FR2917408A1

FR2917408A1 - Cyclohexenones d'antrodia camphorata pour le traitement de maladies auto-immunes et compositions pharmaceutiques les contenant

Info

Publication number: FR2917408A1
Application number: FR0802139A
Authority: FR
Inventors: Sheng Yun Liu; Mao Tien Kuo; Wu Che Wen
Original assignee: Golden Biotechnology Corp
Current assignee: Golden Biotechnology Corp
Priority date: 2007-06-12
Filing date: 2008-04-17
Publication date: 2008-12-19
Also published as: TWI394572B; TW200848065A; DE102007043186A1; BRPI0704904A2; US7501454B2; KR20080109583A; KR101150046B1; US20080312334A1; GB0724750D0; GB2450190B; GB2450190A

Abstract

La présente invention concerne un composé extrait d'Antrodia camphorata, utilisé pour traiter des maladies auto-immunes, en particulier l'extrait 4-hydroxy-2,3-diméthoxy-6-méthyl-5-(3,7,11-triméthyl-dodéca-2,6,10-triényl)-cyclohex-2-énone, isolée d'Antrodia camphorata, et son utilisation pour atténuer les symptômes de maladies auto-immunes telles que le lupus érythémateux disséminé (LED). Cette cyclohexénone permet de diminuer la protéinurie et le titre des anticorps antinucléaires chez les mammifères présentant un LED, pour atténuer l'inflammation et les lésions rénales ainsi que les dommages provoqués par les anticorps antinucléaires, ce qui permet de prévenir et de traiter des maladies auto-immunes et des lésions rénales par une substance naturelle exempte d'effets secondaires.

Description

La présente invention concerne des composés destinés au traitement de

maladies immunes, en particulier des cyclohexénones isolées et purifiées à partir d'extraits d'Antrodia carnphorata, et pouvant être utilisés dans le traitement de maladies auto-immunes telles que le lupus érythémateux disséminé (LED). Il existe de nombreux types de maladies auto-immunes, qui résultent d'une réponse immune aberrante de l'orga- nisme, avec des effets auto-destructeurs. D'importants exemples comprennent le lupus érythémateux disséminé (LED), la polyarthrite rhumatoïde (PR), la sclérodermie, la polymyosite, la dermatomyosite, le purpura anaphylactoïde, le syndrome de Sjôgren et analogues. D'autres pathologies, telles que la cirrhose biliaire primitive (CEP), l'hépatite active chronique et la thyroïdite de Hashimoto, sont toutes apparentées à des maladies auto-immunes. Parmi elles, la pathologie la plus grave est le lupus érythémateux disséminé (LED), quai est courant chez les femmes en âge de pro- créer. Les patients présentant un LED produisent des anticorps appelés anticorps antinucléaires (AAN), qui sont ciblés vers les auto-antigènes situés à l'intérieur du noyau cellulaire. Ces anticorps peuvent provoquer des dommages multiples dans les tissus et organes tels que la peau, les articulations, le squelette, les reins, le système cardiovasculaire, le système d'agglutination, l'intestin et l'estomac, les membranes séreuses (péricarde, plèvre et péritoine), le système neural, et analogues. Certains des anticorps forment des complexes immuns qui vont se lier aux antigènes, qui peuvent se déposer dans des cellules de différents tissus au cours de la circulation. Les manifestations cliniques comprennent les érythèmes en ailes de papillon, l'anémie hémolytique, l'arthrite, l'inflammation des vaisseaux sanguins, la néphrite, etc. Un traitement standard des maladies auto-immunes réside dans l'administration de stéroïdes ou d'autres médicaments chimiques. Cependant, les patients subissant un traitement à long terme ont présenté des complications inconfortables, ou des effets secondaires. En conséquence, il serait avantageux pour les patients d'utiliser, pour traiter des maladies auto-immunes, des médicaments phytothérapeut:iques chinois traditionnels naturels et ne présentant aucun effet secondaire. Antrodia camphorata est aussi appelé Chang-Zhi, Niu Chang-Zhi, champignon du camphre rouge, etc. Il s'agit d'un champignon pérenne appartenant à l'ordre des Aphyllophora-les, famille des polyporacées. Il s'agit d'une espèce endémique à Taiwan, qui pousse sur le parenchyme ligneux du coeur intérieur pourri de Cinnamomum kanehirae Hay. Cinnamomum kanehirai Hay présente une rare distribution, et a subi des surcoupes illégales, de sorte que la croissance d'Antrodia campphorata à l'intérieur de l'arbre à l'état sauvage s'est raréfiée. Le prix d'Antrodia camphorata est très élevé, en raison de la très faible vitesse de croissance de l'Antrodia camphorata naturel, gui ne pousse qu'entre juin et octobre.

Les sporophores d'Antrodia camphorata sont pérennes, sessiles, durs et ligneux, et exhalent une forte odeur de sassafras (arome de camphre). Ils se présentent sous différentes formes : en plaques, en cloche, angulés, ou en tour. Ils ont une couleur rougeâtre et sont plats quand ils sont jeunes, en étant fixés à la surface du bois. Puis les bords de l'extrémité frontale vont subir une légère inclinaison et un bouclage, et s'étendre dans l'espace ambiant. La cou-leur vire au rouge brun passé ou au brun jaune crème, avec des ostioles tout autour. A ce stade, ils présentent un très grand intérêt médical. En médecine Taiwanaise traditionnelle, Antrodia camphorata est habituellement utilisé en tant que médicament anticancéreux, hépato-protecteur et antidote. Antrodia camphorata, tout comme d'une manière générale les champignons comestibles et à usage médical, présente une forte teneur en de nombreux nutriments, parmi lesquels les polysacchari- des tels que le (3-glucosanne), les triterpénoïdes, la superoxyde-dismutase (SOD), l'adénosine, les protéines (immunoglobulines), les vitamines (telles que la vitamine B, l'acide nicotinique), les oligo-éléments (tels que le calcium, le phosphore et le germanium, etc.), les acides nucléiques, l'agglutinine, les acides aminés, les stéroïdes, les lignines et les agents stabilisant la pression sanguine (tels que l'acide dérivé d'Antrodia) et analogues. On pense que ces principes physiologiquement actifs présentent des effets tels qu'une activité antitumcrale, une aug- mentation des activités immunomodulatrices, un effet antiallergique, un effet antibactérien, un effet antihypertenseur, hypoglycémiant, hypocholestérolémiant, et analogues. Les triterpénoïdes représentent le composant le plus étudié, parmi les nombreuses compositions d'Antrodia cam- phorata. On appelle en résumé "triterpénoïdes" des composés naturels qui contiennent 30 atomes de carbone en structure pentacyclique ou hexacyclique. Le goût amer d'Antrodia camphorata est dû au composant triterpénoïdes. Trois nouveaux triterpénoïdes de type ergostane (antcine A, antcine B, antcine C) ont été isolés par Cherng et al.. à partir des sporophores d'Antrodia camphorata (Cherng, 1. H., et Chiang, H. C. 1995. Three new triterpenoids from Antrodia cinnamomea. J. Nat. Prod. 58:365-371). Trois nouveaux composés, l'acide zhankuique A, l'acide zhankuique B et l'acide zhankuique, ont été extraits des sporophores d'Antrod_ia camphorata avec de l'éthanol par Chen et al. (Chen, C. H., et Yang, S. W. 1995. New steroid acide from Antrodia cinnamomea, -a fungus parasitic on Cinnamomum micranthum. J. Nat. Prod. 58:1655-1661). En outre, Cherng et al. ont aussi trouvé trois autres nouveaux triterpénoïdes, provenant, des sporophores d'Antrodia camphorata, qui sont une lactone sesquiterpénique et 2 composés biphénylés, le 4,7-diméthoxy-5-mé-:hy-1,3-benzodioxole et le 2,2',5,5'-tétraméthoxy-3,4,3', 4'-bi-méthylènedioxy-6,6'--diméthylbiphényle (Chiang, H. C., Wu, D. P., Cherng, I. W., et Ueng, C. H. 1995. A sesquiterpene lactone, phenyl and biphenyl compounds from Antrodia cinnamomea. Phytochernistry. 39:613-616). En 1996, quatre nouveaux triterpénoïdes de type ergostane (les antcines E et F et les antcinates de méthyle G et H) ont été isolés par Cherng et al. par les mêmes méthodes analytiques (Cherng, I. H., Wu, D. P., et Chiang, H. C. 1996. Triterpenoids from Antrodia cinnamomea. Phytochemistry. 41:263-267). Et deux stéroïdes de type ergostane, les acides zhankuiques D et E, ainsi que trois lanosta-triterpènes, l'acide 15 alpha-acétyl-déhydrosulfurénique, l'acide déhydroéburicoïque, l'acide déhydrosulfu- rénique, ont été isolés par Yang et al. (Yang, S. W., Shen, Y. C., et Chen, C. H. 1996. Steroids and triterpenoids of Antrodia cinnamomea - a fungus parasitic on Cinnamomun micranthum. Phytochemistry. 41:1389-1392). Les expériences ci-dessus ont montré que les extraits d'Antrodia camphorata présentent les effets mentionnés ci-dessus, et les composants ont été analysés successivement. Cependant, l'utilisation potentielle d'extraits d'Antrodia camphorata pour le traitement de maladies auto-immunes n'a jamais été mentionnée. Des expériences plus poussées sont nécessaires pour identifier la composition qui permettra de faciliter le traitement des états auto-immuns. Les composants naturels des extraits d'Antrodia camphorata vont largement contribuer à d'importants effets avantageux pour ce qui est de prévenir ou de traiter le lupus érythémateux disséminé, si l'on peut trouver la composition vraiment efficace. En outre, cela va faciliter la prévention des effets secondaires ou des complications qui sont provoqués par les médicaments pharmaceutiques chimiques, tels que les stéroïdes, lors du traitement des maladies auto-immunes.

Pour identifier les composés permettant de prévenir ou de traiter les maladies auto-immunes telles que le LED, et provenant d'extraits d'Antrodia camphorata, on a dans le cadre de la présente invention isolé et purifié le composé de formule (1) dans laquelle X et Y peuvent être des atomes d'oxygène ou de soufre, R1, R2 et R3 représentent chacun un atome d' hy- drogène, le groupe méthyle ou (CH2)n,-CH3 et m = 1 à 12 ; n = 1 à 12. Un composé préféré de formule générale (1) est la 4-hydroxy-2,3-diméthoxy-6-méthyl-5-(3,7,11-triméthyl-dodéca-2,6,1. 0-triényl)-cyclohex-2-énone, telle que représentée par la formule (2), avec la formule brute C24H38O4. Ce composé a une masse moléculaire de 390 et se présente sous forme d'une poudre jaune pâle. CH3 CH3 CH3 CH3 (1) CH3 O CH3 (2)

Les cyclohexénones ayant les structures correspondant aux formules (1) et (2) sont purifiées par extraction, aqueuse ou à l'aide d'un solvant organique, d'Antrodia cam- phorata. Les sclvants organiques utilisés comprennent, mais sans limitation, les alcools tels que le méthanol, l'éthanol ou le propanol, les esters tels que l'acétate d'éthyle, les alcanes tels que l'hexane, ou les alcanes halogénés tels que le chlorométhane, le chloréthane. Parmi eux, on préfère les alcools, et en particulier l'éthanol. La présente invention concerne des cyclohexénones de formule (1) et de formule (2), pour ce qui concerne la pré- vention ou le traitement de maladies auto--immunes telles que =_e LED. La protéinurie de mammifères présentant un LED diminue, ce qui peut être dû à une lente progression de la maladie vers une néphrite ; et les titres sanguins des anticorps antinucléaires diminuent eux aussi d'une manière efficace, pour diminuer encore plus les dommages provoqués par les anticorps antinucléaires quand des cyclohexénones d'Antrodia camphorata sont administrées en supplément à des mammifères présentant un LED. En outre, la substance natu- relie extraite d'Antrodia camphorata peut être utilisée pour soulager les complications et effets secondaires provoqués par des médicaments chimiques tels que les stéroïdes, et pour atténuer les symptômes d'inconfort. Par ailleurs, les composés de formule (1) et/ou de formule (2) de la présente invention peuvent être incorporés dans des compositions pharmaceutiques destinées au traitement de maladies auto-immunes telles que le LED, pour améliorer les symptômes de la maladie auto-immune chez des mammifères, tels que les humains. Les compositions pharma- ceutiques comprennent non seulement les composés de formule (1) et/ou de formule (2), mais aussi des supports acceptables d'un point de vue pharmaceutique. Des exemples de ces supports comprennent mais sans limitation les excipients tels que l'eau, les charges telles que le saccharose ou l'amidon, les liants tels que les dérivés de la cellulose, les diluants, les désintégrants, les renforçateurs d'absorption ou les édulcorants. Les compositions pharmaceutiques peuvent être fabriquées par mélange des composés de formule (1) et/ou de formule (2) avec au moins l'un des supports, grâce à des procédés classiques connus dans le domaine de la galénique, et qui peuvent être formulés, mais sans limitation, sous forme de poudres, de comprimés, de gélules, de pastilles, de granulés, ou d'autres formulations liquides.

L'invention sera mieux comprise en regard de la des- cription ci-après et des dessins annexés, qui présentent des exemples de réalisation de l'invention, dessins dans lesquels : La Figure 1 présente les effets des cyclohexénones d'Antrodia camphorata sur les variations de la protéinurie chez des souris NZB/WF1 SLE femelles ; et, La Figure 2 présente les effets de cyclohexénones d'Antrodia camphorata sur les variations du titre d'anticorps antinucléaires anti-ADN double brin chez des souris NZB/WFl SLE femelles à différents instants. Pan- neau (A) : semaine 0 ; panneau (B) : semaine 4 ; panneau (C) : semaine 8. Les mycéliums, les sporophores, ou des mélanges des deux, provenant d'Antrodia camphorata, sont d'abord extraits avec de l'eau ou des solvants organiques pour don- ner l'extrait aqueux ou l'extrait dans un solvant organique d'Antrodia camphorata, par utilisation de procédés bien connus dans la technique. Les solvants organiques comprennent mais sans limitation les alcools tels que le méthanol, l'éthanol ou le propanol ; les esters tels que l'acétate d'éthyle ; les alcanes tels que l'hexane ; ou les alcanes halogénés tels Parmi eux, on l'éthanol. Les extraits, aqueux ou dans un solvant organique, 25 d'Antrodia camphorata sont soumis phase liquide hautes performances purification. Chaque fraction est essai de détermination de la protéinurie, du titre des anticorps antinucléaires et analogues, après traitement 30 d'une maladie auto-immune telle que le LED. Les fractions actives, ayant une fonction de soulagement des symptômes, font l'objet d'une analyse pour déterminer leur composition, et on les soumet d'une manière plus poussée à des essais biologiques apparentés. La technique ci-dessus 35 conduit à identifier des composés de formule (1) et/ou de formule (2) qui conduisent à une diminution. du taux urinaire des protéines et des anticorps antinucléaires, et de que le chlorométhane et le chloréthane. préfère les alcools, et en particulier à une chromatographie en (CLHP) pour isolement et récupérée et soumise à un leurs effets pour ce qui est de traiter des maladies auto-immunes telles que le LED et les maladies de type rénal. En outre, les composés de formule (1) et/ou de formule (2) peuvent être incorporés dans des compositions pharmaceuti- quel destinées au traitement de maladies auto-immunes telles que le LED, pour permettre à cette substance naturelle d'améliorer efficacement les symptômes de la maladie auto--immune, sans déclencher d'effets secondaires et de complications.

Le composé 4-hydroxy-2,3-diméthoxy-6-méthyl-5-(3,7,11-triméthyl-dodéca-2,6, 10-triényl)-cyclohex-2-énone de formule (2) est expliqué ci-dessous à titre d'exemple pour la pré-sente invention. Pour évaluer les effets du traitement d'une maladie auto-immune telle que le LED, on a administré à des souris femelles NZB/WF1, modèles de LED, la cyclohexénone mentionnée ci-dessus d'Antrodia camphorata, et on a évalué la protéinurie et les taux d'anticorps antinucléaires. Les essais ci-dessus ont montré que la 4-hydroxy--2,3--diméthoxy-6-méthyl-5-(3,7,11-triméthyl-dodéca-2,6, 10-triényl)-cyclohex-2-énone d'Antrodia camphorata peut être utilisée pour retarder la néphrite et les dommages rénaux, en diminuant la protéinurie, et en inhibant efficacement ou en retardant la synthèse des anticorps antinucléaires chez les mammifères tels que les humains, l'objectif étant de diminuer les dommages provoqués par des anticorps antinucléaires, et en outre de traiter le LED. Les exemples sont décrits en détail ci-dessous : Exemple 1 Isolement de la 4-hydroxy-2,3-diméthoxy-6-méthyl-5-(3,7,11-triméthyl-dodéca-2,6, 10-triényl)-cyclohex-2-énone On place dans un ballon 100 g de mycéliums, de sporophores, ou d'un mélange des deux, provenant d'Antrodia camphorata. On place dans le ballon une quantité appropriée d'eau et d'alcool (solution alcoolique à 70-100 %), et on agite à 20-25 C pendant au moins 1 heure. On filtre la solution sur un filtre et une membrane filtrante de 0,45 m, et le filtrat est recueilli scus forme d'un extrait. Le filtrat d'Antrodia camphorata est soumis à une ana-lyse par chromatographie en phase liquide haute performance (CLHP). La séparation est effectuée sur une colonne RP18, la phase mobile étant constituée de méthanol (A) et d'acide acétique à 0,1-0,5 % (B), les conditions du gradient étant les suivantes : 0-10 minutes dans 95 %-20s de B, 10-20 minutes dans 20 %-l0 % de B, 20-35 minutes dans 10 %-10 % de B, 35-40 minutes dans 10 %-95 % de B, le débit étant de 1 ml/min. L'effluent de la colonne est suivi par un détecteur UV-visible. Les fractions recueillies à 25-30 minutes sont recueillies et concentrées pour donner sous forme d'une poudre jaune pâle le produit 4-hydroxy-2,3-diméthoxy-6-méthyl-5-(3,7,"11-triméthyl-dodéca-2,6, 10--triényl)-cyclohex-2-énone. L'analyse de la 4-hydroxy-2,3-diméthoxy-6-méthyl-5-(3,7,11-triméthyl-dodéca-2,6, 10-triényl)-cyclohex-2-énone met en évidence la formule brute C24H38O4, dont la masse moléculaire est de 390, avec un point de fusion de 48 C 1 52 C. Une étude des spectres RMN donne les résultats suivants . RMN-1H (CDC13) ô (ppm) = 1, 51, 1, 67, 1, 71, 1, 75, 1, 94, 2, 03, 2,07, 2,22, 2,25, 3,68, 4,05, 5,07, et 5,14 ; RMN-13C (CDC_3)5(ppm) = 12,31, 16,1, 16,12, 17,67, 25,67, 26,44, 26,74, 27,00, 39,71, 39,81, 4,027, 43,34, 59,22, 60,59, 120,97, 123,84, 124,30, 131,32, 135,35, 135,92, 138,05, 160,45, et 197,12. Exemple 2 Evaluation des effets de cyclohexénories d'Antrodia camphorata sur la prévention ou le traitement de maladies auto-immunes telles que le LED Les patients auto-immuns présentent des manifestations cliniques correspondant à une augmentation manifeste des anticorps et des complexes immuns, dont les antigènes sont des protéines normales largement réparties dans le noyau cellulaire, le cytoplasme ou la membrane cellulaire. On utilise donc la présence d'anticorps antinucléaires (AAN), qui présentent une certaine importance en diagnostic pour le criblage des maladies auto-immunes. Les anticorps antinucléaires liés au lupus érythémateux disséminé (LED) ciblent les ADN double brin, les ribonucléoprotéines liées à l'ARN telles que Sm, Ro, La, RNP, les phospholipides et le P ribosomal, etc. Parmi eux, ce sont les anticorps anti-ADN double brin, anti-Sm et aPL (antiphospholipides) qui présentent l'importance pathologique la plus grande. Les anticorps anti--ADN double brin présentent une grande spécificité pour le LED, avec une corrélation avec les dommages aux reins. En conséquence, la présente invention évalue les effets des cyclohexénones d'Antrodia camphorata pour ce qui est de la prévention ou du traitement du LED, par l'inter- médiaire de la création d'un modèle animal du LED, détection du titre des anticorps antinucléaires anti-ADN double brin dans le sang, et détermination de la protéinurie dans les modèles animaux. On décrit ci-dessous les détails des différentes étapes effectuées. (1) Création d'un modèle animal de LED Les souris NZB/WF1 femelles développent spontanément des syndromes analogues au LED humain, tels que la production d'auto-anr:icorps antinucléaires, la protéinurie et la toxicité rénale, pouvant conduire à la mort. La maladie est plus grave chez les souris femelles que chez les souris mâles ; la morbidité des souris femelles est de même plus élevée que celle des souris mâles. En conséquence, on a utilisé des souris NZB/WF1 femelles pour cribler les anticorps anti-LED dans cette étude.

Trente souris femelles NZB/WF1 (achetées à Jackson. Lab, Etats-Unis), âgées de 12 à 24 semaines, ont fait l'objet d'une analyse bihebdomadaire pour déterminer la protéinurie, et d'une analyse mensuelle pour évaluer le titre des anticorps antinucléaires (AAN). L'augmentation du titre des AAN, et une réponse positive, ont impliqué que les souris NZB/WF1 femelles allaient développer un LED et étaient prêtes au regroupement. A un âge de 22 semaines, les animaux présentant les syndromes ci-dessus ont été subdivisés au hasard en 3 groupes (10 souris par groupe ; de l'eau a été administrée au groupe témoin négatif ; un stéroïde a été administré au groupe témoin positif ; et les cyclohexénones d'Antrodia camphorata ont été administrées au groupe expérimental), et on a défini comme étant la semaine zéro le début de l'expérience. En outre, dix souris B6 (achetées au National Laboratory Animal Center, Taiwan) sans syndrome de LED, et qui étaient des souris normales, ont servi de groupe à blanc. Tous les groupes sont traités comme il ressort du Tableau 1.

Tableau 1 Traitement des groupes d'animaux Administration orale Souche de groupe souris eau prednisolone cyc 1,25 mg/kg 50 mg/kg B6 Blanc - -Souris Uémoin + - - femelles négatif NZB/WF1 ?émoin - + - (LED) positif _ Expérimental - - - + Le groupe "blanc" du Tableau 1 comprenait des souris B6 sans syndrome de LED, qui n'ont reçu aucun traitement, avec un régime alimentaire normal assurant une croissance naturelle. Des souris femelles NZB/WF1 à même d'exprimer les syndromes du LED ont servi de groupes témoin négatif et témoin positif. Les souris du premier groupe ont reçu de l'eau normale ; dans le dernier groupe, elles ont reçu des médicaments par voie orale, avec 1,25 mg/kg de prednisolone, le médicament du LED. Les souris du groupe expérimen- tal ont reçu par voie orale 50 mg/kg des cyclohexénones de l'Exemple 1. Les souris ont reçu les substances ci-dessus une fois par jour, en commençant à l'âge de 23 semaines, et ce laps de temps a été appelé "la première semaine de l'expérience". La durée de l'expérience a été de 48 semaines ; on a prélevé en routine des échantillons de sang et d'urine pour évaluer l'effet des cyclohexénones d'Antrodia campho- rata sur la pathologie LED. (2) Effets de cyclohexénones d'Antrodia camphorata sur les variations de la protéinurie sur des souris NZB/WF1 LED femelles Les patients présentant un LED développent une inflammation rénale et des dommages aux reins, qui conduisent à une perte de protéines à partir du rein, pour pénétrer dans le fluide, avec en conséquence une augmentation de la protéinurie. Les variations de la protéinurie peuvent être utilisées pour évaluer les effets des cyclohexénones d'Antrodia camphorata sur le LED. Les échantillons d'urine des souris ont été prélevés deux fois par semaine. On a analysé 10 JL,1 d'urine à l'aide du Bio-Rad Protein Assay Dye Reagent Concentrate (Bio-Rad Laboratories, Etats-Unis), et les résultats ont été lus à 450 nm avec un analyseur ELISA pour déterminer la concentration des protéines à l'aide d'une courbe étalon. Les résultats sont présentés sur la Figure 1. La Figure 1 présente les variations de la protéinurie chez des souris NZB/WF1 LED femelles après utilisation de cyclohexénones d'Antrodia camphorata dans différents groupes. Les taux urinaires de protéines des souris du groupe blanc la semaine 6 ont été analogues à celles observées lors de la semaine zéro (à l'âge de 28 semaines), ces der- niers taux entrant dans la plage normale de 65 mg/dl - 75 mg/dl. Au contraire, les souris du groupe témoin négatif ont présenté après 6 semaines d'expérience une multiplication de la protéinurie par 2,76 (246 mg/dl contre 89,16 mg/dl). On a pu observer le symptôme typique du LED, à sa- voir une nette augmentation de l'excrétion de protéines en raison d'une lésion rénale. On a observé chez les souris du groupe témoin positif ayant reçu de la prednisolone une faible protéinurie, à 32,6 mg/dl. La protéinurie a atteint 118,2 mg/dl après 6 semaines d'expérience pour les souris ayant reçu par voie orale 50 mg/kg de cyclohexénones d'Antrodia camphorata dans le groupe expérimental, soit 1,3 fois plus qu'avant l'expérience. En conséquence, les cyclohexénones d'Antrodia camphorata pourraient inhiber efficacement les lésions rénales et les inflammations provoquées par le LED, tout en soulageant les symptômes de protéinurie chez les souris LED après 6 semaines d'alimentation. De plus, on pourrait aussi appliquer les cyclohexénones d'Antrodia camphorata dans le traitement d'une protéinurie en excès provoquée par des maladies rénales apparentées, mais sans y être limité. (3) Effets de cyclohexénones d'Antrodia camphorata sur les variations des anticorps antinucléaires chez des souris NZB/WF1 LED femelles Dans cette étude, on a déterminé le titre des anticorps antinucléaires contre l'ADN double brin, pour évaluer les effets des cyclohexénones d'Antrodia camphorata sur les souris LED. On a prélevé des échantillons sanguins de l'or-bite oculaire toutes les quatre semaines. Les globules sanguins et le plasma ont été séparés après centrifugation. On a analysé 10 l de plasma avec le kit Mouse Anti-dsDNA IgG ELISA (kit ELISA, IgG anti-ADN double brin de souris, ad: Alpha Diagnostic, Etats-Unis), pour déterminer les titres; d'anticorps. Les résultats sont présentés sur la Figure 2. La Figure 2 présente le titre des anticorps antinucléaires anti-ADN double brin au cours de la semaine 0, de la semaine 4 et de la semaine 8 dans différents groupes de souris NZB/WF1 LED femelles après utilisation de cyclohexénones d'Antrodia camphorata. Les souris du groupe blanc, sans symptôme de LED, n'ont pas présenté d'anticorps antinucléaires anti-ADN double brin de la semaine 0 à la semaine 8 de l'expérience (à un âge de 22 à 30 semaines).

Au contraire, le titre des anticorps antinucléaires anti-ADN double brin, pour les souris du groupe témoin négatif, a augmenté d'une valeur inférieure à 10 mg/dl à une valeur supérieure à 150 mg/dl en 8 semaines. Le titre des anticorps antinucléaires anti-ADN double brin, pour les souris du groupe positif ayant reçu la prednisolone, a diminué à environ 50 % la 8ème semaine, tandis que les souris du groupe expérimental, ayant reçu des cyclohexénones d'Antrodia camphorata, ont présenté des titres d'anticorps antinucléaires anti-ADN double brin significativement plus faibles que celles du groupe négatif au cours des 8 semaines d'expérience. Le titre des anticorps antinucléaires est tombé à 34 % la semaine 8, pour les souris du groupe expérimental. En conséquence, les cyclohexénones d'Antrodia camphorata pourraient efficacement inhiber ou retarder la synthèse d'anticorps antinucléaires chez des mammifères présentant un LED, tout en soulageant les dommages provo- qués par les anticorps antinucléaires lors du traitement d'un LED. Par ailleurs, comme les cyclohexénones d'Antrodia camphorata peuvent être utilisées pour inhiber ou retarder la synthèse massive d'anticorps antinucléaires, provoquée par des maladies auto-immunes telles que le LED, et aussi pour diminuer la protéinurie consécutive à une lésion rénale, on peut les appliquer dans des maladies qui vont former des anticorps antinucléaires et provoquer des lésions rénales, telles que la sclérodermie, le syndrome de Sj6gren, le pur- Aura anaphylactoïde, la néphrite rhumatoïde, ou d'autres maladies auto-immunes qui vont créer des dommages aux tissus et organes, parmi lesquels, mais sans limitation, la peau, les articulations, le squelette, les reins, le système cardiovasculaire, le système d'agglutination, l'intes- tin et l'estomac, les membranes séreuses (péricarde, plèvre, péritoine), le système neural. En outre, les cyclohexénones d'Antrodia camphorata peuvent être utilisées pour diminuer les anticorps anti-ADN double brin., et aussi pour diminuer efficacement les dommages aux reins, et protéger ces derniers. En résumé, le composé 4-hydroxy-2,3-diméthoxy-6-mét_hyl-5-(3,7,11-triméthyl-dodéca-2,6, 10-tr_ényl)-cycichex- 2-éncne, isolé d'Antrodia camphorata conformément à la pré-sente invention, peut être utilisé pour traiter efficace-ment les symptômes tels qu'une protéinurie élevée et des titres élevés d'anticorps antinucléaires dans des maladies auto-immunes, tout en soulageant les dommages aux tissus et organes provoqués par ces maladies chez les mammifères tels que les humains. De plus, le composé peut retarder les dom-mages à l'organisme provoqués par une maladie rénale, grâce à ses effets protecteurs. Par ailleurs, les cyclohexénones d'Antrodia camphorata représentent un extrait naturel, qui ne provoquerait pas de phénomènes inconfortables d'effets secondaires, de toxicité ou de complications. Ils peuvent être combinés à des médicaments chimiques, pour diminuer les doses de stéroïdes et donc les effets secondaires toxi- ques.. En outre, ils peuvent être incorporés dans des compositions pharmaceutiques. Les compositions pharmaceutiques comprennent non seulement les cyclohexénones d'Antrodia camphorata, mais aussi des supports acceptables d'un point de vue pharmaceutique. Des exemples de ces supports corn- prennent, mais sanslimitation, les excipients tels que l'eau, les charges telles que le saccharose ou l'amidon, les liants tels que les dérivés de la cellulose, les diluants, les désintégrants, les renforçateurs d'absorption ou les édulcorants. Les compositions pharmaceutiques peu- vent être fabriquées par mélange des cyclohexénones d'Antrodia camphorata avec au moins l'un des supports, par des procédés classiques connus dans le domaine galénique, et qui peuvent être formulés sous forme de poudres, de comprimés, de gélules, de pastilles, de granulés ou d'autres formulations liquides, mais sans limitation. On peut ainsi atteindre le but de l'invention, à savoir la prévention et le traitement de maladies auto-immunes telles que le LED et les maladies rénales chez les mammifères tels que les humains.

Claims

REVENDICATIONS

1. Cyclohexénone d'Antrodia camphorata, utilisée pour traiter des maladies auto-immunes, caractérisée en ce qu'elle a la formule suivante : Y,ä R2 dans laquelle X et Y sont des atomes d'oxygène ou de soufre, R1, R2 et R3 représentent chacun un atome d'hydrogène, le groupe méthyle ou (CH2)m-CH3, et m vaut 1 à 12 et f vaut 1 à 12.

2. Cyclohexénone selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle est isolée d'extraits dans un solvant: organique d'Antrodia camphorata.

3. Cyclohexénone selon la revendication 2, caractérisée en ce que les solvants organiques sont choisis dans l'ensemble consistant en les alcools, les esters, les alcanes et les alcanes halogénés.

4. Cyclohexénone selon la revendication 3, caractérisée en ce que l'alcool est l'éthanol.

5. Cyclohexénone selon la revendication 1, caracté- risée en ce qu'elle est isolée d'extraits aqueux d'Antrodia camphorata.

6. Cyclohexénone selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'il s'agit de la 4-hydroxy-2,3-diméthoxy--6-méthyl-5-(3,7,11-triméthyl-dodéca-2,6,10-tr: iényl)-cyclohex- 2-énone.

7. Cyclohexénone selon la revendication 6, caractérisée en ce qu'elle peut atténuer les lésions rénales provoquées par des maladies auto-immunes chez les mammifères, et les dommages aux organes et tissus provoqués par des 3C anticorps antinucléaires.

8. Cyclohexénone selon la revendication 7, caractérisée en ce que le mammifère est un humain.

9. Cyclohexénone selon la revendication 8, caractérisée en ce que la maladie auto-immune est le lupus érythé- mateux disséminé (LED).

10. Cyclohexénone selon la revendication 9, caractérisée en ce qu'elle peut atténuer les lésions rénales provoquées par le LED, sur la base d'une diminution de la protéinurie chez des mammifères.

11. Cyclohexénone selon la revendication 9, caractérisée en ce qu'elle peut atténuer les dommages à des organes et tissus provoqués par le LED, sur la base d'une diminution du titre des anticorps antinucléaires (AAN) chez des mammifères.

12. Cyclohexénone selon la revendication 11, caractérisée en ce que les anticorps antinucléaires sont des anticorps antinucléaires anti-ADN double brin.

13. Composition pharmaceutique utilisée pour traiter des maladies auto-immunes, caractérisée en ce qu'elle com- prend au moins un principe actif constitué de la cyclohexénone selon la revendication 1, et un excipient acceptable d'un point de vue pharmaceutique.

14. Composition pharmaceutique selon la revendication 13, caractérisée en ce que la maladie auto-immune est le lupus érythémateux disséminé (LED).

15. Composition pharmaceutique utilisée pour traiter des maladies auto-immunes, caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un principe actif constitué de la cyclohexénone selon la revendication 6, et un support acceptable d'un point de vue pharmaceutique.

16. Composition pharmaceutique selon la revendication 15, caractérisée en ce que la maladie auto-immune est le lupus érythémateux disséminé (LED),