FR2915487A1 - Ensemble et procede pour analyse microbiologique - Google Patents

Abstract

L'ensemble comporte une unité de filtration (1) et une cassette de gélose (80), l'unité (1) et la cassette (80) étant adaptées à coopérer pour occuper une position emboîtée où une membrane (3) recouvre ladite gélose (88), ladite unité (1) et ladite cassette (80) étant chacune munies d'une butée intermédiaire (26, 100), au moins l'une des deux butées (100) étant effaçable pour permettre à ladite unité (1) de passer d'une position intermédiaire, dans laquelle ladite membrane est à l'écart de ladite gélose, à ladite position emboîtée.Le procédé comporte les étapes de sélectionner un tel ensemble, d'engager ladite unité (1) sur ladite cassette (80) jusqu'à ce que la butée intermédiaire (26) de ladite unité (1) vienne au contact de la butée intermédiaire (100) de ladite cassette (80), et l'étape d'effacer ladite butée effaçable (100) pour permettre à ladite unité (1) de passer de ladite position intermédiaire à ladite position emboîtée.

Description

La présente invention concerne l'analyse microbiologique d'un échantillon

de liquide en écoulement sous pression. On connaît déjà, notamment par le brevet français 2 802 942, des unités de contrôle microbiologique d'échantillon de liquide sous pression comportant une membrane microporeuse au travers de laquelle est filtré le liquide sous pression. De telles unités comportent un corps d'admission du liquide à filtrer et un corps de drainage de ce liquide, les corps d'admission et de drainage de cette unité se verrouillant l'un à l'autre de part et d'autre de la membrane filtrante en la pinçant annulairement par l'intermédiaire d'un joint.

Le verrouillage est obtenu par des pattes d'encliquetage sécables qui sont brisées après filtration pour désolidariser les deux corps et ainsi permettre d'accéder à la membrane, celle-ci pouvant alors être saisie par son bord par une pincette pour être déposée sur la surface supérieure d'une gélose préalablement coulée dans une cassette de mise en culture, telle qu'une boîte de pétri par exemple. L'invention vise à fournir un ensemble pour analyse microbiologique similaire mais à la fois plus simple et plus sûr à manipuler (diminution des risques de détection de faux positifs) tout en optimisant les performances de mise en culture des microorganismes éventuellement recueillis sur la membrane (diminution des risques de détection de faux négatifs). Elle propose à cet effet, un ensemble pour analyse microbiologique comportant une unité de filtration et une cassette de gélose, ladite unité de filtration comportant une membrane de filtration et un corps auquel est associée ladite membrane, ladite cassette comportant un corps renfermant ladite gélose, celle-ci présentant une surface prévue pour être recouverte par ladite membrane, caractérisé en ce que le corps de l'unité de filtration et le corps de la cassette sont adaptés à coopérer pour occuper une position emboîtée où la membrane recouvre ladite surface de ladite gélose, le corps de ladite unité et le corps de ladite cassette étant chacun munis d'une butée intermédiaire avec, lorsque lesdites butées sont au contact l'une de l'autre, l'unité de filtration et la cassette de gélose qui sont dans une position intermédiaire dans laquelle ladite membrane est à l'écart de ladite gélose, au moins l'une des deux butées étant effaçable pour permettre à ladite unité de filtration de passer de ladite position intermédiaire à ladite position emboîtée. Le positionnement intermédiaire de l'unité de filtration sur la cassette augmente la reproductibilité des gestes de l'opérateur en assurant un pré-positionnement et un centrage de l'unité sur la cassette avant d'appliquer la membrane sur la gélose ce qui rend plus simple et sûr le travail de l'opérateur. La présence d'une butée effaçable garantit quant à elle une mise en contact uniforme de la membrane sur la gélose lorsqu'elle s'efface ce qui minimise significativement les risques de formation de poches d'air entre la membrane et la gélose, de telles poches pouvant empêcher localement la croissance des microorganismes présents sur la membrane et ainsi être à l'origine de faux négatifs. De plus un tel ensemble permet de ne pas avoir à désolidariser la membrane de l'unité de filtration. Après filtration l'opérateur n'entre au contact que du corps de l'unité de filtration sans jamais avoir à manipuler la membrane avec des pincettes par exemple, comme dans l'ensemble de l'art antérieur susmentionné, minimisant ainsi significativement les risques de contamination. Grâce à l'ensemble selon l'invention, l'optimisation et la simplification conjointe des opérations de transfert de la membrane sur la cassette de gélose puis d'application de cette membrane sur la gélose permettent ainsi de réduire les risques d'analyse microbiologique erronée que ce soit par détection de faux positifs ou de faux négatifs. Selon des caractéristiques préférées, pour des raisons de simplicité et de commodité tant à la fabrication qu'à l'utilisation : - ladite butée effaçable est adaptée à s'effacer lorsqu'un effort de rapprochement entre l'unité et la cassette dépasse un seuil prédéterminé ; ladite butée effaçable appartient à ladite cassette ; -ladite butée effaçable est reliée à une paroi dudit corps de la cassette par au moins une portion frangible ; - ladite butée effaçable est à une bague annulaire ; - ladite unité comporte une paroi flexible, fermant une chambre délimitée en outre par une paroi du corps de l'unité de filtration et par ladite membrane ; - ladite paroi flexible appartient à un couvercle emboîté dans le corps de ladite unité ; - ledit corps de l'unité de filtration comporte également des moyens de maintien de ladite unité dans sa position emboîtée à ladite cassette ; - la butée intermédiaire du corps de ladite unité est une paroi tubulaire que comporte ledit corps ; le corps de l'unité et le corps de la cassette sont également chacun munis d'une butée de fin de course avec lesdites butées de fin de course qui sont au contact l'une de l'autre dans ladite position emboîtée ; - la butée de fin de course du corps de l'unité de filtration est une paroi interne entourée par la paroi formant ladite butée intermédiaire ; ladite membrane est scellée contre ladite paroi interne ; ladite butée de fin de course de la cassette est une paroi située à la périphérie de ladite gélose ; - ladite cassette comporte une paroi tubulaire de laquelle s'étend transversalement à elle, d'un premier côté de ladite paroi, ladite butée intermédiaire et, d'un second côté de ladite paroi, ladite butée de fin de course ; et/ou - ladite gélose présente une forme bombée, ladite surface de gélose prévue pour être recouverte par ladite membrane étant convexe.

L'invention vise également sous un deuxième aspect, un procédé caractérisé en ce qu'il comporte l'étape de : sélectionner un ensemble d'analyse tel qu'exposé ci-dessus ; - engager ladite unité sur ladite cassette jusqu'à ce que la butée intermédiaire du corps de ladite unité vienne au contact de la butée intermédiaire du corps de ladite cassette ; et - effacer ladite butée effaçable pour permettre à ladite unité de passer de ladite position intermédiaire à ladite position emboîtée.

Selon des caractéristiques préférées, pour des raisons de simplicité et de commodité tant à la fabrication qu'à l'utilisation : - on sélectionne comme dite unité de filtration une unité comportant une paroi flexible fermant une chambre délimitée en outre par une paroi du corps de l'unité de filtration et par ladite membrane, l'étape d'effacement de ladite butée effaçable comportant l'étape d'exercer au delà d'un seuil prédéterminé un effort de rapprochement entre ladite unité et ladite cassette en prenant appui sur ladite paroi flexible de ladite unité ; on sélectionne comme dite paroi flexible une paroi adaptée à se déformer sous un effort moindre que l'effort d'effacement de ladite butée ; - ledit procédé comporte, préalablement à l'étape d'engagement de ladite unité sur ladite cassette, une étape d'échantillonnage et, postérieurement à l'étape d'effacement de ladite butée, une étape de mise en croissance des micro-organismes recueillis sur ladite membrane lors de ladite étape d'échantillonnage ; et/ou ladite étape d'échantillonnage comporte les étapes de : • sélectionner une unité de filtration qui comporte un film pelable ; • filtrer un volume prédéterminé de liquide au travers de ladite unité ; et • peler ledit film. Les caractéristiques et avantages de l'invention ressortiront de la description qui suit, donnée à titre d'exemple préféré, mais non limitatif, en référence aux dessins annexés, sur lesquels : - la figure 1 est une vue en perspective d'un ensemble conforme à l'invention dans laquelle une unité de filtration munie d'une membrane de filtration et une cassette de gélose que comporte cet ensemble sont représentées dans leur position d'emboîtement l'une dans l'autre ; -la figure 2 est une vue similaire à la figure 1 mais présentant isolément l'unité de filtration que comporte cet ensemble avant que ne soit pelé de cette unité un film de protection de la membrane de filtration; - la figure 3 est une vue similaire à la figure 2 mais présentant cette unité en éclaté ; - la figure 4 est une vue élévation-coupe de cette unité prise selon un plan médian de symétrie ; - la figure 5 est une vue en perspective présentant isolément un corps que comporte cette unité de filtration prise du côté où la membrane est scellée à ce corps ; - la figure 6 est une vue similaire à la figure 1 mais présentant isolément la cassette de gélose que comporte cet ensemble dans laquelle est emboîté un couvercle supplémentaire recouvrant la gélose ; - la figure 7 est une vue similaire à la figure 6 mais présentant cette cassette en éclaté ; - la figure 8 est une vue en élévation-coupe de cette cassette prise selon un plan médian de symétrie ; - les figures 9 à 12 sont quatre vues en élévation-coupe illustrant respectivement l'étape d'approche de l'unité de filtration sur la cassette de gélose, l'étape intermédiaire de centrage de cette unité sur la cassette, l'étape de déformation d'une paroi flexible que comporte un couvercle de l'unité de filtration avant effacement d'une bague sécable que comporte la cassette puis l'étape de recouvrement de la gélose par la membrane après effacement de cette bague ; et - les figures 13 et 14 sont respectivement une vue en perspective- coupe et une vue en élévation de cet ensemble dans sa position intermédiaire de centrage telle qu'illustrée en figure 10. L'unité pour le contrôle microbiologique 1 représentée en figures 1 à 4 comporte un corps 2, une membrane 3, un fritté poreux 4, une éponge en disque 5, un film plastique pelable 6 et un couvercle 7.

L'unité comporte également deux valves anti-retour en bec de canard 8 et 9 et un insert femelle 10. Le corps 2 est en polycarbonate et est réalisé par moulage d'une seule pièce. Ce corps, présenté isolément en figure 5, comporte une paroi externe 15 interrompue au niveau de renfoncements 47, 48, une paroi interne tronconique 16 convergente vers la membrane 3, une paroi transversale annulaire 17 ainsi qu'une paroi intercalaire 26 disposée entre les parois 15 et 16, les parois 16 et 26 se rejoignant au niveau de la paroi 17. Les parois 15 et 16 sont reliées l'une à l'autre par la paroi 17.

La paroi 16 présente un orifice 19 ménagé entre la portion 41 de plus grand diamètre de cette paroi 16 et la portion 40 de plus petit diamètre de cette paroi 16 (figure 4). L'orifice 19 est situé à l'extrémité d'un conduit 22 (figure 3), ce conduit débouchant à l'extérieur de l'unité, du côté opposé à l'orifice 19, par un orifice 20 ménagé dans la paroi 15. Diamétralement opposé à cet orifice 20, est également ménagé dans la paroi 15 un second orifice 21 (figure 4) situé à l'extrémité d'un conduit 23. Le conduit 23 présente une portion coudée de sorte qu'il débouche à l'opposé de l'orifice 21, dans l'espace situé entre les parois 16 et 26 par un orifice 25. La valve 8 est reçue à emboîtement dans le conduit 22 au niveau de la paroi 16, en étant centrée autour de sa collerette 28 et en butée contre le corps 2 par sa collerette 28'. De la même façon, la valve 9 est reçue à emboîtement dans le conduit 23, la valve étant centrée autour de sa collerette 29, la collerette 29' de cette valve étant en butée contre la portion de paroi entourant l'orifice 25. Les valves 8 et 9 sont tarées pour ne s'ouvrir qu'au-delà d'une certaine valeur de pression lorsqu'un fluide est appliqué sous pression dans le sens d'écoulement qui va de l'orifice d'entrée 20 vers l'orifice de sortie 21 et pour rester fermées sinon. Une fois la valve 8 insérée, l'insert 10 est également reçu à emboîtement dans le tronçon de conduit 22 situé du côté de l'orifice 20, centré autour de sa collerette 27, la collerette annulaire 27' de cet insert venant en butée contre la surface externe de la paroi cylindrique 15 de sorte que l'orifice 12 de cet insert, à l'opposé de la valve 8, est situé au voisinage de l'orifice 20 du corps 2. L'insert 10 est ici un embout Luer femelle, l'étanchéité entre cet embout et le corps 2 étant obtenue par une soudure ultrason réalisée sur le pourtour de cet insert. Comme pour l'insert 10, le conduit 23 et les parois l'entourant forment 30 également un embout Luer femelle. Les orifices 12 et 21 sont chacun obturés par une languette pelable en matière plastique souple (non représentée) de façon à garantir l'intégrité des conduits 22 et 23 en les protégeant de l'air, potentiel source de contamination microbiologique. Du côté de la portion 41 de la paroi tronconique 16, est emboîté en force le couvercle 7 en matière plastique souple.

Le corps 2 comporte également une nervure annulaire en pointe 46 sur la tranche de la portion tronconique 41 tournée vers l'extérieur de l'unité et adaptée à assurer l'étanchéité avec ce couvercle tandis que la paroi 26 présente huit facettes 51 adaptées à maintenir, comme on le verra ci-après, l'unité de filtration et la cassette de gélose dans leur position d'emboîtement.

Le couvercle 7 est en polypropylène et comporte une paroi d'obturation 30, une charnière annulaire 31, un bandeau cylindrique d'emboîtement 32 et une collerette annulaire 33. La paroi d'obturation 30 est reliée par la charnière annulaire 31 au bandeau cylindrique d'emboîtement 32 et à la collerette 33.

Dans sa position emboîtée contre la paroi tronconique 41, le bandeau cylindrique 32 prend appui contre la surface externe de cette portion par l'intermédiaire d'une nervure annulaire d'étanchéité 34. La charnière annulaire 31 présente des portions amincies adaptées à faciliter la déformation du couvercle.

La membrane 3, d'un diamètre de 55 mm, est en ester de cellulose (elle peut également être réalisée en polycarbonate ou en PVDF). Ce matériau permet notamment d'obtenir une micro-porosité permettant de laisser passer les liquides tout en retenant les différents micro-organismes qu'ils contiennent. Cette membrane est scellée à sa périphérie contre la surface 44 de la portion de paroi 40, cette portion formant un rebord annulaire. Sous cette membrane, est disposé le fritté poreux en disque 4 de diamètre plus grand que celui de la membrane, de sorte qu'il est disposé contre la portion 40 en s'étendant au-delà de cette portion et en soutenant la membrane sur toute sa surface (figures 3 et 4).

Sous ce fritté, est disposée l'éponge en disque 5 centrée par rapport au fritté. Le fritté poreux 4 est supporté par l'intermédiaire de l'éponge 5 par un film en polyéthylène 6 scellé contre la surface 50 de la paroi cylindrique 26, de sorte que ce film recouvre hermétiquement et entièrement l'éponge 5, le fritté poreux 4 et la membrane 3 tout en assurant un maintien en position par l'éponge 5 du fritté 4 contre la membrane 3 et la portion de paroi 40. Ce film est scellé en plusieurs bandes (non visibles sur les figures) au fritté 4 de façon à maintenir solidaires ce film, ce fritté et l'éponge disposée entre eux. L'unité de contrôle, prête à l'emploi (avec le couvercle 7 emboîté dans le corps 2 et le film 6 scellé à ce corps) présente donc deux parois transversales flexibles et détachables (la paroi 30 associée à la charnière 31 et le film 6) globalement parallèles entre elles, fermant en haut et en bas la chambre de filtration délimitée par le corps 2, la paroi 30 (respectivement le film 6) présentant une face 38 (respectivement 39) tournée vers l'extérieur de l'unité. La paroi 30 et le film 6 sont maintenus par de simples phénomènes d'adhérence (par friction en engagement à force pour la paroi 30, grâce au bandeau 32 et à la nervure 34, et par scellement ou collage hermétique pour le film 6). Plus précisément, et comme on le verra ci-après, le couvercle 7 ferme un volume d'accueil 43 du liquide situé entre la membrane 3, la paroi tronconique 16 et ce couvercle, tandis que le film plastique 6 délimite partiellement avec la membrane 3 un volume de drainage 45 de ce liquide situé sous la membrane et comportant l'espace situé entre cette membrane et le film 6. Ce volume communique avec le volume annulaire 49 situé entre la portion de paroi 40 et la paroi 26 par lequel transite, comme on le verra ci-après, le liquide (après avoir été reçu dans le volume d'accueil 43, puis drainé dans le volume de drainage 45) pour que ce liquide soit guidé par le conduit 23 vers l'orifice de sortie 21. Cette unité, préalablement stérilisée par ondes gamma, est conditionnée dans un sachet plastique (non représenté) constitué de deux feuilles thermoplastiques reliées l'une à l'autre par un cordon de soudure, un tronçon de ce cordon de soudure étant pelable manuellement.

On va maintenant décrire la cassette de gélose 80 à l'aide des figures 6 à 8. La cassette de gélose 80 présente un corps de cassette 81 et deux couvercles 82 identiques. Le corps 81 est de forme générale cylindrique et présente une première paroi cylindrique 83, une deuxième paroi cylindrique 84, un plateau grillagé 85, un balcon 86 et plusieurs dents 87. Le paroi 84 entoure la paroi 83 et est reliée à elle par une paroi transversale 99.

De la paroi 84 s'étend transversalement, du côté opposé à la paroi 99, une bague 100 reliée à cette paroi par quatre languettes frangibles 101 régulièrement espacées. Le grillage 85 est composé d'une série de barreaux 94 qui partent de la surface de la paroi 83 tournée vers l'intérieur de la cassette en direction du centre géométrique de cette paroi cylindrique, ces tiges étant reliées entre elles par des nervures circulaires (non visibles) de façon à former ce grillage. Le balcon 86 est relié à la paroi 84 du côté opposé à la paroi 99. Ce balcon présente une série de dents 87 régulièrement espacées faisant saillie parallèlement à la paroi 84.

Les couvercles 82 présentent chacun une paroi bombée 90 reliée par un bandeau cylindrique 91 à une collerette 92. La collerette 92 présente une nervure annulaire 93 faisant saillie du côté du bandeau 91. Une gélose 88 à base d'Agar est coulée sur le grillage 85 de la cassette 60 (alors en position retournée par rapport à la figure 8, le bouchon 82 situé au voisinage des dents 87 ayant été préalablement retiré) de façon à recouvrir ce grillage et à présenter, en direction du couvercle 82 n'ayant pas été retiré, une surface convexe 89 prévue pour être recouverte par la membrane 3. Chaque couvercle 82 d'une cassette de gélose prête à l'emploi (figure 12) est emboîté contre un bord libre respectif de la paroi 84 (ces bords étant alors disposés entre le bandeau 91 et la nervure 93 du couvercle 82 correspondant) de sorte que les surfaces concaves 97 des couvercles sont tournées vers le support grillagé 85, la paroi bombée 90 du couvercle 82 le plus proche de la gélose longeant du côté de sa surface concave 97 la surface convexe 89 de la gélose, en la protégeant ainsi de l'air. La paroi 99 présente plusieurs orifices 95 formant évent pour éviter que la gélose 88 ne se ventouse à ce couvercle 82 lorsqu'on le retire.

La cassette de gélose est également conçue afin de permettre, pour simplifier le stockage, l'emboîtement avec d'autres cassettes de gélose identiques, le couvercle supérieur de la boîte de gélose inférieure venant prendre appui contre le couvercle inférieur de la boîte de gélose supérieure, les bords libres des dents 87 de la boîte supérieure entourant partiellement ces deux couvercles pour empêcher tout glissement d'une cassette par rapport à une autre. On va maintenant décrire comment est réalisé un contrôle microbiologique utilisant une unité et une cassette conformes à l'invention. Dans un premier temps l'opérateur réalise une étape d'échantillonnage, c'est-à-dire de réalisation d'un échantillon à analyser (ici une membrane susceptible de contenir des micro-organismes). Pour cela, l'opérateur ouvre le sachet individuel (en écartant les deux feuilles thermoplastiques au niveau du cordon de soudure pelable) dans lequel est contenu une unité 1 pour l'en extraire en la saisissant au niveau des renfoncements 47 et 48 du corps 2. L'unité est ensuite engagée dans une pince de serrage (non réprésentée) présentant deux mâchoires contres lesquelles viennent prendre appui le couvercle 7 et le film 6 pour leur permettre de résister à la pression de liquide en écoulement.

Une fois l'unité serrée par la pince, l'opérateur pèle le film plastique (non représenté) obturant l'orifice d'entrée 12 de l'unité et connecte ensuite l'embout Luer femelle d'entrée 10 de l'unité à un embout Luer mâle (non représenté) relié à un canal de remplissage en communication par un robinet (non représenté) à un réservoir de liquide sous pression (non représenté).

L'opérateur pèle ensuite le film plastique obturant l'orifice de sortie 21 pour connecter l'embout Luer femelle de sortie à un canal de vidange (non représenté). L'opérateur manoeuvre ensuite le robinet de sorte que la chambre de filtration est portée à la même pression que le liquide, par exemple 3 bars.

Le liquide traverse alors le conduit 22 dans le sens de la flèche B (figure 4), la pression étant suffisante pour ouvrir les clapets de la valve 8, puis remplit le volume d'accueil 43 et commence à traverser la membrane 3 sur toute son épaisseur dans le sens de filtration axial représenté par la flèche A (figure 4).

Cette membrane étant scellée hermétiquement contre la surface 44 de la paroi 40, le liquide ne peut s'échapper du volume d'accueil 43 qu'en traversant la membrane 3 sur toute son épaisseur. Une fois que ce liquide a été filtré au travers de la membrane, il pénètre 5 dans le volume de drainage 45 au sein du fritté poreux 4 et le traverse au moins partiellement. La majeure partie du liquide ne traverse qu'une partie de l'épaisseur du fritté, pour s'échapper de ce fritté par sa tranche 4' (figure 4). Le volume de drainage est ainsi essentiellement localisé dans le 10 volume occupé par le fritté 4 et dans le volume s'étendant radialement (transversalement par rapport à la direction axiale de filtration) autour de ce fritté situé au voisinage de la tranche 4'. Le liquide se déplace ensuite du volume de drainage 45 vers le volume de transit 49 situé entre la paroi 40 et la paroi 26, réparti autour de la membrane 3, 15 de sorte que le liquide est conduit jusqu'à la valve 9. Les clapets de cette valve, comme ceux de la valve 8, sont adaptés à s'ouvrir aux pressions de fonctionnement de l'unité, le liquide pouvant ainsi être évacué par l'orifice 21 en cheminant au travers du conduit 23. Dans le cas où l'opérateur intervertit par erreur les orifices d'entrée et 20 de sortie, les valves anti-retour 8 et 9 empêchent le liquide de traverser l'unité dans le sens qui entraînerait, au niveau de la membrane, 3 une différence de pression la déformant du côté opposé au fritté la soutenant et pouvant la déchirer. Une fois tout le liquide filtré, l'opérateur ferme le robinet d'arrivée du liquide, déconnecte les canaux de remplissage et de vidange de l'unité 1 et extrait 25 l'unité 1 de la pince. L'unité extraite de cette pince, la membrane 3 chargée d'eau est soutenue par le fritté 4 afin d'éviter qu'elle ne se déchire. L'opérateur procède ensuite à une opération de purge du liquide contenu dans l'unité en connectant cette unité par l'orifice de sortie 21 à une pompe à vide pour appliquer une dépression par le conduit 23 permettant 30 d'aspirer ce liquide. Lorsque, la majeure partie du liquide est purgée, les surfaces de la membrane sont mises au contact de l'air qui a pénétré dans le dispositif.

Le phénomène de point de bulle fait qu'aucune bulle de gaz ne peut sortir de la membrane mouillée de sorte que cette membrane est rendue étanche à l'air en interdisant tout écoulement de liquide ou de gaz vers l'orifice de sortie 21.

En réponse à cette dépression, la pression extérieure au dispositif entraîne alors la déformation du film pelable 6 qui tend à se rapprocher du fritté poreux 4 et de la membrane 3. En conséquence, le film pelable 6 ainsi déformé vient presser l'éponge en disque 5 contre le fritté 4, de sorte que cette éponge ainsi pressée par le film 6 se vide partiellement du liquide qu'elle a absorbé au cours de la filtration. Une fois cette éponge pressée, l'aspiration est stoppée. Un évent (non visible) au bord de la valve 9 du dispositif laisse entrer un filet d'air stérile qui permet alors progressivement à la pression à l'intérieur des espaces 45 et 49 de s'équilibrer de nouveau avec la pression extérieure de sorte que le film 6 revient vers sa position initiale et l'éponge 5, relativement élastique et libérée (en l'absence de dépression) de la force exercée par le film pelable 6, retrouve sensiblement son volume initial sans être saturée en eau puisqu'une partie de l'eau qu'elle contenait a été purgée lors de son pressage. Par conséquent, lorsque l'éponge 5 reprend son volume elle absorbe simultanément l'éventuel liquide résiduel encore contenu dans le dispositif et en particulier le liquide encore présent dans les pores de la membrane 3 et dans les zones situées de part et d'autres des chemins préférentiels d'écoulement. Une fois cette opération de purge réalisée, l'opérateur saisit le film pelable 6 dans la zone du film située au voisinage d'un des renfoncements 47 ou 48 (figure 2) et retire ce film en le pelant, le plot 5 et le fritté poreux 4 étant alors entraînés avec le film 6 et retirés avec lui (le film étant scellé au fritté en plusieurs endroits), seule la membrane 3 restant solidaire de la paroi 40. On va maintenant décrire l'opération d'assemblage de l'unité de filtration 1 à la cassette de gélose 80 à l'aide des figures 9 à 14.

Dans un premier temps, l'opérateur retire le couvercle 82 protégeant la gélose 88 en saisissant la collerette 92 de ce couvercle pour le désengager de la paroi 84 (figure 13) et rendre ainsi accessible la surface 89 de la gélose.

L'opérateur, après avoir ainsi dégagé les surfaces 3" de la membrane et 89 de la gélose à mettre contact l'une de l'autre, dispose l'unité de filtration au dessus de la cassette comme illustré sur la figure 9 pour venir engager le corps de l'unité sur celui de la cassette.

Cette opération d'engagement se poursuit jusqu'à ce que la paroi 26 du corps de l'unité de filtration vienne en butée contre la bague 100 de la cassette, la surface 50 de la paroi 26 étant alors au contact de la surface 102 de la bague 100 comme illustré en figures 10, 13 et 14. L'unité et la cassette sont ainsi disposées dans une position intermédiaire de centrage l'une par rapport à l'autre dans laquelle la membrane 3 reste à l'écart de la gélose avec la surface 3" de cette membrane qui regarde la surface convexe 89 de la gélose, celles-ci étant disposées concentriquement l'une par rapport à l'autre. Dans cette position, l'opérateur exerce alors un effort de rapprochement entre l'unité et la cassette, soit en saisissant cette unité et cette cassette entre le pouce et les autres doigts d'une seule main soit en pressant cet ensemble contre sa main et un support fixe. L'opérateur exerce cet effort en appuyant sur le couvercle flexible 7 de l'unité de filtration afin d'entraîner une déformation de la paroi 30 réduisant le volume d'accueil 43 comme illustré en figure 11. La valve 8 et la membrane humide 3 fermant de façon étanche le volume 43 (en raison du phénomène de point de bulle), la réduction de ce volume d'accueil 43 est la cause d'une légère surpression. En réponse à cette surpression, la membrane 3 maintenue à sapériphérie contre la surface 44 prend alors une forme légèrement bombée (sa surface 3' devient concave et sa surface 3" convexe) vers l'extérieur de l'unité (figure 11), les centres des surfaces 3" et 89 se rapprochant ainsi l'un de l'autre sans pour autant se toucher. L'opérateur poursuit et augmente ensuite l'effort de rapprochement qu'il exerce entre l'unité et la cassette jusqu'à dépasser un seuil prédéterminé d'effort au-delà duquel les languettes frangibles 101 rompent. Il est à noter que le seuil de rupture des languettes frangibles et la flexibilité du couvercle sont choisis de façon à entraîner une déformation du couvercle suffisante pour que, avant que ce seuil ne soit atteint, cette déformation puisse permettre de créer dans la chambre 43 une surpression suffisante pour donner à la membrane la forme bombée recherchée. Lorsque l'effort de rapprochement dépasse ce seuil prédéterminé, la bague 100 est alors libérée et coulisse le long de la paroi 84 jusqu'à venir en butée contre le balcon 86. La butée constituée par cette bague s'efface ainsi de sorte que le corps de l'unité de filtration coulisse alors le long de la paroi 84 de la cassette, avec cette paroi 84 qui est alors engagée entre les parois 26 et 40 de l'unité de filtration.

Cet engagement se poursuit jusqu'à ce que l'unité et la cassette occupent leur position emboîtée de fin de course où la paroi 40 de l'unité est en butée contre la paroi 99 de la cassette, la surface 44 de la paroi 40 et la surface 103 de la paroi 99 étant alors au contact l'une de l'autre (figure 12). Au cours de cette étape, la surface 3" de la membrane et la surface 89 de la gélose viennent progressivement au contact l'une de l'autre, d'abord par leur centre puis jusqu'à leur périphérie de façon à chasser l'air vers la périphérie afin d'éviter la formation de poches d'air entre la membrane et la gélose qui pourraient gêner localement la croissance des micro-organismes (figure 12). Le coulissement de l'unité de filtration après effacement de la butée 100 fait ainsi passer cette unité de la position intermédiaire par rapport à la cassette à la position emboîtée dans cette cassette, l'opération de recouvrement de la gélose par la membrane étant réalisée rapidement et efficacement en une seule action de l'opérateur. Dans la position d'emboîtement l'unité de filtration est maintenue solidaire de la cassette grâce aux facettes 51 de la paroi 26 qui, en créant une déformation locale de cette paroi, permettent d'emboîter la paroi 84 de la cassette entre la paroi 26 et la paroi 40 de l'unité afin que l'unité et la cassette ne puissent être détachées l'une de l'autre sans avoir à exercer un effort important pour les désolidariser.

Cet ensemble est ensuite mis à incuber dans une chambre d'incubation le temps nécessaire pour faire croître les micro-organismes retenus dans la membrane 3 de sorte qu'ils soient rendus visibles et dénombrables.

Plusieurs ensembles peuvent être empilés les uns sur les autres dans la chambre d'incubation pour faciliter le stockage. Les ensembles peuvent également être retournés pour limiter la condensation se formant sur la gélose.

Pour effectuer le comptage des colonies une fois l'incubation réalisée, on peut, soit retirer le couvercle 7 et compter les colonies directement, soit, si ce couvercle est transparent, compter ces colonies au travers de ce couvercle. L'utilisation de languettes frangibles 101 permet d'assurer d'une unité à l'autre une bonne reproductibilité du seuil prédéterminé de l'effort à exercer pour amener la bague 100 à s'effacer, cette bague 100 constituant un indicateur d'inviolabilité de la cassette de gélose, la bague n'étant pas située à la même hauteur et étant mobile ou non selon que la cassette ait déjà été utilisée ou non. Dans une variante non illustrée la butée effaçable n'appartient pas à une bague sécable mais à des dents ou des nervures élastiquement déformables pouvant optionnellement servir, après coulissement de l'unité de filtration, de moyens de verrouillage (par encliquetage par exemple) de l'unité à la cassette dans la position d'emboîtement. Dans une autre variante encore la butée effaçable n'est pas formée sur la cassette de gélose mais sur l'unité de filtration.

Dans une autre variante encore, le couvercle 7 de l'unité est remplacé par une paroi flexible non détachable (adaptée à être bombée en direction de la membrane) ou par un film pelable similaire au film 6. La présente invention n'est pas limitée au mode de réalisation décrit et représenté mais englobe toute variante d'exécution.

Claims (20)

REVENDICATIONS

1. Ensemble pour analyse microbiologique comportant une unité de filtration (1) et une cassette de gélose (80), ladite unité de filtration (1) comportant une membrane de filtration (3) et un corps (2) auquel est associée ladite membrane (3), ladite cassette (80) comportant un corps (81) renfermant ladite gélose (88), celle-ci présentant une surface (89) prévue pour être recouverte par ladite membrane (3), caractérisé en ce que le corps (2) de l'unité de filtration (1) et le corps (81) de la cassette (80) sont adaptés à coopérer pour occuper une position emboîtée où la membrane (3) recouvre ladite surface (89) de ladite gélose (88), le corps (2) de ladite unité (1) et le corps (81) de ladite cassette (80) étant chacun munis d'une butée intermédiaire (26, 100) avec, lorsque lesdites butées (26, 100) sont au contact l'une de l'autre, l'unité de filtration (1) et la cassette de gélose (80) qui sont dans une position intermédiaire dans laquelle ladite membrane (3) est à l'écart de ladite gélose (88), au moins l'une des deux butées (100) étant effaçable pour permettre à ladite unité de filtration (1) de passer de ladite position intermédiaire à ladite position emboîtée.

2. Ensemble selon la revendication 1, caractérisé en ce que ladite butée effaçable (100) est adaptée à s'effacer lorsqu'un effort de rapprochement entre l'unité (1) et la cassette (80) dépasse un seuil prédéterminé.

3. Ensemble selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2, caractérisé en ce que ladite butée effaçable (100) appartient à ladite cassette (80).

4. Ensemble selon la revendication 3, caractérisé en ce que ladite butée effaçable (100) est reliée à une paroi (84) dudit corps (81) de la cassette (80) par au moins une portion frangible (101).

5. Ensemble selon la revendication 4, caractérisé en ce que ladite butée effaçable est à une bague annulaire (100).

6. Ensemble selon l'une quelconque des revendications 1 à 5, caractérisé en ce que ladite unité (1) comporte une paroi flexible (30) fermant une chambre (43) délimitée en outre par une paroi (40, 41) du corps (2) de l'unité de filtration (1) et par ladite membrane (3).

7. Ensemble selon la revendication 6, caractérisé en ce que ladite paroi flexible (30) appartient à un couvercle (7) emboîté dans le corps (2) de ladite unité (1).

8. Ensemble selon l'une quelconque des revendications 1 à 7, caractérisé en ce que ledit corps (2) de l'unité de filtration (1) comporte également des moyens de maintien (26, 51) de ladite unité dans sa position emboîtée à ladite cassette (80).

9. Ensemble selon l'une quelconque des revendications 1 à 8, caractérisé en ce que la butée intermédiaire du corps (2) de ladite unité (1) est une paroi tubulaire (26) que comporte ledit corps (2).

10. Ensemble selon l'une quelconque des revendications 1 à 9, caractérisé en ce que le corps (2) de l'unité (1) et le corps (81) de la cassette (80) sont également chacun munis d'une butée de fin de course (40, 99) avec lesdites butées de fin de course (40, 99) qui sont au contact l'une de l'autre dans ladite position emboîtée.

11. Ensemble selon la revendication 10, caractérisé en ce que la butée de fin de course du corps (2) de l'unité de filtration (1) est une paroi interne (40) entourée par la paroi (26) formant ladite butée intermédiaire.

12. Ensemble selon la revendication 11, caractérisé en ce que ladite membrane (3) est scellée contre ladite paroi interne (40).

13. Ensemble selon l'une quelconque des revendications 10 à 12, caractérisé en ce que ladite butée de fin de course de la cassette (80) est une paroi (99) située à la périphérie de ladite gélose (88).

14. Ensemble selon la revendication 13, caractérisé en ce que ladite cassette (80) comporte une paroi tubulaire (84) de laquelle s'étend transversalement à elle, d'un premier côté de ladite paroi (84), ladite butée intermédiaire (100) et, d'un second côté de ladite paroi, ladite butée de fin de course (99).

15. Ensemble selon l'une quelconque des revendications 1 à 14, caractérisé en ce que ladite gélose (88) présente une forme bombée, ladite surface (89) de gélose prévue pour être recouverte par ladite membrane (3) étant convexe.

16. Procédé d'analyse microbiologique, caractérisé en ce qu'il comporte les étapes de : - sélectionner un ensemble d'analyse selon l'une quelconque des revendications 1 à 15 ; - engager ladite unité (1) sur ladite cassette (80) jusqu'à ce que la butée intermédiaire (26) du corps (2) de ladite unité (1) vienne au contact de la butée intermédiaire (100) du corps (81) de ladite cassette (80) ; et - effacer ladite butée effaçable (100) pour permettre à ladite unité (1) de passer de ladite position intermédiaire à ladite position emboîtée.

17. Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que l'on sélectionne comme dite unité de filtration (1) une unité comportant une paroi flexible (30) fermant une chambre (43) délimitée en outre par une paroi (40, 41) du corps (2) de l'unité de filtration (1) et par ladite membrane (3), l'étape d'effacement de ladite butée effaçable (100) comportant l'étape d'exercer au delà d'un seuil prédéterminé un effort de rapprochement entre ladite unité (1) et ladite cassette (80) en prenant appui sur ladite paroi flexible (30) de ladite unité (1).

18. Procédé selon la revendication 17, caractérisé en ce que l'on sélectionne comme dite paroi flexible (30) une paroi adaptée à se déformer sous un effort moindre que l'effort d'effacement de ladite butée (100).

19. Procédé selon l'une quelconque des revendications 16 à 18, caractérisé en ce qu'il comporte, préalablement à l'étape d'engagement de ladite unité (1) sur ladite cassette (80), une étape d'échantillonnage et, postérieurement à l'étape d'effacement de ladite butée (100), une étape de mise en croissance des micro-organismes recueillis sur ladite membrane (3) lors de ladite étape d'échantillonnage.

20. Procédé selon la revendication 19, caractérisé en ce que ladite étape d'échantillonnage comporte les étapes de : - sélectionner une unité de filtration (1) qui comporte un film pelable (6) ; - filtrer un volume prédéterminé de liquide au travers de ladite unité (1) ; et - peler ledit film (6).