FR2762319A1 - Slow release microcapsules - Google Patents

Abstract

Slow release microcapsules contain: (a) one or more excipients which are biodegradable polymers or copolymers having an intrinsic viscosity in the range 0.5 - 1.2 dl/g in chloroform; and (b) at least one active material such that the microcapsules liberate the active material(s) over a prolonged period, up to 3 months. Also claimed are: (i) a process for obtaining a water-soluble material having a high specific surface area,where the material is dissolved in water at about half its saturation concentration, then it is lyophilised rapidly at a temperature below -70 deg C, and the solid formed is crushed, preferably ultrasonically; (ii) triptorelin acetate and lanreotide acetate prepared by the process.

Description

Microcapsules présentant une libération prolongée
et leur procédé de préparation
L'invention concerne tout d'abord une composition sous forme de microcapsules comprenant un excipient ou un mélange d'excipients polymères ou copolymères biodégradables de viscosité intrinsèque comprise entre 0,5 dllg et 1,2 dllg dans CHC13 et au moins une substance active.Microcapsules with extended release
and their method of preparation
The invention firstly relates to a composition in the form of microcapsules comprising an excipient or a mixture of biodegradable polymeric excipients or copolymers of intrinsic viscosity between 0.5 dllg and 1.2 dllg in CHC13 and at least one active substance.

L'invention concerne également une composition sous forme de microcapsules comprenant au moins un polymère ou un copolymère biodégradable de masse moléculaire élevée et au moins une substance active hydrosoluble présentant une surface spécifique élevée. De telles compositions seront utilisées pour obtenir une libération régulière de la substance active sur une période prolongée pouvant aller jusqu'à plus de trois mois.The invention also relates to a composition in the form of microcapsules comprising at least one biodegradable polymer or copolymer of high molecular weight and at least one water-soluble active substance having a high specific surface area. Such compositions will be used to obtain a regular release of the active substance over a prolonged period of up to more than three months.

Ces compositions trouvent leur utilisation principale en pharmacie, mais peuvent également être employées dans d'autres domaines, en particulier en agrochimie, c'est à dire dans le domaine phytosanitaire.These compositions find their main use in pharmacy, but can also be used in other fields, particularly in agrochemistry, that is to say in the phytosanitary field.

L'intérêt de l'administration de principes actifs sous forme de compositions à relargage progressif est connu depuis longtemps, qu'il s'agisse de produits pharmaceutiques classiques, par exemple de stéroïdes, de peptides ou de protéines (voir par exemple le brevet
US 3,773,919 de Boswell), ou de produits à usage phytosanitaire. Les formulations adoptes peuvent prendre la forme de microparticules dans lesquelles le principe actif est incorporé dans un polymère ou un copolymère biodégradable tel le copolymère polylactide-co-glycolide (PLGA).The interest of the administration of active principles in the form of progressive release compositions has been known for a long time, be it conventional pharmaceutical products, for example steroids, peptides or proteins (see for example the patent
US 3,773,919 to Boswell), or products for phytosanitary use. The adopted formulations may take the form of microparticles in which the active ingredient is incorporated in a biodegradable polymer or copolymer such as the polylactide-co-glycolide copolymer (PLGA).

I1 est apparu que notamment lorsqu'un mode de relargage relativement constant, en tout cas sans interruption, est recherché, mode qualifié par exemple de "monophasique" dans le brevet européen EP 58 481, des polymères de type PLGA de relativement bas poids moléculaire, donc de faible viscosité, sont nécessaires. On peut citer à ce sujet les brevets européens EP 21 234 (voir l'exemple 8.B.2. décrivant un copolymère de viscosité intrinsèque de 0,5 dut),
EP 52 510 où un copolymère ayant une viscosité de 0,38 dUg dans l'hexaisofluoropropanol (HFIP) est testé in vivo, EP 26 599 qui décrit en exemple des polymères ayant des viscosités de 0,12 à 0,20 dUg et revendique des polymères ayant une viscosité de 0,08 à 0,30 dUg. Les polymères décrits dans ces brevets sont présentés comme conduisant à des compositions à relargage constant. Les compositions du brevet EP 26599 peuvent par exemple contenir des agents de contrôle de fertilité.It has appeared that, especially when a relatively constant mode of emission, in any case without interruption, is sought, described for example as "monophasic" in the European patent EP 58 481, polymers of PLGA type of relatively low molecular weight, therefore low viscosity, are necessary. European patent EP 21 234 can be mentioned in this regard (see Example 8.B.2, describing a copolymer with an intrinsic viscosity of 0.5 dut),
EP 52,510 wherein a copolymer having a viscosity of 0.38 dUg in hexaisofluoropropanol (HFIP) is tested in vivo, EP 26,599 which describes, by way of example, polymers having viscosities of 0.12 to 0.20 dUg and claims polymers having a viscosity of 0.08 to 0.30 dUg. The polymers described in these patents are presented as leading to constant release compositions. The compositions of patent EP 26599 may for example contain fertility control agents.

I1 est d'ailleurs important de noter à cet égard que lors de la procédure d'opposition relative au brevet européen EP 58 481, procédure encore en cours au jour du dépôt de la présente demande, le déposant a limité sa revendication principale à des polymères de faible viscosité (inférieure à 0,3 ou 0,5 dut), seuls capables selon le déposant de permettre un relargage de type monophasique. It is also important to note in this respect that during the opposition proceedings relating to the European patent EP 58 481, a procedure still in progress on the date of filing of the present application, the applicant has limited his main claim to polymers. low viscosity (less than 0.3 or 0.5 dut), only able according to the applicant to allow a release of monophasic type.

Par ailleurs, lorsqu'une période de relargage plus longue est recherchée, par exemple supérieure à un mois, des problèmes plus complexes apparaissent et une solution proposée par exemple par le brevet EP 0 302 582 consiste à mélanger plusieurs types de microcapsules constituées par des polymères de viscosités différentes.Moreover, when a longer release period is sought, for example greater than one month, more complex problems appear and a solution proposed for example by the patent EP 0 302 582 consists of mixing several types of microcapsules constituted by polymers. different viscosities.

Or la demanderesse vient de constater que l'utilisation de certains polymères de viscosité élevée peuvent convenir à la préparation de compositions à relargage progressif de longue durée. ll a été aussi constaté que l'utilisation de certains polymères conduit à des compositions ayant un profil de relargage monophasique pendant une durée très longue et sans période initiale ne comportant pas de libération ("dead period"). ll en est particulièrement ainsi de polymères ayant une viscosité intrinsèque de préférence au moins égale à 0,5 dUg dans CHC13, et de façon plus préférentielle au moins egale à 0,6 ou 0,7 dUg. Toutefois, la viscosité intrinsèque de ces polymères n'excédera pas 1,2 dUg dans CHC13, et restera de préférence inférieure à 0,9 ou 1 dUg. Lesdits polymères seront de préférence des PLGA avec un ratio lactide / glycolide 75 / 25.However, the Applicant has just found that the use of certain polymers of high viscosity may be suitable for the preparation of long-term progressive release compositions. It has also been found that the use of certain polymers results in compositions having a monophasic release profile for a very long time and without an initial period that does not include a "dead period". This is particularly the case for polymers having an intrinsic viscosity preferably at least 0.5 dUg in CHCl3, and more preferably at least 0.6 or 0.7 dUg. However, the intrinsic viscosity of these polymers will not exceed 1.2 dUg in CHCl 3, and will preferably remain below 0.9 or 1 dUg. Said polymers will preferably be PLGA with a lactide / glycolide ratio 75/25.

Les polymères selon l'invention peuvent être préparés par les méthodes usuelles, notamment par ouverture des cycles lactide ou glycolide. Un tel procédé est décrit par exemple dans le brevet américain US 3,773,919.The polymers according to the invention may be prepared by the usual methods, in particular by opening the lactide or glycolide rings. Such a method is described for example in US Pat. No. 3,773,919.

Dans la présente invention, on peut également utiliser un mélange de polymères de viscosités élevées différentes, mais on profère les compositions ne comportant qu'un seul polymère ou copolymère.In the present invention, it is also possible to use a mixture of polymers of different high viscosities, but the compositions having only one polymer or copolymer are used.

L'invention concerne donc tout d'abord une composition sous forme de microcapsules comprenant un excipient ou un mélange d'excipients polymères ou copolymères biodégradables de viscosité intrinsèque comprise entre 0,5 dl/g et 1,2 dUg dans CHC13 et une substance active ou un mélange de substances actives, lesdites microcapsules pouvant libérer la substance active ou le mélange de substances actives sur une période prolongée d'au moins 1 mois, de préférence, d'au moins 2 mois et, de façon plus préférentielle, d'au moins 3 mois.The invention therefore firstly relates to a composition in the form of microcapsules comprising an excipient or a mixture of biodegradable polymeric or copolymeric excipients of intrinsic viscosity of between 0.5 dl / g and 1.2 dUg in CHCl 3 and an active substance. or a mixture of active substances, said microcapsules being able to release the active substance or the mixture of active substances over a prolonged period of at least 1 month, preferably at least 2 months and, more preferably, from at least 3 months.

Par microcapsule, on entend également inclure les microsphères, microparticules, nanocapsules, nanosphères ou nanoparticules. Par polymère, on comprendra un polymère, un copolymère, ou un mélange quelconque de ces entités. Enfin, par substance active, on entend une substance active, un de ses sels ou un de ses précurseurs, ou un mélange quelconque de ces composés.By microcapsule is also meant to include microspheres, microparticles, nanocapsules, nanospheres or nanoparticles. By polymer, there will be understood a polymer, a copolymer, or any mixture of these entities. Finally, active substance means an active substance, a salt or a precursor thereof, or any mixture of these compounds.

Les polymères ou copolymères utilisables dans cet aspect de l'invention peuvent être notamment des polymères tels ceux de l'acide lactique, l'acide glycolique, l'acide citrique ou l'acide malique, ou bien d'autres polymères biocompatibles comme l'acide poly-ss-hydroxybutyrique, les polyorthoesters, les polyorthocarbonates, les polyesters d'acide a-cyanoacrylique, les polyoxalates d'alkylène tels le polyoxalate de triméthylène ou de tétraméthylène, les polyaminoacides, etc. ns peuvent être aussi des copolymères comme le
PLGA, le polystyrène, l'acide polyméthacrylique, des copolymères d'acide méthacrylique et d'acide acrylique, des polyaminoacides, des polymères d'anhydride maléique, l'éthylcellulose, le nitrocellulose, l'acétylcellulose, etc. Tous ces polymères ou copolymères peuvent être utitites seuls ou en un mélange quelconque. De préférence, on utilisera le D,L-PLGA et, plus préférentiellement, un D,L-PLGA réalisé à partir de 70 à 80 % de D,L-lactide et de 20 à 30 % de glycolide. Un PLGA synthétisé à partir de 75 % de D,L-lactide et 25 % de glycolide conviendra particulièrement bien pour l'invention.The polymers or copolymers that may be used in this aspect of the invention may especially be polymers such as those of lactic acid, glycolic acid, citric acid or malic acid, or other biocompatible polymers such as poly-ss-hydroxybutyric acid, polyorthoesters, polyorthocarbonates, α-cyanoacrylic acid polyesters, alkylene polyoxalates such as trimethylene or tetramethylene polyoxalate, polyamino acids, and the like. ns can also be copolymers as the
PLGA, polystyrene, polymethacrylic acid, copolymers of methacrylic acid and acrylic acid, polyamino acids, maleic anhydride polymers, ethylcellulose, nitrocellulose, acetylcellulose, etc. All these polymers or copolymers can be utitites alone or in any mixture. Preferably, use D, L-PLGA and, more preferably, a D, L-PLGA made from 70 to 80% of D, L-lactide and 20 to 30% glycolide. PLGA synthesized from 75% D, L-lactide and 25% glycolide will be particularly suitable for the invention.

Un autre polymère particulièrement préféré pour l'invention est le L-PLGA, obtenu à partir de
L-lactide et de glycolide. Par rapport au D,L-PLGA de même viscosité, le L-PLGA assure une libération plus lente et représente une alternative aux D,L-PLGA de plus haute viscosité.Another particularly preferred polymer for the invention is L-PLGA, obtained from
L-lactide and glycolide. Compared to D, L-PLGA of the same viscosity, L-PLGA provides a slower release and represents an alternative to higher viscosity D, L-PLGA.

Par ailleurs, on préférera en général, aux PLGA obtenus par ouverture de cycle avec des initiateurs hydrophobes, tels ceux de type alcool laurique, ceux obtenus par ouverture de cycle, avec des initiateurs hydrophiles, tels ceux de type acide lactique ou acide glycolique. L'indice d'acide, correspondant au nombre de milliéquivalents de KOH nécessaires par gramme de polymère pour neutraliser l'acidité libre, semble être le paramètre le mieux corrélé au caractère hydrophile ou hydrophobe du polymère. En effet, on constate que dès qu'il est inférieur à 1 (polymère hydrophobe), on obtient un profil de libération moins homogène, ce qui peut produire une interruption (ou "gap") de la libération après le pic de libration initial, alors que lorsqu'il est supérieur à 1,5 et, de préférence, supérieur à 2 (polymère hydrophile), le profil de libération correspond à une libération plus rapide et homogène. On préfère donc en général les polymères hydrophiles, car ils permettent d'éviter un "gap", mais si la libération est trop rapide, alors un polymère de même viscosité mais hydrophobe ne présentera pas ce "gap" et devra être préféré. Furthermore, it will generally be preferable to PLGAs obtained by ring opening with hydrophobic initiators, such as those of lauric alcohol type, those obtained by ring opening, with hydrophilic initiators, such as those of lactic acid or glycolic acid type. The acid number, corresponding to the number of milliequivalents of KOH required per gram of polymer to neutralize the free acidity, seems to be the parameter that best correlates with the hydrophilic or hydrophobic nature of the polymer. Indeed, it is found that as soon as it is less than 1 (hydrophobic polymer), a less homogeneous release profile is obtained, which can produce an interruption (or "gap") of the release after the initial libration peak, while when it is greater than 1.5 and preferably greater than 2 (hydrophilic polymer), the release profile corresponds to a faster and homogeneous release. Hydrophilic polymers are therefore generally preferred because they make it possible to avoid a "gap", but if the release is too rapid, then a polymer of the same viscosity but hydrophobic will not present this "gap" and should be preferred.

La charge en substance active ("core loading") des microcapsules selon l'invention, c'est à dire le rapport entre la masse du peptide pur encapsulé et la masse totale de la microcapsule, sera en général comprise entre 0 et 20 %, de préférence entre 2 et 15 %. Pour l'acétate de triptoréline, la charge sera de préférence inférieure ou égale à 10 % et, de façon plus préfrentielle. comprise entre 4 et 8 % pour des formes permettant une liration sur une période d'environ 3 mois. Pour l'acétate de lanréotide, la charge sera de préférence comprise entre 10 et 20 Yo. The loading of the microcapsules according to the invention, ie the ratio of the mass of the encapsulated pure peptide to the total mass of the microcapsule, will generally be between 0 and 20%, preferably between 2 and 15%. For triptorelin acetate, the charge will preferably be less than or equal to 10% and more preferably. between 4 and 8% for forms allowing a lira over a period of about 3 months. For lanreotide acetate, the charge will preferably be between 10 and 20 Yo.

L'étape d'encapsulation peut être une étape dite de coacervation tel que décrite par exemple dans les brevets américain US 3,773,919 ou européen EP 52 510.The encapsulation step may be a so-called coacervation step as described, for example, in US Pat. No. 3,773,919 or European Patent EP 52,510.

Par ailleurs, on peut utiliser un principe actif hydrosoluble tel qu'un sel hydrosoluble d'un peptide, par exemple l'acétate. On peut également utiliser un sel insoluble d'une molécule soluble tel qu'un sel d'acide gras d'un peptide, par exemple, un pamoate de peptide tel que décrit dans le brevet britannique GB 2 209 937.Moreover, it is possible to use a water-soluble active principle such as a water-soluble salt of a peptide, for example acetate. It is also possible to use an insoluble salt of a soluble molecule such as a fatty acid salt of a peptide, for example, a peptide pamoate as described in GB 2 209 937.

En outre, il est apparu que la configuration du principe actif pouvait également avoir une influence sur la diffusion de ce produit. En particulier, lorsqu'un principe actif peut être obtenu sous une forme cristallisée ou amorphe, le choix de l'une ou l'autre forme n'est pas indifférent.In addition, it appeared that the configuration of the active ingredient could also have an influence on the diffusion of this product. In particular, when an active ingredient can be obtained in a crystallized or amorphous form, the choice of one or the other form is not indifferent.

La demande de brevet EP 709 085 décrit des microcapsules comprenant un polymère et une substance active hydrosoluble et amorphe. I1 y est en particulier question de l'importance d'obtenir des particules de substance active de petite taille, et de préférence de taille inférieure à 10 Cun. Cette demande ne comporte cependant aucun procédé de préparation desdites particules et aucune mention n'est faite de l'effet de la surface spécifique des particules de principe actif sur le profil de relargage des compositions contenant ces particules. Or la demanderesse utilise déjà depuis 1986 des microcapsules comportant une substance active amorphe, l'acétate de triptoréline vendu sous la dénomination Decapeptyl 3,75 mg, dont la taille des particules est d'environ 8 ttm seulement. Mais elle a constaté que la taille des particules n'est pas le seul paramètre déterminant pour favoriser une libration sur une période prolongée pouvant aller jusqu'à plus de trois mois.Patent application EP 709 085 describes microcapsules comprising a polymer and a water-soluble and amorphous active substance. It is particularly concerned with the importance of obtaining particles of active substance of small size, and preferably smaller than 10 Cun. However, this application does not include any process for preparing said particles and no mention is made of the effect of the specific surface area of the active ingredient particles on the release profile of the compositions containing these particles. However, since 1986 the applicant has already used microcapsules containing an amorphous active substance, triptorelin acetate sold under the name Decapeptyl 3.75 mg, the particle size of which is only about 8 μm. But she found that the size of the particles is not the only decisive parameter to favor a release over a prolonged period of up to more than three months.

La question du caractère amorphe ne se pose en principe pas pour des produits tels que les peptides ou les protéines dont le mode d'obtention, spécialement la lyophilisation, conduit dans la plupart des cas à un produit amorphe, ce qui est le cas pour le Decapeptyl 3,75 mg.The question of amorphousness does not arise in principle for products such as peptides or proteins whose mode of production, especially lyophilization, leads in most cases to an amorphous product, which is the case for the Decapeptyl 3.75 mg.

La littérature illustre abondammment ce phénomène et l'on peut citer notamment les articles suivants: Hsu, C.C. et al., Pharmaceutical Research, 12 (1), 69-77 (1995) ou Towns, J.K,
Journal of Chromatography, A, 705 (1), 115-27 (1995).The literature abundantly illustrates this phenomenon and may be mentioned in particular the following articles: Hsu, CC et al., Pharmaceutical Research, 12 (1), 69-77 (1995) or Towns, JK,
Journal of Chromatography, A, 705 (1), 115-27 (1995).

L'invention concerne donc également une composition sous forme de microcapsules comprenant au moins un polymère ou un copolymère biodégradable de masse moléculaire élevée et au moins une substance active hydrosoluble présentant une surface spécifique élevée.The invention therefore also relates to a composition in the form of microcapsules comprising at least one biodegradable polymer or copolymer of high molecular weight and at least one water-soluble active substance having a high specific surface area.

Ces microcapsules permettent un profil de relargage monophasique dans lequel le pic initial (ou "burst" en anglais) est réduit par rapport à certaines autres préparations utilisant un polymère de poids moléculaire plus faible, de sorte qu'elles permettent de libérer la substance active sur une période prolongée pouvant aller jusqu'à plus de trois mois.These microcapsules allow a monophasic release profile in which the initial peak (or "burst" in English) is reduced compared to some other preparations using a lower molecular weight polymer, so that they release the active substance on an extended period of up to more than three months.

Parmi les substances actives utilisables pour l'invention, on peut notamment citer les protéines, les peptides choisis par exemple dans le groupe constitué de l'acétate de triptoréline, l'acétate de lanréotide, d'un composé ayant une activiez LH-RH tel que la triptoréline, la goséréline, la leuproréline, la buséréline ou leurs sels, un antagoniste de LH-RH, un antagoniste de GPIIb/IIIa, un composé ayant une activité similaire à un antagoniste de GPIIb/IIIa, I'érythropoiCtine (EPO) ou un de ses analogues, les différents interférons a, l'interféron ss ou Sy, la somatostatine, un dérivé de la somatostatine tel que décrit dans le brevet européen EP 215 171, un analogue de la somatostatine tel que décrit dans le brevet américain
US 5,552,520 (ce brevet comporte lui-même une liste d'autres brevets décrivant des analogues de la somatostatine qui sont incorporés par référence à la présente demande), l'insuline, une hormone de croissance, un facteur libérateur d'hormone de croissance (GRF), un facteur de croissance épidermique (EGF), une hormone malanocyte-stimulante (MS H), une hormone libératrice de thyrotropine (TRH) ou un de ses sels ou dérivés, une hormone stimulant la thyroïde (TSH), une hormone lutéinisante (LH), une hormone stimulant les follicules (FSH), une hormone parathyroidienne (PTH) ou un de ses dérivés, un hydrochlorure de lysozyme, un fragment de peptide à N terminal (position 1- > 34) de l'hormone PTH humaine, la vasopressine ou un de ses drivés, l'oxytocine, la calcitonine, un dérivé de la calcitonine ayant une activité similaire à celle de la calcitonine, le glucagon, la gastrine, la sécrétine, la pancttozymine, la cholècystokinine, l'angiotensine, le lactogène du placenta humain, la gonadotropine chorionique humaine (HCG), l'enképhaline, le facteur stimulateur de colonies (CSF), un dérivé de l'enképhaline, l'endorphine, la kyotorphine, les interleukines, par exemple l'Interleukine 2, la tuftsine, la thymopoiCtine, la thymosthymline, le facteur thymique humoral (THF), le facteur thymique stérique (FTS), un dérivé du facteur thymique sérique (FTS), la thymosine, le facteur thymique X, le facteur de nécrose tumorale (TNF), la motiline, la bombesine ou un de ses dérivés tels que décrits dans le brevet américain US 5,552,520 (ce brevet comporte lui-même une liste d'autres brevets décrivant des dérivés de la bombesine qui sont incorporés par référence à la présente demande), la prolactine, la neurotensine, la dynorphine, la caeruléine, la substance P, I'urokinase, l'asparaginase, la bradykinine, la kallikréine, la facteur de croissance nerveuse, un facteur de coagulation sanguine, la polymixine
B, la colistine, la gramicidine, la bacitracine, un peptide stimulant la synthèse protéique, un antagoniste de l'endothéline ou un de ses sels ou dérivés, un polypeptide intestinal vasoactif (VIP), l'hormone adrenocorticotropique (ACTH), un facteur de croissance dérivé des plaquettes (PDGF), une protéine morphogénétique osseuse (BMP), et un polypeptide inhibiteur gastrique (GIP). Toute autre substance active hydrosoluble, ou un de ses sels ou précurseurs, pourra egalement être utilisée par l'homme du métier s'il le juge utile.Among the active substances that can be used for the invention, mention may be made, in particular, of proteins, peptides chosen, for example, from the group consisting of triptorelin acetate, lanreotide acetate, and a compound having a LH-RH activity such as that triptorelin, goserelin, leuprorelin, buserelin or their salts, an LH-RH antagonist, a GPIIb / IIIa antagonist, a compound having a similar activity to a GPIIb / IIIa antagonist, erythropoietin (EPO) or one of its analogues, the various interferons α, interferon ss or Sy, somatostatin, a somatostatin derivative as described in European Patent EP 215 171, a somatostatin analogue as described in US Pat.
US 5,552,520 (this patent itself includes a list of other patents disclosing somatostatin analogues which are incorporated by reference herein), insulin, a growth hormone, a growth hormone releasing factor ( GRF), an epidermal growth factor (EGF), a malanocyte-stimulating hormone (MSH), a thyrotropin releasing hormone (TRH) or a salt or derivative thereof, a thyroid stimulating hormone (TSH), a luteinizing hormone (LH), a follicle stimulating hormone (FSH), a parathyroid hormone (PTH) or a derivative thereof, a lysozyme hydrochloride, an N-terminal peptide fragment (position 1-> 34) of the human PTH hormone , vasopressin or a derivative thereof, oxytocin, calcitonin, a calcitonin derivative having activity similar to that of calcitonin, glucagon, gastrin, secretin, pancttozymine, cholecystokinin, angiotensin, the lactogen of the plac human enta, human chorionic gonadotropin (HCG), enkephalin, colony stimulating factor (CSF), enkephalin derivative, endorphin, kyotorphin, interleukins, eg interleukin 2, tuftsin , thymopoietin, thymosthymline, humoral thymic factor (THF), steric thymic factor (STF), serum thymic factor derivative (STF), thymosin, thymic factor X, tumor necrosis factor (TNF), motilin, bombesin or a derivative thereof as described in US Pat. No. 5,552,520 (this patent itself contains a list of other patents describing bombesin derivatives which are incorporated by reference in this application), the prolactin, neurotensin, dynorphin, caerulein, substance P, urokinase, asparaginase, bradykinin, kallikrein, nerve growth factor, blood coagulation factor, polymixin
B, colistin, gramicidin, bacitracin, a peptide stimulating protein synthesis, an endothelin antagonist or a salt or derivative thereof, a vasoactive intestinal polypeptide (VIP), adrenocorticotropic hormone (ACTH), a factor Platelet derived growth promoter (PDGF), bone morphogenetic protein (BMP), and gastric inhibitory polypeptide (GIP). Any other water-soluble active substance, or one of its salts or precursors, may also be used by those skilled in the art if they deem it useful.

De préférence, on utilisera un produit hydrosoluble, obtenu par salification sous forme de cation, avec par exemple l'acide acétique. On peut cependant utiliser un sel insoluble, comme indique ci-dessus. Preferably, use will be made of a water-soluble product, obtained by salification in the form of a cation, with, for example, acetic acid. However, it is possible to use an insoluble salt, as indicated above.

Par peptide et/ou protéine, on entend aussi bien le peptide etlou la protéine eux-mêmes que des fragments de ces peptides ou protéines pharmacologiquement actifs.By peptide and / or protein is meant both the peptide and / or the protein themselves as fragments of these pharmacologically active peptides or proteins.

La substance active hydrosoluble telle qu'utilise pour fabriquer des microcapsules selon l'invention, et en particulier l'acétate de triptoréline, l'acétate de lanréotide, la goséréline, la leuproréline, la budréline ou leurs sels, est obtenue de préférence par un procédé comportant principalement deux étapes: - une étape de lyophilisation comprenant une trempe rapide d'une solution diluée de la
substance hydrosoluble dans un milieu de température inférieure à -700 C; - une étape de broyage; de préférence, cette étape comprendra un broyage ultrasonique.The water-soluble active substance as used to manufacture microcapsules according to the invention, and in particular triptorelin acetate, lanreotide acetate, goserelin, leuprorelin, budrelin or their salts, is preferably obtained by a method comprising mainly two steps: - a lyophilization step comprising a rapid quenching of a dilute solution of the
water-soluble substance in a medium of temperature below -700 C; - a grinding step; preferably, this step will include ultrasonic grinding.

Par solution diluée de la substance active, on entend une solution ayant une concentration de ladite substance active inférieure à la moitié de la concentration de saturation, et de préférence inférieure à un quart de ladite concentration de saturation lorsque celle-ci est au moins égale à 200 g/l. Ce procédé permet d'obtenir une substance active présentant une surface spécifique élevée. By dilute solution of the active substance is meant a solution having a concentration of said active substance less than half the saturation concentration, and preferably less than a quarter of said saturation concentration when it is at least equal to 200 g / l. This method makes it possible to obtain an active substance having a high specific surface area.

Pour la lyophilisation, ou pourra par exemple congeler la solution dans un plateau baignant dans un bac d'azote liquide, avant de procéder à la lyophilisation proprement dite.For lyophilization, or may for example freeze the solution in a tray immersed in a tank of liquid nitrogen, before proceeding to lyophilization itself.

Lorsque le procédé sera appliqué à une substance active pour préparer des microcapsules à libération prolongée selon l'invention, la surface spécifique de la substance active, après lyophilisation mais avant broyage, sera de préférence supérieure à 2 m2/g. De façon plus préférentielle, la surface spécifique de la substance active sera supérieure à 3 m2/g, voire 5 m2lg. When the process is applied to an active substance for preparing sustained-release microcapsules according to the invention, the specific surface area of the active substance, after lyophilization but before grinding, will preferably be greater than 2 m 2 / g. More preferably, the specific surface area of the active substance will be greater than 3 m 2 / g, or even 5 m 2 / g.

La surface spécifique de la substance active est un facteur favorable pour obtenir une libération sur une période prolongée. En effet, comme déjà évoqué, des particules d'une substance active de même taille mais de surfaces spécifiques différentes donneront avec le même excipient polymère des résultats tout à fait différents.The specific surface area of the active substance is a favorable factor for obtaining a release over a prolonged period. Indeed, as already mentioned, particles of an active substance of the same size but different specific surfaces will give with the same excipient polymer results quite different.

L'invention a donc également pour objet le procédé tel que décrit ci-dessus appliqué à une substance hydrosoluble biologiquement active. Elle concerne aussi la substance hydrosoluble biologiquement active tel qu'obtenue par le procédé, laquelle présente une surface spécifique élevée. The invention therefore also relates to the process as described above applied to a biologically active water-soluble substance. It also relates to the biologically active water-soluble substance as obtained by the process, which has a high specific surface area.

Comme indiqué ci-dessus, les compositions selon l'invention trouvent leur usage de préférence dans le domaine pharmaceutique. Les compositions pharmaceutiques peuvent être administrées à un patient par différentes voies ; cependant, la voie préférés est la voie injectable sous-cutanée ou intramusculaire. Les microcapsules selon l'invention peuvent d'abord être suspendues dans un véhicule approprié destiné à l'injection, comme une solution aqueuse de chlorure de sodium ou une solution aqueuse de mannitol.As indicated above, the compositions according to the invention find their use preferably in the pharmaceutical field. The pharmaceutical compositions can be administered to a patient by different routes; however, the preferred route is the subcutaneous or intramuscular injection route. The microcapsules according to the invention may first be suspended in a suitable vehicle intended for injection, such as an aqueous solution of sodium chloride or an aqueous solution of mannitol.

A moins qu'ils ne soient définis d'une autre manière, tous les termes techniques et scientifiques utilisés ici ont la même signification que celle couramment comprise par un spécialiste ordinaire du domaine auquel appartient cette invention. De même, toutes les publications, demandes de brevets, tous les brevets et toutes autres références mentionnées ici sont incorporées par référence.Unless otherwise defined, all technical and scientific terms used herein have the same meaning as commonly understood by an ordinary specialist in the field to which this invention belongs. Likewise, all publications, patent applications, patents and all other references mentioned herein are incorporated by reference.

Les exemples suivants sont présentés pour illustrer les procédures ci-dessus et ne doivent en aucun cas être considérés comme une limite à la porte de l'invention.The following examples are presented to illustrate the above procedures and should in no way be construed as limiting the scope of the invention.

EXEMPLES
Pour tous ces exemples, les viscosités inhérentes (IV) ont été mesurées selon les méthodes classiques de mesure du temps d'écoulement telles que décrites par exemple dans "Pharmacopiée Européenne", 1997, pages 17-18 (méthode au tube capillaire). La surface spécifique de la substance active, lorsqu'elle a été mesurée, a été déterminée par la méthode dite méthode B.E.T. (absorption d'une monocouche d'azote sur la substance active), méthode bien connue de l'homme du métier.EXAMPLES
For all these examples, the inherent viscosities (IV) were measured according to the conventional methods of measuring the flow time as described for example in "European Pharmacopoeia", 1997, pages 17-18 (capillary tube method). The specific surface area of the active substance, when it was measured, was determined by the so-called BET method (absorption of a monolayer of nitrogen on the active substance), a method well known to those skilled in the art.

Pour les exemples suivants, on appellera peptide "modifié" un peptide ayant subi le procédé de lyophilisation selon l'invention, par opposition au peptide "non modifié", qui est lyophilisé de façon classique (sans trempe brutale à basse température). For the following examples, the term "modified" peptide will be called a peptide which has undergone the lyophilization process according to the invention, as opposed to the "unmodified" peptide, which is lyophilized in a conventional manner (without brutal tempering at low temperature).

Exemple 1: 16,620 g d'acétate de triptoréline "non modifié" sont dissous dans 554 ml d'eau. La solution est congelée dans un plateau baignant dans un bac d'azote liquide, puis lyophilisée.Example 1: 16.620 g of "unmodified" triptorelin acetate are dissolved in 554 ml of water. The solution is frozen in a tray immersed in a tank of liquid nitrogen and freeze-dried.

15,18 g d'acétate de triptoréline "modifié" sont ainsi obtenus avec un rendement de 91,34 %.15.18 g of "modified" triptorelin acetate are thus obtained with a yield of 91.34%.

Ce composé présente une surface spécifique de 4,7 m2/g contre 0,8 m2/g avant lyophilisation.This compound has a specific surface area of 4.7 m 2 / g against 0.8 m 2 / g before lyophilization.

On réalise ensuite le broyage aux ultrasons de l'acétate de triptoréline: 15 minutes sont suffisantes pour obtenir des particules inférieures à 10 m pour le peptide modifié (alors que 30 minutes sont nécessaires pour obtenir une telle granulométrie avec le peptide non modifié). The triptorelin acetate is then sonicated: 15 minutes are sufficient to obtain particles less than 10 m for the modified peptide (whereas 30 minutes are necessary to obtain such a particle size with the unmodified peptide).

L'étape d'encapsulation est ensuite réalisée selon la méthode de coacervation telle que décrite dans les brevets européen EP 52 510 et américain US 3,773,919; au départ de 3,378 g de cet acétate de triptoréline modifié et broyé et d'une solution à 7,30 % de DL-PLGA (DL-PLGA composé de 75 % de DL-lactide et 25 % de glycolide, viscosité inhérente dans le chloroforme = 0,70 dllg, indice d'acide = 1,61 meq KOH / g) dans du dichloromethane. The encapsulation step is then performed according to the coacervation method as described in European Patent EP 52 510 and US 3,773,919; from 3.388 g of this modified and ground triptorelin acetate and a 7.30% solution of DL-PLGA (DL-PLGA composed of 75% DL-lactide and 25% glycolide, inherent viscosity in chloroform) = 0.70 dlg, acid number = 1.61 meq KOH / g) in dichloromethane.

390 ml d'huile de silicone ont été additionnés pour former des microcapsules par le procédé de coacervation. Ces microcapsules sont récupérées après immersion dans un bain d'heptane (221) et filtration sur membrane 10 m.390 ml of silicone oil was added to form microcapsules by the coacervation method. These microcapsules are recovered after immersion in a heptane bath (221) and 10 m membrane filtration.

Exemple 2: 0,338 g d'acétate de triptoréline non modifié, de granulométrie cigale à 8 Rm après broyage aux ultrasons pendant 30 minutes1 ont été additionnés sous agitation à une solution à 7,30 % de DL-PLGA dans du dichlorométhane (PLGA équivalent à celui décrit dans l'exemple 1).EXAMPLE 2 0.338 g of unmodified triptorelin acetate, of cicatricial granulometry at 8 μm after ultrasonic grinding for 30 minutes were added with stirring to a solution of 7.30% DL-PLGA in dichloromethane (PLGA equivalent to that described in Example 1).

40 ml d'huile de silicone ont été additionnés pour former des microcapsules qui sont par la suite précipitées dans un bain d'heptane (2 1) puis filtrées sur membrane 10 m.40 ml of silicone oil were added to form microcapsules which are then precipitated in a heptane bath (2 1) and then filtered on a 10 m membrane.

Exemples3a'6: 0,338 g d'acétate de triptoréline modifié selon les conditions décrites dans le Tableau No. 1 ci-dessous, ont été additionnés, après broyage aux ultrasons, à une solution à 7,30 % d'un mélange 33,3 % / 33,3 % / 33,3 % de trois DL-PLGA (aux caractéristiques décrites dans le
Tableau No. 2 ci-dessous) dans du dichlorométhane. 40 ml d'huile de silicone ont été additionnés pour former des microcapsules qui sont par la suite précipitées dans un bain d'heptane (21) puis filtrées sur membrane 10 clam. Examples 3α6: 0.338 g of triptorelin acetate modified according to the conditions described in Table No. 1 below, were added, after ultrasonic grinding, to a 7.30% solution of a 33.3 mixture. % / 33.3% / 33.3% of three DL-PLGAs (with the characteristics described in
Table No. 2 below) in dichloromethane. 40 ml of silicone oil were added to form microcapsules which were subsequently precipitated in a heptane bath (21) and then filtered through clam membrane.

Tableau No. 1

Table No. 1

<tb> Exemple <SEP> Concentration <SEP> Quantité <SEP> Quantité <SEP> Surface
<tb> <SEP> g/l <SEP> acétate <SEP> de <SEP> d'eau <SEP> spécifique
<tb> <SEP> triptoréline <SEP> (mi) <SEP> m2Ig <SEP>
<tb> <SEP> (g)
<tb> <SEP> 3 <SEP> 200 <SEP> 3 <SEP> 15 <SEP> 4,4
<tb> <SEP> 4 <SEP> 150 <SEP> 3 <SEP> 20 <SEP> 4,7
<tb> <SEP> 5 <SEP> 100 <SEP> 3 <SEP> 30 <SEP> 4,8
<tb> <SEP> 6 <SEP> 50 <SEP> 3 <SEP> 60 <SEP> 7,3
<tb>
La surface spécifique de l'acétate de triptoréline de départ (non modifié) est de 0,8 m2/g. <tb> Example <SEP> Concentration <SEP> Quantity <SEP> Quantity <SEP> Surface
<tb><SEP> g / l <SEP> acetate <SEP> of <SEP> specific water <SEP>
<tb><SEP> triptorelin <SEP> (mi) <SEP> m2Ig <SEP>
<tb><SEP> (g)
<tb><SEP> 3 <SEP> 200 <SEP> 3 <SEP> 15 <SEP> 4,4
<tb><SEP> 4 <SEP> 150 <SEP> 3 <SEP> 20 <SEP> 4,7
<tb><SEP> 5 <SEP> 100 <SEP> 3 <SEP> 30 <SEP> 4,8
<tb><SEP> 6 <SEP> 50 <SEP> 3 <SEP> 60 <SEP> 7.3
<Tb>
The specific surface of the starting triptorelin acetate (unmodified) is 0.8 m 2 / g.

Les caractéristiques physico-chimiques des trois polymères mélangés sont réunies dans le
Tableau No. 2 ci-après:
Tableau No. 2

The physico-chemical characteristics of the three mixed polymers are combined in the
Table No. 2 below:
Table No. 2

<tb> <SEP> Caractéristiques <SEP> PLGA <SEP> No. <SEP> 1 <SEP> PLGA <SEP> No. <SEP> 2 <SEP> PLGA <SEP> No. <SEP> 3
<tb> Ratio <SEP> lactide <SEP> I <SEP> glycolide <SEP> DL <SEP> PLGA <SEP> 50:50 <SEP> DL <SEP> PLGA <SEP> 75:25 <SEP> DL <SEP> PLGA <SEP> 75:25
<tb> Viscosité <SEP> inhérente <SEP> dans <SEP> DHC13 <SEP> (dut) <SEP> 0,47 <SEP> 0,61 <SEP> 0,70
<tb> Indice <SEP> d'acide <SEP> (meq <SEP> KOH/g) <SEP> 2,68 <SEP> 2.08 <SEP> 1,61
<tb>
Exemple 7: 22,560 g d'acétate de lanréotide non modifié sont dissous dans 752 ml d'eau. La solution est congelée dans un plateau baignant dans un bac d'azote liquide, puis lyophilisée. 21,75 g d'acétate de lanréotide modifié, de surface spécifique égale à 4,4 m2/g, sont obtenus avec un rendement de 96,41 %.<tb><SEP> Features <SEP> PLGA <SEP> No. <SEP> 1 <SEP> PLGA <SEP> No. <SEP> 2 <SEP> PLGA <SEP> No. <SEP> 3
<tb> Ratio <SEP> Lactide <SEP> I <SEP> Glycolide <SEP> DL <SEP> PLGA <SEP> 50:50 <SEP> DL <SEP> PLGA <SEP> 75:25 <SEP> DL <SEP > PLGA <SEP> 75:25
<tb> Viscosity <SEP> inherent <SEP> in <SEP> DHC13 <SEP> (dut) <SEP> 0.47 <SEP> 0.61 <SEP> 0.70
<tb><SEP> acid number <SEP> (meq <SEP> KOH / g) <SEP> 2.68 <SEP> 2.08 <SEP> 1.61
<Tb>
Example 7: 22,560 g of unmodified lanreotide acetate are dissolved in 752 ml of water. The solution is frozen in a tray immersed in a tank of liquid nitrogen and freeze-dried. 21.75 g of modified lanreotide acetate, with a specific surface area equal to 4.4 m 2 / g, are obtained with a yield of 96.41%.

L'étape d'encapsulation est ensuite réalisée selon la méthode de coacervation telle que décrite dans les brevets européen EP 52 510 et américain US 3,773,919 ; au départ de 7,5 g de cet acétate de triptoréline modifié et broyé et d'une solution à 3,7 % de DL-PLGA (DGPLGA composé de 50 % de DL-lactide et 50 % de glycolide, viscosité inhérente dans HFIP = 0,55 dUg) dans du dichlorométhane. 650 ml d'huile de silicone ont été additionnés pour former des microcapsules par le procédé de coacervation. Ces microcapsules sont récupérées après immersion dans un bain d'heptane (301) et filtration sur membrane 10 llm. The encapsulation step is then performed according to the coacervation method as described in European Patent EP 52 510 and US 3,773,919; starting from 7.5 g of this modified and ground triptorelin acetate and a 3.7% solution of DL-PLGA (DGPLGA composed of 50% DL-lactide and 50% glycolide, inherent viscosity in HFIP = 0.55 dUg) in dichloromethane. 650 ml of silicone oil was added to form microcapsules by the coacervation method. These microcapsules are recovered after immersion in a heptane bath (301) and 10 μm membrane filtration.

Exemples 8 et 9:
Des microcapsules d'acétate de triptoréline ont été fabriquées avec DL-PLGA (DL-PLGA composé de 75 % de DL-lactide et 25 % de glycolide) de différentes masses moléculaires moyennes en poids (Mw). Les fabrications ont ete effectuées selon le procédé décrit dans l'exemple 1 avec un acétate de triptoréline de surface spécifique égal à 4,7 m2/g.Examples 8 and 9:
Microcapsules of triptorelin acetate were made with DL-PLGA (DL-PLGA composed of 75% DL-lactide and 25% glycolide) of different weight average molecular weight (Mw). The fabrications were carried out according to the method described in Example 1 with a specific surface triptorelin acetate equal to 4.7 m 2 / g.

Les paramètres physico chimiques des exemples 8 et 9 sont réunis dans le tableau ci-après:

The physico-chemical parameters of Examples 8 and 9 are summarized in the table below:

<tb> Exemple <SEP> Mw <SEP> THF <SEP> IV <SEP> CHCl3 <SEP> (dl/g) <SEP> Indice <SEP> d'acide
<tb> <SEP> (meq <SEP> KOH/g)
<tb> <SEP> 8 <SEP> 58400 <SEP> 0,61 <SEP> 2,08
<tb> <SEP> 9 <SEP> 132650 <SEP> 0,93 <SEP> 1,80
<tb> ExemDle 10:
Des microcapsules ont été fabriquées selon le procédé décrit dans l'exemple 1 avec DL-PLGA (DL-PLGA composé de 75 % de DL-lactide et 25 % de glycolide; masse moléculaire déterminée dans le THF: 80100; viscosité dans le chloroforme: 0,75 dVg, indice d'acide = 0,40 meq KOH / g) à tendance hydrophobe.<tb> Example <SEP> Mw <SEP> THF <SEP> IV <SEP> CHCl3 <SEP> (dl / g) <SEP> Acid Index <SEP>
<tb><SEP> (meq <SEP> KOH / g)
<tb><SEP> 8 <SEP> 58400 <SEP> 0.61 <SEP> 2.08
<tb><SEP> 9 <SEP> 132650 <SEP> 0.93 <SEP> 1.80
<tb> Example 10:
Microcapsules were made according to the method described in Example 1 with DL-PLGA (DL-PLGA composed of 75% DL-lactide and 25% glycolide; molecular weight determined in THF: 80100; viscosity in chloroform: 0.75 dVg, acid number = 0.40 meq KOH / g) with a hydrophobic tendency.

Exemple 11:
Des microcapsules ont été fabriquées selon le procédé décrit dans l'exemple 1, à partir d'un
L-PLGA (L-PLGA composé de 75 % de L-lactide et 25 % de glycolide; masse moléculaire dans le THF: 99260; viscosité dans le chloroforme : 0,78 dllg, indice d'acide = 1,31 meq
KOH / g) à tendance cristalline.Example 11
Microcapsules were made according to the process described in Example 1, starting from
L-PLGA (L-PLGA composed of 75% L-lactide and 25% glycolide; molecular weight in THF: 99260; viscosity in chloroform: 0.78 dllg, acid number = 1.31 meq
KOH / g) with crystalline tendency.

Etude des profils de libération de microcapsules selon l'invention:
Afin d'illustrer l'intérêt de microcapsules selon l'invention, l'étude de leurs profils de libération in vitro a été réalisée.Study of the release profiles of microcapsules according to the invention:
In order to illustrate the interest of microcapsules according to the invention, the study of their in vitro release profiles has been carried out.

Pour chacun des exemples 1 à 11, on mesure la libération de trois prises d'essai d'environ 25 mg de microcapsules, placées dans 4 ml de solution de chlorure de sodium à 0,9 %. On extrait après 1 heure, 1 jour et 4 jours de libération dans la solution maintenue à 370 C. On dose la triptoréline par chromatographie liquide de haute performance (HPLC) par rapport à une gamme d'étalonnage en mode gradient dans le système acide triauoroacétique (TFA). Pour obtenir la gamme d'étalonnage standard, on prépare une solution T1 de la façon suivante : une prise d'essai voisine de 7,5 mg d'acétate de triptoréline de référence est placée dans une fiole de 50 ml; on complète à 50 ml avec une solution d'acide acétique à 0,1 %. A partir de la solution T1, on prépare les solutions T2 et T3 en procé For each of Examples 1 to 11, the release of three test portions of approximately 25 mg of microcapsules, placed in 4 ml of 0.9% sodium chloride solution, was measured. After 1 hour, 1 day and 4 days of release from the solution maintained at 370 ° C., triptorelin is dosed by high performance liquid chromatography (HPLC) against a gradient calibration range in the triauoroacetic acid system. (TFA). To obtain the standard calibration range, a T1 solution is prepared as follows: a test portion of 7.5 mg of reference triptorelin acetate is placed in a 50 ml flask; it is made up to 50 ml with a solution of 0.1% acetic acid. From solution T1, solutions T2 and T3 are prepared in process

Les résultats des tests in vitro sont résumés par le tableau ci-dessous:

The results of the in vitro tests are summarized in the table below:

<tb> Exemples <SEP> Taux <SEP> de <SEP> libération <SEP> cumulé <SEP> (%)
<tb> <SEP> 1 <SEP> heure <SEP> 1 <SEP> jour <SEP> 4 <SEP> jours
<tb> <SEP> 1 <SEP> g <SEP> <SEP> 16 <SEP> 27
<tb> <SEP> 2 <SEP> 9 <SEP> 47 <SEP> 57
<tb> <SEP> 3 <SEP> 10 <SEP> 45 <SEP> 67
<tb> <SEP> 4 <SEP> 10 <SEP> 37 <SEP> 65
<tb> <SEP> 5 <SEP> 9 <SEP> 41 <SEP> 66
<tb> <SEP> 6 <SEP> 8 <SEP> 30 <SEP> 55
<tb> <SEP> 7 <SEP> 3 <SEP> 14,5 <SEP> 28,3
<tb> <SEP> 8 <SEP> il <SEP> 40 <SEP> 67
<tb> <SEP> 9 <SEP> 2 <SEP> 4 <SEP> 6
<tb> <SEP> 10 <SEP> 5 <SEP> 12 <SEP> 14
<tb> <SEP> 11 <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 2
<tb>
Les résultats des tests in vivo sont parfaitement bien corlCs à ceux des tests in vitro. A titre d'exemple, des microcapsules de l'exemple 1, à la dose de 1,2 mg/kg, ont été injectées par voie intramusculaire à des rats. Un dosage plasmatique a révélé que le taux de triptoréline restait constamment supérieur à 0,1 ng/ml sur une période de plus de 90 jours. Des mêmes études menées sur des microcapsules de l'exemple 2 ont montré que le taux de testostérone restait constamment inférieur à 1 ng/ml sur une période de plus de 90 jours. <tb> Examples <SEP> Rate <SEP> of <SEP> release <SEP> cumulative <SEP> (%)
<tb><SEP> 1 <SEP> hour <SEP> 1 <SEP> day <SEP> 4 <SEP> days
<tb><SEP> 1 <SEP> g <SEP><SEP> 16 <SEP> 27
<tb><SEP> 2 <SEP> 9 <SEP> 47 <SEP> 57
<tb><SEP> 3 <SEP> 10 <SEP> 45 <SEP> 67
<tb><SEP> 4 <SEP> 10 <SEP> 37 <SEP> 65
<tb><SEP> 5 <SEP> 9 <SEP> 41 <SEP> 66
<tb><SEP> 6 <SEP> 8 <SEP> 30 <SEP> 55
<tb><SEP> 7 <SEP> 3 <SEP> 14.5 <SEP> 28.3
<tb><SEP> 8 <SEP> it <SEP> 40 <SEP> 67
<tb><SEP> 9 <SEP> 2 <SEP> 4 <SEP> 6
<tb><SEP> 10 <SEP> 5 <SEP> 12 <SEP> 14
<tb><SEP> 11 <SEP> 1 <SEP> 2 <SEP> 2
<Tb>
The results of the in vivo tests are perfectly well suited to those of the in vitro tests. By way of example, microcapsules of Example 1, at a dose of 1.2 mg / kg, were injected intramuscularly into rats. A plasma assay revealed that the level of triptorelin consistently remained above 0.1 ng / ml over a period of more than 90 days. The same studies conducted on microcapsules of Example 2 showed that the testosterone level remained constantly below 1 ng / ml over a period of more than 90 days.

Claims (21)

REVENDICATIONS 1. Composition sous forme de microcapsules comprenant un excipient ou un mélange1. Composition in the form of microcapsules comprising an excipient or a mixture d'excipients polymères ou copolymères biodégradables de viscosité intrinsèque comprise biodegradable polymeric or copolymeric excipients of intrinsic viscosity entre 0,5 dUg et 1,2 dUg dans CHC13 et une substance active ou un mélange de between 0.5 dUg and 1.2 dUg in CHC13 and an active substance or mixture of substances actives, lesdites microcapsules pouvant libérer la substance active ou le active substances, said microcapsules being able to release the active substance or the mélange de substances actives sur une période prolongée pouvant aller jusqu'à trois mois. mixture of active substances for a prolonged period of up to three months. 2. Composition sous forme de microcapsules selon la revendication 1, caractérisée en ce 2. Composition in the form of microcapsules according to claim 1, characterized in that que l'excipient polymère ou copolymère biodégradable possède une viscosité intrinsèque that the biodegradable polymer or copolymer excipient has an intrinsic viscosity supérieure à 0,6 dl/g dans CHC13.  greater than 0.6 dl / g in CHCl3. 3. Composition sous forme de microcapsules selon l'une des revendications 1 ou 2,3. Composition in the form of microcapsules according to one of claims 1 or 2, caractérisée en ce que le polymère biodégradable est un copolymère de lactide et de characterized in that the biodegradable polymer is a copolymer of lactide and glycolide (PLGA). glycolide (PLGA). 4. Composition sous forme de microcapsules selon la revendication 3, caractérisée en ce4. Composition in the form of microcapsules according to claim 3, characterized in that que le PLGA est préparé à partir de 75 % de lactide et de 25 % de glycolide. that PLGA is prepared from 75% lactide and 25% glycolide. 5. Composition sous forme de microcapsules selon l'une des revendications 1 à 3,5. Composition in the form of microcapsules according to one of claims 1 to 3, caractérisée en ce que le polymère biodégradable est un copolymère de L-lactide et de characterized in that the biodegradable polymer is a copolymer of L-lactide and glycolide. glycolide. 6. Composition sous forme de microcapsules comprenant au moins un excipient ou un6. Composition in the form of microcapsules comprising at least one excipient or one mélange d'excipients polymères ou copolymères biodégradables et au moins une a mixture of biodegradable polymeric or copolymeric excipients and at least one substance active hydrosoluble présentant une surface spécifique élevée. water-soluble active substance having a high specific surface area. 7. Composition sous forme de microcapsules selon l'une des revendications 1 à 6,7. Composition in the form of microcapsules according to one of claims 1 to 6, caractérisée en ce que la surface spécifique de la substance active est supérieure à 2 m2/g. characterized in that the specific surface area of the active substance is greater than 2 m 2 / g. 8. Composition sous forme de microcapsules selon la revendication 7, caractérisée en ce que8. Composition in the form of microcapsules according to claim 7, characterized in that la surface spécifique de la substance active est supérieure à 3 m2/g.  the specific surface area of the active substance is greater than 3 m 2 / g. 9. Composition sous forme de microcapsules selon l'une quelconque des revendications 1 à9. Composition in the form of microcapsules according to any one of claims 1 to 8, caractérisée en ce que la substance active est une protéine. 8, characterized in that the active substance is a protein. 10. Composition sous forme de microcapsules selon l'une quelconque des revendications 1 à10. Composition in the form of microcapsules according to any one of claims 1 to 8, caractérisée en ce que la substance active est un peptide.  8, characterized in that the active substance is a peptide. 1 1. Composition sous forme de microcapsules selon la revendication 10, caractérisée en ce1. Microcapsule composition according to claim 10, characterized in that que le peptide est choisi dans le groupe constitué de l'acétate de triptoréline, l'acétate de that the peptide is selected from the group consisting of triptorelin acetate, lanréotide, d'un composé ayant une activité LH-RH tel que la triptoréline, la goséréline, la lanreotide, a compound having LH-RH activity such as triptorelin, goserelin, leuproréline, la buséréline ou leurs sels, un antagoniste de 1-H-RH, un antagoniste de leuprorelin, buserelin or their salts, a 1-H-RH antagonist, a GPllbIIIIa, un composé ayant une activité similaire à un antagoniste de GPIIb/IIIa,  GPllbIIIIa, a compound having similar activity to a GPIIb / IIIa antagonist, l'érythropoiétine (EPO) ou un de ses analogues, les différents interférons a, erythropoietin (EPO) or one of its analogues, the various interferons a, I'interféron ss ou y, la somatostatine, un dérivé de la somatostatine, un analogue de la Interferon ss or y, somatostatin, a somatostatin derivative, an analogue of somatostatine, l'insuline, une hormone de croissance, un facteur libérateur d'hormone de somatostatin, insulin, a growth hormone, a hormone-releasing factor croissance (GRF), un facteur de croissance épidermique (EGF), une hormone growth (GRF), an epidermal growth factor (EGF), a hormone malanocyte-stimulante (M SH), une hormone libératrice de thyrotropine (1 RH) ou un de malanocyte-stimulant (M SH), a thyrotropin-releasing hormone (1 RH) or one of ses sels ou dérivés, une hormone stimulant la thyroïde (TSH), une hormone lutéinisante its salts or derivatives, a thyroid stimulating hormone (TSH), a luteinizing hormone (LH), une hormone stimulant les follicules (FSH), une hormone parathyroidienne (PTH) (LH), a follicle stimulating hormone (FSH), a parathyroid hormone (PTH) ou un de ses dérivés, un hydrochlorure de lysozyme, un fragment de peptide à N terminal or a derivative thereof, a lysozyme hydrochloride, an N-terminal peptide fragment (position 1- > 34) de l'hormone PTH humaine, la vasopressine ou un de ses dérivés, (position 1-> 34) of the human hormone PTH, vasopressin or a derivative thereof, l'oxytocine, la calcitonine, un dérivé de la calcitonine ayant une activité similaire à celle de oxytocin, calcitonin, a calcitonin derivative with activity similar to that of la calcitonine, le glucagon, la gastrine, la sécrétine, la pancréozymine, la calcitonin, glucagon, gastrin, secretin, pancreozymin, cholécystokinine, l'angiotensine, le lactogène du placenta humain, la gonadotropine cholecystokinin, angiotensin, human placental lactogen, gonadotropin chorionique humaine (HCG), l'enképhaline, le facteur stimulateur de colonies (CSF), un chorionic acid (HCG), enkephalin, colony stimulating factor (CSF), a dérivé de l'enképhaline, l'endorphine, la kyotorphine, les interleukines, par exemple derived from enkephalin, endorphin, kyotorphine, interleukins, for example lAnterleukine 2, la tuftsine, la thymopoiétine, la thymosthymline, le facteur thymique Anterleukin 2, tuftsin, thymopoietin, thymosthymline, thymic factor humoral (THF), le facteur thymique sérique (FrS), un dérivé du facteur thymique sérique humoral (THF) serum thymic factor (SF), a derivative of the serum thymic factor (FTS), la thymosine, le facteur thymique X, le facteur de nécrose tumorale (TNT), la (FTS), thymosin, thymic factor X, tumor necrosis factor (TNT), motiline, la bombesine ou un de ses dérivés, la prolactine, la neurotensine, la dynorphine, motilin, bombesin or a derivative thereof, prolactin, neurotensin, dynorphine, la caeruléine, la substance P, I'urokinase, I'asparaginase, la bradykinine, la kallilrréine,  caerulein, substance P, urokinase, asparaginase, bradykinin, kallilrrein, la facteur de croissance nerveuse, un facteur de coagulation sanguine, la polymixine B, la nerve growth factor, a blood coagulation factor, polymixin B, colistine, la gramicidine, la bacitracine, un peptide stimulant la synthèse protéique, un colistin, gramicidin, bacitracin, a peptide stimulating protein synthesis, a antagoniste de l'endothéline ou un de ses sels ou dérivés, un polypeptide intestinal an antagonist of endothelin or a salt or derivative thereof, an intestinal polypeptide vasoactif (VIP), l'hormone adrénocorticotropique (ACTH), un facteur de croissance vasoactive (VIP) adrenocorticotropic hormone (ACTH), a growth factor dérivé des plaquettes (PDGF), une protéine morphogénétique osseuse (BMP), et un platelet derivative (PDGF), a bone morphogenetic protein (BMP), and a polypeptide inhibiteur gastrique (GIP).  gastric inhibitory polypeptide (GIP). 12. Composition sous forme de microcapsules selon l'une des revendications 1 à 8,12. Composition in the form of microcapsules according to one of claims 1 to 8, caractérisée en ce que la substance active hydrosoluble est l'acétate de triptoréline. characterized in that the water-soluble active substance is triptorelin acetate. 13. Composition sous forme de microcapsules selon l'une des revendications 1 à 8,13. Composition in the form of microcapsules according to one of claims 1 to 8, caractérisée en ce que la substance active hydrosoluble est l'acétate de lanréotide.  characterized in that the water-soluble active substance is lanreotide acetate. 14. Procédé de préparation d'une substance hydrosoluble présentant une surface spécifique14. Process for the preparation of a water-soluble substance having a specific surface élevée, comprenant les étapes suivantes: high, comprising the following steps: - une étape de lyophilisation comprenant une trempe rapide d'une solution diluée de a lyophilization step comprising rapid quenching of a dilute solution of ladite substance hydrosoluble dans un milieu de température inférieure à -70 C; said water-soluble substance in a medium of temperature below -70 C; - une étape de broyage. - a grinding step. 15. Procédé selon la revendication 14, caractérisé en ce que l'étape de broyage comprend un15. The method of claim 14, characterized in that the grinding step comprises a broyage ultrasonique. ultrasonic grinding. 16. Procédé selon la revendication 14 ou 15, caractérisé en ce que la solution diluée est une16. The method of claim 14 or 15, characterized in that the diluted solution is a solution à une concentration inférieure à la moitié de la concentration de saturation. solution at a concentration less than half the saturation concentration. 17. Procédé selon la revendication 14 ou 15, caractérisé en ce que la substance hydrosoluble17. Process according to claim 14 or 15, characterized in that the water-soluble substance présente une concentration de saturation d'au moins 200 g/l et que la solution diluée est has a saturation concentration of at least 200 g / l and that the diluted solution is une solution à une concentration inférieure à un quart de la concentration de saturation. a solution at a concentration of less than one quarter of the saturation concentration. 18. Substance active telle qu'obtenue par un procédé selon la revendication 14 ou 15.Active substance as obtained by a process according to claim 14 or 15. 19. Protéine selon la revendication 18.19. Protein according to claim 18. 20. Peptide selon la revendication 18.Peptide according to claim 18. 21. Peptide selon la revendication 20, caractérisé en ce qu'il est choisi dans le groupePeptide according to claim 20, characterized in that it is selected from the group constitué de l'acétate de triptoréline, l'acétate de lanréotide, d'un composé ayant une consisting of triptorelin acetate, lanreotide acetate, a compound having a activité LH-RH tel que la triptoréline, la goséréline, la leuproréline, la buséréline ou leurs LH-RH activity such as triptorelin, goserelin, leuprorelin, buserelin or their sels, un antagoniste de 1-H-RH, un antagoniste de GPIIb/IIIa, un composé ayant une salts, a 1-H-RH antagonist, a GPIIb / IIIa antagonist, a compound having a activité similaire à un antagoniste de GPIIb/IIIa, l'érythropoiétine (EPO) ou un de ses similar activity to a GPIIb / IIIa antagonist, erythropoietin (EPO) or one of its analogues, les différents interférons cc, l'interféron B ou y, la somatostatine, un dérivé analogues, different interferons cc, interferon B or y, somatostatin, a derivative de la somatostatine, un analogue de la somatostatine, I'insuline, une hormone de somatostatin, an analogue of somatostatin, insulin, a hormone croissance, un facteur libérateur d'hormone de croissance (GRF), un facteur de growth factor, a growth hormone releasing factor (GRF), a factor croissance épidermique (EGF), une hormone malanocyte-stimulante (MSH), une epidermal growth (EGF), a malanocyte-stimulating hormone (MSH), a hormone libératrice de thyrotropine (TRH) ou un de ses sels ou dérivés, une hormone thyrotropin releasing hormone (TRH) or a salt or derivative thereof, a hormone stimulant la thyroïde (TSH), une hormone lutéinisante (LH), une hormone stimulant les thyroid stimulating hormone (TSH), a luteinizing hormone (LH), a hormone that stimulates follicules (FSH), une hormone parathyroïdienne (PTH) ou un de ses dérivés, un follicles (FSH), a parathyroid hormone (PTH) or a derivative thereof, a hydrochlorure de lysozyme, un fragment de peptide à N terminal (position 1- > 34) de lysozyme hydrochloride, an N-terminal peptide fragment (position 1-> 34) of l'hormone PTH humaine, la vasopressine ou un de ses dérivés, l'oxytocine, la human PTH, vasopressin or a derivative thereof, oxytocin, calcitonine, un dérivé de la calcitonine ayant une activité similaire à celle de la calcitonine, calcitonin, a calcitonin derivative with activity similar to that of calcitonin, le glucagon, la gastrine, la sécrétine, la pancréozymine, la cholécystokinine, glucagon, gastrin, secretin, pancreozymine, cholecystokinin, l'angiotensine, le lactogène du placenta humain, la gonadotropine chorionique humaine angiotensin, human placental lactogen, human chorionic gonadotropin (HCG), l'enképhaline, le facteur stimulateur de colonies (CSF), un dérivé de  (HCG), enkephalin, colony stimulating factor (CSF), a derivative of l'enképhaline, I'endorphine, la kyotorphine, les interleukines, par exemple enkephalin, endorphin, kyotorphin, interleukins, for example 1'Interleukine 2, la tuftsine, la thymopoiétine, la thymosthymline, le facteur thymique Interleukin 2, tuftsin, thymopoietin, thymosthymline, thymic factor humoral (THF), le facteur thymique sérique (FTS), un dérivé du facteur thymique sérique Humoral Thymic Factor (THF), a derivative of the serum thymic factor (FTS), la thymosine, le facteur thymique X, le facteur de nécrose tumorale (TNF), la (FTS), thymosin, thymic factor X, tumor necrosis factor (TNF), motiline, la bombesine ou un de ses dérivés, la prolactine, la neurotensine, la dynorphine, motilin, bombesin or a derivative thereof, prolactin, neurotensin, dynorphine, la caeruléine, la substance P, l'urokinase, l'asparaginase, la bradykinine, la kallikréine, caerulein, substance P, urokinase, asparaginase, bradykinin, kallikrein, la facteur de croissance nerveuse, un facteur de coagulation sanguine, la polymixine B, la nerve growth factor, a blood coagulation factor, polymixin B, colistine, la gramicidine, la bacitracine, un peptide stimulant la synthèse protéique, un colistin, gramicidin, bacitracin, a peptide stimulating protein synthesis, a antagoniste de l'endothéline ou un de ses sels ou dérivés, un polypeptide intestinal an antagonist of endothelin or a salt or derivative thereof, an intestinal polypeptide vasoactif (VIP), l'hormone adrénocorticotropique (ACTH), un facteur de croissance vasoactive (VIP) adrenocorticotropic hormone (ACTH), a growth factor dérivé des plaquettes (PDGF), une protéine morphogénétique osseuse (BMP), et un platelet derivative (PDGF), a bone morphogenetic protein (BMP), and a polypeptide inhibiteur gastrique (GIP). gastric inhibitory polypeptide (GIP). 22. Acétate de triptoréline tel qu'obtenu par un procédé selon la revendication 14 ou 15.22. Triptorelin acetate as obtained by a process according to claim 14 or 15. 23. Acétate de lanréotide tel qu'obtenu par un procédé selon la revendication 14 ou 15. 23. Lanreotide acetate as obtained by a process according to claim 14 or 15.