FR2813182A1 - Method for concentrating sperm in liquid in fertility treatment involves filtering sperm for retention in container - Google Patents
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Abstract
Description
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L'invention est du domaine des techniques médicales, et plus particulièrement des techniques de procréation médicalement assistée, et elle a pour objet une méthode pour concentrer des spermatozoïdes mobiles contenus en milieu liquide dans un réservoir. L'invention a aussi pour objet des dispositifs mettant en ceuvre cette méthode pour des applications spécifiques. <Desc / Clms Page number 1>
The invention is in the field of medical techniques, and more particularly medically assisted procreation techniques, and its subject is a method for concentrating mobile spermatozoa contained in a liquid medium in a reservoir. The invention also relates to devices implementing this method for specific applications.
On rappelle que dans la procréation médicalement assistée, on cherche à mettre en présence du complexe cumulo-ovocytaire des spermatozoïdes mobiles afin d'augmenter la probabilité de la fécondation. We recall that in medically assisted procreation, we seek to bring together the cumulo-oocyte complex of mobile sperm in order to increase the probability of fertilization.
Une première opération connue consiste à isoler et à prélever les spermatozoïdes mobiles d'un sperme. Une technique d'isolement des spermatozoïdes du sperme consiste à placer le sperme à l'intérieur d'une cuve contenant un liquide plus léger que lui, dit surnageant, vers lequel les spermatozoïdes mobiles tendent à se diriger. Un prélèvement par pipette du surnageant, qui potentiellement contient une forte proportion de spermatozoïdes mobiles, est alors effectué. Toutefois, cette technique n'est pas avantageuse compte tenu du caractère aléatoire, au moment du prélèvement, de la concentration dans le surnageant des spermatozoïdes mobiles. A first known operation consists in isolating and collecting the mobile spermatozoa from a sperm. A technique for isolating sperm from sperm consists of placing the sperm inside a tank containing a liquid that is lighter than it, called a supernatant, towards which the mobile sperm tend to go. A pipette sample of the supernatant, which potentially contains a high proportion of mobile spermatozoa, is then carried out. However, this technique is not advantageous given the random nature, at the time of sampling, of the concentration in the supernatant of the mobile spermatozoa.
Une deuxième opération connue, dite fécondation in vitro en micro goutte, consiste à mettre en présence dans un faible volume de liquide, le complexe cumulo-ovocytaire et les spermatozoïdes mobiles préalablement prélevés du sperme, au moyen de la technique précédente par exemple. Le problème posé par cette technique réside dans la difficulté à concentrer les spermatozoïdes mobiles autour du complexe cumulo ovocytaires. Il en découle que cette technique est réservée au cas spécifique d'un nombre présumé faible de spermatozoïdes mobiles susceptibles d'être mis en présence du complexe cumulo-ovocytaire. D'une manière générale, la difficulté à surmonter pour l'une et/ou l'autre des opérations susvisées réside dans une concentration optimale des spermatozoïdes mobiles, soit pour les isoler dans le cas de leur prélèvement d'un sperme, soit pour favoriser la fécondation d'un ovocyte. A second known operation, called micro-drop in vitro fertilization, consists in bringing together in a small volume of liquid, the cumulo-oocyte complex and the mobile spermatozoa previously taken from the sperm, using the previous technique for example. The problem with this technique is the difficulty in concentrating mobile sperm around the cumulo oocyte complex. It follows that this technique is reserved for the specific case of a presumed low number of mobile spermatozoa likely to be brought into contact with the cumulo-oocyte complex. In general, the difficulty to be overcome for one and / or the other of the abovementioned operations lies in an optimal concentration of mobile sperm, either to isolate them in the case of their collection of a sperm, or to promote the fertilization of an oocyte.
Le but général de la présente invention est d'augmenter la probalité d'une procréation médicalement assistée, en proposant une méthode de concentration optimale de spermatozoïdes mobiles placés en milieu liquide psysiologique approprié à leur survie, et des dispositifs mettant en oeuvre cette méthode. The general aim of the present invention is to increase the probability of medically assisted procreation, by proposing a method of optimal concentration of mobile spermatozoa placed in a psysiological liquid medium suitable for their survival, and of devices implementing this method.
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Un premier dispositif proposé est destiné à optimiser le nombre de spermatozoïdes mobiles prélevables d'un sperme, à partir de la technique susvisée utilisant un surnageant. A first device proposed is intended to optimize the number of mobile spermatozoa that can be removed from a sperm, using the aforementioned technique using a supernatant.
Un deuxième dispositif proposé, pouvant être utilisé indépendamment ou en complément du premier, est destiné à optimiser la concentration de spermatozoïdes mobiles autour d'un complexe cumulo-ovocytaire dans un volume donné. La présente invention propose dans sa généralité une méthode pour concentrer dans un volume déterminé des spermatozoïdes mobiles placés en milieu liquide approprié à leur survie. Cette méthode consiste dans sa généralité à provoquer un flux du liquide à l'intérieur d'un conduit pour entraîner les spermatozoïdes mobiles qu'il contient vers un filtre de rétention de ces derniers à l'intérieur d'une réserve. A second proposed device, which can be used independently or in addition to the first, is intended to optimize the concentration of mobile spermatozoa around a cumulo-oocyte complex in a given volume. The present invention generally provides a method for concentrating, in a determined volume, mobile spermatozoa placed in a liquid medium suitable for their survival. This method consists in its generality of causing a flow of the liquid inside a conduit to drive the mobile spermatozoa which it contains towards a filter of retention of these last inside a reserve.
On relèvera que la réserve vise à ne pas induire une pression inopportune des spermatozoïdes mobiles contre le filtre. It will be noted that the reserve is intended not to induce untimely pressure of the mobile spermatozoa against the filter.
La circulation du liquide est par exemple provoquée par un organe ou pompe, exerçant des pressions successives sur une zone élastiquement déformable du conduit. The circulation of the liquid is for example caused by a member or pump, exerting successive pressures on an elastically deformable zone of the conduit.
On comprendra que la zone élastiquement déformable du conduit résulte, soit, et de préférence, du caractère souple du conduit lui-même, soit de manière analogue d'un aménagement de la dite zone visant à permettre une réduction du volume intérieur du conduit sous l'effet d'une pression exercée par la pompe. Cette dernière est par exemple une pompe à doigts, un pompe à galet ou analogue. It will be understood that the elastically deformable zone of the conduit results, either, and preferably, from the flexible nature of the conduit itself, or in a similar manner of an arrangement of said zone intended to allow a reduction in the internal volume of the conduit under the effect of pressure exerted by the pump. The latter is for example a finger pump, a roller pump or the like.
Selon une autre approche de l'invention, la méthode susvisée est utilisée pour des applications relevant des techniques de procréation médicalement assistée, notamment la sélection et le prélèvement de spermatozoïdes mobiles d'un sperme, et la fécondation in vitro. On comprendra que la méthode de l'invention est applicable à la fois à l'une et à l'autre de ces techniques, indépendamment l'une de l'autre. Notamment, l'application de l'invention à la fécondation in vitro peut être effectuée à partir de spermatozoïdes mobiles prélevés au moyen d'une autre méthode que celle de la présente invention. La présente invention sera mieux comprise et des détails en relevant apparaîtront, à la description qui va en être faite de formes préférées de réalisation de dispositifs mettant en oeuvre la méthode de l'invention, en relation avec les figures de la planche annexée, dans laquelle According to another approach of the invention, the abovementioned method is used for applications relating to medically assisted procreation techniques, in particular the selection and removal of mobile sperm from a sperm, and in vitro fertilization. It will be understood that the method of the invention is applicable to both of these techniques, independently of one another. In particular, the application of the invention to in vitro fertilization can be carried out using mobile spermatozoa collected by means of another method than that of the present invention. The present invention will be better understood and details will become apparent from the description which will be given of preferred embodiments of devices implementing the method of the invention, in relation to the figures in the appended plate, in which
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la fig.1 est une vue schématique d'un dispositif de l'invention destiné à la sélection et au prélèvement de spermatozoïdes mobiles d'un sperme, les fig.2, fig.3 et fig.4 sont des schémas représentant un dispositif de l'invention destiné à la fécondation in vitro en micro- volume, et illustrant successivement le mode de fonctionnement de ce dispositif. Fig.1 is a schematic view of a device of the invention for the selection and removal of mobile sperm from a sperm, Fig.2, Fig.3 and Fig.4 are diagrams showing a device the invention intended for in vitro fertilization in micro-volume, and successively illustrating the mode of operation of this device.
Sur la fig.1, la technique connue de sélection et de prélèvement de spermatozoïdes, tels que 2, d'un sperme 4, par la superposition au sperme 4 d'un liquide dit surnageant 6, contenus dans une cuve 8, est perfectionnée par la mise en oeuvre de la méthode de l'invention. Le dispositif de l'invention illustré comprend a) la cuve 8 de réception du sperme 4 et du surnageant 6, b) un conduit 10, dont les débouchés 12 et 14 sont disposés à distance l'un de l'autre dans le volume de la cuve 8 de manière à être plongés dans le surnageant 6 qu'elle contient. On notera qu'une zone 16 au moins du dit conduit 10 est élastiquement déformable, c) un premier filtre 18, interposé entre les débouchés 12 et 14 du conduit 10 et placé sur le circuit (flèches 1) de circulation du liquide 6 contenant les spermatozoïdes mobiles 2 en aval proche d'une réserve 20. Cette réserve comporte une trappe 22 d'accès aux spermatozoïdes mobiles 2 retenus par le premier filtre 18 en vue de leur prélèvement, et d) une pompe 24 disposée en correspondance avec la zone 16 élastiquement déformable du conduit 10. In Fig. 1, the known technique for selecting and removing sperm, such as 2, from a sperm 4, by superimposing on the sperm 4 a so-called supernatant liquid 6, contained in a tank 8, is improved by the implementation of the method of the invention. The device of the invention illustrated comprises a) the tank 8 for receiving the sperm 4 and the supernatant 6, b) a conduit 10, the outlets 12 and 14 of which are arranged at a distance from each other in the volume of the tank 8 so as to be immersed in the supernatant 6 which it contains. It will be noted that at least one zone 16 of said conduit 10 is elastically deformable, c) a first filter 18, interposed between the outlets 12 and 14 of conduit 10 and placed on the circuit (arrows 1) for circulation of the liquid 6 containing the mobile sperm 2 downstream close to a reserve 20. This reserve includes a hatch 22 for access to mobile spermatozoa 2 retained by the first filter 18 for their removal, and d) a pump 24 arranged in correspondence with zone 16 elastically deformable from the conduit 10.
La pompe 24 est mise en ceuvre sensiblement jusqu'à épuisement de l'entraînement des spermatozoïdes mobiles 2 vers la réserve 20. Une fois concentrés à l'intérieur de la réserve 20, les spermatozoïdes mobiles sont prélevés par l'utilisateur (flèche 3) à travers la trappe d'accès 22. On notera la présence accessoire d'un organe d'obturation 26 du conduit 10 manoeuvrable par l'utilisateur à la fermeture pour confiner les spermatozoïdes mobiles 2 à l'intérieur de la réserve 20, en cas d'arrêt, éventuellement nécessaire, de la pompe 24 pour prélever les spermatozoïdes mobiles 2. The pump 24 is operated substantially until the entrainment of the drive of the mobile spermatozoa 2 towards the reserve 20. Once concentrated inside the reserve 20, the mobile spermatozoa are removed by the user (arrow 3) through the access hatch 22. Note the accessory presence of a shutter member 26 of the conduit 10 operable by the user when closing to confine the mobile sperm 2 inside the reserve 20, in the event stopping, if necessary, of the pump 24 to collect the mobile sperm 2.
De préférence, le dispositif comporte en outre au moins un second filtre 28 placé sur le circuit en aval du premier filtre 18. Ce second filtre 28 est de mailles plus petites que celles du premier filtre 18, pour la rétention à l'intérieur d'une deuxième réserve 30 de corps indésirables éventuellement contenus dans le liquide 6, telles que bactéries, plus petits que les spermatozoïdes mobiles 2. Preferably, the device further comprises at least a second filter 28 placed on the circuit downstream from the first filter 18. This second filter 28 is of smaller mesh than those of the first filter 18, for retention inside a second reserve 30 of undesirable bodies possibly contained in the liquid 6, such as bacteria, smaller than the mobile spermatozoa 2.
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Le conduit comporte avantageusement un rétreint 32 et/ou 34 situé sur le circuit en aval de l'une quelconque au moins de la première 20 et de la deuxième 30 réserves, pour induire une accélération du flux du liquide vers le filtre 18 et/ou 28 y relatif. Ces dispositions sont telles que les spermatozoïdes mobiles et les dits corps indésirables soient retenus dans la réserve correspondante en empêchant, grâce à la dite accélération, un mouvement de retour inoportun de ceux-ci à l'encontre du courant. The duct advantageously comprises a constriction 32 and / or 34 located on the circuit downstream of any at least of the first 20 and of the second 30 reserves, to induce an acceleration of the flow of the liquid towards the filter 18 and / or 28 relating thereto. These provisions are such that the mobile spermatozoa and the said undesirable bodies are retained in the corresponding reserve by preventing, by virtue of the said acceleration, an inopportune return movement of the latter against the current.
On notera que le dispositif comprend de préférence des moyens de réglage de la position en hauteur des débouchés 12 et 14 du conduit 10 par rapport au fond de la cuve 8, tel que dispositif à crémaillère, ou dispositif 36 de serrage à coulissement dur du conduit 10, tel que sur l'exemple illustré. It will be noted that the device preferably comprises means for adjusting the height position of the outlets 12 and 14 of the conduit 10 relative to the bottom of the tank 8, such as rack and pinion device, or hard sliding clamping device 36 of the conduit. 10, as in the example illustrated.
On comprendra que les spermatozoïdes mobiles 2 prélevés au moyen du dispositif de l'invention peuvent être utilisés en vue de la fécondation d'un complexe cumulo-ovocytaire, quelles que soient les techniques utilisées pour cela. Sur les fig.2 à fig.4, un dispositif destiné à la fécondation in vitro, met en ceuvre la méthode de l'invention. Ce dispositif comprend a) un conduit 40 refermé en boucle sur lui-même. Ce conduit comporte au moins une trappe d'accès 42 ou 44 à son volume intérieur, pour l'introduction (flèche 5) dans le circuit de circulation d'un liquide 46 qu'il contient, @ du complexe cumulo ovocytaire 48 et des spermatozoïdes mobiles 2. Au moins une zone 50 du conduit 40 est élastiquement déformable, b) un filtre 52 placé sur le trajet du conduit 40 en aval proche d'une réserve 54, qui comporte une trappe 44 pour le prélèvement (flèche 7) de l'embryon 56 obtenu, et c) une pompe 58, disposée en correspondance avec la zone 50 élastiquement déformable du conduit 40. It will be understood that the mobile sperm 2 collected using the device of the invention can be used for the fertilization of a cumulo-oocyte complex, whatever the techniques used for this. In fig. 2 to fig. 4, a device intended for in vitro fertilization implements the method of the invention. This device comprises a) a conduit 40 closed in a loop on itself. This conduit comprises at least one access hatch 42 or 44 to its internal volume, for the introduction (arrow 5) into the circulation circuit of a liquid 46 which it contains, @ of the cumulo-oocyte complex 48 and of the spermatozoa mobile 2. At least one zone 50 of the conduit 40 is elastically deformable, b) a filter 52 placed on the path of the conduit 40 downstream close to a reserve 54, which comprises a hatch 44 for the removal (arrow 7) of the 'embryo 56 obtained, and c) a pump 58, arranged in correspondence with the elastically deformable zone 50 of the conduit 40.
On comprendra que la trappe d'accès au volume intérieur du conduit est, selon une première destination, prévue pour l'introduction dans le circuit du complexe cumulo-ovocytaire et des spermatozoïdes. On relèvera toutefois que selon une deuxième destination, la dite trappe peut sans sortir du cadre de l'invention, être confondue avec celle dont est pourvue la réserve pour le prélèvement de l'embryon. It will be understood that the access hatch to the interior volume of the duct is, according to a first destination, provided for the introduction into the circuit of the cumulo-oocyte complex and of the spermatozoa. It will be noted, however, that according to a second destination, the said hatch may, without departing from the scope of the invention, be confused with that which is provided with the reserve for the removal of the embryo.
En se reportant plus particulièrement à la fig.3, et selon la forme préférée de réalisation du dispositif illustré, celui-ci comporte en outre des moyens manoeuvrable 60 d'obturation du conduit 40, placé sur le circuit en amont de la réserve 54. Ces moyens 60 sont prévus pour retenir les Referring more particularly to FIG. 3, and according to the preferred embodiment of the illustrated device, the latter also comprises maneuverable means 60 for closing off the conduit 40, placed on the circuit upstream of the reserve 54. These means 60 are provided to retain the
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spermatozoïdes mobiles 2 contenus dans la réserve 54 lorsque le flux de circulation du liquide (flèches 9) à l'intérieur du circuit est interrompu par la mise à l'arrêt de la pompe 58. En effet, selon le mode de fonctionnement préféré du dispositif de l'invention illustré, la pompe 58 est mise en eouvre dans une première étape jusqu'à épuisement des spermatozoïdes mobiles contenus dans le circuit, vers la réserve 54 (fig.2). On comprendra que le complexe cumulo-ovocytaire 48, préalablement introduit dans le circuit, est lui-aussi entraîné vers la réserve 54 sous !'effet de circulation du liquide 46. Puis, dans une seconde étape les moyens 60 d'obturation sont manoeuvrés par l'utilisateur pour confiner les spermatozoïdes mobiles 2 et le complexe cumulo ovocytaire 48 dans la réserve 54, et la pompe 58 est mise à l'arrêt (fig.3) pour ne pas perturbuer le processus naturel de fécondation de l'ovocyte. On notera que les moyens d'obturation 60 sont par exemple constitués d'un clapet ou encore par des moyens de pincement du conduit. mobile sperm 2 contained in the reserve 54 when the flow of liquid circulation (arrows 9) inside the circuit is interrupted by stopping the pump 58. In fact, according to the preferred operating mode of the device of the invention illustrated, the pump 58 is operated in a first step until the mobile spermatozoa contained in the circuit are exhausted, towards the reserve 54 (FIG. 2). It will be understood that the cumulo-oocyte complex 48, previously introduced into the circuit, is also driven towards the reserve 54 under the effect of circulation of the liquid 46. Then, in a second step, the means 60 for obturation are operated by the user to confine the mobile spermatozoa 2 and the cumulo-oocyte complex 48 in the reserve 54, and the pump 58 is stopped (FIG. 3) so as not to disturb the natural process of fertilization of the oocyte. Note that the shutter means 60 are for example constituted by a valve or by means of pinching the conduit.
On comprendra aussi que les moyens d'obturation 60 sont de préférence perméables pour autoriser le passage du liquide 46 dans la réserve 54 après mise à l'arrêt de la pompe 58, en vue d'éviter une déshydratation de l'embryon 56. En se reportant plus particulièrement à la fig.4, le dispositif, de préférence, comprend en outre un canal ,62 obturable 64 de dérivation. Ce canal 62 relie la réserve 54 au volume intérieur du conduit 40 en aval de cette dernière 54, pour l'évacuation hors de la réserve 54 vers le conduit 40 des cellules de granuloza et des spermatozoïdes morts, tels que 66, après fécondation de l'ovocyte, par une mise en marche de la pompe 58. It will also be understood that the closure means 60 are preferably permeable to allow the passage of the liquid 46 into the reserve 54 after switching off the pump 58, in order to avoid dehydration of the embryo 56. In referring more particularly to fig.4, the device preferably further comprises a channel 62, closable 64 bypass. This channel 62 connects the reserve 54 to the interior volume of the conduit 40 downstream from the latter 54, for the evacuation from the reserve 54 towards the conduit 40 of granuloza cells and dead spermatozoa, such as 66, after fertilization of the oocyte, by starting the pump 58.
Cette troisième étape de mise en oeuvre du dispositif de l'invention intervenient notamment entre environ 12 heures à 24 heures après le début de la précédente. This third step of implementing the device of the invention takes place in particular between approximately 12 hours to 24 hours after the start of the previous one.
D'une manière générale, on relèvera que selon des exemples connus de réalisation des différentes trappes 22, 42, 44 équipant les dispositifs de l'invention, celles-ci sont par exemple chacune constituées par une membrane perforable par une aiguille, par une trappe à clapet ou par un dispositif indifféremment analogue. De même, on relèvera aussi que les dits conduits 10 et 40 de l'un et/ou l'autre des dispositifs est le cas échéant composé de plusieurs tronçons de conduit entre lesquels sont interposées les réserves, 20,30 et/ou 54, l'un au moins des tronçons de conduit comportant la dite zone élastiquement déformable correspondante 16 et/ou 50. In general, it will be noted that according to known examples of embodiment of the various hatches 22, 42, 44 equipping the devices of the invention, these are for example each constituted by a membrane perforable by a needle, by a hatch with valve or by an indifferently similar device. Likewise, it will also be noted that the said conduits 10 and 40 of one and / or the other of the devices is if necessary composed of several sections of conduit between which the reserves, 20, 30 and / or 54 are interposed, at least one of the pipe sections comprising said corresponding elastically deformable zone 16 and / or 50.
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On notera que les moyens décrits, telle qu'une pompe à doigt ou à galet, pour provoquer le flux du liquide à l'intérieur des conduits ne sont donnés qu'à titre d'exemple et ne sont pas limitatifs quant à la portée de l'invention. It will be noted that the means described, such as a finger or roller pump, for causing the flow of the liquid inside the conduits are given only by way of example and are not limiting as to the scope of the invention.
Selon une forme préférée de réalisation, le conduit 40 et la réserve 54 sont contenus dans un réceptacle 68 globalement plan, qui composent un ensemble transparent, de manière à autoriser l'observation de l'embryon à son travers. La trappe au moins 42,44 est dans ce cas avantageusement disposée transversalement au dit plan, pour autoriser un accès à l'intérieur du conduit 40 et/ou de la réserve 54 par le praticien ayant placé le réceptacle 68 en observation au microsocope. According to a preferred embodiment, the conduit 40 and the reserve 54 are contained in a receptacle 68 which is generally planar, which make up a transparent assembly, so as to allow observation of the embryo through it. The hatch at least 42.44 is in this case advantageously arranged transversely to said plane, to allow access to the interior of the conduit 40 and / or of the reserve 54 by the practitioner having placed the receptacle 68 under observation with a microsocope.
On notera enfin qu'à partir d'une même pompe, plusieurs dispositifs peuvent être placés côte à côte pour concentrer, dans des réserves respectives des spermatozoïdes mobiles issus de divers prélèvement. Finally, it should be noted that, from the same pump, several devices can be placed side by side to concentrate, in respective reserves, mobile sperm from various samples.
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