FR2806906A1 - Composition for use on the skin surrounding the eyes and mouth as an anti-aging, anti- wrinkle and anti-bagging formulation, comprises as an active agent an extract of brown algae - Google Patents
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Abstract
Description
COMPOSITION COSMETIQUE <B>COMPRENANT UN</B> EXTRAIT <B>D'ALGUE BRUNE AGISSANT SUR LA</B> QUANTITE <B>DE GAG</B> La présente invention concerne une composition cosmétique pour le soin de la peau, plus particulièrement une composition tout spécialement adaptée au contour des yeux et des lèvres. COSMETIC COMPOSITION <B> COMPRISING A </ B> EXTRACT <B> OF BROWN ALGAE ACTING ON THE </ B> QUANTITY <B> OF GAG </ B> The present invention relates to a cosmetic composition for the care of the skin, more particularly a composition especially adapted to the contour of the eyes and lips.
Les rides du contour des yeux et des lèvres, d'abord sous forme de rides d'expression, évoluent au cours du temps pour être de plus en plus prononcées. Il s'y ajoute des rides liées au vieillissement naturel dont l'apparition est accélérée par des facteurs extérieurs type stress, fatigue, UV, pollution<B>...</B> The wrinkles around the eyes and lips, initially in the form of expression lines, evolve over time to become more pronounced. Added to it are wrinkles related to natural aging whose appearance is accelerated by external factors like stress, fatigue, UV, pollution <B> ... </ B>
Le contour des yeux et les paupières constituent une zone particulièrement délicate et vulnérable, aux tissus très fins et constamment en mouvement. Le système circulatoire et lymphatique de cette zone se révèle paresseux, ce qui explique l'origine des cernes, des poches et des gonflements qui s'amplifient au fil des années. La formation des cernes est due<B>à</B> un ralentissement de la micro-circulation sanguine conduisant <B>à</B> une accumulation de pigments sanguins dans le tissu conjonctif. De plus, le système lymphatique, ralenti pendant la nuit, entraîne un gonflement des paupières. Ce gonflement, associé au relâchement des tissus lié<B>à</B> l'âge, provoque la formation des poches. The eye area and the eyelids constitute a particularly delicate and vulnerable zone, with very fine and constantly moving tissues. The circulatory and lymphatic system in this area is lazy, which explains the origin of dark circles, puffiness and swelling that are increasing over the years. The formation of dark circles is due to a slowing of the micro-circulation leading to accumulation of blood pigments in the connective tissue. In addition, the lymphatic system, slowed down at night, causes swelling of the eyelids. This swelling, associated with age-related tissue loosening, causes the formation of puffiness.
Les contours des yeux et des lèvres sont donc souvent le reflet de l'état de fatigue et laissent apparaître les premiers signes du vieillissement. Le but de la présente invention est précisément d'offrir une composition cosmétique pour le soin de la peau, plus particulièrement pour le contour des yeux et des lèvres, agissant sur l'hydratation des couches superficielles de l'épiderme. La composition de l'invention constitue donc une composition anti-âge, anti-rides, anti-cernes et anti- poches remarquable. The contours of the eyes and lips are often a reflection of the state of fatigue and reveal the first signs of aging. The object of the present invention is precisely to provide a cosmetic composition for the care of the skin, more particularly for the contour of the eyes and lips, acting on the hydration of the superficial layers of the epidermis. The composition of the invention is therefore an anti-aging composition, anti-wrinkle, concealer and anti-pockets remarkable.
Afin de mettre au point une telle composition, la Demanderesse s'est intéressée plus particulièrement aux glycosaminoglycanes <B>(GAG)</B> qui,<B>sous</B> la forme de protéoglycanes participent<B>à</B> la constitution du tissu du soutien dermique. Les protéoglycanes sont constitués d'une protéine associée par liaison covalente <B>à</B> une fraction polysaccharidique (glycosaminoglycane) représentant la plus grande partie de la molécule. Les<B>GAG</B> comprennent l'acide hyaluronique, qui est formé d'une longue chaîne formée d'unités dissacharidiques, et les<B>GAG</B> sulfatés, qui forment un groupe très varié selon leur poids moléculaire, le type de sucres et de groupements sulfate qui les composent (chondroïtine sulfate, dermatane sulfate, kératane sulfate et héparane sulfate)<B>.</B> Les protéoglycanes retiennent la majeure partie de l'eau de la peau et font ainsi office de réservoir hydrique, ce qui permet de maintenir la structure et les propriétés mécaniques de la peau et assure également la diffusion des métabolites et autres éléments nécessaires<B>à</B> la vie cellulaire. Cependant, le contenu du derme en<B>GAG</B> s'appauvrit avec l'âge, ce qui provoque l'amincissement et le dessèchement de l'épiderme et l'apparition des rides. Cet appauvrissement en<B>GAG dû à</B> la diminution de leur synthèse est particulièrement important au-delà de<B>50</B> ans. In order to develop such a composition, the Applicant has been particularly interested in glycosaminoglycans <B> (GAG) </ B> which, <B> in the form of proteoglycans participate <B> in </ B> the constitution of the dermal support tissue. The proteoglycans consist of a covalently linked protein <B> to </ B> a polysaccharide fraction (glycosaminoglycan) representing most of the molecule. <B> GAG </ B> include hyaluronic acid, which consists of a long chain of dissachable units, and sulfated <B> GAGs, which form a very diverse group according to their weight. molecular, the type of sugars and sulfate groups that compose them (chondroitin sulfate, dermatan sulfate, keratan sulfate and heparan sulfate). <B>. </ B> Proteoglycans retain most of the water of the skin and thus water reservoir, which helps maintain the structure and mechanical properties of the skin and also ensures the diffusion of metabolites and other elements necessary <B> to </ b> cell life. However, the content of the derm in <B> GAG </ B> becomes impoverished with age, which causes the thinning and drying of the epidermis and the appearance of wrinkles. This depletion in <B> GAG due to </ B> the decrease of their synthesis is particularly important beyond <B> 50 </ B> years.
On sait également que les acides gras essentiels entrant notamment dans la constitution des phospholipides membranaires sont indispensables<B>à</B> l'homme, et qu'une déficience en acides gras essentiels cutané se traduit par un épaississement de l'épiderme, une couche basale irrégulière et hyperplasique, une couche cornée épaisse et dense. De plus, une déficience en acide linoléïque entraîne un dérèglement de la fonction barrière de l'épiderme, qui se manifeste par une large augmentation de la perte d'eau<B>à</B> travers la couche cornée. It is also known that the essential fatty acids included in the constitution of membrane phospholipids are indispensable <B> to </ B> man, and that a deficiency of essential fatty acids dermal results in a thickening of the epidermis, an irregular and hyperplastic basal layer, a thick and dense horny layer. In addition, a deficiency of linoleic acid causes a disruption of the barrier function of the epidermis, which is manifested by a large increase in the loss of water <B> to </ B> through the stratum corneum.
La Demanderesse a donc maintenant mis au point une composition pour le soin du visage, tout particulièrement pour le contour des yeux et des lèvres, constituant une composition anti-âge et anti-rides, assurant une amélioration de la tonicité, de l'élasticité et de l'hydratation de la peau avec en plus, plus particulièrement pour le contour des yeux, une action au niveau des poches et des cernes. The Applicant has now developed a composition for the care of the face, particularly for the eye and lip contour, constituting an anti-aging and anti-wrinkle composition, ensuring an improvement in tone, elasticity and hydration of the skin with more, especially for the eye area, an action on the pockets and dark circles.
Une composition cosmétique pour le contour des yeux et des lèvres selon l'invention est caractérisée en ce qu'elle comprend au moins un extrait d'algue brune<B>à</B> titre d'agent actif agissant sur la quantité de<B>GAG,</B> associé dans ladite composition avec au moins un et de préférence deux agents actifs choisis parmi<B>:</B> <B>-</B> Un extrait de céréales et<B>plus</B> particulièrement de<B>blé,</B> riche en une fraction protéique de haut poids moléculaire. Cet extrait agit sur le micro- relief en lissant la surface de la peau et présentant un effet tenseur caractérisé par une diminution du nombre et de la profondeur des rides. Cet extrait confère<B>à</B> la composition de l'invention des propriétés lui permettant de se fixer et de s'étaler<B>à</B> la surface de la peau pour<B>y</B> former un film lisse, élastique, cohésif et continu. A cosmetic composition for the contour of the eyes and lips according to the invention is characterized in that it comprises at least one extract of brown alga <B> to </ B> as active agent acting on the amount of < B> GAG, </ B> associated in said composition with at least one and preferably two active agents selected from <B>: </ B> <B> - </ B> An extract of cereals and <B> more < Particularly <B> wheat, </ B> rich in a protein fraction of high molecular weight. This extract acts on the micro-relief by smoothing the surface of the skin and presenting a tightening effect characterized by a decrease in the number and depth of wrinkles. This extract confers <B> to </ B> the composition of the invention with properties allowing it to bind and spread <B> to </ B> the surface of the skin for <B> y </ B> > to form a smooth, elastic, cohesive and continuous film.
<B>-</B> Un agent actif utile pour le maintien de l'hydratation et de la fonction barrière de la peau du contour des yeux et des lèvres.<B>A</B> titre d'exemple d'un tel agent actif, l'invention envisage tout particulièrement le beurre de karité connu pour ses propriétés apaisantes, régénératrices et protectrices grâce<B>à</B> sa teneur élevée en agents composants insaponifiables. Les insaponifiables sont en effet des agents particulièrement efficaces pour lutter contre les atteintes de la peau liées au vieillissement. Ils entraînent très rapidement une augmentation de l'élasticité de la peau et une modification de la micro- architecture de la couche cornée inverse de celle liée au processus de vieillissement. <B> - </ B> An active agent useful for maintaining the hydration and barrier function of the skin around the eyes and lips. <B> A </ B> as an example of a As an active agent, the invention particularly envisages shea butter known for its soothing, regenerative and protective properties by virtue of its high content of unsaponifiable component agents. Unsaponifiables are indeed particularly effective agents to fight skin disorders associated with aging. They very quickly lead to an increase in the elasticity of the skin and a change in micro-architecture of the stratum corneum inverse to that related to the aging process.
L'invention s'intéresse tout particulièrement<B>à</B> un extrait d'algue brune pour sa richesse en glucides et en calcium. En effet, ces algues brunes comme Padina pavonica comportent une membrane protectrice formée d'une matrice osidique qui rappelle la structure, la composition et la fonction des<B>GAG</B> de la peau. Cet extrait permet, comme rapporté dans la partie expérimentale ci-après, d'augmenter la quantité de<B>GAG.</B> L'invention concerne donc aussi l'utilisation d'un extrait d'algue brune pour la préparation d'une composition cosmétique pour le contour des yeux et des lèvres, et tout particulièrement l'utilisation d'un tel extrait dans une composition anti- âge, anti-rides, anti-cernes ou anti-poches. La composition de l'invention est donc particulièrement utile pour lutter contre le vieillissement de la peau tout particulièrement autour des yeux et des lèvres et pour lutter contre les rides, les cernes et les poches. The invention is particularly interested in <B> to </ B> a brown algae extract for its richness in carbohydrates and calcium. In fact, these brown algae such as Padina pavonica contain a protective membrane formed of an osidic matrix that is reminiscent of the structure, composition and function of the <B> GAG </ B> of the skin. This extract makes it possible, as reported in the experimental section below, to increase the amount of <B> GAG. </ B> The invention therefore also relates to the use of a brown algae extract for the preparation of a cosmetic composition for the contour of the eyes and lips, and particularly the use of such an extract in an anti-aging, anti-wrinkle, concealer or anti-puffiness composition. The composition of the invention is therefore particularly useful for combating aging of the skin especially around the eyes and lips and for fighting against wrinkles, dark circles and puffiness.
<B>A</B> titre d'exemple, une composition selon l'invention comprend environ<B>:</B> <B>-</B> de<B>0,5 à 10%</B> et de préférence de l'ordre de<B>1</B> <B>à 5%</B> en poids d'un extrait d'algue brune<B>;</B> <B>-</B> de<B>0,5 à 10%</B> et de préférence<B>1 à 5%</B> en poids d'extrait de<B>blé</B> riche en une fraction protéique de haut poids moléculaire<B>;</B> <B>-</B> de 2<B>à 15%</B> et de préférence de l'ordre de 4<B>à</B> <B>10%</B> en poids de beurre de karité. <B> A </ B> As an example, a composition according to the invention comprises about <B>: <B> - </ B> of <B> 0.5 to 10% </ B> > and preferably of the order of <B> 1 </ B> <B> at 5% </ B> by weight of a brown alga extract <B>; </ B> <B> - < <B> 0.5 to 10% </ B> and preferably <B> 1 to 5% </ B> by weight of <B> wheat </ B> extract rich in a protein fraction high molecular weight <B> <B> - </ B> of 2 <B> to 15% </ B> and preferably of the order of 4 <B> to </ B> < B> 10% </ B> by weight of shea butter.
Les compositions cosmétiques selon l'invention peuvent comprendre également un ou plusieurs des extraits suivants <B>: -</B> un extrait d'huile de sésame dont la richesse en sésamine, sésamoline et acide linoléïque (47<B>%</B> de la composition en acides gras de l'extrait) lui confère résistance à l'oxydation, pouvoir antioxydant et antiradicalaire, effet régénérateur et hydratant<B>;</B> <B>-</B> un ou plusieurs extraits de matricaire (Chamomilla recucita) et/ou de réglisse (Glycyrrhiza glabra), riches en flavonoïdes, qui contribuent<B>à</B> prévenir l'apparition des cernes et des poches<B>;</B> <B>-</B> de l'extrait de carotte qui participe au maintien de l'hydratation de la peau et améliore son éclat<B>;</B> <B>-</B> une ou plusieurs vitamines telles que l'acétate de vitamine<B>E</B> et le D-panthénol (ou provitamine B5) qui améliorent la capacité de la peau<B>à</B> retenir l'eau des couches superficielles de l'épiderme, la vitamine<B>E</B> ayant aussi un effet sur l'amélioration de l'élasticité de la peau. The cosmetic compositions according to the invention may also comprise one or more of the following extracts: a sesame oil extract with a high content of sesamin, sesamolin and linoleic acid (47% <B>% </ B> of the fatty acid composition of the extract) gives it resistance to oxidation, antioxidant and antiradical, regenerative effect and moisturizing <B> <B> - </ B> one or more extracts chamomile (Chamomilla recucita) and / or licorice (Glycyrrhiza glabra), rich in flavonoids, which help <B> to </ B> prevent the appearance of dark circles and puffiness <B>; </ B> <B> - </ B> of the carrot extract that helps maintain the skin's moisture and improves its radiance <B>; </ B> <B> - </ B> one or more vitamins such as the Vitamin Acetate <B> E </ B> and D-panthenol (or provitamin B5) that improve the skin's ability to <B> retain water from the superficial layers of the epidermis, vitamin <B> E </ B> also having an effect on improving the elasticity of the skin.
Enfin, les compositions de l'invention peuvent comprendre un ou plusieurs agents de formulation suivants<B>:</B> <B>-</B> un ou plusieurs agents humectants et/ou émolliants, comme la glycérine, le sorbitol, le propylène glycol, l'alcool oléique, le dicaprylate/dicaprate de propylène glycol, le palmitate d'isopropyle, <B>ou</B> l'isoparaffine C13-14 <B>;</B> <B>-</B> un ou plusieurs tensioactifs comme le TEA- cétyl phosphate, le laureth-7, ou le ceteareth-33 <B>;</B> <B>-</B> un ou plusieurs agents de consistance, comme par exemple l'alcool stéarylique, l'alcool cétéarylique ou le monostéarate de glycérol<B>;</B> <B>-</B> un ou plusieurs agents conservateurs, tels que le phénoxyéthanol, le parahydroxybenzoate de méthyle sodé, l'acide sorbique, le parahydroxybenzoate de méthyle, le parahydroxybenzoate de butyle, le parahydroxybenzoate d'éthyle ou le parahydroxybenzoate de propyle; <B>-</B> un ou plusieurs agents solubilisants, comme par exemple, l'octoxynol-13 et l'huile de ricin hydrogénée PEG-40 <B>;</B> <B>-</B> un ou plusieurs agents complexants comme l'EDTA tétrasodique <B>;</B> <B>-</B> un ou plusieurs agents gélifiants, tels que le carbomer, le polyacrylamide <B>;</B> <B>-</B> un ou plusieurs agents neutralisants. Finally, the compositions of the invention may comprise one or more of the following formulating agents: one or more humectants and / or emolliants, such as glycerol, sorbitol, propylene glycol, oleic alcohol, dicaprylate / propylene glycol dicaprate, isopropyl palmitate, <B> or </ B> isoparaffin C13-14 <B>; </ B> <B> - < One or more surfactants such as TEA-acetyl phosphate, laureth-7, or ceteareth-33; one or more consistency agents, for example stearyl alcohol, cetearyl alcohol or glycerol monostearate; one or more preservatives, such as phenoxyethanol, sodium parahydroxybenzoate, acid, and the like; sorbic acid, methyl parahydroxybenzoate, butyl parahydroxybenzoate, ethyl parahydroxybenzoate or propyl parahydroxybenzoate; <B> - </ B> one or more solubilizing agents, such as, for example, octoxynol-13 and hydrogenated castor oil PEG-40 <B>; </ b> <b> - </ b> or several complexing agents such as tetrasodium EDTA, one or more gelling agents, such as carbomer, polyacrylamide, and the like; </ B> one or more neutralizing agents.
Les compositions de l'invention peuvent se présenter sous toute forme connue de l'homme du métier dans le domaine de la cosmétique, comme par exemple, une crème, un lait, un gel crème, sans aucune restriction galénique particulière autre que celles pour l'application sur la peau liées<B>à</B> la spécificité de la peau au niveau du contour des yeux et des lèvres. The compositions of the invention may be in any form known to those skilled in the field of cosmetics, such as, for example, a cream, a milk or a cream gel, without any particular galenic restriction other than those for the cosmetic industry. application on the skin bound to the specificity of the skin in the contour of the eyes and lips.
D'autres avantages et caractéristiques de l'invention apparaîtront<B>à</B> la lecture des exemples qui suivent concernant la préparation d'une composition cosmétique anti-âge, anti-rides, anti-cernes, anti-poches pour le contour des yeux et des lèvres et son efficacité. Other advantages and characteristics of the invention will become apparent when reading the following examples relating to the preparation of an anti-aging, anti-wrinkle, anti-dark circles, anti-puffiness cosmetic composition for the eye and lip contour and its effectiveness.
<U>Exemple<B>1 :</B> Composition cosmétique pour le</U> <U>contour des</U> yeu <U>et des lèvres sous forme d'une crème</U> <U>(exprimé en<B>%</B> du poids total de la composition),</U>
<U> Example <B> 1: </ B> Cosmetic composition for the </ U><U> outline of </ U> yeu <U> and lips in the form of a cream </ U><U> (expressed as <B>% </ B> of the total weight of the composition), </ U>
<B>-</B> <SEP> Eau <SEP> <B>30 <SEP> à <SEP> 50</B>
<tb> <B>-</B> <SEP> Beurre <SEP> de <SEP> karité <SEP> (Butyrospermum <SEP> parkii) <SEP> 4 <SEP> <B>à <SEP> 10</B>
<tb> <B>-</B> <SEP> Eau <SEP> aromatisée <SEP> (rose, <SEP> fleur <SEP> d'oranger) <SEP> <B>5 <SEP> à</B> <SEP> 20
<tb> <B>-</B> <SEP> Extrait <SEP> d'algue <SEP> brune <SEP> (Padina <SEP> pavonica) <SEP> <B>1 <SEP> à <SEP> 5</B>
<tb> <B>-</B> <SEP> Extrait <SEP> de <SEP> <B>blé</B> <SEP> (Triticum. <SEP> vulgarIê) <SEP> <B>1 <SEP> à <SEP> 5</B>
<tb> <B>-</B> <SEP> extraits <SEP> de <SEP> matricaire <SEP> et/ou <SEP> de <SEP> réglisse <SEP> <B>1 <SEP> à <SEP> 5</B>
<tb> <B>-</B> <SEP> Extrait <SEP> de <SEP> carotte <SEP> (Daucus <SEP> carota) <SEP> <B>0,5 <SEP> à <SEP> 5</B>
<tb> <B>-</B> <SEP> Vitamine <SEP> (Acétate <SEP> de <SEP> vitamine <SEP> <B>E) <SEP> 0,5 <SEP> à <SEP> 5</B>
<tb> <B>-</B> <SEP> Extrait <SEP> d'huile <SEP> de <SEP> sésame <SEP> (Sesamum <SEP> indicum) <SEP> <B>0,5 <SEP> à <SEP> 5</B>
<tb> <B>-</B> <SEP> agents <SEP> humectants <SEP> et/ou <SEP> émolliants <SEP> <B>5 <SEP> à <SEP> 50</B>
<tb> <B>-</B> <SEP> tensioactifs <SEP> <B>0,5 <SEP> à <SEP> 10</B>
<tb> <B>-</B> <SEP> agent <SEP> de <SEP> consistance <SEP> <B>0,5 <SEP> à <SEP> 10</B>
<tb> <B>-</B> <SEP> agents <SEP> conservateurs <SEP> <B>0,1 <SEP> à <SEP> 5</B>
<B> - <SEP> Water <SEP><B> 30 <SEP> to <SEP> 50 </ B>
<tb><B> - <SEP> Butter <SEP> of <SEP> Shea <SEP> (Butyrospermum <SEP> parkii) <SEP> 4 <SEP><B> to <SEP> 10 </ B>
<tb><B> - <SEP> Water <SEP> flavored <SEP> (pink, <SEP> orange flower <SEP>) <SEP><B> 5 <SEP> to </ B ><SEP> 20
<tb><B> - <SEP> SEP <SEP> Extract <SEP> Brown <SEP> (Padina <SEP> Pavonica) <SEP><B> 1 <SEP> to <SEP> 5 </ B>
<tb><B> - <SEP><SEP> Extract <SEP><B> Wheat <SEP> (Triticum. <SEP> Vulgaria) <SEP><B> 1 <SEP > to <SEP> 5 </ B>
<tb><B> - <SEP><SEP> extracts of <SEP> masterbite <SEP> and / or <SEP> of <SEP> licorice <SEP><B> 1 <SEP> to <SEP > 5 </ B>
<tb><B> - <SEP><SEP> Extract <SEP> Carrot <SEP> (Daucus <SEP> carota) <SEP><B> 0.5 <SEP> to <SEP> 5 </ B>
<tb><B> - <SEP> Vitamin <SEP> (Acetate <SEP> of <SEP> Vitamin <SEP><B> E) <SEP> 0.5 <SEP> to <SEP> 5 </ B>
<tb><B> - <SEP><SEP> Oil Extract <SEP> of <SEP> Sesame <SEP> (Sesamum <SEP> Indicum) <SEP><B> 0.5 <SEP > to <SEP> 5 </ B>
<tb><B> - <SEP><SEP> humectants <SEP> and / or <SEP> emollient agents <SEP><B> 5 <SEP> to <SEP> 50 </ B>
<tb><B> - <SEP> Surfactants <SEP><B> 0.5 <SEP> to <SEP> 10 </ B>
<tb><B> - <SEP> agent <SEP> of <SEP> consistency <SEP><B> 0.5 <SEP> to <SEP> 10 </ B>
<tb><B> - <SEP> Preservatives <SEP> Preservatives <SEP><B> 0.1 <SEP> to <SEP> 5 </ B>
<B>-</B> <SEP> agents <SEP> solubilisants <SEP> <B>0,05 <SEP> à <SEP> 0,5</B>
<tb> <B>-</B> <SEP> agents <SEP> complexants <SEP> <B>0,05 <SEP> à <SEP> 0,5</B>
<tb> <B>-</B> <SEP> agents <SEP> gélifiants <SEP> <B>0,1 <SEP> à <SEP> 5</B>
<tb> <B>-</B> <SEP> agents <SEP> neutralisants <SEP> <B>0,1 <SEP> à <SEP> 1</B> <U>Exemple 2<B>:</B></U> Etude <U>de l'effet de la composition</U> <U>de l'exemple<B>1</B> sur la synthèse des<B>GAG.</B></U> <B> - <SEP><SEP> solubilizing agents <SEP><B> 0.05 <SEP> to <SEP> 0.5 </ B>
<tb><B> - <SEP><SEP> complexing agents <SEP><B> 0.05 <SEP> to <SEP> 0.5 </ B>
<tb><B> - <SEP> Agents <SEP> Gelling Agents <SEP><B> 0.1 <SEP> to <SEP> 5 </ B>
<tb><B> - <SEP><SEP> neutralizing agents <SEP><B> 0.1 <SEP> to <SEP> 1 </ B><U> Example 2 <B>: < / B></U><U> study of the effect of the composition </ U><U> of the example <B> 1 </ B> on the synthesis of <B> GAG. </ B></U>
La Demanderesse a évalué<I>in vitro</I> et par la méthode BLYSCAN les effets de deux crèmes correspondant<B>à</B> la composition de l'exemple<B>1</B> avec ou sans extrait d'algue brune, appelées respectivement formules<B>A</B> et B sur la synthèse des<B>GAG</B> par des cellules de peau humaine en présence d'un agent délétère. Le test in vitro décrit ci- après a été réalisé afin de mesurer quantitativement le pourcentage de variation de la synthèse des<B>GAG</B> induit par l'action de chacune des crèmes. L'étude a été conduite en conformité avec le protocole expérimental suivant. The Applicant has evaluated <I> in vitro </ I> and by the method BLYSCAN the effects of two creams corresponding <B> to </ B> the composition of the example <B> 1 </ B> with or without extract of brown algae, respectively called formulas <B> A </ B> and B on the synthesis of <B> GAG </ B> by human skin cells in the presence of a deleterious agent. The in vitro test described below was carried out in order to quantitatively measure the percentage of variation in the synthesis of <B> GAG </ B> induced by the action of each of the creams. The study was conducted in accordance with the following experimental protocol.
<B>1)</B><U>Protocole expérimental.</U> <B> 1) </ B> <U> Experimental Protocol. </ U>
<B>-</B><U>Préparation des cultures cellulaires.</U> <B> - </ B> <U> Preparation of cell cultures. </ U>
Les matériels biologiques utilisés dans cette expérimentation sont des cultures de fibroblastes provenant de prélèvements de peau humaine saine. The biological materials used in this experiment are fibroblast cultures derived from samples of healthy human skin.
Une fois isolées de leur tissu d'origine, les cellules sont maintenues en<B> </B> culture primaire<B> </B> dans un milieu nutritif supplémenté en antibiotiques et contenant <B>10%</B> de sérum. Les cellules se multiplient jusqu'à ce qu'elles soient<B>à</B> confluence, c'est-à-dire formant un tapis cellulaire bien dense. Once isolated from their original tissue, the cells are maintained in <B> </ B> primary culture <B> </ B> in a nutrient medium supplemented with antibiotics and containing <B> 10% </ B> of serum. The cells multiply until they are <B> at confluence, that is, they form a dense cell layer.
Arrivés<B>à</B> confluence, les fibroblastes sont alors mis en suspension<B>à</B> l'aide de trypsine puis ensemencés<B>à</B> une densité beaucoup moins importante dans des puits contenant chacun<B>1</B> ml de milieu de culture. En effet, <B>à</B> l'aide d'un Coulter Counter, <B>300 000</B> cellules sont mises en culture par puits (plaque de 24 puits FALCON). At <confluence>, the fibroblasts are then suspended <B> using trypsin and then seeded <B> at </ B> at a much lower density in wells containing each <B> 1 </ B> ml of culture medium. Indeed, <B> to </ B> using a Coulter Counter, <B> 300,000 </ B> cells are cultured per well (FALCON 24-well plate).
<B>-</B><U>Préparation d'extraits</U> éthanoliques <U>des</U> <U>formules<B>A</B> et B.</U> <B> - </ B> <U> Preparation of ethanolic </ U> extracts <U> of <U> formulas <B> A </ B> and B. </ U>
Les cultures cellulaires ne peuvent être traitées directement avec les crèmes car ces dernières ne sont pas suffisamment miscibles au milieu de culture pour permettre une bonne mise en contact du ou des actif(s) avec les cellules. C'est pourquoi les deux formules sont tout d'abord identiquement traitées sur cartouche afin de séparer le ou les actifs des crèmes et d'obtenir des extraits sous forme de solutions. The cell cultures can not be treated directly with the creams because the latter are not sufficiently miscible with the culture medium to allow good contact of the asset (s) with the cells. This is why the two formulas are first treated identically on cartridge in order to separate the asset (s) from the creams and to obtain extracts in the form of solutions.
Le principe de la séparation actif(s)/crème est le suivant. Un échantillon de crème est déposé sur une cartouche ISOLUTE sur laquelle il va s'imprégner pendant<B>6</B> heures. La phase ainsi obtenue est alors éluée par du méthanol pur. L'extrait récupéré contenant le ou les actifs de la crème solubles dans le solvant organique, est alors séché et remis en suspension dans un volume défini d'éthanol absolu. C'est cet extrait éthanolique qui est utilisé pour traiter les cultures cellulaires. L'éthanol ajouté<B>à</B> faible dose dans les cultures cellulaires n'engendre aucune réaction particulière et est totalement miscible avec le milieu de culture. The principle of active separation (s) / cream is as follows. A sample of cream is deposited on an ISOLUTE cartridge on which it will impregnate for <B> 6 </ B> hours. The phase thus obtained is then eluted with pure methanol. The recovered extract containing the soluble cream active agent (s) in the organic solvent is then dried and resuspended in a defined volume of absolute ethanol. It is this ethanolic extract that is used to treat cell cultures. Ethanol added at low dose in cell cultures does not give rise to any particular reaction and is completely miscible with the culture medium.
<B>-</B><U>Traitement des cultures cellulaires.</U> <B> - </ B> <U> Treatment of cell cultures. </ U>
Après une nuit d'incubation et avant traitement, les cellules sont rincées<B>3</B> fois avec une solution tamponnée stérile PBS puis elles sont disposées dans un tampon tyrode stérile<B>(1</B> ml/puits). After a night of incubation and before treatment, the cells are rinsed <B> 3 </ B> times with sterile buffered PBS solution and then they are placed in a sterile tyrode buffer <B> (1 </ B> ml / well ).
Ainsi préparées, les cultures cellulaires sont alors traitées comme suit<B>:</B> <B>-</B> 2 puits de contrôle sans agent délétère ajouté au milieu. Thus prepared, the cell cultures are then treated as follows: <B> - <B> - <2> 2 control wells without deleterious agent added to the medium.
<B>-</B> 2 puits de contrôle avec un agent délétère ajouté au milieu. Le système délétère utilisé ici est le système enzymatique hypoxanthine-xanthine oxydase (HX-XO), générateur de radicaux libres (HX <B>: 10</B> gg/ml de tampon X0 <B>: 8</B> mU/ml de tampon). <B> - </ B> 2 control wells with a deleterious agent added in the middle. The deleterious system used here is the enzyme system hypoxanthine-xanthine oxidase (HX-XO), a generator of free radicals (HX <B>: 10 </ B> gg / ml buffer X0 <B>: 8 </ B> mU / ml buffer).
<B>-</B> 2 puits avec HX-XO (HX <B>: 10</B> #tg/ml <B>;</B> XO <B>: 8</B> mU/ml) <B>+ 0,5%</B> d'extrait éthanolique de la formule<B>A.</B> <B> - </ b> 2 wells with HX-XO (HX <B>: 10 </ B> # tg / ml <B>; </ B> XO <B>: 8 </ B> mU / ml ) <B> + 0.5% </ B> of ethanolic extract of the formula <B> A. </ B>
<B>-</B> 2 puits avec HX-XO (HX <B>: 10</B> gg/ml <B>;</B> XO <B>: 8</B> mU/ml) <B>+ 0,5%</B> d'extrait éthanolique de la formule B. <B> - </ B> 2 wells with HX-XO (HX <B>: 10 </ B> gg / ml <B>; </ B> XO <B>: 8 </ B> mU / ml) <B> + 0.5% </ B> of ethanolic extract of formula B.
Après deux heures d'incubation<B>à 370C</B> dans un incubateur<B>à C02,</B> les surnageants de chaque puits sont éliminés et remplacés par<B>1</B> ml de milieu nutritif contenant <B>1%</B> de sérum. Les cellules sont alors remises en culture<B>à</B> <B>370C</B> dans un incubateur<B>à C02</B> pendant 48 heures avant de procéder au dosage des<B>GAG.</B> After two hours of incubation <B> at 370C </ B> in a CO 2 incubator, the supernatants from each well are removed and replaced with <B> 1 </ B> ml of nutrient medium. containing <B> 1% </ B> of serum. The cells are then cultured <B> to <B> 370C </ B> in a <B> CO2 incubator </ B> for 48 hours prior to assaying <B> GAG. < / B>
2)<U>Dosage des<B>GAG.</B></U> <B>-</B><U>Principe.</U> 2) <U> Dosage of <B> GAG. </ U> </ U> <B> - </ B> <U> Principle. </ U>
Après rinçage dans du tampon PBS stérile, les cellules sont alors lysées pour effectuer le dosage des<B>GAG</B> par la méthode BLYSCAN (kit Biocolor Ltd.). After rinsing in sterile PBS buffer, the cells are then lysed to perform the <B> GAG </ B> assay by the BLYSCAN method (Biocolor Ltd. kit).
La méthode BLYSCAN est basée sur la fixation d'un colorant spécifique aux<B>GAG</B> avec lesquels il forme un complexe coloré qui est récupéré par centrifugation et dissout dans un solvant. L'absorbance de cette solution est mesurée<B>à</B> la longueur d'onde spécifique du colorant. Celle- ci est proportionnelle aux<B>GAG</B> synthétisés et est exprimée en gg/ml. The BLYSCAN method is based on binding a specific <B> GAG </ B> dye with which it forms a colored complex which is recovered by centrifugation and dissolved in a solvent. The absorbance of this solution is measured <B> at </ B> the specific wavelength of the dye. This is proportional to the <B> GAG </ B> synthesized and is expressed in gg / ml.
<B>-</B><U>Résultats.</U> <B> - </ B> <U> Results </ U>.
Le tableau<B>1</B> ci-dessous rapporte le dosage des <B>GAG</B> selon la méthode BLYSCAN exprimé en gg/ml en fonction du traitement des cultures cellulaires.
Table <B> 1 </ B> below reports the dosage of <B> GAG </ B> according to the BLYSCAN method expressed in gg / ml according to the treatment of cell cultures.
<U>Tableau <SEP> <B>1</B></U>
<tb> Puits <SEP> Puits <SEP> Moyenne <SEP> Ecart
<tb> <U>nOl <SEP> n02 <SEP> type</U>
<tb> Contrôle <SEP> sans <SEP> HX-XO
<tb> <B>2,015</B> <SEP> 2,002 <SEP> <B>2,009 <SEP> <U>0,009</U></B>
<tb> Contrôle <SEP> avec <SEP> HX-XO
<tb> <B><U>0,733</U></B><U> <SEP> 0,744</U> <SEP> <B>0,739 <SEP> <U>0,008</U></B>
<tb> HX-XO <SEP> <B>+</B> <SEP> extrait <SEP> formule <SEP> <B>A</B>
<tb> 1,474 <SEP> 1,479 <SEP> <B>1,477</B> <SEP> <U>0,004</U>
<tb> HX-XO <SEP> <B>+</B> <SEP> extrait <SEP> formule <SEP> B
<tb> <B><U>1 <SEP> 1</U></B><U> <SEP> 1,043 <SEP> 1,049 <SEP> <B>1</B> <SEP> 1,046 <SEP> 0,004</U> Le tableau 2 ci-dessous rapporte le pourcentage de variation de la synthèse des<B>GAG</B> en présence d'un agent délétère.
<U> Table <SEP><B> 1 </ U></U>
<tb> Well <SEP> Well <SEP> Average <SEP> Difference
<tb><U> nOl <SEP> n02 <SEP> type </ U>
<tb> Control <SEP> without <SEP> HX-XO
<tb><B> 2015 </ B><SEP> 2.002 <SEP><B> 2.009 <SEP><U> 0.009 </ U></U>
<tb> Control <SEP> with <SEP> HX-XO
<tb><B><U> 0.733 </ U><U><SEP> 0.744 </ U><SEP><B> 0.739 <SEP><U> 0.008 </ U></B>>
<tb> HX-XO <SEP><B> + </ B><SEP> extract <SEP> formula <SEP><B> A </ B>
<tb> 1.474 <SEP> 1.479 <SEP><B> 1.477 </ B><SEP><U> 0.004 </ U>
<tb> HX-XO <SEP><B> + </ B><SEP> extract <SEP> formula <SEP> B
<tb><B><U> 1 <SEP> 1 </ U><U><SEP> 1,043 <SEP> 1,049 <SEP><B> 1 <SEP> 1,046 <SEP > 0.004 </ U> Table 2 below reports the percentage change in the synthesis of <B> GAG </ B> in the presence of a deleterious agent.
<U>Tableau <SEP> 2</U>
<tb> (moyenne- <SEP> Pourcentage <SEP> de
<tb> <B><U>0,739)/0,739</U></B><U> <SEP> variation</U>
<tb> <U>Contrôle <SEP> sans</U> <SEP> HX-XO <SEP> <B><U>1,720 <SEP> 100%</U></B>
<tb> <U>Contrôle</U> <SEP> avec <SEP> HX-XO <SEP> <B><U>0 <SEP> 0%</U></B>
<tb> HX-XO <SEP> <B>+</B> <SEP> <U>extrait <SEP> formule <SEP> <B>A <SEP> 0,999 <SEP> +58,1%</B></U>
<tb> <U>IHX-XO <SEP> <B>+</B> <SEP> extrait <SEP> formule <SEP> B <SEP> 0,416 <SEP> +24,21%</U> <B>3)</B><U>Conclusions.</U> <U> Table <SEP> 2 </ U>
<tb> (average- <SEP> Percentage <SEP> of
<tb><B><U> 0.739) / 0.739 </ U></U><U><SEP> variation </ U>
<tb><U> Control <SEP> Without </ U><SEP> HX-XO <SEP><B><U> 1,720 <SEP> 100% </ U></U>
<tb><U> Control </ U><SEP> with <SEP> HX-XO <SEP><B><U> 0 <SEP> 0% </ U></U>
<tb> HX-XO <SEP><B> + </ B><SEP><U> extract <SEP> formula <SEP><B> A <SEP> 0.999 <SEP> +58.1% </ B ></U>
<tb><U> IHX-XO <SEP><B> + </ B><SEP> extract <SEP> formula <SEP> B <SEP> 0.416 <SEP> +24.21% </ U><B> 3) </ B><U> Conclusions. </ U>
Les résultats obtenus montrent un effondrement de la production des<B>GAG</B> par les fibroblastes après l'introduction d'un agent délétère HX-XO. Il s'agit d'un agent qui génère des radicaux libres toxiques pour les cellules d'oÙ l'inhibition de la synthèse des<B>GAG.</B> The results obtained show a collapse of the production of <B> GAG </ B> by the fibroblasts after the introduction of a deleterious agent HX-XO. It is an agent that generates toxic free radicals for cells hence inhibiting the synthesis of <B> GAG. </ B>
En présence de l'extrait issu de la formule<B>A</B> contenant l'extrait d'algue brune, on assiste<B>à</B> une augmentation de<B>58%</B> de la synthèse des<B>GAG</B> par rapport au contrôle contenant l'agent délétère seul. In the presence of the extract from the formula <B> A </ B> containing the brown algae extract, <B> </ B> is increased by <B> 58% </ B> the synthesis of <B> GAG </ B> compared to the control containing the deleterious agent alone.
En présence de l'extrait issu de la formule B ne contenant pas l'extrait d'algue brune, on assiste<B>à</B> une augmentation de 24% de la synthèse des<B>GAG</B> par rapport au contrôle contenant l'agent délétère seul.In the presence of the extract from formula B not containing the brown algae extract, there is <B> at </ B> a 24% increase in <B> GAG </ B> synthesis by compared to the control containing the deleterious agent alone.
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