FR2799473A1

FR2799473A1 - DNA POLYMERASE HAVING MUTASE ACTIVITY AND USE THEREOF

Info

Publication number: FR2799473A1
Application number: FR9912709A
Authority: FR
Inventors: Claude Agnes Eleonore Reynaud; Jean Claude Weill
Original assignee: INSTITUT NECKER
Current assignee: INSTITUT NECKER
Priority date: 1999-10-12
Filing date: 1999-10-12
Publication date: 2001-04-13
Also published as: WO2001027250A1; AU7797600A

Abstract

The invention relates to a sequence of RNAm coding for a mutase with an appropriate nucleotide sequence, in addition to mutase active DNA polymerase of a murine or human origin. Said mutase can be used for the purposes of diagnosis and in human and veterinary medicine by virtue of the action thereof on mutations generated on Ig genes during an immune response.

Description

ADN POLYMÉRASE À ACTIVITÉ DE MUTASE ET SON UTILISATION
La présente invention concerne le domaine de la mutagénèse, et plus particulièrement une séquence d'ARNm codant pour une enzyme ADN polymérase à activité de mutase, ainsi que ladite ADN polymérase et les utilisations de cette enzyme, notamment celles fondées sur son activité de mutation générée sur les gènes des Ig pendant la réponse immune. DNA POLYMERASE WITH MUTASE ACTIVITY AND USE THEREOF
The present invention relates to the field of mutagenesis, and more particularly to an mRNA sequence coding for an DNA polymerase enzyme with mutase activity, as well as said DNA polymerase and the uses of this enzyme, in particular those based on its generated mutation activity. on the Ig genes during the immune response.

L'hypermutation des gènes a été décrite il y a plus de trente ans. On la considère comme un mécanisme résultant de l'introduction de mutations aléatoires dans des gènes V réarrangés dans les cellules B soumises à une réponse immune. Ce processus provoque la "maturation" de la réponse, les cellules B exprimant des récepteurs de plus grande affinité spécifiques de l'antigène immunisant étant alors préférentiellement sélectionnés (Weigert et al., 1970). Hypermutation of genes was described over thirty years ago. It is considered to be a mechanism resulting from the introduction of random mutations in rearranged V genes in B cells subjected to an immune response. This process causes the response to "mature", the B cells expressing receptors of greater affinity specific for the immunizing antigen then being preferentially selected (Weigert et al., 1970).

On était donc à la recherche de moyens pour réaliser une hypermutation à des fins de diagnostic, de production et de thérapie génique. We were therefore looking for ways to achieve hypermutation for diagnostic, production and gene therapy purposes.

On a maintenant trouvé une ADN polymérase mutagène, ci-après dénommée "mutase", qui apparaît être une enzyme responsable de telles mutations et on a mis au point selon l'invention des moyens pour produire une telle enzyme et pour l'utiliser dans diverses applications. We have now found a mutagenic DNA polymerase, hereinafter called "mutase", which appears to be an enzyme responsible for such mutations and we have developed according to the invention means for producing such an enzyme and for using it in various applications.

L'invention a pour premier objet une ADN polymérase mutagène ou enzyme dénommée mutase, telle que définie plus loin. The first object of the invention is a mutagenic DNA polymerase or enzyme called mutase, as defined below.

L'invention est décrite ci-après en référence à la liste de séquences ci-dessous, dans laquelle: SEQ ID N0:1 représente la séquence d'ARNm pour l'ADN polymérase selon l'invention, d'origine murine, The invention is described below with reference to the list of sequences below, in which: SEQ ID NO: 1 represents the mRNA sequence for the DNA polymerase according to the invention, of murine origin,

SEQ ID NO: 2 représente la séquence d'ARNm pour l'ADN polymérase selon l'invention, d'origine humaine, SEQ ID NO:3 représente la séquence d'acides aminés caractérisant l'enzyme selon l'invention, d'origine murine, et SEQ ID NO:4 représente la séquence d'acides aminés caractérisant l'enzyme selon l'invention, d'origine humaine. SEQ ID NO: 2 represents the mRNA sequence for the DNA polymerase according to the invention, of human origin, SEQ ID NO: 3 represents the amino acid sequence characterizing the enzyme according to the invention, of origin murine, and SEQ ID NO: 4 represents the amino acid sequence characterizing the enzyme according to the invention, of human origin.

Ces séquences ont été déterminées par des méthodes de séquençage appropriées. These sequences were determined by appropriate sequencing methods.

SEQ ID N0.:3 et SEQ ID NO: 4 sont représentées en écriture condensée normalisée, en lieu et place de l'écriture traditionnelle à trois lettres des acides aminés. SEQ ID N0.:3 and SEQ ID NO: 4 are shown in standardized condensed writing, instead of the traditional three-letter writing of amino acids.

L'invention procure en outre une séquence d'ARNm pour homologue de désoxynucléotidyltransférase terminale, codant pour une telle ADN polymérase mutagène ou mutase, ayant une séquence nucléotidique codant pour la séquence d' acides aminés selon SEQ ID NO: 3 et SEQ ID NO:4, respectivement pour l'enzyme murine et pour l'enzyme humaine. Cette séquence d'ARNm selon SEQ ID N0:1 et SEQ ID NO: 2 respectivement pour la souris et pour l'homme procure un moyen pour la préparation de l'enzyme selon la présente invention. L'invention concerne également, outre le gène codant pour l'enzyme d'environ 50-52.000 daltons, des dérivés de gène codant pour l'activité de mutase. The invention further provides an mRNA sequence for terminal deoxynucleotidyltransferase homolog, coding for such a mutagenic DNA polymerase or mutase, having a nucleotide sequence coding for the amino acid sequence according to SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4, respectively for the murine enzyme and for the human enzyme. This mRNA sequence according to SEQ ID NO: 1 and SEQ ID NO: 2 respectively for the mouse and for man provides a means for the preparation of the enzyme according to the present invention. The invention also relates, in addition to the gene coding for the enzyme of approximately 50-52,000 daltons, derivatives of the gene coding for mutase activity.

L'enzyme mutagène exprimée par une séquence d'ARNm selon la présente invention catalyse la combinaison de désoxynucléotide triphosphates pour former un brin d'acide nucléique complémentaire d'un brin de matrice d'acide nucléique. L'enzyme purifiée exprimée à partir du dit ARNm peut être utilisée dans diverses réactions et divers procédés mettant en jeu des mutations et autres phénomènes liés. The mutagenic enzyme expressed by an mRNA sequence according to the present invention catalyzes the combination of deoxynucleotide triphosphates to form a strand of nucleic acid complementary to a strand of nucleic acid template. The purified enzyme expressed from said mRNA can be used in various reactions and various methods involving mutations and other related phenomena.

L'invention a également pour objets, outre l'enzyme susmentionnée ayant une masse moléculaire d'environ 50- 52. 000 daltons, un vecteur d'expression comprenant une séquence d'ARNm telle que décrite plus haut, et une cellule hôte contenant un tel vecteur, choisie par exemple parmi E. coli et une cellule lymphoïde murine, ainsi que des anticorps monoclonaux reconnaissant ladite ADN polymérase à activité de mutase, et plus particulièrement des anticorps monoclonaux reconnaissant les séquences d'acides aminés SEQ ID NO:3 ou SEQ ID NO:4. A subject of the invention is also, in addition to the above-mentioned enzyme having a molecular mass of approximately 50-52,000 daltons, an expression vector comprising an mRNA sequence as described above, and a host cell containing a such vector, chosen for example from E. coli and a murine lymphoid cell, as well as monoclonal antibodies recognizing said DNA polymerase with mutase activity, and more particularly monoclonal antibodies recognizing the amino acid sequences SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 4.

Des variants de ladite mutase présentant une meilleure activité in vivo ont également été insérés dans un vecteur d'expression approprié et procurent des résultats significativement meilleurs dans les applications in vivo relatées plus loin. Variants of said mutase exhibiting better activity in vivo have also been inserted into an appropriate expression vector and give significantly better results in the in vivo applications described below.

L'invention procure en outre un procédé pour la production de l'enzyme mutase susdite tel que défini plus loin, ainsi qu'un procédé pour la purification de l'enzyme mutase selon l'invention, qui comprend le traitement d'un mélange aqueux contenant l'enzyme mutase avec un support chromatographique d'interaction hydrophobe, dans des conditions qui promeuvent les interactions et l'élution de la mutase liée, à partir du dit support, avec un solvant qui atténue les interactions hydrophobes. The invention further provides a process for the production of the above mutase enzyme as defined below, as well as a process for the purification of the mutase enzyme according to the invention, which comprises the treatment of an aqueous mixture containing the enzyme mutase with a hydrophobic interaction chromatographic support, under conditions which promote interactions and elution of the bound mutase, from said support, with a solvent which attenuates hydrophobic interactions.

Ledit procédé pour la production d'une ADN polymérase recombinante ou mutase peut comporter la mise en culture d'une cellule hôte telle qu'indiquée plus haut et l'isolement de la mutase recombinante du milieu de culture ou des cellules. Said method for the production of a recombinant DNA polymerase or mutase may comprise the cultivation of a host cell as indicated above and the isolation of the recombinant mutase from the culture medium or from the cells.

L'enzyme selon l'invention s'est avérée être un homologue de désoxynucléotidyltransférase terminale. The enzyme according to the invention has been found to be a terminal deoxynucleotidyltransferase homolog.

De tels homologues ont été synthétisés sur base murine et humaine respectivement, au moyen de méthodes de synthèse connues de l'homme du métier. Such homologs have been synthesized on a murine and human basis respectively, using synthesis methods known to those skilled in the art.

Les applications déjà envisageables de cette enzyme sont: The already possible applications of this enzyme are:

# chez l'homme, utilisation d'anticorps monoclonaux produits chez la souris hypermutante comme outil diagnostique ou thérapeutique chez l'homme, - thérapie génique destinée à restaurer un défaut de mutation à l'aide du gène réintroduit dans les cellules du système immunitaire, - amélioration des opérations de vaccination, par injection de ladite enzyme en même temps que l'agent immunogène, diagnostic de tumeurs impliquées dans des processus tumoraux, mutation d'une cellule tumorale pour la faire échapper à une tumeur, - amélioration des processus d'apprentissage sensoriel et cognitif dans le cerveau, et # chez la souris, élaboration d'une souris hypomutante, avec pour intérêt la récupération des anticorps "germline" de la souris, - élaboration d'une souris hypermutante, fabriquant des anticorps monoclonaux, des mutations appro- priées des oncogènes permettant alors de réaliser tous les modèles de tumeurs, à convenance, et # indifféremment chez l'homme et la souris, mutation d'un gène quelconque choisi à convenance dans une cellule avec une cassette d'accessibilité, mutation in vitro en tube de n'importe quel gène, - réalisation d'une mutagénèse au hasard dans une cellule, - réalisation d'une mutagénèse au hasard dans une levure ou une bactérie. # in humans, use of monoclonal antibodies produced in hyper-mutant mice as a diagnostic or therapeutic tool in humans, - gene therapy intended to restore a mutation defect using the gene reintroduced into the cells of the immune system, - improvement of vaccination operations, by injection of said enzyme at the same time as the immunogenic agent, diagnosis of tumors involved in tumor processes, mutation of a tumor cell to make it escape a tumor, - improvement of sensory and cognitive learning in the brain, and # in mice, development of a hypomutant mouse, with the interest of recovering mouse "germline" antibodies, - development of a hypermutant mouse, making monoclonal antibodies, mutations appropriate oncogenes then making it possible to carry out all tumor models, at will, and # indifferently in humans and l a mouse, mutation of any gene chosen conveniently in a cell with an accessibility cassette, in vitro tube mutation of any gene, - carrying out a random mutagenesis in a cell, - carrying out random mutagenesis in yeast or bacteria.

Application à une cassette d'hypermutation:
On a amélioré des protéines par une mutagénèse au hasard effectuée par ladite mutase selon l'invention. On a pour cela préparé de manière connue une cassette Application to a hypermutation cassette:
Proteins were improved by random mutagenesis carried out by said mutase according to the invention. For this, a cassette has been prepared in a known manner.

d'hypermutation d'un gène quelconque dans une cellule lymphoïde humaine. hypermutation of any gene in a human lymphoid cell.

Il s'agissait de rendre la cellule Ramos (ou toute autre cellule lymphoïde B) hypermutante et de s'en servir pour produire toute une série de variants à partir d'un gène donné. A cet effet, on a utilisé une cellule lymphoïde B humaine Ramos qui mute à un taux faible ses gènes d'Ig en culture. On a alors introduit dans une cassette de mutations un gène X. Cette cassette comprenait le promoteur et le facilitateur ou amplificateur de la chaîne légère kappa des Ig. On a transfecté cette cassette avec le gène X dans des cellules Ramos, ainsi que la mutase décrite plus haut. The idea was to make the Ramos cell (or any other B lymphoid cell) hypermutant and to use it to produce a whole series of variants from a given gene. For this purpose, a human Ramos B lymphoid cell was used which mutates its Ig genes in culture at a low rate. An X gene was then introduced into a mutation cassette. This cassette included the promoter and the facilitator or enhancer of the Ig kappa light chain. This cassette was transfected with the X gene in Ramos cells, as well as the mutase described above.

Les cellules Ramos produisaient alors toute une variété de mutants du gène X. Les mutants ont été testés pour leur fonction. Les mutations permettant une amélioration du gène X ont pu être identifiées par séquence. Le vecteur utilisé pour hyper-exprimer ladite mutase dans la cellule Ramos était le vecteur commercialisé par la société Clontech sous la dénomination pIRES (pIRESpuro) contenant le site d'entrée du ribosome interne (en anglais Internal Ribosome Entry Site) du virus de l'encéphalomyocardite (ECMV), qui permet la translation de deux cadres de lecture ouverts d'un ARN messager. Ce vecteur contenait le gène de résistance à l'ampicilline et celui de résistance à un autre antibiotique (hygromycine, puromycine ou néomycine, par exemple). La particularité du dit gène était que le gène inséré et le gène de résistance étaient sous le contrôle du même promoteur (CMV, ou cytomégalovirus). Il ne s'agissait pourtant pas d'une protéine de fusion, car il y avait un site de réinitiation de la traduction en amont du gène codant pour l'antibiotique. Ramos cells then produced a variety of mutants of the X gene. The mutants were tested for their function. Mutations allowing improvement of the X gene could be identified by sequence. The vector used to hyper-express said mutase in the Ramos cell was the vector marketed by the company Clontech under the name pIRES (pIRESpuro) containing the internal ribosome entry site (in English Internal Ribosome Entry Site) of the encephalomyocarditis (ECMV), which allows the translation of two open reading frames of a messenger RNA. This vector contained the ampicillin resistance gene and that of resistance to another antibiotic (hygromycin, puromycin or neomycin, for example). The particularity of the said gene was that the inserted gene and the resistance gene were under the control of the same promoter (CMV, or cytomegalovirus). However, it was not a fusion protein, because there was a site for re-initiation of the translation upstream of the gene coding for the antibiotic.

On a ainsi pu sélectionner, en augmentant la dose d'antibiotique, des clones exprimant de façon élevée le gène d'intérêt et le gène de résistance. It was thus possible to select, by increasing the dose of antibiotic, clones expressing high the gene of interest and the resistance gene.

Ladite mutase une fois produite sous forme de protéine renaturée selon des modes opératoires et des protocoles classiques, connus de l'homme du métier des biotechnologies, a permis de muter, en présence d'autres facteurs choisis de manière appropriée, un segment quelconque d'ADN en tube à essai. Là encore, ces mutants pouvaient être clonés dans une bactérie, où l'on a pu produire la protéine correspondante. Said mutase once produced in the form of a renatured protein according to conventional procedures and protocols, known to those skilled in the art of biotechnology, made it possible to mutate, in the presence of other factors appropriately chosen, any segment of DNA in test tube. Again, these mutants could be cloned into a bacterium, where the corresponding protein could be produced.

La production de ladite mutase dans E. coli se faisait selon le système dit pET, fabriqué et diffusé par la société Novagen, Inc., et tel que décrit dans "The pET System : Choice for Expression", R. Mierendorf, K. Yeager et R. Novy - Novagen, Inc., dans InNovations, No. 1, mai 1994. Les protéines mutées pouvaient être produites de la même façon. Selon ces deux modèles, toutes les protéines habituellement utilisées (par exemple en agronomie, en médecine humaine et vétérinaire, en biotechnologie, etc. ) ont pu être améliorées. The production of said mutase in E. coli was done according to the so-called pET system, manufactured and distributed by the company Novagen, Inc., and as described in "The pET System: Choice for Expression", R. Mierendorf, K. Yeager and R. Novy - Novagen, Inc., in InNovations, No. 1, May 1994. The mutated proteins could be produced in the same way. According to these two models, all the proteins usually used (for example in agronomy, in human and veterinary medicine, in biotechnology, etc.) could have been improved.

Application au diagnostic chez l'homme:
Pour une application à des fins diagnostiques en thérapie chez l'homme, on a produit des anticorps polyclonaux ou monoclonaux dirigés contre ladite mutase de l'homme. A partir de ces anticorps, on peut diagnostiquer chez l'homme un défaut d'hypermutation des gènes des Ig. Application to diagnosis in humans:
For application for diagnostic purposes in therapy in humans, polyclonal or monoclonal antibodies have been produced against said human mutase. From these antibodies, a defect in the hypermutation of the Ig genes can be diagnosed in humans.

On identifie ainsi l'absence de mutase comme étant la cause du défaut d'hypermutation, parmi d'autres causes a priori possibles. The absence of mutase is thus identified as being the cause of the hypermutation defect, among other a priori possible causes.

Application en thérapie chez l'homme:
On a introduit le gène de la mutase décrite plus haut dans les cellules souches sanguines (CD 34+) de patients ne pouvant pas muter leurs gènes d'Ig et on a alors obtenu des mutations des dits gène d'Ig, dans des Application in therapy in humans:
The mutase gene described above was introduced into the blood stem cells (CD 34+) of patients unable to mutate their Ig genes and mutations of the so-called Ig gene were then obtained in

conditions de régularité et de répétabilité très satisfaisantes. very satisfactory regularity and repeatability conditions.

On peut de même, lors des vaccinations, co-injecter le gène de ladite mutase afin que celui-ci s'intègre dans les cellules B du patient traité, et ainsi accélérer et améliorer la réponse immune. It is also possible, during vaccinations, to co-inject the gene for said mutase so that it integrates into the B cells of the treated patient, and thus accelerate and improve the immune response.

Applications à l'expression de ladite mutase en dehors du mécanisme de l'hypermutation somatique :
1. On a pu établir que ladite mutase était réactivée de façon non physiologique dans des processus tumoraux. Ceux-ci pouvaient être des processus lymphoïdes (Burkitt par exemple) et des processus nonlymphoïdes. Cette réactivation pouvait induire des mutations sur les oncogènes, amplifiant et facilitant ainsi le pronostic de la tumeur. Applications to the expression of said mutase outside the mechanism of somatic hypermutation:
1. It has been established that said mutase is reactivated in a non-physiological manner in tumor processes. These could be lymphoid processes (Burkitt for example) and nonlymphoid processes. This reactivation could induce mutations in the oncogenes, thus amplifying and facilitating the prognosis of the tumor.

2. Une thérapeutique antisens ciblée sur le gène de ladite mutase pouvait arrêter ou freiner ce processus malin. 2. Antisense therapy targeted at the gene for said mutase could stop or slow down this malignant process.

3. Ladite mutase des Ig a également pu être exprimée dans d'autres tissus de façon physiologique, notamment dans le système nerveux. On pouvait alors utiliser là encore les anticorps anti-mutase comme outil diagnostic et le gène ou la protéine comme outil thérapeutique. 3. Said Ig mutase could also be expressed in other tissues physiologically, in particular in the nervous system. Here again, anti-mutase antibodies could be used as a diagnostic tool and the gene or protein as a therapeutic tool.

Application à une souris dite KO (hypomutante):
Il s'agissait d'inactiver le gène de la mutase susdite sur les deux allèles d'une souris. Pour cela, on a commencé par annuler un allèle dans une cellule ES servant à la construction de la souris. Les souris hétérozygotes ont été croisées entre elles pour produire une souris présentant ses deux allèles de la mutase inactivés. On a utilisé un vecteur commercialisé par la société DuPont pour mettre en place la construction qui avait été injectée dans les cellules ES de souris, afin Application to a so-called KO (hypomutant) mouse:
The aim was to deactivate the aforementioned mutase gene on the two alleles of a mouse. To do this, we started by canceling an allele in an ES cell used to build the mouse. Heterozygous mice were crossed with each other to produce a mouse with its two inactivated mutase alleles. A vector sold by the company DuPont was used to set up the construct which had been injected into the ES cells of mice, in order to

d'obtenir une recombinaison homologue sur un allèle de la mutase. Ce vecteur contenait le gène codant pour la résistance à la néomycine et le gène codant pour la thymidine kinase du virus HSV (herpès simplex). On a inséré respectivement dans les sites SAL 1 et XHO 1 deux fragments du gène codant pour la mutase de souris. Ces deux fragments ont ensuite été amplifiés par ACP (amplification en chaîne par polymérase) à partir de phages génomiques codant pour la mutase selon l'invention. Cette construction a permis, après recombinaison homologue, d'insérer le gène codant pour la résistance à la néomycine dans un exon de ladite mutase, ce qui permettait son inactivation. La souris KO pour la mutase permettait de produire tous les anticorps naturels chez la souris sans aucune mutation. to obtain homologous recombination on an allele of the mutase. This vector contained the gene coding for resistance to neomycin and the gene coding for thymidine kinase of the HSV virus (herpes simplex). Two fragments of the gene encoding the mouse mutase were inserted into the SAL 1 and XHO 1 sites respectively. These two fragments were then amplified by PCR (polymerase chain reaction) from genomic phages coding for the mutase according to the invention. This construction made it possible, after homologous recombination, to insert the gene coding for resistance to neomycin into an exon of said mutase, which allowed its inactivation. The KO mouse for the mutase made it possible to produce all the natural antibodies in the mouse without any mutation.

Application à la production d'une souris transgénique hypermutante:
Il s'agissait d'exprimer ladite mutase dans les cellules lymphoïdes d'une souris. Cette hyperexpression devait pouvoir augmenter le taux de mutations somatiques, ainsi que la cinétique de leur apparition après immunisation de ces mêmes souris avec un antigène particulier. Application to the production of a hypermutant transgenic mouse:
The aim was to express said mutase in the lymphoid cells of a mouse. This hyperexpression should be able to increase the rate of somatic mutations, as well as the kinetics of their appearance after immunization of these same mice with a particular antigen.

La souris hypermutante ainsi obtenue, au moyen de techniques connues de l'homme du métier, est un outil très important pour la préparation d'anticorps monoclonaux contre tout type d'antigènes. Elle permet également d'améliorer ces anticorps. Les anticorps monoclonaux ainsi produits peuvent être utilisés pour la recherche, le diagnostic et le traitement après leur humanisation. L'humanisation des anticorps monoclonaux préparés chez la souris consiste à maintenir la partie liant l'antigène souris et à remplacer le corps de la molécule par une partie humaine. Cette humanisation The hyper-mutant mouse thus obtained, using techniques known to those skilled in the art, is a very important tool for the preparation of monoclonal antibodies against any type of antigen. It also improves these antibodies. The monoclonal antibodies thus produced can be used for research, diagnosis and treatment after their humanization. Humanization of the monoclonal antibodies prepared in mice consists in maintaining the part binding the mouse antigen and in replacing the body of the molecule with a human part. This humanization

permet d'éviter le rejet de ces anticorps lorsqu'ils sont inj ectés à l'homme. avoids the rejection of these antibodies when injected into humans.

Le vecteur utilisé pour l'injection du gène codant pour ladite mutase de souris (ADNc) dans les blastocytes de souris, afin de construire les souris transgéniques, était construit selon la technique décrite par R. The vector used for the injection of the gene coding for said mouse mutase (cDNA) into mouse blastocytes, in order to construct the transgenic mice, was constructed according to the technique described by R.

Dildrop, A. Ma, K. Zimmerman, E. Hsu, A. Tesfaye, R. DePinho et F. W. Alt, dans IgH enhancer-mediated deregulation of N-myc gene expression in transgenic mice: génération of lymphoid neoplasias that lack c-myc expression, EMBO J. 8 :1121, Ce vecteur contenait le promoteur de N-myc et le facilitateur (enhancer) de la chaîne lourde mu des Ig de souris. Il s'exprimait dans les cellules lymphoïdes B en prolifération. Dildrop, A. Ma, K. Zimmerman, E. Hsu, A. Tesfaye, R. DePinho and FW Alt, in IgH enhancer-mediated deregulation of N-myc gene expression in transgenic mice: generation of lymphoid neoplasias that lack c-myc expression, EMBO J. 8: 1121, This vector contained the promoter of N-myc and the promoter (enhancer) of the mu heavy chain of mouse Ig. It was expressed in proliferating B lymphoid cells.

Cette souris hypermutante pouvait mimer un certain nombre d'événements oncogéniques. En effet, si l'on intègre dans le génome de cette souris un ou plusieurs oncogènes encadrés par le promoteur et le facilitateur de la chaîne légère kappa des Ig de souris, on peut faire muter rapidement ces oncogènes et ainsi obtenir de nombreux modèles différents de cancer. Ces souris mimant des processus tumoraux peuvent devenir des outils de recherche fondamentale et de recherche appliquée à des fins pharmacologiques. This hyper-mutant mouse could mimic a number of oncogenic events. Indeed, if we integrate into the genome of this mouse one or more oncogenes framed by the promoter and the facilitator of the kappa light chain of mouse Ig, we can quickly mutate these oncogenes and thus obtain many different models of Cancer. These mice mimicking tumor processes can become basic research and applied research tools for pharmacological purposes.

La mutase selon l'invention peut ainsi être appliquée notamment à des fins diagnostiques, ainsi que pour l'amélioration des protéines par mutagénèse et en thérapie humaine et vétérinaire, par action sur les mutations générées sur les gènes des Ig pendant une réponse immune. The mutase according to the invention can thus be applied in particular for diagnostic purposes, as well as for the improvement of proteins by mutagenesis and in human and veterinary therapy, by action on the mutations generated on the Ig genes during an immune response.

LISTAGE DES SÉQUENCES NOMBRE DE SÉQUENCES : 4INFORMATION POUR SEQ ID NO:1 LONGUEUR : 1604 bases TYPE : Acide nucléique NATURE DE BRIN : brin TOPOLOGIE : Linéaire TYPE DE MOLÉCULE: ARNm SOURCE D'ORIGINE: ORGANISME : Murin (Mus musculus) TYPE DE TISSU : B220+ PNAhigh DESCRIPTION DE LA SÉQUENCE : ID NO:1
1 gttctgcggc ttcctgtgct tccagagtcg gtgcccagat gcttccgaag cgacggcgag
61 tgcgagctgg gtccccacac agcgcggtag actcttccac gccgccctcg gtggtgcgct
121 tccctgatgt ggccatctac cttgcggagc cgcgaatggg ccgcagccgc cgggccttcc
181 tcacccgcct ggcgcggtcc aaaggcttcc gcgtcctaga tgcttacagc tcaaaggtga
241 cacatgtggt gatggaaggg acctcagcca aggaggccat ctgctggcag aagaacatgg
301 atgctctccc cacaggctgc ccacagccag ctctgctaga tattagctgg tttacagaaa
361 gcatggcagc tgggcagcct gtccctgagg agggccggca ccacctggag gtagctgagc
421 ccaggaagga gcccccagtc tcagcgtcga tgccagctta tgcctgtcag cgcccctcac
481 ctctcacaca ccataacact ctcctctcag aggctctgga gacgctagcg gaggcagcgg
541 gcttcgaagc caacgagggc cgtcttctct ccttctccag agcggcctcg gtgctcaagt
601 ccctgccctg ccctgttgca tctttgagcc agctgcatgg gctgccctac tttggagaac
661 attccactag agtaatccag gagctgctgg agcatggaac atgtgaagaa gtgaaacaag
721 tccgttgctc agaaaggtac cagaccatga agctcttcac ccaggtcttc ggggttgggg
781 tgaagactgc caaccggtgg taccaggaag gactacgaac cctggatgag ctcagagagc
841 agccccagag actgacgcag cagcagaaag cagggctcca atattaccag gacctgagca
901 ctccagttag acgagctgat gccgaggctc tgcagcagtt gatagaggca gctgtgagac
961 agaccctgcc cggagccact gtcacgctga ctggcggttt ccgaaggggg aagttacaag 1021 gccatgatgt agacttcctt atcacccacc cagaggaggg gcaagaagta gggctgctgc 1081 ccaaagtgat gagctgccta cagagccagg gactcgtcct gtatcaccag taccaccgca 1141 gccatttagc agactcagcc cacaacctgc ggcagcggag ctccaccatg gatgcttttg 1201 agaggagttt ctgcatcttg ggtttgccac aaccccaaca ggcagcttta gcgggggccc 1261 tgcctccctg cccaacttgg aaagctgtga gggtagatct tgtggtcacg cccagcagcc 1321 agttcccctt tgcccttctg ggctggactg gctcccagtt ctttgagcgg gagctacggc 1381 ggttcagccg tcaagagaag gggctgtggc ttaacagcca tgggctgttt gatcctgagc 1441 agaagagagt tttccatgca acttctgagg aagatgtttt cagactcctg ggcctcaagt 1501 accttcctcc agagcagaga aatgcctgaa ctgagaaatg cctgtgggct gccacaccca 1561 tccatacaaa atgaggggct gcctcttgct tgaccaggaa tgtt LIST OF SEQUENCES NUMBER OF SEQUENCES: 4 INFORMATION FOR SEQ ID NO: 1 LENGTH: 1604 bases TYPE: Nucleic acid NATURE OF STRAND: strand TOPOLOGY: Linear TYPE OF MOLECULE: ARNM SOURCE OF ORIGIN: ORGANISM: Murine (Musculus) TYPE OF TISSUE : B220 + PNAhigh DESCRIPTION OF THE SEQUENCE: ID NO: 1
1 gttctgcggc ttcctgtgct tccagagtcg gtgcccagat gcttccgaag cgacggcgag
61 tgcgagctgg gtccccacac agcgcggtag actcttccac gccgccctcg gtggtgcgct
121 tccctgatgt ggccatctac cttgcggagc cgcgaatggg ccgcagccgc cgggccttcc
181 tcacccgcct ggcgcggtcc aaaggcttcc gcgtcctaga tgcttacagc tcaaaggtga
241 cacatgtggt gatggaaggg acctcagcca aggaggccat ctgctggcag aagaacatgg
301 atgctctccc cacaggctgc ccacagccag ctctgctaga tattagctgg tttacagaaa
361 gcatggcagc tgggcagcct gtccctgagg agggccggca ccacctggag gtagctgagc
421 ccaggaagga gcccccagtc tcagcgtcga tgccagctta tgcctgtcag cgcccctcac
481 ctctcacaca ccataacact ctcctctcag aggctctgga gacgctagcg gaggcagcgg
541 gcttcgaagc caacgagggc cgtcttctct ccttctccag agcggcctcg gtgctcaagt
601 ccctgccctg ccctgttgca tctttgagcc agctgcatgg gctgccctac tttggagaac
661 attccactag agtaatccag gagctgctgg agcatggaac atgtgaagaa gtgaaacaag
721 tccgttgctc agaaaggtac cagaccatga agctcttcac ccaggtcttc ggggttgggg
781 tgaagactgc caaccggtgg taccaggaag gactacgaac cctggatgag ctcagagagc
841 agccccagag actgacgcag cagcagaaag cagggctcca atattaccag gacctgagca
901 ctccagttag acgagctgat gccgaggctc tgcagcagtt gatagaggca gctgtgagac
961 agaccctgcc cggagccact gtcacgctga ctggcggttt ccgaaggggg aagttacaag 1021 gccatgatgt agacttcctt atcacccacc cagaggaggg gcaagaagta gggctgctgc 1081 ccaaagtgat gagctgccta cagagccagg gactcgtcct gtatcaccag taccaccgca 1141 gccatttagc agactcagcc cacaacctgc ggcagcggag ctccaccatg gatgcttttg 1201 agaggagttt ctgcatcttg ggtttgccac aaccccaaca ggcagcttta gcgggggccc 1261 tgcctccctg cccaacttgg aaagctgtga gggtagatct tgtggtcacg cccagcagcc 1321 agttcccctt tgcccttctg ggctggactg gctcccagtt ctttgagcgg gagctacggc 1381 ggttcagccg tcaagagaag gggctgtggc ttaacagcca tgggctgttt gatcctgagc 1441 agaagagagt tttccatgca acttctgagg aagatgtttt cagactcctg ggcctcaagt 1501 accttcctcc agagcagaga aatgcctgaa ctgagaaatg cctgtgggct gccacaccca 1561 tccatacaaa atgaggggct gcctcttgct tgaccaggaa tgtt

INFORMATION POUR SEQ ID NO:2
LONGUEUR : 2452 bases
TYPE : Acide nucléique NATURE DE BRIN : brin
TOPOLOGIE : Linéaire
TYPE DE MOLÉCULE: ARNm
SOURCE D'ORIGINE:
ORGANISME : Humain (Homo sapiens) TYPE DE TISSU : cellulaire Ramos
DESCRIPTION DE LA SÉQUENCE : SEQ ID NO:2
1 tccctctgcg ttcgctccgc gctgctggag gctgtcgtcc caatgctccc caaacggcgg
61 cgagcgcggg tcgggtcccc tagcggcgat gccgcttcct ccacgccgcc ctcgacgcgc
121 ttcccgggag tcgccatcta cctggtcgag cctcgcatgg gtcgcagccg ccgggccttc
181 ctcacaggcc tggcgcgctc caaaggcttc cgcgtccttg acgcctgcag ctccgaagcg
241 acacatgttg tgatggaaga gacctcagca gaggaggccg tcagctggca ggagcgcagg
301 atggcagctg ctcccccggg ttgcaccccc ccagctctgc tggacataag ctggttaaca
361 gagagcctgg gagctgggca gcctgtacct gtggagtgcc ggcaccgcct ggaggtggct
421 gggccaagga aggggcctct gagcccagca tggatgcctg cctatgcctg ccagcgccct
481 acgcccctca cacaccacaa cactggcctc tccgaggctc tggagatact ggccgaggca
541 gcaggctttg aaggcagtga gggccgcctc ctcaccttct gcagagcagc ctcggtgctc
601 aaggcccttc ccagccctgt cacaaccctg agccagctgc aggggcttcc ccactttgga
661 gaacactcct ctagggttgt ccaggagctg ctggagcatg gagtgtgtga ggaggtggag
721 agagttcggc gctcagagag gtaccagacc atgaagctct tcacccagat cttcggggtc
781 ggtgtgaaga ctgctgaccg gtggtaccgg gaaggactgc gaaccttaga tgacctccga
841 gagcagcccc agaaactaac ccaacagcag aaagcggggc tccagcacca ccaggacctg
901 agcaccccag tcctgcggtc cgatgtagat gccctgcagc aggtggtgga ggaagctgtg
961 gggcaggccc tgcctggggc caccgtcacg ctgaccggcg gcttccgcag ggggaagttg 1021 cagggccatg acgtggactt cctcatcacc caccccaagg agggtcagga ggcggggctg 1081 ctgcctagag tgatgtgccg cctgcaggac cagggcctca tcctgtacca ccagcaccag 1141 cacagctgct gtgagtcccc tacccgcctg gcccaacaga gccacatgga cgcttttgag 1201 agaagtttct gcattttccg cctaccacaa cctccagggg ctgctgtggg gggatccacg 1261 aggccctgcc catcctggaa ggccgtgaga gtggacttgg tagttgcacc cgtcagccag 1321 ttccctttcg ccctgctcgg ttggactggc tccaagcttt tccagcggga gctgcgccgc 1381 ttcagccgga aggagaaggg cctgtggctg aacagccatg ggctgtttga cccggagcag 1441 aagacatttt tccaagcggc ttcagaggaa gacatcttca gacacctggg ccttgagtac 1501 cttcctccag agcagagaaa cgcctgagcc tgcctgtgtc ccccacttcc actcaggaaa 1561 ttgggctgcc cccaacctgg ccactgaatg tctccaggca gatatgctgc cccctgaccc 1621 ccaccttcac ccctccccgc caaggcctgg ctcttcccgg aggtcaattg tgcctgcagg 1681 atcagttgag cccctgctgg tgtgctgcag ggtgtgatga ggtgggagcc ctcagtcctg 1741 cagtcatgaa tggcaagtgg tccctgatgt gcagtgtctc attagttgca ctgcagttaa 1801 ctgtggctcc tgcagggcac cctgcccaga atgcccagaa gagaaccatg catacctgca 1861 ctgcatttga gagccatgag ctggaggctg tggttcgtgc cagcaaggag cctactgtct 1921 ggtgtgctgt aggcatctgg agagggagag ggcctgggta ggagctggga ggaagataat 1981 tttcaactat ggggcttcag tactgcagcg ccccgagcca ggctctgtgc ttctgccttt 2041 aaggcctgtt ctcagcacaa tgtctcaaaa ataggtcata tcctgccact cccgtcgcag 2101 agccctttaa tggttccaaa ccctaagtcc acacatagcc cctggctctg gcatctctcc 2161 agccccactg gccccgagct gcttgactca ccggcttcct atttgatgca cccaggcccc 2221 cttgtggcca actccctccc cttctcactg aggcagaagc actgaggtgg gctggacatg 2281 ggtgccctcc acgtccctca tatccccagg cacactctgg cctcaggttt tgccctggcc 2341 atgtcatcta cctggagtgg gccctcccct tcttcaggcc ttgaatcaaa agccactttg 2401 ttaggcgagg atttcccaga ccactcatca cattaaaaaa tattttgaaa ac INFORMATION FOR SEQ ID NO: 2
LENGTH: 2452 bases
TYPE: Nucleic acid NATURE OF STRAND: strand
TOPOLOGY: Linear
TYPE OF MOLECULE: mRNA
SOURCE OF ORIGIN:
ORGANISM: Human (Homo sapiens) TYPE OF FABRIC: Ramos cell
DESCRIPTION OF THE SEQUENCE: SEQ ID NO: 2
1 tccctctgcg ttcgctccgc gctgctggag gctgtcgtcc caatgctccc caaacggcgg
61 cgagcgcggg tcgggtcccc tagcggcgat gccgcttcct ccacgccgcc ctcgacgcgc
121 ttcccgggag tcgccatcta cctggtcgag cctcgcatgg gtcgcagccg ccgggccttc
181 ctcacaggcc tggcgcgctc caaaggcttc cgcgtccttg acgcctgcag ctccgaagcg
241 acacatgttg tgatggaaga gacctcagca gaggaggccg tcagctggca ggagcgcagg
301 atggcagctg ctcccccggg ttgcaccccc ccagctctgc tggacataag ctggttaaca
361 gagagcctgg gagctgggca gcctgtacct gtggagtgcc ggcaccgcct ggaggtggct
421 gggccaagga aggggcctct gagcccagca tggatgcctg cctatgcctg ccagcgccct
481 acgcccctca cacaccacaa cactggcctc tccgaggctc tggagatact ggccgaggca
541 gcaggctttg aaggcagtga gggccgcctc ctcaccttct gcagagcagc ctcggtgctc
601 aaggcccttc ccagccctgt cacaaccctg agccagctgc aggggcttcc ccactttgga
661 gaacactcct ctagggttgt ccaggagctg ctggagcatg gagtgtgtga ggaggtggag
721 agagttcggc gctcagagag gtaccagacc atgaagctct tcacccagat cttcggggtc
781 ggtgtgaaga ctgctgaccg gtggtaccgg gaaggactgc gaaccttaga tgacctccga
841 gagcagcccc agaaactaac ccaacagcag aaagcggggc tccagcacca ccaggacctg
901 agcaccccag tcctgcggtc cgatgtagat gccctgcagc aggtggtgga ggaagctgtg
961 gggcaggccc tgcctggggc caccgtcacg ctgaccggcg gcttccgcag ggggaagttg 1021 cagggccatg acgtggactt cctcatcacc caccccaagg agggtcagga ggcggggctg 1081 ctgcctagag tgatgtgccg cctgcaggac cagggcctca tcctgtacca ccagcaccag 1141 cacagctgct gtgagtcccc tacccgcctg gcccaacaga gccacatgga cgcttttgag 1201 agaagtttct gcattttccg cctaccacaa cctccagggg ctgctgtggg gggatccacg 1261 aggccctgcc catcctggaa ggccgtgaga gtggacttgg tagttgcacc cgtcagccag 1321 ttccctttcg ccctgctcgg ttggactggc tccaagcttt tccagcggga gctgcgccgc 1381 ttcagccgga aggagaaggg cctgtggctg aacagccatg ggctgtttga cccggagcag 1441 aagacatttt tccaagcggc ttcagaggaa gacatcttca gacacctggg ccttgagtac 1501 cttcctccag agcagagaaa cgcctgagcc tgcctgtgtc ccccacttcc actcaggaaa 1561 ttgggctgcc cccaacctgg ccactgaatg tctccaggca gatatgctgc cccctgaccc 1621 ccaccttcac ccctccccgc caaggcctgg ctcttcccgg aggtcaattg tgcctgcagg 1681 atcagttgag cccctgctgg tgtgctgcag ggtgtgatga ggtgggagcc ctcagtcctg 1741 cagtcatgaa tggcaagtgg tccctgatgt gcagtgtctc attagttgca ctgcagttaa 1801 ct gtggctcc tgcagggcac cctgcccaga atgcccagaa gagaaccatg catacctgca 1861 ctgcatttga gagccatgag ctggaggctg tggttcgtgc cagcaaggag cctactgtct 1921 ggtgtgctgt aggcatctgg agagggagag ggcctgggta ggagctggga ggaagataat 1981 tttcaactat ggggcttcag tactgcagcg ccccgagcca ggctctgtgc ttctgccttt 2041 aaggcctgtt ctcagcacaa tgtctcaaaa ataggtcata tcctgccact cccgtcgcag 2101 agccctttaa tggttccaaa ccctaagtcc acacatagcc cctggctctg gcatctctcc 2161 agccccactg gccccgagct gcttgactca ccggcttcct atttgatgca cccaggcccc 2221 cttgtggcca actccctccc cttctcactg aggcagaagc actgaggtgg gctggacatg 2281 ggtgccctcc acgtccctca tatccccagg cacactctgg cctcaggttt tgccctggcc 2341 atgtcatcta cctggagtgcgggccccggccccgcccc

INFORMATION POUR SEQ ID NO:3
LONGUEUR : 496
TYPE : Acide aminé
TOPOLOGIE : Linéaire
TYPE DE MOLÉCULE : DESCRIPTION DE LA SÉQUENCE : ID NO:3 "MLPKRRRVRAGSPHSAVDSSTPPSWRFPDVAIYLAEPRMGRSR RAFLTRLARSKGFRVLDAYSSKVTHWMEGTSAKEAICWQKNMDALPTGCPQPALLDI SWFTESMAAGQPVPEEGRHHLEVAEPRKEPPVSASMPAYACQRPSPLTHHNTLLSEAL ETLAEAAGFEANEGRLLSFSRAASVLKSLPCPVASLSQLHGLPYFGEHSTRVIQELLE HGTCEEVKQVRCSERYQTMKLFTQVFGVGVKTANRWYQEGLRTLDELREQPQRLTQQQ KAGLQYYQDLSTPVRRADAEALQQLIEAAVRQTLPGATVTLTGGFRRGKLQGHDVDFL ITHPEEQEVGLLPKVMSCLQSQGLVLYHQYHRSHLADSAHNLRQRSSTMDAFERSFC ILGLPQPQQAALAGALPPCPTWKAVRVDLWTPSSQFPFALLGWTGSQFFERELRRFS RQEKGLWLNSHGLFDPEQKRVFHATSEEDVFRLLGLKYLPPEQRNA" INFORMATION POUR SEQ ID NO:4 LONGUEUR : 494 TYPE: Acide aminé TOPOLOGIE : Linéaire TYPE DE MOLÉCULE : DESCRIPTION DE LA SÉQUENCE: SEQ ID NO:4 "MLPKRRRARVGSPSGDAASSTPPSTRFPGVAIYLVEPRMGRSRR AFLTGLARSKGFRVLDACSSEATHWMEETSAEEAVSWQERRMAAAPPGCTPPALLDI SWLTESLGAGQPVPVECRHRLEVAGPRKGPLSPAWMPAYACQRPTPLTHHNTGLSEAL EILAEAAGFEGSEGRLLTFCRAASVLKALPSPVTTLSQLQGLPHFGEHSSRWQELLE HGVCEEVERVRRSERYQTMKLFTQIFGVGVKTADRWYREGLRTLDDLREQPQKLTQQQ KAGLQHHQDLSTPVLRSDVDALQQWEEAVGQALPGATVTLTGGFRRGKLQGHDVDFL ITHPKEGQEAGLLPRVMCRLQDQGLILYHQHQHSCCESPTRLAQQSHMDAFERSFCIF RLPQPPGAAVGGSTRPCPSWKAVRVDLVVAPVSQFPFALLGWTGSKLFQRELRRFSRK EKGLWLNSHGLFDPEQKTFFQAASEEDIFRHLGLEYLPPEQRNA" INFORMATION FOR SEQ ID NO: 3
LENGTH: 496
TYPE: Amino acid
TOPOLOGY: Linear
MOLECULE TYPE: SEQUENCE DESCRIPTION: ID NO: 3 "MLPKRRRVRAGSPHSAVDSSTPPSWRFPDVAIYLAEPRMGRSR RAFLTRLARSKGFRVLDAYSSKVTHWMEGTSAKEAICWQKNMDALPTGCPQPALLDI SWFTESMAAGQPVPEEGRHHLEVAEPRKEPPVSASMPAYACQRPSPLTHHNTLLSEAL ETLAEAAGFEANEGRLLSFSRAASVLKSLPCPVASLSQLHGLPYFGEHSTRVIQELLE HGTCEEVKQVRCSERYQTMKLFTQVFGVGVKTANRWYQEGLRTLDELREQPQRLTQQQ KAGLQYYQDLSTPVRRADAEALQQLIEAAVRQTLPGATVTLTGGFRRGKLQGHDVDFL ITHPEEQEVGLLPKVMSCLQSQGLVLYHQYHRSHLADSAHNLRQRSSTMDAFERSFC ILGLPQPQQAALAGALPPCPTWKAVRVDLWTPSSQFPFALLGWTGSQFFERELRRFS RQEKGLWLNSHGLFDPEQKRVFHATSEEDVFRLLGLKYLPPEQRNA" INFORMATION FOR SEQ ID NO: 4 LENGTH: 494 TYPE: amino acid TOPOLOGY: linear MOLECULE TYPE: SEQUENCE DESCRIPTION: SEQ ID NO: 4 "MLPKRRRARVGSPSGDAASSTPPSTRFPGVAIYLVEPRMGRSRR AFLTGLARSKGFRVLDACSSEATHWMEETSAEEAVSWQERRMAAAPPGCTPPALLDI SWLTESLGAGQPVPVECRHRLEVAGPRKGPLSPAWMPAYACQRPTPLTHHNTGLSEAL EILAEAAGFEGSEGRLLTFCRAASVLKALPSPVTTLSQLQGLPHFGEHSSRWQELLE HGVCEEVERVRRSERYQTMKLFTQIFGVGVKTADRWYREGLRTLDDLREQPQKLTQQQ KAGLQHHQDLSTP VLRSDVDALQQWEEAVGQALPGATVTLTGGFRRGKLQGHDVDFL ITHPKEGQEAGLLPRVMCRLQDQGLILYHQHQHSCCESPTRLAQQSHMDAFRFQQFFQQFFKKFRWKFRWKFRQRFRWKFRQRFKQRRK

Claims

REVENDICATIONS 1. Séquence d'ARNm codant pour une ADN polymérase à activité de mutase, qui possède la séquence nucléotidique SEQ ID NO:1 ou SEQ ID NO:2, codant pour la séquence d'acides aminés SEQ ID NO:3 et SEQ ID NO:4 respectivement. CLAIMS 1. Sequence of mRNA coding for a DNA polymerase with mutase activity, which has the nucleotide sequence SEQ ID NO: 1 or SEQ ID NO: 2, coding for the amino acid sequence SEQ ID NO: 3 and SEQ ID NO: 4 respectively.

2. Séquence d'ARNm selon la revendication 1, dans laquelle ladite mutase a une séquence d'acides aminés correspondant à la séquence SEQ ID NO:3 de 496 acides aminés. 2. The mRNA sequence according to claim 1, wherein said mutase has an amino acid sequence corresponding to the sequence SEQ ID NO: 3 of 496 amino acids.

3. Séquence d'ARNm selon la revendication 1, dans laquelle ladite mutase a une séquence d'acides aminés correspondant à la séquence SEQ ID NO:4 de 494 acides aminés. 3. The mRNA sequence according to claim 1, wherein said mutase has an amino acid sequence corresponding to the sequence SEQ ID NO: 4 of 494 amino acids.

4. Séquence d'ARNm selon l'une des revendications 1 ou 2, caractérisée en ce qu'elle est d'origine murine. 4. Sequence of mRNA according to one of claims 1 or 2, characterized in that it is of murine origin.

5. Séquence d'ARNm selon l'une des revendications 1 ou 3, caractérisée en ce qu'elle est d'origine humaine. 5. Sequence of mRNA according to one of claims 1 or 3, characterized in that it is of human origin.

6. Séquence selon la revendication 1, caractérisée en ce qu'elle code pour une mutase qui est un homologue de désoxynucléotidyltransférase terminale. 6. Sequence according to claim 1, characterized in that it codes for a mutase which is a terminal deoxynucleotidyltransferase homolog.

7. ADN polymérase recombinante, dénommée mutase, caractérisée en ce qu'elle est homologue d'une désoxynucléotidyltransférase terminale et est une enzyme d'environ 50-52.000 daltons. 7. Recombinant DNA polymerase, called mutase, characterized in that it is homologous with a terminal deoxynucleotidyltransferase and is an enzyme of about 50-52,000 daltons.

8. ADN polymérase selon la revendication 7, caractérisée en ce qu'elle a une masse d'environ 50-52.000 daltons 8. DNA polymerase according to claim 7, characterized in that it has a mass of approximately 50-52,000 daltons

et respectivement une longueur de 496 acides aminés et la séquence d'acides aminés SEQ ID NO: 3 ou une longueur de 494 acides aminés et la séquence d'acides aminés SEQ ID NO:4. and respectively a length of 496 amino acids and the amino acid sequence SEQ ID NO: 3 or a length of 494 amino acids and the amino acid sequence SEQ ID NO: 4.

9. Vecteur d'expression comprenant une séquence d'ARNm selon l'une quelconque des revendications 1 à 6. 9. Expression vector comprising an mRNA sequence according to any one of claims 1 to 6.

10. Cellule hôte recombinante contenant un vecteur selon la revendication 9. 10. Recombinant host cell containing a vector according to claim 9.

11. Cellule hôte recombinante selon la revendication 10, caractérisée en ce qu'elle est E. coli. 11. Recombinant host cell according to claim 10, characterized in that it is E. coli.

12. Cellule hôte recombinante selon la revendication 10, caractérisée en ce qu'elle est une cellule lymphoïde murine. 12. Recombinant host cell according to claim 10, characterized in that it is a murine lymphoid cell.

13. Anticorps monoclonal qui reconnaît l'ADN polymérase à activité de mutase selon la revendication 7. 13. A monoclonal antibody which recognizes DNA polymerase with mutase activity according to claim 7.

14. Anticorps monoclonal selon la revendication 13, caractérisé en ce qu'il reconnaissant les séquences d'acides aminés SEQ ID NO:3 ou SEQ ID NO:4. 14. Monoclonal antibody according to claim 13, characterized in that it recognizes the amino acid sequences SEQ ID NO: 3 or SEQ ID NO: 4.

15. Procédé pour la production d'une ADN polymérase recombinante selon la revendication 7 ou 8, caractérisé en ce qu'il comporte la mise en culture d'une cellule hôte selon l'une quelconque des revendications 10 à 12 et l'isolement de la mutase recombinante du milieu de culture ou des cellules.15. Method for the production of a recombinant DNA polymerase according to claim 7 or 8, characterized in that it comprises the cultivation of a host cell according to any one of claims 10 to 12 and the isolation of the recombinant mutase of the culture medium or of the cells.