FR2845285A1 - Procede d'obtention d'un principe actif de stimulation du bronzage et principe actif obtenu - Google Patents
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Abstract
L'objet de l'invention est un procédé d'obtention d'un principe actif pour la stimulation de l'activité de la tyrosinase en sorte d'augmenter la synthèse de la mélanine, caractérisé en ce qu'il consiste à réaliser successivement les étapes suivantes :- solubilisation de poudre micronisée de Citrus Aurantium Dulcis dans une solution aqueuse à raison d'au moins 50 g/l,- hydrolyses enzymatiques simultanées ou successives avec au moins deux enzymes choisies parmi les familles carbohydrases et protéases,- séparation des phases soluble et insoluble par filtration, centrifugation ou décantation, et- sélection par filtration des polyphénols de type flavonones.
Description
PROCEbE D'OBTENTION D'UN PRINCIPE ACTIF DE STIMULATION DU BRONZAGE ET
PRINCIPE ACTIF OBTENU La présente invention concerne un procédé d'obtention d'un principe actif de
stimulation du bronzage ainsi que le principe actif obtenu.
Dans le monde occidental, particulièrement, il est un facteur de beauté
particulièrement recherché, le bronzage ou pour le moins un teint hâlé.
En effet, le bronzage est un signe extérieur de bonne santé, même si l'on sait que ces deux paramètres ne sont aucunement liés. Le corps a besoin d'une légère exposition journalière pour la synthèse de la vitamine b notamment mais une très
faible exposition est largement suffisante.
Plus spécifiquement, le bronzage est plutôt un signe social qui correspond à une 10 certaine capacité à prendre des vacances, au soleil et fait l'objet d'une des
bases des entretiens sociaux.
De ce fait, il existe une très forte demande de la part des consommateurs pour des méthodes ou des produits qui confèrent à la peau une coloration plus ou
moins prononcée.
La peau, les cheveux et les poils sont colorés par un pigment, la mélanine. Et existe deux types de mélanine, l'eumélanine de couleur brune et la
phaeomélanine de couleur jaune-orangée.
Ce pigment est synthétisé par des cellules spécifiques les mélanocytes au cours
d'une réaction, la mélanogenèse.
Plus cette réaction est mise en oeuvre, plus la mélanine est synthétisée et plus la
peau devient colorée.
En fait, cette réaction est une réaction de défense de la peau contre les agressions du soleil et plus particulièrement des rayonnements ultraviolets du soleil. On sait que ces UV ont des effets néfastes sur la santé car ces radiations sont 5 plus ou moins pénétrantes. La majorité des UVB, de l'ordre de 70%, est arrêtée par la couche cornée mais 20% pénètrent jusqu'au corps muqueux et 10%
atteignent le derme superficiel.
Quant aux UVA, ils traversent la couche cornée et 20 à 30% atteignent le derme profond. Ces UVA sont moins énergétiques mais n'en restent pas moins 10 dangereux et ceci en permanence, tout au long de l'exposition.
Face à ces agressions, les réactions de défense de la peau se traduisent par une forte production de mélanine mais aussi un épaississement de la couche cornée, une libération d'anti-oxydants ou encore par une mise en oeuvre de systèmes de
réparation de l'ADN.
Il faut inclure dans des compositions cosmétiques adaptées des actifs ayant une
action contre les dommages induits tels que les radicaux libres.
be plus, si l'on peut accélérer le processus de la mélanogenèse par ces mêmes
actifs, on peut réduire la durée d'exposition pour un même degré de hâle.
Hormis le bronzage de la peau obtenu par une stimulation de la mélanogenèse 20 sous l'effet des rayonnements ultraviolets, il existe d'autres moyens.
On connaît ainsi les autobronzants qui sont des crèmes ou des émulsions contenant des molécules comme la bHA (dihydroxyacétone) ou l'érytrulose (dérivé de la DHA), molécules qui réagissent avec les acides aminés des cellules épidermiques en développant une coloration de teinte et d'intensité variable qui 25 résiste à l'eau.
Néanmoins, ces autobronzants ne présentent pas une durabilité suffisante pour certains consommateurs et la coloration brune ne subsiste que grâce à des
applications régulières de ladite crème ou émulsion.
Il existent enfin des actifs cosmétiques pigmentogènes qui favorisent la
production de mélanine et donc contribuent à accélérer le bronzage.
Le procédé et le principe actif selon la présente invention se positionnent dans
cette catégorie.
Dans ce type d'action, on sait que la synthèse de la mélanine, sous ses différentes formes, résulte d'une succession de réactions enzymatiques qui
transforment un amino-acide, la tyrosine, en pigments mélaniques.
Les différentes étapes essentielles comprennent une hydroxylation de la tyrosine en dihydroxyphénylalanine (bOPA) par la tyrosinase. Cette même 10 enzyme catalyse aussi l'oxydation de la DOPA en tbOPAquinone.
Par des réactions successives, cette DOPAquinone en présence de peptides tels que le glutathion et d'un amino-acide spécifique la cystéine, conduit à la synthèse
de phaeomélanine et de d'eumélanine.
Le but de la présente invention est de proposer un procédé d'obtention d'un 15 principe actif qui stimule cette activité de la tyrosinase et augmente donc la
synthèse de la mélanine.
De ce fait, en stimulant cette synthèse, la pigmentation se renforce et joue son
rôle protecteur au niveau de la peau en assurant une meilleure photoprotection.
La mélanine permet d'absorber plus de 90% des rayonnements ultraviolets ayant 20 franchi la couche cornée. Les polymères de mélanine sont capables d'absorber les photons UV et les lipides cellulaires. La mélanine constitue des pièges à
radicaux libres protégeant ainsi les mélanocytes.
Le procédé d'obtention et les caractéristiques du principe actif obtenu sont maintenant décrits en détail ainsi que les effets obtenus mesurés. 25 Les figures annexées représentent: - figure 1A, une vue d'une coupe histologique d'un expIant témoin non traité, non irradié, - figure 1B, une vue d'une coupe histologique d'un expiant témoin positif traité et irradié avec des UVB, - figure 2A, une vue d'une coupe histologique d'un expiant traité par le placebo et non irradié, - figure 2B, une vue d'une coupe histologique d'un expiant traité par le placebo et irradié avec des UVB, figure 3A, une vue d'une coupe histologique d'un expiant traité avec le principe actif de la présente invention et non irradié, et
- figure 3B, une vue d'une coupe histologique d'un expiant traité avec le principe 10 actif de la présente invention et irradié.
1/ PRINCIPE ACTIF
1-1 Procédé d'obtention: Le procédé d'obtention du principe actif de la présente invention comprend les étapes suivantes: - solubilisation de poudre micronisée de Citrus Aurantium Dulcis (orangette
douce, fruit immature) dans une solution aqueuse à raison d'au moins 50 9/I.
- hydrolyses enzymatiques simultanées ou successives avec au moins deux enzymes choisies parmi les familles carbohydrases et protéases, séparation des phases soluble et insoluble par filtration, centrifugation ou 20 décantation, et
- sélection par filtration des polyphénols de type flavonones.
1-2 Taux de matière sèche:
La mesure consiste à partir d'un volume liquide et à mesurer la matière sèche 25 résiduelle après dessiccation.
Aussi, on verse 49 de liquide sur 49 de sable dans une cupule en aluminium.
On place la cupule à l'étuve à 105 C jusqu'à obtention d'un poids constant.
Le taux de matières sèches obtenu est compris entre 5 et 200 g/1, plus
particulièrement entre 50 et 85 g/I.
1-3 Mesure du pH:
Le pH est mesuré par la méthode potentiométrique, à température ambiante.
Le pH est compris entre 3,0 et 7,0 plus particulièrement entre 4,5 et 5,5. 1-4 Dosage des composés phénoliques: On sait que les composés phénoliques forment en présence de ferricyanure de
potassium des complexes colorés détectables.
Comme l'intensité de la coloration est proportionnelle à la quantité de composés 10 phénoliques, il suffit de comparer avec une gamme étalon d'hespéridine dans la
plage, dans ce cas 40 à 120 mg/I.
La teneur en composés phénoliques varie de 1,5 à 70 g/l, plus particulièrement de
à 30 9/I.
1-5 Caractérisation des composés phénoliques totaux: La caractérisation des composés phénoliques est réalisée par CLHP,
Chromatographie Liquide Haute Performance.
On utilise à cet effet une colonne de type C18, notamment celle commercialisée sous la dénomination Altech Altima C18., avec pré-colonne ayant les mêmes caractéristiques.
On utilise comme solvants une solution d'acide formique et de l'acétonitrile.
Un gradient entre ces deux solvants permet de séparer les différents composés phénoliques. Un détecteur à 280 nm permet l'analyse et de fournir les résultats suivants:
- flavonones (du type hespéridine) représentant au moins 35% et jusqu'à au 25 moins 50% des polyphénols totaux.
- flavones (type lutéoline-7-glucoside)
- acides hydroxycinnamiques (type acide chlorogénique et acide férulique).
1-6 Teneur en sucres totaux: La teneur en sucres totaux est obtenue par la méthode de bUBOIS (DUBOIS M & al, (1956) Analytical Chemistry, 28, N 3, p 350-356) En présence de phénol et d'acide sulfurique concentré, les sucres réducteurs 5 donnent un composé jaune-orangé. Après refroidissement, la)ensité Optique 1)0DO est lue au spectrophotomètre à 490 nm. Une courbe test est établie avec une gamme étalon d'une combinaison de 1/3 de mannose, 1/3 de glucose et 1/3 de
galactose, avec des concentrations de 25 à 100 p/l.
Les valeurs du taux de sucre sont lues sur la courbe directement et dans le cas 10 du principe actif selon la présente invention, on obtient des valeurs de sucres
totaux comprises entre 1,5 et 70 g/I, plus particulièrement 15 et 30 g/I.
2/ EVALUATION IN VITRO bE L' ACTIVITE PIGMENTANTE Le principe consiste àa étudier l'activité pigmentante du principe actif selon la 15 présente invention sur des cultures de mélanocytes par mesure de l'activité
tyrosinase et du taux de mélanine synthétisée.
Le protocole opératoire consiste à ensemencer de mélanocytes B16F1 dans un milieu complet en présence de 0,5 %, 1%/ et 2 % (volume /volume) du principe actif et on laisse incuber dans des conditions adaptées. On réalise parallèlement 20 un témoin positif en présence de (x-MSH (Melanocyte Stimuling Hormone),
hormone de stimulation de la mélanogenèse.
Les cellules sont trypsinées, comptées et lysées.
Après centrifugation, on dose la tyrosinase à partir du surnageant et le taux de
mélanine à partir du culot.
2-1 Dosage de l'activité tyrosinase On ajoute à ce surnageant de la LbOPA. Après incubation, la densité optique DO
mesurée à 490 nm permet de déterminer l'activité de la tyrosinase.
Les résultats sont les suivants: %0 d'activité tyrosinase / témoin Témoin + 103 + 21 Principe actif dosé à 0,5 % + 59 _ 10 Principe actif dosé à 1,0 % + 64 + 9 Principe actif dosé à 2,0 % + 74 + 12 On constate à travers les résultats une forte activité tyrosinase ayant des valeurs tout à fait comparables avec celles de l'hormone a-MSH, I'effet étant dose-dépendant. 2-2 bosage du taux de mélanine: Ce taux de mélanine est déterminé par rapport à une gamme étalon de mélanine
synthétique allant de 0 à 500 pg/l.
Les taux de mélanine synthétisée par des mélanocytes sont récapitulés dans le tableau suivant: Taux de mélanine synthétisée en% / témoin Témoin ca-MSH + 630 _ 92 Principe actif dosé à 0,5 % + 152 _ 41 Principe actif dosé à 1,0 %/+ 274 + 65 Principe actif dosé à 2,0 % + 309 42
On constate une très forte augmentation dose-dépendante du taux de mélanine 15 sous l'action du principe actif.
3/ EVALUATION SUR EXPLANTS bE PEAU bE L' ACTIVITE PIGMENTANTE
On choisit des explants de peau de phototype II (phototype clair).
Ces échantillons, conservés en milieu adapté, sont soumis à des irradiations d'UVB à 0,05 J/cm2, c'est-à-dire 1 à 2 fois la dose minimale pour provoquer un
érythème ce phototype clair.
Certains des explants sont traités en topique avec 2 mg/cm2 de principe actif 5 selon l'invention dosé à 5% pour certains, d'autres sont traités par un milieu placebo et d'autres encore dits témoins restent uniquement dans le milieu de conservation
Les explants sont irradiés tous les jours.
Les résultats sont déduits à partir des observations des coupes histologiques 10 traitées à l'argent par la technique dite de FontanaMasson.
On constate sur les différentes figures que les explants des témoins traités avec le placebo ont sensiblement la même pigmentation que les explants témoins
non irradiés.
Par contre, la pigmentation des explants traités avec le principe actif selon 15 l'invention, à 50o, est importante. Cette pigmentation est d'autant plus visible
que les explants sont soumis aux UVB.
4/ EVALUATION DE L'EFFET ACCELERATEUR bE BRONZAGE L'étude porte sur des volontaires humains, le but étant de quantifier l'effet 20 accélérateur de bronzage d'une émulsion contenant 5% de principe actif selon la
présente invention, pendant et après l'exposition aux UV.
A cet effet, les tests sont réalisés contre placebo sur deux zones des avantbras dont on mesure la couleur avec un Chromamètre, appareil du commerce de la
marque Minolta.
L'émulsion contenant le principe actif et l'émulsion placebo sont appliquées deux fois par jour pendant 15 jours puis ces zones sont irradiées deux fois à deux jours d'intervalle puis 2 jours après chaque irradiation, on mesure de nouveau la
couleur des zones retenues et traitées.
Les paramètres pouvant être mesurés: - L: la clarté (du sombre au pâle)
- a: la zone de couleur des verts aux rouges.
- b: la zone des bleus aux jaunes.
b est le paramètre étudié car il représente la pigmentation jaune mélanique
cutanée, caractéristique du bronzage.
Les résultats obtenus sont récapitulés dans le tableau suivant: Après lèe irradiation Après 2ème irradiation Principe Actif à 5% 0,61 1,26 Placebo 0,52 0,94 Effet Pigmentant / Placebo + 17 % + 34 % Après les irradiations, on a mis en évidence une augmentation importante de la pigmentation jaune cutanée de la peau qui se traduit par un bronzage plus intense. Une des formules cosmétiques utilisée et donc susceptible d'être réalisée 15 industriellement comprend: - Alcool d'arachidyle / Alcool de béhényle / Glucoside d'arachidyl (Montanov
2002): 3%
- Isononanoate d'isononyle (Lanol 99): 2% - Octanoate de cétéaryle (Lanol 1688): 10% - Polyacrylamide / Isoparaffine C13-14 / Laureth-7 (Sepigel 305): 2% - Principe actif: 5% - Eau: 77,5%
- Conservateur: 0,5%.
Le principe actif peut être introduit dans tout support cosmétique adapté tel
qu'une émulsion, une crème, une lotion, un onguent ou une dispersion.
Ainsi, un procédé de bronzage de la peau consiste à appliquer une composition contenant de 0,1 % et 10,0 % de principe actif pour provoquer une forte augmentation de la mélanine. Il
Claims (5)
1. Procédé d'obtention d'un principe actif pour la stimulation de l'activité de la tyrosinase en sorte d'augmenter la synthèse de la mélanine, caractérisé en ce qu'il consiste à réaliser successivement les étapes suivantes - solubilisation de poudre micronisée de Citrus Aurantium bulcis dans une solution aqueuse à raison d'au moins 50 g/I, - hydrolyses enzymatiques simultanées ou successives avec au moins deux enzymes choisies parmi les familles carbohydrases et protéases, - séparation des phases soluble et insoluble par filtration, centrifugation ou décantation, et
- sélection par filtration des polyphénols de type flavonones.
2. Principe actif obtenu par la mise en oeuvre du procédé selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il présente: - un taux de matière sèche compris entre 5 et 200 g/I - un pH compris entre 3,0 et 7,0 - un taux de composés phénoliques compris entre 1,5 et 70 g/I
- un taux d'au moins 35 % en flavonones des polyphénols, et - une teneur en sucres totaux comprise entre 1,5 et 70 g/I.
3. Principe actif selon la revendication 2, caractérisé en ce qu'il présente: - un taux de matière sèche compris entre 50 et 85 g/I 20 - un pH compris entre 4,5 et 5,5 - un taux de composés phénoliques compris entre 15 et 30 g/I - un taux d'au moins 50 % en flavonones des polyphénols, et
- une teneur en sucres totaux comprise entre 15 et 30 g/I.
4. Procédé de bronzage de la peau par application du principe actif selon la revendication 2 ou 3, caractérisé en ce qu'il provoque une forte augmentation de
la mélanine lorsque ledit principe actif est dosé entre 0,1% et 10,0 %.
5. Composition cosmétique destinée à favoriser le bronzage de la peau, 5 caractérisée en ce qu'elle comprend entre 0,1% et 10,0 % de principe actif selon la revendication 2 ou 3 sous une forme galénique telle qu'une crème, un onguent,
une émulsion ou encore une dispersion.
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