 15 11 and 14 12 and 13 25 and 30 26 and 29 27 and 28 1.69 (6H, dd, J = 1.0 and 1.5 Hz) 25.7 131.2 5.10 (2H, m) 124.4 2.10 (4H) 26.7 2.01 (4H) ) 39.8 134.9 5.11 (2H) 124.3 2.01 (4H) 28.3 2.01 (4H) 39.7 135.1 5.10 (2H) 124.3 2.01 (4H) 4H) 28.3 1.61 (6H) 17.7 1.61 (6H) 16.0 1.61 (6H) 16.0 * * 49.0 18.3 34.2 41.0 * * * - ----------- NMR-1H NMR-13C 9 * 50.4 10 ------------ * * 11 * 20.9 12 * 25.2 13 * 38.0 14 42, 9 15 * 27.4 16 * 35.6 17 43.0 18 * 48.2 19 * 47.9 20 150.5 21 * 29.8 22 * 40.0 23 0.94 ( 3H, s) 28.2 24 1.00 (3H, s) 22.0 0.80 (3H, s) 16.1 26 0.99 (3H, s) 15.9 27 0.82 (3H, s) s) 14.6 28 0.76 (3H, s) 18.0 29 & 4.54 (1H, d1, J = 2.0 Hz) 109.3 29b 4.66 (1H, d1, J = 2.0 Hz) 1.66 (3H, d, J30.29 = 1.5 Hz) 19.3 * Signals superimposed on those of substance FH62, chemical shifts between b 0.9 and 2.4 ** Superimposed signals Table 12 1 H and C NMR data for lupenone (4) (500 MHz and 125 MHz, respectively, CDCl3) 1 H-NMR (ppm) 13 C-NMR (ppm) 39.6 34.1 218.1 47.3 55, 0 19.6 33.6 40.8 49.8 36.9 21.5 25.2 38.2 42.9 27.5 35.5 43.0 48.3 48.0 150.8 29.8 40.0 21.0 26.6 15.8 15.9 14.4 18.0 = 2.5 Hz) 109.2 4.60 (1H, d1, J = 2) , 5Hz) 1.00 (2H) 1.30 (2H) 0.95 (3H, s) 0.99 (3H, s) 0.86 (3H, s) 0.99 (3H, s) O, 88 (3H, s) 0.72 (3H, s) 4.50 (1H, dl, J 1.30 (2H) 1, 25 (1H) 1.36 (2H) 1.36 (2H)

1,31 (1H) 1.31 (1H)

1,59 (2H) 1,63 (2H) 1,59 (1H) 1.59 (2H) 1.63 (2H) 1.59 (1H)

1,00 (2H) 1,43(2H) 1.00 (2H) 1.43 (2H)

1,30 (1H) 2,30 (1H)5 RMN-1H (ppm) RMN-13C (ppm) 1,61 (3H, sl) 19,3 Tableau 13 Données de RMN-1H et 3C pour P1 [myricétine-3-0-(3-galactopyranoside (5)] (500 MHz et 125 MHz ; DMSO-d6) C RMN-1H RMN-13C 2 156, 1* 3 134,8 4 177,7 12,6 (sl) 161,3 6 6,17 (d, J = 2,0 Hz) 98,8 7 165,7 8 6,35 (d, J = 2,0 Hz) 93,7 9 156,2* 103,6 1' 119,9 2' 7,20 (s) 108,5 3' 145,4 4' 136,7 5' 145,4 6' 7,20 (s) 108,5 1" 5,30 (d, J = 7,5 Hz) 102,1 2" 3,60 (m) 71,2 3" 3,38 (m) 73,9 4" 3,64 (m) 68,0 5" 3,38 (m) 75,9 6" 3,45 (m) 60,0 5-OH 12,6 (sl) C 30 Tableau 14 Données de RMN-1H et 13C pour P2 [myricétine-3-O-î-rhamnopyranoside (6)] (500 MHz et 125 MHz ; DMSO-d6) C RMN-1H RMN-13C 2 157,6 3 134,4 4 177,8 161,4 6 6,18 (d, J = 2,0 Hz) 98,8 7 164,4 8 6,35 (d, J = 2,0 Hz) 93,6 9 156,5 104,0 1' 119,7 2' 6,88 (s) 108,0 3' 145,9 4' 136,6 5' 145,8 6' 6,88 (s) 108,0 5,20 (sl) 102,0 2" 3,54 (m) 70,4 3" 3,38 (m) 70,6 4" 3,15 (m) 71,4 5" 3,98 (sl) 70,1 6" 0,89 (d, J = 6,5 Hz) 17,6 5-OH 12,6 (sl) -------- 5 Tableau 15 Données de RMN-1H et 3C pour P3 [quercétine-3-0-(3-galactopyranoside (7)] (500 MHz et 125 MHz ; DMSO-d6) C RMN-1H RMN-13C 2 156, 1* 3 133,4 4 177,4 161,2 6 6,19 (d, J = 2,0 Hz) 98,7 7 164,0 8 6,40 (d, J = 2,0 Hz) 93,5 9 156,2* 103,8 1' 121,0 2' 7,53 (d, J = 2,5 Hz) 115,1 3' 144,8 4' 148,4 5' 6,82 (d, J = 8,5 Hz) 115,9 6' 7,67 (dd, J = 2,5 et 8,5 Hz) 121,9 1" 5,36 (d, J = 7,5 Hz) 101,8 2" 3,57 (t, J = 8,0 Hz) 71,2 3" 3,38 (dd, J = 8,0 et 3,5 Hz) 73,1 4" 3,64 (d, J = 3,5 Hz) 67,9 5" 3,38 (m) 75,8 6" 3,45 (m) 60,0 5-OH 12,6 (si) -------- 46 5 Tableau 16 Données de RMN-1H et 3C pour P4 [(quercétine-3-0-(3-arabinopyranoside (8)] (500 MHz et 125 MHz ; DMSO-d6) C RMN-1H RMN-13C 2 156,3 3 133,8 4 177,5 12,6 (sl) 161,2 6 6,18 (d, J = 1,5 Hz) 98,7 7 164,4 8 6,38 (d, J = 1,5 Hz) 93,6 9 156,3 104,0* 1' 120,9 2' 7,50 (d, J = 2,5 Hz) 115,8 3' 145,0 4' 148,6 5' 6,83 (d, J = 8,5 Hz) 115,4 6' 7,61 (dd, J = 2,5 et 8,5 Hz) 122,0 1" 5,25 (d, J = 5,0 Hz) 101,4 2" 3,57 70,8 3" 3,40 71,1 4" 3,57 66,1 5" 3,38 64,3 5-OH 12,6 (sl) 47 5 Tableau 17 Données de RMN-1H et 3C pour P6.1 [quercétine-3-O-î-rhamnopyranoside (9)] (500 MHz et 125 MHz ; DMSO-d6) C 2 3 4 6 7 8 9 10 1' 2' 3' 4' 5' 6' 1" 2" 3" 4" 5" 6" 5-OH RMN-1H RMN-13C 157,2 134,2 177,7 161,2 6,20 (sl) 98,6 164,2 6,38 (sl) 93,6 156,4 104,0 120,7 7,30 (d, J = 2,0 Hz) 115,6 145,1 148,4 6,87 (d, J = 8,5 Hz) 115,4 7,26 (dd, J = 2,0 et 8,5 Hz) 121,0 5,25 (d, J = 1,0 Hz) 101,8 3,90 (dd, J = 1,0 et 3,0 Hz) 70,0 3,50 (dd, J = 3,0 et 9,5 Hz) 70,3 3,14 (t, J = 9,5 Hz) 71,1 3, 21 (dd, J = 6,0 et 9,5 Hz) 70,5 0,82 (d, J = 6,0Hz) 17,4 12,6 (sl) 5 5 Tableau 18 Données de RMN-1H et 13C pour P6.2 [myricétine-3-O-(2"-O-galloil)-î-rhamnopyranoside (11)] (500 MHz et 125 MHz ; DMSO-d6) C RMN-1H RMN-13C 2 157,5 3 133,4 4 177,5 161,3 6 6,20 (sl) 98,7 7 165,0 8 6,38 (sl) 93,6 9 156,5 104,0 1' 119,8 2' 6,95 (s) 108,8 3' 145,8 4' 136,6 5' 145,8 6' 6,95(s) 108,8 1" 5,50 (d, J = 1,5 Hz) 98,3 2" 5,47 (dd, J = 1,5 et 3,0 Hz) 71,7 3" 3,81 (dd, J = 3,0 et 8,5 Hz) 70,1 4" 3,30 (t, J = 8,5) 68,6 5" 3,6 (m) 70,4 6" 0,94 (d, J = 5,5 Hz) 17,6 119,4 6,92 108,0 3"' 145,4 138,6 5"' 145,4 6,92 108,0 C=0 165,0 5-OH 12,6 (sl) C RMN-1H RMN-13C Tableau 19 Données de RMN-1H et 13C pour P5.3 [myricétine-3-0-(3"-0-galloil)-î-rhamnopyranoside (10)] (500 MHz et 125 MHz 5 DMSO-d6) C RMN-1H RMN-13C 2 157,6 3 134,8 4 177,7 161,3 6 6,18 (d, J = 2,0 Hz) 98,7 7 164,2 8 6,36 (d, J = 2,0 Hz) 93,5 9 156,5 104,0 1' 120,0 2' 7,03 (s) 108,9 3' 145,8 4' 136,5 5' 145,8 6' 7,03 (s) 108,9 5,04 (d, J = 2,0 Hz) 102,7 2" 4,3 (si) 67,8 3" 5,03 73,9 4" 3,50 (t, J = 10 Hz) 70,8 5" 3,67 (dd, J = 10 et 6,0 Hz) 68,7 6" 0,91 (d, J = 6,0 Hz) 17,4 119,6 6,88 107,9 3"' 145,3 138,3 5"' 145,3 C RMN-1H RMN-13C 6"' 6,88 107,9 C=0 165,7 Exemple 7 Evaluation de l'action antioxydante d'extraits et de substances obtenus à partir de feuilles de Sclerolobium A. DPPH On solubilise l'extrait végétal et des échantillons de substance pure dans du MeOH, et on obtient des solutions ayant des concentrations connues, que l'on dilue sur des plaques à 96 puits, et l'on obtient ainsi sept solutions ayant différentes concentrations. On transfère une aliquote de 100 pl de chaque solution (en triple) sur la plaque de lecture et ensuite on ajoute 200 pl de solution de DPPH (à 40 pg/ml), on place immédiatement la plaque dans l'obscurité pendant 30 minutes et on effectue la lecture. Les extraits hydro-alcooliques obtenus par l'extraction de feuilles de Sclerolobium spp avec de l'eau, de l'éthanol ou un de leurs mélanges, et les substances antioxydantes représentées par les Formules 5 à 11 (Figure 2), ont des propriétés antioxydantes, comme le montrent les résultats de la capacité de piégeage du radical DPPH (Figures 5 à 8). Ces résultats indiquent aussi des potentiels antioxydants supérieurs pour les extraits obtenus à partir de S. aureum, par comparaison avec ceux obtenus à partir de feuilles des deux autres espèces. Est également évident le potentiel antioxydant (piégeage de radicaux libres) supérieur des gallates de myricétine 10 et 11 (Figure 8), que l'on peut expliquer par la présence de deux groupes trihydroxyphényle dans chacune de ces substances. Comme les extraits hydro-alcooliques de S. aureum présentent les meilleurs résultants dans les tests DPPH, on les a soumis à des tests d'évaluation de l'activité de protection de membrane dans des essais de peroxydation des lipides. 1.30 (1H) 2.30 (1H) 1 H-NMR (ppm) 13C-NMR (ppm) 1.61 (3H, s) 19.3 Table 13 1H-NMR and 3C data for P1 [myricetin-1H] 3-0- (3-galactopyranoside (5)] (500 MHz and 125 MHz; DMSO-d6) C 1 H NMR 13 C-NMR 2 156, 1 * 3 134.8 4 177.7 12.6 (sl) 161 , 6.36.17 (d, J = 2.0 Hz) 98.8 7 165.7 8 6.35 (d, J = 2.0 Hz) 93.7 9 156.2 * 103.6 1 ' 119.9 2 '7.20 (s) 108.5 3' 145.4 4 '136.7 5' 145.4 6 '7.20 (s) 108.5 1 "5.30 (d, J = 7.5 Hz) 102.1 2 "3.60 (m) 71.2 3" 3.38 (m) 73.9 4 "3.64 (m) 68.0 5" 3.38 (m) 75 Table 14 1H-NMR and 13C-NMR data for P2 [myricetin-3-O-1-rhamnopyranoside (6)] (1H NMR (400 MHz, CDCl3))? 500 MHz and 125 MHz; DMSO-d6) C 1 H NMR 13 C NMR 2 157.6 3 134.4 4 177.8 161.4 6 6.18 (d, J = 2.0 Hz) 98.8 7 164.4 8 6.35 (d, J = 2.0 Hz) 93.6 9 156.5 104.0 1 '119.7 2' 6.88 (s) 108.0 3 '145.9 4' 136.6 5 '145.8 6' 6.88 (s) 108.0 5.20 (sl) 102.0 2 "3.54 (m) 70.4 3" 3.38 (m) 70.6 4 "3.15 (m) 71.4 5" 3.98 (sl) 70.1 6 "0.89 (d, J = 6.5 Hz) 17.6 5-OH 12.6 (sl) - ------- 5 Table 15 Donn 1H-NMR and 3C for P3 [quercetin-3-0- (3-galactopyranoside (7)] (500 MHz and 125 MHz; DMSO-d6) C 1 H NMR 13 C-NMR 2 156, 1 * 3 133.4 4 177.4 161.2 6 6.19 (d, J = 2.0 Hz) 98.7 7 164.0 8 6 , 40 (d, J = 2.0 Hz) 93.5 9 156.2 * 103.8 1 '121.0 2' 7.53 (d, J = 2.5 Hz) 115.1 3 '144, Δ 148.4 δ 6.82 (d, J = 8.5 Hz) 115.9 ± 7.67 (dd, J = 2.5 and 8.5 Hz) 121.9 ± 5, 36 (d, J = 7.5 Hz) 101.8 2 "3.57 (t, J = 8.0 Hz) 71.2 3" 3.38 (dd, J = 8.0 and 3.5 Hz ) 73.1 4 "3.64 (d, J = 3.5 Hz) 67.9 5" 3.38 (m) 75.8 6 "3.45 (m) 60.0 5-OH 12.6 (si) -------------------------------------------------------------------------------------------------------------- Table 16 1H-NMR and 3C data for P4 [(quercetin-3-0- (3-arabinopyranoside (8)] (500 MHz and 125 MHz; DMSO-d6 ) C NMR-1H NMR-13C 2 156.3 3 133.8 4 177.5 12.6 (sl) 161.2 6 6.18 (d, J = 1.5 Hz) 98.7 7 164.4 6.38 (d, J = 1.5 Hz) 93.6 9 156.3 104.0 * 1 '120.9 2' 7.50 (d, J = 2.5 Hz) 115.8 3 ' 145.0 4 '148.6 5' 6.83 (d, J = 8.5 Hz) 115.4 6 '7.61 (dd, J = 2.5 and 8.5 Hz) 122.0 1 " 5.25 (d, J = 5.0 Hz) 101.4 2 "3.57 70.8 3" 3.40 71.1 4 "3.57 66.1 5" 3.38 64.3 5- OH 12.6 (sl) 47 Table 17 1H-NMR and 3C data for P6.1 [quercetin-3-O-1-rh] amnopyranoside (9)] (500 MHz and 125 MHz; DMSO-d6) C 2 3 4 6 7 8 9 10 1 '2' 3 '4' 5 '6' 1 "2" 3 "4" 5 "6" 5-OH 1 H NMR 13 C-NMR 157.2 134 , 2 177.7 161.2 6.20 (sl) 98.6 164.2 6.38 (sl) 93.6 156.4 104.0 120.7 7.30 (d, J = 2.0 Hz ) 115.6 145.1 148.4 6.87 (d, J = 8.5 Hz) 115.4 7.26 (dd, J = 2.0 and 8.5 Hz) 121.0 5.25 (d, J = 8.5 Hz) d, J = 1.0 Hz) 101.8 3.90 (dd, J = 1.0 and 3.0 Hz) 70.0 3.50 (dd, J = 3.0 and 9.5 Hz) 70 , 3.14 (t, J = 9.5 Hz) 71.1 3, 21 (dd, J = 6.0 and 9.5 Hz) 70.5 0.82 (d, J = 6.0 Hz) 17.4 12.6 (sl) Table 18 1H-NMR and 13C data for P6.2 [myricetin-3-O- (2 "-O-galloil) -11-rhamnopyranoside (11)] (500 MHz and 125 MHz; DMSO-d6) C 1 H NMR 13 C NMR 2 157.5 3 133.4 4 177.5 161.3 6 6.20 (sl) 98.7 7 165.0 8 6.38 (sl ) 93.6 9 156.5 104.0 1 '119.8 2' 6.95 (s) 108.8 3 '145.8 4' 136.6 5 '145.8 6' 6.95 (s) 108.8 1 "5.50 (d, J = 1.5 Hz) 98.3 2" 5.47 (dd, J = 1.5 and 3.0 Hz) 71.7 3 "3.81 (dd , J = 3.0 and 8.5 Hz) 70.1 4 "3.30 (t, J = 8.5) 68.6 5" 3.6 (m) 70.4 6 "0.94 (d , J = 5.5 Hz) 17.6 119.4 6.92 108.0 3 "145.4 138.6 5" 145.4 6.92 108.0 C = 0 165.0 5-OH 12.6 (sl) C 1 H-NMR 13 C-NMR Table 19 1H-NMR and 13 C-NMR data for P5.3 [myricetin-3-0- (3 "-0-galloil) -17- rhamnopyranoside (10)] (500 MHz and 125 MHz DMSO-d6) C 1 H NMR 13 C NMR 2 157.6 3 134.8 4 177.7 161.3 6 6.18 (d, J = 2.0 Hz) 98.7 7 164.2 8 6.36 (d, J = 2.0 Hz) 93.5 9 156.5 104.0 1 '120.0 2' 7.03 (s) 108.9 3 145.8 4 '136.5 5' 145.8 6 '7.03 (s) 108.9 5.04 (d, J = 2.0 Hz) 102.7 2 "4.3 (si) 67 , 8 3 "5.03 73.9 4" 3.50 (t, J = 10 Hz) 70.8 5 "3.67 (dd, J = 10 and 6.0 Hz) 68.7 6" 0, 91 (d, J = 6.0 Hz) 17.4 119.6 6.88 107.9 3 "145.3 138.3 5" 145.3 C 1 H NMR 13 C-NMR 6 "6, 88 107.9 C = 0 165.7 Example 7 Evaluation of the antioxidant action of extracts and substances obtained from Sclerolobium leaves A. DPPH The plant extract is solubilized and samples of pure substance in MeOH, and solutions with known concentrations are obtained which are diluted on 96-well plates, thereby obtaining seven solutions having different concentrations. A 100 μl aliquot of each solution is transferred (in triplicate) to the reading plate and then 200 μl of DPPH solution (at 40 μg / ml) is added, the plate is immediately placed in the dark for 30 minutes and we read. The hydroalcoholic extracts obtained by the extraction of Sclerolobium spp leaves with water, ethanol or a mixture thereof, and the antioxidant substances represented by Formulas 5 to 11 (FIG. antioxidant, as shown by the results of the DPPH scavenging capacity (FIGS. 5-8). These results also indicate higher antioxidant potentials for extracts obtained from S. aureum, compared with those obtained from leaves of the other two species. Also evident is the antioxidant (free radical scavenging) potential of the gallates of myricetin 10 and 11 (Figure 8), which can be explained by the presence of two trihydroxyphenyl groups in each of these substances. Since the hydroalcoholic extracts of S. aureum show the best results in the DPPH tests, they were subjected to evaluation tests for membrane protection activity in lipid peroxidation assays.

B. Peroxydation des lipides L'analyse de peroxydation des lipides utilisait des liposomes de phosphatidylcholine d'oeuf en tant que source de lipides et du fer/acide ascorbique en tant que déclencheur de lipo-peroxydation. On a incubé les échantillons à 37°C et, après des périodes de temps prédéterminées, on a collecté certains échantillons afin de les faire réagir avec de l'acide thiobarbiturique, dans un milieu acide et à température élevée. Dans cette réaction, il se forme un complexe de malonodialdéhyde et d'acide thiobarbiturique (MDA), que l'on a mesuré à 535 nm. Le MDA est un sous-produit de la réaction de la peroxydation des lipides et, par conséquent, est une mesure indirecte de celle-ci. Les résultats obtenus confirment qu'à partir de 200 mg/ml, les extraits polaires présentent une protection totale contre la peroxydation des lipides liposomiaux (Figure 9). L'extrait non polaire (EA), obtenu par extraction de feuilles de Sclerolobium aureum avec de l'hexane, et ses fractions obtenues par fractionnement par extraction en phase solide en utilisant du charbon actif en tant qu'adsorbant, plus spécifiquement la fraction FAL, ont des propriétés antioxydantes, comme le montrent les résultats obtenus dans les tests de peroxydation des lipides (Figure 9). La combinaison des extraits hydro-alcooliques (EHA) avec des extraits non polaires (EH), plus spécifiquement la combinaison des extraits à l'éthanol/eau 50/50 (p/p) avec l'extrait hexanique provenant de feuilles de S. aureum, présente un effet synergique, d'où l'intérêt de 53 l'utilisation de cette combinaison dans la préparation de formulations cosmétiques (Figure 10). La combinaison des fractions hydrophiles (FAH) avec la fraction d'antioxydants lipophiles (FAL) obtenue à partir des extraits EHA et EH, plus spécifiquement provenant de feuilles de S. aureum, présente un effet synergique, d'où l'intérêt de l'utilisation de cette combinaison dans la préparation de formulations cosmétiques (Figure 10). B. Lipid Peroxidation The lipid peroxidation assay used liposomes of egg phosphatidylcholine as a source of lipids and iron / ascorbic acid as a lipo-peroxidation trigger. The samples were incubated at 37 ° C and, after predetermined time periods, certain samples were collected for reaction with thiobarbituric acid in an acid medium and at elevated temperature. In this reaction, a complex of malonodialdehyde and thiobarbituric acid (MDA) was formed, which was measured at 535 nm. MDA is a by-product of the lipid peroxidation reaction and, therefore, is an indirect measure of it. The results obtained confirm that from 200 mg / ml, the polar extracts have a total protection against the peroxidation of liposomal lipids (FIG. 9). The nonpolar extract (EA), obtained by extraction of Sclerolobium aureum leaves with hexane, and its fractions obtained by fractionation by solid phase extraction using activated carbon as adsorbent, more specifically the FAL fraction , have antioxidant properties, as shown by the results obtained in lipid peroxidation tests (Figure 9). The combination of hydroalcoholic extracts (EHA) with nonpolar extracts (EH), more specifically the combination of 50/50 (w / w) ethanol / water extracts with hexane extract from S leaves. aureum, has a synergistic effect, hence the interest of the use of this combination in the preparation of cosmetic formulations (Figure 10). The combination of hydrophilic fractions (FAH) with the fraction of lipophilic antioxidants (FAL) obtained from extracts EHA and EH, more specifically from leaves of S. aureum, has a synergistic effect, hence the interest of the use of this combination in the preparation of cosmetic formulations (Figure 10).

L'absence de pigments, plus spécifiquement de chlorophylles, et la plus grande quantité des substances antioxydantes 1 à 11 dans les fractions FAH et FAL, rendent l'utilisation de la combinaison FAH + FAL dans une formulation cosmétique plus attrayante que l'utilisation directe des extraits bruts EHA et EH. Les extraits hexaniques et hydro-alcooliques, ainsi que les fractions FAL et FAH, peuvent être combinés en des proportions quelconques pour la préparation des formulations cosmétiques. The absence of pigments, more specifically chlorophylls, and the greater amount of antioxidant substances 1 to 11 in the FAH and FAL fractions, make the use of the FAH + FAL combination in a cosmetic formulation more attractive than direct use. crude extracts EHA and EH. The hexanic and hydroalcoholic extracts, as well as the FAL and FAH fractions, can be combined in any proportions for the preparation of the cosmetic formulations.

Exemple 8 Analyse toxicologique préliminaire in vitro pour l'évaluation d'éventuelles actions cyto- et photo-toxiques A. Test d'Ames Evaluation du potentiel mutagène de la substance de test SPMH par un test de mutation génétique inverse dans Salmonella typhimurium (Test d'Ames) On a effectué le Test d'Ames en utilisant la fraction SPMH, avec les souches TA97a, TA98, TA 100, TA 102 et TA 1535. On a effectué le test avec et sans activation métabolique. On a testé l'échantillon à cinq concentrations 0,001 0,01 0,1 ; 1,0 et 5,0 mg/plaque. Le Test d'Ames, effectué sur des cellules procaryotes de Salmonella typhimurium avec et sans activation métabolique, et réalisé avec des extraits polaires (EHA) et non polaires (EH) provenant de feuilles d'espèces de Sclerolobium à des concentrations situées dans la plage allant de 0,001 à 5,0 mg/plaque, indique l'absence de potentiel mutagène dans ces échantillons. Example 8 Preliminary in vitro toxicological analysis for the evaluation of possible cyto- and photo-toxic actions A. Ames test Evaluation of the mutagenic potential of the SPMH test substance by reverse genetic mutation test in Salmonella typhimurium (Test d Ames) The Ames Test was performed using the SPMH fraction, with the strains TA97a, TA98, TA 100, TA 102 and TA 1535. The assay was performed with and without metabolic activation. The sample was tested at five concentrations 0.001 0.01 0.1; 1.0 and 5.0 mg / plate. The Ames Test, performed on prokaryotic Salmonella typhimurium cells with and without metabolic activation, and performed with polar (EHA) and nonpolar (EH) extracts from leaves of Sclerolobium species at concentrations in the range ranging from 0.001 to 5.0 mg / plate, indicates the lack of mutagenic potential in these samples.

B. Phototoxicité et cytotoxicité B.1 Analyse de solubilité et définition de la concentration testée - On évalue la solubilité des échantillons conformément à des tests standards internationaux du National Institute of Health des Etats- Unis (NIH-USA). Dans le but d'assurer une meilleure solubilité des échantillons dans des solutions aqueuses telles que le DMEM (dans le test de cytotoxicité) ou la PBS (dans le test de phototoxicité), il est permis d'utiliser une concentration maximale de 1 % de DMSO ou d'éthanol. Ainsi, on a dissout des extraits végétaux en vrac, de l'ordre de 10 à 30 mg, dans 10 ml de solution contenant 1 % de DMSO ou d'éthanol dans du DMEM (cytotoxicité), et 1 % de DMSO ou d'éthanol dans de la PBS (phototoxicité), selon la meilleure solubilité pour chaque extrait telle qu'évaluée visuellement. En partant des solutions de départ, on a préparé les dilutions indiquées dans les tests. Les concentrations employées dans les tests de cytotoxicité et de phototoxicité sont situées dans la plage allant de 0,003 à 3 mg/ml, selon les résultats des tests de solubilité des échantillons. B.2 Cytotoxicité - On dépose des cellules 3T3 sur des plaques à 96 puits stériles à une densité de 1 x 10-4 cellules par puits. Au bout de 24 heures, on incube les cellules pendant 24 heures avec les échantillons dilués dans du milieu de culture ayant 5 % de SVF. En outre, on les incube avec du Rouge Neutre pendant trois heures. On lave à la PBS le colorant en excès et on dissout les cristaux formés dans de l'éthanol/acide acétique/eau (50/1/49). On effectue la lecture à 540 nm, et on utilise 55 les résultats pour déterminer la concentration à laquelle 50 % des cellules sont viables (CI50). Ainsi, le potentiel cytotoxique de l'échantillon est d'autant plus faible que la valeur CI50 est plus élevée, et vice versa. B. Phototoxicity and cytotoxicity B.1 Solubility analysis and definition of the tested concentration - The solubility of the samples is evaluated according to international standard tests of the National Institute of Health of the United States (NIH-USA). In order to ensure better solubility of the samples in aqueous solutions such as DMEM (in the cytotoxicity test) or PBS (in the phototoxicity test), it is permissible to use a maximum concentration of 1% of DMSO or ethanol. Thus, plant extracts in the bulk, of the order of 10 to 30 mg, were dissolved in 10 ml of solution containing 1% DMSO or ethanol in DMEM (cytotoxicity), and 1% DMSO or ethanol in PBS (phototoxicity), according to the best solubility for each extract as visually assessed. Starting from the starting solutions, the dilutions indicated in the tests were prepared. The concentrations used in the cytotoxicity and phototoxicity tests are in the range of 0.003 to 3 mg / ml, depending on the results of the solubility tests of the samples. B.2 Cytotoxicity - 3T3 cells are plated on sterile 96-well plates at a density of 1 x 10-4 cells per well. After 24 hours, the cells were incubated for 24 hours with the diluted samples in culture medium having 5% FCS. In addition, they are incubated with Neutral Red for three hours. The excess dye was washed with PBS and the crystals formed dissolved in ethanol / acetic acid / water (50/1/49). The reading is read at 540 nm, and the results are used to determine the concentration at which 50% of the cells are viable (IC 50). Thus, the cytotoxic potential of the sample is even lower than the IC50 value is higher, and vice versa.

Le test pour évaluer la cytotoxicité des extraits polaires (HA) et non polaires (H) provenant de feuilles d'espèces de Sclerolobium par incubation des échantillons avec des cellules 3T3 pendant 24 heures (publication NIH 2001) indique l'absence d'action cytotoxique à des concentrations inférieures à 1,7 mg/ml pour les extraits polaires et non polaires de S. aureum et pour l'extrait non polaire de S. denudatum. B.3 Phototoxicité - On dépose des cellules 3T3 sur des plaques à 96 puits stériles à une densité de 1 x 10-4 cellules par puits. On prépare deux plaques identiques . on soumet l'une d'elles à une irradiation aux UVA et on maintient l'autre dans l'obscurité pour l'utiliser en tant que témoin. 24 heures après le dépôt, on incube les cellules pendant 1 heure dans l'obscurité avec les échantillons diluée dans de la PBS. Ensuite, on soumet l'une des plaques à 5 joules/cm2 d'irradiation lumineuse aux UVA pendant 50 minutes. On lave les plaques à la PBS et on ajoute du milieu de culture contenant 10 % de sérum de veau foetal pendant la période de récupération (environ 12 heures). Le deuxième jour de l'expérience, on incube les cellules avec une solution de Rouge Neutre pendant 3 heures. On lave à la PBS l'excès de colorant et on dissout les cristaux formés dans de l'éthanol/acide acétique/eau (50/1/49). On effectue la lecture à 540 nm, et on utilise les résultats pour déterminer la concentration à laquelle 50 % des cellules sont viables (CI50) dans chacune des plaques. Le rapport entre les deux valeurs est le facteur de photo-irritation (PIF), qui indique si l'échantillon est phototoxique ou non phototoxique. The test to evaluate the cytotoxicity of polar (HA) and nonpolar (H) extracts from leaves of Sclerolobium species by incubating samples with 3T3 cells for 24 hours (NIH publication 2001) indicates no cytotoxic action at concentrations below 1.7 mg / ml for the polar and nonpolar extracts of S. aureum and for the nonpolar extract of S. denudatum. B.3 Phototoxicity - 3T3 cells are plated on sterile 96-well plates at a density of 1 x 10-4 cells per well. Two identical plates are prepared. one is irradiated with UVA and the other is kept in the dark for use as a control. 24 hours after the deposition, the cells were incubated for 1 hour in the dark with the samples diluted in PBS. Then, one of the plates at 5 joules / cm 2 of UVA light irradiation was subjected for 50 minutes. The plates are washed with PBS and culture medium containing 10% fetal calf serum is added during the recovery period (about 12 hours). On the second day of the experiment, cells were incubated with Neutral Red solution for 3 hours. The excess dye was washed with PBS and the crystals formed dissolved in ethanol / acetic acid / water (50/1/49). The reading is run at 540 nm, and the results are used to determine the concentration at which 50% of the cells are viable (IC 50) in each of the plates. The ratio between the two values is the photo-irritation factor (PIF), which indicates whether the sample is phototoxic or non-phototoxic.

On mesure l'évaluation de l'action phototoxique des 56 extraits polaires (EHA) et des extraits non polaires (EH) de feuilles d'espèces de Sclerolobium par la capture du Rouge Neutre par les cellules 3T3 qui ont survécu à l'incubation avec l'échantillon, sous irradiation aux UVA, conformément au protocole de Borenfreund & Puerner (1985), normalisé par le NIH (ZEBET/ECVAM/COLIPA 1998). Les résultats obtenus dans le test d'Ames avec des cellules procaryotes de S. typhimurium et dans les tests de cytotoxicité et de phototoxicité avec des cellules 3T3 valident l'innocuité de l'utilisation des extraits et fractions dérivant de ceux-ci dans des formulations cosmétiques. Composition cosmétique ou pharmaceutique La composition cosmétique ou pharmaceutique constituant l'objet de la présente invention comprend de préférence : (i) de 0,00001 % à 40,0 % en poids d'extrait de Sclerolobium spp obtenu par le procédé d'extraction de la présente invention ; et (ii) un support physiologiquement acceptable ; toutes les quantités étant basées sur le poids total de la composition. Plus préférablement, cette composition comprend de 0,001 à 8,0 % en poids, mieux encore de 0,01 % à 2,00 % en poids, d'un extrait de S. aureum, S. denudatum ou S. paniculatum, et de préférence lesdits extraits contiennent de l'î-tocophérol, du y-tocophérol, du squalène et/ou de la lupénone. Les principaux exemples de formes galéniques de produits que l'on peut préparer à partir de l'extrait de Sclerolobium spp, constituant l'objet de la présente invention, ou à partir de systèmes de libération d'ingrédients actifs comprenant cet extrait, sont les suivants .35 57 a) une émulsion fluide ou semi-solide, comme par exemple : • un lait hydratant pour le corps ; • un lait hydratant pour le visage ; • une lotion hydratante pour le corps ; • une lotion hydratante pour le visage ; • les protecteurs ou écrans solaires pour adultes ou à usage pédiatrique, destinés ou non à un usage concomitant avec une pratique sportive ; • les produits hydratants pour le corps ou le visage ; • les produits anti-âge pour le corps ou le visage ; • les produits astringents pour le corps ou le visage ; • les produits auto-bronzants ; • les insectifuges ; • les produits hydratants éclaircissants pour la peau du corps ou du visage ; • les produits anticellulite ; • les produits pour peau sensible ; b) les gels, comme par exemple : • les produits pour le cuir chevelu ; • les préparations pharmaceutiques destinées à une application topique ; • les préparations cosmétiques pour le corps ou le visage à usage pédiatrique ; • les produits anti-acné ; • les produits anticellulite ; • les produits pour peau sensible ; • les produits exfoliants ; c) les produits nettoyants pour le corps et les cheveux, comme par exemple : • les shampooings ; • le savon liquide ou solide ; 58 • les produits exfoliants ; d) les suspensions, comme par exemple : • les pommades ; • les préparations cosmétiques à action locale, spécifiques de la région péri-oculaire, du contour des lèvres, des lèvres, les correcteurs de teint, les anticernes ; • les liniments ; e) les poudres, comme par exemple : • les poudres pour le visage ; • le talc pour le corps ; • le maquillage ; f) d'autres exemples : • les rouges à lèvres et les bases cireuses ; • les fards à joues et les bases pigmentées ; • les toniques. En ce qui concerne le support physiologiquement acceptable, celui-ci est constitué d'une base cosmétique ou pharmaceutique habituelle fonction de l'utilisation visée de la composition devant être préparée. Un tel support est constitué de composés et adjuvants habituels, physiologiquement inertes. On présente dans ce qui suit une liste, illustrative uniquement et non limitative, de certains exemples d'adjuvants et de constituants inertes compatibles avec les propriétés décrites ici de la composition, et qui de plus peuvent être employés dans la présente composition cosmétique et/ou pharmaceutique : - Eau L'eau est la base de nombreux modes de réalisation préférés de la composition cosmétique de la présente invention, en servant de support pour les autres composants. Les compositions de la présente invention comprennent de l'eau, de préférence de l'eau déminéralisée ou distillée, en une quantité appropriée (q.s.p.) de façon à complémenter à 100 % la formulation sur la base du poids 59 total de la présente composition. Bien évidemment, d'autres supports acceptables du point de vue cosmétique peuvent être utilisés dans la présente invention ; - Agents antioxydants BHT, tocophérol et/ou ses dérivés, catéchines, tanins et/ou leurs dérivés, composés phénoliques, hydroquinone, entre autres ; - Agents conservateurs méthylparabènes, propylparabènes, isothiazolinones, phénoxyéthanol ; - Agents filmogènes gomme de gélose, gomme de carraghénane, alginates, gomme arabique, gélatine ; - Agents formant une structure microcristalline de support : dextranes, acrylates d'éthyle, PHB, PHA ; - Agents polymères et/ou agents copolymères . copolymères de silicone, polymères de siloxane et/ou de silicone modifiée, copolymères d'acrylate ; - Agents dénaturants : benzoate de dénatonium ; - Agents de charge : cires végétales, hydrocarbures minéraux, paraffine, cire d'abeille, paraffine blanche, spermacéti, beurre de cacao, beurre de karité, cire de canne à sucre ; - Emollients : paraffine liquide, huile de palme, beurre de cupuaçu (Theobroma grandiflorum), lécithine, acides aminés du lait, protéine de blé, protéines végétales, huiles végétales phospholipidiques, céramides, céramide de passiflore, sphingolipides, spermacéti, lanoline, huile de noix, carbonate de dicapryle, élastomères de silicone, cyclométhicone ; - Agents humectants et/ou agents hydratants glycérine, propylèneglycol, acide hyaluronique, urée, PCA ; Agents conditionnants sels d'ammonium quaternaire, silicones, siloxanes ; et - Agents actifs. L'homme du métier reconnaîtra immédiatement les bénéfices majeurs que l'on tire de l'utilisation de la 60 présente invention. Des changements dans la forme de mise en oeuvre du concept inventif exemplifié ici doivent être compris comme entrant dans la portée de l'invention. Références bibliographiques KOHEN, R. Skin antioxidants : their rote in aging and in oxidative stress - new approaches for their evaluation. Biomed. Pharmacother., Paris, volume 53, N° 4, pages 181-192, 1999. PINNELL, S. R. Cutaneous photodamage, oxidative stress, and topical antioxidant protection. Journal of the American Academy of Dermatology, volume 48, N° 1, pages 1-19, 2003. DURIGAN, G. ; BAITELLO, Joâo Batista ; FRANCO, Geraldo Antônio Daher Corrêa ; SIQUEIRA, Marinez Ferreira de . Plantas do Cerrado Paulista : Imagens de uma paisagem ameaçada. 1 re Ed. Sao Paulo : Paginas & Letras, 2004. volume 1, 475 pages. DIAS et al. 1991 - Confirmar! Dias, L. E., Brienza Jûnior, S., Pereira, C.A. 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The results obtained in the Ames test with prokaryotic S. typhimurium cells and in the cytotoxicity and phototoxicity tests with 3T3 cells validate the safety of the use of extracts and fractions derived from them in formulations. cosmetics. Cosmetic or pharmaceutical composition The cosmetic or pharmaceutical composition constituting the subject of the present invention preferably comprises: (i) from 0.00001% to 40.0% by weight of Sclerolobium spp extract obtained by the method of extraction of the present invention; and (ii) a physiologically acceptable carrier; all amounts being based on the total weight of the composition. More preferably, this composition comprises from 0.001 to 8.0% by weight, more preferably from 0.01% to 2.00% by weight, of an extract of S. aureum, S. denudatum or S. paniculatum, and of preferably said extracts contain 1-tocopherol, γ-tocopherol, squalene and / or lupenone. The main examples of galenic forms of products that can be prepared from the Sclerolobium spp extract, forming the subject of the present invention, or from active ingredient release systems comprising this extract, are the following: (a) a fluid or semi-solid emulsion, such as: • moisturizing milk for the body; • moisturizing milk for the face; • a moisturizing lotion for the body; • a moisturizing lotion for the face; • protectors or sunscreens for adults or for pediatric use, intended or not for concomitant use with a sporting activity; • moisturizing products for the body or face; • anti-aging products for the body or face; • astringent products for the body or face; • self-tanning products; • insect repellents; • lightening moisturizers for the skin of the body or face; • anti-cellulite products; • products for sensitive skin; (b) gels, such as: • scalp products; • pharmaceutical preparations intended for topical application; • cosmetic preparations for the body or face for pediatric use; • anti-acne products; • anti-cellulite products; • products for sensitive skin; • exfoliating products; c) cleansing products for the body and hair, such as: • shampoos; • liquid or solid soap; • Exfoliating products; d) suspensions, such as: • ointments; • cosmetic preparations with local action, specific to the periocular region, the contour of the lips, the lips, the correctors of complexion, the concealer; • liniments; e) powders, such as: • facial powders; • talc for the body; • makeup ; f) other examples: • lipsticks and waxy bases; • blushes and pigmented bases; • the tonics. As regards the physiologically acceptable carrier, it consists of a usual cosmetic or pharmaceutical base depending on the intended use of the composition to be prepared. Such a carrier consists of usual physiologically inert compounds and adjuvants. The following is a list, illustrative only and not limiting, of certain examples of adjuvants and inert constituents compatible with the properties described herein of the composition, and which may further be used in the present cosmetic composition and / or Pharmaceutical: - Water Water is the basis of many preferred embodiments of the cosmetic composition of the present invention, serving as a support for the other components. The compositions of the present invention comprise water, preferably demineralized or distilled water, in an appropriate amount (q.s.p.) so as to complement the formulation 100% on the basis of the total weight of the present composition. Of course, other cosmetically acceptable carriers can be used in the present invention; Antioxidants BHT, tocopherol and / or its derivatives, catechins, tannins and / or their derivatives, phenolic compounds, hydroquinone, among others; Preservatives methylparaben, propylparabenes, isothiazolinones, phenoxyethanol; - Film-forming agents agar gum, carrageenan gum, alginates, gum arabic, gelatin; - Agents forming a microcrystalline support structure: dextrans, ethyl acrylates, PHB, PHA; Polymeric agents and / or copolymers. silicone copolymers, siloxane and / or modified silicone polymers, acrylate copolymers; - Denaturing agents: denatonium benzoate; - Bulking agents: vegetable waxes, mineral hydrocarbons, paraffin wax, beeswax, white paraffin, spermaceti, cocoa butter, shea butter, sugar cane wax; - Emollients: liquid paraffin, palm oil, cupuaçu butter (Theobroma grandiflorum), lecithin, milk amino acids, wheat protein, vegetable proteins, phospholipidic vegetable oils, ceramides, passionflower ceramide, sphingolipids, spermacéti, lanolin, oil of walnuts, dicapryl carbonate, silicone elastomers, cyclomethicone; - Humectants and / or moisturizing agents glycerine, propylene glycol, hyaluronic acid, urea, PCA; Conditioning agents quaternary ammonium salts, silicones, siloxanes; and - Active Agents. Those skilled in the art will immediately recognize the major benefits gained from using the present invention. Changes in the form of implementation of the inventive concept exemplified herein should be understood as falling within the scope of the invention. References KOHEN, R. Skin Antioxidants: their role in aging and in oxidative stress - new approaches for their evaluation. Biomed. Pharmacother., Paris, Volume 53, No. 4, pages 181-192, 1999. PINNELL, S.R. Cutaneous photodamage, oxidative stress, and topical antioxidant protection. Journal of the American Academy of Dermatology, Volume 48, No. 1, pp. 1-19, 2003. DURIGAN, G.; BAITELLO, Joao Batista; FRANCO, Geraldo Antônio Daher Corrêa; SIQUEIRA, Marinez Ferreira of. Plantas do Cerrado Paulista: Imagens of uma paisagem ameaçada. 1st Ed. Sao Paulo: Paginas & Letras, 2004. volume 1, 475 pages. DIAS et al. 1991 - Confirmar! Dias, L. E., Brienza Junior, S., Pereira, C. A. 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Claims (21)

REVENDICATIONS1. Procédé de préparation d'extraits végétaux du genre Sclerolobium, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes consistant à : a) mettre en contact le matériau végétal choisi parmi les plantes appartenant au genre Sclerolobium, avec au moins un solvant d'extraction convenable ; b) agiter le mélange ; et c) séparer la phase liquide de la phase solide. REVENDICATIONS1. Process for the preparation of plant extracts of the genus Sclerolobium, characterized in that it comprises the steps of: a) bringing the plant material chosen from plants belonging to the genus Sclerolobium into contact with at least one suitable extraction solvent; b) stir the mixture; and c) separating the liquid phase from the solid phase. 2. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que les espèces sont choisies dans l'ensemble comprenant Sclerolobium aureum, Sclerolobium paniculatum, Sclerolobium denudatum et leurs mélanges. 2. Method according to claim 1, characterized in that the species are selected from the group consisting of Sclerolobium aureum, Sclerolobium paniculatum, Sclerolobium denudatum and mixtures thereof. 3. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le matériau végétal est choisi dans l'ensemble comprenant les feuilles, les tiges, les racines, les fruits, les fleurs, l'écorce et leurs mélanges. 3. Method according to claim 1, characterized in that the plant material is selected from the group consisting of leaves, stems, roots, fruits, flowers, bark and mixtures thereof. 4. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le solvant d'extraction est un solvant non polaire choisi dans l'ensemble comprenant l'hexane, le tétrachlorure de carbone, le chloroforme, le dichlorométhane et leurs mélanges. 4. Method according to claim 1, characterized in that the extraction solvent is a non-polar solvent selected from the group consisting of hexane, carbon tetrachloride, chloroform, dichloromethane and mixtures thereof. 5. Procédé selon la revendication 4, caractérisé en ce que le solvant d'extraction est l'hexane. 5. Method according to claim 4, characterized in that the extraction solvent is hexane. 6. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que le solvant d'extraction est un solvant polaire choisi dans l'ensemble comprenant l'eau, le méthanol, l'éthanol, le propanol, le butanol, l'éthylèneglycol, le propylèneglycol, le glycérol et leurs mélanges. 65 6. Process according to claim 1, characterized in that the extraction solvent is a polar solvent chosen from the group consisting of water, methanol, ethanol, propanol, butanol, ethylene glycol and propylene glycol. , glycerol and their mixtures. 65 7. Procédé selon la revendication 6, caractérisé en ce que le solvant d'extraction polaire est un mélange d'eau et d'éthanol dans un rapport 1 : 1. 7. Method according to claim 6, characterized in that the polar extraction solvent is a mixture of water and ethanol in a 1: 1 ratio. 8. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'agitation est effectuée par sonification. 8. Method according to claim 1, characterized in that the stirring is carried out by sonification. 9. Procédé selon la revendication 1, caractérisé en 10 ce que la séparation entre la phase liquide et la phase solide est effectuée par centrifugation. 9. Process according to claim 1, characterized in that the separation between the liquid phase and the solid phase is carried out by centrifugation. 10. Procédé selon l'une quelconque des revendications précédentes, caractérisé en ce qu'il 15 comprend en outre une étape de décoloration de l'extrait obtenu en c). 10. Method according to any one of the preceding claims, characterized in that it further comprises a step of bleaching the extract obtained in c). 11. Procédé selon la revendication 10, caractérisé en ce que la décoloration comprend les étapes suivantes : 20 d) dissolution de l'extrait dans un solvant approprié ; e) dépôt de l'extrait dissous obtenu à l'étape d) sur une colonne contenant un matériau adsorbant ; f) envoi d'une solution d'éluant sur la colonne de l'étape e). 25 11. A process according to claim 10, characterized in that the bleaching comprises the following steps: d) dissolving the extract in a suitable solvent; e) depositing the dissolved extract obtained in step d) on a column containing an adsorbent material; f) sending an eluent solution on the column of step e). 25 12. Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce que la dissolution des extraits végétaux de l'étape d) est effectué dans un solvant non polaire choisi dans l'ensemble comprenant l'hexane, le tétrachlorure de 30 carbone, le chloroforme, le dichlorométhane, et leurs mélanges, ou dans un solvant polaire choisi dans l'ensemble comprenant l'eau, le méthanol, l'éthanol, le propanol, le propylèneglycol, le butanol, le glycérol et leurs mélanges. 35 66 12. A process according to claim 11, characterized in that the dissolution of the plant extracts of step d) is carried out in a non-polar solvent selected from the group consisting of hexane, carbon tetrachloride, chloroform, dichloromethane, and mixtures thereof, or in a polar solvent selected from the group consisting of water, methanol, ethanol, propanol, propylene glycol, butanol, glycerol and mixtures thereof. 35 66 13. Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce que le matériau adsorbant de l'étape e) est choisi dans l'ensemble comprenant le charbon actif et ses dérivés, la terre de diatomées et ses dérivés, les résines de polyvinylpyrrolidone et leurs dérivés, le polystyrènedivinylbenzène et ses dérivés, et leurs mélanges. 13. Process according to claim 11, characterized in that the adsorbent material of step e) is chosen from the group comprising activated carbon and its derivatives, diatomaceous earth and its derivatives, polyvinylpyrrolidone resins and their derivatives. , polystyrene-divinylbenzene and its derivatives, and mixtures thereof. 14. Procédé selon la revendication 13, caractérisé en ce que le matériau adsorbant de l'étape e), est le charbon actif quand un extrait non polaire est préparé, ou une résine de polystyrène-divinylbenzène quand un extrait polaire est préparé. 14. The method of claim 13, characterized in that the adsorbent material of step e), is the activated carbon when a non-polar extract is prepared, or a polystyrene-divinylbenzene resin when a polar extract is prepared. 15. Procédé selon la revendication 11, caractérisé en ce que la solution d'éluant de l'étape f) est choisie dans l'ensemble comprenant l'hexane, l'acétate d'éthyle, l'eau, l'éthanol, et leurs mélanges. 15. The method of claim 11, characterized in that the eluent solution of step f) is selected from the group consisting of hexane, ethyl acetate, water, ethanol, and their mixtures. 16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que la solution d'éluant de l'étape f) est un mélange d'hexane et d'acétate d'éthyle dans un rapport de 9 : 1 (v/v). 16. The method of claim 15, characterized in that the eluent solution of step f) is a mixture of hexane and ethyl acetate in a ratio of 9: 1 (v / v). 17. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que la solution d'éluant de l'étape f) est un mélange d'eau et d'éthanol dans un rapport de 1 : 1 (v/v). 17. The method of claim 15, characterized in that the eluent solution of step f) is a mixture of water and ethanol in a ratio of 1: 1 (v / v). 18. Composition cosmétique caractérisée en ce qu'elle comprend : a) un extrait obtenu par le procédé tel que défini dans l'une quelconque des revendications 1 à 17 ; et b) un support acceptable en cosmétique.35 18. Cosmetic composition, characterized in that it comprises: a) an extract obtained by the process as defined in any one of Claims 1 to 17; and b) an acceptable carrier in cosmetics. 19. Composition pharmaceutique caractérisée en ce qu'elle comprend : a) un extrait obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 17 ; et b) un support acceptable en pharmacie. 19. Pharmaceutical composition, characterized in that it comprises: a) an extract obtained by the process according to any one of claims 1 to 17; and b) a pharmaceutically acceptable carrier. 20. Composition cosmétique selon la revendication 18, ou composition pharmaceutique selon la revendication 19, caractérisée en ce que le support est choisi dans le groupe comprenant une lotion, une crème, un shampooing et une émulsion. 20. Cosmetic composition according to claim 18, or pharmaceutical composition according to claim 19, characterized in that the support is chosen from the group comprising a lotion, a cream, a shampoo and an emulsion. 21. Utilisation de l'extrait pouvant être obtenu par le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 17, caractérisée en ce qu'elle réside dans la préparation d'une formulation cosmétique ou pharmaceutique présentant une activité antioxydante. 21. Use of the extract obtainable by the method according to any one of claims 1 to 17, characterized in that it resides in the preparation of a cosmetic or pharmaceutical formulation having antioxidant activity.