FR2816711A1

FR2816711A1 - Analyte solution droplet maker e.g. for manufacture of bio-chips uses container with base outlet and side projection applied with impact to support surface

Info

Publication number: FR2816711A1
Application number: FR0014691A
Authority: FR
Inventors: Bruno Colin
Original assignee: Biomerieux SA
Current assignee: Biomerieux SA
Priority date: 2000-11-15
Filing date: 2000-11-15
Publication date: 2002-05-17
Anticipated expiration: 2020-11-15
Also published as: FR2816711B1; AU2002223073A1; WO2002040164A1

Abstract

Analyte solution droplet maker, is new. The analyte solution droplet maker procedure for applying separate droplets of a solution (2) containing at least one analyte on a support (6) uses a container (1) with an outlet (3) in its base and a side projection which extends below the level of the container base. The outlet is of a size which does not allow the solution to flow out by gravity when the container is at rest, i.e. preferably between 25 and 250 mcm in diameter, and a droplet is made by positioning the container above the support and tapping its projection against the support with sufficient impact to cause a droplet of the solution to fall onto the support from the outlet, passing through air on the way. Two or more containers can be fastened together to allow a number of separate droplets to be made at the same time.

Description

DESCRIPTION La présente invention concerne un procédé de dépôt d'une solution d'un analyte sur un support et un dispositif pour la mise en oeuvre du procédé. DESCRIPTION The present invention relates to a method for depositing an analyte solution on a support and a device for carrying out the method.

Au cours de ces dernières années, de nombreuses méthodes ont été développées pour la fixation d'analytes et notamment des acides nucléiques ou des peptides sur support solide, notamment pour la fabrication de biopuces. In recent years, many methods have been developed for the fixation of analytes and in particular nucleic acids or peptides on a solid support, in particular for the manufacture of biochips.

Une premier type de méthode consiste à réaliser in situ la synthèse des analytes pour fabriquer une biopuce. A cet effet, le brevet US 5,744, 305 décrit une méthode d'assemblage d'oligonucléotides par photolithographie à partir de nucléotides protégés par un groupement photolabile. La demande de brevet WO 95/25116 décrit la technique du jet d'encre pour amener les réactifs de synthèse d'oligonucléotides sur le support toujours pour la synthèse in situ. Ces méthodes permettent de préparer des biopuces avec une densité importante d'analytes sur le support mais des problèmes de pureté des analytes peuvent survenir, liés aux limites des rendements de synthèse des analytes. A first type of method consists in carrying out in situ the synthesis of the analytes to manufacture a biochip. To this end, US Patent 5,744,305 describes a method of assembling oligonucleotides by photolithography from nucleotides protected by a photolabile group. Patent application WO 95/25116 describes the ink jet technique for bringing the reagents for synthesis of oligonucleotides onto the support always for the synthesis in situ. These methods make it possible to prepare biochips with a high density of analytes on the support, but problems of purity of the analytes can arise, linked to the limits of the yields of synthesis of the analytes.

D'autres méthodes proposent de préparer à l'avance les différents analytes qui peuvent être ainsi purifiés et de les répartir sur le support solide en des positions discrètes. Other methods propose to prepare in advance the different analytes which can be thus purified and to distribute them on the solid support in discrete positions.

Le brevet US 6,110, 426 propose une méthode pour réaliser ces biopuces à l'aide d'un capillaire que l'on met en contact sur une surface solide pour délivrer un volume contrôlé de liquide. Un contact effectif a lieu entre l'extrémité du capillaire et le support solide pour que la goutte se dépose par capillarité. De même, le brevet US 6,083, 763 décrit une méthode et un appareil pour la fabrication de biopuces. Il s'agit d'un ensemble de capillaires coulissant dans un dispositif de façon à compenser les différences de hauteur de chacun d'eux. Ils sont amenés au contact d'une surface plane pour le dépôt par capillarité d'oligonucléotides spécifiques. Ces méthodes par contact impliquent une grande précision dans le mouvement du capillaire et des supports solides parfaitement plans. US Patent 6,110,426 proposes a method for producing these biochips using a capillary which is brought into contact on a solid surface to deliver a controlled volume of liquid. An effective contact takes place between the end of the capillary and the solid support so that the drop is deposited by capillarity. Likewise, US Patent 6,083,763 describes a method and an apparatus for manufacturing biochips. It is a set of capillaries sliding in a device so as to compensate for the differences in height of each of them. They are brought into contact with a flat surface for the deposition by capillarity of specific oligonucleotides. These contact methods imply great precision in the movement of the capillary and perfectly flat solid supports.

D'autres techniques résolvent ce problème du contact comme par exemple le brevet US 6,083, 762 qui propose une système de répartition de gouttes comprenant un Other techniques solve this problem of contact, such as, for example, US Pat. No. 6,083,762 which proposes a drop distribution system comprising a

microdispenseur couplé à un transducteur piézo-électrique pour éjecter des volumes de goutte inférieurs au nanolitre sur une surface solide. Un résultat semblable est obtenu en appliquant une source chaude sur la paroi d'un capillaire pour former une bulle qui éjecte un volume défini de solution (voir T. Okamoto et al., Nature Biotechnology, 18, p438-441, 2000). microdispenser coupled to a piezoelectric transducer to eject drop volumes smaller than nanoliter on a solid surface. A similar result is obtained by applying a hot source to the wall of a capillary to form a bubble which ejects a defined volume of solution (see T. Okamoto et al., Nature Biotechnology, 18, p438-441, 2000).

Dans toutes ces techniques, les résultats obtenus sont satisfaisants et permettent le dépôt de quantités de solution très faibles de l'ordre du picolitre, mais l'appareillage utilisé est complexe et donc le coût de fabrication est élevé. Il y a donc besoin de techniques simples pour permettre le dépôt de solutions d'analytes sur support. Dans un certain nombre de cas où le nombre d'analytes ne doit pas être très élevé, de l'ordre d'une dizaine à quelques centaines, il n'est pas nécessaire d'avoir un volume de dépôt aussi faible que le picolitre et un volume de l'ordre du nanolitre suffit. In all these techniques, the results obtained are satisfactory and allow the deposition of very small quantities of solution of the order of a picoliter, but the apparatus used is complex and therefore the manufacturing cost is high. There is therefore a need for simple techniques to allow the deposit of analyte solutions on a support. In a certain number of cases where the number of analytes must not be very high, of the order of ten to a few hundred, it is not necessary to have a deposit volume as low as picolitre and a volume of the order of a nanoliter is sufficient.

La présente invention décrit un procédé de dépôt d'une solution contenant au moins un analyte sur un support solide comprenant les étapes suivantes : a) charger la solution dans au moins un réservoir d'un dispositif, chaque réservoir étant muni à une extrémité d'un orifice de sortie de dimensions adaptées pour que la solution ne s'écoule pas par gravité, lorsque le réservoir est au repos. b) provoquer le déplacement du réservoir entre deux positions, une position dite de départ et une position dite d'arrivée, selon un axe, et c) stopper le déplacement lorsque ledit réservoir se trouve en position d'arrivée pour créer un choc mécanique sur le réservoir et déposer, via l'orifice de sortie, une goutte de solution sur le support solide, ladite goutte se déplaçant dans l'air avant de se déposer sur le support solide. The present invention describes a method of depositing a solution containing at least one analyte on a solid support comprising the following steps: a) loading the solution into at least one reservoir of a device, each reservoir being provided at one end with an outlet orifice of suitable dimensions so that the solution does not flow by gravity, when the tank is at rest. b) cause the displacement of the reservoir between two positions, a so-called starting position and a so-called arrival position, along an axis, and c) stop the displacement when said reservoir is in the arrival position to create a mechanical shock on the reservoir and deposit, via the outlet, a drop of solution on the solid support, said drop moving in the air before depositing on the solid support.

De préférence, l'axe est sensiblement longitudinal, avantageusement sensiblement vertical, et la position de départ est une position haute, la position d'arrivée est une position basse par rapport à un référentiel vertical. Preferably, the axis is substantially longitudinal, advantageously substantially vertical, and the starting position is a high position, the arrival position is a low position relative to a vertical frame of reference.

Le déplacement du réservoir est provoqué par tout moyen comme par exemple la gravité, un ressort ou tout type d'actionneur connu. La position d'arrivée du réservoir est déterminée à l'aide d'un moyen de butée. La fonction du moyen de butée est d'arrêter le déplacement du réservoir sans freinage préalable et donc de créer un choc mécanique par à coup. En particulier, il n'y a pas de déformation du réservoir lors du The displacement of the reservoir is caused by any means such as for example gravity, a spring or any type of known actuator. The position of arrival of the tank is determined using a stop means. The function of the abutment means is to stop the movement of the tank without prior braking and therefore to create a mechanical shock by sudden. In particular, there is no deformation of the tank during the

choc mécanique. Le réservoir mis en mouvement entre la position de départ et la position d'arrivée subit lors du choc sur la butée une accélération négative dont la valeur est fonction des conditions initiales du mouvement, de la rigidité de la structure porteuse et des matériaux en contact au niveau de la butée lors de l'impact. mechanical shock. The reservoir set in motion between the start position and the finish position undergoes upon impact on the stop a negative acceleration, the value of which depends on the initial conditions of the movement, the rigidity of the supporting structure and the materials in contact with it. level of the stop on impact.

Par analyte on entend tout composé dont la mise en évidence et/ou l'identification et/ou la quantification présente un intérêt, et en particulier l'analyte possède au moins un site de reconnaissance lui permettant de réagir avec une molécule cible d'intérêt biologique. A titre d'exemple, on peut citer comme analytes les polynucléotides, les antigènes, les anticorps, les peptides, les protéines, les haptènes, les sucres, les ions, les métaux. Dans une première variante, les analytes peuvent être mis directement en solution. Dans une deuxième variante, les analytes peuvent être fixés sur des particules comme des latex ou des colloïdes (voir par exemple les brevets ou demandes de brevets de la demanderesse FR-B-2.773. 416 ou FR-A-00/00799 ou les demandes internationales WO 00/39587 et WO 99/67641 pour peu que les particules soient dispersées en milieu aqueux). The term “analyte” means any compound whose highlighting and / or identification and / or quantification is of interest, and in particular the analyte has at least one recognition site allowing it to react with a target molecule of interest organic. By way of example, there may be mentioned as analytes the polynucleotides, the antigens, the antibodies, the peptides, the proteins, the haptens, the sugars, the ions, the metals. In a first variant, the analytes can be placed directly in solution. In a second variant, the analytes can be fixed on particles such as latexes or colloids (see for example the patents or patent applications of the applicant FR-B-2,773,416 or FR-A-00/00799 or the applications WO 00/39587 and WO 99/67641 provided that the particles are dispersed in an aqueous medium).

Le terme"support solide"tel qu'utilisé ici inclut tous les matériaux sur lesquels peut être immobilisé un analyte. Des matériaux naturels, de synthèse, modifiés ou non chimiquement, peuvent être utilisés comme support solide, notamment des polymères tels que polychlorure de vinyle, polyéthylène, polystyrène, polyacrylate, polyamide, ou copolymères à base de monomères vinyl aromatiques, alkylesters d'acides alpha-béta insaturés, esters d'acides carboxyliques insaturés, chlorure de vinylidène, diènes ou composés présentant des fonctions nitriles (acrylonitrile) ; des polymères de chlorure de vinyle et de propylène, polymère de chlorure de vinyle et acétate de vinyle ; copolymères à base de styrènes ou dérivés substitués du styrène ; des fibres synthétiques telles que le nylon, la nitrocellulose ; des matériaux inorganiques tels que la silice, le verre, la céramique, le quartz ; des latex, des particules magnétiques ; des dérivés métalliques. Le support solide selon l'invention peut être, sans limitation, sous la forme d'une plaque de microtitration, d'une feuille, d'un tube, d'un puits, de particules ou d'un support plan comme un wafer de silice ou silicium. Préférentiellement, au moins une partie du support est plan comme un wafer de silicium ou le fond d'un puits d'une plaque de microtitration. The term "solid support" as used herein includes all materials on which an analyte can be immobilized. Natural, synthetic, chemically modified or non-synthetic materials can be used as solid support, in particular polymers such as polyvinyl chloride, polyethylene, polystyrene, polyacrylate, polyamide, or copolymers based on vinyl aromatic monomers, alkyl esters of alpha acids. unsaturated beta, esters of unsaturated carboxylic acids, vinylidene chloride, dienes or compounds having nitrile functions (acrylonitrile); polymers of vinyl chloride and propylene, polymer of vinyl chloride and vinyl acetate; copolymers based on styrenes or substituted derivatives of styrene; synthetic fibers such as nylon, nitrocellulose; inorganic materials such as silica, glass, ceramic, quartz; latexes, magnetic particles; metal derivatives. The solid support according to the invention can be, without limitation, in the form of a microtiter plate, a sheet, a tube, a well, particles or a flat support such as a wafer of silica or silicon. Preferably, at least part of the support is flat like a silicon wafer or the bottom of a well of a microtiter plate.

Le support solide est hydrophile et/ou hydrophobe en fonction des applications et de la nature de la solution contenant le ou les analytes. Par exemple, des zones hydrophiles sont utilisées pour le dépôt, lesdites zones hydrophiles étant délimitées par des zones hydrophobes ce qui permet de mieux contrôler le diamètre des spots. The solid support is hydrophilic and / or hydrophobic depending on the applications and the nature of the solution containing the analyte (s). For example, hydrophilic zones are used for deposition, said hydrophilic zones being delimited by hydrophobic zones which allows better control of the diameter of the spots.

Le réservoir est un contenant de forme quelconque qui peut contenir la solution d'analyte. En particulier, le réservoir a une forme allongée pour permettre d'associer un ensemble de réservoirs dans un espace réduit. A titre d'exemple, des réservoirs tels que décrit dans les brevets US 6,083, 763, US 6,110, 426 ou la demande de brevet EPA-0.955. 084 sont utilisables. Cette variante du procédé permet notamment la fabrication d'une biopuce c'est-à-dire un ensemble d'au moins deux analytes différents fixés sur un support solide, ledit support ayant une taille généralement inférieure à 1

2 cm, et les analytes étant répartis sur le support solide en des positions discrètes. The reservoir is a container of any shape which may contain the analyte solution. In particular, the tank has an elongated shape to allow a set of tanks to be associated in a reduced space. For example, reservoirs as described in US patents 6,083, 763, US 6,110, 426 or patent application EPA-0.955. 084 can be used. This variant of the method allows in particular the manufacture of a biochip, that is to say a set of at least two different analytes fixed on a solid support, said support having a size generally less than 1

2 cm, and the analytes being distributed on the solid support in discrete positions.

L'orifice de sortie est dimensionné pour que le liquide ne s'écoule pas par gravité mais s'écoule par l'action d'un choc mécanique sur le réservoir. Le dimensionnement de l'orifice permet en outre de contrôler le volume de goutte éjecté du réservoir, c'est-àdire permet de calibrer le volume de solution en sortie du réservoir. Bien entendu, la dimension de l'orifice de sortie est fonction de divers paramètres comme la densité de la solution d'analyte, sa viscosité, l'hydrophilie ou l'hydrophobie de ladite solution et de celle du matériau utilisé pour la fabrication du réservoir et de l'orifice de sortie, et l'accélération négative (décélération) lors de l'arrêt du réservoir dans sa position d'arrivée et enfin la variation de hauteur de la colonne de liquide dans le réservoir. The outlet is dimensioned so that the liquid does not flow by gravity but flows by the action of a mechanical shock on the tank. The dimensioning of the orifice also makes it possible to control the volume of drop ejected from the reservoir, that is to say allows the volume of solution leaving the reservoir to be calibrated. Of course, the dimension of the outlet orifice is a function of various parameters such as the density of the analyte solution, its viscosity, the hydrophilicity or the hydrophobicity of said solution and that of the material used for the manufacture of the reservoir. and the outlet, and the negative acceleration (deceleration) when the tank stops in its arrival position and finally the variation in height of the column of liquid in the tank.

Dans une mode préféré de réalisation, la hauteur de liquide dans le réservoir est limitée à 20 mm, avantageusement est comprise entre 10 et 15 mm dans le cas où le haut de la colonne de liquide est à pression atmosphérique. Si le réservoir est bouché, il est possible d'augmenter la hauteur de liquide dans le réservoir avec éventuellement un contrôle de la température. In a preferred embodiment, the height of liquid in the tank is limited to 20 mm, advantageously is between 10 and 15 mm in the case where the top of the liquid column is at atmospheric pressure. If the tank is blocked, it is possible to increase the height of the liquid in the tank, possibly with temperature control.

Dans tous les cas, il n'y a pas contact entre le réservoir et le support solide sur lequel on veut déposer la solution. De même, il n'y pas contact entre le volume de solution à dispenser, c'est-à-dire la goutte, quand celle-ci se décroche du réservoir, et le support solide ce qui évite les problèmes de capillarité de l'état de la technique pour déposer la In all cases, there is no contact between the reservoir and the solid support on which we want to deposit the solution. Likewise, there is no contact between the volume of solution to be dispensed, that is to say the drop, when the latter is released from the reservoir, and the solid support, which avoids the capillarity problems of the state of the art to file the

goutte sur le support solide. La goutte effectue donc un déplacement dans l'air présent entre l'espace séparant l'orifice de sortie du réservoir quand celui-ci est en position d'arrivée (ou position basse) et le support solide. Par air, on entend un milieu gazeux quelconque qui peut être de l'air mais aussi un gaz ou un mélange de gaz inertes comme l'azote et/ou l'argon. drop on the solid support. The drop therefore makes a movement in the air present between the space separating the outlet orifice of the reservoir when the latter is in the arrival position (or low position) and the solid support. By air is meant any gaseous medium which may be air but also a gas or a mixture of inert gases such as nitrogen and / or argon.

Dans un mode préférentiel de réalisation de l'invention, le déplacement du réservoir est sensiblement vertical par rapport au plan horizontal du support et le liquide se déplace par l'effet conjugué du choc mécanique et de la gravité. De préférence, le déplacement est vertical. In a preferred embodiment of the invention, the movement of the reservoir is substantially vertical with respect to the horizontal plane of the support and the liquid moves by the combined effect of mechanical shock and gravity. Preferably, the displacement is vertical.

L'orifice peut être d'une forme quelconque pour peu que la solution d'analyte ne s'écoule pas par gravité lorsque le réservoir est au repos ou lorsque le réservoir est mû de la position d'arrivée à la position de départ (dans le cas du réarmement du dispositif). C'est cette définition complète qu'il convient de donner à l'expression lorsque le réservoir est au repos . Par exemple, l'orifice est un trou de diamètre compris entre 10 et 500 um de préférence compris entre 25 et 250 gm. The orifice can be of any shape provided that the analyte solution does not flow by gravity when the reservoir is at rest or when the reservoir is moved from the arrival position to the departure position (in the case of rearming the device). It is this complete definition that should be given to the expression when the tank is at rest. For example, the orifice is a hole with a diameter between 10 and 500 μm, preferably between 25 and 250 μm.

Le volume de solution par goutte est compris entre 0,5 nanolitre et 1 microlitre, préférentiellement entre 1 nanolitre et 200 nanolitres. The volume of solution per drop is between 0.5 nanoliter and 1 microliter, preferably between 1 nanoliter and 200 nanoliters.

Dans un mode particulier du procédé, le déplacement agit sur un seul réservoir. In a particular mode of the process, the displacement acts on a single tank.

Dans un mode préféré de réalisation du procédé, le déplacement agit sur moins deux réservoirs et le déplacement des réservoirs est simultané. In a preferred embodiment of the method, the displacement acts on at least two reservoirs and the displacement of the reservoirs is simultaneous.

De préférence, chaque réservoir contient des analytes différents. Preferably, each reservoir contains different analytes.

Dans un mode particulier de réalisation du procédé, le procédé comprend une étape supplémentaire d) qui consiste à répéter au moins une fois les étapes b) et c) c'est à dire : b) provoquer le déplacement du réservoir entre deux positions, une position dite de départ et une position dite d'arrivée, selon un axe et c) stopper le déplacement lorsque ledit réservoir se trouve en position d'arrivée pour créer un choc mécanique sur le réservoir et déposer, via l'orifice de sortie, une In a particular embodiment of the method, the method comprises an additional step d) which consists in repeating steps b) and c) at least once, that is to say: b) causing the displacement of the reservoir between two positions, a so-called starting position and a so-called arrival position, along an axis and c) stop the movement when said tank is in the arriving position to create a mechanical shock on the tank and deposit, via the outlet orifice, a

goutte de solution sur le support solide, ladite goutte se déplaçant dans l'air avant de se déposer sur le support solide. Dans un autre mode particulier de réalisation du procédé, le procédé comprend une étape supplémentaire d) qui consiste à répéter au moins une fois les étapes a) à c) c'est à dire : a) charger la solution dans au moins un réservoir d'un dispositif, chaque réservoir étant muni à une extrémité d'un orifice de sortie de dimensions adaptées pour que la solution ne s'écoule pas par gravité, lorsque le réservoir est au repos. b) provoquer le déplacement du réservoir entre deux positions, une position dite de départ et une position dite d'arrivée, selon un axe et c) stopper le déplacement lorsque ledit réservoir se trouve en position d'arrivée pour créer un choc mécanique sur le réservoir et déposer, via l'orifice de sortie, une goutte de solution sur le support solide, ladite goutte se déplaçant dans l'air avant de se déposer sur le support solide. drop of solution on the solid support, said drop moving in the air before being deposited on the solid support. In another particular embodiment of the process, the process comprises an additional step d) which consists in repeating steps a) to c) at least once, that is to say: a) loading the solution into at least one reservoir d 'A device, each tank being provided at one end with an outlet of dimensions adapted so that the solution does not flow by gravity, when the tank is at rest. b) cause the displacement of the reservoir between two positions, a so-called starting position and a so-called arrival position, along an axis and c) stop the displacement when said reservoir is in the arrival position to create a mechanical shock on the reservoir and deposit, via the outlet, a drop of solution on the solid support, said drop moving in air before depositing on the solid support.

Notamment lors de l'opération d), le déplacement génère le dépôt de goutte (s) dont la position est indépendante et sans contact avec toute autre goutte précédemment déposée. Le procédé permet ainsi de déposer un ensemble de gouttes sur une surface. In particular during operation d), the displacement generates the drop deposit (s) whose position is independent and without contact with any other drop previously deposited. The method thus makes it possible to deposit a set of drops on a surface.

Ainsi dans le procédé, les spots, générés par les gouttes après séchage des solutions sur le support solide, ne se touchent pas. Par exemple, le dispositif est positionné de manière décalé par rapport à la position précédente ce décalage étant égal à au moins une fois le diamètre d'un spot sur le support solide. Thus in the process, the spots, generated by the drops after the solutions have dried on the solid support, do not touch. For example, the device is positioned offset from the previous position, this offset being equal to at least once the diameter of a spot on the solid support.

Dans une première variante, le procédé permet de réaliser le dépôt du même analyte à des positions discrètes sur le support solide pour effectuer une multiplicité de tests à partir du même analyte. In a first variant, the method makes it possible to deposit the same analyte at discrete positions on the solid support in order to carry out a multiplicity of tests using the same analyte.

Dans une deuxième variante, le procédé permet de réaliser le dépôt d'analytes différents en des positions discrètes et différentes sur le support solide pour réaliser par exemple un test de multidétection. Un exemple de test en multidétection est donné par exemple dans la demande de brevet de la demanderesse WO 93/02213 pour le typage HLA avec une multiplicité d'analytes qui sont des oligonucléotides de capture. In a second variant, the method makes it possible to deposit different analytes in discrete and different positions on the solid support in order to carry out, for example, a multidetection test. An example of a multidetection test is given for example in the patent application of the applicant WO 93/02213 for HLA typing with a multiplicity of analytes which are capture oligonucleotides.

D'autres exemples de tests sont donnés dans le domaine de la génétique comme la demande de brevet EP-A-0. 412. 883 ou dans le domaine de l'infectieux avec les demandes de brevet WO 96/00298, WO 97/40193, WO 97/27332. Other examples of tests are given in the field of genetics such as patent application EP-A-0. 412. 883 or in the field of the infectious with patent applications WO 96/00298, WO 97/40193, WO 97/27332.

Dans un troisième variante du procédé, le dispositif se positionne au dessus d'un spot préalablement déposé et le dépôt d'une deuxième goutte permet d'augmenter la densité d'analytes à la surface. In a third variant of the process, the device is positioned above a spot previously deposited and the deposition of a second drop makes it possible to increase the density of analytes on the surface.

Dans un quatrième variante, le procédé permet de déposer au moins deux analytes différents sur le même spot à partir d'au moins deux solutions différentes. In a fourth variant, the method makes it possible to deposit at least two different analytes on the same spot from at least two different solutions.

Les gouttes déposées sur le support solide sont par exemple séchées soit à l'air soit dans un caisson à vide selon des méthodes connues de l'homme du métier pour permettre la conservation des analytes. The drops deposited on the solid support are for example dried either in air or in a vacuum box according to methods known to those skilled in the art to allow the preservation of the analytes.

Le chargement du réservoir avec la solution d'analytes est effectué extemporanément ou de manière prévisionnelle, afin de disposer d'autant de réservoirs que de configuration de distribution ou dépôt. Les solutions sont chargées manuellement avec par exemple une micropipette ou de manière automatisée. Les réservoirs ainsi préparés sont stockés dans des conditions de stabilité des analytes avant utilisation. The tank is loaded with the analyte solution is carried out temporarily or provisionally, in order to have as many tanks as there are distribution or depot configurations. The solutions are loaded manually with, for example, a micropipette or automatically. The reservoirs thus prepared are stored under conditions of stability of the analytes before use.

La présente invention concerne également une biopuce fabriquée selon le procédé, c'est à dire un support solide sur lequel sont immobilisés au moins deux analytes différents en des positions discrètes, avantageusement au moins 4 analytes différents, de préférence entre 4 et 100 analytes différents, ainsi qu'un kit de diagnostic comprenant au moins une biopuce fabriquée selon le procédé. The present invention also relates to a biochip manufactured according to the method, that is to say a solid support on which are immobilized at least two different analytes in discrete positions, advantageously at least 4 different analytes, preferably between 4 and 100 different analytes, as well as a diagnostic kit comprising at least one biochip manufactured according to the method.

Un exemple d'application non limitatif des biopuces fabriquées selon le procédé de la présente invention concerne le diagnostic comme par exemple les immunoessais, quelque soit leur format, par analyse directe ou par compétition, ou bien la détection et/ou la quantification d'acides nucléiques à partir d'un prélèvement quelconque contenant des acides nucléiques cibles. Dans un test diagnostique, la biopuce est utilisée préférentiellement comme dispositif de capture (voir le brevet de la demanderesse FR-B-2.707. 010 ou les brevets US 4,981, 783 ; US 5,700, 637 ; US 5,445, 934, ; US 5,744, 305 ; US 5,807, 522). An example of non-limiting application of biochips manufactured according to the method of the present invention relates to diagnosis such as, for example, immunoassays, whatever their format, by direct analysis or by competition, or else the detection and / or quantification of acids. nucleic acids from any sample containing target nucleic acids. In a diagnostic test, the biochip is preferably used as a capture device (see the applicant's patent FR-B-2,707,010 or US patents 4,981,783; US 5,700,637; US 5,445,934; US 5,744, 305; US 5,807, 522).

La présente invention concerne également un dispositif pour mettre en oeuvre le procédé, ledit dispositif comprenant : - au moins un réservoir contenant une solution d'analyte, chaque réservoir étant muni à une extrémité d'un orifice de sortie de dimensions adaptées pour que la solution d'analyte ne s'écoule pas par gravité, lorsque le réservoir est au repos, et chaque réservoir étant mobile le long d'un axe et pouvant adopter deux positions différentes par rapport à cet axe, une position dite de départ et une position dite d'arrivée, - au moins un moyen de butée, ledit moyen de butée permettant de stopper le mouvement du réservoir en position d'arrivée tout en permettant à ladite solution d'analyte de s'écouler via l'orifice de sortie. The present invention also relates to a device for implementing the method, said device comprising: - at least one reservoir containing an analyte solution, each reservoir being provided at one end with an outlet orifice of dimensions adapted so that the solution of analyte does not flow by gravity, when the reservoir is at rest, and each reservoir being movable along an axis and being able to adopt two different positions relative to this axis, a so-called starting position and a so-called position arrival, - at least one stop means, said stop means making it possible to stop the movement of the reservoir in the arrival position while allowing said analyte solution to flow via the outlet orifice.

De préférence, l'axe est sensiblement vertical et la position de départ est une position haute et la position d'arrivée est une position basse par rapport à un référentiel vertical. Preferably, the axis is substantially vertical and the starting position is a high position and the arriving position is a low position relative to a vertical frame of reference.

Le choc mécanique crée un décélération brutale sur le réservoir qui libère le volume de solution. La solution s'écoule sensiblement selon l'axe défini par la gravité. A noter que dans le mouvement de réarmement du dispositif, lorsque le réservoir est mû manuellement ou automatiquement de sa position basse vers sa position haute, celui ci subit une accélération suffisamment faible pour que le liquide ne s'écoule pas par gravité. De même, la décélération subit par le réservoir en position haute lors du réarmement est suffisamment faible pour que la solution de s'écoule pas. The mechanical shock creates a sudden deceleration on the tank which releases the volume of solution. The solution flows substantially along the axis defined by gravity. Note that in the resetting movement of the device, when the reservoir is moved manually or automatically from its low position to its high position, it undergoes an acceleration that is sufficiently low that the liquid does not flow by gravity. Likewise, the deceleration suffered by the tank in the high position during resetting is sufficiently low so that the solution does not flow.

L'orifice peut être d'une forme quelconque pour peu que la solution d'analyte ne s'écoule pas par gravité et que le volume de solution soit calibré. Par exemple, l'orifice est un trou de diamètre compris entre 10 et 500 um de préférence compris entre 25 et 250 f. ! m. Pour les orifices non circulaires, le diamètre est représenté par la plus grande diagonale. The orifice can be of any shape provided that the analyte solution does not flow by gravity and that the volume of solution is calibrated. For example, the orifice is a hole with a diameter between 10 and 500 μm, preferably between 25 and 250 μm. ! m. For non-circular holes, the diameter is represented by the largest diagonal.

Le moyen de butée permet de maintenir un espace entre le support solide et l'orifice du réservoir en position d'arrivée ledit espace étant supérieur à 2 fois le diamètre de l'orifice. Avantageusement, l'espace est réglable et compris entre 2 et 10 fois le The stop means makes it possible to maintain a space between the solid support and the orifice of the reservoir in the arrival position, said space being greater than 2 times the diameter of the orifice. Advantageously, the space is adjustable and between 2 and 10 times the

diamètre de l'orifice. Lors du déplacement du réservoir de la position de départ vers la position d'arrivée, le déplacement est stoppé brutalement par un moyen de butée. hole diameter. When the tank is moved from the starting position to the arriving position, the movement is abruptly stopped by a stop means.

Dans un mode de réalisation où le mouvement pour créer le choc mécanique est vertical, la hauteur de chute du réservoir entre la position haute et la position basse peut être de plusieurs centimètres, mais il sera montré dans les exemples qu'une hauteur de chute de quelques millimètres suffit pour créer un choc mécanique permettant la libération des gouttes du réservoir, si l'accélération négative sur le réservoir provoquée par ledit choc est suffisante. In an embodiment where the movement to create the mechanical shock is vertical, the height of fall of the tank between the high position and the low position can be several centimeters, but it will be shown in the examples that a fall height of a few millimeters is enough to create a mechanical shock allowing the release of the drops from the reservoir, if the negative acceleration on the reservoir caused by said shock is sufficient.

Dans un mode de réalisation préféré, le dispositif contient au moins deux réservoirs qui ont les mêmes positions haute et basse selon l'axe vertical. Le mouvement simultané des réservoirs permet de déposer un ensemble de gouttes sur le support solide. De préférence, les réservoirs sont solidaires entre eux. In a preferred embodiment, the device contains at least two reservoirs which have the same high and low positions along the vertical axis. The simultaneous movement of the reservoirs makes it possible to deposit a set of drops on the solid support. Preferably, the tanks are integral with each other.

Dans une première variante du dispositif, le moyen de butée est entièrement fixé sur le dispositif. In a first variant of the device, the stop means is entirely fixed on the device.

Dans une deuxième variante de réalisation du dispositif, le support solide constitue une partie du moyen de butée du dispositif. In a second variant embodiment of the device, the solid support constitutes part of the stop means of the device.

Les figures ci-jointes sont données à titre d'exemple explicatif et n'ont aucun caractère limitatif. Elles permettront de mieux comprendre l'invention. The attached figures are given by way of explanatory example and are in no way limiting. They will allow a better understanding of the invention.

La figure la représente une vue simplifiée d'un mode de réalisation du dispositif avec un seul réservoir. Figure la shows a simplified view of an embodiment of the device with a single tank.

La figure lb représente une vue simplifiée d'un autre mode de réalisation du dispositif avec un seul réservoir. FIG. 1b represents a simplified view of another embodiment of the device with a single tank.

Les figures 2a à 2c représentent un mode particulier de réalisation du procédé selon l'invention avec le dispositif de la figure la. Figures 2a to 2c show a particular embodiment of the method according to the invention with the device of Figure la.

Les figures 3a à 3c représentent un mode particulier de réalisation du procédé selon l'invention avec le dispositif de la figure lb. Figures 3a to 3c show a particular embodiment of the method according to the invention with the device of Figure lb.

La figure 4a représente une partie d'un dispositif selon l'invention plus complexe avec 4 réservoirs. Figure 4a shows part of a device according to the invention more complex with 4 tanks.

La figure 4b représente un détail d'un réservoir du dispositif de la figure 4a au niveau de l'orifice de sortie. Figure 4b shows a detail of a reservoir of the device of Figure 4a at the outlet.

La figure 4c représente un coupe selon A-A de la figure 4a montrant le positionnement des 4 réservoirs. Figure 4c shows a section along A-A of Figure 4a showing the positioning of the 4 tanks.

La figure 5 représente le mode de fonctionnement du dispositif en regard d'un support solide en forme de plaque de microtitration. FIG. 5 represents the operating mode of the device opposite a solid support in the form of a microtiter plate.

Les figures 6a à 6b représentent une photographie du dépôt de solution en fonction de la taille de l'orifice percé dans le réservoir selon un mode de réalisation du procédé selon l'invention. FIGS. 6a to 6b represent a photograph of the deposition of solution as a function of the size of the orifice drilled in the reservoir according to an embodiment of the method according to the invention.

La figure la représente un dispositif simplifié illustrant le fonctionnement de l'invention. Le réservoir 1 est constitué d'un tube par exemple plastique. Un orifice 3 est pratiqué au fond du tube et le moyen de butée 5 est situé dans la partie inférieure du réservoir et a la forme d'une surépaisseur dans le matériau qui compose le réservoir. Figure la represents a simplified device illustrating the operation of the invention. The reservoir 1 consists of a tube, for example plastic. An orifice 3 is made at the bottom of the tube and the stop means 5 is located in the lower part of the tank and has the form of an extra thickness in the material which composes the tank.

Le mode de fonctionnement du procédé selon l'invention est représenté sur les figures 2a à 2c. Le réservoir est rempli d'une solution 2 contenant un analyte. Par déplacement du réservoir 1, selon un axe vertical représenté par la flèche F, l'on crée un choc mécanique entre la butée 5 du réservoir et le support 6 ce qui a pour effet de libérer un volume précis de solution qui se dépose sur le support solide. La figure 2b illustre que la goutte de solution 7 se déplace dans l'air quand elle quitte le réservoir pour aboutir au dépôt d'un spot sur la figure 2c. The operating mode of the method according to the invention is shown in Figures 2a to 2c. The reservoir is filled with a solution 2 containing an analyte. By moving the reservoir 1, along a vertical axis represented by the arrow F, a mechanical shock is created between the stop 5 of the reservoir and the support 6, which has the effect of releasing a precise volume of solution which is deposited on the solid support. FIG. 2b illustrates that the drop of solution 7 moves in the air when it leaves the reservoir to result in the deposition of a spot in FIG. 2c.

Les figures 6-a à 6-b montrent la reproductibilité du dépôt. Une solution de PBS tween colorée par de l'encre orange G est introduite dans un tube eppendorf (poly labo référence 35341) percé en son fond d'un trou de diamètre variable de 50 u. m (fig 6-a) ou 160 um (fig 6-b). Une butée est réalisée dans le fond du tube en enlevant de la matière plastique sur un coté du tube comme représenté sur la figure la. Le tube est tapé sur une feuille de papier photo plusieurs fois pour créer un choc mécanique et libérer des gouttes de solution. Les figures 6 montrent que le système de dépôt est reproductible même dans ces conditions manuelles et que le diamètre du trou permet de Figures 6-a to 6-b show the reproducibility of the deposit. A solution of PBS tween colored with orange ink G is introduced into an eppendorf tube (poly lab reference 35341) pierced at its bottom with a hole of variable diameter of 50 u. m (fig 6-a) or 160 µm (fig 6-b). A stop is made in the bottom of the tube by removing plastic on one side of the tube as shown in Figure la. The tube is tapped on a sheet of photo paper several times to create a mechanical shock and release drops of solution. Figures 6 show that the deposition system is reproducible even under these manual conditions and that the diameter of the hole allows

faire varier le volume de solution et la taille du spot. L'échelle représentée sur les figures 6a à 6b est graduée par des valeurs exprimées en mm. Il est donc possible de réaliser le dépôt de nanovolume de solution contenant un analyte sur une petite surface pour réaliser une biopuce avec par exemple différents oligonucléotides qui permettent un diagnostic moléculaire. vary the volume of solution and the size of the spot. The scale shown in Figures 6a to 6b is graduated by values expressed in mm. It is therefore possible to deposit a nanovolume of solution containing an analyte on a small surface in order to produce a biochip with, for example, different oligonucleotides which allow molecular diagnosis.

Dans la figure lb, la butée 5 est située sur le haut du réservoir 1 avec deux ergots. Dans ce cas, le support a la forme d'un puits de cuvette de microtitration et la butée vient au contact du bord supérieur du puits. Le dépôt est réalisé en appliquant une force F pour déplacer le réservoir. Le choc mécanique est créé par le contact entre les ergots du moyen de butée. Dans ce mode de réalisation, la partie inférieure du réservoir sur laquelle se trouve l'orifice de sortie ne touche pas la partie inférieure du support solide, c'est à dire la partie plane où se dépose la goutte (figure 3a à 3c). In Figure 1b, the stop 5 is located on the top of the tank 1 with two pins. In this case, the support has the form of a microtitration cuvette well and the stop comes into contact with the upper edge of the well. The deposition is carried out by applying a force F to move the reservoir. The mechanical shock is created by the contact between the lugs of the stop means. In this embodiment, the lower part of the reservoir on which the outlet orifice is located does not touch the lower part of the solid support, that is to say the flat part where the drop is deposited (FIG. 3a to 3c).

De nombreuses variantes de réalisation sont possibles sans sortir de la portée de la présente invention. Le seul principe à respecter est que l'orifice de sortie soit dimensionnée pour que le liquide ne s'écoule pas par gravité mais par l'action d'un choc mécanique sur le réservoir et que l'orifice de sortie soit dimensionné pour que le volume de solution éjecté soit calibré. Dans tous les cas, il n'y a jamais contact entre le liquide et le support solide sur lequel on veut déposer la solution. La goutte effectue donc un déplacement dans l'air. L'espacement 13 entre le bord de l'orifice du réservoir et le support solide est au minimum supérieure à 2 fois le diamètre de l'orifice. Many alternative embodiments are possible without departing from the scope of the present invention. The only principle to be observed is that the outlet orifice is dimensioned so that the liquid does not flow by gravity but by the action of a mechanical shock on the reservoir and that the outlet orifice is dimensioned so that the volume of solution ejected is calibrated. In all cases, there is never contact between the liquid and the solid support on which we want to deposit the solution. The drop therefore moves in the air. The spacing 13 between the edge of the orifice of the reservoir and the solid support is at least greater than 2 times the diameter of the orifice.

La figure 4a montre un autre mode de réalisation de l'invention pour permettre le dépôt de 4 solutions différentes d'analytes sur un support solide. FIG. 4a shows another embodiment of the invention to allow the deposition of 4 different solutions of analytes on a solid support.

Le dispositif comporte quatre réservoirs 1 cylindriques montés verticalement autour d'un axe de guidage 4 et mobile le long de cet axe. Le positionnement équidistant des 4 réservoirs apparaît sur la figure 4c sur une vue en coupe. Un rubis 8 percé d'un trou 3 se trouve à l'extrémité du cylindre. Le trou a un diamètre de 50 um. Une butée 5 est présente à l'extrémité de l'axe pour bloquer le mouvement vertical des cylindres. Le fonctionnement de la butée apparaît sur la figure 4b. Un lamage est usiné dans la partie The device comprises four cylindrical tanks 1 mounted vertically around a guide axis 4 and movable along this axis. The equidistant positioning of the 4 tanks appears in FIG. 4c in a sectional view. A ruby 8 pierced with a hole 3 is at the end of the cylinder. The hole has a diameter of 50 µm. A stop 5 is present at the end of the axis to block the vertical movement of the cylinders. The operation of the stop appears in FIG. 4b. A counterbore is machined in the part

inférieure du réservoir qui vient en butée sur le moyen 5. Comme cela sera expliqué sur la figure 5 le moyen de butée en entier est solidaire du dispositif. Un doigt 9 d'immobilisation en rotation du réservoir est fixé sur la partie supérieure du dispositif. Une encoche réalisée dans la partie supérieure des réservoirs permet de bloquer la rotation par rapport au doigt 9 (figure 4c). bottom of the reservoir which abuts on the means 5. As will be explained in FIG. 5 the entire abutment means is integral with the device. A finger 9 for immobilizing the reservoir in rotation is fixed to the upper part of the device. A notch made in the upper part of the tanks makes it possible to block rotation relative to finger 9 (FIG. 4c).

Le dispositif plus complet est représenté sur la figure 5. The more complete device is shown in Figure 5.

Les quatre réservoirs sont maintenus en position haute par un moyen de blocage comme un cliquet 10. L'ensemble des réservoirs en position haute est représentée en pointillés sur la figure 5. Lorsque ce moyen est débloqué par un levier de commande 12, les 4 cylindres tombent par l'action de la gravité sur une hauteur de quelques millimètres le long de l'axe 4 et le mouvement des réservoirs est bloqué en position basse par la butée 5 créant ainsi une décélération brutale et donc un choc mécanique. The four tanks are held in the high position by a locking means such as a pawl 10. The set of tanks in the high position is shown in dotted lines in FIG. 5. When this means is released by a control lever 12, the 4 cylinders fall by the action of gravity to a height of a few millimeters along the axis 4 and the movement of the tanks is blocked in the low position by the stop 5 thus creating a sudden deceleration and therefore a mechanical shock.

Les réservoirs usinés en métal ont ensemble un mouvement à vitesse suffisante le long de l'axe 4 pour créer un choc mécanique au contact de la butée elle aussi usinée en métal. Les matériaux du réservoir et de la butée ainsi que la rigidité de la structure porteuse contribuent à l'intensité du choc attendu. D'autres matériaux sont utilisables comme le plastique ou le verre. Dans le cas où la quantité de mouvement du réservoir ou de l'ensemble de réservoir (c'est à dire le produit de la masse par la vitesse) est insuffisante par elle-même, un moyen d'accélération comme un ressort est ajouté sur le dispositif. La hauteur de déplacement des réservoirs est un moyen supplémentaire pour créer cet accroissement de la quantité de mouvement et les conditions précises sont déterminées par l'homme du métier au cas par cas. Un espacement de 500 u. m est présent entre le support solide plan 6 qui réceptionne les gouttes de solution et l'orifice 3 du réservoir non représenté sur la figure 5. Les 4 gouttes de solution tombent simultanément sur le support solide. La hauteur de chute du réservoir est variable et réglable par l'intermédiaire d'un pallier 14. L'espacement de 500 f. ! m est assuré par des pieds coniques 15 qui se positionnent dans les puits de la plaque de microtitration représentée sur la figure 5. The machined metal tanks together have a movement at sufficient speed along the axis 4 to create a mechanical shock on contact with the stop which is also machined in metal. The materials of the reservoir and of the stop as well as the rigidity of the supporting structure contribute to the intensity of the expected shock. Other materials can be used such as plastic or glass. In the case where the momentum of the tank or the tank assembly (i.e. the product of mass by speed) is insufficient by itself, a means of acceleration like a spring is added on the device. The height of movement of the tanks is an additional means for creating this increase in the amount of movement and the precise conditions are determined by a person skilled in the art on a case-by-case basis. A spacing of 500 u. m is present between the flat solid support 6 which receives the drops of solution and the orifice 3 of the reservoir not shown in FIG. 5. The 4 drops of solution fall simultaneously on the solid support. The height of the tank drop is variable and adjustable by means of a step 14. The spacing of 500 f. ! m is provided by conical feet 15 which are positioned in the wells of the microtiter plate shown in FIG. 5.

Pour vérifier la reproductibilité du dépôt, les 4 réservoirs du dispositif de la figure 5 sont remplis avec une solution d'orange G à 5mg/ml dans un tampon PBS 4x To verify the reproducibility of the deposit, the 4 reservoirs of the device of FIG. 5 are filled with an orange solution G at 5 mg / ml in a PBS 4x buffer

(phosphate de sodium 200 mM pH 7, 0, NaCl 600 mM). La hauteur de chute est réglée à 10mm. Le support solide est une plaque de microtitration NUNC référence 439454 en polystyrène. Le dépôt est répété 8 fois sur le fond d'un puits de la plaque. La taille des spots, mesurée sous microscope est comprise entre 149 et 179 um avec un coefficient de variation inférieur à 7% et un écart type inférieur à 10 um. (sodium phosphate 200 mM pH 7, 0, NaCl 600 mM). The fall height is set at 10mm. The solid support is a NUNC microtiter plate, reference 439454, made of polystyrene. The deposit is repeated 8 times on the bottom of a well of the plate. The spot size, measured under a microscope, is between 149 and 179 µm with a coefficient of variation of less than 7% and a standard deviation of less than 10 µm.

Il est possible de répartir sur un disque de 4 mm de diamètre, délimité dans le fond d'un puits de plaque de microtitration, 16 spots de 160 nm de diamètre séparé par un distance comprise entre 600 et 700 um sans risque de contamination. It is possible to distribute on a disk of 4 mm in diameter, delimited in the bottom of a microtiter plate well, 16 spots of 160 nm in diameter separated by a distance of between 600 and 700 μm without risk of contamination.

Avec 16 analytes différents sur chaque spot, comme 16 sondes de capture pour le typage HLA, il est possible de réaliser un typage dans un seul puits par un procédé très simple et peu coûteux.With 16 different analytes on each spot, such as 16 capture probes for HLA typing, it is possible to perform typing in a single well by a very simple and inexpensive process.

Claims

REVENDICATIONS 1/Procédé de dépôt d'une solution (2) contenant au moins un analyte sur un support solide (6) comprenant les étapes suivantes : a) charger la solution (2) dans au moins un réservoir (1) d'un dispositif, chaque réservoir étant muni à une extrémité d'un orifice de sortie (3) de dimensions adaptées pour que la solution ne s'écoule pas par gravité, lorsque le réservoir est au repos, b) provoquer le déplacement du réservoir (1) entre deux positions, une position dite de départ et une position dite d'arrivée, selon un axe (4) et c) stopper le déplacement lorsque ledit réservoir (1) se trouve en position d'arrivée pour créer un choc mécanique sur le réservoir et déposer une goutte de solution sur le support solide, ladite goutte se déplaçant dans l'air avant de se déposer sur le support solide. CLAIMS 1 / Method for depositing a solution (2) containing at least one analyte on a solid support (6) comprising the following steps: a) loading the solution (2) into at least one reservoir (1) of a device , each reservoir being provided at one end with an outlet orifice (3) of suitable dimensions so that the solution does not flow by gravity, when the reservoir is at rest, b) causing the displacement of the reservoir (1) between two positions, a so-called starting position and a so-called arrival position, along an axis (4) and c) stop the movement when said reservoir (1) is in the arrival position to create a mechanical shock on the reservoir and depositing a drop of solution on the solid support, said drop moving in the air before depositing on the solid support.

2/Procédé selon la revendication 1 caractérisé par le fait que l'axe est sensiblement vertical et que la position de départ est une position haute et la position d'arrivée une position basse. 2 / A method according to claim 1 characterized in that the axis is substantially vertical and that the starting position is a high position and the arriving position a low position.

3/Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 ou 2 caractérisé par le fait que le déplacement agit sur au moins deux réservoirs et que le déplacement des réservoirs est simultané. 3 / A method according to any one of claims 1 or 2 characterized in that the movement acts on at least two tanks and that the movement of the tanks is simultaneous.

4/Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 3 caractérisé par le fait que chaque réservoir contient des analytes différents. 4 / A method according to any one of claims 1 to 3 characterized in that each reservoir contains different analytes.

5/Procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 4 caractérisé par le fait que le procédé comprend une étape supplémentaire d) qui consiste à répéter au moins une fois les étapes a) à c). 5 / A method according to any one of claims 1 to 4 characterized in that the method comprises an additional step d) which consists in repeating at least once steps a) to c).

6/Procédé selon la revendication 5 caractérisé par le fait que lors de l'opération d) le déplacement génère le dépôt de goutte (s) dont la position est indépendante et sans contact avec toute autre goutte précédemment déposée. 6 / A method according to claim 5 characterized in that during operation d) the movement generates the deposit of drop (s) whose position is independent and without contact with any other drop previously deposited.

7/Dispositif pour mettre en oeuvre le procédé selon l'une quelconque des revendications 1 à 6 comprenant au moins un réservoir (1) contenant une solution d'analyte (2), chaque réservoir étant muni à une extrémité d'un orifice de sortie (3) de dimensions adaptées pour que la solution d'analyte ne s'écoule pas par gravité, lorsque le réservoir est au repos et chaque réservoir étant mobile le long d'un axe (4) et pouvant adopter deux positions différentes par rapport à cet axe, une position dite de départ et une position dite d'arrivée, au moins un moyen de butée (5), ledit moyen de butée permettant de stopper le mouvement du réservoir en position d'arrivée tout en permettant à ladite solution d'analyte de s'écouler via l'orifice de sortie. 7 / Device for implementing the method according to any one of claims 1 to 6 comprising at least one reservoir (1) containing an analyte solution (2), each reservoir being provided at one end with an outlet orifice (3) of dimensions adapted so that the analyte solution does not flow by gravity, when the reservoir is at rest and each reservoir being movable along an axis (4) and being able to adopt two different positions relative to this axis, a so-called starting position and a so-called arrival position, at least one abutment means (5), said abutment means making it possible to stop the movement of the reservoir in the arrival position while allowing said solution to analyte to flow through the outlet.

8/Dispositif selon la revendication 7 caractérisé par le fait que l'axe est sensiblement vertical et que la position de départ est une position haute et la position d'arrivée une position basse et que la solution s'écoule sensiblement selon l'axe défini par la gravité. 8 / Apparatus according to claim 7 characterized in that the axis is substantially vertical and that the starting position is a high position and the arriving position a low position and that the solution flows substantially along the defined axis by gravity.

9/Dispositif selon l'une quelconque des revendications 7 ou 8 caractérisé par le fait que le diamètre de l'orifice de sortie (3) est compris entre 10 et 500 f. ! m, de préférence entre 25 et 250 f. ! m. 9 / Device according to any one of claims 7 or 8 characterized in that the diameter of the outlet orifice (3) is between 10 and 500 f. ! m, preferably between 25 and 250 f. ! m.

10/Dispositif selon l'une quelconque des revendications 7 à 9 caractérisé par le fait que l'espace entre le support solide et l'orifice (3) du réservoir (1) en position d'arrivée est supérieure à 2 fois le diamètre de l'orifice (3) dudit réservoir (1). 10 / Device according to any one of claims 7 to 9 characterized in that the space between the solid support and the orifice (3) of the reservoir (1) in the arrival position is greater than 2 times the diameter of the orifice (3) of said tank (1).

11/Dispositif selon l'une quelconque des revendications 7 à 10, caractérisé par le fait que le dispositif contient au moins deux réservoirs mobiles selon le même axe. 11 / Device according to any one of claims 7 to 10, characterized in that the device contains at least two mobile tanks along the same axis.

12/Dispositif selon la revendication 11 caractérisé par le fait que les réservoirs sont solidaires entre eux. 12 / Apparatus according to claim 11 characterized in that the tanks are integral with each other.