FR2709952A1

FR2709952A1 - Use of an ammonium salt of 18 beta -glycyrrhetinic acid for its biostimulatory action on hair growth

Info

Publication number: FR2709952A1
Application number: FR9310983A
Authority: FR
Inventors: Betourne Michel
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 1993-09-15
Filing date: 1993-09-15
Publication date: 1995-03-24
Anticipated expiration: 2013-09-15
Also published as: FR2709952B1

Abstract

Aqueous-alcoholic glycyrrhizin composition; its use for its biostimulatory activity with respect to hair growth. Aqueous solubilisation of glycyrrhizin and sodium chloride and stirring of the two miscible phases in an alcoholic phase of cade oil, acetone and terpenes according to the established proportions. Demonstration of the activity of the glycyrrhizin-based final product.

Description

1 _i - ' 2709952 La présente invention concerne la composition d'une1 _i - '2709952 The present invention relates to the composition of a

solution hydro-alcoolique de glyccyrhizine extrait de la racine et des stolons non mondés et séchés de réglisse (glyccyrhiza glabra L) qui contient au minimum quatre pour cent d'acide glyccyrhizique sous hydro-alcoholic solution of glyccyrhizine extracted from the root and undolted and dried runners of licorice (glyccyrhiza glabra L) which contains at least four percent of glyccyrhizic acid under

forme de son sel d'amilnonium.form of its amilnonium salt.

I - ETUDE DU PRINCIPE ACTIF: GLYCCYPIIIZINE (PIL!AMIACOPF-,En) CHROMLiTOGiLRPIIIE Opérer par chromatographie sur couche mince (V.6.20. 2) en utilisant une pIaque recouverte de gel de silice I - STUDY OF THE ACTIVE INGREDIENT: GLYCCYPIIIZINE (PIL! AMIACOPF-, En) CHROMLiTOGiLRPIIIE Operate by thin layer chromatography (V.6.20. 2) using a plate coated with silica gel

GF254R.GF254R.

Solution à examiner (a). A 1,0 g de drogue pulvérisée (180), ajouter 20 ml de chloroforme R. Agitez pendant Solution to be examined (a). To 1.0 g of spray drug (180) add 20 ml of chloroform R. Shake for

minutes, puis filtrez. Evaporez le filtrat à siccité. minutes, then filter. Evaporate the filtrate to dryness.

Dissolvez le résidu dans 2.00 ml d'un mélange à volumes égaux de chloroforme Ro et de méthanol R. Solution à examiner (b). A la drogue traitée par le chloroforme au cours de la préparation de la solution Dissolve the residue in 2.00 ml of a mixture of equal volumes of chloroform Ro and methanol R. Solution to be examined (b). To the drug treated with chloroform during the preparation of the solution

à examiner (a), ajoutez 30 ml d'acide sulfurique IN. to examine (a), add 30 ml of IN sulfuric acid.

Chauffez à reflux pendant 1 h. Laissez refroidir et Heat at reflux for 1 hour. Let cool and

agitez le mélange non filtré avec 2 fois 20 ml de chloro- shake the unfiltered mixture with twice 20 ml of chloro-

forme R. Filtrez et évaporez à siccité. Dissolvez le résidu dans 2.00 ml d'un mélange à volumes égaux de chloroforme R et de méthanol R. 1 Solution témoin. Dissolver 10 mg d'acide glycyrrhétique dans 2.00 ml d'un mélange à volumes égaux de chloroforme R. et de méthanol R. Déposer séparément sur la plaque en bandes de 20 mm sur - 3 mm au maximum, 10 pl dessolutionfà examine r(b) et 20 p de solution témoin. Agitez 13 volumes d'éthanol R, 27 volumes d'ammoniaque à 1,7 pour cent m/v de NH3 et Co volumes d'acétate d'éthyle R. Après 5 mm, séparez et utilisez comme phase mobile la couche supérieure, form R. Filter and evaporate to dryness. Dissolve the residue in 2.00 ml of a mixture of equal volumes of chloroform R and methanol R. 1 Control solution. Dissolve 10 mg of glycyrrhetic acid in 2.00 ml of a mixture with equal volumes of chloroform R. and methanol R. Place separately on the plate in strips of 20 mm by - 3 mm maximum, 10 μl of solution to examine r (b ) and 20 p of control solution. Shake 13 volumes of ethanol R, 27 volumes of ammonia at 1.7 percent m / v of NH3 and Co volumes of ethyl acetate R. After 5 mm, separate and use the upper layer as mobile phase,

même si elle est trouble. Développez un parcours de 15 cm. even if it’s cloudy. Develop a 15 cm course.

Laissez sécher la plaque à l'air pendant 5 min. Examinez les chromatogrammes en lumière ultraviolette à 254 nm. Le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner (b). Pulvériser ensuite de la solution d'aldéhyde - anisique R à raison de 10 ml pour une plaque de 200 mm de c8té. Chauffez à 100 - 105 'C pendant 10 min. Examiner à la lumière du jour. La bande correspondant à l'acide p -glycyrrhétique est colorée en bleu violet. Dans les - chromatogrammes obtenus avec la soltion à examiner (a) et (b) il apparait une ou deux bandes d'un R, voisin de 0.6 déjà visibles à la lumière du jour avant la pulvérisation mais qui, après celle-ci, virent au jaune orange. Il apparait Let the plate air dry for 5 min. Examine the chromatograms in 254 nm ultraviolet light. The chromatogram obtained with the solution to be examined (b). Then spray with aldehyde - anisic solution R at a rate of 10 ml for a 200 mm plate. Heat at 100-105 ° C for 10 min. Examine in daylight. The band corresponding to p-glycyrrhetic acid is colored blue violet. In the - chromatograms obtained with the solution to be examined (a) and (b) there appear one or two bands of an R, close to 0.6 already visible in daylight before spraying but which, after this, turn orange yellow. It seems

également plusieurs autres bandes colorées en bleu violet. also several other bands colored in purple blue.

-La bande correspondant à l'acide P-glycyrrhétique dans le chromatogramme obtenu avec la solution à examiner (b) doit avoir au moins les mêmes dimensions que la bande du -The band corresponding to P-glycyrrhetic acid in the chromatogram obtained with the solution to be examined (b) must have at least the same dimensions as the band of

chromatogramme obtenu avec la solution témoin. chromatogram obtained with the control solution.

* présente une bande R (0,1) obtenu avec le témoin, non * has an R (0.1) band obtained with the control, not

obtenu avec la solution à examiner (a). obtained with the solution to be examined (a).

-3 --3 -

DOSAGEDOSAGE

I - Opérez par chromatographie sur couche mince (V 6.20.2) en I - Operate by thin layer chromatography (V 6.20.2) in

utilisant une plaque recouverte de gel de silice GF254R- using a plate covered with silica gel GF254R-

Solution à examiner. Dans un ballon de 100 ml à fond rond, introduisez 1, 00 g de drogue pulvérisée (180). Ajoutez 25 mi _ d'acide chlorhydrique IN et 2,5 ml de dioxanne R. Plongez le ballon dans un bain-marie et chauffez à reflux pendant 2 h. Laissez refroidir et filtrez sur un papier durci d'un diamètre de 9 cm. Eliminez le filtrat. dincer le ballon et le filtre avec fois 20 ml d'eau, puis rejettez les eaux de lavage. Séchez - le ballon puis le filtre à 105 C pendant 20 min. Introduisez le filtre dans le ballon et ajouter 50 ml de chloroforme R. Plonger le ballon dans le bain marie et faire bouillir à reflux pendant 5 min. Filtrez la solution chloroformique chaude sur Solution to consider. Introduce 1, 00 g of powdered drug (180) into a 100 ml round bottom flask. Add 25 ml of IN hydrochloric acid and 2.5 ml of dioxane R. Immerse the flask in a water bath and heat at reflux for 2 h. Leave to cool and filter through a 9 cm diameter hardened paper. Remove the filtrate. rinse the flask and the filter with 20 ml of water once, then discard the washing water. Dry the flask and then the filter at 105 C for 20 min. Introduce the filter into the flask and add 50 ml of chloroform R. Immerse the flask in the water bath and boil at reflux for 5 min. Filter the hot chloroform solution through

un papier filtre d'un diamètre de 9 cm dans un vase à préci- a filter paper with a diameter of 9 cm in a precision vase

- piter. itépétez cette extraction à 2 reprises, dans les mêmes conditions, avec 25 ml de chloroforme R, en filtrant chaque - piter. repeat this extraction twice, under the same conditions, with 25 ml of chloroform R, filtering each

fois la solution chloroformique chaude sur la même filtre. times the hot chloroform solution on the same filter.

Introduisez ce filtre dans le ballon et agitez à nouveau, comme indiqué ci-dessus, avec 25 ml de chloroforme R. Filtrez la - solution chloroformique chaude sur un nouveau filtre d'un diamètre de 9 cm.. Rémissait les solutions chloroformiques dans un ballon de 50 ml et évaporez le liquide à siccité. Reprenez quantitativement le résidu avec un mélange à volumes égaux de chloroforme R et de méthanol R, puis introduisez cette solution - dans une fiole jaugée de 10 ml. lUincer le vase à précipiter avec 2 fois 10 ml de chloroforme R, puis évaporez le solvant jusqu'à un volume de 2 ml. Introduisez les 2 ml dans lait fiole jaugée et complétez à 10,0 ml avec un mélange à volumes égaux Put this filter in the flask and shake again, as indicated above, with 25 ml of chloroform R. Filter the - hot chloroform solution on a new filter with a diameter of 9 cm. Put the chloroform solutions back into a flask 50 ml and evaporate the liquid to dryness. Take up the residue quantitatively with a mixture of equal volumes of chloroform R and methanol R, then introduce this solution - into a 10 ml volumetric flask. Wash the precipitate vessel with 2 times 10 ml of chloroform R, then evaporate the solvent to a volume of 2 ml. Put the 2 ml in volumetric flask and make up to 10.0 ml with a mixture of equal volumes

de chloroforme R et de mthanol il.chloroform R and methanol il.

-4 - 1 _ Solution témoin. Dans un ballon de 100 ml à fond rond, introduisezSO el A. glycyrrhizique SCR, ajoutez 25 ml d'acide chlorhydrique IN et 2,5 ml dioxanne R. Plongez le ballon dans un bain marie et chauffez à reflux pendant 2 heures, - puis opérez comme indiqué plus haut pour préparer la solution à examiner. La solution finale dans le mélange -4 - 1 _ Control solution. In a 100 ml round bottom flask, introduce SO el A. glycyrrhizique SCR, add 25 ml IN hydrochloric acid and 2.5 ml dioxane R. Immerse the flask in a water bath and heat at reflux for 2 hours, - then operate as indicated above to prepare the solution to be examined. The final solution in the mixture

chloroforme-méthanol sert de solution témoin. chloroform-methanol serves as a control solution.

Déposez quantitativement et séparément sur la plaque, en bandes de 20 mm sur 3 mm au maximum, 2 fois 60/JL de solution - à examiner et 2 fois 60 JL de solution témoin en ayant soin Place quantitatively and separately on the plate, in strips of 20 mm by 3 mm maximum, twice 60 / JL of solution - to examine and twice 60 JL of control solution taking care

de n'effectuer aucun dépot sur une partie de la plaque. not to make any deposit on part of the plate.

Agitez 13 volumes d'éthanol R, 27 volumes d'ammoniaque à 1,7 pour cent M/V de NH3 et 60 volumes d'acétate d'éthyle R; après 5 mm, séparer les couches et utilisez comme phase Shake 13 volumes of ethanol R, 27 volumes of ammonia containing 1.7 percent M / V of NH3 and 60 volumes of ethyl acetate R; after 5 mm, separate the layers and use as phase

- mobile la couche supérieure, même si elle est trouble. Déve- - mobile the upper layer, even if it is cloudy. Devel-

loppez successivement à 2 reprises sur un parcours de 15 cm. lop successively twice on a 15 cm course.

Après chaque développement, laissez sécher la plaque à l'air. After each development, allow the plate to air dry.

Examinez les chromatogrammes en lumière ultraviolette à 254 un et repérez les bandes d'acide P-glycyrrhétique obtenues - avec la solution à ex!niner et avec la solution témoin en les entourant d'un rectangle. Prelevez les surfaces localisées en grattant av-c précaution et introduisez l'adsorbant correspondant à ch:que bande séparément dans un ballon de ml à bouchon rodé. Dans chaque ballon, ajoutez 5 ml - d'éthanol Rt et agitez pendant 15 min. Filtrez respectivement chacune des solutions sur un petit filtre de verre fritté (16) Examine the chromatograms in ultraviolet light at 254 a and locate the bands of P-glycyrrhetic acid obtained - with the solution to be eliminated and with the control solution by surrounding them with a rectangle. Take the localized surfaces by scraping with care and introduce the adsorbent corresponding to ch: that strip separately in a ml flask with ground glass stopper. In each flask, add 5 ml - of Rt ethanol and shake for 15 min. Filter each solution respectively on a small sintered glass filter (16)

en recueillant le filtrat dans un ballon jaugé de 10 ml. by collecting the filtrate in a 10 ml volumetric flask.

Rincez l'adsorbant sur le filtre et complétez à 10,0 ml avec de l'éthanol R. - Essai à blanc. Sur la partie de la planque exempte de dépot, Rinse the adsorbent on the filter and make up to 10.0 ml with ethanol R. - Blank test. On the part of the hideout free of deposit,

indiquez la surface correspondant, en position et en diminu- indicate the corresponding surface, in position and in diminu-

d;ions, aux bandes repérées correspondant à l'acide B-glycyr- d; ions, with marked bands corresponding to B-glycyr- acid

rhétique. Prélevez l'adsorb;nt en grattant la plaque et trai- rhetic. Take the adsorb; nt scraping the plate and process

tez-le comme décrit ci-dessus.enter it as described above.

-5- 1 Mesurez l'absorbance (V.6.19) de chaque solution à 250 nm, en utilisant comme liquide de compensation la solution de l'essai blanc. Calculez la teneur pour cent en acide glycyrrhisique à l'aide de l'expression: -5- 1 Measure the absorbance (V.6.19) of each solution at 250 nm, using as solution the white test solution. Calculate the percent content of glycyrrhisic acid using the expression:

-A1 X M2-A1 X M2

x Cx C

A2 X M1A2 X M1

A1 = absorbance de la solution à examiner, A2 = absorbance de la solution témoin, - C = teneur % en acide glycyrrhizique de la substance SCR, ml = masse de la prise d'essai en grammes, A1 = absorbance of the solution to be examined, A2 = absorbance of the control solution, - C = content of glycyrrhizic acid in the SCR substance, ml = mass of the test portion in grams,

m2 = masse de l'acide glycyrrhizique SCR en grammes. m2 = mass of SCR glycyrrhizic acid in grams.

- PROCEDE DL PRr.PAIUATION DU PRODUIT CONTENANT iA - PROCEDURE DL PRr.PAIUATION OF THE PRODUCT CONTAINING iA

GLYCCYRHIZIN;GLYCCYRHIZIN;

La glvccyrhizine est dissoute à tiède dans une eau filrée et distillée sur résine, introduite dans une cuve inox ou enduite d'un produit neutre type brauthite, ou elle est mixée avec une solution aqueuse distillée de Cl Na. Le mélange des deux phases est miscible dans la troisième phase alcoolique d'huile de cade et acétone additionnée des terpènes (essences). Après brassage le produit est filtre par aspiration sur filtre "cuno" après passage préa!able sur un Glvccyrhizine is dissolved warm in filtered water and distilled on resin, introduced into a stainless steel tank or coated with a neutral product like brauthite, or it is mixed with a distilled aqueous solution of Cl Na. The mixture of the two phases is miscible in the third alcoholic phase of cade oil and acetone added with terpenes (essences). After stirring the product is filtered by suction on a "cuno" filter after passing through a

tami s.sieve.

Enfin recueillir dans uu% cuve de rénartition et dis'osérd.ans des flacons verre cansulés immédiatement et maintenu à l'abri de la lumière. La formule arrêtée du i)roduit fini est la su.ivante: _ GYCCYtHIi:....... Finally collect in uu% renartition tank and dis'osérd.ans glass bottles cansulated immediately and kept away from light. The fixed formula of i) finished product is the following: _ GYCCYtHIi: .......

............... 0,21 % _ TUILZ D C D..................... 0,078 c AO:?Oi.............................. O,J6:o LCOOL:TYLQU................... DTD: .. 54,00 o -JNC E L 7A.DI,..C............... 4,9 g o E SSi;'NCE DL.VAND............ 0, 3..DTD: DI' CIT-RON 0,36 ............... 0.21% _ TUILZ DC D ..................... 0.078 c AO:? Oi .............................. O, D6: o LCOOL: TYLQU ............ ....... DTD: .. 54.00 o -JNC EL 7A.DI, .. C ............... 4.9 go E SSi; 'NCE DL .VAND ............ 0, 3..DTD: DI 'CIT-RON 0.36

__C 'DC x................ -,3 6 - ZES \C< DE XzrER'I: E................. .\ 0,jo __C 'DC x ................ -, 3 6 - ZES \ C <DE XzrER'I: E ............... ... \ 0, jo

-:$!VL._.E:........................4...OO 0 -: $! VL ._. E: ........................ 4 ... OO 0

III- PFI:::-[:-'r' DU PRINCIP2{ ACTIF: G].YCOCYIH,H:'[INE 7 - 1 - Le demandeur a mis en évidence l'effet biostimulant de la pousse du poil (ou du cheveu) au cours des essais cliniques suivants: III- PFI ::: - [: - 'r' DU PRINCIP2 {ACTIVE: G] .YCOCYIH, H: '[INE 7 - 1 - The applicant has demonstrated the biostimulating effect of hair growth (or hair) in the following clinical trials:

Essais de toxicité.Toxicity tests.

- Des patch test ont été pratiqué chez 30 patients dont 10 avaient déjà présentés des phénomènes de polysensibilisations diverses, (en particulier des eczémas vésiculeux aux détersifs ménagers, au ciment) mais dans ces cas, ces patch-tests ont été pratiqués - Patch tests were performed on 30 patients, 10 of whom had already presented various polysensitization phenomena (in particular vesicular eczema with household detergents, cement) but in these cases, these patch tests were performed

en dehors de toutes poussées d'eczéma. apart from any outbreaks of eczema.

- Les résultats de ces patch-tests ont été négatifs dans les 30 - The results of these patch tests were negative within 30

cas avec chacun des constituants et avec le produits fini. case with each of the constituents and with the finished product.

Essais cliniques proprements dits.Actual clinical trials.

Pratiqués en applications biquotidiennes pendant un minimum de 3 mois et en traitement d'entretien ensuite avec le produit - fini chez 50 patients qui présentaient une alopécie évolutive de l'apex respectant la nuque. 30 étaient des hommes dont 22 ont présenté après 3 mois environ une amélioration de la tenue et du volume de la chevelure, pour 18 d'entre eux une diminutionnette avec un arrêt de la chute (résultat apprécié avec un recul de Practiced twice daily for a minimum of 3 months and then in maintenance treatment with the product - finished in 50 patients who presented with progressive alopecia of the apex respecting the nape of the neck. 30 were men, 22 of whom presented after 3 months an improvement in the holding and volume of the hair, for 18 of them a decrease with a stop of the fall (result appreciated with a decline in

- 6 mois à 1 an sous poursuite du traitement). - 6 months to 1 year under continuation of treatment).

d'entre eux étaient des femmes dont l'apécie avaiit été agravée ou déclenchée par des soins de la chevelure: après des shampooings, permanentes, décolorations, 16 d'entre elles ont présenté une nette amélioration de la tenue et du volume de la - chevelure après 3 mois environ et un arrêt total de la chute of them were women whose apecia had been aggravated or triggered by care of the hair: after shampoos, perms, discoloration, 16 of them showed a marked improvement in the hold and the volume of the - hair after about 3 months and a total halt of the fall

avec un recul de 6 mois à 1 an.with a decline of 6 months to 1 year.

"b " 2709952 R E V E N D I C( i I O N S 1 - Composition d'une solution hydro-alcoolique de glyccyrhizine dans son utilisation pour son activité "b" 2709952 R E V E N D I C (i I O N S 1 - Composition of a hydro-alcoholic solution of glyccyrhizine in its use for its activity

biostimulante sur la pousse du cheveu. biostimulant on hair growth.

2 - Compositions à usage thérapeutique ou cosmétique à visée biostinlulante de la pousse du cheveu (du poil) 2 - Compositions for therapeutic or cosmetic use with biostinlulating aim of the hair growth (of the hair)

préparées selon la revendication 1. prepared according to claim 1.