FR2741509A1 - Improving intestinal tract flora - Google Patents

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Abstract

A dietetic composition to improve the biological balance of intestinal tract flora in man and animals comprises a dehydrated preparation of propionic and bifid bacteria in an amount of at least 10<9> cells/g, preferably 10<10> - 10<12> cells/g.

Description

La présente invention concerne une composition diététique absorbable susceptible d'améliorer l'équilibre biologique de la flore du tractus intestinal de l'homme et des mammifères. The present invention relates to an absorbable dietetic composition capable of improving the biological balance of the flora of the intestinal tract of humans and mammals.

Il est bien connu que le contenu du tube digestif humain, qui correspond approximativement à 1 à 1,5 kg de matières alimentaires en cours de transformation digestive, renferme une importante population de micro-organismes pouvant être éva
10 luée à environ 10 cellules/g dans le côlon.
It is well known that the contents of the human digestive tract, which corresponds approximately to 1 to 1.5 kg of food material undergoing digestive processing, contains a large population of microorganisms which can be evaporated.
10 luted at about 10 cells / g in the colon.

Cette population est répartie en différents groupes bactériens dont certains sont inoffensifs ou bénéfiques, tandis que d'autres, en particulier des coliformes et des putréfiants conduisent à la production de substances toxiques et influencent négativement la santé. This population is divided into different bacterial groups some of which are harmless or beneficial, while others, especially coliforms and putrefactive substances lead to the production of toxic substances and negatively influence health.

Or, et notamment depuis le début du vingtième siècle, différents travaux ont tenté de montrer que la présence d'une population importante de bactéries lactiques limite très fortement le développement des espèces putréfiantes et par suite la production de ces matières toxiques. However, and in particular since the beginning of the twentieth century, various studies have attempted to show that the presence of a large population of lactic acid bacteria very strongly limits the development of putrefying species and consequently the production of these toxic materials.

Il a donc tout naturellement été proposé d'introduire dans l'organisme une population importante de ces bactéries, soit par le biais d'une alimentation particulière, soit par l'ingestion directe de ces cellules microbiennes parmi la flore lactique possible, on a notamment conseillé l'absorption des bactéries suivantes mentionnées à titre d'exemple non limitatif Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus ou encore Streptococus faeciwn. It has therefore quite naturally been proposed to introduce into the body a large population of these bacteria, either by means of a particular diet, or by the direct ingestion of these microbial cells among the possible lactic flora, it has in particular recommended the absorption of the following bacteria mentioned by way of nonlimiting example Lactobacillus bulgaricus, Lactobacillus acidophilus or Streptococus faeciwn.

Cette administration n'a, toutefois, pas permis d'aboutir aux résultats escomptés compte tenu, d'une part, du fait que la population microbienne du tractus intestinal constitue une masse dont l'équilibre ne peut que difficilement être modifié radicalement et durablement et, d'autre part, que l'on a pu établir que la consommation de bactéries lactiques n'a que peu d'influence sur la flore putride qui provoque les malaises et désagréments connus. This administration did not, however, make it possible to achieve the expected results given, on the one hand, the fact that the microbial population of the intestinal tract constitutes a mass whose balance can only with difficulty be radically and durably modified and , on the other hand, that it has been established that the consumption of lactic acid bacteria has little influence on the putrid flora which causes the known discomforts and inconveniences.

Plus récemment, c'est-à-dire durant la décennie 1970/1980, on a également proposé d'introduire dans l'alimentation humaine des espèces non lactiques du type bifide qui, comme on l'a démontré, sont susceptibles de présenter un intérêt pour la santé. De tels ferments peuvent être consommés soit par le biais de desserts lactés ou autres produits laitiers fermentés pour partie par une flore bifide soit à travers l'ingestion directe de cellules vivantes conditionnées à cet effet. More recently, that is to say during the decade 1970/1980, it was also proposed to introduce into the human diet non-lactic species of the bifid type which, as has been demonstrated, are liable to present a interest in health. Such ferments can be consumed either through dairy desserts or other dairy products fermented in part by a bifid flora or through the direct ingestion of living cells conditioned for this purpose.

Une telle introduction s'est cependant révélée décevante à l'usage, compte tenu en particulier du fait que les bactéries bifides exogènes ne réussissent que difficilement à s'implanter durablement dans l'intestin humain, notamment chez des sujets pour lesquels l'équilibre intestinal n'est pas des meilleurs. Such an introduction has, however, proved to be disappointing in use, in particular given the fact that the exogenous bifid bacteria only succeed with difficulty in establishing themselves durably in the human intestine, in particular in subjects for whom the intestinal balance is not the best.

Partant de ces connaissances d'ordre général, l'idée à la base de l'invention a consisté à chercher un moyen permettant d'augmenter la population bifide. On the basis of this general knowledge, the idea at the basis of the invention consisted in seeking a means making it possible to increase the bifid population.

Ce faisant, on a été amené à prendre en considération les travaux du Professeur Henri Berrens de Lille qui a pu établir que l'acide propionique est un élément sélectif et électif spécifique de la flore bifide. In doing so, we were led to take into consideration the work of Professor Henri Berrens of Lille who was able to establish that propionic acid is a selective and elective element specific to the bifid flora.

Or, il est connu que cet acide organique est l'un des produits résultant de la fermentation notamment du lactate par un type particulier de bactéries, les bactéries propioniques qui, bien que n'appartenant pas au groupe des bactéries lactiques, sont néanmoins présentes en alimentation humaine depuis des siècles, vu en particulier que ce sont elles qui permettent l'obtention des trous lors de la fabrication du fromage dénommé Emmental : en effet, en fin d'affinage, ces froma 9 ges renferment environ 10 cellules/g de bactéries propioni- ques. Now, it is known that this organic acid is one of the products resulting from the fermentation in particular of lactate by a particular type of bacteria, the propionic bacteria which, although not belonging to the group of lactic bacteria, are nevertheless present in human food for centuries, especially considering that it is they which allow the obtaining of the holes during the manufacture of the cheese called Emmental: in fact, at the end of ripening, these cheeses contain approximately 10 cells / g of bacteria propionics.

Il est à noter, qu'outre l'acide propionique, la fermentation des bactéries propioniques produit entre autre de l'acide acétique et du dioxyde de carbone. It should be noted that in addition to propionic acid, the fermentation of propionic bacteria produces, among other things, acetic acid and carbon dioxide.

Parallèlement à ces travaux, on a pu établir conformément à la publication TSUTOMU KANEKO, HIROHARU MORI,
MEGUMI IWATA and SACHIKI MEGURO Growth stimulator for
Bifidobacteria Produced by Propionibacterium freudenreichii and
Several Intestinal Bacteria 1994 J; Dairy Sci 77:393-404, dune part que des bactéries propioniques, et notamment des bactéries du type Propionibacterium freundenreichil peuvent produire un facteur de croissance des bactéries bifides et, d'autre part, que les acides gras à chaîne courte et en particulier l'acide propionique ont une action inhibitrice très importante sur la croissance de nombreuses bactéries intestinales indésirables mais stimulent la croissance des bactéries bifides.
In parallel with this work, it was possible to establish in accordance with the publication TSUTOMU KANEKO, HIROHARU MORI,
MEGUMI IWATA and SACHIKI MEGURO Growth stimulator for
Bifidobacteria Produced by Propionibacterium freudenreichii and
Several Intestinal Bacteria 1994 J; Dairy Sci 77: 393-404, on the one hand that propionic bacteria, and in particular bacteria of the Propionibacterium freundenreichil type can produce a growth factor for bifid bacteria and, on the other hand, that short-chain fatty acids and in particular l propionic acid have a very strong inhibitory action on the growth of many unwanted intestinal bacteria but stimulate the growth of bifid bacteria.

Il a également déjà été proposé, conformément au document JP-A-07 227 207, d'ajouter des bactéries propioniques à des denrées alimentaires notamment à du lait fermenté renfermant des bactéries bifides dans le but d'augmenter la survie de ces bactéries. It has also already been proposed, in accordance with document JP-A-07 227 207, to add propionic bacteria to foodstuffs in particular to fermented milk containing bifid bacteria with the aim of increasing the survival of these bacteria.

Il est, en outre, à noter que l'on connaît, par le document US-A-4 806 368, un comprimé diététique à base de fibres alimentaires, en particulier de fibres de pomme pouvant renfermer des bactéries bifides et, en outre, une quantité moindre de bactéries propioniques agissant en tant qu'agent antifongique. It should also be noted that, from document US Pat. No. 4,806,368, a dietetic tablet based on dietary fibers, in particular apple fibers, which may contain bifid bacteria and, moreover, is known. less propionic bacteria acting as an antifungal agent.

Partant de ces connaissances préalables, on a eu l'idée, conformément à l'invention, de tenter de faire consommer directement, et en grande quantité, des ferments bifides et propioniques associés dans le cadre d'une présentation dosée et prête à être ingérée facilement. Based on this prior knowledge, we had the idea, in accordance with the invention, of trying to consume directly, and in large quantities, associated bifid and propionic ferments in the context of a dosed presentation and ready to be ingested. easily.

Or, on s'est rendu compte qu'une telle absorption s'avère en tout point bénéfique et permet en particulier de réduire de façon significative les manifestations néfastes habituelles des germes putrides, ce alors même que l'on aurait pu s'attendre à l'effet inverse, compte tenu de l'important dégagement de dioxyde de carbone consécutif à la fermentation propionique, comme l'atteste le rôle de ces ferments dans l'ouverture des fromages. However, it has been realized that such absorption is beneficial in every way and in particular makes it possible to significantly reduce the usual harmful manifestations of putrid germs, even though one might have expected to the opposite effect, given the significant release of carbon dioxide following the propionic fermentation, as evidenced by the role of these ferments in the opening of cheeses.

L'invention a, par suite, pour objet une composition diététique absorbable susceptible d'améliorer l'équilibre biologique de la flore du tractus intestinal de l'homme et des mammifères, caractérisée en ce qu'elle est constituée par une préparation déshydratée renfermant des bactéries propioniques
9 et des bactéries bifides en quantité d'au moins 10 cellules/g
10 12 et de préférence de l'ordre de 10 à 10 cellules/g, ce qui signifie qu'elle est très concentrée en bactéries.
The invention therefore relates to an absorbable dietetic composition capable of improving the biological balance of the flora of the intestinal tract of humans and mammals, characterized in that it consists of a dehydrated preparation containing propionic bacteria
9 and bifid bacteria in an amount of at least 10 cells / g
10 12 and preferably of the order of 10 to 10 cells / g, which means that it is very concentrated in bacteria.

Ces bactéries sont, dans le cas général, des bactéries vivantes, mais peuvent également être tuées, à la condition que l'on ait pris soin de ne pas détruire leur capital enzymatique. These bacteria are, in the general case, living bacteria, but can also be killed, provided that care has been taken not to destroy their enzymatic capital.

Ces bactéries sont, de préférence, réparties en 80 à 99 W de bactéries propioniques et 20 à 1 W de bactéries bifides. These bacteria are preferably distributed into 80 to 99 W of propionic bacteria and 20 to 1 W of bifid bacteria.

La composition conforme à l'invention renferme donc avantageusement en moyenne dix fois plus de bactéries propioniques que de bactéries bifides. The composition in accordance with the invention therefore advantageously contains on average ten times more propionic bacteria than bifid bacteria.

Les bactéries bifides mises en oeuvre appartiennent, en règle générale, à l'espèce Bifidobacterium et sont, de préférence, choisies parmi les souches B.bifidum, B.longum,
B.adolescentis, B.breve, B.infantis et B.pseudolongum.
The bifid bacteria used belong, as a general rule, to the Bifidobacterium species and are preferably chosen from the strains B. bifidum, B. longum,
B.adolescentis, B.breve, B. infantis and B.pseudolongum.

Les bactéries propioniques appartiennent, quant à elles en règle générale, aux espèces Propionibacterium freuden reichii ou Propionibacterium shermanli ou Propionibacterium thoenii ou Propionibacterium jensenii ou Propionibacterium acidipropionici. As a general rule, propionic bacteria belong to the species Propionibacterium freuden reichii or Propionibacterium shermanli or Propionibacterium thoenii or Propionibacterium jensenii or Propionibacterium acidipropionici.

Ces bactéries peuvent être mises en oeuvre en souche pure, ou de préférence, en mélange de souches ; dans le cas des bactéries propioniques, il est avantageux d'associer simultanément des souches fortement autolytiques et des souches peu autolytiques. These bacteria can be used as a pure strain, or preferably as a mixture of strains; in the case of propionic bacteria, it is advantageous to simultaneously combine strongly autolytic strains and poorly autolytic strains.

L'invention se rapporte également à l'utilisation d'une préparation déshydratée renfermant des bactéries propio
9 niques en quantité d'au moins 10 cellules/g de préférence de
10 , 12 l'ordre de 10 à 10 cellules/g pour l'obtention d'une composition diététique absorbable susceptible d'améliorer l'équilibre biologique de la flore du tractus intestinal de l'homme et des mammifères et en particulier d'augmenter la population bifide.
The invention also relates to the use of a dehydrated preparation containing propio bacteria.
9 nics in an amount of at least 10 cells / g, preferably
10, 12 of the order of 10 to 10 cells / g for obtaining an absorbable dietetic composition capable of improving the biological balance of the flora of the intestinal tract of humans and mammals and in particular of increasing the population bifides.

Il est à noter que cette population bifide peut provenir soit de bactéries endogènes soit de bactéries exogènes ajoutées à la préparation. It should be noted that this bifid population can originate either from endogenous bacteria or from exogenous bacteria added to the preparation.

Cette composition se présente, de préférence, sous forme de fractions individuelles d'environ 100 mg à 1 g, de préférence 200 à 500 mg renfermant la dose de bactéries devant être absorbée quotidiennement. This composition is preferably in the form of individual fractions of about 100 mg to 1 g, preferably 200 to 500 mg containing the dose of bacteria to be absorbed daily.

Ces fractions peuvent être ingérées directement ou être préalablement diluées dans un liquide ; elles peuvent être conditionnées sous toute forme permettant de faciliter l'absorption : comprimés, sachets de poudre granulée ou non,
On a vérifié que de telles préparations déshydratées concentrées de bactéries propioniques conservées deux années à +40C voient leur concentration baisser de moins de un Log.
These fractions can be ingested directly or be diluted beforehand in a liquid; they can be packaged in any form that facilitates absorption: tablets, sachets of powder, granulated or not,
It has been verified that such concentrated dehydrated preparations of propionic bacteria stored for two years at + 40 ° C. see their concentration drop by less than one log.

L'expérience a prouvé que des gélules gastrorésistantes ou non correspondent à un type de conditionnement parti cul ièrement avantageux. Experience has shown that gastro-resistant capsules or not correspond to a particularly advantageous type of packaging.

Selon une autre caractéristique de l'invention,
9 chaque fraction individuelle renferme au moins 10 bactéries et
10 12 de préférence de l'ordre de 10 à 10 bactéries.
According to another characteristic of the invention,
9 each individual fraction contains at least 10 bacteria and
10 12 preferably of the order of 10 to 10 bacteria.

Il est à noter qu'en deçà du seuil de 10 bactéries, l'effet est aléatoire, ce qui est, selon toute probabilité, consécutif au fait que les bactéries se trouvent alors détruites par l'acidité stomacale ou par les sels biliaires avant leur arrivée dans le côlon. It should be noted that below the threshold of 10 bacteria, the effect is random, which is, in all probability, following the fact that the bacteria are then destroyed by stomach acid or by bile salts before their release. arrival in the colon.

Selon l'invention, il est donc proposé de faire absorber quotidiennement par l'être humain, à titre de complément alimentaire, une dose de bactéries propioniques correspondant environ au millième de la flore totale du tube digestif (qui
14 représente environ 10 unités) ce qui correspond à une quantité nettement supérieure à celle proposée auparavant pour des bactéries de type autre.
According to the invention, it is therefore proposed to have humans absorb daily, as a food supplement, a dose of propionic bacteria corresponding to approximately one thousandth of the total flora of the digestive tract (which
14 represents approximately 10 units) which corresponds to a quantity markedly greater than that proposed previously for bacteria of other type.

On a pu vérifier qu'une telle administration conforme à l'invention est dénuée de tout effet néfaste et entraîne, outre les avantages susmentionnés - une diminution notable de l'émission de gaz malodorants typi
ques des putréfiants, - une modification de la couleur et de l'odeur des selles.
It has been possible to verify that such an administration in accordance with the invention is devoid of any harmful effect and entails, in addition to the aforementioned advantages - a notable reduction in the emission of malodorous gases typi
putrefactive substances, - a change in the color and odor of the stool.

Ces constatations sont clairement de nature à mettre en lumière l'activité symbiotique des bactéries propioniques et des bactéries bifides, les propioniques stimulant le développement des bifides. These findings are clearly such as to shed light on the symbiotic activity of propionic bacteria and bifid bacteria, propionics stimulating the development of bifids.

Ce résultat a été confirmé par une étude réalisée dans le but de vérifier si des souches de Propionibacterium pouvaient soit améliorer la vitesse d'établissement d'une souche de Bifidobacterium bifidum dans le tube digestif de souris, soit augmenter son niveau d'activité dans les différents segments du tube digestif. This result was confirmed by a study carried out with the aim of verifying whether strains of Propionibacterium could either improve the rate of establishment of a strain of Bifidobacterium bifidum in the digestive tract of mice, or increase its level of activity in mice. different segments of the digestive tract.

Cette étude a, dans un premier temps, montré qu'il n'est pas possible d'établir durablement des Propionibacterium dans le tube digestif de souris, même de souris sans germe, c'est-à-dire en l'absence de flore digestive. This study first showed that it is not possible to establish long-term Propionibacterium in the digestive tract of mice, even in mice without germs, that is to say in the absence of flora. digestive.

On a, en revanche, pu montrer que l'apport de Propionibacterium en culture dans l'eau de boisson de ces souris permet de stimuler la vitesse d'implantation de souches de Bifidobacterium bifidum dans le tube digestif. On the other hand, it has been possible to show that the contribution of Propionibacterium in culture in the drinking water of these mice makes it possible to stimulate the rate of implantation of strains of Bifidobacterium bifidum in the digestive tract.

Cette étude scientifique apporte donc la preuve qu'il existe, une réelle synergie entre les actions des bactéries propioniques et des bactéries bifides. This scientific study therefore provides proof that there is a real synergy between the actions of propionic bacteria and bifid bacteria.

Ces résultats ont, en outre, pu être vérifiés par une série d'investigations réalisées, d'une part, in vivo chez l'homme sain et, d'autre part, in vitro. These results could, moreover, be verified by a series of investigations carried out, on the one hand, in vivo in healthy humans and, on the other hand, in vitro.

Investigations in vivo
Celles-ci ont eu pour but l'étude en milieu hospitalier au CHU de Caen de la survie et/ou de l'implantation de souches de bactéries propioniques dans le milieu intestinal et leur effet sur la flore bifide d'une série de dix-neuf sujets masculins volontaires sains.
In vivo investigations
These were aimed at the study in a hospital environment at the CHU de Caen of the survival and / or implantation of strains of propionic bacteria in the intestinal environment and their effect on the bifid flora of a series of ten. nine healthy male volunteers.

Conformément à cette étude, on a fait ingérer quotidiennement à chaque volontaire, ce pendant deux semaines, une 10 gélule contenant 5 10 bactéries propioniques sélectionnées par 1'INRA et issues d'une banque de souches utilisées dans l'industrie fromagère, donc parfaitement inoffensives pour 1 ' homme. In accordance with this study, each volunteer was made to ingest daily, for two weeks, a 10 capsule containing 5 10 propionic bacteria selected by INRA and obtained from a bank of strains used in the cheese industry, therefore perfectly harmless. for man.

Les bactéries propioniques administrées se subdivisaient en deux souches à raison d'environ 50 W chacune, l'une de ces souches étant peu autolytique tandis que l'autre était sensée s'autolyser au niveau de l'estomac et au début de l'intestin grêle sous l'action des sels biliaires. The propionic bacteria administered were subdivided into two strains at a rate of approximately 50 W each, one of these strains being poorly autolytic while the other was supposed to autolyzate in the stomach and at the beginning of the intestine. hail under the action of bile salts.

L'étude de la flore fécale a été réalisée sur un échantillon de selles avant la prise de propioniques pour avoir l'état basal de la flore, au cours de cette prise et postérieurement à celle-ci pour apprécier la durée de survie des bactéries exogènes dans le tube digestif des sujets volontaires. The study of the faecal flora was carried out on a stool sample before the intake of propionics to have the basal state of the flora, during this intake and after it to assess the survival time of the exogenous bacteria. in the digestive tract of volunteers.

Cette étude a inclus une numération des propioniques ingérés et des bifidobactéries. This study included a count of ingested propionics and bifidobacteria.

Suite à ces investigations, il a pu être vérifié que la population de bactéries propioniques dans les selles augmentait significativement dès le premier prélèvement sous propioniques mais que cet effet est transitoire et cesse peu après l'arrêt de l'ingestion des bactéries. Following these investigations, it was possible to verify that the population of propionic bacteria in the stool increased significantly from the first sampling on propionics, but that this effect is transient and ceases shortly after the ingestion of the bacteria has stopped.

Ces résultats montrent qu'une fraction des souches de bactéries propioniques peut survivre dans le tube digestif humain, mais que celles-ci ne peuvent pas s'y implanter durablement. These results show that a fraction of the strains of propionic bacteria can survive in the human digestive tract, but that they cannot permanently implant there.

Pour apprécier l'effet des bactéries propioniques sur la population bifide, on a également pris en considération des prélèvements effectués avant l'ingestion des propioniques (a), pendant cette ingestion (b) et après celle-ci (deux prélèvements (c et d) effectués à une semaine d'intervalle). To assess the effect of propionic bacteria on the bifid population, samples taken before the ingestion of the propionics (a), during this ingestion (b) and after it (two samples (c and d) were also taken into account. ) performed one week apart).

Il est à noter que le prélèvement (b) correspond à la moyenne de deux prélèvements effectués à une semaine d'intervalle. It should be noted that the sample (b) corresponds to the average of two samples taken one week apart.

Une numération des Bifidobactéries a permis de calculer les moyennes (en Log) des populations pendant ces quatre périodes. A count of Bifidobacteria made it possible to calculate the means (in Log) of the populations during these four periods.

On a ainsi trouvé des valeurs moyennes respectives de 8,40 (a) ; 8,90 (b) ; 9,43 (c) et 8,89 (d). L'évolution avec le temps a été étudiée par un test statistique non paramétrique pour populations appariées, le Wilcoxon Matched-paired Signed
Ranks Test. Il montre que lors de l'ingestion de propioniques (prélèvement b) la population bifide augmente significativement par rapport au chiffre de base (prélèvement a) (p=0,0096) et reste élevée au premier contrôle (prélèvement c) après l'arrêt de leur ingestion (p=0,031). Il n'y a pas de différence entre la numération de Bifidobactéries pendant l'apport de propioniques (prélèvement b) et ce premier contrôle après son arrêt (1 semaine) (prélèvement c) (p=0,19) ; la population de Bifidobactéries diminue au deuxième contrôle (prélèvement d) (p=0,049) en comparaison avec le premier contrôle après arrêt (prélèvement c) et revient au niveau antérieur à l'apport des propioniques (prélèvement a) (p=0,25) entre le 2ème contrôle (prélèvement d) et le prélèvement le précédant (prélèvement c).
We thus found respective mean values of 8.40 (a); 8.90 (b); 9.43 (c) and 8.89 (d). The evolution over time was studied by a non-parametric statistical test for paired populations, the Wilcoxon Matched-paired Signed
Ranks Test. It shows that during the ingestion of propionics (sample b) the bifid population increases significantly compared to the baseline figure (sample a) (p = 0.0096) and remains high at the first control (sample c) after stopping of their ingestion (p = 0.031). There is no difference between the Bifidobacteria count during the supply of propionics (sample b) and this first check after stopping it (1 week) (sample c) (p = 0.19); the population of Bifidobacteria decreases at the second control (sample d) (p = 0.049) in comparison with the first control after stopping (sample c) and returns to the level prior to the intake of propionics (sample a) (p = 0.25 ) between the 2nd control (sample d) and the sample preceding it (sample c).

Ces résultats montrent que l'apport à dose élevée de propioniques favorise le développement de la flore bifide cet effet est rapide, observé dès la première semaine et persiste au moins une semaine après l'arrêt de l'ingestion des propioniques. These results show that the high dose intake of propionics promotes the development of the bifid flora. This effect is rapid, observed from the first week and persists for at least one week after stopping the ingestion of the propionics.

Investigations in vitro
Le but de ces investigations était
d'étudier la résistance des bactéries propioniques au
stress digestif, c'est-à-dire l'acidité stomacale et les
sels biliaires,
d'étudier l'influence de cultures de bactéries propioniques
sur la croissance des bifidobactéries,
de caractériser, le cas échéant, l'agent responsable de cette
influence.
In vitro investigations
The aim of these investigations was
to study the resistance of propionic bacteria to
digestive stress, i.e. stomach acidity and
bile salts,
to study the influence of cultures of propionic bacteria
on the growth of bifidobacteria,
to characterize, if applicable, the agent responsible for this
affecting.

Résistance des bactéries propioniques au < r stress digestif
Entre leur ingestion et leur arrivée dans le côlon où elles entrent en contact avec les bactéries intestinales et notamment les bactéries bifides, les bactéries propioniques subissent un certain nombre de stress défavorables à leur survie, dont les principaux sont l'acidité stomacale et le contact avec les sels biliaires dans l'intestin grêle.
Resistance of propionic bacteria to digestive stress
Between their ingestion and their arrival in the colon where they come into contact with intestinal bacteria and in particular bifid bacteria, propionic bacteria undergo a number of stresses that are unfavorable to their survival, the main ones being stomach acidity and contact with bile salts in the small intestine.

Pour apprécier la résistance des bactéries propioniques à ces stress , on a choisi deux souches appartenant à l'espèce Propionibacterium Ereudenreichii, à savoir la souche
LS 410 qui est peu autolytique et la souche LS 2501 qui est fortement autolytique.
To assess the resistance of propionic bacteria to these stresses, we chose two strains belonging to the species Propionibacterium Ereudenreichii, namely the strain
LS 410 which is poorly autolytic and strain LS 2501 which is highly autolytic.

Chez l'homme le pH stomacal, après l'arrivée du bol alimentaire, se situe entre 2 et 3 et le temps moyen de vidange gastrique est de l'ordre de 90 min.. In humans, the stomach pH, after the arrival of the food bolus, is between 2 and 3 and the average gastric emptying time is of the order of 90 min.

Pour évaluer la résistance des souches susmentionnées à l'acidité stomacale, on a donc testé celles-ci à différents pH (2, 3 et 4) pendant 90 min. à 370C. To evaluate the resistance of the above-mentioned strains to stomach acidity, they were therefore tested at different pH (2, 3 and 4) for 90 min. at 370C.

On a pu faire les observations suivantes
A pH 4, la viabilité des deux souches n'est pas du tout alté
rée.
We could make the following observations
At pH 4, the viability of the two strains is not altered at all
ree.

A pH 3, la souche LS 410 n'est pas endommagée mais la souche
LS 2501 présente une légère baisse de viabilité.
At pH 3, the LS 410 strain is not damaged but the strain
LS 2501 shows a slight decrease in viability.

A pH 2, la quasi totalité des deux souches meurt après 90 min.At pH 2, almost all of the two strains die after 90 min.

d'incubation. incubation.

La résistance des deux souches aux sels biliaires à 370C a été évaluée en choisissant des concentrations d'acides biliaires de 1, 2 et 5 g/l correspondant essentiellement à la concentration à l'entrée de l'intestin grêle. The resistance of the two strains to bile salts at 370C was evaluated by choosing concentrations of bile acids of 1, 2 and 5 g / l corresponding essentially to the concentration at the entrance to the small intestine.

Ces investigations ont permis de constater qu'à la concentration la plus faible (1 g/l) la souche LS 410 reste entièrement résistante même après 5 h 30 d'incubation. En revanche, la souche LS 2501 présente une moindre résistance. These investigations made it possible to observe that at the lowest concentration (1 g / l) the strain LS 410 remains entirely resistant even after 5 h 30 of incubation. In contrast, strain LS 2501 exhibits less resistance.

En présence de 2 et 5 g/l d'acides biliaires, la viabilité des deux souches chute nettement, la souche LS 2501 étant plus sensible que la souche LS 410. In the presence of 2 and 5 g / l of bile acids, the viability of the two strains drops sharply, the strain LS 2501 being more sensitive than the strain LS 410.

En conclusion, ces investigations ont montré que les deux souches étudiées présentent une grande résistance face à des stress digestifs modérés. Toutefois, dans des conditions de stress élevées, la majeure partie des bactéries ne résiste pas, la souche fortement autolytique (LS 2501) étant la plus sensible. In conclusion, these investigations have shown that the two strains studied exhibit great resistance to moderate digestive stress. However, under high stress conditions, most bacteria do not resist, the highly autolytic strain (LS 2501) being the most sensitive.

Ces résultats démontrent la nécessité, pour obtenir un effet notable sur l'équilibre biologique de la flore du tractus intestinal de l'homme, d'ingérer une quantité importante de bactéries pour assurer une survie suffisante des souches à l'entrée du côlon. These results demonstrate the need, in order to obtain a notable effect on the biological balance of the flora of the human intestinal tract, to ingest a large quantity of bacteria to ensure sufficient survival of the strains at the entrance to the colon.

Influence de cultures de bactéries propioniques sur la croissance des bifidobactéries
Pour effectuer ces investigations, deux souches de bactéries bifides B . B.longum et B . B.bifidum ont été ensemencées dans un milieu contenant, pour moitié
un bouillon de culture adapté à la croissance des bactéries
bifides,
une culture de bactéries propioniques (souches LS 410 ou
LS 2501), soit jeunes (48 h), donc peu lysées, soit âgées de
11 jours, donc fortement lysées, notamment en ce qui concerne
la souche autolytique LS 2501.
Influence of propionic bacteria cultures on the growth of bifidobacteria
To carry out these investigations, two strains of bifid bacteria B. B. longum and B. B. bifidum were inoculated in medium containing, half
a culture broth adapted to the growth of bacteria
bifids,
a culture of propionic bacteria (LS 410 strains or
LS 2501), either young (48 h), therefore little lysed, or aged
11 days, therefore strongly lysed, in particular as regards
the autolytic strain LS 2501.

On a ainsi observé que la présence d'une culture jeune de LS 410 et, de façon moindre, de LS 2501 entraîne un niveau plus élevé de la population totale de B.bifidum en fin de phase exponentielle le nombre de bactéries viables est 3 à 4 fois supérieur en présence de LS 410 et 2 à 3 fois supérieur en présence de LS 2501. It has thus been observed that the presence of a young culture of LS 410 and, to a lesser extent, of LS 2501 leads to a higher level of the total population of B. bifidum at the end of the exponential phase; the number of viable bacteria is 3 to 4 times higher in the presence of LS 410 and 2 to 3 times higher in the presence of LS 2501.

En ce qui concerne B.longum, la culture de LS 410 entraîne, en fin de croissance, une population 2 fois plus élevée de B.longum. As regards B. longum, the culture of LS 410 leads, at the end of growth, to a population twice as high of B. longum.

Dans le cas des cultures âgées, on a pu observer un effet nettement favorable des deux souches sur la croissance de
B.bifidum lors de la phase exponentielle (population 2 à 3 fois supérieure).
In the case of aged cultures, a markedly favorable effect of the two strains on the growth of
B. bifidum during the exponential phase (population 2 to 3 times higher).

En conclusion, les deux bactéries propioniques, testées dans cette étude, ont une influence sur la croissance de B.bifidum. Leur effet est différent selon l'âge de la culture - les cultures jeunes entraînent une augmentation de la viabilité du bifide en fin de croissance conduisant à des populations finales 2 à 4 fois plus importantes (effet plus marqué de LS 410) alors que les cultures âgées ont une action uniquement au début de la croissance en diminuant le temps de génération, mais sans modifier les niveaux de population finale. In conclusion, the two propionic bacteria tested in this study have an influence on the growth of B. bifidum. Their effect is different depending on the age of the crop - young crops lead to an increase in the viability of the bifidium at the end of growth leading to final populations 2 to 4 times larger (stronger effect of LS 410) while crops elderly have an action only at the start of growth by reducing generation time, but without modifying the final population levels.

Caractérisation de l'agent responsable de l'effet bifidogène - Influence de surnageants de culture de bactéries propioniques
- Rôle de l'acide propionique.
Characterization of the agent responsible for the bifidogenic effect - Influence of culture supernatants of propionic bacteria
- Role of propionic acid.

On a effectué des expériences similaires à celles
mentionnées ci-dessus en utilisant, d'une part, uniquement
les surnageants de culture constituant la fraction extracel
lulaire des bactéries et, d'autre part, un milieu comparatif
supplémenté en acide propionique.
Experiments similar to those were carried out
mentioned above using, on the one hand, only
the culture supernatants constituting the extracel fraction
lular bacteria and, on the other hand, a comparative medium
supplemented with propionic acid.

On a ainsi pu observer que, comparativement à un
témoin, les surnageants de culture de bactéries propioniques
ont un effet nettement stimulant sur la croissance de
B.bifidum (3 à 4 fois plus de bactéries viables après 9 h de
culture) ; cet effet est plus marqué en fin de croissance
avec la souche LS 2501.
It was thus observed that, compared to a
control, propionic bacteria culture supernatants
have a distinctly stimulating effect on the growth of
B. bifidum (3 to 4 times more viable bacteria after 9 h of
culture) ; this effect is more marked at the end of growth
with strain LS 2501.

On a vérifié que ces effets promoteurs sont dus en
partie à l'influence du propionate. I1 apparaît toutefois que
le propionate n'est pas seul responsable de ces effets, no
tamment dans le cas de la souche LS 2501.
It has been verified that these promoter effects are due in
part to the influence of propionate. However, it appears that
propionate is not solely responsible for these effects, no
particularly in the case of the LS 2501 strain.

L'acide propionique possède également une influence
stimulante sur l'activité métabolique de B.longum.
Propionic acid also has an influence
stimulant on the metabolic activity of B. longum.

Influence du milieu intracellulaire
On a pu observer que la présence du milieu intra
cellulaire des deux souches de bactéries propioniques en
traîne une augmentation conséquente de la densité optique et
du poids sec cellulaire des deux bifides. Toutefois, ces ef
fets ne sont pas corrélés à une augmentation de la croissance
de B.bifidum ou B.longum vu que leur viabilité ainsi que leur
activité métabolique lors de la croissance ne sont pas modi
fiées.
Influence of the intracellular environment
It has been observed that the presence of the medium intra
cell of the two strains of propionic bacteria in
drags a consequent increase in optical density and
of the dry cell weight of the two bifids. However, these ef
fets do not correlate with increased growth
of B. bifidum or B. longum since their viability as well as their
metabolic activity during growth is not modified
fiées.

Influence des parois isolées
On a pu observer que les parois isolées de bacté
ries propioniques, hydrolysées ou non, n'ont pas d'influence
sur la croissance de B.longum et B.bifidum.
Influence of insulated walls
It has been observed that the isolated walls of bacteria
propionic lines, hydrolyzed or not, have no influence
on the growth of B. longum and B. bifidum.

En conclusion, l'effet promoteur des bactéries propioniques sur la croissance des bifides n'apparaît lié ni à leur contenu intracellulaire, ni aux parois. En revanche les composés responsables sont principalement localisés dans le milieu intracellulaire. Le propionate correspond à l'un de ces composés. In conclusion, the promoting effect of propionic bacteria on the growth of bifids does not appear to be linked either to their intracellular content or to the walls. On the other hand, the responsible compounds are mainly localized in the intracellular medium. Propionate is one of these compounds.

Claims (3)

REVENDICATIONS 1") Composition diététique absorbable susceptible d'améliorer l'équilibre biologique de la flore du tractus intestinal de l'homme et des mammifères, caractérisée en ce qu' elle est constituée par une préparation déshydratée renfermant des bactéries propioniques et des bactéries bifides en quantité 9 d'au moins 10 cellules/g et de préférence de l'ordre de 10 àCLAIMS 1 ") Absorbable dietary composition capable of improving the biological balance of the flora of the intestinal tract of humans and mammals, characterized in that it consists of a dehydrated preparation containing propionic bacteria and bifid bacteria in quantity 9 of at least 10 cells / g and preferably of the order of 10 to 12 10 cellules/g. 12 10 cells / g. 20) Composition selon la revendication 1, caractérisée en ce qu' elle renferme 80 à 99 W de bactéries propioniques et 20 à 1 de bactéries bifides.20) Composition according to claim 1, characterized in that it contains 80 to 99 W of propionic bacteria and 20 to 1 of bifid bacteria. 30) Composition selon l'une quelconque des revendications 1 et 2, caractérisée en ce que les bactéries propioniques appartiennent à l'espèce Propioni bacterium freudenreichii ou Propionibacterium shermanii ou Pro pionibacterium thoenii ou Propionibacterium jensenii ou30) Composition according to any one of claims 1 and 2, characterized in that the propionic bacteria belong to the species Propioni bacterium freudenreichii or Propionibacterium shermanii or Pro pionibacterium thoenii or Propionibacterium jensenii or Propionibacterium acidipropionici.Propionibacterium acidipropionici. 4 ) Composition selon l'une quelconque des revendications 1 à 3, caractérisée en ce que les bactéries bifides appartiennent à l'espèce Bifidobacterium et sont choisies parmi les souches B.bifidum, B.longum, 4) Composition according to any one of claims 1 to 3, characterized in that the bifid bacteria belong to the Bifidobacterium species and are chosen from the strains B. bifidum, B. longum, B.adolescentis, B.breve, B.infantis et B.pseudolongum.B.adolescentis, B.breve, B. infantis and B.pseudolongum. 50) Utilisation d'une préparation déshydratée renfermant des50) Use of a dehydrated preparation containing 9 bactéries propioniques en quantité d'au moins 10 cellules/g de 9 propionic bacteria in a quantity of at least 10 cells / g of 10 12 préférence de l'ordre de 10 a 10 cellules/g pour l'obtention d'une composition diététique absorbable susceptible d'améliorer l'équilibre biologique de la flore du tractus intestinal de l'homme et des mammifères et en particulier d'augmenter la population bifide. 10 12 preferably of the order of 10 to 10 cells / g for obtaining an absorbable dietary composition capable of improving the biological balance of the flora of the intestinal tract of humans and mammals and in particular of increase the bifid population. 60) Utilisation selon la revendication 5, caractérisée en ce que la préparation renferme des bactéries bifides.60) Use according to claim 5, characterized in that the preparation contains bifid bacteria. 7 ) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 5 et 6, caractérisée en ce que la composition se présente sous forme de fractions individuelles d'environ 100 mg à 1 g de préférence de 200 à 500 mg renfermant la dose de bactéries devant être absorbée quotidiennement. 7) Use according to any one of claims 5 and 6, characterized in that the composition is in the form of individual fractions of about 100 mg to 1 g, preferably 200 to 500 mg, containing the dose of bacteria to be absorbed. daily. 80) Utilisation selon la revendication 7, caractérisée en ce que la composition se présente sous forme de gélules.80) Use according to claim 7, characterized in that the composition is in the form of capsules. 9 ) Utilisation selon l'une quelconque des revendications 7 et 8, caractérisée en ce que 9) Use according to any one of claims 7 and 8, characterized in that 9 chaque fraction individuelle renferme au moins 10 bactéries et 9 each individual fraction contains at least 10 bacteria and 10 , 12 de préférence de l'ordre 10 à 10 bactéries. 10, 12 preferably of the order of 10 to 10 bacteria.
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