FR2595571A1 - Agents immuno-suppresseurs - Google Patents

Abstract

ON A DECOUVERT QUE LES QUINOLEINES DE FAIBLE POIDS MOLECULAIRE, PAR EXEMPLE LES ERGOLINES, PRESENTENT DES PROPRIETES IMMUNO-SUPPRESSIVES. CES QUINOLEINES CONVIENNENT EN PARTICULIER POUR LA PREPARATION DE COMPOSITIONS PHARMACEUTIQUES CONVENANT POUR UNE COADMINISTRATION AVEC UN AUTRE AGENT IMMUNO-SUPPRESSEUR, AFIN DE DIMINUER LES EFFETS SECONDAIRES PROVOQUES PAR L'AUTRE AGENT IMMUNO-SUPPRESSEUR.

Description

La présente invention se rapporte à des agents

immuno-suppresseurs qui sont des dérivés de la quinoléine.

Il a maintenant été montré que les dérivés de la quinoléine de faible poids moléculaire présentent une activité immuno-suppressive et peuvent être administrés seuls, ou, par exemple, administrés conjointement avec un agent immuno-suppresseur, par exemple une cyclosporine, ce

qui permet de réduire le dosage de l'agent immuno-

suppresseur. Dans ce qui suit, ces dérivés de la quinoléine sont désignés comme étant les composés de l'invention. La présente invention propose, suivant l'un de ses aspects, l'utilisation d'un composé de l'invention dans'la

préparation d'une composition pharmaceutique immuno-

suppressive. Ces composés peuvent être utilisés, par exemple, sous la forme de bases libres ou sous la forme de sels d'additiond'acides pharmaceutiquement acceptables, par

exemple, chlorhydrate, maléate ou mésylate.

Les composés de l'invention peuvent comprendre un 2C noyau comportant, par exemple, Jusqu'à 4 cycles condensés, y compris la fraction quinoléine. Le noyau peut porter des substituants, par exemple, des chaînes latérales. Les composés sont de faible poids moléculaire en ce sens que

chaque chaîne latérale ne contient pas de cycles condensés.

Comme exemples de dérivés de la quinoléine à faible poids moléculaire, on peut citer les benzoquinoléines, en particulier celles qui correspondent à la formule I R.

R1 CH

R2 14

dans laquelle les cycles condensés A et B sont à jonction trans et Rl et R2 représentent, indépendamment l'un de l'autre, l'hydrogène

ou un groupe hydroxy ou méthoxy, R1 et R2 ne pouvant représen-

ter tous les deux l'hydrogène, R3 représente l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4, R4 représente un groupe -COOH, -CH20R5, -CH2CN, -CON(R6) R7, -CH2SR8, -NHSO2N(R9)RO10 ou -NHCON(Rg)R1o, R5 représente l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C3, R7 représente l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C3, phényle

ou pyridyle, ledit groupe phényle ou pyridyle étant éventuel-

lement substitué par des halogènes ou des groupes méthyle ou méthoxy, ou bien R6 et R7 représentent ensemble un groupe -(CH2)4-, -(CH2)5- ou

-(CH)2-0-(CH2)2-,

R8 représente un groupe alkyle en C1-C4 ou un groupe pyridyle, ledit groupe pyridyle étant éventuellement substitué par des halogènes ou des groupes méthyle ou méthoxy, et

Rg et R1O représentent, indépendamment l'un de l'autre, l'hydro-

gène ou un groupe alkyle en C1-C3, ou bien représentent en-

semble un groupe -(CH2)4- ou -(CH2)5-, ainsi que les esters physiologiquement hydrolysables et acceptables

de ces composés.

Ces composés sont connus et sont décrits par exemple dans

la demande de brevet européen n 77754, dont le contenu est incor-

poré dans la présente demande à titre de référence.

Parmi ces composés, le composé préféré est le N,N-

diéthyl-N'-E(3a,4aa,10aB)-1,2,3,4,4a,5,10,10a-octahydro-6-hydroxy-

1-propyl-3-benzo[g]quinolTinyl] sulfamide, également connu sous le nom de CV (désigné ci-après composé A), utilisé de préférence sous

forme de chlorhydrate.

Les composés préférés sont les dérivés de l'ergot à faible poids moléculaire, c'est-à-dire les composés qui ne comprennent pas

de reste peptidique en position 8, plus précisément non ergopepti-

diques. Ils peuvent comporter en position 8 par exemple un groupe amino, par exemple un reste acylamino, uréido ou sulfamino,ou bien un reste thiométhyle qui peut être substitué par exemple par un ou, si nécessaire, deux groupes alkyle en C1-C4. Avantageusement, ces composés ont une simple liaison en position 9,10 du noyau ergoline.

Les composés préférés sont les 8a-sulfamoylamino-ergo-

lines. Ces composés peuvent avoir la structure de base répondant à la formule

H R3

Ia

R

dans laquelle R1a représente entre autres un groupe alkyle en C1-C4, R2a représente entre autres H ou un groupe alkyle en C1-C4,

R3a représente entre autres un groupe -NHSO2N(alkyl en C1-C4)2.

Les exemples préférés comprennent:

a) la 1,6-diméthyl-8a-(N,N-diméthylsulfamoylamino)-

ergoline (également connue sous le nom de "Nesulergine", désignée ciaprès .i composé B); b) la 6-n-propyl-8a-(N,N-diéthylsulfamoylamino)ergoline (N,N-diéthyl-N' - (6-propylergolin-8a-yl)sulfamide),

utilisée de préférence sous la forme de son chlor-

hydrate, également connue sous la dénomination "CQP", (désignée ci-après composé C);

c) le N,N-diéthyl-N' -[(8a)-l-éthyl-6-méthyl-ergolin-8-yl]-

sulfamide, utilisé, de préférence, sous la forme de son

chlorhydrate, <désigné ci-après composé D).

L'exemple que l'on préfère le plus est (b>, c'est-

a-dire le composé C. D'autres composés préférés sont les suivants: 1) la 3-(9,10-didéhydro-6-méthyl-ergoline-8a-yl)-1,1-diéthyl-urée (également connue sous le nom de Lisuride, utilisée de préfé- rence sous forme d'hydrogénomaléate); 2) la 6-n-propyl-8B-méthylthiométhyl-ergoline (également connue sous le nom de Pergolide, utilisée de préférence sous forme de mésylate); lO 3) le transhydrolisuride également connu sous le nom de

Terguride et ayant la dénomination chimique 3-(6-méthyl-

ergoline-8a-yl)-1,1-diéthylurée, décrit par exemple dans les demandes de brevet allemand n 3135305 et 3124714; 4) le 6-n-propyldihydro-lisuride, également connu sous le nom de

proterguride et ayant la dénomination chimique 3-(6-n-propyl-

ergoline-8a-yl)-1,1-diéthyl-urée; ) les dérivés substitués en position 6 et 2, par exemple les dérivés 6-n-propyl et/ou 2-méthyl ou 2-bromo du terguride, du

lisuride et du proterguride, décrits par exemple dans les de-

mandes de brevet européen n 21206 et 160842 dont le contenu

est incorporé dans la présente demande à titre de référence.

Les exemples comprennent le 2-bromerguride, également connu sous le nom de 2-bromolisuride, utilisé de préférence sous forme de chlorhydrate;

6) la metergoline, ou ester benzylique de la (+)-N-(carboxy)-1-

méthyl-9,10-dihydrolysergamine;

7) le dosergoside, ou N-(1S,2R,3E)-2-hydroxy-1-(hydroxyméthyl)-

3-heptadécenyl)-6-méthylergoline-8-B-carboxamide;

8) le FCE-21336, ou 1-éthyl-3-(3'-diméthylaminopropyl)-3-(6-

allyl-ergoline-8'-[-carbonyl)-urée, utilisé de préférence sous forme de diphosphate;

9) le GYKI-32887, ou 6-méthyl-8-(N-mésyl-N-2-azidoéthyl)-

ergolène, utilisé de préférence sous forme de bimaléate,

décrit par exemple dans le brevet américain n 4.299.836.

Un groupe de composés comprend les composés de formule

H."NH-CO -R4

R I t I

R1-N R2

dans laquelle R1' représente l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4, R2' représente l'hydrogène, le chlore, le brome ou un groupe méthyle, R3' représente un groupe alkyle en C1-C5 ou un groupe alcényle en C3-C5 dans lequel la double liaison n'est pas située sur l'atome de carbone adjacent à l'atome d'azote, et R4' représente un groupe alkyle en C3-C7, cycloalkyle en C3-C7,

adamantyle, phényle, phényle portant un ou plusieurs substitu-

ants choisis parmi les groupes alkyle en C1-C3, alcoxy en C1-C3, alkylthio en C1-C3, trifluorométhyle, hydroxy, nitro, amino, alkylamino en C1-C3 et di-(alkyl en Cl-C3)-amino, ou

bien un groupe phényle condensé à un hétérocycle non aroma-

tique à 5 ou 6 chaînons comportant i ou 2 hétéroatomes choisis parmi l'oxygène et le soufre, décrits dans le brevet britannique n 2.152.507, dont le contenu est incorporé dans la présente demande à titre de référence, par

exemple la (5R,8S,10R)-2,6-diméthyl-8a-pivaloylamino-ergoline (dé-

signée ci-après composé E), utilisée de préférence sous forme de

chlorhydrate, et le dérivé 2-chloro, la (5R,8S,10R)-2-chloro-6-

méthyl-8a-pivaloylamino-ergoline.

D'autres exemples de composés comprennent ceux correspon-

dant à la formule

"NH-CO -R

HO'R4'

I ( t-R)

Q. H

1-N R

dans laquelle RI" représente l'hydrogène ou un groupe alkyle en C1-C4, R2" représente l'hydrogène, le chlore, le brome ou un groupe méthyle, R3" représente un groupe alkyle en C1-C5 ou un groupe alcényle en C3-C5 dans lequel la double liaison n'est pas située sur l'atome de carbone adjacent à l'atome d'azote, et R4 représente un groupe alkyle en C1-C7, cycloalkyle en C3-C7,

adamantyle, phényle, phényle portant un ou plusieurs substitu-

ants choisis parmi les groupes alkyle en C1-C3, alcoxy en C1-C3, alkylthio en C1-C3, trifluorométhyle, hydroxy, nitro, amino, alkylamino en C1-C3 et di-(alkyl en C1-C3)-amino, ou

bien un groupe phényle condensé 'à un hétérocycle non aroma-

tique à 5 ou 6 chaînons comportant 1 ou 2 hétéroatomes choisis parmi l'oxygène et le soufre,

R3" et R4" ne pouvant représenter un groupe méthyle lorsque R2" re-

présente l'hydrogène,

par exemple les composés dans lesquels R1" = H., R2" = Br ou en par-

ticulier CH3, R3" = CH3 et R4" = tert. butyle, décrits dans la

demande de brevet britannique n 2169291 A dont le contenu est in-

corporé dans la présente demande à titre de référence.

De nombreux composés mentionnés précédemment sont dé-

crits comme inhibiteurs de la sécrétion de la prolactine, certains d'entre eux étant extrêmement puissants et ayant une longue durée d'action. L'activité des composés comme.inhibiteurs de la sécrétion de la prolactine peut être déterminée au moyen des essais habi- tuels, par exemple chez les rats mâles par une baisse des taux de

prolactine basale dans le sérum.

L'activité des composés représentatifs est donnée ci-

dessous: Composé ID50 mg/kg après 4 heures

A 0,03

B 0,003

C. 0,001

Un groupe de composés comprend des composés qui sont des agonistes Dz sans aucune activité antagoniste. Un autre groupe de composés comprend ceux qui sont des agonistes de la sérotonine, par exemple, comme cela est indiqué dans les essais standard de liaisons in vitro et par activation de l'adénylate cyclase sensible au 5-HT de la douve du foie, selon la méthode de R. Markstein, "Effets neurochimiques de quelques dérivés del'ergot: Une base pour leurs actions antiparkinson" ("Neurochemical effects of some ergot derivatives: A basis for their antiparkinson

actions"). "J. Neural transm. 51: 39, (1981)".

Des exemples de ces composés comprenent le composé C et le pergolide. Le composé C, le pergolide et le -HT présentent des efficacités de, respectivement, 90, 80 et 100, et des pD2 clog EC50] de, repectivement 6, 9, 6,9 et 7,7, dans cet essai sur l'adénylate cyclase stimulée par la sérotonine. Comme indiqué ci-dessous, de façon surprenante, la puissance d'un composé de l'invention comme inhibiteur de la sécrétion de prolactine peut servir d'indication pour ce qui est de la puissance de son effet immuno-suppresseur, mais, au moins avant la date de cette invention, il n'y a pas de preuve d'une corrélation directe entre leur aptitude à

diminuer les taux de prolactine et leur effet immuno-

suppresseur. De fait, la puissance de ces composés comme inhibiteurs de la sécrétion de prolactine et leur longue durée d'action avec cette propriété peut très bien avoir masqué l'observation de leurs propriétés intéressantes dans

d'autres directions, en particulier sur la base de l'expé-

rimentation in vitro. On a effectué une expérimentation complète avec ces composés de l'invention et on a découvert qu'ils possèdent des propriétés immuno-suppressives particulièrement intéressantes, souvent à des doses

inférieures à celles attendues.

Les composés de l'invention inhibent l'activité

d'immuno-réponse comme indiqué dans les essais standards ex-

vivo et in-vivo.

ESSAI l: DEVELOPPEMENT DE CELLULES PRODUISANT DES ANTICORPS

CHEZ LA SOURIS (ESSAI PFC)

Les composés de l'invention réduisent le titre en anticorps dirigés contre les SRBC (globules rouges de Mouton - Sheep red blood cells) dans les essais de cellules formant des plaques (PFC - plaque forming cell>. Ces méthodes permettent de mesurer le nombre de lymphocytes spléniques formant des anticorps lytiques dirigés contre les SRBC et la distinction entre les cellules produisant des IgX et des IgG. L'inJection intraveineuse de SRBC (5 x 10) dans 0,2 ml, i.v. a servi de source d'antigène d'immunisation primaire dans les études sur la souris. Les souris, dans ces études, étaient des femelles C57 noires d'environ 20 grammes de poids corporel. Tous les animaux ont été prétraites avec les composés respectifs pendant un Jour avant le traitement des SRBC et traités quotidiennement ensuite à 11 h 00 sur un total de 6 Jours. Les rates ont été retirees pour la détermination des nombres de PFC

dirigés contre l'antigène SRBC.

Les cellules de rate ont été mises en suspension dans du Sérum Physiologique Equilibré tamponné à l'Hepes (Hepes-buffered Balanced Salt Solution - HBSS), lavées une fois, et remises en suspension dans un volume ajusté conformément au nombre attendu de cellules formant des plaques. La mesure directe du nombre de IgM-PFC a été ]0 accomplie par plaquage de 0,1 ml des cellules spléniques diluées avec 0,025 ml de SRBC (30%), 0,3 ml d'Agar (0,5% dans HBSS), et 0,025 ml de complément (sérum de cobaye) et plaquées sur des boîtes de Pétri. Une méthode indirecte de mesure de la quantité d'IgG-PFC a été effectuée avec un anticorps monoclonal dirigé contre les IgM (dilution 1:4) plus un antisérum polyspécifique anti-gamma (1:800) pour permettre la fixation du complément. Les lymphocytes spléniques provenant de chaque rate de souris ont été plaqués pour mesurer la quantité d'IgS- et IgG-PFC en duplicata. Toutes les plaques ont été incubées pendant 4 heures à 37'C et, ensuite, stockées pendant toute une nuit dans des chambres humidifiées à 4'C. Les plaques ont été comptées avec l'utilisation d'un dispositif de comptage des plaques. Les résultats représentatifs sont les suivants:

ESSAI PFC

ESSAI A

TRAITEMENT IgM % par rapport IgG % par rapport (PFC x 103 aux témoins (PFC x 103 aux témoins par rate) par rate)

TEMOINS 195,6 --- 46,2 ---

+ 33,3 + 11,6

Cyclo-

sporine* 36 mg/kg/ 98,6 -49,6 24,4 -47,2 jour par + 18,2 +10,6 injection sous-cutanée Composé A 87,0 -55,4 13,6 -71,6 1,0 mg/kg/ + 26,5 + 10,3 jour par injection sous-cutanée également connue sous le nom de ciclosporine et cyclosporine A

ESSAI B

TRAITEMENT IgM % par rapport (PFC x 103 aux témoins par rate)

TEMOINS 329,6

Cylosporine 180,9 -45% mg/kg/jour par voie orale Composé C 327,0 -1% 1 mg/kg/jour par voie-orale Composé C 244,4 -26% 0,1 mg/kg/jour par voie orale Composé C 167,2 -49% 0,01 mg/kg/jour par voie orale Dans cet essai, le composé A, sur la base d'un dosage de 1 mg/kg/Jour sur 6 jours, administré par voie s.c., présentait un effet du même ordre que celui de la

Cyclosporine à 36 mg/kg/Jour dans des conditions similaires.

Le composé C, à un dosage de 0,01 mg/kg/Jour p.o. sur 6 jours, administré p.o., présentait un effet qui était du même ordre que celui de la Cyclosporine à 60 mg/kg/Jour dans des conditions similaires. L'effet immuno-suppresseur du composé C a diminué à des dosages plus élevés. Le dosage des autres composés de l'invention peut être établi par une expérimentation de routine, en gardant à l'esprit les puissances applicables d'inhibition de la sécrétion de

prolactine, et qu'on ne peut pas observer d'activité immuno-

suppressive à des dosages faibles et à des dosages élevés.

Des exemple de dosages se situent dans la plage allant de

0,01 à 10 mg/kg, par exemple Jusqu'à lmg/kg, p.o. et s.c.

ESSAI 2: ESSAI DE REACTION LYMPHOCrAIRE MIXTE CHEZ LA

SOURIS

L aptitude des composés de l'invention à réduire la capacité de réponse des lymphocytes à une stimulation allogène est mesuré dans l'essai de réaction lyilphocytaire mixte (mixed lymphocyte reaction - KLR), dans lequel des cellules allogènes irradiées provenant de souris stimulatrices induisent une réponse de prolifération des

cellules histo-incompatibles répondantes.

lère VARIANTE: Des souris répondantes (femelles Balb/c, âgées de 8-10 semaines) sont traitées par voie sous-cutanée pendant cinq Jours avec les composés de l'invention. Des nombres égaux de lymphocytes stimulateurs murins <provenant de souris, CBA, stimulatrices; lymphocytes irradiés in vitro par 200 rad) et de lymphocytes effecteurs provenant des animaux traités ou d'animaux témoins sont incubés pendant cinq Jours. La thymidine H incorporée dans l'ADN des lymphocytes a été utilisée comme paramètre de la

prolifération cellulaire en réponse à un stimulus allogène.

[Voir S. S. Rich et al, "J. Exp. Medicine, <1974), 140,

1588-1693]".

Les résultats représentatifs obtenus sont les suivants: dpm x 103/10 cellules + SD Témoins 131192 + 12344 Composé E à raison de 103218 + 21497 mg/kg par voie sous-cutanée Ainsi, le Composé E a inhibé la réponse d'environ 21%. Les dosages pour les autres composés sont trouvés par l'expérimentation, en gardant à l'esprit les puissances relatives dans l'inhibition de la sécrétion de prolactine,

et que l'on peut ne pas observer d'activité immuno-

suppressive à des dosages faibles et à des dosages élevés.

Des exemples de plages sont, par exemple, de 1 à 10 mg/kg s. c. 2ème VARIANTE: De plus, les composés inhibent la capacité d'immuno-réponse des lymphocytes effecteurs aux lymphocytes histo-incompatibles (allogènes), dans une variante de l'essai XLR (réactionlynlphocytaire mixte) à deux voies ci-dessus. Des souris de deux souches histo-incompatibles (Balb/c et CBA) (âgées de 6-8 semaines) ont été traitées une fois par Jour, par voie s.c., avec un composé de l'invention, pendant au moins 7 jours. Les rates ont été

retirées 3 heures après la dernière administration du médi-

cament. L'essai MLR est effectué avec 0,5 x 10 cellules de rate provenant des souris Balb/c et avec 0,5 x 10 cellules de rates de souris CBA, ces dernières ayant été irradiées par 2000 rads. Les cellules de rate des souris Balb-c sont incubées avec les cellules de rate de CBA allogènes pendant 4 Jours. De la thymidine radioactive est aJoutée et, 16 heures après, l'incorporation de la thymidine 3H dans

l'ADN des cellules de rate de souris a été mesurée.

Les résultats obtenus avec le composé C sont les suivants: Dose Changement par rapport aux témoins 5mg/kg -20% 0,5 mg/kg -50% 0,05 mg/kg - 71% (Cyclosporine mg/kg) -53% Les dosages des autres composés sont trouvés par l'expérimentation, en gardant à l'esprit les puissances relatives dans l'inhibition de la sécrétion de prolactine, et qu'on peut ne pas observer d'activité immuno-suppressive à des dosages faibles et à des dosages élevés. Des exemples de plages sont, par exemple, de 0,01 à 10 mg/kg, par exemple

de 0,01 à 1 mg/kg.

ESSAI 3: ARTHRITE D'ADJUVANT DE FREUND CHEZ LE RAT

Un modèle expérimental est un modèle rongeur de développement d'arthrite d'adJuvant auto-immune. On observe

une inhibition du développement de l'arthrite d'adjuvant.

Dans une variante,- Xvobacterium Butyricum, que l'on s'est procuré auprès de "Difco Laboratories", Détroit, Michigan, a été préparé dans une émulsion avec PHHVI à subliquidium de paraffine <Siegfried Zofringen, Suisse), a une concentration de 6 mg/ml. Pendant l'anesthésie a l'éther, un volume de 0,1 ml de cette émulsion a été injecté, avec une aiguille de 3,81 cm (1-k pouce) de 21 g, par voie intra-cutanée, à la base de la queue de rats Sprague-Dawley mâles (d'environ 150-175 g). L'arthrite est survenue dans 95 à 100 %. des pattes arrière des animaux

témoins positifs. L'épaisseur du membre arrière (région mi-

tibiale) a été mesurée avec une jauge linéaire (Mitutoyo) couplée à un dispositif d'affichage digital électronique (Mitutoyo). % d'un groupe témoin a développé une arthrite d'adJuvant. Les composés de l'invention sont administrés au

moyen d'une pompe osmotique à régime continu, par voie sous-

cutanée, sur 7 jours ou 14 Jours à des groupes de 5 animaux.

La progression de l'arthrite et l'effet inhibiteur d'un composé représentatif, le composé B, à 0,1 mg/kg/jour sont les suivants: Epaisseur du membre postérieur (mm) Jour Groupe Composé B Composé B Ju témoin pendant 7 jours pendant 14 jours

0 6,1 6,1 6,0

3 6,2 6,2 6,2

6 6,3 6,2 6,2

9 7,0 6,5 6,7

12 7,7 6,9 7,7

7,8 7,6 7,8

18 8,9 7,9 7,9

21 9,5 8,2 8,2

La dose des autres composés peut être établie par une expérimentation de routine, en gardant à l'esprit les puissances relatives de l'activité d'inhibition de la sécrétion de prolactine. Des exemples des doses vont de 0,1

à 1 mg/kg/jour, s.c.

ESSAI 4: GREFFE LOCALE VERSUS HOTE (GRAFT VERSUS HOST - GvH)

CHEZ LE RAT

Des cellules de rate (environ 1 x 107) sont prélevées sur des rats Wistar/Furth/(W/F), agés de 6 semaines, et sont injectées dans la patte arrière gauche de rats F1 (F344 x WF) femelles, pesant environ 100g. Les rats avaient été traités quotidiennement par le composé, 7 jours avant l'injection, et ils sont traités quotidiennement pendant 3 jours après. La différence de poids entre les nodosités lymphatiques gauches et droites est prise comme

paramètre pour évaluer la réaction.

Les résultats obtenus avec des composés représentatifs sont les suivants: Poids des nodosités lymphatiques Témoins env. 63 mg Poids des nodosités lymphatiques Composé A 0,01 mg/kg/jour env. 50 mg Différence en % -21% env. 33 mg env. 33 mg env. 33 mg Composé C 0,001 mg/kg/jour 24 mg Composé C 0,01 mg/kg/jour 19 mg Composé C 0,1 mg/kg/jour 18 mg Composé E mg/kg/jour env. 39 mg -28% -42% -45% -41% env. 55 mg On notera que l'action du composé C varie en fonction de

la dose administrée.

La dose des autres composés peut être établie par une expérimentation de routine, en gardant à l'esprit les puissances relatives de l'activité d'inhibition de la sécrétion de prolactine, et qu'on peut ne pas observer d'activité immuno-suppressive à des dosages faibles et à des dosages élevés. Des exemples de doses vont d'environ 0,001

à 5 mg/kg/Jour.

ESSAI 5: TAUX DE BIOSYNTHESE CHEZ LE RAT

Les composés de l'invention inhibent le taux de biosynthèse d'un marqueur approprié pour hormones, mitogènes et composés, à savoir l'ornithine décarboxylase (ODC) dans le thymus, la rate, la moelle osseuse et l'hypophyse

antérieure, par exemple, chez le rat stimulé immun.

Le marqueur utilisé dans cette étude pour déterminer le taux de biosynthèse des tissus lymphoïde et endocrine était l'ornithine décarboxylase (O<QDC), L'ODC,

l'enzyme limitant le taux dans la biosynthèse des poly-

amines, sert de marqueur initial de la progression du cycle des cellules G1 des tissus en prolifération et de la biosynthèse accrue dans les tissus sécréteurs, en réponse à des substances trophiques ou stimulantes. Il y a une activité maximale de 1'ODC consécutive à une stimulation in vivo en l'espace de 4 heures - faisant de cette enzyme un marqueur intracellulaire utile pour comprendre la relation

entre les agonistes et la réponse des tissus cibles.

L'activité de l'ODC des tissus lymphoïdes semble se

rapporter à une réponse fonctionnelle au système immun.

Dans une méthode d'essai typique, des rats mAles KFM (150-175 g) ont été traités par le composé de l'invention, un Jour avant l'administration de l'adjuvant complet de Freund, d'une manière analogue à celle décrite cidessus. L'administration du composé a été répétée une fois par Jour par la suite. Deux Jours plus tard, les animaux ont été décapités, les tissus retirés et congelés dans l'azote liquide. Les activités de l'ODC (pmol/30 mn/mg de protéine) sont mesurées. L'activité de 1'ODC a été déterminée par la mesure de la libération de 14 CO2 à partir de la L-(1-14C)- ornithine, comme décrit par Snyder et al.

"Proc. Natl. Acad. Sci. 60:1420, 1968".

Les résultats obtenus avec le composé C sont les suivants: ]0 Témoin Traitement à Composé C l'adjuvant 0,01 mg/kg 0,1 mg/kg 0,5 mg/kg de Freund Thymus 291,8 253,8 98,80 171,40 177,0

SEM 32,95 24,33 24,15 19,48 53,70

Rate 24,83 34,88 12,14 34,62 37,96

SEM 3,77 6,54 1,83 5,35 11,89

Nodosités 40,70 64,40 43,10 107,30 103,90 lymphatiques Moëlle 37,20 27,10 17,40 45,80 43,40 épinière Médullo- 15,50 7,40 17,10 180,0 95,0 surrénale Hypo- 170,40 151,30 32,60 33,70 41,20

physe an-

tér eure Comme on peut le voir, le composé C, à des doses auxquelles il possède des propriétés immuno inhibitrices puissantes, par exemple 0,01 mg/kg, inhibe les taux de biosynthèse. A des doses plus élevées, le composé C a stimulé l'activité de l'ODC dans la médullo-surrénale, et

l'effet immuno-suppresseur était moindre.

Les données sur la toxicité pour quelques-uns parmi les composés de l'invention ont été publiées. De telles données peuvent être déterminées par une

expérimentation de routine.

DONNEES SUR LA TOXICITE pour les composés représentatifs PNET = Pas de niveau d'effet toxique. Les études approfondies ont été effectuées sur 7 ou 14 Jours après administration, respectivement, i.v. ou p.o. sauf indication

contraire..

Composé A: DL50 aiguë (souris) 17 mg/kg i.v.

357 mg/kg p.o.

PNET (4 semaines) rats entre 0,2 et

0,57 mg/kg/Jour p.o.

PNET (4 semaines) chiens entre 0,02 et

0,06 mg/kg/Jour p.o.

Composé B: Analogue au compose E Composé C: DL50 p. o. PNET PNET algue (souris) 45 mg/kg i.v. 69 mg/kg

<4 semaines) rats 0,19 mg/kg/Jour p.o.

(4 semaines) chiens 0,2 mg/kg/jour p.o.

Composé D: Composé E: DL50 aiguë (souris) 44 mg/kg i.v. 992 mg/kg p. o. PNET (26 semaines) rats entre 5 et

17 mg/kg/jour p.o.

PNET (26 semaines) chiens entre

0,3 mg/kg/Jour p.o.

Bien toléré sur 4 semaines, administré A des

chiens Beagle jusqu'à 3 mg/kg/Jour p.o.

Grâce à leur activité immuno-

suppressive, vis-à-vis à la fois d'utne immuno-réponse primaire et d'une immuno-réponse secondaire, et vis-à-vis à la fois des IgX- et IgG-PFC, les composés de l'invention sont utiles pour la prophylaxie et le traitement de maladies et d'états nécessitant une réduction de la réponse immune, en particulier par médiation des cellules T et/ou B. Ainsi, ils peuvent ainsi être utilisés pour supprimer la prolifération des lymphocytes et des immunocytes, par exemple en prévenant le reJet de greffes, par exemple des greffes de la peau, de la moelle osseuse et du rein, en traitant et en prévenant les maladies de greffe versus hôte

et, en particulier, dans le traitement des maladies auto-

immunes. Les composés sont utiles non seulement dans les maladies autoimmunes vasculaires, mais également dans une pluralité de maladies autoimmunes concernant les tissus et

autres organes, et les plaquettes.

Les maladies auto-immunes spécifiques, pour lesquelles les composés de l'invention sont utiles, comprennent celles qui sont de ntare spontanée, (par exemple celles qui ne sont pas provoquées par un médicament>. De telles maladies auto-immunes peuvent être caractérisées par des anticorps spécifiques. Elles comprennent toutes celles pour lesquelles un traitement par la Cyclosporine a été proposé ou utilisé, par exemple, l'anémieaplastique, l'anémie de globules rouges purs, la

thrombocytopénie idiopathique (par exemple,la thrombocyto-

pénie aiguë idiopathique), le lupus érythémateux systémique, la polychondrite, la sclérodermie, la granulomatose de Wegener, la dermatomyosite, l'hépatite active chronique, la

myasthénie gravis, le psoriasis, le syndrome de Steven-

Johnson, la sprue, par exemple la sprue idiopathique, la

maladie de Crohn, la maladie de Graves, l'ophtalmopathie de-

Graves, la sarcoïdose, la sclérose multiple, la cirrhose biliaire primaire, le diabète juvénile primaire (Diabète de type I), l'uvéite, par exemple l'uvéite postérieure et l'uvéite antérieure, le syndrome néphrotique, la glomérulonéphrite, la fibrose pulmonaire interstitielle et

l'arthrite psoriasique.

Des indications particulièrement intéressantes comprennent le psoriasis et l'arthrite, la sclérose multiple, le Diabète de type I, la maladie de Graves,

l'uvéite et la myasthénie gravis.

Ils sont encore utiles pour le traitement des états inflammatoires, par exemple l'arthrite et les maladies rhumatismales avec un composant autoimmun, et encore, pour le traitement des infections dues à des

protozoaires, par exemple la malaria et la schistosomiase.

Pour les utilisations mentionnées ci-dessus, il va

de soi que la dose variera en fonction du mode d'administra-

tion, du composé employé, de l'état particulier à traiter et de la thérapie souhaitée. Cependant, en général, des résultats satisfaisants sont obtenus lorsque les composés sont administrés à un dosage suffisant pour produire une inhibition continue et de longue durée de la sécrétion de prolactine, par exemple, allant jusqu'au-dessous de 2 nanogrames de prolactine par ml de plasma sanguin, ou a des doses Jusqu'à environ 2 fois supérieures, de façon a supprimer toute montée subite de prolactine. En effet, des doses Jusqu'à une dizaine de fois inférieures aux doses d'inhibition de la prolactine sont indiquées comme étant

efficaces dans l'indication immuno-suppressive.

Pour les composéSde l'invention, une dose journalière ap-

* propriée sera comprise entre environ 0,001 et 10 mg (par exemple de 0,1 à 10 mg) par voie orale. Cette dose peut être avantageusement administrée par exemple en doses fractionnées jusqu'à 4 fois par jour ou de préférence sous une forme à libération prolongée. Les

doses unitaires contiennent par exemple entre environ 0,0002 et en-

viron 10 mg de substance active.

La dose exacte devant être administrée peut en outre va-

rier en fonction de l'efficacité relative de la Cyclopsporine A dans les essais précédents. Sur cette base, on a par exemple estimé

que le composé A est à administrer à une dose comprise entre envi-

ron 0,1 et 1 mg par jour par voie orale, par exemple 0,5 mg.

Le composé préféré est le composé C. Il produit chez l'homme un effet inhibiteur de longue durée sur la sécrétion de la

prolactine à raison de 0,01 mg à 0,03 mg par voie orale par jour.

Les doses appropriées pour un effet immuno-suppresseur sont compri-

ses entre 0,005 et 0,03 mg par voie orale.

Les composés de l'invention sous forme de base libre ou

sous forme de sels d'addition d'acides pharmaceutiquement accep-

tables, peuvent être administrés sous forme d'une composition phar-

maceutique. De telles compositions sont généralement connues et peuvent être préparées selon les méthodes classiques. Les composés

peuvent être administrés par l'une quelconque des voies habi-

tuelles, en particulier par voie entérale, de préférence par voie orale, par exemple sous forme de gélules ou de comprimés, ou si nécessaire par voie parentérale, sous forme de solutions ou de

suspensions injectables.

La composition d'une gélule contenant exemple la suivante: Composé A sous forme de chlorhydrate 'correspond à 0,1 mg de base) Amidon de maïs Lactose (200 mailles) Silice Stéarate de magnésium Total La composition d'une gélule contenant de l'invention, à savoir le composé C, est par Composé C sous forme de chlorhydrate Mannitol Amidon de maïs Silice (marque Aerosil 200) le composé A est par 0,1092 mg ,3908 mg ,0 mg 1,5 mg 3,0 mg mg le composé préféré exemple la suivante: 0,02725* mg 107,47275 mg ,0 mg 0,5 mg mg (* correspondant à 0,025 mg de base libre)

Les gélules contenant des quantités plus faibles en compo-

sé C, par exemple 0,005 mg, peuvent être préparées de manière ana-

logue. La présente invention fournit également un nouveau moyen de thérapie, comprenant l'administration conJuguée: i) d'un agent immunosuppresseur, par exemple, une cyclosporine, en particulier, la Cyclosporine; et, ii> d'un composé de l'invention. Les agents immunosuppresseurs comprennent l'azathioprine, le cyclophosphamide, des stéroides, par

exemple la méthylprednisolone et le Ciamexon.

Les cyclosporines appartiennent à une classe d'undéca-

peptides cycliques poly-N-méthylés qui possedent d'intéressantes

propriétés pharmacologiques, en particulier une activité immuno-

suppressive, anti-inflammatoire et anti-parasitaire. La première des cyclosporines à avoir été isolée est la Cyclosporine, également connue comme cyclosporine A, dont la préparation et les propriétés

sont décrites par exemple dans le brevet américain no 4.117.118.

Depuis la découverte de la Cyclosporine, un grand nombre de cyclo-

sporines naturelles ont été isolées et identifiées et plusieurs au-

tres cyclosporines non naturelles ont été préparées par voie syn-

thétique ou semi-synthétique ou par application de techniques de

culture modifiées. La classe des cyclosporines est constituée ac-

tuellement par un nombre substantiel de représentants et comprend par exemple les cyclosporines naturelles, la (Thr2)cyclosporine, la (Val2)cyclosporine et la (Nva2)-cyclosporine (également connues

respectivement comme cyclosporines C, D et G), ainsi que divers dé-

rivés semi-synthétiques de celles-ci, tels que leurs dérivés di-

hydro (par exemple comme décrit dans les brevets américains n 4.108.985, 4.210.581 et 4.220.641) y compris par exemple la (dihydro-MeBmtl)-(Val2)cyclosporine (également connue comme dihydrocyclosporine D), et d'autres cyclosporines naturelles et synthétiques telles que celles décrites dans la demande de brevet

européen no 58 134, par exemple la [(D)-Ser8]-cyclosporine.

Selon la nomenclature adoptée actuellement pour les cyclo-

sporines, ces composés seront définis dans la présente description

par référence à la structure de la cyclosporine, c'est-à-dire la cyclosporine A. Selon cette nomenclature, on indique d'abord les

restes de la molécule qui diffèrent de ceux présents dans la Cyclo-

sporine et on accole le terme "cyclosporine" pour caractériser les

autres restes qui sont identiques à ceux présents dans la Cyclo-

sporine. La Cyclosporine répond à la formule I FA-B-Sar-MeLeu-Val-MeLeuAla-(D)Ala-MeLeu-MeLeu-MeVal1 |e1 2 3 3 5 6 7 8 9 10 11 / (I) dans laquelle A représente le reste -MeBmt-, c'est-à-dire le reste

N-méthyl-(4R)-2E-4-butène-1-yl-4-méthyl-(L)-thréonyle, de for-

mule II CH3 x

I

YCH2

| (R)

HO (R) CH\

CH CH3

I

-N-CH2-CO-

J (S) CH3. dans laquelle -x-y- représente -CH=CH- (trans), et B représente un reste a-Abu-. Ainsi, la (Thr2)-cyclosporine (cyclosporine C) est le

composé de formule I dans laquelle A a la signification donnée ci-

dessus et B signifie un reste -Thr-, et la (dihydro-MeBmtl)-

(Val2)-cyclosporine (dihydrocyclosporine D) est le composé de for-

mule I dans laquelle A représente le reste -dihydro-MeBmt- de for-

mule II ci-dessus dans laquelle -x-y- représente -CH2-CH2-, et B représente un reste -Val. Comme composé principal de la classe, la Cyclosporine a reçu Jusqu'ici le plus d'attention. Le domaine premier d'investigation clinique pour la

Cyclosporine a été celui en tant qu'agent immuno-

suppresseur, en particulier, en rapport avec son application aux receveurs de greffes d'organes, par exemple de greffes du coeur, du poumon, de greffes combinées coeur-poumon, de greffes du foie, du rein, pancréatiques, de la moelle osseuse, de la peau et de la cornée, et, en particulier, les greffes d'organes allogènes. Dans ce domaine, la Cyclosporine a atteint un succès et une réputation remarquables, et elle est maintenant disponible dans le

commerce et largement employée en clinique.

Simultanément, l'applicabilité de la Cyclosporine

à diverses maladies auto-immunes et aux états inflamma-

toires, en particulier, aux états inflammatoires avec une étiologie comprenant un composant auto-immun, tels que les arthrites et les maladies rhumatismales, a été intensive et, des rapports et des résultats in vitro, sur les modèles animaux et sur des essais cliniques, sont largement répandus

dans la littérature.

Un autre domaine d'investigation a été l'applicabilité potentielle comme agents anti-parasitaires, en particulier, anti-protozoaires, les utilisations possibles suggérées comprenant le traitement de la malaria et le traitement de la schistosomiase. D'autres cyclosporines présentent la même utilité pharmacologique d'ensemble que la Cyclosporine, et diverses propositions pour une application, en particulier dans l'une

ou l'autre des indications identifiées ci-dessus, sont-

répandues dans la littérature.

Malgré la contribution de tout premier plan apportée par la Cyclosporine à la technique, en particulier dans le domaine de la chirurgie des greffes et malgré sa large acceptation et son large succès en clinique, une particularité négative évidente a été sa toxicité prétendue pour les organes, par exemple, l'hépatoxicité et la néphrotoxicité. En clinique, la néphrotoxicité s'est révélée généralement être de préoccupation plus courante, et, bien qu'il soit évident que, dans les cas relativement rares o un problème se pose, la néphrotoxicité soit de toute façon liée à la dose, réversible et n'évolue pas sous un traitement à long terme <cliniquement, un problème est seulement susceptible de se produire, si tant est qu'il s'en produise, dans la phase précoce de la thérapie par la Cyclosporine, par exemple immédiatement après la greffe, lorsque la différentiation entre reJet et néphrotoxicité est difficile>, le moyen de réduire cet effet secondaire particulier et les autres effets secondaires apparentés de toxicité sur les organes, qui pourraient éventuellement se produire, serait manifestement d'intérêt maJeur. Ainsi, en plus de rendre la thérapie par la Cyclosporine plus généralement acceptable, il réduirait les nécessités de contrôle, par exemple immédiatement après la greffe, ainsi' que la nécessité occasionnelle d'employer une thérapie immuno-suppressive mixte (par exemple, l'alternance de médicaments), par exemple, chez des patients présentant des

réactions néphrotoxiques particulièrement marquées.

De façon similaire, bien que des cyclosporines particulières autres que la Cyclosporine aient été trouvées comme présentant des effets secondaires considérablement moins toxiques, par exemple néphrotoxiques, que la Cyclosporine, ou, à vrai dire, comme étant généralement exemptes de telles réactions secondaires, dans la mesure o la toxicité sur les organes est, ou peut être, une considération en relation avec leur application clinique, un moyen pour résoudre ce problème serait également d'un

avantage considérable.

Des considérations analogues à celles discutées ci-dessus pour les cyclosporines s'appliquent aux autres agents immuno-suppresseurs. L'administration conduit à des effets secondaires, par exemple, par des problèmes de toxicité, le lymphome, un abaissement du poids, etc. Conformément à la présente invention, on a maintenant découvert, de façon surprenante, que l'efficacité immuno-suppressive d'agents immunosuppresseurs, par exemple, des cyclosporines, en particulier, la Cyclosporine, est, de façon inattendue et avantageuse, rehaussée par

l'administration conJuguée des composés de l'invention.

Plus particulièrement, on a découvert que l'administration conjuguée d'agents immuno-suppresseurs et de composés de l'invention fournit, de façon inattendue, une puissance immuno-suppressive supérieure à la somme des puissances des composants individuels <synergisme ajoutant à la somme des

effets des composants individuels).

L'administration conjuguée des composés de l'invention avec des agents immuno-suppresseurs fournit, en

conséquence, un moyen permettant, une réduction significa-

tive des taux de l'agent immuno-suppresseur, agent immuno-

suppresseur qui était sinon requis pour son utilité immuno-

suppressive, par exemple dans la suppression du reJet de

greffes d'organes, dans le traitement des maladies auto-

immunes, de même que dans le traitement d'états inflamna-

toires avec une étiologie comprenant un composant auto-

immun. En permettant de réduire le dosage de l'agent immuno-suppresseur, la présente invention présente l'avantage le plus important de fournir un moyen pour éviter ou réduire les effets secondaires, par exemple les endommagements d'organes, consécutifs à l'administration de

l'agent immuno-suppresseur pendant la thérapie immuno-

suppressive. Conformément à ce qui précède, la présente invention propose un procédé: 1. pour effectuer une immuno-suppression, par exemple: 1.1 pour empêcher le reJet de greffes, par exemple, chez des receveurs de greffes d'organes, par exemple, de n'importe quel type spécifique énoncé précédemment; ou, 1.2 pour le traitement des maladies auto-immunes, par exemple, pour le traitement de n'importe laquelle des maladies autoimmunes spécifiques énoncées précédemment; ou, 2. pour le traitement des états inflammatoires, en particulier, des états inflammatoires avec une étiologie comprenant un composant auto-immun, par exemple, l'arthrite et les maladies rhumatismales; ou, 3. pour le traitement d'infections dues à des protozoaires, par exemple pour le traitement de la malaria, chez un suJet ayant besoin d'un tel traitement, ledit procédé consistant à administrer audit sujet une quantité efficace: a) d'agents immunosuppresseurs, par exemple, une cyclosporine, par exemple, la cyclosporine, par exemple la cyclosporine G ou la Cyclosporine; et,

b) d'un composé de l'invention.

Si l'on tient compte de l'interaction synergique

des composants a) et b) en ce qui concerne l'immuno-

suppression, les quantités de a) et de b) requises conformément au procédé particulier défini sous 1. ci-dessus ou, dans le cas d'un état avec une étiologie comprenant un composant auto-immun, conformément au procédé particulier défini sous 2. ci-dessus, comprendront conjointement une

quantité efficace du point de vue de l'immuno-suppression.

De plus, lorsque la toxicité résiduelle sur les organes ou les autres effets secondaires de l'agent immuno-suppresseur est une considération (par exemple, malgré les dosages diminués de a) requis en conséquence de l'administration de b)], la quantité de b) requise suffira convenablement à

réduire cette toxicité résiduelle.

En ce qui concerne les procédés particuliers définis sous 2. et 3. cidessus, la quantité de a) requise consistera, respectivement,

2. en une quantité efficace du point de vue anti-

inflammatoire, et

3. en une quantité efficace du point de vue anti-

protozaires, et la quantité de b) requise sera une quantité suffisante pour réduire toute toxicité sur les organes, se produisant

par ailleurs et étant attribuable à a).

Il sera évident que la présente invention peut être regardée tour à tour, comme un procédé de réduction de la toxicité sur les organes, par exemple l'hépatoxicité ou,

en particulier, la néphrotoxicité d'un composant a) [c'est-

à-dire pour la réduction de l'endommagement des organes, par exemple du foie ou, en particulier, l'endommagement du rein, provoqué par un composant a)] chez un suJet recevant une thérapie avec a), comprenant l'administration d'un

composant b).

L'interaction synergique entre les agents immuno-

suppresseurs, par exemple la Cyclosporine, et les composés de l'invention, par exemple le Composé A, en ce qui concerne l'activité immunosuppressive, peut être démontrée dans des expériences cliniques et chez des modèles expérimentaux

animaux, par exemple dans la réaction-localisée greffe-

versus-hôte chez le rat, accomplie conformément aux méthodes décrites par Ford et al., (Transplantation I0, 258-266 (1970)". Dans cette méthode expérimentale, le traitement concomittant par un agent immuno-suppresseur, par exemple une cyclosporine, par exemple, la Cyclosporine, et par les composés de l'invention (le traitement par le composé de l'invention commencant avant l'inoculation avec des cellules stimulatrices) conduit à une inhibition de la réaction greffe-versus-hôte qui est supérieure à la somme des activités observées lorsque les composés sont administrés individuellement. De plus, la combinaison de a) et b) montre une réduction du titre en anticorps dirigés contre les globules rouges de mouton dans l'essai I ci-dessus. Par exemple, l'administration de 36 mg/kg/Jour s.c. de Cyclosporine avec 0,1 mg/kg/Jour du composé A conduit à une réduction de 62,6% du titre en IgX et de 79,1% du titre en IgG. La combinaison de la Cyclosporine (60 mg/kg.jour p.o.) et du Composé C (0,1 mg/kg/Jour p.o.) conduit à une réduction de 63% du

titre en IgH.

Des dosages appropriés des autres composés de l'invention peuvent être trouvés sur la base des puissances relatives de l'activité d'inhibition de la sécrétion de prolactine. Des exemples de doses vont de 0,1 à

mg/kg/Jour s.c.

Un essai supplémentaire pour montrer l'activité immuno-suppressive du mélange est le suivant:

ESSAI 6: GREFFE D'UN TISSU CARDIAQUE NEONATAL DANS LES

OREILLES DE SOURIS.

Dans cet essai in-vivo, le temps de reJet d'un tissu cardiaque néonatal greffé a été accru-par les composés

de la présente invention.

Conformément à une méthode, on a pratiqué une petite incision à la base de l'oreille d'une souris C 57 BL (H-2). On a utilisé des pinces brucelles épointées ou fines pour détacher la couche dorsale de peau à partir de

la couche cartilagineuse, de façon a former un retrait.

Une moitié d'un coeur prélevé sur une souris Balb/c (H-2d), Agée de 1 à 2 Jours, a été ensuite insérée dans le retrait. 6 jours après la greffe et chaque semaine suivante, la survie de la greffe du coeur a été surveillée par des microélectrodes placées sur chaque côté de la greffe. Un enregistreur dynograft a été utilisé pour enregistrer l'activité électrique émanant de la greffe. Le point ultime de survie de la greffe a été pris comme étant le moment o l'activité électrique était perdue. Des souris non traitées

ont reJeté l'implant au bout de 8 V Jours.

Dans ce modèle, on a considéré qu'une immuno-

suppression efficace s'était produite si le temps Jusqu'au reJet était augmenté Jusqu'à au moins 17 Jours. Le temps Jusqu'au reJet de l'allogreffe du coeur a été accru par les composés de l'invention lorsqu'ils ont été appliqués à une

dose allant de 0,05 à 0,5 mg/kg s.c. avec une co-

administration de cyclosporine (18 mg/kg/Jour s.c.). Avec-

le composé A à 0,05 mg/kg/jour, s.c., 50 pourcent des allogreffes du coeur dans un groupe de 10 animaux étaient

actives au Jour 17.

Conformément au procédé de la présente invention, l'agent immunosuppresseur et le composé de l'invention peuvent être administrés séparément et à des moments différents au cours de la thérapie ou de façon pratiquement concomittante. Ainsi, le traitement par le composé de l'invention peut commencer avant le traitement par l'agent immunosuppresseur, ou après le commencement du traitement par l'agent immunosuppresseur, par exemple, après que la rémission de la maladie ait été effectuée. La présente invention doit être entendue comme englobant tous ces régimes de traitement et on doit interpréter en conséquence le terme "administration conjointe". Dans la mise en oeuvre

du procédé de l'invention, le commencement de l'administra-

tion du composé de l'invention avant le traitement par l'agent immunosuppresseur peut être, dans certains cas et en fonction, par exemple, de l'objectif de la thérapie par l'agent immuno-suppresseur et de l'état du suJet à traiter, particulièrement avantageux. Ainsi, le commencement du traitement par le composé de l'invention, avec une avance allant jusqu'à 7 Jours ou plus sur le traitement par l'agent immuno-suppresseur, peut procurer un effet pré-protecteur supplémentaire et bénéfique contre les effets secondaires de l'agent immuno-suppresseur, par exemple, la toxicité sur les

organes, par exemple, la néphrotoxicité.

En variante, les agent immuno-suppresseurs peuvent être administrés à la dose normale avec le composé de la présente invention, et la dose de cyclosporine peut être réduite quelques semaines, par exemple 1 mois après le

début de la thérapie avec le composé de l'invention.

Il va de soi que les doses d'agent immuno-

suppresseur qui peuvent être administrées dans la mise en oeuvre du procédé de la présente invention, varieront en fonction, par exemple, de la cyclosporine particulière employée, du mode d'administration, de l'état à traiter (par

exemple, si le traitement est appliqué à des fins d'lmmuno-

suppression.ou autrement, et, pour des fins d'immuno-

suppression, s'il est ou non destiné à être utilisé en rapport avec, par exemple, une greffe d'organes, une greffe

de moelle osseuse, ou pour le traitement d'une maladie auto-

immune), de même qu'en fonction de l'effet désiré. De plus, le dosage demandera généralement un ajustement pour chaque patient, pour établir une concentration appropriée à long terme du médicament dans le sérum, par exemple, par l'administration d'une dose de départ ou de "charge)" initiale quotidienne, avec un ajustement ultérieur de la dose (généralement une réduction de la dose) selon les taux dans le sérum, par exemple, comme déterminé par une

surveillance régulière par RIA.

Cependant, en général, si un traitement immuno-

suppresseur est requis (c'est-à-dire s'il y a une potentialisation d'activité par le composé de l'invention administré conjointement), des résultats satisfaisants sont obtenus par l'administration dans une plage de doses allant d'environ 1 à environ 25 mg/kg/Jour (par exemple, dans le cas de la Cyclosporine, d'environ 5 à environ mg/kg/Jour), administrées au patient par voie orale en

une seule fois, ou en doses réparties 2 ou 3 fois par Jour.

Si une administration i.v. est requise, par exemple une administration par perfusion (par exemple, dans la phase initiale du traitement), des doses plus faibles, par exemple de l'ordre d'environ 0,5 à environ 5 mg/kg/jour <par exemple, dans le cas de la Cyclosporine, d'environ 1 à environ 3 mg/kg/Jour pour une dose de démarrage, ou Jusqu'à environ 2 mg/kg/Jour pour une dose d'entretien), sont

généralement indiquées.

Si le traitement n'est pas effectué à des fins d'immuno-suppression, des résultats satisfaisants sont obtenus par l'administration dans une plage de doses allant d'environ 5 à environ 50 mg/kg/Jour (par exemple, dans le cas de la Cyclosporine, allant d'environ 10 à environ mg/kg/Jour pendant la phase initiale de la thérapie, en réduisant à une dose d'entretien allant d'environ 5 à environ 10 mg/kg/Jour), administrées au patient par voie orale, en une seule fois ou en doses réparties 2 ou 3 fois par Jour. Si une administration i.v. est requise, par exemple une administration par perfusion (par exemple, dans la phase initiale du traitement), des dosages plus faibles, par exemple de l'ordre d'environ 1 à environ 10 mg/kg/Jour (par exemple, dans le cas de la Cyclosporine, d'environ 3 à environ 5 mg/kg/Jour pour une dose de démarrage, ou Jusqu'à environ 2,5 mg/kg/Jour pour une dose d'entretien), sont

généralement indiquées.

Les doses du composé de l'invention qui sont à administrer dans la mise en oeuvre du procédé de la présente

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invention varieront également, par exemple, en fonction des puissances relatives d'inhibition de la sécrétion de prolactine du composé choisi, du mode d'administration, de la thérapie par la cyclosporine appliquée (par exemple, si un dosage de cyclosporine a des fins d'immuno- suppression ou autres est requis ou non), et la cyclosporine particulière employée. L'administration peut être entérale (par exemple orale) ou parentérale (par exemple. i. m.), ou bien le composé peut être administré sous une forme a libération 0 prolongée. Les doses pour les composés de l'invention, par exemple le composé C, sont telles que données ci-dessus pour une thérapie de vente. Pour le composé A, un dosage quotidien approprié pour une administration orale sera de l'ordre d'environ 0,1 à environ 1 mg/kg/Jour, administré en

une seule fois ou en doses réparties 2 ou 3 fois par jour.

t Les formes de dosage à la fois oral et parentéral pour les cyclosporines, par exemple la Cyclosporine, et pour les composés de l'invention, qui conviennent pour être utilisées dans la mise en oeuvre du procédé de l'invention, sont connues dans la technique, par exemple par la demande de brevet britannique n0 2 015 339 B et elles

sont disponibles dans le commerce.

Les indications préférées comprennent les greffes, le diabète de type I, l'uvéite postérieure, l'arthrite

rhumatoïde et le syndrome néphrotique.

Si on le désire, les formes de dosage en combinaison du composé de l'invention et de la cyclosporine peuvent être faites. Celles-ci peuvent être basées sur les

formulations en solution buvable de cyclosporine, c'est-à-

dire, mg de Cyclosporine 1 ml de mélange Labrafil x 1944 CS (tel que décrit dans le brevet britannique GB 2 015 339)/éthanol c(40:15 v/v) 0,4 ml d'huile d'olive ou d'huile de maïs qui peuvent contenir un composé de l'invention sous la forme d' une base libre, par exemple, 0,1 mg du composé A ou 0,005 mg du composé C. Le mélange peut être employé comme solution buvable ou être introduit dans des capsules de gélatine molle.

- 37 -

Claims (11)

REVENDICATIONS

1.- Utilisation d'une quinoléine de faible poids molécu-

laire pour la préparation d'une composition pharmaceutique immuno-

suppressive.

2.- Utilisation d'une quinoléine de faible poids molécu-

laire pour la préparation d'une composition pharmaceutique qui con-

vient pour la thérapie immuno-suppressive pour une co-administra-

tion avec un autre agent immuno-suppresseur.

3.- Utilisation d'une quinoléine de faible poids molécu-

laire pour la préparation d'une composition pharmaceutique conve-

nant pour une co-administration avec un autre agent immuno-suppres-

seur, afin de diminuer les effets secondaires provoqués par cet

autre agent immuno-suppresseur.

4.- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 3, ca-

ractérisée par le fait que la composition pharmaceutique est desti-

née au traitement de l'un des états suivants: l'arthrite, la sclé-

rose multiple, la myasthénie gravis et le psoriasis.

5.- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, ca-

ractérisée par le fait que la quinoléine de faible poids molécu-

laire est un dérivé de l'ergoline de faible poids moléculaire.

6.- Utilisation selon l'une des revendications i à 5, ca-

ractérisée par le fait que la quinoléine est la 6-n-propyl-8a-

(N,N-diéthylsulfamoylamino)-ergoline.

7.- Utilisation selon l'une des revendications 1 à 4, ca-

ractérisée par le fait que la quinoléine est le N,N-diéthyl-N'-

E(3a,4aa,10ae)-1,2,3,4,4a,5,10,10a-octahydro-[6-hydroxy-1-propyl-

3-benzo [g] quinoléinyl] sulfamide.

8.- Utlisation selon l'une des revendications 1 à 4, ca-

ractérisée par le fait que la quinoléine est choisie parmi la (5R,8S,1OR)2,6-diméthyl-8a-pivaloylamino-ergoline, le lisuride, le pergolide, le terguride, le proterguride, le 2-bromerguride, la

metergoline, le dosergoside, FCE 21336 et GYK1 32887.

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9.- Utilisation selon l'une des revendications 2 à 8, ca-

ractérisée par le fait que l'agent immuno-suppresseur est une cyclosporine.

10.- Utilisation selon l'une des revendications 2 à 8, ca-

ractérisée par le fait que l'agent immuno-suppresseur est la cyclosporine A.

11.- Composition pharmaceutique contenant une quinoléine

de faible poids moléculaire et un agent immuno-suppresseur.