FR2710523A1 - Extract of wheat lipids and process for manufacturing it - Google Patents

Abstract

The invention relates to an extract of wheat lipids. It comprises by weight from 10 to 80% of wheat glycoceramides and from 90 to 20% of sitosterol glycosides. Application, in particular, to cosmetology.

Description

Extrait de lipides de blé et son procédé de préparation
Il est déjà connu d'utiliser en cosmétologie des glycocéramides d'origine animale. On préfère que ces glycocéramides se présentent sous forme de liposomes. Il est connu également que des glycocéramides figurent dans les lipides du blé (FUJINO Y. OHNISHI M., 1982 Structural characterization of sphingolipids in wheat grain Proc. Japan
Acad. , 58, Ser. B., 32-35). Il serait donc souhaitable de pouvoir utiliser ces glycocéramides provenant du blé en cosmétologie. Malheureusement, la teneur en glycocéramides du blé est si petite qu'une simple extraction éthanolique telle que décrite dans un article de Clements de 1977 paru dans "American Association of Cereal Chemist 54(6) p1198 à 1206" donne un extrait pauvre en glycocéramides. De ce fait il n'est pas apte à former des liposomes.Wheat lipid extract and process for its preparation
It is already known to use glycoceramides of animal origin in cosmetology. It is preferred that these glycoceramides are in the form of liposomes. It is also known that glycoceramides appear in the lipids of wheat (FUJINO Y. OHNISHI M., 1982 Structural characterization of sphingolipids in wheat grain Proc. Japan
Acad. , 58, Ser. B., 32-35). It would therefore be desirable to be able to use these glycoceramides originating from wheat in cosmetology. Unfortunately, the glycoceramide content of wheat is so small that a simple ethanolic extraction as described in an article by Clements from 1977 published in "American Association of Cereal Chemist 54 (6) p1198 to 1206" gives an extract poor in glycoceramides. Therefore it is not able to form liposomes.

L'invention pallie cet inconvénient par un extrait de lipides de blé, qui comprend en poids de 10 à 80 % de glycocéramides du blé, de 90 à 20 % de glycosides de sitostérol, et qui est apte à former des liposomes. The invention overcomes this drawback with an extract of wheat lipids, which comprises by weight from 10 to 80% of wheat glycoceramides, from 90 to 20% of sitosterol glycosides, and which is capable of forming liposomes.

En général, plus de 50 % en poids des glycocéramides sont des glucocéramides. In general, more than 50% by weight of the glycoceramides are glucoceramides.

L'extrait de lipides de blé suivant l'invention peut comporter éventuellement au maximum 10 % et notamment 5 % au plus d'impuretés, tels que des acides gras libres, des stérols libres. The wheat lipid extract according to the invention may optionally contain a maximum of 10% and in particular at most 5% of impurities, such as free fatty acids, free sterols.

L'invention vise également un procédé de préparation d'un extrait suivant l'invention, qui consiste à mettre de la farine, du gluten ou un complexe lipidoprotéique du blé en contact avec un premier solvant organique apte à solubiliser les lipides polaires du blé dont les glycocéramides du blé pendant une durée suffisante pour obtenir une suspension dont la partie liquide contient des glycocéramides, à séparer cette partie liquide du reste de la suspension pour obtenir un extrait lipidique, à saponifié cet extrait lipidique en un extrait lipidique saponifié, à faire percoler l'extrait lipidique saponifier sur une résine échangeuse de cations fortement acide et protonée pour obtenir un extrait acide, à faire percoler cet extrait acide sur une résine échangeuse d'anions, pour obtenir un extrait désacidifié, à évaporer le solvant de l'extrait désacidifié jusqu'à précipitation, à séparer le précipité pour conserver une huile, à lui ajouter une base dans un second solvant organique apte à dissoudre la base et les glycocéramides du blé jusqu'à obtention d'une solution et d'un précipité et à séparer de la solution ce précipité qui constitue l'extrait de lipides de blé visé. The invention also relates to a method for preparing an extract according to the invention, which consists in bringing flour, gluten or a lipidoprotein complex from wheat into contact with a first organic solvent capable of dissolving the polar lipids of wheat, wheat glycoceramides for a sufficient time to obtain a suspension, the liquid part of which contains glycoceramides, to separate this liquid part from the rest of the suspension to obtain a lipid extract, to saponify this lipid extract into a saponified lipid extract, to be percolated the lipid extract saponify on a strongly acidic and protonated cation exchange resin to obtain an acid extract, to percolate this acid extract on an anion exchange resin, to obtain a deacidified extract, to evaporate the solvent from the deacidified extract until precipitation, to separate the precipitate to preserve an oil, to add a base to it s a second organic solvent capable of dissolving the base and the glycoceramides of the wheat until a solution and a precipitate are obtained and of separating from the solution this precipitate which constitutes the extract of wheat lipids targeted.

Il s'avère en effet qu'il est impossible de séparer les glycocéramides du blé de l'extrait lipidique par simple précipitation fractionnée. La présence d'une grande quantité de lipides fige le milieu et empêche la précipitation sélective des glycocéramides. En éliminant les glycérides, on obtient une huile plus apte à permettre aux glycocéramides de se séparer. A cet effet, on transforme les glycérides en acides gras libres par saponification et on élimine ces acides gras par passage sur la résine échangeuse de cations sous forme H pour obtenir un extrait acide. En faisant passer cet extrait acide sur une résine échangeuse d'anions, on retient les acides sur cette résine et on récupère un extrait désacidifié apte à la précipitation des glycocéramides. Il s'est avéré que cette précipitation est rendue plus complète et plus facile en présence d'une base. On peut obtenir ainsi un extrait ayant une concentration en glycocéramides de 10 à 80 % et notamment supérieure à 70 % en poids, le seuil de 10 % correspondant sensiblement à la possibilité de former des liposomes. It turns out that it is impossible to separate the glycoceramides from wheat from the lipid extract by simple fractional precipitation. The presence of a large amount of lipids freezes the medium and prevents the selective precipitation of glycoceramides. By eliminating the glycerides, an oil is obtained which is better able to allow the glycoceramides to separate. To this end, the glycerides are transformed into free fatty acids by saponification and these fatty acids are eliminated by passing over the cation exchange resin in H form to obtain an acid extract. By passing this acid extract over an anion exchange resin, the acids are retained on this resin and a deacidified extract capable of precipitating the glycoceramides is recovered. It turned out that this precipitation is made more complete and easier in the presence of a base. An extract can thus be obtained having a glycoceramide concentration of 10 to 80% and in particular greater than 70% by weight, the threshold of 10% corresponding substantially to the possibility of forming liposomes.

Le premier stade du procédé suivant l'invention consiste à mettre de la farine, du gluten ou un complexe lipidoprotéïque du blé en contact avec un premier solvant organique apte à dissoudre les glycocéramides du blé pendant une durée suffisante pour obtenir une suspension dont la partie liquide contient des glycocéramides. Comme complexe lipidoprotéïque, on peut utiliser notamment celui décrit à la demande de brevet européen No 92402215.5 déposée le 3 août 1992. Comme solvant organique, on peut utiliser un étheroxyde tel que le tétrahydrofurane, le dioxane, l'éther diméthylique de l'éthylèneglycol ou du diéthylèneglycol, un hydrocarbure halogéné tel que le chloroforme, le dichlorométhane, le dichloroéthane, un ester tel que l'acétate d'éthyle, l'acétate de propyle, l'acétate de butyle, un alcane tel que le pentane, l'hexane, l'heptane, l'optane, un composé aromatique tel que le toluène et le xylène, un alcool tel que le méthanol, l'éthanol, le propanol, l'isopropanol, le butanol, l'octanol, le décanol, le dodécanol, le tétradécanol, des polyols. On peut utiliser des mélanges de ces solvants. On préfère de beaucoup l'isopropanol, l'hexane et le dichlorométhane et tout particulièrement l'éthanol. On utilise habituellement le premier solvant à raison de 2 à 5 litres par kilo de farine, de gluten ou de complexe lipidoprotéique du blé. On effectue la mise en contact pendant une durée comprise entre 10 minutes et plusieurs heures et, de préférence, pendant au moins une heure pour obtenir de meilleurs rendements. Pour accélérer l'extraction, on peut chauffer en-dessous du point d'ébullition du solvant, mais, en général, il suffit d'opérer à la température ambiante. The first stage of the process according to the invention consists in bringing flour, gluten or a lipidoprotein complex from wheat into contact with a first organic solvent capable of dissolving the glycoceramides of wheat for a sufficient time to obtain a suspension, the liquid part of which contains glycoceramides. As lipidoprotein complex, it is possible to use in particular that described in European patent application No. 92402215.5 filed on August 3, 1992. As organic solvent, an etheroxide such as tetrahydrofuran, dioxane, dimethyl ether of ethylene glycol or diethylene glycol, a halogenated hydrocarbon such as chloroform, dichloromethane, dichloroethane, an ester such as ethyl acetate, propyl acetate, butyl acetate, an alkane such as pentane, hexane , heptane, optane, an aromatic compound such as toluene and xylene, an alcohol such as methanol, ethanol, propanol, isopropanol, butanol, octanol, decanol, dodecanol , tetradecanol, polyols. Mixtures of these solvents can be used. Isopropanol, hexane and dichloromethane and most particularly ethanol are very much preferred. The first solvent is usually used at a rate of 2 to 5 liters per kilo of flour, gluten or lipidoprotein complex from wheat. The contacting is carried out for a period of between 10 minutes and several hours and, preferably, for at least one hour to obtain better yields. To speed up the extraction, it is possible to heat below the boiling point of the solvent, but, in general, it suffices to operate at room temperature.

Le deuxième stade du procédé consiste à séparer la partie liquide du reste de la suspension pour obtenir un extrait lipidique. Cette séparation peut se faire de manière classique par décantation, par filtration ou par centrifugation. The second stage of the process consists in separating the liquid part from the rest of the suspension to obtain a lipid extract. This separation can be carried out in a conventional manner by decantation, by filtration or by centrifugation.

Le troisième stade du procédé consiste à saponifier cet extrait en un extrait lipidique saponifié. On utilise à cet effet un hydroxyde métallique, notamment de la soude ou de la potasse, à raison de 0,2 à 0,5 mole par litre de l'extrait lipidique. De préférence, on effectue la saponification entre 10 et 250C pendant 6 à 15 heures et, de préférence, pendant 12 heures environ. The third stage of the process consists in saponifying this extract into a saponified lipid extract. A metal hydroxide, in particular sodium hydroxide or potassium hydroxide, is used for this purpose, at a rate of 0.2 to 0.5 mol per liter of the lipid extract. Preferably, the saponification is carried out between 10 and 250C for 6 to 15 hours and, preferably, for approximately 12 hours.

Le stade suivant du procédé suivant l'invention consiste à faire percoler l'extrait lipidique saponifié sur une résine échangeuse de cations fortement acide et protonée pour obtenir un extrait acide. Le rapport de l'extrait lipidique saponifié à traiter au volume de résine dépend de la charge en acides gras et se calcule simplement en sachant que les résines fixent de 1 à 1,5 équivalent par litre de résine. En général, on fait percoler de 4 à 10 m3 de la solution qu'est l'extrait lipidique saponifié sur 1 m3 de résine. The next stage of the process according to the invention consists in percolating the saponified lipid extract on a strongly acidic and protonated cation exchange resin to obtain an acid extract. The ratio of the saponified lipid extract to be treated to the volume of resin depends on the load of fatty acids and is calculated simply by knowing that the resins fix from 1 to 1.5 equivalents per liter of resin. In general, 4 to 10 m3 of the solution that is the saponified lipid extract are percolated onto 1 m3 of resin.

Le stade suivant du procédé suivant l'invention consiste à faire percoler cet extrait acide sur une résine échangeuse d'anions pour obtenir un extrait désacidifié. Là encore, on fait en général passer de 4 à 10 m3 de l'extrait acide par m3 de résine. L'extrait désacidifié obtenu contient environ 3 % de glycocéramides en matière sèche. The next stage of the process according to the invention consists in percolating this acid extract on an anion exchange resin to obtain a deacidified extract. Again, we generally pass from 4 to 10 m3 of the acid extract per m3 of resin. The deacidified extract obtained contains approximately 3% glycoceramides in dry matter.

Le stade suivant du procédé consiste à évaporer le solvant de l'extrait désacidifié. Pendant cette opération, le sitostérol et son dérivé glycosylé précipitent. On sépare alors le solide par filtration et on continue à évaporer pour expurger de tout précipité. On obtient ainsi une huile de couleur rougeâtre enrichie en glycocéramides. The next step in the process is to evaporate the solvent from the deacidified extract. During this operation, sitosterol and its glycosylated derivative precipitate. The solid is then separated by filtration and it is continued to evaporate to purify any precipitate. An oil of reddish color enriched with glycoceramides is thus obtained.

Le stade suivant de précipitation des glycocéramides consiste à préparer un base telle que de la potasse ou de la soude dans du solvant frais, puis à l'ajouter à l'huile de couleur rougeâtre pour faire précipiter les glycocéramides. La quantité de base ajoutée est telle que sa molarité sera comprise entre 0,2 et 0,5 M, de préférence 0,4 M, après évaporation de tout le solvant. The next stage in the precipitation of glycoceramides is to prepare a base such as potassium hydroxide or soda in fresh solvent, then add it to the reddish oil to precipitate the glycoceramides. The amount of base added is such that its molarity will be between 0.2 and 0.5 M, preferably 0.4 M, after all the solvent has evaporated.

Comme solvant, on peut utiliser le solvant dans lequel on a effectué précédemment la saponification. On peut utiliser tout solvant susceptible à la fois de dissoudre la base utilisée et d'être miscible à l'huile de couleur rougeâtre.As solvent, it is possible to use the solvent in which the saponification has previously been carried out. Any solvent that can dissolve the base used and be miscible with reddish oil can be used.

On préfere un alcanol inférieur, notamment 1'éthanol. On remet à évaporer pour amplifier la précipitation des glycocéramides, puis on les recueille par filtration et on les lave éventuellement, par exemple à l'acétone. Afin de faciliter la précipitation, on peut abandonner au froid (40C) après évaporation.A lower alkanol, especially ethanol, is preferred. It is again evaporated to amplify the precipitation of the glycoceramides, then they are collected by filtration and they are optionally washed, for example with acetone. In order to facilitate precipitation, it can be left cold (40C) after evaporation.

La préparation obtenue a une teneur en glycocéramides de 70 à 80 % en poids. The preparation obtained has a glycoceramide content of 70 to 80% by weight.

On prépare des liposomes de la manière suivante - Prévoir : 20 mg de glycocéramides par ml de solution de
liposomes,
un ballon de capacité 15 à 20 fois supérieur au
volume de solution, - Dissoudre les glycocéramides dans un minimum de
chloroforme, (1/2 à 2 fois le volume final de solution) - Evaporer le chloroforme à l'évaporateur rotatif (400C,
100tr/min), - Laisser sécher le film environ 10 minutes, - Reprendre le film avec la phase hydrophile et des billes de
verre, (1/20e du volume en billes) - Sitôt le film entièrement repris, centrifuger la solution
sans les billes, (5mn, 5000 tr/min) - Prélever le surnageant. Il est opaque et exempt de
cristaux.Liposomes are prepared as follows - Allow: 20 mg of glycoceramides per ml of solution
liposomes,
a balloon with a capacity 15 to 20 times greater than
volume of solution, - Dissolve the glycoceramides in a minimum of
chloroform, (1/2 to 2 times the final volume of solution) - Evaporate the chloroform on a rotary evaporator (400C,
100rpm), - Leave the film to dry for approximately 10 minutes, - Resume the film with the hydrophilic phase and beads of
glass, (1 / 20th of the volume in beads) - As soon as the film is completely taken up, centrifuge the solution
without the beads, (5 min, 5000 rpm) - Take the supernatant. It is opaque and free of
crystals.

On a effectué cette préparation de liposomes avec deux extraits de lipides de blé suivant l'invention, l'un à 70 % et l'autre à 20 % de teneur en glycocéramides. On obtient des liposomes dans les deux cas, diverses catégories de liposomes pouvant être obtenues (unilamellaires, multilamellaires et de grande et de petite tailles) en fonction de la méthode de fabrication. L'examen au microscope montre que les glycocéramides composent les bicouches des liposomes. Les impuretés des glycocéramides n'entrent pas dans la composition des bicouches. Elles sont pour la majeure partie insolubles dans les solvants utilisés. Elles peuvent cependant être encapsulées dans la cavité des liposomes. This liposome preparation was carried out with two extracts of wheat lipids according to the invention, one at 70% and the other at 20% glycoceramide content. Liposomes are obtained in both cases, various categories of liposomes being obtainable (unilamellar, multilamellar and large and small) depending on the manufacturing method. Examination under a microscope shows that glycoceramides make up the bilayers of liposomes. The impurities of the glycoceramides do not enter into the composition of the bilayers. They are for the most part insoluble in the solvents used. They can however be encapsulated in the liposome cavity.

Les solutions de liposomes obtenues avec les extraits de lipides de blé suivant l'invention comportent donc des insolubles qu'il est souhaitable d'éliminer pour obtenir des solutions pures de liposomes. Ces insolubles sont plus nombreux pour la qualité à 20 %. Une simple centrifugation permet d'obtenir cette élimination à condition de la faire aussitôt après avoir formé les liposomes. En effet ces derniers s'adsorbent vite sur les insolubles (cristaux). Plus il y a d'insolubles, plus les liposomes s'adsorbent rapidement. Beaucoup de liposomes restent prisonniers des insolubles dans les culots de centrifugation quand on utilise l'extrait de lipides de blé à 20 %. The liposome solutions obtained with the extracts of wheat lipids according to the invention therefore comprise insolubles which it is desirable to eliminate in order to obtain pure solutions of liposomes. These insolubles are more numerous for quality at 20%. A simple centrifugation makes it possible to obtain this elimination provided that it is done immediately after having formed the liposomes. Indeed the latter are quickly adsorbed on the insolubles (crystals). The more insolubles, the faster the liposomes adsorb. Many liposomes remain trapped in the insolubles in the centrifuge pellets when using the 20% wheat lipid extract.

En revanche, quand on utilise un extrait de lipides de blé provenant d'une simple extraction éthanolique et contenant environ 3 % en poids de céramides, on n'arrive pas à former des liposomes. On the other hand, when a wheat lipid extract from a simple ethanolic extraction and containing approximately 3% by weight of ceramides is used, it is not possible to form liposomes.

Les exemples suivants illustrent l'invention. The following examples illustrate the invention.

Exemple 1
Extraction
On met en contact en vase clos 1 kg de gluten vital de blé (à 75 % de protéines N x 6,25) avec 4 litres d'éthanol à 96 % et on maintient une agitation vigoureuse pendant 4 heures à 250C à l'aide d'une turbine.Example 1
Extraction
1 kg of vital wheat gluten (75% protein N x 6.25) is brought into contact in a closed cup with 4 liters of 96% ethanol and vigorous stirring is maintained for 4 hours at 250C using of a turbine.

La préparation est ensuite filtrée sur fritté de porosité 4; le gâteau est rincé sur son fritté avec 0,5 1 d'éthanol frais.  The preparation is then filtered through a sinter of porosity 4; the cake is rinsed on its frit with 0.5 l of fresh ethanol.

On récupère 4 litres d'extrait (filtrat) contenant 150 g de matière sèche. 4 liters of extract (filtrate) containing 150 g of dry matter are recovered.

Saponification :
On ajoute 89,6 g de potasse en pastilles à l'extrait éthanolique (4 litres) (normalité = 0,4 N; rapport base/extrait sec = 0,6) et on laisse, sous légère agitation, à 200C, pendant 12 heures.Saponification:
89.6 g of potassium hydroxide pellets are added to the ethanolic extract (4 liters) (normality = 0.4 N; base / dry extract ratio = 0.6) and the mixture is left, with gentle stirring, at 200C for 12 hours.

Purification par échange d'ions
On prépare un chaînage de déminéralisation par échange d'ions de la façon suivante : en amont, une colonne contenant un lit fixe d'un litre de résine échangeuse de cations fortement acide type A200 (polystyrène/DVB, macroporeuse) (Rohm and Haas) chargée en protons; en aval (placée en série), une colonne contenant un lit fixe de deux litres de résine échangeuse d'anions type MP64 (BAYER) chargée en ions hydroxyde (polystyrène/DVB, macroporeuse, 15 % anions forts + 85 % anions faibles).Purification by ion exchange
A demineralization chain is prepared by ion exchange as follows: upstream, a column containing a fixed bed of a liter of strongly acidic cation exchange resin type A200 (polystyrene / DVB, macroporous) (Rohm and Haas) charged with protons; downstream (placed in series), a column containing a fixed bed of two liters of anion exchange resin type MP64 (BAYER) loaded with hydroxide ions (polystyrene / DVB, macroporous, 15% strong anions + 85% weak anions).

On fait percoler, à 2 1/heure, sur ce chaînage, les 4 litres d'extrait saponifié et on rince les colonnes avec 1 litre d'éthanol frais. On fixe ainsi, sur la première colonne (cations), le potassium, les autres cations et la matière azotée et sur la deuxième colonne (anions) les acides gras et les autres anions. The 4 liters of saponified extract are percolated at 2 l / hour on this chaining and the columns are rinsed with 1 liter of fresh ethanol. One thus fixes, on the first column (cations), potassium, the other cations and the nitrogenous matter and on the second column (anions) fatty acids and the other anions.

On récupère l'extrait purifié (5 litres). The purified extract (5 liters) is recovered.

Précipitation fractionnée
On concentre l'extrait purifié par évaporation de l'éthanol sous vide partiel. Pendant l'évaporation, se forment des cristaux de sitostérol et deux glycosides de sitostérol; lorsque le volume d'extrait atteint 500 ml, on filtre sur fritté 4 et on poursuit la concentration du filtrat. Cette opération est répétée plusieurs fois pendant la suite de l'évaporation-concentration.Fractional precipitation
The purified extract is concentrated by evaporation of the ethanol under partial vacuum. During evaporation, sitosterol crystals and two sitosterol glycosides are formed; when the extract volume reaches 500 ml, it is filtered on a frit 4 and the concentration of the filtrate is continued. This operation is repeated several times during the continuation of the evaporation-concentration.

L'évaporation est poursuivie jusqu'à atteindre un volume d'extrait purifié concentré de 50 ml. Cet extrait concentré a l'apparence d'une huile de couleur rouge.  Evaporation is continued until a volume of concentrated purified extract of 50 ml is reached. This concentrated extract has the appearance of a red oil.

On prépare de la potasse éthanolique de la façon suivante : on dissout 1 g de potasse en pastilles dans 50 ml d'éthanol frais. Ethanolic potash is prepared as follows: 1 g of potassium hydroxide pellets is dissolved in 50 ml of fresh ethanol.

Cette préparation est ajoutée à l'huile de couleur rougeâtre et on met l'ensemble à nouveau à évaporer jusqu'à atteindre 50 ml. This preparation is added to the reddish-colored oil and the whole is again evaporated until reaching 50 ml.

Les effets conjugués de la base et de l'évaporation font précipiter les glycocéramides. Ceux-ci sont récupérés par filtration (Fritté 4) et lavés avec un peu d'acétone. The combined effects of base and evaporation cause the glycoceramides to precipitate. These are collected by filtration (Sintered 4) and washed with a little acetone.

La préparation ainsi obtenue contient 75 % en glycocéramides (HPLC) par rapport à la matière sèche totale. The preparation thus obtained contains 75% glycoceramides (HPLC) relative to the total dry matter.

On effectue le dosage des glycocéramides et des glycosides de sitostérol par chromatographie liquide à haute performance de la manière suivante Colonne : Fournisseur INTERCHIM
Type : silice sphérique
Appellation : Sphérisorb 3 microns
Dimensions : 100 mm x 4,6 mm.The dosage of glycoceramides and sitosterol glycosides is carried out by high performance liquid chromatography as follows Column: INTERCHIM supplier
Type: spherical silica
Designation: Spherisorb 3 microns
Dimensions: 100 mm x 4.6 mm.

. Température en cours d'analyse : 200C . Elution
On pratique un gradient à l'aide des 3 solvants suivants
- Premier solvant : Hexane à 1% v/v de THF
- Deuxième solvant : Isopropanol / Chloroforme
80/20 (v/v)
- Troisième solvant : Isopropanol / Eau : 50/50
(v/v) . Détecteur
A diffusion de lumière (Evaporative light-scattering
Detector)
Pression d'azote 2 bar
Température du tube de sortie : 700C
Un étalonnage est effectué à l'aide des composés suivants, en quantités variables . Glucocérébrasides SIGMA Référence G 9884 Bêta-sitostérol SIGMA Référence S 9889 ; . Glucoside de sitostérol préparé par recristallisation dans
l'eau ;
Les temps de rétention de ces composés dans le système d'analyse chromatographique décrit ci-dessus, sont les suivants Glucocérébrasides : 14,47 minutes ; . Bêta-sitostérol : 8,47 minutes ; . Glucoside de sitostérol : 14,06 minutes ;
Pour analyser les préparations de glucocéramides, on compare, à temps de rétention égal, l'aire du pic obtenu avec l'aire du composé étalon correspondant ; la courbe d'étalonnage permet de déterminer la concentration du composé corresponant dans la préparation.. Temperature under analysis: 200C. Elution
We use a gradient using the following 3 solvents
- First solvent: Hexane at 1% v / v THF
- Second solvent: Isopropanol / Chloroform
80/20 (v / v)
- Third solvent: Isopropanol / Water: 50/50
(v / v). Detector
Evaporative light-scattering
Detector)
Nitrogen pressure 2 bar
Outlet tube temperature: 700C
A calibration is carried out using the following compounds, in variable quantities. SIGMA glucocerebrasides Reference G 9884 SIGMA beta-sitosterol Reference S 9889; . Sitosterol glucoside prepared by recrystallization from
the water ;
The retention times of these compounds in the chromatographic analysis system described above are as follows Glucocerebrasides: 14.47 minutes; . Beta-sitosterol: 8.47 minutes; . Sitosterol glucoside: 14.06 minutes;
To analyze the glucoceramide preparations, the area of the peak obtained is compared with the area of the corresponding standard compound, for an equal retention time; the calibration curve makes it possible to determine the concentration of the corresponding compound in the preparation.

Exemple 2
On reprend l'exemple 1, si ce n'est que l'on utilise comme résine échangeuse de cations une résine fortement acide de type IR120 (polystyrène/DVB, gel) (Rohm and Haas) chargée en protons, et comme résine échangeuse d'anions une résine de type IRA900 (polystyrène/DVBmacroporeuse-100 % d'anions forts) (Rohm and Haas) chargée en ions hydroxydes.Example 2
Example 1 is used again, except that a strongly acidic IR120 resin (polystyrene / DVB, gel) (Rohm and Haas) charged with protons is used as the cation exchange resin, and as the exchange resin d 'anions an IRA900 type resin (polystyrene / DVBmacroporous-100% strong anions) (Rohm and Haas) charged with hydroxide ions.

Exemple 3
On reprend l'exemple 1, si ce n'est que l'on effectue la précipitation fractionnée en plaçant le mélange à 40C pendant 12 heures. On récupère le précipité formé par filtration et on concentre le filtrat par évaporation jusqu'à 50 ml afin de former un nouveau précipité qui est récupéré.Example 3
Example 1 is repeated, except that the fractional precipitation is carried out by placing the mixture at 40C for 12 hours. The precipitate formed is recovered by filtration and the filtrate is concentrated by evaporation to 50 ml in order to form a new precipitate which is recovered.

Cette façon de procéder plus longue permet cependant de multiplier les rendements par 1,5. However, this longer procedure allows yields to be multiplied by 1.5.

La qualité obtenue est identique (75 % de glycocéramides). The quality obtained is identical (75% glycoceramides).

Exemple 4
Cet exemple illustre l'utilisation d'un solvant autre que l'éthanol (hexane lors de l'extraction).Example 4
This example illustrates the use of a solvent other than ethanol (hexane during the extraction).

On met en contact, en vase clos, 2,5 kg de gluten vital de blé avec 10 litres d'hexane et on maintient une agitation vigoureuse pendant 2 heures à 200C à l'aide d'une turbine. 2.5 kg of vital wheat gluten is brought into contact in a closed cup with 10 liters of hexane and vigorous stirring is maintained for 2 hours at 200 ° C. using a turbine.

La préparation est ensuite filtrée sur Fritté 4 et le gâteau rincé avec 1 litre d'hexane. Le filtrat est récupéré et on évapore tout l'hexane. On obtient alors 147,5 g de résidu huileux que l'on reprend avec 4 litres d'éthanol. On continue suivant l'exemple 1. The preparation is then filtered through Sinter 4 and the cake rinsed with 1 liter of hexane. The filtrate is recovered and all the hexane is evaporated. 147.5 g of oily residue are then obtained which is taken up in 4 liters of ethanol. We continue according to Example 1.

Exemple 5 : Utilisation d'une autre matière première que le gluten (farine)
Extraction
On met en contact, en vase clos, 1 kg de farine de blé (71 % d'amidon, 13 % de protéines, 1,2 % de lipides et 0,4 % de cendres) avec 4 litres d'éthanol à 96 % et on maintient une agitation vigoureuse pendant 5 heures à 350C à l'aide d'une turbine.Example 5: Use of another raw material than gluten (flour)
Extraction
1 kg of wheat flour (71% starch, 13% protein, 1.2% fat and 0.4% ash) is brought into contact with 4 liters of 96% ethanol and vigorous stirring is maintained for 5 hours at 350C using a turbine.

La préparation est ensuite filtrée sur Fritté N04 et le gâteau lavé avec 0,5 1 d'éthanol frais. The preparation is then filtered through Sinter N04 and the cake washed with 0.5 l of fresh ethanol.

On récupère 4 litres d'extrait (filtrat) contenant 22 g de matière sèche et on concentre 7 fois pour obtenir une préparation à 38 g de MS par litre et on procède ensuite comme pour les exemples 1, 2, 3. 4 liters of extract (filtrate) containing 22 g of dry matter are recovered and concentrated 7 times to obtain a preparation at 38 g of DM per liter and then the procedure is carried out as for Examples 1, 2, 3.

Exemple 6 (comparatif)
On met en contact, sous agitation à 350C pendant 5 heures, 1 kg de farine de blé (de même nature que celle utilisée dans l'exemple 5) avec 4 litres d'éthanol à 96 OC. Example 6 (comparative)
Is brought into contact, with stirring at 350C for 5 hours, 1 kg of wheat flour (of the same kind as that used in Example 5) with 4 liters of ethanol at 96 OC.

La préparation est ensuite filtrée et on récupère le filtrat qui contient 5,5 g de matière sèche (MS) par litre. Celui-ci est placé plusieurs jours, soit à +4"C, soit à -180C. The preparation is then filtered and the filtrate is recovered which contains 5.5 g of dry matter (DM) per liter. This is placed several days, either at +4 "C, or at -180C.

Nous n'avons pas observé de formation de cristaux ou de dépôts. We did not observe any crystal formation or deposits.

Le même filtrat est alors concentré par évaporation 7 fois (38 g MS/l), 12 fois (66 g MS/l) et 20 fois (110 g
MS/l) et placé également plusieurs jours à +4"C et à -180C. The same filtrate is then concentrated by evaporation 7 times (38 g DM / l), 12 times (66 g DM / l) and 20 times (110 g
MS / l) and also placed several days at +4 "C and at -180C.

La préparation concentrée 7 fois ne subit aucune modification à +40C, mais se fige à -180C. The preparation concentrated 7 times does not undergo any modification at + 40C, but freezes at -180C.

Les préparation concentrées 12 fois et 20 fois se fignet à +40C et à -180C. The preparations concentrated 12 times and 20 times are blasted at + 40C and at -180C.

La prise en masse observée est contrairement due à la présence des glycérides et, dans ce cas, il n'a pas été possible d'effectuer de purification des glycocéramides par précipitations sélective. The bulking observed is contrary due to the presence of glycerides and, in this case, it was not possible to carry out purification of the glycoceramides by selective precipitation.

Cet exemple illustre bien la nécessité d'extraire la charge glycéridique avant toute tentative de purification par cristallisation.  This example clearly illustrates the need to extract the glyceride load before any attempt at purification by crystallization.

Claims (7)

REVENDICATIONS 1. Extrait de lipides de blé, caractérisé en ce qu'il comprend en poids de 10 à 80 % de glycocéramides du blé et de 90 à 20 % de glycosides de sitostérol et il est apte à former des liposomes. 1. Wheat lipid extract, characterized in that it comprises by weight from 10 to 80% of wheat glycoceramides and from 90 to 20% of sitosterol glycosides and it is capable of forming liposomes. 2. Extrait suivant la revendication 1, caractérisé en ce que plus de 50 % en poids des glycocéramides sont des glucocéramides. 2. Extract according to claim 1, characterized in that more than 50% by weight of the glycoceramides are glucoceramides. 3. Procédé de préparation d'un extrait suivant la revendication 1 ou 2, caractérisé en ce qu'il consiste à mettre de la farine, du gluten ou un complexe lipidoprotéïque du blé en contact avec un premier solvant organique apte à dissoudre les glycocéramides du blé pendant une durée suffisante pour obtenir une suspension dont la partie liquide contient des glycocéramides, à séparer cette partie liquide du reste de la suspension pour obtenir un extrait lipidique, à saponifier cet extrait lipidique en un extrait lipidique saponifié, à faire percoler l'extrait lipidique saponifié sur une résine échangeuse de cations fortement acide et protonée pour obtenir un extrait acide, à faire percoler cet extrait acide sur une résine échangeuse d'anions pour obtenir un extrait désacidifié, à évaporer le solvant de l'extrait désacidifié jusqu'à précipitation, à séparer le précipité pour conserver une huile, à lui ajouter une base dans un second solvant organique apte à dissoudre la base et les glycocéramides du blé jusqu'à obtention d'une solution et d'un précipité et à séparer de la solution ce précipité qui constitue l'extrait de lipides de blé. 3. Method for preparing an extract according to claim 1 or 2, characterized in that it consists in bringing flour, gluten or a lipidoprotein complex from wheat into contact with a first organic solvent capable of dissolving the glycoceramides of wheat for a sufficient time to obtain a suspension, the liquid part of which contains glycoceramides, to separate this liquid part from the rest of the suspension to obtain a lipid extract, to saponify this lipid extract into a saponified lipid extract, to make the extract percolate lipid saponified on a strongly acidic and protonated cation exchange resin to obtain an acid extract, to percolate this acid extract on an anion exchange resin to obtain a deacidified extract, to evaporate the solvent from the deacidified extract until precipitation , to separate the precipitate to preserve an oil, to add a base to it in a second organic solvent a able to dissolve the base and the glycoceramides of the wheat until a solution and a precipitate are obtained and to separate from the solution this precipitate which constitutes the extract of wheat lipids. 4. Procédé suivant la revendication 3, caractérisé en ce que le premier solvant est un étheroxyde, un hydrocarbure halogéné, un ester, un alcane, un composé aromatique ou un alcool. 4. Method according to claim 3, characterized in that the first solvent is an etheroxide, a halogenated hydrocarbon, an ester, an alkane, an aromatic compound or an alcohol. 5. Procédé suivant la revendication 3 ou 4, caractérisé en ce qu'il consiste à utiliser pour 1 kg de farine, de gluten ou de complexe lipidoprotéïque du blé, de 2 à 5 litres du premier solvant. 5. Method according to claim 3 or 4, characterized in that it consists in using for 1 kg of flour, gluten or wheat lipidoprotein complex, from 2 to 5 liters of the first solvent. 6. Procédé suivant l'une des revendications 3 à 5, caractérisé en ce qu'il consiste à saponifier par 0,2 à 0,5 mole d'un hydroxyde métallique par litre de l'extrait lipidique. 6. Method according to one of claims 3 to 5, characterized in that it consists in saponifying with 0.2 to 0.5 mole of a metal hydroxide per liter of the lipid extract. 7. Procédé suivant l'une des revendications 3 à 6, caractérisé en ce qu'il consiste à utiliser au moins 0,1 mole de base par litre d'huile.  7. Method according to one of claims 3 to 6, characterized in that it consists in using at least 0.1 mole of base per liter of oil.