FR2795959A1 - Produit cosmetique ou pharmaceutique du type qui contient un principe actif pour lutter contre d'adiposite - Google Patents
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Abstract
La présente invention concerne un produit cosmétique ou pharmaceutique du type qui contient un principe actif pour lutter contre l'adiposité. Il est caractérisé en ce que ledit principe actif est constitué d'au moins un acide gras mis en oeuvre pour présenter une activité inhibitrice sur la lipogenèse des adipocytes humains, ledit au moins acide gras étant issu d'un extrait lipidique de plantes ou d'algues.
Description
<Desc/Clms Page number 1>
La présente invention concerne un produit cosmétique ou pharmaceutique qui contient un principe actif pour lutter contre l'adiposité et ainsi affiner la silhouette.
On connaît déjà de tels produits et on sait que les principes actifs utilisés présentent une activité lipolytique par laquelle ils stimulent la dégradation (ou lyse) des graisses stockées dans les adipocytes humains, notamment sous forme de triglycérides, et favorisent l'élimination des produits de cette dégradation, notamment les acides gras et les glycérols.
Par exemple, dans le document du brevet français n 98 02152, on utilise en tant que principe actif un groupement pyrone qui a pour effet d'activer la phosphorylation d'une enzyme du type lipase pour la dégradation des triglycérides en acides gras. Par exemple, ce groupement pyrone est la mangostine extraite d'un arbre de l'espèce Garcinia Mangostana.
On sait également que, dans les adipocytes, la lipolyse est en compétition avec la lipogénèse qui consiste en la formation des graisses, notamment des triglycérides, et qui met en jeu toute une série de réactions biochimiques faisant intervenir des protéines à activité enzymatique telles l'Acyl-CoA synthétase et l'acide gras synthétase
connue également sous le nom FAS (fatty acicsynthase).
connue également sous le nom FAS (fatty acicsynthase).
Le but de la présente invention est de proposer un produit cosmétique qui contient un principe actif pour lutter contre l'adiposité et qui soit nouveau, notamment par rapport aux produits dont le principe actif favorise la lipolyse.
A cet effet, un produit cosmétique selon la présente invention contient en tant que principe actif au moins un acide gras mis en #uvre pour présenter une activité inhibitrice sur la lipogénèse des adipocytes humains, ledit au moins acide gras étant issu d'un extrait lipidique de plantes ou d'algues.
Comme cela est montré ci-dessous, un tel produit cosmétique permet de limiter l'accumulation des acides gras dans les adipocytes humains. On pense que les acides gras contenus dans ledit extrait sont responsables d'un effet d'inhibition de l'action d'une enzyme qui intervient dans la lipogénèse, notamment la synthèse des acides gras par l'acide gras synthétase FAS. En utilisant un produit qui contient un tel principe actif, on inhibe ou limite pour le moins la lipogénèse des acides gras et on diminue ainsi leur concentration dans les adipocytes.
On a pu montrer que les acides gras ayant un nombre de carbones compris entre 12 et 22 peuvent être utilisés. Il en est de même des acides gras présentant un degré
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d'insaturation compris entre 0 et 5 Il en est encore de même des acides gras libres, ou monoglycériques, ou diglycériques ou triglycériques
Selon une autre caractéristique de l'invention, ledit extrait est un extrait lipidique d'une algue ou d'une microalgue
On a réalisé à titre d'exemple un produit cosmétique à base d'un extrait lipidique d'une microalgue qui est, en l'occurrence, une cyanobactérie nommée Odontella aurita. Elle fait partie des diatomés dont la classe est celle des Bacilariophycées, l'ordre celui des Bidulphiales, et la famille celle des Eurodiscaceaes.
Selon une autre caractéristique de l'invention, ledit extrait est un extrait lipidique d'une algue ou d'une microalgue
On a réalisé à titre d'exemple un produit cosmétique à base d'un extrait lipidique d'une microalgue qui est, en l'occurrence, une cyanobactérie nommée Odontella aurita. Elle fait partie des diatomés dont la classe est celle des Bacilariophycées, l'ordre celui des Bidulphiales, et la famille celle des Eurodiscaceaes.
Cette microalgue particulière contient des acides gras polyinsaturés tels que
l'acide eicopentanoïque (5, 8, 11, 14, 17- eicosapentaenoïc acid) connu sous le nom EPA en une concentration de l'ordre de 22 % des acides gras totaux, soit approximativement 2 % du poids sec de la microalgue. Elle est donc riche en EPA.
l'acide eicopentanoïque (5, 8, 11, 14, 17- eicosapentaenoïc acid) connu sous le nom EPA en une concentration de l'ordre de 22 % des acides gras totaux, soit approximativement 2 % du poids sec de la microalgue. Elle est donc riche en EPA.
Cette microalgue est obtenue par culture contrôlée en bassins de plein air (de type race way )
La présente invention concerne également un procédé de préparation d'un produit qui contient en tant que principe actif un extrait lipidique de plantes ou d'algues. Il est caractérisé en ce que ledit extrait est réalisé par extraction au gaz carbonique CO2 supercritique à partir de ladite plante préalablement séchée ou de ladite algue préalablement congelée qui est ensuite lyophilisée.
La présente invention concerne également un procédé de préparation d'un produit qui contient en tant que principe actif un extrait lipidique de plantes ou d'algues. Il est caractérisé en ce que ledit extrait est réalisé par extraction au gaz carbonique CO2 supercritique à partir de ladite plante préalablement séchée ou de ladite algue préalablement congelée qui est ensuite lyophilisée.
On va maintenant décrire le mode opératoire des expériences qui ont été menées pour prouver l'effet inhibiteur des acides gras sur la néosynthèse des lipides.
Dans toutes ces expériences, les adipocytes ont été isolés à partir de plasties abdominales prélevées chez des femmes de 34 à 52 ans. Les expériences ont eu lieu le jour du prélèvement ou dès le lendemain du prélèvement. Les fragments de tissus adipeux ont été incubés pendant 30 minutes à 37 C en présence de collagènase, puis les adipocytes isolés ont été lavés et repris dans un milieu MEM tamponné au bicarbonate, en présence d'antibiotiques (pénicilline/streptomycine), de glutamine (2 mM), et d'albumine bovine sérique délipidée (0,5%)
A 90 l d'une même suspension d'adipocytes de concentration prédéterminée, ont été ajoutés 100 l d'un milieu de culture, puis après une pré-incubation d'environ 1 heure, 10 l d'un marqueur de [2-14C]-acétate 50 uCi/ml. Les échantillons ainsi constitués subissent une incubation à 37 C, 5 % CO2, pendant 4 heures, après quoi, ils sont soumis à une congélation à - 80 C Les expériences sont toujours réalisées en double ou triple
A 90 l d'une même suspension d'adipocytes de concentration prédéterminée, ont été ajoutés 100 l d'un milieu de culture, puis après une pré-incubation d'environ 1 heure, 10 l d'un marqueur de [2-14C]-acétate 50 uCi/ml. Les échantillons ainsi constitués subissent une incubation à 37 C, 5 % CO2, pendant 4 heures, après quoi, ils sont soumis à une congélation à - 80 C Les expériences sont toujours réalisées en double ou triple
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Les lipides sont ensuite extraits conformément à la méthode de Bligh and Dyer (extraction méthanol/chloroforme/eau), séchés sous azote et la radioactivité incorporée (Radioactivité résultant de l'incorporation du carbone 14C dans les lipides néosynthétisés dans les adipocytes) est comptée en scintillation liquide. Les données brutes de comptage ont été transférées et traitées sous un logiciel approprié; les comparaisons intergroupes ont été réalisées par analyse de variance (ANOVA) à l'aide du test de comparaison multiple de la méthode de Dunnett.
Il est tenu compte du bruit de fond (radioactivité mesurée au temps to).
Ce mode opératoire a été validé en utilisant la cérulénine qui est connue pour inhiber l'expression de l'acide gras synthétase.
L'incorporation d'acétate après 4 heures d'incubation est forte (133000 cpm); le bruit de fond à to était négligeable (1 % du temps 4 heures).
On a ainsi pu constater qu'à des concentrations de 10 M (gmoles par litre) et 1 M, la cérulénine inhibe efficacement l'incorporation (respectivement 93 et 56 % d'inhibition). Par contre, elle est inactive à une concentration de 0,1 M. Ces résultats valident par conséquent le mode opératoire ci-dessus.
De plus, on a également pu constater que la présence d'huile minérale, telle que l'huile de vaseline, dans le milieu de culture n'a pas inhibé l'incorporation ni l'extraction des lipides adipocytaires. L'huile de vaseline est donc utilisée comme milieu tampon dans lequel notamment les acides gras testés seront préalablement dilués.
On a cherché à mettre en évidence l'activité inhibitrice des acides gras sur la néosynthèse des lipides produits par les adipocytes humains et à déterminer les propriétés de ceux qui donnent une activité maximale.
On a donc, dans un premier temps, étudier l'effet de la longueur de la chaîne carbonée des acides gras testés.
Pour former le milieu d'incubation, des acides gras à 12,14, 16,18, 20 et 22 carbones ont été dilués dans de l'huile de vaseline dont on rappelle que la présence n'inhibe pas l'incorporation ni l'extraction des lipides adipocytaires. Ce milieu a donc été mélangé à une suspension de 90 l d'adipocytes et a été pré-incubé pendant 1
heure. Puis, mélangé à IOjj.1 d'un marqueur de [2-14C]-acétate 50 Ci/ml, il a été incubé pendant 4 heures
heure. Puis, mélangé à IOjj.1 d'un marqueur de [2-14C]-acétate 50 Ci/ml, il a été incubé pendant 4 heures
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L'incorporation d'acétate après 4 heures de marquage est très forte (de l'ordre de 200 000 cpm); le bruit de fond à to est négligeable (1 % du temps 4 heures). Ce bruit de fond a été soustrait dans les résultats finaux.
Ces résultats sont donnés dans le tableau 1 ci-dessous.
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<tb>
<tb> traitement <SEP> cpm <SEP> moyenne <SEP> cpm-contrôle <SEP> tO <SEP> % <SEP> témoin
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<tb> 4579
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<tb> 203385
<tb> EPA <SEP> (C20: <SEP> 5) <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 5945 <SEP> 7634 <SEP> 1357 <SEP> 1
<tb> 9323
<tb> C12:01 <SEP> mM <SEP> 40049 <SEP> 37894 <SEP> 31616 <SEP> 17
<tb> 35738
<tb>
<tb> traitement <SEP> cpm <SEP> moyenne <SEP> cpm-contrôle <SEP> tO <SEP> % <SEP> témoin
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<tb>
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<tb> 144895
<tb>
Tableau 1 : effets de la longueur de la chaîne carbonée des acides gras sur l'incorporation de [14C]-acétate dans les lipides adipocytaires sd, écart-type.
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On notera que le taux d'inhibition est le complément du taux d'incorporation donné en % témoin dans le tableau 1 ci-dessus (Taux d'inhibition = 100 - % témoin).
On peut constater que tous les acides gras testés ont inhibé de façon dose- dépendante l'incorporation d'acétate par rapport au témoin huile de vaseline. A la plus faible concentration testée (10 M), l'inhibition était d'environ 10-20 % pour les acides gras saturés C12 0 à C16:0, et 30-40 % pour les acides gras saturés Cl 8:0 et C20:0. A la concentration moyenne de lOOuM, l'inhibition est de 25 % pour les acides gras C12.0 et C14:0, et 45-50 % pour les acides gras C16:0 et C18:0. Elle est supérieure à 60 % pour l'acide gras C20 :0 l'exception de l'acide gras C22 :0, tousles acides gras, à la plus forte concentration de 1 mM, ont inhibé l'incorporation avec une efficacité de l'ordre de 80-85 %.
L'acide gras C22 0 à la concentration de 1 mM a inhibé l'incorporation de seulement 40 %.
On peut donc conclure que l'inhibition de la lipogénèse est optimale pour les acides gras à 18 et 20 carbones mais qu'elle diminue ensuite pour les acides gras à 22 carbones.
L'effet du degré d'insaturation a été évalué sur les acides gras comportant 20 carbones, à savoir les acides gras notés C20 0, C20 2, C20 :3, C20 :4 et C20 :5. rappelle que ces acides gras à 20 carbones sont parmi les plus efficaces, comme cela a été démontré dans l'expérience précédente Les résultats sont donnés dans le tableau II ci-dessous.
<Desc/Clms Page number 7>
<tb>
<tb> traitement <SEP> cpm <SEP> moyenne <SEP> cpm-contrôle <SEP> tO <SEP> % <SEP> témoin
<tb> contrôle <SEP> tO <SEP> 1564 <SEP> 1416 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 1268
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<tb> C20 <SEP> :5 <SEP> (EPA) <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 5215 <SEP> 5314 <SEP> 3898 <SEP> 8
<tb> 5412
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<tb> 6638
<tb> C20:5 <SEP> (EPA) <SEP> 10 <SEP> pM <SEP> 6463 <SEP> 6272 <SEP> 4856 <SEP> 10
<tb> 6080
<tb> C20:0 <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 2402 <SEP> 2371 <SEP> 955 <SEP> 2
<tb> 2339
<tb> C20:0 <SEP> 100 <SEP> M <SEP> 2930 <SEP> 2977 <SEP> 1561 <SEP> 3
<tb> 3024
<tb> C20:010 <SEP> pM <SEP> 21989 <SEP> 21730 <SEP> 20314 <SEP> 42
<tb> 21471
<tb> C20:21 <SEP> mM <SEP> 2776 <SEP> 2843 <SEP> 1427 <SEP> 3
<tb> 2910
<tb> C20:2 <SEP> 100 <SEP> pM <SEP> 6373 <SEP> 6771 <SEP> 5355 <SEP> 11
<tb> 7168
<tb> C20:2 <SEP> 10 <SEP> M <SEP> 11946 <SEP> 13220 <SEP> 11804 <SEP> 24
<tb> 14494
<tb> C20:3 <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 5386 <SEP> 5063 <SEP> 3647 <SEP> 8
<tb> 4739
<tb> C20:3 <SEP> 100 <SEP> M <SEP> 4990 <SEP> 4434 <SEP> 3018 <SEP> 6
<tb> 3877
<tb> C20 <SEP> :3 <SEP> 10 <SEP> M <SEP> 12854 <SEP> 15938 <SEP> 14522 <SEP> 30
<tb> 19021
<tb> C20:41 <SEP> mM <SEP> 6179 <SEP> 6373 <SEP> 4957 <SEP> 10
<tb> 6567
<tb> C20:4100 <SEP> M <SEP> 8777 <SEP> 7840 <SEP> 6424 <SEP> 13
<tb> 6902
<tb> C20:4 <SEP> 10 <SEP> M <SEP> 10315 <SEP> 9460 <SEP> 8044 <SEP> 17
<tb> 8604
<tb>
Tableau II : effets du nombre d'insaturation des acides gras sur l'incorporation de [14C]-acétate dans les lipides adipocytaires. sd, écart-type
<tb> traitement <SEP> cpm <SEP> moyenne <SEP> cpm-contrôle <SEP> tO <SEP> % <SEP> témoin
<tb> contrôle <SEP> tO <SEP> 1564 <SEP> 1416 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 1268
<tb> témoin <SEP> (4h <SEP> incubation) <SEP> 48905 <SEP> 49970 <SEP> 48554 <SEP> 100
<tb> 51035
<tb> C20 <SEP> :5 <SEP> (EPA) <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 5215 <SEP> 5314 <SEP> 3898 <SEP> 8
<tb> 5412
<tb> C20:5(EPA)100pM <SEP> 6169 <SEP> 6404 <SEP> 4988 <SEP> 10
<tb> 6638
<tb> C20:5 <SEP> (EPA) <SEP> 10 <SEP> pM <SEP> 6463 <SEP> 6272 <SEP> 4856 <SEP> 10
<tb> 6080
<tb> C20:0 <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 2402 <SEP> 2371 <SEP> 955 <SEP> 2
<tb> 2339
<tb> C20:0 <SEP> 100 <SEP> M <SEP> 2930 <SEP> 2977 <SEP> 1561 <SEP> 3
<tb> 3024
<tb> C20:010 <SEP> pM <SEP> 21989 <SEP> 21730 <SEP> 20314 <SEP> 42
<tb> 21471
<tb> C20:21 <SEP> mM <SEP> 2776 <SEP> 2843 <SEP> 1427 <SEP> 3
<tb> 2910
<tb> C20:2 <SEP> 100 <SEP> pM <SEP> 6373 <SEP> 6771 <SEP> 5355 <SEP> 11
<tb> 7168
<tb> C20:2 <SEP> 10 <SEP> M <SEP> 11946 <SEP> 13220 <SEP> 11804 <SEP> 24
<tb> 14494
<tb> C20:3 <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 5386 <SEP> 5063 <SEP> 3647 <SEP> 8
<tb> 4739
<tb> C20:3 <SEP> 100 <SEP> M <SEP> 4990 <SEP> 4434 <SEP> 3018 <SEP> 6
<tb> 3877
<tb> C20 <SEP> :3 <SEP> 10 <SEP> M <SEP> 12854 <SEP> 15938 <SEP> 14522 <SEP> 30
<tb> 19021
<tb> C20:41 <SEP> mM <SEP> 6179 <SEP> 6373 <SEP> 4957 <SEP> 10
<tb> 6567
<tb> C20:4100 <SEP> M <SEP> 8777 <SEP> 7840 <SEP> 6424 <SEP> 13
<tb> 6902
<tb> C20:4 <SEP> 10 <SEP> M <SEP> 10315 <SEP> 9460 <SEP> 8044 <SEP> 17
<tb> 8604
<tb>
Tableau II : effets du nombre d'insaturation des acides gras sur l'incorporation de [14C]-acétate dans les lipides adipocytaires. sd, écart-type
<Desc/Clms Page number 8>
Comme on peut le constater, l'incorporation d'acétate après 4 heures de marquage est forte (de l'ordre de 50 000 cpm), le bruit de fond à to est faible (2-3 % du temps 4 heures). Ce bruit de fond a été soustrait dans les résultats finaux.
Tous les acides gras C20:0, C20 :2, C20:3 et C20:4 ont inhibé de façon dosedépendante l'incorporation d'acétate par rapport au témoin huile de vaseline. Quant à l'acide gras C20 :5, appelé EPA (Acide eicopentanoïque), il a, en solution huileuse aux 3 concentrations testées (0.01 mM; 0. 1 mM et 1 mM, en huile de vaseline), fortement inhibé l'incorporation (90 % d'inhibition).
On peut donc constater que l'inhibition de la lipogénèse croît avec le degré d'insaturation.
L'effet du type de liaison des acides gras concernés a également été évalué, notamment sur les acides gras à 18 carbones et à 3 insaturations, à savoir l'acide gras libre C18:3L, l'acide gras monoglycérique C18:3MG, l'acide gras diglycérique C 18: 3DG et l'acide gras triglycérique C18:3TG. Les résultats sont donnés dans le tableau III ci-dessous.
<Desc/Clms Page number 9>
<tb>
<tb> traitement <SEP> cpm <SEP> moyenne <SEP> cpm-contrôle <SEP> tO <SEP> % <SEP> témoin
<tb> contrôle <SEP> tO <SEP> 5277 <SEP> 5241 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 5205
<tb> témoin <SEP> 230031 <SEP> 235043 <SEP> 229802 <SEP> 100
<tb> 240055
<tb> C20:5(EPA) <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 9362 <SEP> 9400 <SEP> 4159 <SEP> 2
<tb> 9437
<tb> C20:5 <SEP> (EPA) <SEP> 100 <SEP> pM <SEP> 88429 <SEP> 87278 <SEP> 82037 <SEP> 36
<tb> 86126
<tb> C20 <SEP> :5 <SEP> (EPA) <SEP> 10 <SEP> M <SEP> 160638 <SEP> 184267 <SEP> 179026 <SEP> 78
<tb> 207895
<tb> C18 <SEP> :3TG <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 225489 <SEP> 232519 <SEP> 227278 <SEP> 99
<tb> 239549
<tb> C18:3TG <SEP> 100 <SEP> pM <SEP> 222495 <SEP> 224591 <SEP> 219350 <SEP> 95
<tb> 226687
<tb> C18:3TG <SEP> 10 <SEP> pM <SEP> 222768 <SEP> 220470 <SEP> 215229 <SEP> 94
<tb> 218171
<tb> C18:3DG <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 108249 <SEP> 110324 <SEP> 105083 <SEP> 46
<tb> 112398
<tb> C18:3DG <SEP> 100 <SEP> M <SEP> 189825 <SEP> 174688 <SEP> 169447 <SEP> 74
<tb> 159550
<tb> C18:3DG <SEP> 10 <SEP> M <SEP> 221555 <SEP> 226390 <SEP> 221149 <SEP> 96
<tb> 231225
<tb> C18:3MG <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 16297 <SEP> 15884 <SEP> 10643 <SEP> 5
<tb> 15471
<tb> C18:3MG <SEP> 100 <SEP> pM <SEP> 46557 <SEP> 46228 <SEP> 40987 <SEP> 18
<tb> 45898
<tb> C18:3MG <SEP> 10 <SEP> M <SEP> 208257 <SEP> 211398 <SEP> 206157 <SEP> 90
<tb> 214539
<tb> C18:3 <SEP> L <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 18893 <SEP> 19384 <SEP> 14143 <SEP> 6
<tb> 19874
<tb> C18:3 <SEP> L <SEP> 100 <SEP> pM <SEP> 151243 <SEP> 160452 <SEP> 155211 <SEP> 68
<tb> 169661
<tb> C18:3 <SEP> L <SEP> 10 <SEP> pM <SEP> 215874 <SEP> 217389 <SEP> 212148 <SEP> 92
<tb> 218904
<tb>
<tb> traitement <SEP> cpm <SEP> moyenne <SEP> cpm-contrôle <SEP> tO <SEP> % <SEP> témoin
<tb> contrôle <SEP> tO <SEP> 5277 <SEP> 5241 <SEP> 0 <SEP> 0
<tb> 5205
<tb> témoin <SEP> 230031 <SEP> 235043 <SEP> 229802 <SEP> 100
<tb> 240055
<tb> C20:5(EPA) <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 9362 <SEP> 9400 <SEP> 4159 <SEP> 2
<tb> 9437
<tb> C20:5 <SEP> (EPA) <SEP> 100 <SEP> pM <SEP> 88429 <SEP> 87278 <SEP> 82037 <SEP> 36
<tb> 86126
<tb> C20 <SEP> :5 <SEP> (EPA) <SEP> 10 <SEP> M <SEP> 160638 <SEP> 184267 <SEP> 179026 <SEP> 78
<tb> 207895
<tb> C18 <SEP> :3TG <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 225489 <SEP> 232519 <SEP> 227278 <SEP> 99
<tb> 239549
<tb> C18:3TG <SEP> 100 <SEP> pM <SEP> 222495 <SEP> 224591 <SEP> 219350 <SEP> 95
<tb> 226687
<tb> C18:3TG <SEP> 10 <SEP> pM <SEP> 222768 <SEP> 220470 <SEP> 215229 <SEP> 94
<tb> 218171
<tb> C18:3DG <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 108249 <SEP> 110324 <SEP> 105083 <SEP> 46
<tb> 112398
<tb> C18:3DG <SEP> 100 <SEP> M <SEP> 189825 <SEP> 174688 <SEP> 169447 <SEP> 74
<tb> 159550
<tb> C18:3DG <SEP> 10 <SEP> M <SEP> 221555 <SEP> 226390 <SEP> 221149 <SEP> 96
<tb> 231225
<tb> C18:3MG <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 16297 <SEP> 15884 <SEP> 10643 <SEP> 5
<tb> 15471
<tb> C18:3MG <SEP> 100 <SEP> pM <SEP> 46557 <SEP> 46228 <SEP> 40987 <SEP> 18
<tb> 45898
<tb> C18:3MG <SEP> 10 <SEP> M <SEP> 208257 <SEP> 211398 <SEP> 206157 <SEP> 90
<tb> 214539
<tb> C18:3 <SEP> L <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 18893 <SEP> 19384 <SEP> 14143 <SEP> 6
<tb> 19874
<tb> C18:3 <SEP> L <SEP> 100 <SEP> pM <SEP> 151243 <SEP> 160452 <SEP> 155211 <SEP> 68
<tb> 169661
<tb> C18:3 <SEP> L <SEP> 10 <SEP> pM <SEP> 215874 <SEP> 217389 <SEP> 212148 <SEP> 92
<tb> 218904
<tb>
Tableau III: effets du type de liaison des acides gras sur l'incorporation de [14C]-acétate dans les lipides adipocytaires. sd, écart-type.
L'incorporation d'acétate après 4 heures de marquage est très forte (de l'ordre de 230 000 cpm); le bruit de fond à to est faible (< 1 % du temps 4 heures). Ce bruit de fond a été soustrait dans les résultats finaux
<Desc/Clms Page number 10>
Comme on peut le constater, à la plus faible concentration testée (10 M), les acides gras testés n'ont pas d'effet inhibiteur significatif (> 10 %) contrairement à l'EPA (22 % d'inhibition) A 100 M, les acides gras C18:3DG, C18:3MG et C18:3L ont inhibé l'incorporation de respectivement 25 %, 82 % et 32 %. L'acide gras C 18:3MG était donc le plus efficace à cette concentration.
A la plus forte concentration testée (1 mM), l'acide gras C18:3DG a inhibé l'incorporation de 54 %, alors que les acides gras C18:3MG et C18:3L l'ont inhibé d'une quantité supérieure à 95 %, à l'instar de l'EPA (98 %).
On peut également constater qu'aux 3 concentrations testées, l'acide gras triglycérique C18:3TG n'a pas montré d'effet sur l'incorporation d'acétate dans ces conditions expérimentales.
Les acides gras sous forme libre et monoglycérique sont donc plus efficaces que sous forme diglycérique Les acides gras sous forme triglycérique n'ont pas d'effet.
On a également testé un extrait huileux provenant d'une micro-algue contenant des acides gras polyinsaturés, notamment de l'EPA libre (C20:05L) en concentration d'environ 10 %. Cet extrait a été préalablement dilué à 10% dans une huile végétale (HV) ne contenant pas d'EPA. L'extrait testé (ODON) contenait donc environ 1% d'EPA. Plus particulièrement, ont été testés un tel extrait préservé de l'oxydation par la présence d'un anti-oxydant (ODON 0. 5) et un autre extrait sans anti-oxydant (ODON 0). Les extraits huileux ont été dilués dans l'huile de vaseline.
Les résultats sont répertoriés dans le tableau IV ci-dessous.
<Desc/Clms Page number 11>
<tb>
<tb> traitement <SEP> cpm <SEP> sd <SEP> n <SEP> % <SEP> témoin <SEP> p
<tb> témoin <SEP> (4h <SEP> incubation) <SEP> 153449 <SEP> 10449 <SEP> 3 <SEP> 100
<tb> contrôle <SEP> tO <SEP> 1329 <SEP> 282 <SEP> 3 <SEP> 1 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> EPA <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 109708 <SEP> 9435 <SEP> 3 <SEP> 71 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> EPA <SEP> 100 <SEP> M <SEP> 116948 <SEP> 11909 <SEP> 3 <SEP> 76 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> EPA <SEP> 10 <SEP> pM <SEP> 120202 <SEP> 4487 <SEP> 3 <SEP> 78 <SEP> < <SEP> 0.01
<tb> ODON-010 <SEP> % <SEP> 2501 <SEP> 318 <SEP> 3 <SEP> 2 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> ODON-0 <SEP> 1 <SEP> % <SEP> 40092 <SEP> 5846 <SEP> 3 <SEP> 26 <SEP> < <SEP> 0.01
<tb> ODON-0 <SEP> 0.1 <SEP> % <SEP> 33081 <SEP> 6708 <SEP> 3 <SEP> 22 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> ODON-0.510 <SEP> % <SEP> 2855 <SEP> 632 <SEP> 3 <SEP> 2 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> ODON-0.51 <SEP> % <SEP> 44901 <SEP> 1082 <SEP> 3 <SEP> 29 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> ODON-0.5 <SEP> 0.1 <SEP> % <SEP> 36960 <SEP> 4792 <SEP> 3 <SEP> 24 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb>
<tb> traitement <SEP> cpm <SEP> sd <SEP> n <SEP> % <SEP> témoin <SEP> p
<tb> témoin <SEP> (4h <SEP> incubation) <SEP> 153449 <SEP> 10449 <SEP> 3 <SEP> 100
<tb> contrôle <SEP> tO <SEP> 1329 <SEP> 282 <SEP> 3 <SEP> 1 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> EPA <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 109708 <SEP> 9435 <SEP> 3 <SEP> 71 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> EPA <SEP> 100 <SEP> M <SEP> 116948 <SEP> 11909 <SEP> 3 <SEP> 76 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> EPA <SEP> 10 <SEP> pM <SEP> 120202 <SEP> 4487 <SEP> 3 <SEP> 78 <SEP> < <SEP> 0.01
<tb> ODON-010 <SEP> % <SEP> 2501 <SEP> 318 <SEP> 3 <SEP> 2 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> ODON-0 <SEP> 1 <SEP> % <SEP> 40092 <SEP> 5846 <SEP> 3 <SEP> 26 <SEP> < <SEP> 0.01
<tb> ODON-0 <SEP> 0.1 <SEP> % <SEP> 33081 <SEP> 6708 <SEP> 3 <SEP> 22 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> ODON-0.510 <SEP> % <SEP> 2855 <SEP> 632 <SEP> 3 <SEP> 2 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> ODON-0.51 <SEP> % <SEP> 44901 <SEP> 1082 <SEP> 3 <SEP> 29 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> ODON-0.5 <SEP> 0.1 <SEP> % <SEP> 36960 <SEP> 4792 <SEP> 3 <SEP> 24 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb>
Tableau IV : effets d'une huile de micro-algue riche en AG libres, sans antioxydant (ODON-0) et avec anti-oxydant (ODON-0 5) sur l'incorporation de [14C]- acétate dans les lipides adipocytaires Comparaison avec l'EPA sd, écart-type.
<Desc/Clms Page number 12>
Comme on peut le constater sur le tableau V ci-dessus, ces extraits huileux ont fortement inhibé l'incorporation d'acétate : % d'inhibition à la concentration 10 %; 70-80 % d'inhibition aux concentrations 1 % et 0.1%.
Ces résultats ont été confirmés par des mesures en chromatographie en couche mince (CCM) qui ont, de plus, prouvé que ces effets ne proviennent pas d'un quenching (ce contrôle était nécessaire dans la mesure où les produits sont colorés et sont extraits par les solvants utilisés).
Enfin, on a testé seule l'huile végétale HV qui contient des acides gras polyinsaturés, notamment de l'acide linoléique (> 50 %) sous forme triglycéride (C18:2TG). Ce test a été mené conjointement à l'EPA (C20:5), à l'acide sialique (C18:0) et à l'acide linoléique (C 18:2) sous leur forme libre. Ces acides gras ont été dilués dans l'huile de vaseline. Les résultats sont montrés dans le tableau V cidessous.
<Desc/Clms Page number 13>
<tb>
<tb> traitement <SEP> cpm <SEP> sd <SEP> n <SEP> % <SEP> témoin <SEP> p
<tb> contrôle <SEP> tO <SEP> 1125 <SEP> 564 <SEP> 3 <SEP> 2 <SEP> < <SEP> 0.001
<tb> témoin <SEP> (4h <SEP> incubation) <SEP> 53901 <SEP> 4009 <SEP> 3 <SEP> 100 <SEP> -
<tb>
<tb> traitement <SEP> cpm <SEP> sd <SEP> n <SEP> % <SEP> témoin <SEP> p
<tb> contrôle <SEP> tO <SEP> 1125 <SEP> 564 <SEP> 3 <SEP> 2 <SEP> < <SEP> 0.001
<tb> témoin <SEP> (4h <SEP> incubation) <SEP> 53901 <SEP> 4009 <SEP> 3 <SEP> 100 <SEP> -
<tb>
<tb>
<tb> produits <SEP> en <SEP> solutions <SEP> huileuses
<tb> traitement <SEP> cpm <SEP> sd <SEP> n <SEP> % <SEP> témoin <SEP> p
<tb> contrôle <SEP> tO <SEP> 1171 <SEP> 246 <SEP> 3 <SEP> 2 <SEP> < <SEP> 0.001
<tb> témoin <SEP> (4h <SEP> incubation) <SEP> 52584 <SEP> 6038 <SEP> 3 <SEP> 100C20 <SEP> :5 <SEP> (EPA) <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 10500 <SEP> 934 <SEP> 3 <SEP> 20 <SEP> < <SEP> 0.001
<tb> HV <SEP> 9 <SEP> % <SEP> 27660 <SEP> 5044 <SEP> 3 <SEP> 53 <SEP> < <SEP> 0.001
<tb> HV <SEP> 0.9 <SEP> % <SEP> 39960 <SEP> 3882 <SEP> 3 <SEP> 76 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> HV <SEP> 0. <SEP> 09 <SEP> % <SEP> 46438 <SEP> 1149 <SEP> 3 <SEP> 88 <SEP> > <SEP> 0.05
<tb> C18:0 <SEP> (AS) <SEP> 1000 <SEP> M <SEP> 6483 <SEP> 562 <SEP> 3 <SEP> 12 <SEP> < <SEP> 0.001
<tb>
<tb> produits <SEP> en <SEP> solutions <SEP> huileuses
<tb> traitement <SEP> cpm <SEP> sd <SEP> n <SEP> % <SEP> témoin <SEP> p
<tb> contrôle <SEP> tO <SEP> 1171 <SEP> 246 <SEP> 3 <SEP> 2 <SEP> < <SEP> 0.001
<tb> témoin <SEP> (4h <SEP> incubation) <SEP> 52584 <SEP> 6038 <SEP> 3 <SEP> 100C20 <SEP> :5 <SEP> (EPA) <SEP> 1 <SEP> mM <SEP> 10500 <SEP> 934 <SEP> 3 <SEP> 20 <SEP> < <SEP> 0.001
<tb> HV <SEP> 9 <SEP> % <SEP> 27660 <SEP> 5044 <SEP> 3 <SEP> 53 <SEP> < <SEP> 0.001
<tb> HV <SEP> 0.9 <SEP> % <SEP> 39960 <SEP> 3882 <SEP> 3 <SEP> 76 <SEP> < <SEP> 0.01 <SEP>
<tb> HV <SEP> 0. <SEP> 09 <SEP> % <SEP> 46438 <SEP> 1149 <SEP> 3 <SEP> 88 <SEP> > <SEP> 0.05
<tb> C18:0 <SEP> (AS) <SEP> 1000 <SEP> M <SEP> 6483 <SEP> 562 <SEP> 3 <SEP> 12 <SEP> < <SEP> 0.001
<tb>
C18:0 (AS) 100 NM 19301 1055 3 37 < 0.001 C18:0 (AS) 90 NM 44284 3456 3 84 > 0.05 C18:2 (AL) 1000 NM 13567 1389 3 26 < 0.001 C18:2 (AL) 100 NM 16391 3462 3 31 < 0.001 IC18:2 (AL) 10 NM 50854 4772 3 97 > 0.05
Tableau V : effets d'une huile végétale (HV) riche en acide linoléique (AL) sous forme triglycéride (TG) sur l'incorporation de [14C]-acétate dans les lipides adipocytaires. Comparaison avec la cérulénine, l'EPA, l'acide sialique (AS) et l'acide linoléique (AL) sous forme libre sd, écart-type
L'incorporation d'acétate après 4 heures de marquage était forte (54 000 cpm); le bruit de fond à to était négligeable (2 % du temps 4 heures)
<Desc/Clms Page number 14>
Comme cela est visible sur le tableau ci-dessus, l'Huile Végétale (HV) à 9 % et
0,9 % a inhibé de façon significative l'incorporation d'acétate dans les lipides, respectivement 53 % et 76 % du témoin contre seulement 2%n et 26% du témoin avec l'extrait ODON aux mêmes concentrations d'huile HV. Par contre, l'inhibition de HV n'est plus significative à la concentration 0,09 % correspondant à environ 500jjM de C18:2TG (88 % du témoin) alors que l'extrait ODON à 0,1% inhibait fortement et de façon statistique l'incorporation d'acétate (seulement 22% du témoin).
0,9 % a inhibé de façon significative l'incorporation d'acétate dans les lipides, respectivement 53 % et 76 % du témoin contre seulement 2%n et 26% du témoin avec l'extrait ODON aux mêmes concentrations d'huile HV. Par contre, l'inhibition de HV n'est plus significative à la concentration 0,09 % correspondant à environ 500jjM de C18:2TG (88 % du témoin) alors que l'extrait ODON à 0,1% inhibait fortement et de façon statistique l'incorporation d'acétate (seulement 22% du témoin).
Des mesures en chromatographie en couche mince ont confirmé ces effets.
On notera donc que les effets obtenus avec l'huile végétale HV sont très nettement inférieurs à ceux obtenus avec les extraits huileux contenant les acides gras poly-insaturés libres de la micro-algue ODON.
L'EPA en solution huileuse à 1 mM (huile de vaseline) a fortement inhibé l'incorporation (80 % d'inhibition).
L'acide sialique (AS ou C18:0) à 1000 M et 100 M a fortement inhibé l'incorporation d'acétate (respectivement 74 % et 69 % d'inhibition). L'inhibition n'était plus significative à la concentration 10 M (84 % du témoin).
Quant à l'acide linoléique sous forme libre (AL ou C18:2) à 1000 M et à 100 M, il a fortement inhibé l'incorporation d'acétate (respectivement 88 % et 63 % d'inhibition). L'inhibition n'était plus significative à la concentration 10 M (97 % du témoin).
Cette expérience confirme l'inhibition de la néosynthèse des lipides dans les adipocytes humains par des acides gras à 18 ou 20 carbones, notamment, saturés ou insaturés, de préférence se présentant sous forme libre ou monoglycérides.
Claims (10)
1) Produit cosmétique ou pharmaceutique du type qui contient un principe actif pour lutter contre l'adiposité, caractérisé en ce que ledit principe actif est constitué d'au moins un acide gras mis en #uvre pour présenter une activité inhibitrice sur la lipogénèse des adipocytes humains, ledit au moins acide gras étant issu d'un extrait lipidique de plantes ou d'algues.
2) Produit cosmétique ou pharmaceutique selon la revendication 1, caractérisé en ce que l'au moins dit acide gras a un nombre de carbones compris entre 12 et 22.
3) Produit cosmétique selon la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce que l'au moins dit acide gras a un degré d'insaturation compris entre 0 et 5.
4) Produit cosmétique ou pharmaceutique selon la revendication 1,2 ou 3, caractérisé en ce que l'au moins dit acide gras est un acide gras libre, un acide gras monoglycérique, un acide gras diglycérique ou un acide gras triglycérique.
5) Produit cosmétique ou pharmaceutique selon une des revendications précédentes, caractérisé en ce que ledit extrait est un extrait lipidique d'une algue ou d'une microalgue.
6) Produit cosmétique ou pharmaceutique selon la revendication 5, caractérisé en ce que ladite microalgue appartient à la famille des Eurodiscaceaes.
7) Produit cosmétique ou pharmaceutique selon la revendication 6, caractérisé en ce que ladite microalgue appartient à la famille des Eurodiscaceaes et à l'ordre des Bidulphiales.
8) Produit cosmétique ou pharmaceutique selon la revendication 7, caractérisé en ce que ladite microalgue appartient à la famille des Eurodiscaceaes, à l'ordre des Bidulphiales et la classe des Bacilariophycées.
9) Produit cosmétique ou pharmaceutique selon la revendication 5, caractérisé en ce que ladite microalgue fait partie des diatomées.
10) Produit cosmétique ou pharmaceutique selon la revendication 5, caractérisé en ce que ladite microalgue est une cyanobactérie, par exemple une cyanobactérie nommée Odontella aurita
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