FR2844278A1

FR2844278A1 - New nucleic acids, useful for diagnosis of cancer and for drug screening, are variants of the kallikrein-2 and prostate-specific antigen genes, also derived polypeptides

Info

Publication number: FR2844278A1
Application number: FR0210975A
Authority: FR
Inventors: Laurent Bracco; Brigitta Brinkman; Fanny Coignard
Original assignee: ExonHit Therapeutics SA
Current assignee: ExonHit Therapeutics SA
Priority date: 2002-09-05
Filing date: 2002-09-05
Publication date: 2004-03-12

Abstract

Nucleic acid (I) which is: (a) any of 49 sequences, reproduced; (b) degenerate variants of (a); (c) the complementary strands of (a); and (d) specific fragments of (a)-(c), is new. Independent claims are also included for the following: (1) Polypeptides (II) encoded by (I), especially one comprising all or part of 118 sequences reproduced; (2) nucleic acid probes (III) that can detect (I) by selective hybridization; (3) primer (IV), and their pairs, that can amplify (I) selectively; (4) antibody (Ab) specific for (II); (5) diagnosis of a disease, or predisposition to it, by detecting (I) or (II) in a body sample; (6) kit for method (5); (7) selection or identification of active compounds from their ability to modulate expression or activity of (II) in a cell, in vivo or in vitro; (8) vector containing (I); (9) recombinant cell containing the vector of (8); and (10) product comprising (I), (III), the vector of (8), (II) or Ab, immobilized on a support.

Description

Variants de kallikrein-2 et kallikrein-3 humaines et leurs utilisations La présente invention concerne le domaine de la biologie, de la génétique et de la médecine. Elle concerne notamment de nouvelles séquences nucléotidiques associées à des événements d'épissage alternatif des gènes correspondant à l'antigène PSA (antigène spécifique de la prostate ou KLK3) et à la kallikréine- 2 (KLK2). L'invention concerne également des méthodes pour la détection de la présence ou pour la détermination du niveau d'expression de ces acides nucléiques ou des protéines correspondantes dans des échantillons biologiques, ainsi que des méthodes de sélection de molécules capables de moduler leur activité ou leur expression. The present invention relates to the field of biology, genetics and medicine. It relates in particular to new nucleotide sequences associated with alternative splicing events of the genes corresponding to PSA (prostate specific antigen or KLK3) antigen and to Kallikrein-2 (KLK2). The invention also relates to methods for detecting the presence or for determining the level of expression of these nucleic acids or the corresponding proteins in biological samples, as well as methods for selecting molecules capable of modulating their activity or their expression.

L'invention est particulièrement adaptée au dépistage ou au suivi de cancers, notamment de la prostate et notamment dans la différentiation entre le cancer de la prostate et l'hyperplasie bénigne de la prostate (BPH), ainsi qu'au développement de nouvelles approches thérapeutiques de ces maladies. The invention is particularly suitable for the detection or monitoring of cancers, in particular of the prostate, and in particular in the differentiation between prostate cancer and benign prostatic hyperplasia (BPH), as well as the development of new therapeutic approaches. of these diseases.

Les kallikréines correspondent à un groupe de protéines dont l'activité protéasique permet la modification post-traductionnelle de précurseurs protéiques vers des formes biologiquement actives. Certains membres de cette famille, la kallikréine-3, aussi connue sous la dénomination de PSA ( prostatespecific antigen ou antigène spécifique de la prostate), et plus récemment, la kallikréine-2 sont considérés comme les meilleurs marqueurs disponibles utilisables dans la détection, le diagnostique et le suivi du cancer de la prostate. Kallikreins are a group of proteins whose protease activity allows the post-translational modification of protein precursors to biologically active forms. Some members of this family, kallikrein-3, also known as PSA (prostatespecific antigen or prostate specific antigen), and more recently, kallikrein-2 are considered the best markers available for use in the detection, diagnosis and monitoring of prostate cancer.

L'utilisation de tests mesurant la quantité de PSA dans le sang a permis de diagnostiquer un nombre croissant de patients atteints de cancer de la prostate (Pca). Cependant, comme la PSA est également produite par les cellules épithéliales prostatiques non cancéreuses, il est souvent difficile de différencier les patients atteints de cancers de la prostate de ceux présentant un symptôme bénin hyperplasique (BPH). Dans le sérum, la PSA existe sous forme libre, non complexée et sous forme complexée, notamment à l'alpha-antichymotrypsine. The use of tests measuring the amount of PSA in the blood has made it possible to diagnose an increasing number of prostate cancer patients (Pca). However, since PSA is also produced by non-cancerous prostate epithelial cells, it is often difficult to differentiate between prostate cancer patients and those with benign hyperplastic symptoms (BPH). In serum, PSA exists in free, uncomplexed and complexed form, in particular with alpha-antichymotrypsin.

La mesure de ces différentes formes et de leurs rapports permet d'améliorer le facteur différentiateur entre Pca et BPH. The measurement of these different forms and their ratios improves the differentiating factor between Pca and BPH.

L'épissage alternatif constitue un mécanisme de régulation de l'expression des gènes permettant de générer de la diversité fonctionnelle à partir d'une information génétique limitée. Ce mécanisme, fortement régulé, peut subir des altérations au cours du développement de pathologies humaines. Ainsi, la dérégulation de la machinerie d'épissage dans les cancers peut permettre l'expression d'isoformes ou de variants spécifiquement exprimés dans certaines tumeurs humaines. Ces isoformes pourront avoir un rôle fonctionnel déterminant dans le développement ou le maintien de l'état pathologique. L'expression spécifique de telles isoformes constitue un événement de choix pour une approche rationnelle et ciblée de développement de médicaments et/ou de méthodes de diagnostique. Une technologie de profilage de l'expression génétique (DATAS) a été récemment développée pour identifier de façon systématique les gènes et, à l'intérieur de ces gènes, les domaines susceptibles d'être altérés par épissage alternatif (W099/46403). Alternative splicing is a mechanism for regulating gene expression to generate functional diversity from limited genetic information. This mechanism, highly regulated, can undergo alterations during the development of human pathologies. Thus, the deregulation of splice machinery in cancers may allow the expression of isoforms or variants specifically expressed in certain human tumors. These isoforms may have a decisive functional role in the development or maintenance of the pathological state. The specific expression of such isoforms is an event of choice for a rational and focused approach to drug development and / or diagnostic methods. Gene expression profiling (DATAS) technology has recently been developed to systematically identify genes and, within these genes, domains that may be altered by alternative splicing (WO99 / 46403).

La présente invention décrit à présent de nouveaux événements génétiques liés à des épissages alternatifs des gènes PSA et KLK2 dans des tissus prostatiques. La présente invention découle notamment de la construction d'un répertoire des altérations d'épissage associées à des tissus tumoraux de la prostate, et de l'identifications d'altérations structurales dans les gènes PSA et KLK2 ou dans les ARNm correspondants. La présente invention fournit ainsi de nouvelles approches thérapeutiques et diagnostiques des cancers, notamment du cancer de la prostate. The present invention now describes novel genetic events related to alternative splicing of PSA and KLK2 genes in prostatic tissues. The present invention results in particular from the construction of a repertoire of splicing alterations associated with tumor tissues of the prostate, and the identification of structural alterations in the PSA and KLK2 genes or in the corresponding mRNAs. The present invention thus provides new therapeutic and diagnostic approaches to cancers, in particular prostate cancer.

Plus particulièrement, une analyse qualitative différentielle a été effectuée à partir d'ARN extraits d'échantillons de tissus prostatiques provenant de zones tumorale et non tumorale de patients atteints de carcinomes de la prostate. Cette analyse a été effectuée par criblage différentiel qualitatif grâce à la mise en oeuvre de la technique DATAS (décrite dans la demande n W099/46403) More specifically, differential qualitative analysis was performed from RNA extracted from prostate tissue samples from tumor and non-tumor areas of prostate carcinoma patients. This analysis was carried out by qualitative differential screening using the DATAS technique (described in application No. WO99 / 46403).

qui présente des avantages inégalés. L'application de la technologie DATAS sur des ARNs issus de tissus prostatiques tumoraux et non-tumoraux a permis d'isoler divers fragments d'ADNc dérivés des ARNm de la kalikreine 2 et de la kalikreine 3 (PSA) humaines. Ces résultats ont ensuite permis d'identifier un certain nombre d'ADNc révélateurs d'événements liés à des épissages alternatifs. which has unparalleled benefits. The application of DATAS technology on RNAs derived from tumor and non-tumor prostate tissues made it possible to isolate various cDNA fragments derived from human kalikrein 2 and kalikrein 3 (PSA) mRNAs. These results then made it possible to identify a number of cDNAs indicative of events related to alternative splicing.

La présente invention décrit donc des événements moléculaires originaux qui peuvent aboutir à l'expression spécifique d'isoformes ou de variants de KLK3 (PSA) et de KLK2 dans les tissus prostatiques et plus spécifiquement dans les tissus cancéreux ou les tissus associés à une hyperplasie bénigne (BPH). La présente invention fournit des données moléculaires qui justifient l'utilisation d'un ou de plusieurs de ces variants comme cibles thérapeutiques et diagnostiques nouvelles et utilisables avantageusement dans le diagnostic et le traitement des cancers et notamment du cancer de la prostate. The present invention therefore describes novel molecular events that can result in the specific expression of isoforms or variants of KLK3 (PSA) and KLK2 in prostate tissues and more specifically in cancerous tissues or tissues associated with benign hyperplasia. (BPH). The present invention provides molecular data that justify the use of one or more of these variants as new therapeutic and diagnostic targets and advantageously used in the diagnosis and treatment of cancers and in particular of prostate cancer.

Un premier aspect de la présente demande concerne donc des variants de PSA et KLK2 humains, notamment des variants d'épissage. L'invention concerne les acides nucléiques correspondant à ces variants ou aux altérations spécifiques qu'ils présentent, ainsi que les protéines (ou polypeptides ou domaines protéiques) codés. A first aspect of the present application therefore relates to human PSA and KLK2 variants, especially splice variants. The invention relates to the nucleic acids corresponding to these variants or to the specific alterations they present, as well as the proteins (or polypeptides or protein domains) encoded.

Un autre aspect de la présente demande concerne des méthodes et outils pour détecter la présence de ces variants ou altérations dans des échantillons biologiques (sang, plasma, urine, sérum, salive, biopsies ou cultures cellulaires, etc. ), ou pour déterminer leur(s) quantité(s) ou proportion(s) respective(s). De tels outils comprennent notamment des sondes ou amorces nucléiques, des anticorps ou autres ligands spécifiques, des kits, supports, puces, etc. Les méthodes de détection peuvent inclure les méthodes d'hybridation, de PCR, de chromatographie, d'immunologie, etc. Ces méthodes sont particulièrement adaptées à la détection, la caractérisation, le suivi de la progression ou de Another aspect of the present application relates to methods and tools for detecting the presence of such variants or alterations in biological samples (blood, plasma, urine, serum, saliva, biopsies or cell cultures, etc.), or for determining their ( s) quantity (s) or proportion (s) respectively. Such tools include, in particular, nucleic probes or primers, antibodies or other specific ligands, kits, supports, chips, etc. Detection methods may include hybridization, PCR, chromatography, immunology, etc. These methods are particularly suitable for detecting, characterizing, monitoring the progression or

l'efficacité d'un traitement de cancers, notamment du cancer de la prostate, ou à la détermination d'une prédisposition. the effectiveness of a treatment of cancers, in particular of prostate cancer, or the determination of a predisposition.

Un autre aspect de la présente demande concerne des outils et méthodes pour la production de composés actifs sur les variants décrits, c'est-à-dire capables de moduler leur expression ou leur activité. Ces outils et méthodes incluent notamment des acides nucléiques, des vecteurs, des cellules recombinantes (ou préparations dérivées de telles cellules), des tests de liaison, etc. Another aspect of the present application relates to tools and methods for the production of active compounds on the described variants, i.e. capable of modulating their expression or activity. These tools and methods include nucleic acids, vectors, recombinant cells (or preparations derived from such cells), binding assays, and the like.

La présente invention est ainsi applicable au diagnostic et au développement de stratégies thérapeutiques de cancers, notamment de la prostate. The present invention is thus applicable to the diagnosis and development of therapeutic strategies for cancers, in particular of the prostate.

Variants de KLK2 et KLK3 Un premier aspect de la présente demande concerne donc des variants de KLK- 2 et KLK-3 (PSA), ou des altérations génétiques particulières affectant ces gènes (ou les ARN ou protéines correspondants). Un objet plus particulier de l'invention concerne des acides nucléiques correspondant à ces variants de PSA et KLK2 humains ou aux altérations spécifiques qu'ils présentent, ainsi que les protéines (ou polypeptides ou domaines protéiques) codées. Variants of KLK2 and KLK3 A first aspect of the present application therefore relates to variants of KLK-2 and KLK-3 (PSA), or specific genetic alterations affecting these genes (or the RNA or corresponding proteins). A more particular object of the invention relates to nucleic acids corresponding to these variants of human PSA and KLK2 or to the specific alterations that they present, as well as the proteins (or polypeptides or protein domains) encoded.

Un certain nombre d'isoformes des gènes KLK2 et KLK3 ont été décrites dans l'art antérieur. Ces isoformes correspondent toutes à la rétention totale d'un intron (David et.al (2002), Riegman et.al (1988), Riegman et.al (1991), Liu et.al (1999), Heuze et.al (1999), Tanaka et.al (2000)). La présente demande décrit maintenant l'existence de formes différentes des gènes PSA et KLK2, et leur corrélation à des situations pathologiques. A number of isoforms of the KLK2 and KLK3 genes have been described in the prior art. These isoforms all correspond to the total retention of an intron (David et.al (2002), Riegman et.al (1988), Riegman et.al (1991), Liu et.al (1999), Heuze et al ( 1999), Tanaka et al (2000)). The present application now describes the existence of different forms of the PSA and KLK2 genes, and their correlation to pathological situations.

Ces isoformes ont été identifiées à partir d'échantillons tumoraux. La description des ADNc et des protéines/polypeptides codés par ces ADNc est indiquée cidessous. Les séquences complètes sont fournies dans la Liste de Séquences annexée à la présente demande. These isoforms were identified from tumor samples. The description of the cDNAs and proteins / polypeptides encoded by these cDNAs is set out below. The complete sequences are provided in the Sequence List appended to this application.

Variants de KLK2: La numérotation des nucléotides se réfère au numéro d'accession de Genbank M18157 sauf autre précision. La protéine de référence est la KLK2 munie de son peptide signal. Variants of KLK2: The nucleotide numbering refers to the accession number of Genbank M18157 unless otherwise specified. The reference protein is KLK2 with its signal peptide.

KLK2-EHT002 (SEQ ID NO : 1) : Cette isoforme présente i) une rétention partielle d'une partie 5' de l'intron 2 (nt 1935-2020) et ii) une utilisation de deux sites cryptiques d'épissage dans la partie 3' de l'exon 3 (nt 3728) et la partie 5' de l'exon4 (nt 3937). Ces deux événements correspondent à des sites d'épissage consensuels. Cette isoforme KLK2-EHT002 possède un codon stop après l'exon 2 et code ainsi pour une protéine tronquée après le résidu n 69 (KLK2-EHT002prota / SEQ ID NO : 29 ). KLK2-EHT002 (SEQ ID NO: 1): This isoform has i) a partial retention of a 5 'part of intron 2 (nt 1935-2020) and ii) a use of two cryptic splice sites in the part 3 'of exon 3 (item 3728) and part 5' of exon4 (item 3937). These two events correspond to consensual splice sites. This isoform KLK2-EHT002 has a stop codon after exon 2 and thus encodes a truncated protein after residue n 69 (KLK2-EHT002prota / SEQ ID NO: 29).

54 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence KLK2EHT002protb / SEQ ID NO :30 . On peut remarquer que les nucléotides correspondant aux positions Genbank (M18157) 1821 et 3581 dans SEQ ID NO :1 correspondent à C et A alors que la référence Genbank indique T et G respectivement. Ces différences peuvent s'expliquer par l'existence d'un polymorphisme à ces positions, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Ces deux changements n'affectent pas la séquence protéique traduite. 54 amino acids can be cleaved to form the KLK2EHT002protb / SEQ ID NO: 30 sequence. It may be noted that the nucleotides corresponding to the positions Genbank (M18157) 1821 and 3581 in SEQ ID NO: 1 correspond to C and A whereas the reference Genbank indicates T and G respectively. These differences can be explained by the existence of a polymorphism at these positions, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. These two changes do not affect the translated protein sequence.

KLK2-EHT003 (SEQ ID NO : 2) : Cette isoforme présente i) une délétion totale de l'exon 2 et ii) une rétention d'une partie 5' de l'intron 4 (nt 4061-4097). Ces deux événements correspondent à des sites d'épissage consensuels. Cette isoforme KLK2EHT003 code pour une protéine comprenant 34 acides aminés supplémentaires au-delà du résidu thréonine numéro 15 (KLK2-EHT003prota / SEQ ID NO : 31). Ces 34 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence KLK2EHT003protb / SEQ ID NO: 32 . On peut remarquer que les nucléotides correspondant aux positions Genbank (M18157) 3774 et 5486 dans SEQ ID NO : 2 correspondent à C et T alors que la référence Genbank indique T et G respectivement. Ces différences peuvent s'expliquer par l'existence d'un KLK2-EHT003 (SEQ ID NO: 2): This isoform has i) a total deletion of exon 2 and ii) a retention of a 5 'portion of intron 4 (nt 4061-4097). These two events correspond to consensual splice sites. This isoform KLK2EHT003 encodes a protein comprising 34 additional amino acids beyond threonine number 15 (KLK2-EHT003prota / SEQ ID NO: 31). These 34 amino acids can be cleaved to form the sequence KLK2EHT003protb / SEQ ID NO: 32. It may be noted that the nucleotides corresponding to the positions Genbank (M18157) 3774 and 5486 in SEQ ID NO: 2 correspond to C and T while the reference Genbank indicates T and G respectively. These differences can be explained by the existence of a

polymorphisme à ces positions, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Ces deux changements n'affectent pas la séquence protéique traduite. polymorphism at these positions, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. These two changes do not affect the translated protein sequence.

KLK2-EHT004 (SEQ ID NO : 3) : Cette isoforme présente une délétion totale de l'exon 3. Cette isoforme KLK2EHT004 code pour une protéine comprenant 70 acides aminés supplémentaires au-delà du résidu thréonine numéro 15 (KLK2-EHT004prota / SEQ ID NO : 33). Ces 70 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence KLK2EHT003protb / SEQ ID NO : 34. Les 16 derniers acides aminés sont nouveaux et pourraient présenter un ou des épitopes spécifiques de cette isoforme, KLK2EHT004protc / SEQ ID NO: 35 . On peut remarquer que le nucléotide correspondant à la position Genbank (M18157) 4097 dans SEQ ID NO :3 correspont à A alors que la référence Genbank indique G. Cette différence peut s'expliquer par l'existence d'un polymorphisme à cette position, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Ce changement n'affecte pas la séquence protéique traduite. KLK2-EHT004 (SEQ ID NO: 3): This isoform has a total deletion of exon 3. This isoform KLK2EHT004 encodes a protein comprising 70 additional amino acids beyond threonine number 15 (KLK2-EHT004prota / SEQ ID NO: 33). These 70 amino acids can be cleaved to form the KLK2EHT003protb / SEQ ID NO: 34 sequence. The last 16 amino acids are new and could have one or more specific epitopes of this isoform, KLK2EHT004protc / SEQ ID NO: 35. It may be noted that the nucleotide corresponding to the position Genbank (M18157) 4097 in SEQ ID NO: 3 corresponds to A whereas the reference Genbank indicates G. This difference can be explained by the existence of a polymorphism at this position, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. This change does not affect the translated protein sequence.

KLK2-EHT006 (SEQ ID NO :4 ) : Cette isoforme présente une utilisation de deux sites cryptiques d'épissage dans la partie 3' de l'exon 3 (nt 3728) et la partie 5' de l'exon4 (nt 3937). Cet événement correspond à des sites d'épissage consensuels. Cette isoforme KLK2-EHT006 code pour une protéine de 149 acides aminés (KLK2EHT006prota / SEQ ID NO : 36). 134 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence KLK2-EHT006protb / SEQ ID NO 37. Les 12 derniers acides aminés sont nouveaux et pourraient présenter un ou des épitopes spécifiques de cette isoforme, KLK2-EHT006protc / SEQ ID NO : 38 . On peut remarquer que le nucléotide correspondant à la position Genbank (M18157) 3689 dans SEQ ID NO :4 correspont à T alors que la référence Genbank indique C. Cette différence peut s'expliquer par l'existence d'un polymorphisme à cette position, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne KLK2-EHT006 (SEQ ID NO: 4): This isoform has a use of two cryptic splice sites in the 3 'part of exon 3 (nt 3728) and the 5' part of exon4 (nt 3937) . This event corresponds to consensual splicing sites. This KLK2-EHT006 isoform encodes a protein of 149 amino acids (KLK2EHT006prota / SEQ ID NO: 36). 134 amino acids can be cleaved to form the sequence KLK2-EHT006protb / SEQ ID NO 37. The last 12 amino acids are new and could have one or more specific epitopes of this isoform, KLK2-EHT006protc / SEQ ID NO: 38. It may be noted that the nucleotide corresponding to the position Genbank (M18157) 3689 in SEQ ID NO: 4 corresponds to T while the reference Genbank indicates C. This difference can be explained by the existence of a polymorphism at this position, by errors in the referenced sequence, although one does not

peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Ce changement n'affecte pas la séquence protéique traduite. may exclude mutations introduced by the polymerase. This change does not affect the translated protein sequence.

KLK2-EHT007 (SEQ ID NO : 5) : KLK2-EHT007 présente une rétention de la partie 5' de l'intron 4. Cette isoforme KLK2-EHT007 code pour une protéine de 224 acides aminés (KLK2EHT007prota / SEQ ID NO : 39). 209 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence KLK2-EHT007protb / SEQ ID NO : 40 . Les 14 derniers acides aminés sont nouveaux et pourraient présenter un ou des épitopes spécifiques de cette isoforme, KLK2-EHT007protc / SEQ ID NO : 41 . KLK2-EHT007 (SEQ ID NO: 5): KLK2-EHT007 shows a retention of the 5 'portion of intron 4. This KLK2-EHT007 isoform encodes a protein of 224 amino acids (KLK2EHT007prota / SEQ ID NO: 39) . 209 amino acids can be cleaved to form the sequence KLK2-EHT007protb / SEQ ID NO: 40. The last 14 amino acids are new and could have one or more specific epitopes of this isoform, KLK2-EHT007protc / SEQ ID NO: 41.

KLK2-EHT008 (SEQ ID NO : 6) : Cette isoforme présente une utilisation d'un site cryptique d'épissage dans la partie 5' de l'exon4 (nt 3937). Cet événement correspond à des sites d'épissage consensuels. Cette isoforme KLK2-EHT008 possède un codon stop après l'exon 3 et code pour une protéine de 164 acides aminés (KLK2-EHT008prota / SEQ ID NO : 42). 149 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence KLK2-EHT008protb / SEQ ID NO : 43 . On peut remarquer que les nucléotides correspondant aux positions Genbank (M18157) 3947 et 3954 dans SEQ ID NO : 6 correspondent à C et T alors que la référence Genbank indique T et G respectivement. Ces différences peuvent s'expliquer par l'existence d'un polymorphisme à ces positions, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Ces deux changements n'affectent pas la séquence protéique traduite. KLK2-EHT008 (SEQ ID NO: 6): This isoform has a use of a cryptic splice site in the 5 'portion of exon4 (nt 3937). This event corresponds to consensual splicing sites. This isoform KLK2-EHT008 has a stop codon after exon 3 and encodes a protein of 164 amino acids (KLK2-EHT008prota / SEQ ID NO: 42). 149 amino acids can be cleaved to form the KLK2-EHT008protb / SEQ ID NO: 43 sequence. It may be noted that the nucleotides corresponding to the Genbank positions (M18157) 3947 and 3954 in SEQ ID NO: 6 correspond to C and T whereas the Genbank reference indicates T and G respectively. These differences can be explained by the existence of a polymorphism at these positions, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. These two changes do not affect the translated protein sequence.

KLK2-EHT009 (SEQ ID NO : 7) : KLK2-EHT009 présente i) une délétion d'une séquence dans l'exon 3 (nt 3671 - 3793) et ii) l'utilisation d'un site cryptique d'épissage dans la partie 5' de l'exon 4 (nt 3937) (site d'épissage consensuel). Cette isoforme KLK2-EHT009 code pour une protéine de 123 acides aminés (KLK2-EHT009prota / SEQ ID NO : 44 ). 108 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence KLK2EHT009protb / SEQ ID NO : 45 . Les 5 derniers acides aminés sont nouveaux KLK2-EHT009 (SEQ ID NO: 7): KLK2-EHT009 shows i) a deletion of a sequence in exon 3 (nt 3671 - 3793) and ii) the use of a cryptic splice site in the part 5 'of exon 4 (nt 3937) (consensual splicing site). This KLK2-EHT009 isoform encodes a protein of 123 amino acids (KLK2-EHT009prota / SEQ ID NO: 44). 108 amino acids can be cleaved to form the KLK2EHT009protb / SEQ ID NO: 45 sequence. The last 5 amino acids are new

et pourraient participer à un ou des épitopes spécifiques de cette isoforme, KLK2-EHT009protc / SEQ ID NO : 46 . and could participate in one or more specific epitopes of this isoform, KLK2-EHT009protc / SEQ ID NO: 46.

KLK2-EHT011 1 (SEQ ID NO : 8) : Cette isoforme présente une utilisation d'un site cryptique d'épissage dans la partie 5' de l'exon4 (nt 4041 ). Cet événement correspond à des sites d'épissage consensuels. Cette isoforme KLK2-EHT011code pour une protéine de 165 acides aminés (KLK2-EHT011 prota / SEQ ID NO : 47). 150 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence KLK2-EHT011protb / SEQ ID NO : 48 . Le dernier acide aminé remplace un résidu phenylalanine en résidu tryptophane et pourrait participer à un épitope spécifique de cette isoforme. KLK2-EHT011 1 (SEQ ID NO: 8): This isoform has a use of a cryptic splice site in the 5 'portion of exon4 (nt 4041). This event corresponds to consensual splicing sites. This isoform KLK2-EHT011code for a protein of 165 amino acids (KLK2-EHT011 prota / SEQ ID NO: 47). 150 amino acids can be cleaved to form the KLK2-EHT011protb / SEQ ID NO: 48 sequence. The last amino acid replaces a phenylalanine residue to a tryptophan residue and could participate in a specific epitope of this isoform.

Variants de PSA (ou KLK3) : La numérotation des nucléotides se réfère au numéro d'accession de Genbank M27274 sauf autre précision. La protéine de référence est la PSA munie de son peptide signal. Variants of PSA (or KLK3): The nucleotide numbering refers to the accession number of Genbank M27274 unless otherwise specified. The reference protein is PSA with its signal peptide.

PSA-EHT001 (SEQ ID NO :9 ) : Cette isoforme présente une rétention d'un fragment délété de l'intron 1 (nt 721 - 811puis 971-1272). Cette isoforme PSA-EHT001 code pour une protéine de 51 acides aminés (PSA-EHT001 prota / SEQ ID NO: 49 ). 36 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT001 protb / SEQ ID NO : 50 . On peut remarquer que le nucléotide correspondant à la position Genbank (M27274) 738 dans SEQ ID NO :9 correspont à G alors que la référence Genbank indique T. Cette différence peut s'expliquer par l'existence d'un polymorphisme à cette position, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Ce changement remplace un résidu tryptophane par un résidu glycine. PSA-EHT001 (SEQ ID NO: 9): This isoform exhibits retention of a deleted fragment of intron 1 (nt 721-811, 971-1272). This isoform PSA-EHT001 encodes a protein of 51 amino acids (PSA-EHT001 prota / SEQ ID NO: 49). 36 amino acids can be cleaved to form the PSA-EHT001 protb / SEQ ID NO: 50 sequence. It may be noted that the nucleotide corresponding to the position Genbank (M27274) 738 in SEQ ID NO: 9 corresponds to G whereas the reference Genbank indicates T. This difference can be explained by the existence of a polymorphism at this position, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. This change replaces a tryptophan residue with a glycine residue.

PSA-EHT003 (SEQ ID NO :10 ) : Cette isoforme présente une rétention d'un fragment délété de l'intron 1 (nt 721- 874 puis 920-1272). Cette isoforme PSA-EHT003 code pour une protéine de 89 PSA-EHT003 (SEQ ID NO: 10): This isoform has a retention of a deleted fragment of intron 1 (nt 721- 874 then 920-1272). This isoform PSA-EHT003 encodes a protein of 89

acides aminés (PSA-EHT003prota / SEQ ID NO: 51 ). 74 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT003protb / SEQ ID NO : 52 . Les 20 derniers acides (PSA-EHT003protc / SEQ ID NO : 53) représentent une information nouvelle par rapport à une isoforme déjà décrite comprenant une rétention totale de l'intron 1 PSA-EHT004 (SEQ ID NO :11) : Cette isoforme utilise un site cryptique d'épisage 3' situé dans l'intron 1 en position 1142 (site consensuel) Cette isoforme PSA-EHT004 code pour une protéine de 47 acides aminés (PSA-EHT004prota / SEQ ID NO : 54 ). 32 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT004protb / SEQ ID NO : 55 . amino acids (PSA-EHT003prota / SEQ ID NO: 51). 74 amino acids can be cleaved to form the PSA-EHT003protb / SEQ ID NO: 52 sequence. The last 20 acids (PSA-EHT003protc / SEQ ID NO: 53) represent new information with respect to an already described isoform comprising a total retention of the intron 1 PSA-EHT004 (SEQ ID NO: 11): This isoform uses a 3 'spur cryptic site located in intron 1 at position 1142 (consensus site) This isoform PSA-EHT004 encodes a protein of 47 amino acids (PSA-EHT004prota / SEQ ID NO: 54). 32 amino acids can be cleaved to form the PSA-EHT004protb / SEQ ID NO: 55 sequence.

PSA-EHT005 (SEQ ID NO : 12) : Cette isoforme présente une rétention d'un fragment délété de l'intron 1 (nt 721- 792 puis 1149-1272). Cette isoforme PSA-EHT005 code pour une protéine de 68 acides aminés (PSA-EHT005prota / SEQ ID NO : 56). 53 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT005protb / SEQ ID NO : 57. Les 28 derniers acides (PSA-EHT005protc / SEQ ID NO : 58 ) représentent une information nouvelle par rapport à une isoforme déjà décrite comprenant une rétention totale de l'intron 1 PSA-EHT007 (SEQ ID NO : 13) : Cette isoforme utilise un site cryptique d'épisage 5' situé dans l'exon 1 en position 693 et un site cryptique 3' situé dans l'intron 1 en position 1149 Cette isoforme PSA-EHT007 code pour une protéine de 23 acides aminés (PSAEHT007prota / SEQ ID NO : 59). PSA-EHT005 (SEQ ID NO: 12): This isoform exhibits retention of a deleted fragment of intron 1 (nt 721-792 then 1149-1272). This isoform PSA-EHT005 encodes a protein of 68 amino acids (PSA-EHT005prota / SEQ ID NO: 56). 53 amino acids can be cleaved to form the PSA-EHT005protb / SEQ ID NO: 57 sequence. The last 28 acids (PSA-EHT005protc / SEQ ID NO: 58) represent new information with respect to an already described isoform comprising a total retention. intron 1 PSA-EHT007 (SEQ ID NO: 13): This isoform uses a 5 'spur cryptic site located in exon 1 at position 693 and a 3' cryptic site located in intron 1 in position 1149 This isoform PSA-EHT007 encodes a protein of 23 amino acids (PSAEHT007prota / SEQ ID NO: 59).

PSA-EHT008 (SEQ ID NO :14 ) : Cette isoforme utilise un site cryptique d'épisage 3' situé dans l'intron 1 en position 1202 (site consensuel) Cette isoforme PSA-EHT008 code pour une protéine de 27 acides aminés (PSA-EHT008prota SEQ ID NO : 60 ). 12 acides PSA-EHT008 (SEQ ID NO: 14): This isoform uses a 3 'spiking cryptic site located in intron 1 at position 1202 (consensus site) This isoform PSA-EHT008 encodes a protein of 27 amino acids (PSA) -EHT008prota SEQ ID NO: 60). 12 acids

aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT008protb / SEQ ID NO : 61 .On peut remarquer que le nucléotide correspondant à la position Genbank (M27274) 679 dans SEQ ID N0:14 correspond à T alors que la référence Genbank indique G. Cette différence peut s'expliquer par l'existence d'un polymorphisme à cette position, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Ce changement remplace un résidu tryptophane par un résidu leucine. Amines can be cleaved to form the PSA-EHT008protb / SEQ ID NO: 61 sequence. It can be seen that the nucleotide corresponding to the Genbank position (M27274) 679 in SEQ ID NO: 14 corresponds to T while the Genbank reference indicates G. This difference can be explained by the existence of a polymorphism at this position, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. This change replaces a tryptophan residue with a leucine residue.

PSA-EHT009 (SEQ ID NO :15) : Cette isoforme présente une rétention d'un fragment délété de l'intron 2 (nt 2119-2447 puis 2988-3226). Cette isoforme PSA-EHT009 code pour une protéine de 69 acides aminés (PSA-EHT009prota / SEQ ID NO : 62). 54 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT009protb / SEQ ID NO : 63 . On peut remarquer que le nucléotide correspondant à la position Genbank (M27274) 1966 dans SEQ ID NO :15 correspont à A alors que la référence Genbank indique G. Cette différence peut s'expliquer par l'existence d'un polymorphisme à cette position, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Ce changement ne modifie pas la séquence protéique. D'autres mutations ponctuelles sont identifiées après le codon stop. PSA-EHT009 (SEQ ID NO: 15): This isoform exhibits retention of a deleted fragment of intron 2 (nt 2119-2447 then 2988-3226). This PSA-EHT009 isoform encodes a protein of 69 amino acids (PSA-EHT009prota / SEQ ID NO: 62). 54 amino acids can be cleaved to form the PSA-EHT009protb / SEQ ID NO: 63 sequence. It may be noted that the nucleotide corresponding to the Genbank position (M27274) 1966 in SEQ ID NO: 15 corresponds to A whereas the reference Genbank indicates G. This difference can be explained by the existence of a polymorphism at this position, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. This change does not modify the protein sequence. Other point mutations are identified after the stop codon.

PSA-EHT012 (SEQ ID NO :16) : Cette isoforme utilise un site cryptique d'épisage 3' situé dans l'intron 2 en position 2426 (site consensuel) Cette isoforme PSA-EHT012 code pour une protéine de 83 acides aminés (PSA-EHT012prota / SEQ ID NO : 64). 68 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT004protb / SEQ ID NO : 65. Les 14 derniers acides aminés (PSA-EHT012protc / SEQ ID NO : 66) représentent une information nouvelle par rapport à PSA de type sauvage et sont ainsi susceptibles d'inclure un ou des épitopes spécifiques de cette isoforme. On peut remarquer que les nucléotides correspondant aux positions Genbank (M27274) 1966 et 2459 dans SEQ ID NO : 16 correspondent à A et A PSA-EHT012 (SEQ ID NO: 16): This isoform uses a cryptic 3 'episage site located in intron 2 at position 2426 (consensus site) This isoform PSA-EHT012 encodes an 83 amino acid protein (PSA) -EHT012prota / SEQ ID NO: 64). 68 amino acids can be cleaved to form the PSA-EHT004protb / SEQ ID NO: 65 sequence. The last 14 amino acids (PSA-EHT012protc / SEQ ID NO: 66) represent new information with respect to wild-type PSA and are thus likely to include one or more specific epitopes of this isoform. It may be noted that the nucleotides corresponding to positions Genbank (M27274) 1966 and 2459 in SEQ ID NO: 16 correspond to A and A

alors que la référence Genbank indique G et G respectivement. Ces différences peuvent s'expliquer par l'existence d'un polymorphisme à ces positions, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Ces deux changements n'affectent pas la séquence protéique traduite. while the Genbank reference indicates G and G respectively. These differences can be explained by the existence of a polymorphism at these positions, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. These two changes do not affect the translated protein sequence.

PSA-EHT013 (SEQ ID NO : 17) : Cette isoforme utilise un site cryptique d'épisage 3' situé dans l'intron 1 en position 1945 (site consensuel) Cette isoforme PSA-EHT013 code pour une protéine de 75 acides aminés (PSA-EHT013prota / SEQ ID NO : 67). 60 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT013protb / SEQ ID NO : 68 . Ces 60 acides aminés représentent une information nouvelle par rapport à PSA de type sauvage et sont ainsi susceptibles d'inclure un ou des épitopes spécifiques de cette isoforme. PSA-EHT013 (SEQ ID NO: 17): This isoform uses a 3 'spike cryptic site located in intron 1 at position 1945 (consensus site) This isoform PSA-EHT013 encodes a protein of 75 amino acids (PSA) -EHT013prota / SEQ ID NO: 67). 60 amino acids can be cleaved to form the PSA-EHT013protb / SEQ ID NO: 68 sequence. These 60 amino acids represent new information with respect to wild-type PSA and are thus likely to include one or more specific epitopes of this isoform.

PSA-EHT015 (SEQ ID NO :18) : Cette isoforme utilise un site cryptique d'épisage 5' situé dans l'exon 1 en position 703 et un site cryptique 3' situé dans l'exon 2 en position 2030 Cette isoforme PSA-EHT015 code pour une protéine de 41 acides aminés (PSAEHT015prota / SEQ ID NO: 69). Les 30 derniers acides aminés (PSAEHT015protb / SEQ ID NO: 70) représentent une information nouvelle par rapport à PSA de type sauvage et sont ainsi susceptibles d'inclure un ou des épitopes spécifiques de cette isoforme. On peut remarquer que le nucléotide correspondant à la position Genbank (M27274) 2094 dans SEQ ID N0:18 correspont à C alors que la référence Genbank indique T. Cette différence peut s'expliquer par l'existence d'un polymorphisme à cette position, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Ce changement remplace un résidu sérine par un résidu proline.. PSA-EHT015 (SEQ ID NO: 18): This isoform uses a 5 'spur cryptic site located in exon 1 at position 703 and a 3' cryptic site located in exon 2 at position 2030. This isoform PSA- EHT015 encodes a protein of 41 amino acids (PSAEHT015prota / SEQ ID NO: 69). The last 30 amino acids (PSAEHT015protb / SEQ ID NO: 70) represent new information relative to wild-type PSA and are thus likely to include one or more specific epitopes of this isoform. It may be noted that the nucleotide corresponding to the position Genbank (M27274) 2094 in SEQ ID NO: 18 corresponds to C whereas the reference Genbank indicates T. This difference can be explained by the existence of a polymorphism at this position, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. This change replaces a serine residue with a proline residue.

PSA-EHT016 (SEQ ID NO :19) : PSA-EHT016 (SEQ ID NO: 19):

Cette isoforme utilise un site cryptique d'épisage 3' situé dans l'exon 2 en position 2053 (site consensuel) Cette isoforme PSA-EHT016 code pour une protéine de 39 acides aminés (PSA-EHT016prota / SEQ ID NO : 71). 24 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT016protb / SEQ ID NO : 72 . Ces 24 acides aminés représentent une information nouvelle par rapport à PSA de type sauvage et sont ainsi susceptibles d'inclure un ou des épitopes spécifiques de cette isoforme. This isoform uses a 3 'spur cryptic site located in exon 2 at position 2053 (consensus site). This isoform PSA-EHT016 encodes a protein of 39 amino acids (PSA-EHT016prota / SEQ ID NO: 71). 24 amino acids can be cleaved to form the PSA-EHT016protb / SEQ ID NO: 72 sequence. These 24 amino acids represent new information relative to wild-type PSA and are thus likely to include one or more specific epitopes of this isoform.

PSA-EHT018 (SEQ ID NO : 20) : Cette isoforme présente une rétention d'un fragment délété de l'intron 2 (nt 2119-2588 puis 3114-3226). Cette isoforme PSA-EHT018 code pour une protéine de 69 acides aminés (PSA-EHT018prota / SEQ ID NO : 73). 54 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT018protb / SEQ ID NO : 74 . On peut remarquer que le nucléotide correspondant à la position Genbank (M27274) 2545 dans SEQ ID NO :20 correspond à T alors que la référence Genbank indique A. Cette différence peut s'expliquer par l'existence d'un polymorphisme à cette position, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Ce changement ne modifie pas la séquence protéique. PSA-EHT018 (SEQ ID NO: 20): This isoform exhibits retention of a deleted fragment of intron 2 (nt 2119-2588 then 3114-3226). This isoform PSA-EHT018 encodes a protein of 69 amino acids (PSA-EHT018prota / SEQ ID NO: 73). 54 amino acids can be cleaved to form the PSA-EHT018protb / SEQ ID NO: 74 sequence. It may be noted that the nucleotide corresponding to the position Genbank (M27274) 2545 in SEQ ID NO: 20 corresponds to T while the reference Genbank indicates A. This difference can be explained by the existence of a polymorphism at this position, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. This change does not modify the protein sequence.

PSA-EHT019 (SEQ ID NO : 21) : Cette isoforme présente une délétion d'un fragment situé dans l'exon 3 (nucléotide 3828-3933). Cette isoforme PSA-EHT019 code pour une protéine de 100 acides aminés (PSA-EHT019prota / SEQ ID NO: 75). 85 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT019protb / SEQ ID NO : 76. Les 6 derniers acides aminés (PSA-EHT019protc / SEQ ID NO: 77) représentent une information nouvelle par rapport à PSA de type sauvage et sont ainsi susceptibles d'inclure un ou des épitopes spécifiques de cette isoforme. On peut remarquer que les nucléotides correspondant aux positions Genbank (M27274) 3786 et 3943 dans SEQ ID NO : 21 correspondent à T et à A alors que la référence Genbank indiquent C et C respectivement. Ces différences peuvent s'expliquer par l'existence de polymorphismes à ces PSA-EHT019 (SEQ ID NO: 21): This isoform has a deletion of a fragment located in exon 3 (nucleotide 3828-3933). This isoform PSA-EHT019 encodes a protein of 100 amino acids (PSA-EHT019prota / SEQ ID NO: 75). 85 amino acids can be cleaved to form the PSA-EHT019protb / SEQ ID NO: 76 sequence. The last 6 amino acids (PSA-EHT019protc / SEQ ID NO: 77) represent new information with respect to wild-type PSA and are thus likely to include one or more specific epitopes of this isoform. It may be noted that the nucleotides corresponding to the positions Genbank (M27274) 3786 and 3943 in SEQ ID NO: 21 correspond to T and A while the Genbank reference indicate C and C respectively. These differences can be explained by the existence of polymorphisms at these

positions, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Le premier changement ne modifie pas la séquence protéique. Le deuxième remplace un résidu sérine par un résidu arginine. positions, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. The first change does not modify the protein sequence. The second replaces a serine residue with an arginine residue.

PSA-EHT020 (SEQ ID NO : 22) : Cette isoforme utilise un site cryptique d'épisage 3' situé dans l'exon 3 en position 3885 (site consensuel) La délétion de la partie 5' de l'exon 3 ne change pas la phase de PSA et remplace 44 acides aminés par un résidu lysine. Cette isoforme PSA-EHT020 code donc pour une protéine de 218 acides aminés (PSA-EHT020prota / SEQ ID NO : 78). 203 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT020protb / SEQ ID NO : 79 . La nouvelle jonction créée autour du résidu 69 représente une information nouvelle par rapport à PSA de type sauvage et est ainsi susceptible d'inclure un ou des épitopes spécifiques de cette isoforme. On peut remarquer que les nucléotides correspondant aux positions Genbank (M27274) 4270, 6013, 6014 et 6016 dans SEQ ID NO : 22 correspondent à T, à A, à G et à G alors que la référence Genbank indiquent C, C, C et A respectivement. Ces différences peuvent s'expliquer par l'existence de polymorphismes à ces positions, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Le premier changement remplace un résidu thréonine par un résidu isoleucine. Le troisième remplace un résidu proline par un résidu alanine. Les deuxième et quatrième changements sont silencieux. PSA-EHT020 (SEQ ID NO: 22): This isoform uses a 3 'spur cryptic site located in exon 3 at position 3885 (consensual site) The deletion of the 5' part of exon 3 does not change the PSA phase and replaces 44 amino acids with a lysine residue. This isoform PSA-EHT020 therefore codes for a protein of 218 amino acids (PSA-EHT020prota / SEQ ID NO: 78). 203 amino acids can be cleaved to form the PSA-EHT020protb / SEQ ID NO: 79 sequence. The new junction created around residue 69 represents new information relative to wild-type PSA and is thus likely to include one or more specific epitopes of this isoform. It may be noted that the nucleotides corresponding to the positions of Genbank (M27274) 4270, 6013, 6014 and 6016 in SEQ ID NO: 22 correspond to T, A, G and G while the Genbank reference indicate C, C, C and A respectively. These differences can be explained by the existence of polymorphisms at these positions, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. The first change replaces a threonine residue with an isoleucine residue. The third replaces a proline residue with an alanine residue. The second and fourth changes are silent.

PSA-EHT021 (SEQ ID NO : 23) : Cette isoforme utilise un site cryptique d'épisage 3' situé dans l'exon 3 en position 3885 (site consensuel) et présente également une délétion dans la partie 3' de l'exon 3 (nucléotides 3903-4025). Cette isoforme PSA-EHT021 code donc pour une protéine de 177 acides aminés (PSA-EHT021 prota / SEQ ID NO : 80). 162 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSAEHT021 protb / SEQ ID NO : 81 . Les nouvelles jonctions créées autour des résidus 69 et 76 représentent une information nouvelle par rapport à PSA de PSA-EHT021 (SEQ ID NO: 23): This isoform uses a 3 'spur cryptic site located in exon 3 at position 3885 (consensus site) and also has a deletion in the 3' part of exon 3 (nucleotides 3903-4025). This isoform PSA-EHT021 thus codes for a protein of 177 amino acids (PSA-EHT021 prota / SEQ ID NO: 80). 162 amino acids can be cleaved to form the PSAEHT021 protb / SEQ ID NO: 81 sequence. The new junctions created around residues 69 and 76 represent new information compared to PSA de

type sauvage et sont ainsi susceptibles d'inclure un ou des épitopes spécifiques de cette isoforme. On peut remarquer que le nucléotide correspondant à la position Genbank (M27274) 1966 dans SEQ ID NO :23 correspond à A alors que la référence Genbank indique G. Cette différence peut s'expliquer par l'existence d'un polymorphisme à cette position, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Ce changement ne modifie pas la séquence protéique. wild type and are thus likely to include one or more specific epitopes of this isoform. It may be noted that the nucleotide corresponding to the Genbank position (M27274) 1966 in SEQ ID NO: 23 corresponds to A whereas the reference Genbank indicates G. This difference can be explained by the existence of a polymorphism at this position, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. This change does not modify the protein sequence.

PSA-EHT022 (SEQ ID NO : 24) : Cette isoforme présente une délétion dans la partie 3' de l'exon 3 (nucléotides 3903-4025). Cette isoforme PSA-EHT022 code donc pour une protéine de 220 acides aminés (PSA-EHT022prota / SEQ ID NO: 82). 205 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT022protb / SEQ ID NO : 83 . La nouvelle jonction créée autour du résidu 119 représente une information nouvelle par rapport à PSA de type sauvage et est ainsi susceptible d'inclure un ou des épitopes spécifiques de cette isoforme. On peut remarquer que le nucléotide correspondant à la position Genbank (M27274) 1966 dans SEQ ID NO :24 correspond à A alors que la référence Genbank indique G. Cette différence peut s'expliquer par l'existence d'un polymorphisme à cette position, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Ce changement ne modifie pas la séquence protéique. PSA-EHT022 (SEQ ID NO: 24): This isoform has a deletion in the 3 'part of exon 3 (nucleotides 3903-4025). This isoform PSA-EHT022 therefore codes for a protein of 220 amino acids (PSA-EHT022prota / SEQ ID NO: 82). 205 amino acids can be cleaved to form the PSA-EHT022protb / SEQ ID NO: 83 sequence. The new junction created around residue 119 represents new information relative to wild type PSA and is thus likely to include one or more specific epitopes of this isoform. It may be noted that the nucleotide corresponding to the position Genbank (M27274) 1966 in SEQ ID NO: 24 corresponds to A while the reference Genbank indicates G. This difference can be explained by the existence of a polymorphism at this position, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. This change does not modify the protein sequence.

PSA-EHT023 (SEQ ID NO :25 ) : Cette isoforme comprend une délétion d'un fragment de l'exon 2 (nucléotides 1990-2040), l'utilisation d'un site cryptique en 3' de l'exon 3 en position 3885 (site consensuel) et une rétention d'un fragment 5' de l'intron 3 (nucléotides 4043-4060) (site consensuel). Cette isoforme code pour une protéine de 207 acides aminés (PSA-EHT023prota /SEQ ID NO: 84). 192 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT023protb / SEQ ID NO : 85. Les nouvelles jonctions créées autour des résidus 27,53 et dans la région 105-111 représentent une information nouvelle par rapport à PSA de type PSA-EHT023 (SEQ ID NO: 25): This isoform comprises a deletion of a fragment of exon 2 (nucleotides 1990-2040), the use of a 3 'cryptic site of exon 3 in position 3885 (consensus site) and retention of a 5 'fragment of intron 3 (nucleotides 4043-4060) (consensus site). This isoform encodes a protein of 207 amino acids (PSA-EHT023prota / SEQ ID NO: 84). 192 amino acids can be cleaved to form the sequence PSA-EHT023protb / SEQ ID NO: 85. The new junctions created around residues 27,53 and in region 105-111 represent new information compared to PSA-type

sauvage et sont ainsi susceptibles d'inclure un ou des épitopes spécifiques de cette isoforme. On peut remarquer que les nucléotides correspondant aux positions Genbank (M27274) 2060 et 5731 dans SEQ ID NO : 25 correspondent à G et à G alors que la référence Genbank indiquent T et T respectivement. Ces différences peuvent s'expliquer par l'existence de polymorphismes à ces positions, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Le premier changement remplace un résidu cystéine par un résidu glycine. Le deuxième ne modifie pas la séquence protéique.. and are thus likely to include one or more specific epitopes of this isoform. It may be noted that the nucleotides corresponding to the Genbank positions (M27274) 2060 and 5731 in SEQ ID NO: 25 correspond to G and G while the Genbank reference indicate T and T respectively. These differences can be explained by the existence of polymorphisms at these positions, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. The first change replaces a cysteine residue with a glycine residue. The second does not modify the protein sequence.

PSA-EHT025 (SEQ ID NO : 26) : Cette isoforme correspond à la délétion de l'exon 3. Cette isoforme code pour une protéine de 85 acides aminés (PSA-EHT025prota / SEQ ID NO : 86). 70 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT025protb / SEQ ID NO : 87. Les 16 derniers acides aminés (PSA-EHT025protc / SEQ ID NO: 88) représentent une information nouvelle par rapport à PSA de type sauvage et sont ainsi susceptibles d'inclure un ou des épitopes spécifiques de cette isoforme. On peut remarquer que les nucléotides correspondant aux positions Genbank (M27274) 2118-4186 et 5791 dans SEQ ID N0:26 correspondent à G et à G alors que la référence Genbank indiquent AT et C respectivement. Ces différences peuvent s'expliquer par l'existence de polymorphismes à ces positions, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. La concordance des sites 3' de l'exon 2 et 5' de l'exon 4 suggère une mutation introduite par la polymerase dans cette région. Le dernier changement ne modifie pas la séquence protéique. PSA-EHT025 (SEQ ID NO: 26): This isoform corresponds to the deletion of exon 3. This isoform encodes a protein of 85 amino acids (PSA-EHT025prota / SEQ ID NO: 86). 70 amino acids can be cleaved to form the PSA-EHT025protb / SEQ ID NO: 87 sequence. The last 16 amino acids (PSA-EHT025protc / SEQ ID NO: 88) represent new information with respect to wild-type PSA and are thus likely to include one or more specific epitopes of this isoform. It may be noted that the nucleotides corresponding to the positions Genbank (M27274) 2118-4186 and 5791 in SEQ ID NO: 26 correspond to G and G while the reference Genbank indicate AT and C respectively. These differences can be explained by the existence of polymorphisms at these positions, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. The concordance of the 3 'sites of exon 2 and 5' of exon 4 suggests a mutation introduced by the polymerase into this region. The last change does not change the protein sequence.

PSA-EHT026 (SEQ ID NO : 27) : Cette isoforme présente une délétion d'un fragment situé dans l'exon 3 (nucléotide 3781-4025). Cette isoforme PSA-EHT026 code pour une protéine de 78 acides aminés (PSA-EHT026prota / SEQ ID NO : 89). 63 acides aminés PSA-EHT026 (SEQ ID NO: 27): This isoform has a deletion of a fragment located in exon 3 (nucleotide 3781-4025). This isoform PSA-EHT026 encodes a protein of 78 amino acids (PSA-EHT026prota / SEQ ID NO: 89). 63 amino acids

peuvent être clivés pour former la séquence PSA-EHT026protb / SEQ ID NO : 90 . can be cleaved to form the sequence PSA-EHT026protb / SEQ ID NO: 90.

PSA-EHT027 (SEQ ID NO : 28) Cette isoforme utilise un site cryptique d'épissage situé en 5' dans l'exon 3 en position 3780 et une délétion de l'exon 4 Cette isoforme PSA-EHT027 code pour une protéine de 144 acides aminés (PSA-EHT027prota / SEQ ID NO : 91). PSA-EHT027 (SEQ ID NO: 28) This isoform uses a cryptic splice site located 5 'in exon 3 at position 3780 and a deletion of exon 4 This isoform PSA-EHT027 encodes a protein of 144 amino acids (PSA-EHT027prota / SEQ ID NO: 91).

129 acides aminés peuvent être clivés pour former la séquence PSAEHT027protb / SEQ ID NO: 92 . Les 67 derniers acides aminés (PSAEHT027protc / SEQ ID NO: 93) représentent une information nouvelle par rapport à PSA de type sauvage et sont ainsi susceptibles d'inclure un ou des épitopes spécifiques de cette isoforme. On peut remarquer que le nucléotide correspondant à la position Genbank (M27274) 1966 dans SEQ ID NO : 28 correspond à A alors que la référence Genbank indique G. Cette différence peut s'expliquer par l'existence d'un polymorphisme à cette position, par des erreurs dans la séquence référencée, bien que l'on ne peut exclure des mutations introduites par la polymerase. Ce changement ne modifie pas la séquence protéique. 129 amino acids can be cleaved to form the sequence PSAEHT027protb / SEQ ID NO: 92. The last 67 amino acids (PSAEHT027protc / SEQ ID NO: 93) represent new information with respect to wild type PSA and are thus likely to include one or more specific epitopes of this isoform. It may be noted that the nucleotide corresponding to the Genbank position (M27274) 1966 in SEQ ID NO: 28 corresponds to A while the reference Genbank indicates G. This difference can be explained by the existence of a polymorphism at this position, by errors in the referenced sequence, although we can not exclude mutations introduced by the polymerase. This change does not modify the protein sequence.

Un premier objet de l'invention concerne des acides nucléiques comprenant la séquence des variants de PSA et KLK-2 décrits ci-avant. A first subject of the invention relates to nucleic acids comprising the sequence of the PSA and KLK-2 variants described above.

Un autre objet de l'invention concerne des acides nucléiques spécifiques des altérations génétiques portées par les variants de PSA et KLK-2 décrits ci-avant. Another subject of the invention relates to nucleic acids specific for the genetic alterations carried by the PSA and KLK-2 variants described above.

De tels acides nucléiques peuvent être notamment complémentaires de régions mutées, de domaines introniques retenus ou de jonctions nouvellement créées par des délétions. Such nucleic acids may in particular be complementary to mutated regions, retained intron domains or newly created deletions junctions.

Un autre objet de l'invention concerne un acide nucléique comprenant tout ou partie d'une séquence dérivée des ARNs messagers (ou des ADNc) de KLK2EHT002 à KLK2-EHT011 et de PSA-EHT001 à PSA-EHT027 ou toute Another subject of the invention relates to a nucleic acid comprising all or part of a sequence derived from the messenger RNAs (or cDNAs) of KLK2EHT002 to KLK2-EHT011 and PSA-EHT001 to PSA-EHT027 or any

combinaison de ces variants ainsi que leurs utilisations pour la mise en #uvre d'une méthode de diagnostic, de détection ou de suivi de cancers, notamment du cancer de la prostate et plus particulièrement de la forme bénigne de ce dernier, BPH. combination of these variants and their uses for the implementation of a method for diagnosing, detecting or monitoring cancers, particularly prostate cancer and more particularly the benign form of the latter, BPH.

Un autre objet de l'invention réside dans tout acide nucléique caractérisé en ce qu'il comprend une séquence choisie parmi : a) les séquences SEQ ID NOs : 1 à 28, b) un variant des séquences SEQ ID NOs : 1 à 28 résultant de la dégénérescence du code génétique, c) le brin complémentaire des séquences SEQ ID NOs : 1 à 28, et d) un fragment spécifique des séquences a) à c). Another subject of the invention resides in any nucleic acid characterized in that it comprises a sequence chosen from: a) the sequences SEQ ID NOs: 1 to 28, b) a variant of the sequences SEQ ID NOs: 1 to 28 resulting degeneracy of the genetic code, c) the complementary strand of SEQ ID NOs: 1 to 28, and d) a specific fragment of sequences a) to c).

Le terme fragment spécifique désigne un fragment caractéristique des variants considérés, typiquement un fragment portant au moins une altération génétique (e. g., mutation, nouvelle jonction, rétention d'intron, etc. ) caractéristique des variants considérés. De tels fragments spécifiques se distinguent donc de la séquence sauvage. Des fragments préférés comportent au moins 5 nucléotides consécutifs de la séquence considérée, de préférence au moins 8, plus préférentiellement au moins 12. Ces fragments spécifiques correspondent typiquement aux séquences cibles définies ci-avant. Des fragments peuvent comprendre jusqu'à 50,75 ou 100 nucléotides, voire plus. The term "specific fragment" denotes a characteristic fragment of the variants under consideration, typically a fragment carrying at least one genetic alteration (e.g., mutation, new junction, intron retention, etc.) characteristic of the variants under consideration. Such specific fragments are therefore distinguished from the wild-type sequence. Preferred fragments comprise at least 5 consecutive nucleotides of the sequence in question, preferably at least 8, more preferably at least 12. These specific fragments typically correspond to the target sequences defined above. Fragments can comprise up to 50.75 or 100 nucleotides or more.

Au sens de l'invention, les acides nucléiques peuvent être des ADN, choisis de préférence parmi les ADNc et les ADNg, ou des ARN. Il peut s'agir d'acides nucléiques synthétiques ou semi-synthétiques, de fragments PCR, d'oligonucléotides, de régions double- ou simple-brin, etc. Les acides nucléiques peuvent être produits par synthèse, par voie recombinante, par clonage, par assemblage(s) génétique(s), mutagénèse, etc., ou une combinaison de ces techniques. Within the meaning of the invention, the nucleic acids may be DNAs, preferably chosen from cDNAs and gDNAs, or RNAs. It can be synthetic or semi-synthetic nucleic acids, PCR fragments, oligonucleotides, double- or single-strand regions, etc. Nucleic acids can be produced synthetically, recombinantly, clonally, by genetic assembly (s), mutagenesis, etc., or a combination of these techniques.

Les acides nucléiques peuvent être utilisés pour produire un variant de PSA ou KLK-2 de l'invention in vitro, ex vivo, in vivo ou dans un système de transcription acellulaire. Ils peuvent également être utilisés pour la fabrication de molécules antisens, capables de réduire la traduction des ARNm correspondants dans une cellule. Ils peuvent aussi servir à la production de sondes, notamment marquées, permettant par des réactions d'hybridation de mettre en évidence de manière spécifique la présence d'une forme mutée de PSA ou KLK-2 de l'invention dans un échantillon. Ils peuvent encore servir à la production d'amorces nucléiques, utiles à l'amplification d'une variant de PSA ou KLK-2 (ou d'une séquence cible d'un tel variant) dans un échantillon, notamment dans un but de dépistage ou de diagnostic. The nucleic acids can be used to produce a PSA or KLK-2 variant of the invention in vitro, ex vivo, in vivo or in a cell-free transcription system. They can also be used for the manufacture of antisense molecules, capable of reducing the translation of the corresponding mRNAs into a cell. They may also be used for the production of probes, in particular labeled probes, which make it possible, by hybridization reactions, to specifically demonstrate the presence of a mutated form of PSA or KLK-2 of the invention in a sample. They can still be used for the production of nucleic primers useful for the amplification of a variant of PSA or KLK-2 (or a target sequence of such a variant) in a sample, in particular for screening purposes. or diagnosis.

A cet égard, un autre objet de l'invention concerne une sonde nucléique caractérisée en ce qu'elle permet la détection d'un acide nucléique tel que défini ci-avant, typiquement par hybridation sélective à partir d'une population d'acides nucléiques test. Généralement, la sonde comprend la séquence d'un acide nucléique tel que défini ci-avant ou une partie (spécifique) de la séquence d'un tel acide nucléique. La partie spécifique est préférentiellement caractéristique d'un variant tel que décrit ci-avant, notamment une partie contenant une altération associée au cancer de la prostate. Elle comprend typiquement de 20 à 1000 nucléotides, de préférence de 50 à 800, et est généralement simple-brin. In this regard, another subject of the invention relates to a nucleic acid probe characterized in that it enables the detection of a nucleic acid as defined above, typically by selective hybridization from a population of nucleic acids. test. Generally, the probe comprises the sequence of a nucleic acid as defined above or a part (specific) of the sequence of such a nucleic acid. The specific part is preferably characteristic of a variant as described above, in particular a part containing an alteration associated with prostate cancer. It typically comprises from 20 to 1000 nucleotides, preferably from 50 to 800, and is generally single-stranded.

Un exemple particulier de sonde est représenté par un oligonucléotide spécifique et complémentaire d'une région au moins d'un acide nucléique tel que défini ci-avant. L'oligonucléotide est typiquement simple-brin, et comporte généralement de 10 à 100 bases. Les oligonucléotides et/ou les sondes nucléiques selon l'invention peuvent être marquées, par exemple au moyen de marqueurs radioactifs, enzymatiques, fluorescents, luminescents, etc. A particular example of a probe is represented by a specific oligonucleotide complementary to a region of at least one nucleic acid as defined above. The oligonucleotide is typically single-stranded, and generally comprises from 10 to 100 bases. The oligonucleotides and / or the nucleic probes according to the invention may be labeled, for example by means of radioactive, enzymatic, fluorescent, luminescent labels, etc.

Un autre objet de l'invention concerne une amorce nucléique, permettant l'amplification (sélective) d'un acide nucléique tel que défini ci-avant ou d'une partie (spécifique) d'un tel acide nucléique. La partie amplifiée comporte préférentiellement une altération caractéristique d'un des variants décrits ci- Another subject of the invention relates to a nucleic primer allowing the (selective) amplification of a nucleic acid as defined above or of a (specific) part of such a nucleic acid. The amplified part preferably comprises an alteration characteristic of one of the variants described above.

avant, notamment d'une altération associée au cancer de la prostate. Une amorce selon l'invention est typiquement simple-brin, et avantageusement composée de 3 à 50 bases, de préférence de 3 à 40 et encore plus préférentiellement de 3 à 35 bases. Une amorce particulière est complémentaire d'une région au moins du gène PSA ou KLK-2, ou de l'ARN correspondant. before, including an alteration associated with prostate cancer. A primer according to the invention is typically single-stranded, and advantageously composed of 3 to 50 bases, preferably 3 to 40 and even more preferably 3 to 35 bases. A particular primer is complementary to at least one region of the PSA or KLK-2 gene, or the corresponding RNA.

Un mode de réalisation préféré réside dans une amorce constituée d'un acide nucléique simple-brin comprenant de 3 à 50 nucléotides complémentaires d'une partie au moins de l'une des séquences SEQ ID NOs : 1 à 31 ou de leur brin complémentaire. Des exemples de telles amorces nucléiques sont fournies dans la section expérimentale. A preferred embodiment resides in a primer consisting of a single-stranded nucleic acid comprising from 3 to 50 nucleotides complementary to at least part of one of the sequences SEQ ID NOs: 1 to 31 or their complementary strand. Examples of such nucleic primers are provided in the experimental section.

L'invention concerne également un couple d'amorces comprenant une séquence sens et une séquence inverse, caractérisé en ce que les amorces de ladite paire s'hybrident avec une région d'un acide nucléique tel que défini ciavant et permettent l'amplification d'au moins une portion de cet acide nucléique. The invention also relates to a pair of primers comprising a sense sequence and an inverse sequence, characterized in that the primers of said pair hybridize with a region of a nucleic acid as defined above and allow the amplification of at least a portion of this nucleic acid.

Des couples d'amorces particuliers selon l'invention sont fournis dans le Tableau 1. Particular primer pairs according to the invention are provided in Table 1.

Un autre objet de la présente demande concerne tout vecteur comprenant un acide nucléique tel que défini ci-avant. Il peut s'agir de plasmides, cosmides, épisomes, chromosomes artificiels, virus, phages, etc. On peut citer divers plasmides commerciaux tels que pUC, pcDNA, pBR, etc. Parmi les vecteurs viraux, on peut citer les rétrovirus, adénovirus, AAV, herpès virus, etc. Another object of the present application relates to any vector comprising a nucleic acid as defined above. It can be plasmids, cosmids, episomes, artificial chromosomes, viruses, phages, etc. Various commercial plasmids such as pUC, pcDNA, pBR, etc. can be mentioned. Among the viral vectors, mention may be made of retroviruses, adenoviruses, AAVs, herpesviruses, etc.

Un autre objet de l'invention concerne les cellules recombinantes comprenant un acide nucléique ou un vecteur tels que définis ci-avant. Les cellules peuvent être procaryotes ou eucaryotes. Parmi les cellules procaryotes on peut citer notamment les bactéries telles que E. coli. Parmi les cellules eucaryotes, on peut mentionner les cellules de levure ou les cellules de mammifères, d'insectes Another subject of the invention relates to recombinant cells comprising a nucleic acid or a vector as defined above. The cells may be prokaryotic or eukaryotic. Among the prokaryotic cells, mention may in particular be made of bacteria such as E. coli. Among the eukaryotic cells, there may be mentioned yeast cells or mammalian cells, insects

ou de plantes. Il peut s'agir de cultures primaires ou de lignées. On peut citer les cellules COS, CHO, 3T3, HeLa, etc. or plants. These may be primary crops or lineages. There may be mentioned COS, CHO, 3T3, HeLa, etc. cells.

Un autre objet de l'invention concerne une composition comprenant un acide nucléique tel que défini ci-avant immobilisé sur un support. L'invention concerne notamment des compositions comprenant une pluralité d'acides nucléiques en mélange, sous forme soluble ou immobilisée à un support, la composition comprenant au moins un acide nucléique tel que défini ci-avant. Another subject of the invention relates to a composition comprising a nucleic acid as defined above immobilized on a support. The invention particularly relates to compositions comprising a plurality of nucleic acids in a mixture, in soluble form or immobilized to a support, the composition comprising at least one nucleic acid as defined above.

Un autre objet de l'invention concerne un (produit comprenant un) support sur lequel un ou plusieurs acides nucléiques tels que définis ci-avant sont immobilisés. Le support peut être solide, plan ou non, régulier ou non, comme par exemple du nylon, verre, plastique, métal, fibre, céramique, silice, polymère, etc., ou tout autre matériau compatible. Les acides nucléique sont préférentiellement immobilisés par une extrémité, dans des conditions laissant la molécule accessible pour une réaction d'hybridation. Les acides nucléiques peuvent être arrangés de manière précise sur le support, et déposés en plusieurs exemplaires. Another subject of the invention relates to a product comprising a support on which one or more nucleic acids as defined above are immobilized. The support may be solid, planar or not, regular or not, such as nylon, glass, plastic, metal, fiber, ceramic, silica, polymer, etc., or any other compatible material. The nucleic acids are preferably immobilized at one end, under conditions leaving the molecule accessible for a hybridization reaction. The nucleic acids can be arranged accurately on the support, and deposited in several copies.

Un autre objet de l'invention concerne un (produit comprenant un) support sur lequel une ou plusieurs cellules recombinantes telles que définies ci-avant sont immobilisées ou cultivées. Le support peut être solide, plan ou non, régulier ou non, comme par exemple du nylon, verre, plastique, métal, fibre, céramique, silice, polymère, etc., ou tout autre matériau compatible. Les cellules sont par exemple réparties dans des puits d'une microplaque ou immobilisées dans un gel ou sur un support adapté. Another object of the invention relates to a (product comprising a) support on which one or more recombinant cells as defined above are immobilized or cultured. The support may be solid, planar or not, regular or not, such as nylon, glass, plastic, metal, fiber, ceramic, silica, polymer, etc., or any other compatible material. The cells are, for example, distributed in wells of a microplate or immobilized in a gel or on a suitable support.

L'invention concerne également les peptides et séquences protéiques codés par tout ou partie des isoformes KLK2-EHT002 à KLK2-EHT011et PSA-EHT001 à PSA-EHT027 , notamment celles décrites parmi les séquences SEQ ID NO : 29 à 93 ainsi que leurs utilisations pour la mise en #uvre d'une méthode de The invention also relates to the peptides and protein sequences encoded by all or part of the isoforms KLK2-EHT002 to KLK2-EHT011 and PSA-EHT001 to PSA-EHT027, in particular those described among the sequences SEQ ID NO: 29 to 93 and their uses for the implementation of a method of

diagnostic, de détection ou de suivi de cancers, notamment du cancer de la prostate et plus particulièrement de la forme bénigne de ce dernier, BPH. diagnosis, detection or monitoring of cancers, in particular of prostate cancer and more particularly of the benign form of the latter, BPH.

Un objet particulier de la présente demande concerne un polypeptide comprenant tout ou une partie spécifique d'une séquence choisie parmi SEQ ID NOs : 29 à 93. Des polypeptides particuliers sont composés ou comprennent une séquence ou une partie de séquence créée par l'altération du gène ou du messager correspondant. Au sens de l'invention, le terme partie désigne préférentiellement au moins 5 résidus contigus, de préférence au moins 8, plus préférentiellement au moins 10, encore plus préférentiellement au moins 15. A particular object of the present application relates to a polypeptide comprising all or a specific portion of a sequence selected from SEQ ID NOs: 29 to 93. Particular polypeptides are composed or comprise a sequence or part of a sequence created by the alteration of the gene or corresponding messenger. Within the meaning of the invention, the term part preferably denotes at least 5 contiguous residues, preferably at least 8, more preferably at least 10, even more preferably at least 15.

Comme expliqué ci-avant, les altération d'épissage du gène PSA ou KLK-2 conduisent à la production de protéines mutées, comprenant des séquences nouvellement créées (séquences cibles). Il peut s'agir de séquences nouvelles (e. g., traduction décalée, insertions), de jonctions nouvelles, etc. Des peptides particuliers de l'invention correspondent ou comprennent ces séquences cibles, codées par les séquences SEQ ID Nos : 1 à 28. As explained above, the splicing alterations of the PSA or KLK-2 gene lead to the production of mutated proteins, including newly created sequences (target sequences). These can be new sequences (e.g., offset translation, insertions), new junctions, etc. Particular peptides of the invention correspond or include these target sequences, encoded by the sequences SEQ ID Nos: 1 to 28.

Un autre objet de l'invention concerne un (produit comprenant un) support sur lequel un ou plusieurs polypeptides tels que définis ci-avant sont immobilisés. Another subject of the invention relates to a product comprising a support on which one or more polypeptides as defined above are immobilized.

Le support peut être solide, plan ou non, régulier ou non, comme par exemple du nylon, verre, plastique, métal, fibre, céramique, silice, polymère, etc., ou tout autre matériau compatible. Les polypeptides sont préférentiellement immobilisés par une extrémité, dans des conditions laissant la molécule accessible pour une réaction d'interaction avec un ligand spécifique, tel qu'un anticorps. Les polypeptides peuvent être arrangés de manière précise sur le support, et déposés en plusieurs exemplaires. The support may be solid, planar or not, regular or not, such as nylon, glass, plastic, metal, fiber, ceramic, silica, polymer, etc., or any other compatible material. The polypeptides are preferentially immobilized by one end, under conditions leaving the molecule accessible for an interaction reaction with a specific ligand, such as an antibody. The polypeptides can be arranged accurately on the support, and deposited in several copies.

Des techniques d'immobilisation de matériels (tels que acides nucléiques, polypeptides, anticorps, etc. ) sur des supports ont été décrites dans la littérature, et notamment dans les demandes ou brevets n EP619 321, W091/08307, US4,925,785 et GB2,197,720. Techniques for immobilizing materials (such as nucleic acids, polypeptides, antibodies, etc.) on supports have been described in the literature, and in particular in the applications or patents EP619321, WO91 / 08307, US4,925,785 and GB2. , 197.720.

Ligands spécifiques L'invention concerne par ailleurs des ligands spécifiques, de préférence peptidiques, en particulier des anticorps (polyclonaux, monoclonaux) et leurs fragments, spécifiques des régions peptidiques caractéristiques des protéines codées par KLK2-EHT002-011 et de PSA-EHT001-027 (codées par les domaines introniques retenus ou par les jonctions spécifiquement créées) et leurs utilisations pour la détection, le diagnostique ou le suivi de cancers et notamment du cancer de la prostate. En particulier, il pourra s'agir de diagnostiquer la forme BPH et de la différencier du carcinome de la prostate. Specific Ligands The invention furthermore relates to specific ligands, preferably peptides, in particular antibodies (polyclonal, monoclonal) and their fragments, specific for the peptide regions characteristic of the proteins coded by KLK2-EHT002-011 and of PSA-EHT001-027. (coded by the intronic domains retained or by specifically created junctions) and their uses for the detection, diagnosis or monitoring of cancers and in particular of prostate cancer. In particular, it may be to diagnose the BPH form and to differentiate it from carcinoma of the prostate.

A cet égard, un autre objet de l'invention concerne tout anticorps capable de se lier, de préférence de manière sélective, à un polypeptide tel que défini cidessus. L'anticorps peut être polyclonal ou monoclonal. Il peut également s'agir de fragments et dérivés d'anticorps présentant substantiellement la même spécificité antigénique, en particulier des fragments d'anticorps (e. g., Fab, Fab'2, CDRs), d'anticorps humanisés, polyfonctionnels, monocaténaires (ScFv), etc. Les anticorps peuvent être produits à l'aide de méthodes conventionnelles, comprenant l'immunisation d'un animal et la récupération de son sérum (polyclonal) ou de cellules spléniques (de manière à produire des hybridomes par fusion avec des lignées cellulaires appropriées). In this regard, another object of the invention is any antibody capable of binding, preferably selectively, to a polypeptide as defined above. The antibody may be polyclonal or monoclonal. It may also be fragments and derivatives of antibodies having substantially the same antigenic specificity, in particular antibody fragments (eg, Fab, Fab'2, CDRs), of humanized, polyfunctional, single-stranded (ScFv) antibodies. etc. The antibodies can be produced using conventional methods, including immunizing an animal and recovering its serum (polyclonal) or spleen cells (so as to produce hybridomas by fusion with appropriate cell lines).

Des méthodes de production d'anticorps polyclonaux à partir d'espèces variées sont décrites dans l'art antérieur. Typiquement, l'antigène est combiné avec un adjuvant (e. g., Freund's adjuvant) et administré à un animal, typiquement par injection sous-cutanée. Des injections répétées peuvent être réalisées. Les échantillons sanguins sont collectés et l'immunoglobuline ou le sérum sont séparés. Les méthodes classiques de production d'anticorps monoclonaux comprennent l'immunisation d'un animal avec un antigène, suivie de la récupération des cellules spléniques qui sont ensuite fusionnées avec des cellules immortalisées, telles que des cellules de myélome. Les hybridomes Methods for producing polyclonal antibodies from a variety of species are described in the prior art. Typically, the antigen is combined with an adjuvant (e.g., Freund's adjuvant) and administered to an animal, typically by subcutaneous injection. Repeated injections can be performed. Blood samples are collected and the immunoglobulin or serum is separated. Conventional methods for producing monoclonal antibodies include immunizing an animal with an antigen, followed by recovering spleen cells which are then fused with immortalized cells, such as myeloma cells. Hybridomas

résultant produisent des anticorps monoclonaux et peuvent être sélectionnés par dilutions limites de manière à isoler les clones individuels. Les fragments Fab ou F (ab')2 être produits par digestion à l'aide d'une protéase selon les techniques conventionnelles. resulting monoclonal antibodies and can be selected by limiting dilutions to isolate the individual clones. The Fab or F (ab ') 2 fragments can be produced by digestion with a protease according to conventional techniques.

L'invention concerne également une méthode de production d'anticorps, comprenant l'injection d'un polypeptide tel que défini ci-avant ou d'un fragment immunogène de ce dernier à un animal non humain et la récupération des anticorps ou des cellules productrices d'anticorps. Les anticorps préférés sont des anticorps spécifiques des isoformes de PSA et KLK-2 décrites dans la présente demande, et essentiellement non-spécifique des formes sauvages. The invention also relates to a method for producing antibodies, comprising injecting a polypeptide as defined above or an immunogenic fragment thereof into a non-human animal and recovering the antibodies or the producer cells. antibody. The preferred antibodies are antibodies specific for the isoforms of PSA and KLK-2 described in the present application, and essentially non-specific wild forms.

L'invention concerne des hybridomes produisant les anticorps monoclonaux décrits ci-dessus et leur utilisation pour produire lesdits anticorps. The invention relates to hybridomas producing the monoclonal antibodies described above and their use for producing said antibodies.

Les anticorps peuvent être couplés à des fragments hétérologues telles que des toxines, des marqueurs, des médicaments ou tout autre agent thérapeutique, de façon covalente ou non, soit directement, soit par l'intermédiaire d'agents de couplage. Les marqueurs peuvent être choisis parmi les radio-marqueurs, des enzymes, des agents fluorescents, des particules magnétiques, etc. The antibodies can be coupled to heterologous fragments such as toxins, markers, drugs or any other therapeutic agent, covalently or otherwise, either directly or via coupling agents. The markers may be selected from radio markers, enzymes, fluorescers, magnetic particles, etc.

Les anticorps de l'invention peuvent être utilisés comme agents de criblage ou pour détecter ou quantifier la présence ou la quantité d'isoformes de PSA ou KLK-2 dans des échantillons collectés à partir d'un sujet, typiquement, un fluide biologique provenant d'un mammifère, par exemple d'un être humain. The antibodies of the invention can be used as screening agents or to detect or quantify the presence or amount of isoforms of PSA or KLK-2 in samples collected from a subject, typically a biological fluid from a mammal, for example a human being.

Un autre objet de l'invention concerne un (produit comprenant un) support sur lequel un ou plusieurs anticorps (ou fragments ou dérivés) tels que définis ciavant sont immobilisés. Le support peut être solide, plan ou non, régulier ou non, comme par exemple du nylon, verre, plastique, métal, fibre, céramique, silice, polymère, etc., ou tout autre matériau compatible. Les anticorps sont préférentiellement immobilisés par une extrémité, dans des conditions laissant Another subject of the invention relates to a product comprising a support on which one or more antibodies (or fragments or derivatives) as defined above are immobilized. The support may be solid, planar or not, regular or not, such as nylon, glass, plastic, metal, fiber, ceramic, silica, polymer, etc., or any other compatible material. The antibodies are preferentially immobilized by one end, under conditions that leave

la molécule accessible pour une réaction d'interaction avec un antigène spécifique. Les anticorps peuvent être arrangés de manière précise sur le support, et déposés en plusieurs exemplaires. the accessible molecule for an interaction reaction with a specific antigen. The antibodies can be arranged precisely on the support, and deposited in several copies.

Méthodes de détection/diagnostic La présente demande décrit également de nouveaux procédés de détection d'une pathologie ou d'une prédisposition à une pathologie chez un sujet, comprenant la détermination de la présence, dans un échantillon dudit sujet, d'un acide nucléique, ou d'une altération génétique ou d'une protéine ou polypeptide tels que définis ci-avant. Detection / Diagnosis Methods The present application also describes novel methods for detecting a pathology or predisposition to a pathology in a subject, comprising determining the presence, in a sample of said subject, of a nucleic acid, or a genetic alteration or a protein or polypeptide as defined above.

La détermination peut être réalisée par différentes techniques, telles que séquençage, hybridation et/ou amplification sélectives. Des méthodes utilisables pour déterminer la présence de protéines sont basées par exemple sur des réactions immuno-enzymatiques, telles que ELISA, RIA, EIA, etc. Des techniques utilisables pour déterminer la présence de gènes ou d'ARN altérés sont par exemple la PCR, la RT-PCR, la réaction de ligation en chaîne (LCR), la technique de PCE ou TMA ( Transcriptional Mediated Amplification ), la migration sur gel, l'électrophorèse, notamment la DGGE ( denaturing gel gradient electrophoresis ), etc. The determination can be carried out by various techniques, such as selective sequencing, hybridization and / or amplification. Methods that can be used to determine the presence of proteins are based, for example, on immunoenzymatic reactions, such as ELISA, RIA, EIA, etc. Techniques that can be used to determine the presence of altered genes or RNA are, for example, PCR, RT-PCR, the chain-reaction ligation (LCR), the PCE or TMA (Transcriptional Mediated Amplification) technique, the migration on gel, electrophoresis, especially DGGE (denaturing gel gradient electrophoresis), etc.

Dans le cas où une étape d'amplification est réalisée, celle-ci met préférentiellement en oeuvre une amorce ou un couple d'amorces tel que défini ci-avant. In the case where an amplification step is performed, it preferably implements a primer or a pair of primers as defined above.

Un objet particulier de l'invention concerne l'utilisation d'acides nucléiques complémentaires et spécifiques de fragments des gènes ou des messagers de KLK2-EHT002-011 et de PSA-EHT001-027 (e. g., domaines introniques retenus, jonctions spécifiquement crées, mutations particulières, etc. ) pour la détection de cancers, notamment du cancer de la prostate, et plus particulièrement de sa A particular object of the invention relates to the use of complementary and specific nucleic acid fragments of genes or messengers of KLK2-EHT002-011 and PSA-EHT001-027 (eg, retained intron domains, specifically created junctions, mutations etc.) for the detection of cancers, in particular of prostate cancer, and more particularly of its

forme bénigne, BPH. Cette détection pourra en particulier s'effectuer grâce à des puces à ADN ou à la mise en #uvre d'une PCR à partir de fluides biologiques tels que du sang (le sérum notamment), des urines, du fluide séminal, etc. Benign form, BPH. This detection may in particular be carried out by means of DNA chips or the implementation of a PCR from biological fluids such as blood (serum in particular), urine, seminal fluid, etc.

L'invention réside également dans la mise au point et l'utilisation de tests immunologiques contenant un ou plusieurs anticorps tels que décrits ci-dessus ou fragments de ces derniers. Ces tests permettent de détecter et/ou mesurer individuellement un variant à l'aide d'un anticorps spécifique, plusieurs variants, en parallèle, grâce aux anticorps spécifiques appropriés, ou un ou plusieurs rapports entre les isoformes telles que décrites ci-dessus ou entre lesdites isoformes et d'autres formes décrites pour kallikreine-2 et PSA. The invention also resides in the development and use of immunological assays containing one or more antibodies as described above or fragments thereof. These tests make it possible to detect and / or individually measure a variant with the aid of a specific antibody, several variants, in parallel, using the appropriate specific antibodies, or one or more ratios between the isoforms as described above or between said isoforms and other forms described for kallikrein-2 and PSA.

Une méthode particulière comprend la mise en contact d'un échantillon provenant d'un sujet avec une sonde telle que définie ci-avant, et la mise en évidence d'une hybridation. A particular method comprises contacting a sample from a subject with a probe as defined above, and demonstrating hybridization.

Une autre méthode particulière comprend la mise en contact d'un échantillon provenant d'un sujet avec une amorce ou une paire d'amorces telles que définies ci-avant, et la mise en évidence d'un produit d'amplification. Another particular method comprises contacting a sample from a subject with a primer or a pair of primers as defined above, and the demonstration of an amplification product.

Une autre méthode particulière comprend la mise en contact d'un échantillon provenant d'un sujet avec un anticorps tel que défini ci-avant, et la mise en évidence d'un complexe antigène-anticorps. Another particular method comprises contacting a sample from a subject with an antibody as defined above, and detecting an antigen-antibody complex.

Typiquement, des plusieurs tests sont réalisés en parallèle, à partir de plusieurs échantillons et/ou en utilisant plusieurs sondes, amorces et/ou anticorps. Ainsi, dans un mode particulier, le procédé de l'invention comprend la détermination, en parallèle, de la présence de plusieurs variants ou altérations génétiques tels que décrits ci-avant dans un échantillon d'un patient. Typically, several tests are performed in parallel, from several samples and / or using several probes, primers and / or antibodies. Thus, in a particular embodiment, the method of the invention comprises the determination, in parallel, of the presence of several variants or genetic alterations as described above in a sample of a patient.

Un autre objet de l'invention réside dans un kit utilisable pour la mise en #uvre d'un procédé tel que défini ci-avant comprenant i. un couple d'amorces ou une sonde ou un anticorps tels que définis ci-avant, et ii. les réactifs nécessaires à l'amplification ou à une réaction d'hybridation ou immunologique. Another object of the invention resides in a kit usable for the implementation of a method as defined above comprising i. a pair of primers or a probe or an antibody as defined above, and ii. the reagents necessary for the amplification or a hybridization or immunological reaction.

L'invention réside également dans la mise au point d'une méthode permettant de détecter et/ou de mesurer des partenaires spécifiques d'un ou de plusieurs de ces variants par ajout de l'un ou de plusieurs de ces variants ou de leurs fragments dans des fluides biologiques à tester, tels que du sang (sérum notamment), des urines ou du fluide séminal. The invention also lies in the development of a method for detecting and / or measuring specific partners of one or more of these variants by adding one or more of these variants or their fragments. in biological fluids to be tested, such as blood (serum in particular), urine or seminal fluid.

Criblage de composés actifs Les variants spécifiques de KLK2 et de KLK3 selon l'invention représentent des cibles thérapeutiques particulièrement intéressantes pour le traitement des cancers et notamment du cancer de la prostate. Screening of active compounds The specific variants of KLK2 and KLK3 according to the invention represent therapeutic targets of particular interest for the treatment of cancers, and in particular of prostate cancer.

A cet égard, un objet particulier de l'invention réside dans une méthode de sélection, d'identification, de caractérisation, d'optimisation ou de production de composés actifs, comprenant la mise en contact in vitro ou ex vivo d'un composé test avec un polypeptide tel que défini ci-avant ou une cellule exprimant un polypeptide tel que défini ci-avant, et la sélection ou l'identification de composés modulant l'expression ou l'activité dudit polypeptide. In this regard, a particular object of the invention resides in a method for selecting, identifying, characterizing, optimizing or producing active compounds, comprising bringing into in vitro or ex vivo contact a test compound. with a polypeptide as defined above or a cell expressing a polypeptide as defined above, and the selection or identification of compounds modulating the expression or the activity of said polypeptide.

Le procédé peut être mis en #uvre pour sélectionner ou identifier un activateur ou un inhibiteur de l'expression ou de l'activité de l'antigène spécifique de la PSA ou de KLK-2. The method can be used to select or identify an activator or inhibitor of PSA or KLK-2 specific antigen expression or activity.

Préférentiellement, les méthodes de l'invention comprennent la sélection des composés se liant audit polypeptide, ou au gène ou à l'ARN correspondant, ou Preferably, the methods of the invention comprise the selection of compounds which bind to said polypeptide, or to the corresponding gene or RNA, or

modulant l'expression du dit polypeptide. La liaison au polypeptide au gène ou à l'ARN correspondant peut être mesurée par différentes techniques, telles que le déplacement d'un ligand marqué, la migration sur gel, l'électrophorèse, etc. La modulation de l'expression peut être déterminée par dosage des ARN ou des protéines, ou au moyen d'un système rapporteur. Les cellules utilisées peuvent être toute cellule compatible, notamment des cellules eucaryotes ou procaryotes telles que mentionnées plus haut. modulating the expression of said polypeptide. Binding to the corresponding gene or RNA polypeptide can be measured by various techniques, such as displacement of a labeled ligand, gel migration, electrophoresis, etc. Modulation of expression can be determined by assaying RNAs or proteins, or by means of a reporter system. The cells used may be any compatible cell, especially eukaryotic or prokaryotic cells as mentioned above.

Dans un mode de réalisation particulier, le composé est un acide nucléique antisens, capable d'inhiber l'expression des variants décrits. L'acide nucléique antisens peut comprendre tout ou partie de séquences spécifiques des variants décrits. L'anti-sens peut notamment comprendre une région complémentaire de la forme d'épissage identifiée, et inhiber (ou réduire) sa traduction en protéine. In a particular embodiment, the compound is an antisense nucleic acid capable of inhibiting the expression of the variants described. The antisense nucleic acid may comprise all or part of specific sequences of the variants described. The antisense may in particular comprise a region complementary to the identified splicing form, and inhibit (or reduce) its translation into protein.

Selon un autre mode de réalisation, le composé est un composé chimique, d'origine naturelle ou synthétique, notamment une molécule organique ou inorganique, d'origine végétale, bactérienne, virale, animale, eucaryote, synthétique ou semi-synthétique, capable de moduler l'expression ou l'activité de l'un ou de plusieurs des variants décrits ci-dessus. According to another embodiment, the compound is a chemical compound, of natural or synthetic origin, in particular an organic or inorganic molecule, of vegetable, bacterial, viral, animal, eukaryotic, synthetic or semi-synthetic origin, capable of modulating the expression or activity of one or more of the variants described above.

On préfère des composés spécifiques, c'est-à-dire capables de moduler l'expression ou l'activité des variants, sans affecter significativement l'expression ou l'activité des formes sauvages. Specific compounds, i.e. capable of modulating the expression or activity of the variants, are preferred without significantly affecting the expression or activity of the wild forms.

Les composés ainsi identifiés sont utilisables pour la préparation d'une composition destinée au traitement du cancer de la prostate. The compounds thus identified can be used for the preparation of a composition intended for the treatment of prostate cancer.

Un autre objet de l'invention réside dans l'utilisation d'un composé capable de moduler, i.e. de stimuler, d'inhiber ou de réduire, l'expression d'un ou de plusieurs variants tels que décrits ci-dessus, pour la préparation d'une composition destinée au traitement des cancers et notamment du cancer de la prostate. Another object of the invention is the use of a compound capable of modulating, ie stimulating, inhibiting or reducing, the expression of one or more variants as described above, for the preparation of a composition for the treatment of cancers and in particular prostate cancer.

Dans le contexte de l'invention, le terme traitement désigne le traitement préventif, curatif ou palliatif, ainsi que la prise en charge des patients (réduction de la souffrance, amélioration de la durée de vie, ralentissement de la progression de la maladie), etc. Le traitement peut en outre être réalisé en combinaison avec d'autres agents actifs. In the context of the invention, the term treatment refers to preventive, curative or palliative treatment, as well as the management of patients (reduction of suffering, improvement of the life span, slowing down the progression of the disease), etc. The treatment may further be carried out in combination with other active agents.

Un autre objet de l'invention concernent des méthodes de sélection, d'identification, ou de caractérisation de composés actifs utilisables dans le cadre de la préparation de compositions destinées au traitement de pathologies cancéreuses, comprenant la mise en contact d'un ou de plusieurs composés tests avec des extraits cellulaires exprimant les protéines décrites dans la présente invention, ou avec lesdites protéines purifiées. Another subject of the invention relates to methods for selecting, identifying, or characterizing active compounds that can be used in the context of the preparation of compositions intended for the treatment of cancerous pathologies, comprising contacting one or more test compounds with cell extracts expressing the proteins described in the present invention, or with said purified proteins.

Un autre objet de l'invention concerne l'utilisation de ligands cytotoxiques spécifiques d'un ou de plusieurs variants tels que décrits ci-dessus localisés à la surface des cellules cancéreuses et en particulier des cellules cancéreuses prostatiques. Another subject of the invention relates to the use of cytotoxic ligands specific for one or more variants as described above located on the surface of cancer cells and in particular prostate cancer cells.

D'autres aspects et avantages de la présente invention apparaîtront à la lecture des exemples qui suivent, qui doivent être considérés comme illustratifs et non limitatifs. Other aspects and advantages of the present invention will appear on reading the examples which follow, which should be considered as illustrative and not limiting.

MATERIELS ET METHODES L'analyse qualitative différentielle a été effectuée à partir d'ARN poly adénylés (poly A+) extraits d'échantillons tumoraux et normaux prostatiques. Les ARN poly A+ sont préparés selon des techniques connues de l'homme de métier. Il peut s'agir en particulier d'un traitement au moyen d'agents chaotropiques tels que le thiocyanate de guanidium suivi d'une extraction des ARN totaux au MATERIALS AND METHODS Differential qualitative analysis was performed using poly adenylated RNA (poly A +) extracted from tumor and normal prostatic samples. Poly A + RNAs are prepared according to techniques known to those skilled in the art. It may be in particular a treatment with chaotropic agents such as guanidium thiocyanate followed by extraction of the total RNAs.

moyen de solvants (phénol, chloroforme par exemple). De telles méthodes sont bien connues de l'homme du métier (voir Maniatis et al., Chomczynsli et al., Anal. Biochem. 162 (1987) 156), et peuvent être aisément mises en oeuvre en utilisant des kits disponibles dans le commerce. A partir de ces ARN totaux, les ARN poly A+ sont préparés selon des méthodes classiques connues de l'homme de métier et décrites dans les kits commerciaux. medium of solvents (phenol, chloroform for example). Such methods are well known to those skilled in the art (see Maniatis et al., Chomczynsli et al., Anal Biochem 162 (1987) 156), and can easily be implemented using commercially available kits. . From these total RNAs, poly A + RNAs are prepared according to standard methods known to those skilled in the art and described in commercial kits.

Ces ARN poly A+ servent de matrice à des réactions de transcription inverse à l'aide de transcriptases inverses. Des transcriptases inverses dépourvues d'activité RNase H sont avantageusement utilisées. Elles permettent d'obtenir des brins d'ADN complémentaire de tailles supérieures à ceux obtenus à l'aide de transcriptases inverses classiques. De telles préparations de transcriptases inverses sans activité RNase H sont disponibles commercialement. These poly A + RNAs serve as a template for reverse transcription reactions using reverse transcriptases. Inverse transcriptases lacking RNase H activity are advantageously used. They make it possible to obtain strands of complementary DNA of sizes greater than those obtained using conventional reverse transcriptases. Such reverse transcriptase preparations without RNase H activity are commercially available.

Conformément à la technique DATAS, pour chaque point de la cinétique des hybridations d'ARNm (C) avec des ADNc (T) et des hybridations réciproques d'ARNm (T) avec des ADNc (C) sont réalisées. According to the DATAS technique, for each point of the kinetics of mRNA hybridizations (C) with cDNAs (T) and reciprocal mRNA hybridizations (T) with cDNAs (C) are performed.

Ces hétéroduplexes ARNm/ADNc sont ensuite purifiés selon les protocoles prévus par la technique DATAS. These mRNA / cDNA heteroduplexes are then purified according to the protocols provided by the DATAS technique.

Les séquences d'ARN non appariées avec un ADN complémentaire sont libérées de ces hétéroduplex sous l'action de la RNase H, cette enzyme dégradant les séquences d'ARN appariées. Ces séquences non appariées représentent les différences qualitatives qui existent entre des ARN par ailleurs homologues entre eux. Ces différences qualitatives peuvent être localisées n'importe où sur la séquence des ARN, aussi bien en 5' ou en 3' qu'à l'intérieur de la séquence et notamment à l'intérieur de la séquence codante. Selon leur localisation, ces séquences peuvent être non seulement des modifications d'épissage mais également des conséquences de translocations ou de délétions. The unpaired RNA sequences with a complementary DNA are released from these heteroduplexes under the action of RNase H, this enzyme degrading the paired RNA sequences. These unpaired sequences represent the qualitative differences that exist between otherwise homologous RNAs. These qualitative differences can be located anywhere on the RNA sequence, both 5 'or 3' and inside the sequence and in particular within the coding sequence. Depending on their location, these sequences may be not only splice modifications but also consequences of translocations or deletions.

Les séquences d'ARN représentant les différences qualitatives sont ensuite clonées selon les techniques connues de l'homme de métier et notamment celles décrites dans le brevet relatif à la technologie DATAS. The RNA sequences representing the qualitative differences are then cloned according to the techniques known to those skilled in the art and in particular those described in the patent relating to the DATAS technology.

Ces séquences sont regroupées au sein de banques de ADNc qui constituent des banques qualitatives différentielles. Une de ces banques contient les exons et les introns spécifiques de la situation saine ;les autres banques contiennent les événements d'épissage caractéristiques des conditions pathologiques. These sequences are grouped within cDNA libraries which constitute differential qualitative libraries. One of these banks contains the specific exons and introns of the healthy situation, the other banks contain the splicing events characteristic of pathological conditions.

Les fragments issus des gènes humains de KLK2 et de KLK3 proviennent de ces banques. Fragments from the human KLK2 and KLK3 genes come from these libraries.

Quatre échantillons tumoraux ont été mélangés pour former un pool tumoral. Four tumor samples were mixed to form a tumor pool.

Ce pool d'ARN a été traité à la Dnase à l'aide du kit DNA free de la société Ambion (n cat. 1906). This RNA pool was Dnase-treated using the Ambion DNA free kit (Cat No. 1906).

Cet ARN est ensuite reverse-transcrit à l'aide de la transcriptase inverse du kit High capacity cDNA Archive de la société Aplied Biosystems (n cat. This RNA is then reverse-transcribed using the reverse transcriptase of the High capacity cDNA Archive kit from Aplied Biosystems (cat.

4322171 ). 4322171).

L'ADNc ainsi produit sert de matrice pour des réactions de PCR afin d'amplifier spécifiquement différentes régions d'ARNs messagers dérivés de la kallikreine-2 et de la kallikreine-3 humaines selon le protocole suivant :

The cDNA thus produced serves as a template for PCR reactions to specifically amplify different messenger RNA regions derived from human kallikrein-2 and kallikrein-3 according to the following protocol:

<tb>
<tb> Tampon <SEP> Invitrogen <SEP> 10X <SEP> : <SEP> 2 l
<tb> DNTPs <SEP> 2mM: <SEP> 2 L
<tb> MgCI2 <SEP> 50mM <SEP> : <SEP> 0.6 L
<tb> Primer <SEP> amont <SEP> 1 <SEP> OpM: <SEP> 0.4 L
<tb> Primer <SEP> aval <SEP> 10 M: <SEP> 0.4 L
<tb> Taq <SEP> polymerase <SEP> : <SEP> 0.2 L
<tb> H20: <SEP> 13.4pL
<tb> cDNA <SEP> 1 L
<tb> Volume <SEP> final <SEP> : <SEP> 19 L
<tb>
Selon le programme de cycles suivant :

<Tb>
<tb> Buffer <SEP> Invitrogen <SEP> 10X <SEP>: <SEP> 2 l
<tb> DNTPs <SEP> 2mM: <SEP> 2 L
<tb> MgCl2 <SEP> 50mM <SEP>: <SEP> 0.6 L
<tb> Primer <SEP> upstream <SEP> 1 <SEP> OpM: <SEP> 0.4 L
<tb> Primer <SEP> downstream <SEP> 10 M: <SEP> 0.4 L
<tb> Taq <SEP> polymerase <SEP>: <SEP> 0.2 L
<tb> H20: <SEP> 13.4pL
<tb> cDNA <SEP> 1 L
<tb> Volume <SEP> final <SEP>: <SEP> 19 L
<Tb>
According to the following cycle program:

<tb>
<tb> 94 C <SEP> 3min
<tb> 94 C <SEP> 30sec
<tb> 55 C <SEP> 1 <SEP> min <SEP> ) <SEP> 35 <SEP> cycles <SEP>
<tb> 72 C <SEP> 3min
<tb> 72 C <SEP> 6min
<tb> <Tb>
<tb> 94 C <SEP> 3min
<tb> 94 C <SEP> 30sec
<tb> 55 C <SEP> 1 <SEP> min <SEP>) <SEP> 35 <SEP> cycles <SEP>
<tb> 72 C <SEP> 3min
<tb> 72 C <SEP> 6min
<Tb>

Les oligonucléotides utilisés comme amorces de PCR sont les suivants : Pour KLK2 : 163 KLK2-1-S GGTTCTCTCCATCGCCTTG 164 KLK2-1-AS CTCCTTTAGTCTGAAGCCTCACC 165 KLK2-2-S TGTATTTCACCACGACTATATCTCCC 166 KLK2-2-AS GCTCTAGCACACATGTCATTGGA 167 KLK2-3-S CAGTCATGGATGGGCACACT 168 KLK2-3-AS CTCAGACCCAGGCATCTGG 169 KLK2-4-S GCCAGATGGTGTAGCTGGG 170 KLK2-4-AS CATGATGTGATACCTTGAAGCACC 171 KLK2-5-S CCCTATCCAATTCTTTTGGGT 172 KLK2-5-AS GCTTTGATGCTTCAGAAGGC 173 KLK2-6-S CCTGCCAAGATCACAGATGTTG 174 KLK2-6-AS TGGTTAGCTTTCAGATTGCAGC 212 KLK2-7-S tgggaagaagaacaacgagca 213 KLK2-7-AS tttagggaatcagagaactggcc 214 KLK2-8-S agctcaatgtgtgtgcatgtgag 215 KLK2-8-AS aaaggatgcgggaagtcaga 216 KLK2-9-S cagcataattcacccattc 217 KLK2-9-AS tctacctgttcactgctgcttcc 218 KLK2-10-S ggagtgacgatgaggatgacc 219 KLK2-10-AS gtcagttcagtgatcagaatgac 220 KLK2-11-AS gctacagctgaaaccagcc 221 KLK2-12-S ccactacagagccctcactcca 222 KLK2-13-AS aatgcttctcacactcccagc 249 klk2 start CCTGTGTCAGCATGTGGGACC 250 klk2 stop TGGGACAGGGGCACTCAGGG 251 klk2e spe cctgggggtatagttgccactat The oligonucleotides used as PCR primers are as follows: For KLK2: 163 KLK2-1-S GGTTCTCTCCATCGCCTTG 164 KLK2-1-AS CTCCTTTAGTCTGAAGCCTCACC 165 KLK2-2-S TGTATTTCACCACGACTATATCTCCC 166 KLK2-2-AS GCTCTAGCACACATGTCATTGGA 167 KLK2-3-S CAGTCATGGATGGGCACACT 168 KLK2-3 CTCAGACCCAGGCATCTGG AS-169-S KLK2-4 GCCAGATGGTGTAGCTGGG 170 KLK2-4 CATGATGTGATACCTTGAAGCACC AS-171-S KLK2-5 CCCTATCCAATTCTTTTGGGT 172 KLK2-5 GCTTTGATGCTTCAGAAGGC AS-173-S KLK2-6 CCTGCCAAGATCACAGATGTTG 174 KLK2-6-AS 212 TGGTTAGCTTTCAGATTGCAGC KLK2 -7-S tgggaagaagaacaacgagca 213 KLK2-7 tttagggaatcagagaactggcc AS-214-S KLK2-8 agctcaatgtgtgtgcatgtgag 215 KLK2-8 aaaggatgcgggaagtcaga AS-216-S KLK2-9 cagcataattcacccattc 217 KLK2-9 tctacctgttcactgctgcttcc AS-218-S KLK2-10 ggagtgacgatgaggatgacc 219 KLK2- 10-AS gtcagttcagtgatcagaatgac 220 KLK2-11-AS gctacagctgaaaccagcc 221 KLK2-12-S ccactacagagccctcactcca 222 KLK2-13-AS aatgcttctcacactcccccc 249 klk2 start CCTGTGTCAGCATGTGGGACC 250 klk2 stop TGGGACAGGGGCACTCAGGG 251 klk2e s pe cctgggggtatagttgccactat

Pour PSA : 175 PSA-1-S CGTGACGTGGATTGGTGAGA 176 PSA-1-AS GCTGGCCTTAGAGGTTATCCTG 177 PSA-2-S GGCCTGAACTGTGTCTTCCC 178 PSA-2-AS GTGAACTTGCGCACACACG 179 PSA-3-S TGGCAGGTGCTTGTGGC 180 PSA-3-AS CTCCTCCCTCAGACCCAGG 181 PSA-4-S GTCCAGCCCACAACAGTG 182 PSA-4-AS CCTTGAAGCACACCATTACAGAC 183 PSA-5-S CCTAAATCCATCTCCTATCCGAGTC 184 PSA-5-AS CAGGATGAAACAGGCTGTGC 185 PSA-6-S TGCTGTGAAGGTCATGGACC 186 PSA-6-AS GACGCCTTGTTGGCTTCTAGAC 200 PSA-7-S tcccagagaccttgatgctt 201 PSA-7-AS gtttgcaggttggtggctg 202 PSA-8-S gtcccggttgtcttcctcac 203 PSA-8-AS gacccatttgttgtctcaggc 204 PSA-9-S ctgaacacacgcacgggat 205 PSA-9-AS ccaaagcccttccttttctca 206 PSA-10-S ttggaaacccacgccaaa 207 PSA-10-AS cctcagagtggctcagctgtag 208 PSA-11-S tgactccctcaaggcaataggtta 209 PSA-11-AS tgtttgctcactcccaccttct 210 PSA-12-S tgctggacagaagcaggaca 211 PSA-12-AS atcatcactccctccacatcc 247 PSA start GGAGAGCTGTGTCACCATGTGG 248 PSA stop ATAGGGGTGCTCAGGGGTTGG Les produits amplifiés sont ensuite clonés dans le système Topo de la société Invitrogen (n cat. K4600) selon le protocole fourni. Les produits de For PSA: 175 PSA-1-S CGTGACGTGGATTGGTGAGA 176 PSA-1-AS GCTGGCCTTAGAGGTTATCCTG 177 PSA-2-S GGCCTGAACTGTGTCTTCCC 178 PSA-2-AS GTGAACTTGCGCACACACG 179 PSA-3-S TGGCAGGTGCTTGTGGC 180 PSA-3-AS CTCCTCCCTCAGACCCAGG 181 PSA-4- S GTCCAGCCCACAACAGTG 182 PSA-4-AS CCTTGAAGCACACCATTACAGAC 183 PSA-5-S CCTAAATCCATCTCCTATCCGAGTC 184 PSA-5-AS CAGGATGAAACAGGCTGTGC 185 PSA-6-S TGCTGTGAAGGTCATGGACC 186 PSA-6-AS GACGCCTTGTTGGCTTCTAGAC 200 PSA-7-S tcccagagaccttgatgctt 201 PSA-7-AS gtttgcaggttggtggctg 202 SPA8-S gtcccggttgtcttcctcac 203 SPA8-AS gacccatttgttgtctcaggc 204 PSA-9-S ctgaacacacgcacgggat 205 PSA-9-AS ccaaagcccttccttttctca 206 PSA-10-S ttggaaacccacgccaaa 207 PSA-10-AS cctcagagtggctcagctgtag 208 PSA-11-S tgactccctcaaggcaataggtta 209 PSA-11-AS tgtttgctcactccccctct 210 PSA-12-S tgctggacagaagcaggaca 211 PSA-12-AS atcatcactccctccacatcc 247 PSA start GGAGAGCTGTGTCACCATGTGG 248 PSA stop ATAGGGGTGCTCAGGGGTTGG The amplified products are then cloned in the Topo system of Invitroge n (cat. K4600) according to the protocol provided. The products of

ligation sont transformés dans des cellules Top 10 compétentes. Les colonies sont identifiées sur milieu agar/LB supplémenté d'ampicilline. ligation are transformed into competent Top 10 cells. The colonies are identified on agar / LB medium supplemented with ampicillin.

Les ADNc présents dans ces colonies sont amplifiés de façon individuelle par amplification PCR à l'aide d'amorces Sp6 et T7 selon le protocole suivant :

The cDNAs present in these colonies are amplified individually by PCR amplification using Sp6 and T7 primers according to the following protocol:

<tb>
<tb> Primer <SEP> T7 <SEP> 10 M <SEP> : <SEP> 2 L
<tb> Primer <SEP> Sp6 <SEP> lOpM <SEP> 2[iL
<tb> MgCI2 <SEP> 50mM: <SEP> 1.2pL
<tb> DNTPs <SEP> 2mM: <SEP> 4\il
<tb> Tampon <SEP> 10x <SEP> 4 L
<tb> Taq <SEP> polymerase: <SEP> 0.2pL
<tb> H20: <SEP> 25.6(iL
<tb> Colonie <SEP> : <SEP> 1 L
<tb> vol <SEP> final <SEP> 40 L
<tb>
selon le programme de cycles suivant :
94 C 5min
94 C 30sec)
55 C 30sec) 30cycles
72 C 1 min)
72 C 5min Les produits d'amplification sont ensuite purifiés par P100 pour être séquences à l'aide du kit Big Dye Terminator de la société Applied Biosystems selon le protocole fourni par ce fournisseur. Les réactions de séquence sont analysées à l'aide d'un séquenceur 3100 d'Applied Biosystems. Le tableau suivant représente les différents ADNc ainsi que les couples d'oligonucléotides amorces utilisés pour leur obtention et permettant leur amplification dans un échantillon.

<Tb>
<tb> Primer <SEP> T7 <SEP> 10M <SEP>: <SEP> 2 L
<tb> Primer <SEP> Sp6 <SEP> lOpM <SEP> 2 [iL
<tb> MgCl2 <SEP> 50mM: <SEP> 1.2pL
<tb> DNTPs <SEP> 2mM: <SEP> 4 \ il
<tb> Buffer <SEP> 10x <SEP> 4 L
<tb> Taq <SEP> polymerase: <SEP> 0.2pL
<tb> H20: <SEP> 25.6 (iL
<tb> Colony <SEP>: <SEP> 1 L
<tb> flight <SEP> final <SEP> 40 L
<Tb>
according to the following cycle program:
94 C 5min
94 C 30sec)
55 C 30sec) 30cycles
72 C 1 min)
The amplification products are then purified by P100 to be sequenced using the Big Dye Terminator kit from Applied Biosystems according to the protocol provided by this supplier. Sequence reactions are analyzed using an Applied Biosystems 3100 Sequencer. The following table represents the different cDNAs as well as the pairs of oligonucleotide primers used for their obtaining and allowing their amplification in a sample.

Tableau <SEP> 1
<tb> Isoformes <SEP> Couple <SEP> d'oligonucléotides
<tb> Table <SEP> 1
<tb> Isoforms <SEP> Couple <SEP> of oligonucleotides
<Tb>

<tb>
<tb> KLK2-EHT002 <SEP> 249/166
<tb> KLK2-EHT003 <SEP> 249 <SEP> / <SEP> 170 <SEP>
<tb> KLK2-EHT004 <SEP> 249/174
<tb> KLK2-EHT006 <SEP> 249/166
<tb> KLK2-EHT007 <SEP> 249/174
<tb> KLK2-EHT008 <SEP> 249/174
<tb> KLK2-EHT009 <SEP> 249/166
<tb> KLK2-EHT011 <SEP> 249/174
<tb> PSA-EHT001 <SEP> 247 <SEP> / <SEP> 203 <SEP>
<tb> PSA-EHT003 <SEP> 247 <SEP> / <SEP> 203 <SEP>
<tb> PSA-EHT004 <SEP> 247 <SEP> / <SEP> 203 <SEP>
<tb> PSA-EHT005 <SEP> 247/203
<tb> PSA-EH007 <SEP> 247/203 <SEP>
<tb> PSA-EHT008 <SEP> 247/203
<tb> PSA-EHT009 <SEP> 247/207
<tb> PSA-EHT012 <SEP> 247/205
<tb> PSA-EHT013 <SEP> 247/176
<tb> PSA-EHT015 <SEP> 247/176
<tb> PSA-EHT016 <SEP> 247/176
<tb> PSA-EHT018 <SEP> 247/207
<tb> PSA-EHT019 <SEP> 247/248 <SEP>
<tb> PSA-EHT020 <SEP> 247/248
<tb> PSA-EHT021 <SEP> 247 <SEP> / <SEP> 248 <SEP>
<tb> PSA-EHT022 <SEP> 247/182
<tb> PSA-EHT023 <SEP> 247/182
<tb> PSA-EHT025 <SEP> 247 <SEP> / <SEP> 248 <SEP>
<tb> PSA-EHT026 <SEP> 247 <SEP> / <SEP> 248 <SEP>
<tb> PSA-EHT027 <SEP> 247/182
<tb>
La séquence complète des variants est fournie dans la liste de séquence jointe. <Tb>
<tb> KLK2-EHT002 <SEP> 249/166
<tb> KLK2-EHT003 <SEP> 249 <SEP> / <SEP> 170 <SEP>
<tb> KLK2-EHT004 <SEP> 249/174
<tb> KLK2-EHT006 <SEP> 249/166
<tb> KLK2-EHT007 <SEP> 249/174
<tb> KLK2-EHT008 <SEP> 249/174
<tb> KLK2-EHT009 <SEP> 249/166
<tb> KLK2-EHT011 <SEP> 249/174
<tb> PSA-EHT001 <SEP> 247 <SEP> / <SEP> 203 <SEP>
<tb> PSA-EHT003 <SEP> 247 <SEP> / <SEP> 203 <SEP>
<tb> PSA-EHT004 <SEP> 247 <SEP> / <SEP> 203 <SEP>
<tb> PSA-EHT005 <SEP> 247/203
<tb> PSA-EH007 <SEP> 247/203 <SEP>
<tb> PSA-EHT008 <SEP> 247/203
<tb> PSA-EHT009 <SEP> 247/207
<tb> PSA-EHT012 <SEP> 247/205
<tb> PSA-EHT013 <SEP> 247/176
<tb> PSA-EHT015 <SEP> 247/176
<tb> PSA-EHT016 <SEP> 247/176
<tb> PSA-EHT018 <SEP> 247/207
<tb> PSA-EHT019 <SEP> 247/248 <SEP>
<tb> PSA-EHT020 <SEP> 247/248
<tb> PSA-EHT021 <SEP> 247 <SEP> / <SEP> 248 <SEP>
<tb> PSA-EHT022 <SEP> 247/182
<tb> PSA-EHT023 <SEP> 247/182
<tb> PSA-EHT025 <SEP> 247 <SEP> / <SEP> 248 <SEP>
<tb> PSA-EHT026 <SEP> 247 <SEP> / <SEP> 248 <SEP>
<tb> PSA-EHT027 <SEP> 247/182
<Tb>
The complete sequence of variants is provided in the attached sequence listing.

REFERENCES David et.al, (2002) J. Biol. Chem Riegman et al (1988) Biochem. Biophys. Res. Commun. 155, 181-188. REFERENCES David et.al, (2002) J. Biol. Chem Riegman et al (1988) Biochem. Biophys. Res. Common. 155, 181-188.

Riegman et.al (1991) Mol. Cell. Endicronol. 76,181-190. Riegman et al (1991) Mol. Cell. Endicronol. 76.181-190.

Liu et.al (1999) Biochem. Biophys. Res. Commun. 264,833-839 Heuze et.al (1999) Cancer Res. 59,2820-2824. Liu et al (1999) Biochem. Biophys. Res. Common. 264, 833-839 Heuze et al (1999) Cancer Res. 59.2820-2824.

Tanaka et.al (2000) Cancer Res. 60,56-59.Tanaka et al (2000) Cancer Res. 60.56 to 59.

Claims

REVENDICATIONS 1.Acide nucléique caractérisé en ce qu'il comprend une séquence choisie parmi: a) les séquences SEQ ID NOs : 9 à 28, b) un variant des séquences SEQ ID NOs : 9 à 28 résultant de la dégénérescence du code génétique, c) le brin complémentaire des séquences SEQ ID NOs : 9 à 28, et d) un fragment spécifique des séquences a) à c). 1. A nucleic acid characterized in that it comprises a sequence chosen from: a) the sequences SEQ ID NOs: 9 to 28, b) a variant of SEQ ID NOs: 9 to 28 sequences resulting from the degeneracy of the genetic code, c) the complementary strand of the sequences SEQ ID NOs: 9 to 28, and d) a specific fragment of the sequences a) to c).

2. Acide nucléique selon la revendication 1, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un ADN, choisi de préférence parmi les ADNc et les ADNg, ou d'unNucleic acid according to claim 1, characterized in that it is a DNA, preferably selected from cDNAs and gDNAs, or a

ARN. RNA.

3. Polypeptide codé par un acide nucléique selon l'une quelconque des revendications précédentes, de préférence choisi parmi un polypeptide comprenant tout ou une partie spécifique d'une séquence choisie parmi SEQ ID Nos : 49 à 93. 3. A polypeptide encoded by a nucleic acid according to any preceding claim, preferably selected from a polypeptide comprising all or a specific portion of a sequence selected from SEQ ID Nos: 49 to 93.

4. Protéine choisie parmi les variants PSA-EHT001 à PSA-EHT027 de séquence SEQ ID Nos : 49 à 93, respectivement. 4. Protein chosen from PSA-EHT001 to PSA-EHT027 variants of sequence SEQ ID Nos: 49 to 93, respectively.

5. Sonde nucléique caractérisée en ce qu'elle permet la détection par hybridation sélective d'un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 2. 5. Nucleic probe characterized in that it allows the detection by selective hybridization of a nucleic acid according to one of claims 1 to 2.

6. Sonde selon la revendication 5, caractérisée en ce qu'elle comprend la séquence d'un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à6. Probe according to claim 5, characterized in that it comprises the sequence of a nucleic acid according to one of claims 1 to

2. 2.

7. Sonde selon la revendication 6, caractérisée en ce qu'elle comprend de 20 à 1000 nucléotides, de préférence de 50 à 800. 7. Probe according to claim 6, characterized in that it comprises from 20 to 1000 nucleotides, preferably from 50 to 800.

8. Amorce, caractérisée en ce qu'elle permet l'amplification sélective d'un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 2. 8. Primer, characterized in that it allows the selective amplification of a nucleic acid according to one of claims 1 to 2.

9. Amorce selon la revendication 8, caractérisée en ce qu'elle est composée de 3 à 50 bases, de préférence de 3 à 40 et encore plus préférentiellement de 3 à 35 bases. 9. Primer according to claim 8, characterized in that it is composed of 3 to 50 bases, preferably 3 to 40 and even more preferably 3 to 35 bases.

10. Amorce selon l'une des revendications 8 ou 9, caractérisée en ce qu'elle est complémentaire d'une région au moins du gène codant pour l'antigène spécifique de PSA portant une mutation impliquée dans un cancer. 10. Primer according to one of claims 8 or 9, characterized in that it is complementary to at least one region of the gene encoding the PSA-specific antigen carrying a mutation implicated in cancer.

11. Amorce selon la revendication 10, caractérisée en ce qu'elle est constituée d'un acide nucléique simple-brin comprenant de 3 à 50 nucléotides complémentaires d'une partie au moins de l'une des séquences SEQ ID NO : 9 à 28 ou de leur brin complémentaire. 11. Primer according to claim 10, characterized in that it consists of a single-stranded nucleic acid comprising from 3 to 50 nucleotides complementary to at least part of one of the sequences SEQ ID NO: 9 to 28 or their complementary strand.

12. Couple d'amorces comprenant une séquence sens et une séquence inverse, caractérisé en ce que les amorces de ladite paire s'hybrident avec une région d'un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 2 et permettent l'amplification d'au moins une portion de cet acide nucléique. 12. A pair of primers comprising a sense sequence and an inverse sequence, characterized in that the primers of said pair hybridize with a region of a nucleic acid according to one of claims 1 to 2 and allow the amplification of at least a portion of this nucleic acid.

13. Anticorps, caractérisé en ce qu'il est spécifique d'une protéine ou d'un polypeptide selon les revendications 3 ou 4. An antibody, characterized in that it is specific for a protein or polypeptide according to claims 3 or 4.

14. Anticorps selon la revendication 13, caractérisé en ce qu'il s'agit d'un polyclonal, d'un monoclonal ou d'un dérivé de ceux-ci. 14. Antibody according to claim 13, characterized in that it is a polyclonal, a monoclonal or a derivative thereof.

15. Procédé de détection d'une pathologie ou d'une prédisposition à une pathologie chez un sujet, comprenant la détermination de la présence, dans un échantillon dudit sujet, d'un acide nucléique selon l'une des revendications 1 à 2 ou d'une protéine ou polypeptide selon les revendications 3 et 4. A method of detecting a pathology or predisposition to a pathology in a subject, comprising determining the presence, in a sample of said subject, of a nucleic acid according to one of claims 1 to 2 or a protein or polypeptide according to claims 3 and 4.

16. Procédé selon la revendication 15, caractérisé en ce que la détermination est réalisée par séquençage, hybridation et/ou amplification sélectives. 16. The method of claim 15, characterized in that the determination is carried out by sequencing, hybridization and / or selective amplification.

17. Procédé selon la revendication 16, caractérisé en ce que l'amplification est réalisée en utilisant un couple d'amorces selon la revendication 12. 17. The method of claim 16, characterized in that the amplification is performed using a pair of primers according to claim 12.

18. Kit utilisable pour la mise en #uvre d'un procédé tel que défini dans les revendications 15 à 17 comprenant - un couple d'amorces selon la revendication 12 ou une sonde selon l'une des revendications 5 à 7 ou un anticorps selon l'une des revendications 13 et 14, et les réactifs nécessaires à l'amplification ou à une réaction d'hybridation ou immunologique. 18. Kit usable for the implementation of a method as defined in claims 15 to 17 comprising - a pair of primers according to claim 12 or a probe according to one of claims 5 to 7 or an antibody according to one of claims 13 and 14, and the reagents necessary for amplification or a hybridization or immunological reaction.

19. Méthode de sélection ou d'identification de composés actifs, comprenant la mise en contact in vitro ou ex vivo d'un composé test avec une cellule exprimant un polypeptide selon la revendication 3, et la sélection ou l'identification de composés modulant l'expression ou l'activité dudit polypeptide. A method of selecting or identifying active compounds, comprising contacting in vitro or ex vivo a test compound with a cell expressing a polypeptide according to claim 3, and selecting or identifying modulating compounds of the invention. expression or activity of said polypeptide.

20. Méthode selon la revendication 19, caractérisée en ce qu'elle comprend la sélection des composés se liant audit polypeptide. 20. The method of claim 19, characterized in that it comprises the selection of compounds binding to said polypeptide.

21. Méthode selon la revendication 19, caractérisée en ce qu'elle comprend la sélection des composés modulant l'expression du dit polypeptide. 21. The method of claim 19, characterized in that it comprises the selection of compounds modulating the expression of said polypeptide.

22. Vecteur comprenant un acide nucléique selon la revendication 1 ou 2. A vector comprising a nucleic acid according to claim 1 or 2.

23. Cellule recombinant comprenant un vecteur selon la revendication 22. Recombinant cell comprising a vector according to claim 22.

24. Produit comprenant un acide nucléique selon l'une des revendications24. Product comprising a nucleic acid according to one of the claims

1, 2,5, 6 et 7, un vecteur selon la revendication 22, un polypeptide selon la revendication 3 ou 4 ou un anticorps selon la revendication 13 ou 14 immobilisé sur un support.1, 2,5, 6 and 7, a vector according to claim 22, a polypeptide according to claim 3 or 4 or an antibody according to claim 13 or 14 immobilized on a support.