FR2824823A1 - Preparation of aliphatic carboxylic acids by enzymatic hydrolysis of aliphatic nitriles, useful as precursors for pharmaceutical, agrochemical and nutritional applications - Google Patents
Preparation of aliphatic carboxylic acids by enzymatic hydrolysis of aliphatic nitriles, useful as precursors for pharmaceutical, agrochemical and nutritional applications Download PDFInfo
- Publication number
- FR2824823A1 FR2824823A1 FR0106665A FR0106665A FR2824823A1 FR 2824823 A1 FR2824823 A1 FR 2824823A1 FR 0106665 A FR0106665 A FR 0106665A FR 0106665 A FR0106665 A FR 0106665A FR 2824823 A1 FR2824823 A1 FR 2824823A1
- Authority
- FR
- France
- Prior art keywords
- aliphatic
- biological material
- nitrile
- immobilized
- nitriles
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/002—Nitriles (-CN)
- C12P13/004—Cyanohydrins
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N11/00—Carrier-bound or immobilised enzymes; Carrier-bound or immobilised microbial cells; Preparation thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/40—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a carboxyl group including Peroxycarboxylic acids
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
Abstract
Description
B 13687.4 PAB 13687.4 PA
1 28248231 2824823
Procédé de préparation d'acides carboxyliques aliphatiques par hydrolyse euzymatique de composés nitriles aliphatiques La présente invention concerne un nouveau procédé de préparation d'acides carboxyliques aliphatiques par hydrolyse enzymatique de composés nitriles aliphatiques. De nombreux acides carboxyliques aliphatiques ont des applications industrielles, ou sont des précurseurs de composés ayant de telles applications, dans les domaines pharmaceutiques, The present invention relates to a new process for the preparation of aliphatic carboxylic acids by the enzymatic hydrolysis of aliphatic nitrile compounds. Many aliphatic carboxylic acids have industrial applications, or are precursors of compounds having such applications, in the pharmaceutical fields,
agrochimiques ou nutritionnels.agrochemical or nutritional.
A titre d'exemple, on peut citer l'acide 2-hydroxy-4-méthylthiobutyrique (hyroxy analogue de la méthionine) largement employé en tant qu'additif alimentaire dans le domaine de By way of example, mention may be made of 2-hydroxy-4-methylthiobutyric acid (hydroxy analogue of methionine) widely used as a food additive in the field of
l'alimentation animale, notamment l'alimentation des volailles. animal feed, especially poultry feed.
D'autre part, les monocyanoacides sont des composés particulièrement utilisés dans On the other hand, monocyanoacids are compounds particularly used in
l'industrie chimique des polymères. the polymer chemical industry.
La plupart des procédés permettant de synthétiser ces composés sont essentiellement des procédés de synthèse organique faisant intervenir la chimie conventionnelle. En ce qui concerne la synthèse d'acides carboxyliques aliphatiques par hydrolyse des composés nitriles correspondants, on connait des procédés faisant intervenir des catalyseurs organométalliques. À titre d'exemple, nous pouvons notamment citer ceux faisant intervenir des complexes de métaux de transition tels que le palladium (Paraskewas, 1974, Synthesis: 574), le cobalt (Chin et Kim, 1990, Angew. Chem. Int. Ed. Eng. 29: 523), ou le platine (Bennet et Yoshida, 1973, J. Am. Chem. Soc. 95: 3030) qui ont été employés avec plus ou moins de succès. Néanmoins, l'inconvénient majeur de ces méthodes réside dans l'élaboration complexe et onéreuse du Most of the methods for synthesizing these compounds are essentially organic synthesis methods involving conventional chemistry. As regards the synthesis of aliphatic carboxylic acids by hydrolysis of the corresponding nitrile compounds, processes are known which involve organometallic catalysts. By way of example, we can notably cite those involving transition metal complexes such as palladium (Paraskewas, 1974, Synthesis: 574), cobalt (Chin and Kim, 1990, Angew. Chem. Int. Ed. Eng. 29: 523), or platinum (Bennet and Yoshida, 1973, J. Am. Chem. Soc. 95: 3030) which have been used with varying degrees of success. However, the major drawback of these methods lies in the complex and expensive development of the
catalyseur organométallique.organometallic catalyst.
De plus en plus de procédés de synthèse organique font intervenir la biocatalyse. De nombreuses études ont porté sur les enzymes à pouvoir hydrolytique appelées plus communément les hydrolases (lipases, estérases et acylases), notamment pour leur aptitude à bioconvertir un grand nombre de substrats naturels ou non-naturels dans des conditions opératoires identiques (Zhu et Telford, 1990, Tetrahedron 46: 6587; Santaniello et al. , 1992, More and more organic synthesis processes involve biocatalysis. Numerous studies have focused on enzymes with hydrolytic power more commonly called hydrolases (lipases, esterases and acylases), in particular for their ability to bioconvert a large number of natural or non-natural substrates under identical operating conditions (Zhu and Telford, 1990, Tetrahedron 46: 6587; Santaniello et al., 1992,
Chem. Rev. 92, 1071).Chem. Rev. 92, 1071).
Comparativement, un faible nombre d'euzymes catalysant l'hydrolyse (nitrilase) ou In comparison, a small number of enzymes catalyzing hydrolysis (nitrilase) or
l'hydratation (nitrile hydratase) des nitriles en acides carboxyliques ou amides a été identifié. the hydration (nitrile hydratase) of nitriles to carboxylic acids or amides has been identified.
Cependant, de telles enzymes constituent des réactifs importants pouvant étre employés dans des biocatalyseurs destinés à la synthèse d'acides carboxyliques ayant des applications dans les domaines agrochimique, pharmaceutique ou nutritionnel. Un autre avantage des enzymes However, such enzymes constitute important reagents which can be used in biocatalysts intended for the synthesis of carboxylic acids having applications in the agrochemical, pharmaceutical or nutritional fields. Another benefit of enzymes
2 28248232 2824823
nitrilasiques est leur remarquable tolérance vis-à-vis des groupes fonctionnels (de Raadt et al., 1991, Tetrahedron Lett. 32: 341). De plus, les conditions expérimentales et les réactifs généralement employés sont dénués de toxicité et peuvent donc étre engagés dans des schémas nitrilasiques is their remarkable tolerance towards functional groups (de Raadt et al., 1991, Tetrahedron Lett. 32: 341). In addition, the experimental conditions and the reagents generally used are devoid of toxicity and can therefore be used in schemes.
de synthèse de composés à visée pharmaceutique ou agrochimique. for the synthesis of pharmaceutical or agrochemical compounds.
Il est connu que certaines nitrilases convertissent efficacement différents types de nitriles. En particulier, la nitrilase de la bactérie Alcaligenes faecalis ATCC 8750 est capable de produire It is known that certain nitrilases efficiently convert different types of nitriles. In particular, the nitrilase from the bacteria Alcaligenes faecalis ATCC 8750 is capable of producing
de l'acide R-(-)-mandélique à partir de mandélonitrile racémique (Yamamoto et al., 1991, Appl. R - (-) - mandelic acid from racemic mandelonitrile (Yamamoto et al., 1991, Appl.
Environ. Microbiol. 57(10): 3028-3032). De part cette activité, cette enzyme était réputée pour avoir un forte affinité pour les nitriles benzyliques, et donc pour étre une arylacétonitrilase (Yamamoto et al., 1992, J. Ferm. Bioeng. 73: 425). D'autres nitrilases, par exemple la nitrilase de la bactérie Comumonas testosteroni, ont été identifiées pour leur capacité à hydrolyser les nitriles About. Microbiol. 57 (10): 3028-3032). Due to this activity, this enzyme was reputed to have a strong affinity for benzylic nitriles, and therefore to be an arylacetonitrile (Yamamoto et al., 1992, J. Ferm. Bioeng. 73: 425). Other nitrilases, for example nitrilase from the bacterium Comumonas testosteroni, have been identified for their ability to hydrolyze nitriles
aliphatiques (Levy-Schil et al., 1995, Gene 161(1): 15-20). aliphatics (Levy-Schil et al., 1995, Gene 161 (1): 15-20).
Par ailleurs, on connait de la demande de brevet WO 98/18941 l'utilisation de la nitrilase d'Alcaligenes faecalis ATCC 8750 pour la conversion par hydrolyse enzymatique du 2-hydroxy Furthermore, it is known from patent application WO 98/18941 the use of nitrilase from Alcaligenes faecalis ATCC 8750 for the conversion by enzymatic hydrolysis of 2-hydroxy
4-méthylthio butyronitrile en acide 2-hydroxy 4-méthylthio butyrique et/ou son sel d'ammonium. 4-methylthio butyronitrile to 2-hydroxy acid 4-methylthio butyric and / or its ammonium salt.
La nitrilase de la bactérie Alcaligenes faecalis ATCC 8750 est donc particulièrement efficace, mais aucun procédé connu n'a jusqu'alors permis de généraliser son utilisation industrielle à un grand nombre de nitriles. Toutefois, de nombreux autres acides carboxyliques aliphatiques ont des applications industrielles, et aucun procédé de synthèse de ces autres composés par biocatalyse n'a été développé. La présente invention a pour but de pallier cet inconvénient en proposant un système efficace de synthèse enzymatique d'acides carboxyliques aliphatiques variés à partir de leurs nitriles correspondants, mettant en _uvre la nitrilase The nitrilase from the bacteria Alcaligenes faecalis ATCC 8750 is therefore particularly effective, but no known process has hitherto made it possible to generalize its industrial use to a large number of nitriles. However, many other aliphatic carboxylic acids have industrial applications, and no process for the synthesis of these other compounds by biocatalysis has been developed. The present invention aims to overcome this drawback by proposing an efficient system for the enzymatic synthesis of various aliphatic carboxylic acids from their corresponding nitriles, using nitrilase
d'Alcaligenes faecalis ATCC 8750.of Alcaligenes faecalis ATCC 8750.
3 28248233 2824823
DescriptionDescription
La présente invention concerne un pro cédé de préparati on d'acides carboxyliques aliphatiques, à l'exception de l'hydroxyanalogue de la méthionine, par hydrolyse enzymatique de composés nitriles aliphatiques, à l'exception du 2-hydroxy 4-méthylthio butyronitrile, caractérisé en ce que: (a) on prépare un matériel biologique ayant une activité nitrilase, (b) on immobilise ledit matériel biologique (c) on met en présence un composé nitrile avec le matériel biologique ainsi immobilisé, pour obtenir le sel d' ammonium de l'acide carboxylique aliphatique formé (d) éventuellement, on purifie l'acide formé Selon l'invention, on entend par acide carboxylique aliphatique tous les acides carboxyliques aliphatiques à l'exception de l'hydroxyanalogue de la méthionine. De méme, on entend par composés nitriles aliphatiques tous les nitriles aliphatiques à l'exception du 2 The present invention relates to a process for the preparation of aliphatic carboxylic acids, with the exception of the hydroxyanalogue of methionine, by enzymatic hydrolysis of aliphatic nitrile compounds, with the exception of 2-hydroxy 4-methylthio butyronitrile, characterized in that: (a) a biological material having nitrilase activity is prepared, (b) said biological material is immobilized (c) a nitrile compound is brought into contact with the biological material thus immobilized, in order to obtain the ammonium salt of. The aliphatic carboxylic acid formed (d) optionally, the acid formed is purified. According to the invention, the term “aliphatic carboxylic acid” means all the aliphatic carboxylic acids with the exception of the methionine hydroxyanalogue. Likewise, by aliphatic nitrile compounds is meant all aliphatic nitriles with the exception of 2
hydroxy 4-méthylthio butyronitrile. hydroxy 4-methylthio butyronitrile.
Selon un mode particulier de réalisation de l'invention, les composés nitriles aliphatiques According to a particular embodiment of the invention, the aliphatic nitrile compounds
hydrolysés par le procédé selon l'invention sont des dérivés O-substitués du 2-hydroxy 4- hydrolyzed by the process according to the invention are O-substituted derivatives of 2-hydroxy 4-
méthylthio butyronitrile, et les acides formés sont des dérivés Osubstitués de l'hydroxyanalogue de la méthionine. De prétérence, les dérivés O-substitués du 2-hydroxy 4-méthylthio methylthio butyronitrile, and the acids formed are Osubstituted derivatives of the hydroxyanalogue of methionine. For preference, the O-substituted derivatives of 2-hydroxy 4-methylthio
butyronitrile sont des dérivés O-acétylés ou O-hydroxyalkylés. butyronitrile are O-acetylated or O-hydroxyalkylated derivatives.
Selon un autre mode de réalisation de l'invention, les composés nitriles aliphatiques hydrolysés par le procédé selon l'invention sont des nitriles multi-fonctionnels sélectionnés parmi les nitriles aliphatiques, les nitriles vinyliques, les nitrile-esters, les nitrile-ester allyliques, et les nitrile-éther. Par nitriles multi-fonctionnels, on entend les nitrile possédant une fonction According to another embodiment of the invention, the aliphatic nitrile compounds hydrolyzed by the process according to the invention are multi-functional nitriles selected from aliphatic nitriles, vinyl nitriles, nitrile-esters, allyl nitrile-esters, and nitrile ether. By multi-functional nitriles is meant nitriles having a function
nitrile et au moins une fonction supplémentaire autre que nitrile. nitrile and at least one additional function other than nitrile.
S elon un autre mode de réal i sation de l' invention, les composés nitriles aliphati ques hydrolysés par le procédé selon l'invention sont des dinitriles aliphatiques symétriques ou dissymétriques et les acides formés sont des cyanoacides. A titre d'exemple, les dinitriles According to another embodiment of the invention, the aliphatic nitrile compounds hydrolysed by the process according to the invention are symmetrical or asymmetrical aliphatic dinitriles and the acids formed are cyanoacids. For example, dinitriles
aliphatiques symétriques peuvent être le malononitrile, l'adiponitrile, le fumaronitrile, ou le 1,4- symmetrical aliphatics can be malononitrile, adiponitrile, fumaronitrile, or 1,4-
dicyanobut-2-ène. A titre de dinitriles aliphatiques dissymétriques, on peut citer les 2-alkyl et les 2-aryl dinitriles aliphatiques de structure générale: dicyanobut-2-ene. As asymmetric aliphatic dinitriles, mention may be made of 2-alkyl and 2-aryl aliphatic dinitriles of general structure:
4 28248234 2824823
NC CH (CH2)n CN R dans laquelle: n est un nombre entier quelconque, et NC CH (CH2) n CN R in which: n is any integer, and
R est un groupe alkyl, un groupe aryl ou une châîne multifonctionnelle. R is an alkyl group, an aryl group or a multifunctional chain.
S elon un mode particul ier de réalisation de l' invention, les dinitriles aliphatiques dissymétriques sont le 2-méthylglutaronitrile, le 2-méthylsuccinonitrile, ou le 2 méthyladiponitrile. D'une manière générale, l'homme du métier saura adapter le procédé selon l'invention à According to a particular embodiment of the invention, the asymmetric aliphatic dinitriles are 2-methylglutaronitrile, 2-methylsuccinonitrile, or 2 methyladiponitrile. Generally, a person skilled in the art will know how to adapt the process according to the invention to
tout type de dinitrile, en particulier à tout dinitrile dissymétrique. any type of dinitrile, in particular any asymmetric dinitrile.
Lorsque le procédé selon l'invention s'applique aux dinitriles dissymétriques tels que décrits ci-dessus, l'hydrolyse du dinitrile en cyanoacide s'effectue sur de la fonction nitrile la When the process according to the invention applies to asymmetric dinitriles as described above, the hydrolysis of the dinitrile to cyanoacid is carried out on the nitrile function 1
moins encombrée stériquement.less sterically crowded.
L'étape (a) du procédé selon l'invention consiste à préparer un matériel biologique ayant Step (a) of the process according to the invention consists in preparing a biological material having
une activité nitrilase.nitrilase activity.
Le matériel biologique peut consister en des cellules entières, vivantes ou mortes, ou des cellules brisces ayant une activité nitrilase. Elle peut aussi consister en une solution enzymatique Biological material can consist of whole cells, living or dead, or broken cells with nitrilase activity. It can also consist of an enzymatic solution
comprenant une enzyme à activité nitrilase purifiée ou non. comprising an enzyme with or without purified nitrilase activity.
Avantageusement, on utilise un microorganisme exprimant une nitrilase. Advantageously, a microorganism expressing a nitrilase is used.
Selon un mode particulier de réalisation de l'invention, on utilise un microorganisme According to a particular embodiment of the invention, a microorganism is used
transformé exprimant une nitrilase recombinante. transformed expressing a recombinant nitrilase.
De manière préférentielle, l'activité nitrilase provient d'une bactérie du genre Alcaligenes, Preferably, the nitrilase activity comes from a bacteria of the genus Alcaligenes,
de préférence de la bactérie Alcaligenes faecalis ATCC 8750. preferably of the bacteria Alcaligenes faecalis ATCC 8750.
S elon un mo de préféré de réalisation de l' invention, le microorganisme transformé utili sé est une bactérie Escherichia coli exprimant le gène nitB d'Alcaligenes faecalis ATCC 8750, telle According to a preferred embodiment of the invention, the transformed microorganism used is an Escherichia coli bacterium expressing the nitB gene of Alcaligenes faecalis ATCC 8750, such as
que décrite dans la demande de brevet WO 98/18941. as described in patent application WO 98/18941.
L'étape (b) du procédé consiste à immobiliser le matériel biologique. Cette immobilisation se fait avantageusement en présence d'un support solide et permet d'obtenir des particules solides dont la taille, la forme et la résistance mécanique peuvent être contrôlées. Elle offre également la possibilité d'employer simultanément un polymère de polyazétidine ou Step (b) of the process consists in immobilizing the biological material. This immobilization is advantageously carried out in the presence of a solid support and makes it possible to obtain solid particles whose size, shape and mechanical strength can be controlled. It also offers the possibility of simultaneously using a polyazetidine polymer or
d'autres agents réticulants.other crosslinking agents.
28248232824823
Ce procédé d'immobilisation peut faire intervenir des cellules entières ou perméabilisces, en particulier des cellules d'E. coli selon l'invention. Il peut aussi s'appliquer à une solution This immobilization process can involve whole cells or permeabilizations, in particular E. cells. coli according to the invention. It can also apply to a solution
enzymatique de nitrilases selon l' invention exempte de cellules. cell free nitrilase enzyme according to the invention.
Le procédé d'immobilisation consiste à immobiliser le matériel blologique actif sur un support solide, de granulométrie notamment comprise entre 1 m et 500 1lm, de prétérence 1lm et 200 m, grâce à des agents chimiques réagissant avec les fonctions amine (NH2, NH), carboxyle (COOH), hydroxy (OH), thiol (SH) ou amide (CONH2) de l'agent biologique et du support. Ces agents chimiques permettent aussi d' insolubiliser dans l' eau le matériel blologique et le support. La masse obtenue est très malléable et peut être mise en forme afin d'obtenir des particules de forme et de taille souhaitées. La cohésion et la dureté de ces particules sont ensuite The immobilization process consists in immobilizing the active biological material on a solid support, with a particle size in particular between 1 m and 500 1 lm, preferably 1 lm and 200 m, using chemical agents reacting with the amine functions (NH2, NH) , carboxyl (COOH), hydroxy (OH), thiol (SH) or amide (CONH2) of the biological agent and the support. These chemical agents also make it possible to insolubilize in the water the biological material and the support. The mass obtained is very malleable and can be shaped in order to obtain particles of desired shape and size. The cohesion and hardness of these particles are then
obtenues par séchage.obtained by drying.
Le matériel biologique à immobiliser peut éventuellement contenir également un matériel biologique inactif présent à raison de 0 à 200 % en poids. Ce matériel inactif biologique peut être The biological material to be immobilized can optionally also contain an inactive biological material present at a rate of 0 to 200% by weight. This inactive biological material can be
des protéines (albumine, gélatine) ou des polysaccharides (Chitosan, kcarraghénane, alginate). proteins (albumin, gelatin) or polysaccharides (Chitosan, kcarraghénane, alginate).
Le support solide, sur lequel sont déposés le matériel biologique, et éventuellement le polymère, peut se composer de particules organiques ou inorganiques, poreuses ou non poreuses, hydrophiles ou hydrophobes. Parmi ces particules on peut signaler, sans que cela ne soit limitatif: - les résines échangeuses d'ions, - l'alumine, - les silices de synthèse ou diatomées et les gels de silice, - les zéolites, - les charbons, - les protéines partiellement solubles ou insolubles dans l'eau, comme le gluten, The solid support, on which the biological material, and possibly the polymer, are deposited, can be composed of organic or inorganic particles, porous or non-porous, hydrophilic or hydrophobic. Among these particles, it can be mentioned, without this being limiting: - ion exchange resins, - alumina, - synthetic or diatomaceous silicas and silica gels, - zeolites, - coals, - proteins that are partially soluble or insoluble in water, such as gluten,
- les polysaccharides, comme l'amidon. - polysaccharides, such as starch.
Le support solide peut constituer de 0,01 à 200 % en poids du matériel biologique et de The solid support can constitute from 0.01 to 200% by weight of the biological material and
prélérence de 10 à 100 %.10 to 100% prerequisite.
Les agents chimiques utilisés pour insolubiliser le matériel biologique peuvent être des polymères ou des molécules bi-fonctionnalisées qui réagissent avec les fonctions amine (NH2, NH), carboxy lique (C O OH), hydroxy (OH), thiol ( SH), amide (CONH2). A titre d' exemple, on peut citer: - les polymères de polyazétidine, The chemical agents used to insolubilize the biological material can be polymers or bi-functionalized molecules which react with the amine (NH2, NH), carboxylic (CO OH), hydroxy (OH), thiol (SH), amide ( CONH2). By way of example, mention may be made of: - polyazetidine polymers,
6 28248236 2824823
- les polymères de polyéthylènimine, - les polymères de polyamide, - les polymères d'isocyanates, - les gels d'alginate, - les gels de kcarraghénane, - les amines comme l'hexaméthylène diamine, - les aldéhydes comme le glutaraldéhyde, - les acides carboxyliques comme l'acide adipique, et - polyethylenimine polymers, - polyamide polymers, - isocyanate polymers, - alginate gels, - kcarraghenane gels, - amines such as hexamethylene diamine, - aldehydes such as glutaraldehyde, - carboxylic acids such as adipic acid, and
- les isocyanates.- isocyanates.
Le procédé d'immobilisation peut faire intervenir un ou plusieurs de ces agents chimiques. L'agent chimique est ajouté selon une concentration comprise entre 1 et 50 % en poids par rapport au matériel biologique et au support. On préférera une quantité comprise entre et 30 % afin d'obtenir des particules suffisamment solides et qui conservent une activité The immobilization process can involve one or more of these chemical agents. The chemical agent is added at a concentration of between 1 and 50% by weight relative to the biological material and to the support. We will prefer an amount between and 30% in order to obtain sufficiently solid particles which retain an activity
importante et qui ne présentent pas trop de problèmes de diffusion interne. important and which do not present too many internal distribution problems.
La durée du traitement de réticulation est comprise entre 0,5 et 24 heures. The duration of the crosslinking treatment is between 0.5 and 24 hours.
La température du procédé est généralement comprise entre 4 et 65 C. On préférera une température comprise entre 20 et 40 C. La température employée lors du procédé The temperature of the process is generally between 4 and 65 C. We prefer a temperature between 20 and 40 C. The temperature used during the process
d'immobilisation peut étre aussi très dépendante de la stabilité du matériel biologique employé. immobilization can also be very dependent on the stability of the biological material used.
Le pH durant la phase d'immobilisation est maintenu entre 5 et 11. On prétérera un pH compris entre 6 et 10 avec une prétérence vers les pH alcalins. Le pH est aussi choisi en fonction The pH during the immobilization phase is maintained between 5 and 11. A pH of between 6 and 10 will be preferred with a preference towards alkaline pHs. The pH is also chosen according to
de la résistance du matériel biologique et sera aisément déterminé par l'homme du métier. resistance of the biological material and will be readily determined by those skilled in the art.
De manière préférée, le procédé selon l'invention est caractérisé en ce que le rapport entre Preferably, the method according to the invention is characterized in that the ratio between
la masse de matériel biologique immobilisé et la masse de substrat est compris entre 0,1 et 10. the mass of immobilized biological material and the mass of substrate is between 0.1 and 10.
La mise en forme du matériel biologique immobilisé doit permettre son emploi dans un The shaping of immobilized biological material must allow its use in a
système quelconque, notamment dans un lit fixe. any system, especially in a fixed bed.
Une méthode de formulation peut étre l' extrusion. Pour ce faire, le matériel biologique et le support sont réticulés par ajout d'un ou plusieurs agents chimiques. Après traitement, la masse insoluble est récupérée par centrifugation ou après floculation et filtration. Un taux de matière sèche d'au moins 10% est prétéré. La masse est ensuite extrudée. Par cette méthode, on obtient de prétérence des vermicelles de diamètre compris entre 0,3 et 0,5 mm et d'une longueur comprise entre 1 et 10 mm. Ces vermicelles peuvent étre sphéronisés. Les particules obtenues A formulation method can be extrusion. To do this, the biological material and the support are crosslinked by adding one or more chemical agents. After treatment, the insoluble mass is recovered by centrifugation or after flocculation and filtration. A dry matter content of at least 10% is claimed. The mass is then extruded. By this method, vermicelli with a diameter between 0.3 and 0.5 mm and a length between 1 and 10 mm is preferably obtained. These vermicelli can be spheronized. The particles obtained
sont ensuite séchées.are then dried.
7 28248237 2824823
Une autre méthode de formulation peut être le pelliculage ("spray coating"). Pour ce faire, le matériel biologique est mélangé avec un ou plusieurs agents chimiques. Après réaction, le mélange est pulvérisé sur le support sous forme d'une couche mince. Par cette méthode, on Another formulation method can be spray coating. To do this, the biological material is mixed with one or more chemical agents. After reaction, the mixture is sprayed onto the support in the form of a thin layer. By this method, we
obtient des granulés de diamètre moyen compris entre 0,1 et 2 mm. obtains granules with an average diameter of between 0.1 and 2 mm.
Les particules obtenues peuvent éventuellement être ensuite plongées dans une solution d'un agent réducteur comme le borohydrure de sodium afin de réduire les fonctions imines The particles obtained can optionally be then immersed in a solution of a reducing agent such as sodium borohydride in order to reduce the imine functions.
formées lors de la réticulation.formed during crosslinking.
Les particules obtenues sont suffisamment solides et résistantes à l'attrition pour être The particles obtained are sufficiently solid and resistant to attrition to be
employées dans un lit-fixe, un lit fluidisé ou un réacteur agité. used in a fixed bed, a fluidized bed or a stirred reactor.
L'étape (c) du procédé selon l'invention consiste à mettre en _uvre le matériel biologique immobilisé dans une ou plusieurs colonnes ou réacteurs. Le but de cette étape est de pouvoir produire en continu les acides carboxyliques aliphatiques à partir des composés nitriles aliphatiques. La ou les colonnes ou réacteurs sont alimentés par une solution pure ou diluée d'un Step (c) of the process according to the invention consists in using the biological material immobilized in one or more columns or reactors. The purpose of this step is to be able to continuously produce aliphatic carboxylic acids from aliphatic nitrile compounds. The column or columns or reactors are supplied with a pure or dilute solution of a
composé nitrile aliphatique.aliphatic nitrile compound.
La ou les colonnes ou réacteurs sont mises en _uvre de prétérence à une température The column (s) or reactors are preferably used at a temperature
comprise entre 10 et 60 C et à un pH compris entre 5 et 9. between 10 and 60 C and at a pH between 5 and 9.
Le système mis en _uvre peut être constitué de deux ou plusieurs colonnes connectées The system implemented can consist of two or more connected columns
l'une à l'autre en série.to each other in series.
Selon une première manière de mettre en _uvre l'invention, l'alimentation de la solution aqueuse du composé nitrile aliphatique est réalisée en tête de la première colonne avec une alimentation simultanée d'autres colonnes avec la solution du composé nitrile aliphatique en une quantité limitée à la solubilité de ce composé dans le mélange réactionnel; ce système est intitulé According to a first way of implementing the invention, the supply of the aqueous solution of the aliphatic nitrile compound is carried out at the head of the first column with a simultaneous supply of other columns with the solution of the aliphatic nitrile compound in a limited quantity the solubility of this compound in the reaction mixture; this system is titled
système étagé.tiered system.
Selon une deuxième manière de mettre en _uvre l'invention, on utilise une ou plusieurs colonnes connectées l'une à l'autre en parallèle dans une boucle de circulation. Selon cette installation, le composé nitrile aliphatique en solution aqueuse alimente la boucle en continu, et le milieu de réaction est pompé en continu de façon à conserver un volume constant dans ladite According to a second way of implementing the invention, one or more columns connected to one another are used in parallel in a circulation loop. According to this installation, the aliphatic nitrile compound in aqueous solution feeds the loop continuously, and the reaction medium is pumped continuously so as to maintain a constant volume in said
boucle; ce système est intitulé système boucle. loop; this system is called the loop system.
Le type de réacteur utilisé dans cette invention peut être du type lit fixe, lit fluide, ou du type agité en continu. On prétère utiliser les réacteurs du type lit fixe parce qu'ils réduisent les The type of reactor used in this invention can be of the fixed bed, fluid bed, or continuously stirred type. We pretend to use fixed bed type reactors because they reduce the
problèmes d'attrition qui peuvent être rencontrés avec les particules de cellules immobilisées. attrition problems that can be encountered with immobilized cell particles.
Lorsque le matériel biologique consiste en un microorganisme entier, on prétérera utiliser un When the biological material consists of a whole microorganism, it is preferable to use a
8 28248238 2824823
réacteur agité couplé à un module d'ultrafiltration pour séparer de façon continue le agitated reactor coupled to an ultrafiltration module to continuously separate the
microorganisme du produit d'intérêt. microorganism of the product of interest.
L'étape (d), facultative, consiste à purifier l'acide formé. A titre d'exemple, une méthode de purification de l'acide formé est donnée. L'homme du métier saura identifier ou adapter d' autres méthodes de purification au procédé selon l' invention. Dans un premier temps, le matériel biologique immobilisé peut être récupéré par simple filtration. La phase aqueuse peut ensuite être concentrée à l'aide d'un évaporateur, puis extraite à l'aide d'un solvant organique. La phase organique est alors séchée puis évaporée. La phase aqueuse restante est ensuite concentrée au maximum, et le résidu obtenu est mis en suspension dans un solvant polaire. Les sels insolubles de l'acide formé sont filtrés puis la solution est séchée, filtrée et évaporée. L'ensemble de ces opérations permet d'extraire l'acide, éventuellement l'amide formée et le nitrile non converti. D'autres méthodes de purification de sont par exemple décrites dans la demande de The optional step (d) consists in purifying the acid formed. As an example, a method of purifying the acid formed is given. Those skilled in the art will be able to identify or adapt other purification methods to the process according to the invention. Initially, the immobilized biological material can be recovered by simple filtration. The aqueous phase can then be concentrated using an evaporator, then extracted using an organic solvent. The organic phase is then dried and then evaporated. The remaining aqueous phase is then concentrated to the maximum, and the residue obtained is suspended in a polar solvent. The insoluble salts of the acid formed are filtered then the solution is dried, filtered and evaporated. All of these operations make it possible to extract the acid, possibly the amide formed and the unconverted nitrile. Other methods of purifying are for example described in the application for
brevet WO 98/18941.WO 98/18941.
9 28248239 2824823
Les exemples ci-après permettent d'illustrer la présente invention, sans toutefois en The examples below illustrate the present invention, without however
limiter la portée.limit the scope.
ExemplesExamples
Exemple 1: Protocole général de l'hydrolyse enzymatique des nitriles Le substrat est mis en suspension dans 750 mL d'eau millipore thermostatée à 30 C et tamponnée par KH2PO4 et K2HPO4 à pH = 7,3. L'agitation est maintenue constante à 250 rpm pendant toute la durce de l'essai. La quantité du matériel biologique immobilisé est ensuite additionnée de façon que MCaayseur / Msubsra= 0,55. Le degré d'avancement de la réaction est déterminé par chromatographie HPLC ou CPG. La réaction termince, le matériel biologique immobilisé est récupéré par simple filbation. La phase aqueuse est ensuite concentrce à l'évaporateur rotatifjusqu'à 200 mL environ puis acidifiée par de l'HC1 36% jusqu'à pH = 1,5. La phase aqueuse est extraite à l'acétate d'éthyle ou à l'éther. La phase organique est séchée sur Na2SO4 puis évaporée. La phase aqueuse est concentrée au maximum. Le résidu obtenu est mis en suspension dans du méthanol. Les sels insolubles sont filtrés puis la solution méthanolique est séchée sur Na2SO4, filtrée et évaporée. L'ensemble des opérations permet d'extraire l'acide, Example 1: General protocol for the enzymatic hydrolysis of nitriles The substrate is suspended in 750 ml of millipore water thermostatically controlled at 30 C and buffered with KH2PO4 and K2HPO4 at pH = 7.3. Stirring is kept constant at 250 rpm throughout the duration of the test. The quantity of immobilized biological material is then added so that MCaayseur / Msubsra = 0.55. The degree of progress of the reaction is determined by HPLC or CPG chromatography. The reaction ends, the immobilized biological material is recovered by simple filbation. The aqueous phase is then concentrated on a rotary evaporator to approximately 200 ml and then acidified with 36% HC1 until pH = 1.5. The aqueous phase is extracted with ethyl acetate or with ether. The organic phase is dried over Na2SO4 and then evaporated. The aqueous phase is concentrated to the maximum. The residue obtained is suspended in methanol. The insoluble salts are filtered then the methanolic solution is dried over Na2SO4, filtered and evaporated. All the operations make it possible to extract the acid,
éventuellement l'amide formée et le nitrile non converti. optionally the amide formed and the nitrile not converted.
Exemple 2: Hydrolyse euzymatique des précurseurs de dérivés O-substitués de l'hydroxyanalogue de la méthionine Exemple 2.1: Sythèse de l'acide ()2-acétoxy-4-méthylthiabutanoique (Composé 1) Dans un réacteur parfaitement agité à 250 rpm, thermostaté à 30 C, 13,0 g (0,075 mole) du (+)-2-acétoxy-4-méthylthiobutyronitrile sont introduits dans 750 mL d'eau millipore tamponnée à pH = 7,3. 7,15 g de matériel biologique immobilisé sont ensuite additionnés. Le suivi cinétique est réalisé par HPLC (éluant: eau / acétonitrile 80/20 (vlv) / 0,05% (v/v) d'acide trifluoroacétique (TFA); = 210 nm; Débit = 1 mL/min; colonne: Nucléosil RP C18 (5 1lm, 100 ). Le mélange est laissé sous agitation à 30 C pendant 48 heures. Le rendement obtenu, après 48 heures, est de 89% en acide (+)-2-acétoxy-4-méthylthiobutanoïque (Composé la). L'analyse RMN 'H révèle la présence de 6% molaire d'acide (+)-2-hydroxy-4- méthylthiobutanoique (Composé lb). H RMN (DMSO d6) H ppm: 1,75 (m, 2H, S- CH2-CH2-), 1,79 (s, 3H, CH3CO2-), 1,84 (s, 3H, CH3-S-), 2,28 (t, 2H, CH3- S-C_2-), 4,69 (td, 1H, -C_(OAc)CN), 11,9 (s, 1H, CO2H). i3C RMN (DMSO d6) éc ppm: 15,24 (CH3-S), 21,17 (_H3-CO), 29,73 (CH3-S-CH2), Example 2: Ezymatic hydrolysis of the precursors of O-substituted derivatives of the hydroxyanalogue of methionine Example 2.1: Synthesis of () 2-acetoxy-4-methylthiabutanoic acid (Compound 1) In a perfectly stirred reactor at 250 rpm, thermostatically controlled at 30 ° C., 13.0 g (0.075 mol) of (+) - 2-acetoxy-4-methylthiobutyronitrile are introduced into 750 ml of millipore water buffered to pH = 7.3. 7.15 g of immobilized biological material are then added. Kinetic monitoring is carried out by HPLC (eluent: water / acetonitrile 80/20 (vlv) / 0.05% (v / v) of trifluoroacetic acid (TFA); = 210 nm; Flow rate = 1 mL / min; column: Nucleosil RP C18 (5 μl, 100) The mixture is left under stirring at 30 ° C. for 48 hours. The yield obtained, after 48 hours, is 89% in (+) - 2-acetoxy-4-methylthiobutanoic acid (Compound 1 H NMR analysis reveals the presence of 6 mol% of (+) - 2-hydroxy-4-methylthiobutanoic acid (Compound lb). H NMR (DMSO d6) H ppm: 1.75 (m, 2H, S- CH2-CH2-), 1.79 (s, 3H, CH3CO2-), 1.84 (s, 3H, CH3-S-), 2.28 (t, 2H, CH3- S-C_2- ), 4.69 (td, 1H, -C_ (OAc) CN), 11.9 (s, 1H, CO2H) i3C NMR (DMSO d6) ec ppm: 15.24 (CH3-S), 21.17 (_H3-CO), 29.73 (CH3-S-CH2),
28248232824823
,96 (S-CH2-CH2-), 71,35 (-_H(OAc)CN), 170,77 (CH3-COO), 171,86 (CO2H). IR (CHCl3) cm':2500-3500, 1745, 1720. Masse FAB- (NBA): m/e (intensité relative) 191 (100), 149 (70), , 96 (S-CH2-CH2-), 71.35 (-_H (OAc) CN), 170.77 (CH3-COO), 171.86 (CO2H). IR (CHCl3) cm ': 2500-3500, 1745, 1720. Mass FAB- (NBA): m / e (relative intensity) 191 (100), 149 (70),
59 (25).59 (25).
Exemple 2.2: Synthèse de l'acide (f)-2-(1-éthexyéthoxy)-4méthylthiabutanoque (Composé 2) Le protocole opératoire est identique à celui décrit à l'exemple 2.1. Les quantités introduites sont les suivantes: 3,0 g (0,022 mole) du (+)-2-(l-éthoxyéthoxy)-4 Example 2.2: Synthesis of (f) -2- (1-ethylethoxy) -4methylthiabutanoque acid (Compound 2) The operating protocol is identical to that described in Example 2.1. The amounts introduced are as follows: 3.0 g (0.022 mole) of (+) - 2- (l-ethoxyethoxy) -4
méthylthiobutyronitrile et 3,0 g de matériel biologique immobilisé dans 220 mL d'eau millipore. methylthiobutyronitrile and 3.0 g of biological material immobilized in 220 mL of millipore water.
Le suivi cinétique est réalisé par HPLC (éluant: eau / acétonitrile 95/5 (vlv) / 0,05% (v/v) de TFA). Le rendement obtenu, après 25 heures, est de 93% en acide (+)-2-(1-éthoxyéthoxy)-4 méthylthiobutanoïque (Composé 2a). H RMN (DMSO d6) H ppm: 1,09 (td, 3H, C_3-CH2-O), 1,18 (dd, 3H, CH3-CH), 1, 72-1,84 (m, 2H, -S-CH2-C_2-), 2,10 (s, 3H, C_3-S), 2,52 (t, 2H, S C_2-CH2) , 3,51 (m, 2H, O-CH2-CH3), 3,84 (m, 1H, O-C_-CO2H), 4,72 (qd, 1H, -OC_(CH3) O). '3C RMN (DMSO d6) c ppm: 15,42 (CH3-S), 16,1 (CH3-CH2-O), 21, 32 (CH3-CH-), 30,07 Kinetic monitoring is carried out by HPLC (eluent: water / acetonitrile 95/5 (vlv) / 0.05% (v / v) of TFA). The yield obtained, after 25 hours, is 93% in (+) - 2- (1-ethoxyethoxy) -4 methylthiobutanoic acid (Compound 2a). H NMR (DMSO d6) H ppm: 1.09 (td, 3H, C_3-CH2-O), 1.18 (dd, 3H, CH3-CH), 1.72-1.84 (m, 2H, - S-CH2-C_2-), 2.10 (s, 3H, C_3-S), 2.52 (t, 2H, S C_2-CH2), 3.51 (m, 2H, O-CH2-CH3), 3.84 (m, 1H, O-C_-CO2H), 4.72 (qd, 1H, -OC_ (CH3) O). '3C NMR (DMSO d6) c ppm: 15.42 (CH3-S), 16.1 (CH3-CH2-O), 21, 32 (CH3-CH-), 30.07
(S-CH2-CH2-CH), 33,89 (S-CH2-CH2-CH), 62,00 (CH3-CH2-O), 77,06 (CH(CO2H)O), 99,49 ( (S-CH2-CH2-CH), 33.89 (S-CH2-CH2-CH), 62.00 (CH3-CH2-O), 77.06 (CH (CO2H) O), 99.49 (
O-CH(CH3)-O), 176,42 (CO2H). IR (CHCl3) cml: 2500-3500, 1725. Masse FAB(NBA): m/e O-CH (CH3) -O), 176.42 (CO2H). IR (CHCl3) cml: 2500-3500, 1725. Mass FAB (NBA): m / e
(intensité relative) 221 (100), 152 (40), 122 (30), 46 (65). (relative intensity) 221 (100), 152 (40), 122 (30), 46 (65).
Exemple 2.3: Synthèse de l'acide (f)-2-méthoxyméthoxy-4méthylthiabutanoque (Composé 3) Le protocole opératoire est identique à celui décrit à l'exemple 2.1. Les quantités introduites sont les suivantes: 3,80 g (0,022 mole) du (+)-2-méthoxyméthoxy-4 Example 2.3: Synthesis of (f) -2-methoxymethoxy-4methylthiabutanoque acid (Compound 3) The operating protocol is identical to that described in Example 2.1. The amounts introduced are as follows: 3.80 g (0.022 mole) of (+) - 2-methoxymethoxy-4
méthylthiobutyronitrile et 2,10 g de matériel biologique immobilisé dans 220 mL d'eau millipore. methylthiobutyronitrile and 2.10 g of biological material immobilized in 220 ml of millipore water.
Le suivi cinétique est réalisé selon les mêmes conditions d'élution que celui décrit à l'exemple 2.1. Le rendement obtenu, après 120 heures, est de 70% en acide (+)-2-méthoxyméthoxy-4 méthylthiobutanoque (Composé 3a). H RMN (DMSO d6) OH ppm: 1,96 (m, 2H, S-CH2-CH2 CH), 2,05 (s, 3H, C 3-SCH2), 2,59 (t, 2H, -S-C_2-CH2), 3,31 (s, 3H, C_3-O), 3,91 (m, 1H, O C_CO2H), 4,60-4,72 (dd, 2H, O-C_2-O), 11,32 (CO2H). '3C RMN (DMSO d6) oc ppm: 15,37 Kinetic monitoring is carried out according to the same elution conditions as that described in Example 2.1. The yield obtained, after 120 hours, is 70% in (+) - 2-methoxymethoxy-4-methylthiobutanoic acid (Compound 3a). H NMR (DMSO d6) OH ppm: 1.96 (m, 2H, S-CH2-CH2 CH), 2.05 (s, 3H, C 3-SCH2), 2.59 (t, 2H, -S- C_2-CH2), 3.31 (s, 3H, C_3-O), 3.91 (m, 1H, O C_CO2H), 4.60-4.72 (dd, 2H, O-C_2-O), 11 , 32 (CO2H). '3C NMR (DMSO d6) oc ppm: 15.37
(CH3-S), 30,80 (CH3-S-CH2-), 33,60 (S-CH2-_H2-CH) 55,74 (CH3-O), 76,55 (O_H-CO2H), (CH3-S), 30.80 (CH3-S-CH2-), 33.60 (S-CH2-_H2-CH) 55.74 (CH3-O), 76.55 (O_H-CO2H),
,44 (O-CH2-O), 176,13 (CO2H). IR (CHC13) cm: 1720. Masse FAB- (NBA): m/e (intensité , 44 (O-CH2-O), 176.13 (CO2H). IR (CHC13) cm: 1720. Mass FAB- (NBA): m / e (intensity
relative) 193 (70), 149 (55), 115 (20), 46 (100). relative) 193 (70), 149 (55), 115 (20), 46 (100).
Les résultats des exemples 2.1 à 2.3 sont compilés dans le Tableau 1 cidessous. The results of Examples 2.1 to 2.3 are compiled in Table 1 below.
1 1 28248231 1 2824823
Tableau 1: Hydrolyse encymatique des précurseurs de dérivés O-substitués de l'hydroxyanalogue de la méthionine Substrat Conditionsé Produit formé Rendement (%)b 1 0,55 (33) la (lb) 82 (6) 2 0,55 (115) 2a 93 3 0,55 (120) 2a 70 a Equivalents de matériel biologique immobilisé /substrat (w/w); temps de réaction (h) b Rendement en acide obtenu après extraction puis purification Exemple 3: Hydrolyse euzymatique de composés nitriles bi-fonctionnels Exemple 3.1: Hydrolyse euaymatique de l'isoutyroritrile (Composé 4) Le protocole opératoire est identique à celui décrit à l'exemple 2.1. Les quantités introduites sont les suivantes 5,21 g (0,075 mole) d'isobutyronitrile commercial et 2,86 g de matériel biologique immobilisé sont ensuite additionnés. Le rendement obtenu, après 58 heures, est de 71% en acide isobutyrique. 'H RMN (DMSO d6) H ppm: 1,05 (d, 6H, (C_3)2-CH), 2,40 (h, 1H, (CH3)2-C_), 11,74 (s, 1H, CO2_).}3C RMN (DMSO d6) éc ppm: 19,61 ((CH3)2-CH), 33,90 (CH3)2-CH), 178,7 (s, 1H, CO2H). IR (CHCl3) cml: 2500-3500, 1715. Masse FAB- (GT): Table 1: Encymatic hydrolysis of the precursors of O-substituted derivatives of the hydroxyanalogue of methionine Substrate Conditioned Product formed Yield (%) b 1 0.55 (33) la (lb) 82 (6) 2 0.55 (115) 2a 93 3 0.55 (120) 2a 70 a Equivalents of immobilized biological material / substrate (w / w); reaction time (h) b Yield of acid obtained after extraction then purification Example 3: Ezymatic hydrolysis of bi-functional nitrile compounds Example 3.1: Eymatic hydrolysis of isoutyroritrile (Compound 4) The operating protocol is identical to that described in example 2.1. The amounts introduced are the following 5.21 g (0.075 mole) of commercial isobutyronitrile and 2.86 g of immobilized biological material are then added. The yield obtained, after 58 hours, is 71% in isobutyric acid. 'H NMR (DMSO d6) H ppm: 1.05 (d, 6H, (C_3) 2-CH), 2.40 (h, 1H, (CH3) 2-C_), 11.74 (s, 1H, CO2 _).} 3C NMR (DMSO d6) ec ppm: 19.61 ((CH3) 2-CH), 33.90 (CH3) 2-CH), 178.7 (s, 1H, CO2H). IR (CHCl3) cml: 2500-3500, 1715. Mass FAB- (GT):
mle (intensité relative) 87 (100), 79 (20). male (relative intensity) 87 (100), 79 (20).
Exemple 3.2: Hydrolyse euzymatique de l'acrylonitrile fComposé 5) Le protocole opératoire est identique à celui décrit à l'exemple 2.1. Les quantités introduites sont les suivantes: 4,0 g (0,075 mole) d'acrylonitrile commercial et 2,30 g de matériel Example 3.2: Ezymatic hydrolysis of acrylonitrile fComposed 5) The operating protocol is identical to that described in Example 2.1. The quantities introduced are as follows: 4.0 g (0.075 mole) of commercial acrylonitrile and 2.30 g of material
biologique immobilisé. Le rendement obtenu, après 9 heures, est de 93% en acide acrylique. immobilized biological. The yield obtained, after 9 hours, is 93% of acrylic acid.
L'analyse RMN révèle la présence de 0,8% molaire d'acrylamide. 'H RMN (DMSO d6) H ppm: ,90-6,13 (m, 2H, CH2=CH), 6,32 (dd, 1H, CH2=C_), 12,43 (s, 1H, CO2_). i3C RMN (DMSO d6) âC ppm: 130,7 (CH2=CH), 131,45 (_H2=CH), 171,16 (_O2H). IR (CHC13) cm: 2500-3500, NMR analysis reveals the presence of 0.8 mol% of acrylamide. 'H NMR (DMSO d6) H ppm:, 90-6.13 (m, 2H, CH2 = CH), 6.32 (dd, 1H, CH2 = C_), 12.43 (s, 1H, CO2_). i3C NMR (DMSO d6) âC ppm: 130.7 (CH2 = CH), 131.45 (_H2 = CH), 171.16 (_O2H). IR (CHC13) cm: 2500-3500,
1695. Masse FAB- (GT): m/e (intensité relative) 71 (70), 53 (20). 1695. Mass FAB- (GT): m / e (relative intensity) 71 (70), 53 (20).
Exemple 3.3: Hydrolyse ezymatique du ()-2-acétexy-3-butènenitrile (Composé 6) Le protocole opératoire est identique à celui décrit à l'exemple 2.1. Les quantités introduites sont les suivantes: 9,40 g (0, 075 mole) du (+)-2-acétoxy-3-butènenitrile commercial et 5,20 g de matériel biologique immobilisé sont ensuite additionnés. Le rendement obtenu, après Example 3.3: Ezymatic hydrolysis of () -2-acetexy-3-butenenitrile (Compound 6) The operating protocol is identical to that described in Example 2.1. The amounts introduced are as follows: 9.40 g (0.075 mole) of commercial (+) - 2-acetoxy-3-butenenitrile and 5.20 g of immobilized biological material are then added. The yield obtained, after
12 232482312 2324823
27 heures, est de 92% en acide (+)-2-acétoxybut-3-ènoique. L'analyse RMN révèle la présence de 6% molaire de l'acide (+)-2-hydroxy-but-3-ènoique. H RMN (DMSO d6) H ppm: 2,01 (s, 3H, 27 hours, is 92% in (+) - 2-acetoxybut-3-enoic acid. NMR analysis reveals the presence of 6 mol% of (+) - 2-hydroxy-but-3-enoic acid. H NMR (DMSO d6) H ppm: 2.01 (s, 3H,
CH3-CO2), 4,87-5,25 (m, 3H, C_2=CH-C_), 5,93-6,01 (m, 1H, CH2=CH-CH), 12, 33 (CO2H). CH3-CO2), 4.87-5.25 (m, 3H, C_2 = CH-C_), 5.93-6.01 (m, 1H, CH2 = CH-CH), 12, 33 (CO2H).
13C RMN (DMSO d6) c ppm: 21,77 (CH3-CO2), 76,69 (CH2=CH-CH), 115,12 (_H2=CH), 135,59 (CH2=_H), 171,24 (CH3-CO2), 176,86 (_O2H). IR (CHCl3) cm: 2500-3500, 1740, 13C NMR (DMSO d6) c ppm: 21.77 (CH3-CO2), 76.69 (CH2 = CH-CH), 115.12 (_H2 = CH), 135.59 (CH2 = _H), 171.24 (CH3-CO2), 176.86 (_O2H). IR (CHCl3) cm: 2500-3500, 1740,
1715. Masse FAB- (GT): m/e (intensité relative) 143 (100), 59 (30). 1715. Mass FAB- (GT): m / e (relative intensity) 143 (100), 59 (30).
Exemple 3.4: Hylrolyse euzymatique du (+)-2-(1-éthexyéthoxy)-but-3ènenitrile (Composé 7) Le protocole opératoire est identique à celui décrit à l'exemple 2.1. Les quantités introduites sont les suivantes: 7,8 g (0,05 mole) du (+)-2-(1-éthoxyéthoxy)-but-3-ènenitrile et 4,5 g de matériel biologique immobilisé dans 500 mL d'eau millipore. Le rendement obtenu, après 26 heures, est de 86% en acide (+)-2-(1-éthoxyéthoxy)-but-3ènoique. H RMN (DMSO d6) H ppm: 1,06 (t, 3H, C_3-CH2-O), 1,19 (d, 3H, C_3CH), 3,40-3,55 (m, 2H, CH3-C_2-O-), 4,32 (m, 1H, CH2=CH-CH), 4,75-4,66 (qd, 1H, O-C_-O), 4,95-5,2 (m, 2H, C_2=CH-), 5,78-5,91 (m, 1H, CH2=CH), 12,32 (s, 1H, CO2H). 3C RMN (DMSO d6) c ppm: 15,94 et 16,06 (CH3-CH2-O ), 20,75 et 21,15 (CH3-CH), 60,24 et 61,10 (CH3-_H2-O-), 78,61 et 78,92 (CH2=CH-CH), 98,31 Example 3.4: Ezymatic hylrolysis of (+) - 2- (1-ethylethoxy) -but-3ènenitrile (Compound 7) The operating protocol is identical to that described in Example 2.1. The quantities introduced are as follows: 7.8 g (0.05 mole) of (+) - 2- (1-ethoxyethoxy) -but-3-enenitrile and 4.5 g of biological material immobilized in 500 ml of water millipore. The yield obtained, after 26 hours, is 86% in (+) - 2- (1-ethoxyethoxy) -but-3enoic acid. H NMR (DMSO d6) H ppm: 1.06 (t, 3H, C_3-CH2-O), 1.19 (d, 3H, C_3CH), 3.40-3.55 (m, 2H, CH3-C_2 -O-), 4.32 (m, 1H, CH2 = CH-CH), 4.75-4.66 (qd, 1H, O-C_-O), 4.95-5.2 (m, 2H , C_2 = CH-), 5.78-5.91 (m, 1H, CH2 = CH), 12.32 (s, 1H, CO2H). 3C NMR (DMSO d6) c ppm: 15.94 and 16.06 (CH3-CH2-O), 20.75 and 21.15 (CH3-CH), 60.24 and 61.10 (CH3-_H2-O -), 78.61 and 78.92 (CH2 = CH-CH), 98.31
et 98,87 (O-CH-O), 113,86 et 115,0 (_H2=CH-), 138,25 et 138,56 (CH2=CH), 174,56 (CO2H). and 98.87 (O-CH-O), 113.86 and 115.0 (_H2 = CH-), 138.25 and 138.56 (CH2 = CH), 174.56 (CO2H).
IR (CHCl3) cm: 2500-3500, 1725. Masse FAB- (GT): m/e (intensité relative) 173 (100), 43 (35). Exemple 3.5: Hydrolyse euzymatique du (f)-2méthexyméthoxy-but-3-ènenitrile (Composé 8) Le protocole opératoire est identique à celui décrit à l'exemple 2.1. Les quantités introduites sont les suivantes: 3,81 g (0,030 mole) du (+)-2-méthoxyméthoxy-but-3ènenitrile et 4,5 g de matériel biologique immobilisé dans 300 mL d'eau millipore. Le rendement obtenu, après 47 heures, est de 80% en acide (+)2-méthoxyméthoxy-but-3-ènoïque. 'H RMN (DMSO d6) H ppm: 3,30-3,95 (m, 3H, C_3-O-), 4,37 (m, 1H, CH2=CH-C_), 4,62-4,71 (dd, O-C_2-O), ,07-5,23 (m, 2H, CH'=CH-), 5,91-5,98 (m, 1H, CH2=C_), 11,47 (s, 1H, CO2_). 3C RMN (DMSO d6) c ppm: 55,58 (CH3-O-), 78,87 (CH2=CH-CH), 94,62 (O-CH2-O), 114, 38 IR (CHCl3) cm: 2500-3500, 1725. Mass FAB- (GT): m / e (relative intensity) 173 (100), 43 (35). Example 3.5: Ezymatic hydrolysis of (f) -2methexymethoxy-but-3-enenitrile (Compound 8) The operating protocol is identical to that described in Example 2.1. The amounts introduced are as follows: 3.81 g (0.030 mole) of (+) - 2-methoxymethoxy-but-3enenitrile and 4.5 g of biological material immobilized in 300 ml of millipore water. The yield obtained, after 47 hours, is 80% in (+) 2-methoxymethoxy-but-3-enoic acid. 'H NMR (DMSO d6) H ppm: 3.30-3.95 (m, 3H, C_3-O-), 4.37 (m, 1H, CH2 = CH-C_), 4.62-4.71 (dd, O-C_2-O),, 07-5.23 (m, 2H, CH '= CH-), 5.91-5.98 (m, 1H, CH2 = C_), 11.47 (s , 1H, CO2_). 3C NMR (DMSO d6) c ppm: 55.58 (CH3-O-), 78.87 (CH2 = CH-CH), 94.62 (O-CH2-O), 114, 38
(CH2=CH-), 138,11 (CH2=CH), 173,67 (s, 1H, CO2H). IR (CHCl3) cml: 25003500, 1725. (CH2 = CH-), 138.11 (CH2 = CH), 173.67 (s, 1H, CO2H). IR (CHCl3) cml: 25003500, 1725.
Masse FAB- (GT): m/e (intensité relative) 193 (100) Exemple 3.6: Hydrolyse euzymatique du 2-cyaneacétate d 'éthyle (Composé 9) Le protocole opératoire est identique à celui décrit à l'exemple 2.1. Les quantités introduites sont les suivantes: 8,50 g (0,075 mole) du 2- cyanoacétate d'éthyle et 4,7 g de matériel Mass FAB- (GT): m / e (relative intensity) 193 (100) Example 3.6: Ezymatic hydrolysis of ethyl 2-cyaneacetate (Compound 9) The operating protocol is identical to that described in Example 2.1. The amounts introduced are as follows: 8.50 g (0.075 mole) of ethyl 2-cyanoacetate and 4.7 g of material
13 2824823 biologique immobilisé sont ensuite additionnés. Le rendement obtenu, après13 2824823 immobilized biological are then added. The yield obtained, after
7 heures, est de 94% en acide 2-carbétoxyacétique. H RMN (DMSO d6) H ppm: 1,19 (t, 3H, C_3-CH2-O), 3,33 (s, 2H, HO2C-C_2-CO2Et), 4,12 (q, 3H, CH3-C_2-O), 10,71 (s, 1H, CO2_). 3C RMN (DMSO d6) c ppm: 14,66 (_H3-CH2O-), 42,34 (HO2C-CH2-CO2Et), 64,47 (CH3-CH2-O), 167,7 (-CO2 CH2-CH3), 168, 9 (_O2H). IR (CHCl3) cm: 2500-3500, 1745, 1725. Masse FAB- (GT): m/e 7 hours, is 94% 2-carbetoxyacetic acid. H NMR (DMSO d6) H ppm: 1.19 (t, 3H, C_3-CH2-O), 3.33 (s, 2H, HO2C-C_2-CO2Et), 4.12 (q, 3H, CH3-C_2 -O), 10.71 (s, 1H, CO2_). 3C NMR (DMSO d6) c ppm: 14.66 (_H3-CH2O-), 42.34 (HO2C-CH2-CO2Et), 64.47 (CH3-CH2-O), 167.7 (-CO2 CH2-CH3 ), 168, 9 (_O2H). IR (CHCl3) cm: 2500-3500, 1745, 1725. Mass FAB- (GT): m / e
(intensité relative) 131 (65), 104 (40), 87 (100), 41 (25). (relative intensity) 131 (65), 104 (40), 87 (100), 41 (25).
Les résultats des exemples 3.1 à 3.6 sont compilés dans le Tableau 2 cidessous. The results of Examples 3.1 to 3.6 are compiled in Table 2 below.
Tableau 2: Hydrolyse encymatique de composés nitriles bi-fonctionnels Substrat Temps de réaction (h) Rendement (%)a - Table 2: Encymatic hydrolysis of bi-functional nitrile compounds Substrate Reaction time (h) Yield (%) a -
4 58 714 58 71
9 939 93
6 27 926 27 92
7 25 867 25 86
8 47 808 47 80
9 7 949 7 94
a Rendement en acide extrait après bioconversion totale du nitrile (excepté pour le nitrile 4) Exemple 4: Hydrolyses euzymatiques de dinitriles Exemple 4,1: Hydrolyse encymatique du malononitrile (Composé 10) Le protocole opératoire est identique à celui décrit à l'exemple 2.1. Les quantités introduites sont les suivantes: 5,0 g (0,075 mole) de malononitrile commercial et 2,75 g de matériel biologique immobilisé. Le rendement obtenu, après 51 heures, est de 87% en acide 2 cyanoacétique (Composé 10a). H RMN (DMSO d6) OH ppm: 3,57 (s, 2H, -C_2-), 11,57 (s, 1H, CO2_). 3C RMN (DMSO d6) c ppm: 25,46 (CH2-CN), 115,4 (CN), 165,6 (CO2H). IR (CHCl3) a Yield of acid extracted after total bioconversion of the nitrile (except for nitrile 4) Example 4: Ezymatic hydrolysis of dinitriles Example 4.1: Encymatic hydrolysis of malononitrile (Compound 10) The operating protocol is identical to that described in Example 2.1 . The amounts introduced are as follows: 5.0 g (0.075 mole) of commercial malononitrile and 2.75 g of immobilized biological material. The yield obtained, after 51 hours, is 87% of cyanoacetic acid 2 (Compound 10a). H NMR (DMSO d6) OH ppm: 3.57 (s, 2H, -C_2-), 11.57 (s, 1H, CO2_). 3C NMR (DMSO d6) c ppm: 25.46 (CH2-CN), 115.4 (CN), 165.6 (CO2H). IR (CHCl3)
cm': 2500-3500, 2240, 1725. Masse FAB- (GT): m/e (intensité relative) 84 (100), 46 (60). cm ': 2500-3500, 2240, 1725. Mass FAB- (GT): m / e (relative intensity) 84 (100), 46 (60).
Exemple 4.2: Hydrolyse encymatique de l 'adiponitrile (Composé 11) Le protocole opératoire est identique à celui décrit à l'exemple 2.1. Les quantités introduites sont les suivantes: 8,02 g (0,075 mole) d'adiponitrile commercial et 4,50 g de matériel biologique immobilisé. Le rendement obtenu, après 53 heures, est de 90% en acide 5 cyanopentanoque. H RMN (DMSO d6) H ppm: 1,60 (m, 2H, HO2C-CH2-C_2-), 1,62 (m, 2H, Example 4.2: Encymatic hydrolysis of adiponitrile (Compound 11) The operating protocol is identical to that described in Example 2.1. The amounts introduced are as follows: 8.02 g (0.075 mole) of commercial adiponitrile and 4.50 g of immobilized biological material. The yield obtained, after 53 hours, is 90% of cyanopentanoic acid. H NMR (DMSO d6) H ppm: 1.60 (m, 2H, HO2C-CH2-C_2-), 1.62 (m, 2H,
14 232482314 2324823
NC-CH2-C_2-), 2,23 (t, 2H, -C_2-CO2H), 2,51 (t, 2H, -C_2-CN), 12,41 (s, 1H, CO2H). 3C RMN (DMSO d6) c ppm: 16,92 (NC-_H2-CH2), 24,92 (NC-CH2-CH2), 25,31 (CH2-CH2 CO2H), 34,95 (CH2-CO2H), 121,38 (CN), 176,41 (s, 1H, CO2H) . IR (CHCl3) cm: 2500-3500, NC-CH2-C_2-), 2.23 (t, 2H, -C_2-CO2H), 2.51 (t, 2H, -C_2-CN), 12.41 (s, 1H, CO2H). 3C NMR (DMSO d6) c ppm: 16.92 (NC-_H2-CH2), 24.92 (NC-CH2-CH2), 25.31 (CH2-CH2 CO2H), 34.95 (CH2-CO2H), 121.38 (CN), 176.41 (s, 1H, CO2H). IR (CHCl3) cm: 2500-3500,
2245, 1730. Masse FAB- (GT): m/e (intensité relative) 126 (100). 2245, 1730. Mass FAB- (GT): m / e (relative intensity) 126 (100).
s Exemple 4.3: Hydrolyse euaymatique du fumaronitrile (Composé 12) Le protocole opératoire est identique à celui décrit à l'exemple 2.1. Les quantités introduites sont les suivantes: 5,90 g (0,075 mole) de fumaronitrile commercial et 3,25 g de matériel biologique immobilisé. Le rendement obtenu, après 25 heures, est de 72% en acide 3 s Example 4.3: Euaymatic hydrolysis of fumaronitrile (Compound 12) The operating protocol is identical to that described in Example 2.1. The quantities introduced are as follows: 5.90 g (0.075 mole) of commercial fumaronitrile and 3.25 g of immobilized biological material. The yield obtained, after 25 hours, is 72% of acid 3
cyanoacrylique et de 28% en 3-cyanoacrylamide. cyanoacrylic and 28% 3-cyanoacrylamide.
Acide 3-cyanoucrylique H RMN (DMSO d6) H ppm: 5,84 (d, 1H, HO2C-CH=C_-CN), 6,54 (d, 1H, HO2C-CH=CH CN), 13,10 (s, 1H, CO2_).3C RMN (DMSO d6) c ppm: 115,03 (HO2C-CH=CH-CN), 119,09 3-cyanoucrylic acid H NMR (DMSO d6) H ppm: 5.84 (d, 1H, HO2C-CH = C_-CN), 6.54 (d, 1H, HO2C-CH = CH CN), 13.10 ( s, 1H, CO2 _). 3C NMR (DMSO d6) c ppm: 115.03 (HO2C-CH = CH-CN), 119.09
(CN), 153,22 (HO2C-CH=CH-CN), 167,13 (CO2H). IR (CHC13) cml: 2500-3500, 2225, 1695. (CN), 153.22 (HO2C-CH = CH-CN), 167.13 (CO2H). IR (CHC13) cml: 2500-3500, 2225, 1695.
Masse FAB- (GT): m/e (intensité relative) 96 (100), 52 (10). Mass FAB- (GT): m / e (relative intensity) 96 (100), 52 (10).
3-cyanoacrylamide lH RMN (DMSO d6) H ppm: 6,56 (d, 1H, H2NOC-CH=C_-CN), 7, 04 (d, 1H, H2NOC-C_=CH CN), 7,72-7,99 (d, 2H, CON_2). '3C RMN (DMSO d6) c ppm: 109,54 (H2NOC-CH=CH-CN), 117,95 (CN), 144,95 (H2NOC-CH=CH-CN), 164, 01 (CONH2). IR (CHC13) cm: 3100-3500, 3-cyanoacrylamide 1H NMR (DMSO d6) H ppm: 6.56 (d, 1H, H2NOC-CH = C_-CN), 7.04 (d, 1H, H2NOC-C_ = CH CN), 7.72-7 , 99 (d, 2H, CON_2). '3C NMR (DMSO d6) c ppm: 109.54 (H2NOC-CH = CH-CN), 117.95 (CN), 144.95 (H2NOC-CH = CH-CN), 164, 01 (CONH2). IR (CHC13) cm: 3100-3500,
2235, 1695. Masse FAB- (GT): m/e (intensité relative) 95 (10). 2235, 1695. Mass FAB- (GT): m / e (relative intensity) 95 (10).
Exemple 4.4: Hydrolyse ezymatique du 1,4-dicyanabut-2-ène (Composé 13) Le protocole opératoire est identique à celui décrit à l'exemple 2.1. Les quantités introduites sont les suivantes: 5,30 g (0,05 mole) de 1,4dicyanobut-2-ène commercial et 3,0 g de matériel biologique immobilisé dans 500 mL d'eau millipore. Le rendement obtenu, après 25 heures, est de 82% en acide 5-cyanopent-3-ènoque.'H RMN (DMSO d6) H ppm: 3,04 (dd, 2H, HO2C-C_2), 3,31 (dd, 2H, C_2-CN), 5,51 (td, 1H, NC-CH2-CH=), 5,82 (td, 1H, H2OC-CH2 C_=), 10,51 (s, 1H, CO2_). 3C RMN (DMSO d6) âc ppm: 20,34 (CH2CN), 38,14 (H2OC Example 4.4: Ezymatic hydrolysis of 1,4-dicyanabut-2-ene (Compound 13) The operating protocol is identical to that described in Example 2.1. The quantities introduced are as follows: 5.30 g (0.05 mole) of commercial 1,4dicyanobut-2-ene and 3.0 g of biological material immobilized in 500 ml of millipore water. The yield obtained, after 25 hours, is 82% in 5-cyanopent-3-enoque acid. H NMR (DMSO d6) H ppm: 3.04 (dd, 2H, HO2C-C_2), 3.31 (dd , 2H, C_2-CN), 5.51 (td, 1H, NC-CH2-CH =), 5.82 (td, 1H, H2OC-CH2 C_ =), 10.51 (s, 1H, CO2_). 3C NMR (DMSO d6) at ppm: 20.34 (CH2CN), 38.14 (H2OC
CH2), 119,44 (CN), 122,21 (NC-CH2-CH=), 128,75 (H2OC-CH2-CH=), 173,44 (CO2H). IR CH2), 119.44 (CN), 122.21 (NC-CH2-CH =), 128.75 (H2OC-CH2-CH =), 173.44 (CO2H). IR
(CHCl3) cm: 2500-3500, 2255, 1725. Masse FAB- (GT): m/e (intensité relative) 124 (100), 80 (CHCl3) cm: 2500-3500, 2255, 1725. Mass FAB- (GT): m / e (relative intensity) 124 (100), 80
(25), 46 (30).(25), 46 (30).
28248232824823
Exemple 4.5: Hydrolyse erzymatique du 2-méthylglutaronitrile (Composé 14) Le protocole opératoire est identique à celui décrit à l'exemple 2.1. Les quantités introduites sont les suivantes: 8,27 g (0,075 mole) de 2méthylglutaronitrile commercial et 4,56 g de matériel biologique immobilisé. Le rendement obtenu, après 96 heures, est de 91% en acide 4 cyanopentanoique. H RMN (DMSO d6) âH ppm: 1,23 (d, 3H, CH3-CH), 1,79 (td, 2H, NC CH(CH3)-C_2-), 2,35 (td, 2H, -C_2-CO2H), 2,84 (m, 2H, -C_-CN), 10, 89 (s, 1H, CO2_). 13C RMN (DMSO d6) éc ppm: 18,08 (_H3-CH), 24,94 (NC-_H-) , 29,33 (CH2-CH2-CO2H), 31,89 Example 4.5: Erzymatic hydrolysis of 2-methylglutaronitrile (Compound 14) The operating protocol is identical to that described in Example 2.1. The amounts introduced are as follows: 8.27 g (0.075 mole) of commercial 2methylglutaronitrile and 4.56 g of immobilized biological material. The yield obtained, after 96 hours, is 91% of cyanopentanoic acid 4. H NMR (DMSO d6) âH ppm: 1.23 (d, 3H, CH3-CH), 1.79 (td, 2H, NC CH (CH3) -C_2-), 2.35 (td, 2H, -C_2 -CO2H), 2.84 (m, 2H, -C_-CN), 10.89 (s, 1H, CO2_). 13C NMR (DMSO d6) ec ppm: 18.08 (_H3-CH), 24.94 (NC-_H-), 29.33 (CH2-CH2-CO2H), 31.89
(CH2-CO2H), 123,78 (CN), 174,25 (s, 1H, CO2H). IR (CHCl3) cml: 2500-3500, 2240, 1735. (CH2-CO2H), 123.78 (CN), 174.25 (s, 1H, CO2H). IR (CHCl3) cml: 2500-3500, 2240, 1735.
Masse FAB- (GT): m/e (intensité relative) 126 (100), 54 (5). Mass FAB- (GT): m / e (relative intensity) 126 (100), 54 (5).
Les résultats des exemples 4.1 à 4.5 sont compilés dans le Tableau 3 cidessous. The results of Examples 4.1 to 4.5 are compiled in Table 3 below.
Tableau 3: Hydrolyse erzymatique de composés dirifriles Substrat Temps de réaction (h) Conversion (%) a Rendement (o/O) b Table 3: Erzymatic hydrolysis of dirifrile compounds Substrate Reaction time (h) Conversion (%) a Yield (o / O) b
51 89 8751 89 87
11 53 91 9011 53 91 90
12 25 100 7212 25 100 72
13 25 98 8213 25 98 82
14 96 92 9114 96 92 91
a /0 conversion du dinitrile b Rendement en monoacide obtenu après puriiication a / 0 conversion of dinitrile b Yield of monoacid obtained after puriiication
16 282482316 2824823
Claims (11)
Priority Applications (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0106665A FR2824823A1 (en) | 2001-05-21 | 2001-05-21 | Preparation of aliphatic carboxylic acids by enzymatic hydrolysis of aliphatic nitriles, useful as precursors for pharmaceutical, agrochemical and nutritional applications |
| PCT/FR2002/001665 WO2002095045A2 (en) | 2001-05-21 | 2002-05-17 | Method of preparing aliphatic carboxylic acids by enzymatic hydrolysis of aliphatic nitrile compounds |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR0106665A FR2824823A1 (en) | 2001-05-21 | 2001-05-21 | Preparation of aliphatic carboxylic acids by enzymatic hydrolysis of aliphatic nitriles, useful as precursors for pharmaceutical, agrochemical and nutritional applications |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FR2824823A1 true FR2824823A1 (en) | 2002-11-22 |
Family
ID=8863490
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FR0106665A Withdrawn FR2824823A1 (en) | 2001-05-21 | 2001-05-21 | Preparation of aliphatic carboxylic acids by enzymatic hydrolysis of aliphatic nitriles, useful as precursors for pharmaceutical, agrochemical and nutritional applications |
Country Status (2)
| Country | Link |
|---|---|
| FR (1) | FR2824823A1 (en) |
| WO (1) | WO2002095045A2 (en) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| UA82292C2 (en) * | 2004-04-14 | 2008-03-25 | Пфайзер Продактс Инк. | A method for stereoselective byconversion of aliphatic dinitriles into cyanocarboxylic acids (variants) |
| CN111793007A (en) * | 2020-07-27 | 2020-10-20 | 河北诚信九天医药化工有限公司 | Method for continuously producing cyanoacetic acid |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1998018941A1 (en) * | 1996-10-25 | 1998-05-07 | Rhone-Poulenc Nutrition Animale | Method for preparing 2-hydroxy 4-methylthio butyric acid using a nitrilase |
| WO1998032872A1 (en) * | 1997-01-28 | 1998-07-30 | Novus International, Inc. | ENZYMATIC CONVERSION OF α-HYDROXYNITRILES TO THE CORRESPONDING α-HYDROXYAMIDES, ACIDS OR ACID SALTS |
| US5908954A (en) * | 1996-05-17 | 1999-06-01 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Preparation of lactams from aliphatic α, ω-dinitriles |
| WO2001034786A1 (en) * | 1999-11-08 | 2001-05-17 | Aventis Animal Nutrition S.A. | Method for modulating nitrilase selectivity, nitrilases obtained by said method and use thereof |
-
2001
- 2001-05-21 FR FR0106665A patent/FR2824823A1/en not_active Withdrawn
-
2002
- 2002-05-17 WO PCT/FR2002/001665 patent/WO2002095045A2/en not_active Application Discontinuation
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5908954A (en) * | 1996-05-17 | 1999-06-01 | E. I. Du Pont De Nemours And Company | Preparation of lactams from aliphatic α, ω-dinitriles |
| WO1998018941A1 (en) * | 1996-10-25 | 1998-05-07 | Rhone-Poulenc Nutrition Animale | Method for preparing 2-hydroxy 4-methylthio butyric acid using a nitrilase |
| WO1998032872A1 (en) * | 1997-01-28 | 1998-07-30 | Novus International, Inc. | ENZYMATIC CONVERSION OF α-HYDROXYNITRILES TO THE CORRESPONDING α-HYDROXYAMIDES, ACIDS OR ACID SALTS |
| WO2001034786A1 (en) * | 1999-11-08 | 2001-05-17 | Aventis Animal Nutrition S.A. | Method for modulating nitrilase selectivity, nitrilases obtained by said method and use thereof |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| GAVAGAN J E ET AL: "A GRAM-NEGATIVE BACTERIUM PRODUCING A HEAT-STABLE NITRILASE HIGHLY ACTIVE ON ALIPHATIC DINITRILES", APPLIED MICROBIOLOGY AND BIOTECHNOLOGY, SPRINGER VERLAG, BERLIN, DE, vol. 52, November 1999 (1999-11-01), pages 654 - 659, XP000964621, ISSN: 0175-7598 * |
| KLEMPIER N ET AL: "SELECTIVE TRANSFORMATION OF NITRILES INTO AMIDES AND CARBOXYLIC ACIDS BY AN IMMOBILIZED NITRILASE", TETRAHEDRON LETTERS, vol. 32, no. 3, 1991, pages 341 - 344, XP002192515, ISSN: 0040-4039 * |
| KOBAYASHI M ET AL: "VERSATILE NITRILASES: NITRILE-HYDROLYSING ENZYMES", FEMS MICROBIOLOGY LETTERS, AMSTERDAM, NL, vol. 120, no. 3, 1994, pages 217 - 223, XP001052644, ISSN: 0378-1097 * |
| LEVY-SCHIL S ET AL: "Aliphatic nitrilase from a soil-isolated Comamonas testosteroni sp.: gene cloning and overexpression, purification and primary structure", GENE, ELSEVIER BIOMEDICAL PRESS. AMSTERDAM, NL, vol. 161, no. 1, 8 August 1995 (1995-08-08), pages 15 - 20, XP004042111, ISSN: 0378-1119 * |
| YAMAMOTO K ET AL: "PURIFICATION AND CHARACTERIZATION OF THE NITRILASE FROM ALCALIGENES FAECALIS ATCC 8750 RESPONSIBLE FOR ENANTIOSELECTIVE HYDROLYSIS OF MANDELONITRILE", JOURNAL OF FERMENTATION AND BIOENGINEERING, SOCIETY OF FERMENTATION TECHNOLOGY, JP, vol. 73, no. 6, 1992, pages 425 - 430, XP000881149, ISSN: 0922-338X * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| WO2002095045A3 (en) | 2003-12-24 |
| WO2002095045A2 (en) | 2002-11-28 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| LU84920A1 (en) | METHOD FOR IMMOBILIZING BIOLOGICAL SUBSTANCES BY ABSORPTION IN A VERMICULITE MEDIUM | |
| Chibata et al. | Biocatalysis: immobilized cells and enzymes | |
| FR2770840A1 (en) | Production of amide from nitrile by nitrile hydratase treatment | |
| FR2525234A1 (en) | METHOD FOR IMMOBILIZATION OF BIOLOGICAL SUBSTANCES IN CONDENSED POLYALKYLENE-IMINE POLYMERS | |
| CA1340524C (en) | Process for preparing optically active 2-arylpropionic acids | |
| JPH09227488A (en) | Production of (s)-cyanohydrin | |
| CA2268869A1 (en) | Method for preparing 2-hydroxy 4-methylthio butyric acid using a nitrilase | |
| NL8002603A (en) | PROCESS FOR THE ENZYMATIC PREPARATION OF L-TRYPTOPHANE. | |
| EP0003923B1 (en) | Support-enzyme complexes and method for preparing them | |
| FR2626289A1 (en) | PROCESS FOR THE PREPARATION OF OPTICALLY ACTIVE ALKANOIC ARYL-2 ACIDS | |
| JP2004531243A (en) | Improved method for converting nitrile to carboxylic acid using nitrilase | |
| FR2824823A1 (en) | Preparation of aliphatic carboxylic acids by enzymatic hydrolysis of aliphatic nitriles, useful as precursors for pharmaceutical, agrochemical and nutritional applications | |
| Nakajima et al. | Continuous conversion to optically pure L-methionine from D-enantiomer contaminated preparations by an immobilized enzyme membrane reactor | |
| RU2355678C2 (en) | Method of obtaining ammonium salt of 2-hydroxy-4-methylthiobutyric acid | |
| FR2586702A1 (en) | PROCESS FOR THE PRODUCTION OF L-AMINO ACIDS | |
| EP0014003B1 (en) | Complex particles containing active protein substances and processes for their production, application and regeneration | |
| JP2001161392A (en) | Enantioselective production of amino acid, amino acid derivative using racemization catalyst | |
| EP0510168B1 (en) | Chiral hydantoin resolution | |
| Grundmann et al. | One‐Pot, Regioselective Synthesis of Substituted Arylglycines for Kinetic Resolution by Penicillin G Acylase | |
| LU85019A1 (en) | PROCESS FOR THE MANUFACTURE OF L-PHENYLALANINE COMPRISING THE REUSE OF PHENYLALANINE AMMONIA-LYASE | |
| BE897340A (en) | VERMICULITE SUPPORT FOR IMMOBILIZED BIOLOGICAL MATERIALS | |
| WO1999022012A1 (en) | Method for preparing a substituted benzamide | |
| EP0298796A1 (en) | Synthesis of N-substituted fatty acid amides by enzymatic catalysis | |
| JPH05244968A (en) | Production of alpha-hydroxyisobutyramide | |
| NL1009814C2 (en) | Production of N-acylated amino nitriles comprises reacting an amino nitrile with an optionally alpha-substituted phenylacetic or phenoxyacetic acid in the presence of a penicillin G or V acylase |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| ST | Notification of lapse |