FR2940286A1 - NOVEL RARE EARTH CRYPTATES COMPRISING A TETRAAZATRIPHENYLENE PATTERN - Google Patents

Abstract

L'invention a pour objet des composés macropolycycliques de formula (I) : dans laquelle A et B sont choisis parmi les groupes TATP, bis-pyridine ou pyridine. L'invention concerne également les complexes macropolycycliques ou cryptates de terres rares formés avec les composés de formule (I) et des sels de terres rares. Application : marquage fluorescent de molécules organiques ou biologiques.The subject of the invention is macropolycyclic compounds of formula (I): in which A and B are chosen from TATP, bis-pyridine or pyridine groups. The invention also relates to the macropolycyclic or cryptate rare earth complexes formed with the compounds of formula (I) and rare earth salts. Application: fluorescent labeling of organic or biological molecules.

Description

NOUVEAUX CRYPTATES DE TERRES RARES COMPORTANT UN MOTIF TETRAAZATRIPHENYLENE NOVEL RARE EARTH CRYPTATES COMPRISING A TETRAAZATRIPHENYLENE PATTERN

,ETAT DE LA TECHNIQUE STATE OF THE ART

L'utilisation de complexes de lanthanides en tant que composés fluorescents pour l'étude de phénomènes biologiques a été développée dans les années 1990 (voir par exemple l'article de Mathis et al., Clin. Chem. 1995 Sep; 41(9)1391-7). Ces complexes de lanthanides ont la propriété de pouvoir générer un FRET intermoléculaire, c'est-à-dire une fluorescence résultant d'un transfert 10 d'énergie de résonance entre deux composés, l'un accepteur d'énergie et l'autre donneur d'énergie (en anglais Fluorescent Resonance Energy Transfert ) lorsqu'ils sont à proximité d'un composé accepteur d'énergie et qu'ils sont excités à leur longueur d'onde maximale d'absorption. The use of lanthanide complexes as fluorescent compounds for the study of biological phenomena was developed in the 1990s (see for example the article by Mathis et al., Clin Chem 1995 Sep; 41 (9) 1391-7). These lanthanide complexes have the property of being able to generate an intermolecular FRET, that is to say a fluorescence resulting from a transfer of resonance energy between two compounds, one energy acceptor and the other donor. of energy (in English Fluorescent Resonance Energy Transfer) when they are close to an energy accepting compound and they are excited at their maximum absorption wavelength.

Le phénomène de FRET est largement utilisé en biologie, notamment pour étudier des interactions 15 moléculaires. Il est basé sur l'utilisation d'un composé donneur fluorescent (par exemple un complexe de terre rare) et d'un composé accepteur éventuellement fluorescent, chacun de ces composés étant couplé à une molécule biologique. Lorsqu'un phénomène biologique provoque le rapprochement de ces molécules, et que le composé donneur est excité, un transfert d'énergie a lieu entre le donneur et l'accepteur et va résulter en une variation de la luminescence émise par le 20 milieu réactionnel. Plusieurs sociétés commercialisent des réactifs permettant la mise en œuvre de cette approche pour étudier des processus biologiques par exemple la Demanderesse fournit différents réactife, dont des cryptates de terres nonam, pour l'étude de phénomènes biologiques particuliers (détection d'activité enzymatique, dosage de seconds messagers etc...) The FRET phenomenon is widely used in biology, in particular for studying molecular interactions. It is based on the use of a fluorescent donor compound (for example a rare earth complex) and an optionally fluorescent acceptor compound, each of these compounds being coupled to a biological molecule. When a biological phenomenon causes the approximation of these molecules, and the donor compound is excited, an energy transfer takes place between the donor and the acceptor and will result in a variation of the luminescence emitted by the reaction medium. Several companies market reagents allowing the implementation of this approach to study biological processes, for example the Applicant provides various reagents, including nonam earth cryptates, for the study of particular biological phenomena (detection of enzymatic activity, dosage of second messengers etc ...)

25 Les cryptates de terres rarea, décrits notamment dans les brevets EP 0 180 492. EP O321 353, EPO6O1 113.EP129O448'sont des m comportant des motifs dont l'énergie de l'état triplet est supérieure à celle de la terre rare complexée ; en particulier, ces motifs peuvent être des cycles aromatiques azotén, substitués ou non. Ces cryptates de terres rares sont très stables en milieu acide ou alcalin ce qui facilite la mise en oeuvre des dosages immunologiques dont les 30 anticorps ont été marqués par ces molécules. De plus, leur durée de vie est suffisamment longue (de l'ordre de la milliseconde) pour pouvoir travailler en temps résolu. Cependant les cryptates de trisbipyridine notamment présentent un coefficient d'absorption molaire peu élevé à 337 nm (4500 Mol-1 cm-1), !ongueurd^onde du laser à azote utilisée pour exciter le composé donneur d'énergie ou chromophore. Une autre limitation des cryptates de trisbypiridine est l'obligation 35 d'ajouter au milieu de mesure du fluorure de potassium, pour éviter l'extinction de fluorescence du cryptate liée à la présence de molécules d'eau. Rare earth cryptates, described in particular in patents EP 0 180 492. EP 0321 353, EPO6O1 113. EP129O448 'are m having patterns whose energy of the triplet state is greater than that of the complexed rare earth ; in particular, these units may be azotenic aromatic rings, substituted or unsubstituted. These rare earth cryptates are very stable in acidic or alkaline medium which facilitates the implementation of immunoassays whose antibodies have been labeled by these molecules. In addition, their life is long enough (of the order of a millisecond) to work in time resolved. However, trisbipyridine cryptates in particular exhibit a low molar absorption coefficient at 337 nm (4500 Mol-1 cm-1), the wavelength of the nitrogen laser used to excite the energy-donor compound or chromophore. Another limitation of trisbypiridine cryptates is the requirement to add potassium fluoride to the measurement medium, to avoid fluorescence quenching of the cryptate associated with the presence of water molecules.

Le motif tétraazatriphénylène a été décrit en tant qu'antenne capable de collecter l'énergie excitatrice et de la transférer sur le cation lanthanide, conduisant ainsi à une sensibilisation de la 40 luminescence des lanthanides. Van der Tol et al. ont ainsi étudié une série de dérivés du 2 tétraazatriphénylène et ont souligné leurs excellentes propriétés en tant que chromophores et leur capacité à former des complexes assez stables avec les ions europium et terbium dans l'acétonitrile. (E. B. Van der Tol et al., Chem. Eur. J., 1998, 4, 11, 2315-2823). Le brevet EP 1019401 revendique ces complexes de terres rares, constitués d'un dérivé de tétraazatriphénylène et d'une terre rare. The tetraazatriphenylene unit has been described as an antenna capable of collecting exciter energy and transferring it to the lanthanide cation, thereby leading to sensitization of lanthanide luminescence. Van der Tol et al. thus investigated a series of 2 tetraazatriphenylene derivatives and emphasized their excellent properties as chromophores and their ability to form fairly stable complexes with europium and terbium ions in acetonitrile. (E. B. Van der Tol et al., Chem Eur Eur, 1998, 4, 11, 2315-2823). EP 1019401 claims these rare earth complexes, consisting of a derivative of tetraazatriphenylene and a rare earth.

Bakheret al. ont souligné que la stabilité des complexes bétraazathphénvlène/terre rare en milieu aqueux est relativement faible, par rapport àmdle observée dans des solvents aprotiques, tels que l'acétonitrile. Pour remédier à ce problème, les auteurs proposent de greffer des groupes carboxylates au squelette triphénylène (B.H.Bakheredal.Chem.Rev..2U0O.2O8.3-18). Bakheret al. have pointed out that the stability of the bétraazathphenylene / rare earth complexes in aqueous medium is relatively low, compared with that observed in aprotic solvents, such as acetonitrile. To remedy this problem, the authors propose to graft carboxylate groups to the triphenylene backbone (B.H.Bakheredal.Chem.Rev..2U0O.2O8.3-18).

Bobba*t ont été parmi les premiers à intégrer l'antenne tétraazatriphénylène à un motif capable de coordonner efficacement les ions de terres rares, en l'occurrence un motif tétraazacyclododécane (Chem.Commun., 2002. 890-891. Org. Biomol. Chem, 2003. 1, 1870-1872).otnnt montré que les complexes obtenus peuvent s'intercaler dans l'ADN. Bobba * t were among the first to integrate the tetraazatriphenylene antenna into a motif capable of efficiently coordinating rare earth ions, in this case a tetraazacyclododecane unit (Chem.Commun., 2002. 890-891, Org., Biomol. Chem, 2003. 1, 1870-1872). It has been shown that the complexes obtained can be intercalated in the DNA.

Des complexes de terres rares (chélates de terres rares) similaires, constitués d'une antenne de Lypetëtnaazotriphén}lène et d'une région chélatante dérivée d'un squelette tétrazaoyclododénane, ont été synthétisés et étudiés par Parker et al. En particulier cette équipe s'est intéressée à leur capacité à être adaptés èdea applications d'imagerie cellulaire (R. A. Poole et al., Org. Biolmol. Chem. 5 (2007)2066-2062et R. A. Poole edal.. Org. Biomol. Chem., 2005, 3, 1013-1024). ainsi qu'à l'effet d'agents réducteurs sur la luminescence de ces complexes (F. Kielar et al., Org. Biolmol. Chem. 5 (2007) 2975-2982 et R. A. Poole et al., Chem. Commun.(2006) 4084-4086). Un des problèmes posés par ces complexes de terres rares est leur relative instabilité lorsqu'ils sont en solution dans des milieux compatibles avec les milieux biologiques (tampon phosphate, tampon hepes). Similar rare earth (rare earth chelate) complexes consisting of an Lypetetnaazotriphenene antenna and a chelating region derived from a tetrazoylododenane backbone were synthesized and studied by Parker et al. In particular this team has been interested in their ability to be adapted to cellular imaging applications (RA Poole et al., Org Biolmol Chem 5 (2007) 2066-2062 and RA Poole edal.) Org. Biomol Chem ., 2005, 3, 1013-1024). and the effect of reducing agents on the luminescence of these complexes (F. Kielar et al., Org Biolmol Chem, 5 (2007) 2975-2982 and RA Poole et al., Chem. 2006) 4084-4086). One of the problems posed by these rare earth complexes is their relative instability when they are in solution in media compatible with biological media (phosphate buffer, hepes buffer).

Au regard de l'intérêt des complexes de terres rares en tant que composés fluorescents, les inventeurs ont développé une nouvelle famille de composés macropolycycliques capables de 30 former avec des terres rares des complexes macropolycycliques fluorescents. DESCRIPTION In view of the interest of the rare earth complexes as fluorescent compounds, the inventors have developed a new family of macropolycyclic compounds capable of forming fluorescent macropolycyclic complexes with rare earths. DESCRIPTION

La présente invention a pour objet des composés macropolycycliques possédant un ou plusieurs motifs dérivés du groupe tétraazatriphénylène (TATP), ainsi que des motifs pyridine ou biidine. 5 Elle a également pour objet les complexes macropolycycliques de terres rares ou cryptates de terres rares. The present invention relates to macropolycyclic compounds having one or more units derived from the tetraazatriphenylene group (TATP), as well as pyridine or biidine units. It also relates to macropolycyclic complexes of rare earths or rare earth cryptates.

Les composés macropolycycliques de l'invention forment des complexes stables avec les terres rares, en particulier avec le terbium et l'europium et leurs spectres d'absorption sont plus 10 favorables à une excitation à 337 nm que les cryptates de terres rares de !'ad antérieur, en particulier que les cryptates Eu-trisbipyridine. Enfin, ces composés sont plus résistants à l'extinction de fluorescence due aux molécules d'eau que !aocryptateo de l'art antérieur, en particulier !eecrypt41eod'eunopium-triebipyridinm. The macropolycyclic compounds of the invention form stable complexes with rare earths, in particular with terbium and europium, and their absorption spectra are more favorable to excitation at 337 nm than the rare earth cryptates of ad prior, in particular that the eutrisbipyridine cryptates. Finally, these compounds are more resistant to fluorescence quenching due to water molecules than the aocryptate of the prior art, in particular Eecrypt41eod'eunopium-triebipyridinm.

15 L'invention a aussi pour objet les conjugués constitués par une molécule organique ou biologique couplée à un cryptate de terre rare selon l'invention. The subject of the invention is also the conjugates constituted by an organic or biological molecule coupled to a rare earth cryptate according to the invention.

COMPOSES MACROPOLYCYCLIQUES MACROPOLYCYCLIC COMPOUNDS

20 Les composés macropolycycliques selon l'invention sont les composés de formule (1) : R, R2 25 dans laquelle : (0 A et B sont choisis parmi les groupes de formules (Il), (Ill), (IV) : 40 00 dans lesquelles : R1, R2, R8, R9 sont identiques ou différents et sont choisis parmi les atomes ou groupes suivants : H, -alk(CI.6), -CN, -alk(CI.6)-COOH, -CONH-alk(CI.6), -COO-alk(CI.6), -LG, ou encore R1 et R2 et/ou R8 et R9 forment ensemble, avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné saturé à 5 ou 6 chaînons ou un cycle succinimide dont l'azote porte un atome ou groupe choisi parmi : H, -alk(CI6 ou - LG ; The macropolycyclic compounds according to the invention are the compounds of formula (1): ## STR2 ## in which: (A) and B are chosen from groups of formulas (II), (III), (IV): wherein: R1, R2, R8, R9 are the same or different and are selected from the following atoms or groups: H, -alk (CI.6), -CN, -alk (CI.6) -COOH, -CONH- alk (Cl 6), -COO-alk (Cl 6), -LG, or alternatively R 1 and R 2 and / or R 8 and R 9 together with the carbon atoms to which they are attached form a saturated hydrocarbon ring with 5 or 6-membered or a succinimide ring whose nitrogen carries an atom or group selected from: H, -alk (CI6 or - LG;

R3, R4, R10, R11 sont identiques ou différents et sont choisis parmi les atomes ou groupes suivants : H,ùLG ou les groupes donneurs d'électrons choisis parmi les groupes ou atomes suivants : -NH2, -NH alk(CI_6), -N [alki(CI.6) alk2(CI.6)], -OH, -0-alk(CI_6), -alk(C1_6 -CH-(alk(C1_6))2, -C(alk(CI.6))3, -NHCO-alk(CI.6), -S alk(C1.6), -SH, F, Cl, Br, 1 ; R5, R6 et R7 sont identiques ou différents et sont choisis parmi les atomes ou groupes suivants : -C(alk(CI.6))3, -NHCO-alk(CI.6), -S alk(CI.6), -SH, F, Cl, Br, 1 ; L est un bras de liaison et G est un groupe réactif. Les composés dans lesquels R3, R4, R10 et RI, sont choisis parmi les groupes H, OH et Cl sont des composés préférés. R3, R4, R10, R11 are the same or different and are selected from the following atoms or groups: H, ù LG or electron donor groups selected from the following groups or atoms: -NH2, -NH alk (CI_6), - N [alki (Cl 6) alk 2 (Cl 6)], -OH, -O-alk (Cl 6), -alk (Cl 6 -CH- (alk (Cl 6)) 2, -C (alk (Cl 6 )) 3 -NHCO-alk (Cl 6), -S alk (Cl 6), -SH, F, Cl, Br 1, R 5, R 6 and R 7 are identical or different and are selected from the atoms or following groups: -C (alk (CI.6)) 3, -NHCO-alk (CI.6), -S alk (CI.6), -SH, F, Cl, Br, 1; L is an arm of and G is a reactive group Compounds in which R3, R4, R10 and R1 are selected from H, OH and Cl are preferred compounds.

Les composés selon l'invention peuvent optionnellement comprendre un ou plusieurs groupes ùLG, de préférence 1 ou 2 groupes ùLG, L représentant un bras de liaison et G représentant un groupe réactif dont la fonction est de former une liaison covalente avec une molécule organique ou biologique que l'on souhaite marquer avec les produits selon l'invention. Les composés selon l'invention peuvent comporter des motifs dérivés du TATP, de la pyridine et de la bipyridine. En particulier, les composés selon l'invention peuvent donc avoir pour formules l'une des formules (V) à (x) : The compounds according to the invention may optionally comprise one or more LL groups, preferably 1 or 2 groups LL, L representing a linking arm and G representing a reactive group whose function is to form a covalent bond with an organic or biological molecule that it is desired to mark with the products according to the invention. The compounds according to the invention may comprise units derived from TATP, pyridine and bipyridine. In particular, the compounds according to the invention can therefore have as formulas one of the formulas (V) to (x):

30 35 H, -COO-alk(CI_6), -LG, les groupements donneurs d'électrons choisi parmi : -COOH, -NH2, -NH alk(CI_6), -N [alki(CI_6) alk2(CI.6) , -OH, -0-alk(CI_6), -alk(C1_6), -CH-(alk(C1_6))2, 40 15 20 (V) 25 30 35 40 (VII!) (X) 6 Bien que les groupes RI.R2, R2 et R4 puissent être différents, les composés dans lesquels R/=R2 et R3=R4 sont préférés dans la mesure où leur synthèse est plus aisée car elle ne nécessite pas d'étapes de séparation des espèces mono- ou di-substituées. H, -COO-alk (Cl-6), -LG, the electron donor moieties selected from: -COOH, -NH2, -NH alk (Cl-6), -N [alki (Cl-6) alk2 (Cl6) , -OH, -O-alk (Cl-6), -alk (Cl-6), -CH- (alk (Cl-6)) 2, 40 (V) 25 (VII) (X) 6 Although RI.R2, R2 and R4 groups may be different, compounds in which R / = R2 and R3 = R4 are preferred in that their synthesis is easier because it does not require steps of separation of mono- or di-substituted.

De même et pour faciliter la synthèse, composés dans lesquels R8=R9,R10=R~~sont également préférés. Similarly, and to facilitate synthesis, compounds wherein R 8 = R 9, R 10 = R 7 are also preferred.

Enfin et pour les mêmes raisons, les composés dans lesquels R5=R6 sont aussi préférés. On définit ci-après les différentes familles de composés préférés selon l'invention. Finally and for the same reasons, compounds in which R5 = R6 are also preferred. The various families of preferred compounds according to the invention are defined below.

Une première famille de composés particulièrement préférés est constituée des composés de formule (!)dans laquelle, lorsqu'ils sont présents H/=Rc, R3=R4, Re=R Rio=R/, ' R6=R6, ou bien RI 15 et R2 et/ou R8 et Ro fonnert, avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné aatunéà 5 ou 6 chaînons. A first family of particularly preferred compounds consists of the compounds of formula (I) in which, when present H / = Rc, R3 = R4, R6 = R1 = R6, R6 = R6, or R1 and R2 and / or R8 and Ro form, together with the carbon atoms to which they are attached, a 5- or 6-membered hydrocarbon ring.

Une deuxième famille de composés particulièrement préférés est constituée des composés de formule (V) dans laquelle RI=R2.R3=R4, R8=Ro et R10=Rnou bien RI et R2 et/ou R8 et R9 forment, 20 avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné saturé à 5 ou 6 chaînons La sous-famille de composés de formule (V) et dans laquelle RI=Re=Ra=Reou bien R, et R2 et R8 et R9 forment, avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné saturé à 5 ou 6 chaînons et R3=R4=R10=R11 est encore plus préférée. A second family of particularly preferred compounds consists of the compounds of formula (V) in which R1 = R2. R3 = R4, R8 = Ro and R10 = R or R1 and R2 and / or R8 and R9 together with the atoms of carbon to which they are bonded, a 5- or 6-membered saturated hydrocarbon ring The subfamily of compounds of formula (V) and in which R1 = Re = Ra = Reou well R, and R2 and R8 and R9 form, with the atoms of carbon to which they are attached, a 5- or 6-membered saturated hydrocarbon ring and R3 = R4 = R10 = R11 is even more preferred.

25 Une troisième famille de composés particulièrement préférés est constituée des composés de formule (VI) dans laquelle RI=R2 ou bien RI et R2 forment, avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné saturé à 5 ou 6 chaînons, R3R4 et R5=R6. A third family of particularly preferred compounds are compounds of formula (VI) wherein R 1 = R 2 or R 1 and R 2 together with the carbon atoms to which they are attached form a 5- or 6-membered saturated hydrocarbon ring R 3 R 4 and R5 = R6.

Une quatrième famille de composés particulièrement préférés est constituée des composés de 30 formule (Vl!) dans laquelle RI=Raou bien RI et R2 forment, avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné saturé b5ouGchaînons, R =R4 sdRn=Rs. A fourth family of particularly preferred compounds are compounds of the formula (VI1) in which R1 = Ra or R1 and R2 form, together with the carbon atoms to which they are attached, a saturated hydrocarbon ring, or R = R4 sdRn = Rs.

Une cinquième famille de composés particulièrement préférés est constituée des composés de formule (VIII) dans laquelle Ri=R2, R3=R4, R8=R9, Rln=Rnou bien RI et R2 etIou R8 et R9 forment, 35 avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné saturé à GmuSchaînons La sous-famille de formule (N!!) dans laquelle RI=Ru=Ro=Roou bien RI et R2 et R8 et R9 forment, avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné saturé à5 ou 6 chaînons et Rm=H+=Rm=R1/est encore plus préférée. 10 7 Une sixième famille de composés particulièrement préférés est constituée des composés de formule (IX) dans laquelle Ri=R2 ou bien RI et R2 forment, avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné soiuréà 5ouGchaînons, Ro=R4. A fifth family of particularly preferred compounds are compounds of formula (VIII) wherein R1 = R2, R3 = R4, R8 = R9, R11 = R or R1 and R2 and R8 and R9 together with the carbon atoms to which they are bonded, a saturated hydrocarbon ring to GmuSchaînons The subfamily of formula (N!) in which RI = Ru = Ro = Roou well RI and R2 and R8 and R9 form, with the carbon atoms to which they are linked, a 5- or 6-membered saturated hydrocarbon ring and Rm = H + = Rm = R1 / is even more preferred. A sixth family of particularly preferred compounds are those compounds of formula (IX) in which R 1 = R 2 or R 1 and R 2 together with the carbon atoms to which they are attached form a hydrocarbon ring of 5 to 6 carbon atoms, Ro = R 4.

5 Une septième famille de composés particulièrement préférés est constituée des composés de formule (X) dans laquelle Ri=R2, R3=R4, R8=R9, R~Ro R5=R6 ou bien RI et R2 et/ou R8 et R9 forment, avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné saturé à5 ouG chaînons. La sous-famille de formule (X) dans laquelle RI=Ro=Ru=Roou bien RI et R2 et R8 et R9 forment, 10 avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné saturé bGouGchaînons et R3=R4=R19=R11 est encore plus préférée. A seventh family of particularly preferred compounds is compounds of formula (X) wherein R 1 = R 2, R 3 = R 4, R 8 = R 9, R 5 R 5 R 6 = R 6 or R 1 and R 2 and / or R 8 and R 9 form, with the carbon atoms to which they are bonded, a saturated hydrocarbon ring with 5 or 7 members. The subfamily of formula (X) in which R1 = R1 = Ru = R1 or R1 and R2 and R8 and R9 form, together with the carbon atoms to which they are attached, a saturated hydrocarbon ring bGouGchainons and R3 = R4 = R19 = R11 is even more preferred.

Pour les familles ci-dessus, les composés particulièrement préférés cont ceux dans lesquels RI, R2.R8 et R9 sont des atomes d'hydrogène ou bien les couples R1-R2 et F8-Ryforment, avec les 15 atomes de carbone auxquels ils sont !iés, un cycle saturé à 5 ou 6 atomes, et dans lesquels les groupes R9, R4, Rio et RI, sont choisis parmi les groupes H, OH et Cl, et R5, Re et R7 sont des groupes ûLG. For the above families, particularly preferred compounds are those in which R 1, R 2, R 8 and R 9 are hydrogen atoms or the R 1 -R 2 and F 8 -Ry-form moieties with the 15 carbon atoms to which they are attached! A saturated 5- or 6-membered ring, in which the groups R 9, R 4, R 10 and R 11 are selected from H, OH and Cl, and R 5, R 6 and R 7 are LL groups.

Les composés l'invention peuvent comporter un groupe réactif G permettant de coupler le 20 complexe de terre rare fluorescent avec une espèce que l'on souhaite rendre fluorescente, par exemple une molécule organique, un peptide ou une protéine. The compounds of the invention may comprise a reactive group G for coupling the fluorescent rare earth complex with a species that it is desired to make fluorescent, for example an organic molecule, a peptide or a protein.

Le groupe réactif G peut être porté indifféremment par l'un ou l'autre de substituants RI à R11, mais sera de préférence porté par l'un des substituants R5, R6 ou R7 lorsqu'ils sont présents, et cela 25 pour faciliter la synthèse du polymacrocycle. En d'autres termes, lorsque le groupe ûLG est présent, au moins un des groupes R5, R6 ou R7 est un groupe -UG. The reactive group G may be carried either by one or the other of substituents R1 to R11, but will preferably be carried by one of the substituents R5, R6 or R7 when they are present, and this to facilitate the polymacrocycle synthesis. In other words, when the group ûLG is present, at least one of R5, R6 or R7 is a -UG group.

Typiquement, le groupe réactif G est un groupe électrophile ou nucléophile qui peut former une liaison covalente lorsqu'il est mis en présence d'un groupe n i!oouà ikaappnzphé, 30 respectivement. La réaction de conjugaison entre un composé selon l'invention comportant un groupe réactif et une molécule organique, un peptide ou une protéine portant un groupe fonctionnel entraîne la formation d'une liaison covalente comportant un ou plusieurs atomes du groupe réactif. Typically, the reactive group G is an electrophilic or nucleophilic group that can form a covalent bond when brought into contact with a naphthenic group, respectively. The conjugation reaction between a compound according to the invention comprising a reactive group and an organic molecule, a peptide or a protein bearing a functional group results in the formation of a covalent bond comprising one or more atoms of the reactive group.

De préférence, le groupe réactif G est un groupe dérivé d'un des composés : un 35 acrylamide, une amine activée (par exemple une cadavérine ou une éthylènediamine), un ester activé, un aldéhyde, un halogénure d'alkyle, un anhydride, une aniline, un azide, une aziridine, un acide oorboxy!ique, un diazoa!oune, un ha!uaoébamide, une halotriazine, telle que la monochlorotriazine, !adich!ondriazine' une hydrazine (y compris les hydrazides), un imido ester, un isocyanate, un isothiocyanate, un maléimide, un halogénure de aulfonWe, ou un thiol, une 40 cétone, une amine, un halogénure d'acide, un ester d`hvdrnnyeuocininnidWe, un ester 8 d'hydroxysulfosuccinimidyle, un azidonitrophényle, un azidophényle, un dithio pn)pionemidm.unolyoxal et en particulier les groupes de formule : Mi ) (CH2) NCS 0 iNH ) (CH2)i '01 NH ) (CH2) SH ( NH ) (CH2) NH-Ar NCS ( NH (Il iNHi ) (CH2)ùN O NH ) (CH ) dans lesquels wvahe daO à 8 et vest égal à0 ou 1, et Ar est un hétérocycle à 5 ou 6 chaînons, 5 saturé ou insaturé, comprenant 1 à 3 hétéroatomes, éventuellement substitué par un atome Preferably, the reactive group G is a group derived from one of the compounds: an acrylamide, an activated amine (for example a cadaverine or an ethylenediamine), an activated ester, an aldehyde, an alkyl halide, an anhydride, aniline, an azide, an aziridine, an oorboxylic acid, a diazoaane, a halohebamide, a halotriazine, such as monochlorotriazine, adich! ondriazine a hydrazine (including hydrazides), an imido ester , an isocyanate, an isothiocyanate, a maleimide, a sulfonWe halide, or a thiol, a ketone, an amine, an acid halide, a hydrogen carbonate ester, a hydroxysulfosuccinimidyl ester, an azidonitrophenyl, an azidophenyl , a pionemidm.unolyoxal dithio) and in particular the groups of formula: Mi) (CH2) NCS 0 iNH) (CH2) i '01 NH) (CH2) SH (NH) (CH2) NH-Ar CNS (NH ( IIH (CH 2) nO NH) (CH) in which wvahe daO at 8 and vest equal to 0 or 1, and Ar is a 5- or 6-membered heterocycle saturated or unsaturated chain members, comprising 1 to 3 heteroatoms, optionally substituted by an atom

De manière préférée, le groupe réactif G est un acide carboxylique, un ester deauccinhnidyle, un haloacétamide, une hydrazine, un isothiocyanate, un groupe maléimide, une amine aliphatique. lO Ces groupes réactifs peuvent être liés au cryptate de terre rare directement ou via un bras de liaison L constitué de manière avantageuse par un redioal organique bivalent, choisi parmi les groupes alkylènes linéaires ou ramifiés en CI-Co. contenant éventuellement une ou plusieurs doubles ou triples liaisons; les groupes cycloalkylène en C5-C8 et les groupes arylène en C6-C14, 15 lesdits groupes alkylène, cycloalkylène ou arylène contenant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes, tels que l'oxygène, l'azote, le soufre, le phosphore ou un ou plusieurs groupe(s) 510 carbamoyle ou carboxamido, et lesdits groupes alkylène, cycloalkylène ou arylène étant éventuellement substitués par des groupes alkyle en C1-C8, aryle en C6-C14, sulfonate ou oxo. En particulier, les bras de liaison L peuvent être choisis parmi les groupes divalents suivants : 1) ù(CH2) 0 0 Il II 2) ù(CH2),,ùNH-Cù(CH2)m C 3) ù(CH2)nù0ù(CH2)m 0ù(CH2)p O I 5) ù(CH2)nùNH-Cù(CH2)p I I (CH2)nù0ù(CH2)n7 Où(CH2)pùNH-Cù(CH2)n o o I I O 6) ù(CH2)nùNH-Cù(CH2)P N/ 7) ù(CH2)NH-Cù(CH2)P S 15 >'/ 0 Sù(CH2), 0 Nù(CH ,)r 0 I I ù(CH2)nùNH-C (CH2)p 0 li 9) ù(CH2)nùNH-C(CH2) 20 10 10) ---(CH N O p dans lesquels n, m, p, r sont des nombres entiers de 1 à 16, de préférence de 1 à 5. Preferably, the reactive group G is a carboxylic acid, a succinhnidyl ester, a haloacetamide, a hydrazine, an isothiocyanate, a maleimide group or an aliphatic amine. These reactive groups may be bound to the rare earth cryptate directly or via a linker arm L advantageously composed of a divalent organic redioal selected from linear or branched alkylene groups of Cl-Co. possibly containing one or more double or triple bonds; C 5 -C 8 cycloalkylene groups and C 6 -C 14 arylene groups, said alkylene, cycloalkylene or arylene groups optionally containing one or more heteroatoms, such as oxygen, nitrogen, sulfur, phosphorus or one or more carbamoyl or carboxamido group (s), and said alkylene, cycloalkylene or arylene groups being optionally substituted with C 1 -C 8 alkyl, C 6 -C 14 aryl, sulfonate or oxo groups. In particular, the linking arms L may be chosen from the following divalent groups: ## STR2 ## where: ## STR2 ## where ## STR2 ## (CH 2) m (CH 2) p OI 5) where (CH 2) p (CH 2) n (CH 2) n (CH 2) n (CH 2) n (CH 2) n (CH 2) n CH 2 embedded image (CH 2) np (7) (CH 2) n -CH (CH 2) n o (CH 2) n CH 2) wherein n, m, p, r are integers from 1 to 16, preferably from 1 to 5, and wherein n, m, p, r are integers from 1 to 16, preferably from 1 to 5, and .

10 De manière préférée, les groupes ûLG sont constitués d'un groupe réactif G choisi parmi: un acide carboxyique, un ester de succinimidyle, un hekoocétamide, une hydrazine, un ieodliocyanate, un groupe maléimide, une amine aliphatique, ledit groupe G étant lié au cryptate directement ou via une chaîne alkylène comprenant de 1 à 5 atomes de carbone. Preferably, the LiG groups consist of a reactive group G chosen from: a carboxylic acid, a succinimidyl ester, a hekoocetamide, a hydrazine, an iodiocyanate, a maleimide group or an aliphatic amine, said group G being bound to cryptate directly or via an alkylene chain comprising 1 to 5 carbon atoms.

15 De manière encore plus préférée, le groupe -LG est un acide carboxylique lié au cryptate directement ou via une chaîne alkylène comprenant de 1àGatomes decarbone. Even more preferably, the group -LG is a carboxylic acid bound to the cryptate directly or via an alkylene chain comprising 1 to 7 decarbon atoms.

Une molécule organique, un peptide ou une protéine susceptible d'être marquée par un composé selon l'invention comprendra donc un groupe fonctionnel avec lequel réagira le groupe réactif du 20 cryptate de terre roro, porté éventuellement par un bras de liaison. Par exemple, la molécule organique, la protéine ou le peptide comporte un des groupes fonctionnels suivants : amine, arnide, thiol, a!000!, e!déhvde, oétone, hydrazine, hydroxylamine, amine secondaire, halogénure, 8poxvde, ester (carboxylate d'alkyle), acide carboxylique, des groupes comportant des doubles liaisons ou une combinaison de ces groupes fonctionnels. Les groupes amine ou thiol présents 25 naturellement sur les protéines sont souvent utilisés pour procéder au marquage de ces molécules. An organic molecule, a peptide or a protein capable of being labeled with a compound according to the invention will therefore comprise a functional group with which the reactive group of the earth cryptate roro will react, optionally carried by a linking arm. For example, the organic molecule, the protein or the peptide has one of the following functional groups: amine, amide, thiol, amyl, amide, ketone, hydrazine, hydroxylamine, secondary amine, halide, oxime, ester (carboxylate) alkyl), carboxylic acid, groups having double bonds or a combination of these functional groups. Amino or thiol groups naturally present on proteins are often used to label these molecules.

COMPLEXES MACROPOLYCYCLIQUES (CRYPTATES) DE TERRES RARES L'invention concerne également les complexes macropolycycliques (dits également cryptates) de terres rares constitués d'un sel de terre rare complexé par un composé macropolycyclique tel que 30 décrit ci-dessus, la terre rare étant choisie parmi : E"3+.Tb3+`Ga3+`n"3+,ma3+ ,vb3+'Er3+. De préférence, la terre rare est Tb3+ ou Eu3+. The invention also relates to the macropolycyclic complexes (also known as cryptates) of rare earths consisting of a rare earth salt complexed with a macropolycyclic compound as described above, the rare earth being chosen among: E "3 + .Tb3 +` Ga3 + `n" 3 +, ma3 +, vb3 + 'Er3 +. Preferably, the rare earth is Tb3 + or Eu3 +.

Ces complexes sont préparés en mettant en contact les cryptands selon l'invention et un sel de terre rare Ainsi la réaction entre 1 équivalent de cryptand et 1,2 équivalent de chlorure de 35 lanthanide (europium ou terbium) dans l'acétonitrile à reflux pendant plusieurs heures conduit au cryptate corn*epondamt. 11 CONJUGUES : Les complexes de terres rares selon l'invention comportant un groupe réactif sont particulièrement adaptés au marquage de molécules organiques ou biologiques comportant un groupe fonctionnel susceptible de réagir avec le groupe réactif pour former une liaison covalente. Ainsi l'invention concerne aussi l'utilisation de complexes de terres rares pour le marquage de molécules biologiques. These complexes are prepared by contacting the cryptands according to the invention with a rare earth salt. Thus, the reaction between 1 equivalent of cryptand and 1.2 equivalents of lanthanide chloride (europium or terbium) in refluxing acetonitrile several hours lead to the cryptate corn * epondamt. CONJUGATES: The rare earth complexes according to the invention comprising a reactive group are particularly suitable for labeling organic or biological molecules comprising a functional group capable of reacting with the reactive group to form a covalent bond. Thus the invention also relates to the use of rare earth complexes for the labeling of biological molecules.

L'invention concerne donc également les molécules marquées par un cryptate de terre rare selon l'invention. Toutes les molécules organiques ou biologiques peuvent être conjuguées avec un cryptate de terre rare selon l'invention si elles possèdent un groupe fonctionnel susceptible de réagir avec le groupe réactif. En particulier, les conjugués selon l'invention comportent un cryptate de terre rare selon l'invention et une molécule organique choisie permi: un acide aminé, un peptide, une protéine, un anticorps, un sucre, une chaîne glucidique, un nucléoside, un nucléotide, un oligonucléotide, un substrat d'enzyme, en particulier un substrat d'enzyme suicide telle qu'une benzylguanine. The invention therefore also relates to the molecules labeled with a rare earth cryptate according to the invention. All organic or biological molecules can be conjugated with a rare earth cryptate according to the invention if they have a functional group capable of reacting with the reactive group. In particular, the conjugates according to the invention comprise a rare earth cryptate according to the invention and a chosen organic molecule permi: an amino acid, a peptide, a protein, an antibody, a sugar, a carbohydrate chain, a nucleoside, a nucleotide, an oligonucleotide, an enzyme substrate, in particular a suicide enzyme substrate such as a benzylguanine.

Les inventeurs ont par ailleurs découvert que la réaction de la benzylguanine avec l'enzyme alkylguanine-DNA alkyltransférase est beaucoup plus rapide lorsque la benzylguanine est conjuguée avec un cryptate de terre rare selon l'invention, en comparaison avec la réaction de cette même enzyme avec une benzylguanine coup!éeà un autre type de fluorophore. The inventors have furthermore discovered that the reaction of benzylguanine with the alkylguanine-DNA alkyltransferase enzyme is much faster when the benzylguanine is conjugated with a rare earth cryptate according to the invention, in comparison with the reaction of this same enzyme with a benzylguanine cleaves to another type of fluorophore.

Définitions et abréviations : ": désigne un groupe alkyle linéaire ou ramifié comportant de 1 à n atomes de carbone, tels que les groupes méthyle, éthyle, propyle, isopropyle, butyle, néopentyle ouhaxvle. 25 Lorsque une molécule comprend 2 groupes alkyles, les abréviations a/kl/CI.Jcd alk2(CI_n) sont utilisées. Ctyptand : désigne un composé macropolycyclique de formule : D F 30 dans laquelle D, E, F sont des chromophores, généralement des cycles carbonés ou des hétérocycles aromatiques, éventuellement substitués. Des cryptands sont décrits dans les brevets Definitions and abbreviations: ": denotes a linear or branched alkyl group having from 1 to n carbon atoms, such as methyl, ethyl, propyl, isopropyl, butyl, neopentyl or hexyl groups When a molecule comprises 2 alkyl groups, the abbreviations Alkyl: denotes a macropolycyclic compound of the formula: ## STR3 ## wherein D, E, F are chromophores, generally carbon rings or aromatic heterocycles, optionally substituted. are described in the patents

Cryptate de terre rare : désigne un complexe comportant une terre rare et un cryptand, la terre 35 rare étant liée au oryptand par des liaisons de coordination. 12 Dans la suite de la description, la nomenclature suivante sera utilisée : °Cgptate&æ<terre rare> <chromnphonaD-chromophonaE-chromoohon*F> . Par exemple, un cryptate d'europium, dont !eohnzmnnphora E est une pyridine et les chromophores Eod F sont des bipyridines, sera dénommé : Cryptate d'Europium Pyridine-bisbiPyridine ou encore Cryptate Eu Py-bisbiPy.   Rare earth cryptate: refers to a complex comprising a rare earth and a cryptand, the rare earth being bound to oryptand by coordinating bonds. In the rest of the description, the following nomenclature will be used: ° Cgptate & æ <rare earth> <chromnphonaD-chromophonaE-chromoohon * F>. For example, a europium cryptate, of which Eohnzmnnphora E is a pyridine and the Eod F chromophores are bipyridines, will be called: Pyrium-bisbiPyridine Europium Cryptate or Eu-Py-bisbiPy Cryptate Eu.

"T4TP": 1,4, o py~: pyridine T7/T48TP" : 10,11'12'13-&ét,ahvdro'4,5,9,14-tétraooa-benzo[b]triphény!ène 10 "MS (El) ": Spectrométrie de Masse (Impact électronique) "/R&YG/E/ ": Spectrométrie de Masse Haute Résolution (Impact électronique) P.F. " : Point de fusion "MALDV°: Ionisation désorption sur matrice assistée par laser a ix Assisted Laser Desorption Ionisation) 15 "8&4LD/T{JF : La technique K8ALD!'TC>F(WYathxAaeietedLaser DenorptionIonisation -TimeCf Flight) est un couplage entre la technique MALDI et la spectrométrie de masse dite à temps de vol (T{JF-Ume'of-f!ight mass spectrometry), en raison principalement de sa large plage de fonctionnement en masse. Ce nom est couramment utilisé pour désigner I'appareilllage en!ui' même. 20 °Matrice CHCA ": résine contenant des groupes acide alpha cyano-4-hydroxycinnamique "Matrice ID4A": résine contenant des groupes acide trans-3-indoleacrylique "FRB": domaine de liaison de la protéine FRAP avec le complexe FKBPùrapemyoinm(en langue anglaise "FKBPùrapamycin bindinQdomainofFRAP^) "FRAP": protéine se liant au complexe FKBP-rapamycine (en langue anglaise, FKBPù25 /apanlycinbindingprotein") °FKBp": protéine eoliant à!aprotéine FNSOG(onlangue anglaise, "FK5OSbindinQpnzb in") 30 La préparation des composés macropolycyclîques et des cryptateaaekon l'invention est décrite de manière schématique ci-après, et de manière plus détaillée dans la partie expérimentale. "T4TP": 1,4, o py ~: pyridine T7 / T48TP ": 10,11,12,13- & α, α-hydroxy-4,5,9,14-tetraooa-benzo [b] triphenylene 10" MS (EI) ": Mass Spectrometry (Electronic Impact)" / R & YG / E / ": High Resolution Mass Spectrometry (Electronic Impact) PF": Melting Point "MALDV °: Laser Assisted Ionization Ionization with ix Assisted Laser Desorption Ionisation) 15 "8 & 4LD / T {JF: The technique K8ALD! 'TC> F (WYathxAaeietedLaser DenorptionIonisation -TimeCf Flight) is a coupling between the MALDI technique and time-of-flight mass spectrometry (T {JF-Ume' of-f! ight mass spectrometry), mainly because of its wide range of mass operation. This name is commonly used to refer to the device itself. 20 ° Matrix CHCA ": resin containing alpha cyano-4-hydroxycinnamic acid groups" Matrix ID4A ": resin containing trans-3-indoleacrylic acid groups" FRB ": binding domain of FRAP protein with the FKBPurapemyoinm complex (in language English "FKBPulamycin bindinQdomainofFRAP") "FRAP": FKBP-rapamycin complex binding protein (English language, FKBP-25 / apanlycinbindingprotein) "FKBp": FNSOG aproterine-binding protein (English language, "FK5OSbindinQpnzb in") macropolycyclic compounds and cryptateaaekon the invention is described schematically below, and in more detail in the experimental part.

35 40 13 Synthèse du chromophore TA TP 35 40 13 Synthesis of the chromophore TA TP

Le schéma général de la synthèse du chromophore TATP et de ces dérivés est décrit ci-dessous: FI 1R2 Néocuproîne R1= R2 cyclohexyl NaBH4 MeOH SeO2 Dioxane 5 Quelle que soit la méthode choisie, il est nécessaire d'utiliser la néocuproïne comme produit de départ. La néocupro'ine peut être héxachlorée en présence de N-chlorosuccinimide puis le composé chloré ainsi obtenu est traité dans des conditions oxydantes conduisant ainsi à !'odhoquinone di-acide. Lorsque ce composé est traité avec une 1,2-diamine de formule !O NH2-CR1-CR2-NH2, le motif TATP est formé dans la molécule. Le diacide résultant n'est pas isolé directement mais est estérifié sous forme de di-ester méthylique qui peut être purifié par chromatographie. Ce diester est ensuite réduit par le borohydrure de sodium conduisant au diol souhaité. Alternativement, ce diol peut être obtenu par une autre voie de synthèse mais toujours à partir de la néocuproïne. En effet lorsque ce composé est traité avec un mélange brome û acide 15 nitrique, généré in situ via un mélange de bromure de potaaeium, d'acide sulfurique et d'acide 14 nitrique, l'orthoquinone correspondante est obtenue. Le traitement de ce composé avec la 1^2-diamine de formule NH2{}R1-CR2NH2 conduit au motif TATP souhaité correspondant au squelette de base comportant le cycle pyrazinique. Ensuite !afonoUonna!impdion en position 2 et 2' est possible en oxydant les groupes méthyle par de l'oxyde de sélénium dans le dioxane. La 5 réduction des fonctions aldéhydes en fonctions alcools est effectuée facilement par du borohydrure de sodium conduisant ainsi au diol. En traitant le diol avec du trichlorure de phosphore dans le chloroforme, on obtient le composé dichloré correspondant. The general scheme of the synthesis of the TATP chromophore and these derivatives is described below: FI 1R2 Neocupramine R1 = R2 cyclohexyl NaBH4 MeOH SeO2 Dioxane Whatever the method chosen, it is necessary to use neocuproine as starting material . The neocupro'in can be hexachlorinated in the presence of N-chlorosuccinimide and then the chlorinated compound thus obtained is treated under oxidizing conditions thus leading to di-acid odhoquinone. When this compound is treated with a 1,2-diamine of the formula ## STR2 ## the TATP unit is formed in the molecule. The resulting diacid is not isolated directly but is esterified as a methyl di-ester which can be purified by chromatography. This diester is then reduced by the sodium borohydride leading to the desired diol. Alternatively, this diol can be obtained by another route of synthesis but always from neocuproine. Indeed, when this compound is treated with a brominated nitric acid mixture, generated in situ via a mixture of potassium bromide, sulfuric acid and nitric acid, the corresponding orthoquinone is obtained. Treatment of this compound with 1,2-diamine of the formula NH2 (R1-CR2NH2 results in the desired TATP motif corresponding to the basic backbone comprising the pyrazine ring. Subsequent impregnation at position 2 and 2 'is possible by oxidizing the methyl groups with selenium oxide in dioxane. The reduction of the aldehyde functional groups to alcohol functions is easily carried out with sodium borohydride thus leading to the diol. By treating the diol with phosphorus trichloride in chloroform, the corresponding dichloro compound is obtained.

Lorsque le motif TATP comporte des groupes R3 et R4 différents de l'hydrogène, la synthèse du 10 chromophore diffère de celle présentée précédemment. En particulier, les positions 4 et 4' de la phénanthroline de départ doivent être activées. Ces produits de départ ne sont pas commerciaux, et peuvent être préparés comme indiqué sur le schéma suivant : JûCOB NH HN + H2N NH2 Cl C 15 La phénylène 1,2-diamine est condensée sur l'acétoacétate d'éthyle selon le protocole décrit dans la littérature (T. W. Bell et al .J. Org. Chem. 1987, 52, 3847). Le bis-adduit obtenu est séparé du mono-adduit par chromatographie flash sur colonne de silice. La formation du motif phénantroline est effectuée en chauffant à température élevée (2400{}), en présence de l'oxyde de phényle 5 (PhO). Le composé dichloré correspondant est obtenu avec un bon rendement (89%) en utilisant le POCI3. Ensuite la stratégie utilisée précédemment est appliquée sur cette molécule ce qui permet d'obtenir une série de dérivés du motif TATP. Ces chromophores sont ensuite utilisés dans l'élaboration des produits selon l'invention. When the TATP motif has R3 and R4 groups other than hydrogen, the synthesis of the chromophore differs from that previously presented. In particular, the 4 and 4 'positions of the starting phenanthroline must be activated. These starting materials are not commercial, and can be prepared as indicated in the following scheme: ## STR1 ## The 1,2-diamine phenylene is condensed on ethyl acetoacetate according to the protocol described in US Pat. the literature (TW Bell et al., Org Chem 1987, 52, 3847). The bis-adduct obtained is separated from the mono-adduct by flash chromatography on a silica column. Formation of the phenantroline unit is effected by heating at elevated temperature (2400 °) in the presence of phenyl ether (PhO). The corresponding dichlorinated compound is obtained in good yield (89%) using POCl3. Then the strategy used previously is applied to this molecule which allows to obtain a series of derivatives of the TATP pattern. These chromophores are then used in the preparation of the products according to the invention.

10 Préparation de dérivés de la p yridine ou de la bile yridine diamine : F~ PdKC1O% NH2 NH2 La pyridine dibromée est convertie en diamine correspondante par aminolyse en faisant réagir le 15 composé dibromé dans une solution de diméthylformamide saturée en ammoniac. Une autre alternative à cette stratégie consiste à préparer le diazide puis à réduire le composé intermédiaire pour donner la diamine souhaitée. La même stratégie est utilisée pour la bipyridine. Preparation of derivatives of pyridine or bile yridine diamine: F-PdKC 10% NH 2 NH 2 The dibrominated pyridine is converted to the corresponding diamine by aminolysis by reacting the dibrominated compound in a solution of dimethylformamide saturated with ammonia. Another alternative to this strategy is to prepare the diazide and then reduce the intermediate compound to give the desired diamine. The same strategy is used for bipyridine.

Synthèse de composés macropolycycliques et cryptates dont au moins deux des trois Synthesis of macropolycyclic and cryptate compounds including at least two of the three

Parmi les différentes méthodes de cyclisation pour former des composés macropolycycliques, la méthode appelée °2+1 "eut l'une des plus efficaces permettant en une seule étape d'obtenir un bismacrocycle. Cette méthode consiste à faire réagir deux chromophores dihalogénés avec un chromophore diaminé. Les schémas ci-après représentent la synthèse d'un composé mecropo!yoyoÜquade formule générale (V) ou (X) et des cryptates correspondants. 16 R5 R6 5 Le cryptate de lithium est obtenu en condensant deux équivalents de dérivé TATP dichloré avec un équivalent de pyridine ou bien de bipyridine diamine. Après extraction classique du mélange réactionnel, le produit brut est traité avec du chlorure d'europium ou du chlorure de terbium, ce qui conduit au cryptate de !anthanidennrraapondanL Les crptates sont en général isolés en petite 10 quantité (à l'échelle de la !mol) par HPLC préparative en utilisant un mélange d'acëtonüri!æ-eau' anideLrif!uoruacétique comme é!uant. 15 15 17 Synthèse des cryptates dont les 3 chromophores sont différents : Among the different methods of cyclization to form macropolycyclic compounds, the so-called "2 + 1" method was one of the most efficient methods for obtaining a bismacrocycle in a single step by reacting two dihalogen chromophores with a chromophore. The following diagrams represent the synthesis of a compound of the formula (V) or (X) and the corresponding cryptates.) R5 R6 Lithium cryptate is obtained by condensing two equivalents of TATP derivative dichlorinated with An equivalent of pyridine or bipyridine diamine After conventional extraction of the reaction mixture, the crude product is treated with europium chloride or terbium chloride, resulting in the cryptate of anthanidennrraapondanL Crptates are usually isolated in small Amount (on a scale of 1 mol) by preparative HPLC using a mixture of acetonitrile-water-amide-uoroacetic acid as a result: Synthesis of cryptates whose 3 chromophores are different:

D'autres méthodes également efficaces mais comportant un nombre supérieur d'étapes consistent à préparer un macrocycle sur leouel est condensé un chromophore portant deux groupements ~ partants. Cette méthode permet l'obtention d'un cryptate comportant trois chromophores différents, ce qui n'est pas possible avec la méthode précédente *2+1 . On peut citer par exemple les méthodes suivantes : - Préparation de macrocycles via des bases de Schiff utilisées par David E. Fenton (S.R.C|o!!inson.D.E.Fenton, Coord.Chem.Rev.1S9G.148.19)et 10 - Synthèse de macrocycles utilisant la méthode de Stetter et Marx, qui a été utilisée par Jean-Marie Lehn pour élaborer des macrocyo!ee(H. Stetter, J. Marx, Ann. Chem., 1967. vol. GO7.S9-GG.; B.Dietrich, J.yW.Lehn.J.P.Sauvage, TetmuhodronLett.1SGB.2885-2888). Other methods which are equally effective but which comprise a greater number of steps consist in preparing a macrocycle on which the condensate is a chromophore carrying two leaving groups. This method makes it possible to obtain a cryptate comprising three different chromophores, which is not possible with the previous method * 2 + 1. For example, the following methods can be mentioned: - Preparation of macrocycles via Schiff bases used by David E. Fenton (SRC | o! Inson.DEFenton, Coord.Chem.Rev.1S9G.148.19) and 10 - Synthesis of macrocycles using the method of Stetter and Marx, which was used by Jean-Marie Lehn to develop macrocoies (H. Stetter, J. Marx, Ann.Chem., 1967. vol.BG7.S9-GG; .Dietrich, J.yW.Lehn.JPSauvage, TetmuhodronLett.1SGB.2885-2888).

Les étapes essentielles de ces approches classiques sont résumées dans les schémas suivants : Technique par amination réductrice via une base de Schiff, H rNH2 3 o cil. w LNH2 3 ~ oxmmonhoæo cxmmonxvmx chmmvphvma cxmnmnhomo X= groupement partant Technique par amidation (Stetter et Marx) chmmunhomo communhomo oxmmvvhomx cxmmovhome + NH2 X= groupement partant Synthèse de conjugués ù Marquage de molécules organiques avec les composés selon 20 l'invention Les techniques de conjugaison de deux molécules organiques sont basées sur l'utilisation de groupes réactifs et relèvent des connaissances générales de l'homme du métier. Ces techniques classiques sont décrites par exemple dans Bioconjugate Techniques, G.T. Hermanson, Academic 25 Press, 1996. p. 137-166. Typiquement la préparation d'un conjugué est réalisée selon le protocole décrit ci-dessous (exemple de marquage d'une benzylguanine (8G) aminée par un cryptate Eu P). ù* cryptate possédant une fonction carboxylique est activé sous forme d'ester de NHS (TBTU et diisopropyléthylamine). La benzylguanine aminée réagit réagit avec cet ester pour conduire au conjugué 5 Cryptate-BG souhaité. ? 5 NH2 0 19 EXEMPLES Exemple 1 : Synthèse du 7,10-Dichlorométhyl-1.4,8.9-tétraazatriphénylène 2,9-bls(trichlorométhyl)-1,1 NCS, mCPBA Néocuproïne A une suspension de néocuproïne (5.2g.25 mmol) dans CCN (200 ml) ont été ajoutés en une !O seule portion la N-Chlorosuccinimide (20.06 g, 150 mmol) puis l'acide 3-chloroperbenzoïque (20 mg). La suspension blanche a été chauffée à reflux sans précaution particulière. Au cours du temps la suspension s'est coloré en jaune. L'avancement de la réaction a été suivi par CCM. Après 20 h dans ces conditions, la réaction était complète. La solution a été refroidie à température ambiante puis le solvant a été éliminé sous pression réduüe, oonduioantà un solide. A ce solide a 15 été ajouté du dichlorométhane (150 ml) pour conduire à une suspension qui a été filtrée. Le solide a été écarté et le filtrat a été concentré sous pression réduite. Le résidu a été dilué dans de l'acétate d'éthyle (150 ml). Cette solution a été lavée avec une solution de saumure (3 x 50 ml), puis avec une solution de Na2CO3 à 10% dans l'eau (50 ml xl). La phase organique a été séchée sur MgSO4, filtrée puis concentrée sous pression réduite pour donner un solide. Ce produit a été 20 purifié par chromatographie en utilisant un gradient d'éluant cyclooxexane-Acétate d'éthyle (5/1 à 4/2). Les fractions de même Rf sont regroupées et concentrées sous pression réduite pour conduire au produit désiré (8.G4g.83% Rdd.P.F.: 225"C.1HRyWN(30OMHz, CDC!n): 88.45/d.J The essential steps of these classical approaches are summarized in the following schemes: Reductive amination technique via a Schiff base, H rNH2 3 o cil. ## EQU1 ## X = starting group Amidation technique (Stetter and Marx) homohomo communhomo oxymethylamine + NH2 X = leaving group Synthesis of conjugates Marking of organic molecules with the compounds according to the invention Conjugation techniques two organic molecules are based on the use of reactive groups and fall within the general knowledge of those skilled in the art. These conventional techniques are described for example in Bioconjugate Techniques, G.T. Hermanson, Academic Press, 1996. p. 137-166. Typically, the preparation of a conjugate is carried out according to the protocol described below (example of labeling of a benzylguanine (8G) aminated with a cryptate Eu P). Cryptate having a carboxylic function is activated in the form of NHS ester (TBTU and diisopropylethylamine). The amino benzylguanine reacts reacts with this ester to yield the desired Cryptate-BG conjugate. ? EXAMPLES Example 1 Synthesis of 7,10-Dichloromethyl-1,4,8,9-tetraazatriphenylene 2,9-bls (trichloromethyl) -1,1 NCS, mCPBA Neocuproin A suspension of neocuproine (5.2 g.25 mmol) in NCC (200 ml) was added in one portion N-chlorosuccinimide (20.06 g, 150 mmol) followed by 3-chloroperbenzoic acid (20 mg). The white suspension was heated to reflux without special precautions. In the course of time the suspension is colored yellow. The progress of the reaction was monitored by TLC. After 20 hours under these conditions, the reaction was complete. The solution was cooled to room temperature and then the solvent was removed under reduced pressure to give a solid. To this solid was added dichloromethane (150 ml) to give a suspension which was filtered. The solid was discarded and the filtrate was concentrated under reduced pressure. The residue was diluted in ethyl acetate (150 ml). This solution was washed with brine solution (3 x 50 ml) and then with a solution of 10% Na2CO3 in water (50 ml xl). The organic phase was dried over MgSO4, filtered and concentrated under reduced pressure to give a solid. This product was purified by chromatography using a cyclooxexane-ethyl acetate (5/1 to 4/2) eluent gradient. The fractions of the same Rf are combined and concentrated under reduced pressure to yield the desired product (8.G4g.83% Rdd.P.F .: 225 ° C.1HRyWN (30OMHz, CDC! N): 88.45 / d.J

25 1, Dans un ballon de 250 ml on a introduit de la 2` 1,10-phénanthroline (16 g, 16,86 mmol) et le bromure de potassium (10`03 g ~ 84,33 mmol). Le mélange a été refroidi par un bain de glace, puis de l'acide sulfurique froid (60 ml) a été ajouté sans précautions particulières. Le mélange a été agité pendant 15 min àcette température puis l'acide nitrique à été ajouté goutte à goutte (30 ml). Le mélange a ensuite été chauffé à 85°C pendant 1h30. La 20 formation de vapeur rousse a pu être observée (brome). (brmélange réactionnel a ensuite été versé dans un mélange glace/eau (1:1, 400 ml) et le précipité jaune formé a été filtré, lavé avec 5 ml de dichlorométhane et séché sous pression réduite pendant 24 h, Un solide jaune a été obtenu (4,45 Q. 88%), correspondant au produit souhaité. P.F.: 202'208 "C (déc). `H RMN (300 MHz, DMSO d6): 0 8.59 (d, J= 7.8 Hz, 2 H) ; 8,27 (d, J= 8,1 Hz, 2 H). 13r RMN (75 MHz, de &méthyle. 10 Dans un ballon de 250 ml on uintroduit (4,45 g; 14,93 mmol) de diane et de !'éthanol absolu (180 ml). A cette solution on aaouté goutte à goutte de l'éthylène diamine (1.19m! ; 17,91 mmol) sous agitation magnétique. Un précipité gris s'est formé au cours de cette addition. Le mélange a 15 ensuite été chauffé à reflux pendant 60 h. Après cette période, le solvant a été éliminé sous pression réduite et le résidu dissous dans du nné#huno! (180 ml) puis de l'acide sulfurique concentré (10 ml) a été ajouté. Le mélange a été chauffé à nouveau à reflux pendant 3h. Après cette période de l'eau (300 ml) a été additionnée au mélange dans lequel s'est formé un précipité qui a été filtré, lavé successivement avec de l'eau (100 ml) puis de l'éther diéthylique (50 ml). Le 20 solide ainsi obtenu a été séché sous pression réduite puis purifié par chromatographie flash sur colonne de silice en utilisant un éluant (dichlorométhane-méthanol, 9:1). Un solide beige a été alors obtenu (1.5g. 29%) correspondant au produit souhaité. P.F.: 300-302"{|. `H RMN (300 MHz, CDCI3): B 9'67 (dd, J= 0'4 Hz ; 8,3; 2 H)' 9.07 (s, 2 H), 8.65 (d, J= 8.1 Hz, 2H), 4.15 (s, OMe, 6 H). 13n RMN (75 MHz, CDCI3): O 106'2; 15O,4; 14G.8; 146.0 ; 141'0; 13S.2; 130;0 ; 125,2 ; In a 250 ml flask was introduced 2'-1,10-phenanthroline (16 g, 16.86 mmol) and potassium bromide (10'03 g ~ 84.33 mmol). The mixture was cooled with an ice bath and then cold sulfuric acid (60 ml) was added without any particular precautions. The mixture was stirred for 15 minutes at this temperature and then the nitric acid was added dropwise (30 ml). The mixture was then heated at 85 ° C for 1.5 hours. Red-fume formation could be observed (bromine). The reaction mixture was then poured into an ice / water mixture (1: 1, 400 ml) and the yellow precipitate formed was filtered, washed with 5 ml of dichloromethane and dried under reduced pressure for 24 hours. obtained (4.45 ± 88%), corresponding to the desired product, mp 202 ° 208 ° C. (dec) H NMR (300 MHz, DMSO d6): δ 8.59 (d, J = 7.8 Hz, 2H) 8.27 (d, J = 8.1 Hz, 2H) 13 NMR (75 MHz, methyl) To a 250 ml flask was added (4.45 g, 14.93 mmol) of diane and absolute ethanol (180 ml) Ethylenediamine (1.19 μm, 17.91 mmol) was added dropwise with magnetic stirring A gray precipitate formed during this addition The mixture was then refluxed for 60 hours, after which time the solvent was removed under reduced pressure and the residue dissolved in ether (180 ml) and then concentrated sulfuric acid (10 ml). ) has been added. After this period of water (300 ml) was added to the mixture in which a precipitate formed which was filtered, washed successively with water (100 ml) and then washed with water (100 ml). diethyl ether (50 ml). The solid thus obtained was dried under reduced pressure and then purified by flash column chromatography on silica using eluent (dichloromethane-methanol, 9: 1). A beige solid was then obtained (1.5 g, 29%) corresponding to the desired product. Mp 300-302 NMR (300 MHz, CDCl 3): B 9.67 (dd, J = 0.4 Hz, 8.3, 2H) 9.07 (s, 2H), 8.65. (d, J = 8.1Hz, 2H), 4.15 (s, OMe, 6H) 13n NMR (75MHz, CDCl3): δ 106'2, 15O, 14G.8, 146.0, 141'0, 13S; .2, 130, 0, 125.2;

7, N Dans un ballode 250 ml, on a introduit le composé diestær/G18mQ; 1,49 mmol) et du méthanol (125mn0.Acette suspension on a ajouté, par petites portions, du borohydrure de sodium (350 mg, 9.25 mmol). L'avancement de la réaction a été suivi par HPLC. A ce mélange réactionnel on a 21 ajouté de l'eau (25 ml) puis le solvant mété éliminé sous pression réduite. Le solide jaune pâle obtenu a été filtré et séché sous pression réduite pendant 24 h pour donner le produit souhaité (300 mg, 68%). `H RMN (300 MHz, DMSO de): J 9,48 (d, J = 8,3 Hz ; 2 H) ; 9,15 (s, 2 H) ; 8,07 .J=8,5 Hz ; 2 H), 4,95 (s, 4H0.1orRK8N(75MHz, DMSO de): D166.1; 140.3; 140,6 ; 134/4; 5 126/4 ; 122,]; 85,8; HRMS (El) Calculé pour C16H12N402 ~ 282'0960, trouvée : M, 292,0950; MS (E0/n/z 8n1 rei)2S1(W-H'1OO).282 (K8+.84)262(4Q)'244(53) In a 250 ml ballode, the diisol / G18mO compound was introduced; 1.49 mmol) and methanol (125 ml) were added in small portions, sodium borohydride (350 mg, 9.25 mmol), followed by HPLC. Water (25 ml) was added and the solvent was removed under reduced pressure The pale yellow solid obtained was filtered and dried under reduced pressure for 24 hours to give the desired product (300 mg, 68%). 1H NMR (300 MHz, DMSO d): J 9.48 (d, J = 8.3 Hz, 2H), 9.15 (s, 2H), 8.07 .J = 8.5 Hz; H), 4.95 (s, 4H0.1orRK8N (75MHz, DMSO d): D166.1; 140.3; 140.6; 134/4; 126/4; 122;]; 85.8; HRMS (EI); Calculated for C₁HH₁₂N40O₂-282.0601, found: M, 292.0950; MS (E0 / n₂ / z₂₁₁₁i) 2S₁ (W-H'100) .282 (K8 + .84) 262 (40) 244 (53)

7, Ho c Cl /O A une suspension de diol (250 mQ; 0\85nnmoD. dans du chloroforme (150 ml) on a ajouté du trichlorure de phosphore (830rng; 6,8 mmol). Le mélange a été chauffé àGO"C pendant 6 h. La réaction a été ensuite refroidie à température ambiante puis le mélange a été versé avec 15 précaution dans une solution saturée de bicarbonate de sodium (100 ml). La phase organique a été séparée et la phase aqueuse a été extraite avec du dichlorométhane (2 x 100 ml). Les phases organiques sont réunies, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées et concentrées sous pression réduite. Le composé brut obtenu a été purifié par chromatographie sur colonne de silice en utilisant /edich!onomnédhanecomme é!uonL On a ainsi obtenu le composé souhaité pur (92 mg, 33%). 1H 20 RMN (300 MHz, CDCI3): ~9,59(d. J=8,4Hz ; 2 H) ; 9,00 (s, 2 H) ; 8,10 (d, J=B'1 Hz ; 2 H) ; 5,14 (s, 4 H). 13C RMN (100 MHz, CDCI3): 8 159,7 (]. 144,8 (CH), 140,3 (G), 134,7 (CH), 126'7 (G). 123,5 (CH), 47,2 (CH2). HRMS (El) Calculé pour C|16H10C12N* 328'0283; trouvée 329,0297; MS (E!)nl/z (ini rmi)328(K8-H. 100), 330 (K8+H. 73)`293(K8+HC[ 53). Le ohn}mophonaeimsi obtenu, dérivé du TATP dichloré convient pour la synthèse de cryptates par 25 la méthode dite 2+1 . 22 benzol'bltriphénylène 10,11,12,13-tétrahydra-4,5,9,14-têtraaza-benzolbitriphénylène-3, 6-dicarboxylate de 1) H2N NH2 2)K8eOH H(]~C CO.H H2SO4 25 A une suspension d'acide 1.10-phénanthrol/me-5.6-dione-2,9-dicarboxylique dans du méthanol 10 absolu (200 ml) on eajouté goutte à goutte de la 1.2-diaminocyclohexane (3,0m[25,2 mmol). Un précipité gris a été observé dans le mélange. Celui-ci a été chauffé à 65°C pendant 20h et refroidi jusqu'à la température ambienhe. De l'acide sulfurique (3 ml) concentré a été additionné à ce mélange qui a été ensuite chauffé pendant 3h. A cette solution a été additionnée de l'eau (200 ml) conduisant ainsi à un précipité. Le méthanol a été éliminé sous pression réduite et la phase 15 aqueuse restante a été extraite par du dichlorométhane (3 x 75 ml). Les phases organiques ont été réunies et séchées sur sulfate de magnésium. Le résidu a été purifié par chromatographie flash sur colonne de silice en utilisant un gradient de solvant dichlorométhane-méthanol 100-0 à 97-3 pour donner le composé souhaité (2.33g.34%)P.F.: 302"C (dén).1HRK8N(3OOMHz, CDCI3): DS.G2 (d, J=8.4Hz' 2 H) ; 8,58 (d, J=8.4Hz ; 2 H) ; 4,15 (s, OK8e, G H) ; s ,4 4H) ; 2,11 (bro` 4 H). 20 1 rRK8N(75MHz, CDCk): Ü1S5,B([]; 155.3(C); 149'2([) ; 137.7(C); 134'3({}H); 1298(C); 124,5 (CH) ; 80,2 (C) ; 53,1 (Me); 32,8kCH2; 22,6 VCH" ; HRMS (El) Calculée pour C22H18N404. 402,1328, trouvée 402,1332; MS (CI) mlz Ont. rel.) 403 (M+H, 55), 405 (28), 315 (19). A suspension of diol (250 mM, 85 mmol) in chloroform (150 ml) was added with phosphorus trichloride (830 mmol, 6.8 mmol), the mixture was heated to 80.degree. The reaction was then cooled to room temperature and the mixture was cautiously poured into saturated sodium bicarbonate solution (100 ml) The organic phase was separated and the aqueous phase was extracted with distilled water. dichloromethane (2 x 100 ml) The organic phases are combined, dried over magnesium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure, The crude compound obtained was purified by chromatography on a silica column using (methylene chloride) as an eluent. thus obtained the pure desired compound (92 mg, 33%) .1H NMR (300 MHz, CDCl3): ~ 9.59 (d, J = 8.4Hz, 2H), 9.00 (s, 2H) 8.10 (d, J = B'1 Hz, 2H), 5.14 (s, 4H), 13C NMR (100MHz, CDCl3): 8159.7 (], 144.8 (CH); ), 140.3 (G), 134.7 (CH), 126'7 (G). (CH), 47.2 (CH2) HRMS (EI) Calcd for C16H10Cl2N • 328'0283; found 329.0297; MS (E1) n1 / z (ini rmi) 328 (K8-H100), 330 (K8 + H73), 293 (K8 + HC [53]. The obtained ohn} mophonaeimsi, derived from dichlorinated TATP, is suitable for the synthesis of cryptates by the so-called 2 + 1 method. 1H2N NH2 2) K8eOH H (] ~ C 25 H 2 SO 4 25 benzo [1H] -benzylbenzene-1H-tetrahydra-4,5-tetraaza-benzol-1-benzen-1-dicarboxylate A suspension of 1,10-phenanthrol / me-5.6-dione-2,9-dicarboxylic acid in absolute methanol (200 ml) was added dropwise to 1,2-diaminocyclohexane (3.0 m [25.2 mmol]). A gray precipitate was observed in the mixture, which was heated at 65 ° C. for 20 h and cooled to room temperature, and concentrated sulfuric acid (3 ml) was added to this mixture. Then heated for 3h, water (200 ml) was added to give a precipitate, methanol was removed under reduced pressure and the remaining aqueous phase was extracted with dichloromethane (3 x 75 ml). The organic phases were combined and dried over magnesium sulphate and the residue was purified by flash column chromatography on silica gel. using a 100-0 to 97-3 dichloromethane-methanol solvent gradient to give the desired compound (2.33 g. 34%) mp: 302 ° C (den) .1HRK8N (30OHz, CDCl3): DS.G2 (d, J) = 8.4Hz '2H); 8.58 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 4.15 (s, OK8e, G H); s, 4H); 2.11 (bro` 4 H). 1 RRK8N (75MHz, CDCl 3): δ 155, (155.3 (C), 149 (2) (137.7 (C), 134 (3H), 1298 (C); (CH); 80.2 (C); 53.1 (Me); 32.8kCH2; 22.6 VCH-; HRMS (EI) Calcd for C22H18N4O4 402.1288 found 402.1322; MS (Cl) mlz Rel.) 403 (M + H, 55), 405 (28), 315 (19).

3,fi-Dihydroxyméthyl-10, 11, 12, 13-tétrahydro-4, 5, 9, 14-tétraaza-benzojbjtriphénylène NaBH4 MeOH N HO HO A une suspension de -1[\11'12,1 1 dicarboxyate de diméthyle (1,37 g, 3.27 mmol) dans du méthanol (300 ml) on a ajouté du 23 borohydrure de sodium (834 mg; 22,32 mmol par petites portions (70 mg) toutes les 30 min. L'avancement de la réaction oété suivi porHPLC. De l'eau (50 ml) a été ajoutée à ce mélange et le méthanol a été éliminé sous pression réduite. Le solide jaune pâle formé a été filtré et séché pour donner !edio!attendu (834mg,73%).'HRK8N(3OOMHz, DK88C}4): G8,34 (d,J=8'4Hz'2 5 H) ; 8,02 (d, J=8.7Hz, 2 H) ; 5,74 (m, 2 H, {}H) ; 4'82(rn.4H); 3,18(brn. 4H) ; 2'04(brs. 4 H). 13r RMN (75 MHz, 8K88{} d6): Ô 164'9 ({}) ; 154,4 (C); 146,2 (C|) ; 137,5 (C); 133,6 (CH); 126,0 (C); 121,7 8C!0; 65`6 ACHu ; 33,1 K|Hc ; 230 (CH2). HRMS (E!) Calculée pour C20H18N402. 346,1430, tnouvAe: 346,1412; MS (B) m/z /inL rd.) 345 (M-H, 100), 346 (N+'8B)' 316 (58), 317 (45). 10 3, β-dihydroxymethyl-10,11,12,13-tetrahydro-4,5,9,4-tetraaza-benzo [b] triphenylene NaBH4 MeOH N HO HO To a suspension of dimethyl dimethyl dicarboxyate [11 11 12] 1.37 g, 3.27 mmol) in methanol (300 ml) was added sodium borohydride (834 mg, 22.32 mmol in small portions (70 mg) every 30 min. HPLC monitoring Water (50 ml) was added to this mixture and the methanol was removed under reduced pressure The pale yellow solid formed was filtered and dried to give edio-expected (834mg, 73%). HRK8N (3OOMHz, DK88C) 4): G8.34 (d, J = 8'4Hz-5H); 8.02 (d, J = 8.7Hz, 2H); 5.74 (m, 2H); (4H), 4'82 (rn.4H), 3.18 (brn, 4H), 2'04 (brs.4H), 13r NMR (75MHz, 8K88 (d6)): δ 164'9 ({}), 154.4 (C), 146.2 (C), 137.5 (C), 133.6 (CH), 126.0 (C), 121.78C, 0; 6HCl: 33.1 K | Hc; 230 (CH2). HRMS (E!) Calcd for C20H18N4O2. 346.1430, tnew: 346.1412; MS (B) m / z / inL rd.) 345 (MH, 100), 346 (N + '8B), 316 (58), 317 (45). 10

(TH TA BTP) 15 A une suspension de 3.G-dhvdronynnéthyl-1O,11'12.1 ro-4.5,9'14'bétraazabmzo[b]thohëmylène (600 mg; 1,73 g) dans du chloroforme (300 ml) on a ajouté ionné du trichlorure de phosphore (1.2 nn! ; 13.88nnrnc8). Le mélange eàté chauffé à 60°C pendant 6h, puis refroidi à température ambiante et versé prudemment dans une solution saturée de NaHCO3 20 (200 ml). La phase organique a été séparée et la phase aqueuse a été extraite avec du dichlorométhane (2 x 100 ml). Les phases organiques ont été réunies, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées et concentrées sous pression réduite. Le résidu a été purifié par chromatographie flash sur colonne de silice en utilisant un gradient de solvant dich!oponnëthanennéthuno! (100-0 à 98'2) pour donner le composé désiré (508 mg, 77%) 1H RMN (300 MHz, An^4 H). /ar RMN (100 MHz, O 158'7(C) ; 154,3 /C\; 137,4 (C}; 134,3 (CH) ; 126,8 (C) ; 123,1 (CH) ; 80,7 (C) ; 47,2 /CHJ ; 32,8 (CH" ; 22,7 (CH2). HRMS (E!) Calculée pour C2OH17Cl2N4: 382,0752, trouvée : 382,0746.; K88(E0nvz' Ont. æH.)382 (100),384/68\'847(45,N-HCU. Le chromophore ainsi obetenu, qui est une dérive dichloré du TATP convient pour la synthèse de cryptates par la méthode dite ^2+1 . 24 benzorbItriphénylène de 5 Di-adduit Mono-adduit Un mélange de 1.2-diamine C32.40 A; 0,3 mol) et d'acétoacétate d'éthyle (84.59 g; 0,65 mol) ont été placés dans un grand cristallisoir et conservés sous pression réduite (20 mm de Hg) en présence de pentoxyde de phosphore pendant 2 semaines. Le mélange réactionnel a été 10 utilisé dans l'étape suivante sans purification. Cependant un échantillon analytique a été purifié par chromatographie flash sur colonne de silice avec un éluant cyclohexane-acétate d'éthyle (1-9). Cette première chromatographie a permis d'enrichir une fraction en produit désiré. Une deuxième chromatographie flash sur colonne de silice en utilisant un ë!uentcyc!oheuene-ucétated'éthyle (15-85) apannk* d'obtenir un produit pur sous forme d'une huile incolore. 1H RMN (300 MHz, 15 CDCI3): Ô 10,10 (s, 2 H, NH) ; 7.14(o.4H. ArH).4.75 (s, 2 H) ; 4,12 (q, J=7'2 Hz.4H) ; 1,91 (s, 6 H) ; 1,25 (t, J = 7.2 ; 6 H); 13C RMN (75 MHz, CDCI3): S 170.0 (C) ; 158,4 (C) ; 134,6 ([}) ; 126.4 (CH); 125,6 (CH) ; 876 (CH) ; 58.2 ACHe ; 19,9 kCHo ; 14,5 (CH3). HRMS (El) Calculée pour C18H25N204: 333.1814,trouvée 333.1014; MS (El) nvz (int. nei)333(75, M+H), 332 (36. K8)'245 (100' M-2EtOH). 20 Le sous-produit principal qui a été isolé correspond au monoadduit sous forme solide incolore. R.F. 83'84"C.'HRK8N(3OOMHz, {|[}C!J: 69'75 (bra,1H,NH); 7,08(t,J=7'8; 1H'ArH); 8.98(d.J = 7,8 ; 1 H, ArH) ; 6.73 (m, 2 H, ArH) ; 4,73 (s, 1 H) ; 4,16 (q, J = 6,9 Hz, 2 H) ; 3.83 (br s, 2 H, NHu ; 1,81 (a,3!) ; 1,30 (t, J=6,9, 3 H); 13rRMN (75 MHz, CDCI3): 5 1708(C); 181'5(C) ; 158,5 (C); 143,j(C); 128,6 (CH) ; 1280(CH); 118,3 (CH) ; 115,6 (CH) ; 85,1 (CH) ; 58,7 /CH" ; 25 19,7 (CH° ; 14.6 (CH3). NH2 0 _O ~ Y\ 0 (] Ph2O HO OH 240 0C 30 25 Du diphényléther (50 ml) a été introduit dans un ballon tricol et chauffé à 200'C sous un courant d'azote. Le produit brut contenant le bis-adduit (1 g) a été additionné et chauffé è24O"C pendant 30 min., puis !e mélange oété refroidi à température ambiante. De l'éther de pétrole (15 ml) a été additionné et le ooUdea été filtré, lavé avec de l'éther (2 x 15 ml) et introduit dans un ballon 5 monocol contenant de l'acétone (15m!).Ce mélange a été chauffé à ébullition pendant 15 min et le compoméa été filtré et séché pour donner un solide beige (130 mg, 30%). R.F. 340°C (déc). HO OH POCI3 10 25 Le composé dihydroxylé obtenu précédemment (2,74 g; 11,4 mmol) a été mélangé à de !tmychkorunede phosphore (QOnn0*dchauffé à8O°C pendant une nuit. Le mélange a ensuite été versé dans un mélange glace pilée-eau (200 g - 400 g). Après 15 mm, du chloroforme (100 ml) a 15 été ajouté et le pH de la phase aqueuse a été ajusté à 13-14 en utilisant une solution concentrée d'hydroxyde de potassium. La phase organique aàté séparée et la phase aqueuse eétb extraite avec du chloroforme (2 x 100 ml). Les phases organiques ont été réunies et séchées sur sulfate de nnegnéaiurn, filtrées et concentrées sous pression réduite. Le résidu a été purifié par chromatographie flash en utilisant un éluant dich/ononoéthene-nnéthano! (98-2) pour donner un 20 solide incolore (2.74Q ; 89%). P.F. 202 °C (déc). 1H RMN (300 MHz, CDCI3): Ô 8,25 (s, 2 H); 7.63 (s, 2 H); 2,93 (s, 6 H); 13C NMR (75 MHz, CDCI3): O 158,9 (C), 145,4 (G); 141,8 (C); 124,0 ~; 123,1 (CH); 121,1 (CH); 24,8 (CH3). (TH TA BTP) To a suspension of 3.G-D-N-methyl-1-ethyl, 11,12,12,1-chloro-4,5,9'-14'btraabazo [b] thohethylene (600 mg, 1.73 g) in chloroform (300 ml) phosphorus trichloride (1.2 nm, 13.88 nmrnc) was added. The mixture was heated at 60 ° C for 6h, then cooled to room temperature and cautiously poured into saturated NaHCO 3 solution (200ml). The organic phase was separated and the aqueous phase was extracted with dichloromethane (2 x 100 ml). The organic phases were combined, dried over magnesium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash chromatography on a silica column using a dichotonic solvent gradient. (100-0 to 98'2) to give the desired compound (508 mg, 77%) 1H NMR (300 MHz, νmax 4H). NMR (100 MHz, 158.8 (C), 154.3 / 137.4 (C), 134.3 (CH), 126.8 (C), 123.1 (CH); 80.7 (C), 47.2 CH 2, 32.8 (CH 2), 22.7 (CH 2), HRMS (E 2), calcd for C 2 H 17 Cl 2 N 4: 382.0752, found: 382.0746, K 88 (E n 382 (100), 384/68, 847 (45, N-HCU) The chromophore thus obtained, which is a dichloride derivative of TATP, is suitable for the synthesis of cryptates by the so-called ^ 2 + 1 method. 24 Benzobiphenylene Di-adduct Mono-adduct A mixture of 1.2-diamine C32.40 A, 0.3 mol) and ethyl acetoacetate (84.59 g, 0.65 mol) were placed in a large crystallizer and kept under reduced pressure (20 mm Hg) in the presence of phosphorus pentoxide for 2 weeks The reaction mixture was used in the next step without purification However, an analytical sample was purified by flash column chromatography on silica gel with a cyclohexane-ethyl acetate eluent (1-9) This first chromatography has enriched a The desired product fraction is a second flash column chromatography on silica using ethyl acetate (ethyl acetate) (15-85) to obtain a pure product as a colorless oil. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 10.10 (s, 2H, NH); 7.14 (o.4H, ArH) .4.75 (s, 2H); 4.12 (q, J = 7.2 Hz, 4H); 1.91 (s, 6H); 1.25 (t, J = 7.2, 6H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3): S 170.0 (C); 158.4 (C); 134.6 ([}); 126.4 (CH); 125.6 (CH); 876 (CH); 58.2 ACHe; 19.9 kCHo; 14.5 (CH3). HRMS (EI) Calcd for C18H25N2O4: 333.1814, found 333.1014; MS (EI) n2 (int.nei) 333 (75, M + H), 332 (36. K8) 245 (100 'M-2EtOH). The main by-product which has been isolated corresponds to the monoadduct in colorless solid form. RF δ 83'84 "'HRK8N (3OOMHz, {[C] J: 69'75 (bbl, 1H, NH); 7.08 (t, J = 7'8; 1H'ArH); d = 7.8, 1H, ArH), 6.73 (m, 2H, ArH), 4.73 (s, 1H), 4.16 (q, J = 6.9Hz, 2H); (br s, 2H, NHu; 1.81 (a, 3!); 1.30 (t, J = 6.9, 3H); 13 R NMR (75 MHz, CDCl 3):? 1708 (C); (C), 158.5 (C), 143 (C), 128.6 (CH), 1280 (CH), 118.3 (CH), 115.6 (CH); CH 2 O 3 CH 2 O 3 CH 2 Cl 2 CH 2 Cl 2 CH 2 Cl 2 CH 2 Cl 2 CH 2 Cl 2 CH 2 Cl 2 CH 2 Cl 2 CH 2 Cl 2 CH 2 Cl 2 CH 2 Cl 2 CH 2 Cl 2 The crude product containing the bis-adduct (1 g) was added and heated at 20 ° C. for 30 minutes, and the mixture was cooled to room temperature. Petroleum ether (15 ml) was added and the oil was filtered, washed with ether (2 x 15 ml) and placed in a monocolumn flask containing acetone (15 ml). was heated to boiling for 15 minutes and the compoméa was filtered and dried to give a beige solid (130 mg, 30%). R.F. 340 ° C (dec). The dihydroxy compound obtained above (2.74 g, 11.4 mmol) was mixed with phosphorus pentoxide (H 2 O) heated at 80 ° C. overnight, and the mixture was then poured into an ice-cream mixture. crushed water (200 g - 400 g) After 15 mm, chloroform (100 ml) was added and the pH of the aqueous phase was adjusted to 13-14 using a concentrated solution of potassium hydroxide. The organic phase was separated and the aqueous phase extracted with chloroform (2 x 100 ml) The organic phases were combined and dried over sodium sulfate, filtered and concentrated under reduced pressure The residue was purified by flash chromatography using a dichlorotanylene-nnethanol eluent (98-2) to give a colorless solid (2.74%, 89%), mp 202 ° C. (dec), 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.25 ( s, 2H), 7.63 (s, 2H), 2.93 (s, 6H), 13C NMR (75 MHz, CDCl3): O 158.9 (C), 145.4 (G); 8 (C); 124.0 ~ 123.1 (CH), 121.1 (CH), 24.8 (CH3).

4, 7-Di'chloro-2,9-di'méth yl-1 , KBr, HNOuHuGO^ A un mélange du composé dichloré obtenu précédemment (60Omg; 1]]5 mmol) et de bromure de potassium (2,19g~ 18,5 mmol) dans un ballon de 25 ml ont été ajoutés lentement sous agitation, 30 de l'acide sulfurique (4 ml) puis de l'acide nitrique (2 ml). Le mélange aéhé chauffé à 80°C pendant 3h et versé très lentement dans une solution contenant de l'eau (60 ml) et du NaHCO3 (14 g). La phase aqueuse a été extraite avec du chloroforme (3 x 50 ml). Les phases organiques ont été réunies, séchées sur sulfate de magnésium, filtrées et concentrées sous pression réduite. Le résidu a été purifié par chromatographie flash sur colonne de silice en utilisant un solvant dichlorométhane-méthanol (98-2) pour donner la dione souhaitée (213 mg, 26%). 1H RMN (300 MHz, CDCI3): Ô 7,36 (s, 2 H); 2,72 (s, 6 H); 13C RMN (75 MHz, CDCI3): Ô 178,5 (CO); 166,0 (C); 154,0 (C); 146,5 (C); 128,0 (C); 124,6 (CH); 25,4 (CH3). 1,8-dichlom-3,6-D'iméthyl-10,11,12,13-tétrahydro-4,5,9,14-tétraaza-benzo [bItriphénylène C 20 A une solution de la dione obtenue précédemment (120 mg ; 0,39 mmol) dans du méthanol anhydre (6 ml) a été additionné de la 1,2-diaminocyclohexane (56 gl ; 0,47 mmol) et le mélange a été chauffé sous agitation à 65°C pendant 20h. Le solvant a été évaporé et le résidu purifié par chromatographie flash sur colonne de silice avec un éluant dichlorométhane-méthanol (98-2) pour donner le produit souhaité. Calculée pour C20H16C12N4 382,07, trouvée M+1=382,97; Exemple 4 : 3,6-Dicarboxaldehvde-10,11,12,13-tétrahydro-4,5,9,14-tétraa benzorbltriphénvIène 4, 7-Di-chloro-2,9-dimethyl-1, KBr, HNO 2 OH 2 O. To a mixture of the dichloro compound obtained above (60 mg / l) 5 mmol) and potassium bromide (2.19 g / l). 18.5 mmol) in a 25 ml flask was added slowly with stirring, sulfuric acid (4 ml) and then nitric acid (2 ml). The mixture was heated at 80 ° C for 3h and poured very slowly into a solution containing water (60ml) and NaHCO3 (14g). The aqueous phase was extracted with chloroform (3 x 50 ml). The organic phases were combined, dried over magnesium sulphate, filtered and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by flash column chromatography on silica using dichloromethane-methanol (98-2) solvent to give the desired dione (213 mg, 26%). 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.36 (s, 2H); 2.72 (s, 6H); 13C NMR (75 MHz, CDCl3):? 178.5 (CO); 166.0 (C); 154.0 (C); 146.5 (C); 128.0 (C); 124.6 (CH); 25.4 (CH3). 1,8-dichlom-3,6-dimethyl-10,11,12,13-tetrahydro-4,5,9,14-tetraaza-benzo [bItriphenylene C 20 to a solution of the dione obtained above (120 mg 0.39 mmol) in anhydrous methanol (6 ml) was added with 1,2-diaminocyclohexane (56 g, 0.47 mmol) and the mixture was heated with stirring at 65 ° C for 20 h. The solvent was evaporated and the residue purified by flash column chromatography on silica eluting with dichloromethane-methanol (98-2) to give the desired product. Calculated for C20H16Cl2N4 382.07, found M + 1 = 382.97; Example 4: 3,6-Dicarboxaldehyde-10,11,12,13-tetrahydro-4,5,9,14-tetrabenzorbtriphenylene

2,9-Diméth yl- 1,1 0-phénanthroline-5,6-dione H2SO4 Dans un ballon bicot de 100 ml on a introduit de la néocuproïne (2,0 g ; 9,6 mmol) et du bromure de potassium. (11,4 g ; 96 mmol), puis de l'acide sulfurique à 96% (30 ml). Le mélange a été agité 25 pendant 15 min puis de l'acide nitrique (14 ml) y a été ajouté. La solution a ensuite été chauffée à 80°C pendant 3h. Le mélange a été refroidi à température ambiante et versé avec prudence dans une solution aqueuse (400 ml) contenant du bicarbonate de sodium (100 g). La phase aqueuse a été extraite avec du chloroforme (2 x 250 ml). Les phases organiques ont été réunies, lavées avec une solution saturée de saumure (200 ml) et séchées par du sulfate de magnésium. La suspension a été filtrée puis concentrée sous pression réduite pour conduire à un résidu qui a été purifié par chromatographie flash sur gel de silice en utilisant un éluant dichlorométhane-méthanol (9:1) 27 conduisant ainsi au composé désiré. 1H NMR (300 MHz, CDCI3): O8,37(d,J=[L1 Hz, 2H); 7,41 A une solution de 2.9-dméthvl-1.10-ohànanthnoline-5.0-dione (4,9 g; 23,3 mmol) dans du méthanol 1,2-diaminocyclohexane an (3,26 m/; 26,8mmo0et le mélange a 10 été chauffé àG6"C pendant 2Ohpuis refroidi àtempérature ambiante.Le aoiventaété àUminé ooum pression réduite et le résidu a été purifié par chromatographie flash sur colonne de silice avec un éluant dichlorométhane-méthanol (98-2). Le solide isolé a été recristallisé dans de !'éthænol pour donner des cristaux incolores (1.280 g; 20%). R.F.: 321 °C (dec). 1H RMN (300 MHz, CDCI3): 9,33 (d, J=8.4 Hz, 2H) ; 7.59(d. J=8.4 Hz, 2 H) ; 3,21 (m, 4 H) ; 2,96 (s, 6 H) ; 2,07 (m, 4H). 13C 15 RMN (75 MHz ; CDCI3): 0 160.8 ([) ; 153,1 (C) ; 146.3 ([) ; 133.0 (CH) ; 125,7 ([) ; 124,9 (C) ; 123.9 (CH); 32.7KCH2; 25.8KCH2; 22,8 (Me). HRMS (El) Calculée pour C20HIBN4: 394,1531, trouvée : 314,1526.; MS (El) rn/z Ont. rel.) 314 (100), 315 (25, M+H). 2.9-Dimethyl-1,1,0-phenanthroline-5,6-dione H 2 SO 4 In neocuproin (2.0 g, 9.6 mmol) and potassium bromide were added to a 100 ml flask. (11.4 g, 96 mmol), then 96% sulfuric acid (30 ml). The mixture was stirred for 15 minutes and then nitric acid (14 ml) was added thereto. The solution was then heated at 80 ° C for 3h. The mixture was cooled to room temperature and poured cautiously into an aqueous solution (400 ml) containing sodium bicarbonate (100 g). The aqueous phase was extracted with chloroform (2 x 250 ml). The organic phases were combined, washed with saturated brine solution (200 mL) and dried with magnesium sulfate. The suspension was filtered and concentrated under reduced pressure to give a residue which was purified by flash chromatography on silica gel using a dichloromethane-methanol eluent (9: 1), thus yielding the desired compound. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ8.37 (d, J = [L1 Hz, 2H); 7.41 To a solution of 2.9-dimethyl-1,10-ohanaminoline-5.0-dione (4.9 g, 23.3 mmol) in 1,2-diaminocyclohexane methanol (3.26 m / 26.8 mmol) and the mixture The mixture was heated to 60 ° C. for 20 hours while being cooled to room temperature. The mixture was reduced at reduced pressure and the residue was purified by flash column chromatography on silica with dichloromethane-methanol eluent (98-2). The isolated solid was recrystallized. in ethylenol to give colorless crystals (1.280 g, 20%) RF: 321 ° C (dec) 1H NMR (300 MHz, CDCl3): 9.33 (d, J = 8.4 Hz, 2H); 7.59 (d = 8.4Hz, 2H), 3.21 (m, 4H), 2.96 (s, 6H), 2.07 (m, 4H), 13C NMR (75MHz, CDCl3). ): 0 160.8 ([); 153.1 (C); 146.3 ([); 133.0 (CH); 125.7 ([); 124.9 (C); 123.9 (CH); 32.7KCH2; 25.8KCH2; 22.8 (Me) HRMS (EI) Calcd for C20HIBN4: 394.1531, found: 314.1526, MS (EI) rn / z Rel.) 314 (100), 315 (25, M + H) ).

5 N A une solution de 3~~iméthyl-101.12,1 vo-4,5,9,1 ylène (200 mQ; 0,64mmol) dans du dioxane (100 ml) a été additionné de l'oxyde de sélénium (246 mg, 2.22 mmol). La solution a été chauffée à 1OQ°C pendant 4h et sa couleur initialement jaune pâle est devenue progressivement rose puis une suspension verdâtre et finalement une suspension noire. Le mélange a été refroidi puis filtré sur Celite et le filtrat a été concentré sous pression réduite pour conduire à un solide rose pâle correspondant au dialdéhyde (177 mg, 81%). RF. (déc). 1H RMN (300 MHz, CDCI3): 8 10.45 (s, 2 H. CHO) ; 9'50 (d, J=8'4 Hz, 2 H) ; 8,32 (d, J=8,1 28 155,9 /C\; 153,3 (C) ; 146,3 (C) ; 137,7 (C); 134,78CHD; 130,6 (C) |121.1(CH) ; 32,8(CH2; 22,5 (CH2). HRMS (El) Calculée pour C20H14N402: 342.1117.trouvée : M ; 342,1128; MS (El) m/z Ont. rai)314(55,N-20)^342 (43), 286 (20, Ce composé ainsi obtenu qui est un chromophore dérivé du TATP et porteur de fonctions aldehydes convient pour la fabrication de cryptate via la formation de bases de Schiff. NaBH4 MeOH OHC CHO 10 A une solution de 3'0-DicarboxmNéhvde-1[\11.12,1 ro-4.5.9,14-bétruaze- (50mg,0.14mmo dans du méthanol (12mUona ajouté duborohvdmnece sodium (60 mg, 1.60 mmol) par petite portion sur une période de 30 min. L'avancement de la réaction a été suivi par HPLC. Après 2 h, le mélange réeotionnel a été filtré puis de l'eau a été 15 ajoutée (5 ml). Le méthanol a ensuite été éliminé sous pression réduite. Le solide jaune pâle a été filtré et séché sous pression réduite pendant 24 h conduisant ainsi au diol souhaité (29.5 mg, 58%). %).1H RMN (300 MHz, OMS{] d6): 5 8.34(d. J=8.4 Hz, 2 H); 8.02 (d, J=8'7 Hz, 2 H) ; 5,74(nn'2H'OH); 4,92(n'4H); 3'18(bre'4H) ; 2'04(brs,4H)./ cRK8N(75MHz, OK8GOdj: O 164,9 (C) ; 154,4 (C) ; 146,2 (C) ; 137,5 (C) ; 133,6 (CH) ; 126.0 (C) ; 121,7 (CH) ; 65'6 (CHJ ; 20 33,1 (CH2) ; 23,0 (CH2). HRMS (El) Calculée pmrC20H18N402. 346,1430, trouvée : 346,1412; MS Exemple 5 : Préparation d'un dérivé de pvridine di-aminée, utilisable pour la synthèse de 25 H2, PeC 10% 29 A une solution de 3,6-dibromométhyl pyridine-4-méthoxycarbonyle (500 mg; 1,55 mmol) dans du diméthylformamide (35 ml) on a ajouté de l'azoture de sodium 01Omg; 3,25 mmol) et le mélange aëté agité àtempérature ernbianbapendantuoe nuh.Lumoludionobtenuea étéfiltnàaet !oædvant aétë éliminé sous pression réduite. Le résidu a été dissous dans du dichlorométhane (30 ml). Les 5 sels insolubles ont été filtrés et lavés avec du dichlorométhane. Le solvant a été éliminé sous pression réduite puis on a ajouté du nnàthano! (30 ml) et du Pd/C 10%. La suspension noire obtenue a été hydrogénée sous 1 ednnoophènyd^hvdrogéne pendant une nuit. Le mélange a été ensuite filtré sur Celite et concentré sous pression réduite. Le résidu a été purifié par chromatographie sur alumine en éluant avec un mélange dichlorométhane-méthanol-ammoniaque 10 (90-8-1) pour donner un solide blanc (188,3nng. 66%). P.F.: 62°C. 1H RMN (300 MHz, CDCI3): 8 7,68 (s, 2 H); 4'01 (s, 2 H); 3'92 (s, 3 H, OMe); 1'78 (bro, 4 H. NH2). 13C RMN (75 MHz, CDCI3): Ô 165,8 (C); 162.8 (G); 138,4 (C); 118.4 (CH); 52,5 (OMe); 47,6 (CH2). HRMS (El) Calculée pour C9H13N302: 195,1008, trouvée 195'1012; MS (El) rn/z (ird. roi) 195 (25), 178 (100). A solution of 3 ~~ imethyl-101.12.1 vol-4,5,9,1-ylene (200 mQ, 0.64 mmol) in dioxane (100 ml) was added with selenium oxide (246 mg). 2.22 mmol). The solution was heated at 100 ° C. for 4 hours and its initially pale yellow color gradually became pink then a greenish suspension and finally a black suspension. The mixture was cooled and filtered through Celite and the filtrate was concentrated under reduced pressure to give a pale pink solid corresponding to dialdehyde (177 mg, 81%). RF. (Dec). 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 10.45 (s, 2H, CHO); 9'50 (d, J = 8'4 Hz, 2H); 8.32 (d, J = 8.128 155.9 / C, 153.3 (C), 146.3 (C), 137.7 (C), 134.78CHD, 130.6 (C); 121.1 (CH); 32.8 (CH2; 22.5 (CH2). HRMS (EI) Calcd for C20H14N4O2: 342.1117 Found: M, 342.1188; MS (EI) m / z O.Raa) 314 (M. 55, N-20) 342 (43), 286 (20) This compound thus obtained which is a chromophore derived from TATP and carrying aldehydes functional groups is suitable for the manufacture of cryptate via the formation of Schiff bases NaBH4 MeOH OHC CHO To a solution of 3'O-DicarboxmNegde-1 [11.12,1 ro-4.5.9,14-betuaze- (50mg, 0.14mmol in methanol (12mUona added sodium borohydride (60mg, 1.60mmol) per small portion Over a period of 30 minutes the reaction progress was monitored by HPLC After 2 h, the reaction mixture was filtered and then water (5 ml) was added.The methanol was then removed under Reduced pressure The pale yellow solid was filtered and dried under reduced pressure for 24 hours, thus yielding the desired diol (29.5 mg, 58%). 1H NMR (300 MHz, WHO {] d6): δ 8.34 (d. J = 8.4 Hz, 2H); 8.02 (d, J = 8'7 Hz, 2H); 5.74 (nn'2H'OH); 4.92 (n'4H); 3'18 (bre'4H); 2'04 (brs, 4H) ./CRK8N (75MHz, OK8GOdj: O 164.9 (C); 154.4 (C); 146.2 (C); 137.5 (C); 133.6 (CH); 126.0 (C), 121.7 (CH), 65'6 (CH 2) 33.1 (CH 2), 23.0 (CH 2), HRMS (EI) Calcd., Mp 20 C 18 H 18 N 4 O 2, 346.1430, found: 346, EXAMPLE 5 Preparation of a di-amino pyridine derivative usable for the synthesis of H 2, PeC 10% To a solution of 3,6-dibromomethyl pyridine-4-methoxycarbonyl (500 mg; mmol) in dimethylformamide (35 ml) was added sodium azide (100 mg, 3.25 mmol) and the mixture was stirred at room temperature overnight, while the resulting solution was removed under reduced pressure. dichloromethane (30 ml) The insoluble salts were filtered and washed with dichloromethane The solvent was removed under reduced pressure and then N-butanol (30 ml) and 10% Pd / C were added. obtained was hydrogenated under hydrogenated enzyme. The mixture was then filtered through celite and concentrated under reduced pressure. The residue was purified by chromatography on alumina eluting with dichloromethane-methanol-ammonia (90-8-1) to give a white solid (188.3ng, 66%). M.p .: 62 ° C. 1H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 7.68 (s, 2H); 4'01 (s, 2H); 3.92 (s, 3H, OMe); 1'78 (bro, 4 H. NH2). 13C NMR (75 MHz, CDCl3): δ 165.8 (C); 162.8 (G); 138.4 (C); 118.4 (CH); 52.5 (OMe); 47.6 (CH2). HRMS (EI) Calcd for C9H13N3O2: 195.1008, found 1951010; MS (EI) rn / z (ird) 195 (25), 178 (100).

15 Example 6 : Préparation d'un Cryptate d'Europium Py-bisTHTABTP portant un proupe réactif amine par la méthode dite 2+1 1ULiuCOx CH3CN C 20 Le composé dichloré (20 mg, 45 unno0 fabriqué selon l'exemple 2, la diamine (4,4 mg ; 23 mol) fabriquée selon l'exemple 6 et du carbonate de lithium (34nmg'453pnmcd)ontété mélangés dans de l'acétonitrile anhydre (30 ml) et le mélange a été chauffé à 90°C pendant 7 j. On a ensuite ajouté à la suspension obtenue, du trichlorure d'europium hexahydraté (10 mg, 27 !mol) et le 25 mélange a été chauffé à 90°C pendant 24h supplémentaires. Le produit brut a été purifié par HPLC préparative pour conduire au cryptate d'europium correspondant. E8! IT-MS: (trouvée K8+2TF4=1194),KdALD!T[)F (Trouvée K8=905); K8ALD{(K8adhx!O/V\'trouvée K0=965) 30 Exemple 7 : Préparation d'un Crvp ate de Terbium Pv-bisTHTABTP portant un qroupe réactif amine par la méthode dite 2+1 1V4COn CH3CN 5 C H2N 1)Tb0o Le composé dichloré fabriqué selon l'exemple 2, (36 mg, 82 mol), la diamine (8.9 mg, 45 gmol) fabriquée selon l'exemple 6 et le carbonate de lithium (68 mg, 906 gmol) ont été ajoutés dans de l'acétonitrile anhydre (60 ml). Le mélange a été chauffé à 90°C pendant 1O]. Après cette période 10 2/3 du mélange aéüé transféré dans un ballon de 50 ml et à cette solution on a ajouté du chlorure de terbium hexahydraté (11'3mg; 30.2 'mol). Le mélange a été chauffé pendant 24h. Le produit bru1a été purifié par HPLC préparative pour conduire à un solide (7 mg). K4ALD! (matrix CHCA, K8=189)1162(K8+K4alrix-2H). Le solide précédent a été dissous dans du mddhunol anhydre (G ml) et de l'éthylène diamine 15 (0.2 ml) àO"C. Le mélange a été réchauffé à température ambiante sur une période de 1h puis a été purifié par HPLC préparative pour conduire au composé souhaité. K8ALD! (matrix CHCAyN=189)(tnouvée: N1+msdrix'2H=1189). 31 Exemple 8 : Préparation d'un conjugué Cryptate d'Europium Pv-bisTHTABTP avec une Benzylquanine NH2 5 Dans un tube Eppendorf de 1,5 ml ont été introduits 200 p/de solution à 10~~1-1 dans du diméthylsulfoxyde anhydre (2 pmol) de 6-(4-(aminométhyl)benzyloxy)-9H-purin-2-amine, 200 pI de solution à 1Ommol.[` dans du diméthylsulfoxyde anhydre (2 pmol) de cryptate d'Europium Py-bisTHTABTP-COOH ; 0,7 mg (2,2 pmol) de 0-(Benzotriazo/-1'y0-N,K(N~N'-tétoaméthy!unoniumn 10 tétrafluoroborate (TBTU)et4p!de diisopropyléthylamine (DIPEA). Le mélange a été agité pendant 2h. La réaction a été suivie par HPLC sur une colonne Merck Lichrospher RP"18 5 pm 125 x 4,6 avec un gradient d'acétonitrile dans de l'eau à 0'2% d'acide trifluoroacétique. Une purification par HPLC prépandivoa été effectuée sur une colonne Vydac C18 10 pm 250 x 22 15 avec un gradient d'acétonitrile dans de l'eau à 0,2% d'acide trifluoroacétique. Les fractions ont été collectées et concentrées sous pression réduite. Un solide blanc a été obtenu (611 nmol par mesure de densité optique, 30%) correspondant au produit souhaité. MS (E8~lm/z : [M+TFAI 1316,5. Example 6 Preparation of a Europium Cryptate py-bisTHTABTP carrying an amine reactive progeny by the so-called 2 + 1 1ULiuCOx CH3CN C method The dichlorinated compound (20 mg, 45 unno0 manufactured according to Example 2, the diamine ( 4.4 mg, 23 mol) made according to Example 6 and lithium carbonate (34 nm³ 453 μm) were mixed in dry acetonitrile (30 ml) and the mixture was heated at 90 ° C for 7 days. The resulting suspension was then added with europium trichloride hexahydrate (10 mg, 27 μmol) and the mixture was heated at 90 ° C. for an additional 24 hours.The crude product was purified by preparative HPLC to yield corresponding europium cryptate E8! IT-MS: (found K8 + 2TF4 = 1194), KdALD! T [) F (Found K8 = 905); K8ALD {(K8adhx! O / V \ found K0 = 965) Example 7: Preparation of a Terbium Pv-bisTHTABTP Cryophate with an Amine Reactive Group by the 2 + 1 Method 1V4COn CH3CN 5 C H2N 1) Tb0o The dichloro compound manufactured according to Example 2, (36 mg, 82 mol), the diamine (8.9 mg, 45 gmol) made according to Example 6 and the lithium carbonate (68 mg, 906 gmol) were added in anhydrous acetonitrile (60 ml). The mixture was heated at 90 ° C for 10 minutes. After this period 2/3 of the air mixture was transferred to a 50 ml flask and to this solution was added terbium chloride hexahydrate (11.3 mg, 30.2 mol). The mixture was heated for 24 hours. The crude product was purified by preparative HPLC to yield a solid (7 mg). K4ALD! (CHCA matrix, K8 = 189) 1162 (K8 + K4alrix-2H). The foregoing solid was dissolved in anhydrous mddhunol (G ml) and ethylene diamine (0.2 ml) at 0 ° C. The mixture was warmed to room temperature over a period of 1 h and then purified by preparative HPLC for to the desired compound K8ALD1 (CHCAyN matrix = 189) (tnewed: N1 + msdrix'2H = 1189) Example 8: Preparation of Europium Pv-bisTHTABTP Cryptate Conjugate with Benzylquanin NH2 In an Eppendorf tube of 1.5 ml were added 200 μl of 10% solution in anhydrous dimethylsulfoxide (2 pmol) of 6- (4- (aminomethyl) benzyloxy) -9H-purin-2-amine, 200 μl. of 1 mmol solution in anhydrous dimethylsulfoxide (2 pmol) of europium Py-bisTHTABTP-COOH cryptate 0.7 mg (2.2 pmol) of 0- (Benzotriazo / -1'yO-N, K) The mixture was stirred for 2 hours, followed by HPLC on a Merck Lichrospher RP-18 column (N, N'-tetoamethylnononium tetrafluoroborate (TBTU) and 4% diisopropylethylamine (DIPEA). 125 x 4.6 with a gradient of acetonitrile in water at 0'2% trifluoroacetic acid. Purification by prepandivo HPLC was performed on a Vydac C18 10 μm 250 x 22 column with a gradient of acetonitrile in water at 0.2% trifluoroacetic acid. The fractions were collected and concentrated under reduced pressure. A white solid was obtained (611 nmol by optical density measurement, 30%) corresponding to the desired product. MS (E8 -1m / z: [M + TFAI 1316.5.

20 Exemple 9 : Etude de la réactivité du coniuqué de l'exemple 7 avec une enzyme AGT EXAMPLE 9 Study of the Reactivity of the Conjunction of Example 7 with an AGT Enzyme

Cet exemple a pour objet de mesurer la réactivité d'un conjugué benzylguanine-cryptate de terre 25 rare selon l'invention avec l'enzyme SNAP-tag. 32 Pour cela, une protéine de fusion SNAPtag-FKBP a été mise en contact avec un conjugué benzylguanine-cryptate, et une protéine FRB marquée avec un fluorophore accepteur d'énergie (DY647). La réaction de l'enzyme SNAPtag avec son substrat benzylguanine va conduire au marquage de la 5 protéine de fusion SNAPtag-FKBP par le cryptate de terre rare. En présence de rapamycine, les protéines FRB et FKBP vont interagir, et ainsi provoquer le rapprochement du cryptate de terre rare et du DY647 rendant possible l'émission d'un signal luminescent de FRET. Dans la mesure où l'enzyme G0APtegne peut réagir qu'avec un seul substrat benzylguanine, l'augmentation du signal de FRET est directement proportionnelle au pourcentage de protéine marquée dans le milieu 10 réactionnel. This example is intended to measure the reactivity of a benzylguanine-rare earth cryptate conjugate according to the invention with the SNAP-tag enzyme. For this, a SNAPtag-FKBP fusion protein was contacted with a benzylguanine-cryptate conjugate, and a FRB protein labeled with an energy acceptor fluorophore (DY647). The reaction of the SNAPtag enzyme with its benzylguanine substrate will lead to the labeling of the SNAPtag-FKBP fusion protein by the rare earth cryptate. In the presence of rapamycin, the proteins FRB and FKBP will interact, and thus cause the approximation of the rare earth cryptate and DY647 making possible the emission of a luminescent FRET signal. Since the enzyme G0APtegne can react with only one benzylguanine substrate, the increase of the FRET signal is directly proportional to the percentage of labeled protein in the reaction medium.

Matériel utilisé : Conjugué Benzylguanine-Cryptate d'Europium Py-bisTHTABTP Conjugué Benzylguanine-Cryptate Terbium Py-bisTHTABTP 15 Conjugué Benzylguanine-Cryptate d'Europium tris-biPy (Gis bio international) La protéine de fusion GST-SNAPtag-FKBP a été produite à partir du plasmide pSET-26b selon le protocole du kit commercial (SNAP express pSTE7-26b kit Covalys Biosciences AG VVitternvv!/8vvüzedand). La protéine F8Baété couplée par des techniques classiques de conjugaison avec le DY647 20 (Dyomics) Material used: Benzylguanine-Cryptate Conjugate of Europium Py-bisTHTABTP Benzylguanine-Cryptate Conjugate Terbium Py-bisTHTABTP 15 Benzylguanine-Cryptate Conjugate of Europium tris-biPy (International Bio Gis) The GST-SNAPtag-FKBP fusion protein was produced at from the plasmid pSET-26b according to the protocol of the commercial kit (SNAP express pSTE7-26b kit Covalys Biosciences AG VVitternvv! / 8vvüzedand). F8Beat protein coupled by conventional conjugation techniques with DY647 (Dyomics)

Mode opératoire 2 nmoles de protéine recombinante FRB, préalablement marquée avec un accepteur (DY647) .ont été oo-incubées à température ambiante avec 2 nmoles de protéine recombinante 25 GST'SnopTogO-FNBP et des concentrations croissantes de conjugué Benzylguanine-Cryptate d'Europium Py-bisTHTABTP , de conjugué Benzylguanine-Cryptate de Terbium Py-bisTHTABTP ou de conjugué Benzylguanine-Cryptate d'Europium tris-biPy. Procedure 2 nmoles of FRB recombinant protein, previously labeled with an acceptor (DY647), were incubated at room temperature with 2 nmol of recombinant GST'SnopTogO-FNBP protein and increasing concentrations of Benzylguanine-Europium Cryptate Conjugate. Py-bisTHTABTP, Terbium Benzylguanine-Terbium Py-bisTHTABTP Conjugate or Europium Benzylguanine-Cryptate Conjugate tris-biPy.

Les lectures de fluorescences ont été effectuées à 620 nm (Europium) ou520nmn (Terbium) et à 30 605nnn( sur Analyst (BMG laboratory) en configuration TR-FRET (FRET en temps résolu) après une excitation à 337 nm. Les lectures sont réalisées avant et après induction de l'interaction protéique. L'induction protéine 'pnotéine entre les partenaires FRBIFKBP a été obtenue par ajout ajout de 100 nM de rapamycine. The fluorescence readings were taken at 620 nm (Europium) or 520 nm (Terbium) and at 605 nm (on Analyst (BMG laboratory) in TR-FRET configuration (FRET in time resolved) after excitation at 337 nm. Before and after induction of the protein interaction The protein-protein induction between the FRBIFKBP partners was obtained by addition addition of 100 nM rapamycin.

Ce modèle in vitro permet d'établir des cinétiques de marquage enzymatique en fonction de l'excès de substrat engagé dans la réaction. 33 Les résultats sont indiqués soit en d665 soit en % de marquage suivant les formules suivantes : d 665 = (signal 665 nm avec la protéine GST-SNAPtag-FKBP) - (signal 665 sans la protéine This in vitro model makes it possible to establish enzymatic labeling kinetics as a function of the excess of substrate involved in the reaction. The results are indicated either in d665 or in% labeling according to the following formulas: d 665 = (665 nm signal with the GST-SNAPtag-FKBP protein) - (signal 665 without the protein

5 Le pourcentage de marquage obté obtenu par comparaison à l'incubation pendant une nuit (18 h) qui correspond à 100 % de la protéine marquée. % marquage =/d865 à t mesure /d665 18 hb 100 The percentage of obtained labeling obtained by comparison with the overnight incubation (18 h) which corresponds to 100% of the labeled protein. % marking = / d865 to t measure / d665 18 hb 100

Résultats : 10 Les résultats sont présentés sur la figure 1. La réactivité des conjugués benzylguanine-cryptate selon l'invention (Eu Py-bisTHTABTP et Tb Pv-bisTHTABTp ) a été fortement améliorée par rapport à celle du composé de référence (Eu-TBP). Après 1h d'incubation un excès de substrat (facteur 12,5) permet d'atteindre la saturation de 15 marquage avec les BG -TATP alors que cette saturation n'a été pas atteinte avec un excès de substrat de référence (facteur 50). Results: The results are shown in FIG. 1. The reactivity of the benzylguanine-cryptate conjugates according to the invention (Eu Py-bisTHTABTP and Tb Pv-bisTHTABTp) was greatly improved with respect to that of the reference compound (Eu-TBP). ). After 1 h of incubation, an excess of substrate (factor 12.5) makes it possible to reach the saturation of labeling with the BG-TATP whereas this saturation was not reached with an excess of reference substrate (factor 50). .

Exemple 9 : Comparaison des spectres UV d'un cryptate Eu-TBP et d'un crvptate Eu lev-, 20 bisTHTABTP EXAMPLE 9 Comparison of the UV Spectra of an Eu-TBP Cryptate and a Eu Lev-, 20-bisTHTABTP Crvptate

Les spectres d'absorption des cryptates Eu-TBP et Eu Py-bisTHTABTP ont été mesurés et sont présentés sur la figure 2(Aba.TBPedAbe.TATPnaapecÜvemenU. Le spectre d'absorption du cryptate Eu Py-bisTHTABTP a été beaucoup plus favorable que celui 25 du cryptate Eu TrisbiPy à une excitation à la longueur d'onde du Laser (337 nm) Cette caractéristique a été particulièrement intéressante pour l'utilisation des composés selon l'invention dans des systèmes nécessitant une excitation par rayon laser, telles que leur utilisation dans des dosages basés sur le phénomène de FRET. 30 34 The absorption spectra of Eu-TBP and Eu Py-bisTHTABTP cryptates were measured and are shown in Figure 2 (Aba.TBPedAbe.TATPnaapecÜvemenU.) The absorption spectrum of Eu Py-bisTHTABTP cryptate was much more favorable than This characteristic has been of particular interest for the use of compounds according to the invention in systems requiring laser beam excitation, such as their use. in assays based on the FRET phenomenon.

Claims (19)

REVENDICATIONS1. Composé macropolycyclique de formule (I): A et B sont REVENDICATIONS1. Composé macropolycyclique de formule (I): A et B sont choisis parmi les groupes de formule (Il), (III), (IV) : nu R9 (III) (IV) 20 RI'~R8, R8 sont identiques ou différents et sont choisis parmi les atomes ou groupes suivants : H,-dk(CI*),-CN.-dk/CI .-C{}NH-dk(C/*),'CC)C-e!kkC/+j'ungnzupo'LG,ouonoonaR/ et R2 et/ou R8 et R8 forment ensemble, avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle 30 hydrocarboné aaturéà Gou0chaînons ou un cycle succinimide dont l'azote porte un atome ou groupe choisi parmi : H, -alk(C16) ou un groupe - LG; R8, R4, Rio, RI, sont identiques ou différents et sont choisis parmi les atomes ou groupes suivants : H, un groupe ûLG ou un groupe donneur d'électrons choisi parmi les groupes ou atomes suivants : 35 -NH2, -NH e!k(CI`), -N üdki(CI^) e!ku(CI')], -OH, '[)+alk(CI,). 'CH'(alk(CI'))u. R5, R6 et R7 sont identiques ou différents et sont choisis parmi les atomes ou groupes suivants : H,, -CO[-alk(CI')' un groupe -LG, un groupe donneur d'électrons choisi panni: -COOH, -NH2,-NH alk(CI.6), -N [alkl(CI.6) alk2(CI.6)], -OH, -O-alk k C , -CH- k(CI.6))2, -C(alk(CI.6))3, -NHCO-alk(CI.6), -S alk(CI.6), -SH, F, CI, Br, 1 ; G représente un groupe réactif dont la fonction est de former une liaison covalente avec une 5 molécule organique ou biologique et L représente un bras de liaison. REVENDICATIONS1. Macropolycyclic compound of formula (I): A and B are CLAIMS1. Macropolycyclic Compound of Formula (I): A and B are chosen from the groups of formula (II), (III), (IV): R9 (III) (IV) R1 '-R8, R8 are identical or different and are selected from the following atoms or groups: H, -dk (CI *), -NC.-dk / CI.-C {} NH-dk (C / *), 'CC) Ce! kkC / + j'ungnzupo LG, ouonoonaR / and R2 and / or R8 and R8 together with the carbon atoms to which they are bonded form a hydrocarbon-based hydrocarbon ring or a succinimide ring whose nitrogen carries an atom or group selected from: H, -alk (C16) or a group - LG; R8, R4, Rio, R1, are the same or different and are selected from the following atoms or groups: H, an LLG group or an electron donor group selected from the following groups or atoms: -NH2, -NH e! k (CI), -N üdki (Cl) eku (Cl ')], -OH,' [) + alk (Cl). 'CH (alk (CI')) u. R5, R6 and R7 are the same or different and are selected from the following atoms or groups: ## STR2 ## a group -LG, an electron donor group selected from -COOH, - NH 2, -NH alk (Cl 6), -N [alk 1 (Cl 6) alk 2 (Cl 6)], -OH, -O-alk k C, -CH- k (Cl 6)) 2, -C (alk (CI.6)) 3, -NHCO-alk (Cl.6), -S alk (Cl.6), -SH, F, Cl, Br, 1; G represents a reactive group whose function is to form a covalent bond with an organic or biological molecule and L represents a linker. 2. Composé selon la revendication 1, caractérisé en ce que R1=R2, R3=R4, R8=R9, Rlo=Rll, R5=R6 ou bien R1 et R2 et/ou R8 et R9 forment, avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné saturé à 5 ou 6 chaînons. 2. Compound according to claim 1, characterized in that R1 = R2, R3 = R4, R8 = R9, Rlo = R11, R5 = R6 or else R1 and R2 and / or R8 and R9 form, with the carbon atoms to which they are linked, a saturated hydrocarbon ring with 5 or 6 members. 3. Composé selon la revendication 2, caractérisé en ce que R1=R2=R8=R9 ou bien R1 et R2 et R8 et R9 forment, avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné saturé à 5 ou 6 chaînons et R3=R4=R10=R11 15 3. Compound according to claim 2, characterized in that R1 = R2 = R8 = R9 or else R1 and R2 and R8 and R9 form, with the carbon atoms to which they are bonded, a saturated hydrocarbon ring with 5 or 6 members and R3 = R4 = R10 = R11 4. Composé selon la revendication 1 à 3, caractérisé en ce que RI, R2, R8 et R9 sont des atomes d'hydrogène ou bien R1 et R2 et R8 et R9 forment, avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné saturé à 5 ou 6 chaînons, en ce que les groupes R3, R4, R10 et Rll sont choisis parmi les groupes H, OH et CI, et en ce que R5, R6 et R7 sont des groupes ûLG. 20 4. Compound according to claim 1 to 3, characterized in that R1, R2, R8 and R9 are hydrogen atoms or R1 and R2 and R8 and R9 together with the carbon atoms to which they are attached form a ring saturated hydrocarbon radical with 5 or 6 members, in that the groups R 3, R 4, R 10 and R 11 are chosen from the groups H, OH and Cl, and in that R 5, R 6 and R 7 are LL groups. 20 5. Composé selon la revendication 1 de formule (V) : R, 10 25 (V) 30 35 dans laquelle R1, R2, R8, R9 sont identiques ou différents et sont choisis parmi les atomes ou groupes suivants : H, -alk(C1.6), -CN, - alk(CI.6)-COOH, -CONH-alk(CI.6), -COO-alk(CI.6), un groupe -LG, ou encore R1 et R2 et/ou R8 et R9 forment ensemble un cycle saturé à 5 ou 6 chaînons ou un cycle succinimide 40 dont l'azote porte un atome ou groupe choisi parmi : H, -alk(CI_6) ou un groupe û LG ; 36 ~~Rio, RI, sont identiques ou différents et sont choisis parmi les atomes ou groupes suivants : H,unOroupe ûLGouungroupe donneur d'électrons choisi parmi les groupes ou atomes suivants : -NH2, -NH a!k(CI*)^ -N halkl(CI*) adk2(CI.6)], {}H' -[>+alh(CI*). 'a!k(C,+). -CH'(dk({}I+j)u. R7 est choisi parmi les atomes ou groupes suivants : H.-COO-alk(CI.6)^un groupe -LG.un groupement donneur d'électrons choisi panni: -COOH, -NH2, -NH a!k(C~+J, -N [dhi(CI*) a!hu(C/-6)]' -OH, -0'alk(CI.6), 'CH-(adh/CI+J)u, -C|(dkUC1*j)m G représentant un groupe réactif dont la fonction est de former une liaison covalente avec une molécule organique ou biologique et L représentant un bras de liaison dont la fonction est de relier le groupe réactif et le bis-macrocycle 15 5. A compound according to claim 1 of formula (V): wherein R1, R2, R8, R9 are the same or different and are selected from the following atoms or groups: H, -alk ( C1.6), -CN, -alk (CI.6) -COOH, -CONH-alk (CI.6), -COO-alk (CI.6), a group -LG, or else R1 and R2 and / or R8 and R9 together form a saturated 5- or 6-membered ring or a succinimide ring 40 whose nitrogen carries an atom or group selected from: H, -alk (Cl-6) or a group-L; R, are identical or different and are selected from the following atoms or groups: H, an electron donor group selected from the following groups or atoms: -NH 2, -NH a! K (CI *) -N halkl (CI *) adk2 (Cl.6)], {} H '- [> + alh (Cl *). Has! K (C +). Wherein R7 is selected from the following atoms or groups: H.COO-alk (CI.6), an -LG group, an electron donor group selected from: -COOH, -NH2, -NH a! K (C ~ + J, -N [dhi (CI *) a] hu (C / -6)] -OH, -O'alk (CI.6), CH- (adh / CI + J) u, -C | (dkUC1 * j) m G representing a reactive group whose function is to form a covalent bond with an organic or biological molecule and L representing a linker whose function is to connect the reactive group and the bis-macrocycle 15 6. Composé selon la revendication S. caractérisé en ce que R/=Re. Ha=R* Ro=Roet Rin=Rn ou bien RI et R2 et/ou R8 et R8 forment, avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné saturé à 5 ou 6 chaînons. 6. Compound according to claim 5, characterized in that R / = Re. Ha = R * Ro = Roet Rin = Rn or R1 and R2 and / or R8 and R8 together with the carbon atoms to which they are attached form a saturated hydrocarbon ring with 5 or 6 members. 7. Composé selon la revendication 6, caractérisé en ce que RI=Ro=Ro=Roou bien R/ et Ruet 20 R8 et R8 fornlent, avec les atomes de carbone auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné saturé à 5 ou 6 chaînons et R3=R4=1310=R11 7. Compound according to claim 6, characterized in that R1 = Ro = Ro = Roou well R / and Ruet R8 and R8 form, with the carbon atoms to which they are bound, a saturated hydrocarbon ring with 5 or 6 members and R3 = R4 = R11 = 1310 8. Composé selon l'une des revendications 5 à 7, caractérisé en ce que H,.R2'R8 et R8 sont des atomes d'hydrogène ou bien HI et R2 et R8 et Rg forment, avec les atomes de carbone 25 auxquels ils sont liés, un cycle hydrocarboné saturé à 5 ou 6 chaînons, en ce que les groupes R3, R4, R10 et R11 sont choisis parmi les groupes H, OH et Cl, et en ce que R7 est un groupe ûLG. 8. Compound according to one of claims 5 to 7, characterized in that H, R 2 'R 8 and R 8 are hydrogen atoms or HI and R 2 and R 8 and R 8 form, with the carbon atoms to which they are linked, a saturated hydrocarbon ring with 5 or 6 members, in that the groups R3, R4, R10 and R11 are selected from the groups H, OH and Cl, and that R7 is a group -LG. 9. Composé selol'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que le bras de liaison L est une liaison covalente ou un radical organique bivalent choisi parmi : les groupes 30 alkylène linéaires ou ramifiés en CI'C20, contenant éventuellement une ou plusieurs doubles ou triples liaisons; les groupes cycloalkylène en C5-C8 et les groupes arylène en C6-C14, lesdits groupes sdkWène, cycloalkylène ou arylène contenant éventuellement un ou plusieurs hétéroatomes, tels que l'oxygène, l'azote, le soufre, le phosphore ou un ou plusieurs groupe(s carbamoyle ou carboxamido, et lesdits groupes o/ky/ëne, cycloalkylène ou arylène étant 35 éventuellement substitués par des groupes alkyle en C1-C8, aryle en C6-C14, ,sulfonate ouoxo; 9. The compound according to any one of claims 1 to 8, characterized in that the linking arm L is a covalent bond or a divalent organic radical chosen from: linear or branched alkylene groups containing 1 to 20 carbon atoms, optionally containing one or several double or triple bonds; C 5 -C 8 cycloalkylene groups and C 6 -C 14 arylene groups, said sdkWene, cycloalkylene or arylene groups optionally containing one or more heteroatoms, such as oxygen, nitrogen, sulfur, phosphorus or one or more groups carbamoyl or carboxamido, and said o / ky / ene, cycloalkylene or arylene groups being optionally substituted with C 1 -C 8 alkyl, C 6 -C 14 aryl, sulfonate or oxo groups; 10. Composé selon la revendication 9, caractérisé en ce que le bras de liaison L est choisi parmi les groupes divalents suivants : l0 400 Il Il 2) ù(CH2)nùNH-Cù(CH ù(CH2)nùOù(CH2) CH2)p (CH2)nù0ù(CH2)m O- 0 I I NH-Cù(CH2 0 I I 0 11 5) ù(CH2)nùNH-Cù(CH2)P O O 6) ù(CH2)nùNH-Cù(CH2)p N/ Sù(C O I 7) ù(CH2)nùNH-Cù(CH2)p S 0 8) ù(CH2)nùNH-Cù< H2)p Sù(CI-12) 9) 20 10) ù(CH2)nùNH ù(CH2)nùNH-Cù(CH 0 12) ù(CH2)p NH ù(CH2)p dans lesquels n, m, p, r sont des nombres entiers de 1 à 16, de préférence de 1 à 5. 10 38 10. Compound according to claim 9, characterized in that the linking arm L is chosen from the following divalent groups: ## STR2 ## wherein: ## STR2 ## p (CH 2) n (CH 2) n CHH (CH 2) n (CH 2) n (CH 2) n (CH 2) nùNH-CH (CH 2) POO 6) ù (CH 2) nùNH-Cù (CH 2) p N / Where (CO 2) ù (CH 2) nùNH-Cù (CH 2) p S 0 8) ù (CH 2) nùNH-Cù H2H 2) p Si (Cl-12) 9) 10 (CH 2) nùNH ù (CH 2) embedded image in which n, m, p, r are integers from 1 to 16, preferably from 1 to 5. 10 38 11. Composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que le groupe néactifG est choisi parmi les groupes suivants: un acrylamide, une amine activée, un ester activé, un a/déhvde, un halogénure d'alkyle, un anhydride, une aniline, un azide, une aziridine, un acide uarboxyique, und/azoalcane' une haloacétamide, une halotriazine, telle que la monochlorotriazine, ludich!orothazine. une hydrazine (y compris les hydrazides), un innidoeater, un isocyanate, un isothiocyanate, un maléimide, un halogénure de sulfonyle, ou un thiol, une cétone, une amine, un halogénure d'acide, un ester d'hydroxysuccinimidyle, un ester d'hydroxyau!fosuocininnidy!e, un azidonitrophényl, un azidophényl, une 3-(2-pyridyl dithio)-propionamide, glyoxal et en particulier les groupes de formule : (Il 'v w ( /v ~w ( NH (CH2) NH2 O NK~(CH2) v w ( NH ) (CH2) SH ( Il NH ) (CH2) S-S-Ar ( NH ) (CH2) NH-Ar NH )v (CI-12VN NCS NK~CH où w varie de O à 8ætvest égal à O ou 1, et Ar est un hétérocycle à 5 ou 6 chaînons liés par des liaisons saturées ou insaturées, comprenant 1 à 3 hétéroatomes, éventuellement substitué par 15 un atome d'halogène. 15 39 11. A compound according to any one of claims 1 to 8, characterized in that the neactive group G is chosen from the following groups: an acrylamide, an activated amine, an activated ester, a halide, an alkyl halide, anhydride, aniline, azide, aziridine, uarboxyic acid, and azoalkane, haloacetamide, halotriazine, such as monochlorotriazine, ludish orothazine. hydrazine (including hydrazides), innidoeater, isocyanate, isothiocyanate, maleimide, sulfonyl halide, or thiol, ketone, amine, acid halide, hydroxysuccinimidyl ester, ester of hydroxypropylenosidic acid, an azidonitrophenyl, an azidophenyl, a 3- (2-pyridyl dithio) -propionamide, glyoxal and in particular the groups of the formula: ## STR2 ## ## STR5 ## wherein W is from O to O (CH 2) vw (NH) (CH 2) SH (II NH) (CH 2) SS-Ar (NH) (CH 2) NH-Ar NH) v 8 is equal to O or 1, and Ar is a 5- or 6-membered heterocycle linked by saturated or unsaturated bonds, comprising 1 to 3 heteroatoms, optionally substituted by a halogen atom. 12. Composé selon la revendication Il, caractérisé en ce que G est un groupe réactif choisi parmi les groupes auivanta: un acide carboxylique, une amine, un succinimidyl ester d'acide carboxylique, un haloacétamide, une hydrazine, un isothiocyanate, un groupe maléimide, une amine aliphatique. 5 12. Compound according to claim 11, characterized in that G is a reactive group chosen from the following groups: a carboxylic acid, an amine, a succinimidyl carboxylic acid ester, a haloacetamide, a hydrazine, an isothiocyanate, a maleimide group an aliphatic amine. 5 13. Composé selon les revendications 1 à 8oanaotérisé en ce que le groupe ûLG est constitué d'un groupement réactif G choisi parmi : un acide carboxylique, un ester de succinimidyle, un haloacétamide, une hydrazine, un isothiocyanate, un groupe maléimide, une amine aliphatique, et d'un bras de liaison Lohoiai pexni: une liaison simple, une chaîne alkènyle comprenant de 1 à 5 10 atomes de carbone. 13. The compound according to claims 1 to 8a, wherein the group LiG consists of a reactive group G selected from: a carboxylic acid, a succinimidyl ester, a haloacetamide, a hydrazine, an isothiocyanate, a maleimide group, an amine aliphatic, and a binding arm Lohoiai pexni: a single bond, an alkenyl chain comprising 1 to 5 carbon atoms. 14. Composé selon la revendication 13 caractérisé en ce que le groupe -LG est constitué d'un groupe réactif G qui est un acide carboxylique et et en ce que le bras de liaison L est choisi parmi : une liaison simple, une chaîne alkènyle comprenant de 1 à 5 atomes de carbone. 14. Compound according to claim 13 characterized in that the group -LG consists of a reactive group G which is a carboxylic acid and and in that the linker L is selected from: a single bond, an alkenyl chain comprising from 1 to 5 carbon atoms. 15. Composé selon la revendication 14 de formule : 25 30 35 15. A compound according to claim 14 of the formula: 16. Complexe de terre rare comprenant un composé selon l'une quelconque des revendications 1 à 15 et un lanthanide. A rare earth complex comprising a compound according to any one of claims 1 to 15 and a lanthanide. 17. Complexe de terre rare selon la revendication 16, caractérisé en ce que le lanthanide est 40 choisi parmi : l'europium et le terbium. 5 17. A rare earth complex according to claim 16, characterized in that the lanthanide is selected from: europium and terbium. 5 18. Conjugué comprenant une molécule organique liée de manière covalente à un complexe de terre rare selon l'une des revendications 16 ou 17. 18. Conjugate comprising an organic molecule covalently bound to a rare earth complex according to one of claims 16 or 17. 19. Conjugué selon la revendication 16 de formule : 10 19. Conjugate according to claim 16 of the formula: